本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種可提高那西肽產(chǎn)量的發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

納西肽是一種新型的非吸收性動物飼料添加劑，動物飼料中加入很少的量就可以大大提高禽類的出肉率。因為它在動物體內(nèi)不殘留，所以不會給人類帶來負面影響。其作用機制為：抑制蛋白質(zhì)的合成，使細菌的生長受到抑制。目前,那西肽發(fā)酵的水平較低,成本高、應(yīng)用受限制。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種優(yōu)化的培養(yǎng)基以提高那西肽的產(chǎn)量，為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)手段：

一種可提高那西肽產(chǎn)量的發(fā)酵培養(yǎng)基，包括：KNO₃ 0.5-1g/L、(NH₄)₂S0₄ 0.8-1.5g/L、NaCl 3-5g/L、黃豆粉35-45g/L、酵母粉1-2.5g/L、葡萄糖5-6g/L、淀粉酶0.01-0.02g/L、淀粉40-50g/L、輕質(zhì)碳酸鈣3.5-5g/L、絲氨酸0.1-0.5mg/L；以水配制。

其中，優(yōu)選所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：KNO₃ 1g/L、(NH₄)₂S0₄ 1.5g/L、NaCl 4g/L、黃豆粉40g/L、酵母粉2g/L、葡萄糖5g/L、淀粉酶0.01g/L、玉米淀粉50g/L、輕質(zhì)碳酸鈣5g/L、絲氨酸0.2-0.4mg/L，以水配制。

其中，黃豆粉的粒徑范圍為60±5目，可購于五?？凳⑼Z油食品加工廠。

其中，酵母粉可購自湖北中農(nóng)華威生物工程有限公司。

其中，淀粉酶可選用α-淀粉酶，該淀粉酶可購于山東隆科特酶制劑有限公司。

本發(fā)明所述的培養(yǎng)基，控制pH值范圍以6.5-7為宜，具體的調(diào)控為本領(lǐng)域技術(shù)人員所掌握，本發(fā)明對此不作特別限定。

傳統(tǒng)可用于發(fā)酵生產(chǎn)納西肽的培養(yǎng)基組成如下(其中最常用的一種)：葡萄糖4％、黃豆粉3％、淀粉4％、硫酸鈉0.1％、硫酸鈉0.1％、氯化鈉0.25％、碳酸鈣0.5％、元素液5ml/L，但這種培養(yǎng)基在實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)納西肽的產(chǎn)量不太理想。本發(fā)明通過對傳統(tǒng)用于發(fā)酵培養(yǎng)那西肽的培養(yǎng)基進行配方優(yōu)化(尤其是絲氨酸的加入)，得到了一種能夠顯著提高那西肽產(chǎn)量的新培養(yǎng)基。

本發(fā)明同時提供了一種利用上述培養(yǎng)基發(fā)酵制備那西肽的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)將活躍鏈霉菌CGMCC NO.8732接種至所述培養(yǎng)基，；

(2)將接種后的培養(yǎng)基在220-250rpm/min、28-30℃下培養(yǎng)67-75小時，分離發(fā)酵產(chǎn)物，即得那西肽。

本發(fā)明提供的微生物為活躍鏈霉菌(streptomyces actuosus)BJX004，現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101，保藏編號CGMCC NO.8732，保藏日期2014年1月17日，該菌的分類命名為：活躍鏈霉菌(streptomyces actuosus)BJX004。

其中，所述活躍鏈霉菌CGMCC NO.8732優(yōu)選以種子液形式提供，接種量為4-6％(v/v)，優(yōu)選接種量為5％(v/v)。

優(yōu)選地，所述培養(yǎng)條件為在230-240rpm/min、28-30℃下培養(yǎng)72-75小時。

其中，所述發(fā)酵產(chǎn)物的分離具體為將發(fā)酵液用二氯甲烷浸提，然后水洗二氯甲烷提取液，濃縮成粗品后用正庚烷洗滌粗品，室溫干燥得精品。具體的操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所掌握，本發(fā)明對此不作特別限定。采用上述分離手段，能夠進一步確保產(chǎn)物納西肽的純度及收率。

