本發(fā)明屬于新藥設(shè)計及合成領(lǐng)域，具體地，涉及一種吉非羅齊肟類衍生物、其制備方法及將其作為FXR拮抗劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：心腦血管疾病是當(dāng)前危害人類生命和健康最嚴(yán)重的病癥之一，為中老年人的常見病和多發(fā)病，在許多國家是發(fā)病率和死亡率的首位。動脈粥樣硬化是許多心腦血管疾病的基礎(chǔ)，大量的實驗和臨床資料證明動脈粥樣硬化和血脂代謝的異常密切相關(guān)。因此，血脂調(diào)節(jié)成為當(dāng)前該類新藥研究的重要領(lǐng)域。通過前瞻性、隨即和對照的臨床研究，已經(jīng)證明一些他汀類藥物可以減少動脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)生，降低了冠心病所致的死亡率，降低了心肌梗死的發(fā)生率。進(jìn)一步研究還證明降脂藥物的治療可以減少粥樣硬化斑塊內(nèi)脂質(zhì)的含量，加固纖維脂而穩(wěn)定斑塊，減少斑塊破裂而引發(fā)的心肌梗死和腦梗死等等嚴(yán)重事件。此外，調(diào)血脂藥還可恢復(fù)受損血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，加強(qiáng)纖溶性和防止血栓形成，并且延緩人的動脈粥樣硬化的進(jìn)展并消退已形成的斑塊。因此，積極使用調(diào)血脂藥物治療是減輕動脈粥樣硬化和減少冠心病的發(fā)生的重要措施。目前臨床和常用的調(diào)節(jié)血脂的藥物品種較多，例如他汀類，苯氧芳酸類，離子交換樹脂或膽酸螯合劑，煙酸類以及其他調(diào)血脂類藥物。其中他汀類藥物尤為引人注意。他汀類藥物是膽固醇合成酶的抑制劑。3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(簡稱：HMG-CoA)在HMG-CoA還原酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榧籽觚埶?，他汀類藥為化學(xué)結(jié)構(gòu)的開放酸部分與HMG-CoA相似，它可競爭性抑制甲氧龍酸的形成，從而降低了膽固醇的合成，因而可以降低血液中膽固醇和低密度脂蛋白(簡稱：LDL-C)水平。臨床研究證明，冠心病患者即使血清中膽固醇和低密度脂蛋白的水平不很高或正常，他汀類藥物可以預(yù)防動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展和減少冠心病的嚴(yán)重臨床事件。然而，長期服用除了他汀類藥物有上腹不適等消化系統(tǒng)癥狀外，相當(dāng)部分病人還會產(chǎn)生肝功能損害，轉(zhuǎn)氨酶升高，肌肉疼痛，肌酸激酶升高等副反應(yīng)。法尼醇X受體(簡稱：FXR)是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)；研究發(fā)現(xiàn)膽汁酸為其天然配體，參與膽汁酸的代謝,因此也被稱為膽汁酸受體，而鵝脫氧膽酸(簡稱：CDCA)為其最合適的天然配體。GW4064是第一個人工合成的FXR配體。FXR除參與機(jī) 體內(nèi)膽汁酸的代謝，還對脂代謝和糖代謝等起著重要的調(diào)節(jié)作用。膽固醇代謝成膽汁酸主要有兩條通路:1.經(jīng)典通路是由膽固醇-7α-羥化酶(簡稱：CYP7A1)催化，而且受膽汁酸的負(fù)反饋調(diào)節(jié)；2.替代通路是由膽固醇-27α-羥化酶(簡稱：CYP27A1)催化，占人體總膽汁酸合成的18％，且作為經(jīng)典通路的補(bǔ)充。經(jīng)典代謝通路過程是膽固醇的氧化產(chǎn)物與肝X受體(簡稱：LXR)結(jié)合并誘導(dǎo)其與維甲酸X受體(簡稱：RXR)形成二聚體，結(jié)合到DNA的LXR的反應(yīng)原件上，激CYP7A1的表達(dá)，然后CYP7A1催化膽固醇生成膽汁酸，膽汁酸與FXR結(jié)合并誘導(dǎo)其與RXR形成二聚體，結(jié)合到DNA的FXR反應(yīng)原件上，激活小異源二聚體配體(SHP)的表達(dá)，而SHP與肝受體類似物-1(LRH-1)結(jié)合抑制CYP7A1的表達(dá)，從而維持膽固醇的代謝平衡。FXR對甘油三酯代謝的調(diào)控機(jī)制體現(xiàn)在抑制甘油三酯的合成：FXR經(jīng)SHP途徑下調(diào)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(簡稱：SREBP-1c)，而SREBP-1c是參與脂肪合成基因的主要轉(zhuǎn)錄因子，可激活多種參與脂肪酸和甘油三酯合成的酶的轉(zhuǎn)錄，包括脂肪酸合成酶(簡稱：FAS)、乙酰輔酶A羧化酶(簡稱：ACC)等。最近的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)XR可以誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的分化，從而促進(jìn)TG在脂肪細(xì)胞的儲存。也有文獻(xiàn)報道FXR拮抗劑降低甘油三酯(TG)的作用是通過下調(diào)SREBP-1c的方式實現(xiàn)的。目前，報道的FXR拮抗劑大部分為甾體類化合物，包括Z-guggulsterone(簡稱GS)、CDRI/80-574、Sulfatedsterol和Scalaranesesterterpene等。迄今為止，非甾體類FXR拮抗劑包括AGN34、取代的異噁唑衍生物。其中天然產(chǎn)物GS是FXR的一個高效拮抗劑，它能夠減少小鼠體內(nèi)低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯(TG)的水平但不能夠改善高膽固醇病人的血漿脂密度。FXR作為近幾年來調(diào)節(jié)血脂領(lǐng)域出現(xiàn)的新靶點(diǎn)，憑借其獨(dú)特的調(diào)節(jié)血脂機(jī)制，吸引了眾多科研工作者的目光。因此，針對FXR研發(fā)出對混合型高脂血癥有效的藥物具有很大意義。本研究課題組在前期研究中，酰胺類化合物、其制備方法及應(yīng)用(專利CN102838505A)和酯類化合物、其制備方法和應(yīng)用(專利CN102093II6A)兩篇專利中已發(fā)明了大量化合物并證實體內(nèi)降血脂作用，其中本研究課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)的候選降脂藥物-編號為SIPI-7623(專利CN102838505A中的化合物5)的化合物在體內(nèi)降血脂作用明顯。本專利中的發(fā)明以SIPI-7623為先導(dǎo)化合物，發(fā)明了一種肟類衍生物，重點(diǎn)進(jìn)行了體外FXR拮抗活性的研究，證實具有FXR拮抗作用，而大鼠體內(nèi)實驗證實具有降血脂作用。技術(shù)實現(xiàn)要素：為開拓臨床藥物的資源，本發(fā)明選擇合適的芳氧苯酰胺、酯及硫酯類化合物，通過與 相應(yīng)的鹽酸羥胺及其衍生物肟化，從而提供了一種肟類FXR拮抗劑，用于降血脂藥物的開發(fā)。本發(fā)明的第一方面是提供了如下式(I)所示的化合物，其中：R1、R2、R3各自獨(dú)立地選自氫、羥基、甲基、甲氧基、三氟甲基、鹵素或硝基；R4、R5、R6各自獨(dú)立地選自氫或甲基；X選自NH、O、S。一種優(yōu)選的實施方式中，上述式(I)所示化合物，其中，所述鹵素選自氟、氯、溴或碘。一種優(yōu)選的實施方式中，上述式(I)所示化合物，其中，R4、R5同時選自甲基。一種優(yōu)選的實施方式中，上述式(I)所示化合物，其中，R1、R2、R3至少一個選自羥基。