：本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一組新化合物及其制備方法，以及該化合物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
：糖尿病是由于胰腺的功能失調(diào)導(dǎo)致胰島素分泌相對(duì)或絕對(duì)不足，或靶細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性降低而引起的一系列全身性代謝紊亂疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織資料，全世界有3.46億人患有糖尿病，嚴(yán)重威脅人類健康。目前的治療藥物主要有胰島素類、胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素增敏劑和碳水新化合物。胰島素類藥物對(duì)于胰島素依賴型糖尿病患者，不用胰島素病情就惡化，一旦用上就難以撤除；胰島素分泌促進(jìn)劑如磺脲類，血糖濃度依賴，易低血糖，易導(dǎo)致腹型肥胖；增加胰島β細(xì)胞負(fù)荷，導(dǎo)致胰島功能衰竭；長(zhǎng)效用藥導(dǎo)致嚴(yán)重的低血糖難以糾正等；胰島素增敏劑，其中雙胍類易引起胃腸道和消化道不良反應(yīng)，而噻唑烷二酮類價(jià)格高，應(yīng)用前提是胰島功能尚可而胰島素受體結(jié)合率低；碳水新化合物，消化道副作用強(qiáng)，肝功能不全者也應(yīng)慎用。鑒于上述種種原因，人們把目光轉(zhuǎn)向天然降血糖藥物的研發(fā)上。天然藥物降血糖在毒副作用方面比化學(xué)藥物具有獨(dú)到之處，因此，從祖國(guó)醫(yī)藥寶庫(kù)中尋找療效確切的降血糖天然藥物，明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而開發(fā)出高效低毒的新藥，成為中醫(yī)藥領(lǐng)域多年研究的焦點(diǎn)?？喙螹omordicacharantiaL.始載于《滇南本草》和《本草綱目》列于菜部菜類,曰：“苦寒無毒,除邪熱,解勞乏，清心名目。”苦瓜廣泛分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū),在許多國(guó)家和地區(qū)都有入藥記載?？喙纤幨惩吹奶匦院惋@著的生理活性使其成為近年來人們研究的熱點(diǎn)。在傳統(tǒng)中醫(yī)領(lǐng)域中的《救荒本草》和《本草綱目》等古文獻(xiàn)里，都曾經(jīng)提到苦瓜能止渴，主治煩熱渴引飲，在治療消渴癥即糖尿病方面有獨(dú)特功效。本發(fā)明在針對(duì)苦瓜降血糖有效成分的研究中，經(jīng)過醇提取、色譜分離純化與細(xì)胞活性檢測(cè)相結(jié)合的方法，最終獲得了具有降血糖活性的一組新化合物，并采用質(zhì)譜與高分辨核核磁共振和單晶衍射等技術(shù)，確定了各個(gè)新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。上述新化合物均具有良好的降血糖活性，可以開發(fā)制成適合于臨床使用的降血糖藥物。如作為先導(dǎo)新化合物，通過結(jié)構(gòu)改造和對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步的研究，可合成一系列的降血糖藥物和新的藥物組合。也可作為苦瓜藥材及其制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分，實(shí)現(xiàn)苦瓜藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，為一類降血糖創(chuàng)新藥物的研究突破目前苦瓜研究開發(fā)的瓶頸奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是提供一組從中藥苦瓜中提取分離得到的新化合物。本發(fā)明另一目的是提供上述新化合物的制備方法。本發(fā)明另一目的是提供上述新化合物在制備降血糖藥物中的用途。本發(fā)明另一目的是提供上述新化合物作為先導(dǎo)藥物的用途，用于合成降血糖藥物。本發(fā)明另一目的是提供上述新化合物作為中藥對(duì)照品的用途，用于檢測(cè)和鑒別苦瓜藥材。本發(fā)明另一目的是提供含有上述新化合物的藥物組合物，可用于治療糖尿病。本發(fā)明另一目的是提供中藥苦瓜的檢測(cè)方法，該方法中以上述新化合物作對(duì)照品。