本發(fā)明涉及醫(yī)藥合成領(lǐng)域，具體涉及一種低分子量肝素鈣的制備方法。

背景技術(shù)：
肝素是一種由糖醛酸和葡萄糖胺等低聚糖組成的混合物，具有抗凝活性，從發(fā)現(xiàn)至今已有80余年的歷史，目前仍沒(méi)有一種能夠完全替代其的產(chǎn)品，仍是重要的生化藥物。肝素是預(yù)防手術(shù)后血栓形成和治療靜脈血栓的首選藥物。但大量的使用會(huì)引起出血和誘導(dǎo)血小板減少等副作用，限制了其大量的使用。低分子量肝素是肝素分級(jí)或降解得到的分子量較小的糖片段，其重均分子量在3000-8000，具有與肝素相當(dāng)?shù)目筙a因子作用，而抗凝血酶(IIa)活性大大降低，其抗栓作用對(duì)凝血系統(tǒng)影響較小，出血傾向較小，還具有分子小，易吸收，生物利用度高，體內(nèi)半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn)，其有效性與安全性由于肝素，目前已成為抗凝類藥物研究的熱點(diǎn)。低分子量肝素鈣是低分子量肝素的鈣鹽，與鈉鹽相比，鈣鹽經(jīng)注射后緩慢擴(kuò)散，不會(huì)減少局部細(xì)胞間毛細(xì)血管的鈣膠質(zhì)，也不會(huì)改變血管通透性，幾乎無(wú)鈉鹽經(jīng)皮下注射可能引起的局部出血的副作用，故鈣鹽更適于臨床使用。衡量低分子肝素鈣的品質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)有兩個(gè)，一個(gè)是抗Xa因子效價(jià)，另一個(gè)就是抗Xa/抗Ⅱa比值，這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的值越高，產(chǎn)品質(zhì)量越好。公開(kāi)號(hào)為CN1554671A的中國(guó)專利公開(kāi)了“一種低亞硝酸鹽含量的低分子肝素鈣的制備方法”，其基于亞硝酸鹽法將低分子量肝素鈉經(jīng)多次酸堿反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榈头肿恿扛嗡剽}，雖然其成功降低了亞硝酸鹽的含量，但制備過(guò)程中pH值較低，加上后續(xù)轉(zhuǎn)鈣步驟中酸堿強(qiáng)烈的中和反應(yīng)，對(duì)抗Xa因子效價(jià)有一定損失，造成了抗Xa因子效價(jià)和抗Xa/抗Ⅱa比值不高的問(wèn)題，影響產(chǎn)品質(zhì)量，同時(shí)此工序操作較繁瑣，可能引入其它試劑雜質(zhì)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種低分子量肝素鈣的制備方法，使該制備方法能夠提高低分子量肝素鈣的抗Xa因子效價(jià)和抗Xa/抗Ⅱa比值；本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種低分子量肝素鈣的制備方法，使該制備方法能夠簡(jiǎn)化制備低分子量肝素鈣工藝步驟。針對(duì)現(xiàn)有低分子量肝素鈣制備方法(CN1554671A)中，抗Xa因子效價(jià)和抗Xa/抗Ⅱa比值較低，影響產(chǎn)品質(zhì)量，同時(shí)工序操作較繁瑣的問(wèn)題，本發(fā)明提供如下解決方案：一種低分子量肝素鈣的制備方法，包括以下步驟：步驟1、利用亞硝酸鈉法制備低分子量肝素鈉溶液；步驟2、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂用氯化鈣溶液進(jìn)行樹(shù)脂鈣化，然后將步驟1制備的低分子量肝素鈉溶液上鈣化后的陽(yáng)離子樹(shù)脂，進(jìn)行鈣鈉離子置換；步驟3、將步驟2鈣鈉離子置換后的置換液過(guò)濾、凍干、粉碎獲得低分子量肝素鈣。作為優(yōu)選，步驟1為：步驟1.1、取肝素鈉溶于水溶液中，加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，加入亞硝酸鈉反應(yīng)4-6h獲得降解液；步驟1.2、向所述降解液中加入30％過(guò)氧化氫溶液氧化15min，然后加入25％氫氧化鈉溶液中和pH值至6.5-7.0，獲得中和液；步驟1.3、向所述中和液中加入95％乙醇進(jìn)行醇沉并分離醇沉物，所得醇沉物用注射用水溶解獲得低分子量肝素鈉溶液。其中，所述肝素鈉、亞硝酸鈉和30％過(guò)氧化氫的比例優(yōu)選為2.5kg:70g-90g:660mL，更優(yōu)選為2.5kg:80g-85g:660mL；所述各pH值均可從限定的范圍內(nèi)任取一個(gè)點(diǎn)值，并不局限于范圍的端點(diǎn)值，且可以和其它參數(shù)任意組合，不限于上述優(yōu)選的步驟1具體方案，例如所述加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，所述pH值可以取此范圍內(nèi)諸如2.01、2.02......3.98、3.99或4.00任意一個(gè)作為pH值，且可以和過(guò)氧化氫、氫氧化鈉的濃度以及反應(yīng)時(shí)間、氧化時(shí)間參數(shù)任意組合，其他pH值參照此解釋。作為優(yōu)選，所述陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為強(qiáng)酸性大孔陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，進(jìn)一步優(yōu)選為D001型強(qiáng)酸性大孔陽(yáng)離子交換樹(shù)脂或JZD001X7-II型大孔強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。作為優(yōu)選，所述低分子量肝素鈉的重均分子量為3000-4500D。作為優(yōu)選，所述低分子量肝素鈣的重均分子量為3000-4500D。作為優(yōu)選，所述樹(shù)脂鈣化步驟為：陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上氯化鈣溶液，置換至下柱液pH值呈中性后，注射用水沖洗陽(yáng)離子交換樹(shù)脂完成樹(shù)脂鈣化。其中，所述氯化鈣溶液濃度優(yōu)選為0.5mol/L。本發(fā)明在制備過(guò)程中避免pH值為2以下的低分子量肝素步驟，減少了低分子量肝素在極低pH值環(huán)境下的分解，同時(shí)通過(guò)低分子量肝素鈉與陽(yáng)離子交換樹(shù)脂溫和的進(jìn)行置換，避免了采用氫氧化鈣與低分子量肝素的酸堿中和放熱反應(yīng)，保證了低分子量肝素鈣的穩(wěn)定，避免了劇烈環(huán)境下的抗Xa因子效價(jià)的損失。經(jīng)過(guò)檢測(cè)分析，本發(fā)明制備的低分子量肝素鈣抗Xa因子效價(jià)介于105-120IU/mg，明顯高于CN1554671A中記載的最高抗Xa因子效價(jià)102IU/mg(實(shí)施例1)，同時(shí)抗Xa/抗Ⅱa最高比值達(dá)到4.4以上，高于CN1554671A記載的最高比值4.2。