本發(fā)明涉及一種化合物及其制備方法和應(yīng)用，具體一種具有抗腫瘤活性的化合物及其制備方法和應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中國專利201110055102.X公開了抗癌先導(dǎo)化合物T-OA，藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，先導(dǎo)物T-OA能較顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞的體外增殖，而對(duì)正常細(xì)胞毒性較低；體內(nèi)對(duì)S180小鼠肉瘤的生長有顯著抑制活性，并可提高荷瘤小鼠的脾指數(shù)，均呈劑量依賴關(guān)系。通過計(jì)算腫瘤橫截面積，可以清晰觀察到腫瘤體積、腫瘤橫截面積比明顯縮小，而毒副作用又顯著低于環(huán)磷酰胺。對(duì)腫瘤凋亡NF-KB信號(hào)通路研究發(fā)現(xiàn)，T-OA給藥后可以顯著降低肉瘤小鼠P65、COX-2和VEGF的表達(dá)，并可抑制金屬蛋白酶-2的活性；此外，T-OA還可明顯抑制雞胚尿囊膜新生血管增生，具有抗血管生成的作用。單日連續(xù)給予T-OA最大耐受量6000mg·kg-1，觀察14天內(nèi)，小鼠未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，優(yōu)于環(huán)磷酰胺。
本發(fā)明以具有抗腫瘤、抗肝病生物活性的齊墩果酸(OA)、甘草次酸(GA)、熊果酸(UA)、白樺脂酸(BA)及天然藥物川芎嗪(TMP)為起始原料，進(jìn)行化學(xué)拼合合成本發(fā)明化合物。對(duì)該類化合物的活性評(píng)價(jià)主要圍繞抗腫瘤(尤其肝癌)方面展開，分別測(cè)試了類似物對(duì)5種癌癥細(xì)胞系 (Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7)和正常細(xì)胞系(MDCK)的細(xì)胞毒活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是提供一種具有結(jié)構(gòu)通式1的化合物。
本發(fā)明的目的之二是提供一種具有結(jié)構(gòu)通式2的化合物。
本發(fā)明的目的之三是提供通式化合物1、2的制備方法。
本發(fā)明的目的之四是提供通式化合物1、2在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的之五是提供一種具有抗腫瘤作用的藥物組合物。
本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
具有抗腫瘤作用的式1化合物，
式1
其中，
R1選自-OH、-X中的一種；
R2選自-H、＝O中的一種；
R3、R4選自-H、-CH3中的一種；
R5、R6選自-CH3、-Y、-Z、-COOH中的一種；
且R1、R5、R6中至少有一個(gè)包含-X、-Y或-Z；
上述-X、-Y和-Z結(jié)構(gòu)式如下：
具有抗腫瘤作用的式2化合物，
式2；
其中，R1選自-OH、-X中的一種；
R2選自-COOH、-Y、-Z中的一種；
且R1、R2中至少有一個(gè)包含-X、-Y或-Z；
上述-X、-Y和-Z結(jié)構(gòu)式如下：
進(jìn)一步，本發(fā)明化合物編號(hào)及結(jié)構(gòu)式如下：
本發(fā)明化合物按如下方法制備：
化合物TBA-X1的制備方法：將齊墩果酸溶于有機(jī)溶劑，與溴代川芎嗪 (化合物1)在堿性條件下生成TBA-X1；
化合物TBA-X2的制備方法：將熊果酸溶于有機(jī)溶劑，與溴代川芎嗪(化合物1)在堿性條件下生成TBA-X2；
化合物TBA-X3的制備方法：將甘草次酸溶于有機(jī)溶劑，與溴代川芎嗪(化合物1)在堿性條件下生成TBA-X3；
化合物TBA-X4的制備方法：將白樺脂酸溶于有機(jī)溶劑，與溴代川芎嗪(化合物1)在堿性條件下生成TBA-X4；
化合物TBA-X5的制備方法：將TBA-X1溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X5；
化合物TBA-X6的制備方法：將TBA-X2溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X6；
化合物TBA-X7的制備方法：將TBA-X3溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X7；
化合物TBA-X8的制備方法：將TBA-X4溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X8；
化合物TBA-X9的制備方法：將芐基保護(hù)的齊墩果酸(化合物4)溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X9；
化合物TBA-X10的制備方法：將芐基保護(hù)的熊果酸(化合物5)溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X10；
化合物TBA-X11的制備方法：將芐基保護(hù)的甘草次酸(化合物6)溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X11；
化合物TBA-X12的制備方法：將芐基保護(hù)的白樺脂酸(化合物7)溶于有機(jī)溶劑，與川芎嗪酸(化合物2)在縮合劑、催化劑作用下生成TBA-X12；
化合物TBA-X13的制備方法：將TBA-X9溶于有機(jī)溶劑，在催化劑作用下生成TBA-X13；
化合物TBA-X14的制備方法：將TBA-X10溶于有機(jī)溶劑，在催化劑作用下生成TBA-X14；
化合物TBA-X15的制備方法：將TBA-X11溶于有機(jī)溶劑，在催化劑作用下生成TBA-X15；
化合物TBA-X16的制備方法：將TBA-X12溶于有機(jī)溶劑，在催化劑作用下生成TBA-X16；
