本發(fā)明涉及含惡二唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

白血病，亦稱作血癌，是一類造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時(shí)使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。

白血病通常分為:1)急性白血??；2)慢性白血??；3)特殊類型白血病。

急性白血病是一種造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時(shí)使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。急性白血病大體上可以分為淋巴細(xì)胞白血病或粒細(xì)胞白血病，它們可以從表型和基因上鑒別，其特點(diǎn)是病程進(jìn)展快速，需要立即治療。急性白血病來源于早期造血祖細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病是比較少見的惡性腫瘤。每年急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的總發(fā)病率為1.1/100,000。該發(fā)病率在童年時(shí)期達(dá)到高峰，并隨著年齡逐漸增大而不斷降低。35歲之后該發(fā)病率又再次上升，并從80歲開始觀察到第二個高峰。

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)成人患者的治療變得日益復(fù)雜，因?yàn)獒槍Σ煌募膊喰鸵肓硕喾N多樣的治療方案，體現(xiàn)出根據(jù)適應(yīng)于特定風(fēng)險(xiǎn)的病種最佳地調(diào)整治療的意圖。已通過引入新治療方案完成最新的改進(jìn)，如針對Ph-陽性(Ph+)ALL而在早期加入酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼或針 對B-系A(chǔ)LL的CD20+病例使用抗-CD20抗體利妥昔單抗(Rituximab)。但是這些藥對復(fù)發(fā)性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者的療效極差，約30％的患者將最終復(fù)發(fā)。

特征類型白血病又可包括早幼粒細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、淋巴瘤白血病以及中樞性白血病。這種特殊類型白血病，除了具有一般白血病臨床表現(xiàn)(發(fā)熱、出血、貧血)、浸潤癥狀、肝脾淋巴結(jié)腫大)外，主要有如下特點(diǎn)：發(fā)病急，進(jìn)展快，出血明顯，可發(fā)生致命性腦出血或合并彌散性血管內(nèi)凝血，如未能及時(shí)診斷和治療，在短時(shí)間內(nèi)可因出血導(dǎo)致死亡。因此，是人類健康的隱形殺手。

其中，慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)又叫慢性髓細(xì)胞白血病，它是血液系統(tǒng)的造血干細(xì)胞惡性克隆增殖性疾病，導(dǎo)致病人出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。CML占成人白血病的20％左右，大約每年的發(fā)病率為五萬分之一，其在任何年齡段都有可能發(fā)病，尤其是在老年人中發(fā)病率更高，且男性比女性發(fā)病率高。根據(jù)CML患者的疾病進(jìn)展?fàn)顩r和嚴(yán)重程度分為慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。大約85％～90％的慢性粒細(xì)胞白血病患者在慢性期被診斷發(fā)現(xiàn)，這個階段癥狀并不明顯，或者僅有乏力、關(guān)節(jié)疼痛或腹脹，如果藥物治療及時(shí)，慢性期就會變長，在沒有及時(shí)治療的情況下，疾病會進(jìn)入到加速期。CML形成的主要原因是9號和22號染色體發(fā)生異位t(9:22)(q34:q11)(費(fèi)城染色體Ph)形成一種融合基因即BCR-ABL融合基因，該基因能夠編碼BCR-ABL蛋白，是一種活性酪氨酸激酶。這種BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，進(jìn)而激活與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，造成成熟粒細(xì)胞無限增殖而導(dǎo)致CML的發(fā)生。

目前，臨床上對CML的治療方法主要是傳統(tǒng)的藥物治療、造血干細(xì)胞移植和新興的分子靶向治療。普通的藥物治療包括烷化劑白消安、羥基脲、干擾素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯堿。其中，由于白消安副反應(yīng)比較大，目前在臨床上已經(jīng)停止使用；羥基脲雖然價(jià)格低廉，治療成本低，毒副作用小，但是其對于處于加速期的CML病人作用效果差，而且對于急變期的CML患者基本沒有效果；α-干擾素較前兩者毒副作用更小，病人耐 受性也好，能夠產(chǎn)生持續(xù)的細(xì)胞遺傳學(xué)緩解使CML病患者的生存期延長，但是其對加速期和急變期的CML患者效果很差。這種普通藥物治療的一個很大弊端是在對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用的同時(shí)也能對正常的機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生損傷。造血干細(xì)胞移植是目前理論上唯一可以治愈CML的方法，它是通過先用大劑量放化療將CML患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞清除，再將自體或異體的造血干細(xì)胞移植給患者，使其重新建立正常的的造血免疫系統(tǒng)。但是這種方法在實(shí)際操作起來存在很多困難，比如對患者的年齡有一定的要求，手術(shù)復(fù)雜，成功率低，耗費(fèi)高，且必須要有合適的骨髓捐獻(xiàn)者，而且移植后期有可能發(fā)生感染，會使CML患者和家人面臨很大的風(fēng)險(xiǎn)，所以造血干細(xì)胞移植在實(shí)際應(yīng)用過程中很受限制。直到2001年全球第一個與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑伊馬替尼的上市，使CML的治療看到的希望，開創(chuàng)CML分子靶向治療的新時(shí)代。

伊馬替尼是全球第一個獲得批準(zhǔn)的與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號傳導(dǎo)抑制劑，主要用于治療急性和慢性白血病，近年來，隨著伊馬替尼作為治療慢性粒細(xì)胞白血病的一線用藥被大量使用，其耐藥性現(xiàn)象也逐漸凸顯，且多發(fā)生在CML加速期或急變期的患者。所以尋找一種對白血病干細(xì)胞有殺傷力并且能夠克服伊馬替尼耐藥的化合物迫在眉睫，而且這也將開啟CML治療的新方向和改變抗CML藥物的臨床評估標(biāo)準(zhǔn)。