此外，本發(fā)明簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步驟，通過(guò)樹(shù)脂一次進(jìn)行置換，提高了生產(chǎn)效率，采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，先選擇性吸附原料中的鈣離子，然后與低分子量肝素鈉進(jìn)行置換，減少雜質(zhì)的引入，所置換產(chǎn)生的低分子量肝素鈣，大部分為結(jié)合態(tài)鈣，保證鈣含量的穩(wěn)定可靠。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種低分子量肝素鈣的制備方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述制備方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。以下就本發(fā)明所提供的一種低分子量肝素鈣的制備方法做進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1：制備低分子量肝素鈣降解：取精品肝素鈉2.5kg溶于水溶液中，加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，加入亞硝酸鈉80.00g反應(yīng)4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％(質(zhì)量百分比，下同)過(guò)氧化氫溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氫氧化鈉溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，為低分子量肝素鈉溶液。鈣化樹(shù)脂：JZD001X7-II型大孔強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上0.5mol/L氯化鈣溶液，置換至下柱液pH值呈中性后，注射用水沖洗離子交換樹(shù)脂。鈣置換：低分子量肝素鈉溶液上陽(yáng)離子交換柱，進(jìn)行鈉鈣置換。精制：置換液經(jīng)0.22um過(guò)濾后，得到精品溶液。凍干：精品溶液置于冷凍干燥機(jī)凍干，粉碎后，得到低分子量肝素鈣成品1858g。實(shí)施例2：制備低分子量肝素鈣降解：取精品肝素鈉2.5kg溶于水溶液中，加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，加入亞硝酸鈉81.25g反應(yīng)4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％過(guò)氧化氫溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氫氧化鈉溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，為低分子量肝素鈉溶液。鈣化樹(shù)脂：JZD001X7-II型大孔強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上0.5mol/L氯化鈣溶液，置換至下柱液pH值呈中性后，注射用水沖洗離子交換樹(shù)脂。鈣置換：低分子量肝素鈉溶液上陽(yáng)離子交換柱，進(jìn)行鈉鈣置換。精制：置換液經(jīng)0.22um過(guò)濾后，得到精品溶液。凍干：精品溶液置于冷凍干燥機(jī)凍干，粉碎后，得到低分子量肝素鈣成品1932g。實(shí)施例3：制備低分子量肝素鈣降解：取精品肝素鈉2.5kg溶于水溶液中，加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，加入亞硝酸鈉82.5g反應(yīng)4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％過(guò)氧化氫溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氫氧化鈉溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，為低分子量肝素鈉溶液。鈣化樹(shù)脂：D001型強(qiáng)酸性大孔陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上0.5mol/L氯化鈣溶液，置換至下柱液pH值呈中性后，注射用水沖洗離子交換樹(shù)脂。鈣置換：低分子量肝素鈉溶液上陽(yáng)離子交換柱，進(jìn)行鈉鈣置換。精制：置換液經(jīng)0.22um過(guò)濾后，得到精品溶液。凍干：精品溶液置于冷凍干燥機(jī)凍干，粉碎后，得到低分子量肝素鈣成品2047g。實(shí)施例4：制備低分子量肝素鈣降解：取精品肝素鈉2.5kg溶于水溶液中，加醋酸調(diào)節(jié)pH值至2-4，加入亞硝酸鈉83.75g反應(yīng)4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％過(guò)氧化氫溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氫氧化鈉溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，為低分子量肝素鈉溶液。鈣化樹(shù)脂：D001型強(qiáng)酸性大孔陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上0.5mol/L氯化鈣溶液，置換至下柱液pH值呈中性后，注射用水沖洗離子交換樹(shù)脂。鈣置換：低分子量肝素鈉溶液上陽(yáng)離子交換柱，進(jìn)行鈉鈣置換。精制：置換液經(jīng)0.22um過(guò)濾后，得到精品溶液。凍干：精品溶液置于冷凍干燥機(jī)凍干，粉碎后，得到低分子量肝素鈣成品2195g。實(shí)施例5：產(chǎn)品檢測(cè)將實(shí)施例1-實(shí)施例4制備的低分子量肝素鈣進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比產(chǎn)品為采用CN1554671A實(shí)施例1記載的方法制備的產(chǎn)品，檢測(cè)結(jié)果如下表：表1產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果由表1可知，本發(fā)明制備的產(chǎn)品符合低分子量肝素鈣的各項(xiàng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且在抗Xa因子效價(jià)、抗Xa/抗Ⅱa比值和干燥失重比例方面顯著優(yōu)于CN1554671A。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。