本申請根據(jù)35USC§119(e)要求于2014年1月5日提交的美國臨時申請序列號61/923,759的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其全部內(nèi)容通過引用并入。

關(guān)于聯(lián)邦資助研究或開發(fā)的聲明

本發(fā)明是在美國國立衛(wèi)生研究院的資助NIH P01 HL13851和NIH R01 HL116389的支持下進行的。美利堅合眾國政府可能在這項研究中具有某些權(quán)利。

技術(shù)領(lǐng)域

本教導屬于用于成像PARP-1分布的放射性標記示蹤物的領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)是核酶的PARP家族的最豐富的成員之一。¹其最特征的功能是檢測DNA損傷和促進DNA修復，但PARP-1也參與許多其它的DNA相關(guān)的細胞過程，如細胞凋亡調(diào)控、細胞分裂、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色體穩(wěn)定化。^2-5PARP-1也可以在調(diào)節(jié)炎癥反應方面發(fā)揮中心作用。PARP-1，113kD的蛋白質(zhì)具有三個獨特結(jié)構(gòu)域：具有特異性結(jié)合受損的DNA鏈斷裂的兩個鋅指的N-末端DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域；^1,6中央自我修飾結(jié)構(gòu)域；和循序地將ADP-核糖亞基從煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)受體的C末端催化結(jié)構(gòu)域。⁷由于其在DNA修復方面的關(guān)鍵作用，在過去的20年里，已經(jīng)積極地追求PARP-1作為藥物靶標，投入了巨大努力，開發(fā)了幾代PARP-1抑制劑(圖1)用于治療目的，特別是在缺血再灌注損傷和癌癥領(lǐng)域。^5,8最近，已經(jīng)證明PARP1抑制是一種用于在依賴于PARP1活性而生存的癌癥中誘導合成致死性的有效方法。⁹另外，PARP抑制劑或轉(zhuǎn)基因小鼠中缺乏PARP表達降低所存在的炎癥的程度，因此保護各種器官，包括肺，免受持續(xù)性炎癥的不利影響。因此，一些PARP抑制劑，包括奧拉帕尼(olaparib)(AZD2281KU-59436)，維利帕尼(veliparib)(ABT-888)，魯卡帕尼(rucaparib)(PF-01367338，AG014699)和尼拉帕尼(niraparib)(MK4827)，現(xiàn)作為抗癌藥物正處于臨床試驗評價中^10-14。這些PARP抑制劑有效地抑制PARP1活性以及其它的PARP樣酶如PARP2和端錨聚合酶(tankyrase1)的活性¹⁵。其它PARP抑制劑包括苯并咪唑甲酰胺(NU1085)²¹及其衍生物(AG014361)。²²

盡管具有與無進展生存期相關(guān)的來自臨床試驗的有前景的結(jié)果，然而，通過目前的測定不能準確地確定不同的PARP抑制劑抑制腫瘤PARP活性的能力的差異。此外，最近發(fā)現(xiàn)最初作為PARP抑制劑開發(fā)的尼帕尼(iniparib)的作用機制最有可能與PARP活性的抑制無關(guān)¹⁶。因此，需要用于體內(nèi)非侵入性定量腫瘤的PARP活性的方法以便用于證實腫瘤特異性PARP抑制以及評估有效的PARP抑制的持續(xù)時間以指導給藥決定。

用正電子發(fā)射斷層掃描(PET)成像可以是用于非侵入性地確定PARP活性水平的有效方法。[¹¹C]PJ-34，一種PARP-1靶向示蹤物，顯示在成像糖尿病的動物模型中的PARP-1表達的一些潛質(zhì)。¹⁷最近，通過使用反式-環(huán)辛烯和四嗪之間的[4+2]環(huán)加成的兩步標記策略合成了¹⁸F標記的奧拉帕尼/AZD2281衍生物并用于體外細胞研究和微型PET腫瘤成像。^18-20

技術(shù)實現(xiàn)要素：

在各種實施方案中，本教導包括用于測量PARP-1表達和PET成像PARP-1體內(nèi)分布的放射性標記的PARP-1抑制劑。在各種實施方案中，本教導包括結(jié)合PARP-1并標記有發(fā)射正電子的放射性核素如¹⁸F的各種化合物。在各種實施方案中，也公開了這些化合物的合成方法。還公開了本發(fā)明教導的化合物對PARP-1的抑制效力。

在一些配置中，2-[對-(2-氟乙氧基)苯基]-1.3.10-三氮雜三環(huán)[6.4.1.0^4,13]十三烷基-2,4(13),5,7-壬四烯-9-酮(IC₅₀＝6.3±1.3nM)可以用¹⁸F標記。在各種配置中，¹⁸F標記可以是在一個步驟中，且可以提供高的化學和放射化學純度。在一些配置中，微型PET成像可以用來證明MDA-MB-436腫瘤中的[¹⁸F]12攝取增加。在一些配置中，這種增加的攝取可以由12和奧拉帕尼/AZD2281阻止。

在各種不同的實施方案中，已開發(fā)了PARP-1抑制劑12(IC₅₀＝6.3nM)?？墒褂贸Ｒ?guī)標記方法來合成具有高純度和比活性的[¹⁸F]12。攜帶MBA-MD-436腫瘤的小鼠中的[¹⁸F]12的微型PET研究證實這些腫瘤中的放射性蓄積，已知這些腫瘤會過表達PARP-1。腫瘤攝取可由PARP-1抑制劑奧拉帕尼和12阻止，支持[¹⁸F]12攝取對PARP-1活性的特異性。因此，[¹⁸F]12可用作用于體內(nèi)成像PARP-1表達的PET示蹤物。

在各種不同的實施方案中，可以通過用[¹⁸F]氟化物親核取代²⁸的氟乙氧基或使用2-[¹⁸F]氟乙基疊氮化物的Cu(I)催化的點擊反應實現(xiàn)放射性核素摻入。^29,30可以根據(jù)方案1和2以僅僅幾個步驟分別合成NU1085和AG014361的相應的2-氟乙氧基和2-氟乙基三唑類似物。雖然炔丙基和三唑基略微降低了類似物的抑制效力，這些中最有效的是12(IC₅₀＝6.3nM)，其具有2-氟乙氧基基團，其次是(IC₅₀＝10.8)。

