本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)蛋白激酶活性、且用于治療或預(yù)防與蛋白激酶相關(guān)疾病的化合物。具體而言，本發(fā)明涉及一種硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，屬于調(diào)節(jié)間變性淋巴瘤激酶(ALK)活性的化合物，并提供了該類化合物的制備方法，及該類化合物用于治療或預(yù)防與ALK相關(guān)的疾病的制藥用途。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，其特點是細胞或變異細胞異常增殖。腫瘤細胞的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移等與細胞內(nèi)外的一系列信號傳導(dǎo)通路中某個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常密切相關(guān)。在這些信號傳導(dǎo)途徑中，一類重要的分子就是蛋白激酶，蛋白激酶的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，也是導(dǎo)致一系列其它與炎癥或增殖反應(yīng)有關(guān)的人類疾病的主要原因；開發(fā)靶向蛋白激酶的藥物是治療相關(guān)疾病的主要手段，已有很多藥物獲批上市，這類藥物具有靶點清晰、療效明確、安全性高的特點，因此越來越受到臨床醫(yī)療實踐的認可和支持。間變性淋巴瘤激酶(ALK)是蛋白激酶家族的重要成員，現(xiàn)有研究表明ALK的過度表達、突變和融合蛋白與多種腫瘤直接相關(guān)，包括但不限于成神經(jīng)細胞瘤、間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)、非小細胞肺癌(NSCLC)和炎性肌纖維母細胞瘤(IMT)等等。針對ALK融合基因的第一代藥物克唑替尼(Crizotinib)及第二代藥物色瑞替尼(Ceritinib)已分別于2011年和2014年上市，用于ALK陽性肺癌患者的治療獲得顯著的無進展生存和客觀有效率，證實了該靶點明確的臨床價值。盡管藥效顯著，由于腫瘤異質(zhì)性特點及腫瘤細胞對環(huán)境壓力的適應(yīng)，有越來越多的研究報道表明，腫瘤耐藥、疾病繼續(xù)發(fā)展幾乎依舊是此類患者必然的命運；此外，現(xiàn)有藥物的嚴重不良反應(yīng)，如消化道不良反應(yīng)發(fā)生率過高、肝臟毒性及QT間期延長等問題，也限制了該類藥物的應(yīng)用。有鑒于此，繼續(xù)研制具有良好ALK抑制活性及安全性的新化合物并將其開發(fā)上市以應(yīng)對上述問題具有重要的社會效益和價值。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的在于提供一種結(jié)構(gòu)新穎的硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，通過基團的取代修飾，合成并篩選出一系列具有抗腫瘤活性的化合物。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：一種硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，為具有如下結(jié)構(gòu)通式Ⅰ的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，R1選自Q為-O-、-S-或-NR13-；R2、R3、R4、R5、R6各自獨立地選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基或氨基；R7選自羥基或C1-6烷氧基；R0、R8、R9、R13各自獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、?；?、酰胺基、磺基、磺胺基、羥基、芳基、雜環(huán)基中的一種或幾種；R10選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基、芳基、雜環(huán)基、-(CH2)wOR11、-(CH2)wNR11R12、-CO2R11、-CONR11R12中的一種或幾種；R11、R12各自獨立地選自氫、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基或雜環(huán)基；雜環(huán)基為選自N、O雜原子的3-12元雜環(huán)；且n選自1～3中的任一整數(shù)值，L、p選自0～6中的任一整數(shù)值，k選自2～6中的任一整數(shù)值，m、w各自獨立地選自0～3中的任一整數(shù)值。優(yōu)選的，結(jié)構(gòu)通式Ⅰ中，R1選自Q為-O-、-S-或-NR13-；R2、R3、R4、R5、R6各自獨立地選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、氰基或氨基；R7選自羥基或C1-6烷氧基；R0、R8、R9、R13各自獨立地選自氫、C1-6烷基、?；?、酰胺基、磺基、磺胺基、羥基、苯基或雜環(huán)基；R10選自氫、C1-6烷基、氰基、苯基、雜環(huán)基、-(CH2)wOR11、-(CH2)wNR11R12、-CO2R11或-CONR11R12；R11、R12各自獨立地選自氫、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、苯基或雜環(huán)基；雜環(huán)基為選自N、O雜原子的3-6元雜環(huán)；且n選自1～3中的任一整數(shù)值，L、p選自0～6中的任一整數(shù)值，k選自2～6中的任一整數(shù)值，m、w各自獨立地選自0～3中的任一整數(shù)值。一種硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，還包括為具有如下結(jié)構(gòu)通式Ⅱ的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，R1選自Q為-O-、-S-或-NR13-；R2、R3、R4、R5、R6各自獨立地選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基或氨基；R7、R14各自獨立地選自羥基、C1-6烷氧基或R7、R14形成的環(huán)烷氧基；R0、R8、R9、R13各自獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、?；Ⅴ０坊⒒腔?