本發(fā)明涉及一種斑節(jié)對蝦染色體的制備方法。

背景技術(shù)：

基因定位在基因組研究中占有很重要的地位，既有助于基因序列的測定，又有利于對基因結(jié)構(gòu)和功能的研究，以進(jìn)一步提示生物的遺傳信息?；虻娜旧w定位方法多種多樣，它可分為基因的遺傳作圖和物理作圖，而物理作圖中最傳統(tǒng)的是熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）。FISH 通過特定分子的熒光標(biāo)記探針在細(xì)胞內(nèi)與染色體上特定的互補(bǔ)核酸序列原位雜交，通過激發(fā)雜交探針的熒光來檢測信號(hào)。由于熒光染料收到一定波長（即激發(fā)波長）的光激發(fā)后會(huì)發(fā)射熒光（即發(fā)射波長），所以就濾光鏡選擇合適的激發(fā)波長的光，即可顯示某一特定的熒光染料，于是就可以直接顯示染色體上的基因序列間的相互位置關(guān)系。染色體制備作為基因定位的第一步，就顯得尤為重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種斑節(jié)對蝦（Penaeus monodon）染色體的制備方法。

一種斑節(jié)對蝦染色體的制備方法，步驟如下：

（1）濃縮收集斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體于1.5mL離心管中，以0.01%秋水仙素處理樣品0.5-1.5h；

（2）濾掉秋水仙素，用70-80 mM KCl 溶液進(jìn)行低滲處理20-40min；

（3）向離心管中加滿Carnoy's固定溶液進(jìn)行固定，并置于30-50rpm搖床上不斷搖晃混勻，每隔15-30min更換一次固定液，共計(jì)三次；

（4）室溫5000-10000rpm 離心0.5-1.5min，棄上清液后用適量的50%乙酸溶液對材料進(jìn)行解離，將細(xì)胞解離液在事先45-55℃預(yù)熱的載玻片上懸空滴片；

（5）將滴好的載玻片置于45-55℃烘箱5-15 min 后，室內(nèi)干燥1-2 天，即可使用。

所述秋水仙素的濃度為質(zhì)量體積濃度，溶劑為海水。

所述的Carnoy's固定溶液成分為：體積比3：1的酒精：冰乙酸。

步驟（4）中懸空高度為15-40cm。

所述50%乙酸中的比例為體積比。

染色體的制備是基因定位的基礎(chǔ)，只有制備出高質(zhì)量的染色體才可以進(jìn)行基因定位，由于細(xì)胞分裂中染色體變化的特殊性，只有在細(xì)胞分裂的后期才可以制備得到分散良好的染色體，而這個(gè)時(shí)期非常短，因此就必須選擇細(xì)胞分裂旺盛的組織來進(jìn)行染色體制備。本發(fā)明選擇了細(xì)胞分裂最為旺盛的無節(jié)幼體時(shí)期進(jìn)行染色體的制備，制備成功率非常高，每張載玻片上可找到6-8個(gè)處于分裂相的染色體。且本發(fā)明的方法簡單易行，適合大批量制備。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。

一種斑節(jié)對蝦染色體的制備方法，步驟如下：

（1）濃縮收集斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體于1.5mL離心管中，以0.01%秋水仙素處理樣品0.5-1.5h；

（2）濾掉秋水仙素，用70-80 mM KCl 溶液進(jìn)行低滲處理20-40min；

（3）向離心管中加滿Carnoy's固定溶液進(jìn)行固定，并置于30-50rpm搖床上不斷搖晃混勻，每隔15-30min更換一次固定液，共計(jì)三次；

（4）室溫5000-10000rpm 離心0.5-1.5min，棄上清液后用適量的50%乙酸溶液對材料進(jìn)行解離，將細(xì)胞解離液在事先45-55℃預(yù)熱的載玻片上懸空滴片；

（5）將滴好的載玻片置于45-55℃烘箱5-15 min 后，室內(nèi)干燥1-2 天，即可使用。

所述秋水仙素的濃度為質(zhì)量體積濃度，溶劑為海水。

所述的Carnoy's固定溶液成分為：體積比3：1的酒精：冰乙酸。

步驟（4）中懸空高度為15-40cm。

所述50%乙酸中的比例為體積比。