本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域；具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及新型的蝶啶酮衍生物、其合成方法及其作為FMS樣酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3，F(xiàn)LT3)抑制劑在治療FLT3介導(dǎo)的疾病，例如腫瘤中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase)是一類催化ATP上γ-磷酸轉(zhuǎn)移到蛋白特定氨基酸殘基上的蛋白，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中占有非常重要的地位，并且調(diào)節(jié)著細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、死亡等一系列生理過(guò)程。已有資料表明，超過(guò)50％的原癌基因及其產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞生命周期的紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。此外，酪氨酸激酶的異常表達(dá)還與腫瘤的轉(zhuǎn)移、化療抗性等密切相關(guān)。
FMS樣酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3，F(xiàn)LT3)屬于III型受體酪氨酸激酶家族，F(xiàn)LT3在造血細(xì)胞的增殖、分化及凋亡過(guò)程中起著重要作用(Oncogene,1993,8,815-822)。FLT3與FLT3配體結(jié)合之后，激活多個(gè)下游信號(hào)通路，包括STAT5、Ras/MAPK及PI3K/AKT通路。在大約三分之一的急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者中存在FLT3突變(Blood,2002,100,1532-1542)，包括近膜結(jié)構(gòu)域14和(或)15號(hào)外顯子的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)序列(FLT3-ITD)突變、酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的激活環(huán)中氨基酸的缺失或插入(FLT3-TKD)突變。此外，在急性白血病病例中存在FLT3高表達(dá)現(xiàn)象(Blood,2004,103,1901)，F(xiàn)LT3的過(guò)表達(dá)、FLT3-ITD突變及FLT3-TKD突變均會(huì)導(dǎo)致AML患者預(yù)后不良。由此，F(xiàn)LT3成為AML治療的重要靶標(biāo)。然而，到目前為止，尚無(wú)FLT3抑制劑被批準(zhǔn)用于臨床使用，眾多處于臨床試驗(yàn)階段的FLT3抑制劑的臨床效果仍不夠理想?，F(xiàn)有技術(shù)中的很多FLT3抑制劑抑制FLT3的IC50值達(dá)到數(shù)百、甚至數(shù)千nm，并無(wú)實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。因此，提高小分子激酶抑制劑臨床有效率正成為當(dāng)前抗腫瘤靶向藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，最有前景的策略即為，開發(fā)同時(shí)靶向多個(gè)與疾病(腫瘤)發(fā)生相關(guān)的激酶的多靶點(diǎn)抑制劑。
綜上所述，本領(lǐng)域急需高活性的新型FLT3抑制劑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種高活性的新型FLT3抑制性化合物，以及包含這種化合物的藥物組合物。
在第一方面，本發(fā)明提供式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
式中，
R1為氫、鹵素、C1-C6烷氧基、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基；
R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲?；?、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R3選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被被柞；?、羧基、任選取代的烷氧甲酰基、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R5選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲酰基、任選取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R6選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲?；Ⅳ然?、任選取代的烷氧甲酰基、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R7選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲酰基、羧基、任選取代的烷氧甲酰基、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基或鏈烯基；和
并且，當(dāng)R5為C1-C6烷氧基，且R2或R3為氨基時(shí)，R6和R7不同時(shí)為氫。
在具體的實(shí)施方式中，R1為氫、鹵素、C1-C3烷氧基、任選取代的C1-C3烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基；
R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、羧基、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、 任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R3選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺?；被被柞；?、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、-NRaRb；
R5選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲酰基、任選取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R6選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、-NRaRb；
R7選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、氨基甲酰基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、-NRaRb；
Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基。
在具體的實(shí)施方式中，R1為氫、鹵素、C1-C3烷氧基、任選取代的C1-C3烷基；