、磺胺基、羥基、芳基、雜環(huán)基中的一種或幾種；R10選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基、芳基、雜環(huán)基、-(CH2)wOR11、-(CH2)wNR11R12、-CO2R11、-CONR11R12中的一種或幾種；R11、R12各自獨立地選自氫、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基或雜環(huán)基；雜環(huán)基為選自N、O雜原子的3-12元雜環(huán)；n選自0～3中的任一整數(shù)值，L、p選自0～6中的任一整數(shù)值，k選自2～6中的任一整數(shù)值，m、w各自獨立地選自0～3中的任一整數(shù)值。優(yōu)選的，結(jié)構(gòu)通式Ⅱ中，R1選自Q為-O-、-S-或-NR13-；R2、R3、R4、R5、R6各自獨立地選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、氰基或氨基；R7、R14各自獨立地選自羥基、C1-6烷氧基或R7、R14形成的環(huán)烷氧基；R0、R8、R9、R13各自獨立地選自氫、C1-6烷基、?；Ⅴ０坊?、磺基、磺胺基、羥基、苯基或雜環(huán)基；R10選自氫、C1-6烷基、氰基、苯基、雜環(huán)基、-(CH2)wOR11、-(CH2)wNR11R12、-CO2R11或-CONR11R12；R11、R12各自獨立地選自氫、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、苯基或雜環(huán)基；雜環(huán)基為選自N、O雜原子的3-6元雜環(huán)；n選自0～3中的任一整數(shù)值，L、p選自0～6中的任一整數(shù)值，k選自2～6中的任一整數(shù)值，m、w各自獨立地選自0～3中的任一整數(shù)值。優(yōu)選的，芳基為苯基、萘基或蒽基；所述的雜環(huán)基為嗎啉基、哌啶基、吡喃基、呋喃基、吡啶基或嘧啶基。優(yōu)選的，鹵素為氟、氯、溴、碘中的一種或幾種。一種硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，選自編號為REX-C1～REX-C23的如下特征化合物：REX-C1：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C2：4-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C3：7-((5-三氟甲氧基-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C4：7-((5-氯-2-((2-三氟甲氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C5：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-氯-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C6：7-((5-氟-2-((2-異丙氧基-5-氟-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C7：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C8：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(4-四氫吡喃基)-4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C9：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(嗎啉基甲基)環(huán)丙基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C10：(2-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯基)硼酸；REX-C11：(2-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)芐基)硼酸；REX-C12：8-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)氨基)-4-嘧啶基)胺)-3,4-雙氫-苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C13：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-(1-甲基哌啶基))苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C14：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-(1-乙酰胺基哌啶基))苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C15：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-(1-乙醇基哌啶基))苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C16：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C17：7-((5-甲基-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-(1-甲基哌啶基))苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C18：7-((5-三氟甲基-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-(1-甲基哌啶基))苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸；REX-C19：5-氯-N2-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)-N4-(2-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)甲基)苯基)-2,4-二氨基嘧啶；REX-C20：(2-((5-氯-2-((4-(1-(乙氧基甲基)環(huán)丙基)-2-異丙氧基-5-甲基苯基)氨基)4-嘧啶基)胺)芐基)硼酸；REX-C21：7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(4-四氫吡喃基)-4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)芐基)硼酸；REX-C22：5-氯-N2-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)-N4-(4-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)甲基)苯基)-2,4-二氨基嘧啶；REX-C23：(4-((5-氯-2-((4-(1-(乙氧基甲基)環(huán)丙基)-2-異丙氧基-5-甲基苯基)氨基)4-嘧啶基)胺)芐基)硼酸。