其中，上述反應(yīng)在-20℃至250℃下進(jìn)行；所述有機(jī)溶劑是含有1-20個(gè)碳原子的醚、醇、烷烴、芳香烴、酮、鹵代烷、酰胺、腈、酯或者它們各種比例的混合物；所述催化劑為4-二甲氨基吡啶(DMAP)、鈀碳(Pd/C)和氫氧化鈀碳(Pd(OH)2/C)；所述縮合劑為1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)或1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)；此外，所用堿中，無機(jī)堿為碳酸鉀。
進(jìn)一步，上述制備方法中，相應(yīng)的原料與溴代川芎嗪的摩爾比為1∶0.1～1∶10；相應(yīng)的原料與縮合劑的摩爾比為1∶0.1～1∶10；相應(yīng)的原料與堿的摩爾比為1∶0.1～1∶10；相應(yīng)的原料與催化劑的摩爾比為1∶0.1～1∶10。
反應(yīng)路線：
路線1、TBA-X1-4，TBA-X5-8的合成
反應(yīng)條件和試劑：(a)Benzene，reflux，10h；(b)CCl4，NBS，hv，reflux，12h； (c)DMF，K2CO3，N2，85℃，1.5h；(d)H2O，KMnO4，37℃，6h；(e)dry CH2Cl2，EDCI，DMAP，12h.
路線2、TBA-X9-12，TBA-X13-16的合成
反應(yīng)條件和試劑：(a)DMF，K2CO3，N2，85℃，1.5h；(b)dry CH2Cl2，EDCI，DMAP，12h；(c)MeOH，10％Pd/C或Pd(OH)2/C，H2，12h。
本發(fā)明還提供式1、2化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，所述腫瘤為肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、宮頸癌細(xì)胞系。
本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤的藥物組合物，該組合物包含式1或式2化合物和藥學(xué)上可接受的載體。所述藥物組合物可以是片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、口服液、注射劑等常規(guī)劑型。
本發(fā)明化合物具有明顯抑制腫瘤細(xì)胞系(Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7)生長的活性。其中，化合物TBA-X4的抗腫瘤活性優(yōu)于陽性藥順鉑。
實(shí)驗(yàn)例MTT法觀察本發(fā)明組合物TBA-X對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞增殖影響
1.儀器與材料
Thermo 3111型CO2培養(yǎng)箱；HFsafe生物安全柜；Multiskan GO酶標(biāo)儀；京立牌LD5-2B型臺(tái)式低速離心機(jī)；Olympus IX71倒置熒光顯微鏡改良型RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶溶液、噻唑藍(lán)、磷酸鹽緩沖 液(賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司)；二甲基亞砜(DMSO)；
人肝癌細(xì)胞系Bel-7402和HepG2；人胃癌細(xì)胞系BGC-823；人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29；人宮頸癌細(xì)胞系Hela；犬腎上皮細(xì)胞MDCK。
實(shí)驗(yàn)藥物：本發(fā)明化合物TBA-X1-16(分別按實(shí)施例8-21制備)；反應(yīng)原料齊墩果酸(OA)、甘草次酸(GA)、熊果酸(UA)、白樺脂酸(BA)及川芎嗪(TMP)；陽性藥物注射用順鉑(301001CF；齊魯制藥有限公司)；
2.方法
2.1不同細(xì)胞株的培養(yǎng)
Bel-7402，HepG2，HT-29，MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液中，放置于37℃、5％的CO2培養(yǎng)箱中溫育。細(xì)胞均呈貼壁狀態(tài)生長，在倒置顯微鏡下觀察生長狀況，待細(xì)胞數(shù)量適量時(shí)傳代培養(yǎng)。
Hela，MDCK細(xì)胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，放置于37℃、5％的CO2培養(yǎng)箱中溫育。細(xì)胞均呈貼壁狀態(tài)生長，在倒置顯微鏡下觀察生長狀況，待細(xì)胞數(shù)量適量時(shí)傳代培養(yǎng)。
2.2初篩細(xì)胞抑制率
取對(duì)數(shù)生長期的Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7，MDCK細(xì)胞，以3×103/孔的數(shù)量接種于96孔培養(yǎng)板中，在含5％CO2的濕化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h。每孔分別加入100μL待測(cè)化合物，使每孔濃度分別為10μM和20μM。設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組及空白對(duì)照組，藥物組每濃度重復(fù)3孔，細(xì)胞對(duì)照組和空白對(duì)照組重復(fù)3孔。培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72h后，每孔加20μLMTT孵育4h，棄去上清，再加100μL DMSO，振蕩10min，酶標(biāo)儀490nm波長測(cè)得吸光度值并記錄結(jié)果，抑制率/％＝[1-(A給藥-A空白)/(A正常-A空白)]×100％。將20μM濃度下，抑制率大于50％的化合物進(jìn)行復(fù)篩并計(jì)算IC50值。
