本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及新型苯丙酸類衍生物及其制備方法與在制藥中的用途，尤其涉及苯丙酸類衍生物作為GPR120受體激動(dòng)劑在預(yù)防和治療糖尿病中的用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種糖代謝異常的代謝性疾病，臨床上糖尿病主要可分為兩種：I型和II型糖尿病。I型糖尿病也稱胰島素依賴型糖尿病，是一種慢性自身免疫性疾病，其特征是胰島β細(xì)胞受損，導(dǎo)致胰島素分泌不足。90-95％的糖尿病患者屬于II型糖尿病。高血糖、胰島素分泌受損和胰島素抵抗是II型糖尿病的三個(gè)特征。持續(xù)的不受控制的高血糖會(huì)顯著增加大血管和微血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，例如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病性心臟病和糖尿病神經(jīng)病變等。GPR120，又稱FFAR4，是長(zhǎng)鏈脂肪酸的特異性受體。hGPR120編碼基因定位于人類第10號(hào)染色體短臂(10q23.33)。hGPR120有兩種亞型：長(zhǎng)亞型和短亞型。其中短亞型由361個(gè)氨基酸構(gòu)成，長(zhǎng)亞型在氨基酸序列233-248處比短亞型多出16個(gè)氨基酸。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在人體15種組織中都有表達(dá)GPR120的mRNA，包括腦、垂體、心臟、肝、腎、肺、胃、肌肉、小腸、脾、皮下組織、結(jié)腸和胰腺等。其中，人與小鼠的小腸部位GPR120的mRNA表達(dá)最為豐富。同時(shí)，在人的四種不同的脂肪組織及味蕾細(xì)胞中，GPR120也有豐富的表達(dá)。在體外細(xì)胞系中，小鼠腸內(nèi)分泌細(xì)胞系STC-1、ghrelin腫瘤細(xì)胞系MGN3-1、乳腺癌細(xì)胞系MCF-7及胰島α細(xì)胞系αTC1-6均表達(dá)GPR120，但在NCI-H716、CaCo-2、T29、IEC-6、IEC-18及Min6細(xì)胞系中并無(wú)GPR120表達(dá)。此外，在人的成骨和破骨細(xì)胞中也有GPR120的表達(dá)。因此，GPR120可能與糖尿病、肥胖及骨代謝等疾病相關(guān)。GPR120受體被激活后可以促進(jìn)GLP-1的釋放。中、長(zhǎng)鏈游離脂肪酸可以增加STC-1細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度，促進(jìn)GLP-1的釋放。采用GPR120siRNA下調(diào)GPR120的表達(dá)，可以顯著降低中、長(zhǎng)鏈游離脂肪酸對(duì)STC-1細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度的增加和GLP-1的釋放。同時(shí)激活GPR120受體還可以增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗。在脂肪組織和巨噬細(xì)胞中，GPR120受體可以介導(dǎo)ω-3脂肪酸DHA和EPA的抗炎效應(yīng)。因此激活GPR120受體可以發(fā)揮抗炎效應(yīng)。此外有研究表明，GPR120功能的缺失可以導(dǎo)致人和鼠的肥胖。同時(shí)GPR120在腫瘤的生長(zhǎng)和遷移、骨質(zhì)疏松等疾病相關(guān)。綜上所述，GPR120是糖尿病、肥胖等代謝性疾病的重要治療靶點(diǎn)，其受體激動(dòng)劑具有重要的開(kāi)發(fā)價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于設(shè)計(jì)、合成代謝穩(wěn)定、具有較好成藥性的新型GPR120激動(dòng)劑。本發(fā)明公開(kāi)了一系列苯丙酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，所述衍生物如通式I的化合物：其中R1為氟、氯、溴、碘、1～6個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；R2為芳環(huán)、取代芳環(huán)、芳雜環(huán)、取代芳雜環(huán)；R3為氫、氟、氯、溴、碘、1～6個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；X為碳、氧、硫、氮；n＝0，1，2，3本發(fā)明通式I的化合物優(yōu)選R1為氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、環(huán)丙基、；其中，優(yōu)選R2為苯環(huán)、單取代苯環(huán)、多取代苯環(huán)；優(yōu)選R3為氫、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基；優(yōu)選X為碳、氧、硫、氮；優(yōu)選n＝0，1，2，3；本發(fā)明通式I的化合物更優(yōu)選R1為氟、氯、溴、甲基；本發(fā)明通式I的化合物優(yōu)選R2為苯環(huán)、單取代苯環(huán)、二取代苯環(huán)；本發(fā)明通式I的化合物更優(yōu)選R3為氫、氟、氯；本發(fā)明通式I的化合物更優(yōu)選X為碳、氧、氮；本發(fā)明通式I的化合物更優(yōu)選n為1本發(fā)明優(yōu)選的化合物如下：3-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-1；3-(4-((4-氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸I-2；3-(4-((4’-氯-4