前述編號為REX-C1～REX-C23的化合物，結(jié)構(gòu)式見下：本發(fā)明還提供了一種化合物為如前所述的通式Ⅰ和通式Ⅱ的合成方法，總反應(yīng)路線如下：通式Ⅰ：通式Ⅱ：基于上述總反應(yīng)路線，包括如下合成方案：(1)合成方案1：化合物1-3的合成步驟1：將化合物1-1溶解于有機溶劑，緩慢加入催化劑，氮氣置換、通氫氣，加熱反應(yīng)N小時；反應(yīng)結(jié)束后，過濾去除多余的催化劑，干燥有機溶劑，減壓、干燥，得到化合物1-2。步驟2：將化合物1-3溶解于有機溶劑，緩慢加入氫化鈉和2,4,5-三氯嘧啶，氮氣置換、加熱反應(yīng)N小時；反應(yīng)結(jié)束后，加少量冰水破壞多余氫化鈉，加萃取劑，萃取、干燥、減壓、旋干，得到化合物1-3。合成方案1中，有機溶劑選自N,N二甲基甲酰胺、四氫呋喃、甲醇、二氧六環(huán)中的一種或幾種；萃取劑選自純水、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或幾種；催化劑選自鈀炭、四(三苯基膦)鈀、二氧化鉑中的一種或幾種。合成方案1中，加熱反應(yīng)的溫度為60～120℃，優(yōu)選60℃、120℃；反應(yīng)時間為10～14小時，優(yōu)選10小時、14小時。(2)合成方案2：化合物2-3的合成步驟1：將(即化合物2-1)和溶解于按比例配置的有機溶劑與水的混合液，緩慢加入磷酸鉀和催化劑，氮氣置換、加熱反應(yīng)N小時；反應(yīng)結(jié)束后，加萃取劑，萃取、干燥、減壓、旋干，得到化合物2-2。步驟2：將化合物2-2溶解于有機溶劑，加入催化劑，氮氣置換、通氫氣，加熱反應(yīng)N小時；反應(yīng)結(jié)束后，減壓過濾去除多余的催化劑，減壓、旋干，得到化合物2-3。合成方案2中，有機溶劑選自N,N二甲基甲酰胺、甲醇、異丙醇、二氧六環(huán)中的一種或幾種；萃取劑選自純水、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或幾種；催化劑選自鈀炭、四(三苯基膦)鈀、二氧化鉑中的一種或幾種。合成方案2中，加熱反應(yīng)的溫度為100～120℃，優(yōu)選100℃；反應(yīng)時間為12～16小時，優(yōu)選12小時、16小時。(3)合成方案3：目標化合物的合成步驟1：將合成方案1制得的化合物1-4、合成方案2制得的化合物2-3溶解于有機溶劑，繼續(xù)加入碳酸銫和催化劑，氮氣置換、微波加熱反應(yīng)N小時；反應(yīng)結(jié)束后，減壓過濾去除多余的催化劑，過柱層析，得到目標化合物(即通式Ⅰ或通式Ⅱ的化合物)。合成方案3中，有機溶劑選自N,N二甲基甲酰胺、四氫呋喃、甲醇、二氧六環(huán)中的一種或幾種；催化劑選自鈀炭、四(三苯基膦)鈀、二氧化鉑、醋酸鈀、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽中的一種或幾種。合成方案3中，反應(yīng)時間為0.5～1小時，優(yōu)選0.5小時。在如前所述的合成方案1、合成方案2、合成方案3中，R1選自Q為-O-、-S-或-NR13-；R2、R3、R4、R5、R6各自獨立地選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基或氨基；R7選自氫、C1-6烷基、酰胺基、羥基、芳基、雜環(huán)基中的一種或幾種；R0、R8、R9、R13各自獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、酰基、酰胺基、磺基、磺胺基、羥基、芳基、雜環(huán)基中的一種或幾種；R10選自氫、鹵素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氰基、芳基、雜環(huán)基、-(CH2)wOR11、-(CH2)wNR11R12、-CO2R11、-CONR11R12中的一種或幾種；R11、R12各自獨立地選自氫、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基或雜環(huán)基；雜環(huán)基為選自N、O雜原子的3-12元雜環(huán)；且n選自1～6中的任一整數(shù)值，L、p選自0～6中的任一整數(shù)值，k選自2～6中的任一整數(shù)值，m、w各自獨立地選自0～3中的任一整數(shù)值。本發(fā)明所述的“化合物”，包括所有立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和同位素。本發(fā)明所述的“化合物”，可以是不對稱的，例如，具有一個或多個立體異構(gòu)體。除非另有說明，所有立體異構(gòu)體都包括，如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。本發(fā)明中含有不對稱碳原子的化合物，可以光學(xué)活性純的形式或外消旋形式被分離出來。光學(xué)活性純的形式可以從外消旋混合物拆分，或通過使用手性原料或手性試劑合成。本發(fā)明所述的“化合物”，還包括互變異構(gòu)體形式?；プ儺悩?gòu)體形式來源于一個單鍵與相鄰的雙鍵交換并一起伴隨一個質(zhì)子的遷移。本發(fā)明還包括所有同位素的原子，無論是在中間體或最后的化合物。同位素的原子包括具有相同的原子數(shù)、但不同質(zhì)量數(shù)的。例如，氫的同位素包括氘和氚。含有前述通式結(jié)構(gòu)的化合物，本文中所用的術(shù)語具有如下含義：術(shù)語“鹵素”，指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟、氯或溴。術(shù)語“氰基”，指-CN。術(shù)語“羥基”，指-OH。