?？颂婺猁}酸鹽晶型、藥物組合物和用途本申請(qǐng)是中國(guó)申請(qǐng)201210438377.6號(hào)的分案申請(qǐng)，申請(qǐng)日2009年07月07日，發(fā)明創(chuàng)造名稱(chēng)埃克替尼鹽酸鹽晶型、藥物組合物和用途。技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4鹽酸鹽及其新的晶型；本發(fā)明還涉及所述化合物的制備方法，含有所述化合物的藥物組合物，所述化合物治療癌癥的用途以及相關(guān)的中間體化合物。

背景技術(shù)：
酪氨酸激酶受體是參與信號(hào)轉(zhuǎn)化的跨膜蛋白，它們將擁有控制諸如生長(zhǎng)、變異、血管生成和抑制凋亡等重要功能的生長(zhǎng)因子信號(hào)，從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo)到細(xì)胞內(nèi)。其中一類(lèi)這樣的酪氨酸激酶受體是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶。這些受體會(huì)在許多主要的人體腫瘤中過(guò)度表達(dá)，如腦、肺、肝臟、膀胱、胸、頭頸部、食道、胃腸道、乳腺、卵巢、子宮頸或甲狀腺的腫瘤。EGFR表達(dá)于多種類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞，和其配體EGF、TGF-α(TransformingGrowthFactor-α，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α)結(jié)合后，激活細(xì)胞漿部分的激酶，導(dǎo)致EGFR羧基端的酪氨酸磷酸化，然后通過(guò)不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)多種基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等，和腫瘤的轉(zhuǎn)移、血管增生及化療藥的耐藥性密切相關(guān)。在分子生物學(xué)和臨床應(yīng)用上已經(jīng)證明，EGFR激酶抑制劑能阻斷和癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等相關(guān)的EGFR信號(hào)傳導(dǎo)，從而達(dá)到臨床抗腫瘤治療效應(yīng)。兩個(gè)化學(xué)結(jié)構(gòu)上類(lèi)似的口服EGFR激酶抑制劑吉非替尼(易瑞沙，阿斯利康公司)于2003年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于晚期非小細(xì)胞肺癌的治療，鹽酸厄洛替尼(特羅凱，羅氏及OSI公司)于2004年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于晚期非小細(xì)胞肺癌和胰腺癌的治療。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN1305860C(公開(kāi)號(hào))在說(shuō)明書(shū)29頁(yè)實(shí)施例15中的化合物23已經(jīng)公開(kāi)了4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4的結(jié)構(gòu)信息，該化合物是一種游離堿。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種如下結(jié)構(gòu)式Ⅰ的4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4鹽酸鹽：本發(fā)明的發(fā)明人也令人驚奇地發(fā)現(xiàn)上述結(jié)構(gòu)式I的化合物可以以一種以上的晶型存在。發(fā)明人將這些晶型簡(jiǎn)稱(chēng)為晶型I，II，III和IV。上述結(jié)構(gòu)式I的化合物及其相應(yīng)的晶型具有更好的溶解性和代謝特性，是臨床用藥的優(yōu)選形式。為了描述上的方便，在本發(fā)明的下文中，結(jié)構(gòu)式I的化合物“4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4鹽酸鹽”將簡(jiǎn)稱(chēng)為“鹽酸?？颂婺帷?，而游離堿“4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4”將簡(jiǎn)稱(chēng)為“?？颂婺帷?。本發(fā)明一方面提供了鹽酸?？颂婺岬木虸，如附圖1所示，其X射線(xiàn)粉末衍射譜圖中典型地具有如下衍射角的譜峰(其中“晶面間距”即附圖中所示“d-值”)：本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)晶型I是比較穩(wěn)定的晶型，并且晶型I的粒度細(xì)，分布均勻，平均粒徑(D90)在1-10μM左右，可給制劑的制備工藝帶來(lái)方便。本發(fā)明的又一方面提供了鹽酸埃克替尼的晶型II，如附圖2所示，其X-射線(xiàn)粉末衍射譜圖中典型地具有如下衍射角譜峰(其中“晶面間距”即附圖中所示“d-值”)：本發(fā)明的又一方面提供了鹽酸埃克替尼的晶型III，如附圖3所示，其X-射線(xiàn)粉末衍射譜圖中典型地具有如下衍射角譜峰(其中“晶面間距”即附圖中所示“d-值”)：本發(fā)明的又一方面提供了鹽酸?？颂婺岬木虸V，如附圖4所示，其X-射線(xiàn)粉末衍射譜圖中典型地具有如下衍射角譜峰(其中“晶面間距”即附圖中所示“d-值”)：上述的晶型僅僅概括了主要的峰(也就是最特征、顯著、獨(dú)特和/或可再現(xiàn)的峰)，附加峰可使用常規(guī)方法從衍射圖中得到。上述的主峰可再現(xiàn)并且在誤差限度內(nèi)(在上次給定小數(shù)點(diǎn)位置±2，即所述值±0.2)。本發(fā)明的又一目的在于提供如結(jié)構(gòu)式Ⅰ化合物的制備方法：方法一：方法二：方法三：其中化合物BPI-02采用重結(jié)晶工藝。本發(fā)明的鹽酸?？颂婺峋虸、II、III和IV可通過(guò)如下方法來(lái)制備：把4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4鹽酸鹽用極性溶劑加熱回流至完全溶解，抽濾，冷卻，結(jié)晶，抽濾，干燥，得到其不同晶型。