本發(fā)明涉及一種毛葉山桐子中抗菌成分的提取方法及用途,屬于植物提取領(lǐng)域。
背景技術(shù):
毛葉山桐子,又稱為水冬瓜,是山桐子的變種。其果實(shí)中主要含有脂肪酸、酚類、糖甙、生物堿、維生素E等,并具有一定的生物活性,被廣泛應(yīng)用于抗菌、殺菌、抗氧化、強(qiáng)心、降血壓等領(lǐng)域?;诿~山桐子提取物產(chǎn)品廣譜性應(yīng)用的巨大需求,我國(guó)黃河流域以南的大部分省份例如:浙江、江蘇、安徽、湖北、河南、山東、廣東、江西、貴州、四川、云南、重慶、陜西等地均出現(xiàn)大面積人工栽種,產(chǎn)品研發(fā)機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)廠家也應(yīng)運(yùn)而生。目前,從天然植物中提取抗菌物質(zhì)的研究有很多,這些提取物的種類主要由揮發(fā)油、有機(jī)酸、生物堿、鞣質(zhì)、某些內(nèi)酯等。例如,CN1740137A公開(kāi)了一種從葵花粕中提取純化綠原酸的方法,而綠原酸具有抗菌消炎、利膽、止血及增高白血球數(shù)量的作用。CN1789395A公開(kāi)了具有抑菌和/或殺菌作用的藏藥異葉青蘭揮發(fā)油及其在制備具有抑菌和/或殺菌作用的產(chǎn)品中的應(yīng)用。CN101084989A公開(kāi)了同時(shí)制備苦參總黃酮提取物和總生物堿提取物的制備方法,苦參總黃酮提取物和苦參總生物堿提取物具有抗菌殺蟲、抗病毒、抗炎,可用于抗菌和殺菌等領(lǐng)域。周燕等(周燕等,水冬瓜果肉的非油脂化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2003,15(1):13-17)發(fā)現(xiàn)水冬瓜果皮的乙醇提取物用石油醚脫脂后的浸膏對(duì)臘狀芽孢桿菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用,而且發(fā)現(xiàn)它對(duì)離體蟾蜍心臟的作用實(shí)驗(yàn)表明該萃取物具有一定的強(qiáng)心作用,但未對(duì)各單體化合物做進(jìn)一步的活性研究。葛紅光等(葛紅光,吳婉蛾,陳開(kāi)勛.水冬瓜籽中天然抗氧化劑研究[J].中國(guó)油脂,1998,23(6):49-51)用烘箱法測(cè)試水冬瓜種子提取物抗氧化活性時(shí),發(fā)現(xiàn)它具有很強(qiáng)的抑制豬油氧化作用。他們將水冬瓜種子乙醇提取物以水懸浮,分別以乙酸乙酯、正丁醇萃取,發(fā)現(xiàn)正丁醇萃取物用量為4×l0-4%時(shí)其抗氧化性已強(qiáng)于2,6-二叔丁基對(duì)甲基苯酚(BHT)的用量2×l0-4%?;谄淞己玫纳镝t(yī)藥活性,研究人員還開(kāi)展了對(duì)該植物的化學(xué)成分研究。周燕等(周燕等,水冬瓜果肉的非油脂化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2003,15(1):13-17)從水冬瓜果肉乙醇浸膏的正丁醇萃取物還分離出常見(jiàn)化合物1,2-順-環(huán)己二醇和鄰苯二酚。KimSeungHyun等(KimSeungHyun等,Idesolide:ANewSpiroCompoundfromIdesiapolycarpa[J].Org.Lett.,2005,7(15):3275–3277)從水冬瓜果實(shí)甲醇提取物分離到結(jié)構(gòu)復(fù)雜的醇類物質(zhì),并對(duì)該甲醇提取物的氯仿部分中得到一單體的螺環(huán)化合物,應(yīng)用NMR、MS和單晶X射線衍射鑒定并將其命名為idesolide。在2007年,KimSeungHyun等(KimSeungHyun等,InhibitoryactivityofphenolicglycosidesfromthefruitsofIdesiapolycaroaonlipopolysaccharide-inducednitricoxideproductioninBV2microglia[J].PlantaMedica,2007,73(2):167-169)又從水冬瓜果實(shí)甲醇提取物的乙酸乙脂部分分離得到1-hydroxy-6-oxocyclohex-2-enecarboxylicacidmethylester,后者可能是前者的分解產(chǎn)物。雖然人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)山桐子屬植物含有重要的酚性糖甙、二萜等活性成分,毛葉山桐子果實(shí)早已被用于殺蟲、除草等農(nóng)業(yè)活動(dòng),但化學(xué)成分與生物活性報(bào)道較少。因而,針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)缺陷,本發(fā)明旨在開(kāi)發(fā)一種毛葉山桐子中抗菌成分的提取方法,采用簡(jiǎn)單、快捷的提取方法提取出四個(gè)化合物,并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和確認(rèn),分別為β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、二十碳酸、6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。同時(shí),化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌表現(xiàn)出較高的抗菌活性,將在抗菌劑、殺菌劑、消毒劑、清潔劑、清洗劑、防腐劑等領(lǐng)域具有應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
