本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一系列具有蛋白激酶抑制作用的取代2-(吡啶-2-基)氨基嘧啶類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動(dòng)的重要部分，在正常的細(xì)胞生長過程中，細(xì)胞周期進(jìn)程的實(shí)現(xiàn)有賴于各級(jí)調(diào)控因子對(duì)細(xì)胞周期精確而嚴(yán)密的調(diào)控。這些調(diào)控因子的核心是細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶(CyclinDependentKinase,CDK)及其正、負(fù)性調(diào)控因子———細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)和細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑(CDI)。細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶和細(xì)胞周期蛋白形成的CDK-Cyclin復(fù)合物，參與細(xì)胞的生長、增殖、休眠或者進(jìn)入凋亡。細(xì)胞周期的過程中，細(xì)胞周期蛋白周期性連續(xù)的表達(dá)和降解，并分別結(jié)合到由它們瞬時(shí)活化的CDK上，通過CDK活性，催化不同底物磷酸化，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期不同時(shí)相的推進(jìn)和轉(zhuǎn)化作用。目前CDK家族已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了13個(gè)成員，分別是CDK1-CDK13；其中CDK1、CDK2、CDK3、CDK4和CDK6與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖有關(guān)，CDK7、CDK8、CDK9、CDK11、CDK12和CDK13參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄。Cyclin分為A-L，不同的CDK分別連接不同亞型的Cyclin。其中，CyclinD家族(CyclinD1，D2，D3)，在G1期開始表達(dá)，結(jié)合并激活CDK4和CDK6，形成CDK4/6-CyclinD復(fù)合物，使包括視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)在內(nèi)的一系列底物磷酸化。Rb磷酸化后釋放與其結(jié)合并被其抑制的蛋白，主要是轉(zhuǎn)錄因子E2F等，E2F激活并轉(zhuǎn)錄進(jìn)入S期所必須的一些基因(馬珂，CDK4/6抑制劑抗腫瘤作用研究進(jìn)展，《國外醫(yī)藥·抗生素分冊(cè)》，2013，34(5)：197-202)。如果由于各種因素使平衡被打破，無論是促進(jìn)細(xì)胞增殖的信號(hào)增強(qiáng)，或者是抑制細(xì)胞增殖的信號(hào)減弱到某種程度，細(xì)胞增殖都會(huì)失控，進(jìn)而出現(xiàn)腫瘤。研究發(fā)現(xiàn)，大約80％的人類腫瘤中存在CyclinD–CDK4/6–INK4–Rb通路的異常(1.MalumbresM,BarbacidM.,Tocycleornottocycle:acriticaldecisionincancer[J].NatureReviewsCancer,2001,1(3):222；2.ShapiroGI.,Cyclin-dependentkinasepathwaysastargetsforcancertreatment[J].JClinicalOncology,2006,24(11):1770)。這條通路的改變，加速了G1期進(jìn)程，使得腫瘤細(xì)胞增殖加快而獲得生存優(yōu)勢(shì)。因此，對(duì)其的干預(yù)成為一種治療策略，CDK4/6因此成為潛在的抗腫瘤的靶點(diǎn)之一。CDK4/6作為抗腫瘤靶點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)在于：(1)大多數(shù)增殖的細(xì)胞依賴CDK2或者CDK4/6增殖，但CDK4/6的抑制劑不表現(xiàn)出“泛-CDK抑制劑”的細(xì)胞毒性，如骨髓抑制和腸道反應(yīng)。(2)臨床前實(shí)驗(yàn)表明，如果細(xì)胞CyclinD水平升高或者p16INK4a失活，能夠增加細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性，由于腫瘤細(xì)胞相對(duì)于正常細(xì)胞存在上述現(xiàn)象，所以一定程度上增加了藥物的靶向。除了抑制腫瘤生長，也有CDks抑制劑用于其它病癥的治療；如用于治療心血管障礙，包括動(dòng)脈粥樣硬化、血管支架植入后再狹窄和其它由細(xì)胞異常增殖引起的心血管障礙；再如用于治療真菌、原生動(dòng)物寄生蟲(如惡性瘧原蟲)和DNA與RNA病毒感染引起的疾病，包括瘧疾、艾滋病等。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)CDKs抑制劑還可以用于自身免疫系統(tǒng)疾病(如牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎和紅斑狼瘡等)，抑制炎癥細(xì)胞的增殖。自WO9811095中公開了一系列具有細(xì)胞激酶抑制活性的2-嘧啶胺類化合物后，基于 這樣的母核結(jié)構(gòu)，現(xiàn)有技術(shù)陸續(xù)出現(xiàn)了很多宣稱具有CDK4/6抑制活性的化合物，有的已經(jīng)成為有希望的候選藥物，甚至進(jìn)入臨床III期試驗(yàn)階段。如，化合物PD0332991在WO2003062236中被公開，又名Palbociclib，結(jié)構(gòu)式如1所示，由輝瑞公司開發(fā)。PD0332991抑制CDK4和CDK6的IC50分別為11nmol/L和15nmol/L；而抑制CDK2、CDK1和CDK5的IC50則大于10μmol/L(FryDW,HarveyPJ,KellerPR,etal.Specificinhibitionofcyclin-dependentkinase4/6byPD0332991andassociatedantitumoractivityinhumantumorxenografts[J].MolecularCancerTherapeutics,2004,3(11):1427)。諾華公司在研的化合物L(fēng)EE011(由WO2011101409公開)，結(jié)構(gòu)式如2所示?；衔風(fēng)Y2835219(由WO2010075074公開)，又名Bemaciclib，結(jié)構(gòu)式如3所示；據(jù)報(bào)道，它對(duì)CDK4和CDK6的抑制IC50分別為2nmol/L和9.9nmol/L(LawrenceM.G.,S.F.Cai,X.Linetal.PreclinicalcharacterizationoftheCDK4/6inhibitorLY2835219:in-vivocellcycle-dependent/independentanti-tumoractivitiesalone/incombinationwithgemcitabine[J].InvestNewDrugs,(2014),32:825)。目前LY2835219正在由禮來公司進(jìn)行III期臨床實(shí)驗(yàn)。由于這些化合物的出現(xiàn)，CDK4/6已經(jīng)成為明確的抗腫瘤靶點(diǎn)。研發(fā)出選擇性、活性和生物利用度更好的CDK4/6抑制劑，從而可能為臨床提供更多治療癌癥等與細(xì)胞異常增殖相關(guān)疾病的新選擇，是十分必要和迫切的。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述問題，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種新的取代2-氨基嘧啶類化合物。本發(fā)明提供的化合物，能夠選擇性抑制細(xì)胞周期蛋白激酶CDK4/6，使細(xì)胞停止在G1期，從而可以用于治療細(xì)胞增殖障礙性疾病。為了達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：一種結(jié)構(gòu)式I的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或結(jié)構(gòu)式I的化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物，A環(huán)是4-7元雜環(huán)，除與咪唑共用的N外，A環(huán)不含有其它雜原子，或者A環(huán)還含有一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，并且所述A環(huán)被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、 鹵代烷基、烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、的取代基所取代；R1和R2各自獨(dú)立地選自氫、鹵素，且R1和R2中至少一個(gè)是鹵素；R3選自氫原子、烷基、烷氧基、羥基；R4為其中，Z是羰基、O、S、亞胺基、磺?；騨＝0-4的整數(shù)；W和Y各自獨(dú)立地是C、N、O或S，但W和Y不能同時(shí)是C，且當(dāng)Z是O或S時(shí)，W是C；R8、R9、R10和R11各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、羥基烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、且Y＝N時(shí)，R8不能是-NR5R6；或者，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的5-7元雜環(huán)，并且所述5-7元雜環(huán)被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基烷基、羥基、鹵素、氰基、-NR5R6、的取代基所取代；R5、R6和R7各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、羥基烷基。優(yōu)選的，A環(huán)是5-7元雜環(huán)。更優(yōu)選的，A環(huán)是5-7元雜環(huán)，除與咪唑共用的N原子外，不含其它雜原子。優(yōu)選的，A環(huán)被1-4個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、烷氧基、羥基的取代基取代。更優(yōu)選的，A環(huán)被1-2個(gè)烷基取代。優(yōu)選的，A環(huán)和稠和的咪唑形成如下的化學(xué)結(jié)構(gòu)：優(yōu)選的，R1和R2各自獨(dú)立地是氫、氟或氯，且R1和R2中至少一個(gè)是氟或氯。更優(yōu)選的，R1和R2各自獨(dú)立地是氫或氟，且R1和R2中至少一個(gè)是氟。最優(yōu)選的，R1是氫或氟，R2是氟。優(yōu)選的，R3選自氫原子或烷基。優(yōu)選的，Z是羰基、O或n＝0-4的整數(shù)。更優(yōu)選的，Z是n＝0-2的整數(shù)，進(jìn)一步優(yōu)選的，n＝0或1。優(yōu)選的，W和Y各自獨(dú)立地選自C或N，但W和Y不能同時(shí)是C。優(yōu)選的，R8、R9、R10和R11各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、羥基或-NR5R6，其中，R5和R6各自獨(dú)立地選自氫原子和烷基。進(jìn)一步優(yōu)選的，R4選自如下結(jié)構(gòu)的取代基：其中，R12和R13各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基或羥基，R14選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、羥基或-NR5R6，R5和R6各自獨(dú)立地選自氫原子和烷基。還優(yōu)選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的6元雜環(huán)。更優(yōu)選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成含一個(gè)N的6元雜環(huán)。進(jìn)一步優(yōu)選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成如下的化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中R15選自羥基或烷氧基；進(jìn)一步優(yōu)選為羥基。作為的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明還提供結(jié)構(gòu)式II、III、IV或V的化合物或各自的互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或所述結(jié)構(gòu)式II、III、IV或V的化合物、各自的互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物，其中，Z、W、Y、R1、R2、R3、R8、R9和R15的定義如前，R16和R17各自獨(dú)立地選自氫原子、烷基、烷氧基或鹵代烷基。作為更優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明提供如下結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、溶劑化物或多晶型體，作為另一更優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明提供如下結(jié)構(gòu)的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或所述化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物，本發(fā)明所述的化合物還包括同位素標(biāo)記的上述所有化合物。本發(fā)明還提供一種結(jié)構(gòu)式VI的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或所述結(jié)構(gòu)式VI的化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物，其中，A環(huán)、R1和R2的定義如前，X為離去基團(tuán)或氨基。優(yōu)選的，X是鹵素或氨基，更優(yōu)選是氟、氯或氨基。本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供結(jié)構(gòu)式I-V的化合物的制備方法，包括結(jié)構(gòu)式VI和結(jié)構(gòu)式VII的化合物在非質(zhì)子溶劑中，經(jīng)鈀催化偶聯(lián)反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)式I的化合物，其中，A環(huán)、R1、R2、R3和R4的定義如前，X和M各自獨(dú)立地為離去基團(tuán)或氨基，X和M中只能有一個(gè)且必須有一個(gè)為氨基；優(yōu)選的，所述離去基團(tuán)為鹵素；更優(yōu)選的，所述離去基團(tuán)為氟或氯。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供結(jié)構(gòu)式I-V的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或所述結(jié)構(gòu)式I-V的化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物在制備用于治療細(xì)胞增殖障礙性疾病的藥物制劑中的用途。優(yōu)選的，所述藥物制劑包括藥學(xué)上可以接受的輔料。優(yōu)選的，所述細(xì)胞增殖障礙性疾病是指哺乳動(dòng)物或人的癌癥，更優(yōu)選的是指人的癌癥，包括惡性實(shí)體瘤和惡性非實(shí)體瘤，具體包括但不限于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、腦癌、胃癌等。還優(yōu)選的，所述細(xì)胞增殖障礙性疾病還可以是指艾滋病、動(dòng)脈粥樣硬化、血管支架植入后再狹窄。優(yōu)選的，上述用途是指所述結(jié)構(gòu)式I-V的化合物或其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或其混合物形式，或所述結(jié)構(gòu)式I-V的化合物、其互變異構(gòu)體、內(nèi)消旋體、外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體的藥學(xué)上可以接受的鹽或溶劑化物作為唯一活性成分或聯(lián)合其它具有生物活性的物質(zhì)在制備用于治療細(xì)胞增殖障礙性疾病的藥物制劑中的用途。所述其它具有生物活性的物質(zhì)包括但不限于抗癌劑、免疫抑制劑、抗病毒劑等。其中，所述抗癌劑選自烷化劑(如環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、塞替派、司莫司汀、鹽酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇等)，抗代謝類抗腫瘤藥(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羥基脲、替加氟、甲異靛、巰嘌呤等)，鉑絡(luò)合劑(如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑等)，抗生素類抗腫瘤藥(放線菌 素D、絲裂霉素、阿霉素、平陽霉素、表柔比星、吡柔比星、柔紅霉素、博來霉素等)，天然來源抗腫瘤藥(高三尖杉酯堿及其衍生物、長春新堿及其衍生物、羥喜樹堿及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、長春地辛及其衍生物、長春堿及其衍生物、重酒石酸長春瑞賓、紫杉醇及其衍生物、秋水仙堿及其衍生物、欖香烯及其衍生物等)，激素類抗腫瘤藥(如氨魯米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、來曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制劑(如舒尼替尼、索拉非尼、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、達(dá)沙替尼、來那替尼等)，抗體抗腫瘤藥(如曲妥單抗、帕妥珠單抗、利妥昔單抗、帕尼單抗、貝伐單抗、伊匹單抗、奧法木單抗、雷莫盧單抗等)，mTOR抑制劑(如依維莫司、西羅莫司、佐他莫司等)等。本發(fā)明還提供一種治療患有所述細(xì)胞增殖障礙性疾病的患者的方法，包括對(duì)所述患者通過口服或非口服途徑給予有效劑量的本發(fā)明所述化合物。優(yōu)選的，上述治療患有所述細(xì)胞增殖障礙性疾病的患者的方法，包括對(duì)所述患者通過口服或非口服途徑給予有效劑量的本發(fā)明所述化合物和所述其它具有生物活性的物質(zhì)。所述其它具有生物活性的物質(zhì)包括但不限于抗癌劑、免疫抑制劑、抗病毒劑等。其中，所述抗癌劑選自烷化劑(如環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、塞替派、司莫司汀、鹽酸氮芥、白消安、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、硝卡芥、氮甲、卡莫司汀、洛莫司汀、六甲蜜胺、二溴甘露醇等)，抗代謝類抗腫瘤藥(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、羥基脲、替加氟、甲異靛、巰嘌呤等)，鉑絡(luò)合劑(如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑等)，抗生素類抗腫瘤藥(放線菌素D、絲裂霉素、阿霉素、平陽霉素、表柔比星、吡柔比星、柔紅霉素、博來霉素等)，天然來源抗腫瘤藥(高三尖杉酯堿及其衍生物、長春新堿及其衍生物、羥喜樹堿及其衍生物、依托泊苷及其衍生物、長春地辛及其衍生物、長春堿及其衍生物、重酒石酸長春瑞賓、紫杉醇及其衍生物、秋水仙堿及其衍生物、欖香烯及其衍生物等)，激素類抗腫瘤藥(如氨魯米特、他莫昔芬、地塞米松、度他雄胺、氟他胺、戈那瑞林、醋酸亮丙瑞林、來曲唑等)，VEGFR或EGFR抑制劑(如舒尼替尼、索拉非尼、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、凡德替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、卡奈替尼、阿法替尼、木利替尼、達(dá)沙替尼、來那替尼等)，抗體抗腫瘤藥(如曲妥單抗、帕妥珠單抗、利妥昔單抗、帕尼單抗、貝伐單抗、伊匹單抗、奧法木單抗、雷莫盧單抗等)，mTOR抑制劑(如依維莫司、西羅莫司、佐他莫司等)等。本發(fā)明的說明書中，如無特殊說明，所述“烷基”，指的是C1-C6的直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選為C1-C4的直鏈或支鏈烷基，進(jìn)一步優(yōu)選為甲基、乙基、丙基或異丙基。所述“烷氧基”，指的是C1-C6的直鏈或支鏈烷氧基，優(yōu)選為C1-C4的直鏈或支鏈烷氧基，進(jìn)一步優(yōu)選為甲氧基、乙氧基、丙氧基或2-甲基乙氧基。所述“環(huán)烷基”，指的是未取代或烷基、烷氧基取代的C3-C7的環(huán)烷基，優(yōu)選為未取代或烷基、烷氧基取代的C3-C6的環(huán)烷基，進(jìn)一步優(yōu)選為環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、甲基環(huán)丙烷、環(huán)戊烷或環(huán)己烷。所述“鹵素”，指的是氯或氟。所述“鹵代烷基”指的是氯取代或氟取代C1-C6的直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選為氯取代或氟取代C1-C4的直鏈或支鏈烷基，進(jìn)一步優(yōu)選為一氟代甲基、二氟代甲基、三氟代甲基、一氯代甲基、二氯代甲基、三氯代甲基、1-氟乙基、1-氯丙基、1-氯乙基、1-氯丙基?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，CDKs抑制劑的毒性主要與其抑制CDK1有關(guān)。因此，作為CDKs抑制劑類化合物，希望其對(duì)CDK4/CDK6和CDK1的作用差異越顯著越好，即選擇性抑制CDK4/CDK6。