當(dāng)上述式(I)所示化合物的結(jié)構(gòu)式中，其R1、R2、R3至少一個選自羥基時，由于結(jié)構(gòu)式中包含有酚羥基，此酚羥基具有弱酸性，其可以與適當(dāng)?shù)膲A形成鹽；所述的適當(dāng)?shù)膲A選自堿金屬或堿土金屬的氫氧化物；較佳地可以選自氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣等。上述式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽容易分離，可采用常規(guī)分離方法提純；例如式(I)所示化合物可經(jīng)柱層析純化，式(I)所示化合物與堿性化合物所成的鹽經(jīng)重結(jié)晶純化。在本發(fā)明的第一方面中，更優(yōu)先發(fā)明的化合物為：在本發(fā)明第二方面，本發(fā)明提供了如式(I)所示的化合物的制備方法，包括步驟：a)、將式(II)所示化合物、適當(dāng)?shù)膲A和R6O-NH2.HCl加入適當(dāng)?shù)拇碱惾軇┲?，通過肟化反應(yīng)即得(見路線1)。路線1上述路線1的反應(yīng)式中，所述的式(II)所示化合物中X、R1、R2、R3、R4、R5以及R6O-NH2.HCl中R6的定義同上述式(I)所示化合物所定義保持一致。上述路線1中，所述適當(dāng)?shù)膲A選自三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、無水碳酸鉀、吡啶、N-甲基嗎啉、乙酸鈉等，優(yōu)選乙酸鈉。上述路線1中，所述適當(dāng)?shù)拇碱惾軇┌–1-C6的醇，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇；更優(yōu)選甲醇。上述路線1中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)地選取具體的實驗操作條件，例如：式(II)所示化合物在無水乙酸鈉存在下與R6O-NH2.HCl在甲醇溶劑中，通過肟化反應(yīng)得到式(I)所示化合物。對于上述式(II)所示化合物，當(dāng)其結(jié)構(gòu)式中X選取不同，其優(yōu)選的制備方法可不相同。例如，上述式(II)所示化合物，當(dāng)X＝NH，即為式(IIA)所示的酰胺化合物，其制備方法包括以下步驟：b)、式(III)所示的苯乙酮類化合物經(jīng)溴化得式(IV)所示的溴代苯乙酮類化合物，c)、再與烏洛托品反應(yīng)得式(V)所示的胺類化合物，d)、最后將式(V)所示的胺類化合物和式(VI-A)所示的羧酸化合物在縮合劑作用下脫水縮合得式(II-A)所示化合物，參考路線2，路線2上述路線2中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)地選取具體的實驗操作條件，例如：各步步驟反應(yīng)條件為：b.CuBr2，乙酸乙酯：氯仿/1：1；c.①烏洛托品，四氫呋喃，②濃鹽酸，乙醇，40-50℃；d.三乙胺，EDCI.HCl，HOBT，二氯甲烷，室溫。再例如，上述式(II)所示化合物，當(dāng)X＝O，即為式(IIB)所示的酯化合物；或當(dāng)X＝S，即為式(IIC)所示的巰酯化合物，其制備方法包括以下步驟：e)、式(VI-A)所示的羧酸化合物或式(VI-B)所示巰基羧酸化合物與式(IV)所示的溴代苯乙酮類化合物在適當(dāng)?shù)膲A存在下脫溴化氫分別得到式(IIB)所示的酯化合物及式(IIC)所示的巰酯化合物，參考路線3：路線3上述路線3中，所述適當(dāng)?shù)膲A選自碳酸鉀、碳酸鈉、三乙胺、N,N-二異丙基乙胺、吡啶、N-甲基嗎啉等，優(yōu)選碳酸鉀或碳酸鈉。上述路線3中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)地選取具體的實驗操作條件，例如：步驟e)的反應(yīng)條件為：碳酸鉀，四氫呋喃，室溫。至于式(VI-B)所示巰基羧酸化合物，可以通過步驟f)-將式(VI-A)所示的羧酸化合物在適當(dāng)條件下硫化制得，參考路線4：路線4上述路線3中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)地選取具體的實驗操作條件，例如：步驟f)的反應(yīng)條件為：.N,N-羰基二咪唑，硫化氫，N,N-二甲基甲酰胺，室溫。在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供了降血脂藥物組合物，其中包括第一方面所述的式(I)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)治療目的，可將藥物組合物制成各種類型的給藥單位劑型，如片劑、丸劑、粉劑、液體、懸浮液、乳液、顆粒劑、膠囊、栓劑和針劑(溶液及懸浮液)等。在本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提供了將如式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其藥物組合物作為FXR拮抗劑的應(yīng)用。此外，本發(fā)明提供了將如式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其藥物組合物在調(diào)節(jié)血脂中的應(yīng)用。本發(fā)明的如式(I)所示的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在藥物組合物中的含量無特殊限制，可在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行選擇，通?？蔀橘|(zhì)量百分比1-70％，較佳的為質(zhì)量百分比1-30％。本發(fā)明中，所述的藥物組合物的給藥方法沒有特殊限制。可根據(jù)病人年齡、性別和其它條件及癥狀，選擇各種劑型的制劑給藥。例如，片劑、丸劑、溶液、懸浮液、乳液、顆粒劑和膠囊是口服給藥；針劑可以單獨(dú)給藥，或者和注射用輸送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合進(jìn)行靜脈注射，如有必要可以單純用針劑進(jìn)行肌肉、皮內(nèi)、皮下或腹內(nèi)注射；栓劑為給藥到直腸。本發(fā)明中，可以根據(jù)服藥方法、病人年齡、性別和其它條件以及癥狀適當(dāng)?shù)剡x擇用藥劑量。通常的給藥劑量可為：約0.1～300mg藥物活性成分/kg體重/天。一般來說，每個給藥單位劑型可含1～200mg的藥物活性成分。以下將通過具體實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但并不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可在權(quán)利要求范圍內(nèi)對制備方法和使用儀器作出改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。附圖說明圖1-4顯示是本發(fā)明的化合物2的降血脂藥效學(xué)研究的實驗結(jié)果。實驗選用了正常大鼠作為空白對照，同時選用高脂大鼠模型作為對照；陽性藥物選取降脂藥-辛伐他汀(Simvastatin，簡稱Sim)以及本研究課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)的候選降脂藥物-編號為SIPI-7623(專利CN102838505A中的化合物5)，測定了化合物2對于高脂大鼠的降血脂藥效。圖1、圖2、圖3及圖4分別顯示了采用日立自動生化分析儀7080測定實驗大鼠血清中的膽固醇(簡稱：TC)、甘油三酯(簡稱：TG)、高密度脂蛋白(簡稱HDL-C)和低密度脂蛋白(簡稱LDL-C)的測試結(jié)果。