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸I-3；3-(3，5-二氟-4-((4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-4；3-(3，5-二氟-4-((4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-5；3-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲氧基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-6；3-(3，5-二氟-4-((4-氟-3’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-7；3-(4-([1，1’-聯(lián)苯]-2-甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸I-8；3-(4-((4，4’-二氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)-丙酸I-9；3-(4-氯-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)-甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸I-10；3-(3，5-二氟-4-((4-氟-2’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-11；3-(4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二甲基苯基)丙酸I-12；3-(3，5-二溴-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-13；3-(3，5-二氯-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯]-2-)甲氧基)苯基)丙酸I-14；2-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯氧基)乙酸I-15；2-(3，5-二氟-4-((4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯氧基)乙酸I-16；本發(fā)明的另一目的是提供了一系列苯丙酸衍生物式I化合物的制備方法，如下反應(yīng)式：具體包括下列步驟(1)式II化合物與中間體III通過(guò)Mitsunobo反應(yīng)，得到化合物V，所采用的活化劑可以為DEAD、DIAD、ADDP、三丁基膦、三苯基膦等；溶劑選自苯、甲苯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、甲基叔丁基醚、乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃、丙酮、乙腈、乙醇、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜中的一種或多種的混合溶劑。反應(yīng)溫度為零下20℃至100℃，優(yōu)選溫度為0℃至60℃；(2)式II化合物在適合的條件下引入離去基團(tuán)，得到化合物IV。離去基團(tuán)可以為氯、溴、碘、對(duì)甲苯磺?；⒈交酋；?、對(duì)硝基苯磺酰基、甲磺?；?。(3)式IV化合物與式III化合物在堿的存在下發(fā)生親核取代反應(yīng)，得到式V化合物，所采用的溶劑選自苯、甲苯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、甲基叔丁基醚、 乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃、丙酮、乙腈、乙醇、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜中的一種或多種的混合溶劑，優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈或二氯甲烷；所采用的堿可以是三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、1，8-二氮雜環(huán)[5，4，0]十一烯-7、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、叔丁醇鉀、氫化鈉、甲基氯化鎂、異丙基氯化鎂、叔丁基氯化鎂、二異丙基胺基鋰、六甲基二硅基胺基鋰中的一種或多種混合使用；反應(yīng)溫度為零下20℃至100℃，優(yōu)選溫度為25℃至80℃；(4)式V化合物在堿性條件下水解得到式I化合物，所采用的堿可以是氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銫、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫等；所采用的溶劑為水、四氫呋喃、甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞楓中的一種或多種混合溶劑。反應(yīng)溫度為零20℃至100℃，優(yōu)選溫度為25℃至80℃；在上述反應(yīng)式中，R1、R2、R3如上述式I化合物中所定義；R4為烷基、芳基，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、芐基、對(duì)甲氧基芐基、苯基等。本發(fā)明的又一目的是提供了一系列苯丙酸衍生物式I化合物在制藥中的用途。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明式I化合物對(duì)GPR120具有較好的激動(dòng)效果；體內(nèi)代謝研究結(jié)果表明，本發(fā)明式I化合物能夠表現(xiàn)出更好的代謝穩(wěn)定性；更出人意料的是，式I化合物在羧基端苯環(huán)上引入二氟取代后，GPR120激動(dòng)活性顯著提高。