在一些配置中，可以自動化[¹⁸F]12在典型條件下的一步標記以便臨床生產(chǎn)這種示蹤物。在一些配置中，用于注射的最終劑量可具有高的化學和放射化學純度和具有優(yōu)異的比活性。在各種配置中，[¹⁸F]12在微型PET研究中的注射質(zhì)量可以是0.0037-0.012μg/劑量(0.2mCi/劑量)，其可以比阻斷劑量和治療劑量低得多。質(zhì)量的這個量可以是不太可能有藥理作用。因此，[¹⁸F]12可用作PET示蹤物用于成像PARP-1表達和腫瘤。在一些配置中，PARP-1示蹤物如[¹⁸F]12也可以用于確定患有慢性炎性疾病的患者，在這些患者中PARP抑制劑治療可能延緩炎癥疾病的進展。

因此，本教導包括具有如下結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學上可接受的鹽：

其中R可以選自由以下組成的組：其中代表鍵。在一些配置中，R可以是在一些配置中，F(xiàn)可以是¹⁸F。在一些配置中，R可以是在一些配置中，R可以是

在一些實施方案中，本教導包括成像受試者中的腫瘤的方法，以及成像受試者中的炎癥的方法。在各種配置中，這些方法可以包括對受試者施用具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：

其中R可以選自由以下組成的組：其中代表鍵。在一些配置中，R可以是在一些配置中，F(xiàn)可以是¹⁸F。在一些配置中，R可以是在一些配置中，R可以是其中該化合物包括發(fā)射正電子的放射性核素如¹⁸F。該方法可以進一步包括對受試者進行PET掃描。

在本教導的各種配置中，受試者可以是患有或懷疑患有腫瘤或炎癥的人。受試者也可以是患有或懷疑患有腫瘤或炎癥的動物。該動物可以是哺乳動物，例如伴侶動物如，例如貓或狗，實驗室動物諸如，例如，小鼠、豚鼠、兔或大鼠，或大型動物，諸如，例如，馬、綿羊、?；蛏窖?。

附圖說明

圖1示出PARP-1抑制劑的實施例(現(xiàn)有技術(shù))。

圖2示出[¹⁸F]12(WC-4-138)的HPLC分析，其表現(xiàn)出高的化學和放射化學純度。(頂部圖：UV，底部圖：放射性；比活性＝11500mCi/μmol)。

圖3A-D示出在60分鐘時在基線條件下使用[¹⁸F]12并用奧拉帕尼(i.p.50mg/kg 20min預處理)和12(i.p.1mg/kg 20min預處理)阻斷的小鼠中的MDA-MB-231和MDA-MB-436腫瘤的微型PET圖象。上排：用奧拉帕尼(i.p.50mg/kg 20min預處理)治療前和后的MDA-MB-231腫瘤。下排：12(i.p.1mg/kg20min預處理)前和后的MDA-MB-436(右)和MDA-MB-231(左)腫瘤。圖3A，圖3B和圖3C分別表示紅色、綠色和藍色RGB通道，各自以黑色和白色渲染。圖3D表示以黑色和白色渲染的RGB通道的復合。

圖4示出在基線條件下并用奧拉帕尼(i.p.50mg/kg 20min預處理)和12(i.p.1mg/kg 20min預處理，頂部圖)阻斷的小鼠中的MDA-MB-436腫瘤中的[¹⁸F]12的時間放射性曲線。經(jīng)奧拉帕尼治療的MDA-MB-231腫瘤還顯示[¹⁸F]12攝取下降(底部圖)。

圖5示出癌細胞系中的[¹⁸F]WC-4-138(12)攝取和PARP活性的分析。

圖6示出如在成年小鼠中評價的[¹⁸F]WC-4-138示蹤物的代謝穩(wěn)定性。

圖7示出在[¹⁸F]WC-4-138示蹤物注射后進行60分鐘動態(tài)成像的攜帶MDA/MB-231(乳腺癌)腫瘤的小鼠。

圖8A-B示出在[¹⁸F]WC-4-138示蹤物注射后進行60分鐘動態(tài)成像的攜帶MDA/MB-231(乳腺癌)或SCC1(HNSCC)腫瘤的小鼠。

具體實施方式

在各種實施方案中，本教導包括可用于通過PET掃描成像腫瘤或炎癥的示蹤物。在各個方面，所述示蹤物可以高親和性結(jié)合PARP-1。在各種實施方案中，本教導還包括示蹤物的合成方法。本教導的示蹤物，當用正電子發(fā)射放射性同位素如¹⁸F標記時，可通過靜脈內(nèi)或其它合適的方式施用到受試者。

本文所描述的方法使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的實驗室技術(shù)，并且可在實驗室手冊和教科書中找到指導，如Sambrook,J.,et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3rd ed.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,2001；Spector,D.L.et al.,Cells:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1998；Hedrickson et al.,Organic Chemistry 3rd edition,McGraw Hill,New York,1970；Carruthers,W.,and Coldham,I.,Modern Methods of Organic Synthesis(4th Edition),Cambridge University Press,Cambridge,U.K.,2004；Curati,W.L.,Imaging in Oncology,Cambridge University Press,Cambridge,U.K.,1998；Welch,M.J.,and Redvanly,C.S.,eds.Handbook of Radiopharmaceuticals:Radiochemistry and Applications,J.Wiley,New York,2003?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的藥理學標準原則確定藥物的施用方法和給藥方案，使用標準參考文本如Remington:the Science and Practice of Pharmacy(Alfonso R.Gennaro ed.19th ed.1995)；Hardman,J.G.,et al.,Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ninth Edition,McGraw-Hill,1996；和Rowe,R.C.,et al.,Handbook of Pharmaceutical Excipients,Fourth Edition,Pharmaceutical Press,2003提供的方法。