R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、甲磺?；被?、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R3選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R5選自鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺?；被?、氨基甲?；?、任選取代的N-烷基哌啶基氧基、任選取代的N-烷基哌嗪基、-NRaRb；
R6選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R7選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基。
在第二方面，本發(fā)明提供選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
在第三方面，本發(fā)明提供選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
在第四方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有本發(fā)明第一到第三方面所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述藥物組合物是適于口服的劑型，包括但不限于片劑、溶液劑、混懸液、膠囊劑、顆粒劑、粉劑。
在第五方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一到第三方面所述的化合物在制備治療或預(yù)防FLT3介導(dǎo)的疾病，或抑制FLT3的藥物中的用途。
在具體的實(shí)施方式中，所述FLT3介導(dǎo)的疾病為癌癥。
在具體的實(shí)施方式中，所述癌癥選自下組：急性髓細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性前髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性中性粒細(xì)胞白血病、 急性未分化性白血病、退化發(fā)育性大細(xì)胞淋巴瘤、幼淋巴細(xì)胞性白血病、青少年粒單核細(xì)胞白血病、成人T細(xì)胞ALL、AML合并三譜系脊髓發(fā)育不良、混合譜系白血病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生障礙、多發(fā)性骨髓瘤。
在具體的實(shí)施方式中，所述疾病為免疫性疾病。
在具體的實(shí)施方式中，所述免疫性疾病選自：關(guān)節(jié)炎、狼瘡、炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、青少年關(guān)節(jié)炎、糖尿病、重癥肌無(wú)力癥、橋本甲狀腺炎、奧德甲狀腺炎、格雷夫斯病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、多發(fā)性硬化癥、傳染性神經(jīng)元炎、急性傳播性腦脊髓炎、阿狄森病、再生障礙性貧血、自身免疫性肝炎、視神經(jīng)炎、銀屑病、移植物抗宿主病、移植、輸血過(guò)敏反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、I型超敏反應(yīng)、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎。
在第六方面，本發(fā)明提供利用本發(fā)明第一到第三方面所述的化合物治療或預(yù)防FLT3介導(dǎo)的疾病方法。
應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具體實(shí)施方式
發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，出乎意料地發(fā)現(xiàn)一批結(jié)構(gòu)全新的蝶啶酮衍生物，這些衍生物具有良好的FLT3抑制活性以及腫瘤細(xì)胞抑制活性，其抑制FLT3的IC50值達(dá)到nM水平，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中的FLT3抑制劑。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
術(shù)語(yǔ)定義
本文中涉及到的一些基團(tuán)定義如下：
本文中，“烷基”指碳鏈長(zhǎng)度為1-10個(gè)碳原子的飽和的支鏈或直鏈烷基，優(yōu)選的烷基包括長(zhǎng)2-8個(gè)碳原子、1-6個(gè)碳原子、1-4個(gè)碳原子、3-8個(gè)碳原子、1-3個(gè)碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、庚基等。烷基可以被1個(gè)或多個(gè)取代基取代，例如被鹵素或鹵代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4個(gè)氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。
本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。優(yōu)選的烷氧基是長(zhǎng)1-6個(gè)碳原子的烷氧基，更優(yōu)選為長(zhǎng)1-4個(gè)或1-3個(gè)碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。
本文中，“鏈烯基”通常表示具有至少一個(gè)雙鍵的單價(jià)烴基，通常含有2-8個(gè)碳原子，優(yōu)選含有2-6個(gè)碳原子，可以是直鏈或支鏈。鏈烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、 異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、己烯基等等。
本文中，“炔基”通常表示具有至少一個(gè)三鍵的單價(jià)烴基，通常含有2-8個(gè)碳原子，優(yōu)選含有2-6個(gè)碳原子，更通常含有2-4個(gè)碳原子，可以是直鏈或支鏈。鏈烯基的例子包括乙炔基、丙炔基、異丙炔基、丁炔基、異丁炔基、己炔基等。
本文中，“鹵素原子”或“鹵素”指氟、氯、溴和碘。
“芳基”指含有6到14個(gè)碳原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)芳族基團(tuán)，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氫化萘基、二氫化茚基等。芳基可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、C1-4醛基、C1-6烷基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基等、雜環(huán)基或雜芳基等。
本文中，“芳烷基”指被芳基取代的烷基，例如被苯基取代的C1-C6烷基。芳烷基的例子包括但不限于芳基甲基、芳基乙基等，例如芐基、苯乙基等。
例如，芳基可以被1-3個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、-OH、C1-4烷氧基、C1-4烷基、-NO2、-NH2、-N(CH3)2、羧基、和乙氧甲?；?。