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于制備抗糖尿病、肥胖等代謝性疾病。本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療糖尿病、肥胖等代謝性疾病的藥物組合物，其中含有治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體。所述藥物組合物可以是普通片劑或膠囊、緩釋片劑或膠囊、控釋片劑或膠囊、顆粒劑、散劑、糖漿劑、口服液、注射劑等制劑學(xué)上常規(guī)的制劑形式。附圖說(shuō)明圖1化合物I-1的核磁共振氫譜；圖2化合物I-5的核磁共振氫譜。具體實(shí)施方式下面通過(guò)實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容。在本發(fā)明中，以下所述的實(shí)施例是為了更好的闡述本發(fā)明，并不是用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。中間體的制備(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇室溫下，2-溴-5-氟芐醇(410mg，2mmol)、對(duì)甲基苯硼酸(299mg，2.2mmol)、無(wú)水碳酸鈉(636mg，6mmol)溶于甲苯(10mL)、乙醇(5mL)、水(5mL)的混合溶液中。氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入四三苯基膦鈀(116mg，0.1mmol)，然后升至70℃攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫，硅藻土抽濾并用乙酸乙酯洗滌。濾液用乙酸乙酯萃取后用飽和食鹽水洗滌，合并有機(jī)相并用無(wú)水硫酸鈉干燥、脫溶并通過(guò)柱層析純化，得黃色液體267mg，收率為62％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.33-7.14(m，6H)，7.09-6.95(m，1H)，4.57(s，2H)，2.41(s，3H)，1.99(s，1H).2-溴甲基-4-氟-4’-甲基-1，1’-聯(lián)苯(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇(433mg，2mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(10mL)。0℃下，PBr3(146μL，2mmol)逐滴加入反應(yīng)液中。0℃下繼續(xù)攪拌2h，加入適量水淬滅反應(yīng)，然后用乙酸乙酯萃取三次，并用飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后脫溶，柱層析純化，得無(wú)色液體406mg，收率為73％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.32-7.21(m，6H)，7.07-7.01(m，1H)，4.41(s，2H)，2.42(s，3H).(4-氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.58(d，J＝2.1Hz，1H)，7.46-7.37(m，3H)，7.36-7.29(m，3H)，7.20(d，J＝8.2Hz，1H)，4.59(s，2H).(4’-氯-4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.42-7.36(m，2H)，7.33-7.16(m，4H)，7.03(m，1H)，4.57(s，2H).(4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.41(t，J＝8.1Hz，3H)，7.32(m，3H)，7.28-7.22(m，1H)，7.05(m，1H)，4.61(d，J＝5.4Hz，2H).(4’-甲基-[1，’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.57-7.52(m，1H)，7.42-7.32(m，2H)，7.31-7.21(m，5H)，4.63(s，2H)，2.42(s，3H).(4-氟-4’-甲氧基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.29-7.18(m，4H)，7.04-6.93(m，3H)，4.58(d，J＝2.8Hz，2H)，3.84(s，3H).(4-氟-3’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.32-7.25(m，2H)，7.21-7.17(m，2H)，7.10-7.07(m，2H)，7.04-6.98(m，1H)，4.58(d，J＝2.6Hz，2H)，2.39(s，3H).[1，1’-聯(lián)苯基]-2-甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.57-7.54(m，1H)，7.46-7.34(m，7H)，7.31-7.26(m，1H)，4.62(d，J＝1.0Hz，2H).(4，4’-二氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.57(d，J＝1.9Hz，1H)，7.40(d，J＝8.3Hz，2H)，7.32(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，7.29-7.22(m，2H)，7.17(d，J＝8.2Hz，1H)，4.56(s，2H).