2.3復(fù)篩細(xì)胞抑制率
操作方法如2.2項(xiàng)，取對(duì)數(shù)生長期的Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7，MDCK細(xì)胞，以3×103/孔的數(shù)量接種于96孔培養(yǎng)板中，在含5％CO2的濕化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h；每孔分別加入100μL待測(cè)化合物，使最終濃度分別為40，20，10，5，2.5μM。設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組及空白對(duì)照組，藥物組每濃度重復(fù)4孔，細(xì)胞對(duì)照組和空白對(duì)照組重復(fù)3孔。培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 72h后，每孔加20μL MTT孵育4h，棄去上清，再加100μL DMSO，振蕩10min，酶標(biāo)儀490nm波長測(cè)得吸光度值，記錄結(jié)果，并計(jì)算化合物的IC50值，細(xì)胞抑制率(％)＝[1-(A給藥-A空白)/(A正常-A空白)]×100％。
3.結(jié)果
3.1本發(fā)明化合物TBA-X1-16和反應(yīng)原料OA、GA、UA、BA及TMP對(duì)5種腫瘤細(xì)胞系(Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7)和正常細(xì)胞系MDCK的IC50值如表1所示。
由表1可以看出，與反應(yīng)原料相比，大部分化合物表現(xiàn)出更強(qiáng)的體外抗腫瘤活性；化合物TBA-X1，TBA-X4，TBA-X13和TBA-X16對(duì)各種癌細(xì)胞均表現(xiàn)出較好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性，特別是化合物TBA-X4的體外抗腫瘤活性甚至優(yōu)于順鉑；
化合物TBA-X2對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，化合物TBA-X14對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，化合物TBA-X11對(duì)胃癌細(xì)胞增殖具有抑制作用。
表1不同藥物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株的IC50值
注明：a：當(dāng)IC50＞20.0μM時(shí)，我們認(rèn)為其活性較低；
b：“ND”表明未能測(cè)出IC50值。
4.結(jié)論
本發(fā)明化合物表現(xiàn)出抑制腫瘤細(xì)胞系(Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7)增殖的活性。其中，化合物TBA-X4的活性優(yōu)于陽性藥順鉑。表明該類化合物可用于抗腫瘤藥物的研究。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1中間體化合物1(2-溴代甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)的制備
按“《中間體2-溴甲基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成工藝優(yōu)化》.安徽醫(yī)藥，2013，17(9)：1467-1470”方法制備。稱取20.00g(0.15mol)無水川芎嗪、23.54g N-溴代丁二酰亞胺(0.15mol，用前研細(xì))置于250mL三頸瓶，100mL CCl4作為反應(yīng)溶劑，4盞85W白熾燈照射，95℃回流反應(yīng)1h。TLC[V(石油醚)∶V(丙酮)＝3∶1]檢測(cè)反應(yīng)基本完全；冷卻后濾過，收集濾液，減壓回收溶劑，得紫紅色粘稠狀液體(含量按60％計(jì))。HRMS(ESI)m/z：216.00135[M+H]+，calcd.for C8H11BrN2 216.00851。
實(shí)施例2中間體化合物2(3，5，6-三甲基吡嗪-2-羧酸)的制備
按照“《新型川芎嗪衍生物的合成及其抗癌活性研究》.西北藥學(xué)雜志，29(1)：58-64”方法制備。將10.0g(73.53mmol)川芎嗪混懸于100.0mL的蒸餾水中，稱取11.62g(73.53mmol)高錳酸鉀，分3批加入，37℃，磁力 攪拌24h。將上述混合液冷卻，抽濾，濾液用360mg·L-1的鹽酸調(diào)pH至1～2，然后用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮至干，丙酮重結(jié)晶，得到白色固體，收率：47.8％，m.p.：162-163℃。
實(shí)施例3中間體化合物4(3β-羥基齊墩果-12-烯-28-酸-芐酯)的制備
將2.28g(5mmol)齊墩果酸，0.855g(5mmol)芐基溴溶解于25mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌2h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，得到化合物4的粗品。
White amorphous solid，m.p.：188.8-189.5℃，yield 95.8％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.63，0.80，0.90，0.92，0.94，1.00，1.15(s，each，3H，7×-CH3)，2.92(m，1H)，3.23(m，1H)，5.06，5.12，(d，J＝12.4Hz，1H，-CH2)，5.31(t，J＝3.6Hz，1H，＝CH-)，7.36(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).
