)含量的測定
[0117] 配制嗎I噪乙酸的系列標準溶液，其濃度分別為0、0. 5、1. 0、2. 5、5、10、15、20、 25μg/mL。取干潔的大試管9支，每支加入4mL試劑B，再分別加入不同濃度的IAA溶液各 2血，搖勻，于40°C條件下保溫30min，使反應混合液呈紅色。取反應液在530皿處測定0D 值。WIAA濃度（μg/mL)為橫坐標，0〇53。值為縱坐標繪制標準曲線。
[0118] 果渣發(fā)酵液于4°C，10000巧m離屯、lOmin，取上清1血，加入1血比色液II，暗室放 置30min，530nm下測定吸光度，由標準曲線查得IAA含量。 陽119] 2. 8果渣發(fā)酵液中氨基酸含量的測定
[0120] 將果渣發(fā)酵液4000r/min離屯、去除菌體得樣品液；
[0121] 分別取0mL、0.lmL、0. 2mL、0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL谷氨酸標準液于25血刻度管中，定 容，利用721分光光度計測定0D"。值，測定標準曲線。 陽12引取樣品液2血于A試管中，在A、B試管中分別加入5%橫基水楊酸2mL，混勻放置 1小時，沉淀蛋白質，分別加入邸TA溶液1血、鹽酸1血，40(K)r/min離屯、15min，各取1血上 清液蒸干，加入緩沖液ImU定容25mU利用721分光光度計測定孤57。值，由標準曲線查得 氨基酸含量。 陽123] 3試驗結果與分析
[0124] 3.1酵母菌發(fā)酵液的制備
[01巧]Ξ株酵母菌發(fā)酵液的活菌數(shù)測定結果如表2所示。 陽1 %] 表2Ξ株酵母菌發(fā)酵液的活菌數(shù)（C化 陽 127]

[0128] 由表2可W看出，Ξ株酵母菌的發(fā)酵液活菌數(shù)均達到了 2. 0X108cfu/mU可W進行 果渣發(fā)酵接種。
[0129] 3. 2乳酸菌發(fā)酵液的制備
[0130] Ξ株乳酸菌發(fā)酵液的活菌數(shù)測定結果如表3所示。 陽131] 表3Ξ株乳酸菌發(fā)酵液的活菌數(shù)（C化 陽m]
[0133] 由表3可W看出，Ξ株乳酸菌的發(fā)酵液活菌數(shù)均達到了 2. 0X108c化/mU可W進行 果渣發(fā)酵接種。
[0134] 3. 3果渣發(fā)酵液中淀粉酶含量
[0135] 發(fā)酵30d的果渣發(fā)酵上清液中淀粉酶含量的比較結果如圖1中A所示，接種乳酸 菌C200 OI組的淀粉酶含量最高，約為16. 5U/mL;接種酵母菌C4OOO6組的淀粉酶含量最高， 約為15U/mL。結果表明接種乳酸菌發(fā)酵組的淀粉酶含量高于接種酵母菌發(fā)酵組。 陽136] 3. 4果渣發(fā)酵液中核酸含量
[0137] 發(fā)酵30d的果渣發(fā)酵上清液中核酸含量的比較結果如圖1中B所示，接種乳酸菌 C200 OI組的核酸含量最高，約為6. 5μg/mL;接種酵母菌C4OO2I組的核酸含量最高，約為 5. 3μg/mL。結果表明乳酸菌發(fā)酵組的核酸含量總體高于酵母菌發(fā)酵組。
[0138] 3. 5果渣發(fā)酵液中維生素含量
[0139] 發(fā)酵30d的果渣發(fā)酵上清液中維生素含量的比較結果如圖1中C所示，接種乳酸 菌C20038組的維生素含量最高，約6. 4mg/mL;接種酵母菌C4OO3O組的維生素含量最高，約 為6mg/血。結果表明乳酸菌發(fā)酵組的維生素含量與酵母菌組無顯著性的差異。
