本發(fā)明涉及一種新型的胞苷衍生物以及衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是威脅人類健康的常見(jiàn)疾病之一，腫瘤死亡率居于各種疾病之首。目前臨床使用的抗腫瘤藥物，其毒性是困擾腫瘤化療的突出問(wèn)題。提高腫瘤治療效果同時(shí)降低藥物毒性，是當(dāng)前治療腫瘤藥物的重要研究課題。具有抗腫瘤作用的胞苷衍生物有阿糖胞苷和吉西他濱。阿糖胞苷在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性的三磷酸阿糖胞苷而發(fā)揮抗癌作用。三磷酸阿糖胞苷通過(guò)抑制NDA多聚酶及少量摻入DNA，阻止DNA的合成，抑制細(xì)胞的增長(zhǎng)，主要用于治療急性粒細(xì)胞白血病。但是阿糖胞苷的毒副作用也較大，對(duì)造血系統(tǒng)主要是骨髓抑制，白細(xì)胞及血小板減少，嚴(yán)重者可發(fā)生再生障礙性貧血或巨幼細(xì)胞性貧血；對(duì)白血病、淋巴癌患者治療初期可發(fā)生高尿酸血癥，嚴(yán)重者可發(fā)生尿酸性腎病。吉西他濱(Gemcitabine)是去氧胞苷的衍生物，結(jié)構(gòu)和代謝均與阿糖胞苷相似。吉西他濱在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)核苷酸激酶作用，催化成有活性的二磷酸雙氟胞苷(dFdCDP)和三磷酸雙氟胞苷(dFdCTP)，后者抑制DNA多聚酶而阻礙DNA的合成。由于摻合到DNA上，終止了DNA鏈的繼續(xù)延長(zhǎng)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。吉西他濱適用于胰腺癌(一、二線治療)、非小細(xì)胞性肺癌、乳腺癌、卵巢癌和頭頸部鱗癌等。但是吉西他濱的毒性也較大，不良反應(yīng)有骨髓抑制即白細(xì)胞、血小板減少，貧血；消化道反應(yīng)如輕度惡心、嘔吐和肝功能異常；發(fā)熱、流感樣癥狀、乏力、黏膜炎等。上述胞苷衍生物進(jìn)入人體后，腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生多耐藥基因，并且環(huán)上的氨基易被乙?；禄衔锸タ拱┗钚?，以及其它耐藥因素，上述胞苷衍生物毒副作用大并且容易產(chǎn)生耐藥性。為了降低阿糖胞苷和吉西他濱的毒性，提高或維持抗腫瘤藥效，研究人員對(duì)胞苷衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾。例如《SynthesisandBiologicalActivityofaGemcitabinePhosphoramidateProdrug》(J.Med.Chem2007,50,3743-3746；WeidongWu)報(bào)道了一種吉西他濱磷酸酯前體藥物。美國(guó)專利US7265096B2(申請(qǐng)?zhí)?0/701965)公開(kāi)了一種吉西他濱前體藥物、藥 物組合物及應(yīng)用，該文獻(xiàn)對(duì)吉西他濱的氨基、呋喃核糖上的羥基的氫原子和羥甲基的氫原子進(jìn)行了取代，呋喃核糖上的羥甲基的氫原子由H、?；⑷〈；ⅤＱ趸驶?、取代酰氧基羰基、氧羰基、取代氧羰基等取代；呋喃核糖上的羥基的氫原子由H、酰基、取代?；?、酰氧基羰基、取代酰氧基羰基、氧羰基、取代氧羰基等取代；氨基由-N＝C(R10)(R11)或-NHR12取代，其中R12為C5-C9的?；蛘呤荂5-C9的取代酰基。該專利所制備的化合物是前藥，進(jìn)入體內(nèi)轉(zhuǎn)化后才具有抗腫瘤活性；另外，臨床研究發(fā)現(xiàn)該吉西他濱前體藥物毒性大，抗腫瘤活性不夠強(qiáng)，目前還未開(kāi)發(fā)成藥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種新型的胞苷衍生物以及上述衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：一種新型胞苷衍生物，具有下述通式(Ⅰ)：其中R1是C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、-(CH2)n-Ph、或取代-(CH2)n-Ph；所述的-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10，Ph為苯；所述的取代烷基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的取代-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10，其碳鏈上或苯環(huán)上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。R2是H、鹵素或X1是C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、C1至C10的烷氧基、C1至C10的取代烷氧基、C1至C6的烷基磺酰基、C1至C6的烷硫基、-(CH2)n-Ph、或者是取代-(CH2)n-Ph；所述的取代烷基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的取代烷氧基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10；所述的取代-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10， 其碳鏈上或苯環(huán)上由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)H、鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。R3是H或其中X3是苯環(huán)，雜環(huán)，稠雜環(huán)，獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代苯，獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代雜環(huán)，或者是獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代稠雜環(huán)；所述雜環(huán)是咪唑、吡啶、呋喃、噻吩、噻唑、嘧啶、哌嗪或哌啶；所述稠雜環(huán)是喹啉或吲哚；X2是-(CH2)n-，其中n＝1、2、3，或者X2是-O-(CH2)n-，其中n＝0、1、2、3。作為可選擇的，R2為H。進(jìn)一步優(yōu)選的，R2不為H；并且R3不為H。R2不為H時(shí)，R2為鹵素或X1是-(CH2)n-Ph或者是取代-(CH2)n-Ph。作為優(yōu)選的，R1是C1至C4的烷基、C1至C4的取代烷基、芐基，或者是取代芐基；R3的X3是獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代咪唑，獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代吡啶，或者是獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代苯環(huán)。上述化合物或其鹽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述腫瘤為血液腫瘤或惡性實(shí)體腫瘤。所述的鹽為鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、琥珀酸鹽、磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽。一種藥物組合物，其中含有作為活性成分的通式(Ⅰ)所示的胞苷衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及一種或多種藥用載體或賦形劑。上述組合物的劑型為注射劑或者是口服劑型，其中注射劑為溶液型注射劑、混懸型注射劑、乳劑型注射劑、或注射用無(wú)菌粉末，口服劑型為片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、微丸制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑或酏劑。本發(fā)明具有積極的效果：本發(fā)明的化合物對(duì)結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的化合物的抗腫瘤活性高，同時(shí)對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠體重的影響小，證明化合物的毒性較低。具體實(shí)施方式本發(fā)明的新型胞苷衍生物的結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)：其中R1是C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、-(CH2)n-Ph、或取代-(CH2)n-Ph；所述的-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10，Ph為苯；所述的取代烷基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的取代-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10，其碳鏈上或苯環(huán)上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。R2是H、鹵素或X1是C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、C1至C10的烷氧基、C1至C10的取代烷氧基、C1至C6的烷基磺?；?、C1至C6的烷硫基、-(CH2)n-Ph或者是取代-(CH2)n-Ph；所述的取代烷基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的取代烷氧基，其碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；所述的-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10；所述的取代-(CH2)n-Ph，其中n＝0、1、2、3～10，其碳鏈上或苯環(huán)上由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)H、鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。