在平行試驗(yàn)中，與現(xiàn)有技術(shù)公開的LY2835219(由WO2010075074公開，又名Bemaciclib)相比，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出更好的CDK4/CDK6選擇性。IC50(CDK4)/IC50(CDK1)和IC50(CDK6)/IC50(CKD1)可以體現(xiàn)化合物對(duì)于CDKs的選擇性——數(shù)值越小，對(duì)CDK4/6的選擇性越好，預(yù)示著化合物的泛CDK抑制的毒性可能越小。對(duì)照化合物(LY2835219)的IC50(CDK4)/IC50(CDK1)≈0.03，IC50(CDK6)/IC50(CKD1)≈0.139；而本發(fā)明實(shí)施例17、18、19、20、24、25、27、28、30、31、35、36、37、39、40、41、42、 43、46、47、53、55、57、59、60、65、72、74等的化合物都表現(xiàn)出比對(duì)照化合物更好的對(duì)CDK4/6的選擇性，具體見表2。大鼠和小鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)也表明本發(fā)明代表化合物的口服吸收良好、半衰期長，具有顯著的口服吸收效果。具體實(shí)施方式以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明所述的結(jié)構(gòu)式VI的化合物是合成結(jié)構(gòu)式I的化合物的關(guān)鍵中間體，其和結(jié)構(gòu)式VII的化合物在非質(zhì)子溶劑中，經(jīng)鈀催化偶聯(lián)反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)式I的化合物。其中，A環(huán)、R1、R2、R3、R4、X和M的定義如前。優(yōu)選的，A環(huán)為5-7元雜環(huán)，除與咪唑共用的N外，不含有其它的雜原子，并且所述A環(huán)優(yōu)選無取代，或者被1-2個(gè)C1-C3的直鏈或支鏈烷基取代。R1和R2各自獨(dú)立地是氫或氟，且R1和R2中至少一個(gè)是氟。R3優(yōu)選為C1-C3的直鏈或支鏈烷基，更優(yōu)選為甲基或乙基。R4優(yōu)選為如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)：其中，R12和R13如前定義，更優(yōu)選地各自獨(dú)立地選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基、C3-C6的環(huán)烷基、羥基取代C1-C3的直鏈或支鏈烷基或鹵代C1-C3的直鏈或支鏈烷基；R14選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基、鹵代C1-C3的直鏈或支鏈烷基或-NR5R6，R5和R6獨(dú)立地選自氫原子、C1-C3的直鏈或支鏈烷基?；蛘?，還優(yōu)選的，R3和R4與其連接的C原子一起形成如下的化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中R15選自羥基或烷氧基；進(jìn)一步優(yōu)選為羥基。優(yōu)選的，X為氟或氯，M為氨基；或，X為氨基，M為氟或氯。下述實(shí)施例1-11具體描述了作為關(guān)鍵中間體的結(jié)構(gòu)式VI的化合物的合成，實(shí)施例12-74具體描述了上述中間體參與的結(jié)構(gòu)式I的化合物的合成。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。以上對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明做出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。實(shí)施例17-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑第一步：(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5,5-二甲基吡咯烷-2-亞胺向反應(yīng)瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯(4.5g,21.6mmol)，4,4-二甲基吡咯烷-2-酮(4.9g,43.3mol)，三乙胺(3.3g,32.7mmol)，三氯氧磷(5g,32.4mmol)和甲苯(100mL)，回流攪拌反應(yīng)3小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，飽和碳酸鈉水溶液(30mL×2)洗滌.有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(3.2g,黃色固體)，產(chǎn)率49％。MSm/z(ESI):303.0,305.0(M+H)第二步：7-溴-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向微波反應(yīng)瓶中加入第一步制備的(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5,5-二甲基吡咯烷-2-亞胺(3.03g,10mmol)，碳酸銫(6.50g,20mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(30mL)，將該混合物在微波中210℃攪拌反應(yīng)30分鐘。冷卻至室溫，在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(150mL)，用飽和氯化鈉洗滌(30mL×3)。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(1.50g,黃色固體)，產(chǎn)率53％。MSm/z(ESI):283.0,285.0(M+H)第三步：5-氟-1,1-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應(yīng)瓶中加入第二步制備的7-溴-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.5g,5.4mmol)，雙(頻哪醇)二硼(1.70g,6.5mmol),Pd(dppf)Cl2(490mg,0.60mmol),醋酸鉀(1.10g,11mmol)和二氧六環(huán)(50mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，該混合物在100℃攪拌反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/2)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(1.20g,黃色固體)，產(chǎn)率67％。MSm/z(ESI):330.9(M+H)第四步：7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應(yīng)瓶中加入第三步制備的5-氟-1,1-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.2g,3.6mmol)，2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.664g,4.0mmol),Pd(PPh3)2Cl2(282mg,0.40mmol),碳酸鈉(763mg,7.2mmol)和DME/H2O(40mL/10mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，該混合物在80℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液抽濾，濾液真空濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/3)純化所得殘余物，得到標(biāo) 題化合物(0.51g,白色固體)，產(chǎn)率42％。MSm/z(ESI):334.9(M+H)實(shí)施例27-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑第一步：(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5-甲基吡咯-2-亞胺向反應(yīng)瓶中加入4-溴-2,6-二氟苯(5g,24mmol)，5-甲基吡咯烷-2-酮(4.8g,48mol)，三乙胺(7.2g,72mmol)，三氯氧磷(11g,72mmol)和甲苯(50mL)，回流攪拌反應(yīng)3小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，飽和碳酸鈉水溶液(50mL×2)洗滌.有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(3g,黃色固體)，產(chǎn)率43％。MSm/z(ESI):289.15(M+H)第二步：7-溴-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向微波反應(yīng)瓶中加入第一步制備的(Z)-N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-5-甲基吡咯-2-亞胺(2.89g,10mmol)，碳酸銫(6.5g,20mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(20mL)，將該混合物在微波中210℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。冷卻至室溫，在反應(yīng)液中加入乙酸乙酯(150mL)，飽和氯化鈉洗滌(100mL×3)。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(2.1g,黃色固體)，產(chǎn)率78％。MSm/z(ESI):270.14(M+H)第三步：5-氟-1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應(yīng)瓶中加入第二步制備的7-溴-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(1.5g,5.57mmol)，雙(頻哪醇)二硼(1.3g,5.57mmol),Pd(dppf)Cl2(490mg,0.60mmol),醋酸鉀(1.10g,11mmol)和二氧六環(huán)(50mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，該混合物在100℃攪拌反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(0.83g,白色固體)，產(chǎn)率47％。MSm/z(ESI):317.2(M+H)第四步：7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑向反應(yīng)瓶中加入第三步制備的5-氟-1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(0.83g,2.63mmol)，2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.44g,2.63mmol),Pd(PPh3)4(440mg,0.26mmol),K3PO4(1.1g,5.2mmol)和DME/H2O(40mL/10mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，該混合物在100℃攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束，冷卻至室溫，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(50mL×3)。抽濾，濾液用無水硫酸鈉干燥，真空濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)純化所得殘余物，得到標(biāo)題化合物(0.3g,白色固體)，產(chǎn)率36％。MSm/z(ESI):321.75(M+H)實(shí)施例37-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以5-乙基吡咯-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例47-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以4,4-二甲基吡咯-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例57-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以4-甲基吡咯-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例67-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以4-乙基吡咯-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例78-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以哌啶-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例82-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以己內(nèi)酰胺為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例97-(2-氯嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，在第四步反應(yīng)中以2,4二氯嘧啶為原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例107-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以4-溴-2-氟苯胺為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例117-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑采用與實(shí)施例1類似的反應(yīng)步驟，以吡咯-2-酮為起始原料，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例12N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,3-二氫-1H-苯并 [d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪向反應(yīng)瓶中加入1-乙基哌嗪(1.8g,16mmol)，6-溴-吡啶-3-甲醛(3g,16mmol)和二氯甲烷(50mL)，攪拌下分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(3.7g,17.5mmol)，混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。在反應(yīng)液中加入二氯甲烷(20mL)和氫氧化鈉水溶液(2N,15mL).分液，水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(3.6g,黃色油狀物)，產(chǎn)率80％。MSm/z(ESI):285.2(M+H)第二步：5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入第一步制備的1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(2.84g,10mmol),2-二環(huán)己基膦基聯(lián)苯(0.7g,2mmol),Pd2(dba)3(915mg,1mmol)和無水甲苯(30mL)。混合物通過氮?dú)庵脫Q三次后，再加入LiHMDS(1MinTHF，20mL,20mmol)。在氮?dú)猸h(huán)境下，混合物在80℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(50mL),乙酸乙酯(50mL×2).萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾。用柱層析色譜法(DCM/MeOH/Et3N＝10:1:0.5％)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(1.34g,棕色固體)，產(chǎn)率61％。MSm/z(ESI):221.3(M+H)第三步：N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，實(shí)施例11制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(73mg,0.33mmol，第二步制備),叔丁醇鈉(64mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(30mg,0.033mmol)，XantPhos(38mg,0.066mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(15mg,黃色固體)，產(chǎn)率9.3％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.97(s,1H),8.69(d,J＝3.6Hz,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.07(s,1H),7.78-7.70(m,2H),4.24(t,J＝6.8Hz,2H),3.44(s,2H),3.05-3.01(m,2H),2.71-2.68(m,2H),2.39-2.33(m,8H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):491.1(M+H)實(shí)施例135-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.93g,24.3mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.97g,26.7mmol)，二異丙基乙基胺(4.65mL,26.7mmol)和乙腈(60mL),混合物在110℃下攪拌反應(yīng)72小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮，用柱色譜分離法(DCM/MeOH＝10/1)純化所得殘留物，得到標(biāo)題化合物(4.5g,白色固體)，產(chǎn)率60％。MSm/z(ESI):309.3(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應(yīng)瓶中加入4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(3.4g,11mmol，第一步制備),以及鈀碳(10％,400mg)、乙酸乙酯/乙醇(100mL，1:1)。混合物在氫氣環(huán)境中室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)。抽濾，減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(2.8g,白色固體)，產(chǎn)率93％。MSm/z(ESI):279.3(M+H)第三步：4-(6-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯向反應(yīng)瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(100mg,0.32mmol，實(shí)施例7制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(89mg,0.32mmol，第二步制備)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,黃色油狀物)，產(chǎn)率31％。MSm/z(ESI):563.2(M+H)第四步：5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(50mg,0.089mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(22mg,黃色固體)，產(chǎn)率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.10(s,1H)，8.08(s,1H)，8.03(s,1H)，7.74(d,J＝12.4Hz,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),4.20(s,2H),3.26(brs,8H),3.02(s,2H),2.08(brs,2H),1.97(brs,2H)MSm/z(ESI):463.1(M+H)實(shí)施例14N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(100mg,0.32mmol，實(shí)施例7制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(68mg,0.32mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(33mg,淡黃色固體)，產(chǎn)率20.5％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.00(s,1H),8.70(s,1H),8.23(s,1H)，8.20(s,1H)，8.06(s,1H),7.79-7.73(m,2H),4.23-4.21(m,2H),3.55(s,2H),3.05-3.02(m,2H),2.95-2.91(m,10H),2.09-1.97(m,4H),1.23-1.15(m,3H)MSm/z(ESI):505.1(M+H)實(shí)施例151-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-亞奈-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮第一步：2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽向反應(yīng)瓶中加入2-氯-5,6,7,8-四氫-1,6-萘啶(1g,5.9mmol)，二異丙基乙基胺(903mg,7mmol),2,5-二氧吡咯-1-基2-乙酰氧醋酸乙酯(1.27g,5.9mmol)和二氯甲烷(20mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，加入水(10mL)稀釋，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(600mg,黃色固體)，產(chǎn)率46％。