具體的結(jié)晶程序可參見(jiàn)本發(fā)明的具體實(shí)施方式部分。上述的結(jié)晶可以在單一溶劑、溶劑混合物或在其含水混合物中進(jìn)行。用于結(jié)晶的合適的極性溶劑為水、例如低級(jí)醇的醇、酮、醚、酯、鹵代烷烴、烷烴、鹵代苯、脂族腈和芳香族溶劑。優(yōu)選的極性溶劑選自異丙醇、乙酸乙酯、50％乙醇、水、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮和正丙醇。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)醇”此處包括直鏈或支鏈C1-C5醇，例如直鏈或支鏈C2-C3醇。其它例子為甲醇、乙醇、異丙醇和丁醇。本發(fā)明化合物從含有至少一種溶劑的合適的溶劑體系中的結(jié)晶可通過(guò)溶劑蒸發(fā)、溫度下降和/或通過(guò)加入反溶劑(亦即在其中本發(fā)明化合物溶解性較差的溶劑)，在溶劑體系中達(dá)到過(guò)飽和實(shí)現(xiàn)。結(jié)晶可使用或不使用適于結(jié)晶本發(fā)明化合物的晶種引發(fā)和/或?qū)崿F(xiàn)。本發(fā)明的結(jié)晶與特定條件下各個(gè)晶型的動(dòng)力學(xué)和平衡條件有關(guān)。因此本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到，得到的晶型取決于結(jié)晶過(guò)程的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)。在特定條件下(溶劑體系、溫度、壓力和本發(fā)明化合物的濃度)，一種晶型可能要比另一種晶型穩(wěn)定(或?qū)嶋H上比任何其它晶型穩(wěn)定)。然而，具有相對(duì)較低熱力學(xué)穩(wěn)定性的晶型可能動(dòng)力學(xué)上有利。因此動(dòng)力學(xué)之外的因素，例如時(shí)間、雜質(zhì)分布、攪動(dòng)、晶種的存在與否等也可能影響結(jié)晶的形式。本發(fā)明的又一目的在于提供一種藥物組合物，它含有治療有效量的鹽酸?？颂婺岷推渖鲜鼍廷瘛ⅱ?、Ⅲ和Ⅳ中的一種或多種以及藥學(xué)上可接受的載體?；钚曰衔镌谠撍幬锝M合物中的含量為1-99重量％，優(yōu)選1-70重量％，更優(yōu)選10-30重量％。該藥物組合物，可以是例如適用于口服的形式，如藥片(片劑)、膠囊、丸粒、粉劑、持續(xù)釋放劑、溶液、懸浮液；適用于非腸道注射的形式，如無(wú)菌溶液、懸浮液或乳液；適用于局部施用的形式，如膏劑或乳膏(軟膏或眼膏)；或者適用于直腸施用的形式，如栓劑。該藥物組合物可以是適合于精確劑量的單一施用的單位劑量形式。此外，該藥物組合物還可以包括其它的活性成分。適當(dāng)?shù)乃幬镙d體包括水，各種有機(jī)溶劑和各種惰性稀釋劑或填料。如果需要，這些藥物組合物可含有各種添加劑，如香料、粘合劑和賦形劑等。對(duì)于口服形式，含有各種賦形劑如檸檬酸的片劑可以與各種分解劑如淀粉、藻酸及某些復(fù)合硅酸鹽一起使用以及與各種粘合劑如蔗糖、明膠及阿拉伯膠一起使用。此外，潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂及滑石粉常用于制作片劑的填料。同樣類(lèi)型的固體成分也可填充于軟和硬的明膠膠囊中。當(dāng)用于口服而且需要是水懸浮液時(shí)，其中的活性化合物可與各種甜味劑或香味劑，顏料或染料相結(jié)合，如果需要，還可與各種乳化劑或懸浮劑相結(jié)合，還可與稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油、或它們的結(jié)合使用。上述藥物組合物優(yōu)選口服給藥。上述的藥物組合物的劑型優(yōu)選片劑或膠囊。本發(fā)明另一方面提供了本發(fā)明的鹽酸?？颂婺岷推渖鲜鼍廷?、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在制備用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的非惡性過(guò)度性增生病癥藥物中的應(yīng)用。所述的非惡性過(guò)度性增生病癥優(yōu)選是良性皮膚增生或良性前列腺增生。本發(fā)明另一方面提供了本發(fā)明的鹽酸?？颂婺岷推渖鲜鼍廷?、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在制備用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的胰腺炎，腎病，腫瘤，血管生成或血管發(fā)生有關(guān)的疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明另一方面提供了本發(fā)明的鹽酸?？颂婺岷推渖鲜鼍廷瘛ⅱ?、Ⅲ和Ⅳ在制備用于哺乳動(dòng)物的內(nèi)胚細(xì)胞移植藥物中應(yīng)用。本發(fā)明的鹽酸埃克替尼和其上述晶型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ可以治療或預(yù)防的疾病優(yōu)選選自：腫瘤血管生成、慢性發(fā)炎疾病如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化，皮膚病如牛皮癬、及硬皮病、糖尿病所致的皮膚病，糖尿病性視網(wǎng)膜病，早熟視網(wǎng)膜病，與年齡有關(guān)的色斑變性、血管瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、卡波濟(jì)內(nèi)瘤，卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、淋巴癌、前列腺癌、結(jié)腸癌及皮膚腫瘤及它們的并發(fā)癥。上述的哺乳動(dòng)物優(yōu)選為人。本發(fā)明的又一目的在于提供一種治療哺乳動(dòng)物的(惡性)組織過(guò)度增生疾病的方法，其包括對(duì)患有哺乳動(dòng)物的組織過(guò)度增生疾病的患者給藥治療有效量的鹽酸埃克替尼和/或其上述晶型和/或上述藥物組合物。在另一種實(shí)施方案中，該方法結(jié)合使用選自MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑，VEGFR(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體)激酶抑制劑，Her2的抑制劑，VEGFR抗體的藥物，內(nèi)皮抑素(Endostatin)的藥物。