具體實施方式實施例1：中間體α-溴代對羥基苯乙酮的制備將CuBr2(4.47g,20.0mmol)加于乙酸乙酯和氯仿的混合液(30mL,EA:CHCl3體積比為1:1) 中，80℃攪拌0.5h后降溫至40℃，再將對羥基苯乙酮(1.36g,10.0mmol)的乙酸乙酯溶液(15mL)滴加于上述溶液中，滴加完畢后再80℃攪拌5h，加活性炭脫色，趁熱抽濾，旋出溶劑后用乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得中間體α-溴代對羥基苯乙酮1.73g，ESI-MSm/z:216[M+H]+.同法制備中間體α-溴代-3,5-二羥基苯乙酮、α-溴代-3-氟-4羥基苯乙酮、α-溴代-3-硝基-4羥基苯乙酮、α-溴代-3,5-二甲基-4羥基苯乙酮、α-溴代-3,5-二溴-4羥基苯乙酮、α-溴代對氟苯乙酮和α-溴代對三氟甲基苯乙酮。實施例2：中間體2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊酸的制備將吉非羅齊(2.50g,10.0mmol)和K2CO3(1.37g,10.0mmol)加于四氫呋喃(30mL)中室溫攪拌0.5h后，向攪拌液中滴加α-溴代對羥基苯乙酮(2.15g,10.0mmol)的四氫呋喃溶液(10mL)，繼續(xù)攪拌12h。旋出溶劑，稀鹽酸酸化，加入乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得中間體2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊酸3.21g，ESI-MSm/z:385[M+H]+.同法制備中間體2-(3,5-二羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(3-氟-4-羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(3-硝基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(3,5-二甲基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(3,5-二溴-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(4-氟苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸、2-(4-三氟甲基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸。實施例3：中間體5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸制備將CDI(10.0mmol)和5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2–二甲基戊酸(10.0mmol)溶于DMF(20mL)中，室溫攪拌1h后通入H2S反應(yīng)3h。加入水(100mL)和乙酸乙酯(30mL×3)萃取，經(jīng)柱層析得中間體5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸，2.41gMS(ESI):m/z＝367[M+H]+.實施例4：中間體S-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸的制備將5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(2.66g,10.0mmol)和K2CO3(1.37g, 10.0mmol)加于四氫呋喃(30mL)中室溫攪拌0.5h后，向攪拌液中滴加α-溴代對羥基苯乙酮(2.15g,10.0mmol)的四氫呋喃溶液(10mL)，繼續(xù)攪拌12h。旋出溶劑，稀鹽酸酸化，加入乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得中間體S-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸3.81g，ESI-MSm/z:401[M+H]+.同法制備中間體S-(2-(3,5-二羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(3-氟-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(3-硝基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(3,5-二甲基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(3,5-二溴-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸、S-(2-(4-三氟甲基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸。實施例5：中間體5-(2,5-二甲基苯氧基)-N-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基戊酸(即對比化合物SIPI-7623)的制備將對羥基苯乙酮(2.15g)和六次甲基四胺(1.40g)加于四氫呋喃(20mL)中，20℃條件下攪拌6h，抽濾后將濾餅加入無水乙醇(20mL)中，向該混合液中加入濃鹽酸(4mL)，45℃下攪拌2h，冷卻抽濾，無水乙醇洗滌(5mL)，烘干后加于二氯甲烷(15mL)中，再于0℃向該混合液中加入三乙胺(4.2mL)、吉非羅齊(2.50g)、EDCI.HCl(2.30g)、HOBT(1.62g),攪拌12h后加水萃取，無水硫酸鎂干燥，旋干后經(jīng)柱層析得中間體5-(2,5-二甲基苯氧基)-N-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基戊酸(即對比化合物SIPI-7623)，ESI-MSm/z:401[M+H]+.實施例6：2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)-戊酸的制備將5-(2,5-二甲基苯氧基)-戊酸(2.22g,10.0mmol)和K2CO3(1.37g,10.0mmol)加于四氫呋喃(30mL)中室溫攪拌0.5h后，向攪拌液中滴加α-溴代對羥基苯乙酮(2.15g,10.0mmol)的四氫呋喃溶液(10mL)，繼續(xù)攪拌12h。旋出溶劑，稀鹽酸酸化，加入乙酸乙酯(25mL×3)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得中間體2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)-戊酸3.72g，ESI-MSm/z:357[M+H]+.同法制備2-(3,5-二羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)-戊酸。實施例7：化合物1的制備將5-(2,5-二甲基苯氧基)-N-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基戊酸(即對比化合物SIPI-7623，0.383g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.26g，收率65.3％。ESI-MSm/z:399[M+H]+,421[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.57(s,1H),7.60(t,J＝5.