R3是H或其中X3是苯環(huán)，雜環(huán)，稠雜環(huán)，獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代苯，獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代雜環(huán)，或者是獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代稠雜環(huán)；所述雜環(huán)是咪唑、吡啶、呋喃、噻吩、噻唑、嘧啶、哌嗪或哌啶；所述稠雜環(huán)是喹啉或吲哚；X2是-(CH2)n-，其中n＝1、2、3，或者X2是-O-(CH2)n-，其中n＝0、1、2、3。對(duì)于本發(fā)明的胞苷衍生物，在表1中給出如下化合物，但本發(fā)明的胞苷衍生物不限于這些化合物。表1對(duì)上表中的化合物進(jìn)行制備，合成過(guò)程中所用到的固體試劑沒(méi)有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步處理直接使用，液體試劑經(jīng)過(guò)重蒸干燥后使用。(實(shí)施例1)本實(shí)施例的胞苷衍生物為4-N-(正丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式4，代號(hào)G2)，經(jīng)三步反應(yīng)合成，反應(yīng)式如下(反應(yīng)式中HMDS為六甲基二硅氮烷，reflux為回流，chloridate為氯化物，rt為室溫，TEA為三乙胺，下同)。將300mg(1mmol)2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷鹽酸鹽(結(jié)構(gòu)式1，代號(hào)G1)、5mL(0.023mmol)六甲基二硅氮烷HMDS，催化量硫酸銨5mg溶于5mL1,4-二氧六環(huán)中，加熱回流反應(yīng)2h，反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)式為2?；亓鞣磻?yīng)結(jié)束后反應(yīng)液濃縮，向其中加入甲苯，濃縮至干2次，濃縮所得產(chǎn)物溶于10mL二氯甲烷中。向上述二氯甲烷溶液中加入0.24mL(3mmol)N-甲基咪唑、0.32mL(3mmol)氯甲酸丁酯，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)式3，反應(yīng)液濃縮得粘稠油狀物。將上述粘稠油狀物溶于3mL三乙胺和20mL甲醇組成的混合溶液中，室溫?cái)嚢?h。減壓蒸餾除去溶劑，粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到230mg的G2，三步反應(yīng)產(chǎn)率55.5％。G2核磁共振表征：1H-NMR(MeOD-d4，400MHz)δ：8.30(d，1H，J＝7.68Hz，H6)，7.34(d，1H，J＝7.68Hz，H5)，6.28(t，1H，J＝7.08Hz，H1')，4.33(m，1H，H5a')，4.0(m，2H，O-CH2-CH2-)，3.81(m，1H，H5b')，3.79(m，1H，H4')，1.68(m，2H，O-CH2-CH2-)，1.45(m，2H，O-CH2-CH2-CH2)，0.98(t，3H，J＝7.4Hz，-CH2-CH3)。13C-NMR(MeOD-d4，100MHz)δ：164.28，156.27，153.50，144.39，128.33，122.72，95.81，84.90，81.71，74.87，68.88，63.69，59.15，30.66，32.40，18.81，11.23，8.06。按照上述制備方法，改變反應(yīng)原料，R1除正丁基外，可為其他基團(tuán)，如：C1至C10的烷基，C1至C10的取代烷基，-(CH2)n-Ph，n＝0、1、2、3～10或取代-(CH2)n-Ph，n＝0、1、2、3～10，Ph為苯；取代烷基的碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；取代-(CH2)n-Ph的碳鏈上或苯環(huán)上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。(實(shí)施例2)本實(shí)施例的胞苷衍生物為4-N-(叔丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式6，代號(hào)G3)，經(jīng)三步反應(yīng)合成，反應(yīng)式如下。將300mg(1mmol)2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷鹽酸鹽、5mL(0.023mmol)六甲基二硅氮烷，催化量硫酸銨5mg溶于5mL1,4-二氧六環(huán)中，加熱回流反應(yīng)2h；回流反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液濃縮，向其中加入甲苯，濃縮至干2次，濃縮所得產(chǎn)物溶于10mL二氯甲烷中。向上述二氯甲烷溶液中加入0.24mL(3mmol)N-甲基咪唑、416mg(3mmol)二碳酸二叔丁酯，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)式5，反應(yīng)液濃縮得粘稠油狀物。將上述粘稠油狀物溶于3mL三乙胺和20mL甲醇組成的混合溶液中，室溫?cái)嚢柘逻^(guò)夜。然后減壓蒸餾除去溶劑，粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到199mg的產(chǎn)物G3，，三步反應(yīng)產(chǎn)率54％。G3核磁共振表征：1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：8.27(d,1H,J＝7.68Hz,H6),7.32(d,1H,J＝7.68Hz,H5),6.28(t,1H,J＝7.08Hz,H1'),4.25(m,1H,H5a'),3.93(m,2H,H5b',H4'),3.78(m,1H,H3'),1.52(s,9H,t-Bu)。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：164.36,152.17,144.24,125.29,122.71,120.13,109.98,95.78,82.17,81.60,70.45,69.30,68.90,65.57,55.90,27.12,23.57。(實(shí)施例3)本實(shí)施例的胞苷衍生物為4-N-(芐氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式8，代號(hào)G4)，經(jīng)三步反應(yīng)合成，反應(yīng)式如下。將300mg(1mmol)2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷鹽酸鹽、5mL(0.023mmol)六甲基二硅氮烷，催化量硫酸銨5mg溶于5mL1,4-二氧六環(huán)中，加熱回流反應(yīng)2h；回流反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液濃縮，向其中加入甲苯，濃縮至干2次，濃縮所得產(chǎn)物溶于10mL二氯甲烷中。向上述二氯甲烷溶液中加入0.24mL(3mmol)N-甲基咪唑、340mg(3mmol)氯甲酸卞酯，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)式7，反應(yīng)液濃縮得粘稠油狀物。將上述粘稠油狀物溶于3mL三乙胺和20mL甲醇組成的混合溶液中，室溫?cái)嚢柘逻^(guò)夜。然后減壓蒸餾除去溶劑，粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到162mg的產(chǎn)物G4，，三步反應(yīng)產(chǎn)率41％。G4核磁共振表征：1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：8.31(d,1H,J＝7.64Hz,H6),7.39(m,5H,J＝7.68Hz,Ph),6.25(t,1H,J＝7.12Hz,H1'),5.21(s,2H.CH2-Ph),4.31(m,1H,H5a'),3.82(m,2H,H5b,H4'),3.79(m,1H,H3')。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：164.22,156.22,153.27,144.48,135.87,128.42,128.10,125.31,122.74,120.16,95.89,85.35,84.91,81.7,81.66,68.87,67.54,58.31。(實(shí)施例4)本實(shí)施例的胞苷衍生物為4-N-(4-硝基芐氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式10，代號(hào)G5)，經(jīng)三步反應(yīng)合成，反應(yīng)式如下。將300mg(1mmol)2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷鹽酸鹽、5mL(0.023mmol)六甲基二硅氮烷，催化量硫酸銨5mg溶于5mL1,4-二氧六環(huán)中，加熱回流反應(yīng)2h；回流反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液濃縮，向其中加入甲苯，濃縮至干2次，濃縮所得產(chǎn)物溶于10mL二氯甲烷中。向上述二氯甲烷溶液中加入0.24mL(3mmol)N-甲基咪唑、430mg(3mmol)氯甲酸對(duì)硝基芐酯，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)式9，反應(yīng)液濃縮得粘稠油狀物。將上述粘稠油狀物溶于3mL三乙胺和20mL甲醇組成的混合溶液中，室溫?cái)嚢柘? 過(guò)夜。然后減壓蒸餾除去溶劑，粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到160mg的產(chǎn)物G5，三步反應(yīng)產(chǎn)率36％。G5核磁共振表征：1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ：11.11(s,1H),8.25(m,3H,Ph),7.68(d,2H,J＝8.64Hz,Ph),7.08(d,1H,J＝7.44Hz,H6),6.29(d,1H,J＝7.44Hz,H5),6.17(t,1H,J＝7.4Hz,H1'),5.33(s,2H,CH2-Ph),5.29(t,1H,J＝5.44Hz),4.19(m,1H,H5a'),3.66(m,1H,H5b'),3.61(m,1H,H4'),3.29(m,1H,H3')。