在又一種實(shí)施方案中，該方法結(jié)合使用以下抗腫瘤劑：有絲分裂抑制劑，烷基化劑，抗代謝物，腫瘤抗生素類(lèi)，生長(zhǎng)因子抑制劑，細(xì)胞循環(huán)抑制劑，酶類(lèi)，酶抑制劑，生物應(yīng)答修飾劑，抗激素類(lèi)等，抗腫瘤劑例如是卡鉑，紫杉醇，吉西他濱，甲氨蝶吟，5-氟尿嘧啶，喜樹(shù)堿類(lèi)藥物等。本發(fā)明的又一目的在于提供一種治療患有酪氨酸激酶功能失調(diào)所致相關(guān)疾病的方法，其包括對(duì)患有酪氨酸激酶功能失調(diào)所致相關(guān)疾病的患者給藥治療有效量的鹽酸?？颂婺岷?或其上述晶型和/或上述藥物組合物。這里，該酪氨酸激酶功能失調(diào)所致相關(guān)疾病優(yōu)選包括腦、肺、肝臟、膀胱、胸、頭頸部、食道、胃腸道、乳腺、卵巢、子宮頸或甲狀腺的腫瘤及它們的并發(fā)癥。上述的治療方法中所述疾病優(yōu)選自腦癌、肺癌(例如非小細(xì)胞癌(NSCLC))、腎癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、胸、頭頸部腫瘤、食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、皮膚癌、腎上腺癌、宮頸癌、淋巴癌或甲狀腺腫瘤及它們的并發(fā)癥。上述的方法中可以與任何化學(xué)治療、生物治療及放射治療相組合。上述的方法中所述治療進(jìn)一步包括應(yīng)用抗-EGFR和抗-EGF抗體中的任何一個(gè)或兩個(gè)同時(shí)進(jìn)行治療。所施用的活性化合物的量將決定于要治療的對(duì)象的個(gè)體需求，給藥路徑和疾病或病癥的嚴(yán)重程度、施用速率及指定醫(yī)師的評(píng)價(jià)判斷。然而，基于活性化合物，有效劑量的范圍優(yōu)選為每天每公斤體重約0.01-120mg，更優(yōu)選一次性或分開(kāi)的劑量為每天每公斤體重1-50mg。在某些情況下，劑量水平在上述范圍的低限以下更適合，而在其它情況下可使用更大的劑量而不會(huì)引起有害的副作用。本發(fā)明的再一目的在于提供4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠-4鹽酸鹽的臨床用藥方法。具體而言本發(fā)明的鹽酸?？颂婺岬呐R床治療方法，對(duì)于腫瘤病人給予以下治療方案：鹽酸?？颂婺岷?或其晶型Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ或Ⅳ給藥劑量為25-2100毫克/日，給藥次數(shù)為1-3次/日；優(yōu)選為75-1200毫克/日，所述給藥次數(shù)為1-3次/日；更優(yōu)選給藥劑量為75-1200毫克/日，所述給藥次數(shù)為2-3次/日,還更優(yōu)選給藥劑量為給藥劑量為100-1200毫克/日，所述給藥次數(shù)為2-3次/日。附圖說(shuō)明圖1鹽酸?？颂婺峋廷竦腦-衍射圖譜(異丙醇結(jié)晶)圖2鹽酸?？颂婺峋廷虻腦-衍射圖譜(50％乙醇結(jié)晶)圖3鹽酸埃克替尼晶型Ⅲ的X-衍射圖譜(水結(jié)晶)圖4鹽酸?？颂婺峋廷舻腦-衍射圖譜(N,N-二甲基甲酰胺結(jié)晶)圖5鹽酸?？颂婺岬?HNMR譜圖圖6鹽酸?？颂婺岬?3CNMR譜圖具體實(shí)施方式下面通過(guò)給出的各實(shí)施例和試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作出進(jìn)一步說(shuō)明，但所述實(shí)施例和試驗(yàn)例并不能對(duì)本發(fā)明要求保護(hù)的范圍構(gòu)成任何限制。實(shí)施例1步驟1制備：將16kg(400mol)氫氧化鈉、80L水加入400L反應(yīng)釜中溶解，然后將18.8L(140mol)二縮三乙二醇、32L四氫呋喃加入反應(yīng)釜中，冷卻5℃以下，滴加47.84kg(260mol)對(duì)甲苯磺酰氯、50L四氫呋喃的溶液，滴畢，在此溫度下反應(yīng)2小時(shí)，倒入240L冰水中，抽濾，用少量水洗滌，干燥，得58.64kg白色結(jié)晶性粉末BPI－01，收率91.4％。mp：77～80℃，HPLC：97％。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，Rf＝0.87)。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(CDCl3)：δppm：7.78(d，4H，J＝10.4Hz，苯環(huán)靠磺酰基質(zhì)子)；7.34(d，4H，J＝11.6Hz，苯環(huán)靠甲基質(zhì)子)；4.129(dd，4H，J＝5.6Hz，靠近磺?；叶假|(zhì)子)；3.64(dd，4H，J＝5.6Hz，遠(yuǎn)離磺酰基乙二醇質(zhì)子)；3.517(s，4H，中間一分子乙二醇質(zhì)子)；2.438(s，6H，苯環(huán)上甲基質(zhì)子)。步驟2制備：將3.64kg(20mol)3，4-二羥基苯甲酸乙酯、12.4kg(89.6mol)碳酸鉀和300LN，N-二甲基甲酰胺混合，攪拌約30分鐘，升溫至85～90℃，滴加BPI-019.17kg(20mol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液40L，1.5～2小時(shí)內(nèi)滴完，滴畢，反應(yīng)30分鐘，TLC檢查反應(yīng)完畢(展開(kāi)劑：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，Rf＝0.58)。吸出約40L反應(yīng)液，繼續(xù)重復(fù)以上操作3～5次，抽濾，減壓蒸干N，N-二甲基甲酰胺，用240L乙酸乙酯溶解殘?jiān)闉V，減壓蒸溶，殘留物用300L石油醚進(jìn)行萃取。減壓回收石油醚，固體用異丙醇1∶2.5(W/V)進(jìn)行重結(jié)晶，得1.68kg類(lèi)白色粉末BPI－02，收率為28％。mp：73～76℃，HPLC：96.4％。