本發(fā)明涉及一類(lèi)新型的用作GPR17和CysLT₁雙重拮抗劑的化合物，其制備方法和用途。該類(lèi)化合物對(duì)GPR17有弱的拮抗活性，對(duì)CysLT₁有強(qiáng)的拮抗作用，可用于預(yù)防、治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和神經(jīng)退行性疾病(如多發(fā)性硬化癥，腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良)；還可用于治療CysLT₁介導(dǎo)的哮喘和鼻炎、過(guò)敏、其他炎癥性疾病。

背景技術(shù)：

孤兒受體GPR17(the G protein-coupled receptor 17)屬于視紫紅質(zhì)樣A類(lèi)G-蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors,GPCRs)大家族，從系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上看，GPR17處于P₂Y₁₂、P₂Y₁₃、P₂Y₁₄亞群和半胱氨酰白三烯受體(cysteinyl leukotrienes receptor,CysLT受體)的中間，GPR17具有典型的七次螺旋跨膜結(jié)構(gòu)，人GPR17定位于染色體2q21，與CysLT₁的同源性為31％。GPR17主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，尤其是處于分化期的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞，GPR17有兩種剪切變體，即短型(含339個(gè)氨基酸)和長(zhǎng)型(N端多出28個(gè)氨基酸)，兩種GPR17在不同組織中的表達(dá)水平不同，腦內(nèi)短型GPR17的含量豐富，大約為長(zhǎng)型的8-23倍，在心臟和腎臟中則相反。

近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)GPR17與髓鞘的形成有關(guān)，Chen等人報(bào)道GPR17參與從少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)早期分化到少突膠質(zhì)成熟、髓鞘形成的全過(guò)程，表現(xiàn)為NG2陽(yáng)性細(xì)胞分化成OPCs期間GPR17的表達(dá)逐漸上調(diào)，并在OPCs分化前期表達(dá)最高，隨著OPCs分化成熟GPR17的表達(dá)逐漸降低，完全成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)GPR17。螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子Olig1能促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞成熟，從而修復(fù)髓鞘。Olig1能負(fù)性調(diào)控GPR17的表達(dá)。在體內(nèi)和體外都發(fā)現(xiàn)GPR17過(guò)表達(dá)可抑制少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化成熟，引起脫髓鞘現(xiàn)象，GPR17基因敲除小鼠可以較早出現(xiàn)髓鞘形成?？傊?，GPR17對(duì)OPCs早期分化起正性調(diào)節(jié)作用，對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞 后期分化成熟起負(fù)性調(diào)控作用。在腦缺血、脊髓損傷后期抑制GPR17可促進(jìn)髓鞘的修復(fù)。

人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在腦缺血和腦外傷后，CysLTs的合成和釋放增加，CysLTs可激活GPR17，參與腦損傷病變。在大鼠局灶性腦缺血模型中，缺血中心區(qū)CysLT₁受體mRNA表達(dá)增加，在缺血后3-6h和7-14d有兩個(gè)高峰，而在缺血周邊區(qū)僅在7-14d增加；缺血中心區(qū)CysLT₁受體在缺血24h表達(dá)于神經(jīng)元，14d后表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞，缺血周邊區(qū)在14d后表達(dá)在增生的星形膠質(zhì)細(xì)胞。小鼠持續(xù)性局灶性腦缺血模型也證明，CysLT₁受體在急性期有相似的表達(dá)特點(diǎn)(Fang SH et al.Neuroscience,2006,140(3):969-979；Zhang Y J et al.Acta Pharmacol Sin,2006,27(12):1553-1560)。這說(shuō)明CysLT₁受體與腦缺血急性期的神經(jīng)元損傷和后期的膠質(zhì)細(xì)胞增生有關(guān)。在整體實(shí)驗(yàn)中，已證明CysLT₁受體拮抗劑對(duì)腦缺血和腦外傷有保護(hù)作用。

綜上所述，GPR17和CysLT₁與中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷有密切的關(guān)系，開(kāi)發(fā)它們的拮抗劑對(duì)于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有重要意義。目前，還沒(méi)有選擇性GPR17拮抗劑的報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，GPR17受體可能存在兩個(gè)相距較遠(yuǎn)的配體結(jié)合位點(diǎn)(核苷酸結(jié)合位點(diǎn)和半胱氨酰白三烯結(jié)合位點(diǎn))，GPR17的核苷酸結(jié)合區(qū)與P₂Y受體的核苷酸結(jié)合區(qū)位置相同，Ciana等人用表達(dá)了hGPR17的1321N1細(xì)胞做[³⁵S]GTPγS結(jié)合實(shí)驗(yàn)，P₂Y₁₂/P₂Y₁₃受體的拮抗劑cangrelor和P₂Y₁受體的拮抗劑MRS2179可以阻斷UDP-葡萄糖引起的hGPR17激活，IC₅₀分別為0.7nM和508nM；CysLT₁受體拮抗劑孟魯司特和普侖司特能濃度依賴(lài)的抑制LTD₄引起的hGPR17激活，IC₅₀分別為60nM和10.5nM；2013年，Hennen等人發(fā)現(xiàn)MDL29951能選擇性地激活GPR17，不能激活P₂Y受體和CysLT₁受體，普侖司特能抑制MDL29951誘導(dǎo)的GPR17的激活，而孟魯司特不能。GV150526A對(duì)GPR17有弱的激活作用。2014年，Kirsten Ritter等人用放射性配體[³H]PSB-12150做結(jié)合實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)MDL29951和GV150526A、普侖司特、孟魯司特對(duì)GPR17的親和性相似，其Ki分別為2.32μM、1.63μM、4.06μM、6.54μM。和MDL29951相比，GV150526A對(duì)GPR17親和性相似，激動(dòng)作用大大減弱，可能是酰胺鍵側(cè)鏈的苯基造成的，GV150526A可視為GPR17的部分激動(dòng)劑。于是發(fā)明人設(shè)想用孟魯司特的(E)-3-[2-[7-氯-2-喹啉]乙烯基]苯基替代GV150526A酰胺鍵側(cè)鏈的苯基，設(shè)計(jì)合成了CHY113，使其對(duì)GPR17保持高親和性的同時(shí)，對(duì) GPR17具有拮抗作用，活性結(jié)果表明CHY113對(duì)GPR17有弱的拮抗作用，對(duì)CysLT₁有較強(qiáng)的拮抗作用，結(jié)果證明上面的設(shè)計(jì)思路是正確的。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人對(duì)CHY113作了初步的結(jié)構(gòu)優(yōu)化和評(píng)價(jià)，從而得到一系列化合物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類(lèi)新型的用作GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑的化合物；

本發(fā)明的另一目的在于提供上述化合物的制備方法；

本發(fā)明的又一目的是提供上述化合物在制備預(yù)防或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和神經(jīng)退行性疾病(如多發(fā)性硬化癥，腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良)的藥物中的用途以及在制備治療CysLT₁介導(dǎo)的哮喘、鼻炎、過(guò)敏、其他炎癥性疾病的藥物中的用途。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種用作GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑的化合物，其具有以下通式Ⅰ的結(jié)構(gòu)：

