本申請(qǐng)包括計(jì)算機(jī)可讀形式的序列表，將其通過(guò)引用結(jié)合在此。發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及具有脂肪酶活性的多肽、編碼這些多肽的多核苷酸、產(chǎn)生這些多肽的方法、以及使用這些多肽的方法。相關(guān)技術(shù)說(shuō)明脂肪酶是重要的生物催化劑，其已顯示可用于各種應(yīng)用并且大量的不同脂肪酶已經(jīng)被鑒定并且許多已被商品化。然而，適合于在適應(yīng)于當(dāng)前使用的條件的不同組合物中使用的新脂肪酶是令人希望的。脂肪酶已經(jīng)被用于組合物中，從而用于通過(guò)水解甘油三酯以產(chǎn)生脂肪酸來(lái)去除脂質(zhì)污漬。當(dāng)前清潔和/或織物護(hù)理組合物包括許多活性成分，這些成分干擾脂肪酶去除脂質(zhì)污漬的能力。因此，需要可以在用于清潔的組合物的嚴(yán)苛環(huán)境中起作用的脂肪酶。本申請(qǐng)的目的是提供具有有利特征的脂肪酶，如當(dāng)應(yīng)用在清潔劑組合物中時(shí)具有改進(jìn)的性能的脂肪酶。來(lái)自米根霉(UNIPROTB1Q560)的已知的脂肪酶與本申請(qǐng)的SEQIDNO:2的成熟多肽具有55％一致性。發(fā)明概述本發(fā)明涉及具有脂肪酶活性的分離的多肽，這些分離的多肽選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(a)與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)一種由以下多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸在低嚴(yán)格條件下、中嚴(yán)格條件下、中-高嚴(yán)格條件下、高嚴(yán)格條件下或非常高嚴(yán)格條件下與(i)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3或(i)的全長(zhǎng)互補(bǔ)體雜交；(c)一種多肽，該多肽由與SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的成熟多肽編碼序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多核苷酸編碼；(d)一種多肽，該多肽是在一個(gè)或多個(gè)(例如若干個(gè))位置處包括取代、缺失、和/或插入的SEQIDNO:2的變體；以及(e)一種多肽，該多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一項(xiàng)的片段。本發(fā)明還涉及編碼這些多肽的分離的多核苷酸；包含這些多核苷酸的核酸構(gòu)建體、載體、以及宿主細(xì)胞；以及生產(chǎn)該多肽的方法和該多肽的用途。本發(fā)明還涉及包括該多肽的組合物和使用該多肽進(jìn)行清潔的方法。序列表綜述SEQIDNO:1是如從閃光須霉(Phycomycesnitens)分離的脂肪酶的DNA序列。SEQIDNO:2是如從SEQIDNO:1推導(dǎo)的脂肪酶的氨基酸序列。SEQIDNO:3是針對(duì)在米曲霉中SEQIDNO:2的表達(dá)所優(yōu)化的人工DNA序列。SEQIDNO:4是引物lip47921-4O_C505_BamHI。SEQIDNO:5是引物lip47921-4O_C505_XhoI。定義等位基因變體：術(shù)語(yǔ)“等位基因變體”意指占據(jù)同一染色體基因座的基因的兩種或更多種可替代形式中的任一種。等位基因變異由突變天然產(chǎn)生，并且可以導(dǎo)致群體內(nèi)多態(tài)性?；蛲蛔兛梢允浅聊?在所編碼的多肽中沒(méi)有改變)或可編碼具有改變的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因變體是由基因的等位基因變體編碼的多肽。cDNA：術(shù)語(yǔ)“cDNA”意指可以通過(guò)從得自真核或原核細(xì)胞的成熟的、剪接的mRNA分子進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄而制備的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于對(duì)應(yīng)基因組DNA中的內(nèi)含子序列。早先的初始RNA轉(zhuǎn)錄本是mRNA的前體，其在呈現(xiàn)為成熟的剪接的mRNA之前要經(jīng)一系列的步驟進(jìn)行加工，包括剪接。編碼序列：術(shù)語(yǔ)“編碼序列”意指直接指定一個(gè)多肽的氨基酸序列的多核苷酸。編碼序列的邊界一般由開(kāi)放閱讀框架決定，該開(kāi)放閱讀框架從起始密碼子(如ATG、GTG或TTG)開(kāi)始并且以終止密碼子(如TAA、TAG或TGA)結(jié)束。編碼序列可以是基因組DNA、cDNA、合成DNA或其組合?？刂菩蛄校盒g(shù)語(yǔ)“控制序列”意指對(duì)于表達(dá)編碼本發(fā)明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。各個(gè)控制序列可以相對(duì)于編碼多肽的多核苷酸是天然的(即，來(lái)自相同基因)或外源的(即，來(lái)自不同基因)，或相對(duì)于彼此是天然的或外源的。此類控制序列包括但不限于前導(dǎo)子、多腺苷酸化序列、前肽序列、啟動(dòng)子、信號(hào)肽序列、以及轉(zhuǎn)錄終止子。至少，控制序列包括啟動(dòng)子以及轉(zhuǎn)錄和翻譯終止信號(hào)。出于引入有利于將這些控制序列與編碼多肽的多核苷酸的編碼區(qū)連接的特異性限制酶切位點(diǎn)的目的，這些控制序列可以提供有多個(gè)接頭。表達(dá)：術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”包括涉及多肽產(chǎn)生的任何步驟，包括但不限于，轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾、以及分泌。表達(dá)載體：術(shù)語(yǔ)“表達(dá)載體”意指線性或環(huán)狀DNA分子，該分子包含編碼多肽的多核苷酸并且該多核苷酸可操作地與提供用于其表達(dá)的控制序列相連接。片段：術(shù)語(yǔ)“片段”意指在該成熟多肽的氨基(N-)和/或羧基(C-)末端缺失一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))氨基酸的一種多肽；其中該片段具有脂肪酶活性。在一方面，該片段包含SEQIDNO:2的氨基酸1至340的數(shù)目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％。宿主細(xì)胞：術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”意指易于用包含本發(fā)明的多核苷酸的核酸構(gòu)建體或表達(dá)載體轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)等的任何細(xì)胞類型。術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”涵蓋由于復(fù)制期間發(fā)生的突變而與親本細(xì)胞不同的親本細(xì)胞的任何后代。分離的：術(shù)語(yǔ)“分離的”意指處于自然界中不存在的形式或環(huán)境中的物質(zhì)。分離的物質(zhì)的非限制性實(shí)例包括(1)任何非天然存在的物質(zhì)，(2)包括但不限于任何酶、多肽、變體、核酸、蛋白質(zhì)、肽或輔因子的任何物質(zhì)，該物質(zhì)至少部分地從與其本質(zhì)上相關(guān)的一種或多種(例如，若干)或所有天然存在的成分中去除；(3)相對(duì)于天然發(fā)現(xiàn)的物質(zhì)通過(guò)人工修飾的任何物質(zhì)；或(4)通過(guò)相對(duì)于與其天然相關(guān)聯(lián)的其他組分增加該物質(zhì)的量而修飾的任何物質(zhì)(例如，編碼該物質(zhì)的基因的多個(gè)拷貝；比與編碼該物質(zhì)的基因天然相關(guān)聯(lián)的啟動(dòng)子更強(qiáng)的啟動(dòng)子的使用)。分離的物質(zhì)可以存在于發(fā)酵液樣品中。脂肪酶：術(shù)語(yǔ)“脂肪酶(lipase)”、“脂肪酶(lipaseenzyme)”、“脂解酶”、“脂質(zhì)酯酶”、“脂解多肽”以及“脂解蛋白”是指如酶命名法所定義的EC3.1.1類中的一種酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，EC3.1.1.3)、角質(zhì)酶活性(EC3.1.1.74)、固醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蠟酯水解酶活性(EC3.1.1.50)。出于本發(fā)明的目的，根據(jù)實(shí)例中所述的程序確定脂肪酶活性。在一方面，本發(fā)明的變體具有SEQIDNO:2的多肽的至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％的脂肪酶活性。低溫：“低溫”是5℃-35℃，如5℃-30℃、5℃-25℃、5℃-20℃、5℃-15℃、或5℃-10℃的溫度。在另一個(gè)實(shí)施例中，“低溫”是10℃-35℃，如10℃-30℃、10℃-25℃、10℃-20℃、或10℃-15℃的溫度。成熟多肽：術(shù)語(yǔ)“成熟多肽”意指呈其在翻譯以及任何翻譯后修飾之后的最終形式的多肽，所述修飾如N-末端加工、C-末端截?cái)?、糖基化、磷酸化等。在一方面，成熟多肽是SEQIDNO:2的氨基酸1至340。SEQIDNO:2的氨基酸-23至1是信號(hào)肽。在本領(lǐng)域中已知的是，宿主細(xì)胞可以產(chǎn)生由相同多核苷酸表達(dá)的兩種或更多種不同成熟多肽(即，具有一個(gè)不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。成熟多肽編碼序列：術(shù)語(yǔ)“成熟多肽編碼序列”意指編碼具有脂肪酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一方面，該成熟多肽編碼序列被包括在SEQIDNO:1的核苷酸570-1029、1090-1118、1188-1245、1314-1410、1482-1579、1641-1727、1781-1861、1933-2011、2068-2101中。SEQIDNO:1的核苷酸501至569編碼信號(hào)肽。SEQIDNO:1中的DNA序列是源自閃光須霉的基因組DNA。在一方面，成熟多肽編碼序列被包括在SEQIDNO:3的核苷酸70-1089中。SEQIDNO:1的核苷酸3至69編碼信號(hào)肽。在SEQIDNO:3中的DNA序列是針對(duì)在米曲霉中SEQIDNO:2的表達(dá)所優(yōu)化的人工DNA序列。核酸構(gòu)建體：術(shù)語(yǔ)“核酸構(gòu)建體”意指單鏈或雙鏈的核酸分子，該核酸分子是從天然存在的基因中分離的，或以本來(lái)不存在于自然界中的方式被修飾成含有核酸的區(qū)段，或是合成的，該核酸分子包括一個(gè)或多個(gè)控制序列?？刹僮鞯剡B接：術(shù)語(yǔ)“可操作地連接”意指如下的構(gòu)造，其中，控制序列相對(duì)于多核苷酸的編碼序列安置在適當(dāng)位置，從而使得該控制序列指導(dǎo)該編碼序列的表達(dá)。親本或親本脂肪酶：術(shù)語(yǔ)“親本”或“親本脂肪酶”意指如下的脂肪酶，對(duì)該脂肪酶進(jìn)行取代以產(chǎn)生本發(fā)明的脂肪酶的變體。親本可以是天然存在的(野生型)多肽或其變體或片段。序列一致性：用參數(shù)“序列一致性”來(lái)描述兩個(gè)氨基酸序列之間或兩個(gè)核苷酸序列之間的相關(guān)性。出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：歐洲分子生物學(xué)開(kāi)放軟件套件，賴斯(Rice)等人，2000，遺傳學(xué)趨勢(shì)(TrendsGenet.)16:276-277)(優(yōu)選5.0.0版或更新版本)的尼德?tīng)柍绦蛑兴鶎?shí)施的尼德?tīng)柭?翁施算法(尼德?tīng)柭?Needleman)和翁施(Wunsch)，1970，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)48:443-453)來(lái)確定兩氨基酸序列之間的序列一致性。所使用的參數(shù)是空位開(kāi)放罰分10，空位延伸罰分0.5，以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩陣。尼德?tīng)枠?biāo)注的“最長(zhǎng)的一致性”的輸出(使用-非簡(jiǎn)化選項(xiàng)獲得)被用作百分比一致性，并且計(jì)算如下：(一致的殘基x100)/(比對(duì)長(zhǎng)度-比對(duì)中的空位總數(shù))出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：歐洲分子生物學(xué)開(kāi)放軟件套件，賴斯(Rice)等人，2000，見(jiàn)上文)(優(yōu)選5.0.0版或更新版本)的尼德?tīng)柍绦蛑兴鶎?shí)施的尼德?tīng)柭?翁施算法(尼德?tīng)柭?Needleman)和翁施(Wunsch)，1970，見(jiàn)上文)來(lái)確定兩個(gè)脫氧核糖核苷酸序列之間的序列一致性。所使用的參數(shù)是空位開(kāi)放罰分10，空位延伸罰分0.5，以及EDNAFULL(NCBINUC4.4的EMBOSS版)取代矩陣。尼德?tīng)枠?biāo)注的“最長(zhǎng)的一致性”的輸出(使用-非簡(jiǎn)化選項(xiàng)獲得)被用作百分比一致性，并且計(jì)算如下：(一致的脫氧核糖核苷酸x100)/(比對(duì)長(zhǎng)度-比對(duì)中的空位總數(shù))嚴(yán)格條件：非常低嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“非常低嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA和25％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在45℃下使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。低嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“低嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA和25％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在50℃使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。中嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“中嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA和35％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在55℃使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。中-高嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“中-高嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA以及35％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在60℃使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。高嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“高嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA和50％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在65℃使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。非常高嚴(yán)格條件：術(shù)語(yǔ)“非常高嚴(yán)格條件”意指對(duì)于長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/mL剪切并變性的鮭魚(yú)精子DNA和50％甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時(shí)。最后在70℃使用2XSSC、0.2％SDS將載體材料洗滌三次，每次15分鐘。子序列：術(shù)語(yǔ)“子序列”意指使一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))核苷酸從成熟多肽編碼序列的5'端和/或3'端缺失的多核苷酸；其中該子序列編碼具有脂肪酶活性的片段。在一方面，子序列包含SEQIDNO:2的核苷酸82至1134的數(shù)目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、和至少95％。變體：術(shù)語(yǔ)“變體”意指在一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))位置包括取代的具有脂肪酶活性的多肽，即本發(fā)明的變體也是本發(fā)明的多肽。取代意指用不同的氨基酸置換占用一個(gè)位置的氨基酸。本發(fā)明的這些變體具有SEQIDNO:2的脂肪酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。洗滌性能：在本發(fā)明背景下，使用術(shù)語(yǔ)“洗滌性能”作為酶去除存在于待清潔的物體上的脂質(zhì)或含脂質(zhì)污漬的能力。洗滌性能可以通過(guò)計(jì)算在以下方法部分中的AMSA說(shuō)明中定義的所謂G/(B+R)值來(lái)定量。術(shù)語(yǔ)“洗滌性能”包括通常清潔例如硬表面清潔，如在餐具洗滌中，但還包括在紡織品如衣物上的洗滌性能，并且還包括工業(yè)清潔和機(jī)構(gòu)清潔。野生型脂肪酶：術(shù)語(yǔ)“野生型”脂肪酶意指由天然存在的微生物(如在自然界中發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌、酵母或絲狀真菌)表達(dá)的脂肪酶?！耙吧汀敝久缚梢栽谒拗骷?xì)胞中進(jìn)行重組表達(dá)。發(fā)明詳述具有脂肪酶活性的多肽在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及具有脂肪酶活性的分離的多肽，這些分離的多肽選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(a)與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)由以下多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸在低嚴(yán)格條件下、中嚴(yán)格條件下、中-高嚴(yán)格條件下、高嚴(yán)格條件下或非常高嚴(yán)格條件下與(i)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3或(i)的全長(zhǎng)互補(bǔ)體雜交；(c)一種多肽，該多肽由與SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的成熟多肽編碼序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多核苷酸編碼；(d)一種多肽，該多肽是在一個(gè)或多個(gè)(例如若干個(gè))位置處包括取代、缺失、和/或插入的SEQIDNO:2的變體；以及(e)一種多肽，該多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一項(xiàng)的片段。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少70％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少75％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少80％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少85％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少90％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少95％的脂肪酶活性。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性的多肽，并且其中該多肽具有SEQIDNO:2的成熟多肽的至少100％的脂肪酶活性。