在本文所述的實驗中，試劑和材料從商業(yè)供應商購買，除非另有說明不經(jīng)進一步純化即可使用?；瘜W品購自Sigma-Aldrich化學公司(圣路易斯，密蘇里州美國)，除非另有指明。所有反應均通過標準無空氣和無濕氣技術(shù)用干燥溶劑在惰性氮氣氛下進行，除非另有說明。

快速柱色譜法可以使用各種方法和儀器進行，包括Scientific Adsorbents公司的硅膠，60A，“40μm Micron Flash”(32-63μm)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中公知的多種方法和儀器，包括MEL-TEMP 3.0裝置來測定熔點。在一些配置中，熔點數(shù)據(jù)未經(jīng)校正。可以通過多種常規(guī)方法在各種儀器，包括Varian Mercury-VX分光計上記錄300MHz的¹H和¹³C NMR譜。在一些配置中，可以將化學位移報告為從四甲基硅烷(TMS)往低場的百萬分率(ppm)。以赫茲(Hz)給出所有的耦合常數(shù)(J)。通常將分裂模式描述為如下：s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；m，多重峰。

可以通過各種商業(yè)合同組織，如GA諾克羅斯的Atlantic Microlab公司，來確定元素分析(C，H，N)?？捎米贤饩€檢測器和良好閃爍NaI(Tl)檢測器以及相關(guān)的用于放射性檢測的電子器件實施高效液相色譜(HPLC)。Grace Altima C18 250×10mm 10μ半制備柱(A)和Altima C18 250×4.6mm×10μ分析柱(B)可分別用于制備和分析?？梢酝ㄟ^RDS111回旋加速器中的富集的(95％)[¹⁸O]水的質(zhì)子輻照由¹⁸O(p,n)¹⁸F反應產(chǎn)生[¹⁸F]氟化物?？梢允褂肂ioscan AR-2000成像掃描儀(Bioscan公司，華盛頓，DC)實現(xiàn)放射性-TLC。已公布的方法用于化合物5²⁷和11²²的合成。按照國家研究理事會的“護理和使用實驗動物的指南”的建議，在華盛頓大學動物研究委員會IACUC批準的協(xié)議下進行所有動物實驗。

實施例

本教導包括在實施例中提供的不打算限制任何權(quán)利要求的范圍的說明。除非以過去時明確提出，一個實施例可以是預示性或?qū)嶋H的實施例。提供下面的非限制性實施例以進一步說明本發(fā)明的教導。本領(lǐng)域的技術(shù)人員，考慮到本公開內(nèi)容，將認識到可以在公開的具體實施方案中進行許多變化并仍然獲得相同或類似的結(jié)果而不背離本教導的精神和范圍。

實施例1

這個實施例說明了PARP-1抑制劑的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見下文。

本教導的PARP-1抑制劑的合成示于方案1和2中。2,3-二氨基苯甲酸甲酯(5)在吡啶和二氯甲烷中與4-(2-氟乙氧基)苯甲酰氯反應，得到中間體6a和苯并咪唑化合物6的混合物。在溶劑蒸發(fā)后，在甲醇中用甲磺酸回流該混合物，得到6。然后在甲醇中使用銨將6的甲酯轉(zhuǎn)化為酰胺化合物8。類似地，從5和4-(丙-2-炔基氧基)苯甲酰氯開始合成炔烴類似物9。在DMF中使用CuSO₄·5H₂O和抗壞血酸鈉通過2-氟乙基疊氮化物和9的銅(I)催化的點擊反應制備三唑化合物10。

從二胺中間體11合成三環(huán)化合物?；衔?1在吡啶和二氯甲烷中與4-(2-氟乙氧基)苯甲酰氯反應，得到中間體12a和苯并咪唑12的混合物。在溶劑蒸發(fā)后，在甲醇中用甲磺酸回流該混合物，得到12。類似地，13和14分別從相應的芐基氯制備。使用2-氟乙基疊氮化物和13在與用于10時相同的條件下通過點擊反應制備化合物15。通過在乙腈中回流14和甲磺酸銀合成用于用¹⁸F標記12的甲磺酸酯前體16。

方案1.NU1085的衍生物(2)的合成

試劑和條件：(a)ROC₆H₄COCl(R＝CH₂CH₂F用于6a和6，R＝CH₂C≡CH用于7a和7)吡啶，CH₂Cl₂；(b)CH₃SO₃H，MeOH；(c)NH₃，MeOH；(d)9，F(xiàn)CH₂CH₂N₃，CuSO₄，抗壞血酸鈉，DMF。

方案2.AG014361的衍生物(3)的合成

試劑和條件：(a)ROC₆H₄COCl(R＝CH₂CH₂F用于12a和12，R＝CH₂C≡CH用于13a和13，R＝CH₂CH₂Br用于14a和14)，吡啶，CH₂Cl₂；(b)CH₃SO₃H，MeOH；(c)13，F(xiàn)CH₂CH₂N₃，CuSO₄，抗壞血酸鈉，DMF；(d)14，AgOMs，乙腈。

實施例2

本實施例說明2-(4-(2-氟乙氧基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯(6)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

在23℃下，2,3-二氨基苯甲酸甲酯5(500mg，3mmol)和4-(2-氟乙氧基)苯甲酰氯(638mg，3.15mmol)在CH₂Cl₂(10ml)和吡啶(10ml)中的混合物攪拌過夜。減壓除去溶劑后，將殘余物溶于甲醇(50mL)中，并隨后加入CH₃SO₃H(1mL)。將混合物回流3小時后，減壓下除去甲醇，將殘余物溶解在乙酸乙酯(75ml)中。將溶液用飽和Na₂CO₃(50ml)，水(50ml)和飽和NaCl(50mL)洗滌，并經(jīng)Na₂SO₄干燥。在蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1:1)洗脫，得到6，為白色固體(686mg，73％)，mp 134.2-134.6℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ10.58(s,1H),7.98(d,J＝8.7Hz,2H),7.95(d,J＝8.7Hz,1H),7.83(d,J＝7.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),6.98(d,J＝9.0Hz,2H),4.75(dt,J＝47.1Hz,4.2Hz,2H),4.22(dt,J＝27.6Hz,4.2Hz,2H),3.96(s,3H).¹³C NMR(75MHz,CDCl₃)δ167.0,160.2,152.3,144.8,135.0,128.2,124.4,124.2,122.3,121.7,114.9,113.0,81.6(d,J＝169.7Hz),67.1(d,J＝20.6Hz),52.0。