上述數(shù)據(jù)表明，白血病對大多數(shù)患者而言仍然是爆發(fā)性且無法治愈的疾病。因而，迫切需要改進(jìn)的治療白血病的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中用于治療白血病的藥物療效不佳的問題，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種含惡二唑雜環(huán)類化合物，所述含惡二唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述含惡二唑雜環(huán)類化合物中，所述通式中R包括以下基團(tuán)：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種含惡二唑雜環(huán)類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下合成路線：使N-?；?4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼化合物發(fā)生重排反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為所述含惡二唑雜環(huán)類化合物；其中，所述N-?；?4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

并且

所述含惡二唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述制備方法中，所述N-酰基-4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼化合物的結(jié)構(gòu)通式和所述含惡二唑雜環(huán)類化合物的結(jié)構(gòu)通式中，R包括以下基團(tuán)：

在上述制備方法中，在三氟甲烷磺酸酐和三苯基氧化膦存在的條件下或者在碳酸鉀和對甲苯磺酰氯存在的條件下，發(fā)生所述重排反應(yīng)。

在上述制備方法中，所述N-?；?4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼化合物的制備方法進(jìn)一步包括：在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCl)、1-羥基苯并三唑(HOBT)和N-甲基嗎啡啉(NMM)存在下，使4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼與羧酸化合物(R-CH3COOH)反應(yīng)，生成所述N-酰基-4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼化合物；

其中，R包括以下基團(tuán)：

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了上述的含惡二唑雜環(huán)類化合物在用于治 療白血病的藥物中的應(yīng)用。

在上述應(yīng)用中，所述用于治療白血病的藥物包含所述含惡二唑雜環(huán)類化合物、所述含惡二唑雜環(huán)類化合物在藥學(xué)上可接受的鹽、酯、水合物或它們的組合以及輔料。

在上述應(yīng)用中，所述治療白血病的藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、氣霧劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、露劑、膜劑或它們的組合。

在上述應(yīng)用中，所述治療白血病的藥物的給藥方式包括口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。

從而，本發(fā)明提供了一類新的含惡二唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用，通過細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，通過測定IC₅₀和IC₉₀值發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物對K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖的抑制作用均可達(dá)到90％，并且特別是本發(fā)明提供的實(shí)例11化合物(化合物10c)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，可以同樣實(shí)現(xiàn)抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物可以用于治療白血病。

附圖說明

圖1是化合物6a的¹H NMR。

圖2是化合物6a的¹³C NMR。

圖3是化合物6a的HR-MS。

圖4是化合物6b的¹H NMR。

圖5是化合物6b的¹³C NMR。

圖6是化合物6b的HR-MS。

圖7是化合物6c的¹H NMR。

圖8是化合物6c的¹³C NMR。

圖9是化合物6c的HR-MS。

圖10是化合物6d的¹H NMR。

圖11是化合物6d的¹³C NMR

圖12是化合物6d的HR-MS。

圖13是化合物6e的¹H NMR。

圖14是化合物6e的¹³C NMR。

圖15是化合物6e的HR-MS。

圖16是化合物6f的¹H NMR。

圖17是化合物6f的¹³C NMR。

圖18是化合物6f的HR-MS。

圖19是化合物6g的¹H NMR。

圖20是化合物6g的¹³C NMR。

圖21是化合物6g的HR-MS。

圖22是化合物6h的¹H NMR。

圖23是化合物6h的¹³C NMR。

圖24是化合物6h的HR-MS。

圖25是化合物10a的¹H NMR。

圖26是化合物10a的¹³C NMR。

圖27是化合物10a的HR-MS。

圖28是化合物10b的¹H NMR。

圖29是化合物10b的¹³C NMR。

圖30是化合物10b的HR-MS。

圖31是化合物10c的¹H NMR。

圖32是化合物10c的¹³C NMR。

圖33是化合物10c的HR-MS。

圖34是化合物10d的¹H NMR。

圖35是化合物10d的¹³C NMR。

圖36是化合物10d的HR-MS。

圖37是化合物10e的¹H NMR。

圖38是化合物10e的¹³C NMR。

圖39是化合物10e的HR-MS。

圖40是化合物10f的¹H NMR。

圖41是化合物10f的¹³C NMR。

圖42是化合物10f的HR-MS。

圖43是化合物10g的¹H NMR。

圖44是化合物10g的¹³C NMR。

圖45是化合物10g的HR-MS。

圖46是化合物10h的¹H NMR。

圖47是化合物10h的¹³C NMR。

圖48是化合物10h的HR-MS。

圖49是化合物10i的¹H NMR。

圖50是化合物10i的¹³C NMR。

圖51是化合物10i的HR-MS。

圖52示出了伊馬替尼、實(shí)例1-9化合物對K562細(xì)胞的抑制。

圖53示出了實(shí)例10-17化合物對K562細(xì)胞的抑制。

圖54示出了伊馬替尼、實(shí)例1-9化合物對HL60的抑制。

圖55示出了實(shí)例10-17化合物對HL60的抑制。

圖56示出了伊馬替尼、實(shí)例1-9化合物對KG1a細(xì)胞的抑制。

圖57示出了實(shí)例10-17化合物對KG1a細(xì)胞的抑制。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成和結(jié)構(gòu)鑒定

1.本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述結(jié)構(gòu)通式中，取代基-R包括以下基團(tuán):

2.本發(fā)明提供的含惡二唑雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成實(shí)驗(yàn)步驟：

2.1通用合成路線為:

2.2.1化合物5a-5h的合成

2.2.1.1化合物2：4-甲基-3-[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基苯甲酸甲酯的合成

在三口燒瓶中加入30mL的無水甲醇，化合物1(1g，3.26mmol)，向其中緩慢滴加2mL的濃硫酸，滴加完畢后，反應(yīng)液在65℃下加熱回流3小時(shí)，旋除甲醇，加入飽和碳酸鈉水溶液，過濾，濾餅水洗，干燥得棕黃色固體955mg，產(chǎn)率：91.32％。

MS(ESI⁺)：321.6

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.32(s,1H),9.01(s,1H),8.74(d,J＝3.6Hz,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.45(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,J＝5.2 Hz,1H),7.15(s,1H),3.97(s,3H),2.42(s,3H)。