本發(fā)明的多肽優(yōu)選地包括SEQIDNO:2的氨基酸序列或其等位基因變體或由其組成；或是其具有脂肪酶活性的片段。在另一方面，該多肽包括SEQIDNO:2的成熟多肽或由其組成。在另一方面，該多肽包括SEQIDNO:2的氨基酸1至340或由其組成。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及由以下多核苷酸編碼的具有脂肪酶活性的分離的多肽，該多核苷酸在非常低嚴(yán)格條件、低嚴(yán)格條件、中嚴(yán)格條件、中-高嚴(yán)格條件、高嚴(yán)格條件、或非常高嚴(yán)格條件下與以下各項(xiàng)雜交：(i)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的成熟多肽編碼序列，或(i)的全長(zhǎng)互補(bǔ)體(薩姆布魯克(Sambrook)等人，1989，分子克隆實(shí)驗(yàn)指南(MolecularCloning,ALaboratoryManual)，第二版，冷泉港(ColdSpringHarbor)，紐約)。在另一方面，該多肽是SEQIDNO:2的多肽的片段。該片段可以包含至少250個(gè)氨基酸殘基，例如，至少255個(gè)、至少260個(gè)、至少265個(gè)、至少270個(gè)、至少275個(gè)、至少280個(gè)、至少285個(gè)、至少290個(gè)、至少295個(gè)、至少300個(gè)、至少305個(gè)、至少310個(gè)、至少315個(gè)、至少320個(gè)、至少325個(gè)、至少330個(gè)、至少335個(gè)、至少340個(gè)氨基酸殘基。在一方面，該片段包含SEQIDNO:2的多肽的氨基酸的數(shù)目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的多核苷酸或其子序列，連同SEQIDNO:2的多肽或其片段可根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法用于設(shè)計(jì)核酸探針以鑒定和克隆來(lái)自不同屬或種的株系的、編碼具有脂肪酶活性的多肽的DNA。具體地，可以遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，使用此類探針與感興趣的細(xì)胞的基因組DNA或cDNA雜交，以便鑒定和分離其中的對(duì)應(yīng)基因。這樣的探針可以大大短于整個(gè)序列，但是長(zhǎng)度應(yīng)該為至少15個(gè)，例如至少25個(gè)、至少35個(gè)或至少70個(gè)核苷酸。優(yōu)選地，核酸探針的長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸，例如長(zhǎng)度為至少200個(gè)核苷酸、至少300個(gè)核苷酸、至少400個(gè)核苷酸、至少500個(gè)核苷酸、至少600個(gè)核苷酸、至少700個(gè)核苷酸、至少800個(gè)核苷酸、或至少900個(gè)核苷酸。DNA和RNA探針二者均可使用。典型地將探針進(jìn)行標(biāo)記，用于檢測(cè)相應(yīng)的基因(例如，用32P、3H、35S、生物素或抗生物素蛋白)。本發(fā)明涵蓋此類探針?？梢葬槍?duì)與以上描述的探針雜交并且編碼具有脂肪酶活性的多肽的DNA，對(duì)從此類其他菌株制備的基因組DNA或cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選。來(lái)自此類其他菌株的基因組DNA或其他DNA可以通過(guò)瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳，或其他分離技術(shù)來(lái)分離。來(lái)自文庫(kù)的DNA或分離的DNA可轉(zhuǎn)移到并固定在硝酸纖維素或其他適合的載體材料上。為了鑒定與SEQIDNO:1或SEQIDNO:3或其子序列雜交的克隆或DNA，將載體材料用于DNA印跡中。出于本發(fā)明的目的，雜交表示多核苷酸與對(duì)應(yīng)于以下項(xiàng)的標(biāo)記的核酸探針雜交：(i)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3；(ii)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的成熟多肽編碼序列；(iii)其全長(zhǎng)互補(bǔ)體；或(iv)其子序列；雜交是在非常低至非常高嚴(yán)格條件下進(jìn)行。在這些條件下與該核酸探針雜交的分子可以使用例如X射線薄膜或本領(lǐng)域中已知的任何其他檢測(cè)手段進(jìn)行檢測(cè)。在一方面，該核酸探針是SEQIDNO:1或SEQIDNO:3。在另一方面，該核酸探針由SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的至少15個(gè)并且多達(dá)1000個(gè)核苷酸組成。在另一個(gè)方面，核酸探針是編碼以下項(xiàng)的多核苷酸：SEQIDNO:2的多肽；或其片段。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽具有脂肪酶活性，由與SEQIDNO:1或SEQIDNO:3的成熟多肽編碼序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多核苷酸編碼。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及SEQIDNO:2的多肽、SEQIDNO:2的成熟多肽、或其片段的變體，這些變體在一個(gè)或多個(gè)(例如若干個(gè))位置處包括取代。在一個(gè)實(shí)施例中，向SEQIDNO:2的多肽中引入的氨基酸取代的數(shù)目是1-50、1-40、1-30、1-20、1-10或1-5個(gè)，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(gè)。這些氨基酸變化可以具有微小性質(zhì)，即，不會(huì)顯著地影響蛋白質(zhì)的折疊和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30個(gè)氨基酸的小缺失；小的氨基末端的或羧基末端的延伸，例如氨基末端甲硫氨酸殘基；高達(dá)20-25個(gè)殘基的小接頭肽；或通過(guò)改變凈電荷或另一功能有利于純化的小的延伸，例如聚組氨酸段、抗原表位或結(jié)合結(jié)構(gòu)域。保守取代的實(shí)例是在下組的范圍內(nèi)：堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸及組氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、極性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸及纈氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸及甲硫氨酸)。一般不會(huì)改變比活性的氨基酸取代是本領(lǐng)域已知的并且例如由H.諾伊拉特(Neurath)和R.L.希爾(Hill)，1979，在蛋白質(zhì)(TheProteins)，學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress)，紐約中描述。常見(jiàn)的取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。可替代地，氨基酸改變具有這樣的性質(zhì)：改變多肽的物理化學(xué)特性。例如，氨基酸改變可以改進(jìn)多肽的熱穩(wěn)定性、改變底物特異性、改變最適pH等。可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序，如定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變(坎寧漢(Cunningham)和威爾斯(Wells)，1989，科學(xué)(Science)244:1081-1085)來(lái)鑒定多肽中的必需氨基酸。在后種技術(shù)中，在分子中的每個(gè)殘基處引入單個(gè)丙氨酸突變，并且測(cè)試所得突變分子的脂肪酶活性以鑒定對(duì)分子的活性關(guān)鍵的氨基酸殘基。還參看希爾頓(Hilton)等人，1996，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可結(jié)合假定接觸位點(diǎn)氨基酸的突變，如通過(guò)以下技術(shù)例如核磁共振、結(jié)晶學(xué)、電子衍射、或光親和標(biāo)記進(jìn)行確定，對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行物理學(xué)分析，從而確定酶的活性位點(diǎn)或其他生物學(xué)相互作用。參見(jiàn)，例如，德沃斯(deVos)等人，1992，科學(xué)(Science)255:306-312；史密斯(Smith)等人，1992，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)224:899-904；沃勒達(dá)爾(Wlodaver)等人，1992，歐洲生物化學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)盟通訊(FEBSLett.)309:59-64。還可以從與相關(guān)多肽的比對(duì)推斷鑒別必需氨基酸?？梢宰龀鰡蝹€(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用誘變、重組、和/或改組的已知方法進(jìn)行測(cè)試，隨后進(jìn)行相關(guān)篩選程序，如由里德哈爾-奧爾森(Reidhaar-Olson)和薩奧爾(Sauer)，1988，科學(xué)(Science)241:53-57；博維(Bowie)和薩奧爾，1989，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156；WO95/17413；或WO95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易錯(cuò)PCR、噬菌體展示(例如洛曼(Lowman)等人，1991，生物化學(xué)(Biochemistry)30:10832-10837；US5223409；WO92/06204)以及區(qū)域定向誘變(德比什爾(Derbyshire)等人，1986，基因(Gene)46:145；內(nèi)爾(Ner)等人，1988，DNA7:127)?？梢越Y(jié)合誘變/改組方法與高通量自動(dòng)化篩選方法來(lái)檢測(cè)由宿主細(xì)胞表達(dá)的克隆的、誘變的多肽的活性(內(nèi)斯(Ness)等人，1999，自然生物技術(shù)(NatureBiotechnology)17:893-896)。編碼活性多肽的誘變的DNA分子可以回收自宿主細(xì)胞，并且使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)其進(jìn)行迅速測(cè)序。這些方法允許迅速確定多肽中單個(gè)氨基酸殘基的重要性。多肽可以是雜合多肽，其中一個(gè)多肽的區(qū)域融合在另一多肽的區(qū)域的N末端或C末端。多肽還可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一多肽融合在本發(fā)明的多肽的N-末端或C-末端。通過(guò)將編碼另一多肽的多核苷酸融合到本發(fā)明的多核苷酸而產(chǎn)生融合多肽。用于產(chǎn)生融合多肽的技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的，并且包括連接編碼多肽的編碼序列，這樣使得它們?cè)诳騼?nèi)并且使得融合多肽的表達(dá)處于相同的一個(gè)或多個(gè)啟動(dòng)子和終止子的控制下。融合多肽還可以使用內(nèi)含肽技術(shù)來(lái)構(gòu)建，其中融合多肽在翻譯后產(chǎn)生(庫(kù)珀(Cooper)等人，1993，歐洲分子生物學(xué)學(xué)會(huì)雜志(EMBOJ.)12:2575-2583；道森(Dawson)等人，1994，科學(xué)(Science)266:776-779)。融合多肽可以在兩種多肽之間進(jìn)一步包括切割位點(diǎn)。在融合蛋白分泌之時(shí)，該位點(diǎn)被切割，從而釋放出這兩種多肽。切割位點(diǎn)的實(shí)例包括但不限于以下各項(xiàng)中披露的位點(diǎn)：馬丁(Martin)等人，2003，工業(yè)微生物學(xué)與生物技術(shù)雜志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3：568-576；斯韋蒂納(Svetina)等人，2000，生物技術(shù)雜志(J.Biotechnol.)76：245-251；拉斯馬森(Rasmussen)-威爾遜(Wilson)等人，1997，應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)(Appl.Environ.Microbiol.)63：3488-3493；華德(Ward)等人，1995，生物技術(shù)(Biotechnology)13：498-503；以及孔特拉斯(Contreras)等人，1991，生物技術(shù)9：378-381；伊頓(Eaton)等人，1986，生物化學(xué)(Biochemistry)25：505-512；柯林斯(Collins)-萊斯(Racie)等人，1995，生物技術(shù)13：982-987；卡特(Carter)等人，1989，蛋白：結(jié)構(gòu)、功能和遺傳學(xué)(Proteins:Structure,Function,andGenetics)6：240-248；以及史蒂文斯(Stevens)，2003，世界藥物發(fā)現(xiàn)(DrugDiscoveryWorld)4：35-48?？紤]到如上所述的本發(fā)明的多肽還可以為用于產(chǎn)生脂肪酶變體的一個(gè)或多個(gè)(例如若干個(gè))取代提供基礎(chǔ)。因此，該多肽還應(yīng)是親本脂肪酶。具有脂肪酶活性的多肽的來(lái)源本發(fā)明的具有脂肪酶活性的多肽可以從任何屬的微生物獲得。出于本發(fā)明的目的，如在此結(jié)合一種給定的來(lái)源使用的術(shù)語(yǔ)“從...中獲得”應(yīng)意指由多核苷酸編碼的多肽是由該來(lái)源或者由其中已經(jīng)插入來(lái)自該來(lái)源的多核苷酸的菌株產(chǎn)生的。在一方面，該多肽是胞外分泌的。該多肽可以是細(xì)菌脂肪酶或真菌脂肪酶。在一個(gè)優(yōu)選的方面，該多肽是閃光須霉脂肪酶，例如，SEQIDNO:2的脂肪酶、SEQIDNO:2的成熟多肽或其片段。將理解的是，對(duì)于以上提到的物種而言，本發(fā)明涵蓋完全狀態(tài)和不完全狀態(tài)(perfectandimperfectstates)二者、以及其他分類學(xué)等效物，例如無(wú)性型，而不管它們已知的物種名稱是什么。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易地識(shí)別適當(dāng)?shù)刃锏纳矸?。?xì)菌和真菌物種的菌株可以容易地在許多培養(yǎng)物保藏中心為公眾所獲得，如美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)、德國(guó)微生物菌種保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH，DSMZ)、荷蘭菌種保藏中心(CentraalbureauVoorSchimmelcultures，CBS)以及美國(guó)農(nóng)業(yè)研究服務(wù)專利培養(yǎng)物保藏中心北方地區(qū)研究中心(NRRL)?？梢允褂靡陨咸岬降奶结槒钠渌麃?lái)源，包括從自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分離的微生物或直接從自然材料(例如，土壤、堆肥、水等)獲得的DNA樣品鑒定和獲得該多肽。用于從自然生活環(huán)境中直接分離微生物和DNA的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。然后可通過(guò)在另一種微生物或混合DNA樣本的基因組DNA或cDNA文庫(kù)中類似地進(jìn)行篩選來(lái)獲得編碼多肽的多核苷酸。一旦用一種或多種探針檢測(cè)到編碼多肽的多核苷酸，就可以通過(guò)使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)分離或克隆該多核苷酸(參見(jiàn)例如，薩姆布魯克(Sambrook)等人，1989，同上)。多肽的制備本發(fā)明還涉及用于獲得具有脂肪酶活性的多肽的方法，這些方法包括：(a)向親本脂肪酶(例如，野生型)中對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2的多肽的位置的一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))位置處引入取代；并且(b)回收該變體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何誘變程序來(lái)制備這些變體，例如定點(diǎn)誘變、合成基因構(gòu)建、半合成基因構(gòu)建、隨機(jī)誘變、改組等。定點(diǎn)誘變是在編碼該親本的多核苷酸中的一個(gè)或多個(gè)限定位點(diǎn)處引入一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))突變的技術(shù)。通過(guò)使用涉及含有所希望的突變的寡核苷酸引物的PCR可以體外實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)誘變。也可以通過(guò)盒式誘變進(jìn)行體外定點(diǎn)誘變，所述盒式誘變涉及由限制酶在包括編碼親本的多核苷酸的質(zhì)粒中的位點(diǎn)處切割并且隨后將含有突變的寡核苷酸連接在多核苷酸中。通常，消化該質(zhì)粒與該寡核苷酸的限制酶是相同的，以允許該質(zhì)粒的粘性末端以及插入片段彼此連接。參見(jiàn)，例如謝勒(Scherer)和戴維斯(Davis)，1979，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)76:4949-4955；和巴頓(Barton)等人，1990，核酸研究(NucleicAcidsRes.)18:7349-4966。還可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法體內(nèi)實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)誘變。參見(jiàn)，例如，US2004/0171154；斯道瑞希(Storici)等人，2001，自然生物技術(shù)(NatureBiotechnol.)19:773-776；卡倫(Kren)等人，1998，自然醫(yī)學(xué)(Nat.Med.)4:285-290；以及凱利薩諾(Calissano)和馬奇諾(Macino)，1996，真菌遺傳學(xué)簡(jiǎn)訊(FungalGenet.Newslett.)43:15-16。在本發(fā)明中可以使用任何定點(diǎn)誘變程序。存在可用于制備變體的很多可商購(gòu)的試劑盒。合成基因構(gòu)建需要體外合成一種設(shè)計(jì)的多核苷酸分子以編碼一種所感興趣的多肽?；蚝铣煽梢岳枚喾N技術(shù)來(lái)進(jìn)行，如由田(Tian)等人(2004，自然(Nature)432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技術(shù)、以及其中在光可編程的微流芯片上合成并組裝寡核苷酸的類似技術(shù)。使用已知的誘變、重組和/或改組方法、隨后進(jìn)行一個(gè)相關(guān)的篩選程序可以做出單一或多種氨基酸取代、缺失和/或插入并對(duì)其進(jìn)行測(cè)試，這些相關(guān)的篩選程序例如由瑞德哈爾-奧爾森(Reidhaar-Olson)和薩奧爾(Sauer)，1988，科學(xué)241:53-57；鮑伊(Bowie)和薩奧爾，1989，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156；WO95/17413；或WO95/22625。其他可以使用的方法包括易錯(cuò)PCR、噬菌體展示(例如洛曼(Lowman)等人，1991，生物化學(xué)(Biochemistry)30:10832-10837；US5,223,409；WO92/06204)以及區(qū)域定向誘變(德比什爾(Derbyshire)等人，1986，基因(Gene)46:145；內(nèi)爾(Ner)等人，1988，DNA7:127)?？梢越Y(jié)合誘變/改組方法與高通量自動(dòng)化篩選方法來(lái)檢測(cè)由宿主細(xì)胞表達(dá)的克隆的、誘變的多肽的活性(內(nèi)斯(Ness)等人，1999，自然生物技術(shù)(NatureBiotechnology)17:893-896)。