本發(fā)明涉及下述培養(yǎng)基組合物的制造方法，所述培養(yǎng)基組合物使用水中溶解性有所提高的具有陰離子性官能團的高分子化合物，用于將動植物細胞及/或組織特別是以三維或懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)。
背景技術：
：近年，用于對在動物和植物機體內(nèi)發(fā)揮不同作用的多種器官、組織和細胞進行體外增殖或維持的技術在不斷發(fā)展。對這些器官、組織進行的體外增殖或維持分別被稱為器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)，對從器官、組織分離的細胞進行的體外增殖、分化或維持則被稱為細胞培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)是將經(jīng)分離的細胞在培養(yǎng)基中進行體外增殖、分化或維持的技術，是為了詳細分析生物體內(nèi)各種器官、組織和細胞的功能和結構而必不可少的技術。此外，通過該技術培養(yǎng)的細胞和/或組織被用于以下多個領域：化學物質(zhì)、藥品等的藥效和毒性評價；酶、細胞生長因子、抗體等有用物質(zhì)的大規(guī)模生產(chǎn)；對因疾病、肢體欠損而失去的器官、組織、細胞加以彌補的再生醫(yī)療；植物品種改良；基因重組作物的制造等。來自動物的細胞基于其性狀被大體分為懸浮細胞和粘附細胞兩大類。懸浮細胞是生長和增殖不需要支持物的細胞，粘附細胞是生長和增殖需要支持物的細胞，構成生物體的大部分細胞是后者即粘附細胞。作為粘附細胞的培養(yǎng)方法，已知有單層培養(yǎng)、分散培養(yǎng)、包埋培養(yǎng)(embeddedculture)、微載體培養(yǎng)、球體培養(yǎng)(sphereculture)等。單層培養(yǎng)是將培養(yǎng)容器(由玻璃或各種經(jīng)過表面處理的高分子材料制成)或者被稱為飼養(yǎng)細胞(feedercell)的輔助細胞作為支持物、以對目標細胞進行單層狀培養(yǎng)的方法，是最廣為常見的。已經(jīng)開發(fā)了利用各種形狀或性狀的培養(yǎng)容器的培養(yǎng)方法，所述培養(yǎng)容器例如，對聚苯乙烯實施了各種表面處理(等離子體處理、電暈處理等)的培養(yǎng)容器，涂布有膠原蛋白、纖連蛋白、多聚賴氨酸等細胞粘附因子的培養(yǎng)容器，或者預先接種了飼養(yǎng)細胞的培養(yǎng)容器等。然而，單層培養(yǎng)存在如下問題：由于其二維培養(yǎng)環(huán)境與生物體內(nèi)環(huán)境完全不同，所以無法長期維持細胞在生物體內(nèi)具有的特異性功能，無法重構與生物體內(nèi)同樣的組織；由于相對一定面積而言的細胞數(shù)存在限度，所以不適合于細胞的大量培養(yǎng)；等等(專利文獻1)。此外，在飼養(yǎng)細胞上培養(yǎng)目標細胞的方法會有飼養(yǎng)細胞與目標細胞的分離成為問題的情況(非專利文獻1)。分散培養(yǎng)是下述這樣的培養(yǎng)方法：在培養(yǎng)基中接種細胞后，在實施了阻礙細胞附著的表面處理的培養(yǎng)容器中連續(xù)攪拌其培養(yǎng)液，由此阻礙細胞向培養(yǎng)容器的粘附，以懸浮狀態(tài)培養(yǎng)粘附細胞。然而，對被以該方法培養(yǎng)的粘附細胞而言，向支持物的粘附是無法實現(xiàn)的，因此，該方法不能應用于為進行細胞增殖而必須粘附于支持物的細胞。另外，還有可能由于時常因剪切力而破碎導致無法發(fā)揮出本來的細胞功能，所以無法對具有功能的細胞進行大量培養(yǎng)的情況(非專利文獻2)。包埋培養(yǎng)是在瓊脂、甲基纖維素、膠原凝膠、明膠、纖維蛋白、瓊脂糖、藻酸鹽等固體或半固體的凝膠基材中包埋細胞、將其固定來進行培養(yǎng)的方法。該方法能夠以近似生物體內(nèi)的狀態(tài)三維培養(yǎng)細胞，并且有時凝膠基材自身也能促進細胞的增殖和分化，所以，與單層培養(yǎng)、分散培養(yǎng)相比，該方法能夠以維持細胞功能的狀態(tài)高密度地培養(yǎng)細胞(專利文獻2、3)。此外，還開發(fā)了下述培養(yǎng)細胞的方法：以將細胞包埋于這些凝膠基材中的狀態(tài)制成大小為100～300μm的微囊，在使該微囊分散的狀態(tài)下在水溶液培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞(非專利文獻3)。然而，這些方法具有如下問題：凝膠基材不透過可見光時無法進行對培養(yǎng)細胞的連續(xù)觀察；由于含有凝膠基材的培養(yǎng)基、微囊具有高粘度，所以為了從該培養(yǎng)基中回收細胞需要酶處理(例如，在膠原凝膠的情況下，膠原酶處理)等復雜且對細胞造成損害的操作；長期培養(yǎng)時所必需的培養(yǎng)基更換工作難于進行，等等。近年，已經(jīng)開發(fā)了通過熱、剪切力等處理而使得能夠從凝膠基材中回收細胞的技術，然而，熱、剪切力等有可能對細胞功能產(chǎn)生不良影響，而且，該凝膠基材對生物體的安全性尚未明確(專利文獻4、5，非專利文獻4、5、6、7)。此外，在食品領域已經(jīng)開發(fā)了溶膠狀食品(以使切成小塊的水果、蔬菜等粒狀食品均勻分散、懸浮，并防止其沉淀、漂浮)，但是，對這類溶膠狀食品而言未考慮過將分散的粒狀食品回收的問題，沒有研究過細胞、組織能否以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)的問題(專利文獻6)。微載體培養(yǎng)是下述這樣的方法：在比水稍重的微粒(下文也稱為微載體)的表面上使細胞進行單層增殖，在燒瓶等培養(yǎng)容器內(nèi)攪拌該微粒，進行懸浮狀態(tài)下的培養(yǎng)。通常，該方法中使用的微載體是直徑100～300μm、表面積3000～6000cm2/g、比重1.03～1.05的球狀粒子，由葡聚糖、明膠、藻酸或聚苯乙烯等材料構成。在微載體的表面也可以賦予膠原蛋白、明膠或二甲基氨基乙基等帶電基團以使細胞易于附著。由于該方法可以極大地增加培養(yǎng)面積，所以能應用于細胞的大量培養(yǎng)(專利文獻7、8)。然而，產(chǎn)生如下問題：難以使目標細胞以近乎均勻的方式附著至所有微載體上，另外，在攪拌中剪切力的作用下細胞從微載體上脫離，細胞受到損害，等等(非專利文獻8)。球體培養(yǎng)是下述這樣的培養(yǎng)方法：使目標細胞形成由數(shù)十～數(shù)百個細胞構成的聚集體(下文中也稱為球體(sphere))，之后在培養(yǎng)基中對該聚集體以靜置或振蕩進行培養(yǎng)的方法。球體中，細胞密度高、與生物體內(nèi)環(huán)境近似的細胞-細胞相互作用和細胞結構體得以被重構，與單層培養(yǎng)、分散培養(yǎng)方法相比更能以長期維持細胞功能的狀態(tài)進行培養(yǎng)，這是已知的(非專利文獻9、10)。然而，對于球體培養(yǎng)而言，在球體的尺寸過大時，球體內(nèi)部的營養(yǎng)成分的供給和殘屑廢物的排出變得困難，因此，無法形成大的球體。另外，由于形成的球體需要在培養(yǎng)容器的底面以分散狀態(tài)進行培養(yǎng)，所以難以增加相對一定體積而言的球體數(shù)，不適于大量培養(yǎng)。此外，作為球體的制作方法，已知有懸滴培養(yǎng)、在細胞非粘附表面上培養(yǎng)、微孔內(nèi)培養(yǎng)、旋轉培養(yǎng)、利用細胞支持物的培養(yǎng)、通過離心力、超聲波、電場·磁場進行的凝聚等，但是這些方法的問題在于：操作復雜，球體的回收困難，尺寸控制和大規(guī)模生產(chǎn)困難，對細胞的影響未知，需要特殊的專用容器、設備，等等(專利文獻9)。另一方面，對于植物而言，也可以以無菌狀態(tài)對細胞、除去了細胞壁的原生質(zhì)體或植物的葉、莖、根、生長點、種子、胚、花粉等器官、組織、愈傷組織(callus)進行培養(yǎng)、增殖。使用這樣的植物的組織、細胞的培養(yǎng)技術，植物的品種改良、有用物質(zhì)的生產(chǎn)也成為可能。作為用于在短時間內(nèi)大量增殖植物細胞、組織的方法，已知有將植物細胞、組織在液體培養(yǎng)基中進行懸濁培養(yǎng)的方法(非專利文獻11)。為了實現(xiàn)其良好的增殖，供應足夠的氧、維持均勻的混合狀態(tài)、以及防止細胞破損等是重要的。關于向培養(yǎng)液中供氧以及對細胞、組織的懸濁，存在將通氣和機械攪拌組合進行的方式，以及僅通過通氣來進行的方式，但是，對于前者而言，存在因攪拌導致的細胞、組織破損而引起增殖不良的情況，另一方面，對于后者而言，雖然對細胞、組織的剪切較少，但存在如下問題：在高密度培養(yǎng)中有時難以維持均勻的混合狀態(tài)，因此細胞、組織沉積，增殖效率降低，等等?，F(xiàn)有技術文獻專利文獻專利文獻1：日本特開2001－128660號公報專利文獻2：日本特開昭62－171680號公報專利文獻3：日本特開昭63－209581號公報專利文獻4：日本特開2009－29967號公報專利文獻5：日本特開2005－60570號公報專利文獻6：日本特開平8－23893號公報專利文獻7：日本特開2004－236553號公報專利文獻8：國際公開第2010/059775號專利文獻9：日本特開2012－65555號公報非專利文獻非專利文獻1：Klimanskaya等,Lancet2005,365:1636-1641非專利文獻2：King等,CurrOpinChemBiol.2007,11:394-398非專利文獻3：Murua等,J.ofControlledRelease2008,132:76-83非專利文獻4：Mendes,ChemicalSocietyReviews2008,37:2512-2529非專利文獻5：Moon等,ChemicalSocietyReviews2012,41:4860-4883非專利文獻6：Pek等,NatureNanotechnol.2008,3:671-675非專利文獻7：Liu等,SoftMatter2011,7:5430-5436非專利文獻8：Leung等,TissueEngineering2011,17:165-172非專利文獻9：Stahl等,Biochem.Biophys.Res.Comm.2004,322:684-692非專利文獻10：Lin等,BiotechnolJ.2008,3:1172-1184非專利文獻11：Weathers等,ApplMicrobiolBiotechnol2010,85:1339-1351技術實現(xiàn)要素：發(fā)明所要解決的技術課題為了解決上述問題，本申請的發(fā)明人經(jīng)潛心研究，結果發(fā)現(xiàn)，通過在液體培養(yǎng)基中混合含有脫?；Y冷膠等具有陰離子性官能團的高分子化合物的結構體，能夠在不實質(zhì)性地提高該液體培養(yǎng)基的粘度的情況下、將動植物細胞及/或組織以靜置狀態(tài)進行懸浮培養(yǎng)，并且發(fā)現(xiàn)通過使用該培養(yǎng)基組合物進行培養(yǎng)，細胞的增殖活性提高。在開發(fā)該培養(yǎng)基組合物的過程中，發(fā)現(xiàn)如下新的問題：脫?；Y冷膠等具有陰離子性官能團的高分子化合物向水中的溶解性低，為了獲得所期望的培養(yǎng)基組合物，必須以高溫條件等將具有陰離子性官能團的高分子化合物溶解至水性溶劑中。因此，本發(fā)明的目的在于提供能夠提高上述具有陰離子性官能團的高分子化合物向水中的溶解性、使上述化合物與培養(yǎng)基的混合及溶解更簡便的培養(yǎng)基組合物制造方法等。用于解決課題的技術手段本申請的發(fā)明人為了解決上述課題進行了潛心研究，結果發(fā)現(xiàn)，在具有陰離子性官能團的高分子化合物中微量混入的2價金屬陽離子是導致向水中的溶解性降低的原因。而且發(fā)現(xiàn)，通過采用螯合劑、離子交換樹脂進行處理、預先除去所混入的2價金屬陽離子，可使得該高分子化合物干燥而成的粉末也能溶解在室溫的水、冷水中；通過將如上所述得到的水溶液與液體培養(yǎng)基混合，能夠在不實質(zhì)性地提高該液體培養(yǎng)基的粘度的情況下、使細胞及/或組織以懸浮狀態(tài)均勻地分散，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明如下所述：(1)能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物的制造方法，所述方法包括如下步驟：將實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物與培養(yǎng)基混合。(2)能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物的制造方法，所述方法包括如下步驟：對具有陰離子性官能團的高分子化合物進行2價金屬陽離子除去處理，得到2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物；將該高分子化合物與培養(yǎng)基混合。(3)如(2)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，2價金屬陽離子除去處理利用螯合劑或陽離子交換體進行。(4)如(2)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，2價金屬陽離子除去處理通過將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水中混懸物與陽離子交換體混合而進行。(5)如(4)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，于10～70℃將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水中混懸物與陽離子交換體混合。(6)如(1)～(5)中任一項所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，所述2價金屬陽離子為選自鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子及銅離子中的至少1種。(7)如(1)～(6)中任一項所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，高分子化合物是脫?；Y冷膠或其鹽。(8)如(1)～(7)中任一項所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其特征在于，將所述高分子化合物的水溶液與培養(yǎng)基的水溶液混合。(9)如(8)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其特征在于，在混合前對該各水溶液進行過濾滅菌。(10)如(8)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其特征在于，對所述高分子化合物的水溶液進行高壓釜滅菌。(11)如(8)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其特征在于，將所述高分子化合物的水溶液與培養(yǎng)基的水溶液在攪拌下混合。(12)如(8)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其特征在于，在均相混合機(Homo-mixer)中在攪拌下混合。(13)如(3)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。(14)如(3)所述的培養(yǎng)基組合物的制造方法，其中，陽離子交換體為鈉型。(15)培養(yǎng)基添加劑，所述培養(yǎng)基添加劑用于配制能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基添加劑含有實質(zhì)上不含2價金屬陽離子、且為已滅菌狀態(tài)的具有陰離子性官能團的高分子化合物。(16)如(15)所述的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于，為水溶液。(17)如(15)所述的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于，所述具有陰離子性官能團的高分子化合物為脫酰基結冷膠或其鹽。(18)下述培養(yǎng)基添加劑的制造方法，所述培養(yǎng)基添加劑用于配制能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物，所述制造方法包括如下步驟：對具有陰離子性官能團的高分子化合物進行2價金屬陽離子除去處理，得到2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物；通過噴霧干燥或冷凍干燥使該高分子化合物干燥。(19)如(18)所述的培養(yǎng)基添加劑的制造方法，其特征在于，所述具有陰離子性官能團的高分子化合物為脫?；Y冷膠或其鹽。(20)具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，所述方法的特征在于，將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水中混懸物、與用于將2價金屬陽離子交換為1價金屬陽離子的陽離子交換體混合，得到2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物。(21)如(20)所述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，其中，所述陽離子交換體為鈉型。(22)如(20)或(21)所述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，其中，于10～70℃將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水中混懸物與上述陽離子交換體混合。(23)如(20)～(22)中任一項所述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，其中，所述2價金屬陽離子為選自鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子及銅離子中的至少1種。(24)如(20)～(23)中任一項所述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，其中，高分子化合物為脫?；Y冷膠或其鹽。(25)如(20)～(24)中任一項所述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法，其中，水中混懸物中的具有陰離子性官能團的高分子化合物的含量為0.5～2.0％(w/v)。發(fā)明效果本發(fā)明提供培養(yǎng)基組合物的制造方法等，所述方法中，將使具有陰離子性官能團的高分子化合物(已通過除去2價金屬陽離子提高了其向水中的溶解性)干燥而得到的粉末與培養(yǎng)基混合。通過使用本發(fā)明的制造方法，從而能夠不需要高壓釜處理等加熱處理而簡便地配制培養(yǎng)基組合物，該培養(yǎng)基組合物能夠在不實質(zhì)性地提高液體培養(yǎng)基的粘度的情況下使細胞及/或組織以懸浮狀態(tài)均勻地分散。附圖說明[圖1]該圖顯示在培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)HepG2細胞的球體時球體被均勻地分散、且能夠以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)。[圖2]該圖顯示在培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)HeLa細胞的球體時球體被均勻地分散、且能夠以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)。[圖3]該圖顯示在培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)HeLa細胞的球體、對該球體進行顯微鏡觀察時，與現(xiàn)有培養(yǎng)基相比球體之間的締合被抑制。[圖4]該圖顯示在培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)附著了HepG2細胞的微載體時，HepG2細胞能夠在微載體上增殖。[圖5]該圖顯示在培養(yǎng)基組合物中添加HeLa細胞的球體時球體被均勻地分散、且處于懸浮狀態(tài)。[圖6]該圖示出了利用培養(yǎng)基組合物形成HeLa細胞的球體。[圖7]該圖示出了作為結構體一種實施方式的膜。培養(yǎng)基組合物中脫?；Y冷膠的濃度為0.02％(重量/容量)。[圖8]該圖示出了利用培養(yǎng)基組合物形成HepG2細胞的球體。[圖9]該圖示出了將附著了HepG2細胞的層粘連蛋白涂布GEM在培養(yǎng)基組合物中進行培養(yǎng)時的懸浮狀態(tài)。[圖10]該圖示出了將包埋有HepG2細胞的藻酸珠在培養(yǎng)基組合物中進行培養(yǎng)時的懸浮狀態(tài)。[圖11]該圖示出了將包埋有HepG2細胞的膠原蛋白凝膠膠囊在培養(yǎng)基組合物中進行培養(yǎng)時的懸浮狀態(tài)。[圖12]該圖示出了在培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自水稻的愈傷組織時的懸浮狀態(tài)。具體實施方式以下，更詳細地說明本發(fā)明。本說明書中所使用的用語如下定義。本發(fā)明中，細胞表示構成動物或植物的最基本的單元，作為其要素，在細胞膜的內(nèi)部具有細胞質(zhì)和各種細胞器。此時，包封DNA的核可以包含在細胞內(nèi)部、也可以不包含在細胞內(nèi)部。例如，本發(fā)明中的來自動物的細胞包括：精子、卵子等生殖細胞；構成生物體的體細胞；干細胞；祖細胞(progenitorcell)；從生物體分離的癌細胞；從生物體分離的、獲得了永生能力并在體外被穩(wěn)定地維持的細胞(細胞株)；從生物體分離的、且人工地進行了基因改變的細胞；從生物體分離的、且人工地進行了細胞核交換的細胞；等。作為構成生物體的體細胞的例子，包括：成纖維細胞、骨髓細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞、紅細胞、血小板、巨噬細胞、單核細胞、骨細胞、骨髓細胞、周細胞、樹突狀細胞、角化細胞、脂肪細胞、間質(zhì)細胞、上皮細胞、表皮細胞、內(nèi)皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、肝細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、神經(jīng)系統(tǒng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、心細胞、食管細胞、肌細胞(例如，平滑肌細胞或骨骼肌細胞)、胰腺β細胞、黑色素細胞、造血祖細胞及單核細胞等，但并不限定于此。該體細胞包括：例如從皮膚、腎、脾、腎上腺、肝、肺、卵巢、胰腺、子宮、胃、結腸、小腸、大腸、脾臟、膀胱、前列腺、睪丸、胸腺、肌肉、結締組織、骨骼、關節(jié)、血管組織、血液、心臟、眼、腦或神經(jīng)組織等任意組織采集的細胞。干細胞是同時具有自我復制能力和分化為其他多系統(tǒng)細胞的能力的細胞，作為其例子，包括：胚胎干細胞(ES細胞)、胚胎瘤細胞、胚胎生殖干細胞、人工多能干細胞(iPS細胞)、神經(jīng)干細胞、造血干細胞、間充質(zhì)干細胞、肝干細胞、胰腺干細胞、肌干細胞、生殖干細胞、腸干細胞、癌癥干細胞、毛囊干細胞等，但并不限定于此。所謂祖細胞，是指處于從上述干細胞分化為特定的體細胞、生殖細胞的中途階段的細胞。所謂癌細胞，是指由體細胞衍生并獲得了無限增殖能力的細胞。所謂細胞株，是指通過在生物體外的人工操作獲得了無限增殖能力的細胞，作為其例，包括：CHO(中國倉鼠的卵巣細胞株)、HCT116、Huh7、HEK293(人胎兒腎細胞)、HeLa(人子宮癌細胞株)、HepG2(人肝癌細胞株)、UT7/TPO(人白血病細胞株)、MDCK、MDBK、BHK、C－33A、HT－29、AE－1、3D9、Ns0/1、Jurkat、NIH3T3、PC12、S2、Sf9、Sf21、HighFive(注冊商標)、Vero等，但不限于此。本發(fā)明中的來自植物的細胞，包括從植物體的各組織分離的細胞，也包括從該細胞中人工地除去細胞壁而得的原生質(zhì)體。本發(fā)明中的組織，是指幾種具有不同特性、功能的細胞以一定方式集合而成的結構單元，作為動物組織的例子，包括上皮組織、結締組織、肌肉組織、神經(jīng)組織等。作為植物組織的例子，包括分裂組織、表皮組織、同化組織、葉肉組織、輸導組織、機械組織、薄壁組織、去分化的細胞塊(愈傷組織)等。培養(yǎng)細胞及/或組織時，培養(yǎng)的細胞及/或組織可以從上文所述的細胞及/或組織中任意選擇進行培養(yǎng)。細胞及/或組織可以直接從動物或植物體采取。細胞及/或組織也可以通過施加特定處理由動物或植物體衍生、生長或轉化后采取。此時，該處理可以是生物體內(nèi)的處理也可以是生物體外的處理。作為動物，例如可以舉出魚類、兩棲動物類、爬行動物類、鳥類、泛甲殼動物類、六足類(Hexapoda)、哺乳動物等。作為哺乳動物的例子，可以舉出大鼠、小鼠、兔、豚鼠、松鼠、倉鼠、田鼠、鴨嘴獸、海豚、鯨、犬、貓、山羊、牛、馬、綿羊、豬、大象、普通狨、松鼠猴、獼猴、黑猩猩和人，但不限于此。