2.2.1.2化合物3：4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼的合成

在三口燒瓶中，加入化合物2(700mg,2.185mmol)，10mL乙醇和30mL水合肼，加熱至78℃回流3小時(shí)，冷卻，抽濾，水洗兩次，冷乙醇洗2次，獲得乳黃色固體650mg，產(chǎn)率：92.86％。

MS(ESI⁺)：321.1

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm9.69(s,1H),9.26(d,J＝1.6Hz,1H),9.05(s,1H),8.69-8.70(m,1H),8.53(d,J＝4.8Hz,1H),8.44(d,J＝8.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.52-7.56(m,2H),7.46(d,J＝5.2Hz,1H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),2.29(s,3H)

2.2.1.3化合物5a-5h合成

化合物5a：4-甲基-N'-[3-(4-甲基-1H-咪唑基-1-基)-5-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼的合成

在室溫下，三口燒瓶中加入化合物4a:3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯甲酸(50mg，0.185mmol)，EDCI(42.6mg,0.222mmol)，HOBT·H₂O(34mg,0.222mmol)，NMM(30.5uL，0.277mmol)和二氯甲烷5mL，攪拌20分鐘后，加入化合物3(59.3mg,0.185mmol)，室溫?cái)嚢?4h，用飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至堿性，二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋除溶劑，殘余物柱層析純化，用CH₂Cl₂：MeOH＝30:1至CH₂Cl₂：MeOH＝15:1洗脫，獲得白色固體67.2mg，產(chǎn)率：63.43％。

MS(ESI^-)：571.05

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm 10.71(s,2H),9.27(s,1H),9.14(s,1H),8.70(d,J＝4.8Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.45(d,J＝8.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.39(s,1H),8.28(s,1H),8.23(s,1H),8.16(s,1H),7.70(s,1H),7.69(s,1H),7.55(dd,J＝5.2,8.0Hz,1H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.41(d,J＝4Hz,1H),2.35(s,3H),2.19(s,3H)

按照上述路線和方法得到了5b-5h。

化合物5b：4-氟-N'-(4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰肼

白色固體700mg，產(chǎn)率：87.9％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.68(s,2H),9.27(d,J＝1.2Hz,1H),9.13(s,1H),8.70(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.54(d,J＝4.82Hz,1H),8.44-8.66(m,1H),8.31-8.35(m,2H),8.21(s,1H),7.66-7.74(m,2H),7.55(dd,J＝4.8,7.2Hz,3H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(s,J＝8.0Hz,1H),2.34(s,3H)。

化合物5c：N'-[3,5-二(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼

白色固體,產(chǎn)率：73.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm 11.05(m,1H),10.66(s,1H),9.27(d,J＝1.6Hz,1H),9.14(s,1H),8.70(d,J＝1.2,4.4Hz,1H),8.58(s,2H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.43-8.46(m,2H),8.12(s,1H),8.15(s,1H),7.68(dd,1H),8.16(s,1H),7.70(s,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.54(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.48(d,J＝5.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),2.35(s,3H)。

化合物5d：4-甲基-N'-(4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰肼

得白色固體，產(chǎn)率：56％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm 9.28(s,1H),8.66(d,J＝4.4Hz,1H),8.58(d,J＝7.6Hz,1H),8.51(d,J＝5.2Hz,1H),8.45(s,1H),8.26(s,1H),8.08 (d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,,J＝7.6Hz,1H),7.55-7.62(m,2H),7.41-7.44(m,2H),2.57(s,3H),2.43(s,3H)。

化合物5e：4-甲基-N'-[3-(2-甲基-1H-咪唑基-1-基)-5-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼

白色固體，產(chǎn)率：56％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm 10.91(s,1H),10.65(s,1H),9.27(d,J＝1.6Hz,1H),9.14(s,1H),8.69-8.70(m,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(d,J＝8.0Hz,1H),8.34(s,1H),8.26(s,1H),8.24(s,1H),8.17(s,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(s,1H),7.53-7.56(m,1H),7.50(s,1H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),6.99(s,1H),2.37(s,3H),2.35(s,3H)。

化合物5f:4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-)甲基)苯甲酰基)-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼

白色固體，產(chǎn)率84.5％。ESI-MS：[M+H]⁺537.3；¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄)：δppm 9.25(s,1H),8.63(d,J＝4.0Hz,1H),8.55(d,J＝8.0Hz),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.43(s,1H),7.91(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(dd,J＝5.2Hz,8.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),7.38(d,J＝5.6Hz,1H),3.60(s,2H),2.54(br s,8H),2.40(s,3H),2.32(s,3H)。

化合物5g：N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰基)煙酰肼

淡黃色固體，產(chǎn)率76％。

該化合物的MS：[M+H]⁺:426.01；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 10.71(s,1H),10.53(s,1H),9.27(d,J＝1.6Hz,1H),9.13(s,1H),9.08(d,J＝1.6Hz,1H),8.78(dd,J＝1.2,4.8Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.47–8.43(m,1H),8.32–8.22(m,2H),7.68(dd,J＝1.6,8Hz,1H),7.60-7.54(m,2H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝8Hz,1H),2.34(s,1H)。

化合物5h：N-乙?；?4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼

灰白色固體，產(chǎn)率87％。

該化合物的ESI-MS：[M+H]⁺:363.06；¹H NMR:10.21(s,1H),9.85(s,1H),9.26(d,J＝4Hz,1H),9.10(s,1H),8.70(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.43(d,J＝8Hz,1H),8.15(s,1H),7.61(dd,J＝1.6,8Hz,1H),7.54(dd,J＝4.8,8Hz,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,1H),7.36(d,J＝8Hz,1H),2.32(s,3H),1.92(s,3H)。