編碼活性多肽的誘變的DNA分子可以回收自宿主細(xì)胞，并且使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)其進(jìn)行迅速測(cè)序。這些方法允許迅速確定多肽中單個(gè)氨基酸殘基的重要性。通過(guò)組合合成基因構(gòu)建、和/或定點(diǎn)誘變、和/或隨機(jī)誘變、和/或改組的多個(gè)方面來(lái)實(shí)現(xiàn)半合成基因構(gòu)建。半合成構(gòu)建典型地是，利用合成的多核苷酸片段的過(guò)程結(jié)合PCR技術(shù)。因此，基因的限定的區(qū)域可以從頭合成，而其他區(qū)域可以使用位點(diǎn)特異性誘變引物來(lái)擴(kuò)增，而還有其他區(qū)域可以經(jīng)受易錯(cuò)PCR或非易錯(cuò)PCR擴(kuò)增。然后可以對(duì)多核苷酸子序列進(jìn)行改組。核酸構(gòu)建體本發(fā)明還涉及核酸構(gòu)建體，這些核酸構(gòu)建體包含可操作地連接至一個(gè)或多個(gè)控制序列的本發(fā)明的多核苷酸，在與控制序列相容的條件下，這些控制序列指導(dǎo)編碼序列在合適的宿主細(xì)胞中的表達(dá)。該多核苷酸可以按多種方式操縱，以提供該多肽的表達(dá)。取決于表達(dá)載體，在多核苷酸插入載體之前對(duì)其進(jìn)行操縱可以是令人希望的或必需的。用于利用重組DNA方法修飾多核苷酸的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的?？刂菩蛄锌梢允菃?dòng)子，即由宿主細(xì)胞識(shí)別用于表達(dá)該多核苷酸的多核苷酸。該啟動(dòng)子包含轉(zhuǎn)錄控制序列，這些序列介導(dǎo)該多肽的表達(dá)。該啟動(dòng)子可以是在宿主細(xì)胞中顯示出轉(zhuǎn)錄活性的任何多核苷酸，包括突變型、截短型及雜合型啟動(dòng)子，并且可以由編碼與該宿主細(xì)胞同源或異源的細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)多肽的基因獲得。在細(xì)菌宿主細(xì)胞中，適合指導(dǎo)本發(fā)明的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子的實(shí)例是獲得自以下各項(xiàng)的啟動(dòng)子：解淀粉芽孢桿菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢桿菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢桿菌青霉素酶基因(penP)、嗜熱脂肪芽孢桿菌麥芽淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢桿菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢桿菌xylA和xylB基因、蘇云金芽孢桿菌cryIIIA基因(阿蓋斯(Agaisse)和里瑞克拉斯(Lereclus)，1994，分子微生物學(xué)(MolecularMicrobiology)13:97-107)、大腸桿菌lac操縱子、大腸桿菌trc啟動(dòng)子(埃貢(Egon)等人，1988，基因)69:301-315)，天藍(lán)鏈霉菌瓊脂酶基因(dagA)、和原核β-內(nèi)酰胺酶基因(維拉-卡瑪諾夫(Villa-Kamaroff)等人，1978，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊75:3727-3731)、連同tac啟動(dòng)子(德波爾(DeBoer)等人，1983，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊80:21-25)。另外的啟動(dòng)子描述于“來(lái)自重組細(xì)菌的有用蛋白(Usefulproteinsfromrecombinantbacteria)”，吉爾伯特(Gilbert)等人，1980，科學(xué)美國(guó)人(ScientificAmerican)，242:74-94；以及薩姆布魯克(Sambrook)等人，1989，同上。串聯(lián)啟動(dòng)子的實(shí)例披露于WO99/43835中。用于指導(dǎo)本發(fā)明的核酸構(gòu)建體在絲狀真菌宿主細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄的合適啟動(dòng)子的實(shí)例是從以下各項(xiàng)的基因獲得的啟動(dòng)子：構(gòu)巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸穩(wěn)定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉堿性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸異構(gòu)酶、尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶(WO96/00787)、鑲片鐮孢菌淀粉葡糖苷酶(WO00/56900)、鑲片鐮孢菌Daria(FusariumvenenatumDaria)(WO00/56900)、鑲片鐮孢Quinn(FusariumvenenatumQuinn)(WO00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纖維二糖水解酶I、里氏木霉纖維二糖水解酶II、里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶I、里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶II、里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶III、里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶IV、里氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶，以及NA2tpi啟動(dòng)子(修飾的啟動(dòng)子，其來(lái)自曲霉屬中性α-淀粉酶基因，其中未翻譯的前導(dǎo)序列由曲霉屬丙糖磷酸異構(gòu)酶基因的未翻譯的前導(dǎo)序列替代；非限制性實(shí)例包括修飾的啟動(dòng)子，其來(lái)自黑曲霉中性α-淀粉酶的基因，其中未翻譯的前導(dǎo)序列由構(gòu)巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸異構(gòu)酶基因的未翻譯的前導(dǎo)序列替代)；以及其突變型啟動(dòng)子、截短型啟動(dòng)子、以及雜合型啟動(dòng)子。在酵母宿主中，有用的啟動(dòng)子獲得自以下各項(xiàng)的基因：釀酒酵母烯醇酶(ENO1)、釀酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、釀酒酵母醇去氫酶/甘油醛-3-磷酸去氫酶(ADH1、ADH2/GAP)、釀酒酵母丙糖磷酸異構(gòu)酶(TPI)、釀酒酵母金屬硫蛋白(CUP1)、以及釀酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。羅馬諾斯(Romanos)等人，1992，酵母(Yeast)8:423-488描述了酵母宿主細(xì)胞的其他有用的啟動(dòng)子。控制序列還可以是由宿主細(xì)胞識(shí)別以終止轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄終止子。該終止子序列被可操作地連接至編碼該多肽的多核苷酸的3’-末端。可以使用在宿主細(xì)胞中具有功能的任何終止子。用于細(xì)菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選終止子是從克勞氏芽孢桿菌堿性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢桿菌α-淀粉酶(amyL)以及大腸桿菌核糖體RNA(rrnB)的基因獲得。絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選終止子是從以下各項(xiàng)的基因中獲得的：構(gòu)巢曲霉鄰氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶。用于酵母宿主細(xì)胞的優(yōu)選終止子是從釀酒酵母烯醇化酶、釀酒酵母細(xì)胞色素C(CYC1)、以及釀酒酵母甘油醛-3-磷酸脫氫酶的基因獲得。羅馬諾斯(Romanos)等人，1992，同上，描述了酵母宿主細(xì)胞的其他有用的終止子?？刂菩蛄羞€可以是啟動(dòng)子下游和基因的編碼序列上游的mRNA穩(wěn)定子區(qū)，其增加該基因的表達(dá)。適合的mRNA穩(wěn)定子區(qū)的實(shí)例是從以下獲得的：蘇云金芽孢桿菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢桿菌SP82基因(化(Hue)等人，1995，細(xì)菌學(xué)雜志(JournalofBacteriology)177:3465-3471)。該控制序列還可以是前導(dǎo)序列，對(duì)宿主細(xì)胞翻譯很重要的非翻譯mRNA區(qū)域。該前導(dǎo)子序列可操作地連接至編碼該多肽的多核苷酸的5’-末端。可以使用在宿主細(xì)胞中起作用的任何前導(dǎo)序列。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選前導(dǎo)序列是從米曲霉TAKA淀粉酶和構(gòu)巢曲霉丙糖磷酸異構(gòu)酶的基因獲得。酵母宿主細(xì)胞的適合的前導(dǎo)子是從以下各項(xiàng)的基因中獲得的：釀酒酵母烯醇酶(ENO1)、釀酒酵母3磷酸甘油酸激酶、釀酒酵母α-因子、和釀酒酵母醇去氫酶/甘油醛-3磷酸去氫酶(ADH2/GAP)。該控制序列還可以是一種多腺苷酸化序列，即被可操作地連接至該多肽編碼序列的3’-末端并且當(dāng)轉(zhuǎn)錄時(shí)由宿主細(xì)胞識(shí)別成將多腺苷酸殘基添加到所轉(zhuǎn)錄的mRNA上的一個(gè)信號(hào)的一種序列。可以使用在宿主細(xì)胞中起作用的任何多腺苷酸化序列。絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選多腺苷酸化序列是從以下各項(xiàng)的基因中獲得的：構(gòu)巢曲霉鄰氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡萄糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶。對(duì)于酵母宿主細(xì)胞有用的多腺苷酸化序列在郭(Guo)和謝爾曼(Sherman)，1995，分子細(xì)胞生物學(xué)(Mol.CellularBiol.)15:5983-5990中得以描述?？刂菩蛄羞€可以是編碼連接至多肽的N-末端的信號(hào)肽并指導(dǎo)該多肽進(jìn)入細(xì)胞的分泌途徑的信號(hào)肽編碼區(qū)域。多核苷酸的編碼序列的5’端本身可包含在翻譯閱讀框中天然與編碼多肽的編碼序列區(qū)段相連接的信號(hào)肽編碼序列?？商娲兀摼幋a序列的5’末端可以包含對(duì)于該編碼序列來(lái)說(shuō)是外來(lái)的信號(hào)肽編碼序列。在編碼序列不天然地包含信號(hào)肽編碼序列的情況下，可能需要外源信號(hào)肽編碼序列?？商娲兀庠葱盘?hào)肽編碼序列可簡(jiǎn)單地替換天然的信號(hào)肽編碼序列以便增強(qiáng)該多肽的分泌。然而，可以使用指導(dǎo)所表達(dá)多肽進(jìn)入宿主細(xì)胞的分泌通路的任何信號(hào)肽編碼序列。用于細(xì)菌宿主細(xì)胞的有效信號(hào)肽編碼序列是從以下各項(xiàng)的基因獲得的信號(hào)肽編碼序列：芽孢桿菌屬NCIB11837產(chǎn)麥芽糖淀粉酶、地衣芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶、地衣芽孢桿菌β-內(nèi)酰胺酶、嗜熱脂肪芽孢桿菌α-淀粉酶、嗜熱脂肪芽孢桿菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)以及枯草芽孢桿菌prsA。西蒙納(Simonen)和帕爾瓦(Palva)，1993，微生物學(xué)評(píng)論(MicrobiologicalReviews)57:109-137描述了另外的信號(hào)肽。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的有效信號(hào)肽編碼序列是從以下各項(xiàng)的基因中獲得的信號(hào)肽編碼序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特異腐質(zhì)霉纖維素酶、特異腐質(zhì)霉內(nèi)切葡聚糖酶V、柔毛腐質(zhì)霉脂肪酶以及米黑毛霉天冬氨酸蛋白酶。對(duì)于酵母宿主細(xì)胞有用的信號(hào)肽獲得自以下項(xiàng)的基因：釀酒酵母α-因子和釀酒酵母轉(zhuǎn)化酶。羅馬諾斯(Romanos)等人，1992，同上，描述了其他有用的信號(hào)肽編碼序列?？刂菩蛄羞€可以是編碼位于多肽的N-末端的前肽的前肽編碼序列。生成的多肽被稱為前體酶(proenzyme)或多肽原(或者在一些情況下被稱為酶原(zymogen))。多肽原通常是無(wú)活性的并且可以通過(guò)從該多肽原上催化切割或自動(dòng)催化切割前肽而被轉(zhuǎn)化成活性多肽。前肽編碼序列可以從以下各項(xiàng)的基因獲得：枯草芽孢桿菌堿性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢桿菌中性蛋白酶(nprT)、嗜熱毀絲霉漆酶(WO95/33836)、曼赫根毛霉天冬氨酸蛋白酶、以及釀酒酵母α因子。當(dāng)信號(hào)肽和前肽序列同時(shí)存在時(shí)，前肽序列的位置緊鄰于多肽的N-末端，且信號(hào)肽序列的位置緊鄰于前肽序列的N-末端。還可以希望添加調(diào)節(jié)序列，這些調(diào)節(jié)序列相對(duì)于宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)來(lái)調(diào)節(jié)多肽的表達(dá)。調(diào)節(jié)系統(tǒng)的實(shí)例是響應(yīng)于化學(xué)或物理刺激而引起基因的表達(dá)開(kāi)啟或關(guān)閉的那些，包括調(diào)節(jié)化合物的存在。在原核系統(tǒng)中的調(diào)節(jié)系統(tǒng)包括lac、tac、以及trp操縱基因系統(tǒng)。在酵母中，可以使用ADH2系統(tǒng)或GAL1系統(tǒng)。在絲狀真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶啟動(dòng)子、米曲霉TAKAα-淀粉酶啟動(dòng)子、以及米曲霉葡糖淀粉酶啟動(dòng)子。調(diào)節(jié)序列的其他例子是允許基因擴(kuò)增的那些。在真核系統(tǒng)中，這些調(diào)控序列包括在甲氨蝶呤存在下被擴(kuò)增的二氫葉酸還原酶基因以及用重金屬擴(kuò)增的金屬硫蛋白基因。在這些情況下，編碼該多肽的多核苷酸將與調(diào)控序列可操作地連接。表達(dá)載體本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的多核苷酸、啟動(dòng)子、以及轉(zhuǎn)錄和翻譯終止信號(hào)的重組表達(dá)載體。不同的核苷酸和控制序列可以連接在一起以產(chǎn)生重組表達(dá)載體，該重組表達(dá)載體可以包括一個(gè)或多個(gè)便利的限制酶切位點(diǎn)以允許在這些位點(diǎn)處插入或取代編碼該多肽的多核苷酸?？商娲?，該多核苷酸可以通過(guò)將該多核苷酸或包括該多核苷酸的核酸構(gòu)建體插入用于表達(dá)的適當(dāng)載體中來(lái)表達(dá)。在產(chǎn)生該表達(dá)載體時(shí)，該編碼序列位于該載體中，這樣使得該編碼序列與該供表達(dá)的適當(dāng)控制序列可操作地連接。重組表達(dá)載體可以是可便利地經(jīng)受重組DNA程序并且可引起多核苷酸表達(dá)的任何載體(例如，質(zhì)?；虿《?。載體的選擇將典型地取決于該載體與有待引入該載體的宿主細(xì)胞的相容性。該載體可以是線性的或閉合的環(huán)狀質(zhì)粒。載體可以是自主復(fù)制載體，即，作為染色體外實(shí)體存在的載體，其復(fù)制獨(dú)立于染色體復(fù)制，例如，質(zhì)粒、染色體外元件、微染色體、或人工染色體。該載體可包含任何用以保證自我復(fù)制的要素。可替代地，該載體可以是這樣載體，當(dāng)它被引入該宿主細(xì)胞中時(shí)，被整合到基因組中并且與其中已整合了它的一個(gè)或多個(gè)染色體一起復(fù)制。此外，可以使用單一載體或質(zhì)?；騼蓚€(gè)或更多個(gè)載體或質(zhì)粒(這些載體或質(zhì)粒共同含有待引入到宿主細(xì)胞的基因組中的總DNA)或轉(zhuǎn)座子。該載體優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)允許方便地選擇轉(zhuǎn)化細(xì)胞、轉(zhuǎn)染細(xì)胞、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞等細(xì)胞的選擇性標(biāo)記。選擇性標(biāo)記是這樣一種基因，該基因的產(chǎn)物提供了殺生物劑抗性或病毒抗性、重金屬抗性、營(yíng)養(yǎng)缺陷型的原養(yǎng)型等。細(xì)菌性選擇性標(biāo)記的實(shí)例是地衣芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌dal基因，或賦予抗生素抗性(例如氨芐青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大觀霉素或四環(huán)素抗性)的標(biāo)記。用于酵母宿主細(xì)胞的適合的標(biāo)記包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、以及URA3。用于在絲狀真菌宿主細(xì)胞中使用的選擇性標(biāo)記包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶)、bar(草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶)、hph(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶)、niaD(硝酸還原酶)、pyrG(乳清苷-5’磷酸脫羧酶)、sC(硫酸腺苷基轉(zhuǎn)移酶)、以及trpC(鄰氨基苯甲酸合酶)，連同其等效物。優(yōu)選在曲霉屬細(xì)胞中使用的是構(gòu)巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水鏈霉菌bar基因。載體優(yōu)選含有允許載體整合到宿主細(xì)胞的基因組中或載體在細(xì)胞中獨(dú)立于基因組自主復(fù)制的一個(gè)或多個(gè)元件。對(duì)于整合到該宿主細(xì)胞基因組中，該載體可以依靠編碼該多肽的多核苷酸序列或者用于通過(guò)同源或非同源重組整合到該基因組中的該載體的任何其他元件。可替代地，該載體可以包含用于指導(dǎo)通過(guò)同源重組而整合到宿主細(xì)胞基因組中的一個(gè)或多個(gè)染色體中的一個(gè)或多個(gè)精確位置處的另外的多核苷酸。為了增加在精確位置整合的可能性，這些整合元件應(yīng)包含足夠數(shù)量的核酸，例如100至10,000個(gè)堿基對(duì)、400至10,000個(gè)堿基對(duì)、以及800至10,000個(gè)堿基對(duì)，這些堿基對(duì)與對(duì)應(yīng)的靶序列具有高度的序列一致性以提高同源重組的可能性。這些整合元件可以是與宿主細(xì)胞的基因組內(nèi)的靶序列同源的任何序列。此外，這些整合元件可以是非編碼多核苷酸或編碼多核苷酸。另一個(gè)方面，該載體可以通過(guò)非同源重組整合到宿主細(xì)胞的基因組中。對(duì)于自主復(fù)制，該載體可以進(jìn)一步包括使該載體能夠在所討論的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制的復(fù)制起點(diǎn)。復(fù)制起點(diǎn)可以是在細(xì)胞中起作用的介導(dǎo)自主復(fù)制的任何質(zhì)粒復(fù)制子。術(shù)語(yǔ)“復(fù)制起點(diǎn)(originofreplication)”或“質(zhì)粒復(fù)制子(plasmidreplicator)”意指使得質(zhì)?；蜉d體可在體內(nèi)復(fù)制的多核苷酸。細(xì)菌的復(fù)制起點(diǎn)的實(shí)例是允許在大腸桿菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制的質(zhì)粒pBR322、pUC19、pACYC177、以及pACYC184以及允許在芽孢桿菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制的pUB110、pE194、pTA1060、以及pAMβ1的復(fù)制起點(diǎn)。