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.72(d,J＝8.6Hz,2H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),4.34(d,J＝5.6Hz,2H),3.72(t,J＝6.0Hz,2H),2.25(s,3H),2.07(s,3H),1.51–1.42(m,2H),1.41–1.32(m,2H),0.97(s,6H).實施例8：化合物2的制備將2-(4-羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.384g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.28g，收率65.1％。ESI-MSm/z:400[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.39(s,1H),9.68(s,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.77(d,J＝8.6Hz,2H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),5.18(s,2H),3.75(t,J＝5.5Hz,2H),2.25(s,3H),2.06(s,3H),1.63–1.38(m,4H),1.02(s,6H).實施例9：化合物3的制備將S-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.24g，收率57.8％。ESI-MSm/z:416[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.43(s,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,2H),6.98(d,J＝7.8Hz,1H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),6.68(s,1H),6.62(d,J＝7.8Hz,1H),4.10(s,2H),3.85(t,J＝5.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.07(s,3H),1.76–1.63(m,4H),1.18(s,6H).實施例10：化合物4的制備將2-(3,5-二羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.25g，收率60.2％。ESI-MSm/z:416[M+H]+,m/z:438[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.58(s,1H),9.33(s,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),6.42(d,J＝1.8Hz,2H),6.23(s,1H),5.11(s,2H),3.77(t,J＝5.2Hz,2H),2.26(s,3H),2.06(s,3H),1.66–1.44(m,4H),1.05(s,6H).實施例11：化合物5的制備將S-(2-(3,5-二羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.416g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.30g，收率69.6％。ESI-MSm/z:432[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.36(s,2H),6.97(d,J＝7.3Hz,1H),6.68(s,1H),6.62(d,J＝7.3Hz,1H),6.49(d,J＝1.5Hz,2H),6.24(s,1H),4.03(s,2H),3.86(t,J＝5.6Hz,2H),2.24(s,3H),2.07(s,3H),1.73–1.59(m,4H),1.19(s,6H).實施例12：化合物6的制備將2-(3-氟-4-羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.402g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.26g，收率62.4％。ESI-MSm/z:[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),10.15(s,1H),7.31(dd,J＝12.7,2.0Hz,1H),7.20(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),6.97(dd,J＝8.4,2.9Hz,2H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),5.19(s,2H),3.76(t,J＝5.5Hz,2H),2.25(s,3H),2.05(s,3H),1.55–1.45(m,4H),1.03(s,6H).實施例13：化合物7的制備將S-(2-(3-氟-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.418g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合 物0.28g，收率64.7％。ESI-MSm/z:434[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),10.20(s,1H),7.35(d,J＝12.6Hz,1H),7.25(d,J＝12.6Hz,1H),7.00–6.89(m,2H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),4.10(s,2H),3.84(t,J＝5.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.06(s,3H),1.73–1.54(m,4H),1.18(s,6H).實施例14：化合物8的制備將2-(3-硝基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.429g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.25g，收率56.3％。ESI-MSm/z:445[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.81(s,1H),11.29(s,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(d,J＝7.4Hz,1H),6.63(s,1H),6.61(d,J＝7.4Hz,1H),5.25(s,2H),3.74(t,J＝5.7Hz,2H),2.24(s,3H),2.04(s,3H),1.63–1.40(m,4H),1.03(s,6H).實施例15：化合物9的制備將S-(2-(3-硝基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.418g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.24g，收率52.2％。ESI-MSm/z:461[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.81(s,1H),11.29(s,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(d,J＝7.4Hz,1H),6.63(s,1H),6.61(d,J＝7.4Hz,1H),5.25(s,2H),3.74(t,J＝5.7Hz,2H),2.24(s,3H),2.04(s,3H),1.63–1.40(m,4H),1.03(s,6H).