其中：

Y不存在，或者為-O-或-NH-；

X不存在，或者為C₁-C₆亞烷基、C₂-C₆亞鏈烯基或C₂-C₆亞鏈炔基；優(yōu)選X為不存在、或?yàn)?CH₂CH₂-或-CH＝CH-；

不存在，或者為苯環(huán)；

R₁為選自如下基團(tuán)中的任意一種：H；鹵素原子；羥基；羧基；氨基；C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷基；C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷氧基；氰基C₀-C₆烷基；C₂-C₈鏈烯基；C₂-C₆鏈炔基；C₁-C₆烷氨基；3-8元環(huán)烷基C₀-C₁₀烷基；5至8元芳 基C₀-C₆烷基，其中，所述5至8元芳基未被取代，或者被選自如下的基團(tuán)取代：

R₁優(yōu)選為C₁-C₆的直鏈或支鏈烷基；C₂-C₅鏈炔基；5-8元環(huán)烷基C₀-C₆烷基；苯基C₀-C₆烷基，其中，所述苯基未被取代，或者被選自如下的基團(tuán)取代：

R₁進(jìn)一步優(yōu)選為甲基、乙基、丙基、正丁基、異丁基、戊基、己基、苯基C₁-C₆烷基、苯基、4-6元環(huán)烷基C₀-C₆烷基、氰基C₁-C₆烷基、苯基C₁-C₆烷氧基苯基；

m為0至10的整數(shù)，優(yōu)選為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；

R₂和R₄各自獨(dú)立地為氫、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、鹵素原子、羥基或氨基；優(yōu)選各自獨(dú)立地為氫、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、F、Cl、羥基或氨基；

R₇選自H、四氮唑基、-(CH₂)_nCOOH，其中，n為0至3的整數(shù)；優(yōu)選地，R₇選自H、-(CH₂)_nCOOH，其中，n為0至2的整數(shù)，優(yōu)選為0、1或2；

當(dāng)不存在時(shí)，R_5a和R_6a不存在，R_5b和R_6b各自獨(dú)立地選自H、鹵素原子(如，F(xiàn)、Cl等)、羥基、羧基、氨基、C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷基、C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷氧基、C₂-C₈鏈烯基、C₂-C₆鏈炔基、C₁-C₆烷氨基；優(yōu)選R_5b和R_6b各自獨(dú)立地為H、鹵素原子、C₁-C₆烷氧基；

當(dāng)為苯環(huán)時(shí)，R_5b和R_6b不存在，R_5a和R_6a各自獨(dú)立地選自H、鹵素原子(如F、Cl等)、羥基、羧基、氨基、C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷基、C₁-C₁₀直鏈或支鏈烷氧基、C₂-C₈鏈烯基、C₂-C₆鏈炔基、C₁-C₆烷氨基；優(yōu)選R_5a和R_6a各自獨(dú)立地為H、鹵素原子、C₁-C₆烷氧基；

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的用作GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑的化合物具有如下通式Ⅱ或通式Ⅳ的結(jié)構(gòu)：

X、Y、R₁、R₇、R_5a、R_6a、R_5b和R_6b的定義如前述相同；

在本發(fā)明的更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述通式Ⅱ中的R₁的結(jié)構(gòu)如下：

Y為-NH-；

X為-CH＝CH-，雙鍵具有Z、E構(gòu)型，優(yōu)選E構(gòu)型；

其中R₇優(yōu)選為羧基；

優(yōu)選地，本發(fā)明的所述的用作GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑的化合物具有如下通式Ⅲ的結(jié)構(gòu)：

其中：

R_5a和R_6a的定義同上；優(yōu)選R_5a和R_6a各自獨(dú)立地為H、鹵素原子(如F、Cl)、C₁-C₆烷氧基；

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含根據(jù)本發(fā)明的通式I所示的化合物的藥物組合物。

所述藥物組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的輔料、賦形劑等。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明所述的用作GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑的化合物的制備方法。

所述通式I所示的化合物的制備方法，其包括如下步驟：

a)通式V所示的化合物溶于DMF，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入R₁OH、縮合劑DCC或者EDCI、DMAP,室溫過(guò)夜的條件下發(fā)生酯化反應(yīng)；

或通式V所示的化合物溶于DMF，室溫下加入縮合劑HATU、DIPEA，15分鐘至半小時(shí)后加入R₁NH_2，室溫過(guò)夜；

或者通式V所示的化合物溶于DMF，氮?dú)獗Ｗo(hù)冰水浴加入堿碳酸鉀或者碳酸銫，15分鐘后加入R₁Br，室溫或者60℃反應(yīng)4h至16h；

或通式V所示的化合物溶于DMF，室溫下加入碳酸銫，R₁OTs,室溫過(guò)夜；

當(dāng)R₉與R₇不相同時(shí)，進(jìn)一步包括步驟b)

b)使R₉脫保護(hù)得到通式I的化合物。例如，當(dāng)保護(hù)基為甲基、乙基時(shí)，以乙醇或異丙醇為溶劑，以氫氧化鋰或氫氧化鈉為堿，60℃反應(yīng)4h至16h得酸；當(dāng)保護(hù)基為三甲基硅乙氧基時(shí)，以四氫呋喃為溶劑，加入TBAF,室溫反應(yīng)4h得酸。

其中，X為不存在、或?yàn)?CH₂CH₂-或-CH＝CH-；Y不存在，或者為-O-、-NH-)；R₉為氫、或-(CH₂)_nCOOR₁₀，R₁₀為羧基保護(hù)基團(tuán)，例如C₁-C₆烷基，三甲基硅乙基；R₇為H、-(CH₂)_nCOOH；

R₁、R_5a、R_6a、R_5b、R_6b、和n的定義與前述定義相同。

其中，所述通式V所示的化合物通過(guò)如下步驟制備：

c)通式VI中的醛基被氧化劑氧化得到通式V的化合物；

例如，反應(yīng)條件可以為，將醛加入乙腈水(5:1，v/v)中,加入二水合磷酸二氫鈉,雙氧水、次氯酸鈉，室溫反應(yīng)過(guò)夜；

或者

d)通式VI所示的化合物與叔丁氧羰基亞甲基三苯基膦在甲苯中回流過(guò)夜發(fā)生Horner-Wadsworth-Emmons反應(yīng)；再用甲酸室溫反應(yīng)過(guò)夜或三氟乙酸室溫反應(yīng)2到6小時(shí)選擇性水解叔丁酯得到通式V中α，β不飽和羧酸，以及非必須地，α，β不飽和羧酸在甲醇和四氫呋喃(2:1，v/v)中，室溫下用還原劑Pd/C催化氫化4h得到通式V所示的化合物；

或者

e)通式VI中的醛基和丙二酸在例如吡啶和哌啶的弱堿的作用下，50℃反應(yīng)過(guò)夜得到通式V所示的化合物；

其中，X為不存在、或?yàn)?CH₂CH₂-或-CH＝CH-；R₉為氫、-(CH₂)_nCOOH或-(CH₂)_nCOOR₁₀，R₁₀為羧基保護(hù)基團(tuán)；