用于在酵母宿主細(xì)胞中使用的復(fù)制起點(diǎn)的實(shí)例是2微米復(fù)制起點(diǎn)ARS1、ARS4、ARS1與CEN3的組合、以及ARS4與CEN6的組合。在絲狀真菌細(xì)胞中有用的復(fù)制起點(diǎn)的實(shí)例是AMA1和ANS1(格姆斯(Gems)等人，1991，基因(Gene)98:61-67；卡倫(Cullen)等人，1987，核酸研究(NucleicAcidsRes.)15:9163-9175；WO00/24883)。根據(jù)WO00/24883中披露的方法可以實(shí)現(xiàn)AMA1基因的分離和包含該基因的質(zhì)粒或載體的構(gòu)建。可以將本發(fā)明的多核苷酸的多于一個(gè)拷貝插入宿主細(xì)胞中以增加多肽的產(chǎn)生。通過(guò)將序列的至少一個(gè)另外的拷貝整合到宿主細(xì)胞基因組中或者通過(guò)包含與該多核苷酸一起的可擴(kuò)增的選擇性標(biāo)記基因可以獲得多核苷酸的增加的拷貝數(shù)目，其中通過(guò)在適當(dāng)?shù)倪x擇性試劑的存在下培養(yǎng)細(xì)胞可以選擇包含選擇性標(biāo)記基因的經(jīng)擴(kuò)增的拷貝的細(xì)胞、以及由此該多核苷酸的另外的拷貝。用于連接上述元件以構(gòu)建本發(fā)明的重組表達(dá)載體的程序?qū)τ诒绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是熟知的(參見(jiàn)，例如薩拉布魯克(Sambrook)等人，1989，同上)。宿主細(xì)胞本發(fā)明還涉及重組宿主細(xì)胞，這些重組宿主細(xì)胞包括編碼本發(fā)明的多肽的、可操作地連接至一個(gè)或多個(gè)控制序列的多核苷酸，該一個(gè)或多個(gè)控制序列指導(dǎo)本發(fā)明的多肽的產(chǎn)生。將包括多核苷酸的構(gòu)建體或載體引入宿主細(xì)胞中，這樣使得該構(gòu)建體或載體被維持作為染色體整合體或作為自主復(fù)制的染色體外載體，如早前所述。術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”涵蓋由于復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的突變與親本細(xì)胞不同的親本細(xì)胞的任何后代。宿主細(xì)胞的選擇在很大程度上取決于編碼該多肽的基因及其來(lái)源。宿主細(xì)胞可以是在重組產(chǎn)生多肽中有用的任何細(xì)胞，例如原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。原核宿主細(xì)胞可以是任何革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性細(xì)菌。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌包括，但不限于芽孢桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬、土芽孢桿菌屬、乳桿菌屬、乳球菌屬、大洋芽孢桿菌屬(Oceanobacillus)、葡萄球菌屬、鏈球菌屬和鏈霉菌屬。革蘭氏陰性細(xì)菌包括，但不限于彎曲桿菌屬、大腸桿菌、黃桿菌屬、梭桿菌屬、螺桿菌屬、泥桿菌屬、奈瑟球菌屬、假單胞菌屬、沙門(mén)菌屬和脲原體屬。細(xì)菌宿主細(xì)胞可以是任何芽孢桿菌的細(xì)胞，包括但不限于嗜堿芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌、燦爛芽孢桿菌、遲緩芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、以及蘇云金芽孢桿菌的細(xì)胞。細(xì)菌宿主細(xì)胞還可以是任何鏈球菌屬的細(xì)胞，包括但不限于似馬鏈球菌、釀膿鏈球菌、乳房鏈球菌和馬鏈球菌獸瘟亞種的細(xì)胞。細(xì)菌宿主細(xì)胞還可以是任何鏈霉菌細(xì)胞，包括但不局限于不產(chǎn)色鏈霉菌、除蟲(chóng)鏈霉菌、天藍(lán)鏈霉菌、灰色鏈霉菌以及淺青紫鏈霉菌細(xì)胞。將DNA引入芽孢桿菌屬細(xì)胞中可通過(guò)以下來(lái)實(shí)現(xiàn)：原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)例如，張(Chang)和科恩(Cohen)，1979，分子遺傳學(xué)與基因組學(xué)(Mol.Gen.Genet.)168:111-115)、感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)，例如，楊格(Young)和斯皮宰曾(Spizizen)，1961，細(xì)菌學(xué)雜志(J.Bacteriol.)81:823-829；或杜拜努(Dubnau)以及大衛(wèi)杜夫-阿貝爾森(Davidoff-Abelson)，1971，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)56:209-221)、電穿孔(參見(jiàn)，例如，茂川(Shigekawa)和道爾(Dower)，1988，生物技術(shù)(Biotechniques)6:742-751)、或者接合(參見(jiàn)，例如克勒(Koehler)和索恩(Thorne)，1987，細(xì)菌學(xué)雜志(J.Bacteriol.)169:5271-5278)。通過(guò)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)，例如，哈納漢(Hanahan)，1983，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)166:557-580)或電穿孔(參見(jiàn)，例如，道爾(Dower)等人，1988，核酸研究(NucleicAcidsRes.)16:6127-6145)可以實(shí)現(xiàn)將DNA引入到大腸桿菌細(xì)胞中。將DNA引入鏈霉菌屬細(xì)胞中可通過(guò)以下來(lái)實(shí)現(xiàn)：原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、電穿孔(參見(jiàn)，例如，貢(Gong)等人，2004，葉線形微生物學(xué)(FoliaMicrobiol.)(Praha(布拉格))49:399-405)、接合(參見(jiàn)，例如，馬佐迪耶(Mazodier)等人，1989，細(xì)菌學(xué)雜志(J.Bacteriol.)171:3583-3585)、或轉(zhuǎn)導(dǎo)(參見(jiàn)，例如，伯克(Burke)等人，2001，美國(guó)科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)98:6289-6294)。將DNA引入假單孢菌屬細(xì)胞中可通過(guò)以下來(lái)實(shí)現(xiàn)：電穿孔(參見(jiàn)，例如，蔡(Choi)等人，2006，微生物學(xué)方法雜志(J.Microbiol.Methods)64:391-397)或接合(參見(jiàn)，例如，皮內(nèi)多(Pinedo)和斯梅茨(Smets)，2005，應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)(Appl.Environ.Microbiol.)71:51-57)。將DNA引入鏈球菌屬細(xì)胞中可通過(guò)以下來(lái)實(shí)現(xiàn)：天然感受態(tài)(參見(jiàn)，例如，佩里(Perry)和藏滿(Kuramitsu)，1981，感染與免疫(Infect.Immun.)32：1295-1297)、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)，例如，凱特(Catt)和喬力克(Jollick)，1991，微生物學(xué)(Microbios)68:189-207)、電穿孔(參見(jiàn)，例如，巴克利(Buckley)等人，1999，應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)(Appl.Environ.Microbiol.)65:3800-3804)、或者接合(參見(jiàn)，例如，克萊威爾(Clewell)，1981，微生物學(xué)評(píng)論(Microbiol.Rev.)45：409-436)。然而，可以使用本領(lǐng)域已知的用于將DNA引入宿主細(xì)胞中的任何方法。宿主細(xì)胞還可以是真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物、昆蟲(chóng)、植物、或真菌細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是真菌細(xì)胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌門(mén)(Ascomycota)、擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota)、壺菌門(mén)(Chytridiomycota)、以及接合菌門(mén)(Zygomycota)、連同卵菌門(mén)(Oomycota)和全部有絲分裂孢子真菌(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人在安斯沃思和拜斯比真菌詞典(AinsworthandBisby’sDictionaryofTheFungi)，第8版，1995，國(guó)際應(yīng)用生物科學(xué)中心(CABInternational)，大學(xué)出版社(UniversityPress)，英國(guó)劍橋(Cambridge，UK)中進(jìn)行定義的)。該真菌宿主細(xì)胞可以是酵母細(xì)胞。如在此使用的“酵母”包括產(chǎn)子嚢酵母(內(nèi)孢霉目)、產(chǎn)擔(dān)子酵母和屬于半知菌類(芽孢綱)的酵母。由于酵母的分類在將來(lái)可能有變化，出于本發(fā)明的目的，酵母應(yīng)如酵母生物學(xué)和活動(dòng)性(BiologyandActivitiesofYeast)(斯金納(Skinner)、帕斯莫爾(Passmore)、以及達(dá)文波特(Davenport)編輯，應(yīng)用細(xì)菌學(xué)學(xué)會(huì)討論會(huì)(Soc.App.Bacteriol.Symposium)系列第9期，1980)所述地進(jìn)行定義。酵母宿主細(xì)胞可以是假絲酵母屬、漢遜酵母屬、克魯弗酵母屬、畢赤酵母屬、酵母屬、裂殖酵母屬、或亞羅酵母屬細(xì)胞，例如乳酸克魯弗酵母、卡氏酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、釀酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母(Saccharomycesdouglasii)、克魯費(fèi)酵母(Saccharomyceskluyveri)、諾地酶母(Saccharomycesnorbensis)、卵形酵母、或亞羅解脂酵母(Yarrowialipolytica)細(xì)胞。真菌宿主細(xì)胞可以是絲狀真菌細(xì)胞。“絲狀真菌”包括真菌門(mén)(Eumycota)和卵菌門(mén)的亞門(mén)(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人，1995，見(jiàn)上文所定義)的所有絲狀形式。絲狀真菌通常的特征在于由殼多糖、纖維素、葡聚糖、殼聚糖、甘露聚糖、以及其他復(fù)雜多糖構(gòu)成的菌絲體壁。營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)是通過(guò)菌絲延伸，而碳分解代謝是專性需氧的。相反，酵母(如釀酒酵母)的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)是通過(guò)單細(xì)胞菌體的出芽(budding)，而碳分解代謝可以是發(fā)酵的。絲狀真菌宿主細(xì)胞可以是枝頂孢霉屬、曲霉屬、短梗霉屬、煙管菌屬、擬蠟菌屬、金孢子菌屬、鬼傘菌屬、革蓋菌屬、隱球菌屬、線黑粉酵母屬、鐮孢屬、腐質(zhì)霉屬、梨孢菌屬、毛霉屬、毀絲霉屬、新美鞭菌屬、脈孢菌屬、擬青霉屬、青霉菌屬、平革菌屬、白腐菌屬、瘤胃壺菌屬、側(cè)耳屬、裂褶菌屬、踝節(jié)菌屬、嗜熱子囊菌屬、梭孢殼屬、彎頸霉屬、栓菌屬、或木霉屬的細(xì)胞。例如，絲狀真菌宿主細(xì)胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、煙曲霉、日本曲霉、構(gòu)巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺煙管菌(Bjerkanderaadusta)、干擬蠟菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡內(nèi)基擬蠟菌(Ceriporiopsiscaregiea)、淺黃擬蠟孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘諾希塔擬蠟菌(Ceriporiopsispannocinta)、環(huán)帶擬蠟菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微紅擬蠟菌(Ceriporiopsissubrufa)、蟲(chóng)擬蠟菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狹邊金孢子菌(Chrysosporiuminops)、嗜角質(zhì)金孢子菌、盧克諾文思金孢子菌(Chrysosporiumlucknowense)、糞狀金孢子菌(Chrysosporiummerdarium)、租金孢子菌、昆士蘭金孢子菌、熱帶金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporiumzonatum)、灰蓋鬼傘(Coprinuscinereus)、毛革蓋菌(Coriolushirsutus)、桿孢狀鐮孢、谷類鐮孢、庫(kù)威鐮孢、大刀鐮孢、禾谷鐮孢、禾赤鐮孢、異孢鐮孢、合歡木鐮孢、尖鐮孢、多枝鐮孢、粉紅鐮孢、接骨木鐮孢、膚色鐮孢、擬分枝孢鐮孢、硫色鐮孢、圓鐮孢、擬絲孢鐮孢、鑲片鐮孢、特異腐質(zhì)霉、柔毛腐質(zhì)霉、米黑毛霉、卷枝毛霉、嗜熱毀絲霉、粗糙鏈孢菌、產(chǎn)紫青霉菌、黃孢原毛平革菌、射脈菌(Phlebiaradiata)、刺芹側(cè)耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢殼、長(zhǎng)域毛栓菌(Trametesvillosa)、變色栓菌(Trametesversicolor)、哈茨木霉、康寧木霉、長(zhǎng)枝木霉、里氏木霉或綠色木霉細(xì)胞?？梢詫⒄婢?xì)胞通過(guò)涉及原生質(zhì)體形成、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、以及細(xì)胞壁再生的方法以本身已知的方式轉(zhuǎn)化。用于轉(zhuǎn)化曲霉屬和木霉屬宿主細(xì)胞的適合程序在EP238023和約爾頓(Yelton)等人，1984，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊81:1470-1474、以及克里斯滕森(Christensen)等人，1988，生物/技術(shù)(Bio/Technology)6:1419-1422中描述。用于轉(zhuǎn)化鐮孢屬物種的適合方法由馬拉迪爾(Malardier)等人，1989，基因(Gene)78:147-156、以及WO96/00787描述?？梢允褂糜扇缫韵挛墨I(xiàn)描述的程序轉(zhuǎn)化酵母：貝克爾(Becker)和瓜倫特(Guarente)，在阿貝爾森(Abelson)，J.N.和西蒙(Simon)，M.I.編，酵母遺傳學(xué)與分子生物學(xué)指南，酶學(xué)方法(GuidetoYeastGeneticsandMolecularBiology,MethodsinEnzymology)，第194卷，第182-187頁(yè)，學(xué)術(shù)出版社有限公司(AcademicPress,Inc.)，紐約；伊藤(Ito)等人，1983，細(xì)菌學(xué)雜志153:163；以及哈尼恩(Hinnen)等人，1978，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊75:1920。生產(chǎn)方法本發(fā)明還涉及產(chǎn)生多肽的方法，這些方法包括：(a)在適于表達(dá)該多肽的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞；并且(b)回收該多肽。在一個(gè)優(yōu)選方面，該細(xì)胞是曲霉屬細(xì)胞。在一個(gè)更優(yōu)選的方面，該細(xì)胞是米曲霉細(xì)胞。在一個(gè)最優(yōu)選的方面，該細(xì)胞是米曲霉MT3568。這些宿主細(xì)胞是在適合于使用本領(lǐng)域中已知的方法產(chǎn)生該多肽的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的。例如，可以通過(guò)搖瓶培養(yǎng)，或者在一種適合的培養(yǎng)基中并在允許該多肽表達(dá)和/或分離的條件下在實(shí)驗(yàn)室或工業(yè)發(fā)酵罐中進(jìn)行小規(guī)?；虼笠?guī)模發(fā)酵(包括連續(xù)發(fā)酵、分批發(fā)酵、分批給料發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵)來(lái)培養(yǎng)該細(xì)胞。該培養(yǎng)是使用本領(lǐng)域中已知的程序，在一種適合營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中發(fā)生，該培養(yǎng)基包括碳和氮來(lái)源及無(wú)機(jī)鹽。適合的培養(yǎng)基可從商業(yè)供應(yīng)商獲得或可以根據(jù)公開(kāi)的組成(例如，在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的目錄中)制備。如果多肽分泌到該營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，那么可直接從培養(yǎng)基中回收多肽。如果多肽不被分泌，那么其可從細(xì)胞裂解液中進(jìn)行回收?？梢允褂锰禺愋葬槍?duì)這些多肽的本領(lǐng)域已知的方法來(lái)檢測(cè)該多肽。這些檢測(cè)方法包括但不限于，特異性抗體的使用、酶產(chǎn)物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶測(cè)定來(lái)確定該多肽的活性。脂肪酶活性測(cè)定的實(shí)例是本領(lǐng)域中已知的，包括如在實(shí)例中所描述的平板測(cè)定和pNP測(cè)定?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的方法來(lái)回收多肽。例如，該多肽可以通過(guò)常規(guī)程序，包括但不限于，收集、離心、過(guò)濾、提取、噴霧干燥、蒸發(fā)或沉淀，從該營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基回收?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的多種程序來(lái)純化該多肽以獲得基本上純的多肽，這些程序包括但不限于：色譜法(例如，離子交換色譜、親和色譜、疏水作用色譜、色譜聚焦、以及尺寸排阻色譜)、電泳程序(例如，制備型等電點(diǎn)聚焦)、差別溶解度(例如，硫酸銨沉淀)、SDS-PAGE、或提取(參見(jiàn)例如，蛋白純化(ProteinPurification)，詹森(Janson)和賴登(Ryden)編輯，VCH出版社(VCHPublishers)，紐約，1989)。在一個(gè)替代性方面中，該多肽未被回收，而是使用表達(dá)該多肽的本發(fā)明的宿主細(xì)胞作為該多肽來(lái)源。組合物也考慮到包括本發(fā)明的多肽的組合物。在某些方面，本發(fā)明涉及具有脂肪酶活性的分離的多肽，這些分離的多肽選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(a)與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)一種由以下多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸在低嚴(yán)格條件下、中嚴(yán)格條件下、中-高嚴(yán)格條件下、高嚴(yán)格條件下或非常高嚴(yán)格條件下與(i)SEQIDNO:1或SEQIDNO:3或(i)的全長(zhǎng)互補(bǔ)體雜交；(c)一種多肽，該多肽由與SEQIDNO:1或SEQIDNO:3具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多核苷酸編碼；(d)一種多肽，該多肽是在一個(gè)或多個(gè)(例如若干個(gè))位置處包括取代、缺失、和/或插入的SEQIDNO:2的變體；以及(e)一種多肽，該多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一項(xiàng)的片段。