實(shí)例1-8化合物6a-6h的合成

實(shí)例1化合物6a：N-(2-甲基-5-{5-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2-基}苯基)-4-(3-吡啶基)-嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在三口瓶中加入167mg的三苯氧膦和干燥的二氯甲烷2mL，在0℃下緩慢加入50μL的三氟甲磺酸酐，在0℃下攪拌5min，并緩慢升至室溫,有白色固體生成，加入化合物5a(114.5mg，0.2mmol)，溶液變成亮黃色，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3h后用10％NaHCO₃水溶液淬滅，水層用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濾液旋除溶劑，殘余物柱層析純化，用CH₂Cl₂：MeOH＝50:1,CH₂Cl₂：MeOH＝30:1梯度洗脫,獲得白色固體65mg，產(chǎn)率：58.61％。

MS(ESI⁺)：554.98；HRMS-ESI(+)：C₂₉H₂₁F₃N₈OH計(jì)算值555.1869，實(shí)測值555.1854；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.38(d,J＝1.2Hz,1H),9.22(d,J＝1.2Hz,1H),8.65-8.66(m,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.49-8.52(m,1H),8.33-8.34(m,2H),7.93(s,1H),7.85(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),7.78(s,1H),7.41-7.44(m,2H),7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.19(s,1H),7.14(s,1H),2.50(s,3H),2.35(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm165.8,162.6,162.4,160.3,159.3,151.7,148.5,140.7,138.7,138.4,134.5,134.4,133.8,133.5,132.3,132.1,131.4,126.9,124.2,123.8,121.7,121.7,121.7,120.0,119.3,114.2,108.8,18.4,13.6。

按照上述路線和方法得到6b-6h。

實(shí)例2化合物6b：N-(5-{5-[4-氟-3-(三氟甲基)]苯基}-1,3,4-噁二唑-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

微黃白色固體，產(chǎn)率：89.2％。

MS(ESI⁺)：493.33；HRMS-ESI(+)：C₂₅H₁₆F₄N₆OH計(jì)算值493.1400，實(shí)測值493.1389；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm9.37(s,1H),9.20(s,1H),8.73(d,J＝4Hz,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.35-8.41(m,2H),7.83(d,J＝7.6Hz,1H),7.37-7.47(m,3H),7.17(s,1H),2.49(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.4,162.6,162.5,160.3,159.3,151.7,148.5,138.3,134.7,132.7,132.6,132.4,131.8,131.3,126.2,126.1,123.8,121.9,121.6,120.8,120.7,119.0,118.2,118.0,108.8,18.4。

實(shí)例3化合物6c：N-(5-{5-[3,5-二(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

白色固體，產(chǎn)率：64.9％。

MS(ESI⁺)：543.96；HRMS-ESI(+)：C₂₆H₁₆F₆N₆OH計(jì)算值543.1368，實(shí)測值543.1354；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm9.35(s,1H),9.21(s,1H),8.71(s,1H), 8.57(s,2H),8.54(s,1H),8.51(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(s,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.40-7.46(m,2H),7.29(m,1H),7.22(s,1H),2.48(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.8,162.6,162.1,160.3,159.3,151.7,148.5,138.4,134.6,133.3,133.0,132.7,132.3,131.3,126.8,126.1,124.9,124.8,124.1,123.8,121.7,121.6,121.4,119.4,108.8,18.4。

實(shí)例4化合物6d:N-{2-甲基-5-[5-(4-甲基-3-三氟甲基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]苯基}-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

得白色固體，產(chǎn)率＝62％。

HRMS-ESI(+)：C₂₆H₁₉F₃N₆OH計(jì)算值489.1651，實(shí)測值489.1644；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm9.33(s,1H),9.12(s,1H),8.73(d,J＝0.4Hz,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),8.35(s,1H),8.18(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.39-7.46(m,3H),7.18(s,1H),2.58(s,3H),2.47(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：δppm 165.0,163.4,162.6,160.3,159.3,151.7,148.4,140.6,138.2,134.7,132.8,132.5,131.7,131.3,130.1,129.8,124.4,124.3,123.9,122.1,122.0,121.6,119.2,108.7,19.6,18.3。

實(shí)例5化合物6e：N-(2-甲基-5-{5-[3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2-基}苯基)-4-(3-吡啶基)-嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

微黃白色固體，產(chǎn)率：60.6％。

MS(ESI⁺)：555.09；HRMS-ESI(+)：C₂₉H₂₁F₃N₈OH計(jì)算值555.1869，實(shí)測值555.1857；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm9.38(d,J＝1.6Hz,1H),9.21(d,J＝1.2Hz,1H),8.65-8.66(m,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.47-8.50(m,1H),8.46(s,1H),8.32(s,1H),7.85(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.43-7.45(m,2H),7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.17(s,1),2.50(s,3H),2.47(s,3H)

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.8,162.6,162.3,160.3,159.3,151.7,148.5,144.6,139.5,138.4,134.5,133.6,133.3,132.2,131.4,128.5,126.7,126.6,124.8,124.7,124.1,123.8,123.2,121.7,121.7,121.4,120.4,119.3,108.8,18.4,13.9。

實(shí)例6化合物6f:N-(2-甲基-5-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-)甲基)哌嗪)-1,3,4-噁二唑-2-)苯基)-4-(吡啶-3-)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

白色固體，產(chǎn)率63.3％。ESI-MS：[M+H]⁺:519.4；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δppm 9.30(d,1H,J＝1.2Hz),9.13(s,1H),8.70(dd,1H,J＝1.2Hz,4.8Hz), 8.56(d,1H,J＝5.2Hz)8.53(d,1H,J＝8Hz),8.05(d,2H,J＝8.4Hz),7.80(dd,1H,J＝1.6,8.0Hz),7.46(d,2H,J＝8.0Hz),7.41(dd,1H,J＝4.8,7.6Hz)7.38(d,1H,J＝8.4Hz),7.16(s,1H),3.58(s,2H),2.54(br,8H),2.45(s,3H),2.34(s,3H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):164.7,164.4,162.6,160.4,159.3,151.6,148.5,142.4,134.7,132.6,131.6,131.2,129.6,126.9,123.9,122.8,122.4,121.6,119.1,108.7,62.5,55.0,52.8,45.8,18.3。HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：519.2615,實(shí)測值：519.2560。