術(shù)語“烷基”，指由碳原子和氫原子組成的直鏈或支鏈的飽和烴基團，如C1-20烷基，優(yōu)選為C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基(包括正丙基和異丙基)、丁基(包括正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基)、戊基(包括正戊基、異戊基、新戊基)、正己基、2-甲基己基等。所述烷基可以是非取代的、或是被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、雜芳基、氨基、鹵素、磺?；?、亞磺?；?、磷酰基。術(shù)語“氨基”，指-NH2、-NH(烷基)和-N(烷基)2，烷基的含義如前所述。-NH(烷基)的結(jié)構(gòu)形式為具體例子包括但不限于-NHCH3、-NHCH(CH3)2、-NHC2H5等；-N(烷基)2的結(jié)構(gòu)形式為具體例子包括但不限于-N(CH3)2、-N(CH3)C2H5等。術(shù)語“芳基”，指具有完全共軛的π電子體系的全碳單環(huán)或稠合環(huán)，通常具有6-14個碳原子，優(yōu)選具有6-12個碳原子，最優(yōu)選具有6個碳原子。芳基可以是非取代的、或被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、芳烷基、氨基、鹵素、磺?；喕酋；⒘柞；?。非取代的芳基的實例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。術(shù)語“雜環(huán)基”，指具有3-12個(整數(shù))環(huán)原子的單環(huán)或稠合環(huán)，其中有1、2或3個環(huán)原子選自N、O中的一個或多個，其余環(huán)原子為C，且具有完全共軛的π-電子體系。雜環(huán)基可以是非取代的、或被一個或多個取代基所取代，取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羥基、羰基、羧基、芳基、芳烷基、氨基、鹵素、磺?；?、亞磺酰基、磷?；?。非取代的雜環(huán)基的實例包括但不限于吡咯基、吲哚基、吡咯烷基、咪唑基、吡唑基、四唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、哌啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、呋喃基、吡喃基、嗎啉基。本發(fā)明中的通式結(jié)構(gòu)Ⅰ，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包含如前所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成份，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明所述的“藥物組合物”，指一種或多種本發(fā)明的化合物或其鹽與在本領(lǐng)域中通常接受的用于將生物活性化合物輸送至有機體(例如人)的載體的制劑。藥物組合物的目的是有利于對有機體給藥輸送。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”，指與活性成份共同給藥的、且有利于活性成份給藥的物質(zhì)，包括但不限于國家食品藥品監(jiān)督管理局許可的可接受的用于人或動物(例如家畜)的任何助流劑、增甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、崩解劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。例如包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和各類淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。本發(fā)明所述的藥物組合物，可配制成固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)制劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸浮劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等等。本發(fā)明所述的藥物組合物，可以采用本領(lǐng)域熟知的方法制造，如常規(guī)的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣藥丸法、磨細法、乳化法、冷凍干燥法等。本發(fā)明所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物組合物的給藥途徑，包括但不限于口服、直腸、透黏膜、經(jīng)腸給藥，或者局部、經(jīng)皮、吸入、腸胃外、舌下、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)給藥。優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥。對于口服給藥，可以通過將活性化合物與本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受的載體混合，來配制該藥物組合物。這些載體能使本發(fā)明的化合物被配制成片劑、丸劑、錠劑、糖衣劑、膠囊劑、液體、凝膠劑、漿劑、懸浮劑等，以用于對患者的口服給藥。例如，用于口服給藥的藥物組合物，可采用如下方式獲得片劑：將活性成分與一種或多種固體載體合并，如果需要將所得混合物制粒，并且如果需要加入少量的賦形劑加工成混合物或顆粒，以形成片劑或片芯。片芯可與任選適合腸溶的包衣材料結(jié)合，加工成更有利于有機體(例如人)吸收的包衣制劑形式。本發(fā)明還提供了一種如前所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療或預(yù)防與蛋白激酶相關(guān)的疾病的藥物中的用途。一種如前所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療或預(yù)防與間變性淋巴瘤激酶(ALK激酶)相關(guān)的疾病的藥物中的用途。優(yōu)選的，前述與ALK激酶相關(guān)的疾病選自細胞增殖性疾病，優(yōu)選腫瘤。優(yōu)選的，前述細胞增殖性疾病包括非小細胞肺癌、間變性大細胞淋巴瘤、炎性肌纖維母細胞瘤、鼻咽癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、彌漫大B細胞淋巴瘤、肝癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、卵巢癌、全身組織細胞增生癥和神經(jīng)母細胞瘤。