MSm/z(ESI):267.2(M+H)第二步：5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入8-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶(600mg,0.18mmol，實(shí)施例7制備)，氨水(20mL),和異丙醇(20mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，混合物在110℃攪拌12小時(shí)，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(500mg,黃色固體)，產(chǎn)率88％。MSm/z(ESI):302.1(M+H)第三步：2-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.33mmol，第二步制備)，2-(2-氯-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(89mg,0.33mmol，第一步制備)，碳酸銫(215mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)，冷卻至室溫，加入水(10mL)稀釋。乙酸乙酯萃取(40mL×3).合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率19％。MSm/z(ESI):534.2(M+H)第四步：1-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮向反應(yīng)瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(6-氟-1,2,3,4-四氫苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡啶-8-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯(10mg,0.018mmol，第三步制備)，甲醇鈉(0.2mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水(10mL)稀釋，二氯甲烷萃取(20mL×2).合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(10mg,黃色固體)，產(chǎn)率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.93(s,1H),8.67(s,1H),8.07(s,2H),7.78(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),4.62-4.55(m,2H),4.21-4.19(m,4H),3.81-3.75(m,4H),3.04-3.01(m,2H),2.09-2.07(m,2H),1.98-1.97(m,2H)MSm/z(ESI):492.1(M+H)實(shí)施例16N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入2-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷(100mg,0.3mmol，實(shí)施例8制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率13％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.09(s,1H),8.71(s,1H),8.27-8.20(m,2H),8.07(s,1H),7.79-7.73(m,2H),4.23-4.20(m,2H),3.52(s,2H),3.12-2.85(m,10H),2.39-2.37(m,2H),2.09-2.08(m,2H),1.98-1.96(m,2H),1.15-1.06(m,5H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例175-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入2-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚烷(100mg,0.3mmol，實(shí)施例8制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(45mg,黃色油)，產(chǎn)率26％。MSm/z(ESI):577.3(M+H)第二步：5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(4-氟-7,8,9,10-四氫-6H-苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吖庚-2-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.078mmol，第一步制備)，三氟乙酸 (0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(10mg,黃色固體)，產(chǎn)率27％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.85(s,1H),8.65(s,1H),8.10-8.08(m,3H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H),7.53-7.50(m,1H),4.35(s,2H),3.56-3.50(m,4H),3.28-3.23(m,4H),3.04-3.03(m,2H),1.98(s,2H),1.90(s,2H),1.78(s,2H)MSm/z(ESI):477.3(M+H)實(shí)施例18N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實(shí)施例1制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)。混合物在120℃下加熱攪拌反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,白色固體)，產(chǎn)率32％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ10.14(s,1H),8.71(d,J＝3.6Hz,1H),8.23-8.20(m,3H),7.73-7.70(m,2H),3.54(brs,2H),3.13-3.09(m,3H),2.92-2.90(m,4H),2.59-2.56(m,4H),2.50-2.48(m,2H),1.67(s,6H),1.23-1.20(m,4H)MSm/z(ESI):519.6(M+H)實(shí)施例195-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑并-7- 基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實(shí)施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(92mg,黃色固體)，產(chǎn)率53％。MSm/z(ESI):577.3(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑并-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(92mg,0.16mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(37mg,黃色固體)，產(chǎn)率49％。1HNMR(MeOD,400MHz),δ8.50(s,1H),8.22(s,1H),8.19(s,1H),8.04(d,J＝2.8Hz,1H),7.82(d,J＝12.4Hz,1H),7.53(dd,J1＝2.8Hz,J2＝8.4Hz,1H),3.23-3.16(m,10H),2.68(t,J＝7.6Hz,2H),1.76(s,6H)MSm/z(ESI):477.2(M+H)實(shí)施例205-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪向反應(yīng)瓶中加入6-溴-吡啶3-甲醛(10g,53.7mmol),1-溴哌嗪(7.0g,70mmol)和二氯甲烷(100mL),攪拌下分批加入三乙酰氧硼氫化鈉(17g,81mmol).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。然后在反應(yīng)液中加入二氯甲烷(50mL)和氫氧化鈉水溶液(2N,15mL).分液，水相用二氯甲烷(50mL×2)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(50mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(12.3g,黃色油狀物)，產(chǎn)率85％。MSm/z(ESI):271.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2- 胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(500mg,1.5mmol)，氨水(5mL)和異丙醇(5mL)，100℃下悶罐反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液減壓濃縮,得標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)品(450mg,黃色油狀物)直接用于下一步反應(yīng)。MSm/z(ESI):316.1(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.31mmol，第二步制備)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(88mg,0.31mmol),碳酸銫(194mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(65mg,白色固體)，產(chǎn)率42％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.09(s,1H),8.70(d,J＝3.6Hz,1H),8.23-8.21(m,3H),7.73-7.68(m,2H),3.53(s,2H),3.12-3.09(m,2H),2.97-2.95(m,4H),2.66-2.50(m,9H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實(shí)施例211-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥乙基-1-酮第一步：2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸乙酯向反應(yīng)瓶中加入2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(85mg,0.32mmol),5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.32mmol),Cs2CO3(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色油)，產(chǎn)率11％。MSm/z(ESI):548.0(M+H)第二步：1-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥乙基-1-酮在反應(yīng)瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸乙酯(20mg,0.37mmol，第一步制備)，甲醇鈉(1M甲醇溶液，2mL)和二氯甲烷(6mL)。在氮?dú)猸h(huán)境中，混合物在 室溫下攪拌1小時(shí)。加入水(10mL),乙酸乙酯萃取(10mL×3).合并有機(jī)相，飽和食鹽水(40mL),無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液減壓濃縮，用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(10mg,黃色固體)，產(chǎn)率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.99(s,1H),8.68(s,1H),8.23(s,1H),8.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.63-7.55(m,1H),4.66-4.56(m,2H),4.21(brs,2H),3.82-3.70(m,2H),3.11(t,J＝7.2Hz,2H),2.89-2.82(m,2H),2.57(t,J＝7.6Hz,2H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):506.1(M+H)實(shí)施例22N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.32mmol，實(shí)施例9制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(70mg,0.32mmol),碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(16mg,淡黃色固體)，產(chǎn)率10％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.89(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.35(s,1H),8.33(s,1H),8.24(s,1H),7.89(d,J＝12.8Hz,1H),7.74-7.72(m,2H),3.56(s,2H),3.09(t,J＝7.2Hz,2H),2.93-2.90(m,4H),2.57-2.54(m,4H),2.39-2.35(m,2H),1.70(s,6H),0.86-0.83(m,5H)MSm/z(ESI):501.2(M+H)實(shí)施例234-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.32mmol，實(shí)施例9制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(89mg,0.32mmol)，碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(45mg,黃色油狀物)，產(chǎn)率25％。MSm/z(ESI):559.1(M+H)第二步：4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.08mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(18mg,黃色固體)，產(chǎn)率49％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.62(s,1H),8.55(d,J＝5.6Hz,1H),8.30(s,1H),8.18(d,J＝9.2Hz,1H),8.05(s,1H),7.87(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.48-7.46(m,1H),3.22(brs,4H),3.10-3.06(m,6H),2.57-2.54(m,3H),1.69(s,6H)MSm/z(ESI):459.2(M+H)實(shí)施例244-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.63mmol，按照實(shí)施例10方法制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(139mg,0.63mmol),碳酸銫(410mg,1.26mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，BINAP (37mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(134mg,淡黃色固體)，產(chǎn)率43％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.08(s,1H),8.67(s,1H),8.39(s,1H),8.28-8.23(m,2H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.72-7.67(m,2H),3.55(s,2H),3.42-3.39(m,2H),3.10-3.07(m,4H),2.93-2.90(m,4H),2.56-2.52(m,2H),2.43-2.41(m,2H),1.67(s,6H),1.21(t,J＝6.8Hz,3H)MSm/z(ESI):501.1(M+H)實(shí)施例254-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(300mg,0.95mmol，按照實(shí)施例10方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(264mg,0.95mmol)，碳酸銫(618mg,1.9mmol),Pd2(dba)3(87mg,0.095mmol)，BINAP(124mg,0.2mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(4mL).混合物在120℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,黃色固體)，產(chǎn)率9.4％。MSm/z(ESI):559.3(M+H)第二步：4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.09mmol，第一步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(22mg,黃色固體)，產(chǎn)率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.31(s,1H),8.71(s,1H),8.43(s,1H),8.06-8.02(m,3H),7.93(d,J＝7.2Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),4.75(brs,1H),3.40-3.28(m,10H),2.63-2.59(m,2H),1.73(s,6H)MSm/z(ESI):477.1(M+H)實(shí)施例265-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7- 基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：6-硝基-3',6'-二氫-[3,4'-雙吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(30.9g,0.1mol)，碳酸銫(65g,0.2mol)，Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)和二氧六環(huán)/水(250mL/30mL)?；旌衔镌?5℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，冷卻至室溫，減壓濃縮，用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(11g,白色固體)，產(chǎn)率36％。MSm/z(ESI):306.1(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入6-硝基-3',6'-二氫-[3,4'-雙吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0.9g,3mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，90mg)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL)，混合物在氫氣下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。過濾，濾液濃縮直接得到標(biāo)題化合物(790mg,白色固體)，產(chǎn)率95％。MSm/z(ESI):278.2(M+H)第三步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例1方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(45mg,黃色固體)，產(chǎn)率26％。MSm/z(ESI):576.2(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(45mg,0.078mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(25mg,黃色固體)，產(chǎn)率68％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.06(s,1H),8.69(s,1H),8.20-8.17(m,3H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),3.12-3.09(m,2H),3.03-3.01(m,2H),2.98-2.95(m,3H),2.58-2.55(m,2H),1.97-1.94(m,2H),1.85-1.82(m,2H),1.67 (s,6H)MSm/z(ESI):476.1(M+H)實(shí)施例275-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入6-溴-3-醛基吡啶(5.0g,26.88mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.5g,35mmol)和二氯甲烷(30mL),再分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(8.6g,40mmol).