實(shí)例7化合物6g:N-(2-甲基-5-(5-(吡啶-3-)-1,3,4-噁二唑-2-)苯基)-4-(吡啶-3-)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

得白色固體，產(chǎn)率64％。

該化合物的ESI-MS：[M+H]⁺:408.08；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm9.33(d,J＝6.8Hz,2H),9.16(d,J＝1.2Hz,1H),8.75(dd,J＝2.4,24.4Hz,2H),8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.50(d,J＝8.4Hz,1H),8.41(d,J＝8Hz,1H),7.81(dd,J＝1.6,8Hz,1H),7.48–7.42(m,2H),7.39(d,J＝8Hz,1H),7.18(s,1H),2.46(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：165.3,162.7,162.4,160.3,159.3,152.3,152.3,151.7,148.5,147.9,138.3,134.7,134.2,132.5,131.8,131.3,123.9,123.8,122.0,121.6,119.1,108.8,18.4。HR-MS(ESI)[M+H]⁺:計(jì)算值：408.1573,實(shí)測值：408.1541。

實(shí)例8化合物6h:N-(2-甲基-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-)苯基)-4-(吡啶-3-)嘧啶-2-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

淡黃色固體，產(chǎn)率65.3％。該化合物的ESI-MS：[M+H]⁺345.48；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.33(s,1H),9.11(d,J＝1.2Hz,1H),8.73(d,J＝3.6Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.48(m,1H),7.70(dd,J＝1.6,8Hz,1H)7.46(dd,J＝4.4,7.6Hz,1H),7.35(d,J＝8Hz,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.13(s,1H),2.65(s,1H),2.44(s,1H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：δppm 165.1,163.5,162.6,160.3,159.2,151.6,148.6,138.1,134.7,132.5,131.2,131.0,123.7,122.5,121.3,118.8,108.7,18.2,11.2。HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：345.1464,實(shí)測值：345.1446。

2.2.3.1化合物8a-8d的合成

路線和方法類似于化合物3的合成。

2.2.3.1.1化合物8a：4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定：

淡黃色固體，產(chǎn)率：93.7％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 8.04(s,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(s,1H),4.14(s,3H),3.72(s,2H),2.50-2.54(m,8H),2.33(s,2H)。

2.2.3.1.2化合物8b：4-{[4-(2-叔丁基二苯基硅氧基乙基)哌嗪-1-基]甲基}-3-(三氟甲基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

淡黃色固體，產(chǎn)率：98％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 8.06(s,1H),7.90-7.95(m，2H),7.69-7.71(m，4H),7.38-7.48(m，6H),4.16(s,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.69(s,2H),2.51-2.65(m,10H),1.07(s,9H)。

2.2.3.1.3化合物8c：4-[(N-叔丁氧羰基氨乙基)-4H-哌嗪]甲基-3-(三氟甲基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

淡黃色固體，產(chǎn)率：79.3％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 8.06(s,1H),7.90-7.95(m,2H),7.78(s,1H),5.03(s,1H),4.17(s,2H),3.70(s,2H),3.24(d,J＝4.8Hz,2H),2.48-2.51(m,11H),1.47(s,9H)。

2.2.3.1.4化合物8d:4-((4-(2-(叔丁基二苯基硅氧乙基)哌嗪-1-)甲基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

淡黃色油狀液體，產(chǎn)率92％。ESI-MS：[M+H]⁺:518.37.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 7.70–7.65(m,6H),7.43–7.33(m,9H),4.09(s,2H),3.80(t,J＝6Hz,2H),3.52(s,2H),2.59–2.45(m,10H),1.03(s,9H)。

2.2.3.1化合物9a-9d的合成

通用路線

2.2.3.2化合物9a-9d的合成

路線和方法類似于5a-5h。

2.2.3.2.1化合物9a：4-甲基-N'-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定：

白色固體，產(chǎn)率：78.3％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 11.36(s,1H),9.45(d,J＝1.6Hz,1H),9.17(s,1H),8.82(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.51(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(dd,J＝1.6,6.4Hz,1H),8.23(s,1H),8.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),7.19-7.22(m,2H),7.13(s,1H),3.55(s,3H),2.42(m,8H),2.38(s,3H),2.29(s,3H)。

2.2.3.2.2化合物9b：4-{4-(2-叔丁基二苯基硅氧基乙基)哌嗪-1-基]甲基}-N'-(4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

白色固體，產(chǎn)率：70.2％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 11.55(s,1H),11.34(d,J＝0.8Hz,1H),9.42(d,J＝1.6Hz,1H),9.10(s,1H),8.77(dd,J＝1.2,4.8Hz,1H),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(t,J＝8.8Hz,1H),7.67-7.72(m,6H),7.36-7.48(m,7H),7.21(s,1H),8.15-7.18(m,2H),3.80(s,2H),3.52(s,2H),2.34-2.57(m,13H),1.05(s,9H)。

2.2.3.2.3化合物9c：4-[(N-叔丁氧羰基氨乙基)-4H-哌嗪]甲基-N'-(4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯基)-3-(三氟甲基)苯酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

白色固體，產(chǎn)率：96.1％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 10.74(s,1H),10.53(s,1H),9.27(s,1H), 9.17(s,1H),8.69(d,J＝2.4Hz,1H),8.54(d,J＝4.8Hz,1H),8.44(d,J＝8.4Hz,1H),8.19-8.24(m,3H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.55(m,1H),7.46(d,J＝4.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),3.54(s,2H),3.20(d,J＝1.2Hz,2H),2.33-2.42(m,13H),1.46(s,9H)。

2.2.3.2.4化合物9d:N-(4-((4-(2-(叔丁基二苯基硅氧乙基)哌嗪-1-)甲基)苯甲?；?-4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯甲酰肼的結(jié)構(gòu)鑒定