本文所用的“5元或6元雜環(huán)”包括但不限于含有1-3個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子的雜環(huán)基團(tuán)，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、嗎啉基等。
本文所用“雜芳基”是指含有5-14個(gè)環(huán)原子，并且有6個(gè)、10個(gè)或14個(gè)電子在環(huán)體系上共用。而且所含環(huán)原子是碳原子和從氧、氮、硫中任選的1-3個(gè)雜原子。有用的雜芳基包括哌嗪基、嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。
雜芳基或5元或6元雜環(huán)可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、C1-4醛基、C1-6直鏈或支鏈烷基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。
本文中，“酰氧基”指結(jié)構(gòu)式為“-O-C(O)-R”的基團(tuán)，其中，R可選自烷基、鏈烯基和炔基。所述R可任選地被取代。
本文中，“酰氨基”指結(jié)構(gòu)式為“-R’-NH-C(O)-R”的基團(tuán)，其中，R’可選自鍵或烷基，R可選自烷基、鏈烯基、炔基、被NRaRb取代的烷基、被NRaRb取代的鏈烯基和NRaRb取代的炔基、被鹵素取代的烷基、被氰基取代的鏈烯基、其中，Ra和Rb可選自烷基或鏈烯基。
本文中，“磺酰基氨基”是指R-S(O)2-NH-所示基團(tuán)，其中，R可選自C1-6，優(yōu)選C1-3的烷基。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，“磺?；被笔侵讣谆酋；被?。
本文中，“任選取代的”指其所修飾的取代基可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4 或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、C1-4醛基、C1-6直鏈或支鏈烷基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲?；?、N(CH3)和C1-4?；?。
本發(fā)明的化合物
本發(fā)明人合成了一批結(jié)構(gòu)全新的蝶啶酮衍生物，與現(xiàn)有技術(shù)中的FLT3抑制劑相比，這些化合物具有良好的FLT3抑制活性以及腫瘤細(xì)胞抑制活性，其抑制FLT3的IC50值達(dá)到nM水平。
在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物是式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
式中，
R1為氫、鹵素、C1-C6烷氧基、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基；
R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲?；Ⅳ然?、任選取代的烷氧甲?；⑷芜x取代的苯基、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R3選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被?、氨基甲?；Ⅳ然?、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R5選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺?；被被柞；?、任選取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任選取代的烷氧甲酰基、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R6選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲酰基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R7選自氫、鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨 基、任選取代的C1-C6烷基、CN、磺酸基、磺酰基氨基、氨基甲?；Ⅳ然?、任選取代的烷氧甲酰基、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基或鏈烯基；和
并且，當(dāng)R5為C1-C6烷氧基，且R2或R3為氨基時(shí)，R6和R7不同時(shí)為氫。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明化合物中的R1為氫、鹵素、C1-C3烷氧基、任選取代的C1-C3烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基；R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、磺酸基、磺?；被Ⅳ然?、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；R3選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺?；被?、氨基甲酰基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、-NRaRb；R5選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺酰基氨基、氨基甲?；⑷芜x取代的N-烷基哌啶基氧基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；R6選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、-NRaRb；R7選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、氨基甲酰基、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、-NRaRb；Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基。
在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供以下化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
本發(fā)明的化合物具有良好的FLT3抑制活性以及腫瘤細(xì)胞抑制活性，其中多個(gè)化合物對(duì)FLT3的抑制IC50值甚至在10nM以下。
在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
式中，
R1為氫、鹵素、C1-C3烷氧基、任選取代的C1-C3烷基；
R2選自氫、鹵素、羥基、氨基、C1-C2的酰氨基、氨基取代的C1-C3烷基、CN、甲磺?；被?、任選取代的哌嗪基、任選取代的N-烷基哌嗪基、任選取代的嗎啉基、任選取代的哌啶基、任選取代的吡咯基、任選取代的吡咯烷基、-NRaRb、任選取代的吡啶基；
R3選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R5選自鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、任選取代的酰氧基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、CN、磺?；被被柞；?、任選取代的N-烷基哌啶基氧基、任選取代的N-烷基哌嗪基、-NRaRb；