實(shí)施例4中間體化合物5的合成
將2.283g(5mmol)熊果酸，0.855g(5mmol)芐基溴溶解于25mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌2h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，得到化合物5的粗品。
White powder，m.p.：76.8-77.4℃，yield 92.7％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.67，0.80，0.87(d，J＝6.0Hz，3H，3×-CH3)，0.92，0.96(d，J＝6.0Hz，3H，2×-CH3)，1.01，1.10(s，3H，2×-CH3)，2.28(d，J＝11.2Hz，1H)，3.23(m，1H)，5.01，5.13(d，each，J＝12.4Hz，1H，-CH2)，5.26(t，J＝3.6Hz，1H，＝CH-)，7.36(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(24H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).
實(shí)施例5中間體化合物6的合成
將2.353g(5mmol)甘草次酸，0.855g(5mmol)芐基溴溶解于25mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀， 于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌2h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，得到化合物6的粗品。
White powder，m.p.：92.9-93.7℃，yield 94.1％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.76，0.83，1.02，1.13，1.16，1.18，1.37(s，each，3H，7×-CH3)，3.24(m，1H)，5.11，5.22(each，d，J＝12.4Hz，1H，-CH2)，5.58(s，1H，＝CH-)，7.39(m，5H，Ar-H)，1.00-3.00(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).
實(shí)施例6中間體化合物7的合成
將2.283g(5mmol)白樺脂酸，0.855g(5mmol)芐基溴溶解于25mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌2h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，得到化合物7的粗品。
White powder，m.p.：191.3-192.1℃，yield 92.7％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.78(brs，6H，2×-CH3)，0.82，0.97，0.98，1.70(s，each，3H，4×-CH3)，3.05(brs，1H)，3.19(m，1H)，4.62，4.75(brs，1H，＝CH2)，5.11，5.17(each，d，J＝12.4Hz，1H，-CH2)，7.38(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).
實(shí)施例7化合物TBA-X1的合成
將2.28g(5mmol)齊墩果酸，1.08g(5mmol)化合物1溶解于25mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌1.5h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離(V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝3∶2)，乙酸乙酯重結(jié)晶得化合物TBA-X1。
White solid，m.p.：185.9-186.6℃，yield 57.0％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.55，0.80，0.90，0.91，0.93，1.00，1.13(s，each，3H，7×CH3)，3.23(m，1H)，2.89(m，1H)，5.26(brs，1H)，5.24，5.14(ea，d，J＝12.5Hz，1H，CH2-)，2.58(s，3H，CH3)，2.54(s，3H，CH3)，2.52(s，3H，CH3)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：38.4，27.2，79.0，38.8，55.2，18.3，33.1，39.2，47.6，37.0，23.7，122.5，143.6，41.7，27.6，23.1，46.9，41.3，45.9，30.7，33.9，32.7，28.1，15.6，15.3，16.8，25.9，177.2，32.4，23.4；pyrazine ring：64.8，150.9，145.5，148.9，149.1，21.6，21.4，20.5.HRMS(ESI)m/z：591.6581[M+H]+，calcd.for C38H59N2O3 591.4526.
實(shí)施例8化合物TBA-X2的合成
將2.283g(5mmol)熊果酸，1.08g(5mmol)化合物1溶解于25mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691mg(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌1.5h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝10∶1]得化合物TBA-X2。
White solid，m.p.：125.9-126.7℃，yield 55.7％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.60，0.80，0.91，1.00，1.01(s，each，3H，5×-CH3)，0.85(d，J＝6.5Hz，3H，-CH3)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H，-CH3)，2.26(d，J＝11.5Hz，1H)，2.51(s，3H，-CH3)，2.53(s，3H，-CH3)，2.58(s，3H，-CH3)，3.23(m，1H)，5.20(brs，1H，＝CH-)，5.25，5.06(each，d，J＝12.0Hz，1H，-CH2)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.4，15.6，17.0，18.3，21.1，23.2，23.5，24.3，27.3，28.0，28.1，30.7，33.0，36.7，37.0，38.7，38.8，38.8，39.1，39.5，42.0，47.5，48.3，52.9，55.2，79.0，125.7，138.0，176.9(-COO-)；pyrazine ring：20.6(-CH3)，21.4(-CH3)，21.7(-CH3)，64.8(-CH2)，145.4，148.8，149.3，151.0.HRMS(ESI)m/z：591.45245[M+H]+，calcd.for C38H58N2O3 590.44474.