R_5a、R_6a、R_5b、R_6b、和n的定義與前述定義相同；

更具體而言，本發(fā)明中通式I所示的化合物可以通過(guò)多種步驟和合成路線制備，代表性的步驟和合成方法如下，但不限于下述方法：

路線一：

其中，R_5a、R_6a和R₁的定義與前述相同；

具體來(lái)說(shuō)，化合物1與2-甲基乙酰乙酸乙酯發(fā)生Japp-Klingemann縮合生成化合物2，化合物2在多聚磷酸作用下關(guān)環(huán)生成吲哚化合物3，化合物3經(jīng)Vilsmeier-Haack甲酰化得到化合物4，化合物4在堿性條件下水解得酸5，酸5與2-三甲基硅基乙醇在縮合劑EDCI、DMAP的作用下生成酯化合物6，化合物6和叔丁氧羰基亞甲基三苯基膦發(fā)生Horner-Wadsworth-Emmons反應(yīng)得到不飽和酯化合物7，化合物7經(jīng)甲酸選擇性水解叔丁酯得酸化合物8，化合物8經(jīng)不同的方法引入酯基R₁得到化合物9，化合物9用TBAF脫保護(hù)基即得到本發(fā)明所述的如通式10所示的化合物。

其中，化合物8到9可通過(guò)如下方法轉(zhuǎn)化而成：①化合物8與醇R₁OH在DCC，DMAP的條件下縮合而成；②化合物8與R₁OTs在堿性條件下(如NaHCO₃)發(fā)生親核取代得到；③化合物8與R₁Br在堿性條件下(如Cs₂CO₃)發(fā)生親核取代得到；

路線二：

其中，R_5a和R_6a各自獨(dú)立地為H、鹵素原子、C₁-C₄烷氧基；R₈為甲基或乙基；優(yōu)選R₁為：

具體來(lái)說(shuō)，化合物11經(jīng)Vilsmeier-Haack甲?；玫?2，化合物12和叔丁氧羰基亞甲基三苯基膦反應(yīng)得到13，化合物13和三氟乙酸反應(yīng)得到化合物14，化合物14和胺在縮合劑作用下縮合成酰胺化合物15，化合物15在堿性條件下水解為酸即得到本發(fā)明所述的如通式16所示的化合物。

對(duì)于商業(yè)上不可得的吲哚化合物11，其合成路線如下：

1、用路線一中合成化合物3的方法合成吲哚類(lèi)化合物，其中化合物2還可以在ZnCl₂/Tol.或者TsOH/Tol.的條件下得到化合物3；

2、

化合物19和疊氮化鈉反應(yīng)生成化合物20，化合物17和20在甲醇鈉的條件下反應(yīng)得到18，化合物18經(jīng)加熱關(guān)環(huán)得吲哚類(lèi)化合物11；

3、

取代苯肼的鹽酸鹽或者取代苯肼與丙酮酸酯縮合成化合物22，化合物22在PPA中關(guān)環(huán)得到吲哚類(lèi)化合物11；有時(shí)化合物21與丙酮酸酯在乙酸的催化作用下直接得到吲哚類(lèi)化合物11；

路線三：

其中，R_5a和R_6a、R₁的定義同上；R₁優(yōu)選C₁-C₆烷基，苯基取代的C₁-C₆烷基，苯基；

具體來(lái)說(shuō)，化合物23和PPh₃反應(yīng)得化合物24，化合物24與化合物4反應(yīng)得化合物25，化合物25在堿性條件下水解得到本發(fā)明所述的如通式26所示的化合物；

路線四：

其中，R_5a和R_6a優(yōu)選為H、Cl，Y優(yōu)選為-NH-，R₁優(yōu)選為：

具體來(lái)說(shuō)，用Pd/C催化氫化化合物14得到化合物27，化合物27與R₁YH縮合得到28，化合物28在堿性條件下水解得到本發(fā)明所述的如通式26所示的化合物；

路線五：

其中，R_5a和R_6a優(yōu)選為H、Cl，Y優(yōu)選為-NH-，R₁優(yōu)選為：

具體來(lái)說(shuō)，用雙氧水等將化合物12吲哚環(huán)3位的醛基氧化為羧基得到化合物30，化合物30與R₁YH縮合得到31，化合物31在堿性條件下水解得到本發(fā)明所述的如通式32所示的化合物；

路線六：

其中，R_5a和R_6a優(yōu)選為H、Cl，Y優(yōu)選為-O-，R₁優(yōu)選為：

具體來(lái)說(shuō)，化合物5在氯化亞銅和喹啉條件下脫羧得到化合物33，化合物33和丙二酸在弱堿條件下反應(yīng)得34，酸34與溴代物R₁Br在堿性條件下發(fā)生取代反應(yīng)生成本發(fā)明所述的如通式35所示的化合物；其中溴代物的合成如下：

化合物36被硼氫化鈉還原為醇37，后者在NBS，PPh₃條件下被轉(zhuǎn)化成溴代物38。

路線七：

其中，R_5b和R_6b優(yōu)選為H、甲基、乙基、苯基，R₁優(yōu)選為：

具體來(lái)說(shuō)，化合物39與化合物46反應(yīng)生成化合物40，化合物40被PCC氧化成化合物41，采用合成化合物16的方法即路線二將化合物41轉(zhuǎn)化成本發(fā)明所述的如通式45所示的化合物。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了通式I所示的化合物在制備預(yù)防或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和神經(jīng)退行性疾病(如多發(fā)性硬化癥，腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良)的藥物中的用途以及在制備治療CysLT₁介導(dǎo)的哮喘、鼻炎、過(guò)敏、其他炎癥性疾病的藥物中的用途。

根據(jù)本發(fā)明的再一方面，提供了通式I所示的化合物在預(yù)防或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和神經(jīng)退行性疾病(如多發(fā)性硬化癥，腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良)中的用途以及在治療CysLT₁介導(dǎo)的哮喘、鼻炎、過(guò)敏、其他炎癥性疾病中的用途。

本發(fā)明設(shè)計(jì)合成了一類(lèi)新型的GPR17受體和CysLT₁受體雙重拮抗劑，體外鈣流實(shí)驗(yàn)表明該類(lèi)化合物對(duì)GPR17有弱的拮抗活性，對(duì)CysLT₁有強(qiáng)的拮抗作用，可用于預(yù)防、治療腦、脊髓損傷和神經(jīng)退行性疾病(如多發(fā)性硬化癥，腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良)；還可用于治療CysLT₁介導(dǎo)的哮喘和鼻炎、過(guò)敏、其他炎癥性疾病。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。

化合物制備實(shí)施例

下述制備實(shí)施例中，NMR用Varian生產(chǎn)的Mercury-Vx 300M儀器測(cè)定，NMR定標(biāo)：δH 7.26ppm(CDCl₃),2.50ppm(DMSO-d₆),2.05ppm(Acetone-d₆)；試劑主要由上海化學(xué)試劑公司提供；TLC薄層層析硅膠板由山東煙臺(tái)會(huì)友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn)，型號(hào)HSGF 254；化合物純化使用的正相柱層析硅膠為山東青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)，型號(hào)zcx-11，200-300目。

制備實(shí)施例一(化合物編號(hào)CHY90)

將3,5-二氯苯胺(5g,30.8mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入水(20mL)，在冰水浴條件下滴加濃鹽酸(20mL)，滴加完后，再滴加冰水冷卻過(guò)的亞硝酸鈉(2.34g,33.91mmol)水溶液11mL，滴畢，在冰水浴條件下攪拌20分鐘；在另一個(gè)單口圓底燒瓶中加入2-甲基乙酰乙酸乙酯(6.6g,45.78mmol)，加入乙醇(25mL)，在冰水浴下滴加氫氧化鉀(15.5g,0.28mol)水溶液30mL，滴畢，在冰水浴條件下攪拌15分鐘后滴加到第一個(gè)瓶中，40℃下攪拌15分鐘，冷卻至室溫，乙醚萃取(20mL×3次)，合并有機(jī)相，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水MgSO₄干燥，減壓旋除溶劑后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝100:1→50:1→20:1)得產(chǎn)品M2(2.876g，33.9％，黃色固體)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)：δ7.63(s,1H),7.11(d,J＝1.8Hz,2H),6.94(d,J＝1.8Hz,1H),4.33(q,J＝7.1Hz,2H),2.10(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H).