實施例16：化合物10的制備將2-(3,5-二甲基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.412g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.24g，收率56.2％。ESI-MSm/z:428[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.33(s,1H),8.49(s,1H),7.11(s,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),5.16(s,2H),3.72(t,J＝5.2Hz,2H),2.25(s,3H),2.15(s,6H),2.05(s,3H),1.52–1.47(m,4H),1.03(s,6H).實施例17：化合物11的制備將S-(2-(3,5-二甲基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.429g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.29g，收率65.4％。ESI-MSm/z:444[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.40(s,1H),7.16(s,2H),6.98(d,J＝7.6Hz,1H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),4.09(s,2H),3.90(t,J＝5.8Hz,2H),2.24(s,3H),2.14(s,6H),2.09(s,3H),1.69–1.62(m,4H),1.19(s,6H).實施例18：化合物12的制備將2-(3,5-二溴-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.542g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.28g，收率50.3％。ESI-MSm/z:570[M-H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.82(s,1H),7.76(s,1H),7.70(s,1H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),6.67(d,J＝7.5Hz,1H),6.60(s,1H),5.26(s,2H),3.83(t,J＝5.2Hz,2H),2.32(s,3H),2.16(s,3H),1.68–1.61(m,4H),1.16(s,6H).實施例19：化合物13的制備將S-(2-(3,5-二溴-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.558g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.32g，收率55.8％。ESI-MSm/z:574[M+H]+,596[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.86(s,1H),10.29(s,1H),7.71(s,2H),6.96(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(s,1H),6.61(d,J＝7.2Hz,1H),4.11(s,2H),3.83(t,J＝5.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.05(s,3H),1.75–1.66(m,2H),1.61–1.52(m,2H),1.18(s,6H).實施例20：化合物14的制備將5-(2,5-二甲基苯氧基)-N-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基戊酸(即對比化合物SIPI-7623，0.383g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.2mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.28g，收率67.9％。ESI-MSm/z:399[M+H]+,421[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.57(s,1H),7.60(t,J＝5.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.72(d,J＝8.6Hz,2H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),4.34(d,J＝5.6Hz,2H),3.72(t,J＝6.0Hz,2H),2.25(s,3H),2.07(s,3H),1.51–1.42(m,2H),1.41–1.32(m,2H),0.97(s,6H).實施例21：化合物15的制備將2-(4-羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.384g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.31g，收率75.1％。ESI-MSm/z:414[M+H]+,436[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.79(s,1H),7.39(d,J＝6.7Hz,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,2H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝7.5Hz,1H),5.16(s,2H),3.89(s,3H),3.74(t,J＝5.6Hz,2H),2.25(d,J＝5.2Hz,3H),2.06(s,3H),1.56–1.41(m,4H),1.01(s,6H).實施例22：化合物16的制備將S-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取， 有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.29g，收率68.0％。ESI-MSm/z:430[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.84(s,1H),7.45(d,J＝8.7Hz,2H),6.97(d,J＝7.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.7Hz,2H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.5Hz,1H),4.09(s,2H),3.90(s,3H),3.83(t,J＝6.0Hz,2H),2.24(s,3H),2.07(s,3H),1.73–1.65(m,2H),1.61–1.51(m,2H),1.18(s,6H).實施例23：化合物17的制備將2-(3,5-二羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.33g，收率76.9％。ESI-MSm/z:430[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.38(s,2H),6.97(d,J＝7.5Hz,1H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),6.42(d,J＝2.2Hz,2H),6.26(t,J＝2.2Hz,1H),5.09(s,2H),3.90(s,3H),3.77(t,J＝5.0Hz,2H),2.26(s,3H),2.06(s,3H),1.59–1.43(m,4H),1.03(s,6H).