本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用，具體涉及一種利用銀耳菌糠制備的培養(yǎng)基及應(yīng)用，屬于微生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

我國作為世界上最大的食用菌生產(chǎn)國，每年將產(chǎn)生大量的食用菌菌糠。近年來，伴隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，相應(yīng)產(chǎn)生的非菌糠的數(shù)量也與日劇增。現(xiàn)階段，對食用菌菌糠的利用局限于以燃料燃燒，大部分菌糠被堆制丟棄，在造成資源浪費(fèi)的同時，對周邊農(nóng)業(yè)環(huán)境造成了嚴(yán)重污染，甚至成為生產(chǎn)下茬食用菌的污染源之一。福建省古田縣是銀耳主產(chǎn)區(qū)，年生產(chǎn)銀耳2億袋以上，每年有10萬噸的廢菌糠，大量的銀耳蒂頭、爛菇等廢料難以處置。

銀耳菌糠以鋸木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣及多種農(nóng)作物秸稈等為主要原料，含有豐富的有機(jī)物和多種礦物質(zhì)元素，據(jù)測定分析，有機(jī)物含量15.660%、氮含量1.274%、磷含量0.211%、鉀含量1.450%，銀耳菌糠中還含有鈣、磷、鈉、銅等多種微量元素。以銀耳菌糠為原料制作培養(yǎng)基，提升了原料的利用率，工藝簡便實(shí)用性強(qiáng)，減少了環(huán)境污染，符合當(dāng)下低碳環(huán)保的新理念，具有廣闊的發(fā)展前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種利用菌糠特別是銀耳菌糠制備的培養(yǎng)基及應(yīng)用，以解決銀耳菌糠的資源循環(huán)利用問題，同時為食用菌母種的培養(yǎng)利用尋找新的培養(yǎng)基替代品。

本發(fā)明的技術(shù)方案是利用銀耳菌糠，通過煮沸浸提的方法制備浸提液，再利用該浸提液和其他物質(zhì)制備適用于真菌培養(yǎng)的通用培養(yǎng)基。本發(fā)明還涉及這種培養(yǎng)基在培養(yǎng)真菌中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種利用銀耳菌糠制備的固體培養(yǎng)基，其原料按重量份計包括：

銀耳菌糠浸提液：100份；

土豆：0.01-20份；

葡萄糖：0.01-20份；

硫酸鎂：1.5份；

磷酸二氫鉀：2份；

瓊脂：1.5-2份。

所述的銀耳菌糠浸提液，是通過如下步驟制備得到的：

（1）銀耳菌糠粉制備：將銀耳菌糠脫袋后，于45-60℃條件下烘干至水分含量為6-8wt%，打粉過40-60目篩備用；

（2）銀耳菌糠浸提液制備：按料水比1g：14-20ml將水加入銀耳菌糠粉中，于沸水中煮制5-8min，經(jīng)8層紗布過濾后補(bǔ)足煮沸蒸發(fā)水量。

應(yīng)用：所述培養(yǎng)基用于草菇和長根菇的培養(yǎng)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

（1）銀耳菌糠以棉籽殼、玉米芯等農(nóng)副產(chǎn)品為主，在銀耳生長的過程中，分泌了大量酶將纖維素、木質(zhì)素等大分子營養(yǎng)物質(zhì)降解成還原糖儲存在菌糠中，且富含微量元素，是一種良好的天然培養(yǎng)基質(zhì)。

（2）利用銀耳菌糠液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，添加其他的營養(yǎng)成分，制作成微生物培養(yǎng)基，提升了銀耳菌糠的利用率，為銀耳生產(chǎn)降低了成本。