實施例3

本實施例說明2-(4-(丙-2-炔基氧基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯(7)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

按照用于化合物6(實施例2)的相同程序制備化合物7，除了使用化合物5(500mg，3mmol)和4-(丙-2-炔基氧基)苯甲酰氯(613mg，3.15mmol)作為起始原料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1：1)洗脫，得到7，為白色固體(724mg，79％)，mp 176.0-176.8℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ10.58,8.03(d,J＝9.0Hz,2H),7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.86(d,J＝7.8Hz,1H),7.29(t,J＝8.1Hz,1H),7.10(d,J＝9.0Hz,2H),4.76(d,J＝2.4Hz,2H),4.00(s,3H),2.57(t,J＝2.4Hz,1H).¹³C NMR(75MHz,CDCl₃)δ167.1,159.4,152.4,144.9,135.1,128.2,124.6,124.3,122.8,121.8,115.4,113.0,77.9,76.0,55.8,52.1。

實施例4

本實施例說明2-(4-(2-氟乙氧基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(8)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

在23℃下攪拌化合物6(315mg，1mmol)在甲醇(10ml)中在7N NH₃中的溶液3天。在蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1：2)洗脫，得到8，為白色固體(245mg，82％)，mp 195.8-197.4℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.44(s,1H),8.23(d,J＝9.0Hz,2H),7.89(d,J＝7.5Hz,1H),7.80(s,2H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(t,J＝7.5Hz,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),4.81(dt,J＝47.7Hz,3.6Hz,2H),4.37(dt,J＝30.0Hz,3.9Hz,2H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ166.4,160.1,152.0,135.5,128.6,122.7,122.0,115.1,82.1(d,J＝166.2Hz),67.3(d,J＝19.4Hz)。C₁₆H₁₄FN₃O₂.0.5H₂O分析計算:C,62.33；H,4.90；N,13.63。實測:C,62.54；H,4.87；N,13.67。

實施例5

本實施例說明2-(4-(丙-2-炔基氧基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(9)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

按照用于化合物8的相同程序制備化合物9，不同的是使用化合物7(460mg，1.5mmol)作為起始原料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用己烷-乙酸乙酯(1:2)洗脫，得到9，為白色固體(378mg，86％)，mp 183.4-183.9℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.39(s,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(s,2H),7.72(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(t,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝9.0Hz,2H),4.92(d,J＝1.8Hz,2H),3.63(s,1H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ166.4,159.0,152.0,128.5,122.7,122.3,121.9,115.4,78.9,78.6,55.7。C₁₇H₁₈N₃O₂.0.5H₂O分析計算:C,67.99；H,4.70；N,13.99。實測:C,67.97；H,4.72；N,13.71。

實施例6

本實施例說明2-(4–((1-(2-氟乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(10)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

在23℃下攪拌9(291mg，1.0mmol)，1-疊氮基-2-氟乙烷(1.68mmol)，抗壞血酸鈉(990mg，5.0mmol)和CuSO₄.5H₂O(125mg，0.5mmol)在DMF(10ml)中的混合物過夜。用乙酸乙酯(75ml)稀釋反應混合物，并用水(2×50ml)和飽和NaCl(50mL)洗滌，經(jīng)Na₂SO₄干燥。蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯洗脫，得到10，為白色固體(255mg，67％)，mp256.4-257.3℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H),8.33(s,1H),8.21(d,J＝8.7Hz,2H),7.87(d,J＝7.5Hz,1H),7.78(s,2H),7.71(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(t,J＝7.8Hz,1H),7.27(d,J＝8.7Hz,2H),5.28(s,2H),4.85(dt,J＝46.8Hz,4.5Hz,2H),4.76(dt,J＝27.6Hz,4.2Hz,2H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ166.3,159.9,152.0,142.5,141.6,135.3,128.6,125.1,122.7,122.1,121.9,115.3,114.7,99.5,81.9(d,J＝167.3Hz),61.3,50.1(d,J＝20.5Hz)。C₁₉H₁₇FN₆O₂:C分析計算,59.99；H,4.50；N,22.09。實測:C,60.10；H,4.67；N,21.49。

實施例7

本實施例說明5,6-二氫-2-(4-(2-氟乙氧基)苯基)-咪唑并[4,5,1-jk][1,4]苯并二氮雜卓-7(4H)-酮(12)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

按照用于化合物6的相同程序制備化合物12(WC-4-138)，除了使用化合物11(177mg，1mmol)和4-(2-氟乙氧基)苯甲酰氯(213mg，1.05mmol)作為起始材料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯-甲醇(10：1)洗脫，得到12，為白色固體(247mg，76％)，mp 236.0-237.5℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.44(t,J＝5.1Hz,1H),7.89-7.80(m,4H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),7.17(d,J＝8.7Hz,2H),4.79(dt,J＝48.9Hz,3.6Hz,2H),4.44(m,2H),4.35(dt,J＝31.2Hz,3.9Hz,2H),3.53(m,2H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ167.8,159.9,154.1,143.7,132.9,131.7,125.5,123.1,122.5,121.9,118.1,115.1,82.5(d,J＝165.0Hz),67.7(d,J＝19.3Hz),50.9,40.8。C₁₈H₁₆FN₃O₂分析計算:C,66.45；H,4.96；N,12.92。實測:C,66.43；H,5.03；N,12.92。