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(CDCl3)：δppm：7.701(d，1H，J＝2.4Hz，苯環(huán)6位質(zhì)子)；7.68(s，1H，苯環(huán)2位質(zhì)子)；6.966(d，1H，J＝10.8Hz，苯環(huán)5位質(zhì)子)；4.374～3.81(q，2H，J＝9.6Hz，乙基的亞甲基質(zhì)子)；3.78～4.23(dd，12H，J＝4.8Hz，冠醚質(zhì)子)；1.394(t，3H，J＝9.6Hz，甲基質(zhì)子)。MS：m/z296。步驟3制備：將592g(2mol)BPI-02、600mL乙酸加入5L反應(yīng)瓶中，冷卻至0℃，緩慢加入1640mL(25.4mol)濃硝酸，內(nèi)溫不得超過(guò)10℃，控制0℃以下，滴加1L濃硫酸，內(nèi)溫不超過(guò)5℃，滴畢，0～5℃下反應(yīng)1～2小時(shí)。反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液倒入有碎冰的15L塑料桶中，攪拌，抽濾，乙醇重結(jié)晶，得449g微黃色至黃色結(jié)晶性粉末BPI－03，收率65.7％，mp：92～95℃，HPLC：98.2％。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，Rf＝0.52)。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(CDCl3)：δppm：7.56(s，1H，苯環(huán)5位質(zhì)子)；7.20(s，1H，苯環(huán)2位質(zhì)子)；4.402(q，2H，J＝9.2Hz，乙基的亞甲基位質(zhì)子)；4.294(dd，12H，J＝4.8Hz，冠醚質(zhì)子)；1.368(t，3H，J＝9.2Hz，乙基的甲基質(zhì)子)。步驟4制備：在3L氫化反應(yīng)釜中，加入2L甲醇，加入195g(0.57mol)BPI-03，緩慢加入63ml乙酰氯，攪拌片刻，加入含水40％的Pd/C33g，在氫壓4atm下反應(yīng)直至不吸氫，再保壓反應(yīng)1～2小時(shí)。反應(yīng)完畢，倒入5L反應(yīng)瓶中回流，抽濾，結(jié)晶，抽濾，得產(chǎn)物。母液減壓濃縮，又得產(chǎn)物。合并共得168g白色至粉紅色結(jié)晶性粉末BPI－04，收率：85％，mp：198～201℃，HPLC：99.1％。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，Rf＝0.33)。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(d6-DMSO)：δppm：8～9(br.，3H，兩個(gè)氨基質(zhì)子和1個(gè)鹽酸質(zhì)子)；7.37(s，1H，苯環(huán)5位質(zhì)子)；6.55(s，1H，苯環(huán)2位質(zhì)子)；4.25(q，2H，J＝7.06Hz，乙基的亞甲基質(zhì)子)；4.05(dd，12H，J＝4.04Hz，冠醚質(zhì)子)；1.31(t，3H，J＝7.06Hz，乙基的甲基質(zhì)子)。步驟5制備：將1105g(3.175mol)BPI－04、4810g(106.9mol)甲酰胺、540g(8.55mol)甲酸銨加入10L三口瓶中，升溫至165℃，此溫度下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加入3L水，攪拌10分鐘。抽濾，水洗，干燥，得742g類(lèi)白色結(jié)晶性粉末BPI－05，收率為80％，mp：248～251℃，HPLC：99.78％。TLC(氯仿∶甲醇＝8∶1，Rf＝0.55)。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(d6-DMSO)：δppm：12.06(s，1H，喹唑啉環(huán)N-H)；8.0(d，1H，J＝3.28Hz，喹唑啉環(huán)3位質(zhì)子)；7.62(s，1H，喹唑啉環(huán)6位質(zhì)子)；7.22(s，1H，喹唑啉環(huán)9位質(zhì)子)；4.25(dd，12H，J＝4.08Hz，冠醚質(zhì)子)。步驟6制備：將337g(1.13mol)BPI－05、7.1L氯仿、1.83L(19.58mol)POCl3及132mlN，N-二甲基甲酰胺依次加入10L三口瓶中，攪拌升溫至回流、反應(yīng)液溶清后，TLC檢查反應(yīng)是否完全(展開(kāi)劑：氯仿∶甲醇＝15∶1，Rf＝0.56)。反應(yīng)時(shí)間約8小時(shí)。反應(yīng)畢，冷卻，減壓蒸干，加入4L氯仿，倒入4kg碎冰中攪拌0.5小時(shí)，分液，水相用2Lx2氯仿萃取，合并有機(jī)相，加4L冰水，用6NNaOH調(diào)pH至8～9，溫度控制在30℃以下，分液，有機(jī)相用飽和NaCl洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸干溶劑，殘留物用丙酮洗滌，抽濾，得268g類(lèi)白色結(jié)晶性粉末BPI－06，收率：77％，mp：164～167℃，HPLC：99％。核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(CDCl3)：δppm：8.89(s，1H，喹唑啉環(huán)2位質(zhì)子)；7.68(s，1H，喹唑啉環(huán)9位質(zhì)子)；7.42(s，1H，喹唑啉環(huán)6位質(zhì)子)；4.38～3.81(dd，12H，J＝3.88Hz，冠醚質(zhì)子)。步驟7本發(fā)明化合物制備：將20.8gBPI－06懸浮于500毫升乙醇中，加入25毫升N，N-二甲基甲酰胺后，再加入8.98gm-乙炔基苯胺的異丙醇溶液200毫升。在室溫下攪拌5分鐘到反應(yīng)液澄清，加熱回流3小時(shí)。濃縮干燥，乙酸乙酯溶解、水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥得結(jié)構(gòu)式I的化合物27.1g，是類(lèi)白色結(jié)晶性粉末。