（3）本發(fā)明的培養(yǎng)基較為穩(wěn)定，不易引起菌種退化，且具有廣泛的適用性，可用作草菇母種、長根菇母種的培養(yǎng)基。

附圖說明：

圖1：不同濃度濃度銀耳菌糠浸提液對長根菇生長的影響；

圖2：不同濃度銀耳菌糠浸提液對草菇菌絲生長的影響。

具體實(shí)施方式：

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。

實(shí)施例1：應(yīng)用于草菇母種培養(yǎng)基的舉例

（1）銀耳菌糠粉制備：將銀耳菌糠脫袋后，于45℃條件下烘干48h至水分含量為6wt%，打粉過60目篩備用。

（2）銀耳菌糠浸提液制備：取70g銀耳菌糠粉于1l沸水中煮制5min，經(jīng)紗布過濾后定容至1l。

（3）固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備：選取新鮮土豆，洗凈，削皮，稱取200g，切成丁字狀和步驟（2）制備的銀耳菌糠浸提液煮制15min，經(jīng)8層紗布過濾后加入20g葡萄糖、20g瓊脂、15g硫酸鎂和20g磷酸二氫鉀，混合均勻。將上述配置好的培養(yǎng)基于121℃高壓滅菌20min，即得草菇母種培養(yǎng)基。

實(shí)施例2：應(yīng)用于長根菇母鐘培養(yǎng)基的舉例

（1）銀耳菌糠粉制備：將銀耳菌糠脫袋后，于45℃條件下烘干48h至水分含量為6wt%，打粉過40目篩備用。

（2）銀耳菌糠浸提液制備：取50g銀耳菌糠粉于1l沸水中煮制5min，經(jīng)紗布過濾后定容至1l。

（3）固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備：選取新鮮土豆，洗凈，削皮，稱取60g，切成丁字狀和步驟（2）制備的銀耳菌糠浸提液煮制15min，經(jīng)8層紗布過濾后加入20g葡萄糖、20g瓊脂、15g硫酸鎂和20g磷酸二氫鉀，混合均勻。將上述配置好的培養(yǎng)基于121℃高壓滅菌20min，即得長根菇菌培養(yǎng)基。

（4）觀察長根菇菌落生長情況，測量菌落直徑，計算菌落日生長速度。

與pda培養(yǎng)基相比，加入銀耳菌糠后能夠有效的促進(jìn)菌絲生長以及菌絲密度。

實(shí)施例3：不同濃度銀耳菌糠浸提液對草菇菌絲生長

為尋求最適濃度銀耳菌糠浸出液對草菇菌絲生長的影響，分別取9g，17.5g，35g，70g銀耳菌糠粉，于1l沸水中煮制5min，經(jīng)紗布過濾后定容至1l，制備不同濃度的銀耳菌糠浸出液，選取新鮮土豆，洗凈，削皮，稱取200g，切成丁字狀和不同濃度的銀耳菌糠浸提液煮制15min，經(jīng)8層紗布過濾后加入20g葡萄糖、20g瓊脂，混合均勻。將上述配置好的培養(yǎng)基于121℃高壓滅菌20min，即得不同濃度銀耳菌糠浸提液草菇母種培養(yǎng)基。將滅菌好的平板放置超凈工作臺中紫外燈滅菌30min,各個濃度梯度的銀耳菌糠分別倒平板,待平板凝固后用同一長滿平板的草菇菌絲沿邊緣打孔接種，觀察菌落生長情況，測量菌落直徑，計算菌落日生長速度，觀察發(fā)現(xiàn)加入銀耳菌糠的栽培料較pda培養(yǎng)基而言菌絲密度增加，且生長速度也有所加快。

實(shí)施例4：草菇菌絲傳代實(shí)驗(yàn)

取pda培養(yǎng)基和70g/l的銀耳菌糠培養(yǎng)基分別倒平板,待平板凝固后用長滿平板的草菇原種培養(yǎng)基（0代）沿邊緣打孔接種，培養(yǎng)3天，即為第一代菌種，將第一代菌種打孔接種至pda培養(yǎng)基和70g/l的銀耳菌糠培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天即為第2代菌種，依次類推，傳代5次，觀察菌絲生長情況，測量菌落直徑，計算菌落日生長速度。

加入銀耳菌糠組與pda組對比，兩組生長速度與傳代次數(shù)沒有明顯聯(lián)系，但兩者對比，在同樣的傳代次數(shù)下，加入銀耳菌糠后菌絲生長速度總體有所提高。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。