實(shí)施例9化合物TBA-X3的合成
將2.353g(5mmol)甘草次酸，1.08g(5mmol)化合物1溶解于25mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌1.5h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝10∶1]，丙 酮重結(jié)晶得化合物TBA-X3。
Colorless crystals，m.p.：225.7-226.5℃，yield 53.0％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.81，0.82，1.01，1.13，1.14，1.20，1.36(s，each，3H，7×CH3)，3.23(m，1H，H-3)，5.55(s，1H)，5.27，5.19(ea，d，J＝12.5Hz，1H，CH2-)，2.55(s，3H，CH3-)，2.54(s，3H，CH3-)，2.52(s，3H，CH3-)，1.00-3.00(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：39.2，27.3，78.8，39.2，55.0，17.5，32.8，43.2，61.8，37.1，200.0，128.6，168.9，45.4，26.5，26.4，31.9，48.0，41.1，44.2，31.2，37.7，28.5，15.6，16.4，18.7，23.4，28.1，28.5，176.1；pyrazine ring：64.7，151.1，145.0，148.4，149.3，21.5，21.5，20.4.HRMS(ESI)m/z：605.5377[M+H]+，calcd.for C38H57N2O4 605.4318.
實(shí)施例10化合物TBA-X4的合成
將2.283g(5mmol)白樺脂酸，1.08g(5mmol)化合物1溶解于25mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入0.691g(5mmol)無水碳酸鉀，于85℃油浴中反應(yīng)，磁力攪拌1.5h；反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝10∶1]得化合物TBA-X4。
White powder，m.p.：184.6-185.4℃，yield 54.1％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.78，0.80，0.82，0.96，0.98，1.69(s，each，3H，6×-CH3)，2.51(s，3H，-CH3)，2.53(s，3H，-CH3)，2.57(s，3H，-CH3)，3.02(m，1H)，3.19(m，1H)，4.61，4.74(each，brs，1H，＝CH2)，5.20，5.23(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH2)，1.00-2.50(25H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：14.7，15.4，15.9，16.1，18.3，19.4，20.9，25.5，27.4，28.0，29.7，30.6，32.1，34.4，36.9，37.2，38.1，38.7，38.9，40.7，42.4，46.9，49.5，50.6，55.4，56.7，79.0，109.6，150.5，175.5(-COO-)；pyrazine ring：20.4(-CH3)，21.4(-CH3)，21.6(-CH3)，64.3(-CH2)，145.4，148.7，148.9，150.9.HRMS(ESI)m/z：591.45212[M+H]+，calcd.for C38H58N2O3 590.44474.
實(shí)施例11化合物TBA-X5的合成
將591.45mg(1mmol)TBA-X1，199.32mg(1.2mmol)化合物2，287.55 mg(1.5mmol)EDCI，12.2mg(0.1mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝7∶1]得化合物TBA-X5。
White powder，m.p.：193.0-193.7℃，yield 53.7％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.59，0.92，0.93，0.97，1.15(s，each，3H，5×-CH3)，0.98(brs，6H，2×-CH3)，2.52(s，3H，-CH3)，2.53(s，3H，-CH3)，2.58(brs，9H，3×-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，2.89(m，1H)，4.87(m，1H)，5.18，5.24，(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH2)，5.27(brs，1H，＝CH-)，1.00-2.50(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.4，16.8，17.0，18.2，23.1，23.4，23.7，25.8，27.6，28.2，30.7，32.4，32.7，33.1，33.9，37.0，38.0，38.2，39.3，41.4，41.7，45.9，46.9，47.5，55.4，82.9，122.4，143.7，177.2(-COO-)；pyrazine ring：20.5(-CH3)，21.4(-CH3)，21.6(-CH3)，22.1(-CH3)，22.7(-CH3)，64.9(-CH2)，140.8，145.5，148.8，149.1，149.3，149.9，150.9，153.8，166.2(-COO-)，HRMS(ESI)m/z：761.49756[M+Na]+，calcd.for C46H66N4O4 738.50841.
實(shí)施例12化合物TBA-X6的合成
將590.44mg(1mmol)TBA-X2，199.32mg(1.2mmol)化合物2，287.55mg(1.5mmol)EDCI，12.2mg(0.1mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝7∶1]得化合物TBA-X6。
White solid，m.p.：168.2-168.9℃，yield 46.8％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.62，0.98，1.09(s，each，3H，3×-CH3)，0.87(d，J＝6.0Hz，3H，-CH3)，0.96(d，J＝6.0Hz，3H，-CH3)，0.99(brs，6H，2×-CH3)，2.26(d，J＝11.5Hz，1H)，2.52(s，3H，-CH3)，2.54(s，3H，-CH3)，2.57(brs，9H，-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，4.87(m，1H)，5.06(each，d，J＝12.0Hz，1H，-CH2)，5.21(brs，1H，＝CH-)，5.25，1.00-2.50(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.5，17.0，17.0，17.1，18.2，21.2，23.2，23.5，23.7，24.2，27.9，28.2，30.7，33.0，36.7，36.9，38.0，38.4，38.8，39.1，39.6，42.0，47.5，48.3，52.9，55.4，83.0，125.6，138.1，177.0(-COO-)；pyrazine ring：20.5(-CH3)，21.4(-CH3)，21.6(-CH3)，22.1(-CH3)，22.7(-CH3)，64.8(-CH2)，140.8，145.5，148.9，149.2，149.3，149.9，150.9，153.8，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：739.51645[M+H]+，calcd.for C46H66N4O4 738.50841.