將化合物M2(780mg,2.84mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入多聚磷酸(9.6g)，甲苯(10mL)，45℃攪拌過(guò)夜，減壓旋除甲苯，加入冰水，攪拌15分鐘，析出沉淀，過(guò)濾，濾餅用CH₂Cl₂洗兩次，40℃真空干燥得化合物M3(707mg,96.5％，白色固體)。用同樣的方法再制備1.876g化合物M3。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ7.43(s,1H),7.25(s,1H),7.09(s,1H),4.34(q,J＝6.6Hz,2H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H).

將安裝有冷凝管的雙口圓底燒瓶置于冰水浴中，在氬氣保護(hù)下加入DMF(3.26mL，42.32mmol)，緩慢滴加POCl₃(3.65mL,39.92mmol)，室溫?cái)嚢?5分鐘，加入M3(2.06g,7.98mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(40mL)，100℃回流7小時(shí)，冷卻至室溫，緩緩地倒入乙酸鈉的水溶液中(50g AcONa,100mL H₂O)，析出大量黃色固體，繼續(xù)攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，濾餅分別用水、二氯甲烷 洗滌，40℃真空干燥得化合物M4(1.1g,59.2％，灰色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ10.63(s,1H),7.56(d,J＝1.8Hz,1H),7.42(d,J＝1.5Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。

將化合物M4(1.1g,3.86mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入乙醇(60mL)，氫氧化鋰(616mg,14.67mmol)，加熱到50℃逐漸溶解，2小時(shí)后反應(yīng)完全，濃縮乙醇，加水稀釋?zhuān)?N鹽酸調(diào)pH至2，析出黃色沉淀，過(guò)濾，濾餅用水洗2次，40℃真空干燥得化合物M5(920mg,92.4％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ10.76(s,1H),7.50(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(d,J＝2.1Hz,1H).

在圓底燒瓶中依次加入化合物M5(600mg,2.33mmol)，重蒸的1,2-二氯乙烷(20mL)，2-三甲基硅基乙醇(332mg,2.79mmol)，EDCI(671mg,3.50mmol)，DMAP(340mg,2.79mmol)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，濾掉不溶物，減壓旋掉溶劑，所得粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(30mL)溶解，0.5N鹽酸(40mL×3次)洗滌，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M6(200mg,24％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.81(s,1H),9.47(bs,NH),7.38(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),4.56-4.51(m,2H),1.24-1.18(m,2H),0.11(s,9H).

將化合物M6(200mg,0.56mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入叔丁氧羰基亞甲基三苯基膦(315mg,0.84mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入重蒸的甲苯(20mL)，回流過(guò)夜，減壓旋掉溶劑，所得粗產(chǎn)物用二氯甲烷(10mL)溶解，硅膠拌樣柱層析純化(PE/EtOAc＝30:1)得化合物M7(203mg，79.6％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ9.15(bs,NH),8.32(d,J＝16.5Hz,1H),7.32(d,J＝1.5Hz,1H),7.20(d,J＝1.5Hz,1H),6.48(d,J＝16.2Hz,1H),4.49-4.43(m,2H),1.26-1.15(m,2H),0.08(s,9H).

將化合物M7(190mg,0.42mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入98％甲酸(50mL)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，減壓旋掉溶劑，所得粗產(chǎn)物用丙酮(10mL)溶解，硅膠拌樣柱層析純化(PE/EtOAc＝20:1)得62mg化合物M7，(PE/EtOAc＝4:1)得化合物M8(78mg，46.4％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆)):δ11.63(bs,1H),10.69(bs,1H),8.50(d,J＝16.5Hz,1H),7.59(s,1H),7.27(s,1H),6.64(d,J＝15.9Hz,1H),4.48(t,J＝9.0Hz,2H),1.19(t,J＝9.0Hz,2H),0.09(s,9H).

將化合物M8(10mg,0.025mmol)溶于0.5mL DMF中，冰水浴下加入碳酸銫(12mg,0.038mmol)，滴加溴芐(4.7mg,0.028mmol)的DMF溶液(0.2mL)，室溫反應(yīng)4小時(shí)，加入乙酸乙酯(5mL)，水(5mL)，振搖，靜置分層，有機(jī)相用飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M9(10mg，83.3％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.20(bs,NH),8.49(d,J＝16.2Hz,1H),7.44-7.21(m,7H),6.64(d,J＝16.2Hz,1H),5.28(s,2H),4.48-4.42(m,2H),1.17-1.11(m,2H),0.09(s,9H).

將化合物M9(10mg,0.020mmol)溶于0.3mL THF中，緩慢滴加TBAF(0.2mL,1M in THF)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，減壓旋掉THF，加水(2mL)，1N鹽酸調(diào)PH至2，乙酸乙酯(4mL×2)萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝1:1)得產(chǎn)品CHY90(8mg，100％，黃色固體)。其中雙鍵主要是E構(gòu)型，含有微量的Z構(gòu)型。¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ11.66(bs,1H),8.62(d,J＝16.2Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.49-7.33(m,5H),7.27(d,J＝1.5Hz,1H),6.79(d,J＝16.2Hz,1H),5.27(s,2H).

采用與制備實(shí)施例一相似的操作合成以下化合物：

制備實(shí)施例二(化合物編號(hào)CHY98)

將化合物38(100mg,0.37mmol)加入5mL甲醇中，呈混濁狀，在冰水浴下加入硼氫化鈉(28mg,0.73mmol)，室溫反應(yīng)8小時(shí)，TLC檢測(cè)沒(méi)反應(yīng)完全， 補(bǔ)加50mg硼氫化鈉，室溫過(guò)夜，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓旋除甲醇，加水(10mL)稀釋?zhuān)^(guò)濾，干燥得化合物37(100mg，100％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.40(d,J＝9.0Hz,1H),8.03-7.31(m,10H),5.26(s,1H),4.56(s,2H).

將化合物M8(20mg,0.050mmol)溶于無(wú)水DMF(1mL)中，分別加入化合物37(16mg,0.058mmol)，DCC(16mg,0.078mmol)，DMAP(4mg,0.033mmol)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，加乙酸乙酯(5mL)稀釋?zhuān)?5mL×2次)洗滌，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M10(25mg，74％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.20(bs,NH),8.54(d,J＝15.9Hz,1H),8.11(d,J＝8.7Hz,1H),8.07(s,1H),7.77-7.22(m,11H),6.69(d,J＝15.9Hz,1H),5.33(s,2H),4.46(m,2H),1.15(m,2H),0.06(s,9H).