灰白色固體，產(chǎn)率89％。ESI-MS：[M+H]⁺:805.29.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):10.43(s,3H),9.27(s,1H),9.12(s,1H),8.70(dd,J＝1.2,4.4Hz,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.46(dd,J＝1.6,8Hz,1H),8.22(s,1H),7.89(d,J＝8Hz,2H),7.69–7.64(m,5H),7.55(dd,J＝4.8,7.8Hz,1H),7.48–7.38(m,10H),3.73(t,J＝6Hz,2H),3.52(s,2H),2.43–2.34(m,10H),0.99(s,9H)。

2.2.4化合物10a-10i的合成

實(shí)例9化合物10a：N-(2-甲基-5-{5-(4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-基)苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

合成方法和路線與6a-6h相似。

微黃白色固體，產(chǎn)率：85.3％。

MS(ESI⁺)：587.19；HRMS-ESI(+)：C31H29F3N8OH計(jì)算值587.2495，實(shí)測值587.2476；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 9.33(s,1H),9.18(d,J＝1.2Hz,1H),8.72(d,J＝3.6Hz,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.53(d,J＝4Hz,1H),8.37(s,1H),8.28(d,J＝8.4Hz,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.82-7.85(m,1H),7.41-7.46(m,2H),7.12(s,1H),3.76(s,2H),2.54-2.59(m,8H),2.49(s,3H),2.36(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.1,163.4,162.7,160.4,159.3,151.7,148.5,141.8,138.3,134.6,132.4,131.8,131.3,131.2,129.9,129.7,124.4,124.3,123.8,122.8,122.1,121.6,119.2,108.8,58.0,55.2,53.1,46.0,18.4。

實(shí)例10化合物10b：2-(4-{4-[5-(4-甲基-3-{[4-(吡啶基-3-基)嘧啶基-2-基]氨基}苯基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-2-(三氟甲基)苯基-1-哌嗪基)乙醇的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

化合物11合成：合成路線和方法同6a-6h相似。

微黃白色固體363mg，產(chǎn)率：70.2％

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.34(d,J＝1.2Hz,1H),9.19(d,J＝1.2Hz,1H),8.72(d,J＝3.6Hz,1H),8.53-8.55(m,1H),8.37(s,1H),8.29(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),),7.84(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),7.69-7.71(m, 4H),7.38-7.45(m,8H),7.29(d,J＝5.2Hz,1H),7.17(s,2H),3.87(s,2H),3.75(s,2H),2.41-2.66(m,13H),1.07(s,9H)。

化合物10b合成：

在25mL三口瓶中加入化合物11(363mg，0.425mmol)和THF10mL室溫?cái)嚢璧渭尤隩BAF(543.6mg，2.123mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除溶劑，殘余物柱層析純化，獲得白色固體34b，240mg，產(chǎn)率：91.7％。

MS(ESI⁺)：617.12；HRMS-ESI(+)：C₃₂H₃₁F₃N₈O₂H計(jì)算值617.2600，實(shí)測值617.2548；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm9.32(s,1H),9.16(s,1H),8.71(d,J＝4Hz,1H),8.57(d,J＝5.2Hz,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.36(s,1H),8.28(s,1H),8.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,3H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.44(m,2H),7.28(s,1H),7.22(s,1H),3.75(s,3H),3.69(t,J＝5.2Hz,3H),2.61-2.66(m,10H),2.47(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.1,163.3,162.6,160.3,159.3,151.7,148.5,141.6,138.3,134.6,132.4,131.9,131.3,131.2,129.9,129.8,129.4,125.1,124.4,124.3,123.8,122.9,122.4,122.0,121.609,119.226,108.7,59.4,57.6,53.4,53.0,18.4。

實(shí)例11化合物10c：N-(2-甲基-5-{5-(4-[(4-氨乙基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-基)苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

化合物12：N-(2-甲基-5-{5-(4-[(N-叔丁氧羰基氨乙基)-4H-哌嗪甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-基)苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺

合成路線和方法同6a-6h相似。

微黃白色，產(chǎn)率：74.9％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.31(s,1H),9.13(s,1H),8.69(d,J＝2.8Hz,1H),8.55(d,J＝4.8Hz,1H),8.50(d,J＝8.0Hz,1H),8.34(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,3H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.36-7.42(m,2H),7.24-7.28(m,2H),5.18(s,1H),3.73(s,2H),3.29(s,2H),2.59(m,10H),2.44 (s,3H),1.46(s,9H)。

化合物10c：N-(2-甲基-5-{5-(4-[(4-氨乙基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-基)苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺

在25mL三口瓶中加入化合物12(738.9mg，1.03mmol)，CHCl₃(3mL)和CH₃OH(3mL)，在室溫下攪拌，滴加濃鹽酸4mL，繼續(xù)攪拌30分鐘，用飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)ph至11，用二氯甲烷和甲醇(10:1)混合液萃取，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得黃白色固體482.1mg，產(chǎn)率：75.86％。

MS(ESI⁺)：616.71；HRMS-ESI(+)：C₃₂H₃₂F₃N₉OH計(jì)算值616.2760，實(shí)測值616.2746；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.33(d,J＝1.6Hz,1H),9.18(s,1H),8.72-8.73(m,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.28(d,J＝8.0Hz,1H),8.02(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.41-7.45(m,2H),7.28(s,1H),7.17(s,1H),3.75(s,2H),2.83(t,J＝6.0Hz,2H),2.56(br,8H),2.47-2.50(m,5H)；

¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δppm 165.10,163.19,161.87,160.51,159.14,150.51,147.53,141.72,138.54,135.19,134.03,132.62,131.38,131.06,129.76,128.99,129.76,129.30(q,J＝30.9Hz),124.04,108.02,59.69,57.67,53.01,52.69,37.54,17.01。

實(shí)例12化合物10d：N-(5-{5-(4-[(4-(2-異硫氰酸脂基)乙基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-甲基苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，25mL三口瓶放入0℃下加入二氯甲烷10mL，攪拌5分鐘，然后加入化合物10c(200mg，0.325mml)，DCC(73.7mg，0.357mmol)和CS₂(196.3uL，3.25mmol)，投料完畢后從0℃移至室溫，反應(yīng)3h后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除反應(yīng)液溶劑，殘余物柱層析純化(CH₂Cl₂：MeOH＝30:1)得乳白色固體192.6mg，產(chǎn)率：90.1％。