實(shí)施例13化合物TBA-X7的合成
將605.43mg(1mmol)TBA-X3，199.32mg(1.2mmol)化合物2，287.55mg(1.5mmol)EDCI，12.2mg(0.1mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝7∶1]得化合物TBA-X7。
White powder，m.p.：295.9-296.7℃，yield 51.7％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.82，1.00，1.01，1.15，1.39(s，each，3H，5×-CH3)，1.22(brs，6H，2×-CH3)，2.53(s，3H，-CH3)，2.54(s，3H，-CH3)，2.56(s，3H，-CH3)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，4.89(m，1H)，5.20，5.28(each，d，J＝15.0Hz，1H，-CH2)，5.58(s，1H，＝CH-)，1.00-3.00(21H，methyl-and methylene-of triterpenoid stmcture).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：16.4，17.0，17.4，18.7，23.4，23.7，26.5，26.5，28.2，28.4，28.5，31.2，31.9，32.7，37.0，37.7，38.4，38.9，41.1，43.2，44.2，45.4，48.1，55.1，61.7，82.6，128.5，169.0，199.8(-C＝O)，176.1(-COO-)；pyrazine ring：20.5(-CH3)，21.4(-CH3)，21.6(-CH3)，22.1(-CH3)，22.6(-CH3)，64.7(-CH2)，140.8，145.0，148.4，149.2，150.0，149.3，151.1，153.8，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：775.47629[M+Na]+，calcd.for C46H64N4O5 752.48767.
實(shí)施例14化合物TBA-X8的合成
將590.44mg(1mmol)TBA-X4，199.32mg(1.2mmol)化合物2，287.55mg(1.5mmol)EDCI，12.2mg(0.1mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸 乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝7∶1]得化合物TBA-X8。
White powder，m.p.：142.1-142.9℃，yield 47.9％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.82，0.89，0.98，1.70(s，each，3H，4×-CH3)，0.96(brs，6H，2×-CH3)，2.51(s，3H，-CH3)，2.53(s，3H，-CH3)，2.57(brs，9H，3×-CH3)，2.72(s，3H，-CH3)，3.02(m，1H)，4.62，4.74(each，brs，1H，＝CH2)，4.84(m，1H)，5.23，5.20(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH2)，1.00-2.50(24H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：14.7，15.9，16.2，16.8，18.2，19.3，20.9，23.8，25.5，28.1，29.6，30.6，32.1，34.3，36.9，37.2，38.1，38.5，40.7，42.4，46.9，49.5，50.5，55.5，56.7，83.0，109.7，150.5，175.4(-COO-)；pyrazine ring：20.5(-CH3)，21.4(-CH3)，21.6(-CH3)，21.6(-CH3)，22.1(-CH3)，22.6(-CH3)，64.3(-CH2)，140.9，145.4，148.7，148.9，149.3，149.9，150.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：739.51637[M+H]+，calcd.for C46H66N4O4 738.50841.
實(shí)施例15化合物TBA-X9的合成
將1.64g(3mmol)化合物4，581.60mg(3.5mmol)化合物2，670.95mg(3.5mmol)EDCI，36.65mg(0.3mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝8∶1]得化合物TBA-X9。
White powder，m.p.：194.2-194.9℃，yield 47.9％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.85，0.92，0.95，0.97，0.98，0.98，1.17(s，each，3H，7×-CH3)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.74(s，3H，-CH3)，2.89(m，1H)，4.87(m，1H)，5.07，5.12(each，d，J＝13.0Hz，1H，-CH2)，5.32(brs，1H，＝CH-)，7.35(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.4，16.9，17.0，18.3，23.1，23.4，23.7，25.9，27.6，28.2，30.7，32.4，32.7，33.1，33.9，37.0，38.0，38.2，39.4，41.4，41.7，45.9，46.8，47.6，55.4，83.0，122.4，127.9，128.0，128.4，136.5，143.8，177.4(-COO-)；pyrazine ring：21.6(-CH3)， 22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，65.9(-CH2)，140.9，149.4，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：717.46027[M+Na]+，calcd.for C45H62N2O4 694.47096.