作為植物，只要所采集的細胞及/或組織可以液體培養(yǎng)即可，沒有特殊限制。例如，可以舉出：生產(chǎn)藥材類(例如，皂苷、生物堿、小檗堿、東莨菪苷、植物甾醇等)的植物(例如，人參、長春花、莨菪、黃連、顛茄等)；生產(chǎn)用作化妝品·食品原料的色素、多糖體(例如，花色素苷、紅花色素、茜草色素、藏紅花色素、黃酮等)的植物(例如，藍莓、紅花、茜草、藏紅花等)；或產(chǎn)生藥物原體的植物；等等，但并不限定于此。本發(fā)明中，所謂細胞及/或組織的懸浮，是指細胞及/或組織不粘附于培養(yǎng)容器的狀態(tài)(非粘附)。此外，在本發(fā)明中，使細胞及/或組織增殖、分化或維持時，在不伴有相對于液體培養(yǎng)基組合物而言的來自外部的壓力、振動或者不伴有在該組合物中的振蕩、旋轉操作等的情況下，細胞及/或組織在該液體培養(yǎng)基組合物中均勻地分散并處于懸浮狀態(tài)，將上述狀態(tài)稱為“懸浮靜置”，將在該狀態(tài)下培養(yǎng)細胞和/或組織稱為“懸浮靜置培養(yǎng)”。另外，作為在“懸浮靜置”中能夠使其懸浮的時間，包括：至少5～60分鐘、1小時～24小時、1天～21天，但只要能夠保持懸浮狀態(tài)，則不限于上述時間。通過本發(fā)明的制造方法制造的培養(yǎng)基組合物，是含有能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)(優(yōu)選能懸浮靜置培養(yǎng))的結構體和培養(yǎng)基的組合物。該培養(yǎng)基組合物優(yōu)選為在培養(yǎng)時的培養(yǎng)基組合物的交換處理及培養(yǎng)結束后可以回收細胞或組織的組合物，更優(yōu)選在回收細胞或組織時不需要任何的溫度變化、化學處理、酶處理、剪切力的組合物。所謂“能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的結構體”，是從特定化合物形成的、具有使細胞及/或組織均勻地懸浮的效果的結構體。更詳細而言，包括高分子化合物通過離子集聚而形成的結構體、或高分子化合物形成三維網(wǎng)而成的結構體等。另外，已知多糖類介由金屬陽離子形成微凝膠(例如，日本特開2004－129596號公報)，本發(fā)明的結構體中，作為一方案也包括該微凝膠。另外，作為高分子化合物通過離子集聚而形成的結構體，作為其一方案可以舉出膜狀的結構體。對于該結構體的大小，在用過濾器過濾時優(yōu)選為通過孔徑0.2μm至200μm的過濾器的大小。作為該孔徑的下限，較優(yōu)選超過1μm，考慮到使細胞或組織穩(wěn)定地懸浮，進一步優(yōu)選超過5μm。作為該孔徑的上限，較優(yōu)選為100μm以下，考慮到細胞或組織的大小時，更優(yōu)選為70μm以下。所謂“特定化合物”，是指具有下述效果的化合物，即，與液體培養(yǎng)基混合時，形成無定形的結構體，該結構體在該液體中均勻地分散，在不實質(zhì)性地提高該液體的粘度的情況下實質(zhì)性地保持細胞及/或組織，防止其沉淀。所謂“不實質(zhì)性地提高液體的粘度”，是指液體的粘度不超過8mPa·s。此時的該液體的粘度(即，通過本發(fā)明的制造方法制造的培養(yǎng)基組合物的粘度)為8mPa·s以下，優(yōu)選為4mPa·s以下，較優(yōu)選為2mPa·s以下。進而，只要具有在液體培養(yǎng)基中形成該結構體、在不實質(zhì)性地提高該液體粘度的情況下使細胞及/或組織均勻地懸浮(優(yōu)選懸浮靜置)的效果即可，對特定化合物的化學結構、分子量、物性等沒有任何限制。含有結構體的液體的粘度例如可以采用下述實施例所述的方法測定。具體而言，可以在37℃條件下使用E型粘度計(東機產(chǎn)業(yè)株式會社制，TV－22型粘度計，機種：TVE－22L，ConeRotor：標準轉子1°34’×R24，轉速100rpm)測定。作為“特定化合物”的例子，沒有特殊的限制，可以舉出高分子化合物，優(yōu)選可以舉出具有陰離子性官能團的高分子化合物。作為陰離子性官能團，可以舉出羧酸、磺酸、磷酸及它們的鹽，優(yōu)選羧酸或其鹽。本發(fā)明中使用的高分子化合物，可以使用由上述陰離子性官能團中的1種或者2種以上構成的高分子化合物。作為本發(fā)明中使用的高分子化合物的優(yōu)選具體例，沒有特別的限制，可以舉出10個以上單糖類(例如，三碳糖、四碳糖、五碳糖、六碳糖、七碳糖等)聚合而成的多糖類，較優(yōu)選可以舉出具有陰離子性官能團的酸性多糖類。此處所謂的酸性多糖類只要在其結構中具有陰離子性官能團即可，沒有特殊的限制，例如，為具有糖醛酸(例如，葡糖醛酸、艾杜糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸)的多糖類、一部分結構中具有硫酸或磷酸的多糖類、或者具有其雙方結構的多糖類，不僅包括來自天然的多糖類，還包括由微生物產(chǎn)生的多糖類、基因工程產(chǎn)生的多糖類、或者使用酶通過人工合成的多糖類。更具體而言，可以例舉由選自透明質(zhì)酸、結冷膠、脫?；Y冷膠(DAG)、鼠李聚糖膠(rhamsangum)、迪特膠(Diutangum)、黃原膠(xanthangum)、卡拉膠、漢生膠(zanthangum)、已糖醛酸(hexuronicacid)、巖藻多糖(fucoidan)、果膠、果膠酸(pectinacid)、果膠酯酸(pectinicacid)、硫酸乙酰肝素(heparansulfate)、肝素、硫酸類肝素(heparitinsulfate)、硫酸角質(zhì)(keratosulfate)、硫酸軟骨素(chondroitinsulfate)、硫酸皮膚素(dermatansulfate)、硫酸鼠李聚糖(rhamnansulfate)及它們的鹽中的1種或者2種以上構成的物質(zhì)。作為此處所謂的鹽，可以舉出：鋰、鈉、鉀這樣的堿金屬的鹽；鈣、鋇、鎂這樣的堿土類金屬的鹽；鋁、鋅、銅、鐵等的鹽；銨鹽；四乙基銨、四丁基銨、甲基三丁基銨、十六烷基三甲基銨、芐基甲基己基癸基銨、膽堿等季銨鹽；吡啶、三乙基胺、二異丙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三羥甲基氨基甲烷、葡甲胺、普魯卡因、氯普魯卡因等有機胺的鹽；甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸等氨基酸的鹽；等。這些高分子化合物或多糖類的重均分子量，優(yōu)選為10,000至50,000,000，較優(yōu)選為100,000至20,000,000，更優(yōu)選為1,000,000至10,000,000。例如，該分子量可以采用利用凝膠滲透色譜法(GPC)進行的茁霉多糖(pullulan)換算來測定。本發(fā)明中，可以組合多種(優(yōu)選2種)上述多糖類進行使用。關于多糖類的組合的種類，只要能夠在液體培養(yǎng)基中形成上述結構體、且在不實質(zhì)性地提高該液體培養(yǎng)基的粘度的情況下使細胞及/或組織均勻地懸浮(優(yōu)選懸浮靜置)即可，沒有特殊的限定，優(yōu)選該組合至少含有DAG或者其鹽。即，優(yōu)選的多糖類的組合中，包括DAG或者其鹽、以及DAG或者其鹽以外的多糖類(例如，黃原膠、藻酸、卡拉膠、迪特膠、甲基纖維素、刺槐豆膠(LocustBeanGum)或者它們的鹽)。作為具體的多糖類的組合，可以舉出DAG與鼠李聚糖膠、DAG與迪特膠、DAG與黃原膠、DAG與卡拉膠、DAG與漢生膠、DAG與刺槐豆膠、DAG與κ－卡拉膠、DAG與藻酸鈉、DAG與甲基纖維素等，不限于此。作為“特定化合物”的更優(yōu)選具體例，可以舉出透明質(zhì)酸、脫?；Y冷膠、迪特膠、卡拉膠及黃原膠及它們的鹽，從能夠降低培養(yǎng)基組合物的粘度的方面以及易于回收細胞或組織的方面考慮，作為最優(yōu)選例可以舉出脫?；Y冷膠或其鹽。本發(fā)明中的所謂脫酰基結冷膠，是以4分子的糖(即，1－3鍵合的葡萄糖、1－4鍵合的葡糖醛酸、1－4鍵合的葡萄糖及1－4鍵合的鼠李糖)為結構單元的直鏈狀的高分子多糖類，是下述通式(I)(式中，R1、R2均為氫原子，n為2以上的整數(shù))所示的多糖類。其中，R1可以包括甘油基，R2可以包括乙酰基，乙酰基及甘油基的含量優(yōu)選為10％以下，較優(yōu)選為1％以下。上述結構體根據(jù)特定化合物形成各種形態(tài)，針對為脫酰基結冷膠的情況進行描述時，脫酰基結冷膠在與液體培養(yǎng)基混合時，獲取液體培養(yǎng)基中的金屬陽離子(例如，鈣離子)，形成介由該金屬陽離子而構成的無定形的結構體，使細胞及/或組織懸浮。對于由脫?；Y冷膠配制的本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物而言，其粘度為8mPa·s以下，優(yōu)選為4mPa·s以下，考慮到細胞或組織易于回收的方面，更優(yōu)選為2mPa·s以下。“特定化合物”也可以采用化學合成法得到，該化合物為天然物時，優(yōu)選通過采用常用技術從含有該化合物的各種植物、各種動物、各種微生物中提取及分離純化而得到。在該提取中使用水、超臨界氣體時能夠高效地提取該化合物。例如，作為結冷膠的制造方法，可以在發(fā)酵培養(yǎng)基中對生產(chǎn)微生物進行培養(yǎng)，將在菌體外產(chǎn)生的粘膜物通過常用純化方法回收，經(jīng)干燥、粉碎等步驟后制成粉末狀。另外，為脫?；Y冷膠的情況下，可以在回收粘膜物時實施堿處理，將與1－3鍵合的葡萄糖殘基鍵合的甘油基和乙酰基脫?；蠡厥?。作為純化方法，可以單獨地或以任意順序組合使用下述方法、或反復使用下述方法，由此除去雜質(zhì)進行純化，所述方法例如為：液－液萃取、分級沉淀、結晶化、各種離子交換色譜法、使用SephadexLH－20等的凝膠滲透色譜法、基于利用活性炭、硅膠等進行的吸附層析法或薄層層析法的活性物質(zhì)的吸脫處理、或使用反相柱的高效液相色譜法等。作為結冷膠的生產(chǎn)微生物的例子，可以舉出多沼鞘氨醇單胞菌(Sphingomonaselodea)及改變該微生物基因而得到的微生物，但并不限定于此。而且，為脫?；Y冷膠的情況下，可以使用市售物，例如三晶株式會社制“KELCOGEL(CPKelco公司的注冊商標)CG－LA”、三榮源F·F·I株式會社制“KELCOGEL(CPKelco公司的注冊商標)”等。培養(yǎng)基中的特定化合物的濃度可以為0.0005％至1.0％(重量/容量)，優(yōu)選為0.001％至0.4％(重量/容量)，更優(yōu)選為0.005％至0.1％(重量/容量)，進一步優(yōu)選為0.005％至0.05％(重量/容量)。例如，為脫酰基結冷膠時，可以以0.001％至1.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.003％至0.5％(重量/容量)、更優(yōu)選0.005％至0.1％(重量/容量)、進一步優(yōu)選0.01％至0.05％(重量/容量)、最優(yōu)選0.01％至0.02％(重量/容量)的濃度添加在培養(yǎng)基中。為黃原膠時，可以以0.001％至5.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.01％至1.0％(重量/容量)、更優(yōu)選0.05％至0.5％(重量/容量)、最優(yōu)選0.1％至0.2％(重量/容量)的濃度添加在培養(yǎng)基中。為κ－卡拉膠及刺槐豆膠混合體系的情況下，可以以0.001％至5.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.005％至1.0％(重量/容量)、更優(yōu)選0.01％至0.1％(重量/容量)、最優(yōu)選0.03％至0.05％(重量/容量)的濃度添加在培養(yǎng)基中。將上述多糖類組合多種(優(yōu)選2種)進行使用時，對于該多糖類的濃度，可以在該多糖類的組合能夠在液體培養(yǎng)基中形成上述結構體、且在不實質(zhì)性地提高該液體培養(yǎng)基的粘度的情況下使細胞及/或組織均勻地懸浮(優(yōu)選懸浮靜置)的范圍內(nèi)，適當?shù)卦O定。例如，使用DAG或其鹽、與除DAG或其鹽以外的多糖類的組合時，作為DAG或其鹽的濃度，可以例舉0.005～0.02％(重量/容量)、優(yōu)選0.01～0.02％(重量/容量)，作為除DAG或其鹽以外的多糖類的濃度，可以例舉0.005～0.4％(重量/容量)、優(yōu)選0.1～0.4％(重量/容量)。作為具體的濃度范圍的組合，可以例舉如下。DAG或其鹽：0.005～0.02％(優(yōu)選0.01～0.02％)(重量/容量)DAG以外的多糖類黃原膠：0.1～0.4％(重量/容量)藻酸鈉：0.1～0.4％(重量/容量)(優(yōu)選0.0001～0.4％(重量/容量))天然結冷膠：0.0001～0.4％(重量/容量)刺槐豆膠：0.1～0.4％(重量/容量)甲基纖維素：0.1～0.4％(重量/容量)(優(yōu)選0.2～0.4％(重量/容量))卡拉膠：0.05～0.1％(重量/容量)迪特膠：0.05～0.1％(重量/容量)需要說明的是，該濃度可以由下式計算。濃度(％)＝特定化合物的重量(g)/培養(yǎng)基組合物的容量(ml)×100上述化合物也可以通過化學合成法進一步地改變成其他衍生物，由此所得的該衍生物也可以在本發(fā)明中有效地使用。具體而言，為脫?；Y冷膠的情況下，將此通式(I)表示的化合物的與R1及/或R2相應的羥基、置換成C1－3烷氧基、C1－3烷基磺?；?、葡萄糖或果糖等單糖殘基、蔗糖、乳糖等寡糖殘基、甘氨酸、精氨酸等氨基酸殘基等而得到的衍生物，也能夠在本發(fā)明中使用。另外，也可以使用1－乙基－3－(3－二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)等交聯(lián)劑將該化合物交聯(lián)。本發(fā)明中使用的特定化合物或其鹽，基于制造條件能夠以任意的結晶形的形式存在，也能夠以任意的水合物的形式存在，這些晶形、水合物及它們的混合物也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，有時也以包含丙酮、乙醇、四氫呋喃等有機溶劑的溶劑合物的形式存在，這些形態(tài)均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明中使用的特定化合物，也可以以通過環(huán)內(nèi)或環(huán)外異構化而生成的互変異構體、幾何異構體、互変異構體或幾何異構體的混合物、或者它們的混合物的形式存在。本發(fā)明的化合物無論是否通過異構化生成，在具有手性中心的情況下，均可以以分割的光學異構體或以任意比例含有其的混合物的形式存在。本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物中含有金屬陽離子、例如2價金屬陽離子(鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子及銅離子等)，優(yōu)選含有鈣離子。在一方案中，通過含有金屬陽離子，從而具有陰離子性官能團的高分子化合物介由金屬陽離子而聚集；具有陰離子性官能團的高分子化合物形成三維網(wǎng)；或具有陰離子性官能團的高分子化合物介由金屬陽離子形成微凝膠，由此能夠形成使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的結構體。在通過本發(fā)明的制造方法制造的培養(yǎng)基組合物中，可以含有下述的細胞外基質(zhì)、粘附分子等。本發(fā)明也包括：使用該培養(yǎng)基組合物使細胞或者組織增殖的培養(yǎng)方法；將所得的細胞或者組織通過例如過濾、離心或者磁性分離進行回收的方法；使用該培養(yǎng)基組合物制造球體的方法。本發(fā)明中使用的從特定化合物構成的結構體具有如下效果：在生物體外培養(yǎng)細胞及/或組織時，使該細胞及/或組織懸浮在含有該特定化合物的結構體的液體中的效果(優(yōu)選使其懸浮靜置的效果)。通過該懸浮效果，能夠以與單層培養(yǎng)相比每一定體積內(nèi)的細胞及/或組織得以增加的形式進行培養(yǎng)。另外，在現(xiàn)有的懸浮培養(yǎng)方法中伴有旋轉、振蕩操作時，針對細胞及/或組織的剪切力發(fā)揮作用，因此，存在細胞及/或組織的增殖率、回收率低、或細胞功能受損的情況，但通過使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物，可在不進行振蕩等操作的情況下使細胞及/或組織均勻地分散，因此，能夠不損害細胞功能地、容易且大量地獲取作為目標的細胞及/或組織。另外，在現(xiàn)有的含有凝膠基材的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)細胞及/或組織時，存在細胞及/或組織的觀察、回收困難、回收時損害其功能的情況，但通過使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物，能夠懸浮培養(yǎng)細胞及/或組織、不損害其功能地進行觀察、回收。另外，現(xiàn)有的含有凝膠基材的培養(yǎng)基存在粘度高、培養(yǎng)基更換困難的情況，但本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物由于為低粘度，所以可使用吸液管、泵等容易地更換培養(yǎng)基。采用本發(fā)明的方法所培養(yǎng)的來自人的細胞及/或組織，能夠基于治療目的移植至患有疾病、障礙的患者。此時，關于作為治療對象的疾病、障礙的種類、前處置方法以及細胞移植方法，可以基于當事人適當?shù)剡x擇。關于被移植的細胞在受體中的成活，從疾病、障礙狀態(tài)的恢復，伴隨移植的副作用的有無以及治療的效果，可以通過移植治療中的通常方法進行適當?shù)臋z查、判斷。進而，由于細胞及/或組織被高效地增殖，所以通過本發(fā)明的制造方法制造的培養(yǎng)基組合物可以作為細胞的研究用藥物樣品使用。例如，在研究對細胞、組織的分化、增殖進行調(diào)節(jié)的因子時，對使細胞和目標因子共存進行培養(yǎng)時的細胞數(shù)量、種類、細胞表面分化標志、表達基因的變化進行解析，此時，通過使用本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物，不僅能夠將作為解析對象的細胞的數(shù)量高效地擴增，而且能夠高效地回收。對目標因子進行研究時的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)裝置、培養(yǎng)基的種類、本發(fā)明化合物的種類、特定化合物的含量、添加物的種類、添加物的含量、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度等，可以由當事人從本說明書記載的范圍中適當選擇。通過培養(yǎng)而增殖或呈現(xiàn)出的細胞，可以采用該領域中的標準的顯微鏡進行觀察。此時，針對所培養(yǎng)的細胞，也可以使用特異抗體進行染色。對于因目標因子而變化的表達基因，可以通過從所培養(yǎng)的細胞中提取RNA(核糖核酸)采用Northern印跡法、RT－PCR法等檢測。另外，細胞表面分化標志可以使用特異抗體通過ELISA、流式細胞術檢測，觀察由目標因子所產(chǎn)生的對分化、增殖的效果。采用本發(fā)明的培養(yǎng)方法培養(yǎng)細胞及/或組織時，可以采用在細胞培養(yǎng)中通常使用的培養(yǎng)皿、燒瓶、塑料袋、Teflon(注冊商標)袋、皿、陪替氏培養(yǎng)皿(PetriDish)、組織培養(yǎng)用皿、多皿、微量培養(yǎng)板、微孔板、多板、多孔板、腔室載玻片(chamberslide)、管、盤、培養(yǎng)袋、滾瓶等培養(yǎng)器材進行培養(yǎng)。這些培養(yǎng)器材的材質(zhì)沒有特殊的限制，例如可以舉出玻璃、聚氯乙烯、纖維素系聚合物、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚砜、聚氨酯、聚酯、聚酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯等塑料等。另外，也可以對這些塑料實施各種表面處理(例如，等離子體處理、電暈處理等)。進而，針對這些培養(yǎng)器材也可以預先涂布細胞外基質(zhì)、細胞粘附分子等。作為這樣的涂布材料，可以舉出膠原蛋白I至XIX、纖連蛋白、玻璃粘連蛋白、層粘連蛋白－1至12、Nitogen(日文：ニトジェン)、腱生蛋白、血小板反應蛋白(thrombospondin)、vonWillebrand因子、骨橋蛋白、纖維蛋白原、各種彈性蛋白、各種蛋白聚糖、各種鈣粘附蛋白、橋粒芯膠粘蛋白(desmocollin)、橋粒芯糖蛋白(desmoglein)、各種整聯(lián)蛋白、E－選擇蛋白、P－選擇蛋白、L－選擇蛋白、免疫球蛋白、透明質(zhì)酸、超家族(super-family)、基質(zhì)膠、聚－D－賴氨酸、聚－L－賴氨酸、甲殼質(zhì)、殼聚糖、瓊脂糖、藻酸凝膠、水凝膠、以及它們的切斷斷片等。這些涂布材料也可以使用通過基因重組技術將氨基酸序列人工改變而得到的物質(zhì)。另外，也可以使用用于阻礙細胞及/或組織粘附于培養(yǎng)器材的涂布材料。作為這樣的涂布材料，可以舉出硅、聚(甲基丙烯酸2－羥基甲酯)、聚(2－甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿)等，但并不限定于此。關于細胞及/或組織的培養(yǎng)，也可以在機械控制下且于封閉環(huán)境中自動地實施細胞接種、培養(yǎng)基的更換、細胞圖像的獲取、培養(yǎng)細胞的回收，一邊控制pH、溫度、氧濃度等，一邊通過能夠實現(xiàn)高密度培養(yǎng)的生物反應器、自動培養(yǎng)裝置進行。作為使用這些裝置在培養(yǎng)中補充新的培養(yǎng)基、將所要求的物質(zhì)適量地供給至細胞及/或組織中的方法，有分批補料式培養(yǎng)(fed-batchculture)、連續(xù)培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，但任意的方法均可用于本發(fā)明的培養(yǎng)方法。使用本發(fā)明中的特定化合物培養(yǎng)細胞及/或組織時，可以將培養(yǎng)細胞及/或組織時所用的培養(yǎng)基、和上述的2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物混合而配制培養(yǎng)基組合物。本發(fā)明提供該培養(yǎng)基組合物的制造方法。作為培養(yǎng)基，例如可以舉出Dulbecco’sModifiedEagles’sMedium(DMEM)、HamF12培養(yǎng)基(Ham’sNutrientMixtureF12)、DMEM/F12培養(yǎng)基、McCoy5A培養(yǎng)基(McCoy’s5AMedium)、EaglesMEM培養(yǎng)基(Eagles’sMinimumEssentialMedium；EMEM)、αMEM培養(yǎng)基(alphaModifiedEagles’sMinimumEssentialMedium；αMEM)、MEM培養(yǎng)基(MinimumEssentialMedium)、RPMI1640培養(yǎng)基、Iscove’sModifiedDulbecco’sMedium(IMDM)、MCDB131培養(yǎng)基、William培養(yǎng)基E、IPL41培養(yǎng)基、Fischer’s培養(yǎng)基、StemPro34(Invitrogen公司制)、X-VIVO10(Cambrex公司制)、X-VIVO15(Cambrex公司制)、HPGM(Cambrex公司制)、StemSpanH3000(STEMCELLTechnologies公司制)、StemSpanSFEM(STEMCELLTechnologies公司制)、StemlineII(SigmaAldrich公司制)、QBSF－60(Qualitybiological公司制)、StemProhESCSFM(Invitrogen公司制)、mTeSR1或2培養(yǎng)基(STEMCELLTechnologies公司制)、Sf－900II(Invitrogen公司制)、Opti－Pro(Invitrogen公司制)等。細胞及/或組織來自植物時，作為培養(yǎng)基可以舉出如下培養(yǎng)基：植物組織培養(yǎng)通常使用的Murashige&Skoog(MS)培養(yǎng)基、LinsmaierSkoog(LS)培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基、Gamborg’sB5培養(yǎng)基、Niche培養(yǎng)基、Hela培養(yǎng)基、Morel培養(yǎng)基等基本培養(yǎng)基，或在將上述培養(yǎng)基成分改良至最適濃度的改良培養(yǎng)基(例如，使氨態(tài)氮濃度為半量等)中以適當濃度添加生長素類及根據(jù)需要的細胞分裂素類等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(植物激素)而得到的培養(yǎng)基。這些培養(yǎng)基中，根據(jù)需要可以進一步補充酪蛋白降解酶、玉米漿、維生素類等。作為生長素類，例如可以舉出3－吲哚乙酸(IAA)、3－吲哚丁酸(IBA)、1－萘乙酸(NAA)、2，4－二氯苯氧乙酸(2，4－D)等，但并不限定于此。對于生長素類，例如可以以約0.1～約10ppm的濃度添加到培養(yǎng)基中。