在某些方面，本發(fā)明涉及包括多肽的組合物，該多肽包括在SEQIDNO:2、SEQIDNO:2的成熟多肽或其片段的一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))位置處的取代。在一些方面，本發(fā)明涉及包括多肽的組合物，該多肽是沒(méi)有變化的，即，并不包括在SEQIDNO:2、SEQIDNO:2的成熟多肽或其片段的一個(gè)或多個(gè)(例如，若干個(gè))位置處的取代。下文闡述的組合物組分的非限制性列表適合用于這些組合物中，并且在此的方法可以合宜地并入本發(fā)明的某些實(shí)施例中，例如用以輔助或增強(qiáng)清潔性能，用于處理有待清潔的底物，或用以在與香料、著色劑、染料或類似物一起的情況下修飾該組合物的美感。摻入任何組合物中的任何此類組分的水平是除了先前引用的用于摻入的任何材料之外的。這些另外的組分的精確性質(zhì)及其摻入水平將取決于組合物的物理形式和將在其中使用組合物的清潔操作的性質(zhì)。盡管根據(jù)具體的功能性對(duì)以下提及的組分由通用標(biāo)題進(jìn)行分類，但是這并不被解釋為限制，因?yàn)槿鐚⒈黄胀夹g(shù)人員所理解，一種組分可以包括另外的功能性。除非另外表明，以百分比計(jì)的量是按該組合物的重量計(jì)(wt％)。適合的組分材料包括但不限于表面活性劑、助洗劑、螯合劑、染料轉(zhuǎn)移抑制劑、分散劑、酶、以及酶穩(wěn)定劑、催化材料、漂白活化劑、過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫源、預(yù)形成的過(guò)酸、聚合物分散劑、粘土去除/抗再沉積劑、增亮劑、泡沫抑制劑、染料、調(diào)色染料、香料、香料遞送系統(tǒng)、結(jié)構(gòu)彈力劑、織物軟化劑、載體、助水溶物、加工助劑、溶劑和/或顏料。除了以下披露，此類其他組分的適合實(shí)例以及使用水平發(fā)現(xiàn)于US5576282、US6306812、和US6326348中，通過(guò)引用將這些文獻(xiàn)特此結(jié)合。因此，在某些實(shí)施例中，本發(fā)明不包含以下附屬材料的一種或多種：表面活性劑、皂、助洗劑、螯合劑、染料轉(zhuǎn)移抑制劑、分散劑、另外的酶、酶穩(wěn)定劑、催化材料、漂白活化劑、過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫源、預(yù)形成的過(guò)酸、聚合物分散劑、粘土去除/抗再沉積劑、增亮劑、泡沫抑制劑、染料、香料、香料遞送系統(tǒng)、結(jié)構(gòu)彈力劑、織物軟化劑、載體、助水溶物、加工助劑、溶劑和/或顏料。然而，當(dāng)一種或多種組分存在時(shí)，這樣的一種或多種組分可以是如下文詳述地存在的：表面活性劑-根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包括表面活性劑或表面活性劑系統(tǒng)，其中該表面活性劑可以選自非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑、兼性離子表面活性劑、半極性非離子表面活性劑、及其混合物。當(dāng)存在時(shí)，表面活性劑典型地以從0.1wt％至60wt％、從0,2wt％到40wt％、從0,5wt％至30wt％、從1wt％至50wt％、從1wt％至40wt％、從1wt％至30wt％、從1wt％至20wt％、從3wt％至10wt％、從3wt％至5wt％、從5wt％至40wt％、從5wt％至30wt％、從5wt％至15wt％、從3wt％至20wt％、從3wt％至10wt％、從8wt％至12wt％、從10wt％至12wt％或從20wt％至25wt％的水平存在。適合的陰離子去污表面活性劑包括硫酸鹽和磺酸鹽去污表面活性劑。適合的磺酸鹽去污表面活性劑包括烷基苯磺酸鹽，在一方面為C10-13烷基苯磺酸鹽?？梢酝ㄟ^(guò)磺化可商購(gòu)的直鏈烷基苯(LAB)獲得適合的烷基苯磺酸鹽(LAS)，適合的LAB包括低碳2-苯基LAB，如或其他適合LAB包括高碳2-苯基LAB，如適合的陰離子去污表面活性劑是通過(guò)DETAL催化工藝獲得的烷基苯磺酸鹽，但其他合成途徑(如HF)也可以是適合的。在一方面，使用LAS的鎂鹽。適合的硫酸鹽去污表面活性劑包括烷基硫酸鹽，在一方面，為C8-18烷基硫酸鹽，或主要為C12烷基硫酸鹽。另外的適合的硫酸鹽去污表面活性劑是烷基烷氧基化硫酸鹽，在一方面為烷基乙氧基化硫酸鹽，在一方面為C8-18烷基烷氧基化硫酸鹽，在另一方面為C8-18烷基乙氧基化硫酸鹽，典型地烷基烷氧基化硫酸鹽具有從0.5至20或從0.5至10的平均烷氧基化度，典型地烷基烷氧基化硫酸鹽是C8-18烷基乙氧基化硫酸鹽，具有0.5至10、從0.5至7、從0.5至5或從0.5至3的平均乙氧基化度。烷基硫酸鹽、烷基烷氧基化硫酸鹽和烷基苯磺酸鹽可以是直鏈或支鏈的、取代或未取代的。去污表面活性劑可以是中鏈分支的去污表面活性劑，在一方面為中鏈分支的陰離子去污表面活性劑，在一方面為中鏈分支的烷基硫酸鹽和/或中鏈分支的烷基苯磺酸鹽，例如中鏈分支的烷基硫酸鹽。在一方面，中鏈分支是C1-4烷基，典型地為甲基和/或乙基。陰離子表面活性劑的非限制性實(shí)例包括硫酸鹽和磺酸鹽，具體地說(shuō)是直鏈烷基苯磺酸鹽(LAS)、LAS的異構(gòu)體、支鏈烷基苯磺酸鹽(BABS)、苯基鏈烷磺酸鹽、α-烯烴磺酸鹽(AOS)、烯烴磺酸鹽、鏈烯烴磺酸鹽、鏈烷-2,3-二基雙(硫酸鹽)、羥基鏈烷磺酸鹽以及二磺酸鹽、烷基硫酸鹽(AS)(如十二烷基硫酸鈉(SDS))、脂肪醇硫酸鹽(FAS)、伯醇硫酸鹽(PAS)、醇醚硫酸鹽(AES或AEOS或FES，也被稱為醇乙氧基硫酸鹽或脂肪醇醚硫酸鹽)、仲鏈烷磺酸鹽(SAS)、石蠟烴磺酸鹽(PS)、酯磺酸鹽、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸鹽(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和單酯、及其組合。適合的非離子去污表面活性劑選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：C8-C18烷基乙氧基化物，如C6-C12烷基苯酚烷氧基化物，其中該烷氧基化物單元可以是乙烯氧基單元，丙烯氧基單元或其混合物；C12-C18醇和C6-C12烷基苯酚與環(huán)氧乙烷/環(huán)氧丙烷嵌段聚合物的縮合物，如普朗尼克C14-C22中鏈分支的醇；C14-C22中鏈分支的烷基烷氧基化物，典型地具有從1至30的平均烷氧基化度；烷基多糖，在一方面為烷基多糖苷；多羥基脂肪酸酰胺；醚封端的聚(烷氧基化)醇表面活性劑；及其混合物。適合的非離子去污表面活性劑包括烷基多糖苷和/或烷基烷氧基化醇。在一方面，非離子去污表面活性劑包括烷基烷氧基化醇，在一方面為C8-18烷基烷氧基化醇，例如C8-18烷基乙氧基化醇，該烷基烷氧基化醇可以具有從1至50、從1至30、從1至20、或從1至10的平均烷氧基化度。在一方面，烷基烷氧基化醇可以是C8-18烷基乙氧基化醇，具有從1至10、從1至7，更多是從1至5或從3至7的平均乙氧基化度。烷基烷氧基化醇可以是直鏈或支鏈的、以及取代或未取代的。適合的非離子表面活性劑包括非離子型表面活性劑的非限制性實(shí)例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)，烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)，烷基酚乙氧基化物(APE)，壬基酚乙氧基化物(NPE)，烷基多糖苷(APG)，烷氧基化胺，脂肪酸單乙醇酰胺(FAM)，脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)，乙氧基化的脂肪酸單乙醇酰胺(EFAM)，丙氧基化的脂肪酸單乙醇酰胺(PFAM)，多羥基烷基脂肪酸酰胺，或葡萄糖胺的N-?；鵑-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)，或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，連同在SPAN和TWEEN商品名下可獲得的產(chǎn)品，及其組合。適合的陽(yáng)離子去污表面活性劑包括烷基吡啶鎓化合物、烷基季銨化合物、烷基季鏻化合物、烷基三锍化合物、及其混合物。適合的陽(yáng)離子去污表面活性劑是具有以下通式的季銨化合物：(R)(R1)(R2)(R3)N+X-，其中R是直鏈或支鏈的、取代或未取代的C6-18烷基或烯基部分，R1和R2獨(dú)立地選自甲基或乙基部分，R3是羥基、羥甲基或羥乙基部分，X是提供電荷中性的陰離子，適合的陰離子包括鹵化物，例如氯化物；硫酸鹽；以及磺酸鹽。適合的陽(yáng)離子去污表面活性劑是單-C6-18烷基單-羥乙基二甲基季銨氯化物。高度合適的陽(yáng)離子去污表面活性劑是單-C8-10烷基單-羥乙基二甲基季銨氯化物、單-C10-12烷基單-羥乙基二甲基季銨氯化物以及單-C10烷基單-羥乙基二甲基季銨氯化物。陽(yáng)離子表面活性劑的非限制性實(shí)例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化銨(DSDMAC)、以及烷基芐基二甲基銨、烷基季銨化合物、烷氧基化季銨(AQA)化合物、酯季銨及其組合。適合的兩性表面活性劑/兼性離子表面活性劑包括氧化胺和甜菜堿(如烷基二甲基甜菜堿、磺基甜菜堿)、或其組合。本發(fā)明的胺中和的陰離子表面活性劑-陰離子表面活性劑以及附屬的陰離子共表面活性劑可以按酸形式存在，并且所述酸形式可以被中和以形成希望用于本發(fā)明洗滌劑組合物的表面活性劑鹽。典型的用于中和的試劑包括金屬反離子堿，例如氫氧化物，如NaOH或KOH。用于中和本發(fā)明的陰離子表面活性劑和處于其酸形式的附屬陰離子表面活性劑或共表面活性劑的另外優(yōu)選的試劑包括氨、胺、或烷醇胺。優(yōu)選烷醇胺。適合的非限制性實(shí)例包括單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、以及其他本領(lǐng)域中已知的直鏈或支鏈的烷醇胺；例如，高度優(yōu)選的烷醇胺包括2-氨基-1-丙醇、1-氨基丙醇、單異丙醇胺、或1-氨基-3-丙醇。胺中和可以進(jìn)行到完全或部分的程度，例如，陰離子表面活性劑混合物的部分可以被鈉或鉀中和，并且陰離子表面活性劑混合物的部分可以被胺或烷醇胺中和。半極性表面活性劑的非限制性實(shí)例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲胺氧化物包含一種或多種陰離子表面活性劑以及另外一種或多種非離子表面活性劑、并可任選地與另外的表面活性劑例如陽(yáng)離子表面活性劑的混合物的表面活性劑系統(tǒng)可以是優(yōu)選的。優(yōu)選的陰離子與非離子表面活性劑的重量比是至少2:1、或至少1:1至1:10。在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，該組合物選自如下的表面活性劑或表面活性劑體系：十二烷基苯磺酸鈉、氫化椰油酸鈉、月桂醇醚硫酸鈉、C12-14烷醇聚醚-7、C12-15烷醇聚醚-7、C12-15烷醇聚醚硫酸鈉、以及C14-15烷醇聚醚-4。皂-在此的組合物可以包含皂。不受理論的限制，可令人希望的是包括皂，因?yàn)樗糠殖洚?dāng)表面活性劑并且部分充當(dāng)助洗劑，并且可用于抑制泡沫，并且此外，可以有利地與組合物的多種陽(yáng)離子化合物相互作用以增強(qiáng)用本發(fā)明組合物處理的紡織品織物的柔軟性。可以利用本領(lǐng)域中已知的用于在衣物洗滌劑中使用的任何皂。在一個(gè)實(shí)施例中，這些組合物包含從0wt％至20wt％、從0.5wt％至20wt％、從4wt％至10wt％、或從4wt％至7wt％的皂。在此有用的皂的實(shí)例包括油酸皂、棕櫚酸皂、棕櫚仁脂肪酸皂、及其混合物。典型的皂處于具有不同鏈長(zhǎng)和取代度的脂肪酸皂混合物的形式。一種這樣的混合物是拔頂棕櫚仁脂肪酸。在一個(gè)實(shí)施例中，該皂選自游離脂肪酸。合適的脂肪酸是飽和和/或不飽和的并且可以從天然來(lái)源如植物或動(dòng)物酯(例如，棕櫚仁油、棕櫚油、椰子油、巴巴蘇油、紅花油、妥爾油、蓖麻油、牛油和魚(yú)油、油脂、及其混合物)中獲得，或合成地制備(例如，經(jīng)由石油的氧化或者經(jīng)由費(fèi)托法(FisherTropschprocess)氫化一氧化碳)。用于在本發(fā)明組合物中使用的適合的飽和脂肪酸的實(shí)例包括癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸和山萮酸。合適的不飽和脂肪酸種類包括：棕櫚油酸、油酸、亞油酸、亞麻酸和蓖麻油酸。優(yōu)選的脂肪酸的實(shí)例是飽和Cn脂肪酸、飽和Ci2-Ci4脂肪酸、和飽和或不飽和的Cn至Ci8脂肪酸、及其混合物。當(dāng)存在時(shí)，織物軟化陽(yáng)離子輔助表面活性劑與脂肪酸的重量比優(yōu)選地是從約1:3至約3:1，更優(yōu)選地從約1:1.5至約1.5:1，最優(yōu)選地約1:1。在此的皂和非皂陰離子表面活性劑的水平是以酸式基礎(chǔ)指定的按洗滌劑組合物的重量計(jì)的百分比。然而，正如本領(lǐng)域中通常理解的，在實(shí)踐中使用鈉、鉀或鏈烷醇銨堿如氫氧化鈉或單乙醇胺中和陰離子表面活性劑和皂。助水溶劑–本發(fā)明的組合物可以包括一種或多種助水溶劑。助水溶劑是如下化合物，該化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非極性環(huán)境中的極性物質(zhì))。一般地，助水溶物具有親水和疏水兩種特征(如由表面活性劑已知的所謂的兩親性質(zhì))；然而，助水溶物的分子結(jié)構(gòu)一般不利于自發(fā)性自聚集，參見(jiàn)例如通過(guò)霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)(2007)，膠體&界面科學(xué)新見(jiàn)(CurrentOpinioninColloid&InterfaceScience)12：121-128的綜述。助水溶劑并不顯示臨界濃度，高于該濃度就會(huì)發(fā)生如對(duì)表面活性劑而言所發(fā)現(xiàn)的自聚集以及脂質(zhì)形成膠束、薄層或其他很好地定義的中間相。很多助水溶劑反而示出連續(xù)型聚集過(guò)程，其中聚集體的大小隨著濃度增加而增長(zhǎng)。然而，很多助水溶劑改變了包括極性和非極性特征的物質(zhì)的系統(tǒng)(包括水、油、表面活性劑、和聚合物的混合物)的相行為、穩(wěn)定性、和膠體特性。經(jīng)典地從制藥、個(gè)人護(hù)理、食品跨行業(yè)至技術(shù)應(yīng)用使用助水溶劑。助水溶劑在洗滌劑組合物中的使用允許例如更濃的表面活性劑配制品(如在通過(guò)除去水而壓縮液體洗滌劑的過(guò)程中)而不引起不希望的現(xiàn)象，例如相分離或高粘度。洗滌劑可以包含從0wt％至10wt％，如從0wt％至5wt％、0.5wt％至5wt％、或從3wt％至5wt％的助水溶劑。可以利用本領(lǐng)域中已知的用于在洗滌劑中使用的任何助水溶劑。助水溶劑的非限制性實(shí)例包括苯磺酸鈉、對(duì)甲苯磺酸鈉(STS)、二甲苯磺酸鈉(SXS)、枯烯磺酸鈉(SCS)、傘花烴磺酸鈉、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羥基萘甲酸鈉、羥基萘磺酸鈉、乙基己基磺酸鈉及其組合。助洗劑-本發(fā)明的組合物可以包括一種或多種助洗劑、共助洗劑、助洗劑系統(tǒng)或其混合物。當(dāng)使用助洗劑時(shí)，清潔組合物將典型地包括從0wt％至65wt％、至少1wt％、從2wt％至60wt％或從5wt％至10wt％的助洗劑。在洗滌餐具清潔組合物中，助洗劑的水平典型地是40wt％至65wt％或50wt％至65wt％。該組合物可以是基本上不含助洗劑；基本上不含意思為“沒(méi)有有意添加的”沸石和/或磷酸鹽。典型的沸石助洗劑包括沸石A、沸石P和沸石MAP。典型的磷酸鹽助洗劑是三聚磷酸鈉。助洗劑和/或共助洗劑可以具體是形成具有Ca和Mg的水溶性復(fù)合物的螫合劑。可以使用本領(lǐng)域中已知用于在洗滌劑中使用的任何助洗劑和/或共助洗劑。助洗劑的非限制性實(shí)例包括沸石、二磷酸鹽(焦磷酸鹽)、三磷酸鹽(如三磷酸鈉(STP或STPP))、碳酸鹽(如碳酸鈉)、可溶性硅酸鹽(如偏硅酸鈉)、層狀硅酸鹽(例如，來(lái)自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺(如2-氨基乙-1-醇(MEA)、亞胺基二乙醇(DEA)和2,2’,2”-次氨基三乙醇(TEA))、以及羧甲基菊粉(CMI)、以及其組合。清潔組合物可以單獨(dú)地包括共助洗劑，或與助洗劑，例如沸石助洗劑組合。共助洗劑的非限制性實(shí)例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/馬來(lái)酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性實(shí)例包括檸檬酸鹽，螯合劑，例如氨基羧酸鹽、氨基多羧酸鹽和膦酸鹽，以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的特定實(shí)例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、亞氨二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羥乙烷-1,1-二基雙(膦酸)(HEDP)、乙二胺四(亞甲基)四(膦酸)(EDTMPA)、二亞乙基三胺五(亞甲基)五(膦酸)(DTPMPA)、N-(2-羥乙基)亞氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-單乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-單丙酸(ASMP)、亞氨二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亞氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、絲氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、異絲氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、鄰氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、對(duì)氨基苯磺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、氨基乙磺酸-N、N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(羥乙基)-亞乙基二胺三乙酸鹽(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亞乙基三胺五(亞甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亞甲基膦酸)(ATMP)，及其組合和鹽。另外的示例性助洗劑和/或共助洗劑描述于例如WO09/102854、US5977053中。螯合劑和晶體生長(zhǎng)抑制劑-在此的組合物可以包含螯合劑和/或晶體生長(zhǎng)抑制劑。適合的分子包括銅、離子和/或錳螯合劑及其混合物。適合的分子包括DTPA(二亞乙基三胺五乙酸)、HEDP(羥基乙烷二膦酸)、DTPMP(二亞乙基三胺五(亞甲基膦酸))、1,2-二羥基苯-3,5-二磺酸二鈉鹽氫氧化物、乙二胺、二亞乙基三胺、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、N-羥基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亞乙基四胺六乙酸(TTHA)、N-羥基乙基亞氨基二乙酸(HEIDA)、二羥基乙基甘氨酸(DHEG)、亞乙基二胺四丙酸(EDTP)、羧甲基菊粉以及2-膦羧基丁烷1,2,4-三羧酸(AM)及其衍生物。典型地，該組合物可以包括從0.005wt％至15wt％或從3.0wt％至10wt％的螯合劑或晶體生長(zhǎng)抑制劑。漂白組分-適合用于摻入本發(fā)明的方法和組合物中的漂白組分包括多于一種漂白組分中的一種或混合物。適合的漂白組分包括漂白催化劑、光漂白劑、漂白活化劑、過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫源、預(yù)形成的過(guò)酸及其混合物。通常，當(dāng)使用漂白組分時(shí)，本發(fā)明的組合物可以包括從0wt％至30wt％、從0.00001wt％至90wt％、0.0001wt％至50wt％、從0.001wt％至25wt％或從1wt％至20wt％。適合的漂白組分的實(shí)例包括：(1)預(yù)形成的過(guò)酸：適合的預(yù)形成的過(guò)酸包括但不限于選自下組的化合物，該組由預(yù)先形成的過(guò)氧酸或其鹽組成，典型地是過(guò)氧羧酸或其鹽或過(guò)氧硫酸或其鹽。預(yù)形成的過(guò)氧酸或其鹽優(yōu)選是過(guò)氧羧酸或其鹽，典型地具有對(duì)應(yīng)于以下化學(xué)式的化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中：R14選自烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基團(tuán)；R14基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的、取代或未取代的；并且Y是達(dá)到電荷中性的任何適合的反離子，優(yōu)選地Y選自氫、鈉或鉀。