本發(fā)明中，發(fā)明人對合成得到的一系列的硼基取代的苯胺類化合物，進行ALK激酶抑制活性及ALK相關(guān)突變位點的結(jié)合率測定實驗，發(fā)現(xiàn)部分化合物對ALK表現(xiàn)出較高的抑制活性，對ALK突變位點(如L1196M、F1174L、C1156Y)表現(xiàn)出較好的結(jié)合率，對ROS1也具有顯著的抑制活性；此外，還進行了肺癌細胞株的細胞增殖實驗和斑馬魚表型篩選實驗，發(fā)現(xiàn)部分化合物在體內(nèi)的抗腫瘤活性顯著。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的硼基取代的苯胺類蛋白激酶抑制劑，基于靶標的合理藥物設(shè)計，通過基團的取代修飾，獲得了一系列結(jié)構(gòu)新穎的化合物；并結(jié)合激酶活性實驗、細胞增殖實驗、斑馬魚表型篩選實驗，優(yōu)化篩選出一系列具有抗腫瘤活性的化合物。因此，可用于開發(fā)成新一代的蛋白激酶抑制劑，對于靶向治療或預(yù)防由ALK介導(dǎo)的疾病具有極大的臨床應(yīng)用價值，市場潛力可觀。附圖說明圖1為Albino斑馬魚虹膜色素細胞在脊背上的分布圖圖2為REX-C1/REX-C3對斑馬魚虹膜色素細胞影響的量效關(guān)系圖(mean±sem)圖3為REX-C1/REX-C3對斑馬魚虹膜色素細胞的影響圖具體實施方式以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步的描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明提供的目標化合物制備方法中，液相色譜采用WatersSymmetryC18色譜柱。薄層色譜采用GF254(0.25毫米)。核磁共振色譜(NMR)使用Bruker-400核磁共振儀測定；液質(zhì)連用(LC/MS)使用WatersZQ質(zhì)譜檢測器(柱子：WatersSymmetryC18，毫米，5微米，35℃)，采用ESI(+)離子模式。此外，凡涉及易氧化或易水解的原料的所有操作都在氮氣保護下進行。除非另有說明，本發(fā)明使用的原料都是市售原料、無需進一步純化可以直接使用。實施例17-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸【編號為REX-C1】的制備合成路線如下：合成方案1：中間體7-((2,5-二氯嘧啶基)氨基)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸(即化合物1-5)的合成步驟1：3-硝基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代硼基)芐基乙酸(即化合物1-2)的制備將原料2-溴-3-硝基芐乙酸(即化合物1-1,11.3g,40.0mmol)溶解在1,4二氧六環(huán)(150.0mL)中，緩慢加入乙酸鉀(13.7g,140.0mmol)，1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀(2.6g,3.0mmol),雙(頻哪醇合)二硼(15.2g,60.0mmol)，氮氣置換，保持溫度在90～95℃反應(yīng)16小時；反應(yīng)結(jié)束后傾入到500.0mL水中，用乙酸乙酯萃取，干燥、濃縮、硅膠柱色譜分離，得到化合物1-2(13.0g)，收率：98.0％。MSm/z[ESI]：322.1[M+1]。步驟2：中間體7-硝基苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸(即化合物1-3)的制備將化合物1-2(6.4g,20.0mmol)溶于甲醇(200.0mL)，滴加5.0mol/L的氫氧化鈉溶液(8.0mL,40.0mmol)，保持溫度在60～70℃反應(yīng)24分鐘；反應(yīng)結(jié)束后回溫到室溫，加入3.0mol/L鹽酸水破壞，用水和乙酸乙酯提取，有機相用碳酸氫鈉洗滌二次，無水硫酸鈉干燥，濃縮得到化合物1-3(2.2g)，收率：63.0％。MSm/z[ESI]：179.2[M+1]。步驟3：中間體7-氨基苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸(即化合物1-4)的制備將化合物1-3(2.2g,12.0mmol)和10％鈀炭(即Pd/C,0.5g)加到干燥的甲醇(25.0mL)中，氮氣置換、通氫氣，于25℃反應(yīng)12小時；冷卻后用硅藻土過濾、分離，無水硫酸鈉干燥、濃縮，得到化合物1-4(1.1g)，收率：58.0％。MSm/z[ESI]：150.2[M+1]。步驟4：7-((2,5-二氯嘧啶基)氨基)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸(即化合物1-5)的制備在冰水浴條件下，將化合物1-4(1.1g,7.0mmol)溶解于DMF(30.0mL)中，反應(yīng)體系中緩慢加入氫化鈉(0.18g,7.0mmol)并于0℃攪拌15分鐘，再將2,4,5-三氯嘧啶(1.2g,6.0mmol)滴加到反應(yīng)體系中并于25℃攪拌過夜；冷卻后傾入50.0mL水中，用乙酸乙酯萃取，干燥、濃縮、硅膠柱色譜分離，得到化合物1-5(1.0g)，收率：53.0％。MSm/z[ESI]：296.2[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.531(s,1H),8.940(s,1H),8.462(s,1H),8.021(d,1H,J＝8.4Hz),7.554-7.548(m,1H),7.218-7.199(d,1H,J＝7.6Hz),5.040(s,2H)。合成方案2：中間體4-(4-氨基5-異丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-叔丁氧碳酸酯(即化合物2-4)的合成步驟1：中間體1-氯-5-異丙氧基-2-甲基-4-硝基苯(即化合物2-2)的制備將原料2-氯-4-氟-5-硝基甲苯(即化合物2-1,14.2g,74.9mmol)溶解于異丙醇(100.0mL)，加入碳酸銫(122.0g,374.4mmol)，加畢，于60℃下反應(yīng)過夜；反應(yīng)結(jié)束后，濃縮、除去異丙醇，傾入500.0mL水中，用乙酸乙酯提取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到化合物2-2(14.3g)，收率：82.0％。MSm/z[ESI]：230.6[M+1]。