實施例8

本實施例說明5,6-二氫-2-(4-(丙-2-炔基氧基)苯基)-咪唑并[4,5,1-jk][1,4]苯并二氮雜卓-7(4H)-酮(13)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

根據(jù)用于化合物6的相同程序制備化合物13，除了使用化合物11(177mg，1mmol)和4-(丙-2-炔基氧基)苯甲酰氯(204mg，1.05mmol)作為起始原料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯-甲醇(10：1)洗脫，得到13，為白色固體(268mg，84％)，mp 258.0-259.1℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.47(s,1H),7.85(m,4H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),7.18(d,J＝6.9Hz,2H),4.93(s,2H),4.46(m,2H),3.64(s,1H),3.54(m,2H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ167.4,158.5,153.6,143.3,132.5,131.1,125.1,122.7,122.4,121.5,117.7,115.0,79.0,78.5,55.6,50.5。C₁₉H₁₅N₃O₂分析計算:C,71.91；H,4.76；N,13.24。實測:C,71.71；H,4.82；N,12.98。

實施例9

本實施例說明2-(4-(2-溴乙氧基)苯基)-5,6-二氫-咪唑并[4,5,1-jk][1,4]苯并二氮雜卓-7(4H)-酮(14)的合成。化合物編號參見方案1和2，見上文。

根據(jù)用于化合物6的相同程序制備化合物14，除了使用化合物11(177mg，1mmol)和4-(2-溴乙氧基)苯甲酰氯(277mg，1.05mmol)作為起始原料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯-甲醇(10:1)洗脫，得到14，為白色固體(255mg，66％)，分解熔點280℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.44(t,J＝5.6Hz,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(t,J＝7.6Hz,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,2H),4.44(m,4H),3.86(t,J＝5.2Hz,2H),3.53(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ167.8,159.7,154.1,143.7,132.9,131.7,125.5,123.1,122.6,122.0,118.1,115.2,68.4,50.5,40.8。

實施例10

本實施例說明5,6-二氫-2-(4-((1-(2-氟乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)甲氧基)苯基)-咪唑并[4,5,1-jk][1,4]苯并二氮雜卓-7(4H)-酮(15)的合成?；衔锞幪枀⒁姺桨?和2，見上文。

按照用于化合物10的相同程序制備化合物15，不同的是使用化合物13(159mg，0.5mmol)作為起始原料。將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯-甲醇(10：1)洗脫，得到15，為白色固體(147mg，72％)，mp 226.5-227.6℃。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.46(t,J＝5.7Hz,1H),8.33(s,1H),7.89-7.81(m,4H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),5.28(s,2H),4.85(dt,J＝47.1Hz,4.2Hz,2H),4.76(dt,J＝27.6Hz,4.2Hz,2H),4.45(m,2H),3.54(m,2H).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ167.4,159.4,143.3,142.6,131.2,125.1,125.0,122.7,122.0,121.5,117.7,114.8,81.9(d,J＝167.3Hz),61.2,50.5,50.1(d,J＝20.5Hz),40.4。C₂₁H₁₉FN₆O₂.1.5H₂O分析計算:C,58.19；H,5.12；N,19.39。實測:C,57.89；H,4.54；N,18.92。

實施例11

本實施例說明5,6-二氫-2-(4-(2-(甲磺酰氧基)乙氧基)苯基)-咪唑并[4,5,1-jk][1,4]苯并二氮雜卓-7-(4H)-酮(16)的合成。化合物編號參見方案1和2，見上文。

回流14(193mg，0.5mmol)和AgOMs(508mg，2.5mmol)的混合物8小時。在蒸發(fā)溶劑后，將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯-甲醇(10:1)洗脫，得到16，為白色固體(129mg，64％)，mp 253.2-254.1℃。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),4.59(t,J＝4.0Hz,2H),4.49(t,J＝4.0Hz,2H),4.35(t,J＝4.0Hz,2H),3.65(m,2H),3.12(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ160.2,148.1,142.7,135.7,132.2,131.1,131.0,125.8,122.6,122.1,121.4,116.9,114.6,68.3,66.0,50.5,40.6,36.0。

實施例12

該實施例說明PARP-1活性測定。

使用Putt和Hergenrother描述的方法評估新合成的PARP-1抑制劑抑制活性PARP-1的能力。²³結(jié)果顯示在表1中。三環(huán)苯并咪唑化合物比它們各自的苯并咪唑類似物具有更高的抑制效力(例如，12對比8，15對比10)。在苯并咪唑和三環(huán)苯并咪唑類似物中，具有氟乙氧基取代基的類似物比各自的具有氟乙基三唑基的類似物具有三倍更高的抑制效力(例如，8對比10，12對比15)。因此，選擇最有效的抑制劑12用于¹⁸F標記。

表1.PARP-1抑制劑的抑制效率

a.報告值:IC₅₀＝20nM,EC₅₀＝35nm；^3,24

實施例13

這個實施例示出了PARP-1酶活性測定。

該測定基于NAD⁺的化學定量，即當活性PARP-1C-末端催化結(jié)構(gòu)域循序地將ADP-核糖亞基從煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)受體時所消耗的NAD⁺的量。⁷