優(yōu)選地，R14是直鏈的或支鏈的、取代的或未取代的C6-9烷基。優(yōu)選地，過(guò)氧酸或其鹽選自過(guò)氧己酸、過(guò)氧庚酸、過(guò)氧辛酸、過(guò)氧壬酸、過(guò)氧癸酸、其任何鹽、或其任何組合。特別優(yōu)選的過(guò)氧酸是鄰苯二甲酰亞胺基-過(guò)氧基-鏈烷酸，特別是ε-鄰苯二甲酰亞胺基過(guò)氧基己酸(PAP)。優(yōu)選地，過(guò)氧酸或其鹽具有處于從30℃至60℃的范圍內(nèi)的熔點(diǎn)。預(yù)形成的過(guò)氧酸或其鹽還可以是過(guò)氧硫酸或其鹽，典型地具有對(duì)應(yīng)于以下化學(xué)式的化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中：R15選自烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基團(tuán)；R15基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的、取代或未取代的；并且Z是達(dá)到電荷中性的任何適合的反離子，優(yōu)選地Z選自氫、鈉或鉀。優(yōu)選地，R15是直鏈的或支鏈的、取代的或未取代的C6-9烷基。優(yōu)選地，此類漂白組分可以按從0.01wt％至50wt％、或從0.1wt％至20wt％的量存在于本發(fā)明的組合物中。(2)過(guò)氧化氫源包括例如無(wú)機(jī)過(guò)氧化氫合物鹽，包括堿金屬鹽，如過(guò)硼酸鹽(通常是一水合物或四水合物)，過(guò)碳酸鹽，過(guò)硫酸鹽，過(guò)磷酸鹽，過(guò)硅酸鹽的鈉鹽及其混合物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，無(wú)機(jī)過(guò)氧化氫合物鹽是例如選自下組的那些，該組由以下各項(xiàng)組成：過(guò)硼酸鹽、過(guò)碳酸鹽的鈉鹽及其混合物。當(dāng)使用時(shí)，無(wú)機(jī)過(guò)氧化氫合物鹽典型地以整體組合物的0.05wt％至40wt％或1wt％至30wt％的量存在并且典型地被摻入進(jìn)此類組合物中作為可以被包衣的結(jié)晶固體。適合的包衣包括：無(wú)機(jī)鹽，例如堿金屬硅酸鹽、碳酸鹽或硼酸鹽或其混合物，或有機(jī)材料，例如水溶性或水分散性聚合物、蠟、油或脂肪皂。優(yōu)選地，此類漂白組分可以按0.01wt％至50wt％、或0.1wt％至20wt％的量存在于本發(fā)明的組合物中。(3)術(shù)語(yǔ)漂白活化劑在此意指與過(guò)氧化氫反應(yīng)以經(jīng)由過(guò)水解反應(yīng)形成過(guò)酸的化合物。以此方式形成的過(guò)酸構(gòu)成活化的漂白劑。有待在此使用的適合漂白活化劑包括屬于酯、酰胺、酰亞胺或酸酐類別的那些。適合的漂白活化劑是具有R-(C＝O)-L的那些，其中R是烷基基團(tuán)(優(yōu)選是支鏈的)，當(dāng)該漂白活化劑是疏水的時(shí)候，具有從6個(gè)至14個(gè)碳原子或從8個(gè)至12個(gè)碳原子，并且當(dāng)該漂白活化劑是親水的時(shí)，具有少于6個(gè)碳原子或少于4個(gè)碳原子；并且是L離去基團(tuán)。適合的離去基團(tuán)的實(shí)例是苯甲酸及其衍生物-尤其是苯磺酸鹽。適合的漂白活化劑包括十二酰氧基苯磺酸鹽、癸酰氧基苯磺酸鹽、癸酰氧基苯甲酸或其鹽、3,5,5-三甲基己酰氧基苯磺酸鹽、四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己?；?氧基]苯-1-磺酸鈉(ISONOBS)、4-(十二?；趸?苯-1-磺酸鹽(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸鹽、4-(癸酰基氧基)苯甲酸鹽(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸鹽(NOBS))、和/或披露于WO98/17767中的那些。漂白活化劑的家族披露于EP624154中并且在那個(gè)家族中特別優(yōu)選的是乙酰檸檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短鏈甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下優(yōu)點(diǎn)，它是環(huán)境友好的。此外，乙酰檸檬酸三乙酯和三醋汀在存儲(chǔ)時(shí)在產(chǎn)品中具有良好的水解穩(wěn)定性，并且是有效的漂白活化劑。最后，ATC是多功能的，因?yàn)樵谶^(guò)水解反應(yīng)中釋放的檸檬酸鹽可以作為助洗劑起作用。可替代地，漂白系統(tǒng)可以包括例如酰胺、酰亞胺或砜型的過(guò)氧酸。漂白系統(tǒng)還可以包括過(guò)酸，例如6-(鄰苯二甲酰亞胺基)過(guò)氧己酸(PAP)。適合的漂白活化劑還披露于WO98/17767中。盡管可以使用任何適合的漂白活化劑，但是在本發(fā)明的一個(gè)方面，主題清潔組合物可以包括NOBS、TAED或其混合物。當(dāng)存在時(shí)，基于織物及家居護(hù)理組合物，過(guò)酸和/或漂白活化劑通常以0.1wt％至60wt％、0.5wt％至40wt％或0.6wt％至10wt％的量存在于組合物中?？梢詫⒁环N或多種疏水性過(guò)酸或其前體與一種或多種親水性過(guò)酸或其前體組合使用。優(yōu)選地，此類漂白組分可以按0.01wt％至50wt％、或0.1wt％至20wt％的量存在于本發(fā)明的組合物中?？梢詫?duì)過(guò)氧化氫源和過(guò)酸或漂白活化劑的量進(jìn)行選擇，以使得可用氧(來(lái)自過(guò)氧化物源)與過(guò)酸的摩爾比是從1:1至35:1，或甚至2:1至10:1。(4)二?；^(guò)氧化物-優(yōu)選的二?；^(guò)氧化物漂白種類包括選自具有以下通式的二酰基過(guò)氧化物的那些：R1-C(O)-OO-(O)C-R2，其中R1表示C6-C18烷基，優(yōu)選地是包含具有至少5個(gè)碳原子的直鏈并且任選地包含一個(gè)或多個(gè)取代基(例如-N+(CH3)3、-COOH或-CN)和/或一個(gè)或多個(gè)在烷基的相鄰碳原子之間插入的中斷部分(例如-CONH-或-CH＝CH-)的C6-C12烷基基團(tuán)，并且R2表示與過(guò)氧化物部分可相容的脂肪族基團(tuán)，以使得R1和R2一起包含總共8個(gè)至30個(gè)碳原子。在一個(gè)優(yōu)選方面，R1和R2是直鏈的未取代的C6-C12烷基鏈。最優(yōu)選地，R1和R2是相同的。二?；^(guò)氧化物(其中R1和R2均是C6-C12烷基基團(tuán))是特別優(yōu)選的。優(yōu)選地，R基團(tuán)(R1或R2)中的至少一者、最優(yōu)選地僅有一者在α位不包含分枝的或下垂的環(huán)，或優(yōu)選在α位或β位都不包含分枝的或下垂的環(huán)，或最優(yōu)選在α位或β位或γ位都不包含分枝的或下垂的環(huán)。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施例中，DAP可以是不對(duì)稱的，以使得優(yōu)選地R1?；鶊F(tuán)的水解是迅速的以產(chǎn)生過(guò)酸，但是R2?；鶊F(tuán)的水解是緩慢的。四?；^(guò)氧化物漂白種類優(yōu)選選自具有以下通式的四?；^(guò)氧化物：R3-C(O)-OO-C(O)-(CH2)n-C(O)-OO-C(O)-R3，其中R3表示C1-C9烷基，或C3-C7基團(tuán)，并且n表示從2至12或4至10(包括端值)的整數(shù)。優(yōu)選地，二?；?或四?；^(guò)氧化物漂白種類以足夠提供按重量計(jì)至少0.5ppm、至少10ppm、或至少50ppm的洗滌液的量存在。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，這些漂白種類以足夠提供按重量計(jì)從0.5ppm至300ppm、從30ppm至150ppm的洗滌液的量存在。優(yōu)選地，漂白組分包括漂白催化劑(5和6)。(5)優(yōu)選的是有機(jī)(非金屬)漂白催化劑，包括能夠接受來(lái)自過(guò)氧酸和/或其鹽的氧原子并且將該氧原子轉(zhuǎn)移至可氧化的底物的漂白催化劑。適合的漂白催化劑包括但不限于：亞胺鎓陽(yáng)離子及聚離子；亞胺鎓兼性離子；改性胺；改性氧化胺；N-磺?；鶃啺?；N-膦酰基亞胺；N-酰基亞胺；噻二唑二氧化物；全氟亞胺；環(huán)狀糖酮及其混合物。適合的亞胺鎓陽(yáng)離子及聚離子包括但不限于，N-甲基-3,4-二氫異喹啉鎓四氟硼酸鹽，如四面體(Tetrahedron)(1992)，49(2)，423-38所述的進(jìn)行制備(例如，化合物4，第433頁(yè))；N-甲基-3,4-二氫異喹啉鎓對(duì)-甲苯磺酸鹽，如US5360569所述的進(jìn)行制備(例如第11欄，實(shí)例1)；以及正辛基-3,4-二氫異喹啉鎓對(duì)-甲苯磺酸鹽，如US5360568所述的進(jìn)行制備(例如第10欄，實(shí)例3)。適合的亞胺鎓兼性離子包括但不限于，N-(3-磺丙基)-3,4-二氫異喹啉鎓，內(nèi)鹽，如US5576282所述的進(jìn)行制備(例如第31欄，實(shí)例II)；N-[2-(磺氧基)十二烷基]-3,4-二氫異喹啉鎓，內(nèi)鹽，如US5817614所述的進(jìn)行制備(例如，第32欄，實(shí)例V)；2-[3-[(2-乙基己基)氧基]-2-(磺氧基)丙基]-3,4-二氫異喹啉鎓，內(nèi)鹽，如WO05/047264所述的進(jìn)行制備(例如，第18頁(yè)，實(shí)例8)，以及2-[3-[(2-丁基辛基)氧基]-2-(磺氧基)丙基]-3,4-二氫異喹啉鎓，內(nèi)鹽。適宜的改性胺氧轉(zhuǎn)移催化劑包括但不限于1,2,3,4-四氫-2-甲基-1-異喹啉醇，其可依照描述于四面體通訊(TetrahedronLetters)(1987)，28(48)，6061-6064中的方法制備。適合的改性氧化胺氧傳遞催化劑包括但不限于1-羥基-N-氧基-N-[2-(磺氧基)癸基]-1,2,3,4-四氫異喹啉鈉。適合的N-磺?；鶃啺费鮽鬟f催化劑包括但不限于根據(jù)有機(jī)化學(xué)雜志(JournalofOrganicChemistry)(1990),55(4),1254-61中描述的程序制備的3-甲基-1,2-苯并異噻唑1,1-二氧化物。適宜的N-膦?；鶃啺费蹀D(zhuǎn)移催化劑包括但不限于[R-(E)]-N-[(2-氯-5-硝基苯基)亞甲基]-對(duì)苯基-對(duì)-(2,4,6-三甲基苯基)次膦酸酰胺，其可依照描述于化學(xué)學(xué)會(huì)雜志，化學(xué)通訊(JournaloftheChemicalSociety，ChemicalCommunications)(1994)，(22)，2569-70中的方法制備。適合的N-酰基亞胺氧傳遞催化劑包括但不限于可以根據(jù)波蘭化學(xué)雜志(PolishJournalofChemistry)(2003)，77(5)，577-590中描述的程序制造的[N(E)]-N-(苯基亞甲基)乙酰胺。適合的噻二唑二氧化物氧傳遞催化劑包括但不限于可以根據(jù)US5753599(第9欄，實(shí)例2)中所述的程序制造的3-甲基-4-苯基-1,2,5-噻二唑1,1-二氧化物。適宜的全氟亞胺氧轉(zhuǎn)移催化劑包括但不限于(Z)-2,2,3,3,4,4,4-七氟-N-(壬氟丁基)丁酰亞胺氟化物，其可依照四面體通訊(TetrahedronLetters)(1994)，35(34)，6329-30中所述的方法制備。適合的環(huán)狀糖酮氧傳遞催化劑包括但不限于如在US6649085(第12欄，實(shí)例1)中制備的1,2:4,5-二-O-異亞丙基-D-赤-2,3-己二酮(hexodiuro)-2,6-吡喃糖。優(yōu)選地，所述漂白催化劑包含亞胺鎓和/或羰基官能團(tuán)，并且通常能夠在接受氧原子，尤其是從過(guò)氧酸和/或其鹽接受氧原子后形成過(guò)氧亞胺正離子(oxaziridinium)和/或雙環(huán)氧乙烷官能團(tuán)。優(yōu)選地，漂白催化劑包括過(guò)氧亞胺正離子官能團(tuán)和/或在接受氧原子時(shí)，尤其是在接受來(lái)自過(guò)氧酸和/或其鹽的氧原子時(shí)能夠形成過(guò)氧亞胺正離子官能團(tuán)。優(yōu)選地，漂白催化劑包括環(huán)狀亞胺鎓官能團(tuán)，優(yōu)選其中該環(huán)狀部分具有從五個(gè)至八個(gè)原子(包括氮原子)、優(yōu)選六個(gè)原子的環(huán)尺寸。優(yōu)選地，漂白催化劑包括芳基亞胺鎓官能團(tuán)，優(yōu)選二環(huán)芳基亞胺官能團(tuán)，優(yōu)選是3,4-二氫異喹啉鎓官能團(tuán)。典型地，亞胺官能團(tuán)是季亞胺官能團(tuán)并且典型地在接受氧原子時(shí)，尤其是在接受來(lái)自過(guò)氧酸和/或其鹽的氧原子時(shí)能夠形成季過(guò)氧亞胺正離子官能團(tuán)。在另一方面，該洗滌劑組合物包括具有不大于0、不大于-0.5、不大于-1.0、不大于-1.5、不大于-2.0、不大于-2.5、不大于-3.0、或不大于-3.5的logPo/w的漂白組分。下面更加詳細(xì)地描述用于確定logPo/w的方法。典型地，漂白成分能夠產(chǎn)生具有從0.01至0.30、從0.05至0.25或從0.10至0.20的XSO的漂白種類。下面更加詳細(xì)地描述用于確定XSO的方法。例如，具有異喹啉鎓結(jié)構(gòu)的漂白成分能夠產(chǎn)生具有過(guò)氧亞胺正離子結(jié)構(gòu)的漂白種類。在這一實(shí)例中，XSO是過(guò)氧亞胺正離子漂白種類的XSO。優(yōu)選地，漂白催化劑具有對(duì)應(yīng)于以下化學(xué)式的化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中：n和m獨(dú)立地是從0至4，優(yōu)選n和m均是0；每個(gè)R1獨(dú)立地選自取代的或未取代的選自下組的基團(tuán)，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、烷基、環(huán)烷基、芳基、稠合芳基、雜環(huán)、稠合雜環(huán)、硝基、鹵基、氰基、磺酸根、烷氧基、酮基、羧基以及烷氧羰基；并且任何兩個(gè)連位的R1取代基可以合并以形成稠合芳基、稠合碳環(huán)或稠合雜環(huán)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自取代的或未取代的獨(dú)立地選自下組的基團(tuán)，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、羥基、烷基、環(huán)烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、亞烷基、雜環(huán)、烷氧基、芳基羰基、羧基烷基以及酰胺基團(tuán)；任何R2可以與任何其他的R2結(jié)合在一起以形成常見(jiàn)環(huán)的一部分；任何偕R2可以合并以形成羰基；并且任何兩個(gè)R2可以合并以形成取代的或未取代的稠合的不飽和部分；R3是C1至C20取代的或未取代的烷基；R4是氫或Qt-A部分，其中：Q是分支或未分支的烯烴，t＝0或1，并且A是選自下組的陰離子基團(tuán)，該組由以下各項(xiàng)組成：OSO3-、SO3-、CO2-、OCO2-、OPO32-、OPO3H-和OPO2-；R5是氫或-CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10)y-O]k-R8部分，其中：每個(gè)Y獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：O、S、N-H、或N-R8；并且每個(gè)R8獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：烷基、芳基和雜芳基，所述部分是取代或未取代的，并且無(wú)論是取代的還是未取代的，所述部分具有少于21個(gè)碳；每個(gè)G獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：CO、SO2、SO、PO和PO2；R9和R10獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H和C1-C4烷基；R11和R12獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H和烷基，或者當(dāng)放一起時(shí)可以結(jié)合形成羰基；b＝0或1；c可以＝0或1，但是如果b＝0，c必須＝0；y是從1至6的整數(shù)；k是從0至20的整數(shù)；R6是H，或是烷基、芳基或雜芳基部分；所述部分是取代或未取代的；并且X，如果存在的話，是適合的電荷平衡反離子，優(yōu)選地當(dāng)R4是氫時(shí)，X是存在的，適合的X包括但不限于：氯化物、溴化物、硫酸鹽、甲氧硫酸鹽(methosulphate)、磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、硼四氟化物以及磷酸鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，漂白催化劑具有對(duì)應(yīng)于以下通式的結(jié)構(gòu)：其中R13是包含從三個(gè)至24個(gè)碳原子(包括分支的碳原子)的支鏈烷基或包含從一個(gè)至24個(gè)碳原子的直鏈烷基；優(yōu)選地，R13是包含從八個(gè)至18個(gè)碳原子的支鏈烷基或包含從八個(gè)至十八個(gè)碳原子的直鏈烷基；優(yōu)選地，R13選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正-十二烷基、正-十四烷基、正-十六烷基、正-十八烷基、異-壬基、異-癸基、異-十三基和異-十五烷基；優(yōu)選地，R13選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、異-十三基和異-十五烷基。優(yōu)選地，除了漂白催化劑、特別是有機(jī)漂白催化劑以外，漂白組分還包括過(guò)酸源。過(guò)酸源可以選自(a)預(yù)形成的過(guò)酸；(b)過(guò)碳酸鹽、過(guò)硼酸鹽或過(guò)硫酸鹽(過(guò)氧化氫源)，優(yōu)選與一種漂白活化劑組合；和(c)過(guò)水解酶以及酯，用于在紡織品或硬表面處理步驟中在水的存在下原位形成過(guò)酸。當(dāng)存在時(shí)，基于該組合物，過(guò)酸和/或漂白活化劑通常以從0.1wt％至60wt％、從0.5wt％至40wt％或從0.6wt％至10wt％的量存在于該組合物中?？梢詫⒁环N或多種疏水性過(guò)酸或其前體與一種或多種親水性過(guò)酸或其前體組合使用。可以對(duì)過(guò)氧化氫源和過(guò)酸或漂白活化劑的量進(jìn)行選擇，以使得可用氧(來(lái)自過(guò)氧化物源)與過(guò)酸的摩爾比是從1:1至35:1，或2:1至10:1。(6)包含金屬的漂白催化劑-可以由催化金屬絡(luò)合物提供漂白組分。一種類型的包含金屬的漂白催化劑是以下催化系統(tǒng)，該催化系統(tǒng)包括一種具有限定的漂白催化活性的過(guò)渡金屬陽(yáng)離子(例如銅、鐵、鈦、釕、鎢、鉬或錳陽(yáng)離子)，一種具有很少或不具有漂白催化活性的輔助金屬陽(yáng)離子(例如鋅或鋁陽(yáng)離子)，以及一種對(duì)于催化性和輔助性金屬陽(yáng)離子具有限定的穩(wěn)定性常數(shù)的隔離物，特別是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亞甲基膦酸)及其水溶性鹽。此類催化劑披露于US4430243中。優(yōu)選的催化劑描述于WO09/839406、US6218351和WO00/012667中。特別優(yōu)選的是過(guò)渡金屬催化劑或因此作為跨橋(cross-bridged)多齒N-供體配體的配體。如果希望的話，可以借助錳化合物催化在此的組合物。此類化合物以及使用水平在本領(lǐng)域中是熟知的并且包括例如披露于US5576282中的基于錳的催化劑。在此有用的鈷漂白催化劑是已知的并且例如描述于US5597936；US5595967中。通過(guò)已知的程序可容易地制備此類鈷催化劑，例如像US5597936和US5595967中傳授的程序。在此的組合物還可以適合地包括配體的過(guò)渡金屬絡(luò)合物，例如雙哌啶酮(bispidone)(US7501389)和/或大多環(huán)剛性配體-縮寫(xiě)為“MRL”。作為一個(gè)實(shí)際問(wèn)題而并不作為限制之用，可以調(diào)整在此的組合物和方法，以在水性洗滌介質(zhì)中提供大約至少一億分之一的活性MRL種類，并且將典型地在洗滌液中提供從0.005ppm至25ppm、從0.05ppm至10ppm、或從0.1ppm至5ppm的MRL。即成的過(guò)渡金屬漂白催化劑中的適合的過(guò)渡金屬包括例如錳、鐵和鉻。適合的MRL包括5,12-二乙基-1,5,8,12-四氮雜二環(huán)[6.6.2]十六烷。通過(guò)已知的程序可容易地制備適合的過(guò)渡金屬M(fèi)RL，例如像US6225464和WO00/32601中傳授的程序。