實施例24：化合物18的制備將S-(2-(3,5-二羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.416g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.26g，收率58.4％。ESI-MSm/z:446[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.42(s,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.68(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),6.49(d,J＝2.2Hz,2H),6.28(d, J＝4.3Hz,1H),3.91(s,3H),3.85(t,J＝5.9Hz,2H),2.24(s,3H),2.08(s,3H),1.74–1.66(m,2H),1.64–1.53(m,2H),1.19(s,6H).實施例25：化合物19的制備將2-(3-氟-4-羥基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.402g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.29g，收率67.3％。ESI-MSm/z:432[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.27(s,1H),7.33(d,J＝10.5Hz,1H),7.21(d,J＝10.6Hz,1H),6.98(d,J＝2.5Hz,1H),6.97(s,1H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.5Hz,1H),5.16(s,2H),3.90(s,3H),3.76(t,J＝5.7Hz,2H),2.25(s,3H),2.06(s,3H),1.58–1.41(m,4H),1.02(s,6H).實施例26：化合物20的制備將S-(2-(3-氟-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.418g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.33g，收率73.8％。ESI-MSm/z:448[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.32(s,1H),7.38(d,J＝10.6Hz,1H),7.26(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),3.92(s,3H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),2.24(s,3H),2.06(s,3H),1.72–1.65(m,2H),1.57(dt,J＝10.3,5.9Hz,2H),1.18(s,6H).實施例27：化合物21的制備將2-(3-硝基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.429g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.23g，收率50.2％。ESI-MSm/z:459[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.45(s,1H),8.06(s,1H),7.75(s,1H),7.18(s,1H),6.98(s,1H),6.64(s,2H),5.22(s,2H),3.94(s,3H),3.74(s,2H),2.25(s,4H),2.04(s,3H),1.48(d,4H),1.02(s,6H).實施例28：化合物22的制備將S-(2-(3-硝基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.418g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.27g，收率57.0％。ESI-MSm/z:473[M-H]+,ESI-MSm/z:497[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.43(s,1H),8.06(d,J＝2.3Hz,1H),7.79(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(d,J＝7.5Hz,1H),6.66(s,1H),6.61(d,J＝7.5Hz,1H),4.14(s,2H),3.95(s,3H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),2.24(s,3H),2.05(s,3H),1.70–1.64(m,2H),1.58–1.51(m,2H),1.17(s,6H).實施例29：化合物23的制備將2-(3,5-二甲基-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.412g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.32g，收率72.6％。ESI-MSm/z:442[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.60(s,1H),7.13(s,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.65(s,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(s,2H),3.88(s,3H),3.72(t,J＝5.8Hz,2H),2.26(s,3H),2.16(s,6H),2.05(s,3H),1.51–1.42(m,4H),1.02(s,6H).實施例30：化合物24的制備將S-(2-(3,5-二甲基-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.429g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.28g，收率61.3％。ESI-MSm/z:458[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.64(s,1H),7.17(s,2H),6.97(d,J＝7.5Hz,1H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.5Hz,1H),4.07(s,2H),3.89(s,3H),3.83(t,J＝6.1Hz,2H),2.24(s,3H),2.14(s,6H),2.06(s,3H),1.72–1.64(m,2H),1.62–1.52(m,2H),1.18(s,6H).實施例31：化合物25的制備將2-(3,5-二溴-4-羥基苯基)-2-氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.542g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.33g， 收率57.8％。ESI-MSm/z:458[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.87(s,1H),7.70(s,1H),6.97(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝6.8Hz,1H),5.18(s,2H),3.93(s,3H),3.77(d,J＝4.