R6選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
R7選自氫、鹵素、C1-C3烷氧基、羥基、氨基、任選取代的酰氨基、任選取代的C1-C3烷基、-NRaRb；
Ra和Rb各自獨(dú)立選自烷基。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
在上述化合物的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥物組合物，該組合物含有治療有效量的本發(fā)明的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括但不限于無(wú)機(jī)和有機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；以及與堿例如鈉羥基、三(羥基甲基)胺基甲烷(TRIS，胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的無(wú)機(jī)和有機(jī)堿鹽。
雖然每個(gè)人的需求各不相同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定本發(fā)明藥物組合物中每種活性成分的最佳劑量。一般情況下，本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，對(duì)哺乳動(dòng)物每天口服給藥，藥量按照約0.0025到50毫克/公斤體重。但最好是每公斤口服給藥約0.01到10毫克。例如，單位口服劑量可以包括約0.01到50毫克，最好是約0.1到10毫克的本發(fā)明化合物。單位劑量可給予一次或多次，每天為一片或多片，每片含有約0.1到50毫克，合宜地約0.25到10毫克的本發(fā)明化合物或其溶劑化物。
本發(fā)明的藥物組合物可被配制成適合各種給藥途徑的制劑形式，包括但不限于被配制成用于腸外，皮下，靜脈，肌肉，腹腔內(nèi)，透皮，口腔，鞘內(nèi)，顱內(nèi)，鼻腔或外用途徑給藥的形式，用于治療腫瘤和其他疾病。給藥量是有效地改善或消除一個(gè)或多個(gè)病癥的藥量。對(duì)于特定疾病的治療，有效量是足以改善或以某些方式減輕與疾病有關(guān)的癥狀的藥量。這樣的藥量可作為單一劑量施用，或者可依據(jù)有效的治療方案給藥。給藥量也許可治愈疾病，但是給藥通常是為了改善疾病的癥狀。一般需要反復(fù)給藥來(lái)實(shí)現(xiàn)所需的癥狀改善。藥的劑量將根據(jù)病人的年齡，健康與體重，并行治療的種類，治療的頻率，以及所需治療效益來(lái)決定。
本發(fā)明的藥物制劑可以給予任何哺乳動(dòng)物，只要他們能獲得本發(fā)明化合物的治療效果。在這些哺乳動(dòng)物中最為重要的是人類。
本發(fā)明的化合物或其藥物組合物可用于治療各種由FMS樣酪氨酸激酶3(FLT3)介導(dǎo)的疾病。本文中，由FLT3介導(dǎo)的疾病為各種癌癥、免疫性疾病。所述癌癥包括但不限于急性髓細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性前髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性中性粒細(xì)胞白血病、急性未分化性白血病、退化發(fā)育性大細(xì)胞淋巴瘤、幼淋巴細(xì)胞性白血病、青少年粒單核細(xì)胞白血病、成人T細(xì)胞ALL、AML合并三譜系脊髓 發(fā)育不良、混合譜系白血病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生障礙、多發(fā)性骨髓瘤。所述免疫性疾病包括但不限于關(guān)節(jié)炎、狼瘡、炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、青少年關(guān)節(jié)炎、糖尿病、重癥肌無(wú)力癥、橋本甲狀腺炎、奧德甲狀腺炎、格雷夫斯病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、多發(fā)性硬化癥、傳染性神經(jīng)元炎、急性傳播性腦脊髓炎、阿狄森病、再生障礙性貧血、自身免疫性肝炎、視神經(jīng)炎、銀屑病、移植物抗宿主病、移植、輸血過(guò)敏反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、I型超敏反應(yīng)、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎。
本發(fā)明的藥物制劑可用已知的方式制造。例如，由傳統(tǒng)的混合，制粒，制錠，溶解，或冷凍干燥過(guò)程制造。制造口服制劑時(shí)，可結(jié)合固體輔料和活性化合物，選擇性研磨混合物。如果需要或必要時(shí)加入適量助劑后，加工顆?；旌衔?，獲得片劑或錠劑芯。
合適的輔料特別是填料，例如糖類如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑或鈣磷酸鹽，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；以及粘結(jié)劑，例如淀粉糊、包括玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解劑，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或褐藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。輔助劑特別是流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如，硅石、滑石、硬脂酸鹽類，如鎂硬脂酸鈣、硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給錠劑核芯提供可以抵抗胃液的合適包衣。為此，可以應(yīng)用濃縮糖類溶液。這個(gè)溶液可以含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了制備耐胃液的包衣，可使用適當(dāng)?shù)睦w維素溶液，例如醋酸纖維素鄰苯二甲酸或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸?？上蛩幤蝈V劑核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于識(shí)別或?yàn)榱吮碚骰钚猿煞謩┝康慕M合。
因此，本發(fā)明還提供一種治療FLT3介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給予需要的對(duì)象以本發(fā)明的化合物或藥物組合物。
給藥方法包括但不限于本領(lǐng)域周知的各種給藥方法，可根據(jù)患者的實(shí)際情況加以確定。這些方法包括但不限于腸外，皮下，靜脈，肌肉，腹腔內(nèi)，透皮，口腔，鞘內(nèi)，顱內(nèi)，鼻腔或外用途徑給藥。
本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物在制備治療FLT3介導(dǎo)的疾病用的藥物中的用途。