[0140] 3.6果渣發(fā)酵液中根際生長素（IAA)含量 陽發(fā)酵30d的果渣發(fā)酵上清液中根際生長素（IAA)含量的比較結果如圖1中D所 示，接種酵母菌C4OO2I組的根際生長素含量最高，約為lOlmg/L;接種乳酸菌C200 OI組的根 際生長素含量最高，約為90mg/L。結果表明酵母菌發(fā)酵組的IAA含量總體高于乳酸菌發(fā)酵 組。 陽142] 3. 7果渣發(fā)酵液中氨基酸含量 陽143] 發(fā)酵30d的果渣發(fā)酵上清液中氨基酸含量的比較結果如圖1中E所示，接種乳酸 菌C200 OI組的氨基酸含量最高，約為6. 3μg/血液種酵母菌C4OO2I組的核酸含量高，約為 5. 9μg/mL。結果表明接種乳酸菌發(fā)酵組的氨基酸含量普遍高于酵母菌發(fā)酵組。 陽144] 4總結
[0145] 根據(jù)單菌株發(fā)酵果渣發(fā)酵液中淀粉酶、核酸、維生素、IAAW及氨基酸的含量，最終 選擇了乳酸菌C200 OI、酵母菌C4OO2I作為發(fā)酵果渣酵素的備選菌株。
[0146] 乳酸菌〔2〇001經(jīng)過菌種庫保藏號比對為植物乳桿菌LP化actobacillus plantarum)，已于2010年06月21日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、，其保藏編號為： CCTCCΜ2010150;記載在申請人的另一項專利"一株可用于生物防腐保鮮的乳酸菌及其應 用"（CN101914475Β)中。 陽147] 酵母菌C4OO2I經(jīng)過菌種庫保藏號比對為產(chǎn)航假絲酵母（Candidautilis)CUM，已 于2010年04月19日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、，其保藏編號為：CCTCCΜ2010090; 記載在申請人的另一項專利"一株具有較強有機砸耐受、富集和轉化能力的酵母菌及其應 用"（CN101864369B)中。 陽148] 實施例2酵素肥的制備 陽1例1試驗材料
[0150] 匯源果汁廠提供經(jīng)過干燥處理的含水量為5%的果渣、紅糖； 陽151] 植物乳桿菌LP發(fā)酵液，活菌數(shù)為5. 23Χ108c化; 陽152] 產(chǎn)航假絲酵母CUM發(fā)酵液，活菌數(shù)為2. 21X109c化/mL。
[0153] 2試驗方法
[0154] 2.1酵素肥的制備方法
[0155] 在果渣的發(fā)酵初期起主要作用的菌為酵母菌，進行有氧發(fā)酵；后期起主要作用的 菌為乳酸菌。將果渣、紅糖、水和產(chǎn)航假絲酵母CUM發(fā)酵液混合后，于發(fā)酵壇中密封發(fā)酵，發(fā) 酵30天后補接植物乳桿菌LP發(fā)酵液，繼續(xù)發(fā)酵30天；果渣：紅糖：水：產(chǎn)航假絲酵母CUM 發(fā)酵液準物乳桿菌LP發(fā)酵液=3Kg:lKg:1化：100血：100血。 陽156] 2. 2酵素肥中各類有效元素的測定方法
[0157] 酵素肥中淀粉酶、核酸、維生素、生長素IAA、氨基酸含量的測定如實施例1中 2. 4-2.8的測定方法。 陽15引3試驗結果與分析
[0159] 經(jīng)過發(fā)酵液中各類有效元素含量的測定，其結果為：生長素IAA的含量為lOlmg/ ^維生素含量為6. 41mg/l、淀粉酶含量為16. 54U/mL、核酸含量為6. 58μg/mL、氨基酸含量 為6.39μg/mL。