(4-氯-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.54(d，J＝2.1Hz，1H)，7.22(m，6H)，4.56(s，2H)，2.39(s，3H).(4-氟-2’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇參照(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇的方法制備3-(3，5-二氟-4-羥基苯基)丙酸乙酯室溫下，2，6-二氟苯酚(650mg，5mmol)溶于三氟乙酸(10mL)。向該反應(yīng)液中分批加入六亞甲基四胺(701mg，5mol)。加畢后，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷去至室溫，加入適量二氯甲烷，并依次用水、10％碳酸鉀水溶液洗滌，合并水相并用濃鹽酸酸化后，乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥后脫溶，柱層析純化，得白色固體。該固體溶于丙酮(10mL)中，并依次加入溴芐(653μL，5.5mmol)、碳酸鉀(1.59g，11.5mmol)。加畢后，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫后直接旋干，柱層析純化，得淡黃色固體390mg，兩步收率為31％。在0℃、氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，磷?；宜崛阴?468μL，2.36mmol)逐滴加入鈉氫(88mg，2.2mmol)的甲苯(10mL)溶液。加畢后，升溫至50℃。攪拌1h后，反應(yīng)液冷卻至0℃。上一步產(chǎn)物溶于甲苯(5mL)后逐滴加入反應(yīng)液中。加畢后，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫，加入適量水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶、柱層析純化，得黃色油狀物383mg，收率為77％。該產(chǎn)物溶于甲醇(5ml)，加入15mg鈀碳(含量10％)，在氫氣氛下反應(yīng)，攪拌過(guò)夜。原料消失后，硅藻土抽濾并用乙酸乙酯洗滌，柱層析純化，得無(wú)色液體228mg，收率為83％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ6.78-6.70(m，2H)，5.27(bs，1H)，4.12(q，J＝7.1Hz，2H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.56(t，J＝7.5Hz，2H)，1.23(t，J＝7.1Hz，3H).3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙酸乙酯室溫下，4-羥基-3，5-二甲基苯甲醛(451mg，3mmol)、碳酸鉀(829mg，6mmol)、溴芐(428μL，3.6mmol)依次加入N，N-二甲基甲酰胺(10mL)。加畢，反應(yīng)液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。原料消失后，加入適量水，乙酸乙酯萃取三次，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸出溶劑，柱層析純化，得無(wú)色液體。在0℃、氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，磷酰基乙酸三乙酯(893μL，4.5mmol)逐滴加入鈉氫(168mg，4.2mmol)的甲苯(10mL)溶液。加畢后，升溫至50℃。攪拌1h后，反應(yīng)液冷卻至0℃。上一步產(chǎn)物溶于甲苯(5mL)后逐滴加入反應(yīng)液中。加畢后，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫，加入適量水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶、柱層析純化，得黃色液體。該產(chǎn)物溶于甲醇(15ml)，加入90mg鈀碳(含量10％)，在氫氣氛下反應(yīng)，攪拌過(guò)夜。原料消失后，硅藻土抽濾并用乙酸乙酯洗滌，柱層析純化，得無(wú)色液體467mg，三步總收率為70％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ6.80(s，2H)，4.56(s，1H)，4.12(q，J＝7.1Hz，2H)，2.81(t，J＝7.8 Hz，2H)，2.56(t，J＝7.8Hz，2H)，2.21(s，6H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H).3-(3，5-二溴-4-羥基苯基)丙酸甲酯室溫下，3-(4-羥基苯基)丙酸甲酯(360mg，2.0mmol)溶于冰醋酸(20mL)。向該反應(yīng)液中逐滴加入液溴(205μL，4.0mmol)。加畢后，室溫下攪拌過(guò)夜。原料消失后，減壓蒸除溶劑，加入飽和亞硫酸鈉溶液淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取三次，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶，柱層析純化，得無(wú)色液體460mg，收率為68％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.28(s，2H)，5.79(bs，1H)，3.66(s，3H)，2.83(t，J＝7.5Hz，2H)，2.57(t，J＝7.6Hz，2H).3-(3，5-二氯-4-羥基苯基)丙酸乙酯室溫下，2，6-二氯苯酚(490mg，3mmol)溶于三氟乙酸(10mL)。向該反應(yīng)液中分批加入六亞甲基四胺(421mg，3mol)。