以下結(jié)合具體實(shí)施案例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步描述，但以下實(shí)施案例不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制，所有依據(jù)本發(fā)明的原理和技術(shù)手段采用的各種施用方法，均屬于本發(fā)明范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
材料與方法
本發(fā)明的蝶啶酮類化合物的合成如下所示：
在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明(Journal of Medicinal Chemistry 2013,56(20)，7821-7837)。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
試劑和條件：(a)ArNH2,DIPEA,1,4-dioxane,r.t.；(b)ArNH2,DIPEA,1,4-dioxane,r.t.；(c)Pd/C,H2,EtOH；(d)R2COCOOEt,HOAc,EtOH,reflux；(e)trifluoroacetic acide,CH2Cl2,0℃ to r.t.；(f)acyl chloride,Et3N,CH2Cl2,0℃ to r.t.or acyl chloride,1-Methyl-2-pyrrolidinone,CH3CN,0℃ to r.t.
上述制備流程中，R1-R4的定義如上文所述。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際制備需要，采用本領(lǐng)域常規(guī)獲得的各種起始化合物為原料，制備本發(fā)明的化合物。
實(shí)施例1
上述步驟a-f的具體合成方法如下：
(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步驟a)
稱取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(190mg，0.98mmol)，加入6mL 1,4-二氧六環(huán)，置于25mL圓底燒瓶中，室溫下攪拌，取(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.96mmol)、N,N-二異丙基乙胺(137mg，1.06mmol)溶于4mL 1,4-二氧六環(huán)，緩慢滴加到上述反應(yīng)液中，滴加完后繼續(xù)在室溫下攪拌1小時(shí)左右，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全轉(zhuǎn)化。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，v/v)分離，得到(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙色固體301mg，產(chǎn)率82％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.38(s,1H),9.47(s,1H),9.12(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),1.49(s,9H).LC-MS計(jì)算值C15H17ClN5O4[M+H]+366.09,實(shí)驗(yàn)值366.00。
(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步驟b)
稱取(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.14mmol)、對(duì)甲氧基苯胺(17mg，0.14mmol)、N,N-二異丙基乙胺(18mg，0.18mmol)置于10mL圓底燒瓶中，加入5mL 1,4-二氧六環(huán)，室溫下攪拌4小時(shí)，TLC跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝4:1，v/v)純化，得到(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黃色固體51mg，產(chǎn)率82％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.32(s,1H),10.27(s,1H),9.47(s,1H),9.04(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.45(d,J＝8.8Hz,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,2H),6.75(d,J＝8.8Hz,2H),3.73(s,3H),1.50(s,9H)。
(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步驟c)
稱取(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.10mmol)置于50mL圓底燒瓶中，加入20mL乙醇、5mg鈀碳(10％Pd)，通入氫氣，室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，將濾液旋干，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝5:1，v/v)純化，得到(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯淡粉色固體30mg，產(chǎn)率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.23(s,1H),8.42(s,1H),8.10(s,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,2H),7.56(s,1H),7.53(d,J＝9.2Hz,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,2H),6.77(d,J＝8.8Hz,2H),3.70(s,3H),1.48(s,9H)。
(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(步驟d)
稱取(4-(5-氨基-2-(4-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.07mmol)置于10mL圓底燒瓶中，加入0.29mL冰醋酸、5mL無(wú)水乙醇，然后加入乙醛酸乙酯(50％甲苯溶液)(16mg，0.08mmol)，加熱至回流攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，有固體析出，抽濾，濾餅用乙醇、氨水、去離子水洗滌，干燥。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝50:1，v/v)分離純化，得到(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黃 色固體18mg，產(chǎn)率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),9.64(s,1H),8.83(s,1H),8.02(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.30-7.28(m,4H),6.62(br,2H),3.67(s,3H),1.52(s,9H)。
8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮的合成(步驟e)