高比活性的PARP-1和活化的DNA購自Trevigen(馬里蘭州蓋瑟斯堡)。該測定法所需的所有其它試劑包括NAD⁺均購自Sigma-Aldrich(圣路易斯，密蘇里州)。在這些實驗中用作對照的已知的PARP-1抑制劑PJ-34在內(nèi)部合成。為了測試用于PARP-1抑制的化合物，首先在pH 8.0，50mM Tris-HCl，2mM MgCl₂(PARP測定緩沖液)中制備250nM NAD⁺的溶液并且將20μL轉(zhuǎn)移至96孔黑色熒光板的每個孔。在PARP測定緩沖液中制備活化DNA的50μg/ml溶液并將10μL加至每個孔中。首先在DMSO中制備測試化合物的儲備溶液，在PARP測定緩沖液中稀釋至不同濃度，并將10μL加至每個孔中。為了引發(fā)反應，將10μL的在PARP測定緩沖液中的10μg/ml PARP-1酶加入到每個孔中?？傮w積為50μL，使每孔終濃度為2μg/ml PARP-1酶，10μg/ml活化DNA，以及100nM NAD⁺。然后將板在室溫下孵育20分鐘。然后通過首先加入20μL 2M KOH，隨后加入20μL的20％苯乙酮(在乙醇中)至每孔來確定所存在的NAD⁺的量。將板在4℃下孵育10分鐘。然后加入90μL的88％甲酸，導致222mM KOH，2.2％苯乙酮，44％甲酸的終濃度，和不同的NAD⁺濃度。將板在100℃下孵育5分鐘，使之冷卻，然后使用360nM激發(fā)和450nM發(fā)射濾光片在Perkin Elmer Victor微孔板熒光計(沃爾瑟姆，馬薩諸塞州)上讀數(shù)。使用用于Windows的GraphPad Prism版本5.04(圣地亞哥，CA)生成劑量-響應曲線，其中僅含有NAD⁺的對照孔設(shè)定為0％PARP活性且僅包含PARP-1的對照孔設(shè)定為100％PARP活性。從由至少三個獨立的實驗生成的劑量-響應曲線計算IC₅₀值，并在表1中報告為平均值±標準偏差(SD)。

實施例14

本實施例說明放射性標記的PARP-1抑制劑的合成。

在常規(guī)條件(K₂₂₂/K₂CO₃)下在DMF中在105℃下，通過甲磺酸酯前體16的親核取代合成[¹⁸F]12(方案3)，在反相HPLC純化及固相萃取之后以40-50％產(chǎn)率(經(jīng)衰變校正的)得到[¹⁸F]12(圖2)?？偤铣蓵r間為90分鐘。在10％乙醇/鹽水中的最后劑量的比活性為5500-18000mCi/μmol。

方案3.[¹⁸F]12的放射合成

試劑和條件：[¹⁸F]KF，K₂₂₂，K₂CO₃，DMF，105℃，10min。

實施例15

這個實施例進一步說明了合成[¹⁸F]化合物12(WC-4-138)。

將[¹⁸F]氟化物(在100-500μL[¹⁸O]水中可達50mCi)轉(zhuǎn)移到含K₂₂₂(2.2mg，5.8μmol)和K₂CO₃(0.3mg，2.2μmol)的BD真空采血管(13×75mm，5ml，玻璃，無添加劑)中。然后用乙腈(3×1mL)在N₂氣體的平緩流動下將混合物通過105℃下的共沸蒸餾干燥。當干燥接近完成時，從油浴移出真空采血管，并在室溫下通過N₂流除去溶劑殘余物(<100μL)。將16(0.65mg，1.6μmol)在DMF(300μL)中的溶液加入到該真空采血管中，然后搖動，并在105℃下加熱10分鐘。在室溫下，用水(2ml)稀釋該反應混合物，然后裝載到用于純化的半制備柱(A)(18％乙腈/82％水/0.1％TFA，4ml/分鐘，251nm)上。收集含有[¹⁸F]12的HPLC流分，并使用標準的固相萃取方法在乙醇中獲得[¹⁸F]12。將劑量稀釋至10％乙醇在鹽水中。分析柱(B)用于分析所述劑量(32％乙腈/68％0.1M甲酸銨緩沖液pH＝4.5，2ml/分鐘，251nM)。總合成時間為90分鐘，衰變校正收率40-50％，放射化學純度為100％，而比活性在合成結(jié)束時在5500至18000mCi/μmol的范圍內(nèi)。

實施例16

本實施例說明小鼠中的腫瘤組織在微型PET中的可視化。

使用[¹⁸F]12通過PET可視化免疫缺陷小鼠中的MDA-MB-436人乳腺癌異種移植腫瘤。在示蹤物注射后的60分鐘，這些腫瘤顯示有別于背景的攝取增加(圖3)。示蹤物注射之前的20分鐘用奧拉帕尼(50mg/kg i.p.)或12(1mg/kg i.p.)治療的相同小鼠減少腫瘤中的[¹⁸F]12攝取到背景組織活性水平(圖3)。來自0-60分鐘的微型PET研究的腫瘤中的[¹⁸F]12的時間-放射性曲線證實微型PET圖像的視覺評估(圖4)，顯示作為用奧拉帕尼或12治療的結(jié)果的[¹⁸F]12攝取顯著減少。

MDA-MB-436是具有天生高水平的PARP-1活性¹⁹的人乳腺癌細胞系，并已用在小鼠模型中用于評估¹⁸F標記的奧拉帕尼衍生物用微型PET成像PARP-1活性的功效。在1小時微型PET獲取過程中，[¹⁸F]12在腫瘤中逐步積累，并且[¹⁸F]12攝取在用奧拉帕尼或12預處理的動物中被阻斷。奧拉帕尼和12是具有高的抑制效力(IC₅₀＝5nM³¹和6.3nM，分別)的有競爭力的PARP-1抑制劑。因此，我們的數(shù)據(jù)表明，小鼠模型中的[¹⁸F]12攝取是由于PARP-1表達，而且特別地[¹⁸F]12是用于PARP-1表達的體內(nèi)成像的有效PET示蹤物。

實施例17

這個實施例說明了使用PET可視化小鼠中的腫瘤組織。

使用補充有2mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，0.1mM非必需氨基酸2％用于MEM的維生素，和5％胎牛血清的Eagle’s最低必需培養(yǎng)基(含Earle’s平衡鹽溶液和2mM L-谷氨酰胺)，在標準條件下使用5％CO₂氣氛，將MDA-MB-436和MDA-MB-231人乳腺癌細胞保持在細胞培養(yǎng)物中。胰蛋白酶消化并收獲指數(shù)生長的細胞用于腫瘤植入。計數(shù)后，將細胞重新懸浮在冰冷的1：1Matrigel和PBS中，以得到所需的濃度，并保持在冰上。