作為細胞分裂素類，例如可以舉出激動素、芐基腺嘌呤(BA)、玉米素等，但不限于此。對于細胞分裂素類，例如可以以約0.1～約10ppm的濃度添加到培養(yǎng)基中。本領域技術人員可以根據(jù)目的在上述培養(yǎng)基中自由地添加鈉、鉀、鈣、鎂、磷、氯、各種氨基酸、各種維生素、抗生素、血清、脂肪酸、糖等。培養(yǎng)來自動物的細胞及/或組織時，本領域技術人員也可以根據(jù)目的組合添加一種以上的其他化學成分或生物體成分。作為在來自動物的細胞及/或組織的培養(yǎng)基中所添加的成分，可以舉出胎牛血清、人血清、馬血清、胰島素、轉鐵蛋白、乳鐵蛋白、膽固醇、乙醇胺、亞硒酸鈉、硫代甘油、2-巰基乙醇、牛血清白蛋白、丙酮酸鈉、聚乙二醇、各種維生素、各種氨基酸、瓊脂、瓊脂糖、膠原、甲基纖維素、各種細胞因子、各種激素、各種增殖因子、各種胞外基質(zhì)、各種細胞粘附分子等。作為可以添加至培養(yǎng)基中的細胞因子，例如可以舉出白細胞介素－1(IL－1)、白細胞介素－2(IL－2)、白細胞介素－3(IL－3)、白細胞介素－4(IL－4)、白細胞介素－5(IL－5)、白細胞介素－6(IL－6)、白細胞介素－7(IL－7)、白細胞介素－8(IL－8)、白細胞介素－9(IL－9)、白細胞介素－10(IL－10)、白細胞介素－11(IL－11)、白細胞介素－12(IL－12)、白細胞介素－13(IL－13)、白細胞介素－14(IL－14)、白細胞介素－15(IL－15)、白細胞介素－18(IL－18)、白細胞介素－21(IL－21)、干擾素α(IFN－α)、干擾素β(IFN－β)、干擾素γ(IFN－γ)、粒細胞集落刺激因子(G－CSF)、單核細胞集落刺激劑(M－CSF)、粒細胞－巨噬細胞集落刺激因子(GM－CSF)、干細胞因子(SCF)、flk2/flt3配體(FL)、白血病細胞抑制因子(LIF)、制瘤素M(OM)、促紅細胞生成素(EPO)、促血小板生成素(TPO)等，但并不限定于此。作為可以添加至培養(yǎng)基中的激素，可以舉出褪黑激素、血清素、甲狀腺素、三碘甲狀腺氨酸、腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺、抗穆勒氏管激素、脂聯(lián)素、促腎上腺皮質(zhì)激素、血管緊張素原及血管緊張素、抗利尿激素、心房鈉尿肽、降鈣素、縮膽囊素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、促紅細胞生成素、卵泡刺激素、促胃液素、生長素釋放肽、胰高血糖素、促性腺激素釋放激素、生長激素釋放激素、人絨毛膜促性腺激素、人胎盤催乳素、生長激素、、抑制素、胰島素、胰島素樣生長因子、瘦素、促黃體激素、黑素細胞刺激素、催產(chǎn)素、甲狀旁腺激素、催乳素、胃泌素釋放肽、促生長素抑制素、血小板生成素、甲狀腺刺激激素、促甲狀腺激素釋放激素、皮質(zhì)醇、醛固酮、睪酮、脫氫表雄酮、雄烯二酮、雙氫睪酮、雌二醇、雌酮、雌三醇、黃體酮、骨化三醇、骨化二醇、前列腺素、白三烯、前列環(huán)素、血栓素、催乳激素釋放激素、促脂素、腦鈉肽、神經(jīng)肽Y、組胺、內(nèi)皮素、胰多肽、腎素及腦啡肽，但并不限定于此。作為在培養(yǎng)基中添加的生長因子，可以舉出轉化生長因子－α(TGF－α)、轉化生長因子－β(TGF－β)、巨噬細胞炎性蛋白－1α(MIP－1α)、上皮細胞生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子－1、2、3、4、5、6、7、8或9(FGF－1、2、3、4、5、6、7、8、9)、神經(jīng)細胞生長因子(NGF)、肝細胞生長因子(HGF)、白血病抑制因子(LIF)、蛋白酶連接蛋白I、蛋白酶連接蛋白II、血小板衍生的生長因子(PDGF)、膽堿能分化因子(CDF)、趨化因子、Notch配體(Deltal等)、Wnt蛋白、血管生成素樣蛋白2、3、5或7(Angpt2、3、5、7)、胰島素樣生長因子(IGF)、胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP)、多效蛋白(Pleiotrophin)等，但并不限定于此。另外，也可以添加通過基因重組技術人工改變這些細胞因子、生長因子的氨基酸配列而得到的物質(zhì)。作為其例，可以舉出IL－6/可溶性IL－6受體復合體或HyperIL－6(IL－6與可溶性IL－6受體的融合蛋白)等。作為各種細胞外基質(zhì)、各種細胞粘附分子的例子，可以舉出膠原蛋白I至XIX、纖連蛋白、玻連蛋白、層粘連蛋白－1至12、Nitogen、腱生蛋白、血小板反應蛋白、VonWillebrand因子、骨橋蛋白、纖維蛋白原、各種彈性蛋白、各種蛋白聚糖、各種鈣粘素、橋粒糖蛋白(desmocollin)、橋粒芯糖蛋白(desmogleins)、各種整聯(lián)蛋白、E-選擇蛋白、P-選擇蛋白、L-選擇蛋白、免疫球蛋白超家族、Matrigel、聚-D-賴氨酸、聚-L-賴氨酸、甲殼質(zhì)、殼聚糖、瓊脂糖、透明質(zhì)酸、藻酸凝膠、各種水凝膠、以及它們的切割斷片等。作為可以添加至培養(yǎng)基中的抗生素的例子，可以舉出磺胺類制劑、青霉素、苯氧乙基青霉素、甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林、雙氯西林、氟氯西林、萘夫西林、氨芐青霉素、青霉素、阿莫西林、環(huán)己西林、羧芐西林、替卡西林、哌拉西林、阿洛西林、美洛西林、美西林、阿德諾西林(Amdinocillin)、頭孢菌素及其衍生物、奧索利酸、氨氟沙星、替馬沙星、萘啶酸、吡咯米酸、環(huán)丙沙星、西諾沙星、諾氟沙星、甲氟哌酸、Rosaxacin、氧氟沙星、依諾沙星、吡哌酸、舒巴坦、克拉維酸、β-溴青霉烷酸(β-bromopenicillanicacid)、β-氯青霉烷酸(β-chloropenicillanicacid)、6-乙酰基亞甲基-青霉烷酸、頭孢噁唑、sultampicillin、adinoshirin及舒巴坦甲醛水合物酯(sulbactamformaldehydehudrateester)、他佐巴坦、氨曲南(Aztreonam)、sulfazethin、isosulfazethin、norcardicin、間羧基苯基、苯乙酰氨基膦酸甲酯(phenylacetamidophosphonicacidmethyl)、氯四環(huán)素、土霉素、四環(huán)素、地美環(huán)素、多西環(huán)素、美他環(huán)素和米諾環(huán)素。在優(yōu)選方案中，培養(yǎng)基含有金屬陽離子(例如2價金屬陽離子(鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子及銅離子等)、優(yōu)選鈣離子)。鈣離子的含量為0.1～10mM，優(yōu)選為0.5～3.0mM。通過含有金屬陽離子，從而具有陰離子性官能團的高分子化合物經(jīng)由金屬陽離子而聚集；具有陰離子性官能團的高分子化合物形成三維網(wǎng)；或具有陰離子性官能團的高分子化合物經(jīng)由金屬陽離子形成微凝膠，由此形成能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的結構體。本發(fā)明的制造方法的特征在于，作為具有陰離子性官能團的高分子化合物，使用2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)。對于市售的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫?；Y冷膠)來說，由于通常難溶于水，所以為了將其溶解于水，有時需要高壓釜等加熱處理。本發(fā)明的發(fā)明人們對其水難溶性的原因進行了探究，發(fā)現(xiàn)混入該高分子化合物中的2價金屬陽離子為其原因，通過除去2價金屬陽離子混入物，能夠使具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)的水溶性提高，添加至液體培養(yǎng)基中時，成功地形成了能夠容易地使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的結構體。作為2價金屬陽離子，可以舉出鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子、銅離子等。其中，鈣離子的混入量被減少。在一方案中，可以使用實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)。所謂“實質(zhì)上不含2價金屬陽離子”，是指處理后的該高分子化合物中的全部2價金屬陽離子為900ppm以下、優(yōu)選為600ppm以下、進一步優(yōu)選為300ppm以下、最優(yōu)選不含2價金屬陽離子。特別指出的是，Ca通常為500ppm以下、優(yōu)選為300ppm以下、進一步優(yōu)選為100ppm以下，并且Mg通常為300ppm以下、優(yōu)選為200ppm以下、進一步優(yōu)選為100ppm以下。在進一步的情況下，鈣離子混入量例如為750ppm以下、優(yōu)選為500ppm以下、較優(yōu)選為300ppm以下、更優(yōu)選為100ppm以下、最優(yōu)選為50ppm以下，鎂離子混入量例如為300ppm以下，優(yōu)選Mg為200ppm以下，較優(yōu)選Mg為100ppm以下、更優(yōu)選50ppm以下、最優(yōu)選25ppm以下。關于實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物中的2價金屬陽離子混入量，在使用DAG的情況下，經(jīng)處理的DAG中的Ca通常為500ppm以下、優(yōu)選為300ppm以下、進一步優(yōu)選為100ppm以下，且Mg通常為300ppm以下、優(yōu)選為200ppm以下、進一步優(yōu)選Mg為100ppm以下。在進一步的情況下，經(jīng)處理的DAG中的鈣離子混入量例如為750ppm以下、優(yōu)選為500ppm以下、更優(yōu)選為300ppm以下、進一步優(yōu)選為100ppm以下、最優(yōu)選為50ppm以下，鎂離子混入量例如為300ppm以下，優(yōu)選Mg為200ppm以下，較優(yōu)選Mg為100ppm以下，更優(yōu)選50ppm以下、最優(yōu)選25ppm以下。經(jīng)處理的DAG最優(yōu)選不含2價金屬陽離子。如上所述，通過減少2價金屬陽離子的混入量，例如在為脫?；Y冷膠時，于25℃在100mL的純水中1500mg以上的脫?；Y冷膠粉末可以完全溶解。通常情況下，在市售的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫?；Y冷膠)中混入有很多2價金屬陽離子，因此需要從其中除去2價金屬陽離子。因此，在一方案中，本發(fā)明的制造方法包括對具有陰離子性官能團的高分子化合物實施2價金屬陽離子除去處理的步驟。通過該2價金屬陽離子除去處理，可以得到減少了2價金屬陽離子混入量的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)。作為除去2價金屬陽離子的方法，可以舉出陽離子交換體處理、螯合劑處理、沉淀法、溶劑提取法、離子交換膜法等，但不限于此?？紤]混入到培養(yǎng)基組合物中時，優(yōu)選陽離子交換體處理。陽離子交換體是將2價金屬陽離子交換成1價金屬陽離子的陽離子交換體。作為陽離子交換體，可以舉出弱酸性陽離子交換樹脂、強酸性陽離子交換樹脂、螯合樹脂等。這些陽離子交換樹脂沒有特別的限定，可以使用氫型、鈉型，考慮到操作性時，優(yōu)選鈉型。另外，使用氫型的陽離子交換樹脂時，由于處理后的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)中的陰離子性官能團不是鹽，而是變?yōu)槌尸F(xiàn)出酸的結構，所以，具有如下風險，即，該處理后的高分子化合物的水溶液變?yōu)樗嵝裕摳叻肿踊衔锇l(fā)生由酸導致的水解。因此，在利用氫型的陽離子交換樹脂進行處理后，通常需要利用堿進行中和處理。相對于此，使用鈉型的陽離子交換樹脂時，由于處理后的高分子化合物中的陰離子性官能團呈現(xiàn)鈉鹽的結構，所以即使不進行中和處理，處理后的高分子化合物的水溶液也不會變成強酸性，能夠減小由酸導致該高分子化合物水解的風險。另外，也可以將氫型、鈉型陽離子交換樹脂變?yōu)殁浶?、銨型進行使用。使高分子化合物與離子交換樹脂接觸的方法沒有特殊的限定，存在柱式和分批式的方法。柱式中，將陽離子交換樹脂填充到柱中，使高分子化合物的溶液流出，采集洗脫出的液體。分批式中，將陽離子交換樹脂和高分子化合物的溶液以樹脂能懸浮的程度的強度進行攪拌或者振蕩，使其反應規(guī)定時間后，采集上清液或者除去樹脂后的濾液。陽離子交換體處理如下進行：將具有陰離子性官能團的高分子化合物與陽離子交換體混合，使混入該高分子化合物中的2價金屬陽離子吸附于陽離子交換體，從混合物中分離已除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物。陽離子交換體是本領域技術人員所公知的，可以使用常用物。例如，為鈉型陽離子交換樹脂(分批式)的情況下，將該陽離子交換樹脂與高分子化合物混合并進行加熱，于室溫放置冷卻后，獲取上清液或者除去了樹脂的濾液，加入到低級醇(例如，異丙基醇)中，將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，除去水分，使其干燥(例如，真空烘箱中)，由此能夠得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的干燥粉末。另外，為鈉型陽離子交換樹脂(柱式)的情況下，將陽離子交換樹脂填充到柱中，使該分子化合物的溶液流出，采集洗脫出的液體，加入到低級醇(例如，異丙基醇)中，將所產(chǎn)生的懸浮性固態(tài)成分收緊，除去水分，使其干燥(例如，真空烘箱中)，由此能夠得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的干燥粉末。另外，為氫型陽離子交換樹脂(分批式)的情況下，將該陽離子交換樹脂與高分子化合物混合并進行加熱，于室溫放置冷卻后，用堿中和(例如，鋰、鈉、鉀、銣、銫的1價的氫氧化物鹽的水溶液等)，加入到低級醇(例如，異丙基醇)中，將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，除去水分，使其干燥(例如，真空烘箱中)，由此能夠得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的干燥粉末。作為弱酸性陽離子交換樹脂，可以舉出Amberlite(注冊商標)(CG-50TypeI、IRC50、IRC76、IRC86、IRP64)、DiaionTM(CWK30/S、WK10、WK20、WK40、WK100、WT01S)、DOWEX(注冊商標)(MAC-3)等，但并不限于此。作為強酸性陽離子交換樹脂，可以舉出Amberlite(注冊商標)(200、200C、IR120H、IR122Na、15、1200H、IRN77、CG-120、IRP69)、Amberjet(注冊商標)(1200)、Amberlyst(注冊商標)(15(Dry)、16、36)、Diaion(注冊商標)(EXC04、HPK25、PK208、PK212、PK216、PK220、PK228L、RCP160M、SK1B、SK1BS、SK104、SK110、SK112、SK116、UBK510L、UBK555)、DOWEX(注冊商標)(50Wx2、50Wx4、50Wx8、DR-2030、DR-G8、HCR-W2、MSC、650C、650CUPW、G-26、88、88、M-31、99K/320、99K/350、MarathonC、N-406)、Lewatit(注冊商標)(MonoPlusS100、MonoPlusSP112)等，但并不限于此。作為螯合樹脂，可以舉出Amberlite(注冊商標)(IRC-748)、Ambersep(注冊商標)(GT74)Sumichelate(注冊商標)(MC700、MC760、MC850、MC900、MC960、CR2)、DiaionTM(CR11)、DOWEX(注冊商標)(M4195)、Duolite(注冊商標)(C467、GT73、C548、C747)、Lewatit(注冊商標)(TP207、TO208、TP260)等，但并不限于此。在分批式處理中，例如使用DAG作為高分子化合物時，相對于1g的DAG，樹脂量通常為0.5～10mL，優(yōu)選為1～10mL，更優(yōu)選為1～5mL，進一步優(yōu)選為2～4mL，DAG處理濃度為0.001％～5.0％(w/v)，優(yōu)選為0.1～2.0％(w/v)，更優(yōu)選為0.1～1.5％(w/v)，進一步優(yōu)選為0.1～1.0％(w/v)，處理溫度通常為10～120℃，優(yōu)選為25～120℃，更優(yōu)選為40～70℃，處理時間通常為0.5小時～24小時，優(yōu)選為0.5小時～2小時，更優(yōu)選為0.5小時～1小時。在柱式處理中，作為高分子使用DAG時，相對于1g的DAG，樹脂量為1～10mL，優(yōu)選為1～5mL，更優(yōu)選為2～4mL，DAG處理濃度為0.001％～5.0％，優(yōu)選為0.1～1.0％，處理溫度為5～40℃，優(yōu)選為10～30℃，處理時間為0.5小時～24小時、優(yōu)選為0.5小時～1小時。在一實施方式中，將具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫?；Y冷膠)的水中混懸物、與陽離子交換體(例如，陽離子交換樹脂)混合，以樹脂懸浮的程度的強度進行攪拌或者振蕩(分批法)。上述混懸物含有具有陰離子性官能團的高分子化合物的不溶物。本方案具有如下特征：具有陰離子性官能團的高分子化合物未完全溶解于水、以混懸狀態(tài)將該混懸物與陽離子交換體混合。該混懸物中的具有陰離子性官能團的高分子化合物由于含有2價金屬陽離子混入物，所以相對于水呈現(xiàn)出難溶性。對水為難溶性的具有陰離子性官能團的高分子化合物中可以含有例如超過2000ppm(例如2700ppm)的2價金屬陽離子(例如鈣離子)。作為陽離子交換體，可以使用上述物質(zhì)，優(yōu)選使用鈉型的陽離子交換體(例如陽離子交換樹脂)。如上所述，即使未進行中和處理，處理后的高分子化合物的水溶液也不會變成強酸性，由酸導致該高分子化合物水解的風險降低。另外，采用質(zhì)子型的陽離子交換體進行處理時，特別是在低溫(30℃以下)下，有時高分子化合物(例如脫酰基結冷膠)易于凝膠化、除去交換體時的濾紙堵塞等、引起操作性降低，但通過使用鈉型的陽離子交換體能夠避免上述風險。對于具有陰離子性官能團的高分子化合物與陽離子交換樹脂的混合，為了使2價金屬陽離子的除去高效地進行，也可以在加熱條件下進行，但并不是必需的。該溫度通常為10～90℃、優(yōu)選為10～70℃、20～70℃、30～70℃、30～60℃、30～50℃、或者30～40℃。特別是，在30～70℃的溫度下，2價金屬陽離子的除去效率優(yōu)異。將不含具有陰離子性官能團的高分子化合物的不溶物的、該高分子化合物的水溶液用陽離子交換樹脂進行處理的情況下，在將具有陰離子性官能團的高分子化合物溶解至水中時、以及在用陽離子交換樹脂處理時需要共計2次加熱處理。相對于此，在該方案中，由于用陽離子交換樹脂直接處理具有陰離子性官能團的高分子化合物的混懸液，所以，通過陽離子交換樹脂除去混懸液中的2價金屬陽離子的反應、以及通過除去2價金屬陽離子而使得水溶性增加的具有陰離子性官能團的高分子化合物向水中溶解的步驟得以同時進行，因此，進行1次加熱處理即可完成，可以實現(xiàn)處理時間的縮短及處理操作的簡單化。進而，將不含具有陰離子性官能團的高分子化合物的不溶物的、該高分子化合物的水溶液用陽離子交換樹脂進行處理的情況下，對水為難溶性的具有陰離子性官能團的高分子化合物首先溶解于水中時，有時需要在高溫(例如在90℃以上)下加熱，但在該方案中，不需要這樣高溫的加熱，能夠在較溫和的條件(例如，10～70℃)下、同時進行基于陽離子交換樹脂的2價金屬陽離子的除去以及具有陰離子性官能團的高分子化合物向水中的溶解。因此，能夠避免由加熱導致的具有陰離子性官能團的高分子化合物的分解。另外，將不含具有陰離子性官能團的高分子化合物的不溶物的、該高分子化合物的水溶液用陽離子交換樹脂進行處理的情況下，例如，為脫?；Y冷膠時，使處理對象的水溶液中的脫?；Y冷膠濃度上升至0.5％(w/v)左右也是困難的，但在該方案中，能夠使處理對象的懸浮液中的脫?；Y冷膠含量超過0.5％(w/v)，例如提高至0.6％(w/v)以上、0.7％(w/v)以上、0.8％(w/v)以上。對于上限值而言，只要在陽離子交換樹脂處理后、具有陰離子性官能團的高分子化合物能夠全部溶于水即可，沒有特別的限定，例如為2.5％(w/v)以下、優(yōu)選為2.0％(w/v)以下、更優(yōu)選為1.5％(w/v)以下、進一步優(yōu)選為1.0％(w/v)以下。通過使用該方案的方法，能夠改善2價金屬陽離子除去步驟的容積效率。該方案中的利用陽離子交換樹脂的處理時間沒有特殊的限定，通常為0.5小時～24小時、優(yōu)選為0.5小時～2小時、較優(yōu)選為0.5小時～1小時。通過利用該方案的方法進行處理，能夠得到除去了2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如脫?；Y冷膠)的水溶液。本發(fā)明也提供上述這樣的從具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)中除去2價金屬陽離子(例如，鈣離子)的方法。該方法是具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫酰基結冷膠)的純化方法、或實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，脫?；Y冷膠)的制造方法。作為除去了2價金屬陽離子的高分子化合物的上述獲取方法，可以使陽離子交換體處理后的溶液干燥，從而得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的粉末。另外，將該溶液加入到低級醇(例如，異丙基醇)中，將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，除去水分，使其干燥(例如，真空烘箱中)，由此能夠得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的粉末。例如，作為高分子化合物使用DAG時，該異丙基醇量相對于DAG溶液而言為2～10倍、優(yōu)選為3～5倍，DAG的處理濃度為0.001％～5.0％、優(yōu)選為0.1～1.0％，處理溫度為0～40℃、優(yōu)選為10～25℃，處理時間為0.5小時～12小時、優(yōu)選為0.5小時～1小時。作為所得的固態(tài)成分的干燥方法，可以舉出噴霧干燥、冷凍干燥、利用薄膜離心蒸發(fā)器的干燥、攪拌干燥、靜置干燥等。干燥后的粉體也可以粉碎進行使用?？紤]到干燥后向水中的溶解性時，優(yōu)選噴霧干燥、冷凍干燥。另外，考慮到不需要干燥后的粉碎時，優(yōu)選噴霧干燥。螯合劑處理可以如下進行：將具有陰離子性官能團的高分子化合物與螯合劑混合，使混入到該高分子化合物中的2價金屬陽離子吸附在螯合劑上，形成絡合體，從混合物中分離出除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物。作為螯合劑，只要能夠與2價金屬陽離子形成絡合體、并將其從具有陰離子性官能團的高分子化合物中除去即可，沒有特別的限定，例如，可以舉出有機系的氨基羧酸鹽等。例如，可以舉出乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA·2Na)、乙二醇四乙酸(EGTA)、次氮基三乙酸(NTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、L－谷氨酸二乙酸(GLDA)等，優(yōu)選乙二胺四乙酸二鈉(EDTA·2Na)。例如，使上述高分子化合物與螯合劑在水中反應。將該混合液在室溫放置冷卻后，用堿中和(例如，鋰、鈉、鉀、銣、銫的1價的氫氧化物鹽的水溶液等)，添加到低級醇(例如，異丙基醇)中，將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，除去水分，使其干燥(例如，真空烘箱中)。2價金屬陽離子與螯合劑的絡合體及過剩的螯合劑，由于處于溶解于水中的狀態(tài)，所以通過該一系列的操作，能夠得到除去了2價金屬陽離子的上述高分子化合物的干燥粉末。通過將任意形狀的2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)與培養(yǎng)基混合，可以制造能夠使細胞或者組織懸浮進行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物。該高分子化合物的形狀可以為：粉末、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑這樣的制劑化固體、溶解在適當?shù)慕橘|(zhì)及溶解劑中的溶液或懸浮液這樣的液體、或者鍵合在基板、單體上的狀態(tài)。作為被制劑化時的添加物，可以舉出：對羥基苯甲酸酯類等防腐劑；乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇等賦形劑；硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑；聚乙烯醇、羥丙基纖維素、明膠等粘合劑；脂肪酸酯等表面活性劑；甘油等增塑劑等。