化合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，加入飽和碳酸鈉溶液(15mL)，二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(3.4g,淡黃色固體)，產(chǎn)率36％。MSm/z(ESI):357.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實(shí)施例1方法制備),4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(107mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol)，Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xant-phos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),二氯甲烷(10mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(62mg,黃色油)，產(chǎn)率35％。MSm/z(ESI):591.2(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg,0.1mmol，第二步制備)，鹽酸(2N,2mL)和1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(5mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(22mg,黃色固體)，產(chǎn)率45％。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz),δ10.08(s,1H),8.69(s,1H),8.23-8.2(m,3H),7.73-7.68(m,2H),3.54(s,2H),3.12-3.06(m,6H),2.58-2.55(m,6H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):491.1(M+H)實(shí)施例28N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H- 苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：(1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(2.0g,9.9mmol)，哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.98g,9.9mmol)，三乙胺(1.31g,12.87mmol)和二甲基亞砜(8mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1.5小時(shí)，冷卻至室溫，乙酸乙酯萃取(25mL×3).合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌(25mL),無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(1.4g,黃色固體)，產(chǎn)率44.1％。MSm/z(ESI):323.1(M+H)第二步：(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入(1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g,3.1mmol，第一步制備)，Pd/C(0.1g),乙酸乙酯(2mL)和乙醇(8mL)。在氫氣中，混合物室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)。反應(yīng)液抽濾，濾餅用乙酸乙酯(20mL)洗滌，合并有機(jī)相，濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝50/1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(0.87g,類白色固體)，產(chǎn)率95％。MSm/z(ESI):293.2(M+H)第三步：(1-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，實(shí)施例1制備),(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(131mg,0.45mmol),碳酸銫(292mg,0.90mmol)，Pd2(dba)3(41mg,0.045mmol)，Xant-phos(26mg,0.045mmol)和1,4-二氧六環(huán)(10mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),二氯甲烷(10mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(39mg,黃色油)，產(chǎn)率14.7％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第四步：N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入(1-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30.0mg,0.05mmol，第三步制備)，鹽酸(2N,2mL)和1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(5mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo) 題化合物(18mg,黃色固體)，產(chǎn)率73％。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz),δ11.06(s,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.94-7.91(m,2H),7.82(d,J＝6.9Hz,1H),7.72(d,J＝9.0Hz,1H),3.74(d,J＝9.0Hz,2H),3.22-3.20(m,1H),3.13(t,J＝5.4Hz,2H),2.86(t,J＝8.4Hz,2H),2.58((t,J＝5.7Hz,2H),2.00-1.98(m,2H),1.66-1.60(m,8H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實(shí)施例295-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：6-溴-2-甲基-3-醛吡啶向反應(yīng)瓶中加入3,6-二溴-2-甲基吡啶(1.0g,3.9mmol)和無水乙醚(10mL)冷卻至-78℃，滴加n-BuLi(1.6Minhexanes,2.4mL,3.9mmol),攪拌1小時(shí)，加入無水DMF(307mg,4.2mmol),室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)。加入飽和氯化銨溶液(10mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(0.4g,白色固體)，產(chǎn)率51％。MSm/z(ESI):202.1(M+H)第二步:4-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛吡啶(0.4g,2mmol,第一步制備)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.37g,2mmol)，三乙?；饸浠c(0.53g,2.5mmol)和二氯甲烷(35mL),混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(500mg,白色固體)，產(chǎn)率75％。MSm/z(ESI):372.2(M+H)第三步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實(shí)施例20的第二步反應(yīng)制備)，4-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(111mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率17％。MSm/z(ESI):605.3(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.05mmol，第三步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(17mg,黃色固體)，產(chǎn)率68％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.96(s,1H),8.67(s,1H),8.24(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝12.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),3.42(s,2H),3.21-3.18(m,2H),2.87(brs,4H),2.72(brs,2H),2.58-2.54(m,2H),2.38(s,3H),2.34-2.32(m,2H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實(shí)施例305-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入4-甲基乙烯哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g,5mmol)和四氫呋喃(10mL)，再加入9-BBN(0.5MinTHF,15mL,7.5mmol),混合物在75℃下攪拌1小時(shí)。冷卻至室溫，再加入5-溴-6-甲基吡啶-2-胺(748mg,4mmol),碳酸鉀(0.8g,5.5mmol),DMF(10mL)和水(1mL),混合物在60℃下攪拌反應(yīng)4小時(shí)。加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(1g,黃色固體)，產(chǎn)率84％.MSm/z(ESI):306.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例1方法制備),4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(92mg,0.3mmol，第一步制備),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(65mg,黃色固體)，產(chǎn)率36％。MSm/z(ESI):604.2(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6- 甲基-5-(哌啶-4-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(65mg,0.1mmol，第二步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(4mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(25mg,黃色固體)，產(chǎn)率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.92(s,1H),8.83(brs,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),3.35(s,2H),3.24-3.21(m,2H),3.12-3.10(m,2H),2.58-2.53(m,4H),2.43(s,3H),1.78-1.74(m,3H),1.67(s,6H),1.43-1.40(m,2H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實(shí)施例315-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入3-溴-6-氯-2-甲基吡啶(1.5g,7.2mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g,6.4mmol),叔丁醇鈉(1.4g,14.4mmol),Pd2(dba)3(659mg,0.72mmol)，Xantphos(832mg,1.44mmol)和甲苯(20mL)，混合物在100℃下加熱攪拌反應(yīng)16小時(shí)。冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮，用柱層析色譜法(乙酸乙酯/石油醚＝1:5)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(698mg,黃色油)，產(chǎn)率31％。MSm/z(ESI):312.3(M+H)第二步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(95mg,0.3mmol，按照實(shí)施例20的第二步反應(yīng)制備)，4-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(69mg,0.12mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL),混合物150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(56mg,黃色固體)，產(chǎn)率32％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入(56mg,0.095mmol)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(25mg,黃色固體)，產(chǎn)率54％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.43(s,1H),8.94(brs,1H),8.73(s,1H),8.22(s,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,1H),7.74-7.65(m,2H),3.28(brs,4H),3.13-3.09(m,2H),3.09-3.05(m,4H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.48(s,3H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實(shí)施例32(4-乙基哌嗪-1-基)(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基酮第一步：6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸乙酯向反應(yīng)瓶中加入6-氨基煙酸乙酯(10g,60mmol)，DMAP(0.72g,6mmol),(Boc)2O(19.5g,90mmol)和四氫呋喃(600mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)12小時(shí)，再加入二氯甲烷(100mL)，鹽酸(0.5N，20mL)洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥。抽濾，濃縮，即得到標(biāo)題化合物(15g，白色固體)，產(chǎn)率94％。MSm/z(ESI):267.2(M+H)第二步：6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸向反應(yīng)瓶中加入6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸乙酯(10g,37.6mmol，第一步制備),氫氧化鈉(1M，75mL)和MeOH(100mL)，混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。減壓濃縮，殘留物用鹽酸(2N)中和至pH為3,過濾，得到標(biāo)題化合物(6.5g,白色固體)，產(chǎn)率73％。MSm/z(ESI):239.2(M+H)第三步：(5-(4-乙基哌-1-羰基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入6-((叔丁氧基羰基)氨基)煙酸(5g,21mmol，第二步制備)，1-乙基哌嗪(4.8g，42mmol)，HOBt(4.3g,31.5mmol),三乙胺(6.4g,63mmol)，EDCI(6.0g,31.5mmol和DMF(100mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí).反應(yīng)液濃縮，加入二氯甲烷(50mL)，鹽酸(0.1N，10mL)洗滌，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮得標(biāo)題化合物(4.0g,白色固體)，產(chǎn)率57％。MSm/z(ESI):335.2(M+H)第四步：(6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲基酮向反應(yīng)瓶中加入(5-(4-乙基哌-1-羰基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2g,6mmol，第三步制備)，三氟乙酸(5mL)和DMF(20mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí).加入二氯 甲烷(20mL)，飽和碳酸鈉溶液洗滌(20mL)，飽和食鹽水(20mL)洗滌。無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.0g,白色固體)，產(chǎn)率71％.MSm/z(ESI):235.1(M+H)第五步：(4-乙基哌嗪-1-基)(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基酮向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，實(shí)施例1制備)，(6-氨基吡啶-3-基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲基酮(140mg,0.6mmol),碳酸銫(391mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(75mg,黃色固體)，產(chǎn)率24％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.44(s,1H),8.75(s,1H),8.37(s,1H),8.31(d,J＝8.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.82-7.97(m,1H),7.71(d,1H),3.37-3.34(m,2H),3.16-3.12(m,2H),3.10-3.08(m,2H),2.56(q,J＝7.6Hz,2H),2.39-2.34(m,6H),1.67(s,6H),0.86(t,J＝7.6Hz,3H)MSm/z(ESI):533.3(M+H)實(shí)施例33N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶向反應(yīng)瓶中加入1-乙基哌啶-4-醇(1.0g,7.7mmol)，2,5-二溴吡啶(2g,8.5mmol)和二甲亞砜(30mL),再加入叔丁醇鈉(1.7g,15.4mmol).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入水(30mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(702mg,黑色固體)，產(chǎn)率32％。MSm/z(ESI):287.2(M+H)第二步:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.32mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備)，2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧)吡啶(91mg,0.32mmol),碳酸銫(208mg,0.64mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小 時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,白色固體)，產(chǎn)率30％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ9.67(s,1H),8.61(d,J＝3.6Hz,1H),8.57(s,1H),8.12(s,1H),8.00-7.97(m,1H),7.64(d,J＝12.8Hz,1H),4.94-4.91(m,1H),3.10(t,J＝7.2Hz,2H),2.73-2.71(m,2H),2.58-2.56(m,2H),2.37-2.32(m,2H),2.17-2.13(m,2H),1.99-1.97(m,2H),1.66(s,6H),1.62(s,2H),1.02t,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):520.3(M+H)實(shí)施例345-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌啶-4-基氧)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g,5mmol)，2,5-二溴吡啶(1.2g,5mmol),叔丁醇鈉(0.72g,7.5mmol)和DMSO(10mL)，混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)。加入水(10mL)和二氯甲烷(30mL)，有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮，用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(0.8g,白色固體)，產(chǎn)率45％。MSm/z(ESI):358.2(M+H)第二步：4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.64mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備)，4-((6-溴吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(227mg,0.64mmol，第一步制備),叔丁醇鈉(92mg,0.96mmol),Pd2(dba)3(59mg,0.064mmol)，XantPhos(74mg,0.128mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,黃色固體)，產(chǎn)率13.2％。