MS(ESI⁺)658.41；HRMS-ESI(+)：C₃₃H₃₀F₃N₉OSH計(jì)算值658.2324，實(shí)測值658.2317；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.33(d,J＝1.2Hz,1H),9.18(d,J＝1.2Hz,1H),8.72(d,J＝3.6Hz,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.53-8.55(m,1H),8.37(s,1H),8.28(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(dd,J＝2.4,8.0Hz,1H),7.40-7.45(m,2H),7.30(s,1H),7.17(s,1H),3.76(s,2H),3.63(t,J＝6.0Hz,2H),2.73(t,J＝6.0Hz,2H),2.60(br,8H),2.8(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δppm 165.14,163.34,162.65,160.35,159.30151.72,148.52,141.73,138.28,134.63,132.43,131.82,131.30,131.17,129.94,129.61(q,J＝30.5Hz),124.38,124.32,123.83,123.78(q,J＝272.4Hz), 122.87,122.10,121.62,119.21,108.78,57.93,57.21,53.12,52.99,43.07,18.36。

實(shí)例13化合物10e：N-(5-{5-(4-[(4-(2-丙烯酰胺乙基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1,3,4-噁二唑-2-甲基苯基-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在室溫下，10mL三口燒瓶中加入化合物10c(50mg，0.081mmol)，EDCI(31.3mg，0.163mmol)，HOBT·H₂O(24.9mg，0.163mmol)，NMM(27.5uL，0.244mmol)和二氯甲烷5mL攪拌20分鐘后，加入丙烯酸(8.5ul，0.122mmol)，反應(yīng)24小時(shí)候用飽和碳酸氫鈉調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除濾液溶劑，殘余物柱層析純化，獲得白色固體22.5mg，產(chǎn)率：41％。

HRMS-ESI(+)：C₃₅H₃₄F₃N₉O₂H計(jì)算值670.2866，實(shí)測值670.2869；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.29(s,1H),9.12(s,1H),8.67(d,J＝4.0Hz,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.49(d,J＝8.0Hz,1H),8.33(s,1H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.35-7.41(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.21(s,1H),6.38(s,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.13(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),5.62(d,J＝10.0Hz,1H),3.71(s,2H),3.45(dd,J＝5.2,10.8Hz,2H),2.55-2.58(br,10H),2.43(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ165.54,165.13,163.30,162.61,160.37,159.25,151.64,148.49,141.62,138.30,134.62,132.44,131.94,131.26,131.18,130.98,129.93,129.71,129.40,126.12,125.15,124.35,124.29,123.80,122.90,122.43,122.05,121.62,119.29,108.71,57.92,56.42,53.04,52.90,35.89,18.31。

實(shí)例14化合物10f:2-(4-(4-(5-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)芐基)哌嗪-1-)乙醇(A15)的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

化合物13合成：合成路線和方法同6a-6h相似。

淡黃色固體，產(chǎn)率67％。ESI-MS：[M+H]⁺:786.91.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):9.32(s,1H),9.12(s,1H),8.72(s,1H),8.56(d,J＝4.8Hz,1H),8.51(d,J＝8Hz,1H),8.08(d,J＝8Hz,2H),7.80(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.64–7.62(m,5H),7.48–7.38(m,11H),7.18(s,1H),4.04(s,2H),3.68(s,2H),3.12–2.82(m,11H),2.46(s,3H),1.04(s,9H)。

化合物10f合成：合成路線和方法同10b相似。

淡黃色固體，產(chǎn)率94％。ESI-MS:[M+H]⁺:549.08；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.28(s,1H),9.11(s,1H),8.70(d,J＝3.6Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.52(d,J＝8Hz,1H),8.05(d,J＝8Hz,2H),7.80(d,J＝8Hz,1H),7.45(d,J＝8Hz,2H),7.39(m,2H),7.17(s,1H),3.66(t,J＝5.2Hz,2H),3.58(s,2H),2.63-2.55(m,10H),2.44(s,3H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 164.7,164.4,162.6,160.3,159.3,151.6,148.5,142.2,138.2,134.7,132.6,131.6,131.2,129.6,127.0,123.9,122.8,122.4,121.6,119.2,108.7,62.5,59.4,57.6,52.9,18.3。HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：549.2726,實(shí)測值：549.2715。

實(shí)例15化合物10g:N-(5-(5-(4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)-2甲基苯基)-4-(吡啶-3-)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

化合物14的合成

在25mL兩口燒瓶中，加入化合物10f(50mg，0.09mmol)，鄰苯二甲酰亞胺(17.4mg，0.11mmol)，三苯基膦(31mg，0.11mmol)，5mL干燥的四氫呋喃。 將上述混合物放置冰浴中降溫至-5℃，向上述溶液中緩慢滴加DEAD(19μL，0.11mmol)。滴加完畢后，將反應(yīng)液移至室溫，攪拌過夜，并通過TLC對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測。反應(yīng)完全后，減壓濃縮，加入20mL二氯甲烷，有機(jī)相用碳酸鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，并通過硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇＝40：1)進(jìn)行分離純化，獲得白色固體，產(chǎn)率74％。

該化合物的MS：[M+H]⁺:678.21.¹HNMR:(400MHz,CDCl₃)δppm 9.30(s,1H),9.14(s,1H),8.72(s,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),8.55(d,J＝8Hz,1H),8.05(d,J＝6.8Hz,2H),7.86–7.81(m,3H),7.73–7.71(m,2H),7.44–7.39(m,4H),7.10(s,1H),3.82(t,2H,J＝6.4Hz),3.55(s,2H),2.66–2.47(m,13H)。

