本發(fā)明屬于肥料制造技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥及其制備方法。

背景技術(shù)：

蔬菜根結(jié)線蟲是一類嚴(yán)重危害經(jīng)濟(jì)農(nóng)作物并廣泛分布于世界各地的重要的植物病原線蟲。它不僅可以侵染經(jīng)濟(jì)性的糧食作物、蔬菜以及觀賞性的花卉樹木，甚至連雜草都可以侵染。根結(jié)線蟲病害可以使經(jīng)濟(jì)作物減產(chǎn)10～20%，嚴(yán)重時達(dá)到75%以上，甚至導(dǎo)致絕收。目前，由根結(jié)線蟲引起的病害已嚴(yán)重制約著我國保護(hù)地作物的發(fā)展和穩(wěn)產(chǎn)，影響著全國經(jīng)濟(jì)持續(xù)快速健康的發(fā)展。

現(xiàn)有微生物有機(jī)肥、微生物肥，添加預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的功能菌所起的作用效果一般，且施用量少，施肥方法不恰當(dāng)，基質(zhì)中營養(yǎng)成分配比不合理，不能有效供給功能菌繁殖生長，其效果不太明顯，特別是土傳病害，如枯萎病、根結(jié)線蟲病幾乎看不到效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種防治蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥，同時可在有機(jī)質(zhì)中提高蛋白質(zhì)含量，給菌種生長提供了營養(yǎng)，進(jìn)而達(dá)到肥、藥雙效的目的。

為解決以上問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

設(shè)計一種預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥，包括以下重量份的原料：有機(jī)肥45～55份、含碳植物粉8～12份、含蛋白谷類粉4～8份、功能菌8～12份和水20～25份。

為加快有機(jī)物料發(fā)酵速度，還可以進(jìn)一步添加1.5～3份的腐熟劑（本島酵素菌或神采生物有機(jī)肥料發(fā)酵腐熟菌劑）。

所述有機(jī)肥優(yōu)選為雞糞，所述含碳植物粉優(yōu)選秸稈粉或糠醛渣，所述含蛋白谷類粉優(yōu)選為玉米面和/或油餅（油料作物榨油后的固余物）。

所述功能菌包括重量比為（3～5）:1:（4～6）的淡紫紫孢菌、叢枝菌根真菌和枯草芽孢桿菌，三種原料的活菌含量分別為6×10⁹cfu/克、5.1×10⁹cfu/克、9.3×10⁹cfu/克。

所述淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株，保藏編號為cctccno：m2016683；其是在已分離、篩選得到的原始菌株pl36-1（來源于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)線蟲實(shí)驗(yàn)室）基礎(chǔ)上，由發(fā)明人進(jìn)一步通過紫外誘變而得到的穩(wěn)定突變子，進(jìn)而得到變異的淡紫紫孢菌菌株pl36-1-1，并于2016年11月25日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國湖北省武漢市武漢大學(xué)，郵編430072）。

所述叢枝菌根真菌為常規(guī)市售菌劑bgcam0023。

所述枯草芽孢桿菌為常規(guī)市售枯草芽孢桿菌atcc9372。

大量研究表明淡紫紫孢菌、枯草芽孢桿菌等作為線蟲生防因子，不僅有廣泛的寄主范圍，而且可以適應(yīng)于不同的氣候條件，可以寄生于根結(jié)線蟲、孢囊線蟲、異皮線蟲、金色線蟲、穿刺線蟲和珍珠線蟲等多種線蟲；淡紫紫孢菌、枯草芽孢桿菌因?yàn)榫哂辛餍杏|殺性、安全無污染性以及和發(fā)展環(huán)境友好型社會相符合的特點(diǎn)，可以作為新的有效地生防因子，而且克服了傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥帶來的諸多問題，是極具推廣潛力的應(yīng)用生防菌和功能菌。