將化合物M10(25mg,0.037mmol)溶于1mL THF中，緩慢滴加TBAF(0.3mL,1M in THF)，室溫反應(yīng)2小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓旋掉THF，加水(2mL)，1N鹽酸調(diào)pH至2，析出黃色固體，過(guò)濾，濾餅分別用水、二氯甲烷洗，40℃真空干燥得15mg粗產(chǎn)物，用丙酮打漿得產(chǎn)品CHY98(10mg，47.6％，黃色固體)，含有少量雜質(zhì)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.63(d,J＝7.8Hz,1H),8.54(d,J＝15.9Hz,1H),8.17-8.06(m,5H),7.81(s,1H),7.75-7.50(m,5H),7.32(s,1H),6.74(d,J＝15.9Hz,1H),5.31(s,2H).

采用與制備實(shí)施例二相似的操作合成CHY109。¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ11.73(bs,1H),8.77(d,J＝15.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.45-7.22(m,6H),6.99(d,J＝16.2Hz,1H).

采用與制備實(shí)施例二相似的操作合成CHY111。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.53(s,1H),9.19(s,1H),8.83(d,J＝16.5Hz,1H),8.36(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.82-7.70(m,2H),7.59(s,1H),7.53-7.21(m,8H),6.78(d,J＝16.5Hz,1H),5.35(s,2H).

制備實(shí)施例三(化合物編號(hào)CHY96)

將4-戊炔-1-醇(100mg,1.19mmol)和吡啶(141mg,1.57mmol)依次加入無(wú)水二氯甲烷(2mL)中，冰水浴下滴加對(duì)甲苯磺酰氯(248mg,1.30mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，分別用1N鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M11(73mg，23.8％，無(wú)色油狀)。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.81-7.78(m,2H),7.36-7.33(m,2H),4.15(t,J＝6Hz,2H),2.45(s,3H),2.25(td,J＝6.9,2.7Hz,2H),1.90-1.81(m,2H),1.58(s,2H).

將化合物M11(13mg,0.055mmol)溶于0.5mL DMF中，加入化合物M8(20mg,0.050mmol)和碳酸氫鈉(12mg,0.15mmol)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，TLC檢測(cè)沒(méi)反應(yīng)，加入碳酸銫(24mg,0.074mmol)，60℃反應(yīng)過(guò)夜，加入乙酸乙酯(5mL)，水(5mL)，1N鹽酸調(diào)PH至2，振搖，靜置分層，有機(jī)相用飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M12(16mg，69.6％，白色固體)。核磁中含有少量Z構(gòu)型產(chǎn)物，以E構(gòu)型為主。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.42(s,1H),8.44(d,J＝16.2Hz,1H),7.33(d,J＝1.5Hz,1H),7.20(d,J＝1.5Hz,1H),6.57(d,J＝15.9Hz,1H),4.50-4.42(m,2H),4.34(t,J＝6.3Hz,2H),2.35(td,J＝7.2,3.0Hz,2H),2.04-1.91(m,2H),1.64(s,2H),1.22-1.12(m,2H),0.09(s,9H).

將化合物M12(16mg,0.034mmol)溶于0.3mL THF中，緩慢滴加TBAF(0.2mL,1M in THF)，室溫反應(yīng)4小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓旋掉THF，加水(2mL)，1N鹽酸調(diào)pH至2，乙酸乙酯(4mL×2)萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝2:1)得產(chǎn)品CHY96(6mg，50％，黃色固體)。其中雙鍵主要是E構(gòu)型，含有微量的Z構(gòu)型。¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ11.63(bs,1H),8.55(d,J＝15.9 Hz,1H),7.61(s,1H),7.26(s,1H),6.72(d,J＝16.2Hz,1H),4.30(t,J＝6.3Hz,2H),2.35(m,2H),2.05(s,1H),1.93(m,2H).

制備實(shí)施例四(化合物編號(hào)CHY113)

化合物M4的制備見(jiàn)實(shí)施例一。

將化合物M13(850mg,5.63mmol)和化合物M14(1g,5.63mmol)加入瓶中，加入乙酸酐(6mL)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下60℃反應(yīng)4.5小時(shí)，冷卻至室溫，析出黃色固體，過(guò)濾，濾餅用水和乙醚各洗兩次得化合物M15(1.52g，86.9％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.50(t,J＝2.1Hz,1H),8.20-8.15(m,2H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.94(d,J＝7.5Hz,1H),7.80(d,J＝16.2Hz,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.59(t,J＝8.1Hz,1H),7.48(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.47(d,J＝16.5Hz,1H).

將二水合氯化亞錫(1.81g,8.05mmol)溶于濃鹽酸(4mL)中，室溫下滴加化合物M15(500mg,1.61mmol)的醋酸溶液(8mL)，60℃反應(yīng)2小時(shí)，呈黃色漿狀，濃縮除去乙酸，加20mL水稀釋?zhuān)?0N氫氧化鈉水溶液調(diào)pH至9，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后得化合物M16(413mg，91.8％，黃色固體)。ESIMS:281.0[M+H]⁺；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.38(d,J＝8.7Hz,1H),8.02(d,J＝1.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.7Hz,1H),7.90(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(d,J＝16.2Hz,1H),7.58(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.28(d,J＝16.2Hz,1H),7.09(t,J＝7.8Hz,1H),6.89(s,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),5.17(s,2H).

將化合物M4(500mg,1.75mmol)加入單口圓底燒瓶中，加入叔丁氧羰基亞甲基三苯基膦(987mg,2.63mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入重蒸的甲苯(20mL)，回流過(guò)夜，減壓旋掉溶劑，所得粗產(chǎn)物用二氯甲烷(30mL)溶解，硅膠拌樣柱層析純化(PE/EtOAc＝8:1)得化合物M17(828mg，收率＞100％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ9.18(bs,NH),8.33(d,J＝16.2Hz,1H),7.34(s,1H),7.21(s,1H),6.48(d,J＝16.2Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.44(t,J＝7.2Hz,3H).

將化合物M17(417mg,1.08mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，冰水浴下滴加三氟乙酸(2mL,26.93mmol)，反應(yīng)液由黃色變成橙紅色，室溫反應(yīng)1小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢，硅膠拌樣柱層析純化(CHCl₃/CH₃OH＝30:1)得化合物M18(340mg，96.0％，黃色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.66(s,1H),8.28(d,J＝15.9Hz,1H),7.51(s,1H),7.33(s,1H),6.45(d,J＝16.2Hz,1H),4.37(q,J＝6.9Hz,2H),1.35(t,J＝6.9Hz,3H).

將化合物M18(80mg,0.24mmol)溶于DMF(1mL)，分別加入HATU(139mg,0.37mmol)，DIPEA(74mg,0.57mmol)，室溫反應(yīng)半小時(shí)后，滴加化合物M16(68mg,0.24mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)，再用1mL DMF洗瓶壁，加到反應(yīng)液中，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，濃縮除掉二氯甲烷，所得粗品用乙酸乙酯(10mL)稀釋?zhuān)?10mL×2)洗，飽和食鹽水洗有機(jī)相，濃縮部分乙酸乙酯，有沉淀析出，過(guò)濾，用二氯甲烷洗兩次濾餅，干燥得化合物M19(55mg，39.0％，灰色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.41(s,1H),8.44(d,J＝9.0Hz,1H),8.33(d,J＝15.6Hz,1H),8.22(s,1H),8.06(s,1H),8.03-7.98(m,2H),7.89(d,J＝16.5Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.36(m,4H),6.86(d,J＝15.6Hz,1H),4.41(q,J＝6.9Hz,2H),1.38(t,J＝6.9Hz,3H).