13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ：163.93,153.47,147.86,144.38,128.97,126.72,126.19,124.26,123.62,95.57,84.82,83.99,81.77,71.91,69.13,68.42,66.06,62.34,59.52。按照上述合成方法，能夠合成各種具有不同取代基團(tuán)的衍生物，例如G5-1和G5-2。(實(shí)施例5)本實(shí)施例的胞苷衍生物為5-溴-4-N-(正丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式11，代號(hào)G6)，反應(yīng)式如下。按照實(shí)施例1的方法制得G2后，取1g(2.75mmol)G2溶于150mL二甲基甲酰胺中，攪拌下加入500mg(1.75mmol)二溴海因，得到的淡黃色溶液室溫下攪拌反應(yīng)1h，經(jīng)LCMS檢測(cè)反應(yīng)完全，G2完全轉(zhuǎn)化為G6。減壓旋蒸除去溶劑，用乙氰濃縮，濃縮后粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到263mg的產(chǎn)物G6，自G1開(kāi)始反應(yīng)至獲得G6，反應(yīng)總產(chǎn)率51％。G6核磁共振表征：1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：8.62(s,1H,H5),6.18(t,1H,J＝6.52Hz,H1'),4.19(m,1H,H5a'),4.15(m,2H,H5b',H4'),3.95(m,2H,O-CH2-CH3),3.17(m,1H,H3'),1.36(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),1.31(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),0.98(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3)。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：143.05,124.56,84.59,81.91,75.45,66.17,58.74,58.42,32.96,30.64,28.32,18.84,12.79,8.17.ESIMS：calcdforC14H18BrF2N3O6m/z442.03(M+H)+,found442.02。(實(shí)施例6)本實(shí)施例的胞苷衍生物為5-溴-4-N-(芐氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式12，代號(hào)G7)，反應(yīng)式如下(反應(yīng)式中DMF為N，N-二甲基甲酰胺，下同)。按照實(shí)施例3的方法制得G4后，取1g(2.51mmol)G4溶于150mLN，N-二甲基甲酰胺中，攪拌下加入500mg(1.75mmol)二溴海因，得到的淡黃色溶液室溫下攪拌反應(yīng)1h，經(jīng)LCMS檢測(cè)反應(yīng)完全，G4完全轉(zhuǎn)化為G7。減壓旋蒸除去溶劑，用乙氰濃縮，濃縮后粗產(chǎn)品用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到283mg的產(chǎn)物G7，自G1開(kāi)始反應(yīng)至獲得G7，反應(yīng)總產(chǎn)率32％。G7核磁共振表征：1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：8.60(s,1H,H5),7.45(m,2H,Ph),7.36(m,3H,Ph),6.18(t,1H,J＝6.52Hz,H1'),5.24(s,2H,CH2-Ph),4.33(m,1H,H5a'),4.0(m,2H,H5b',H4'),3.81(m,1H,H3')。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：143.23,135.93,128.37,128.27,125.22,122.63,120.05,85.41,85.08,84.76,81.85,68.77,68.53,68.31,67.93,58.76.ESIMS：calcdforC17H16BrF2N3O6m/z476.02(M+H)+,found477.09。同樣的，按照實(shí)施例1的合成路線在氨基上進(jìn)行取代后，按照實(shí)施例6的方法在5位上實(shí)現(xiàn)Br取代，即可制得G7-1和G7-2。按照上述制備方法，可制得R2為其他基團(tuán)的衍生物。(實(shí)施例7)本實(shí)施例的胞苷衍生物為5'-O-[3,5-二硝基水楊酸酯]-4-N-(正丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式14，代號(hào)G8)。反應(yīng)式如下(反應(yīng)式中(Boc)2O為二碳酸二叔丁酯，dioxane為1,4-二氧六環(huán)，DMAP為4-二甲氨基吡啶，EDCL為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，DCM 為二氯甲烷，TFA為三氟乙酸，下同)：首先制備化合物13。取實(shí)施例1制備的60mg(0.16mmol)G2和106mg(1mmol)碳酸鈉，混合后加入到5mL1,4-二氧六環(huán)和水(體積比4∶1)的混合溶液中。向溶液中加入44mg(0.2mmol)二碳酸二叔丁酯(Boc)2O，然后在24℃下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)過(guò)程中TLC檢測(cè)G2是否完全反應(yīng)完畢。待反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)后的體系中加入2mL水稀釋，然后用乙酸乙酯萃取2次，每次用量30mL。萃取得到的有機(jī)相用5mL水和5mL飽和食鹽水依次洗滌，洗滌完畢無(wú)水硫酸鈉干燥，接著減壓濃縮至干；濃縮后用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/丙酮/甲醇(1∶1∶0.02)洗脫得到51mg的化合物13，上述反應(yīng)產(chǎn)率76％。取上述制備的51mg(0.11mmol)的化合物13，與98mg(0.42mmol)3,5-二硝基水楊酸、60mg(0.31mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCL)混合后加入到15mL二氯甲烷中，再向二氯甲烷中加入2mg4-二甲氨基吡啶(DMAP)，在24℃下攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)過(guò)程中薄層色譜TLC檢測(cè)化合物13是否完全反應(yīng)完畢。反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)后物料中加入50mL二氯甲烷，接著使用10mL水和20mL飽和食鹽水依次洗滌，洗滌完畢使用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮至干。向濃縮后得到的物料中加 入5mL三氟乙酸(TFA)，室溫?cái)嚢?2h后濃縮至干。濃縮后用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到18mg的產(chǎn)物G8，由化合物13制得化合物14的反應(yīng)產(chǎn)率為28％。將3,5-二硝基水楊酸改變?yōu)槠渌?，即可制備R3為其中X3為苯環(huán)、雜環(huán)、稠雜環(huán)、獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代的取代苯、取代雜環(huán)、取代稠雜環(huán)；所述雜環(huán)包括咪唑、吡啶、呋喃、噻吩、噻唑、嘧啶、哌嗪和哌啶；稠雜環(huán)包括喹啉和吲哚；X2為C1至C3的-(CH2)n-或C0至C3的-O-(CH2)n-的化合物。(實(shí)施例8)本實(shí)施例的胞苷衍生物為5'-O-[2-(4-硝基-1H-咪唑)乙酸酯]-4-N-(叔丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(結(jié)構(gòu)式16，代號(hào)G9)。反應(yīng)式如下：首先制備化合物15。取60mg(0.16mmol)實(shí)施例2制備的化合物6(G3)和106mg(1mmol)碳酸鈉，混合后加入到5mL1,4-二氧六環(huán)和水(體積比4∶1)的混合溶液中。向溶液中加入44mg(0.2mmol)二碳酸二叔丁酯(Boc)2O，然后在24℃下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)過(guò)程中TLC檢測(cè)G2是否完全反應(yīng)完畢。待反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)后的體系中加入2mL 水稀釋，然后用乙酸乙酯萃取2次，每次用量30mL。萃取得到的有機(jī)相用5mL水和5mL飽和食鹽水依次洗滌，洗滌完畢無(wú)水硫酸鈉干燥，接著減壓濃縮至干；濃縮后用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/丙酮/乙醇(1∶1∶0.02)洗脫得到48mg的化合物15，上述反應(yīng)產(chǎn)率64％。取上述制備的51mg(0.11mmol)的化合物15，與98mg(0.57mmol)的2-(4-硝基-1H-咪唑)乙酸、60mg(0.31mmol)EDCL混合后加入到15mL二氯甲烷中，再向二氯甲烷中加入2mgDMAP，在24℃下攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)過(guò)程中薄層色譜TLC檢測(cè)化合物15是否完全反應(yīng)完畢。反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)后物料中加入50mL二氯甲烷，接著使用10mL水和20mL飽和食鹽水依次洗滌，洗滌完畢使用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮至干。向濃縮后得到的物料中加入5mL三氟乙酸(TFA)，室溫?cái)嚢?2h后濃縮至干。