1H-NMR(400MHz,CDCl3)：δ＝7.880(s,1H)，7.498(s,1H)，4.871-4.795(m,1H)，2.294(s,1H)，1.281-1.266(d,J＝6.0Hz,6H)。步驟2：中間體4-(5-異丙氧基-2-甲基-4-硝基-苯基)-吡啶(即化合物2-3)的制備將4-吡啶硼酸(14.7g,120.0mmol)溶于二氧六環(huán)與水的混合液(兩者的體積比v/v＝2:1)，氮氣置換、攪拌5分鐘。將三(1,3-二亞芐基丙酮)合二鈀(10.0g,10.9mmol)，2-雙環(huán)己基膦-2',6'-二甲氧基-1,1'-二聯(lián)苯(11.2g,27.2mmol)，化合物2-2(25.0g,109.0mmol)和磷酸鉀(46.2g,218.0mmol)在氮氣保護下依次加入，反應(yīng)回流過夜。反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，1.0mol的飽和NaOH洗滌二次，用乙酸乙酯提取。有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮、硅膠柱色譜分離，得到化合物2-3(20.0g)，收率：67.4％。MSm/z[ESI]：272.6[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.698-8.683(dd,J1＝1.6Hz,J2＝4.4Hz1H)，7.831(s,1H)，7.474-7.459(dd,J1＝2.0Hz,J2＝4.8Hz1H)，7.230(s,1H)，4.912-4.822(m,1H)，2.196(s,1H)，1.285-1.270(d,J＝6.0Hz,6H)。步驟3：中間體4-(4-氨基5-異丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-叔丁氧碳酸酯(即化合物2-4)的制備將化合物2-3(43.8g,161.0mmol)溶解于乙酸(400.0mL)和三氟乙酸(25.0mL)的混合液，加入含鉑量40％的二氧化鉑(17.6g)，氮氣置換、通氫氣、攪拌5分鐘，加壓到1個大氣壓，反應(yīng)36小時。反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，過濾、去除二氧化鉑，加入100.0mL水稀釋，用乙酸乙酯提?。挥袡C相用1.0mol的飽和NaOH洗滌二次，無水硫酸鈉干燥、濃縮、硅膠柱色譜分離，得到化合物2-4(34.0g)，收率：60.6％。MSm/z[ESI]：348.2[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝6.575(s,1H)，6.432(s,1H)，4.439-4.345(m,2H)，4.083-4.063(m,2H)，2.818-2.81(m,2H)，2.122(s,3H)，1.620-1.590(m,2H)，1.423(s,9H)，1.401-1.388(m,2H)，1.231-1.216(m,6H)。合成方案3：目標化合物7-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸(即REX-C1)的合成步驟1：中間體4-(4-((1-羥基-1,3苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸基)-2-嘧啶氨基)-5-異丙氧基-2-甲苯基)哌啶-1-羥酸叔丁酯(即化合物3-1)的制備將化合物2-4(0.9g,2.7mmol)、化合物1-5(0.8g,2.7mmol)、4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(0.3g,0.5mmol)、醋酸鈀(63.0mg,0.3mmol)和碳酸銫(2.7g,8.1mmol)溶解于二氧六環(huán)(50.0mL)，并加入封管中，氮氣置換，于95℃反應(yīng)18小時。反應(yīng)結(jié)束后，旋干溶劑，加入乙酸乙酯和水，萃取、有機相干燥、過硅膠柱色譜純化，得到化合物3-1(0.2g)，收率：16.0％。MSm/z[ESI]：608.1[M+1]。步驟2：目標化合物(即REX-C1)的制備攪拌條件下，將化合物3-1(0.2g，0.4mmol)加入二氯甲烷(10.0mL)中，滴加三氟乙酸(2mL)，室溫下攪拌過夜。先用5.0％碳酸氫鈉水溶液調(diào)至pH＞10.0，再用乙酸乙酯萃取、干燥、旋干，得到目標化合物REX-C1(80.0mg)，收率：34.0％。MSm/z[ESI]：508.1[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.444(s,1H),8.176(m,2H),7.976(s,1H),7.600(s,1H),7.320-7.315(m,1H),7.086-7.066(m,1H),6.835(s,1H),5.007(s,2H),4.540-4.445(m,1H),3.060-3.055(m,2H),2.740-2.735(m,1H),2.630-2.628(m,2H),2.095(s,3H),1.650-1.550(m,4H),1.250-1.235(d,6H,J＝6Hz)。實施例24-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸【編號為REX-C2】的制備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1“化合物1-5的合成”中，步驟1原料2-溴-6-硝基芐基乙酸代替實施例1的2-溴-3-硝基芐乙酸進行反應(yīng)，其余合成方法同實施例1的合成方案1，多步反應(yīng)后即得化合物1-5，收率：28.0％。MSm/z[ESI]：296.4[M+1]。在合成方案2“化合物2-4的合成”中，原料2-氯-4-氟-5-硝基甲苯(即化合物2-1)、其余合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-4，收率：62.8％。MSm/z[ESI]：348.2[M+1]。在合成方案3“目標化合物REX-C2的合成”中，將本實施例制得的化合物1-5和化合物2-4，按照實施例1的合成方案3制備，即得目標化合物REX-C2，收率：9.0％。MSm/z[ESI]：508.1[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝9.478(s,1H),8.725-8.690(d,1H,J＝14Hz),8.499-8.463(m,1H),8.236(s,1H),8.188(s,1H),7.716-7.699(d,1H,J＝6.8Hz),7.475-7.741(m,2H),7.314(s,1H),6.699(s,1H),4.916(s,2H),4.514(m,1H),3.339-3.335(m,2H),3.020-3.015(m,2H),2.873-2.870(m,1H),1.850(s,3H),1.754-1.740(m,4H),1.257-1.242(d,6H,J＝6Hz)。