將化合物M19(50mg,0.085mmol)加入瓶中，加入乙醇(5mL)，氫氧化鈉(22mg,0.55mmol)，60℃反應(yīng)18小時(shí)，濃縮除去乙醇，用2mL水稀釋?zhuān)?N鹽酸調(diào)pH至2，加5mL乙酸乙酯，攪拌，過(guò)濾，濾餅干燥得產(chǎn)品 CHY113(24mg，53.5％，紅色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.40(s,1H),8.55(d,J＝8.7Hz,1H),8.36(d,J＝15.6Hz,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.09-8.06(m,2H),7.98(d,J＝16.5Hz,1H),7.69-7.64(m,2H),7.51-7.34(m,5H),6.97(d,J＝15.6Hz,1H).

采用與制備實(shí)施例四相似的操作合成以下化合物：

其中商業(yè)上不可得的吲哚衍生物可通過(guò)如下方法制備：

方法A:見(jiàn)制備實(shí)施例一中化合物M3的合成，用這種方法還可合成4，6-二氟吲哚-2-羧酸乙酯。

方法B:

以鄰甲氧基苯胺為原料，采用合成化合物M2的方法合成化合物M21。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ8.12(s,1H),7.59(d,J＝7.5Hz,1H),6.70-6.85(m,3H),4.32(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),2.35(s,3H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H).

將化合物M21(760mg,3.22mmol)溶于乙酸(5mL)，加入甲苯(5mL)，氯化鋅(1.088g,8.09mmol),110℃反應(yīng)12小時(shí)，濃縮甲苯，加水和乙醚各10mL，用2N氫氧化鈉調(diào)pH至中性，分層，水相再用乙醚(10mL)萃取，合并有機(jī)相，分別用水、飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝50:1to 20:1)得化合物M22(200mg，28.4％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ9.04(bs,1H),7.27(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(s,1H),7.06(t,J＝8.1Hz,1H),6.72(d,J＝7.5Hz,1H),4.41(q,J＝7.2Hz,2H),3.96(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H).

方法C:

將丙酮酸乙酯(3.19g,27.59mmol)溶于乙醇(60mL)，加入乙酸(517mg,8.62mmol),對(duì)甲氧基苯肼鹽酸鹽(3g,17.24mmol)，加冷凝管，80℃反應(yīng)2小時(shí)，固體逐漸溶解呈黑色溶液，繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)，濃縮乙醇，析出白色固體，過(guò)濾，濾液用硅膠拌樣柱層析純化(PE/EtOAc＝25:1to 10:1)得中間點(diǎn)，即化合物M24(456mg，12.1％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ11.72(bs,1H),7.32(d,J＝8.7Hz,1H),7.07(d,J＝2.1Hz,1H),7.02(s,1H),6.89(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),4.30(q,J＝7.2Hz,2H),3.73(s,3H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H).

方法D:

將丙酮酸乙酯(3.1g,26.82mmol)溶于乙醇(60mL)，加入乙酸(498mg,8.38mmol),鄰氯苯肼鹽酸鹽(3g,17.76mmol)，加冷凝管，80℃反應(yīng)2小時(shí)，冷卻至室溫，濃縮乙醇，析出固體，過(guò)濾，濾餅用乙醇洗2次，得1.36g無(wú)色針狀晶體，母液再濃縮至固體析出，過(guò)濾，濾餅用乙醇洗得660mg無(wú)色針狀晶體，收率47.3％。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ12.30(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.31(t,J＝7.5Hz,1H),6.93(d,J＝7.5Hz,1H),4.27(q,J＝7.2Hz,2H),2.13(s,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。

將化合物M26(1g，4.15mmol)加入瓶中，加入多聚磷酸(10g)，45℃反應(yīng)1小時(shí)，加冰水，攪拌10分鐘，乙醚萃取，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝50:1)得化合物M27(300mg，32％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.13(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝7.5Hz,1H),7.26(s,1H),7.09(t,J＝8.1Hz,1H),4.35(q,J＝6.9Hz,2H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)。

方法E:

將疊氮化鈉(1.08g，16.62mmol)加入瓶中，加入DMF(4.5mL)，室溫滴加化合物M28(2.5g,14.97mmol)，室溫反應(yīng)2小時(shí)，加水使白色沉淀溶解，乙醚(10mL×3)萃取，合并有機(jī)相，水(10mL×6)洗，飽和食鹽水洗，無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后得化合物M29(1.66g，85.9％，無(wú)色油狀)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ4.26(q,J＝7.2Hz,2H),3.86(s,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H).

在室溫下將金屬鈉(280mg,12.17mmol)分批加入無(wú)水甲醇(9.5mL)中，鈉塊消失后回流1小時(shí)，冷卻至零下20℃，滴加對(duì)甲氧基苯甲醛(500mg,3.67mmol)的甲醇溶液(2.5mL)，然后滴加化合物M29(1.184g,9.18mmol)，零下20℃反應(yīng)半小時(shí)后，零下3℃反應(yīng)12小時(shí)，加入冰水，攪拌析出白色沉淀，過(guò)濾，濾餅用冰水洗2次，干燥得化合物M31(412mg，48.1％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ7.79(d,J＝7.5Hz,2H),6.91(d,J＝9.0Hz,2H),6.89(s,1H),3.90(s,3H),3.84(s,3H).

將化合物M31(412mg，1.77mmol)溶于間二甲苯(50mL)，氬氣保護(hù)下160℃回流半小時(shí)，減壓濃縮除掉間二甲苯，粗品用二氯甲烷溶解硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝5:1)得化合物M32(359mg，98.9％，白色固體)。ESIMS:228.1[M+Na]⁺。

¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ10.70(bs,1H),7.55(d,J＝9.0Hz,1H),7.11(s,1H),7.00(s,1H),6.77(dd,J＝9.0,2.1Hz,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H).

制備實(shí)施例五(化合物編號(hào)GP523)

將化合物M33(639mg,3mmol)，對(duì)硝基苯酚(500.8mg,3.6mmol)，碳酸鉀(829mg,6mmol)溶溶于DMF(15mL)中，60℃反應(yīng)過(guò)夜，TLC檢測(cè)原料消失，加水稀釋?zhuān)宜嵋阴ポ腿?次，合并有機(jī)相，有機(jī)相用水洗3次，飽和食鹽水洗，無(wú)水Na₂SO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M34(850mg，收率＞100％，無(wú)色固體)。ESIMS:272.1[M+H]⁺。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ8.19(d,J＝9.0Hz,2H),7.32-7.19(m,5H),6.92(d,J＝9.3Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),2.71(t,J＝6.9Hz,2H),1.83(m,4H).

將化合物M34(170mg,0.63mmol)溶于甲醇(10mL)中，用氮?dú)庵脫Q3次后加入Pa/C(20mg)，用氫氣置換3次，室溫反應(yīng)50分鐘，TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。硅藻土過(guò)濾，濃縮除掉溶劑得化合物M35(136mg，89.5％，無(wú)色液體)。

ESIMS:242.1[M+H]⁺。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ7.31-7.18(m,5H),6.74(d,J＝8.7Hz,2H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),3.90(t,2H),2.67(t,2H),1.79(m,4H).