核磁數(shù)據(jù):1HNMR(BrukerAPX-400,溶劑：d6-DMSO，TMS作為內(nèi)標(biāo))：δ3.58ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚12位的2個(gè)質(zhì)子；δ3.60ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚13位的2個(gè)質(zhì)子；δ3.73ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚10位的2個(gè)質(zhì)子；δ3.80ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚15位的2個(gè)質(zhì)子；δ4.30ppm，單峰，代表1個(gè)氫，為炔基的1個(gè)質(zhì)子；δ4.34ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚16位的2個(gè)質(zhì)子；δ4.40ppm，兩個(gè)二重峰，代表2個(gè)氫，為冠醚9位的2個(gè)質(zhì)子；δ7.39ppm，二重峰，代表1個(gè)氫，為苯環(huán)上25位的1個(gè)質(zhì)子；δ7.46ppm，兩個(gè)雙重峰，代表1個(gè)氫，為苯環(huán)上26位的1個(gè)質(zhì)子；δ7.49ppm，單峰，代表1個(gè)氫，為喹唑啉環(huán)苯并環(huán)上6位的1個(gè)質(zhì)子；δ7.82ppm，雙重峰，代表1個(gè)氫，為苯環(huán)上27位的1個(gè)質(zhì)子；δ7.94ppm，三重峰(由于間為偶合)，代表1個(gè)氫，為喹唑啉環(huán)苯并環(huán)上19位的1個(gè)質(zhì)子；δ8.85pm，單峰，代表1個(gè)氫，為苯環(huán)上23位的1個(gè)質(zhì)子；δ8.87ppm，單峰，代表1個(gè)氫，為喹唑啉環(huán)上2位的質(zhì)子；δ11.70pm，單峰，代表1個(gè)氫，為芳胺成鹽后的1個(gè)質(zhì)子；δ14～16pm，寬峰，代表1個(gè)氫，為鹽酸質(zhì)子。參見(jiàn)附圖5。核磁數(shù)據(jù)：13CNMR(溶劑DMSO)，參見(jiàn)附圖6。質(zhì)譜(MS)：儀器型號(hào)：ZAB-HS，測(cè)定條件：EI，200℃，700ev，質(zhì)譜測(cè)得的分子量為m/z427。所得產(chǎn)品的元素分析結(jié)果為：(1)C、H、N的測(cè)定測(cè)定儀器：Elementar－VarioEL。表1元素分析測(cè)定結(jié)果與計(jì)算值比較(％)所得產(chǎn)品的C、H、N實(shí)測(cè)值與計(jì)算值誤差均在千分之三以?xún)?nèi)，符合條件。(2)Cl的測(cè)定測(cè)定儀器：Carlo－Erba1112型元素分析儀，氯測(cè)定：氧瓶法，硝酸汞標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.01079mol/L。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)1-2。表2氯元素測(cè)試結(jié)果與計(jì)算值比較(％)所得產(chǎn)品的Cl實(shí)測(cè)值與計(jì)算值誤差均在3‰以?xún)?nèi)。實(shí)施例2鹽酸埃克替尼晶型I的制備將0.1克鹽酸?？颂婺崤c200ml異丙醇加入250ml圓底燒瓶中，加熱溶解，抽濾，冷卻結(jié)晶，抽濾，用少量丙酮洗滌，60℃以下真空干燥，得類(lèi)白色結(jié)晶性粉末。mp：225-228℃。用上述粉末X-射線(xiàn)衍射圖像法對(duì)晶型I作了表征，參見(jiàn)附圖1。采用NETZSCH公司的DSC204熱重分析儀測(cè)定鹽酸埃克替尼晶型Ⅰ，結(jié)果該晶型無(wú)結(jié)晶溶劑。實(shí)施例3鹽酸?？颂婺峋虸I的制備將0.5克鹽酸?？颂婺崤c15ml50％乙醇加入25ml圓底燒瓶中，加熱溶解，抽濾，冷卻結(jié)晶，抽濾，用5ml丙酮洗滌，60℃下真空干燥，得類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，mp：224-227℃。用上述粉末X-射線(xiàn)衍射圖像法對(duì)晶型II作了表征，參見(jiàn)附圖2。采用NETZSCH公司的DSC204熱重分析儀測(cè)定鹽酸?？颂婺峋廷?，結(jié)果該晶型含有2.11個(gè)結(jié)晶水。實(shí)施例4鹽酸?？颂婺峋虸II的制備將0.5克鹽酸埃克替尼與15ml水加入25ml圓底燒瓶中，加熱溶解，抽濾，冷卻結(jié)晶，抽濾，用5ml丙酮洗滌，60℃下真空干燥，得類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，mp：224-227℃。用上述粉末X-射線(xiàn)衍射圖像法對(duì)晶型III作了表征，參見(jiàn)附圖3。采用NETZSCH公司的DSC204熱重分析儀測(cè)定鹽酸埃克替尼晶型Ⅲ，結(jié)果該晶型含有1.90個(gè)結(jié)晶水。實(shí)施例5鹽酸?？颂婺峋廷舻闹苽鋵?.5克鹽酸?？颂婺崤c10mlN,N-二甲基甲酰胺加入25ml圓底燒瓶中，加熱溶解，抽濾，冷卻結(jié)晶，抽濾，用5ml丙酮洗滌，60℃下真空干燥，得淺黃色結(jié)晶性粉末，mp：223-226℃。用上述粉末X-射線(xiàn)衍射圖像法對(duì)晶型IV作了表征,參見(jiàn)附圖4。采用NETZSCH公司的DSC204熱重分析儀測(cè)定鹽酸?？颂婺峋廷簦Y(jié)果該晶型含有0.158個(gè)N，N-二甲基甲酰胺。效果試驗(yàn)試驗(yàn)1-聚丙酰胺膠電泳法測(cè)定鹽酸埃克替尼晶型I對(duì)EGFR激酶的抑制和選擇特異性實(shí)驗(yàn)方法：本方法的作用機(jī)制為激酶催化蛋白質(zhì)底物磷酸化，使反應(yīng)體系中放射性同位素32P標(biāo)記的ATP(32P-γ-ATP)上的32P標(biāo)記到蛋白質(zhì)底物上，經(jīng)聚丙酰胺膠電泳分離，記錄底物蛋白質(zhì)放射性標(biāo)記的強(qiáng)度。在體外的EGFR激酶檢測(cè)試驗(yàn)中，將EGFR蛋白激酶(2.4μg/μl，14.5單位/μg，Sigma)與Crk(EGFR底物，32ng/μl)于25μl激酶反應(yīng)緩沖液中混合。激酶反應(yīng)緩沖液中包括1μM非同位素標(biāo)記的ATP?；旌弦号c不同濃度的鹽酸埃克替尼晶型I(分別是0(作為對(duì)照組)、0.5、2.5、12.5、62.5nM)在冰中孵育10min，然后加入1μCi32P-γ-ATP，在30℃下孵育20min。反應(yīng)結(jié)束后加SDS(十二烷基磺酸鈉)樣品緩沖液(samplebuffer)在100℃水中煮4min，用10％SDS-PAGE(聚丙酰胺)膠電泳分離蛋白混合物。