實施例37-((5-三氟甲氧基-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(4-哌啶基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸【編號為REX-C3】的制備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1“化合物1-5的合成”中，步驟4原料2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶代替實施例1的2,4,6-三氯嘧啶進行反應(yīng)，其余合成方法同實施例1的合成方案1，多步反應(yīng)后即得化合物1-5，收率：31.0％。MSm/z[ESI]：296.4[M+1]。在合成方案2“化合物2-4的合成”中，原料2-氯-4-氟-5-硝基甲苯(即化合物2-1)、其余合成方法均同實施例1的合成方案2，即得化合物2-4，收率：62.8％。MSm/z[ESI]：348.2[M+1]。在合成方案3“目標化合物REX-C3的合成”中，將本實施例制得的化合物1-5和化合物2-4，按照實施例1的合成方案3制備，即得目標化合物REX-C3，收率：18.0％。MSm/z[ESI]：542.1[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝9.404-9.554(m,2H),8.613(s,1H),7.751-7.902(brs,1H),7.341-7.385(m,2H),7.203-7.261(m,1H),6.851(s,1H),4.995(s,2H),4.503-4.574(m,1H),3.311-3.392(m,2H),2.962-3.093(m,2H),2.083(s,3H),1.932-1.993(m,2H),1.771-1.862(m,2H),1.241-1.262(d,J＝6Hz,6H).實施例47-((5-氯-2-((2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(嗎啉基甲基)環(huán)丙基)苯基)胺)4-嘧啶基)胺)苯并[c][1,2]氧代1(3H)硼酸【編號為REX-C9】的制備合成路線如下：如本實施例提供的合成路線所述，在合成方案1“化合物1-5的合成”中，原料2-溴-3-硝基芐乙酸(即化合物2-1)、其余合成方法均同實施例1的合成方案1，即得化合物1-5，收率：28.0％。MSm/z[ESI]：296.4[M+1]。合成方案2：中間體2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(亞甲基嗎啉基)環(huán)丙基)苯胺(即化合物2-5)的合成步驟1：中間體1-(2-甲基-4-硝基-5-異丙氧基)環(huán)丙基苯乙酸(即化合物2-2)的制備將原料1-(2-甲基-4-硝基-5-羥基)環(huán)丙基苯乙酸甲酯(即化合物2-1,1g,3.4mmol)和氫氧化鋰(571mg,13.6mmol)溶解在甲醇(50ml)和水(10ml)中，反應(yīng)加熱到80℃攪拌60分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，加水加1N的鹽酸調(diào)節(jié)pH＝4，過濾，得到化合物2-2(750mg)，收率：79％。MSm/z[ESI]：280.2[M+1]。步驟2：中間體(1-(5-異丙氧基-2-甲基-4-硝基)環(huán)丙基)苯乙酸嗎啉(即化合物2-3)的制備將化合物2-2(600mg,2.15mmol)，三乙胺(653mg,6.45mmol)，HATU(1.064g,2.8mmol)，嗎啉(281mg,3.23mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(50ml)中，室溫反應(yīng)3小時。反應(yīng)結(jié)束后，加水加乙酸乙酯萃取，干燥旋干，得到化合物2-3(673mg)，收率：90％。MSm/z[ESI]：347.4[M+1]。步驟3：中間體2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(亞甲基嗎啉基)環(huán)丙基)硝基苯(即化合物2-4)的制備將化合物2-3(673mg,1.93mmol)溶解在四氫呋喃(50ml)中，室溫滴加三氟化硼(14.4ml,14.4mmol,1MinTHF)。反應(yīng)結(jié)束后，加水加乙酸乙酯萃取，干燥、旋干，得到化合物2-4(450mg)，收率：69％。MSm/z[ESI]：333.4[M+1]。步驟4：中間體2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-(亞甲基嗎啉基)環(huán)丙基)苯胺(即化合物2-5)的制備將化合物2-4(450mg,1.35mmol)，Pd/C(238mg,58.8％inH2O)溶解在甲醇(25ml)中，氫氣置換，室溫過夜。反應(yīng)結(jié)束后，過濾去除鈀炭，干燥、旋干，得到化合物2-5(400mg)，收率：97％。MSm/z[ESI]：305.4[M+1]。在合成方案3“目標化合物REX-C9的合成”中，將本實施例制得的化合物1-5和化合物2-5，按照實施例1的合成方案3制備，即得目標化合物REX-C9，收率：20.0％。MSm/z[ESI]：564.1[M+1]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.382-8.360(d,J＝8.8Hz,1H),8.299(s,1H),8.061(s,1H),8.012(s,1H),7.460(s,1H),7.402-7.360(t,J＝8.4Hz,1H),6.881-6.862(d,J＝7.6Hz,1H),6.805(s,1H),4.999(s,2H),4.607-4.547(m,1H),3.721-3.698(t,J＝4.6Hz,4H),2.594(m,6H),2.478(s,3H),2.044-2.027(m,1H),1.442-1.427(d,J＝6Hz,6H),0.886(m,2H),0.811(m,2H).實施例5ALK激酶抑制活性及相關(guān)突變位點結(jié)合率的測定對上述實施例1～4制得的化合物REX-C1、REX-C2、REX-C3和REX-C9，采用(FRET)方法來測定前述化合物對ALK激酶抑制活性，該抑制活性采用IC50這一指標來表示，IC50即ALK激酶的活性被抑制50％時的化合物的濃度。