在腫瘤植入用于這些串行成像研究前，使來自Charles River實驗室的成熟的雌性無胸腺nu/nu小鼠在AALAC認可的畜舍設(shè)施中適應至少1周。將1：1Matrigel:PBS中的MDA-MB-436乳腺癌細胞植入雌性nu/nu小鼠的乳腺脂肪墊(腋淋巴結(jié)附近)中。植入后2-3周進行成像研究。

將荷瘤小鼠置于含有異氟烷/氧氣的吸氣室中，然后固定到用于安置尾靜脈導管的定制雙人床；通過鼻錐在異氟烷/氧氣下維持麻醉用于動態(tài)成像程序。用150-200μCi的[¹⁸F]12注入小鼠并使用Focus 220和Inveon PET/CT掃描儀掃描0-60分鐘。從腫瘤和周圍的“背景”組織的關(guān)注的手工繪制區(qū)域生成標準的攝取值(SUVs)。通過比較基線掃描和在用阻斷劑奧拉帕尼(50mg/kg，IP)或12(1mg/Kg，IP)預處理之后的20分鐘通過示蹤物注射獲得的圖像確定具體攝取的可視化。

實施例18

本實施例說明細胞培養(yǎng)測定中的[¹⁸F]WC-4-138(化合物12)的攝取。

在這些實驗中，在補充有中10％胎牛血清(FBS，Gibco)，1％青霉素-鏈霉素(P/S，Gibco)，和100ng/ml氫化可的松(Sigma-Aldrich)的Dulbecco’s改良Eagle’s培養(yǎng)基(DMEM，Gibco)中繁殖頭和頸部鱗狀細胞癌系SCC1，SCC15和SCC25(ATCC)。在補充有10％FBS和1％P/S的RPMI培養(yǎng)基(Gibco)中繁殖小細胞肺癌細胞系NCI-H69和NCI-H82(ATCC)。在補充有5％FBS，2％用于MEM的維生素(Gibco)，1％200mM L-谷氨酰胺(Gibco)，1％10mM非必需氨基酸(NEAA，Gibco)的Eagle’s最低必需培養(yǎng)基(Gibco)中繁殖人類乳腺癌細胞系MDA-MB-231(ATCC)。

對于每個實驗重復，將大約1μCi[¹⁸F]WC-4-138稀釋在1ml細胞培養(yǎng)基中，并加入到10⁶個細胞。在5，30或60分鐘后，收集培養(yǎng)基并在0.7ml磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，Gibco)中洗滌細胞兩次。通過刮擦細胞培養(yǎng)皿收集粘附細胞并轉(zhuǎn)移到微量離心管。在收集的培養(yǎng)基，PBS或細胞沉淀中測定放射性。使用標準化學發(fā)光PARP ELISA試劑盒(Trevigen#4520-096-K)定量來自細胞沉淀的蛋白質(zhì)。所有數(shù)據(jù)都經(jīng)衰變校正和歸一化為細胞沉淀中的總蛋白量。對于藥物治療研究，在與[¹⁸F]WC-4-138孵育前二十小時，用10μM奧拉帕尼或尼帕尼孵育細胞。

頭部和頸部細胞系SCC1和SCC25在組成上占用少量的示蹤物，顯示為細胞沉淀中的0.001-0.002μCi/μg(圖5A)。肺細胞系NCI-H69和NCI-H82占用在細胞沉淀中顯示為0.004-0.006μCi/μg的[¹⁸F]WC-4-138(圖5A)。在用[¹⁸F]WC-4-138孵育5，30或60分鐘(在每個時間點n＝3)后，在頭部和頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)系(SCC1和SCC25)或小細胞肺癌(SCLC)系(NCI-H69和NCI-H82)中測定放射性。這些附圖代表對于SCC細胞1-2單位的PARP活性和對于NCI細胞大約3.5單位的PARP活性(圖5B)。在HNSCC或肺SCLC細胞中測定PARP活性。(圖5C-D)在用奧拉帕尼或尼帕尼治療的HNSCC細胞系中測定[¹⁸F]WC-4-138攝取。在用示蹤物孵育30或60分鐘(*p<0.05)之后，用于攝取的數(shù)據(jù)是平均值±標準差。所有數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，n＝3，除非另有說明。

該活性由奧拉帕尼(圖5C)而不是尼帕尼(圖5D)消除。

實施例19

這個實施例說明化合物12([¹⁸F]WC-4-138)的代謝穩(wěn)定性。

在這些實驗中，在將400μCi注入到成年雄性C57BL/6J小鼠(Jackson實驗室)的尾靜脈后評估[¹⁸F]-WC-4-138的代謝穩(wěn)定性。注射后5或30分鐘通過頸脫位法處死小鼠。撕裂下腔靜脈并從腹腔采集血液。通過以14000rpm離心從紅血細胞分離血漿。血漿(100μL)與乙腈以1：1.5比例混合并以14000rpm離心。測定與紅血細胞沉淀、全血漿和乙腈-可溶性和不溶性流份關(guān)聯(lián)的放射性。也在指定的時間收集每只動物的肝臟并在干冰上冷凍。肝臟在2ml乙腈中勻漿并且1ml的勻漿的肝臟以14000rpm離心。測定與上清液和沉淀相關(guān)的放射性。

用水以1：1比例混合乙腈可溶性血漿或肝臟上清液(100μL)并通過反相HPLC分離。還通過HPLC分離母體化合物作為參考。測定與每個HPLC流份相關(guān)聯(lián)的放射性。將各樣品的母體化合物百分比計算為與預期包含母體化合物的HPLC流份相關(guān)聯(lián)的放射性部分。

化合物12([¹⁸F]WC-4-138)在血液中快速代謝，在注射后5分鐘相對于參考化合物存在50％并且在注射后30分鐘觀察到相對于參考化合物只有約10％的化合物(圖6)。與此相反，化合物在肝臟中具有長得多的半衰期，在注射后5分鐘相對于參考化合物存在約80％并且在注射后30分鐘相對于參考化合物存在約70％(圖6)。