濃縮后用硅膠層析柱純化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1)洗脫得到18mg的產(chǎn)物G9，由化合物15制得化合物16的反應(yīng)產(chǎn)率為31％。(實(shí)施例9)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G10，反應(yīng)式如下(反應(yīng)式中DCC為N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺)：首先準(zhǔn)備化合物22，反應(yīng)式如下(反應(yīng)式中DMF為N,N-二甲基甲酰胺)：向反應(yīng)瓶中加入化合物20即3,5,6-三氯-2-吡啶酚(5g,25.2mmol)，碳酸鉀(7g,50.6mmol)和N,N-二甲基甲酰胺DMF(30ml)，攪拌15min。冷卻到0℃，滴加溴乙酸乙酯(2.78ml,25.2mmol)。室溫反應(yīng)4h。加入水(15ml)，二氯甲烷提取(15ml×3)。有機(jī)相旋干，得到化合物21直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。將化合物21(5.4g,18.8mmol)加入54mL水中，加入氫氧化鈉(0.864g,21.6mmol)，在80℃下攪拌4h。然后滴加濃鹽酸調(diào)pH至1，過(guò)濾得產(chǎn)物化合物22待用，3.3g(70％)。將化合物12即5-溴-4-N-(芐氧羰基)--2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(2g，4.21mmol)與碳酸鈉(3.3g,31.1mmol)混合后加入到1,4-二氧六環(huán)和水的體系中(體積比4∶1,200mL)。加入(Boc)2O(1.8g,8.25mmol,Di-t-butyldicarbonate)，在25℃下攪拌反應(yīng)48h，反應(yīng)過(guò)程中TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入20mL水稀釋，使用2×100mL乙酸乙酯2次萃取，有機(jī)相使用50mL水和50mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析(二氯甲烷/丙酮/甲醇，1∶1∶0.02)得到化合物17，產(chǎn)量690mg，產(chǎn)率29％。ESIMS：calcdforC22H24BrF2N3O8m/z576.07(M+H)+,found576.16。將化合物17(350mg，0.61mmol)與化合物22(186mg，0.73mmol)、DCC(250mg，1.21mmol，Dicydohexylcarbodiimide，N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺)混合后加入到7mL二氯甲烷中，加入DMAP(15mg,0.12mmol，4-dimethylaminopyridine，4-二甲氨基吡啶)，反應(yīng)在常溫下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入5mL水稀釋，使用2×20mL二氯甲烷萃取，有機(jī)相使用5mL水和5mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析(二氯甲烷/甲醇，45∶1)得到中間體18(260mg，產(chǎn)率70％)。該中間體直接使用TFA(三氟乙酸，trifluoroaceticacid)的二氯甲烷溶液處理，直接得到產(chǎn)物G10(175mg，產(chǎn)率77％)。G10核磁共振表征：1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ7.81(s,1H),7.75(s,1H),7.35(m,5H),6.24(m,1H), 5.27(s,2H),5.22(s,2H),5.03(m,2H),4.67(m,1H),4.47(m,1H),4.30(s,2H)。13CNMR(CDCl3,100MHz)δ167.80,162.56,157.21,155.57,143.28,140.91,128.90,128.78,124.55,123.44,118.57,117.47,72.61,68.68,64.94,63.83,63.37,62.84。ESIMS：calcdforC24H18BrCl3F2N4O8m/z712.93(M+H)+,found712.99。(實(shí)施例10)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G11。首先制備化合物24，反應(yīng)式如下：將2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷(5g，16mmol)溶于乙酸(56mL)，35℃下攪拌2h；加入三氯甲烷(17mL)，0℃下攪拌15min。滴加三氯甲烷/乙酰氯(28ml/33ml)混合液，50℃下攪拌反應(yīng)24h。旋干溶劑，加入甲醇(35ml)，旋干，得到產(chǎn)物23，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。反應(yīng)瓶加入碘單質(zhì)(2.8g，11mmol)、碘酸(0.83g，4.7mmol)、乙酸(37.5mL)、四氯化碳(25.5mL)、水(25.5ml)和化合物23，40℃下攪拌反應(yīng)24h。旋干溶劑，加入二氯甲烷和水。調(diào)節(jié)pH至6～7，有機(jī)相用硫代硫酸鈉洗滌，水洗。合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾，濾液旋干。得到化合物24即產(chǎn)物5g待用(兩步產(chǎn)率55％)。ESIMS：calcdforC13H14F2N3O6m/z473.99(M+H)+,found474.14。制備化合物G11的反應(yīng)式如下：將化合物24(2.5g,5.3mmol)、吡啶(1.24g,15.8mmol)溶于二氯甲烷(35mL)；0℃下滴加氯甲酸丁酯(2.15g,15.8mmol)，10℃下反應(yīng)過(guò)夜。旋干溶劑，柱分離(二氯甲烷∶甲醇＝60∶1)得到1.9g(產(chǎn)率63％)化合物25。ESIMS：calcdforC18H22F2N3O8m/z574.04(M+H)+,found574.14。將化合物25(2.5g,4.3mmol)溶于甲醇(40mL)，攪拌5min，加入碳酸鉀(2.1g,15.2mmol)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾，濾液旋干得1.5g(產(chǎn)率70.4％)化合物26。ESIMS：calcdforC14H18F2N3O6m/z490.02(M+H)+,found490.07。將化合物26(3.9g,8mmol)、碳酸鈉(4.24g,40mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(22.5mL)和水(4.5mL)的混合液中，攪拌10min。加入二碳酸二叔丁酯(2.1g,9.6mmol)。室溫反應(yīng)至少24h。旋干溶劑，加入二氯甲烷(70mL)和水(100mL)，二氯甲烷提取(70mL×3)。有機(jī)相旋干。柱分離(二氯甲烷∶甲醇＝80∶1)得到2.8g(產(chǎn)率60％)化合物27。ESIMS：calcdforC19H26F2IN3O8m/z590.07(M+H)+,found590.02.將化合物27(50mg，0.08mmol)與化合物22(32.4mg，0.13mmol)、DCC(35mg，0.17mmol)混合后加入到2mL二氯甲烷中，加入DMAP(2mg,0.016mmol)，反應(yīng)在常溫下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入5mL水稀釋，使用2×20mL二氯甲烷2次萃取，有機(jī)相使用5mL水和5mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析(二氯甲烷/甲醇，150∶1)得到中間體(50mg，產(chǎn)率71％)。該中間體直接使用TFA的二氯甲烷溶液處理，直接得到G11(35mg，產(chǎn)率80％)。G11的表征如下：ESIMS：calcdforC21H20Cl3F2IN4O8m/z726.94(M+H)+,found727.12。1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ8.06(s,1H),5.49(s,1H),5.07(m,3H),4.51(s,1H),4.48(m,1H),4.21(s,5H),1.69(m,3H),1.44(m,3H),0.97(m,3H)。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ168.06,141.08,140.91,122.67,81.73,66.15,63.85, 63.54,59.38,58.64,33.27,30.68,19.73,18.89,15.75,12.84,8.78。(實(shí)施例11)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G12，反應(yīng)式如下：將化合物27(300mg，0.51mmol)與2-(4-硝基-1H-咪唑)乙酸(105mg，0.61mmol)、DCC(210mg，1.02mmol)混合后加入到10mL二氯甲烷中，加入DMAP(9mg,0.073mmol)，反應(yīng)在常溫下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入20mL水稀釋，使用3×30mL二氯甲烷3次萃取，有機(jī)相使用20mL水和20mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥，柱層析(二氯甲烷/甲醇，66∶1)得到中間體200mg(53％)，該中間體直接使用TFA的二氯甲烷溶液處理，直接得到70mg(40％)產(chǎn)物G12。(實(shí)施例12)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G13。首先制備化合物35。將化合物24(5g，0.01mol)、(Ph3)PdCl2(1.5g，2.14mmol)、CuI(1.0g，5.27mmol)加入預(yù)干燥的反應(yīng)瓶中，N2保護(hù)下注入干燥的THF(100ml)，注入Me3SiC≡CH(5.2g，0.053mol)，注入TEA(15ml)。室溫反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑。使用硅膠層析柱(乙酸乙酯/石油醚：1∶1)純化得到2.67g(產(chǎn)率57％)化合物30。