這些添加物不限定于此，只要本領域技術人員可以利用即可，可以自由地選擇。另外，2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物可以根據(jù)需要實施滅菌處理。滅菌方法沒有特殊的限制，例如可以舉出放射線滅菌、環(huán)氧乙烷氣體滅菌、高壓釜滅菌、過濾器滅菌等。對于進行過濾器滅菌(以下、也有時稱為過濾滅菌)時的過濾器部分的材質(zhì)，沒有特殊的限制，例如可以舉出玻璃纖維、尼龍、PES(聚醚砜)、親水性PVDF(聚偏氟乙烯)、纖維素混合酯、纖維素乙酸酯、聚四氟乙烯等。過濾器的微孔的大小沒有特殊的限制，優(yōu)選為0.1μm至10μm、較優(yōu)選為0.1μm至1μm、最優(yōu)選為0.1μm至0.5μm。這些滅菌處理中，2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物可以為固態(tài)，也可以為溶液狀態(tài)。在一方案中，2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)的水溶液(將其作為培養(yǎng)基添加劑。)，可以用于本發(fā)明的制造方法中。該水溶液可以通過將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物的固體(例如粉末)溶解于生理性水性介質(zhì)中而得到。如上所述，2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物由于向水中的溶解性高，所以不需要加熱處理即可溶解于水性介質(zhì)中。特別是，為DAG的情況下，能制作水溶液中的DAG的濃度為1.0～1.5％(重量/容量)的高濃度溶液(市售的DAG存在如下缺點：不僅在溶解時需要加熱處理，而且在1％以上的高濃度的情況下，通過加熱處理使其溶解、冷卻至室溫時凝膠化，因此操作性差。)。關于溶解時的溫度，例如相對于水的情況下為5～60℃、優(yōu)選為5～40℃、進一步優(yōu)選為10～30℃。作為水性介質(zhì)的例子，可以舉出水、二甲基亞砜(DMSO)等，但并不限定于此。作為水性介質(zhì)，優(yōu)選水。水性介質(zhì)中可以含有適當?shù)木彌_劑、鹽。該水性介質(zhì)中可以含有也可以不含2價金屬陽離子，但在優(yōu)選方案中，不含2價金屬陽離子。其原因在于，水性介質(zhì)中不含2價金屬陽離子時，在該水溶液中，具有陰離子性官能團的高分子化合物難以形成能夠使細胞或組織懸浮進行培養(yǎng)的結構體，在溶解于水中的狀態(tài)下能夠穩(wěn)定地保存。對于水溶液中的具有陰離子性官能團的高分子化合物的濃度，只要該高分子化合物能夠穩(wěn)定地溶解即可，沒有特別的限定，例如為0.0001％至1.5％(重量/容量)、優(yōu)選為0.01％至0.5％(重量/容量)、更優(yōu)選為0.01％至0.3％(重量/容量)。上述培養(yǎng)基添加劑中，也可以進一步添加使具有陰離子性官能團的高分子化合物的效果提高、降低使用時的濃度這樣的添加物。作為這樣的添加劑的例子，可以將瓜爾膠、羅望子膠(tamarindgum)、藻酸丙二醇酯、刺槐豆膠、阿拉伯樹膠、刺云實膠(taragum)、羅望子膠、甲基纖維素等多糖類混合1種以上?？梢詫⒕哂嘘庪x子性官能團的高分子化合物的水溶液滅菌(過濾、高壓釜滅菌等)。也可以將已滅菌的上述水溶液與液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)混合進行使用?；蛘撸部梢詫⑸鲜龈叻肿踊衔锏乃芤?、與將粉末培養(yǎng)基溶于水中而配制的液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)混合后滅菌進行使用。上述水溶液與液體培養(yǎng)基的滅菌，可以在混合前分別地進行。滅菌方法可以舉出上述方法，優(yōu)選過濾滅菌。過濾滅菌的微孔的大小如上所述，但通常情況下，過濾滅菌步驟中采用孔徑0.22μm的膜過濾器。優(yōu)選孔徑為0.1μm。例如，作為高分子化合物使用DAG時，DAG水溶液的能夠過濾滅菌的濃度范圍為0.0001～2％，現(xiàn)實情況下優(yōu)選為0.0001～1％。在一方案中，將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如DAG)(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)的水溶液進行高壓釜滅菌，將其與無菌的液體培養(yǎng)基混合。通過使用2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(例如，DAG)的水溶液，在以低濃度(例如0.03％(重量/容量)以下、優(yōu)選0.001％～0.03％(重量/容量)、更優(yōu)選0.005～0.03％(重量/容量))進行高壓釜滅菌時，能夠避免下述風險，即，在與液體培養(yǎng)基混合時以懸浮狀態(tài)維持細胞及/或組織的功能降低。而且，將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)、與培養(yǎng)細胞及/或組織時所用的培養(yǎng)基混合，使培養(yǎng)基組合物中的具有陰離子性官能團的高分子化合物的濃度為能夠在不實質(zhì)性地提高液體培養(yǎng)基的粘度的情況下使細胞及/或組織均勻地懸浮(優(yōu)選懸浮靜置)的濃度。優(yōu)選將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水溶液滅菌，與液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)混合。對于混合比率而言，具有陰離子性官能團的高分子化合物的水溶液：液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)為1：99～99：1、優(yōu)選為10：90～90：10、更優(yōu)選為20：80～80：20。對于混合順序而言，既可以將具有陰離子性官能團的高分子化合物的水溶液添加到液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)中，也可以將液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基的水溶液)添加到具有陰離子性官能團的高分子化合物的水溶液中。上述的具有陰離子性官能團的高分子化合物的濃度如上所述。例如，將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)、與培養(yǎng)細胞及/或組織時所用的培養(yǎng)基混合，使培養(yǎng)基組合物中的具有陰離子性官能團的高分子化合物濃度為0.0005％至1.0％(重量/容量)、優(yōu)選為0.001％至0.4％(重量/容量)、更優(yōu)選為0.005％至0.1％(重量/容量)、進一步優(yōu)選為0.005％至0.05％(重量/容量)。例如，為脫?；Y冷膠的情況下，能夠以0.001％至1.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.003％至0.5％(重量/容量)、更優(yōu)選0.005％至0.1％(重量/容量)、進一步優(yōu)選0.01％至0.05％(重量/容量)、最優(yōu)選0.01％至0.02％(重量/容量)的濃度添加到培養(yǎng)基中。為黃原膠的情況下，能夠以0.001％至5.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.01％至1.0％(重量/容量)、更優(yōu)選0.05％至0.5％(重量/容量)、最優(yōu)選0.1％至0.2％(重量/容量)的濃度添加到培養(yǎng)基中。為κ－卡拉膠及刺槐豆膠的混合體系的情況下，可以以0.001％至5.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.005％至1.0％(重量/容量)、更優(yōu)選0.01％至0.1％、最優(yōu)選0.03％至0.05％(重量/容量)的濃度添加到培養(yǎng)基中。需要說明的是，該濃度能夠由下式計算。濃度(％)＝特定化合物的重量(g)/培養(yǎng)基組合物的容量(mL)×100通過將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)與培養(yǎng)基混合，形成能夠使細胞或組織在培養(yǎng)基中懸浮進行培養(yǎng)的結構體，能夠得到本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物。由于培養(yǎng)基中通常含有充分濃度的金屬陽離子，所以，僅僅通過將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物添加到培養(yǎng)基中，即可獲得本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物，上述充分濃度的金屬陽離子是指：對于具有陰離子性官能團的高分子化合物介由金屬陽離子聚集、具有陰離子性官能團的高分子化合物形成三維網(wǎng)、或者具有陰離子性官能團的高分子化合物介由金屬陽離子形成微凝膠而言充分濃度的金屬陽離子。例舉本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物的制造方法，但本發(fā)明并不限定于此。將2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的具有陰離子性官能團的高分子化合物)添加到離子交換水或超純水中。而且，在能夠溶解該特定化合物的溫度(例如，5～60℃、優(yōu)選5～40℃、進一步優(yōu)選10～30℃)下攪拌，使其溶解至變成透明的狀態(tài)。溶解后，進行滅菌(例如，于121℃進行20分鐘的高壓釜滅菌、過濾器過濾)。一邊攪拌在靜置培養(yǎng)中所用的任意的培養(yǎng)基(例如，均相混合機(homomixer)等)一邊向該培養(yǎng)基中添加上述滅菌后的水溶液，與該培養(yǎng)基混合使其均勻。該水溶液與培養(yǎng)基的混合方法沒有特殊的限制，例如可以舉出采用吸液(Pipetting)等手動方式進行的混合、使用磁力攪拌器、機械攪拌器、均相混合機、均化器等設備進行的混合。另外，也可以在混合后將本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物用過濾器過濾。過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為5μm至100μm、優(yōu)選為5μm至70μm、更優(yōu)選為10μm至70μm。例如，配置脫?；Y冷膠時，向離子交換水或超純水中添加2價金屬陽離子混入量減小的脫?；Y冷膠(優(yōu)選，實質(zhì)上不含2價金屬陽離子的脫?；Y冷膠)，使其濃度為0.0001％至1.5％(重量/容量)、優(yōu)選為0.01％至0.5％(重量/容量)、更優(yōu)選為0.01％至0.3％(重量/容量)。而且，只要為能夠將上述脫?；Y冷膠溶解的溫度即可，可以為任何溫度，可以于5～60℃、優(yōu)選5～40℃、進一步優(yōu)選10～30℃進行攪拌，由此使其溶解至變?yōu)橥该鳡顟B(tài)。溶解后，例如通過于121℃進行20分鐘高壓釜滅菌或者過濾器過濾進行滅菌。例如，一邊用均相混合機等攪拌DMEM/F12培養(yǎng)基等液體培養(yǎng)基，一邊向該培養(yǎng)基中添加該水溶液、均勻地混合使其為所期望的最終濃度(例如最終濃度為0.015％時0.3％水溶液：培養(yǎng)基的比率為1：20)?；蛘撸梦汗芟蛟撍芤褐刑砑覦MEM/F12培養(yǎng)基等液體培養(yǎng)基使其為所期望的最終濃度(例如最終濃度為0.015％時，0.3％水溶液：培養(yǎng)基的比率為1：20)，通過吸液將其均勻地混合。該水溶液與培養(yǎng)基的混合方法沒有特別的限制，例如可以舉出采用吸液等手動方式進行的混合、使用磁力攪拌器、機械攪拌器、均相混合機、均化器等設備進行的混合。另外，也可以在混合后將培養(yǎng)基組合物用過濾器進行過濾。過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為5μm至100μm、優(yōu)選為5μm至70μm、更優(yōu)選為10μm至70μm。對于采用本發(fā)明的方法培養(yǎng)的細胞及/或組織的形態(tài)、狀態(tài)，本領域技術人員可以任意地選擇。作為其優(yōu)選具體例，沒有特殊的限制，可以舉出細胞及/或組織單獨地在培養(yǎng)基組合物中分散的狀態(tài)、細胞及/或組織粘附在載體表面上的狀態(tài)、細胞及/或組織包埋于載體內(nèi)部的狀態(tài)、多個細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)、或2種以上細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)等，較優(yōu)選細胞及/或組織粘附在載體表面上的狀態(tài)、細胞及/或組織包埋于載體內(nèi)部的狀態(tài)、多個細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)、或2種以上細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)，進一步優(yōu)選細胞及/或組織粘附于載體表面上的狀態(tài)、多個細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)、或2種以上細胞聚集形成細胞塊(球體)的狀態(tài)。這些狀態(tài)中，作為采用本發(fā)明的方法進行培養(yǎng)的最優(yōu)選的狀態(tài)，可以舉出形成了細胞塊(球體)的狀態(tài)，其原因在于，與生物體內(nèi)環(huán)境近似的細胞－細胞間相互作用及細胞結構體被重構，以能夠長時間地維持細胞功能的狀態(tài)進行培養(yǎng)，另外細胞的回收比較容易。作為使細胞及/或組織載持于表面上的載體，可以舉出由各種高分子構成的微載體、玻璃珠、陶瓷珠等。作為該高分子的例子，可以使用乙烯基樹脂、聚氨酯樹脂、環(huán)氧樹脂、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯聚酯、聚酰胺、聚酰亞胺、硅樹脂、酚醛樹脂、三聚氰胺樹脂、尿素樹脂、苯胺樹脂、離聚物樹脂、聚碳酸酯、膠原蛋白、葡聚糖、明膠、纖維素、藻酸鹽及它們的混合物等。也可以用下述化合物涂布該載體，所述化合物能夠提高細胞的粘附、或者提高物質(zhì)從細胞中的放出。作為上述涂布材料的例子，可以舉出聚(單硬脂酰甘油酯琥珀酸)、聚－D，L－丙交酯－co－乙交酯、透明質(zhì)酸鈉、N－異丙基丙烯酰胺、膠原蛋白I至XIX、纖連蛋白、玻璃粘連蛋白、層粘連蛋白－1至12、Nitogen、腱生蛋白、血小板反應蛋白、VonWillebrand因子、骨橋蛋白、纖維蛋白原、各種彈性蛋白、各種蛋白聚糖、各種鈣粘附蛋白、橋粒芯膠粘蛋白、橋粒芯糖蛋白、各種整聯(lián)蛋白、E－選擇蛋白、P－選擇蛋白、L－選擇蛋白、免疫球蛋白超家族、基質(zhì)膠、聚－D－賴氨酸、聚－L－賴氨酸、甲殼質(zhì)、殼聚糖、瓊脂糖、藻酸凝膠、各種水凝膠、以及它們的切斷斷片等。此時，也可以組合2種以上涂布材料。另外，也可以進一步向在表面上載持有細胞及/或組織的載體的培養(yǎng)時所使用的培養(yǎng)基中，混合1種以上的瓜爾膠、羅望子膠、刺槐豆膠、阿拉伯樹膠、刺云實膠、羅望子膠、甲基纖維素等多糖類。另外，該載體也可以含有磁性體材料，例如鐵氧體。該載體的直徑為數(shù)10μm至數(shù)100μm，較優(yōu)選為100μm至200μm，其比重優(yōu)選接近1，較優(yōu)選為0.9～1.2，特別優(yōu)選為約1.0。作為該載體的例子，可以舉出Cytodex1(注冊商標)、Cytodex3(注冊商標)、Cytoline1(注冊商標)、Cytoline2(注冊商標)、Cytopore1(注冊商標)、Cytopore2(注冊商標)、(以上、GEHealthcareLifeSciences)、Biosilon(注冊商標)(NUNC)、Cultispher－G(注冊商標)、Cultispher－S(注冊商標)(以上、ThermoSCIENTIFIC)、HILLEXCT(注冊商標)、ProNectinF-COATED(注冊商標)、及HILLEXII(注冊商標)(SoloHillEngineering)等，但并不限定于此。根據(jù)需要，該載體也可以實施滅菌處理。滅菌方法沒有特別的限制，例如可以舉出放射線滅菌、環(huán)氧乙烷氣體滅菌、高壓釜滅菌及干熱滅菌等。作為使用該載體來培養(yǎng)動物細胞的方法，沒有特殊的限制，可以采用通常的使用流動層型培養(yǎng)槽或者充填層型培養(yǎng)槽的培養(yǎng)方法等。此時，在表面上載持有細胞及/或組織的載體，通過使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物能夠在不進行振蕩等操作的情況下均勻地分散，因此，能夠不損傷細胞功能地培養(yǎng)目標細胞及/或組織。采用該法培養(yǎng)的細胞及/或組織，可以在培養(yǎng)后以載持在載體上的狀態(tài)進行離心分離、過濾處理，由此進行回收。此時，也可以在添加了所使用的液體培養(yǎng)基后，進行離心分離、過濾處理。例如，離心分離時的重力加速度(G)為100至400G，過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為10μm至100μm，但并不限定于此。另外，使載體中內(nèi)包有鐵氧體等具有磁性的材料時，能夠通過磁力回收所培養(yǎng)的載體。通過該法培養(yǎng)的細胞及/或組織，可以通過使用各種螯合劑、熱處理、酶從載體上剝離來進行回收。在載體內(nèi)部包埋細胞及/或組織時，作為載體可以選擇由各種高分子構成的材料。作為上述高分子的例子，可以舉出膠原蛋白、明膠、藻酸鹽、殼聚糖、瓊脂糖、聚乙醇酸、聚乳酸、纖維蛋白粘附劑、聚乳酸·聚乙醇酸共聚物、蛋白聚糖、糖胺聚糖、聚氨酯泡沫等海綿、DseA－3D(注冊商標)、聚N－取代丙烯酰胺衍生物、聚N－取代甲基丙烯酰胺衍生物及它們的共聚物、聚乙烯基甲基醚、聚環(huán)氧丙烷、聚環(huán)氧乙烷、聚乙烯醇部分醋化物等溫度敏感性高分子、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、甲基纖維素、硝酸纖維素、丁酸纖維素、聚環(huán)氧乙烷、聚(甲基丙烯酸2－羥乙酯)/聚己內(nèi)脂等水凝膠。另外，也可以使用2種以上上述高分子制作用于包埋細胞的載體。進而，該載體中除了這些高分子以外也可以具有生理活性物質(zhì)。作為該生理活性物質(zhì)的例子，可以舉出細胞生長因子、分化誘導因子、細胞粘附因子、抗體、酶、細胞因子、激素、凝集素、或者細胞外基質(zhì)等，也可以含有多種上述物質(zhì)。另外，可以進一步地向包埋有細胞及/或組織的載體的培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基中，混合1種以上瓜爾膠、羅望子膠、藻酸丙二醇酯、刺槐豆膠、阿拉伯樹膠、刺云實膠、羅望子膠、甲基纖維素等增粘劑。使上述載體包埋細胞及/或組織的方法，沒有特殊的限制，例如，可以采用如下方法：將細胞與上述高分子的混合液抽吸至注射器中、通過25G～19G左右的注射針滴入培養(yǎng)基中、或使用微量吸液管滴入培養(yǎng)基中等方法。此處形成的珠狀載體的尺寸，取決于將細胞與上述高分子混合液滴下時所使用的器具前端的形狀，優(yōu)選為數(shù)10μm至數(shù)1000μm，較優(yōu)選為100μm至2000μm。能夠采用珠狀載體進行培養(yǎng)的細胞數(shù)沒有特殊的限制，可以與該珠尺寸相應地自由地選擇。例如，為直徑約2000μm的珠狀載體時，能夠在該尺寸的珠狀載體中包埋直至500萬個細胞。另外，細胞可以在載體內(nèi)一個一個地分散、也可以形成數(shù)個細胞聚集而成的細胞塊。此時，包埋有細胞及/或組織的載體，通過使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物而能夠在不進行攪拌等操作的情況下均勻地分散，因此，能夠不損失細胞功能地培養(yǎng)目標細胞及/或組織。對于利用該法培養(yǎng)的細胞及/或組織，在培養(yǎng)后能夠通過以包埋于載體中的狀態(tài)進行離心分離、過濾處理從而進行回收。此時，也可以在加入所用的液體培養(yǎng)基后進行離心分離、過濾處理。例如，離心分離時的重力加速度(G)為100至400G，進行過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為10μm至100μm，但并不限定于此。采用該法培養(yǎng)成的細胞及/或組織，可以通過使用各種螯合劑、熱、酶等處理來分解載體從而使其分散、進行回收。形成細胞凝集塊(球體)的方法，沒有特別的限定，本領域技術人員可以適當?shù)剡x擇。作為其例，可以舉出：使用具有細胞非粘附表面的容器的方法、懸滴法、旋轉培養(yǎng)法、三維支架法、離心法、采用利用電場、磁場形成的凝集的方法等。例如，對于使用具有細胞非粘附表面的容器的方法，可以在實施了阻礙細胞粘附的表面處理的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)目標細胞，使其形成球體。使用該細胞非粘附性培養(yǎng)容器時，首先，在采集目標細胞后配制其細胞懸浮液，接種至該培養(yǎng)容器中進行培養(yǎng)。持續(xù)培養(yǎng)約一周時，細胞自發(fā)地形成球體。作為此時使用的細胞非粘附性表面，可以使用在通常所用的培養(yǎng)皿等培養(yǎng)容器的表面涂布了阻礙細胞粘附的物質(zhì)而得到的細胞非粘附性表面等。作為上述物質(zhì)，可以舉出瓊脂糖、瓊脂、聚－HEMA(聚－(甲基丙烯酸2－羥基乙基酯))2－甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿與其他單體(例如，甲基丙烯酸丁基酯等)形成的共聚物等，只要沒有細胞毒性，則不限定于此。另外，作為形成細胞凝集塊(球體)的方法，也可以采用NATUREBIOTECHNOLOGY,VOL.28,NO.4,APRIL2010,361-366,NATUREPROTOCOLS,VOL.6,NO.5,2011,689-700,NATUREPROTOCOLS,VOL.6,NO.5,2011,572-579,StemCellResearch,7,2011,97-111,StemCellRevandRep,6,2010,248-259等中記載的方法。另外，在使球體形成的培養(yǎng)時所使用的培養(yǎng)基中，也可以含有加速球體形成、或促進其維持的成分。作為具有上述效果的成分的例子，可以舉出二甲基亞砜、超氧化物歧化酶、銅藍蛋白、過氧化氫酶、過氧化物酶、L－抗壞血酸、L－抗壞血酸磷酸酯、生育酚、類黃酮、尿酸、膽紅素、含硒化合物、轉鐵蛋白、不飽和脂肪酸、白蛋白、茶堿、毛喉素、胰高血糖素、二丁酰cAMP等。作為含硒化合物，可以舉出亞硒酸鈉、硒酸鈉、二甲基硒、硒化氫、硒代蛋氨酸、硒－甲基硒代半胱氨酸、丙氨酸丁氨酸硒醚、硒代半胱氨酸、硒高半胱氨酸、腺苷-5'-磷酰硒酸、硒－腺苷硒代蛋氨酸、Y27632、Fasudil(HA1077)、H－1152、Wf－536等ROCK抑制劑。另外，為了得到作為目標的尺寸均勻的細胞凝集塊，也可以在所使用的細胞非附著性培養(yǎng)容器上導入與目標細胞凝集塊具有相同直徑的多個凹部。如果這些凹部彼此接觸、或在目標細胞凝集塊的直徑的范圍內(nèi)，則在接種細胞時，所接種的細胞在凹部與凹部之間不形成細胞凝集塊，而是確實地在凹部中形成與其容積相應的大小的細胞凝集塊，能夠得到尺寸均勻的細胞凝集塊群。作為此時的凹部的形狀，優(yōu)選半球或圓錐狀。或者，也可以基于具有細胞粘附性的支持體而形成球體。作為這樣的支持體的例子，可以舉出膠原蛋白、聚輪烷(polyrotaxane)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)、水凝膠等。另外，也可以通過與飼養(yǎng)細胞共同培養(yǎng)，來形成球體。作為用于促進球體形成的飼養(yǎng)細胞，可以使用任何的粘附性細胞，但優(yōu)選與各種細胞相應的飼養(yǎng)細胞。雖然沒有限定，但例如在形成來自肝、軟骨的細胞的球體時，作為其飼養(yǎng)細胞的例子，可以舉出COS－1細胞、血管內(nèi)皮細胞作為優(yōu)選的細胞種。進而，也可以使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)組合物形成球體。此時，可以將該特定化合物添加到球體形成時所使用的培養(yǎng)基中，使該特定化合物的濃度為0.0005％至1.0％(重量/容量)、優(yōu)選0.001％至0.3％(重量/容量)、較優(yōu)選0.005％至0.1％(重量/容量)、進一步優(yōu)選0.01％至0.05％(重量/容量)。球體可以如下配制：使目標細胞均勻地分散在含有該特定化合物的結構體的培養(yǎng)基中，靜置3天至10天進行培養(yǎng)。此處配制的球體可以通過進行離心、過濾處理來回收。例如，離心時的重力加速度(G)為100至400G，過濾處理時所使用的過濾器的微孔的大小為10μm至100μm，但并不限制于此。