稱取(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(18mg,0.04mmol)置于5mL圓底燒瓶中,加入2mL二氯甲烷，0℃下攪拌，加入0.5mL三氟乙酸。然后繼續(xù)在0℃下攪拌1小時(shí)，室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至溶液偏堿性，用二氯甲烷萃取(3×50mL)，有機(jī)相用去離子水、飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，將溶劑旋干。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分離純化，得到8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮黃色固體12mg，產(chǎn)率85％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.05(s,1H),8.81(s,1H),8.00(s,1H),7.40(d,J＝7.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.73(d,J＝8.0Hz,2H),6.67(br,2H),5.44(s,2H),3.70(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C19H17N6O2[M+H]+361.1413,實(shí)驗(yàn)值361.1417。
N-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(化合物001)的合成(步驟f)
稱取8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(100mg,0.277mmol)，三乙胺(0.232mL，1.662mmol)置于25mL圓底燒瓶中，加入15mL無(wú)水二氯甲烷，冰浴下攪拌。稱取甲基磺酰氯(0.172mL，2.216mmol)溶于2mL的二氯甲烷中，將其緩慢滴加到上述反應(yīng)液當(dāng)中，滴加完后冰浴下繼續(xù)攪拌1小時(shí)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。TLC跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化。旋干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至溶液偏堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥。粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝100:50:1，v/v)純化，得到N-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺黃色固體54mg，產(chǎn)率47％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.11(br,1H),8.84(s,1H),8.03(s,1H),7.40(s,4H),7.31(br,2H),6.66(br,2H),3.69(s,3H),3.12(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C20H19N6O4S[M+H]+439.1189,實(shí)驗(yàn)值439.1187。
以下化合物均按照上述步驟a-f的方法合成得到：
8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物002)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.13(s,1H),8.72(s,1H),7.95(s,1H),7.21(s,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,2H),6.72(s,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2H),6.60(s,1H),5.33(br,2H),3.72(s,3H),2.13(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C20H19N6O2[M+H]+375.1569,實(shí)驗(yàn)值375.1573。
8-(4-氨基苯基)-2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物003)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(s,1H),8.84(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),7.38(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(s,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.39(br,2H),3.79(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C19H16ClN6O2[M+H]+395.1023,實(shí)驗(yàn)值395.1027。
8-(4-氨基苯基)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物004)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.14(s,1H),8.85(s,1H),8.03(s,1H),7.42(s,1H),7.19(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(s,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.38(br,2H),3.77(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C19H16FN6O2[M+H]+379.1319,實(shí)驗(yàn)值379.1323。
N-(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)乙酰胺(化合物005)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.23(s,1H),10.10(s,1H),8.85(s,1H),8.04(s,1H),7.78(d,J＝7.2Hz,2H),7.34(d,J＝7.6Hz,4H),6.61(s,2H),3.67(s,3H),2.13(s,3H).HRMS (ESI)計(jì)算值C21H19N6O3[M+H]+403.1519,實(shí)驗(yàn)值403.1500。
8-(3-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物006)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.35(d,J＝7.2Hz,2H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),6.75(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(br,2H),6.52(br,1H),6.48(d,J＝8.0Hz,1H),5.35(s,2H),3.02(br,4H),2.46-2.44(m,4H),2.23(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C23H25N8O[M+H]+429.2151,實(shí)驗(yàn)值429.2151。