為了解決上述缺陷,本發(fā)明人進(jìn)行了潛心研究,在付出大量創(chuàng)造性勞動(dòng)后,從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明涉及一種毛葉山桐子中抗菌成分的提取方法及用途,所述提取方法不僅簡(jiǎn)單、便捷,而且提取率較高,同時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌表現(xiàn)出較高的抗菌活性。更具體而言,本發(fā)明涉及一種水冬瓜中抗菌成分即β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷的提取方法,以及它們?cè)诳咕鷦?、殺菌劑、消毒劑、清潔劑、清洗劑、防腐劑領(lǐng)域中的應(yīng)用。具體而言,第一方面,本發(fā)明提供了一種毛葉山桐子中抗菌成分的提取方法,包括以下步驟:(1)從干燥的毛葉山桐子果實(shí)分離出果皮和種子,將種子粉碎后得干粉,以乙酸乙酯為溶劑微波浸提3-5次,微波功率為500-1000W,每次10-20分鐘,分離提取液,濃縮提取液得乙酸乙酯提取浸膏,分離所得的濾渣再用質(zhì)量百分比濃度為70%的乙醇提取4次,每次10小時(shí),合并提取液,濃縮至無(wú)醇味,得乙醇提取浸膏;取乙醇提取浸膏,經(jīng)100-200目硅膠柱,干法上樣,硅膠柱先后以二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇進(jìn)行洗脫,從而將其分為3個(gè)部分,分別為二氯甲烷部分、乙酸乙酯部分和甲醇部分。(2)將步驟(1)所得乙酸乙酯提取浸膏經(jīng)固相柱層析,以環(huán)己烷-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,分別得到化合物β-香樹(shù)脂醇和化合物β-谷甾醇;(3)將上述步驟(1)中乙醇提取浸膏層析柱洗脫后得到的乙酸乙酯部分,過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱,以石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,分別得到化合物二十碳酸CH3(CH2)18COOH和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。其中,β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷的結(jié)構(gòu)式如下:在本發(fā)明的水冬瓜中抗菌成分的提取方法中,所述步驟(1)中的微波功率為500-1000W,例如為500W、600W、700W、800W、900W或1000W,更優(yōu)選為600-800W,最優(yōu)選為700W。在本發(fā)明的水冬瓜中抗菌成分的提取方法中,所述步驟(2)的具體操作如下:將步驟(1)所得乙酸乙酯提取浸膏經(jīng)固相柱層析,以環(huán)己烷-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,梯度洗脫混合溶劑中環(huán)己烷、丙酮的體積比依次為30:1、25:1、20:1、15:1、10:1和5:1;收集兩者體積比為30:1、25:1、20:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥,得到化合物β-香樹(shù)脂醇;收集兩者體積比為15:1、10:1和5:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥,得到化合物β-谷甾醇。在本發(fā)明的水冬瓜中抗菌成分的提取方法中,所述步驟(3)的具體操作如下:將上述步驟(1)中乙醇提取浸膏層析柱洗脫后得到的乙酸乙酯部分,過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱,以石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,梯度洗脫混合溶劑中石油醚、乙酸乙酯的體積比依次為25:1、20:1、15:1、10:1和5:1,收集25:1和20:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥得到化合物二十碳酸CH3(CH2)18COOH;收集15:1、10:1和5:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥得到6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。