上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：化合物，其具有下式結(jié)構(gòu)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ之一：上述化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和/或Ⅳ的制備方法是：a)取干燥的苦瓜用醇、水或醇-水任意比例混合提取，提取液濃縮，濃縮后將濃縮液經(jīng)酸水解，水解后的反應(yīng)液加水離心或靜置，收集沉淀部分，或者水解后的反應(yīng)液經(jīng)堿中和后用有機(jī)溶劑萃取，收集有機(jī)溶劑部分；b)干燥沉淀部分或有機(jī)溶劑部分，即得苦瓜水解產(chǎn)物，將苦瓜水解產(chǎn)物上200-300目硅膠分離，用溶劑洗脫，硅膠薄層定性，合并相同組分，即得粗品；c)粗品用溶劑重結(jié)晶，即得含有化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的混合物；該混合物經(jīng)高效液相色譜方法制備，用甲醇-水作流動(dòng)相洗脫，分別得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的單體。作為優(yōu)選的實(shí)施方式，上述制備方法中所述的步驟b）的溶劑為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮的任意兩者或三者的組合；步驟c）的溶劑為92%甲醇-水；步驟a）所述的醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇之一或兩種以上的混合物；所述醇-水的比例是1%-95%體積比，優(yōu)選70%體積比。作為優(yōu)選的實(shí)施方式，上述制備方法中的苦瓜是指來自葫蘆科苦瓜屬植物苦瓜的未成熟果實(shí)。作為優(yōu)選的實(shí)施方式，上述制備方法中所述步驟a)中的提取是加熱回流提取或滲濾提取或超聲提取或微波提取或閃式提?。凰鲇么继崛“▽⒏稍锖蟮目喙嫌么继崛?次，每次提取2小時(shí)，合并提取液，提取液減壓濃縮至25℃時(shí)密度為1.00-1.50。作為優(yōu)選的實(shí)施方式，上述制備方法中步驟a)的濃縮液經(jīng)酸水解具體是在酸性水溶液或有機(jī)溶劑中在超聲條件下進(jìn)行，其中濃縮液的用量10-800g/L，g指醇提取物的質(zhì)量單位；酸為鹽酸、硫酸、高氯酸、磷酸、冰乙酸或甲酸，濃度為0.2-9mol/L或?yàn)樯鲜鏊岬娘柡退幔换蛘邽橛袡C(jī)酸，例如蘋果酸、檸檬酸、草酸、酒石酸、抗壞血酸、苯甲酸、水楊酸或咖啡酸等。超聲條件：頻率：20-70kHz；功率：2.4-6KW；時(shí)間：1-120分鐘；水溫：25-100℃；中和萃取為第一種方法，水解后的反應(yīng)液用氫氧化鈉或氫氧化鉀中和，其濃度優(yōu)選0.2-9mol/L；萃取用的有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯或正丁醇；柱層析用硅膠粒度為200-300目；水解溫度為：25-100℃，時(shí)間1分鐘-5天。作為優(yōu)選的實(shí)施方式，上述制備方法中：取干燥的苦瓜用醇提取，提取液濃縮，濃縮后將濃縮液經(jīng)鹽酸水解，加水離心，收集沉淀部分，干燥沉淀部分即得苦瓜水解產(chǎn)物，離心沉淀為第二種方法。將苦瓜水解產(chǎn)物上200-300目硅膠分離，用石油醚-乙酸乙酯50:1，30:1，15:1的混合液依次洗脫，每個(gè)梯度洗脫5個(gè)柱體積，硅膠薄層定性，合并相同組分，30:1組分得到粗品，粗品用乙酸乙酯重結(jié)晶后即得含有化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的混合物，該混合物經(jīng)高效液相色譜方法制備，用甲醇-水作流動(dòng)相洗脫，分別得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的單體。上述化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明具有以下有益效果：1、本發(fā)明提供了一組具有降血糖作用的新化合物，通過對(duì)PTP1B抑制試驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn)，證明了該組化合物具有優(yōu)良的降血糖活性，可制成適合于臨床使用的降血糖藥物。2、采用本實(shí)驗(yàn)的篩選方法從中藥苦瓜中分離純化了化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ，且純度達(dá)到98%以上。上述化合物為從天然植物中提取分離，具有結(jié)構(gòu)新穎、作用獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，一方面可與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的降血糖藥物，另一方面也可作為先導(dǎo)新化合物，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究，合成一系列的降血糖藥物和藥物組合。