另外，可以使用磁性微粒(在表面涂布有與目標細胞特異性結合的抗體)，利用磁力回收所培養(yǎng)的球體。作為這樣的磁性微粒的例子，可以舉出Dynabeads(Veritas公司制)、MACSmicrobeads(MiltenyiBiotec公司制)、BioMag(TechnoChemical公司制)等。球體的大小基于細胞種及培養(yǎng)時間的不同而不同，沒有特殊的限制，在形成球狀或橢球狀時直徑為20μm至1000μm、優(yōu)選為40μm至500μm、較優(yōu)選為50μm至300μm。對于上述球體而言，即使以此狀態(tài)繼續(xù)靜置培養(yǎng)，也能在10天以上、優(yōu)選13天以上、進一步優(yōu)選30天以上的時間內(nèi)保持增殖能力，通過進一步在靜置培養(yǎng)中定期地進行機械分割，或進一步地進行單細胞化處理和凝集，由此能夠實質(zhì)性地無期限地保持增殖能力。關于球體培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)容器，只要是通常可以進行動物細胞培養(yǎng)的容器即可，沒有特別的限定，例如可以舉出燒瓶、皿、陪替氏培養(yǎng)皿、組織培養(yǎng)用皿、多皿、微量培養(yǎng)板、微孔板、多板、多孔板、腔室載玻片、培養(yǎng)皿、管、盤、培養(yǎng)袋、滾瓶等。球體的靜置培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基，可以含有細胞粘附因子，作為其例，可以舉出基質(zhì)膠、膠原蛋白凝膠、明膠、聚－L－賴氨酸、聚－D－賴氨酸、層粘連蛋白、纖連蛋白。這些細胞粘附因子也可以組合添加2種以上。另外，進一步地可以向球體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基中混合瓜爾膠、羅望子膠、藻酸丙二醇酯、刺槐豆膠、阿拉伯樹膠、刺云實膠、羅望子膠、甲基纖維素等增粘劑。通過使用本發(fā)明的含有特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物，可以在不進行振蕩等操作的情況下均勻地分散在培養(yǎng)液中，因此，能夠不損害細胞功能地以球體的形式對目標細胞及/或組織進行培養(yǎng)。采用該法靜置培養(yǎng)的球體，可以通過在培養(yǎng)后進行離心、過濾處理來進行回收。此時，也可以加入所用的液體培養(yǎng)基后進行離心、過濾處理。例如，離心時的重力加速度(G)為100至400G，進行過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為10μm至100μm，但并不限定于此。另外，可以使用磁性微粒(在表面上涂布了與目標細胞特異性結合的抗體)，利用磁力回收所培養(yǎng)的球體。作為這樣的磁性微粒的例子，可以舉出Dynabeads(Veritas公司制)、MACSmicrobeads(MiltenyiBiotec公司制)、BioMag(TechnoChemical公司制)等。對于被回收的球體，可以進一步地使用各種螯合劑、熱、過濾器、酶等處理將其解開，由此能夠以單一細胞的形式分散。作為將來自植物的細胞及/或組織靜置培養(yǎng)時的方法，可以培養(yǎng)未分化的植物細胞塊即愈傷組織。關于愈傷組織的誘導，可以針對所使用植物種分別采用已知的方法進行。例如，根據(jù)需要，使用70％乙醇、1％次氯酸鈉溶液等，對已經(jīng)分化的植物體的一部分的組織(例如，根、莖、葉的切片、種子、生長點、胚、花粉等)表面進行滅菌，然后，使用刀等切成適當大小的組織片(例如，約1～約5mm見方的根切片)，通過使用凈化臺等的無菌操作，將該組織片接種至預先經(jīng)過滅菌的愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，在適當條件下進行無菌培養(yǎng)。此處誘導的愈傷組織，為了立即大量增殖，可以進行液體培養(yǎng)，或也可以采用傳代用培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)，由此以品種株系的形式維持。傳代培養(yǎng)可以使用任意的液體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基。對于使用本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物開始進行靜置培養(yǎng)時所接種的植物細胞塊的量，可以基于目標細胞的增殖速度、培養(yǎng)方式(分批式培養(yǎng)、分批補料式培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)等)、培養(yǎng)時間等而變化，例如在培養(yǎng)愈傷組織等植物細胞塊時，接種至本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物中，使細胞塊相對于本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物的濕重量為4～8(重量/容積(w/v))％、優(yōu)選5～7(w/v)％。培養(yǎng)時的植物細胞塊的粒徑為3mm至40mm、優(yōu)選3mm至20mm、較優(yōu)選5mm至15mm。此處所謂“粒徑”，例如在植物細胞塊為球形時是指其直徑，為橢圓球形時是指其長徑，在其他形狀時同樣地是指可得到的最大長度。關于培養(yǎng)細胞及/或組織時的溫度，在為動物細胞時通常為25至39℃、優(yōu)選為33至39℃。在培養(yǎng)氣氛中，CO2濃度通常為4至10體積％，優(yōu)選為4至6體積％。培養(yǎng)時間通常為3至35天，可以根據(jù)培養(yǎng)目的自由地設定。植物細胞的培養(yǎng)溫度通常為20至30℃，需要光時，可以在照度2000～8000lux的照度條件下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)時間通常為3至70天，可以根據(jù)培養(yǎng)目的自由地設定。采用本發(fā)明的方法培養(yǎng)細胞及/或組織時，可以向本發(fā)明的培養(yǎng)組合物中添加另外配制的細胞及/或組織，進行混合使其均勻地分散。此時的混合方法沒有特別的限制，例如可以舉出吸液等采用手動進行的混合、使用攪拌器、旋渦混合器(VortexMixer)、微孔板混合器、振蕩機等設備的混合。在混合后，既可以使培養(yǎng)液為靜置狀態(tài)，也可以根據(jù)需要將培養(yǎng)液進行旋轉、振蕩或攪拌。其轉速及頻率可以根據(jù)本領域技術人員的目的適當?shù)卦O定。另外，在靜置培養(yǎng)的期間需要進行培養(yǎng)基組合物的更換時，可以通過進行離心、過濾處理將細胞及/或組織與培養(yǎng)基組合物分離后，將新的培養(yǎng)基組合物添加至細胞及/或組織中?；蛘?，可以通過進行離心、過濾處理將細胞及/或組織適當濃縮后，將新培養(yǎng)基組合物添加至該濃縮液中。例如，離心時的重力加速度(G)為100至400G，進行過濾處理時使用的過濾器的微孔的大小為10μm至100μm，但并不限定于此。另外，可以使用磁性微粒(在表面上涂布了與目標細胞特異性結合的抗體)利用磁力分離所培養(yǎng)的細胞及/或組織。作為這樣的磁性微粒的例子，可以舉出Dynabeads(Veritas公司制)、MACSmicrobeads(MiltenyiBiotec公司制)、BioMag(TechnoChemical公司制)等。這些培養(yǎng)基組合物的更換也可以采用在機械控制下且可在封閉環(huán)境下實施的生物反應器、自動培養(yǎng)裝置進行。另外，本發(fā)明提供具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法。詳細而言，該具有陰離子性官能團的高分子化合物的純化方法是如下方法：利用將2價金屬陽離子交換成1價金屬陽離子的陽離子交換體，對具有陰離子性官能團的高分子化合物的水中混懸物進行處理，得到2價金屬陽離子混入量減小的具有陰離子性官能團的高分子化合物。本發(fā)明的純化方法的優(yōu)選方案與上述除去2價金屬陽離子的方法相同。以下通過具體地闡述本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物的實施例，進一步詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于此。實施例參考例1經(jīng)高溫加熱處理的含有脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基的粘度測定及細胞懸浮試驗含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基的配制及粘度測定使脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在純水中使其為0.4％(w/v)，之后，于90℃加熱攪拌使其溶解。一邊攪拌該水溶液一邊放冷至室溫，于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。向300mL高型燒杯(TallBeaker)中加入2倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Aldrich公司制)50mL和滅菌水47.5mL，一邊在室溫下用均相混合機(3000rpm)攪拌一邊添加脫?；Y冷膠水溶液2.5mL，以此狀態(tài)持續(xù)攪拌1分鐘，由此配制成脫?；Y冷膠最終濃度0.01％的培養(yǎng)基組合物。同樣地配制成添加有脫酰基結冷膠水溶液使其最終濃度為0.02、0.03、0.05％(w/v)的培養(yǎng)基組合物。對于該培養(yǎng)基組合物的粘度，在37℃條件下，使用E型粘度計(東機產(chǎn)業(yè)株式會社制、ViscometerTVE－22L、標準轉子1°34’×R24)，以轉速100rpm測定5分鐘。含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基的細胞懸浮試驗將人子宮頸癌細胞株HeLa(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)以250000個/mL混懸在含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中，將10mL該混懸液接種至EZSPHERE(旭硝子公司制)后，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)培養(yǎng)3天。將此處所得的球體(直徑100～200μm)的混懸液10mL進行離心處理(200G、5分鐘)使球體沉淀，除去上清液，由此配制成球體混懸液1.0mL。接著，向1.5mL的Eppendorf管中各加入上述配制的含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基1.0mL，進而加入HeLa細胞球體混懸液10μL。通過輕敲使細胞塊分散，于37℃培養(yǎng)，目視觀察1小時后的細胞分散狀態(tài)。[表1]參考比較例含有甲基纖維素、膠原蛋白的培養(yǎng)基的配制含有甲基纖維素的培養(yǎng)基的配制向200mL茄型燒瓶中加入100mLDMEM/F－12培養(yǎng)基(Aldrich公司制)，加入0.1g甲基纖維素(M0387、Aldrich公司制)。一邊用冰浴進行冷卻一邊攪拌，使甲基纖維素溶解。使用該溶液配制添加有甲基纖維素水溶液使其最終濃度為0.1、0.3、0.6、1.0％(w/v)的培養(yǎng)基組合物。含有膠原蛋白的培養(yǎng)基的配制向6.5mL的0.3％CellmatrixTypeI－A(新田明膠公司制)中加入10倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Aldrich公司制)1mL、重構用緩沖液(新田明膠公司制)1mL及純水1.5mL，在冰中一邊攪拌一邊配制0.2％的含有膠原蛋白的培養(yǎng)基。同樣地配制成添加有膠原蛋白使其最終濃度為0.01、0.05、0.1、0.2％(w/v)的培養(yǎng)基組合物。對于上述配制的培養(yǎng)基組合物，也與含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基同樣地實施HeLa細胞球體的懸浮試驗及粘度測定。其中，基于裝置的測定范圍，以50rpm測定1.0％(w/v)甲基纖維素的粘度。[表2][表3]參考試驗例在以下的參考試驗例中，CO2培養(yǎng)箱中的CO2的濃度(％)以氣氛中的CO2的體積％表示。另外，PBS表示磷酸緩沖生理鹽水(SigmaAldrichJapan公司制)，F(xiàn)BS表示胎牛血清(BiologicalIndustries公司制)。另外，(w/v)表示每1體積的重量。參考試驗例1：使單一細胞分散時的細胞增殖試驗將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸于超純水(Milli-Q水)中使其為0.3％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。使用該溶液配制培養(yǎng)基組合物，該培養(yǎng)基組合物在含有10％(v/v)胎牛血清及10ng/mL促血小板生成素(WAKO公司制)的IMDM培養(yǎng)基(Gibco公司制)中添加有最終濃度0.015％(w/v)的脫酰基結冷膠。接著，將人白血病細胞株UT7/TPO接種至上述添加有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物中使其為20000個細胞/mL，然后以每1孔5mL注入到6孔平底微量培養(yǎng)板(Corning公司制)的孔中。同樣地，將人子宮頸癌細胞株HeLa(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)以20000個細胞/mL的量接種至培養(yǎng)基組合物(該培養(yǎng)基組合物在含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中添加有0.015％(w/v)的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制))中，然后，以每1孔5mL注入到6孔平底微量培養(yǎng)板(Corning公司制)的孔中。將這些細胞混懸液在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)以靜置狀態(tài)培養(yǎng)3天。然后，將一部分的培養(yǎng)液回收，添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞數(shù)。其結果確認到，UT7/TPO細胞及HeLa細胞通過使用上述培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)均勻地培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中增殖。懸浮靜置培養(yǎng)3天后的UT7/TPO細胞及HeLa細胞的細胞數(shù)如表4所示。[表4]UT7/TPO細胞HeLa細胞細胞數(shù)(×10000/mL)3840參考試驗例2：培養(yǎng)來自細胞株的球體時的細胞增殖試驗將人肝癌細胞株HepG2(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)混懸在含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中使其為250000個/mL，將該混懸液10mL接種至EZSPHERE(旭硝子公司制)后，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)培養(yǎng)7天。同樣地，將人子宮頸癌細胞株HeLa(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)混懸在含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中使其為250000個/mL，將10mL該混懸液接種至EZSPHERE(旭硝子公司制)后，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)培養(yǎng)7天。將此處所得的各個細胞株的球體(直徑100～200μm)的混懸液2.5mL進行離心處理(200G、5分鐘)，使球體沉淀并除去上清液。接著，向該球體(約800個)中添加上述培養(yǎng)基10mL使其混懸后，移至平底管(BMEQUIPMENT公司制)中。同樣地，使用向上述培養(yǎng)基中添加0.015％(w/v)的脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)而得的培養(yǎng)基組合物，制作球體的混懸液，移至平底管(BMEQUIPMENT公司制)中。需要說明的是，添加有0.015％(w/v)的脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物可以如下配制：首先將脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其為0.3％(w/v)，然后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘后，以1/20稀釋，添加到含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，由此進行配制。于37℃在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)將上述球體混懸液靜置培養(yǎng)3天后，添加2倍容量的培養(yǎng)基進行離心處理(200G、5分鐘)，由此使球體沉淀，除去上清液。此處，分取一部分球體，用光學顯微鏡(OLYMPUS公司制、CK30－F100)觀察其形狀。接著，用10mLPBS將所回收的球體清洗1次后，添加1mL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。添加9mL上述培養(yǎng)基后，通過離心處理(200G、5分鐘)回收細胞。向此處所得的細胞混懸液2mL的一部分中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞及死細胞的數(shù)量。其結果確認到，HepG2細胞及HeLa細胞的球體通過使用上述培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)，采用該培養(yǎng)基組合物，細胞高效地增殖。并且確認到，與現(xiàn)有的培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物在使細胞增殖時死細胞的比例少、細胞增殖的促進效果優(yōu)異。此時，在現(xiàn)有的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的球體沉淀至培養(yǎng)容器的底面。進而，采用光學顯微鏡觀察所培養(yǎng)的球體的形狀，結果在該培養(yǎng)基組合物中未發(fā)現(xiàn)球體之間的締合，相對于此，在現(xiàn)有的培養(yǎng)基中觀察到球體之間的締合。關于HepG2細胞及HeLa細胞，將采用不含脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)時的細胞數(shù)作為1，將此時的相對細胞數(shù)示于表5。另外，將采用不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)時的死細胞率(死細胞數(shù)/活細胞數(shù))作為1，將此時的相對死細胞率示于表6。另外，在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)HepG2細胞及HeLa細胞的球體時的懸浮狀態(tài)，分別如圖1及圖2所示。進而，所培養(yǎng)的HeLa細胞的球體的形狀如圖3所示。[表5]脫?；Y冷膠HepG2細胞HeLa細胞無相對細胞數(shù)1.01.0有相對細胞數(shù)1.71.5[表6]脫酰基結冷膠HepG2細胞HeLa細胞無相對死細胞率1.01.0有相對死細胞率0.50.5參考試驗例3：將附著在微載體上的細胞株進行培養(yǎng)時的細胞增殖試驗將微載體Cytodex(注冊商標)1(GEHealthcareLifeSciences公司制)混懸在PBS中使其為0.02g/mL，靜置1晩后，棄去上清液，用新的PBS將該微載體清洗2次。然后，再次在PBS中混懸使其為0.02g/mL，于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。接著，將該微載體用70％乙醇清洗2次、用PBS清洗3次，然后，混懸在含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中使其為0.02g/mL。使用該微載體混懸液配制含有120mg的Cytodex(注冊商標)1及4000000個HepG2細胞的DMEM培養(yǎng)基(含有10％(v/v)胎牛血清)20mL，在預先用硅涂布劑(AsahiTechnoGlass公司制)處理過的燒杯中，將該細胞混懸液于37℃一邊用攪拌器攪拌(100rpm)6小時一邊進行培養(yǎng)。此處，采用顯微鏡確認到HepG2細胞粘附在微載體上。接著，將粘附有細胞的微載體用含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基清洗2次，混懸在3mL相同培養(yǎng)基中。在含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基20mL或在向該培養(yǎng)基中添加了0.015％(w/v)的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)而得到的培養(yǎng)基組合物中，分別添加上述微載體混懸液300μL，于37℃培養(yǎng)3天。此時，不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)液一邊用攪拌器攪拌(100rpm)一邊進行培養(yǎng)。培養(yǎng)后，用顯微鏡確認了細胞在微載體上的附著狀態(tài)后，通過離心處理(200G、5分鐘)使微載體沉淀。用10mL的PBS清洗該微載體后，添加1mL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。進而，添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基9mL后，使用網(wǎng)尺寸70μm的細胞篩網(wǎng)(CellStrainer)(BDFALCON公司制)除去微載體。通過離心處理(200G、5分鐘)從此處所得的濾液中回收細胞。將該細胞混懸在500μL的培養(yǎng)基中，向其一部分中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞數(shù)。其結果，不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)液含有123,000個細胞，含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)液含有1,320,000個細胞。如上所述，對于含有該特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物，確認到了即使使用微載體進行細胞培養(yǎng)，也可以獲得比現(xiàn)有培養(yǎng)基優(yōu)異的細胞增殖促進效果。使用含有該特定化合物的結構體的培養(yǎng)基組合物、實施微載體培養(yǎng)3天時的HepG2細胞的附著狀態(tài)如圖4所示。參考試驗例4：使用來自細胞株的球體的細胞懸浮試驗將黃原膠(KELTROLCG、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其濃度為1％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解。使用該水溶液，配制黃原膠的最終濃度為0.1、0.15、0.2％(w/v)的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。另外，以90℃對含有0.2％(w/v)的κ－卡拉膠(GENUGELWR-80-J、三晶株式會社制)及0.2％(w/v)的刺槐豆膠(GENUGUMRL-80-J、三晶株式會社制)的水溶液進行加熱而進行配制，使用該水溶液配制含有0.03、0.04、0.05％(w/v)的κ－卡拉膠和刺槐豆膠的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Sigma公司制)組合物。使用與參考試驗例2相同的方法，制作HeLa細胞的球體，向上述配制的培養(yǎng)基1mL中分別添加數(shù)十個球體后，于37℃靜置1小時，目視觀察球體細胞的懸浮狀態(tài)。其結果確認到，在上述全部培養(yǎng)基組合物中，HeLa細胞的球體均以懸浮狀態(tài)維持。進而確認到，向該細胞混懸液中添加等量的培養(yǎng)基后，通過離心處理(300至400G、5分鐘)，HeLa細胞的球體沉淀，可被回收。