研究表明，叢枝菌根真菌是一類在生物防治土傳病害和提高植物抗、耐病性方面極具應(yīng)用潛力的微生物資源，叢枝菌根真菌作為生態(tài)系統(tǒng)中重要的一員，廣泛分布于自然界各生態(tài)系統(tǒng)中；90%以上的植物都能被叢枝菌根真菌侵染而形成互惠共生體，特別是栽培植物中絕大多數(shù)的農(nóng)作物、園藝作物、牧草等均能形成叢植菌根；叢枝菌根真菌被譽(yù)為生物肥料，在促進(jìn)植物生長發(fā)育、提高作物產(chǎn)量和改良作物品質(zhì)、增強(qiáng)植物抗逆性和抗病性等方面具有顯著的促進(jìn)作用。

上述預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：在所述有機(jī)肥中添加所述含碳植物粉和含蛋白谷類粉進(jìn)行腐熟發(fā)酵，再加入所述功能菌，充分混合均勻，即得本發(fā)明新型復(fù)合微生物菌肥。

上述復(fù)合微生物菌肥制備方法具體包括如下步驟：

（1）將所述有機(jī)物、含碳植物粉、含蛋白的谷類粉、腐熟劑和水按比例充分混合均勻，在55～60℃的條件下堆肥，殺死病原菌，當(dāng)堆垛塌陷，布滿白色菌絲，無臭味，達(dá)到無害化標(biāo)準(zhǔn)，即制成有機(jī)物料；

（2）在制成的有機(jī)物料中加入所述功能菌，充分混合均勻，即得本發(fā)明新型復(fù)合微生物菌肥。

根據(jù)上述復(fù)合微生物菌肥的作用和機(jī)理，應(yīng)用要求如下：

（1）穴施：播種前刨窩撒施與土混拌，然后播種；這樣菌株生長發(fā)育，破壞并殺死病原菌和害蟲，使作物根圍形成保護(hù)層，給作物生長創(chuàng)造良好條件。畝用量60～90公斤。

（2）溫室大棚施用：起壟撒施，和土壤混合均勻，畝用量100～200公斤，然后覆膜播種。

本發(fā)明具有的積極有益的技術(shù)效果：

（1）克服了單一菌種防治效果的不理想性，同時對其它土傳病害也有一定的防治效果，施用方便，肥效高，使用只需一次，節(jié)省勞力，不污染環(huán)境。

（2）本發(fā)明菌種復(fù)合后對控害工作原理：淡紫紫孢菌、枯草芽孢桿菌都對線蟲有很好的防治效果，叢枝菌根真菌對作物生長、抗逆方面有很好的促進(jìn)作用，同時叢枝菌根真菌對土壤改良有一定的實(shí)際意義；經(jīng)過大量的試驗(yàn)研究證明，三者之間無拮抗或寄生作用，可以共存并顯著地增強(qiáng)了防治效果，三種菌分泌的代謝產(chǎn)物不影響殺線蟲作用。

（3）本發(fā)明將三種菌復(fù)合能改良土壤，破除板結(jié)，提高土壤通透性和供氧量，促進(jìn)作物根系和植株生長，對種子萌發(fā)生長也有促進(jìn)作用；苗期表現(xiàn)苗齊、苗旺、苗壯；三菌復(fù)合，具有肥藥雙效作用。

（4）本發(fā)明在堆肥發(fā)酵過程中添加了玉米面、油餅等，增加了蛋白源，給后來添加的功能菌生長發(fā)育提供了營養(yǎng)物質(zhì)，加快了菌種繁殖生長。

（5）實(shí)踐證明，本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥不但能預(yù)防根結(jié)線蟲病害，而且抗重茬效果明顯。

（6）本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥還能夠降解農(nóng)藥殘留，抑制多種病原菌發(fā)生和根結(jié)線蟲病的發(fā)生，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明防治率達(dá)到80%。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例來說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但以下實(shí)施例只是用來詳細(xì)說明本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在以下實(shí)施例中所涉及的儀器設(shè)備如無特別說明，均為常規(guī)儀器設(shè)備；所涉及的生化試劑如無特別說明，均為市售常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例1功能菌原料的準(zhǔn)備