[0160] 經(jīng)過保質期的測定，在密封的環(huán)境中，常溫放置3個月內各類有效元素的含量無 顯著性差異，因此可W斷定該酵素肥密封的環(huán)境中常溫放置3個月不變質，是一種極好的 綠色液體肥料，具有廉價環(huán)保的特性。 陽161]對比例1:酵素肥的制備
[0162] 試驗材料同實施例2,區(qū)別在于"2. 1酵素肥的制備方法"，本對比例中酵素肥的制 備方法如下：將果渣、紅糖、水、產(chǎn)航假絲酵母CUM發(fā)酵液和植物乳桿菌LP發(fā)酵液混合后，于 發(fā)酵壇中密封發(fā)酵60天；果渣：紅糖：水：產(chǎn)航假絲酵母CUM發(fā)酵液：植物乳桿菌LP發(fā)酵液 =3Kg:化g:10L:100血：100血。
[0163] 對制備的酵素肥中各類有效元素進行測定，測定方法同實施例1中2. 4-2.8的測 定方法。測定結果為：生長素ΙΑΑ的含量為85mg/l、維生素含量為5. 07mg/l、淀粉酶含量為 12.抓/mL、核酸含量為5. 64μg/mL、氨基酸含量為5. 38μg/mL。 陽164]對比例2:酵素肥的制備 陽1化]試驗材料同實施例2,區(qū)別在于"2. 1酵素肥的制備方法"，本對比例中酵素肥的制 備方法如下：將果渣、紅糖、水和植物乳桿菌LP發(fā)酵液混合后，于發(fā)酵壇中密封發(fā)酵，發(fā)酵 30天后補接產(chǎn)航假絲酵母CUM發(fā)酵液，繼續(xù)發(fā)酵30天；果渣：紅糖：水：產(chǎn)航假絲酵母CUM 發(fā)酵液準物乳桿菌LP發(fā)酵液=3Kg:lKg:1化：100血：100血。
[0166] 對制備的酵素肥中各類有效元素進行測定，測定方法同實施例1中2. 4-2. 8的測 定方法。測定結果為：生長素IAA的含量為93mg/L、維生素含量為5. 16mg/L、淀粉酶含量為 16. 48U/mL、核酸含量為4. 4μg/mL、氨基酸含量為6. 1μg/mL。
[0167] 由實施例2、對比例1和對比例2可W看出：制備發(fā)酵液時，不同接種方式也會影 響最終制備的酵素肥的性能，通過對發(fā)酵液的不同接種方式進行了考察，結果發(fā)現(xiàn)：將酵母 菌發(fā)酵液和乳酸菌發(fā)酵液采用間歇接種的方式，間隔25-35天，發(fā)酵后制備的酵素肥性能 最佳。
[0168] 實施例3具有促進作物生長發(fā)育及改良±壤功效的酵素肥的效果驗證 陽1例 1試驗材料
[0170] 本發(fā)明實施例2中制備的酵素肥； 陽171] 白菜品種：市售良豐四季小白菜； 陽172] 2試驗方法
[0173] 2.1試驗分組：
[0174] A:空白Control組（不施化肥和肥料的空白組）；B:CK-I(單施化肥碳酸氨錠 組，按180kg/hm2施用，使用時用水稀釋2000倍）；C:CK-II(為本發(fā)明對比例1制備的酵 素肥，按180kg/hm2施用，使用時用水稀釋2000倍）；D:CK-III(為本發(fā)明對比例2制備的 酵素肥，按180kg/hm2施用，使用時用水稀釋2000倍）；E:EM(為本發(fā)明實施例2制備的酵 素肥，按180kg/hm2施用，使用時用水稀釋2000倍）。 陽1巧]2. 2試驗處理：每個處理組有3個重復，每個重復3排，共5個小區(qū)，單排單灌。 陽176] 2. 3 ±壤和植株采集：在白菜植株生長至5-6cm時進行上述2. 2的試驗處理，在處 理后的第6周進行樣本采集。
[0177] 2. 4植株指標測定：在第6周采集樣本時測定植株的株高、地下根長、根粗、鮮重和 可溶性糖含量。
[0178] 2. 5葉片中可溶性糖含量的測定 陽179] 稱取剪碎混勻的新