MSm/z(ESI):592.3(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌啶-4-基氧)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.084mmol，第二步制備)， TFA(2mL)和二氯甲烷(6mL).混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí),再加入水(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×2).合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(25mg,黃色固體)，產(chǎn)率60.5％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.73(s,1H),8.63(s,1H),8.61(s,1H),8.10(s,1H),8.06-8.03(m,1H),7.65(d,J＝12.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,1H),5.16-5.13(m,1H),3.26-3.24(m,3H),3.12-3.05(m,4H),2.58-2.50(m,2H),2.11-2.09(m,2H),1.98-1.96(m,2H),1.81(s,6H)MSm/z(ESI):492.2(M+H)實(shí)施例35N-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.0g,19.7mmol)，1-乙基哌嗪(3.4g,29.8mmol)，K2CO3(4.1g,29.6mmol)，TBAI(0.42g,1.2mmol)和二甲亞砜(40mL),混合物在80℃下加熱攪拌反應(yīng)16小時(shí)。冷卻至室溫，將反應(yīng)液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(3.59g,棕色固體)，產(chǎn)率77％。MSm/z(ESI):237.1(M+H)第二步：5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入1-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪(0.9g,3.8mmol，第一步制備)，鈀-碳(10％，18mg)和乙酸乙酯/甲醇(9mL/9mL)。在氫氣環(huán)境中，混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。過濾，濾液濃縮得標(biāo)題化合物(720mg,黃色固體)，產(chǎn)率92％。MSm/z(ESI):207.1(M+H)第三步：N-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實(shí)施例1方法制備)，5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(123mg,0.6mmol，第二步制備),碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(5mL)?；旌衔镌?20℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化 得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,白色固體)，產(chǎn)率17％。1HNMR(DMSO,400MHz)δ9.80(s,1H),8.62(d,J＝4.0Hz,1H),8.18(s,1H)，8.05-8.02(m,2H),7.68(d,J＝12.4Hz,1H),7.42-7.39(m,1H),3.11-3.08(m,6H),2.57-2.50(m,6H),2.40-2.39(m,2H),1.66(s,6H),0.86(t,J＝6.4Hz,1H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實(shí)施例365-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入2-溴-5-醛基吡啶(5.0g,27mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.5g,35mmol)和二氯甲烷(30mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(8.6g,40mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)12小時(shí)，加入水(20mL),二氯甲烷萃取(30mL×3).合并有機(jī)相，飽和碳酸鈉溶液(40mL)和飽和氯化鈉溶液(40mL)依次洗滌,無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液濃縮，柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(5.3g,白色固體)，產(chǎn)率55％.MSm/z(ESI):358.2(M+H)第二步：1-(4-溴苯基)哌嗪向反應(yīng)瓶中加入4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3g,14.9mmol，第一步制備)，三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(30mL)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入飽和碳酸鈉溶液(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(3.1g,黃色固體)，產(chǎn)率81％。MSm/z(ESI):257.2(M+H)第三步：1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(2-氟乙基)哌嗪向反應(yīng)瓶中加入1-(4-溴苯基)哌嗪(1.4g,5.4mmol，第二步制備)，1-溴-2-氟乙烷(1.4g,10.8mmol)，碳酸鉀(3.0g,21.6mmol)和乙腈(15mL)。混合物在60℃下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，濃縮得標(biāo)題化合物(813mg,白色固體)，產(chǎn)率50％。MSm/z(ESI):304.1(M+H)第四步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基) 嘧啶-2-胺(200mg,0.63mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備),1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-(2-氟乙基)哌嗪(191mg,0.63mmol),碳酸銫(410mg,1.26mmol)，Pd2(dba)3(58mg,0.063mmol)，BINAP(40mg,0.063mmol)和1,4-二氧六環(huán)(4mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(78mg,白色固體)，產(chǎn)率23％。1HNMR(DMSO,400MHz)，δ10.12(s,1H),8.69(d,J＝3.6Hz,1H),8.21-8.19(m,3H),7.72-7.65(m,2H),4.58-4.44(m,2H),3.45(s,2H),3.34(s,2H),3.10(t,J＝7.2Hz,2H),2.57-2.44(m,10H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):537.3(M+H)實(shí)施例37N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪向反應(yīng)瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛基吡啶(1.5g,7.5mmol)，1-乙基哌嗪(1.1g,9.7mmol)和二氯甲烷(15mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.4g,11.25mmol)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，過濾，濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20/1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(782mg,白色固體)，產(chǎn)率35％。MSm/z(ESI):299.2(M+H)第二步：N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.16mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備)，1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(47mg,0.16mmol),碳酸銫(104mg,0.32mmol),Pd2(dba)3(29mg,0.032mmol)，BINAP(20mg,0.032mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在120℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率35％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.95(s,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),3.51(s,2H),3.35(s,2H),3.12-3.08(m,4H),2.91(brs,4H),2.58-2.54(m,2H),2.50-2.46(m,8H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):533.3(M+H)實(shí)施例385-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪向反應(yīng)瓶中加入6-溴-2-甲基-3-醛基吡啶(1.5g,7.5mmol)，1-甲基哌嗪(0.97g,9.7mmol)和二氯甲烷(15mL),分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(2.37g,11.25mmol)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，過濾，濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20/1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(809mg,白色固體)，產(chǎn)率38％。MSm/z(ESI):285.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.16mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備),1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(45mg,0.16mmol，第一步制備),Pd2(dba)3(29mg,0.032mmol),BINAP(20mg,0.032mmol),Cs2CO3(103mg,0.32mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?20℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(37mg,黃色固體)，產(chǎn)率45％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.94(s,1H),8.67(s,1H),8.23(s,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),3.51(s,2H),3.12-3.08(m,6H),2.72(s,3H),2.58-2.47(m,9H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例39(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：(S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.0g,19.7mmol)，(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.9g,29.6mmol),碳酸鉀(4.1g,29.6mmol)，TBAI(0.42g,1.2mmol)和DMSO(40mL)。混合物在80℃下攪拌反應(yīng)16小時(shí)，將反應(yīng)液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(3.5g,白色固體)，產(chǎn)率55％。MSm/z(ESI):323.2(M+H)第二步：(S)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入(S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.9g,2.8mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，90mg)和乙酸乙酯/甲醇(9mL/9mL)。在氫氣環(huán)境中，混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，過濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物(776mg,白色固體)，產(chǎn)率95％.MSm/z(ESI):293.2(M+H)第三步：(S)-4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，按照實(shí)施例1方法制備),(S)-4-(5-氨基吡啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(132mg,0.45mmol，第二步制備),Pd2(dba)3(41mg,0.045mmol),BINAP(56mg,0.09mmol),碳酸銫(294mg,0.9mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL).混合物在120℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(65mg,黃色固體)，產(chǎn)率25％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第四步：(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入(S)-4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(65mg,0.11mmol，第三步制備)，TFA(1mL)和二氯甲烷(5mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)3小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,淡黃色固體)，產(chǎn)率56％。1HNMR(DMSO,400MHz)，δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.18(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.69(d,J＝12Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),3.49-3.43(m,2H),3.12-3.08(m,2H),2.97-2.95(m,1H),2.84-2.78(m,2H),2.58-2.54(m,4H),2.22-2.17(m,1H),1.67(s,6H),1.02(d,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實(shí)施例40(R)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺采用和實(shí)施例39類似的方法，以(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯為起始原料，經(jīng)過四步反應(yīng)合成，得到標(biāo)題化合物(R)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.61(s,1H),8.17(s,1H),8.04-8.02(m,2H),7.68(d,J＝12.4Hz,1H),7.38(d,J＝6.4Hz,1H),3.48-3.45(m,2H),3.11-3.07(m,2H),2.97-2.95(m,1H),2.83-2.78(m,2H),2.57-2.50(m,3H),2.32-2.17(m,2H),1.66(s,6H),1.02(d,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實(shí)施例415-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(150mg,0.5mmol，按照實(shí)施例58第一步的方法制備),1-(6-氯-2-甲基吡啶-3-基)-4-甲基哌嗪(135mg,0.5mmol),Pd2(dba)3(46mg,0.05mmol),BINAP(62mg,0.1mmol),叔丁醇鈉(96mg,1.0mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL),混合物在120℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(113mg,黃色固體)，產(chǎn)率46％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.70(s,1H),8.63(s,1H),8.16(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝12.4Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),4.78-4.74(m,1H),3.14-3.08(m,4H),2.97-2.92(m,5H),2.40(s,3H),2.38-2.29(m,6H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實(shí)施例422-(4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙基-1-醇向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(20mg,0.042mmol，按照實(shí)施例19制備),2-溴乙醇(26mg,0.21mmol),碳酸鉀(29mg,0.21mmol)和DMF(2mL)?；旌衔镌?0℃下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(5mL×3),合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，(9mg,黃色固體)，產(chǎn)率43％。1HNMR(D2O-ex,400MHz),δ8.58(d,J＝3.6Hz,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝12.4Hz,1H),7.41-7.38(m,1H),3.54(t,J＝6Hz,1H),3.11-3.05(m,6H),2.60-2.56(m,6H),2.54-2.52(m,2H),1.64(s,6H)MSm/z(ESI):521.3(M+H)實(shí)施例435-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺采用與實(shí)施例39相似的方法，以5-溴-2-硝基吡啶和1-甲基哌嗪為起始原料，經(jīng)過三步反應(yīng)合成得到標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.77(s,1H),8.63(d,J＝3.6Hz,1H),8.18(s,1H),8.06(s,1H),8.03(s,1H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),3.14-3.08(m,6H),2.58-2.54(m,6H),2.28(s,3H),1.67(s,6H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實(shí)施例445-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氫-3,4'-聯(lián)吡啶向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(20.3g,0.1mol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧噁硼-2-基)-1,2,3,6-四氫吡啶(22.3g,0.1mol)，碳酸銫(65g,0.2mol)，Pd(dppf)Cl2(7.33g,0.01mol)和二氧六環(huán)/水(250mL/30mL)。混合物在85℃下加熱攪拌反應(yīng)12小時(shí)，冷卻至室溫，減壓濃縮，柱層析色譜法(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(5.7g,白色固體)，產(chǎn)率26％.MSm/z(ESI):220.2(M+H)第二步：5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入1'-甲基-6-硝基-1',2',3',6'-四氫-3,4'-聯(lián)吡啶(657mg,3.0mmol，第一步制備)，鈀碳(10％，66mg)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL)。