同時采用EuKinaseBingingAssay(TR-FRET)測定了本發(fā)明的化合物對ALK相關(guān)突變位點如ALKL1196M的結(jié)合率測定，也采用IC50這一指標來表示。LanthaScreenEu激酶結(jié)合實驗通過添加Eu標記抗體或者抗標簽抗體檢測AlexaFluor偶聯(lián)物或激酶“示蹤劑”結(jié)合。示蹤劑和抗體與激酶的結(jié)合導(dǎo)致高度的FRET，反之使用激酶抑制因子代替示蹤劑會造成FRET丟失。本發(fā)明利用Lifetechnology公司的kinaseassay平臺進行測定，測定結(jié)果見表一。結(jié)果表明，本發(fā)明提供的化合物有較好的ALK抑制活性，并且對ALK的突變位點(如ALKL1196M)也有較好的結(jié)合率。表一實施例化合物的ALK抑制活性及ALKL1196M結(jié)合率測定ALKIC50(nM)ALKF1196MIC50(nM)REX-C180.992.3REX-C231.551.3REX-C332.617.6REX-C910701040進一步的，本發(fā)明擇選化合物REX-C1，利用Lifetechnology公司的kinaseassay平臺測定了前述化合物在100nM濃度下對相關(guān)激酶的活性測定，測定結(jié)果見表二。結(jié)果表明，本發(fā)明提供的化合物REX-B2、REX-B3和REX-B4對ALKF1174L、ALKC1156Y表現(xiàn)出較好的結(jié)合率，同時對LTK、ROS1表現(xiàn)出較高的抑制活性。表二實施例化合物在100nM濃度下對相關(guān)激酶的活性測定實施例6細胞增殖實驗(CellTiterGLO法檢測)待測化合物：本發(fā)明實施例1～4制得的化合物REX-C1、REX-C2、REX-C3和REX-C9。細胞株：人間變性大細胞淋巴瘤細胞株Karpas-299、非小細胞肺癌細胞株NCI-H3122，購自南京科佰生物科技有限公司。方法：收集對數(shù)生長期細胞，計數(shù)，用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞，調(diào)整細胞濃度至合適濃度(依照細胞密度優(yōu)化試驗結(jié)果確定)，接種96孔板，每孔加100μl細胞懸液。細胞在37℃，100％相對濕度，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育24小時。用培養(yǎng)基將待測化合物稀釋至所設(shè)置的相應(yīng)作用濃度，按25μl/孔加入細胞?；衔镒饔媒K濃度從10μM開始，3倍梯度稀釋，共10個濃度點。細胞置于37℃，100％相對濕度，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育72小時。孵育結(jié)束后按照CellTiterGlo試劑說明書要求，在細胞版中加入配制好的試劑，充分混勻后室溫避光孵育10分鐘。將細胞板放入讀板儀進行分析，設(shè)定讀取化學(xué)發(fā)光并記錄數(shù)據(jù)。計算抑制率。根據(jù)各化合物不同濃度對各細胞生長的抑制率，用graphad6.0計算各化合物在各細胞上的IC50值。計算公式為：結(jié)果：見表三。表三CellTiterGLO法檢測實施例化合物對Karpas-299/NCI-H3122細胞株的細胞增殖IC50值IC50(μM)Karpas-299NCI-H3122REX-C1<1<0.2REX-C2<1<1REX-C3<0.3<0.05REX-C9<0.5<0.5實施例8斑馬魚表型篩選實驗斑馬魚是一種脊椎動物，與人類基因同源性高達85％，其信號傳導(dǎo)通路與人類基本近似，生物結(jié)構(gòu)和生理功能與哺乳動物高度相似；其體積小、發(fā)育迅速、胚胎透明、產(chǎn)卵量高，這些獨特優(yōu)勢使得斑馬魚成為人類疾病研究和活體高通量藥物篩選的最佳模式生物體之一。其中，間變性淋巴瘤激酶ALK(Anaplasticlymphomakinase)在人類與斑馬魚中基因同源性達76％。斑馬魚的白細胞酪氨酸激酶ltk(leukocytetyrosinekinase)調(diào)控斑馬魚虹膜色素細胞的生成(Lopes,S.S.,Yang,X.,etal.(2008).Leukocytetyrosinekinasefunctionsinpigmentcelldevelopment.PLoSGenet,4.)，虹膜色素細胞在斑馬魚中表現(xiàn)為一種銀色小體，分布在頭部、眼睛、脊柱外側(cè)(反射光觀察)，利用黑色素缺失的Albino斑馬魚，在透色光中可以觀察到銀色小體為黑色，見圖1。ALK與LTK是sisterkinase，研究者發(fā)現(xiàn)注射外源性的ALK質(zhì)粒同樣可以調(diào)節(jié)虹膜色素細胞的生成，實驗結(jié)果也表明ALK抑制劑大多有LTK活性，可以抑制虹膜色素細胞的生成(Rodrigues,F.S.,Yang,X.,Nikaido,M.,Liu,Q.,&Kelsh,R.N.(2012).Asimple,highlyvisualinvivoscreenforanaplasticlymphomakinaseinhibitors.ACSChemBiol,7,1968-1974.)。因此，利用這一原理，我們考察化合物對正常斑馬魚虹膜色素細胞的影響，來探討化合物在體內(nèi)抗ALK活性的強弱。實驗(一)化合物對正常斑馬魚虹膜色素細胞的影響方案：選取6hpf(hourspostfertilization)的魚卵，隨機分組，然后加入各濃度的受試藥物，至3dpf(dayspostfertilization)時進行圖象采集，然后利用ImageJ軟件分析泄殖孔至尾鰭部位斑馬魚脊背側(cè)虹膜色素細胞的IOD(integratedoptiondensity)值，采用Graphpadprism6.0進行Dunnett’sT-檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，p<0.05表明具有統(tǒng)計學(xué)差異，虹膜色素抑制率計算公式如下：計算結(jié)果見表四、表五，化合物REX-C1/REX-C3對斑馬魚虹膜色素細胞影響的量效關(guān)系圖(mean±sem)見圖2，化合物REX-C1/REX-C3對斑馬魚虹膜色素細胞的影響圖見圖3。表四化合物REX-C1對斑馬魚虹膜色素細胞的影響(mean±sem)comparedwithcontrol,*,p<0.05；**,p<0.01表五化合物REX-C3對斑馬魚虹膜色素細胞的影響(mean±sem)comparedwithcontrol,*,p<0.05；**,p<0.01。當前第1頁1 2 3