在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)HeLa細胞的球體時的懸浮狀態(tài)分別如圖5所示。另外，采用與分析例1相同的方法測定的粘度如表7、8所示。[表7][表8]參考試驗例5：使用經(jīng)過濾器過濾的培養(yǎng)基組合物的細胞懸浮試驗使用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.015％脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。接著，將1mL該培養(yǎng)基組合物分別使用70μm、40μm的過濾器(BDFALCON公司制)、30μm、20μm的過濾器(ASONE公司制)、10μm的過濾器(Partec公司制)、5μm、1.2μm、0.45μm、0.2μm的過濾器(SartoriusStedimJapan公司制)進行過濾。向上述濾液中添加約數(shù)十個使用與參考試驗例2相同的方法制作的HepG2細胞的球體，然后，于37℃靜置1小時，目視觀察球體細胞的懸浮狀態(tài)。其結果確認到，HepG2細胞的球體能夠在透過了10μm以上的過濾器的培養(yǎng)基組合物中維持懸浮狀態(tài)，但在透過了5μm以下過濾器的培養(yǎng)基組合物中沉淀。進而確認到，對于這里處于懸浮狀態(tài)的HepG2細胞的球體，通過在室溫下進行300G、5分鐘的離心處理、或者通過在加入等量培養(yǎng)基后在室溫下進行200G、5分鐘的離心處理，使其沉淀，從而能夠被回收。參考試驗例6：球體形成試驗采用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.01％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)及10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)的組合物。接著，添加HeLa細胞使其濃度為1000個/mL后，注入到24孔培養(yǎng)板(Corning公司制)中。將該培養(yǎng)板于37℃懸浮靜置培養(yǎng)9天后，采用顯微鏡確認球體形成。進而，通過300G、5分鐘的離心處理使球體細胞沉淀，用5mL的PBS清洗1次后，添加100μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。向此處所得的細胞混懸液100μL中添加100μL含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基，向其一部分的細胞混懸液中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞數(shù)。其結果，確認到HeLa細胞增加至170000個/mL。采用該培養(yǎng)基組合物形成的HeLa細胞的球體如圖6所示。參考試驗例7：結構體的光學顯微鏡觀察將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在純水中使其濃度為0.4％(w/v)后，于90℃加熱攪拌使其溶解。向300mL高型燒杯中加入2倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Aldrich公司制)95mL，于室溫一邊用磁力攪拌器攪拌一邊添加脫?；Y冷膠水溶液5mL，以此狀態(tài)持續(xù)攪拌5分鐘，由此配制得到脫?；Y冷膠最終濃度為0.02％的培養(yǎng)基組合物。進而采用均相混合機(3000rpm)將該培養(yǎng)基組合物攪拌5分鐘。通過光學顯微鏡(KEYENCE公司、BIOREVOBZ-9000)觀察所配制的培養(yǎng)基組合物。所觀察到的結構體如圖7所示。參考試驗例8：粉末培養(yǎng)基和DAG通過混合加熱進行的配制將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)20mg和DMEM/F－12培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司制)1.58g加入到200mL錐形瓶中，注入純水100mL。于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘，配制得到脫?；Y冷膠濃度為0.02％的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。向配制的培養(yǎng)基中添加葡聚糖珠Cytodex1(大小200μm、GEHealthcareLifeSciences公司制)，目視確認珠的分散狀態(tài)。以懸浮分散狀態(tài)為○、部分沉淀/分散狀態(tài)為△、沉淀狀態(tài)為×，進行評價。結果如表9所示。[表9]參考試驗例9：混合有多糖類的培養(yǎng)基組合物的配制將黃原膠(KELTROLCG、三晶株式會社制)混懸在純水中使其濃度為0.5％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解。同樣地，針對藻酸鈉(DuckalginicacidNSPM、FOODCHEMIFA制)、刺槐豆膠(GENUGUMRL-80-J、三晶株式會社制)、κ－卡拉膠(GENUGELWR-80-J、三晶株式會社制)、迪特膠(KELCOCRETEDG-F、三晶株式會社制)，制作0.5％(w/v)的水溶液。將該水溶液、0.2或0.1％(w/v)脫酰基結冷膠溶液和10倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基混合，于80℃加熱30分鐘。放置冷卻至室溫后，添加7.5％碳酸氫鈉水溶液，配制含有最終濃度為0.01、0.02％(w/v)的脫酰基結冷膠和最終濃度為0.1、0.2、0.3、0.4％(w/v)的其他多糖的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。另外，與上述同樣地配制含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基后，添加甲基纖維素(cP400、WAKO株式會社制)的粉末。在冰浴中攪拌，使甲基纖維素溶解，配制得到含有最終為0.01、0.02％(w/v)的脫?；Y冷膠和最終濃度為0.1、0.2、0.3、0.4％(w/v)的其他甲基纖維素的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。向上述配制的培養(yǎng)基中添加聚苯乙烯珠(大小500－600μm，PolysciencesInc.制)，目視確認珠的分散狀態(tài)。以懸浮分散狀態(tài)為○、部分沉淀/分散狀態(tài)為△、沉淀狀態(tài)為×，進行評價。結果如表10所示。[表10]參考試驗例10：混合有多糖類的培養(yǎng)基組合物的粘度測定采用與參考試驗例9的多糖混合體系相同的方法，配制含有最終濃度為0.005、0.01％(w/v)的脫?；Y冷膠和其他多糖的DMEM/F－12培養(yǎng)基。多糖配制成：黃原膠、藻酸鈉、刺槐豆膠的最終濃度為0.1％(w/v)、甲基纖維素的最終濃度為0.2％(w/v)、κ－卡拉膠和迪特膠的最終濃度為0.05％(w/v)。各個培養(yǎng)基組合物的狀態(tài)以及采用與分析例1相同的方法測定的粘度如表11～16所示。[表11]黃原膠濃度％(w/v)脫?；Y冷膠濃度％(w/v)狀態(tài)粘度(mPa·s)0.10.005液體4.360.10.010液體4.59[表12]藻酸鈉濃度％(w/v)脫酰基結冷膠濃度％(w/v)狀態(tài)粘度(mPa·s)0.10.005液體1.530.10.010液體1.75[表13]刺槐豆膠濃度％(w/v)脫?；Y冷膠濃度％(w/v)狀態(tài)粘度(mPa·s)0.10.005液體1.920.10.010液體2.36[表14][表15][表16]參考試驗例11：改變了2價金屬陽離子濃度的培養(yǎng)基組合物的配制使用不含氯化鈣、硫酸鎂、氯化鎂的DMEM/F－12(D9785、Aldrich制)，與參考試驗例8的方法同樣地配制含有0.02％(w/v)的脫?；Y冷膠的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。另外，配制添加有氯化鈣或添加有硫酸鎂、氯化鎂的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物使最終濃度為DMEM/F－12培養(yǎng)基的規(guī)定量。根據(jù)DMEM/F－12培養(yǎng)基的規(guī)定組成，將各個最終濃度設定為：氯化鈣0.116g/L、硫酸鎂0.049g/L、氯化鎂0.061g/L。向配制的培養(yǎng)基組合物中加入葡聚糖珠Cytodex1(GEHealthcareLifeSciences公司制)，在2天后通過目視確認珠的分散。以懸浮分散狀態(tài)為○、部分沉淀/分散狀態(tài)為△、沉淀狀態(tài)為×，進行評價。結果如表17所示。[表17]參考試驗例12：隨后添加了2價金屬陽離子的培養(yǎng)基組合物的配制將0.1％(w/v)脫?；Y冷膠溶液、5倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(不含氯化鈣、硫酸鎂、氯化鎂；D9785；Aldrich制)、氯化鈣1167mg、硫酸鎂489mg、氯化鎂287mg溶解于300mL純水中，配制鹽溶液。向200mL的高型燒杯中加入脫酰基結冷膠水溶液和純水，使用錨型攪拌葉片以200rpm攪拌溶液。添加將培養(yǎng)基液和水混合而成的A液，以此狀態(tài)攪拌10分鐘。接下來，添加鹽溶液，進而添加7.5％碳酸氫鈉水溶液1.6mL，配制含有最終濃度為0.02％的脫?；Y冷膠的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。各液的混合量如表所示。配制4小時后，對6個培養(yǎng)基組合物進行聚苯乙烯珠和Cytodex1的分散評價。結果如表18、19所示。[表18][表19]參考試驗例13：各種培養(yǎng)基組合物的配制配制0.1％(w/v)脫酰基結冷膠溶液和高濃度的培養(yǎng)基液。作為高濃度的培養(yǎng)基液，配制10倍濃度的MEM(M0268、Aldrich制)、RPMI－1640(R6504，Aldrich制)和5倍濃度的DMEM(高壓滅菌相應的培養(yǎng)基、Nissui制)。將0.1％(w/v)脫酰基結冷膠溶液、與各高濃度培養(yǎng)基、濃度調(diào)節(jié)用純水混合，于80℃加熱30分鐘。放置冷卻至室溫后，添加7.5％碳酸氫鈉水溶液，分別配制含有最終濃度為0.01、0.02、0.03％(w/v)的脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基組合物。對所配制的6個培養(yǎng)基組合物進行評價，將聚苯乙烯珠和葡聚糖珠Cytodex1的懸浮分散狀態(tài)評價為○，將部分沉淀/分散狀態(tài)評價為△，將沉淀狀態(tài)評價為×。結果如表20、21所示。[表20][表21]參考試驗例14：含有脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基組合物的粒度分布測定根據(jù)參考例1，配制含有0.038％(w/v)的脫?；Y冷膠的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。使用均相混合機以3000rpm和6000rpm攪拌1分鐘，配制培養(yǎng)基。使用BeckmanCoulte(株)制Multisizer4(根據(jù)庫爾特原理的精密粒度分布測定裝置)測定該培養(yǎng)基組合物的粒度分布，求出體積標準粒度分布的中值粒徑(d50)。結果如表22所示。[表22]培養(yǎng)基配制時的均相混合機轉速d50(μm)3000rpm1.7096000rpm1.499參考試驗例15：脫酰基結冷膠的磷酸化秤量脫?；Y冷膠1g和純水40mL置于玻璃制的100mL試驗管中，于100℃加熱30分鐘，配制混懸液。向該混懸液中添加磷酸水溶液(85％)1g，加熱回流5小時。然后，一邊攪拌12小時一邊放置冷卻至室溫，將由此得到的白色混懸液注入99％乙醇(500mL)中。將產(chǎn)生的綿狀白色固體過濾后使其干燥，由此得到淡褐色固體(0.4g)，為脫酰基結冷膠的磷酸化物。通過傅里葉變換紅外光譜分析(株式會社島津制作所制、IR-Prestage21)確認了已導入磷酸基(1700cm－1；P－OH、1296cm－1、1265cm－1；P＝O)。通過微波加熱分解裝置(ETHOSTC,MilestoneGeneral制)將淡褐色固體分解后，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜分析儀(ICP-OES)(SPS5520,SIINanoTechnology公司制)測定磷原子的含有率，其結果為3.5wt％(n＝2)。參考試驗例16：含有磷酸化的脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物的配制將任意量的磷酸化的脫酰基結冷膠(30mg)和DMEM/F－12培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司制)1.56g加入200mL錐形瓶中，注入純水100mL。于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘，配制脫?；Y冷膠濃度為0.03％的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。向所配制的培養(yǎng)基中添加葡聚糖珠Cytodex1(GEHEALTHCAREBIOSCIENCES公司制)，目視確認珠的分散狀態(tài)。在0.03％(w/v)的磷酸化的脫?；Y冷膠濃度下，確認到珠的分散狀態(tài)。參考試驗例17：含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物的配制按照下表所示的比例添加脫?；Y冷膠水溶液和培養(yǎng)基溶液，進行混合，配制脫?；Y冷膠濃度為0.02％的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物，對此時的聚苯乙烯珠(大小500－600μm、PolysciencesInc.制)的分散狀態(tài)進行評價。結果如表23、24所示。通過靜置1天以上，在所有的條件下苯乙烯珠均分散。[表23]脫酰基結冷膠/純水DMEM/F12粉末培養(yǎng)基/純水放置時間20mg/10mL1.56g/90mL5分鐘20mg/20mL1.56g/80mL5分鐘20mg/30mL1.56g/70mL5分鐘20mg/40mL1.56g/60mL6小時20mg/50mL1.56g/50mL6小時20mg/60mL1.56g/40mL6小時20mg/70mL1.56g/30mL6小時20mg/80mL1.56g/20mL1天20mg/90mL1.56g/10mL1天將“DMEM/F12粉末培養(yǎng)基/純水”加入到“脫?；Y冷膠/純水”中。[表24]脫?；Y冷膠/純水DMEM/F12粉末培養(yǎng)基/純水放置時間20mg/10mL1.56g/90mL5分鐘20mg/20mL1.56g/80mL5分鐘20mg/30mL1.56g/70mL1小時20mg/40mL1.56g/60mL6小時20mg/50mL1.56g/50mL6小時20mg/60mL1.56g/40mL6小時20mg/70mL1.56g/30mL1天20mg/80mL1.56g/20mL1天20mg/90mL1.56g/10mL1天將“脫?；Y冷膠/純水”加入到“DMEM/F12粉末培養(yǎng)基/純水”中。參考試驗例18：使用過濾器的培養(yǎng)基組合物的配制將脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其最終濃度為0.02或0.04％(w/v)后，于90℃加熱30分鐘或者于121℃加熱20分鐘，由此使其溶解。進而，將該水溶液100mL用孔徑為0.22μm的聚醚砜制膜過濾器(Corning公司制)過濾。接著，將該濾液與2至4倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(SigmaAldrich公司制)混合后，用MildMixer(SI－24、TAITEC公司制)振蕩1小時，分別配制含有最終濃度為0.01或0.015％(w/v)的脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基組合物(例如，將0.02％(w/v)脫酰基結冷膠水溶液和2倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基各25mL進行混合，配制0.01％(w/v)的脫?；Y冷膠培養(yǎng)基組合物50mL)。采用與參考試驗例2相同的方法制作HepG2細胞的球體，向上述配制的培養(yǎng)基1mL中分別添加數(shù)十個球體后，于37℃靜置，目視觀察1小時及1晚后的球體細胞的懸浮狀態(tài)。其結果確認到，HepG2細胞的球體在上述全部的培養(yǎng)基組合物中均能維持懸浮狀態(tài)。進而，在全部培養(yǎng)基組合物中確認到：通過添加2倍容量的培養(yǎng)基后將該細胞混懸液進行離心處理(500G、5分鐘)，由此，HepG2細胞的球體沉淀，細胞能夠被回收。通過目視確認1晩后的球體的分散狀態(tài)時，將懸浮分散狀態(tài)評價為○，將部分沉淀/分散狀態(tài)評價為△，將沉淀狀態(tài)評價為×，其結果如表25所示。[表25]參考試驗例19：培養(yǎng)來自細胞株的球體時的細胞增殖試驗將人胚腎細胞株HEK293(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)混懸在含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中使其濃度為250000個/mL，將該混懸液10mL接種至EZSPHERE(旭硝子公司制)，然后，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)培養(yǎng)2天。將此處所得的HEK293細胞的球體(直徑100～200μm)的混懸液10mL進行離心處理(200G、5分鐘)，使球體沉淀并除去上清液后，混懸于1mL中。接著，向該球體混懸液200μL(細胞數(shù)約200000個)中添加上述培養(yǎng)基10mL使其混懸后，移至平底管(BMEQUIPMENT公司制)中。同樣地，使用在上述培養(yǎng)基中添加0.015％(w/v)的脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)而得的培養(yǎng)基組合物，制作球體的混懸液，移至平底管(BMEQUIPMENT公司制)。需要說明的是，添加有0.015％(w/v)的脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物如下配制：首先將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其為0.3％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘后，以1/20稀釋，添加到含有10％(v/v)胎牛血清的EMEM培養(yǎng)基中，由此配制而成。于37℃在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)將上述球體混懸液靜置培養(yǎng)5天后，添加2倍容量的培養(yǎng)基進行離心處理(500G、5分鐘)，由此使球體沉淀，除去上清液。接著，將所回收的球體用10mL的PBS清洗1次后，添加1mL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。添加9mL上述培養(yǎng)基后，通過離心處理(500G、5分鐘)回收細胞。向此處所得的細胞混懸液2mL的一部分中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞及死細胞的數(shù)量。需要說明的是，作為對照，制作不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物，進行相同的實驗。其結果確認到，HEK293細胞的球體通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中細胞高效地增殖。并且確認到，與不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物相比，該培養(yǎng)基組合物在使細胞增殖時死細胞的比例較少，細胞增殖的促進效果優(yōu)異。此時，采用現(xiàn)有的培養(yǎng)基培養(yǎng)的球體沉淀至培養(yǎng)容器的底面。關于HEK293細胞，將采用不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基培養(yǎng)時的細胞數(shù)作為1，將此時的相對細胞數(shù)示于表26。另外，將采用不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基培養(yǎng)時的死細胞率(死細胞數(shù)/活細胞數(shù))作為1，將此時的相對死細胞率示于表27。[表26]脫?；Y冷膠HEK293細胞無相對細胞數(shù)1.0有相對細胞數(shù)1.6[表27]脫?；Y冷膠HEK293細胞無相對死細胞率1.0有相對死細胞率0.3參考試驗例20：培養(yǎng)昆蟲細胞時的細胞增殖試驗將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸于超純水(Milli-Q水)中使其濃度為0.3％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。使用該溶液，配制在Sf-900(注冊商標)IIISFM培養(yǎng)基(Gibco公司制)中添加最終濃度0.015％(w/v)的脫酰基結冷膠而成的培養(yǎng)基組合物。接著，將來自草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)的Sf9細胞(Gibco公司制)接種至上述添加有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物中使其為100000個細胞/mL，然后，以每1孔1mL注入到24孔平底微量培養(yǎng)板(Corning公司制)的孔中。將這些細胞混懸液在培養(yǎng)箱內(nèi)于25℃靜置培養(yǎng)5天。然后，將一部分培養(yǎng)液回收，添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。需要說明的是，作為對照制作不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物，進行相同的實驗。其結果確認到，Sf9細胞可以通過使用該培養(yǎng)基組合物而以懸浮狀態(tài)均勻地培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中增殖。進而確認到，與不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物相比，該培養(yǎng)基組合物在使細胞增殖時具有優(yōu)異的細胞增殖促進效果。懸浮靜置培養(yǎng)5天后的Sf9細胞的細胞數(shù)如表28所示。[表28]脫?；Y冷膠Sf9細胞數(shù)(×10000)無33.5有47.4參考試驗例21：培養(yǎng)CD34陽性細胞時的細胞增殖試驗將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其濃度為0.3％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。使用該溶液，配制在StemSpanSFEM培養(yǎng)基(StemCellTechnologies公司制)中添加最終濃度0.015％(w/v)的脫?；Y冷膠、20ng/mL的促血小板生成素(WAKO公司制)及100ng/mL的干細胞因子(SCF、WAKO公司制)而得的培養(yǎng)基組合物。接著，將來自人臍帶血的CD34陽性細胞(Lonza公司制)以10000個細胞/mL的量接種至上述的添加了脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物中，然后，以每1孔1mL注入至24孔平底微量培養(yǎng)板(Corning公司制)的孔中。將這些細胞混懸液在37℃下在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置培養(yǎng)7天。然后，回收一部分培養(yǎng)液，添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。另外，向剩余的培養(yǎng)液中添加3倍容量的培養(yǎng)基進行離心處理(500G、5分鐘)，由此使全部的細胞沉淀。需要說明的是，作為對照制作不含脫酰基結冷膠的培養(yǎng)基組合物，進行相同的實驗。