3、中藥及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控一直是中藥現(xiàn)代化的瓶頸，上述化合物為中藥苦瓜的有效成分之一，可以作為苦瓜藥材及其制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)，在其基礎(chǔ)上建立以該成分為指標(biāo)的鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)苦瓜藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，上述化合物將作為中藥對(duì)照品廣泛使用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1：取干燥的苦瓜未成熟果實(shí)用70%乙醇加熱回流提取，提取2次，每次提取2小時(shí)，過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得到乙醇苦瓜提取物。經(jīng)酸水解（方法見實(shí)施例3-9），制得苦瓜水解產(chǎn)物。將苦瓜水解產(chǎn)物上200-300目硅膠分離，用石油醚-乙酸乙酯50:1，30:1，15:1梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5個(gè)柱體積，硅膠薄層定性，合并相同組分，30:1洗脫收集部分得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的混合物。該混合物經(jīng)高效液相色譜方法制備，液相條件為：溫度：室溫；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流動(dòng)相：92%甲醇-水；流速：3.5mL/min；最大進(jìn)樣量/次：＜1mg，4個(gè)色譜峰之間有良好的分離度，故確定此條件為制備分離的最佳液相條件，峰1(化合物I)的保留時(shí)間為27.8分鐘，峰2(化合物II)的保留時(shí)間為31.6分鐘、峰3(化合物III)的保留時(shí)間為35.2分鐘、峰4(化合物IV)的保留時(shí)間為40.2分鐘。經(jīng)過拆分，得到化合物I為20mg、化合物II為12mg、化合物III為40mg、化合物IV為20mg，純度均為98%。新化合物的結(jié)構(gòu)測(cè)定用ShimadzuUV-2201分光光度計(jì)測(cè)定紫外光譜，用BrukerIFS-55（KBr壓片）分光光度計(jì)測(cè)定紅外光譜，用Perkin-Elmerpolarimeter測(cè)定旋光度，用LCQmassanalyzer測(cè)定ESI-MS，用BICmicroTOF-Qmassspectrometer測(cè)定HR-TOF-MS，1H-和13C-NMR譜用BrukerAV-600和ARX-300，TMS做內(nèi)標(biāo)。化合物Ⅰ白色粉末(甲醇)。UV(cyclohexane)λmax(logε)211.0(3.20)nm；IR(KBr)νmax3501、2917、2849、1702、1646、1471、1383、1115、1083cm-1；HR-ESI-MS的準(zhǔn)分子離子峰：m/z523.3731[M+Na]+(C32H52O4Na，計(jì)算值為523.3758)，結(jié)合NMR推測(cè)化合物的分子式為C32H52O4。1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ0.851(3H,s)、0.853(3H,s)、0.88(3H,s)、1.25(3H,s)、1.70(3H,s)、1.78(3H,s)、0.91(3H,d,J=6.3Hz)為七個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)，δ3.23(3H,s)、3.43（3H,s）為兩個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)，同時(shí)存在δ5.98(1H,dd,J=3.3,9.6Hz)、5.64(1H,dd,J=3.0,9.6Hz)和4.95(1H,d,J=8.7Hz)烯氫質(zhì)子信號(hào)。13CNMR(75MHz,CDCl3)給出了32個(gè)碳信號(hào)。δ55.2、58.1為兩個(gè)甲氧基碳信號(hào)，δ136.3、132.7、130.9和126.2為烯碳信號(hào)，δ86.7一個(gè)連氧次甲基碳信號(hào)，δ112.4一個(gè)縮醛次甲基碳信號(hào)。綜上所述故鑒定化合物Ⅰ為5α,19S-epoxy-19,23-dimethoxycucurbita-6,24–dien-3β-ol為一未見報(bào)道的新化合物，碳?xì)渥V數(shù)據(jù)歸屬和化學(xué)結(jié)構(gòu)見表1?；衔铫虬咨勰?甲醇)。UV(cyclohexane)λmax(logε)211.2(3.20)nm；IR(KBr)νmax3526、2953、2876、1732、1647、1466、1383、1111、1080cm-1；HR-ESI-MS的準(zhǔn)分子離子峰：m/z523.3746[M+Na]+(C32H52O4Na，計(jì)算值為523.3758)，結(jié)合NMR推測(cè)化合物的分子式為C32H52O4。