在本發(fā)明的水冬瓜中抗菌成分的提取方法中,所述步驟(2)中的固相柱為中性氧化鋁柱。其中,所述中性氧化鋁的粒度為100-500目,最優(yōu)選為100-200目。在本發(fā)明的水冬瓜中抗菌成分的提取方法中,所述步驟(3)中的大孔吸附樹(shù)脂為DM301樹(shù)脂、AB-8樹(shù)脂、DA201樹(shù)脂、D101樹(shù)脂、X-5樹(shù)脂或DM130樹(shù)脂。其中,所述大孔吸附樹(shù)脂優(yōu)選為AB-8樹(shù)脂、DM301樹(shù)脂、DA201樹(shù)脂或者D101樹(shù)脂,最優(yōu)選為D101樹(shù)脂。第二方面,本發(fā)明涉及使用上述方法提取得到的β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇或6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。第三方面,本發(fā)明涉及上述提取到的活性化合物的用途。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn),通過(guò)本發(fā)明方法提取得到的化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌表現(xiàn)出較高的抗菌活性,因而可應(yīng)用到抗菌劑、殺菌劑、消毒劑、清潔劑、清洗劑、防腐劑等領(lǐng)域。具體實(shí)施方式下面通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明,但這些例舉性實(shí)施方式僅用于例舉,而并非對(duì)本發(fā)明的實(shí)際保護(hù)范圍構(gòu)成任何形式的任何限定。實(shí)施例1(1)從干燥的毛葉山桐子果實(shí)分離出果皮和種子。將種子粉碎后得干粉,以乙酸乙酯用微波浸提5次,微波功率為:700W,每次15分鐘,濃縮提取液得乙酸乙酯提取浸膏,分離所得的濾渣再用質(zhì)量百分比濃度為70%的乙醇提取4次,每次10小時(shí),合并提取液,濃縮至無(wú)醇味,得乙醇提取浸膏。取乙醇提取浸膏,經(jīng)規(guī)格為100-200目粒度范圍的硅膠柱,干法上樣,硅膠柱先后以二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇梯度洗脫。根據(jù)TLC檢測(cè)的結(jié)果,將其分為3個(gè)部分,分別為二氯甲烷部分、乙酸乙酯部分和甲醇部分。(2)將步驟(1)所得乙酸乙酯提取浸膏經(jīng)100-200目中性氧化鋁進(jìn)行柱層析,以環(huán)己烷-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,梯度洗脫混合溶劑中環(huán)己烷、丙酮的體積比依次為30:1、25:1、20:1、15:1、10:1和5:1;收集兩者體積比為30:1、25:1、20:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥,得到化合物β-香樹(shù)脂醇;收集兩者體積比為15:1、10:1和5:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥,得到化合物β-谷甾醇。(3)將上述步驟(1)中乙醇提取浸膏層析柱洗脫后得到的乙酸乙酯部分,過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂柱,以石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫,梯度洗脫混合溶劑中石油醚、乙酸乙酯的體積比依次為25:1、20:1、15:1、10:1和5:1,收集25:1和20:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥得到化合物二十碳酸CH3(CH2)18COOH;收集15:1、10:1和5:1的洗脫流分,旋蒸除去溶劑,干燥得到6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。實(shí)施例2-6除將實(shí)施例1步驟(1)中提取微波功率分別替換為500W、600W、800W、900W、1000W外,分別以與實(shí)施例1的相同方式實(shí)施了實(shí)施例2-6。實(shí)施例7-9除將實(shí)施例1步驟(3)中D101大孔吸附樹(shù)脂分別替換為AB-8樹(shù)脂、DM301樹(shù)脂、DA201樹(shù)脂外,以與實(shí)施例1的相同方式實(shí)施了實(shí)施例7-9。上述實(shí)施例1-9得到的四個(gè)化合物的表征數(shù)據(jù)分別如下:β-香樹(shù)脂醇m.p.:183-185℃。