加畢后，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷去至室溫，加入適量二氯甲烷，并依次用水、10％碳酸鉀水溶液洗滌，合并水相并用濃鹽酸酸化后，乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥后脫溶，柱層析純化，得白色固體。該固體溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，并依次加入溴芐(343μL，2.89mmol)、碳酸鉀(666mg，4.82mmol)。加畢后，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫后直接旋干，柱層析純化，得淡黃色固體585mg，兩步收率為69％。在0℃、氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，磷?；宜崛阴?619μL，3.12mmol)逐滴加入鈉氫(117mg，2.91mmol)的甲苯(10mL)溶液。加畢后，升溫至50℃。攪拌1h后，反應(yīng)液冷卻至0℃。上一步產(chǎn)物溶于甲苯(5mL)后逐滴加入反應(yīng)液中。加畢后，加熱至回流，攪拌過(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液冷卻至室溫，加入適量水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶、柱層析純化，得白色固體515mg，收率為70％。該產(chǎn)物溶于甲醇(5ml)，加入52mg鈀碳(含量10％)，在氫氣氛下反應(yīng)，攪拌過(guò)夜。原料消失后，硅藻土抽濾并用乙酸乙酯洗滌，柱層析純化，得無(wú)色液體254mg，收率為66％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.11(s，2H)，5.78(s，1H)，4.13(q，J＝7.2Hz，2H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.57(t，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H).2，6-二氟-4-(2-羥基乙氧基)苯酚0℃條件下，NBS(890mg，5mmol)分批加入2，6-氟苯酚(650mg，5mmol)的DMF溶液中。加畢后，升至室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。原料消失后，反應(yīng)液直接柱層析純化，得黃色液體，直接用于下 一步反應(yīng)。上一步所得液體溶于DMF中，依次加入溴芐(713μL，6mmol)、碳酸鉀(1.38mg，10mmol)。加畢后反應(yīng)液在室溫下攪拌過(guò)夜。原料消失后，往反應(yīng)液中加入適量水，乙酸乙酯萃取三次后無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑后柱層析純化，得無(wú)色液體1.28g，兩步收率85％。在斯萊克管中依次加入上述產(chǎn)物(300mg，1mmol)、氯化銅的水合物(8.5mg，0.05mmol)、碳酸鉀(410mg，3mmol)和乙二醇(5mL)。加畢后，反應(yīng)液在氬氣保護(hù)下，升溫至130℃，攪拌過(guò)夜。原料消失后，加入3MHCl溶液酸化至酸性，乙酸乙酯萃取，減壓蒸出溶劑后，柱層析純化，得無(wú)色液體175mg，收率63％。上一步所得產(chǎn)物(411mg，1.47mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入10％的鈀碳(40mg)，在氫氣氛下，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。原料消失后，硅藻土濾除鈀碳，濾液減壓蒸除溶劑后，柱層析純化，得白色固體238mg，收率85％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ6.53(d，J＝8.2Hz，2H)，3.98(m，4H).實(shí)施例13-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-1)室溫下，(4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲醇(160mg，0.74mmol)、3-(3，5-二氟-4-羥基苯基)丙酸乙酯(170mg，0.74mmol)、三丁基膦(295μL，1.18mmol)溶于無(wú)水甲苯(10mL)。N2保護(hù)下，向上述反應(yīng)液中逐滴加入ADDP(298mg，1.18mmol)的甲苯(5mL)溶液。加畢后，反應(yīng)液在室溫下攪拌過(guò)夜。原料消失后，向反應(yīng)瓶中加入適量正己烷，攪拌10min后硅藻土抽濾并用正己烷洗滌濾餅。減壓蒸除溶劑后，柱層析純化，得無(wú)色液體。該無(wú)色液體溶于甲醇(2mL)，飽和氫氧化鈉溶液(1mL)加入混合物中，室溫下攪拌過(guò)夜。原料消失后，減壓蒸出部分溶劑后用3M稀鹽酸酸化至酸性，乙酸乙酯萃取三次，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶，柱層析純化，得白色固體80mg，兩步收率為27％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.40(dt，J＝12.1，6.0Hz，1H)，7.33-7.18(m，5H)，7.08(td，J＝8.4，2.7Hz，1H)，6.84-6.67(m，2H)，5.00(s，2H)，2.89(t，J＝7.5Hz，2H)，2.66(t，J＝7.5Hz，2H)，2.41(s，3H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.05，163.70，160.44，157.66，157.57，154.36，154.28，137.75，137.71，137.12，136.44，136.30，136.19，136.15，136.05，131.60，131.49，129.17，128.95，116.10，115.81，115.54，115.23，114.95，112.12，112.02，111.91，111.81，73.42，34.88，29.76，21.12.