1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ0.85(3H,s)、1.78(3H,s)、1.71(3H,s)、0.88(3H,s)、1.25(3H,s)、0.85(3H,s)、0.91(3H,d,J=6.3Hz)為七個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)，δ3.23(3H,s)、3.43（3H,s）為兩個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)，同時(shí)存在δ5.50(1H,dd,J=3.6,9.6Hz)、6.08(1H,dd,J=1.8,9.6Hz)和4.91(1H,brd,J=9.6Hz)烯氫質(zhì)子信號(hào)。13CNMR(300MHz,CDCl3)給出了32個(gè)碳信號(hào)。δ55.2、57.2為兩個(gè)甲氧基碳信號(hào)，δ136.3、133.0、130.4和126.1為烯碳信號(hào)，δ85.0一個(gè)連氧次甲基碳信號(hào)，δ114.7一個(gè)縮醛次甲基碳信號(hào)?；衔铫虻木w屬于斜方晶系，晶胞參數(shù)為α=90°，β=105.950(8)°，γ=90°,Z=1,Dc=0.968mg/cm3,最終獲得一致性因子R1=0.0413,wR2=0.0934(w=1/σ|F|2),S=1.064.X射線單晶衍射結(jié)構(gòu)分析顯示，化合物2含有三個(gè)六元環(huán)和兩個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu)。相對(duì)構(gòu)型由NOESY譜圖闡明，絕對(duì)構(gòu)型見前文結(jié)構(gòu)式Ⅱ。綜上所述故鑒定化合物Ⅱ?yàn)?α,19R-epoxy-19,23-dimethoxycucurbita-6,24-dien-3β-ol為一未見報(bào)道的新化合物，碳?xì)渥V數(shù)據(jù)歸屬和化學(xué)結(jié)構(gòu)見表1。化合物Ⅲ白色粉末(甲醇)。UV(cyclohexane)λmax(logε)210.4(3.20)nm；IR(KBr)νmax3471、2926、2882、1732、1647、1469、1383、1115、1084cm-1；HR-ESI-MS的準(zhǔn)分子離子峰：m/z523.3752[M+Na]+(C32H52O4Na，計(jì)算值為523.3758)，結(jié)合NMR推測(cè)化合物的分子式為C32H52O4。1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ0.88(3H,s)、1.74(3H,s)、1.68(3H,s)、0.85(3H,s)、1.22(3H,s)、0.85(3H,s)、0.925(3H,d,J=6.6Hz)為七個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)，δ3.12(3H,s)、3.43（3H,s）為兩個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)，同時(shí)存在δ5.964(1H,dd,J=3.3,9.3Hz)、5.63(1H,dd,J=3.0,9.3Hz)和5.023(1H,brd,J=8.4Hz)烯氫質(zhì)子信號(hào)。13CNMR(75MHz,CDCl3)給出了32個(gè)碳信號(hào)。δ55.7、57.2為兩個(gè)甲氧基碳信號(hào)，δ134.4、132.8、130.9和127.0為烯碳信號(hào)，δ86.7一個(gè)連氧次甲基碳信號(hào)，δ112.0一個(gè)縮醛次甲基碳信號(hào)?；衔?的晶體屬于斜方晶系、晶胞系數(shù)為a=β=g=90°,Z=1,Dc=1.001mg/cm3,最終獲得一致性因子R1=0.0729,wR2=0.1449(w=1/s|F|2),S=1.019。X射線單晶衍射結(jié)構(gòu)分析顯示，化合物3含有三個(gè)六元環(huán)和兩個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu)。23位甲氧基是在平面下。相對(duì)構(gòu)型由NOESY譜圖證明，絕對(duì)構(gòu)型見前文結(jié)構(gòu)式Ⅲ。綜上所述故鑒定化合物Ⅲ為5β,19R-epoxy-19,23-dimethoxycucurbita-6,24-dien-3β-ol，為一未見報(bào)道的新化合物。碳?xì)渥V數(shù)據(jù)歸屬和化學(xué)結(jié)構(gòu)見表1。化合物Ⅳ白色粉末(甲醇)。UV(cyclohexane)λmax(logε)210.8(3.20)nm；IR(KBr)νmax3525、2939、2875、1732、1647、1466、1382、1113、1083cm-1；HR-ESI-MS的準(zhǔn)分子離子峰：m/z523.3750[M+Na]+(C32H52O4Na，計(jì)算值為523.3758)，結(jié)合NMR推測(cè)化合物的分子式為C32H52O4。