經(jīng)真空干膠后以Phosphorimager磷屏(MolecularDynamics公司)檢測(cè),記錄放射性標(biāo)記的強(qiáng)度,使用ImageQuant軟件對(duì)信號(hào)作定量分析。被EGFR激酶磷酸化的Crk用于反映激酶的活性。抑制率(％)＝(1-試驗(yàn)組激酶活性/對(duì)照組激酶活性)×100％。結(jié)果：(1)、鹽酸?？颂婺峋虸能抑制EGFR的激酶活性，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系，和對(duì)照組比較，在鹽酸埃克替尼晶型I濃度為0.5、2.5、12.5和62.5nM時(shí)，EGFR激酶活性的抑制率分別達(dá)到20.5％、36.6％、63％和87.6％。根據(jù)劑量反應(yīng)關(guān)系曲線(xiàn)(略)，鹽酸埃克替尼晶型I抑制EGFR激酶活性的IC50(當(dāng)50％酶活性被抑制時(shí)的抑制劑濃度)為5nM，和國(guó)外上市產(chǎn)品相當(dāng)。(2)、為研究鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)EGFR激酶抑制的選擇特異性，同樣方法平行比較了鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)EGFR和Arg(abl-relatedgene)激酶的抑制作用，兩個(gè)激酶同屬酪氨酸激酶，且皆能介導(dǎo)Crk磷酸化。在濃度為62.5nM時(shí)，?？颂婺釠](méi)有顯示對(duì)Arg激酶的抑制，但同一濃度及相同試驗(yàn)條件下，鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)EGFR激酶的抑制率達(dá)97％。表明鹽酸?？颂婺峋虸抑制的選擇特異性。綜合以上結(jié)果，鹽酸?？颂婺峋虸為一敏感、選擇特異性強(qiáng)的EGFR激酶抑制劑。試驗(yàn)2-鹽酸埃克替尼晶型I多在細(xì)胞水平對(duì)EGFR介導(dǎo)的蛋白磷酸化抑制試驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)采用高表達(dá)EGFR的A431細(xì)胞株(外陰鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A431細(xì)胞懸液接種于12孔培養(yǎng)板上(5×105個(gè)/孔)，細(xì)胞生長(zhǎng)于含有10％胎牛血清(FCS)的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液(Gibco公司)，在37℃，5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)。棄去培養(yǎng)液上清，用PBS緩沖液洗兩遍，加入不含F(xiàn)CS的DMEM，培養(yǎng)18小時(shí)以后，加二甲基亞砜(DMSO)稀釋的鹽酸?？颂婺峋虸，終濃度依次為0(對(duì)照組)，10，50，250，1000nM，37℃培養(yǎng)2.5小時(shí)。加入100ng/mlEGF刺激細(xì)胞5分鐘后，用含有1mM釩酸鹽(抑制去磷酸化)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞并收取細(xì)胞總蛋白。細(xì)胞總蛋白在100℃水中煮沸4分鐘以后，用10％SDS-PAGE膠分離細(xì)胞總蛋白，然后用電轉(zhuǎn)移法將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上[6]。纖維膜用抗磷酸化酪氨酸鼠源單克隆抗體(PY99和4G10，UpstateBiotech)探查，然后用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體(抗鼠源抗體的抗體，TransductionLaboratories,Inc.)標(biāo)記。酪氨酸磷酸化的蛋白信號(hào)通過(guò)化學(xué)發(fā)光法(AmershamCorp.)顯現(xiàn)出來(lái)，由Densitometer進(jìn)行定量(MolecularDynamics)。抑制率(％)＝(1-試驗(yàn)組激酶活性/對(duì)照組激酶活性)×100％。作為內(nèi)對(duì)照(internalcontrol)，纖維膜上抗磷酸化酪氨酸單克隆抗體和標(biāo)記的第二抗體用脫抗體緩沖液(stripingbuffer)去除，然后用抗EGFR的抗體及HRP-標(biāo)記的第二抗體標(biāo)記以便對(duì)EGFR的表達(dá)量用進(jìn)行定量分析。結(jié)果：在A431細(xì)胞，鹽酸?？颂婺峋虸可抑制EGF誘導(dǎo)、EGFR酪氨酸激酶介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸化，在濃度10、50、250和1000nM時(shí)，其抑制率非別為5.4％、52.9％、61.9％和63.7％，IC50其半數(shù)有效濃度約50nM。結(jié)果顯示不同處理組的EGFR表達(dá)量無(wú)顯著差別，但其細(xì)胞總蛋白酪氨酸磷酸化信號(hào)卻顯著不同，表明在A431細(xì)胞，鹽酸埃克替尼晶型I并不影響EGFR的表達(dá)，只抑制了EGFR激酶的活性。試驗(yàn)3-鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)體外培養(yǎng)的人體腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)體外培養(yǎng)的人體腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用。實(shí)驗(yàn)材料受試藥物：鹽酸?？颂婺峋虸，批號(hào)，050106由浙江貝達(dá)藥業(yè)有限公司提供,現(xiàn)用現(xiàn)配。瘤株：外陰鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞A431、人肺腺癌A549、人肝癌Bel7402、人胃腺癌BGC823、人結(jié)腸癌HCT8、人大細(xì)胞肺癌H460、人口腔上皮癌細(xì)胞KB。