在氫氣環(huán)境中，混合物室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(550mg,白色固體)，產(chǎn)率96％.MSm/z(ESI):192.1(M+H)第三步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(150mg,0.45mmol，按照實(shí)施例1制備),5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(86mg,0.45mmol),Pd2(dba)3(42mg,0.045mmol),BINAP(56mg,0.09mmol),Cs2CO3(293mg,0.9mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(4mL)。混合物150℃下微波反應(yīng)1小時(shí),冷卻至室溫.減壓濃縮，用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(90mg,黃色固體)，產(chǎn)率41％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.02(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.18(m,3H),7.71(d,J＝12.8Hz,1H),7.65(d,J＝6.8Hz,1H),3.45(s,2H),3.13-3.04(m,4H),2.84-2.80(m,4H),2.59-2.55(m,2H),1.99-1.97(m,4H),1.69(s,6H)MSm/z(ESI):490.3(M+H)實(shí)施例45N-(5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺采用與實(shí)施例44相似的合成方法，以5-溴-2-硝基吡啶和1-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧噁硼-2-基)-1,2,3,6-四氫吡啶為起始原料，經(jīng)過三步反應(yīng)合成得到標(biāo)題化合物。.1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.07(s,1H),8.69(s,1H),8.27-8.19(m,3H),7.71(d,J＝12.4Hz,1H),7.65(d,J＝6.4Hz,1H),3.57-3.54(m,2H),3.12-3.09(m,4H),2.99-2.97(m,3H),2.58-2.55(m,2H),2.03-2.01(m,4H),1.69(s,6H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):504.3(M+H)實(shí)施例46(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：(S)-4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入6-溴-3-醛基吡啶(2.43g,13mmol)and(S)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)(3.4g,17mmol)和二氯甲烷(30mL),再分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(4.3g,20mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)12小時(shí)，加入水(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3).有機(jī)相用飽和Na2CO3溶液洗滌(40mL),飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(2.2g,白色固體)，產(chǎn)率45％。MSm/z(ESI):372.1(M+H)第二步：(S)-4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(315mg,1mmol，按照實(shí)施例20的第二步方法制備),(S)-4-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(369mg,1mmol第一步制備),Pd2(dba)3(92mg,0.1mmol),BINAP(125mg,0.2mmol),叔丁醇鈉(200mg,2.0mmol)和1,4-二氧六環(huán)(15mL)?；旌衔镌?30℃下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，冷卻至室溫，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(100mg,黃色油)，產(chǎn)率17％。MSm/z(ESI):605.3(M+H)第三步：(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入(S)-4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.17mmol，第二步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(15mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)3小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(20mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(55mg,黃色固體)，產(chǎn)率64％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.18(m,3H),7.73-7.65(m,2H),3.41(s,2H),3.12-3.08(m,2H),2.80-2.77(m,1H),2.68-2.63(m,4H),2.59-2.55(m,2H),1.93-1.87(m,2H),1.67(s,6H)，1.59-1.54(m,1H)，0.89(t,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實(shí)施例47(S)-N-(5-((3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入(S)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(51mg,0.1mmol，按照實(shí)施例46制備),甲醛(5mg,0.15mmol)，三乙酰氧基硼氫化鈉(41mg,0.5mmol)和二氯甲烷(4mL)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入水(4mL)，二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(19mg,黃色固體)，產(chǎn)率37％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.19(m,3H),7.73-7.65(m,2H),3.41(s,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),2.66-2.57(m,5H),2.14-2.11(m,5H),2.00(brs,1H),1.79-1.74(m,1H),1.68(s,6H)，0.92(t,J＝6.0Hz,3H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例48N-(5-((4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1,1-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(50mg,0.1mmol，按照實(shí)施例27制備)，碳酸鉀(71mg,0.51mmol),環(huán)丙基溴(37mg,0.3mmol)和DMF(4mL)，混合液在50℃攪拌反應(yīng)5小時(shí),冷卻至室溫,加入水(10mL)，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(17mg,黃色固體)，產(chǎn)率32％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.032(s,1H),8.69(s,1H),8.22-8.19(m,3H),7.73-7.65(m,2H),5.84-5.74(m,1H),5.18-5.09(m,2H),3.45(s,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),2.92(d,J＝6.4Hz,2H),2.59-2.55(m,3H),2.39-2.37(m,7H),1.68(s,6H)MSm/z(ESI):531.3(M+H)實(shí)施例49N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol，按照實(shí)施例5制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL),混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物胺(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.01(s,1H),8.70(s,1H),8.20-8.18(m,2H),8.05(s,1H),7.78-7.71(m,2H),4.44-4.40(m,1H),3.83-3.78(m,1H),3.48(s,2H),3.25-3.20(m,3H),2.72-2.65(m,3H),2.37-2.32(m,6H),1.29-1.23(m,7H)MSm/z(ESI):505.2(M+H)實(shí)施例505-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol),4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(84mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán) (2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(30mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(28mg,黃色固體)，產(chǎn)率17％。MSm/z(ESI):563.1(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(28mg,0.05mmol，第一步制備)，三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(4mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(10mg,黃色固體)，產(chǎn)率44％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.75(s,1H),8.64(s,1H),8.08-8.02(m,3H),7.73(d,J＝12.4Hz,1H),7.48(d,J＝12.4Hz,1H),4.39(q,J＝6.4Hz,1H),3.82-3.78(m,1H),3.32-3.25(m,2H),3.23-3.20(m,2H),3.09-3.07(m,2H),2.69-2.67(m,2H),1.29-1.23(m,7H)MSm/z(ESI):463.1M+H)實(shí)施例514-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例6制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.96(s,1H),8.68(s,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.05(s,1H),7.77-7.07(m,2H),4.44-4.40(m,1H),3.88-3.84(m,1H),3.46(s,2H),3.23-3.21(m,3H),3.08-3.04(m,2H),2.76-2.70(m,2H),2.35-2.32(m,6H),1.68-1.63(m,2H),1.00-0.97(m,6H)MSm/z(ESI):519.1(M+H)實(shí)施例524-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟 -N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例6制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率17.4％。MSm/z(ESI):577.2(M+H)第二步：4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((4-(2-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.05mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(3mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(15mg,白色固體)，產(chǎn)率63％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.52(s,1H),8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.06-8.03(m,2H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.77-7.74(m,2H),4.44(t,J＝8.4Hz,1H),3.87(t,J＝7.2Hz,1H),3.36-3.28(m,4H),3.24-3.22(m,4H),3.20-3.18(m,1H),3.10-3.06(m,1H),2.77-2.71(m,1H),1.70-1.63(m,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)m/z(ESI):477.1(M+H)實(shí)施例535-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，按照實(shí)施例2制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(91mg,0.31mmol)，碳酸銫(202mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫,加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物,得到標(biāo)題化合物(62mg,黃色固體)，產(chǎn)率35％。MSm/z(ESI):577.6(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg,0.1mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物,得到標(biāo)題化合物(26mg,黃色固體)，產(chǎn)率54.6％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.47(s,1H)，9.25(s,1H),8.72(s,1H),8.13(s,1H),8.05(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.75-7.72(m,2H),4.78-4.76(m,1H),3.80-3.74(m,2H),3.45-3.42(m,2H),3.17-3.10(m,2H),3.08-2.97(m,3H),2.78-2.72(m,1H),2.29-2.28(m,1H),1.56(d,J＝6.4Hz,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):477.5(M+H)實(shí)施例544-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶 -2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.30mmol，實(shí)施例3制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.30mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(72mg，黃色固體)，產(chǎn)率41.7％。MSm/z(ESI):577.61(M+H)第二步：4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((4-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(72mg,0.13mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(31mg,黃色固體)，產(chǎn)率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.45(s,1H),8.72(s,1H),8.12(s,1H)，8.02(s,1H)，7.99-7.97(m,1H)，7.74-7.70(m,2H)，4.70-4.68(m,1H),3.35-3.34(m,4H),3.28-3.26(m,4H),3.11-3.09(m,1H),3.09-3.02(m,1H),2.85-2.80(m,1H),2.42-2.38(m,1H),2.11-2.09(m,1H),1.85-1.82(m,1H),0.91(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):477.3(M+H)實(shí)施例555-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實(shí)施例4制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(167mg,0.6mmol)，碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(69mg,0.12mmol)和1,4-二氧六環(huán)(4mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)45分鐘。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(80mg,黃色固體)，產(chǎn)率23％。MSm/z(ESI):577.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.14mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(40mg,黃色固體)，產(chǎn)率60％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.67(s,1H),8.63(s,1H),8.04-8.00(m,3H),7.73(d,J＝12.4Hz,1H),7.45-7.42(m,1H),4.00(s,2H),3.03-3.01(m,4H),2.89(s,2H),2(m,4H),2.85(brs,4H),1.30(s,6H)MSm/z(ESI):477.1(M+H)實(shí)施例56N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,2-二甲基-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例4制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)45分鐘。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率14％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.94(s,1H),8.69(s,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H),7.78-7.70(m,2H),4.02(s,2H),3.44(s,2H),2.90(s,2H),2.33-2.29(m,10H),1.31(s,6H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H)MSm/z(ESI):519.2(M+H)實(shí)施例575-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(88mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(40mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(52mg,黃色固體)，產(chǎn)率29.4％。MSm/z(ESI):591.3(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(3-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(52mg,0.09mmol，第一步制備)，三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率45.4％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.95(s,1H),8.66(s,1H),8.17(s,1H),8.09-8.08(m,2H),7.69(d,J＝12.4Hz,1H)，52-7.49(m,1H),3.75-3.72(m,2H)，3.44-3.38(m,2H),3.35-3.33(m,1H),3.11-3.08(m,2H),2.97-2.91(m,1H),2.75-2.70(m,1H)，2.57-2.73(m,2H)，1.66(s,6H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):491.3(M+H)實(shí)施例581-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮第一步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(500mg,1.56mmol，按照實(shí)施例2制備)，氨水(5mL)和異丙醇(5mL)，100℃下悶罐反應(yīng)12小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液減壓濃縮,得標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)品(420mg,黃色油狀物)直接用于下一步反應(yīng)。