8-(4-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物007)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.98(s,1H),8.79(s,1H),7.99(s,1H),7.33(d,J＝6.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.74(d,J＝8.4Hz,2H),6.68(br,2H),5.43(s,2H),3.05-3.03(m,4H),2.48-2.46(m,4H),2.24(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C23H25N8O[M+H]+429.2151,實(shí)驗(yàn)值429.2151。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-氯-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物008)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(br,1H),8.85(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.89(d,J＝7.6Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),5.38(s,2H),2.89(br,4H),2.47(br,4H),2.34(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C23H24ClN8O[M+H]+463.1762,實(shí)驗(yàn)值463.1710。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物009)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.13(br,1H),8.84(s,1H),8.02(s,1H),7.32(d,J＝12.4Hz,1H),7.19(d,J＝7.2Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.77(br,1H),6.72(d,J＝8.4Hz,2H),5.39(s,2H),2.92-2.90(m,4H),2.45(br,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C23H24FN8O[M+H]+447.2057,實(shí)驗(yàn)值447.2057。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物010)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.94(br,1H),8.80(s,1H),7.99(s,1H),7.36(br,1H),7.18(d,J＝6.4Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),5.37(s,2H),2.76-2.74(m,4H),2.47(br,4H),2.24(s,3H),2.06(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C24H27N8O[M+H]+443.2308，實(shí)驗(yàn)值443.2301。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物011)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.94(br,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.09(s,2H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),6.60(br,1H),5.41(s,2H),3.56(s,3H),2.87(br,4H),2.43(br,4H),2.21(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C24H27N8O2[M+H]+459.2257,實(shí)驗(yàn)值459.2256。
8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(1-甲基-4-氧代哌啶基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物012)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.97(br,1H),8.81(s,1H),7.99(s,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),7.16(br,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,3H),5.39(s,2H),4.37(s,1H),2.92(s,2H),2.75(s,2H),2.01(s,6H),1.81-1.71(m,2H),1.34-1.19(m,1H).HRMS(ESI)計(jì)算值C25H28N7O2[M+H]+458.2304,實(shí)驗(yàn)值458.2289。
N-(4-(2-(4-(4-甲基-1-哌嗪基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶酮)苯基)乙酰胺(化合物013)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.44(s,1H),10.05(s,1H),8.82(s,1H),8.02(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(br,2H),6.64(br,2H),3.24(br,4H),3.05(br,4H),2.64(s,3H),2.15(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C25H27N8O2[M+H]+471.2257,實(shí)驗(yàn)值471.2213。
N-(4-(2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(化合物014)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.02(s,1H),8.82(s,1H),8.02(s,1H),7.42-7.37(m,4H),7.26(br,2H),6.66(br,2H),3.13(s,3H),3.07(br,4H),2.54(br,4H),2.29(s,3H)。HRMS(ESI)計(jì)算值C24H27N8O3S[M+H]+507.1927,實(shí)驗(yàn)值507.1926。