實施例20

這個實施例說明了化合物12([¹⁸F]WC-4-138)在小鼠中的生物分布。

經(jīng)由尾靜脈用[¹⁸F]WC-4-138注射八周大，雌性，無胸腺裸鼠(Harlan)。在IV注射示蹤物30μCi后5或30分鐘，注射45μCi后1或2小時或注射60μCi的[¹⁸F]WC-4-138后4小時，通過頸脫位法處死小鼠。通過反相高效液相色譜法(HPLC)分離血漿或肝臟的乙腈可溶流份和對照母體化合物并且定量各個流份的放射性。將各樣品的母體化合物百分比計算為與預期包含母體化合物的HPLC流份相關(guān)聯(lián)的放射性部分。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，n＝3。

在每個時間點處死四只小鼠，除了2小時時間點(n＝3)。從每只動物收集血液、心臟、肺、肌肉、肝、脾、脂肪、腎上腺、腎、子宮、卵巢、骨、骨髓、胰腺、胃、小腸以及大腸。所有器官弄干以除去過量的血液，稱重，并在貝克曼6000γ計數(shù)器中計數(shù)。對每個器官測定組織的每克注射劑量百分比(％ID/g)。結(jié)果在0.5％至15％每克組織注射劑量之間變化，并且在表1和2中報告。

表1無胸腺裸鼠中的[¹⁸F]WC-4-138的器官生物分布

％ID/g

％ID/g的＝每克組織注射劑量百分比。

所有數(shù)據(jù)都是平均值±標準差。對于所有組n＝4，除了在120分鐘n＝3。

表2.從小鼠生物分布研究估算的人類劑量

使用標準MIRD方法，從根據(jù)表1中示出的小鼠生物分布數(shù)據(jù)計算出的器官滯留時間獲得估算。

實施例21

這個實施例說明了化合物12([¹⁸F]WC-4-138)在小鼠中的攝取。

將10⁶個SCC1細胞或10⁷個MDA-MB-231細胞植入到成熟的雌性無胸腺裸小鼠(Charles River實驗室)的乳腺脂肪墊中。在植入后5周成像攜帶SCC1腫瘤的小鼠以及在植入后2.5周成像攜帶MDA-MB-231細胞的小鼠。用2％異氟烷/氧麻醉小鼠，并在整個成像過程中通過鼻錐使小鼠保持在1％異氟烷/氧氣中。在Inveon PET/CT掃描儀上獲得整個動物微型CT圖像。小鼠經(jīng)尾靜脈注射11.36±0.5MBq(307±13μCi)的[¹⁸F]WC(4)-138，并使用Focus 220或Inveon PET/CT掃描儀使小鼠經(jīng)歷60分鐘動態(tài)掃描。用Integrated Research Workflow軟件(西門子)配準微型PET和微型CT圖像。在腫瘤上畫出關(guān)注的區(qū)域，以確定時間活性曲線。對于藥物治療研究，成像前30分鐘，動物接受50mg/Kg奧拉帕尼或尼帕尼腹膜內(nèi)注射。在基線，或IP注射奧拉帕尼或尼帕尼后30分鐘成像小鼠。MDA-MB-231荷瘤小鼠的橫向視圖顯示于圖7。箭頭指示CT上所確定的腫瘤位置。腫瘤中和基線(圖7，每個通道視圖的頂部，箭頭)中的小鼠的其它部分大量攝取示蹤物，但通過用奧拉帕尼治療，消除了[¹⁸F]12的腫瘤攝取(圖7，每個通道面板左下，箭頭)，但示蹤物仍然存在于該部分的其它區(qū)域。與此相反，尼帕尼治療不影響腫瘤細胞中的[¹⁸F]WC(4)-138的攝取，但廢除在其它類型的細胞中的所述攝取(圖7，每個通道視圖的右下，箭頭)。

實施例22

這個實施例示出了定量分析，其顯示基線和MDA-MB-231腫瘤(圖8A)和SCC腫瘤(圖8B)藥物治療之間的每ml注射劑量顯著降低。在圖8中，在基線或IP注射奧拉帕尼或尼帕尼后的30分鐘成像小鼠。(A)在基線或藥物治療后為每個MDA/MB-231腫瘤計算每ml注射劑量的百分比。奧拉帕尼處理的小鼠中的示蹤物攝取顯著降低(通過配對t檢驗確定*p＝0.0038，n＝6腫瘤)。尼帕尼處理的小鼠中的示蹤物攝取不變(通過配對t檢驗確定p＝0.1098，n＝6腫瘤)。(B)在基線或藥物治療后為每個SCC1腫瘤計算每ml注射劑量的百分比。奧拉帕尼處理的小鼠中的示蹤物攝取顯著降低(通過配對t檢驗確定*p＝0.001，n＝8腫瘤)。尼帕尼處理的小鼠中的示蹤物攝取不變(通過配對t檢驗確定p＝0.7216，n＝5腫瘤)。

實施例23

受試者呈現(xiàn)潛在PARP-1相關(guān)的乳腺癌癥狀。醫(yī)師要求進行PET掃描，并且技術(shù)人員施用有效量的[¹⁸F]WC(4)-138和執(zhí)行PET掃描。相比于受試者的周圍組織，腫瘤顯示出大量的示蹤物攝取。醫(yī)師診斷PARP-1相關(guān)的癌癥并開具PARP-1抑制劑作為治療方案的一部分。

實施例24

受試者呈現(xiàn)肺的異常炎癥。醫(yī)師要求進行PET掃描，并且技術(shù)人員施用有效量的[¹⁸F]WC(4)-138和執(zhí)行PET掃描。相比于對照肺組織，腫瘤組織顯示出大量的示蹤物攝取，并且醫(yī)師診斷PARP-1相關(guān)的炎癥并開具PARP-1抑制劑作為治療方案的一部分。

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