將化合物30(10g，1.1mmol)加入到MeOH(200ml)中，攪至全溶。在0℃下，冷卻15分鐘。加入K2CO3(10.92g，3.95mmol)，0℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后先過(guò)濾除去碳酸鉀，再減壓蒸餾除去溶劑。使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：10∶1)純化 得到5.46g(產(chǎn)率84.27％)化合物31。將化合物61(5.46g,0.019mol)，CuSO4.5H2O(475mg,1.9mmol)，Vc.Na(1.13g,5.7mmol)，加入到THF(55mL)和水(49ml)中，N2保護(hù)下常溫?cái)嚢?0分鐘。然后注入N2保護(hù)下常溫?cái)嚢?6小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑。使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：15∶1)純化得到4.88g(產(chǎn)率61.0％)化合物32?；衔?2：ESIMS：calcdforC18H18F2N6O4m/z421.18(M+H)+,found421.36。上述反應(yīng)式中1,4-dioxane為1,4-二氧六環(huán)，HMDS為六甲基二硅氮烷。將化合物32(2.0g，4.76mmol)、六甲基二硅氮烷HMDS(20mL)、(NH4)2SO4(50.3mg，0.38mmol)加入到1,4-二氧六環(huán)(20mL)中，在80℃下攪拌回流4小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯5ml×2旋干帶溶劑，油泵抽干。加入二氯甲烷(40ml)、吡啶(1.13g,14.3mmol)，降溫至0℃，緩慢加入氯甲酸對(duì)硝基卞酯(3.08g,14.3mmol)，10℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑。加入甲醇(40mL)，0℃冷卻15分鐘，滴加三乙胺(6.7ml)。10℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：40∶1)純化得到780mg(三步產(chǎn)率27.3％)化合物33?；衔?3：ESIMS：calcdforC26H23F2N7O8m/z600.22(M+H)+,found600.25。將化合物33(780mg,1.3mmol)、Na2CO3(690mg,6.5mmol)加入至1,4-二氧六環(huán)(20ml)和水(5ml)中，攪拌至溶解。常溫下加入(Boc)2O(340.6mg,1.56mmol)。常溫?cái)嚢柽^(guò)夜；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：80∶ 1)純化得到366mg(產(chǎn)率40.2％)化合物34?；衔?4：ESIMS：calcdforC31H31F2N7O10m/z700.28(M+H)+,found700.08。將化合物34(250mg,0.36mmol)、化合物22(109mg,0.43mmol)、DCC(148mg,0.72mmol),DMAP(5mg)加入至二氯甲烷(12ml)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后抽濾除去DCC，減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：100∶1)純化得到210mg(產(chǎn)率60.0％)化合物35。化合物35：ESIMS：calcdforC38H33Cl3F2N8O12m/z937.28(M+H)+,found937.28。將化合物35(210mg,0.224mmol)加入至10ml的DCM/TFA＝5∶1體系中，常溫?cái)嚢?小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：60∶1)純化得到產(chǎn)物140mg(產(chǎn)率75.0％)G13。ESIMS：calcdforC33H25Cl3F2N8O10m/z837.17(M+H)+,found837.27。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ8.34(s,1H),8.23(m,3H),7.57(m,3H),7.33(m,3H),7.23(m,2H),6.38(m,1H),5.49(m,3H),5.30(s,3H),5.13(m,2H),4.73(m,1H),4.33(m,3H)。將現(xiàn)在市場(chǎng)上能夠購(gòu)買(mǎi)到的或者是已經(jīng)合成的疊氮化合物代替進(jìn)行反應(yīng)，即 可獲得R2位是的化合物，X1為C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、C1至C10的烷氧基、C1至C10的取代烷氧基、C1至C6的烷基磺?；1至C6的烷硫基、-(CH2)n-Ph或取代-(CH2)n-Ph；其中取代烷基、取代烷氧基的碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；-(CH2)n-Ph和取代-(CH2)n-Ph的n＝0、1、2、3～10；取代-(CH2)n-Ph的碳鏈上或苯環(huán)上由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)H、鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。(實(shí)施例13)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G14。首先制備化合物39。將化合物32(1.5g，3.57mmol)，HMDS(15mL),(NH4)2SO4(37.7mg，0.285mmol)加入到1,4-二氧六環(huán)(15mL)中，在80℃下攪拌回流4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯5ml×2旋干帶溶劑，油泵抽干。加入二氯甲烷(30mL)、吡啶(0.846g,0.01mol)，降溫至0℃慢加氯甲酸卞酯(1.83g,0.01mol)，10℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑。加入甲醇40mL，0℃冷卻15分鐘，滴加三乙胺6mL。10℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：40∶1)純化得到570mg(產(chǎn)率28.8％)化合物37。ESIMS：calcdforC25H24F2N6O6m/z555.24(M+H)+,found555.04。將化合物37(520mg，0.939mmol)，Na2CO3(497.5mg,4.69mmol)加入至12mL1,4-二氧六環(huán)和3mL水中，攪拌至溶解；常溫下加入(Boc)2O(245.5mg，1.126mmol)，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：80∶1)純化得到278mg(產(chǎn)率45.3％)化合物38。ESIMS：calcdforC31H32F2N6O8m/z655.28(M+H)+,found655.08。將化合物38(200mg,0.3mmol),化合物22(93.6mg,0.367mmol),DCC(126mg,0.612mmol),DMAP(10mg)加入至二氯甲烷(10ml)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后抽濾除去DCC，減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：125∶1)純化得到170mg(產(chǎn)率62.5％)化合物39。ESIMS：calcdforC38H34Cl3F2N7O10m/z914.14(M+Na)+,found914.36。將化合物39(140mg,0.157mmol)加入至10mL的DCM/TFA＝5∶1體系中，常溫?cái)嚢?小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：50∶1)純化得到產(chǎn)物G1495mg(產(chǎn)率76.43％)。ESIMS：calcdforC33H26Cl3F2N7O8m/z814.26(M+Na)+,found814.61。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ8.50(s,1H),8.36(s,1H),7.63(s,1H),7.33(m,9H),7.23(m,2H),6.38(m,1H),5.49(m,2H),5.30(s,4H),5.13(m,1H),4.80(m,1H),4.50(m,2H),4.30(m,1H).13C-NMR(CDCl3,100MHz)δ168.61157.65155.68146.20143.22140.59128.87128.02123.07117.2468.1964.1154.4012.69。將現(xiàn)在市場(chǎng)上能夠購(gòu)買(mǎi)到的或者是已經(jīng)合成的疊氮化合物代替進(jìn)行反應(yīng)，即可獲得R2位是的其他化合物，X1為C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、C1至C10的烷氧基、C1至C10的取代烷氧基、C1至C6的烷基磺酰基、C1至C6的烷硫基、-(CH2)n-Ph或取代-(CH2)n-Ph；其中取代烷基、取代烷氧基的碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；-(CH2)n-Ph和取代-(CH2)n-Ph的n＝0、1、2、3～10；取代-(CH2)n-Ph的碳鏈上或苯環(huán)上由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)H、鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。(實(shí)施例14)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G15。首先制備化合物43。將化合物32(1.3g，3.0mmol)、HMDS(13mL)、(NH4)2SO4(32.7mg，0.247mmol)加入到1,4-二氧六環(huán)(13mL)中，在80℃下攪拌回流4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯5ml×2旋干帶溶劑，油泵抽干。