將化合物M18(65mg，0.20mmol)溶于干燥的DMF(4mL)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入化合物M36(62mg，0.28mmol)，三苯基膦(73mg，0.28mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，TLC檢測(cè)有很多原料，補(bǔ)加10當(dāng)量的化合物M36和三苯基膦，再反應(yīng)2小時(shí)后，加入化合物M35(67mg，0.28mmol)，80℃反應(yīng)過(guò)夜，加水，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相有固體不溶，過(guò)濾，濾液濃縮后硅膠柱層析純化(PE/Acetone＝5:1)得粗品，加入甲醇后析出固體，過(guò)濾，合并固體得化合物M37(5mg，4.5％，白色固體)。

¹H NMR(300MHz,CD₃OD):δ8.40(d,J＝15.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(d,J＝1.8Hz,1H),7.27-7.13(m,5H),6.85(d,J＝9.0Hz,2H),6.78(d,J＝15.6Hz,1H),4.41(q,J＝6.9Hz,2H),3.96(t,2H),2.67(t,2H),1.79(m,4H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H).

將化合物M37(5mg,0.0091mmol)溶于異丙醇，氫氧化鈉(2.5mg,0.063mmol)水解，用1N鹽酸調(diào)PH至2，濃縮掉異丙醇，加水，析出固體，過(guò)濾，干燥得產(chǎn)品GP523(2mg，41.7％，黃色固體)。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.54(s,1H),10.07(s,1H),8.23(d,J＝15.6Hz,1H),7.62(d,J＝9.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.39(s,1H),7.31-7.17(m,5H),6.88(d,J＝9.0Hz,2H),6.75(d,J＝15.6Hz,1H),3.96(s,2H),2.64(s,2H),1.71(s,4H).

制備實(shí)施例六(化合物編號(hào)CHY110)

將化合物M38(500mg，2.07mmol)溶于苯(10mL)中，室溫下滴加三苯基膦(580mg，2.21mmol)的苯溶液(10mL)，室溫反應(yīng)48小時(shí)，析出白色沉淀，過(guò)濾，濾餅用正己烷洗一次，將所得固體溶于二氯甲烷(30mL)中，加入1％的氫氧化鈉水溶液(30mL)，室溫?cái)?0分鐘，分層，有機(jī)相用無(wú)水MgSO₄干燥，濃縮后得化合物M39(無(wú)色油狀)，直接投下一步反應(yīng)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ7.71-7.41(m,20H),7.27(s,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,2H),2.65(t,J＝7.2Hz,2H).

將化合物M4(20mg，0.078mmol)溶于無(wú)水甲苯(5mL)中，加入化合物M39(41mg，0.10mmol)，120℃反應(yīng)過(guò)夜，加二氯甲烷稀釋?zhuān)枘z柱層析純化(PE/EtOAc＝6:1)得化合物M40(22mg，68.8％，白色固體)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ9.47(bs,1H),8.31(d,J＝16.2Hz,1H),7.34-7.20(m,7H),6.82(d,J＝16.5Hz,1H),4.42(q,J＝7.2Hz,2H),3.05(s,4H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H).

將化合物M40(22mg，0.053mmol)加入瓶中，加入乙醇(2mL)，一水合氫氧化鋰(8mg，0.20mmol)，50℃反應(yīng)3.5小時(shí)，TLC檢測(cè)沒(méi)反應(yīng)完，補(bǔ)加1N LiOH(1mL)，50℃反應(yīng)1小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，濃縮掉乙醇，加水稀釋?zhuān)?N鹽酸調(diào)PH至2，過(guò)濾，濾餅干燥得產(chǎn)品CHY110(9mg，43.7％，黃色固體)。

¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ11.63(bs,1H),8.42(d,J＝16.5Hz,1H),7.61(s,1H),7.30-7.15(m,6H),6.96(d,J＝16.5Hz,1H),3.08-2.96(m,4H).

制備實(shí)施例七(化合物編號(hào)CHY112)

將化合物M5(300mg，1.16mmol)，氯化亞銅(53mg，0.54mmol)加入微波管中，加入喹啉(2mL)，氬氣換氣，200℃反應(yīng)10分鐘，加入乙酸乙酯(15mL),1N鹽酸洗兩次，有機(jī)相呈乳狀，過(guò)濾，濾液用飽和食鹽水洗，MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝1:1)得化合物M41(124mg，50.0％，灰色固體)。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.42(s,1H),8.34(s,1H),7.59(s,1H),7.41(s,1H).

將化合物M41(63mg，0.29mmol)，丙二酸(59mg，0.57mmol)，吡啶(1.7mL),哌啶(246mg，2.89mmol)依次加入瓶中，50℃反應(yīng)12小時(shí)，濃縮掉溶劑，硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝1:1+1％甲酸)得化合物M42(50mg，67.6％，灰色固體)。

¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ11.21(bs,1H),10.46(bs,1H),8.57(d,J＝15.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.53(s,1H),7.21(s,1H),6.36(d,J＝15.9Hz,1H).

將化合物M37(100mg，0.34mmol)溶于無(wú)水DMF(2.5mL)，在冰水浴下加入三苯基膦(108mg，0.41mmol)，NBS(72mg，0.41mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，溶液由澄清變渾濁，加乙酸乙酯(10mL)，分別用0.5N氫氧化鋰(10mL)，水(10mL)，飽和食鹽水(10mL)洗，MgSO₄干燥，濃縮后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M43(66mg，54.1％，淺黃色固體)。ESIMS：357.1，359.1。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ8.13-8.08(m,2H),7.74-7.56(m,6H),7.47-7.35(m,3H),4.54(s,2H).

將化合物M42(35mg，0.14mmol)溶于無(wú)水DMF(3mL)，在冰水浴下加入碳酸鉀(39mg，0.28mmol)，攪拌15分鐘后，加入化合物M43(50mg，0.14mmol)，室溫過(guò)夜后溶液由澄清變成黃色渾濁，加水和乙酸乙酯各(10mL)，產(chǎn)生許多白色絮狀物，過(guò)濾，干燥得產(chǎn)品CHY112(20mg，26.8％，白色固體)。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.51(d,J＝15.9Hz,1H),8.41(d,J＝8.4Hz,1H),8.33(s,1H),8.02(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.94-7.87(m,3H),7.80(s,1H),7.73(d,J＝6.9Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.48(m,2H),7.43(t,J＝6.3Hz,1H),7.24(s,1H),6.54(d,J＝15.9Hz,1H),5.26(s,2H).

制備實(shí)施例八(化合物編號(hào)CHY117)

從化合物M44出發(fā)，采用制備實(shí)施例四中合成M18的方法合成化合物M47。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.34(s,1H),8.54(d,J＝16.2Hz,1H),7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.24(d,J＝8.1Hz,1H),6.57(d,J＝16.5Hz,1H),4.41(q,J＝7.2Hz,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,1H).

將化合物M47(100mg，0.39mmol)溶于乙醇(5mL)和四氫呋喃(8mL)的混合溶液中，用氮?dú)庵脫Q3次后加入Pa/C(29mg)，用氫氣置換2次，室溫反應(yīng)7小時(shí)，硅藻土過(guò)濾，濃縮除掉溶劑得化合物M48(74mg，73.3％，白色固體)。

ESIMS：260.1[M-H]⁺；¹H NMR(300MHz,Acetone-d₆):δ10.69(bs,1H),7.77(d,J＝8.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(ddd,J＝8.1,7.2,1.2Hz,1H),7.10(ddd,J＝7.2,6.9,0.9Hz,1H),4.38(q,J＝7.2Hz,2H),3.41(t,J＝8.1Hz,2H),2.66(t,J＝7.5Hz,2H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H).