實(shí)施例23-(4-((4-氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸(I-2)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.68(d，J＝1.0Hz，1H)，7.44-7.35(m，6H)，7.26(d，J＝4.1Hz，1H)，6.72(m，2H)，4.97(s，2H)，2.87(t，J＝7.4Hz，2H)，2.65(t，J＝7.4Hz，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.56，157.62，157.54，155.19，154.32，154.24，140.40，139.11，136.39，136.28，136.17，135.55，135.18，133.38，131.26，130.18，130.01，129.86，129.62，129.33，129.15，128.39，128.26，128.08，127.56，127.48，127.20，112.10，112.00，111.89，111.80，111.72，73.22，34.91，29.70.實(shí)施例33-(4-((4’-氯-4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸(I-3)參照實(shí)施例1的方法制備。實(shí)施例43-(3，5-二氟-4-((4-氟-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-4)參照實(shí)施例1的方法制備。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.50，163.81，160.55，157.66，157.58，154.36，154.28，139.38，137.88，137.84，136.43，136.32，136.20，136.16，136.06，131.61，131.51，129.33，128.27，127.43，116.27，115.98，115.33，115.05，112.15，112.05，111.94，111.85，73.36，34.95，29.76.實(shí)施例53-(3，5-二氟-4-((4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-5)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.59(m，1H)，7.46-7.32(m，5H)，7.25(d，J＝7.7Hz，2H)，6.75(d，J＝8.6Hz，2H)，5.04(s，2H)，2.89(t，J＝7.4Hz，2H)，2.67(t，J＝7.4Hz，2H)，2.43(s，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.03，157.81，157.73，154.51，154.43，154.35，154.33，154.28，154.25，142.28，137.41，136.92，136.88，136.03，135.93，133.73，130.09，129.25，128.83，128.41，128.37，128.24，127.31，112.05，111.95，111.84，111.74，74.02，34.91，29.77，21.15.實(shí)施例63-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲氧基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-6)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.37(dd，J＝9.6，2.5Hz，1H)，7.33-7.21(m，3H)，7.07(td，J＝8.3，2.6Hz，1H)，6.94(d，J＝8.6Hz，2H)，6.79-6.68(m，2H)，4.98(s，2H)，3.85(s，3H)，2.88(t，J＝7.5Hz，2H)，2.65(t，J＝7.5Hz，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ177.85，163.61，160.35，159.03，157.66，157.58，154.36，154.28，137.63，137.56，137.52，136.33，136.22，136.14，136.04，131.77，131.65，131.55，131.41，130.43，116.23，115.94，115.28，115.00，114.59，113.70，112.13，112.03，111.92，111.83，73.48，55.29，34.85，29.77.實(shí)施例73-(3，5-二氟-4-((4-氟-3’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-7)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.42(dd，J＝9.5，2.1Hz，1H)，7.29(dd，J＝14.8，6.8Hz，2H)，7.22-7.05(m，4H)，6.75(d，J＝8.6Hz，2H)，4.99(s，2H)，2.88(t，J＝7.4Hz，2H)，2.66(t，J＝7.4Hz，2H)，2.40(s，3H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.41，170.78，163.74，160.48，157.66，157.57，154.36，154.28，139.32，138.98，138.00，137.96，137.91，136.32，136.21，136.10，136.00，131.55，131.45，130.04，128.14，128.12，126.37，116.24，115.95，115.26，114.98，112.12，112.02，111.92，111.82，73.40，34.93，29.75，21.35.