實(shí)施例16化合物TBA-X10的合成
將1.64g(3mmol)化合物5，581.60mg(3.5mmol)化合物2，670.95mg(3.5mmol)EDCI，36.65mg(0.3mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝8∶1]得化合物TBA-X10。
White solid，m.p.：218.5-219.3℃，yield 51.1％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.89(d，J＝6.5Hz，3H，-CH3)，0.98(brs，12H，4×-CH3)，0.68，1.12(s，each，3H，2×-CH3)，2.29(d，J＝11.5Hz，1H)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.74(s，3H，-CH3)，4.87(m，1H)，5.10，5.13(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH2)，5.27(brs，1H，＝CH-)，7.35(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid stmcture).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.5，17.0，17.1，18.2，21.2，23.3，23.6，23.7，24.3，28.0，28.2，30.7，33.0，36.7，36.9，38.0，38.4，38.9，39.1，39.6，42.1，47.5，48.1，52.9，55.4，83.0，125.6，127.9，128.2，128.4，136.4，138.2，177.3(-COO-)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，66.0(-CH2)，140.9，149.4，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：717.46082[M+Na]+，calcd.for C45H62N2O4 694.47096.
實(shí)施例17化合物TBA-X11的合成
將1.68g(3mmol)化合物6，581.60mg(3.5mmol)化合物2，670.95mg(3.5mmol)EDCI，36.65mg(0.3mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝8∶1]得化合物TBA-X11。
White powder，m.p.：212.3-213.0℃，yield 49.2％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.76，1.00，1.01，1.14，1.19，1.22，1.39(s，each，3H，7×-CH3)，2.58 (brs，6H，2×-CH3)，2.74(s，3H，-CH3)，4.89(m，1H)，5.11，5.23(each，d，J＝10.0Hz，1H，-CH2)，5.58(s，1H，＝CH-)，7.38(m，5H，Ar-H)，1.00-3.00(21H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：16.4，17.0，17.4，18.7，23.3，23.7，26.4，26.5，28.2，28.3，28.4，31.2，31.8，32.7，37.0，37.7，38.4，38.9，41.1，43.2，44.0，45.4，48.3，55.1，61.7，82.6，128.2，128.3，128.5，128.6，136.2，169.1，176.2(-COO-)，199.9(-C＝O)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，66.2(-CH2)，140.8，149.3，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：731.44060[M+Na]+，calcd.for C45H60N2O5 708.45022.
實(shí)施例18化合物TBA-X12的合成
將1.64g(3mmol)化合物7，581.60mg(3.5mmol)化合物2，670.95mg(3.5mmol)EDCI，36.65mg(0.3mmol)DMAP依次加入圓底燒瓶中；再加入20mL二氯甲烷，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液加入適量飽和食鹽水分散，然后用等體積乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝8∶1]得化合物TBA-X12。
White powder，m.p.：162.1-162.8℃，yield 49.0％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.80，0.89，0.98，1.71(s，each，3H，4×-CH3)，0.96(brs，6H，2×-CH3)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，3.04(m，1H)，4.63(brs，1H，＝CH2)，4.75(brs，1H)，4.84(m，1H)，5.12，5.17(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH2)，7.38(m，5H，Ar-H)，1.00-2.50(24H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：14.7，15.9，16.2，16.8，18.2，19.4，21.0，23.8，25.5，28.1，29.6，30.6，32.1，34.3，36.9，37.2，38.1，38.2，38.5，40.7，42.4，47.0，49.5，50.5，55.5，56.7，83.0，109.6，128.1，128.3，128.5，136.5，150.5，175.8(-COO-)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，65.7(-CH2)，140.9，149.3，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：717.46016[M+Na]+，calcd.for C45H62N2O4 694.47096.
實(shí)施例19化合物TBA-X13的合成
將694.47mg(1mmol)TBA-X9溶于30ml甲醇中，再加入80mg 10％Pd(OH)2/C常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液過濾，濾液減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝5∶1]得化合物TBA-X13。
White powder，m.p.：289.7-290.5℃，yield 92.8％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.80，0.94，0.96，0.98，0.99，1.00，1.18(s，each，3H，7×-CH3)，2.57(brs，6H，2×-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，2.86(m，1H)，4.87(m，1H)，5.31(brs，1H，＝CH-)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.4，17.0，17.2，18.2，22.9，23.4，23.6，23.7，25.9，27.7，28.2，30.7，32.5，32.6，33.1，33.8，37.0，38.0，38.2，39.3，41.0，41.6，45.9，46.5，47.6，55.4，83.0，122.5，143.7，183.4(-COOH)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，140.8，149.3，149.9，153.8，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：627.41275[M+Na]+，calcd.for C38H56N2O4604.42401.