8-(4-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)芐基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物015)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.99(s,1H),8.82(s,1H),8.01(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,2H),6.59(s,2H),3.86(s,2H),3.00-2.99(m,4H),2.44-2.41(m,4H),2.21(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C24H27N8O[M+H]+443.2308,實(shí)驗(yàn)值443.2304。
2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-8-(4-(1-哌嗪基)苯基)-7(8H)蝶啶酮(化合物016)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,1H),8.81(s,1H),8.00(s,1H),7.26(d,J＝6.8Hz,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,2H),6.58(s,2H),3.19-3.17(m,4H),3.02-3.00(m,4H),2.90-2.88(m,4H),2.45-2.43(m,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)計(jì)算值C27H32N9O[M+H]+498.2730,實(shí)驗(yàn)值498.2728。
實(shí)施例2
生物活性測(cè)試部分
本發(fā)明提供的化合物對(duì)FLT3激酶活性的體外抑制效果實(shí)驗(yàn)如下進(jìn)行，其中FLT3購(gòu)自BPS，以MLN518、AC220作為對(duì)照化合物，對(duì)照化合物購(gòu)自Selleck，兩結(jié)構(gòu)分別如下：
激酶測(cè)試：配制1x激酶基質(zhì)緩沖液和終止緩沖液。1x激酶基質(zhì)緩沖液：50mM HEPES，pH 7.5，0.0015％Brij-35，10mM氯化鎂，2mM DTT；終止緩沖液：100mM HEPES，pH 7.5，0.0015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA。配制化合物溶液。將化合物溶于100％DMSO，配制成50倍最終的最高抑制濃度的溶液。首先，向孔板中加入100μL待測(cè)化合物，并在同一96孔板的兩個(gè)空白孔中，分別加入100μL 100％DMSO作為無(wú)化合物和無(wú)激酶對(duì)照，此孔板作為原始孔板(1號(hào)板，96孔板)；其次，過(guò)渡孔板(2號(hào)板，96孔板)，從1號(hào)板中轉(zhuǎn)移10μL溶液到2號(hào)板中，再加入90μL的1x激酶緩沖液，將中間孔板振搖10分鐘。最后，準(zhǔn)備分析孔板(3號(hào)板，384孔板)，從2號(hào)板每個(gè)孔中取出5μL溶液到3號(hào)板中，并做重復(fù)對(duì)照。加10μL 2.5x激酶溶液，10μL 2.5x肽溶液，到3號(hào)板中，在28℃孵育一段時(shí)間后，加入25μL的終止緩沖液以結(jié)束反應(yīng)。在Caliper上采集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成抑制率，抑制百分率＝(Max-Conversion)/(Max-Min)*100，“Max”代表DMSO對(duì)照，“Min”代表低對(duì)照。
細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞株由美國(guó)菌種保藏中心(ATCC)獲得，按照ATCC提供的方法培養(yǎng)。具體如下，MV4-11、K562、Wi38細(xì)胞分別用含10％的胎牛血清的IMDM、RPMI-1640、MEM培養(yǎng)基，置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；其中，MV4-11是FLT3-ITD突變細(xì)胞株，而FLT3-ITD突變是臨床中急性髓系白血病的致癌驅(qū)動(dòng)基因突變，k562和WI-38是無(wú)FLT3表達(dá)的細(xì)胞株，K562是慢性粒細(xì)胞白血病，WI-38是正常組織肺纖維原細(xì)胞，后兩株細(xì)胞用于評(píng)測(cè)藥物的選擇性。
細(xì)胞活性測(cè)試：懸浮細(xì)胞，本申請(qǐng)中為MV4-11和K562細(xì)胞，在每孔3-8×103細(xì)胞的96孔板上進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)孔中加入100μL的培養(yǎng)基，然后加入10μL的化合物(一式三份)，在37℃下培養(yǎng)72h。細(xì)胞培養(yǎng)完以后，在每一孔板中加入20μL的5mg/mL MTT試劑再繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入50μL三聯(lián)液(5％異丙醇-10％SDS-12mmol/L HCl)來(lái)溶解氧化產(chǎn)物。在CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜。用多功能酶標(biāo)儀Synergy 2測(cè)570nm處OD值。按照以下公式計(jì)算被測(cè)化合物對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤抑制率＝(A570nm對(duì)照孔-A570nm給藥孔)/A570nm對(duì)照孔×100％。
貼壁細(xì)胞，本申請(qǐng)為Wi38細(xì)胞，在每孔2–7×103細(xì)胞的96孔板上進(jìn)行培養(yǎng)24h，同樣在培養(yǎng)基中加入相同當(dāng)量的化合物。72h培養(yǎng)以后，傾去培養(yǎng)液，用10％預(yù)冷的TCA固定固定細(xì)胞。4℃放置1h后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。在加入由1％冰醋酸配制的SRB 4mg/mL溶液100μL，室溫染色15min，去上清，用1％冰醋酸洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μL/孔10mM Tris-HCl，用多功能酶標(biāo)儀Synergy 2在560nm處檢測(cè)OD值。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)三復(fù)孔。按照以下公式計(jì)算被測(cè)化合物對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤抑制率＝(A560nm對(duì)照孔-A560nm給藥孔)/A560nm對(duì)照孔×100％
測(cè)試結(jié)果如下表1。
表1化合物對(duì)FLT3激酶和細(xì)胞抑制活性
討論：
從表1所示結(jié)果可以看出，與現(xiàn)有的FLT3抑制劑-MLN518以及AC220等相比，本發(fā)明的化合物對(duì)于FLT3激酶表現(xiàn)出優(yōu)異的抑制活性，大多數(shù)化合物對(duì)FLT3激酶的抑制IC50值在10nM以下。
此外，從細(xì)胞抑制活性可以看出，本發(fā)明化合物同時(shí)具備相當(dāng)優(yōu)異的選擇性。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。