MSm/z(ESI):302.1(M+H)第二步：2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.66mmol，第一步制備)，2-(2-氯-7,8-二氫-1,6--萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸鹽(176mg,0.66mmol),碳酸銫(423mg,1.3mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(4mL)?；旌衔?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(80mg,黃色固體)，產(chǎn)率22.8％。MSm/z(ESI):534.1(M+H)第三步：1-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-羥基乙基-1-酮向反應(yīng)瓶中加入2-(2-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-7,8-二氫-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-氧乙基醋酸酯(80mg,0.15mmol，第二步制備)，甲醇鈉(0.2mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水(10mL)稀釋，二氯甲烷萃取(20mL×2)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝5:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率27.4％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.68(s,1H),8.17(s,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝12.8Hz,1H),7.65-7.57(m,1H),4.79-4.56(m,4H),4.22-4.19(m,2H),3.82-3.69(m,2H),3.11-2.81(m,5H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H)MSm/z(ESI):492.1(M+H)實(shí)施例595-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol，實(shí)施例2制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(83mg,0.3mmol)，碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(51mg,黃色固體)，產(chǎn)率30％。MSm/z(ESI):563.2(M+H)第二步:5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(51mg,0.09mmol,第一步制備)，三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(21mg,黃色固體)，產(chǎn)率51.2％。1HNMR(DMSO,300MHz),δ10.21(s,1H),8.69(s,1H),8.14(s,1H),8.06-8.00(m,2H),7.74(d,J＝12.4Hz,1H),7.66-7.63(m,1H),4.77(q,J＝6.4Hz,1H),3.19-3.16(m,6H),3.15-3.11(m,2H),2.98-2.90(m,3H),2.35-2.31(m,1H),1.57(d,J＝4.5Hz,3H)MSm/z(ESI):463.1(M+H)實(shí)施例60N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(96mg,0.3mmol,實(shí)施例2制備),5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),碳酸銫(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),XantPhos(35mg,0.06mmol)和1,4-二 氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫,加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(45mg,白色固體)，產(chǎn)率29.8％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.70(d,J＝4.0Hz,1H),8.22(s,1H),8.20(s,1H),8.16(s,1H),7.76-7.71(m,2H),4.78(q,J＝6.4Hz,1H),3.54(s,2H),3.11-2.85(m,12H),2.32-2.28(m,2H),1.58(d,J＝6.4Hz,3H),1.24(s,3H)MSm/z(ESI):505.1(M+H)實(shí)施例615-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，按照實(shí)施例2制備)，叔丁基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸(85mg,0.31mmol)，碳酸銫(201mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),Xantphos(17mg,0.03mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率11.5％。MSm/z(ESI):562.1(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg,0.03mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(15mg,黃色固體)，產(chǎn)率91％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.32-3.03(m,2H),3.01-2.93(m,1H),2.93-2.86(m,3H),2.50-2.32(m,1H),2.32-2.30(m,2H),2.30-1.92(m,2H),1.92-1.88(m,2H),1.80-1.77(m,3H)MSm/z(ESI):462.1(M+H)實(shí)施例625-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：叔丁基4-((6-((5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.31mmol，實(shí)施例2制備)，叔丁基4-((6-氨基-2-甲基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(94mg,0.31mmol),碳酸銫(201mg,0.62mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(18mg,黃色固體)，產(chǎn)率10％。MSm/z(ESI):590.2(M+H)第二步：5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(6-甲基-5-(哌啶-4-亞甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(18mg,0.03mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(3mL)。混合物在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3).合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(10mg,黃色固體)，產(chǎn)率66％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.32-3.03(m,2H),3.01-2.93(m,1H),2.93-2.86(m,3H),2.50-2.32(m,1H),2.32-2.30(m,2H),2.30-1.92(m,2H),1.92-1.88(m,2H),1.80-1.77(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實(shí)施例635-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.33mmol，按照實(shí)施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(87.7mg,0.33mmol),Cs2CO3(214mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(35mg,黃色固體)，產(chǎn)率22％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.10(s,1H),8.71-8.70(m,1H),8.24-8.16(m,2H),7.76-7.71(m,2H),7.40-7.38(m,1H),4.79(q,J＝4Hz,1H),3.60-3.58(m,4H),3.33-2.90(m,6H),2.90-2.70(m,2H),2.70-2.50(m,4H),2.32-2.29(m,1H),1.59-1.57(m,3H)MSm/z(ESI):491.2(M+H)實(shí)施例64N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-甲基吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.66mmol，按照實(shí)施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴-2-甲基吡啶-3-基)甲基)-4-乙基哌嗪(198mg,0.66mmol),Cs2CO3(429mg,1.32mmol),Pd2(dba)3(118mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(4mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(88mg,黃色固體)，產(chǎn)率26％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ8.63(s,1H),8.12-8.00(m,1H),8.00-7.98(m,1H),7.73-7.71(m,1H),7.60-7.58(m,1H),4.76(q,J＝6.5Hz,1H),3.70(s,2H),3.12-2.83(m,10H),2.50(s,3H),2.44-2.30(m,1H),1.56-1.54(m,3H),2.23-1.15(m,3H)MSm/z(ESI):519.2(M+H)實(shí)施例655-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-異丙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(150mg,0.5mmol，按照實(shí)施例58第一步的方法制備)，1-((6-溴吡啶-3-yl)甲基)-4-異丙基哌嗪(149mg,0.5mmol),Cs2CO3(325mg,1mmol),Pd2(dba)3(91mg,0.1mmol),Xantphos(57mg,0.1mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(93mg,黃色固體)，產(chǎn)率36％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ8.65(s,1H),8.19-8.11(m,3H),7.73-7.69(m,2H),4.76(q,J＝6.6Hz,1H),3.70-3.50(m,2H),3.08-2.82(m,9H),2.50-2.27(m,4H),1.56-1.54(m,3H),1.09-1.07(m,6H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例665-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.63mmol，實(shí)施例2制備)，5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(120mg,0.63mmol),Cs2CO3(406mg,1.25mmol),Pd2(dba)3(119mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(100mg,黃色固體)，產(chǎn)率33％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.98(s,1H),8.69-8.68(m,1H),8.29-8.16(m,3H),7.75-7.64(m,2H),4.77(q,J＝4Hz, 1H),3.32-3.03(m,6H),3.03-2.89(m,3H),2.72-2.50(m,2H),2.29-2.28(m,1H),1.99-1.97(m,4H),1.59-1.57(m,3H)MSm/z(ESI):476.3(M+H)實(shí)施例674-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-5-氟-N-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入5-氟-4-(5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺(200mg,0.63mmol)，1-((6-溴吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(171mg,0.63mmol),Cs2CO3(406mg,1.25mmol),Pd2(dba)3(119mg,0.13mmol),Xantphos(75mg,0.13mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(80mg,黃色固體)，產(chǎn)率25％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.06(s,1H),8.70(s,1H),8.23-8.21(d,2H),8.15(s,1H),7.77-7.71(m,2H),4.70-4.68(m,1H),3.56-3.33(m,4H),3.15-2.97(m,6H),2.86-2.81(m,2H),2.97(s,4H),2.43-2.39(m,1H),1.87-1.83(m,1H),0.95-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)實(shí)施例684-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑l-7-基)-5-氟-N-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實(shí)施例3制備)，5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺 (114mg,0.6mmol),Cs2CO3(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(110mg,0.12mmol),Xantphos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(90mg,黃色固體)，產(chǎn)率30％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.01(s,1H),8.69(s,1H),8.21-8.15(m,3H),7.75-7.58(m,2H),4.73-4.69(m,1H),3.47-3.38(m,2H),3.10-3.01(m,4H),2.86-2.80(m,3H),2.50-2.30(d,1H),2.01-1.86(d,6H),1.26-1.18(m,2H),0.95-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實(shí)施例69N-(5-(1-乙基哌啶-4-yl)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(50mg,0.16mmol，實(shí)施例2制備)，5-(1-乙基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(32mg,0.16mmol),Cs2CO3(104mg,0.32mmol),Pd2(dba)3(27mg,0.03mmol),Xantphos(17mg,0.03mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL),混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(17mg,黃色固體)，產(chǎn)率22％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.90(s,1H),8.68-8.67(m,1H),8.20-8.16(m,3H),7.60-7.70(m,2H),4.72-4.65(s,1H),3.16-2.89(m,2H),2.36-2.33(m,2H),2.03-1.96(m,1H),1.74(s,2H),1.59-1.58(m,2H),1.46-1.39(m,3H),1.35-1.34(m,3H),1.08-0.01(m,3H),0.87-0.84(m,3H)MSm/z(ESI):490.2(M+H)實(shí)施例704-(1-乙基-5-氟-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-((4-乙基哌嗪-1-yl)甲基)吡啶-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1-乙基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，實(shí)施例3制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)。混合物在150℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(31mg,黃色固體)，產(chǎn)率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.07(s,1H),8.70(s,1H),8.20-8.22(m,2H),8.06(s,1H),7.73-7.79(m,2H),4.69(q,J＝4.8Hz,1H),3.49-3.10(m,8H),3.10-2.97(m,3H),2.97-2.80(m,2H),2.50-2.39(m,3H),2.14-2.11(m,1H),1.85-1.82(m,1H),1.06-0.94(m,H),0.93-0.91(m,3H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例71N-(5-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.3mmol，按照實(shí)施例1制備)，5-(4-(二甲氨基)環(huán)己基)吡啶-2-胺(66mg,0.3mmol),Cs2CO3(195mg,0.6mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率20％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.84(s,1H),8.64-8.63(m,1H),8.17-8.11(m,1H),8.06-8.04(m,2H),7.70-7.67(m,1H),7.46-7.43(m,1H),3.78-3.75(m,2H),3.36-3.08(m,4H),2.69-2.57(m,8H),2.55-2.54(m,2H),2.07-1.90(m,2H),1.74-1.66(m,7H)MSm/z(ESI):519.3(M+H)實(shí)施例724-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺第一步：叔丁基4-(6-((4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)哌嗪-2-基)氨)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，按照實(shí)施例9類似的方法制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(92mg,0.33mmol)，碳酸銫(215mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol)，Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(30mg,黃色固體)，產(chǎn)率16.5％。