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      一種提取泥蚶DNA的方法與流程

      文檔序號(hào):12712454閱讀:來源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種提取泥蚶DNA的方法,其特征在于,步驟如下:

      (1)取泥蚶肌肉組織3-8克,用液氮研磨后,將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中,隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K,55-57℃水浴10-60 min,至溶液澄清;

      (2)每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇(體積比24:1),輕柔晃動(dòng)5-15min,室溫10000-12000 rpm離心8-15min;

      (3)離心后有機(jī)相位于下層,中間層為蛋白層,上層為溶有DNA的水相,吸取上清液至新離心管中,重復(fù)步驟(2),至水相和有機(jī)相之間無蛋白層殘留;

      (4)吸取上清液至新離心管中,加入500μL氯仿/異戊醇,輕柔晃動(dòng)5-15min,室溫10000-12000 rpm離心8-15min;

      (5)吸取上清液,加入50μL 3M NaAc,緩慢輕柔搖勻,添加1mL在-20℃預(yù)冷的無水乙醇,放置于-20℃冰箱 20-50min,10000-15000rpm 離心8-15min,得到DNA沉淀;

      (6)用預(yù)冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次;

      (7)沉淀干燥,根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A,37℃水浴15-40min,直至RNA全部溶解;

      (8)用分光光度計(jì)測(cè)定DNA的濃度,同時(shí)進(jìn)行瓊脂糖電泳檢測(cè)。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取泥蚶DNA的方法,其特征在于,所述STE成分為:100mM NaCl;10mM Tris-Cl,pH8.0;1mM EDTA,pH8.0。

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