方法：采用中文MTT方法，觀察鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)體外培養(yǎng)的人腫瘤細(xì)胞A431、A549、Bel7402、BGC823、HCT8、H460、KB的生長(zhǎng)抑制作用。MTT試驗(yàn)：用胰酶消化腫瘤細(xì)胞，以含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配制細(xì)胞懸液，濃度為104個(gè)細(xì)胞/ml，于96孔培養(yǎng)板內(nèi)每孔接種100μl(1000個(gè)細(xì)胞/孔)，培養(yǎng)24小時(shí)后加入藥物，每孔加樣100μl，每組設(shè)三個(gè)平行孔。鹽酸埃克替尼晶型I用DMSO溶解后以培養(yǎng)基稀釋至50、25、12.5、6.25、3.125、1.56μmol/L，DMSO濃度小于0.1％，對(duì)照孔加入含0.1％DMSO的培養(yǎng)基。置37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)96小時(shí)后棄去培養(yǎng)液，每孔加入100μl0.5％MTT溶液(RPMI1640配制)。37℃保溫4小時(shí)，棄上清，每孔加入DMSO200μl溶解中文Formazan顆粒，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀檢測(cè)(參比波長(zhǎng)450nm、檢測(cè)波長(zhǎng)570nm)，計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。以藥物濃度對(duì)數(shù)值對(duì)抑制率作線(xiàn)性回歸，得直線(xiàn)方程，從中求出藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果：見(jiàn)下表1，鹽酸?？颂婺峋虸在體外對(duì)人體腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，這些細(xì)胞中包括EGFR高表達(dá)的A431細(xì)胞。鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)A431細(xì)胞株極為敏感，IC50為1μmol·L-1，其次對(duì)胃癌細(xì)胞株BGC823、人肺腺癌細(xì)胞株A549和人大細(xì)胞肺癌株H460比較敏感，其IC50分別為4、12、16μmol·L-1。當(dāng)鹽酸?？颂婺峋虸的濃度為200μmol·L-1時(shí)，鹽酸?？颂婺峋虸幾乎可以抑制BGC823和A549腫瘤細(xì)胞的全部生長(zhǎng)，抑制率接近100％，但此時(shí)HCT8細(xì)胞的抑制率僅為40％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)于HCT8、BEL-7402、KB敏感性低。表1鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用試驗(yàn)4-鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)人癌細(xì)胞株裸鼠移植腫瘤的抑制作用比較鹽酸?？颂婺峋虸和鹽酸厄洛替尼對(duì)人A431(人鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株)細(xì)胞株裸鼠移植腫瘤的抑制作用的預(yù)試驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)選擇高表達(dá)EGFR人A431(人鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株)癌細(xì)胞株。腫瘤移植方法：用已在裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)良好的人癌細(xì)胞作瘤源，接種于BALB/C裸鼠右腋窩皮下，即在超凈臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作下取出腫瘤結(jié)節(jié)，剪成小瘤塊采取常規(guī)小塊接種法，1塊/鼠(約6mm3)，經(jīng)6-7天待腫瘤長(zhǎng)出并可觸及時(shí)(約20mm3)，將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組6-9只，稱(chēng)體重、標(biāo)號(hào)。4組分別為對(duì)照組、陽(yáng)性藥(鹽酸厄洛替尼，200mg/kg，本試驗(yàn)室合成)對(duì)照組，鹽酸?？颂婺峋虸高、低劑量組(200、50mg/kg)。實(shí)驗(yàn)組每日灌胃給藥一次。給藥次數(shù)視腫瘤生長(zhǎng)情況而定。裸鼠飼養(yǎng)在室溫20-22℃，相對(duì)濕度40-60％，并具屏蔽系統(tǒng)輔以潔凈層流柜的環(huán)境內(nèi)。于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后每3日用卡尺測(cè)一次腫瘤體積[腫瘤體積(V)＝腫瘤長(zhǎng)徑(L)×腫瘤短徑(S)2/2]，繪出腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)，末次給藥結(jié)束后24h，處死動(dòng)物，稱(chēng)體重后完整剖取瘤塊，并稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率，試驗(yàn)結(jié)果用OfficeExcel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。統(tǒng)計(jì)方法：所有數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，p值<0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥效判定標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤抑制率＝[1-給藥組平均瘤重(T)/對(duì)照組平均瘤重(C)]×100％結(jié)果表明，試驗(yàn)用鹽酸?？