加入二氯甲烷(26ml)、吡啶(0.733g,9.3mmol)，降溫至0℃慢加氯甲酸丁酯(1.268g,9.3mmmol)，10℃下攪拌過(guò)夜。 反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑。加入甲醇(30ml)，0℃冷卻15分鐘，滴加三乙胺(4.5ml)。10℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：40∶1)純化得到850mg(產(chǎn)率52.8％)化合物41。將化合物41(800mg,1.538mmol)、Na2CO3(815mg,7.69mmol)加入至25mL1,4-二氧六環(huán)和6mL水中，攪拌至溶解；常溫下加入(Boc)2O(403mg,1.85mmol)，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：80∶1)純化得到458mg(產(chǎn)率48.1％)化合物42。ESIMS：calcdforC28H34F2N6O8m/z637.76(M+NH4)+,found637.46。將化合物42(380mg,0.613mmol)、化合物22(187.5mg,0.736mmol)、DCC(252.5mg,1.226mmol)、DMAP(20mg)加入至二氯甲烷(20ml)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后抽濾除去DCC，減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：125∶1)純化得到333mg(產(chǎn)率63.5％)化合物43。ESIMS：calcdforC35H36Cl3F2N7O10m/z858.18(M+H)+,found858.28。將化合物43(310mg,0.362mmol)加入至12ml的DCM/TFA＝5∶1體系中，常溫?cái)嚢?小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾除去溶劑，使用硅膠層析柱(二氯甲烷/甲醇：50∶1)純化得到235mg(產(chǎn)率85.8％)產(chǎn)物G15。ESIMS：calcdforC30H28Cl3F2N7O8m/z758.18(M+H)+,found758.18。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ8.43(s,1H),8.33(s,1H),8.11(m,1H),7.70(m,1H),7.63(m,1H),7.34(m,4H),6.34(m,1H),5.53(m,3H),5.21(m,2H),4.76(m,1H),4.54(m,1H),4.46(m,1H),4.43(m,1H),4.20(m,2H),1.70(m,2H),1.41(m,2H),0.95(m,3H)。將現(xiàn)在市場(chǎng)上能夠購(gòu)買(mǎi)到的或者是已經(jīng)合成的疊氮化合物代替進(jìn)行反應(yīng)，即可獲得R2位是的其他化合物，X1為C1至C10的烷基、C1至C10的取代烷基、C1至C10的烷氧基、C1至C10的取代烷氧基、C1至C6的烷基磺?；1至C6的烷硫基、-(CH2)n-Ph或取代-(CH2)n-Ph；其中取代烷基、取代烷氧基的碳鏈上獨(dú)立地由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代；-(CH2)n-Ph和取代-(CH2)n-Ph的n＝0、1、2、3～10；取代-(CH2)n-Ph的碳鏈上或苯環(huán)上由一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)H、鹵素、氰基、硝基、氨基、羥基或羧基取代。(實(shí)施例15)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G16。將化合物11(2g,4.52mmol)、碳酸鈉(3.4g)溶于133mL1,4-二氧六環(huán)和34mL水的混合液中，攪拌10min；加入二碳酸二叔丁酯(1.47g,6.78mmol)，室溫反應(yīng)至少48h。旋干溶劑，加入二氯甲烷(70mL)和水(100mL)，二氯甲烷提取(70ml×3)。有機(jī)相旋干。柱分離(二氯甲烷∶甲醇＝80∶1)得到1.2g(48.9％)化合物45。ESIMS：calcdforC19H26BrF2N3O8m/z542.09(M+H)+,found542.11將Boc保護(hù)的化合物45(355mg，0.65mmol)與化合物22(499mg，1.95mmol)、DCC(401mg，1.95mmol)混合后加入到45mL二氯甲烷中，加入DMAP(2mg,0.016mmol)，反應(yīng)在常溫下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入5mL水稀釋，使用2×20mL二氯甲烷萃取，有機(jī)相使用5mL水和5mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥后加入TFA處理，直接得到目標(biāo)化合物G16(110mg，2步產(chǎn)率24％)。1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：8.05(s,2H,Ar),6.22(t,1H,J＝7.6Hz,H1'),5.15(m,2H),4.67(m,1H,H5a'),4.48(m,4H,H5b',H4',O-CH2-CH3),1.70(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),1.28(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),0.97(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3)。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：168.12,155.98,142.88,141.03,124.15,122.75,117.32,82.73,78.37,77.97,63.76,63.55,62.67,41.82,31.04,30.63,29.98,18.88,18.84,12.81,8.29。ESIMS：calcdforC21H20BrCl3F2N4O8m/z681.94(M+2H)+,found681.15。(實(shí)施例16)本實(shí)施例的胞苷衍生物的代號(hào)G17。將化合物10(911mg,1.75mmol)溶于50mL二甲基甲酰胺中，加入二溴海因(500mg,1.75mmol)，淡黃色溶液室溫?cái)嚢?h，LCMS檢測(cè)反應(yīng)完全。減壓旋蒸除去溶劑，柱層析(二氯甲烷/甲醇，20∶1)，獲得化合物47(483mg，總產(chǎn)率52.9％，白色固體)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ8.40(s,1H,Ar),8.23(d,J＝4Hz,2H,Ar),7.60(d,J＝4Hz,2H,Ar),6.15(m,1H,H1'),5.30(s,2H,Ar-CH2),4.50(m,1H,H5a'),4.48(m,4H,H5b',H4',O-CH2-CH3)。將化合物47(2.33g,5.72mmol)，碳酸鈉(4.12g)溶于133mL1,4-二氧六環(huán)和34mL水的混合液中，攪拌10min。加入二碳酸二叔丁酯(1.72g,7.9mmol)；室溫反應(yīng)至少48h。旋干溶劑，加入二氯甲烷(70ml)和水(100ml)，二氯甲烷提取(70ml×3)。有機(jī)相旋干。柱分離(二氯甲烷∶甲醇＝80∶1)得到1.4g(49％)化合物48。將Boc保護(hù)的化合物48(540mg，0.869mmol)與化合物22(667mg，2.60mmol)、DCC(537mg，2.60mmol)混合后加入到45mL二氯甲烷中，加DMAP(2mg,0.016mmol)，反應(yīng)在常溫下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)，待反應(yīng)結(jié)束后加入5mL水稀釋，使用2×20mL二氯甲烷萃取，有機(jī)相使用5mL水和5mL飽和食鹽水洗滌，使用無(wú)水硫酸鈉干燥后加入TFA處理，直接得到目標(biāo)化合物G17(115mg，2步產(chǎn)率17％)1H-NMR(MeOD-d4,400MHz)δ：.05(s,2H,Ar),6.22(t,1H,J＝7.6Hz,H1'),5.15(m,2H),4.67(m,1H,H5a'),4.48(m,4H,H5b',H4',O-CH2-CH3),1.70(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),1.28(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3),0.97(m,2H,-O-CH2-CH2-CH2-CH3)。13C-NMR(MeOD-d4,100MHz)δ：67.81,157.47,155.55,142.93,141.00,128.98,128.42,123.99,117.54,79.92,76.89,76.55,66.69,65.80,63.78,62.54。ESIMS：calcdforC24H17BrCl3F2N5O10m/z760.92(M+2H)+,found760.10。(實(shí)施例17胞苷衍生物的鹽酸鹽)本實(shí)施例制備實(shí)施例1的化合物4-N-(正丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷的鹽酸鹽。取4-N-(正丁氧羰基)-2’-脫氧-2’，2’-二氟代胞苷0.50g溶解于60mL乙酸乙酯中，冰浴下通入干燥的鹽酸氣，攪拌15分鐘后去除溶劑得到白色固體產(chǎn)物。其他胞苷衍生物的鹽酸鹽的制備方法同上。除了上述鹽酸鹽外，還可以制備胞苷衍生物的磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、琥珀酸鹽、磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽。(實(shí)施例18、胞苷衍生物的注射用凍干粉針劑)本實(shí)施例制備實(shí)施例13的化合物G14的凍干粉針劑。G14的凍干粉針劑包括30g的化合物G14、甘露醇(20％w/v)300g，緩沖劑二水合磷酸二氫鈉7克、表面活性劑泊洛沙姆188(F68)4.0g。