（1）淡紫紫孢菌菌株的培養(yǎng)

淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株（保藏編號為cctccno：m2016683），用pda培養(yǎng)基繁殖（馬鈴薯蔗糖瓊脂粉培養(yǎng)基），28℃，培養(yǎng)7天，4℃保存。

液體發(fā)酵，液體培養(yǎng)基pdb（馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基），28℃，200rpm/min，培養(yǎng)9天，血球計數(shù)板測定孢子含量為10⁹cfu/g。4℃保存。

（2）叢枝菌根真菌（bgcam0023）的擴(kuò)繁

先將沙：土為3:1的比例混合滅菌，再將叢植菌根真菌（國家資源平臺編號1511c0001bgcam0023，由北京市農(nóng)林科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源研究所“叢枝菌根真菌種質(zhì)資源庫(bgc)”提供）和混合沙土比例為1:100混合接種，然后播種三葉草或蘇丹草，生長5～8月后使用。血球計數(shù)板測定基質(zhì)土壤孢子含量為10⁹cfu/g，4℃保存。

（3）枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)

枯草芽孢桿菌atcc9372，采用lb培養(yǎng)基培養(yǎng)（蛋白胨酵母粉瓊脂粉培養(yǎng)基，液體的不加瓊脂粉），37℃，培養(yǎng)3～5天，血球計數(shù)板測量芽孢含量為10⁷cfu/g，4℃保存。

實(shí)施例2：一種預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥，由以下重量份的原料組成：雞糞50份、秸稈粉10份、玉米面4份、油餅2份、功能菌10份、腐熟劑1.5份和水22.5份。所述功能菌包括重量比為4:1:5的淡紫紫孢菌、叢枝菌根真菌和枯草芽孢桿菌，三種原料的活菌含量分別為6×10⁹cfu/克、5.1×10⁹cfu/克叢枝菌根真菌、9.3×10⁹cfu/克。

上述預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的新型復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：（1）將所述雞糞、秸稈粉、玉米面、油餅、腐熟劑腐熟劑和水按比例充分混合均勻，在55～60℃的條件下堆肥，殺死病原菌，當(dāng)堆垛塌陷，布滿白色菌絲，無臭味，達(dá)到無害化標(biāo)準(zhǔn)，即制成有機(jī)物料；

（2）在制成的有機(jī)物料中加入所述功能菌，充分混合均勻，即得本發(fā)明新型復(fù)合微生物菌肥。

實(shí)施例3：一種預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥，由以下重量份的原料組成：雞糞45份、秸稈粉12份、玉米面5份、油餅1份、功能菌12份、腐熟劑2份和水23份。所述功能菌包括重量比為4:1:5的淡紫紫孢菌、叢枝菌根真菌和枯草芽孢桿菌，三種原料的活菌含量分別為6×10⁹cfu/克、5.1×10⁹cfu/克叢枝菌根真菌、9.3×10⁹cfu/克。

實(shí)施例4：一種預(yù)防蔬菜根結(jié)線蟲病的復(fù)合微生物菌肥，由以下重量份的原料組成：雞糞55份、秸稈粉8份、玉米面6份、功能菌8份、腐熟劑3份和水20份。所述功能菌包括重量比為4:1:5的淡紫紫孢菌、叢枝菌根真菌和枯草芽孢桿菌，三種原料的活菌含量分別為6×10⁹cfu/克、5.1×10⁹cfu/克叢枝菌根真菌、9.3×10⁹cfu/克。

將以上實(shí)施方式所得復(fù)合微生物菌肥分別對黃瓜和番茄菜田進(jìn)行施用，對根結(jié)線蟲及產(chǎn)量的影響見表1、2。

表1不同處理對黃瓜根結(jié)線蟲及產(chǎn)量的影響

表2不同處理對番茄根結(jié)線蟲及產(chǎn)量的影響

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