實(shí)施例83-(4-([1，1’-聯(lián)苯]-2-甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸(I-8)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.70-7.57(m，1H)，7.48-7.30(m，8H)，6.79-6.66(m，2H)，5.00(s，2H)，2.86(t，J＝7.5Hz，2H)，2.64(t，J＝7.5Hz，2H).實(shí)施例93-(4-((4，4’-二氯-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二氟苯基)-丙酸(I-9)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.62(d，J＝1.7Hz，1H)，7.43-7.30(m，4H)，7.27-7.19(m，2H)，6.74(d，J＝8.8Hz，2H)，4.90(s，2H)，2.87(t，J＝7.5Hz，2H)，2.64(t，J＝7.5Hz，2H).實(shí)施例103-(4-氯-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)-甲氧基)-3，5-二氟苯基)丙酸(I-10)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.67(s，1H)，7.42-7.18(m，6H)，6.75(d，J＝8.7Hz，2H)，4.98(s，2H)，2.89(t，J＝7.3Hz，2H)，2.66(t，J＝7.3Hz，2H)，2.41(s，3H).實(shí)施例113-(3，5-二氟-4-((4-氟-2’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-11)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.48(d，J＝9.7Hz，1H)，7.27-7.04(m，6H)，6.71(d，J＝8.7Hz，2H)，4.80(s，2H)，2.87(t，J＝7.4Hz，2H)，2.64(t，J＝7.4Hz，2H)，2.06(s，3H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.02，163.82，160.57，157.56，157.48，154.26，154.18，138.69，136.97，136.87，136.41，136.36，136.24，136.13，136.10，136.02，131.10，131.00，129.97，129.71，127.79，125.57，115.24，114.92，114.64，114.58，112.08，111.99，111.88，111.78，73.01，34.88，29.74，19.85.實(shí)施例123-(4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)-3，5-二甲基苯基)丙酸(I-12)參照實(shí)施例1的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.52-7.49(m，1H)，7.23-7.20(m，1H)，7.17(bs，4H)，7.08-7.02(m，1H)，6.81(s，2H)，4.68(s，2H)，2.83(t，J＝7.7Hz，2H)，2.62(t，J＝7.7Hz，2H)，2.37(s，3H)，2.12(s，6H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ178.93，163.93，160.67，154.11，137.75，137.65，137.08，136.97，136.93，136.76，135.70，131.48，131.37，131.04，129.07，129.00，128.62，115.04，114.74，114.48，114.19，70.97，35.68，29.92，21.12，16.31.實(shí)施例133-(3，5-二溴-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-13)室溫下，2-溴甲基-4-氟-4’-甲基-1，1’-聯(lián)苯(74mg，0.27mmol)、3-(3，5-二溴-4-羥基苯基)丙酸甲酯(90mg，0.27mmol)溶于DMF中。向上述反應(yīng)液中加入碳酸鉀(74mg，0.53mmol)。加畢后，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。原料消失后，加入適量水，乙酸乙酯萃取三次后無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶，柱層析純化，得無(wú)色油狀物。該無(wú)色液體溶于甲醇(2mL)，飽和氫氧化鈉溶液(1mL)加入混合物中，室溫下攪拌過(guò)夜。原料消失后，減壓蒸出部分溶劑后用3M稀鹽酸酸化至酸性，乙酸乙酯萃取三次，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶，柱層析純化，得白色固體124mg，兩步收率為88％。