將按照上述處方量準(zhǔn)確稱取的二水合磷酸二氫鈉、泊洛沙姆188(F68)(CAS號(hào)：9003-11-6)、甘露醇(20％w/v)加入300g預(yù)冷至10℃以下的注射用水中溶解后，用0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH值為7.3～7.5；再向上述溶液中加入處方量的G14混合均勻，用0.1mol/L的NaOH溶液或0.1mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為7.3±0.2(本實(shí)施例為7.5)；加水至2000g，溶液用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌；按每瓶2.0g將濾液分裝于管制瓶中，半加塞后置于冷凍干燥機(jī)中凍干，待干燥后真空壓塞，軋蓋，貼標(biāo)簽，即得 凍干粉針劑1000支，保存在2～8℃溫度下。除了上述凍干粉針劑即注射用無(wú)菌粉末外，本發(fā)明的胞苷衍生物還可制備成其他形式的注射劑，如溶液型注射劑、混懸型注射劑、乳劑型注射劑。(實(shí)施例19、胞苷衍生物的口服藥物組合物)本實(shí)施例的胞苷衍生物的藥物組合物由活性組分和輔料組成，其中的藥物活性組分為上述實(shí)施例制備的胞苷衍生物或其對(duì)應(yīng)的鹽。藥物活性組分的重量在組合物中所占比例為1％～95％(本實(shí)施例為30％)。輔料由水、乳糖、玉米淀粉、羥丙基甲基纖維素和硬脂酸鎂組成。本實(shí)施例的藥物組合物的劑型為片劑。藥物組合物的適用劑型除除上涉及的片劑形式外，藥物活性組分可以被制成口服的散劑、顆粒劑、膠囊劑、微丸制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者是口服形式的緩釋及控釋制劑，或者是其他口服形式的藥物組合物，這些口服劑型含有常見(jiàn)的相應(yīng)的輔料(根據(jù)不同的作用分為添加劑、附加物等)，如添加劑有藥物等級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鹽、纖維素或硫酸鎂等。在實(shí)現(xiàn)上述口服劑型中，可以選擇藥學(xué)上的附加物作為藥物活性組分的載體，包括已有技術(shù)成熟的物質(zhì)，例如：惰性固體稀釋液、水溶劑、脂質(zhì)體、微球體或/和無(wú)毒有機(jī)溶劑等；優(yōu)選的附加物有：加濕劑、乳化劑、pH緩沖液、人血清白蛋白、抗氧化劑、防腐劑、抑菌劑、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、卵磷脂、甘氨酸、山梨酸、丙烯醇、聚乙烯、魚(yú)精蛋白、硼酸、氯化鈉、或者氯化鉀、礦物油、植物油等；可從中選擇一種或幾種組合作為藥物載體。本發(fā)明的藥物組合物的靶腫瘤包括血液腫瘤或惡性實(shí)體性腫瘤；具體的，靶腫瘤包括肺癌、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮癌、腎癌、頭頸癌、皮膚癌、膀胱癌、外陰癌、睪丸瘤、直腸癌、絨毛癌、生殖細(xì)胞瘤、惡性淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤，并且甚至更優(yōu)選的靶腫瘤可包括胰腺癌(一、二線治療)、非小細(xì)胞性肺癌、乳腺癌、卵巢癌和頭頸部鱗癌、結(jié)腸癌，但本發(fā)明不限于此。(應(yīng)用例1、單次腹腔給予系列化合物在ICR小鼠的最大耐受量試驗(yàn))本實(shí)驗(yàn)是研究受試物單次腹腔給藥對(duì)ICR小鼠的毒性反應(yīng)，確定各受試物的最大耐受量(MTD)。最大耐受量(MTD)是指動(dòng)物不會(huì)發(fā)生死亡，動(dòng)物的體重降低不會(huì)超過(guò)10％(與Day0相比)，或者不產(chǎn)生明顯毒副作用的劑量。1、受試物配置如下。受試物溶解所用溶劑來(lái)源如下：稱取定量對(duì)應(yīng)的受試物于5mL玻璃試管中，在5mm的磁力攪拌子攪拌下溶解于乙醇中，全部溶解后加入CremophorEL，保持?jǐn)嚢?，臨用前加入標(biāo)示量的生理鹽水?dāng)嚢杈鶆?，配置時(shí)乙醇、CremophorEL、生理鹽水的體積比為5∶5∶90。2、試驗(yàn)動(dòng)物品種和品系：ICR小鼠；級(jí)別：SPF；性別：雌性。來(lái)源：上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。合格證號(hào)：0130749。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始動(dòng)物體重：18-20g。數(shù)量和性別：41只，雌性。飼養(yǎng)方式：六只一籠。適應(yīng)期：5～7天，與實(shí)驗(yàn)時(shí)相同飼養(yǎng)條件。動(dòng)物房環(huán)境溫度18-26℃，相對(duì)濕度30-70％，12小時(shí)光照。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)5-7天。SPF大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料Co60滅菌，購(gòu)自北京科澳協(xié)力有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用水采用過(guò)濾滅菌水，動(dòng)物自由飲食及飲水。3、實(shí)驗(yàn)方法給藥方式：ip。如動(dòng)物死亡則減低劑量，直至動(dòng)物存活，如無(wú)動(dòng)物死亡，則增加劑量；如在給給定高劑量下動(dòng)物正常存活則實(shí)驗(yàn)結(jié)束。最終根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定小鼠對(duì)受試物的MTD；急性給藥后連續(xù)觀察動(dòng)物7天。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有動(dòng)物，對(duì)所有的受試動(dòng)物進(jìn)行詳細(xì)臨床觀察，給藥后每天兩次(上10：00、下午16：00各一次)，連續(xù)觀察14天，觀察包括但不僅限于：皮膚，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸腔，腹部，外生殖器，四肢和腳，呼吸道及循環(huán)系統(tǒng)，自主效應(yīng)(如流涎)，神經(jīng)系統(tǒng)(如震顫，抽搐，應(yīng)激反應(yīng)以及反常行為)。給藥前稱重動(dòng)物的體重，隨后每天在同一時(shí)間稱量動(dòng)物的體重并記錄。每天詳細(xì)記錄觀察結(jié)果、動(dòng)物體重以及給藥一周后動(dòng)物存活情況。4試驗(yàn)結(jié)果G3和G4在350mg/kg可以耐受，G5在300mg/kg可以耐受，G6在200mg/kg可以 耐受，G7在200mg/kg可以耐受，G8在300mg/kg可以耐受，G10在400mg/kg可以耐受，G11在400mg/kg可以耐受，G12在400mg/kg可以耐受，G13在400mg/kg可以耐受，G15在400mg/kg可以耐受，G16在400mg/kg可以耐受。(應(yīng)用例2、系列化合物對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)抑制作用)本應(yīng)用例通過(guò)觀察接種部位腫瘤的形成情況和受試動(dòng)物的體重變化來(lái)評(píng)價(jià)單次腹腔注射化合物G2至G17對(duì)結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用及其毒性。1、試驗(yàn)?zāi)康臏y(cè)定本發(fā)明的胞苷衍生物樣品對(duì)結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用及其毒性。2、受試物的配制受試物溶解所用溶劑來(lái)源如下：溶劑批號(hào)廠商無(wú)水乙醇10009218國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司CremophorEL27963Sigma0.9％生理鹽水13083004華裕制藥有限公司稱取定量對(duì)應(yīng)的受試物于5mL玻璃試管中，在5mm的磁力攪拌子攪拌下溶解于乙醇中，全部溶解后加入CremophorEL，保持?jǐn)嚢瑁R用前加入標(biāo)示量的生理鹽水?dāng)嚢杈鶆?，配置時(shí)乙醇、CremophorEL、生理鹽水的體積比為5∶5∶90。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種和品系：Balb/cNude小鼠；級(jí)別：SPF；性別：雌性。來(lái)源：上海西普爾-畢凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。動(dòng)物數(shù)量：訂購(gòu)100只，選擇其中健康狀況良好的用于實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物合格證號(hào)：0123627。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)動(dòng)物年齡：7-9周齡。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)動(dòng)物體重：18-22克。適應(yīng)環(huán)境時(shí)間：5-7天。動(dòng)物編號(hào)方式：尾號(hào)。動(dòng)物房環(huán)境保持溫度23±2℃,濕度40-70％，12小時(shí)明暗交替。動(dòng)物飼料(SLAC-M01)購(gòu)自北京科澳協(xié)力有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用水采用過(guò)濾滅菌水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物自由飲食和飲水。4、實(shí)驗(yàn)方法4.1腫瘤細(xì)胞：結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞，購(gòu)于中科院細(xì)胞生物研究所。用F-12培養(yǎng)基，(含10％的FBS)培養(yǎng)在37℃，飽和濕度，含體積分?jǐn)?shù)為5％CO2、95％空氣的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)。接種前取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，以0.25％胰蛋白酶消化后，PBS洗滌1次，PBS重新懸浮計(jì)數(shù)，用不含血清的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至約3x10^7cell/mL。