1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ0.88(3H,s)、1.74(3H,s)、1.68(3H,s)、0.88(3H,s)、1.25(3H,s)、0.85(3H,s)、0.94(3H,d,J=6.3Hz)為七個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)，δ3.21(3H,s)、3.40（3H,s）為兩個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)，同時(shí)存在δ5.51(1H,dd,J=3.6,9.9Hz)、6.08(1H,dd,J=1.5,9.6Hz)和5.02(1H,brd,J=8.7Hz)烯氫質(zhì)子信號(hào)。13CNMR(75MHz,CDCl3)給出了32個(gè)碳信號(hào)。δ55.7、57.3為兩個(gè)甲氧基碳信號(hào)，δ134.5、133.0、130.5和127.0為烯碳信號(hào)，δ85.1一個(gè)連氧次甲基碳信號(hào)，δ114.7一個(gè)縮醛次甲基碳信號(hào)。綜上所述故鑒定化合物Ⅳ為5β,19S-epoxy-19,23-dimethoxycucurbita-6,24-dien-3β-ol為一未見報(bào)道的新化合物，碳?xì)渥V數(shù)據(jù)歸屬和化學(xué)結(jié)構(gòu)見表1。表1化合物Ⅰ-Ⅳ的13CNMR(75MHz，CDCl3)和1HNMR(300MHz,CDCl3)光譜數(shù)據(jù)實(shí)施例2上述化合物抑制PTP1B的活性實(shí)驗(yàn)抑制PTP1B酶的活性實(shí)驗(yàn)在96孔板中進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)組依次加入83μL含酶緩沖溶液、10μL待測(cè)樣品溶液和4μL底物溶液，陽(yáng)性對(duì)照組依次加入83μL含酶緩沖溶液、10μL釩酸鈉溶液和4μL底物溶液。試劑對(duì)照組加入83μL含酶溶液、10μLDMSO溶液和4μL底物溶液，在恒溫培養(yǎng)箱中37℃反應(yīng)30分鐘后，用5μLNaoH終止反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀測(cè)量產(chǎn)物在410nm處的紫外吸收強(qiáng)度。溶液配制①儲(chǔ)存液分別取0.6055gTris和0.0584gEDTA加蒸餾水稀釋至20mL，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.5。終濃度Tris-HCl為250mM，EDTA為10mM。保存條件：4℃可長(zhǎng)期保存。②緩沖液取1mL儲(chǔ)存液，加蒸餾水稀釋至10mL，并加入0.0015gDTT和0.718μLβ-mercaptoethanol。此時(shí)緩沖液含25mMTris-HCl、1mMEDTA、1mMDTT、2mMβ-mercaptoethanol。此溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。③底物溶液稱取0.1856g于pNPP1.5mLEP管，用1mL緩沖溶液稀釋，。保存條件：用錫紙包裹，保存于-20℃的冰柜中。④釩酸鈉溶液取0.816g十二水釩酸鈉，加100mL蒸餾水,將溶液加熱沸騰至半透明，并調(diào)節(jié)pH至10左右，用移液槍取1mL溶液至100mL燒杯中，用玻璃棒攪拌混勻，再次加熱至沸騰至半透明，確保釩酸鈉為單體形式，待冷卻后分裝于1.5mLEP管中，-20℃冷凍保存。⑤PTP1B酶溶液原始包裝為50μg/50μL,含25mMTris-HCl（pH7.5），2mMβ-mercaptoethanol,1mMEDTA,1mMDTT和20%Glycerol。保存條件：4℃凍存2-4周，-20℃凍存時(shí)間更長(zhǎng)，若長(zhǎng)時(shí)間凍存可添加0.1%牛血清白蛋白或人血清白蛋白。避免反復(fù)凍融。使用時(shí)取35.4μL酶溶液加緩沖液稀釋至8.3mL，可供96孔使用?？筛鶕?jù)每次實(shí)驗(yàn)新化合物數(shù)量、濃度梯度、平行數(shù)量按比例配置PTP1B酶溶液。⑥待測(cè)樣品溶液用EP管準(zhǔn)確稱量新化合物，溶解在DMSO中，使?jié)舛葹?0mmol/L，成為原液。用移液槍取30μL原液，加970μLDMSO，用振蕩器混合均勻，成為待測(cè)樣品溶液1。從待測(cè)樣品溶液1中取30μL加70μLDMSO，成為待測(cè)樣品溶液2，即為高濃度和低濃度待測(cè)樣品溶液。⑦終止溶液2MNaOH。評(píng)價(jià)指標(biāo)測(cè)定在不同濃度下對(duì)基因重組PTP1B的相對(duì)抑制率的計(jì)算公式如下：其中對(duì)照組為試劑對(duì)照組。表2化合物對(duì)PTP1B的相對(duì)抑制率以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，化合物I、II、III和IV對(duì)PTP1B具有顯著的抑制作用，它們的濃度為30μM的抑制率分別為77%，62%，40%和62%。