(7)光漂白劑-適合的光漂白劑包括例如磺化的酞菁鋅、磺化的酞菁鋁、呫噸染料及其混合物。用于在本發(fā)明的這些組合物中使用的優(yōu)選漂白組分包括過(guò)氧化氫源、漂白活化劑和/或有機(jī)過(guò)氧酸，任選地通過(guò)過(guò)氧化氫源和漂白活化劑與漂白催化劑相組合的反應(yīng)而原位產(chǎn)生。優(yōu)選的漂白組分包括漂白催化劑，優(yōu)選以上所述的有機(jī)漂白催化劑。特別優(yōu)選的漂白組分是漂白催化劑，特別是有機(jī)漂白催化劑。示例性漂白系統(tǒng)還描述于例如WO2007/087258、WO2007/087244、WO2007/087259以及WO2007/087242中?？椢镎{(diào)色劑-該組合物可以包括織物調(diào)色劑。適合的織物調(diào)色劑包括染料、染料-粘土軛合物、以及顏料。適合的染料包括小分子染料和聚合物染料。適合的小分子染料包括選自下組的小分子染料，該組由以下各項(xiàng)組成：屬于以下比色指數(shù)(C.I.)分類的染料：直接藍(lán)、直接紅、直接紫、酸性藍(lán)、酸性紅、酸性紫、堿性藍(lán)、堿性紫和堿性紅或其混合物。在另一方面，適合的小分子染料包括選自下組的小分子染料，該組由以下各項(xiàng)組成：比色指數(shù)(染工和著色師學(xué)會(huì)(SocietyofDyersandColorists)，布拉德福德，英國(guó))編號(hào)直接紫9、直接紫35、直接紫48、直接紫51、直接紫66、直接紫99、直接藍(lán)1、直接藍(lán)71、直接藍(lán)80、直接藍(lán)279、酸性紅17、酸性紅73、酸性紅88、酸性紅150、酸性紫15、酸性紫17、酸性紫24、酸性紫43、酸性紅52、酸性紫49、酸性紫50、酸性藍(lán)15、酸性藍(lán)17、酸性藍(lán)25、酸性藍(lán)29、酸性藍(lán)40、酸性藍(lán)45、酸性藍(lán)75、酸性藍(lán)80、酸性藍(lán)83、酸性藍(lán)90和酸性藍(lán)113、酸性黑1、堿性紫1、堿性紫3、堿性紫4、堿性紫10、堿性紫35、堿性藍(lán)3、堿性藍(lán)16、堿性藍(lán)22、堿性藍(lán)47、堿性藍(lán)66、堿性藍(lán)75、堿性藍(lán)159及其混合物。在另一方面，適合的小分子染料包括選自下組的小分子染料，該組由以下各項(xiàng)組成：比色指數(shù)(染工和著色師學(xué)會(huì)，布拉德福德，英國(guó))編號(hào)酸性紫17、酸性紫43、酸性紅52、酸性紅73、酸性紅88、酸性紅150、酸性藍(lán)25、酸性藍(lán)29、酸性藍(lán)45、酸性藍(lán)113、酸性黑1、直接藍(lán)1、直接藍(lán)71、直接紫51及其混合物。在另一方面，適合的小分子染料包括選自下組的小分子染料，該組由以下各項(xiàng)組成：比色指數(shù)(染工和著色師學(xué)會(huì)，布拉德福德，英國(guó))編號(hào)酸性紫17、直接藍(lán)71、直接紫51、直接藍(lán)1、酸性紅88、酸性紅150、酸性藍(lán)29、酸性藍(lán)113或其混合物。適合的聚合物染料包括選自下組的聚合物染料，該組由以下各項(xiàng)組成：包含軛合色原體的聚合物(染料-聚合物軛合物)以及與色原體共聚合進(jìn)聚合物主鏈中的聚合物，及其混合物。在另一方面，適合的聚合物染料包括選自下組的聚合物染料，該組由以下各項(xiàng)組成：在(美利肯(Milliken))名稱之下的織物實(shí)質(zhì)性著色劑，從至少一種反應(yīng)性染料和選自下組的聚合物形成的染料-聚合物軛合物，該組由以下各項(xiàng)組成：包含選自由羥基部分、一級(jí)胺部分、二級(jí)胺部分、硫醇部分及其混合物組成的組的部分的聚合物。在再另一方面，適合的聚合物染料包括選自下組的聚合物染料，該組由以下各項(xiàng)組成：紫色CT，與活性藍(lán)、活性紫或活性紅染料軛合的羧甲基纖維素(CMC)，如與C.I.反應(yīng)性藍(lán)19(由麥格酶(Megazyme)，威克洛，愛(ài)爾蘭，以產(chǎn)品名AZO-CM-CELLULOSE，產(chǎn)品代碼S-ACMC下售賣(mài))軛合的CMC、烷氧基化的三苯基-甲烷聚合物著色劑，烷氧基化的噻吩聚合物著色劑、及其混合物。優(yōu)選的調(diào)色染料包括發(fā)現(xiàn)于WO08/87497中的增白劑。這些增白劑可以由以下結(jié)構(gòu)(I)表征：其中R1和R2可以獨(dú)立地選自：a)[(CH2CR'HO)x(CH2CR"HO)yH]其中R’選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH3、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中R”選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中x+y≤5；其中y≥1；并且其中z＝0至5；b)R1＝烷基、芳基或芳基烷基，并且R2＝[(CH2CR'HO)x(CH2CR"HO)yH]其中R’選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH3、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中R”選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中x+y≤10；其中y≥1；并且其中z＝0至5；c)R1＝[CH2CH2(OR3)CH2OR4]并且R2＝[CH2CH2(OR3)CH2OR4]其中R3選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、(CH2CH2O)zH、及其混合物；并且其中z＝0至10；其中R4選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(C1-C16)烷基、芳基基團(tuán)、及其混合物；并且(d)其中R1和R2可以獨(dú)立地選自氧化苯乙烯、縮水甘油甲醚、異丁基縮水甘油醚、異丙基縮水甘油醚、叔丁基縮水甘油醚、2-乙基己基縮水甘油醚、以及縮水甘油十六烷基醚的氨基加成產(chǎn)物，隨后為從1至10個(gè)環(huán)氧烷單位的加成。本發(fā)明的優(yōu)選增白劑可以由以下結(jié)構(gòu)(II)表征：其中R’選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH3、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中R”選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、CH2O(CH2CH2O)zH、及其混合物；其中x+y≤5；其中y≥1；并且其中z＝0至5。本發(fā)明的另外優(yōu)選的增白劑可以由以下結(jié)構(gòu)(III)表征：典型地包括具有一共5個(gè)EO基團(tuán)的混合物。適合的優(yōu)選分子是處于結(jié)構(gòu)I的具有以下上文中“部分a”中的側(cè)基的那些。表AR1R2R’R”xyR’R”xyaHH31HH01bHH21HH11c＝bHH11HH21d＝aHH01HH31另外的使用的增白劑包括描述于US2008/34511(聯(lián)合利華(Unilever))中的那些。優(yōu)選的試劑是“紫色13”。適合的染料粘土軛合物包括選自下組的染料粘土軛合物，該組包括至少一種陽(yáng)離子/堿性染料和綠土、及其混合物。在另一方面，適合的染料粘土軛合物包括選自下組的染料粘土軛合物，該組由一種陽(yáng)離子/堿性染料和一種粘土組成，該陽(yáng)離子/堿性染料選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：C.I.堿性黃1至108、C.I.堿性橙1至69、C.I.堿性紅1至118、C.I.堿性紫1至51、C.I.堿性藍(lán)1至164、C.I.堿性綠1至14、C.I.堿性棕色1至23、CI堿性黑1至11，并且該粘土選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：蒙脫石粘土、水輝石粘土、皂石粘土及其混合物。在再另一方面，適合的染料粘土軛合物包括選自下組的染料粘土軛合物，該組由以下各項(xiàng)組成：蒙脫石堿性藍(lán)B7C.I.42595軛合物、蒙脫石堿性藍(lán)B9C.I.52015軛合物、蒙脫石堿性紫V3C.I.42555軛合物、蒙脫石堿性綠G1C.I.42040軛合物、蒙脫石堿性紅R1C.I.45160軛合物、蒙脫石C.I.堿性黑2軛合物、水輝石堿性藍(lán)B7C.I.42595軛合物、水輝石堿性藍(lán)B9C.I.52015軛合物、水輝石堿性紫V3C.I.42555軛合物、水輝石堿性綠G1C.I.42040軛合物、水輝石堿性紅R1C.I.45160軛合物、水輝石C.I.堿性黑2軛合物、皂石堿性藍(lán)B7C.I.42595軛合物、皂石堿性藍(lán)B9C.I.52015軛合物、皂石堿性紫V3C.I.42555軛合物、皂石堿性綠G1C.I.42040軛合物、皂石堿性紅R1C.I.45160軛合物、皂石C.I.堿性黑2軛合物及其混合物。適合的顏料包括選自下組的顏料，該組由以下各項(xiàng)組成：黃士酮、陰丹酮、包含1至4個(gè)氯原子的含氯陰丹酮、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、單溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3,4,9,10-四羧酸二酰亞胺(其中該酰亞胺基團(tuán)可以是未取代的或被C1-C3-烷基或苯基或雜環(huán)基團(tuán)取代的，并且其中該苯基和雜環(huán)基團(tuán)可以另外地帶有不賦予在水中的溶解性的取代基)、蒽素嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、異蒽酮紫、二噁嗪顏料、每個(gè)分子可以包含高達(dá)2個(gè)氯原子的酞菁銅、多氯-酞菁銅或每個(gè)分子包含高達(dá)14個(gè)溴原子的多溴氯-酞菁銅，及其混合物。在另一方面，適合的顏料包括選自下組的顏料，該組由以下各項(xiàng)組成：群青(C.I.顏料藍(lán)29)、群青紫(C.I.顏料紫15)及其混合物。上述織物調(diào)色劑可以組合使用(可以使用織物調(diào)色劑的任何混合物)。適合的調(diào)色劑更詳細(xì)地描述于US7208459中。染料在本發(fā)明的組合物中的優(yōu)選水平是0.00001wt％至0.5wt％、或0.0001wt％至0.25wt％。優(yōu)選在水中用于處理和/或清潔步驟的染料的濃度是從1ppb至5ppm、10ppb至5ppm或20ppb至5ppm。在優(yōu)選的組合物中，表面活性劑的濃度將是從0.2至3g/l。膠囊化物-該組合物可以包含膠囊化物。在一方面，膠囊化物包括一個(gè)核心，具有內(nèi)表面和外表面的包殼，所述包殼膠囊化所述核心。在所述膠囊化物的一個(gè)方面，所述核心可以包括一種選自下組的材料，該組由以下各項(xiàng)組成：香料；增亮劑；染料；驅(qū)蟲(chóng)劑；硅酮；蠟；調(diào)味劑；維生素；織物軟化劑；護(hù)膚劑，在一個(gè)方面是石蠟；酶；抗菌劑；漂白劑；感受劑(sensate)；及其混合物；并且所述包殼可以包括一種選自下組的材料，該組由以下各項(xiàng)組成：聚乙烯；聚酰胺；聚乙烯醇，可任選地包含其他共聚單體；聚苯乙烯；聚異戊二烯；聚碳酸酯；聚酯；聚丙烯酸酯；氨基塑料，在一個(gè)方面，所述氨基塑料可以包括聚脲、聚氨酯和/或聚脲聚氨酯(polyureaurethane)，在一個(gè)方面，所述聚脲可以包括聚氧基亞甲基脲和/或三聚氰胺甲醛；聚烯烴；多糖，在一個(gè)方面，所述多糖可以包括海藻酸鹽和/或殼聚糖；明膠；蟲(chóng)膠；環(huán)氧樹(shù)脂；乙烯基聚合物水不溶性無(wú)機(jī)物；硅酮；及其混合物。在所述膠囊化物的一個(gè)方面，所述核心可以包括香料。在所述膠囊化物的一個(gè)方面，所述包殼可以包括三聚氰胺甲醛和/或交聯(lián)的三聚氰胺甲醛。在一方面，披露了適合的膠囊化物可以包括核心材料和包殼，所述包殼至少部分地包圍所述核心材料。所述膠囊化物的85％或90％可以具有從0.2MPa至10MPa、從0.4MPa至5MPa、從0.6MPa至3.5MPa、或從0.7MPa至3MPa的抗斷強(qiáng)度；并且具有從0至30％、從0至20％、或從0至5％的有益試劑泄露。在一方面，所述膠囊化物的85％或90％可以具有從1至80微米、從5至60微米、從10至50微米、或從15至40微米的粒度。在一方面，所述膠囊化物的85％或90％可以具有從30至250nm、從80至180nm、或從100至160nm的顆粒壁厚。在一方面，所述膠囊化物的核心材料可以包括一種選自由香料原材料組成的組的材料，和/或任選地包括一種選自下組的材料，該組由以下各項(xiàng)組成：植物油，包括純凈植物油和/或共混植物油，包括蓖麻油(casteroil)、椰子油、棉籽油、葡萄籽油、油菜籽、大豆油、玉米油、棕櫚油、亞麻籽油、紅花油、橄欖油、花生油、椰子油、棕櫚仁油、蓖麻油(castoroil)、檸檬油及其混合物；植物油的酯，酯，包括己二酸二丁酯、酞酸二丁酯、己二酸丁基芐酯、己二酸辛基芐酯、磷酸三甲苯酯、磷酸三辛酯及其混合物；直鏈或支鏈烴，包括具有高于約80℃的沸點(diǎn)的那些直鏈或支鏈烴；部分氫化的三聯(lián)苯、二烷基鄰苯二甲酸酯、烷基聯(lián)苯(包括單異丙基聯(lián)苯)、烷基化的萘(包括二丙基萘)、石油精(包括煤油)、礦物油及其混合物；芳香族溶劑，包括苯、甲苯及其混合物；硅酮油；及其混合物。在一方面，所述膠囊化物的壁材料可以包括適合的樹(shù)脂，該樹(shù)脂包括醛和胺的反應(yīng)產(chǎn)物，適合的醛包括甲醛。適合的胺包括三聚氰胺、脲、苯并胍胺、甘脲、及其混合物。適合的三聚氰胺包括羥甲基三聚氰胺、甲基化的羥甲基三聚氰胺、亞氨基三聚氰胺及其混合物。適合的脲包括二羥甲基脲、甲基化的二羥甲基脲、脲-間苯二酚、及其混合物。在一方面，在將膠囊化物添加至組合物之前、期間或之后，適合的甲醛清除劑可以與例如處于膠囊漿料中的膠囊化物一起使用和/或添加至這種組合物中。適合的膠囊可以通過(guò)US2008/0305982；和/或US2009/0247449的以下傳授來(lái)制成。在一個(gè)優(yōu)選方面，該組合物還可以包括沉積酸，優(yōu)選由下組組成，該組包括陽(yáng)離子或非離子聚合物。適合的聚合物包括陽(yáng)離子淀粉、陽(yáng)離子羥基乙基纖維素、聚乙烯甲醛、槐樹(shù)豆膠、甘露聚糖、木葡聚糖、羅望子膠、聚乙烯對(duì)苯二酸鹽，以及包含二甲基氨乙基甲基丙烯酸酯的且任選具有一種或多種選自下組的單體的聚合物，該組包括丙烯酸和丙烯酰胺。香料-在一方面，該組合物包括含有選自下組的一種或多種香料原材料的香料，該組由以下各項(xiàng)組成：1,1'-氧基雙-2-丙醇；1,4-環(huán)己烷二羧酸，二乙基酯；(乙氧基甲氧基)環(huán)十二烷；1,3-壬二醇，單乙酸酯；(3-甲基丁氧基)乙酸，2-丙烯基酯；β-甲基環(huán)十二烷乙醇；2-甲基-3-[(1,7,7-三甲基二環(huán)[2.2.1]庚-2-基)氧基]-1-丙醇；氧雜環(huán)十六-2-酮；α-甲基-苯甲醇乙酸鹽；反式-3-乙氧基-1,1,5-三甲基環(huán)己烷；4-(1,1-二甲基乙基)環(huán)己醇乙酸酯；十二氫-3a,6,6,9a-四甲基萘并[2,1-b]呋喃；β-甲基苯丙醛；β-甲基-3-(1-甲基乙基)苯丙醛；4-苯基-2-丁酮；2-甲基丁酸，乙基酯；苯甲醛；2-甲基丁酸，1-甲基乙基酯；二氫-5-戊基-2(3H)呋喃酮；(2E)-1-(2,6,6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-2-丁烯-1-酮；十二醛；十一醛；2-乙基-α,α-二甲基苯丙醛；癸醛；α,α-二甲基苯乙醇乙酸酯；2-(苯基亞甲基)辛醛；2-[[3-[4-(1,1-二甲基乙基)苯基]-2-甲基亞丙基]氨基]苯甲酸，甲基酯；1-(2,6,6-三甲基-3-環(huán)己烯-1-基)-2-丁烯-1-酮；2-戊基環(huán)戊酮；3-氧代-2-戊基環(huán)戊烷乙酸，甲基酯；4-羥基-3-甲氧基苯甲醛；3-乙氧基-4-羥基苯甲醛；2-庚基環(huán)戊酮；1-(4-甲基苯基)乙酮；(3E)-4-(2,6,6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-3-丁烯-2-酮；(3E)-4-(2,6,6-三甲基-2-環(huán)己烯-1-基)-3-丁烯-2-酮；苯乙醇；2H-1-苯并吡喃-2-酮；4-甲氧基苯甲醛；10-十一烯醛；丙酸，苯基甲基酯；β-甲基苯戊醇；1,1-二乙氧基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯；α,α-二甲基苯乙醇；(2E)-1-(2,6,6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2-丁烯-1-酮；乙酸，苯基甲基酯；環(huán)己烷丙酸，2-丙烯基酯；己酸，2-丙烯基酯；1,2-二甲氧基-4-(2-丙烯基)苯；1,5-二甲基-二環(huán)[3.2.1]辛-8-酮肟；4-(4-羥基-4-甲基戊烷基)-3-環(huán)己烯-1-甲醛；3-丁烯-2-醇；2-[[[2,4(或3,5)-二甲基-3-環(huán)己烯基-1-基]亞甲基]氨基]苯甲酸，甲基酯；8-環(huán)十六-1-酮；甲基紫羅酮；2,6-二甲基-7-辛烯-2-醇；2-甲氧基-4-(2-丙烯基)苯酚；(2E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醇；2-羥基-苯甲酸，(3Z)-3-己烯基酯；2-十三烯腈；4-(2,2-二甲基-6-亞甲基環(huán)己基)-3-甲基-3-丁烯-2-酮；四氫-4-甲基-2-(2-甲基-1-丙烯基)-2H-吡喃；乙酸，(2-甲基丁氧基)-，2-丙烯基酯；苯甲酸，2-羥基-，3-甲基丁基酯；2-丁烯-1-酮，1-(2,6,6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-，(Z)-；環(huán)戊烷羧酸，2-己基-3-氧代-，甲基酯；苯丙醛，4-乙基-α，α-二甲基-；3-環(huán)己烯-1-甲醛，3-(4-羥基-4-甲基戊基)-；乙酮，1-(2,3,4,7,8,8a-六氫-3,6,8,8-四甲基-1H-3a,7-甲醇甘菊藍(lán)-5-基)-，[3R-(3.α.,3a.β.,7.β.,8a.α.)]-；十一醛，2-甲基-2H-吡喃-2-酮，6-丁基四氫-；苯丙醛、4-(1,1-二甲基乙基)-.α.-甲基-；2(3H)-呋喃酮、5-庚基二氫-；苯甲酸，2-[(7-羥基-3,7-二甲基亞辛基)氨基]-、甲基；苯甲酸，2-羥基-，苯基甲基酯；萘，2-甲氧基-；2-環(huán)戊烯-1-酮，2-己基-；2(3H)-呋喃酮、5-己基二氫-；氧雜環(huán)丙烷羧酸，3-甲基-3-苯基-，乙基酯；2-氧雜二環(huán)[2.2.2]辛烷，1,3,3-三甲基-；苯戊醇，.γ.-甲基-；3-辛醇，3,7-二甲基-；3,7-二甲基-2,6-辛二烯腈；3,7-二甲基-6-辛烯-1-醇；萜品醇乙酸酯；2-甲基-6-亞甲基-7-辛烯-2-醇，二氫衍生物；3a,4,5,6,7,7a-六氫-4,7-甲醇-1H-茚-6-酚丙酸酯；3-甲基-2-丁烯-1-醇乙酸酯；(Z)-3-己烯-1-醇乙酸酯；2-乙基-4-(2,2,3-三甲基-3-環(huán)戊烯-1-基)-2-丁烯-1-醇；4-(八氫-4,7-甲醇-5H-亞茚-5-基)-丁醛；3-2,4-二甲基-環(huán)己烯-1-甲醛；1-(1,2,3,4,5,6,7,8-八氫-2,3,8,8-四甲基-2-萘基)-乙酮；2-羥基-苯甲酸，甲基酯；2-羥基-苯甲酸，己基酯；2-苯氧基-乙醇；2-羥基-苯甲酸，戊基酯；2,3-庚烷二酮；2-己烯-1-醇；6-辛烯-2-醇、2,6-二甲基-；突厥酮(α，β，γ或δ或其混合物)，4,7-甲醇-1H-茚-6-酚，3a,4,5,6,7,7a-六氫-，乙酸酯；9-十一烯醛；8-十一烯醛；異環(huán)檸檬醛；乙酮，1-(1,2,3,5,6,7,8,8a-八氫-2,3,8,8-四甲基-2-萘基)-；3-環(huán)己烯-1-甲醛，3,5-二甲基-；3-環(huán)己烯-1-甲醛，2,4-二甲基-；1,6-辛二烯-3-醇，3,7-二甲基-；1,6-辛二烯-3-醇，3,7-二甲基-，乙酸酯；鈴蘭醛(p-t-Bucinal)，以及環(huán)戊酮、2-[2-(4-甲基-3-環(huán)己烯-1-基)丙基]-以及1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)環(huán)己烯及其混合物。在一方面，該組合物可以包括膠囊化的香料顆粒，該顆粒包含水溶性羥基化合物或三聚氰胺-甲醛或改性的聚乙烯醇。在一方面，膠囊化物包括(a)至少部分水溶的固體基質(zhì)，包含一種或多種水溶性羥基化合物，優(yōu)選淀粉；以及(b)由該固體基質(zhì)包封的香料油。在另一方面，該香料可以是與多胺(優(yōu)選聚乙烯亞胺)預(yù)復(fù)合的，以形成席夫堿(Schiffbase)。聚合物-該組合物可以包括一種或多種聚合物。實(shí)例為羧甲基纖維素、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯(如聚丙烯酸酯)、馬來(lái)酸/丙烯酸共聚物、以及甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。