4.2動(dòng)物接種及分組：每個(gè)裸鼠在無(wú)菌狀態(tài)下，右側(cè)后肢皮下接種0.1mL細(xì)胞懸液(3x10^6cell/mouse)。待腫瘤長(zhǎng)至體積60-150mm3左右時(shí)，選出腫瘤體積相近、形狀較好的裸鼠(形狀盡量為單一圓球形，無(wú)不規(guī)則的形狀或多個(gè)腫瘤聚在一起)，分組，每組6只，分組情況如下：IP：腹腔注射；QD×1：注射一次。Control控制組即模型對(duì)照組的小鼠注射5:5:90的乙醇、CremophorEL、生理鹽水組成的混合溶液。4.3動(dòng)物給藥和觀察觀察各組裸鼠接種部位腫瘤的形成狀況，每周3次用圓洞尺測(cè)量腫瘤結(jié)節(jié)的直徑(D),并按如下公式計(jì)算腫瘤結(jié)節(jié)的體積(V)：V＝3/4π(D/2)3?？鼓[瘤活性的評(píng)價(jià)指標(biāo)為腫瘤生長(zhǎng)抑制率TGI(％)，相對(duì)腫瘤增殖率T/C(％)。腫瘤生長(zhǎng)抑制率TGI(％)的計(jì)算公式為：TGI(％)＝(Vcontrol-VTreatment)/Vcontrol)×100％。相對(duì)腫瘤體積(relativetumorvolume，RTV)計(jì)算公式為：RTV＝Vt/V0。其中V0為分組給藥時(shí)的腫瘤體積，Vt為測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。相對(duì)腫瘤增殖率T/C(％)，計(jì)算公式為：T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％。TRTV：治療組RTV；CRTV：陰性對(duì)照組RTV。每周3次稱量小鼠體重。4.4臨床癥狀在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每個(gè)動(dòng)物所有的臨床癥狀都應(yīng)記錄。觀察應(yīng)在每天的同一時(shí)間進(jìn)行。給予受試物后如出現(xiàn)體重減低>20％，瀕死動(dòng)物或腫瘤體積超過(guò)2800mm^3，則CO2處死，分離腫瘤并稱重，尸檢，肉眼觀察是否有病變器官并記錄。4.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)除特別指出外，均以Mean±SEM表示；兩組間數(shù)據(jù)采用非配對(duì)T檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。5試驗(yàn)結(jié)果(1)臨床觀察和死亡率G4350mg/kg組在給藥后第4天1只動(dòng)物死亡，3只動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、體重降低、體表溫度低于正常等臨床癥狀。G8350mg/kg組動(dòng)物在給藥后第4天全部死亡。G6300mg/kg組在給藥后第4天5只動(dòng)物死亡。模型對(duì)照組和其余各化合物組(G3，G5，G7，G9，G10，G11，G12，G13，G15，G16)動(dòng)物臨床癥狀未出現(xiàn)明顯異常。各組動(dòng)物死亡率見(jiàn)表2(表中QD*1：?jiǎn)未胃骨蛔⑸?。表2(2)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠體重的影響。各組動(dòng)物平均體重見(jiàn)表3。表3-1G3至G9不同日期小鼠體重*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroup表3-2G10至G16不同日期小鼠體重*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroup表4-1G3至G9體重改變率*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroupG10至G16體重改變率見(jiàn)表4-2表4-2*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroup由上述圖表數(shù)據(jù)，在化合物對(duì)結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用中，G4350mg/kg在給藥第4天動(dòng)物體重顯著降低(p<0.05)，體重降低率平均為10.91±3.45％，其后體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，在第18～20天與模型對(duì)照組比較體重顯著升高(p<0.05)。G5325mg/kg在給藥4天動(dòng)物體重顯著降低(p<0.05)，體重降低率<10％，其后體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，在第13～20天與模型對(duì)照組比較體重顯著升高(p<0.05～0.01)。G7 250mg/kg在給藥第4，6天動(dòng)物體重顯著降低(p<0.05)，體重降低率分別為12.28±4.78％和4.39±3.6％，其后體重穩(wěn)定增長(zhǎng)。其他給藥組動(dòng)物體重與模型對(duì)照比較無(wú)顯著性差異。(3)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤體積的影響各組腫瘤體積具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。表5-1G3-G9腫瘤體積*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroup表5-2G10-G16腫瘤體積*p<0.05,**p<0.01vsvehiclegroup由上述各組腫瘤體積的數(shù)據(jù)可見(jiàn)，本發(fā)明的胞苷衍生物對(duì)腫瘤具有明顯的抑制作用。(4)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)抑制率(TGI％)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)抑制率(TGI)見(jiàn)如下表6：表6-1G3-G9對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)抑制率表6-2G10-G16對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)抑制率化合物G3350mg/kg組腫瘤抑制率最大值在Day8，為58.10％，至Day22天約為46.82％?；衔颎4350mg/kg組腫瘤抑制率較好在Day11達(dá)到最大值92.58％，至Day22天仍維持在70％以上?；衔颎5325mg/kg組腫瘤抑制率較好在Day11達(dá)到最大值94.46％，至Day24天仍維持在70％以上。G9325mg/kg組腫瘤抑制率最大值在Day4為80.77％，至Day22天約為40％。G7250mg/kg組腫瘤抑制率最大值在Day8為82.62％，至Day22天抑制率為44.07％。(5)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的腫瘤相對(duì)體積(RTV)受試化合物G3-G9對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的腫瘤相對(duì)體積見(jiàn)如下表7-1：表7-1化合物G4350mg/kg組與模型對(duì)照組比較腫瘤相對(duì)體積在Day4到Day18有顯著性降低(p<0.05～0.01)。G5325mg/kg組與模型對(duì)照組比較腫瘤相對(duì)體積在Day4到Day18有顯著性降低(p<0.05～0.01)。G7250mg/kg組與模型對(duì)照組比較腫瘤相對(duì)體積在Day4到Day15有顯著性降低(p<0.05～0.01)。G9325mg/kg組與模型對(duì)照組比較腫瘤相對(duì)體積僅在Day4有顯著性降低(p<0.05)。其他給藥組與模型對(duì)照組比較腫瘤相對(duì)體積無(wú)顯著性差異。G10-G16對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的腫瘤相對(duì)體積見(jiàn)如下表7-2：表7-2(6)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增值率(T/C％)受試化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增值率數(shù)據(jù)見(jiàn)如下表8：表8-1G3-G9對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增值率化合物G4350mg/kg組相對(duì)腫瘤增殖率在Day13達(dá)到最小值17.62％，至Day22天 腫瘤增殖率為75.38％?；衔颎5325mg/kg組相對(duì)腫瘤增殖率在Day11達(dá)到最小值10.01％，至Day22天腫瘤增殖率為68.77％?；衔颎7250mg/kg組相對(duì)腫瘤增殖率在Day8達(dá)到最小值17.67％，至Day22天腫瘤增殖率為58.62％。在系列化合物對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)中，化合物G4，G5，G7對(duì)結(jié)腸癌HCT-116荷瘤裸小鼠移植瘤的腫瘤抑制率較好，一次性腹腔給藥后Day8到Day13有較好的腫瘤抑制作用，其中G5在Day11相對(duì)腫瘤增殖率達(dá)到最小值10.01％，對(duì)動(dòng)物體重的降低作用較小，平均體重降低率小于10％。表8-2G10-G16對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116荷瘤小鼠的相對(duì)腫瘤增值率基于上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，能夠確定本發(fā)明的新型胞苷衍生物提供了作為抗腫瘤劑的優(yōu)異作用。上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行示例性的說(shuō)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解可能存在各種變型且這些變型在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3