颂婺峋虸經(jīng)口給藥對(duì)裸鼠A431移植瘤有顯著的抗腫瘤作用，且成劑量相關(guān)關(guān)系。試驗(yàn)5-鹽酸?？颂婺峋虸和易瑞沙TM片劑對(duì)不同人癌細(xì)胞株裸鼠移植腫瘤的抑制作用的比較方法：按照試驗(yàn)4的步驟，分別對(duì)鹽酸埃克替尼晶型I和易瑞沙TM進(jìn)行試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，比較鹽酸埃克替尼晶型I和易瑞沙TM片劑研磨粉混懸液口服給藥(14天)結(jié)果表明，鹽酸埃克替尼晶型I高、中、低三個(gè)劑量組(120mg/kg、60mg/kg和30mg/kg)對(duì)H460移植瘤抑瘤率分別為52.01％，49.37％和37.53％；易瑞沙TM對(duì)照組(120mg/kg)抑瘤率為38.29％，顯示在同等劑量水平，鹽酸?？颂婺峋虸對(duì)H460移植瘤的抑瘤活性高于易瑞沙TM。也可觀察到易瑞沙TM給藥組動(dòng)物活動(dòng)呆滯，體重增長(zhǎng)減少，這表明鹽酸?？颂婺峋虸的毒性小于易瑞沙TM。本發(fā)明的發(fā)明人還針對(duì)Beagle犬，小鼠，大鼠使用鹽酸埃克替尼晶型I進(jìn)行了藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，表明：鹽酸?？颂婺岬目诜拘缘停瑹o(wú)常見(jiàn)抗腫瘤化療藥的骨髓抑制毒性，其肝臟毒性在恢復(fù)期可逆。安全藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸?？颂婺釋?duì)呼吸、血壓和循環(huán)功能、自主活動(dòng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)無(wú)影響。特殊毒性試驗(yàn)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)有致畸、致突變及生殖毒性。本發(fā)明的發(fā)明人還針對(duì)Beagle犬和大鼠使用鹽酸?？颂婺峋虸進(jìn)行了非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究，表明：鹽酸?？颂婺峤?jīng)口給藥吸收良好，絕對(duì)生物利用度在不同動(dòng)物品系達(dá)27％-62％，該藥物在體內(nèi)達(dá)峰時(shí)間較短，主要經(jīng)糞便排泄，小部分經(jīng)尿排泄。鹽酸埃克替尼在各組織中廣泛分布，在腦組織中含量低，說(shuō)明該藥不容易通過(guò)血腦屏障。對(duì)大鼠肝P450酶沒(méi)有顯著誘導(dǎo)作用，未發(fā)現(xiàn)鹽酸埃克替尼對(duì)藥物代謝酶有抑制作用。試驗(yàn)6－臨床試驗(yàn)一、采用鹽酸?？颂婺峋廷裰苽涞钠瑒?，已經(jīng)完成了臨床Ⅰ期76名臨床受試者25mg、50mg、100mg、150mg、225mg、325mg、425mg、575mg和1025mg等10個(gè)劑量組的單次給藥的安全性研究，結(jié)果顯示25mg-1025mg的劑量是安全的。二、針對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)已完成104例病例的臨床試驗(yàn)。采用的給藥方法是空腹口服鹽酸埃克替尼晶型Ⅰ制備的片劑。體療效評(píng)價(jià)結(jié)果詳見(jiàn)表1。以下涉及的術(shù)語(yǔ)，其精確解釋為：PR：部分緩解，CR：完全緩解，SD：疾病穩(wěn)定，PD：疾病進(jìn)展，ORR：客觀緩解率，DCR：疾病控制率。針對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，已完成104例病例的臨床試驗(yàn)，具體療效評(píng)價(jià)結(jié)果詳見(jiàn)表1。表1各劑量組的擴(kuò)大入組患者入組情況和初步療效分析以上數(shù)據(jù)說(shuō)明鹽酸埃克替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌具有良好的治療效果。試驗(yàn)7-不同晶型鹽酸?？颂婺峋鸵约坝坞x堿的大鼠藥代試驗(yàn)藥品與試劑?？颂婺?游離堿)、鹽酸?？颂婺峋廷?、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，研細(xì)。各物質(zhì)的含量(純度)：不低于99.0％。羧甲基纖維素鈉，藥用輔料。試驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，每只體重150-220g。藥劑配制稱(chēng)取上述各物質(zhì)適量，加入0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為3.5mg·ml–1的混懸液，。給藥與樣品的采集大鼠試驗(yàn)：混懸液灌胃給藥。每組Wistar大鼠給藥前禁食12小時(shí)，自由飲水。以相當(dāng)于鹽酸?？颂婺?5mg·kg–1的劑量分別灌胃給藥(給藥體積為10ml·kg-1)，于給藥前和給藥后30分鐘內(nèi)，1.0分鐘、2.0分鐘、3.0分鐘、6.0分鐘、10.0分鐘、24.0分鐘時(shí)于眼球后靜脈叢(或尾靜脈)取血0.5-1.0ml，置肝素化試管中，離心，吸取上層血漿，–20℃保存待測(cè)。樣品經(jīng)純化處理后，采用高效液相色譜法分析，色譜條件為：十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈(40∶60，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至5.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm。統(tǒng)計(jì)所得藥時(shí)曲線(xiàn)下面積數(shù)據(jù)如下：由以上實(shí)驗(yàn)說(shuō)明鹽酸?？颂婺峋廷瘛ⅱ颉ⅱ?、Ⅳ的藥時(shí)曲線(xiàn)下面積(0-t)以及藥時(shí)曲線(xiàn)下面積(0-無(wú)窮)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比游離堿的數(shù)據(jù)高3倍左右，因而鹽酸?？颂婺峋廷?、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的相對(duì)生物利用度顯著優(yōu)于埃克替尼游離堿。