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.05(s,3H),1.55–1.40(m,4H),1.02(s,6H).實施例32：化合物26的制備將S-(2-(3,5-二溴-4羥基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.558g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入羥甲胺鹽酸鹽(0.100g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.27g，收率50.0％。ESI-MSm/z:587[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.40(s,1H),7.73(s,2H),6.96(d,J＝7.6Hz,1H),6.66(s,1H),6.61(d,J＝7.4Hz,1H),4.10(s,2H),3.94(s,3H),3.83(t,J＝6.0Hz,2H),2.24(s,3H),2.05(s,3H),1.71–1.65(m,2H),1.61–1.51(m,2H),1.17(s,6H).實施例33：化合物27的制備將2-(4-氟苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.384g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.32g，收率79.8％。ESI-MSm/z:402[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),7.58(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.20(t,J＝8.8Hz,2H),6.97(d,J＝7.3＝4Hz,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,2H),5.25(s,2H),3.72(t,J＝5.7Hz,2H),2.25(s,3H),2.05(s,3H),1.55–1.32(m,4H),1.00(s,6H).實施例34：化合物28的制備將S-(2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.29g，收率69.5％。ESI-MSm/z:418[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.82(s,1H),7.67–7.60(m,2H),7.21(t,J＝8.8Hz,2H),6.97(d,J＝7.3Hz,1H),6.67(s,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),4.16(s,2H),3.83(t,J＝6.1Hz,2H),2.24(s,3H),2.06(s,3H),1.70–1.64(m,2H),1.60–1.52(m,2H),1.18(s,5H).實施例35：化合物29的制備將2-(4-三氟甲基苯基)-2氧代乙基-5-(2,5－二甲基苯氧基)2,2-二甲基戊酸(0.436g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.30g，收率66.5％。ESI-MSm/z:452[M+H]+,474[M+Na]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H),7.75(q,J＝8.5Hz,4H),6.96(d,J＝7.8Hz,1H),6.62(d,J＝4.7Hz,2H),5.30(s,2H),3.69(t,J＝5.7Hz,2H),2.24(s,3H),2.04(s,3H),1.63–1.27(m,4H),1.00(s,6H).實施例36：化合物30的制備將S-(2-(4-三氟甲基苯基)-2-氧代乙基)5-(2,5-二甲基苯氧基)-2,2-二甲基戊烷硫代酸(0.400g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和 無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.34g，收率72.8％。ESI-MSm/z:468[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ12.16(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝8.4Hz,2H),6.96(d,J＝7.4Hz,1H),6.65(s,1H),6.61(d,J＝7.4Hz,1H),4.21(s,2H),3.81(t,J＝6.1Hz,2H),2.23(s,3H),2.05(s,3H),1.72–1.63(m,2H),1.60–1.42(m,2H),1.17(s,6H).實施例37：化合物31的制備將2-(4-羥基苯基)-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)戊酸(0.356g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.25g，收率67.4％。ESI-MSm/z:372[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.45(s,1H),9.71(s,1H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),6.69(s,1H),6.62(d,J＝7.4Hz,1H),5.17(s,2H),3.85(t,J＝4.9Hz,2H),2.32(t,J＝6.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.07(s,3H),1.63(d,J＝3.0Hz,4H).實施例38：化合物32的制備將2-(3,5-二羥基苯基)-氧代乙基-5-(2,5-二甲基苯氧基)戊酸(0.372g，1.0mmol)溶于甲醇(15mL)中，室溫攪拌下加入鹽酸羥胺(0.076g,1.0mmol)和無水乙酸鈉(0.090g,1.2mmol)，加畢后60℃反應(yīng)3小時。旋出溶劑，加入乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用水洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾后濾液經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得目標(biāo)化合物0.29g，收率72.3％。ESI-MSm/z:402[M+H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.02(d,J＝7.5Hz,1H),6.69(d,J＝7.5Hz,1H),6.62(s,1H),6.60(s,2H),6.32(t,J＝2.2Hz,1H),5.19(s,2H),4.00(s,3H),3.83(t,J＝5.3 Hz,2H),2.33(s,3H),2.17(s,3H),1.61(d,J＝3.0Hz,4H),1.13(s,6H).實施例39：FXR拮抗活性測試所用試劑材料供應(yīng)商如下：試劑材料供應(yīng)商貨號FXR-LBD(GST)InvitrogenPV4835Streptavidin-XL665-5,000testscisbio610SAXLAMAbAntiGST-K-5,000testscisbio61GSTKLASRC1GL-TritonX-100BeyotimeST795KFSigma60240-250GSodiumMolybdateSigmaM1003-100GUltrapure1MTris-HClpH7.5invitrogen15567-0270.5MEDTApH8.0invitrogen15575-020GlycerolFLUKA49780-1LDTTShenggongDB00581.