MSm/z(ESI):545.3(M+H)第二步：4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)-N-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入叔丁基4-(6-((4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)哌嗪-2-基)氨)吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸酯(30mg,0.055mmol，第一步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用薄層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(15mg,黃色固體)，產(chǎn)率63％.1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.77(s,1H),8.90(s,2H),8.64-8.31(m,2H),8.04-8.03(m,1H),7.94-7.79(m,4H),4.77-4.72(m,1H),3.38-3.30(m,8H),3.13-2.81(m,3H),2.29-2.26(m,1H),1.61-1.60(m,3H)MSm/z(ESI):445.3(M+H)實(shí)施例73N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-4-(5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向微波反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-氟-1-甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(100mg,0.33mmol，按照實(shí)施例9相似的方法制備)，5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-胺(73mg,0.33mmol),Cs2CO3(195mg,0.66mmol),Pd2(dba)3(55mg,0.06mmol),Xantphos(35mg,0.06mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(20mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(62mg,黃色固體)，產(chǎn)率39％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ10.03(s,1H),8.60(s,1H),8.62-8.40(m,2H),8.40-8.32(m,1H),7.91-7.88(m,1H),7.76-7.68(m,2H),4.77-4.71(m,1H),3.56-3.44(m,2H),3.41-3.35(m,8H),3.09-2.89(m,3H),2.50-2.30(m,2H),2.29-2.28(m,1H),1.62-1.61(m,3H),1.23-1.16(m,3H)MSm/z(ESI):487.3(M+H)實(shí)施例74N-(5-(3,5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺第一步：2,6-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入5-溴-2-硝基吡啶(2.0g,9.33mmol)，2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.0g,14mmol),碳酸鉀(2.0g,14mmol)，TBAI(0.22g,0.6mmol)和二甲亞砜(20mL)，混合物在80℃下攪拌反應(yīng)16小時(shí)。冷卻至室溫，將反應(yīng)液倒入冰水中，二氯甲烷萃取(50mL×3)。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝20:1)純化得到的殘留物,得到標(biāo)題化合物(1.7g,白色固體)，產(chǎn)率 54％。MSm/z(ESI):337.1(M+H)第二步：4-(6-氨基吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向反應(yīng)瓶中加入2,6-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g,3.0mmol,第一步制備)，鈀碳(10％，0.1g)和乙酸乙酯/甲醇(10mL/10mL),混合物在氫氣環(huán)境中室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。過濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物(872mg,白色固體)，產(chǎn)率95％。MSm/z(ESI):307.2(M+H)第三步：叔丁基4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨)吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸酯向反應(yīng)瓶中加入7-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑(200mg,0.6mmol，按照實(shí)施例1制備)，4-(6-氨基吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(183mg,0.6mmol，第二步制備)，碳酸銫(390mg,1.2mmol),Pd2(dba)3(110mg,0.12mmol)，Xantphos(69mg,0.12mmol)和無水1,4-二氧六環(huán)(2mL)?；旌衔镌?50℃下微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加入水(10mL),乙酸乙酯(40mL×3)萃取分液。合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL×2)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(50mg,黃色固體)，產(chǎn)率13％。MSm/z(ESI):605.2(M+H)第四步：N-(5-(3,5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-胺向反應(yīng)瓶中加入4-(6-((5-氟-4-(5-氟-1,1-二甲基-2,3-二氫-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)嘧啶-2-基)氨)吡啶-3-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.1mmol，第三步制備)，TFA(0.5mL)和二氯甲烷(6mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，加入水稀釋(10mL),二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗滌(10mL×2),無水硫酸鈉干燥，濾液真空濃縮。用柱層析色譜法(DCM/MeOH＝10:1)純化得到的殘留物，得到標(biāo)題化合物(20mg,黃色固體)，產(chǎn)率50％。1HNMR(DMSO,400MHz),δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.18(s,1H),8.04-8.02(d,2H),7.71-7.68(d,1H),7.40-7.37(m,1H),5.76(s,1H),3.49-3.48(d,2H),3.12-3.08(m,2H),2.89-2.84(m,2H),2.58-2.50(m,2H),2.14-2.09(m,3H),1.66(s,6H),1.03-1.01(m,6H)MSm/z(ESI):505.3(M+H)以下實(shí)驗(yàn)例中所用的對(duì)照品，編號(hào)為LY2835219,參考專利WO2010075074制備方法制備，其結(jié)構(gòu)式如”
背景技術(shù)：
”部分結(jié)構(gòu)式3所示。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物的CDKs激酶抑制活性測(cè)定本發(fā)明所述化合物體外對(duì)CDK(CDK1、CDK4、CDK6)激酶活性的抑制作用通過以下的方法進(jìn)行測(cè)試。本實(shí)驗(yàn)例所用儀器和試劑盒信息實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1.激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ的配制：將試劑盒中給出的5×ReactionBufferA(Promega；V307A-C)用MilliQH2O和0.1MDTT(二硫蘇糖醇)混合稀釋成4×激酶緩沖液；再按比例加入MilliQH2O，最終配制成1x激酶緩沖液。激酶反應(yīng)緩沖液Ⅱ的配制：在1x激酶反應(yīng)緩沖液中加入0.5％DMSO(二甲基亞砜)混勻即可。2.激酶溶液的配制：用1x激酶反應(yīng)緩沖液將100ng/μl激酶儲(chǔ)液配制每個(gè)反應(yīng)體系所需濃度的激酶溶液。3.供試化合物和對(duì)照品LY2835219溶液的配制:(1)配制對(duì)照品LY2835219溶液a.分別取1μl的10mM標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)液，加入到9μl的激酶反應(yīng)緩沖液I中，混勻；再加入90μl的激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ，混勻；再加入100μl的激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ，混勻；得到終濃度為50μM。b.在96-孔板的B2-B10中加入40μl的激酶反應(yīng)緩沖液Ⅱ；在B1中加入50μl上述溶液；c.從孔B1中取出10μl加入B2，混勻，然后取10μl加入到B3，依次稀釋B9；得到依次5倍稀釋的對(duì)照品溶液。(2)準(zhǔn)備供試化合物溶液：a.分別取一定濃度的供試化合物溶液，用激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ稀釋到終濃度為50μM的化合物溶液；b.在96-孔板的H2-H10中加入40μl的激酶反應(yīng)緩沖液Ⅱ；在H1中加入50μl上述溶液；c.從孔H1中取出10μl加入H2，混勻，然后取10μl加入到H3，依次稀釋H9；得到依次5倍稀釋的供試化合物溶液。4.準(zhǔn)備反應(yīng)底物和ATP混合溶液：a.準(zhǔn)備ATP溶液：200μl0.1mMATP溶液:2μl10mMATP加入198μl激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ；300μl50μMATP溶液：加150μl的激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ到150μl上述0.1mMATP溶液中；b.準(zhǔn)備300μl的反應(yīng)底物溶液：將150μl1μg/μl的反應(yīng)底物儲(chǔ)液，加入150μl激酶反應(yīng)緩沖液Ⅰ混勻；c.將上述a/b兩種溶液混合分別得到混合溶液。實(shí)驗(yàn)過程：1.取2μl各濃度的化合物溶液加入到384孔板中，離心3min；2.每孔加入4μl激酶溶液，18℃，5000rpm離心10min，搖板機(jī)上搖勻10min；3.每孔加入4ul底物和ATP混合溶液，18℃，5000rpm離心10min，搖板機(jī)37℃搖勻90min；4.取出384孔板，放置至室溫；5.每孔加入10μl的ADP-Glo試劑，18℃、5000rpm離心10min，搖板機(jī)25℃搖勻40min，終止反應(yīng)；6.每孔加入20μl的激酶檢測(cè)試劑，18℃、5000rpm離心10min，搖板機(jī)25℃搖勻30min；7.M1000pro酶標(biāo)儀讀取熒光數(shù)值。數(shù)據(jù)處理：按如下公式計(jì)算各化合物在各濃度點(diǎn)的抑制率，并通過軟件GraphPadPrism5進(jìn)行曲線擬合得到IC50值。檢測(cè)結(jié)果：由WO2010075074公開的LY2835219以及實(shí)施例12-74的化合物對(duì)CDK4和CDK6的抑制作用，以IC50表示，具體結(jié)果見表1。LY2835219和本發(fā)明代表化合物對(duì)CDK1的抑制作用及CDKs選擇性見表2。表1CDKs抑制活性檢測(cè)結(jié)果(IC50：nM)表2本發(fā)明代表化合物的CDK1活性及CDKs選擇性試驗(yàn)結(jié)論：由表1可知，本發(fā)明化合物對(duì)CDK4和CDK6激酶的抑制活性與對(duì)照化合物相當(dāng)，表現(xiàn)出足夠的抑制活性。IC50(CDK4)/IC50(CDK1)和IC50(CDK6)/IC50(CDK1)可以體現(xiàn)化合物對(duì)于CDKs的選擇性：數(shù)值越小，對(duì)CDK4/6的選擇性越好，預(yù)示著化合物的泛CDKs抑制的毒性可能越小。對(duì)照化合物(LY2835219)的IC50(CDK4)/IC50(CDK1)≈0.03，IC50(CDK6)/IC50(CDK1)≈0.139。而表2中所列本發(fā)明代表化合物都表現(xiàn)出比對(duì)照化合物更好的對(duì)CDK4/6的選擇性。實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDB-MA-231的增殖抑制測(cè)定實(shí)驗(yàn)材料：人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231購于北京協(xié)和細(xì)胞資源中心，DAPI(5mg/mL,碧云天，c1002)，4％多聚甲醛(鼎國生物，AR-0211)，黑色透明底96孔板(PE，6005182)，InCellAnalyzer2200(GEHealthcare)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1.人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231培養(yǎng)基的配制:RPIM1640+10％FBS+1％青霉素/ 鏈霉素2.供試化合物和標(biāo)準(zhǔn)品LY2835219溶液的配制:(1)配制標(biāo)準(zhǔn)品LY2835219,PD0332992溶液a.分別取3.6μl的10mM標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)液，加入到6.4ul培養(yǎng)基中，混勻；再加入90μl的培養(yǎng)基，混勻；再加入200μl的培養(yǎng)基，混勻；配制成20uM起始濃度。b.在96-孔板的B2-B10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亞砜)的培養(yǎng)基；在B1中加入300μl上述溶液；c.從孔B1中取出100μl加入B2，混勻，然后取100μl加入到B3，依次稀釋B9；得到依次3倍稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。(2)準(zhǔn)備供試化合物溶液：a.分別取一定濃度的供試化合物溶液，用培養(yǎng)基稀釋到終濃度為20μM的化合物溶液；b.在96-孔板的H2-H10中加入200μl的含0.2％DMSO(二甲基亞砜)的培養(yǎng)基；在H1中加入300μl上述溶液；c.從孔H1中取出100μl加入H2，混勻，然后取100μl加入到H3，依次稀釋H9；得到依次3倍稀釋的供試化合物溶液。實(shí)驗(yàn)過程：1.MDA-MB-231細(xì)胞分別以4000cells/100ul/well接種至96孔黑色透明底細(xì)胞板，37℃培養(yǎng)過夜；2.上述樣品分別以100μl/孔加入接種有細(xì)胞的培養(yǎng)板中，輕拍使混勻，37℃孵育72h；3.固定：取出細(xì)胞板，去除培養(yǎng)基，每孔加入50μl4％多聚甲醛固定10min；4.加入50μl0.1Mglycine(甘氨酸)中和10min；5.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗兩次；6.通透：每孔加50ul0.2％TritonX-100(曲拉通)室溫通透10min；7.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗兩次；8.5mg/mL的DAPI儲(chǔ)備液1:5000稀釋(終濃度1μg/ml)室溫染色20min。9.1×PBS(磷酸鹽緩沖液PH7.2)洗三次；10.Incellanalyser掃描并分析。數(shù)據(jù)處理：1.按如下公式計(jì)算各化合物在各濃度點(diǎn)的抑制率，并通過軟件GraphPadPrism5進(jìn)行曲線擬合得到IC50值。測(cè)定結(jié)果：由WO2010075074公開的LY2835219以及實(shí)施例12-74的化合物的細(xì)胞學(xué)活性測(cè)定結(jié)果，以IC50表示，具體結(jié)果見表3表3本發(fā)明化合物抑制人乳腺癌細(xì)胞MDB-MA-231增殖的IC50(nM)實(shí)施例IC50實(shí)施例IC50LY283521919139171220276406313116641549148882424615123043581666204421實(shí)施例IC50實(shí)施例IC501755545301840248391974495879202175036532192521678224835360023543542522425155377251455739262145845827768591313281006021082921266115323030062132031129633339325796426823320651159343570252735527146369677281737330373361738220574174試驗(yàn)結(jié)論：本發(fā)明的化合物大部分表現(xiàn)出與對(duì)照化合物相當(dāng)、甚至更強(qiáng)地抑制對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDB-MA-231的增殖的活性。實(shí)驗(yàn)例3實(shí)施例18、20和24化合物的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)測(cè)定1.實(shí)驗(yàn)摘要以SD大鼠為受試動(dòng)物，應(yīng)用LC/MS/MS方法測(cè)定大鼠灌胃給予優(yōu)選化合物后不同時(shí)刻血漿中的藥物濃度，以研究本發(fā)明化合物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為，評(píng)價(jià)其藥動(dòng)學(xué)特征。2.實(shí)驗(yàn)方案2.1供試藥品：本發(fā)明實(shí)施例18、20和24制備的化合物；對(duì)照藥LY2835219,自制。2.2供試動(dòng)物：健康成年SD大鼠，每個(gè)供試化合物各3只，雄性，6-8周齡，體重200-250g,購自蘇州昭衍新藥研究中心有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2013-00032.3供試藥物配制稱取適量樣品，加入0.1％羥乙基纖維素/0.5％吐溫80至終體積，配成1mg/ml溶液。2.4供試藥品給藥雄性SD大鼠每個(gè)供試化合物各3只，禁食一夜后分別灌胃給藥，劑量為5mg/kg,給藥體積為5ml/kg.3.實(shí)驗(yàn)操作在給藥前及給藥后0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時(shí)后，經(jīng)過頸動(dòng)脈插管取血。全血EDTA-K2抗凝，離心去上清，-20℃冷凍保存，直至樣品分析。用LC-MS/MS進(jìn)行血漿樣品分析，蛋白沉淀法進(jìn)行樣品前處理，樣品分析線性范圍1-2000ng/ml.最低定量 限為1ng/ml.4.藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果本發(fā)明化合物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表4表4本發(fā)明化合物的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)5.實(shí)驗(yàn)結(jié)論：本發(fā)明優(yōu)選化合物的給藥劑量為5mg/kg時(shí)，與LY2835219比較，大鼠藥代吸收良好，半衰期長，具有明顯的口服吸收效果。實(shí)驗(yàn)例4實(shí)施例20和60化合物的小鼠藥代動(dòng)力學(xué)測(cè)定1.實(shí)驗(yàn)摘要以ICR小鼠為受試動(dòng)物，應(yīng)用LC/MS/MS方法測(cè)定小鼠灌胃后給予優(yōu)選化合物后不同時(shí)刻血漿中的藥物濃度，以研究本發(fā)明化合物在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為，評(píng)價(jià)其藥動(dòng)學(xué)特征。2.實(shí)驗(yàn)方案2.1供試藥品：本發(fā)明實(shí)施例20和60制備的化合物；對(duì)照藥LY2835219,自制。2.2供試動(dòng)物：健康成年ICR小鼠，每個(gè)供試藥品灌胃和靜脈注射各3只，雄性，6-8周齡，體重20-25g,購自蘇州昭衍新藥研究中心有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2013-00032.3供試藥物配制稱取適量樣品，加入0.1％羥乙基纖維素/0.5％吐溫80至終體積，配成0.5mg/ml溶液，供灌胃給藥。稱取適量樣品，加入10％的N-甲基-2-吡咯烷酮和90％的18％磺丁基-β-環(huán)糊精至終體積，配成0.2mg/ml溶液，供靜脈注射給藥。2.4供試藥品給藥每個(gè)供試藥品雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分別灌胃給藥，劑量為5mg/kg,給藥體積為10ml/kg；每個(gè)供試品雄性ICR小鼠3只，禁食一夜后分別靜脈注射給藥，劑量為2mg/kg，給藥體積為10ml/kg.3.實(shí)驗(yàn)操作灌胃給藥組于給藥前及給藥后在0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時(shí)后，經(jīng)過頸動(dòng)脈插管取血。全血EDTA-K2抗凝，離心去上清，-20攝氏度冷凍保存，直至樣品分析。靜脈注射給藥組于給藥前及給藥后在0.083h、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24小時(shí)后，經(jīng)過頸動(dòng)脈插管取血。血漿樣品處理同灌胃給藥。用LC-MS/MS進(jìn)行血漿樣品分析，蛋白沉淀法進(jìn)行樣品前處理，樣品分析線性范圍1-2000ng/ml.最低定量限為1ng/ml.4.藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果：見表5。表5本發(fā)明化合物小鼠藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)5.實(shí)驗(yàn)結(jié)論：本發(fā)明優(yōu)選化合物的給藥劑量為5mg/kg時(shí)，與LY2835219比較，小鼠藥代吸收良好，具有更好的生物利用度?？傊景l(fā)明提供了一系列新的具有選擇性CDK4/6激酶抑制活性的化合物，其活性與目前處于III期臨床試驗(yàn)的候選藥物L(fēng)Y2835219相當(dāng)，部分化合物表現(xiàn)出甚至更好的選擇性。而且優(yōu)選的化合物的口服吸收良好，預(yù)示著本發(fā)明的化合物有希望被開發(fā)成新的治療細(xì)胞增殖相關(guān)疾病，尤其是惡性腫瘤的藥物，為臨床醫(yī)生和患者提供新的選擇。當(dāng)前第1頁1 2 3