化合物10g的合成

在25mL兩口燒瓶中，加入化合物14(80mg，0.12mmol)，1mL水合肼和5mL乙醇，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜，并通過TLC進(jìn)行監(jiān)測。反應(yīng)完成后減壓濃縮，加入20mL 5％碳酸鈉溶液，水相用二氯甲烷進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，并用無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，減壓濃縮，并通過硅膠柱層析進(jìn)行分離純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1至5:1+5‰氨水)，獲得淡黃色固體，產(chǎn)率35％。ESI-MS：[M+H]⁺:547.77.¹HNMR:(400MHz,DMSO-d₆)δppm 9.33(d,1H,J＝2Hz),8.68(dd,1H,J＝1.6,4.8Hz),8.60(d,1H,J＝5.2Hz),8.55(s,1H),8.50(d,1H,J＝8Hz),8.03(d,2H,J＝8Hz),7.82(d,1H,J＝8Hz),7.55–7.50(m,5H),3.55(s,2H),2.64(t,2H,J＝6.8Hz),2.40(m,8H),2.32(t,2H,J＝7.2Hz)。¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆):δppm 164.5,164.3,162.0,161.2,160.2,151.9,148.6,143.2,139.3,136.2,134.8,132.6,132.5,131.9,130.0,128.4,127.0,125.7,124.3,122.4,122.3,121.6,108.8,62.04,59.50,53.27,53.10,38.20,18.79。HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：548.2886,實(shí)測值：548.2886。

實(shí)例16化合物10h:(1E,6E)-1-(羥基-3-甲氧苯基)-7-(3-甲氧基-4-(2-(4-4-(5-4-甲基-3-((4-吡啶-3-)嘧啶-2-)氨基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)芐基)哌嗪-1-)乙氧基)苯基1,6-庚二烯-3,5-二酮的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在25mL干燥的三口燒瓶中加入50mg化合物10f(50mg，0.1mmol)，化合物39(43.7mg，0.12mmol)，三苯基膦(31.1mg，0.14mmol)和四氫呋喃(5mL)，上述溶液冰浴降溫至-5℃，在攪拌下將DEAD(19μL，0.14mmol)滴加到上述溶液中，滴加完畢后反應(yīng)液升溫至室溫，攪拌過夜并通過TLC對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測，反應(yīng)結(jié)束后減壓濃縮并通過硅膠柱層析進(jìn)行分離純化(二氯甲烷：甲醇＝40：1至15：1)，獲得橙色固體，產(chǎn)率24％。ESI-MS:[M+H]⁺:899.38.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δppm 9.66(s,1H),9.32(s,1H),9.15(s,1H),8.68(s,1H),8.59(d,J＝2.8Hz,1H),8.55(s,1H),9.45(d,J＝6.4Hz,1H),8.03(d,J＝6.8Hz,2H),7.81(d,J＝6.4Hz,1H),7.58–7.49(m,7H),7.33(d,J＝2Hz,2H),7.23(d,J＝6.4Hz,1H),7.15(d,J＝6.8Hz,1H),7.02(dd,J＝0.4,6.4Hz,1H),6.83–6.74(m,3H),6.07(s,1H),4.11(s,2H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.55(s,2H),2.72 (s,2H),2.39(s,7H)。¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆)：δppm 184.2,183.3,183.2,164.5,164.3,162.1,161.2,160.2,152.0,150.6,149.9,149.7148.6,148.5,143.3,141.4,140.6,139.3,136.2,134.8,132.6,132.0,130.0,128.2,127.1,126.8,124.3,123.6,123.3,122.6,122.5,122.4,121.6,121.6,116.2,113.4,111.9,111.3,108.8,101.4,66.8,62.0,57.0,56.2,53.6,53.1,18.8。HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：899.3881,實(shí)測值：899.3793。

實(shí)例17化合物10i:N-(5-(5-(4-((4-(2-異硫氰酸乙基)哌嗪-1-)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-)嘧啶-2-胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

合成路線和方法和10d類似。

淡黃色固體，產(chǎn)率20％。該化合物的ESI-MS：[M+H]⁺：590.18,¹HNMR:(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.28(d,J＝2Hz,1H),9.11(d,J＝0.8Hz,1H),8.70(d,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.53(d,J＝8Hz,1H),8.15(d,J＝8Hz,2H),7.81(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.46(d,J＝8Hz,2H),7.42–7.38(m,2H),7.25(s,1H),7.14(s,1H),3.59(t,J＝6.4Hz,4H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.57–2.53(m,8H),2.44(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：δppm 164.7,164.4,162.6,160.4,159.3,151.6,148.5,138.2,134.7,132.6,131.6,131.2,129.6,126.9,123.9,122.9,122.4,121.6,119.2,108.7,62.5,57.2,53.1,52.8,43.1,29.7,18.3.HR-MS(ESI)[M+H]⁺,計(jì)算值：590.2451,實(shí)測值：590.2438。

實(shí)施例2在實(shí)施例1中制備得到的實(shí)例1至實(shí)例17化合物的活性測試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細(xì)胞(慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測定細(xì)胞活性包括下面幾個步驟(以K562細(xì)胞的測試方法為例，KG1a HL60細(xì)胞的測試方法與K562細(xì)胞的方法一致)：

(1)選取處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置了9個濃度梯度，體系中藥物終濃度梯度為：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每個濃度5個復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對照組(不加藥僅接種細(xì)胞)及空白孔(未接種細(xì)胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時(shí)。

(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時(shí)后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15min左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測儀MULTISKAN FC(Thermo scientific)測定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測量時(shí)以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，用數(shù)據(jù)處理軟件SPSS軟件(IBM公司)進(jìn)行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀和IC₉₀值，IC₅₀和IC₉₀見表1。

表1實(shí)例1-17化合物對K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的IC₅₀和IC₉₀值

通過表1，可以看出在實(shí)施例中制備的實(shí)例1至實(shí)例17化合物(分別對應(yīng)于化合物6a-6h和10a-10i)均可以有效地抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，特別是實(shí)例11化合物(化合物10c)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，仍可以同樣實(shí)現(xiàn)有效抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此，本發(fā)明提供的實(shí)例1至實(shí)例17化合物可以用于治療白血病。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。