基本緩沖液的配制注：以下實驗中，mM為mmol/L，μM為μmol/L，nM為μmol/L。a.準(zhǔn)備20mL1x基本緩沖液，混合后待用。緩沖液詳細(xì)列表如下：材料終濃度(mM)Tris-HCl20EDTA1glycerol10％TritonX-1000.0025％KF400BSA0.01％SodiumMolybdate10DTT5H2O補(bǔ)足到20mL2.化合物溶液的配制a.對于對照化合物Z-guggulsterone(簡稱：GS)，先用100％DMSO稀釋成30mM母液，然后按3倍稀釋到所需終濃度。b.對于待檢測化合物，先用100％DMSO稀釋成20mM母液，然后按3倍稀釋到所需終濃度。c.對于激活化合物GW4064，用100％DMSO稀釋成520μM母液，然后加5nL到384孔板各孔中(不包括低值孔)待用，其終濃度達(dá)到130nM。3.1x蛋白混合液的配制a.按每孔需要10μL溶液計算，首先用1x基本緩沖液準(zhǔn)備2xFXR-LBD/EuAnti-GST蛋白溶液，使GST-FXR-LBD蛋白溶液終濃度達(dá)到3nM。詳表如下：材料終濃度(mM)GST-FXR-LBD3EuAnti-GST(nl)50nL/孔b.按每孔需要10μL溶液計算，首先用1x基本緩沖液準(zhǔn)備2xFXRBiotin-SRC1/SA-APC多肽溶液，使SRC1多肽溶液終濃度達(dá)到500nM。詳表如下：材料終濃度(mM)Biotin-Peptide500SA-APC50nL/孔c.把以上兩種2xGST-ER/EuAnti-GST溶液和2xpeptide/SA-APC溶液按體積1：1混合均勻，待用。d.將1x蛋白混合溶液加入384孔板每個孔，每孔加20μL。e.將384孔板放入離心機(jī)室溫1000轉(zhuǎn)離心10秒，取出。f.將384孔板在室溫放置3小時后讀數(shù)。4.TR-FRETassay讀數(shù)將384板放入EnVision多功能酶標(biāo)儀讀數(shù)。5.結(jié)果處理a.讀數(shù)665nm和615nm值，并以615nm值做校正值，最終數(shù)值表示為665nm值/615nm值。b.計算抑制率(％)根據(jù)以下公式計算抑制率(％)X是每個濃度的“665nm值比615nm值”。Min是只加DMSO的空白對照孔的“665nm值比 615nm值”平均值。Max是只加激活化合物和DMSO的高信號對照孔的“665nm值比615nm值”平均值。實驗結(jié)果：體外篩選結(jié)果顯示，對比化合物SIPI-7623的IC50為52μM，本發(fā)明的化合物有相當(dāng)一部分體外拮抗FXR活性強(qiáng)于SIPI-7623。實施例40：片劑的制備處方：用量化合物250mg微晶纖維素250mg交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮50mg預(yù)膠化淀粉100mg硬脂酸鎂5mg制備方法：按上述配方，將粉碎過篩后的化合物2、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉和交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮均勻混合，然后與5％乙醇溶液混合，制粒、干燥，之后再與潤滑劑混合，壓片即可。其中，所述的化合物粉碎過篩為過60目篩；所述的微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉和交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮粉碎過篩為過80目篩；所述的制粒的顆粒粒徑大小為20目；所述的干燥的溫度較佳的為90℃控制水分質(zhì)量百分比3％以內(nèi)。實施例41：膠囊的制備制備方法：按上表配方，將藥物與輔料各原料混勻，填充至膠囊殼中即可。實施例42：注射劑制備制備方法：按上述配方，使用乳缽，將化合物或其鹽與潤濕劑研磨混合均勻，然后與助懸劑、防腐劑和注射用水均勻混合，再研磨即可。其中，所述的研磨的顆粒大小為0.5μm。實施例43：降血脂藥效學(xué)研究試劑及批號豬油市售膽固醇上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司批號：090720丙基硫氧嘧啶上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司批號：090505脫氧膽酸上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司批號：090615吐溫80CP國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司批號：F200905071,2-丙二醇國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司AR批號：T20070125方法脂肪乳劑制備方法：取豬油25g，放在200mL的燒杯里，放在煤氣灶上加熱,待溫度升到100℃時,加入10g膽固醇,溶化,再加入1g丙硫氧嘧啶,充分?jǐn)噭?然后加入25mL吐溫80,制成油相。同時在另一燒杯中加入30mL蒸餾水和1,2－丙二醇20mL,放在水浴鍋中加熱至60℃,然后加入2g脫氧膽酸鈉,充分?jǐn)嚢柚钡酵耆芙?制成水相。然后將水相加入油相,充分混勻,即制成脂肪乳劑。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，根據(jù)體重進(jìn)行分組，每組6只：分出6只作為空白對照組(Control)，其余大鼠每天上午9:00-11:00灌胃脂肪乳，1mL/100g體重，連續(xù)灌胃2周。再根據(jù)體重將給予脂肪乳劑的大鼠分為高脂模型組(Model)、陽性藥組和測試藥組。所有高脂模型組(Model)、陽性藥組和測試藥組的大鼠在給藥測試期間，均同時繼續(xù)灌胃脂肪乳劑，同時，陽性藥組給予辛伐他汀(Sim，10mg/kg)和SIPI-7623(80mg/kg)，測試藥組給予劑量分別為80mg/kg及20mg/kg的本發(fā)明化合物2，高脂模型組給予等體積溶劑。于分組當(dāng)日開始口服給藥，每天下午3:00-4:00給藥一次。每周一稱量體重，觀察大鼠情況。連續(xù)給藥14天，大鼠禁食12小時，眼眶采血1mL。進(jìn)行血脂測定。采用日立自動生化分析儀7080測定實驗大鼠血清中的膽固醇(簡稱：TC)、甘油三酯(簡稱：TG)、高密度脂蛋白(簡稱HDL-C)和低密度脂蛋白(簡稱LDL-C)，測試結(jié)果分別見圖1、圖2、圖3及圖4。圖中，**代表統(tǒng)計學(xué)P<0.01，***代表統(tǒng)計學(xué)P<0.001。圖1-4顯示是本發(fā)明的化合物2的降血脂藥效學(xué)研究的實驗結(jié)果。實驗選用正常大鼠作為空白對照，并通過對大鼠進(jìn)行持續(xù)用脂肪乳進(jìn)行灌胃，建立高脂大鼠模型。陽性藥物選取降脂藥-辛伐他汀(Simvastatin，簡稱Sim)以及本研究課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)的候選降脂藥物-編號為SIPI-7623(專利CN102838505A中的化合物5)，測定了化合物2對于高脂大鼠的降血脂藥效。圖1、圖2、圖3及圖4的實驗結(jié)果顯示化合物2在高脂大鼠模型中可顯著降低大鼠血脂。在口服劑量為20mg/kg和80mg/kg降TC和LDL-C水平明顯優(yōu)于對比化合物SIPI-7623，降TG水平與對比化合物SIPI-7623相當(dāng)。當(dāng)前第1頁1 2 3