IR(KBr)cm-1:2919、2872、1463、1034。EI-MSm/z:426[M]+。1H-NMR(CDCl3,500MHz)δ:0.78(3H,s)、0.82(3H,s)、0.86(6H,s)、0.93(3H,s)、0.95(3H,s)、1.04(3H,s)、1.11(3H,s),5.18(1H,t,J=3.4Hz,H-12),3.22(1H,dd,J=4.4,11.2Hz,H-3α),其中0.78(3H,s)、0.81(3H,s)、0.86(6H,s)、0.92(3H,s)、0.95(3H,s)、1.01(3H,s)、1.10(3H,s)為8個(gè)角甲基單峰,為五環(huán)三萜類化合物;13C-NMR(CDCl3)δ:38.6、27.5、79.1、39.6、55.1、18.2、32.5、38.6、47.3、37.1、23.3、21.6、145.1、39.8、26.1、27.0、32.3、47.3、46.6、31.1、34.6、37.1、28.1、15.4、15.4、16.6、26.1、38.2、33.1、23.5。β-谷甾醇m.p.:135-138℃。IR光譜顯示有-OH(3433cm-1)、-C=C-基團(tuán)(1630cm-1,弱)。EI-MSm/z:414[M]+。1H-NMR(CDCl3)δ:5.35(1H,d,J=5.2Hz)、3.50(1H,m)、1.01(3H,s)、0.92(3H,d,J=6.8Hz)、0.91(3H,d,J=6.7Hz)、0.84(3H,t,J=7.3Hz)、0.82(3H,d,J=7.2Hz)、0.66(3H,s)。13C-NMR(CDCl3):37.1、31.5、71.6、42.1、140.5、121.5、31.8、32.0、50.1、36.4、21.0、39.6、42.1、56.6、24.2、28.0、56.0、11.6、19.2、36.0、18.6、34.0、26.0、45.7、29.0、19.6、19.2、23.0、11.9。二十碳酸m.p.:47-48℃。IR:-C=O(1707cm-1),長(zhǎng)鏈CH2(2920、2851、1466、730cm-1),EI-MSm/z:312.2[m]+、284.2、256.2、185.1、171.1、129.0、111.0、97.0、83.0。1H-NMR(CDCl3)δ:0.75ppm(3H,CH3),1-2ppm內(nèi)有17個(gè)CH2,2-3ppm內(nèi)有1個(gè)個(gè)CH2。6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷m.p.:152-153℃。IR:糖基(3422cm-1處寬而鈍的峰)、-C=C-(1636cm-1)、-C=O(1740cm-1)、-C-O-C-(1077cm-1、1046cm-1)、CH2(2825cm-1、1474cm-1)。EI-MSm/z:301.4、162.0、139.9、123.0、121.9。1H-NMR(CD3OD)δ:7.06(1H,t,J=7.7Hz)、6.86(1H,d,J=7.6Hz)、6.81(1H,dd,J=7.7Hz)、6.11(1H,m)、5.78(1H,dd)、5.53(1H,d,J=12.2Hz)、5.31(1H,d,J=12.5Hz)、4.60(1H,d,J=5.8Hz)、3.84(1H,m)、3.76(1H,m)、3.52(3H,m)、3.42(1H,m)、2.90(1H,m)、2.63(1H,m)、2.52(2H,m)。13C-NMR(CD3OD):144.5、131.4、120.9、126.9、118.1、151.3、65.1、107.4、75.2、77.9、80、78.4、62.4、79.3、129.6、132.8、27.2、36.9、207.6、171.8。對(duì)比例1除將實(shí)施例1中“微波浸提5次,微波功率為:700W,每次15分鐘”替換為“以乙酸乙酯為溶劑在40℃下提取5次,每次2h”外,以與實(shí)施例1的相同方式實(shí)施本對(duì)比例1,得到化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、二十碳酸和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。對(duì)比例2-3除將實(shí)施例1步驟(2)中的混合溶劑環(huán)己烷-丙酮分別替換為環(huán)己烷-乙酸乙酯、環(huán)己烷-石油醚外,以與實(shí)施例1的相同方式實(shí)施本對(duì)比例2-3,經(jīng)過(guò)TLC檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在步驟(2)中β-香樹(shù)脂醇和β-谷甾醇很難分開(kāi),導(dǎo)致其產(chǎn)率很低。這證明當(dāng)改變混合溶劑中的丙酮時(shí),對(duì)于產(chǎn)物的分離效果有著顯著的影響。對(duì)比例4-5除將實(shí)施例1步驟(3)中的大孔吸附樹(shù)脂分別替換為“粒度為300-400目的硅膠柱色譜”和“粒度為100-200目的中性氧化鋁柱色譜”外,以與實(shí)施例1的相同方式實(shí)施本對(duì)比例4-5,而得到化合物6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷。將所有實(shí)施例和對(duì)比例中提取到的每個(gè)化合物的重量除以原水冬瓜種子的總重量而得出提取率,化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇、二十碳酸和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D葡糖苷的提取率如表1所示。表1由上表可以看出:1.當(dāng)進(jìn)行微波萃取時(shí),提取率要顯著高于未進(jìn)行微波萃取時(shí)的提取率,且當(dāng)微波功率為700W時(shí)具有最好的提取效果。2.步驟(3)中使用特定的大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離時(shí),提取率要遠(yuǎn)高于硅膠柱色譜和中性氧化鋁柱色譜,但D101樹(shù)脂的提取效果要優(yōu)于其它樹(shù)脂。3.當(dāng)步驟(2)中改變洗脫混合溶劑的組分時(shí),能夠顯著地影響β-香樹(shù)脂醇和β-谷甾醇的分離,可見(jiàn)該步驟中的混合溶劑的類型選擇非常關(guān)鍵和重要。性能測(cè)試及穩(wěn)定性測(cè)試通過(guò)下述實(shí)驗(yàn)測(cè)定了各實(shí)施例得到的本發(fā)明提取到的化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D-葡糖苷的殺菌性能。取標(biāo)準(zhǔn)菌株:金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸桿菌(441490)菌株少許,分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18h。取18h培養(yǎng)的各菌株?duì)I養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物,用營(yíng)養(yǎng)肉湯作10-3稀釋用于實(shí)驗(yàn)。取白色念珠菌菌株少許,接種于改良馬丁培養(yǎng)基中,35℃培養(yǎng)24h。取24h培養(yǎng)的白色念珠菌培養(yǎng)物,用改良馬丁培養(yǎng)基10-3稀釋用于實(shí)驗(yàn)。用二倍稀釋法(試管法)配制樣品,即受試化合物分別配成初濃度為10mg/ml,取0.1ml加5.9ml營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋過(guò)濾備用,對(duì)于每個(gè)受試化合物取滅菌試管8支,第1管加入受試藥稀釋液1ml,第2-8管各加1ml營(yíng)養(yǎng)肉湯,分別取受試藥稀釋液1ml加入第2管中,混勻后取1ml至第3管,依次稀釋,第7管吸出1ml棄去,第8管不加藥液作為對(duì)照。每管加入稀釋菌液0.1ml,37℃培養(yǎng)24h。取出觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。如藥液管混濁,即表示細(xì)菌生長(zhǎng),供試藥物無(wú)抑菌作用;如藥液管清亮則表示細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制,其能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最大稀釋度的藥液,即為該藥物的最小抑菌濃度(MIC)。取鹽酸環(huán)丙沙星片(廣州白云制藥有限公司,規(guī)格:0.25g/片,配成0.05g/m1溶液)、制霉素片(浙江震元制藥有限公司,規(guī)格:500mg/片,配成200mg/ml溶液),按上述方法,依次稀釋,培養(yǎng),作陽(yáng)性對(duì)照,結(jié)果見(jiàn)下表2。表2由上表可以看出,本發(fā)明提取的化合物β-香樹(shù)脂醇、β-谷甾醇和6-羥基-2-[[[(1-羥基-6-氧代-2-環(huán)己烯基)羰基]氧]甲基]苯基-β-D-葡糖苷具有良好的殺菌活性可用于抗菌劑、殺菌劑、消毒劑、清潔劑、清洗劑、防腐劑等領(lǐng)域。應(yīng)當(dāng)理解,這些實(shí)施例的應(yīng)用僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非意欲限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。此外,也應(yīng)理解,在閱讀了本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容之后,本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)、修改和/或變型,所有的這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的保護(hù)范圍之內(nèi)。