實(shí)施例3苦瓜提取物的鹽酸水解法3.1稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加濃鹽酸10mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：50kHz；功率：3KW；時(shí)間：30分鐘；在溫度40℃水解12h。水解后的反應(yīng)液加水1000mL，靜置后沉淀部分用水洗反復(fù)至中性后靜置，收集沉淀，濾過，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。3.2稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加濃鹽酸10mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：50kHz；功率：3KW；時(shí)間：30分鐘；在溫度40℃水解12h，水解液用2.5mol/L氫氧化鈉中和后用氯仿萃取，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，回收氯仿液后收集殘余物，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例4苦瓜提取物的硫酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加44%硫酸15mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：50kHz；功率：3KW；時(shí)間：20分鐘；在溫度40℃水解8小時(shí)。水解后的反應(yīng)液加水1000mL，靜置后沉淀部分用水洗反復(fù)至中性后靜置24小時(shí)，收集沉淀，濾過，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例5苦瓜提取物的高氯酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加43%高氯酸16mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：40kHz；功率：2KW；時(shí)間：30分鐘；在溫度40℃水解12h，水解液用3.0mol/L氫氧化鈉中和后用氯仿萃取，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，回收氯仿液后收集殘余物，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例6苦瓜提取物的磷酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加45%磷酸15mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：50kHz；功率：3KW；時(shí)間：60分鐘；，在溫度40℃水解24h，水解液用2.5mol/L氫氧化鈉中和后用氯仿萃取，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，回收氯仿液后收集殘余物，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例7苦瓜提取物的冰醋酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加冰醋酸8.3mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：60kHz；功率：3KW；時(shí)間：50分鐘；在溫度50℃水解12h，水解液用2.5mol/L碳酸鈉中和后用氯仿萃取，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，回收氯仿液后收集殘余物，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例8苦瓜提取物的甲酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加甲酸5.0mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：60kHz；功率：3KW；時(shí)間：50分鐘；在溫度50℃水解12h，水解后的反應(yīng)液加水1000mL，靜置后沉淀部分用水洗反復(fù)至中性后靜置24小時(shí)，收集沉淀，濾過，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。實(shí)施例9苦瓜提取物的檸檬酸水解法稱取苦瓜提取物10g，超聲溶于50mL甲醇，緩緩滴加檸檬酸3.0mL（同時(shí)攪拌）后進(jìn)行超聲水解。超聲條件：頻率：60kHz；功率：3KW；時(shí)間：60分鐘；在溫度50℃水解12h，水解液用2.0mol/L碳酸鈉中和后用氯仿萃取，水洗至中性，加無水硫酸鈉脫水，回收氯仿液后收集殘余物，干燥后即得苦瓜水解產(chǎn)物。