采用上述發(fā)酵條件，發(fā)酵結(jié)束后，納西肽產(chǎn)量最高可達到5600ug/mL，較相同培養(yǎng)條件下，前述普通培養(yǎng)基下(見發(fā)明內(nèi)容第8段)發(fā)酵培養(yǎng)所得那西肽的產(chǎn)量提高了12％以上。

具體實施方式

以下實施例中，所采用的所有原料均為已知的市售產(chǎn)品，黃豆粉購于五?？凳⑼Z油食品加工廠；酵母粉購自湖北中農(nóng)華威生物工程有限公司；淀粉酶為α-淀粉酶，購于山東隆科特酶制劑有限公司。

實施例1

本實施例提供了一種可用于提高那西肽產(chǎn)量的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的配方如下：

KNO₃ 1g/L、(NH₄)₂S0₄ 1.5g/L、NaCl 4g/L、黃豆粉40g/L、酵母粉2g/L、葡萄糖5g/L、淀粉酶0.01g/L、玉米淀粉50g/L和輕質(zhì)碳酸鈣5g/L，絲氨酸0.4mg/L；以水配制。

實施例2

本實施例提供了一種可用于提高那西肽產(chǎn)量的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的配方如下：

KNO₃ 0.5g/L、(NH₄)₂S0₄ 0.8g/L、NaCl 3g/L、黃豆粉35g/L、酵母粉1g/L、葡萄糖5g/L、淀粉酶0.01g/L、淀粉40g/L、輕質(zhì)碳酸鈣3.5g/L、絲氨酸0.1mg/L；以水配制。

實施例3

本實施例提供了一種可用于提高那西肽產(chǎn)量的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的配方如下：

KNO₃ 0.5g/L、(NH₄)₂S0₄ 0.8g/L、NaCl 5g/L、黃豆粉45g/L、酵母粉2.5g/L、葡萄糖6g/L、淀粉酶0.02g/L、淀粉45g/L、輕質(zhì)碳酸鈣4g/L、絲氨酸0.5mg/L；以水配制。

實施例4

本實施例提供了一種可用于提高那西肽產(chǎn)量的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng) 基的配方如下：

KNO₃ 1g/L、(NH₄)₂S0₄ 1.5g/L、NaCl 5g/L、黃豆粉45g/L、酵母粉2.5g/L、葡萄糖6g/L、淀粉酶0.02g/L、淀粉50g/L、輕質(zhì)碳酸鈣5g/L、絲氨酸0.5mg/L；以水配制。

實施例5

本實施例提高了一種發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，具體包括如下步驟：

(1)將活躍鏈霉菌CGMCC NO.8732的種子液接種至實施例1所制備的培養(yǎng)基，接種量為5％(v/v)；

(2)將接種后的培養(yǎng)基在220rpm/min、28℃下培養(yǎng)72小時，分離發(fā)酵產(chǎn)物(將發(fā)酵液用二氯甲烷浸提，然后水洗二氯甲烷提取液，濃縮成粗品后用正庚烷洗滌粗品，室溫干燥得精品)即得那西肽。

本實施例中，那西肽的產(chǎn)量為5600ug/mL。

實施例6

本實施例同樣提供了一種發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，與實施例5相比，區(qū)別點僅在于本實施例采用實施例2所制備得到的培養(yǎng)基，接種量為4％(v/v)，發(fā)酵培養(yǎng)的條件為在220rpm/min、30℃下培養(yǎng)75小時，那西肽的產(chǎn)量為5450ug/mL。

實施例7

本實施例同樣提供了一種發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，與實施例5相比，區(qū)別點僅在于本實施例采用實施例3所制備得到的培養(yǎng)基，接種量為6％(v/v)，發(fā)酵培養(yǎng)的條件為在250rpm/min、29℃下培養(yǎng)67小時，那西肽的產(chǎn)量為5370ug/mL。

對比例1

與實施例5相比，本對比例的區(qū)別僅在于，發(fā)酵培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基中，未加入絲氨酸。

本對比例中，那西肽的產(chǎn)量為5000ug/mL。

對比例2

與實施例6相比，本對比例的區(qū)別僅在于，發(fā)酵培養(yǎng)的具體條件為在180rpm/min、25℃下培養(yǎng)72小時。

本對比例中，那西肽的產(chǎn)量為5230ug/mL。

顯然，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明進行各種改動和變型而不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和范圍。這樣，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動和變型在內(nèi)。