其結果確認到，CD34陽性細胞通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)均勻地培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中增殖。進而確認到，與不含脫酰基結冷膠的現(xiàn)有培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物具有同等以上的細胞增殖促進效果。另外確認到，通過離心處理，細胞沉淀，細胞能夠被回收。將采用不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基培養(yǎng)時的細胞數(shù)作為1時，懸浮靜置培養(yǎng)7天后從CD34陽性細胞增殖的細胞的相對細胞數(shù)如表29所示。[表29]脫酰基結冷膠相對細胞數(shù)無1.0有1.2參考試驗例22：球體形成試驗采用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.015％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)及10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)組合物。接著，添加HepG2細胞使細胞濃度為15000個/mL后，向24孔培養(yǎng)板(Corning公司制)中注入1mL。將該培養(yǎng)板于37℃懸浮靜置培養(yǎng)7天后，采用顯微鏡確認球體形成。進而，通過400G、5分鐘的離心處理使球體細胞沉淀，采用5mLPBS清洗1次后，添加100μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。向此處所得的細胞混懸液100μL中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基100μL，向其一部分的細胞混懸液中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，HepG2細胞在該培養(yǎng)基組合物中形成球體，另外細胞數(shù)也增加至80800個/mL。采用該培養(yǎng)基組合物形成的HepG2細胞的球體如圖8所示。參考試驗例23：使用來自細胞株的球體的細胞懸浮試驗將迪特膠(KELKO-CRETEDG、三晶株式會社制)混懸在超純水(Milli-Q水)中使其濃度為0.3％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解。使用該水溶液配制迪特膠的最終濃度為0.1％(w/v)的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。另外，通過于90℃加熱來配制含有0.5％(w/v)的天然型結冷膠(KELCOGELHT、San-EiGenF.F.I.株式會社制)的水溶液，使用該水溶液配制含有0.05、0.1％(w/v)的天然型結冷膠的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Sigma公司制)組合物。采用與參考試驗例2相同的方法制作HeLa細胞的球體，向上述配制的培養(yǎng)基1mL中分別添加數(shù)十個球體后，于37℃靜置1小時，目視觀察球體細胞的懸浮狀態(tài)。其結果確認到，HeLa細胞的球體在上述全部的培養(yǎng)基組合物中均能夠維持在懸浮狀態(tài)。進而確認到，通過對含有0.1％(w/v)的迪特膠的該細胞混懸液進行離心處理(200G、5分鐘)，HeLa細胞的球體沉淀，細胞能夠被回收。參考試驗例24：使用具有細胞粘附能力的磁珠的細胞懸浮試驗1將用層粘連蛋白或纖連蛋白涂布過的GEM(注冊商標、GlobalEukaryoticMicrocarrier、GLSciences株式會社制)的混懸溶液以500μL注入至1.5mL容量的微型試管(Eppendorf公司制)中，使用磁力架(TA4899N12、多摩川精機株式會社制)從上述GEM混懸溶液中集聚GEM并除去介質(zhì)。進而，利用含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)500μL將GEM清洗2次后，混懸至相同培養(yǎng)基500μL中。將該混懸液注入至細胞低粘附板即Sumilon細胞緊密板(celltightplate)24F(SUMITOMOBAKELITE株式會社制)中，每1孔50μL。接著，添加另外配制的HepG2細胞使其為250000個細胞/mL，采用相同培養(yǎng)基使最終容量為500μL/孔。手動攪拌該細胞混懸液后，將該板在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置一晚。采用顯微鏡確認細胞粘附在GEM上后，將細胞混懸液移至1.5mL容量的微型試管(Eppendorf公司制)中，使用上述磁力架集聚附著有細胞的GEM，除去上清液。采用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.015％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)及10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)的組合物。向上述配制的附著有HepG2細胞的GEM(涂布有層粘連蛋白或纖連蛋白)中添加該培養(yǎng)基組合物1mL或不含脫酰基結冷膠的相同培養(yǎng)基1mL，使其混懸后，移至Sumilon細胞緊密板24F。接著，將該板在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置6天，將細胞培養(yǎng)液移至1.5mL容量的微型試管(Eppendorf公司制)中，一邊在上述磁力架上緩緩地吸液一邊使附著有細胞的GEM集聚，除去上清液。用1mLPBS將該GEM清洗1次，添加200μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫10分鐘。向此處所得的細胞混懸液200μL中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基800μL，向其一部分的細胞混懸液中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，粘附有HepG2細胞的GEM通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中細胞高效地增殖。并且確認了，與不含脫?；Y冷膠的現(xiàn)有培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物具有優(yōu)異的細胞增殖促進效果。另外確認到，通過使用磁力能夠從該培養(yǎng)基組合物中集聚附著有HepG2細胞的GEM，進而能夠從該GEM中回收HepG2細胞。采用含有或不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基將HepG2細胞在GEM上培養(yǎng)6天，此時的細胞數(shù)如表30所示。另外，將附著有HepG2細胞的層粘連蛋白涂布GEM在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)時的懸浮狀態(tài)如圖9所示。[表30]參考試驗例25：使用具有細胞粘附能力的磁珠的細胞懸浮試驗2與參考試驗例24同樣地，將用纖連蛋白涂布的GEM(注冊商標、GlobalEukaryoticMicrocarrier、GLSciences株式會社制)混懸在MF－Medium(注冊商標)間充質(zhì)干細胞增殖培養(yǎng)基(東洋紡株式會社制)中。將該混懸液以每1孔50μL注入至細胞低粘附板即Sumilon細胞緊密板24F(SUMITOMOBAKELITE株式會社制)中。接著，添加另外配制的來自人骨髄的間充質(zhì)干細胞(CellApplications公司制)使其濃度為250000個細胞/mL，與參考試驗例24同樣地使該板在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置一晚，配制粘附有間充質(zhì)干細胞的GEM。采用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.015％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)的MF－Medium(注冊商標)間充質(zhì)干細胞增殖培養(yǎng)基(東洋紡株式會社制)的組合物。向上述配制的附著有間充質(zhì)干細胞的GEM(涂布有纖連蛋白)中分別添加該培養(yǎng)基組合物或不含脫?；Y冷膠的相同培養(yǎng)基1mL，使其混懸后，移至Sumilon細胞緊密板24F。接著，將該板在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置4天后，將細胞培養(yǎng)液移至1.5mL容量的微型試管(Eppendorf公司制)中，在上述磁力架上一邊緩緩地吸液一邊使附著有細胞的GEM集聚，除去上清液。用1mLPBS將該GEM清洗1次，添加200μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫10分鐘。向此處所得的細胞混懸液200μL中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基800μL，向其一部分的細胞混懸液中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，粘附有間充質(zhì)干細胞的GEM通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中細胞高效地增殖。并且確認到，與不含脫?；Y冷膠的現(xiàn)有培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物具有優(yōu)異的細胞增殖促進效果。另外確認到，通過使用磁力，能夠從該培養(yǎng)基組合物中將附著有間充質(zhì)干細胞的GEM集聚，進而能夠從該GEM回收間充質(zhì)干細胞。在含有或不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基中將間充質(zhì)干細胞在GEM上培養(yǎng)4天時的細胞數(shù)如表31所示。[表31]脫?；Y冷膠間充質(zhì)干細胞數(shù)(×10000/mL)無11.3有20.9參考試驗例26：使用藻酸珠的細胞懸浮試驗以下試驗，基于株式會社PGRESEARCH制藻酸三維培養(yǎng)試劑盒的方法實施。將另外配制的HepG2細胞添加至藻酸鈉溶液(株式會社PGRESEARCH制)2.5mL中使其為400000個細胞/mL，進而以5μg/mL的量添加人重組層粘連蛋白511(株式會社Veritas制)，配制細胞混懸液。對于該細胞混懸液，用裝有探針的5mL注射器(泰爾茂株式會社制)回收后，向該注射器上安裝22G注射針(泰爾茂株式會社制)。接著，向各添加有2mL氯化鈣水溶液(株式會社PGRESEARCH制)的24孔平底微量培養(yǎng)板(株式會社PGRESEARCH制)的孔中，各添加10滴該細胞混懸液。于室溫靜置在10分鐘后確認形成藻酸珠，然后，除去氯化鈣溶液，添加2mLPBS，于室溫靜置15分鐘。進而，除去PBS后，添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)2mL，于室溫靜置15分鐘。除去培養(yǎng)基后，向各孔中分別添加1mL的采用與參考試驗例2相同的方法配制的含有0.03％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)及10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)的培養(yǎng)基組合物或者不含脫?；Y冷膠的相同培養(yǎng)基，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)靜置培養(yǎng)8天。需要說明的是，在培養(yǎng)第四天進行培養(yǎng)基更換。使用1mL容量的吸頭(tip)將培養(yǎng)的藻酸珠移至1.5mL容量的微型試管(Eppendorf公司制)中后，向各管中添加檸檬酸鈉溶液(株式會社PGRESEARCH制)1mL，于室溫攪拌15分鐘，使藻酸珠溶解。接著，通過300G、3分鐘的離心處理使細胞沉淀，除去上清液。向該細胞中添加200μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制，于37℃保溫5分鐘。向此處所得的細胞混懸液200μL中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基800μL，向其一部分的細胞混懸液中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，包埋有HepG2細胞的藻酸珠通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中細胞高效地增殖。并且確認到，與不含脫酰基結冷膠的現(xiàn)有培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物具有優(yōu)異的細胞增殖促進效果。采用含有或不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基在藻酸珠內(nèi)培養(yǎng)HepG2細胞8天時的細胞數(shù)，如表32所示。另外，在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)包埋有HepG2細胞的藻酸珠時的懸浮狀態(tài)，如圖10所示。[表32]脫?；Y冷膠HepG2細胞數(shù)(×10000/mL)無34.9有51.8參考試驗例27：使用膠原蛋白凝膠膠囊的細胞懸浮試驗將A：組織培養(yǎng)用膠原蛋白Cellmatrix(注冊商標)I‐A型(細胞基質(zhì)，新田明膠株式會社制)、B：10倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基(Aldrich公司制)、C：重構用緩沖液(向0.05N氫氧化鈉溶液100mL中加入碳酸氫鈉2.2g、HEPES(4‐(2‐羥乙基)‐1‐哌嗪乙磺酸))4.77g并進行過濾滅菌而得到)分別地一邊在冰中冷卻一邊進行混合使其比例為A：B：C＝8：1：1。進而，以5μg/mL的量添加人重組層粘連蛋白511(株式會社Veritas制)，配制膠原蛋白混合溶液500μL。向該混合溶液中以200000個細胞/mL的量添加另外配制的HepG2細胞，使用安裝有25G注射針(泰爾茂株式會社制)的1.5mL注射器(泰爾茂株式會社制)將其全部量回收。接著，使用上述注射器，向預先于37℃保溫的添加有10mL含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)的平底管(BMEQUIPMENT公司制)中，逐滴地滴下細胞混懸液。于37℃在水浴中保溫10分鐘，確認形成直徑為2mm左右的無定形的膠原蛋白凝膠膠囊后，采用與參考試驗例2相同的方法添加脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)使其最終濃度為0.04％，輕輕地攪拌，使上述膠囊懸浮。接著，在CO2培養(yǎng)箱(5％CO2)內(nèi)將該管靜置培養(yǎng)5天。向含有膠原蛋白凝膠膠囊的培養(yǎng)液中添加25mLPBS，通過400G、5分鐘的離心處理使膠原蛋白凝膠膠囊沉淀，除去上清液。再次加入25mL的PBS進行離心處理，除去上清液使殘余量為5mL。向該液中加入1％(W/V)的膠原酶L(新田明膠株式會社制)20μL后，于37℃振蕩2小時。確認膠原蛋白凝膠溶解后，加入10mL的PBS，通過400G、5分鐘的離心處理使細胞沉淀，除去上清液。向該細胞中添加1mL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。向此處所得的細胞混懸液中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基4mL，通過400G、5分鐘的離心處理使細胞沉淀，除去上清液。將所得細胞混懸在2mL的與上述相同的培養(yǎng)基中，向其一部分中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，包埋有HepG2細胞的膠原蛋白凝膠膠囊通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中細胞高效地增殖。并且確認到，與不含脫?；Y冷膠的現(xiàn)有培養(yǎng)基相比，該培養(yǎng)基組合物具有優(yōu)異的細胞增殖促進效果。采用含有或不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基在膠原蛋白凝膠膠囊內(nèi)培養(yǎng)HepG2細胞5天時的細胞數(shù)如表33所示。另外，在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)包埋有HepG2細胞的膠原蛋白凝膠膠囊時的懸浮狀態(tài)如圖11所示。[表33]脫酰基結冷膠HepG2細胞數(shù)(×10000/mL)無62.4有106.0參考試驗例28：使用過濾器的球體的回收試驗采用與參考試驗例2相同的方法，配制含有0.015％的脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)及10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)的組合物。另外，作為對照，配制不含脫?；Y冷膠的與上述同樣的培養(yǎng)基。采用與參考試驗例2相同的方法制作HepG2細胞的球體，向上述配制的培養(yǎng)基1mL中分別添加球體使細胞數(shù)為86000個后，于37℃靜置1小時，目視觀察球體細胞的懸浮狀態(tài)。進而，在網(wǎng)尺寸為40μm的細胞篩網(wǎng)(Becton·DickinsonandCompany制)上添加該細胞混懸液，將球體捕捉至過濾器上。接著，通過從過濾器的內(nèi)面流入10mL的PBS，從而將球體回收至15mL管中，通過300G、5分鐘的離心處理使球體沉淀。除去上清液后，向球體中添加500μL的胰蛋白酶－EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(WAKO公司制)，于37℃保溫5分鐘。向此處所得的細胞混懸液中添加含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基1mL，向其一部分中添加相同量的臺盼藍染色液(Invitrogen公司制)后，采用血細胞計數(shù)儀(ERMAINC.制)測定活細胞的數(shù)量。其結果確認到，HepG2細胞的球體能夠在上述培養(yǎng)基組合物中以懸浮狀態(tài)維持。進而確認到，通過對含有0.015％的脫酰基結冷膠的該球體混懸液進行過濾器處理，對于HepG2細胞的球體而言，能夠以與不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基相同的回收率回收細胞。將使用不含脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基采用過濾器回收的HepG2細胞數(shù)設為1時的、從含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基回收的相對的細胞數(shù)如表34所示。[表34]脫?；Y冷膠相對的HepG2細胞數(shù)無1.0有1.1參考試驗例29：使用各種多糖類的混合劑的球體細胞懸浮試驗采用與參考試驗例9相同的方法，將黃原膠(KELTROLCG、三晶株式會社制)、藻酸鈉(DuckalginicacidNSPM、FOODCHEMIFA制)、刺槐豆膠(GENUGUMRL-80-J、三晶株式會社制)、甲基纖維素(cP400、WAKO株式會社制)、κ－卡拉膠(GENUGELWR-80-J、三晶株式會社制)、果膠(GENUpectinLM-102AS、三晶株式會社制)或迪特膠(KELCOCRETEDG-F、三晶株式會社制)與脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)組合進行混合，配制DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。采用與參考試驗例2相同的方法制作HepG2細胞的球體，向上述配制的培養(yǎng)基1mL中分別添加數(shù)十個球體后，于37℃靜置，目視觀察1小時及1晚后的球體細胞的懸浮狀態(tài)。其結果確認到，HepG2細胞的球體在上述全部的培養(yǎng)基組合物中均能夠以懸浮狀態(tài)維持。進而確認到，在全部的培養(yǎng)基組合物中，通過在添加2倍容量的培養(yǎng)基后對該細胞混懸液進行離心處理(500G、5分鐘)，HepG2細胞的球體沉淀，細胞能夠被回收。目視確認1晩后的球體的分散狀態(tài)時，以懸浮分散狀態(tài)為○、以部分沉淀/分散狀態(tài)為△、以沉淀狀態(tài)為×進行評價，其結果如表35及表36所示。需要說明的是，表中的－表示未實施。[表35][表36]珠與細胞的分散性比較1針對上述(比較例)配制的含有脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基和含有甲基纖維素的培養(yǎng)基，將葡聚糖珠Cytodex(注冊商標)1(GEHealthcareLifeSciences公司制)與HeLa細胞球體的分散狀態(tài)進行比較。結果如表中所示。由于Cytodex1與HeLa細胞球體的分散狀態(tài)密切相關，所以能夠將Cytodex1作為細胞球體模型使用。[表37][表38]珠與細胞的分散性比較2針對采用參考試驗例9配制的含有多糖及脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基，將聚苯乙烯珠(大小500－600μm、PolysciencesInc.制)與HepG2細胞球體的分散狀態(tài)進行比較。將懸浮分散狀態(tài)評價為○，將部分沉淀/分散狀態(tài)評價為△，將沉淀狀態(tài)評價為×。結果如表中所示。由于聚苯乙烯珠與HepG2細胞球體的分散狀態(tài)密切相關，所以能夠將聚苯乙烯珠用作細胞球體模型。[表39]參考試驗例30：來自水稻的植物愈傷組織的懸浮培養(yǎng)試驗將通過鹽水選擇而精選出的50粒完全成熟的日本晴稻種(購自湖東農(nóng)業(yè)協(xié)同組合)移至50mL聚苯乙烯管(BDFALCON公司制)，用50mL滅菌水進行清洗后，在30mL的70％乙醇水中攪拌1分鐘。除去乙醇水后，添加30mL的KitchenHaiter(花王株式會社制)，攪拌1小時。將KitchenHaiter除去后，用50mL滅菌水清洗4次。將此處已滅菌的種子以1.5mL/孔(24孔平底微量培養(yǎng)板(Corning公司制))播種(日語：“置床”)至含有2μg/mL的2，4－二氯苯氧乙酸(SigmaAldrich公司制)及瓊脂的Murashige&Skoog基礎培養(yǎng)基(M9274、SigmaAldrich公司制)上。在30℃、16小時暗處/8小時暗處的條件下培養(yǎng)3周，收取在種子的胚囊上增殖的奶油色的愈傷組織(1～2mm)。將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸至超純水(Milli-Q水)中使其為0.3％(w/v)后，于90℃一邊加熱一邊攪拌而溶解，將該水溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。使用該溶液，在含有2μg/mL的2，4－二氯苯氧乙酸(SigmaAldrich公司制)的Murashige&Skoog基礎培養(yǎng)基(M9274、SigmaAldrich公司制)中添加最終濃度為0.03％(w/v)的脫?；Y冷膠，配制成培養(yǎng)基組合物。將15個上述配制的愈傷組織添加至10mL/平底管的該培養(yǎng)基組合物中(BMEQUIPMENT公司制)，于25℃振蕩培養(yǎng)7天。其結果確認到，來自水稻的愈傷組織通過使用該培養(yǎng)基組合物而能夠以懸浮狀態(tài)進行培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中愈傷組織能被維持。在該培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自水稻的愈傷組織時的懸浮狀態(tài)如圖12所示。實施例1除2價鹽DAG的配制方法(EDTA·2Na處理NaOH中和)向300mL茄型燒瓶中加入脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)1.0g、乙二胺四乙酸二鈉(純正化學株式會社制)0.74g、及純水200mL使其混懸，在設定為110℃的油浴中加熱30分鐘。于室溫放置冷卻1小時后，使用1N的氫氧化鈉水溶液，一邊用pH試紙確認一邊進行中和。將該中和溶液一點一點地添加到已加有200mL異丙基醇的500mL燒杯中。用58μm的網(wǎng)將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，從而除去水分，通過將所得的固體在設定為50℃的真空烘箱中干燥，由此得到目標固體0.86g。