實(shí)施例143-(3，5-二氯-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯]-2-)甲氧基)苯基)丙酸(I-14)參照實(shí)施例13的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.59(dd，J＝9.8，2.6Hz，1H)， 7.31-7.19(m，5H)，7.17-7.05(m，3H)，4.93(s，2H)，2.88(t，J＝7.6Hz，2H)，2.67(t，J＝7.5Hz，2H)，2.41(s，3H).實(shí)施例152-(3，5-二氟-4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯氧基)乙酸(I-15)室溫下，2-溴甲基-4-氟-4’-甲基-1，1’-聯(lián)苯(140mg，0.5mmol)、2，6-二氟-4-(2-羥基乙氧基)苯酚(95mg，0.5mmol)、碳酸鉀(104mg，0.75mmol)溶于DMF中，攪拌過(guò)夜。原料消失后，加入適量水，乙酸乙酯萃取三次，減壓蒸除溶劑，柱層析純化，得無(wú)色液體87mg。上述產(chǎn)物溶于丙酮(5mL)中，冰浴條件下，逐滴加入Jones試劑(1mL)，繼續(xù)攪拌過(guò)夜。原料消失后，加入適量異丙醇至體系呈藍(lán)色，乙酸乙酯萃取三次，減壓蒸除溶劑，直接柱層析純化，得白色固體53mg，兩步收率為26％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.39(d，J＝9.4Hz，1H)，7.32-7.18(m，5H)，7.08(t，J＝8.4Hz，1H)，6.49(d，J＝9.0Hz，2H)，4.93(s，2H)，4.61(s，2H)，2.41(s，3H).實(shí)施例162-(3，5-二氟-4-((4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯氧基)乙酸(I-17)參照實(shí)施例15的方法制備。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.68-7.58(m，1H)，7.38(ddd，J＝12.1，9.2，5.2Hz，5H)，7.24(d，J＝7.8Hz，2H)，6.56-6.41(m，2H)，4.98(s，2H)，4.62(s，2H)，2.42(s，3H).體外GPR120激動(dòng)活性藥效學(xué)試驗(yàn)藥品：受試化合物(上述實(shí)施例制備)、對(duì)照藥TUG-891(3-(4-((4-氟-4’-甲基-[1，1’-聯(lián)苯基]-2-)甲氧基)苯基)丙酸)、GW9508(3-(4-((3-苯氧基芐基)氨基)苯基)丙酸)、α-LA。細(xì)胞模型：利用細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在CHO-K1細(xì)胞中過(guò)表達(dá)hGPR120與Gα15蛋白，經(jīng)過(guò)篩選、擴(kuò)大培養(yǎng)、鑒定，得到人工構(gòu)建的hGPR120穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系。進(jìn)一步利用受體穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化，在細(xì)胞水平對(duì)小分子化合物的GPR120的激動(dòng)活性分別進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)步驟：hGPR120穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建委托Invitrogen公司構(gòu)建hGPR120質(zhì)粒，載體均為pcDNA3.1。使用羅氏X-tremGENEHP轉(zhuǎn)染試劑對(duì)CHO-K1細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。采用抗生素篩選結(jié)合有限稀釋法，得到穩(wěn)定過(guò)表達(dá) hGPR120的單克隆細(xì)胞株。RT-PCR鑒定單克隆細(xì)胞株中受體的表達(dá)情況，驗(yàn)證蛋白的表達(dá)。檢測(cè)內(nèi)源性配體α-LA在構(gòu)建的hGPR120穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的激動(dòng)活性，驗(yàn)證細(xì)胞的功能性表達(dá)?；衔餃?zhǔn)備化合物用DMSO配成100mM的母液儲(chǔ)存鈣流實(shí)驗(yàn)步驟1)細(xì)胞鋪板：細(xì)胞以3×104/孔的密度接種至96孔板，置于37℃、5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)；2)棄去培養(yǎng)基，每孔加入100ulHBSS清洗后，加入100uL含Probenecid的Fluo-4染料溶液37℃孵育60min。3)孵育結(jié)束后，吸出Fluo-4染料溶液，加100μLHBSS緩沖液，洗去染料；4)每孔加入100μL含Probenecid的HBSS，37℃孵育10min，；5)準(zhǔn)備化合物板：96孔板中每孔加入至少150μL濃度為3×工作濃度的化合物，HBSS配制；6)加入相應(yīng)濃度的化合物溶液；7)讀數(shù)：按照參數(shù)設(shè)置表用FlexStation3讀數(shù)。FlexStation參數(shù)設(shè)置表(96孔板)參數(shù)Excitationwavelentth(nm)485Emissionwavelength(nm)525Emissioncut-off(nm)515Dyeloadingvolume(μL)100Additionvolume(μL)50Pipetheight(μL)100實(shí)施例17片劑將實(shí)施例1中制得的化合物I-1(50g)、羥丙甲基纖維素E(150g)、淀粉(200g)、聚維酮K30適量和硬脂酸鎂(1g)混合，制粒，壓片。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3