采用制備實(shí)施例四中合成CHY113的方法可將化合物M48轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品CHY117。

ESIMS：494.2[M-H]⁺；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ11.39(s,1H),10.01(s,1H)，8.40(d,J＝8.7Hz,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H)，8.02-7.92(m,3H),7.82(d,J＝16.5Hz,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.40-7.32(m,5H),7.21(t,J＝7.2Hz,1H),7.04(t,J＝7.2Hz,1H),3.40(t,J＝7.2Hz,2H),2.69(t,J＝7.5Hz,2H).

制備實(shí)施例九(化合物編號(hào)CHY118)

將化合物M45(200mg，0.92mmol)加入瓶中，加入水(2mL)和乙腈(10mL)，呈白色渾濁，加入二水合磷酸二氫鈉(186mg，1.20mmol)，30％雙氧水(125mg，1.10mmol)，冰水浴條件下滴加亞氯酸鈉(116mg，1.29mmol)的水溶液(0.5mL)，室溫反應(yīng)7小時(shí)，TLC檢測(cè)沒(méi)反應(yīng)完，再加水(2mL)和四氫呋喃(10mL)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，冰水浴下用1N鹽酸調(diào)PH至2，析出白色沉淀，過(guò)濾，水洗濾餅2次，干燥得化合物M50(177mg，82.7％，白色固體)。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.71(s,1H),12.48(s,1H)，7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝7.2Hz,1H),4.37(q,J＝6.9Hz,1H),1.33(t,J＝7.2Hz,1H).

采用制備實(shí)施例四中合成CHY113的操作可將化合物M50轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品CHY118。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.36(s,1H),11.63(s,1H)，8.43(d,J＝8.4Hz,1H),8.26(d,J＝8.1Hz,1H),8.20(s,1H)，8.06-7.99(m,3H),7.91(d,J＝16.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.57-7.42(m,5H),7.36(t,J＝8.1Hz,1H),7.23(t,J＝7.2Hz,1H).

制備實(shí)施例十(化合物編號(hào)CHY127)

將炔丙醇(560mg，10mmol)溶于二氧六環(huán)(27mL)中，加入碳酸銀(184mg，0.67mmol)，加熱到80℃，緩慢滴加化合物46(753mg，6.66mmol)，80℃反應(yīng)2小時(shí)，濃縮掉溶劑，加二氯甲烷(20mL)溶解，硅藻土過(guò)濾掉黑色不溶物，濃縮濾液后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝10:1到5:1到3:1)得化合物M51(53mg，13.6％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ9.07(bs,1H),6.85(s,1H),6.25(s,1H),4.75(d,J＝6.6Hz,1H),4.36(q,J＝7.2Hz,2H),3.52(bs,1H),1.28(t,J＝8.1Hz,3H).

將化合物M51(153mg，0.91mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入PCC(291mg，1.36mmol)，室溫反應(yīng)2小時(shí)，過(guò)濾，濃縮濾液后硅膠柱層析純化(PE/EtOAc＝5:1)得化合物M52(100mg，65.8％，白色固體)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ10.49(s,1H),9.48(bs,1H),6.94(t,J＝2.4Hz,1H),6.81(t,J＝3.0Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).

將化合物M52轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品CHY127的操作見(jiàn)制備實(shí)施例四。

ESIMS：442.0[M-H]⁺；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ11.66(bs,1H),10.13(s,1H),8.43-8.33(m,2H),8.14(s,1H),8.06-7.94(m,3H),7.85(d,J＝16.2Hz,1H),7.64-7.58(m,2H),7.44-7.39(m,3H),6.90(s,1H),6.54(d,J＝15.6Hz,1H),6.46(s,1H).

生物實(shí)驗(yàn)實(shí)施例

一：GPR17,CysLT₁,CysLT₂拮抗活性測(cè)試實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模哼M(jìn)行本發(fā)明化合物的GPR17,CysLT₁,CysLT₂拮抗活性測(cè)試。

2、實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞：穩(wěn)定表達(dá)GPR17/Gα16,CysLT₁/Gα16,CysLT₂/Gα16的HEK293細(xì)胞，作為高通量篩選和檢測(cè)化合物拮抗活性的細(xì)胞模型。

3、實(shí)驗(yàn)原理：通過(guò)建立共轉(zhuǎn)目標(biāo)受體和Gα16蛋白的細(xì)胞系，使目標(biāo)受體被激活后能引起Gα16蛋白的活化，進(jìn)而激活磷脂酶C(PLC)產(chǎn)生IP₃和DAG，IP₃可與細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體上的IP₃受體結(jié)合，從而引起胞內(nèi)鈣離子的釋放。因此，測(cè)定胞內(nèi)鈣離子濃度的變化可以作為檢測(cè)目標(biāo)受體活化狀態(tài)的方法。Fluo-4/AM是一種鈣熒光探針指示劑用來(lái)測(cè)量鈣離子，作為非極性脂溶性的化合物，進(jìn)入細(xì)胞后在細(xì)胞脂解酶的作用下，AM基團(tuán)解離，釋出Fluo-4；由于Fluo-4是極性分子，不易通過(guò)脂質(zhì)雙分子膜，它可使Fluo-4長(zhǎng)時(shí)間保留在細(xì)胞內(nèi)。最終可以通過(guò)測(cè)量被激發(fā)的熒光強(qiáng)度來(lái)反映Gα蛋白被激活的水平。如果篩選的化合物能夠激動(dòng)目標(biāo)受體，則可以使鈣流反應(yīng)大大升高。反之，如果篩選的化合物能夠拮抗目標(biāo)受體，則可以使鈣流反應(yīng)大大降低。

實(shí)驗(yàn)試劑：BSA(Roche),D-glucose(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),sulfinpyrazone(Sigma),Cremophor EL(Biochemika),Fluo-4, AM(Invitrogen),montelukast(TCI),pranlukast(TCI),zafirlukast(TCI),MDL29951(TCI).

4、實(shí)驗(yàn)步驟：

樣品處理：樣品用DMSO溶解，低溫保存，DMSO在最終體系中的濃度控制在不影響檢測(cè)活性的范圍之內(nèi)。

穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)受體/Gα16的HEK293細(xì)胞種于96孔板，培養(yǎng)過(guò)夜。吸去種有細(xì)胞的孔內(nèi)的培養(yǎng)液，加入新鮮配制的染料40mL/孔，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫孵育40分鐘。用鈣緩沖液將待測(cè)的藥物稀釋并混勻。將染料吸盡棄去，用新鮮配制的鈣緩沖液洗一遍后，換上50mL溶解有待測(cè)藥物的鈣緩沖液。用FlexStation II儀檢測(cè)，第15秒開(kāi)始由儀器自動(dòng)加入25mL溶解有已知激動(dòng)劑的鈣緩沖液，最終讀取525nm處熒光值。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

陽(yáng)性對(duì)照Montelukast、Pranlukast、Zafirlukast的結(jié)果表明本測(cè)試方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果是可靠的。根據(jù)上述細(xì)胞水平測(cè)試結(jié)果，本發(fā)明得到了一類(lèi)新型的GPR17和CysLT₁受體雙重拮抗劑，其對(duì)GPR17的拮抗活性在微摩爾水平，對(duì)CysLT₁和CysLT₂有選擇性拮抗作用，拮抗活性在納摩爾水平。