實(shí)施例20化合物TBA-X14的合成
將694.47mg(1mmol)TBA-X10溶于30ml甲醇中，再加入80mg10％Pd(OH)2/C常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液過濾，濾液減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝5∶1]得化合物TBA-X14。
White solid，m.p.：305.9-306.6℃，yield 90.6％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.81，1.02，1.12(s，each，3H，3×-CH3)，0.89(d，J＝6.5Hz，3H，-CH3)，0.98(brs，9H，3×-CH3)，2.22(d，J＝11.0Hz，1H)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.73(s，3H，-CH3)，4.87(m，1H)，5.27(brs，1H，＝CH-)，1.00-2.50(23H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：15.6，17.0，17.1，18.2，21.2，23.3，23.6，23.7，24.1，28.0，28.2，30.6，32.9，36.7，37.0，38.0，38.4，38.8，39.0，39.6，42.0，47.5，48.0，52.6，55.4，83.0，125.7，138.0，183.4(-COOH)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，140.9，149.4，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：627.41319[M+Na]+，calcd.for C38H56N2O4604.42401.
實(shí)施例20化合物TBA-X15的合成
將708.45mg(1mmol)TBA-X11溶于30ml甲醇中，再加入80mg 10％Pd(OH)2/C常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液過濾，濾液減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝5∶1]得化合物TBA-X15。
White powder，m.p.：305.4-306.2℃，yield 90.1％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.87，1.00，1.01，1.17，1.23，1.26，1.42(s，each，3H，7×-CH3)，2.58(brs，6H，2×-CH3)，2.74(s，3H，-CH3)，4.90(m，1H)，5.75(s，1H，＝CH-)，1.00-3.00(22H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：16.4，17.0，17.4，18.7，23.3，23.7，26.5，26.5，28.2，28.4，28.6，31.0，31.9，32.7，37.0，37.7，38.4，38.9，40.9，43.3，43.8，45.5，48.3，55.1，61.7，82.7，128.5，169.4，181.3(-COOH)，200.2(-C＝O)；pyrazine ring：21.5(-CH3)，22.0(-CH3)，22.5(-CH3)，140.9，149.4，149.9，153.7，166.1(-COO-).HRMS(ESI)m/z：617.39564[M-H]-，calcd.for C38H54N2O5 618.40327.
實(shí)施例21化合物TBA-X16的合成
將694.47mg(1mmol)TBA-X12溶于30ml甲醇中，再加入80mg10％Pd(OH)2/C常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，TLC檢測(cè)反應(yīng)基本完全。將反應(yīng)液過濾，濾液減壓回收溶劑，硅膠柱分離[V(石油醚)∶V(丙酮)＝5∶1]得化合物TBA-X16。
White powder，m.p.：279.5-280.3℃，yield 89.2％.1H-NMR(CDCl3)(ppm)：0.91，0.96，0.97，0.98，1.02，1.72(s，each，3H，6×-CH3)，2.57(brs，6H，2×-CH3)，2.72(s，3H，-CH3)，3.04(m，1H)，4.64，4.77(each，brs，1H，＝CH2)，4.85(m，1H)，1.00-2.50(25H，methyl-and methylene-of triterpenoid structure).13C-NMR(CDCl3)(ppm)：14.7，16.1，16.2，16.8，18.2，19.4，20.9，23.8，25.5，28.1，29.7，30.6，32.2，34.3，37.1，37.2，38.2，38.4，38.5，40.8，42.5，47.0，49.3，50.5，55.5，56.4，83.0，109.7，150.4，181.4(-COOH)；pyrazine ring：21.6(-CH3)，22.0(-CH3)，22.6(-CH3)，140.9，149.3，149.9，153.7，166.2(-COO-).HRMS(ESI)m/z：627.41288[M+Na]+，calcd.for C38H56N2O4 604.42401.
實(shí)施例22
取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入注射劑(包括凍干粉針劑和無菌分裝干粉針劑)適當(dāng)輔料，按注射劑(包括凍干粉針劑和無菌分裝干粉針劑)工藝制備成抗腫瘤藥注射劑。
實(shí)施例23
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入片劑(包括緩控釋片、骨架片、包衣片、分散片等)適當(dāng)輔料，按片劑(包括緩控釋片、骨架片、包衣片、分散片等)工藝制備成抗腫瘤藥片劑。
實(shí)施例24
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入膠囊劑適當(dāng)輔料，按膠囊劑工藝制備成抗腫瘤藥膠囊劑。
實(shí)施例25
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入乳劑(包括微乳、納米乳等)適當(dāng)輔料，按乳劑(包括微乳、納米乳等)工藝制備成抗腫瘤藥乳劑。
實(shí)施例26
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入顆粒劑適當(dāng)輔料，按顆粒劑工藝制備成抗腫瘤藥顆粒劑。
實(shí)施例27
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入緩釋控釋劑適當(dāng)輔料，按緩釋控釋劑工藝制成抗腫瘤藥緩釋控釋劑。
實(shí)施例28
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入口服液適當(dāng)輔料，按口服液工藝制備成抗腫瘤藥口服液。
實(shí)施例29
取取實(shí)施例7～21任一制備的化合物10g，加入脂質(zhì)體劑型適當(dāng)輔料，按脂質(zhì)體工藝制備成抗腫瘤藥脂質(zhì)體劑型。