實施例2除2價鹽DAG的配制方法(EDTA·2Na處理KOH或LiOH中和)向300mL茄型燒瓶中加入脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)1.0g、乙二胺四乙酸二鈉(純正化學株式會社制)0.74g、及純水200mL使其混懸，在設定為110℃的油浴中加熱30分鐘。于室溫放置冷卻1小時后，使用1N氫氧化鉀或氫氧化鋰水溶液，一邊用pH試紙確認一邊進行中和。將該中和溶液一點一點地加入到已添加有200mL異丙基醇的500mL燒杯中。通過用58μm的網(wǎng)將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，從而除去水分，在設定為50℃的真空烘箱中干燥所得的固體，由此，通過氫氧化鉀中和得到0.88g的白色固體、通過氫氧化鋰中和得到1.04g的白色固體。實施例3除2價鹽DAG的配制方法(氫型陽離子交換樹脂、分批式)在200mL茄型燒瓶中添加脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)0.5g及純水100mL使其混懸，在設定為110℃的油浴中加熱30分鐘。放置冷卻至50℃后，加入陽離子交換樹脂Dowex50×8(DowChemical株式會社制)10g，一邊保持在50℃以上一邊用氫氧化鉀水溶液中和。于室溫放置冷卻1小時后，將該中和溶液一點一點地加入到已添加有200mL異丙基醇的500mL燒杯中。通過用58μm的網(wǎng)將所產(chǎn)生的懸浮性的固態(tài)成分收緊，從而除去水分，在設定為50℃的真空烘箱中干燥所得固體，由此得到目標固體0.31g。實施例4除2價鹽DAG的配制方法(鈉型陽離子交換樹脂、柱式)將50mL的0.5％脫?；Y冷膠水溶液經(jīng)1小時流入到填充有5mL離子交換樹脂的柱中。離子交換樹脂使用鈉型的DOWEX50Wx8(DowChemical株式會社)、SumichelateMC700(SUMIKACHEMTEX公司制)、DuoliteC467(SUMIKACHEMTEX公司制)。將洗脫液滴入200mL異丙基醇中，通過過濾收集所析出的凝膠狀固體。通過用58μm的網(wǎng)將所產(chǎn)生的凝膠狀固體收緊，從而除去水分，在設定為50℃的真空烘箱中干燥所得固體，由此得到白色固體。向白色固體20mg中加入超純水2mL使白色固體濃度為1％，于室溫(25℃)渦流處理1小時，調(diào)查向水中的溶解性。白色固體的產(chǎn)量及溶解試驗的結果如下所示。DuoliteC467的金屬定量結果將樣品溶液適當?shù)叵♂專秒姼旭詈系入x子體發(fā)光分光分析裝置(ICP-OES；SPS5520、SIINanoTechnology公司制)進行定量。[表40][表41]固體產(chǎn)量離子交換樹脂產(chǎn)量DOWEX50Wx8處理184mgSumichelateMC700處理205mgDuoliteC467處理213mg[表42]溶解試驗離子交換樹脂溶解/不溶未處理脫?；Y冷膠不溶DOWEX50Wx8處理溶解SumichelateMC700處理溶解DuoliteC467處理溶解實施例5除2價鹽DAG的配制方法(鈉型陽離子交換樹脂、分批式)加入200mL的0.5％脫?；Y冷膠水溶液和5mL量的DuoliteC467，一邊不時地攪拌一邊于70℃靜置24小時。通過抽吸過濾，除去DuoliteC467，將濾液滴入異丙基醇中。通過過濾獲得所析出的凝膠狀固體，于50℃真空干燥。向白色固體20mg中加入超純水2mL使白色固體濃度為1％，于室溫(25℃)進行30分鐘渦流處理后，溶解。DuoliteC467的金屬定量結果將樣品溶液適當稀釋，采用電感耦合等離子體發(fā)光分光分析裝置(ICP-OES；SPS5520、SIINanoTechnology公司制)進行定量。[表43]實施例6除2價鹽DAG的配制方法(鈉型陽離子交換樹脂、柱式、通過噴霧干燥法進行的干燥)將脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)25g和離子交換水4975mL加入到燒杯中，加熱95℃使其溶解，制作0.5％脫酰基結冷膠溶液。將脫?；Y冷膠溶液以流速80mL/min通入到填充有500mLDuoliteC467(商品名：SUMIKACHEMTEX社制)的柱中。通過噴霧干燥機FOC－20－LS型(大川原化工機株式會社制)將洗脫液進行噴霧干燥，得到球狀粉體。此時，脫?；Y冷膠溶液以10kg/h供給，噴霧器轉速為10,000－22,000rpm，干燥送風溫度為130℃。通過激光衍射散射法粒度分布計(LS13320：BeckmanCoulte社制)進行測定，結果，粉體粒徑d50為7－12μm。實施例7使用上述DAG的DMEM培養(yǎng)基的制作(過濾滅菌)于室溫(25℃)使實施例1的實施了處理的脫?；Y冷膠17mg溶解于100mL純水中。使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)對該溶液進行滅菌，另一方面，向DMEM的粉末培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司)和碳酸氫鈉中加入與培養(yǎng)基配制時的推薦值的十分之一量相當?shù)募兯?，?0倍的濃度配制10mL水溶液后，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。秤取事先經(jīng)滅菌的脫?；Y冷膠溶液90mL置于經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基瓶中，向其中加入10倍濃度的DMEM培養(yǎng)基后，將瓶搖晃，充分地混合，由此，配制成脫酰基結冷膠濃度為0.015％(w/v)的目標DMEM培養(yǎng)基100mL。實施例8使用上述DAG的DMEM培養(yǎng)基的制作(高壓釜滅菌)于室溫(25℃)使實施例2的實施了處理的脫酰基結冷膠300mg溶解于20mL純水后，采用高壓釜(121℃、20分鐘)滅菌。將RPMI1640液體培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司)198mL加入500mL的高型燒杯中，一邊用均相混合機劇烈攪拌(3000rpm)一邊加入經(jīng)高壓釜處理的上述的脫?；Y冷膠水溶液2mL。用均相混合機進一步地以3000rpm攪拌1分鐘，由此配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的目標RPMI1640培養(yǎng)基202mL。實施例9使A549細胞分散時的細胞增殖試驗將實施例1及2配制的除去了2價離子的脫?；Y冷膠混懸在超純水(Milli-Q水)中使其分別為0.3％(w/v)，然后，于37℃一邊加熱一邊溶解。然后，用孔徑0.22μm的過濾器(Millipore公司制)過濾滅菌。將該溶液添加到含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中，通過吸液將其混合，配制添加有最終濃度0.015％(w/v)的上述脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物。接著，將人肺癌細胞株A549(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)以20000個細胞/mL接種至上述培養(yǎng)基組合物后，以每1孔100μL注入到96孔平底超低粘附表面微量培養(yǎng)板(Corning公司制、#3474)的孔中。需要說明的是，作為比較對象，注入在培養(yǎng)基組合物(其中以相同濃度添加有未實施2價離子除去處理的脫酰基結冷膠)中混懸A549細胞而成的物質(zhì)。另外，作為陰性對照，注入在不含脫酰基結冷膠的同上培養(yǎng)基中混懸A549細胞而成的物質(zhì)。接著，將該培養(yǎng)板在CO2培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)內(nèi)以靜置狀態(tài)培養(yǎng)5天。向培養(yǎng)5天后的培養(yǎng)液中添加WST－8溶液(株式會社同仁化學研究所制)20μL后，于37℃培養(yǎng)100分鐘，采用吸光度計(MolecularDevices公司制、SPECTRAMAX190)測定450nm的吸光度，減去僅培養(yǎng)基時的吸光度，由此測定活細胞數(shù)。其結果確認到，A549細胞通過使用本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物而能夠以細胞凝集塊大小適當?shù)?、均勻地分散的狀態(tài)進行培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中高效地增殖。此時，關于對細胞增殖的效果，在除去了2價離子的脫?；Y冷膠與無處理的脫酰基結冷膠之間未見差異。靜置培養(yǎng)5天后的450nm的吸光度(相當于A549細胞的細胞數(shù))如表44所示。另外，采用光學顯微鏡(OLMPUS公司制、CK30－F100)觀察細胞凝集塊，以懸浮分散狀態(tài)為○、以沉淀狀態(tài)為×，進行評價，結果如表44所示。[表44]實施例10使A549細胞分散時的細胞增殖試驗將實施例4(DuoliteC467處理)中配制的除去了2價離子的脫?；Y冷膠混懸在超純水(Milli-Q水)中使其分別為0.3％(w/v)后，于25℃一邊用攪拌器攪拌一邊將其溶解，采用孔徑0.22μm的過濾器(Millipore公司制)過濾滅菌。將該溶液添加到含有10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(WAKO公司制)中，通過吸液將其混合，配制添加有最終濃度0.015％(w/v)的上述脫?；Y冷膠的培養(yǎng)基組合物。接著，將人肺癌細胞株A549(DSPHARMABIOMEDICAL公司制)以100000個細胞/mL接種至上述的培養(yǎng)基組合物中，然后以每1孔100μL注入到96孔平底超低粘附表面微量培養(yǎng)板(Corning公司制、#3474)的孔中。需要說明的是，作為比較對象，注入在培養(yǎng)基組合物(其中以相同濃度添加有未實施2價離子除去處理的脫?；Y冷膠)中混懸A549細胞而成的物質(zhì)。另外，作為陰性對照，注入在不含脫酰基結冷膠的同上培養(yǎng)基中混懸A549細胞而成的物質(zhì)。接著，將該培養(yǎng)板在CO2培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)內(nèi)以靜置狀態(tài)培養(yǎng)6天。向培養(yǎng)6天后的培養(yǎng)液中添加ATP測定試劑(CellTiter－Glo(商標)、Promega公司制)100μL后，于25℃培養(yǎng)15分鐘，采用微孔板讀取器(MicroplateReader)(MolecularDevices公司制、FlexStation3)測定發(fā)光量(RLU)，減去僅培養(yǎng)基時的RLU，由此測定活細胞數(shù)。其結果確認到，A549細胞通過使用本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物而能夠以細胞凝集塊大小適當?shù)亍⒕鶆虻胤稚⒌臓顟B(tài)進行培養(yǎng)，且在該培養(yǎng)基組合物中高效地增殖。此時，關于對細胞增殖的效果，在除去了2價離子的脫?；Y冷膠與無處理的脫酰基結冷膠之間未見差異。靜置培養(yǎng)6天后的RLU(相當于A549細胞的細胞數(shù))如表45所示。[表45]實施例11使用上述DAG及其他多糖類的培養(yǎng)基組合物的制作將黃原膠(SunAceNXG-C、三榮源株式會社制)混懸在純水中使其濃度為0.5％(w/v)后，于90℃通過一邊加熱一邊攪拌而溶解。同樣地，將瓜爾膠(VISTOPD－2029、三榮源株式會社制)制成0.5％(w/v)的水溶液。將該水溶液與0.2或0.1％(w/v)的經(jīng)脫二價陽離子處理的DAG溶液和10倍濃度的DMEM/F－12培養(yǎng)基、用于濃度調(diào)節(jié)的水混合，于80℃加熱30分鐘。放置冷卻至室溫后，添加7.5％碳酸氫鈉水溶液，配制含有最終濃度為0.01、0.02％(w/v)的脫?；Y冷膠和最終濃度為0.1、0.2、0.3、0.4％(w/v)的其他多糖的DMEM/F－12培養(yǎng)基組合物。實施例12珠分散試驗向實施例11中配制的培養(yǎng)基中添加聚苯乙烯珠(大小500－600μm、PolysciencesInc.制)，目視確認珠的分散狀態(tài)。以懸浮分散狀態(tài)為○、以部分沉淀/分散狀態(tài)為△、以沉淀狀態(tài)為×，進行評價。[表46]比較例1使用未處理DAG的培養(yǎng)基的制造方法(過濾滅菌)含有脫?；Y冷膠的DMEM/Ham’sF12培養(yǎng)基的制作使120mg脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)混懸于72mL純水中，于90℃加熱攪拌1小時使其溶解。向其中加入純水，配制脫酰基結冷膠為0.017％(w/v)的溶液720mL后，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。另一方面，向DMEM/Ham’sF12等量混合的粉末培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司)和碳酸氫鈉中加入與培養(yǎng)基配制時的推薦值的十分之一量相當?shù)募兯?，?0倍濃度配制80mL水溶液后，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。將其在滅菌條件下于25℃一邊攪拌一邊混合，由此配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的目標培養(yǎng)基800mL。比較例2使用未處理DAG的培養(yǎng)基的制造方法(高壓釜滅菌)含有脫?；Y冷膠的DMEM/Ham’sF12培養(yǎng)基的制作使脫?；Y冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)0.30g混懸于200mL純水中，采用高壓釜(121℃、20分鐘)加熱滅菌，配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的水溶液。向DMEM/Ham’sF12等量混合的粉末培養(yǎng)基(LifeTechnologies公司)和碳酸氫鈉中加入與培養(yǎng)基配制時的推薦值的90％相當?shù)募兯?，以稍高的濃度配制液體培養(yǎng)基180mL后，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。將其用均相混合機劇烈地攪拌(3000rpm)，同時以約10秒添加事先配制的脫?；Y冷膠水溶液20mL，進而，一邊以3000rpm攪拌1分鐘一邊混合，由此配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的培養(yǎng)基200mL。實施例13除2價鹽DAG的配制方法(鈉型陽離子交換樹脂、分批式、DAG溶解與陽離子交換樹脂處理同時進行)向300mL的四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)1.0g、純水200mL和螯合樹脂DuoliteC467(Na)(SUMIKACHEMTEX)4mL使脫?；Y冷膠濃度為0.5％(w/v)。于70℃加熱，使用Tornado攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中?；厥账龀龅睦w維狀的固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。另外，將攪拌時的溫度設定為50℃、30℃、23℃、10℃，進行同樣的操作，得到白色固體。實施例14除2價鹽DAG的配制方法使DAG濃度增加的情況(鈉型陽離子交換樹脂、分批式、DAG溶解與陽離子交換樹脂處理同時進行)向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)2.0g、純水200mL、螯合樹脂DuoliteC467(Na)(SUMIKACHEMTEX)4mL使脫?；Y冷膠濃度為1％(w/v)。于70℃加熱，使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中。回收所析出的纖維狀固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。另外，使脫酰基結冷膠的量為4.0g，進行相同的操作，得到白色固體。實施例15除2價鹽DAG的配制方法增加樹脂使用量的情況(鈉型陽離子交換樹脂、分批式、DAG溶解與陽離子交換樹脂處理同時進行)向300mL的四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)4.0g、純水200mL和螯合樹脂DuoliteC467(Na)(SUMIKACHEMTEX)8mL使脫?；Y冷膠濃度為2％(w/v)。于70℃加熱，使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中?；厥账龀龅睦w維狀固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。另外，使脫?；Y冷膠的量為5.0g，進行相同的操作，得到白色固體。實施例16除2價鹽DAG的配制方法減少樹脂使用量的情況(鈉型陽離子交換樹脂、分批式、DAG溶解與陽離子交換樹脂處理同時進行)向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)2.0g、純水200mL和螯合樹脂DuoliteC467(Na)(SUMIKACHEMTEX)1mL使脫?；Y冷膠濃度為1.0％(w/v)。于70℃加熱，使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中。回收所析出的纖維狀固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。實施例17除2價鹽DAG的配制方法利用樹脂的處理時間延長的情況(鈉型陽離子交換樹脂、分批式、DAG溶解與陽離子交換樹脂處理同時進行)向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)1.0g、純水200mL和螯合樹脂DuoliteC467(Na)(SUMIKACHEMTEX)8mL使脫?；Y冷膠濃度為1.0％(w/v)。于23℃使用機械攪拌器以100rpm攪拌5小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中。回收所析出的纖維狀固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。比較例3向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)1.0g和純水200mL使脫酰基結冷膠濃度為0.5％(w/v)。于100℃加熱，使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B過濾，將濾液注入到500mL異丙基醇中?；厥账龀龅睦w維狀固體，于50℃真空干燥。然后，使用混合機粉碎，得到白色粉末。比較例4向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)1.0g、純水200mL和強酸性陽離子交換樹脂(H型)DOWEXTM(DowChemical公司)4mL使脫?；Y冷膠濃度為0.5％(w/v)。于100℃使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，使用桐山濾紙5B，過濾樹脂，將濾液注入到500mL異丙基醇中，但未見固體析出。比較例5向300mL四頸瓶中加入脫?；Y冷膠(CG-LA、三晶株式會社)1.0g、純水200mL和強酸性陽離子交換樹脂(H型)DOWEXTM(DowChemical公司)4mL使脫酰基結冷膠濃度為0.5％(w/v)。于23℃使用機械攪拌器以100rpm攪拌1小時。接著，試圖使用桐山濾紙5B過濾樹脂，但濾紙網(wǎng)眼堵塞，無法完成過濾操作。實施例13至17、以及比較例3至5的產(chǎn)量如下所示。[表47]條件產(chǎn)量實施例13－1DAG0.5％―10℃、樹脂4mL0.89g實施例13－2DAG0.5％―23℃、樹脂4mL0.90g實施例13－3DAG0.5％―30℃、樹脂4mL0.90g實施例13－4DAG0.5％―50℃、樹脂4mL0.86g實施例13－5DAG0.5％―70℃、樹脂4mL0.82g實施例14－1DAG1.0％―70℃、樹脂4mL1.85g實施例14－2DAG2.0％―70℃、樹脂4mL3.76g實施例15－1DAG2.0％―70℃、樹脂8mL3.76g實施例15－2DAG2.5％―70℃、樹脂8mL4.51g實施例16DAG1.0％―70℃、樹脂1mL1.77g實施例17DAG1.0％―23℃、樹脂8mL1.60g比較例3DAG0.5％―100℃、無樹脂0.90g比較例4DAG0.5％―70℃、H型樹脂4mL無法回收比較例5DAG0.5％―23℃、H型樹脂4mL無法回收溶解性試驗針對實施例13至17以及比較例3的、通過各個處理而得到的DAG粉末，調(diào)查室溫下的向水中的溶解性。向MaruemuScrew管No.1中加入各個粉末20mg和純水2mL，于室溫通過渦流攪拌1小時。通過目視確認溶解性。結果如下所示。[表48]金屬定量向實施例13至17以及比較例3的、通過各個處理而得到的DAG粉末中，加入酸，加熱分解，用超純水適當稀釋，將所得溶液用電感耦合等離子體發(fā)光分光分析裝置(ICP-OES)(SPS5520,SIINanotechnology)分析。結果如下所示。[表49]Ba、Co、Cr、Cu、Li、Ni、Pb、Sn為<2實施例18除2價鹽DAG的配制方法(鈉型陽離子交換樹脂、分批式透析處理)加入300mg脫酰基結冷膠(KELCOGELCG-LA、三晶株式會社制)、30mL超純水(Milli-Q水)、0.5g的DuoliteC467，于70℃加熱攪拌1小時，由此使其溶解。然后，放置冷卻至室溫，通過抽吸過濾，除去DuoliteC467。將濾液用水透析1天。對所得的水溶液進行冷凍干燥，得到187mg的白色固體。實施例19使用除2價鹽脫酰基結冷膠的DMEM培養(yǎng)基的制作(過濾器滅菌)將實施例18配制的除2價鹽脫?；Y冷膠加入水中使其為0.3％，于100℃加熱分散。然后，于室溫靜置。將溶液用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。另一方面，向DMEM/F12的粉末培養(yǎng)基(Sigma－Aldrich公司)和碳酸氫鈉中加入與培養(yǎng)基配制時的推薦值的二分之一量相當?shù)募兯?，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。使脫?；Y冷膠溶液、MilliQ水和培養(yǎng)基以1：9：10的體積比混合，配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的目標DMEM/F12培養(yǎng)基。實施例20使用除2價鹽脫?；Y冷膠的DMEM培養(yǎng)基的制作(高壓釜滅菌)將實施例18配制的除2價鹽脫?；Y冷膠加入水中使其濃度為0.3％，于100℃加熱分散。然后，于室溫靜置。將所得的溶液于121℃進行高壓釜滅菌20分鐘。另一方面，向DMEM/F12的粉末培養(yǎng)基(Sigma－Aldrich公司)和碳酸氫鈉中加入與培養(yǎng)基配制時的推薦值的二分之一量相當?shù)募兯?，使用滅菌過濾器(孔大小0.22μm)滅菌。使脫?；Y冷膠溶液、MilliQ水和經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基以1：9：10的體積比進行混合，配制脫?；Y冷膠濃度為0.015％(w/v)的目標DMEM/F12培養(yǎng)基。實施例21珠分散試驗向實施例19及20中配制的培養(yǎng)基中加入聚苯乙烯珠(大小200μm、PolysciencesInc.制)，目視確認珠的分散狀態(tài)。以懸浮分散狀態(tài)為○、以部分沉淀/分散狀態(tài)為△、以沉淀狀態(tài)為×，進行評價。[表50]實施例珠分散實施例19○實施例20○產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明提供培養(yǎng)基組合物的制造方法，該制造方法中，在使用具有陰離子性官能團的高分子化合物的培養(yǎng)基組合物中提高該高分子化合物在水中的溶解性，更簡便地將上述化合物與培養(yǎng)基混合。通過該方法，能更簡便地制造能夠懸浮培養(yǎng)細胞及/或組織的培養(yǎng)基組合物，因此，本發(fā)明是在產(chǎn)業(yè)上極其有用的發(fā)明。本文提及的全部出版物(包括專利及專利申請說明書在內(nèi))中所記載的內(nèi)容通過引用而與明確記載其全部內(nèi)容相同程度的形式并入本說明書中。本申請以在日本提出申請的日本特愿2014－010841(申請日：2014年1月23日)及日本特愿2014－170992(申請日：2014年8月25日)為基礎，上述申請的內(nèi)容全部包括在本說明書中。當前第1頁1 2 3