該組合物可以包括一種或多種兩親清潔聚合物，例如具有以下通用結(jié)構(gòu)的化合物：雙((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-雙((C2H5O)(C2H4O)n)，其中n＝從20至30，并且x＝從3至8，或其硫酸化的或磺化的變體。該組合物可以包括兩親烷氧基化油脂清潔聚合物，這些聚合物具有平衡的親水和疏水特性，使得它們從織物和表面去除油脂顆粒。本發(fā)明的兩親烷氧基化油脂清潔聚合物的具體實(shí)施例包括一個(gè)核心結(jié)構(gòu)和與那個(gè)核心結(jié)構(gòu)連接的多個(gè)烷氧基化基團(tuán)。這些可以包括烷氧基化的聚烯屬烴亞胺(polyalkylenimine)，優(yōu)選具有內(nèi)聚環(huán)氧乙烷嵌段和外聚環(huán)氧丙烷嵌段。在此，烷氧基化的聚羧酸酯(例如從聚丙烯酸酯制備的那些)可用于提供另外的油脂去除性能。此類材料描述于WO91/08281和PCT90/01815中。化學(xué)上地，這些材料包括聚丙烯酸酯，每7-8個(gè)丙烯酸脂單位具有一個(gè)乙氧基側(cè)鏈。側(cè)鏈具有化學(xué)式-(CH2CH2O)m(CH2)nCH3，其中m是2-3并且n是6-12。側(cè)鏈?zhǔn)酋ミB接至聚丙烯酸酯“主鏈”，以提供“梳子狀”聚合物類型結(jié)構(gòu)。分子量可以不同，但典型地處于2000至50,000的范圍內(nèi)。此類烷氧基化的聚羧酸酯可以包括在此的組合物的從0.05wt％至10wt％。本發(fā)明的類異戊二烯衍生的表面活性劑，以及它們與其他輔助表面活性劑和其他佐劑成分一起形成的混合物特別適合與兩親接枝共聚物一起使用，優(yōu)選地該兩親接枝共聚物包括(i)聚乙二醇主鏈；以及(ii)和至少一種下垂物部分，該下垂物部分選自聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇及其混合物。優(yōu)選的兩親接枝共聚物是由巴斯夫供應(yīng)的SokalanHP22。適合的聚合物包括隨機(jī)接枝共聚物，優(yōu)選聚乙酸乙烯酯接枝的聚環(huán)氧乙烷共聚物，具有聚環(huán)氧乙烷主鏈和多重聚乙酸乙烯酯側(cè)鏈。聚環(huán)氧乙烷主鏈的分子量?jī)?yōu)選是6000，并且聚環(huán)氧乙烷與聚乙酸乙烯酯的重量比是40比60，并且每50個(gè)環(huán)氧乙烷單位有不多于1個(gè)接枝點(diǎn)。羧酸酯聚合物-本發(fā)明的組合物還包括一種或多種羧酸酯聚合物，例如馬來(lái)酸酯/丙烯酸酯隨機(jī)共聚物或聚丙烯酸酯均聚物。在一方面，該羧酸酯聚合物是具有從4,000Da至9,000Da或從6,000Da至9,000Da的分子量的聚丙烯酸酯均聚物。污物釋放聚合物-本發(fā)明的組合物還可以包括一種或多種污物釋放聚合物，這些聚合物具有如由以下結(jié)構(gòu)(I)、(II)或(III)之一所定義的結(jié)構(gòu)：(I)-[(OCHR1-CHR2)a-O-OC-Ar-CO-]d(II)-[(OCHR3-CHR4)b-O-OC-sAr-CO-]e(III)-[(OCHR5-CHR6)c-OR7]f其中：a、b和c是從1至200；d、e和f是從1至50；Ar是1,4-取代的亞苯基；sAr是1,3-取代的亞苯基，該亞苯基在5位上被SO3Me取代；Me是Li，K，Mg/2，Ca/2，Al/3，銨，單-、二-、三-、或四烷基銨，其中烷基是C1-C18烷基或C2-C10羥基烷基，或其混合物；R1、R2、R3、R4、R5和R6獨(dú)立地選自H或C1-C18正-或異-烷基；并且R7是直鏈或支鏈的C1-C18烷基，或直鏈或支鏈的C2-C30烯基，或具有5至9個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或C8-C30芳基，或C6-C30芳基烷基。適合的去污聚合物是聚酯去污聚合物，例如Repel-o-tex聚合物，包括Repel-o-tex、SF-2和SRP6，由羅地亞(Rhodia)供應(yīng)。其他適合的去污聚合物包括Texcare聚合物，包括TexcareSRA100、SRA300、SRN100、SRN170、SRN240、SRN300和SRN325，由科萊恩(Clariant)供應(yīng)。其他適合的去污聚合物是Marloquest聚合物，例如MarloquestSL，由薩索爾(Sasol)供應(yīng)。纖維素聚合物-本發(fā)明的組合物還包括一種或多種纖維素聚合物，包括選自烷基纖維素、烷基烷氧基烷基纖維素、羧基烷基纖維素、烷基羧基烷基纖維素的那些。在一方面，纖維素聚合物選自下組，該組包括羧甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥基乙基纖維素、甲基羧甲基纖維素、及其混合物。在一方面，羧甲基纖維素具有從0.5至0.9的羧甲基取代度以及從100,000Da至300,000Da的分子量。酶-該組合物可以包括提供清潔性能和/或織物護(hù)理益處的一種或多種酶。適合的酶的實(shí)例包括但不限于半纖維素酶、過(guò)氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、甘露聚糖酶、果膠裂解酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、聚戊糖酶、馬拉納酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶、葉綠素酶和淀粉酶、或其混合物。典型的組合是酶混合物，可以包含例如蛋白酶和脂肪酶連同淀粉酶。當(dāng)存在于組合物中時(shí)，前述另外的酶可以按組合物的重量計(jì)以從0.00001wt％至2wt％、從0.0001wt％至1wt％或從0.001wt％至0.5wt％酶蛋白的水平存在。一般而言，一種或多種所選酶的特性應(yīng)與選定的洗滌劑相容(即，最適pH，與其他酶和非酶成分的相容性，等等)，并且該一種或多種酶應(yīng)以有效量存在。纖維素酶：適合的纖維素酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或蛋白質(zhì)工程化的變體。適合的纖維素酶包括來(lái)自以下屬的纖維素酶：芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、腐質(zhì)霉屬、鐮孢菌屬、梭孢殼屬、枝頂孢霉屬，例如US4435307、US5648263、US5691178、US5776757以及WO89/09259中披露的由特異腐質(zhì)霉、嗜熱毀絲霉以及尖孢鐮孢菌產(chǎn)生的真菌纖維素酶。特別適合的纖維素酶是具有顏色護(hù)理益處的堿性或中性纖維素酶。這樣的纖維素酶的實(shí)例是EP0495257、EP0531372、WO96/11262、WO96/29397、WO98/08940中所述的纖維素酶。其他實(shí)例是纖維素酶變體，如WO94/07998、EP0531315、US5457046、US5686593、US5763254、WO95/24471、WO98/12307以及PCT/DK98/00299中所述的那些?？缮藤?gòu)的纖維素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(諾維信公司(NovozymesA/S))、ClazinaseTM、和PuradaxHATM(杰能科國(guó)際有限公司(GenencorInternationalInc.))、以及KAC-500(B)TM(花王株式會(huì)社(KaoCorporation))。在一方面，優(yōu)選的酶將包括蛋白酶。適合的蛋白酶包括細(xì)菌、真菌、植物、病毒或動(dòng)物起源的那些，例如植物或微生物起源。優(yōu)選微生物來(lái)源。包括化學(xué)修飾的或蛋白質(zhì)工程化的變體。它可以是堿性蛋白酶，例如絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草桿菌蛋白酶)。金屬蛋白酶可以例如是來(lái)自例如家族M4的嗜熱菌蛋白酶或其他金屬蛋白酶，例如來(lái)自M5、M7或M8家族的那些。術(shù)語(yǔ)“枯草桿菌酶”是指根據(jù)斯艾森(Siezen)等人，蛋白質(zhì)工程學(xué)(ProteinEngng.)4(1991)719-737和斯艾森等人，蛋白質(zhì)科學(xué)(ProteinScience)6(1997)501-523的絲氨酸蛋白酶亞組。絲氨酸蛋白酶是特征為在活性位點(diǎn)具有與底物形成共價(jià)加合物的絲氨酸的蛋白酶的一個(gè)亞組?？莶輻U菌酶可以劃分為6個(gè)亞部，即，枯草桿菌蛋白酶家族、嗜熱蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。枯草桿菌酶的實(shí)例是來(lái)源于芽孢桿菌屬的那些，例如描述于US7262042和WO2009/021867中的遲緩芽孢桿菌、嗜堿芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和吉氏芽孢桿菌；和描述于WO89/06279中的枯草桿菌蛋白酶遲緩(lentus)、枯草桿菌蛋白酶諾和(Novo)、枯草桿菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、地衣芽孢桿菌、枯草桿菌蛋白酶BPN’、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168以及描述于(WO93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO92/175177、WO01/016285、WO02/026024以及WO02/016547中的那些。胰蛋白酶樣蛋白酶的實(shí)例是胰蛋白酶(例如豬或牛來(lái)源的)和鐮孢菌蛋白酶(描述于WO89/06270、WO94/25583和WO05/040372中)，以及衍生自纖維單胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO05/052161和WO05/052146中)。進(jìn)一步優(yōu)選的蛋白酶是來(lái)自遲緩芽孢桿菌DSM5483的堿性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其變體(在WO92/21760、WO95/23221、EP1921147以及EP1921148中描述的)。金屬蛋白酶的實(shí)例是如描述于WO07/044993(杰能科國(guó)際公司(GenencorInt.))中的中性金屬蛋白酶，例如來(lái)源于解淀粉芽孢桿菌的那些。有用的蛋白酶的實(shí)例是于以下各項(xiàng)中的變體：WO92/19729、WO96/034946、WO98/20115、WO98/20116、WO99/011768、WO01/44452、WO03/006602、WO04/03186、WO04/041979、WO07/006305、WO11/036263、WO11/036264，尤其是在以下位置的一個(gè)或多個(gè)中具有取代的變體：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’編號(hào)。更優(yōu)選地，這些枯草桿菌酶變體可以包含以下突變：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,RS103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’編號(hào))。適合的可商購(gòu)蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：DuralaseTm、DurazymTm、Ultra、Ultra、Ultra、和(諾維信公司)，以下列商品名出售的那些：PurafectPreferenzTm、PurafectPurafectPurafectEffectenzTm、以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTm(吉斯特布羅卡德斯公司(Gist-BrocasesN.V.))、BLAP(序列示于US5352604的圖29中)及其變體(漢高股份(HenkelAG))以及來(lái)自花王株式會(huì)社(Kao)的KAP(嗜堿芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶)。適合的脂肪酶和角質(zhì)酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或蛋白工程化的突變體酶。實(shí)例包括來(lái)自嗜熱真菌屬的脂肪酶，例如如描述于EP258068和EP305216中的來(lái)自疏綿狀嗜熱絲孢菌(早先命名為疏棉狀腐質(zhì)霉)；來(lái)自腐質(zhì)霉屬的角質(zhì)酶，例如特異腐質(zhì)霉(WO96/13580)；來(lái)自假單胞菌屬的菌株的脂肪酶(這些中的一些現(xiàn)在改名為伯克霍爾氏菌屬)，例如產(chǎn)堿假單胞菌或類產(chǎn)堿假單胞菌(EP218272)、洋蔥假單胞菌(EP331376)、假單胞菌屬菌株SD705(WO95/06720&WO96/27002)、威斯康星假單胞菌(P.wisconsinensis)(WO96/12012)；GDSL-型鏈霉菌屬脂肪酶(WO10/065455)；來(lái)自稻瘟病菌的角質(zhì)酶(WO10/107560)；來(lái)自門(mén)多薩假單胞菌的角質(zhì)酶(US5,389,536)；來(lái)自褐色嗜熱裂孢菌(Thermobifidafusca)的脂肪酶(WO11/084412，WO13/033318，WO2013/096653)；嗜熱脂肪土芽孢桿菌脂肪酶(WO11/084417)；來(lái)自枯草芽孢桿菌的脂肪酶(WO11/084599)；以及來(lái)自灰色鏈霉菌(WO11/150157)和始旋鏈霉菌(S.pristinaespiralis)(WO12/137147)的脂肪酶。其他實(shí)例是脂肪酶變體，例如描述于EP407225、WO92/05249、WO94/01541、WO94/25578、WO95/14783、WO95/30744、WO95/35381、WO95/22615、WO96/00292、WO97/04079、WO97/07202、WO00/34450、WO00/60063、WO01/92502、WO07/87508以及WO09/109500中的那些。優(yōu)選的商業(yè)化脂肪酶產(chǎn)品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(諾維信公司)，Lumafast(最初來(lái)自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(最初來(lái)自吉斯特-博克德斯公司(Gist-Brocades))。再其他實(shí)例是有時(shí)稱為?；D(zhuǎn)移酶或過(guò)水解酶的脂肪酶，例如與南極假絲酵母(Candidaantarctica)脂肪酶A具有同源性的?；D(zhuǎn)移酶(WO10/111143)、來(lái)自恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)的?；D(zhuǎn)移酶(WO05/56782)、來(lái)自CE7家族的過(guò)水解酶(WO09/67279)以及恥垢分枝桿菌過(guò)水解酶的變體(特別是來(lái)自亨斯邁紡織品染化有限公司(HuntsmanTextileEffectsPteLtd)的商業(yè)產(chǎn)品GentlePowerBleach中所用的S54V變體)(WO10/100028)。在一方面，其他優(yōu)選的酶包括微生物衍生的展現(xiàn)出內(nèi)切-β-1,4-葡聚糖酶活性的內(nèi)切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)，包括對(duì)于芽孢桿菌屬的成員而言內(nèi)源的細(xì)菌多肽，具有與US7141403中的氨基酸序列SEQIDNO:2至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％一致性的序列，以及其混合物。適合的內(nèi)切葡聚糖酶是在商標(biāo)名和(諾維信公司)下售賣(mài)的。其他優(yōu)選的酶包括在商標(biāo)名下售賣(mài)的果膠裂解酶，以及在商標(biāo)名下售賣(mài)的甘露聚糖酶(諾維信公司)，以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))。該一種或多種洗滌劑酶可以通過(guò)添加包含一種或多種酶的單獨(dú)的添加劑，或通過(guò)添加包括所有這些酶的組合添加劑而被包括于洗滌劑組合物中。本發(fā)明的洗滌劑添加劑，即，獨(dú)立添加劑或組合添加劑，可以被配制為，例如顆粒、液體、漿料等。優(yōu)選的洗滌劑添加劑配制品是顆粒，尤其是非塵顆粒；液體，尤其是穩(wěn)定化的液體；或漿料。非塵顆?？梢岳缛鏤S4106991和US4661452中所披露來(lái)制造，并且可以任選地通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)涂布。蠟狀包衣材料的實(shí)例是平均分子量為1000至20000的聚(環(huán)氧乙烷)產(chǎn)品(聚乙二醇，PEG)；具有16-50個(gè)環(huán)氧乙烷單位的乙氧基化壬基酚；具有15至80個(gè)環(huán)氧乙烷單位的乙氧基化脂肪族醇，其中醇含有12至20個(gè)碳原子；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的單-和雙-和三甘油酯。適用于通過(guò)流化床技術(shù)應(yīng)用的成膜包衣材料的實(shí)例在GB1483591中給出。液體酶制劑可以例如通過(guò)根據(jù)已確立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而穩(wěn)定化。受保護(hù)的酶可以根據(jù)EP238216中披露的方法來(lái)制備。染料轉(zhuǎn)移抑制劑-本發(fā)明的組合物還可以包括一種或多種染料轉(zhuǎn)移抑制劑。合適的聚合物染料轉(zhuǎn)移抑制劑包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮與N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。當(dāng)存在于組合物中時(shí)，染料轉(zhuǎn)移抑制劑可以按從0.0001wt％至10wt％、從0.01wt％至5wt％或從0.1wt％至3wt％的水平存在。增亮劑-本發(fā)明的組合物還可包含另外的組分，這些組分可以給正清潔的物品著色，例如熒光增亮劑。該組合物可以包括C.I.熒光增亮劑260，處于具有以下結(jié)構(gòu)的α-晶體形式：在一方面，增亮劑是冷水可溶增亮劑，例如處于α-晶體形式的C.I.熒光增亮劑260。在一方面，增亮劑主要處于α-晶體形式，這意味著典型地至少50wt％、至少75wt％、至少90wt％、至少99wt％、或甚至基本上全部的C.I.熒光增亮劑260是處于α-晶體形式。增亮劑典型地是處于微?；⒘Ｐ问?，具有從3至30微米、從3微米至20微米、或從3至10微米的加權(quán)平均初級(jí)粒度。該組合物可以包括處于β-晶體形式的C.I.熒光增亮劑260，并且(i)處于α-晶體形式的C.I.熒光增亮劑260與(ii)處于β-晶體形式的C.I.熒光增亮劑260的重量比可以是至少0.1或至少0.6。BE680847涉及用于制得處于α-晶體形式的C.I.熒光增亮劑260的方法?？梢杂糜诒景l(fā)明中的商業(yè)光學(xué)增亮劑可以劃分為多個(gè)亞組，這些亞組包括但不是必須限制于：二苯乙烯、吡唑啉、香豆素、羧酸、次甲基菁、二苯并噻吩-5,5-二氧化物、唑、5和6元環(huán)雜環(huán)的衍生物以及其他混雜劑。此類增亮劑的實(shí)例披露于“熒光增亮劑的生產(chǎn)和應(yīng)用”，M.佐赫勞德尼克(Zahradnik)，由約翰威利父子公司(JohnWiley&Sons)，紐約(1982)出版?？梢杂糜诒景l(fā)明組合物的光學(xué)增亮劑的具體非限制性實(shí)例是在US4790856和US3646015中鑒定的那些。另外適合的增亮劑具有以下結(jié)構(gòu)：適合的熒光增亮劑水平包括從0.01wt％、從0.05wt％、從0.1wt％或從0.2wt％的較低水平至0.5wt％或0.75wt％的較高水平。在一方面，增亮劑可以裝載在粘土上以形成顆粒。硅酸鹽-本發(fā)明的組合物還可以包含硅酸鹽，例如硅酸鈉或鉀。該組合物可以包含從0wt％至小于10wt％硅酸鹽，至9wt％、或至8wt％、或至7wt％、或至6wt％、或至5wt％、或至4wt％、或至3wt％、或甚至至2wt％，并且從高于0wt％、或從0.5wt％、或從1wt％起的硅酸鹽。適合的硅酸鹽是硅酸鈉。分散劑-本發(fā)明的組合物還可以包含分散劑。適合的水溶性有機(jī)材料包括均聚合或共聚合的酸或其鹽，其中聚羧酸包括至少兩個(gè)羧基，這兩個(gè)羧基被不超過(guò)兩個(gè)碳原子彼此分開(kāi)。酶穩(wěn)定劑-用于在組合物中使用的酶可以通過(guò)各種技術(shù)來(lái)穩(wěn)定。在此使用的酶可以通過(guò)鈣和/或鎂離子的水溶性來(lái)源的存在來(lái)穩(wěn)定。常規(guī)的穩(wěn)定劑的實(shí)例是，例如，丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳香族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，例如4-甲酰苯基硼酸，并且可以如在例如WO92/19709和WO92/19708中所述配制該組合物。在包含蛋白酶的水性組合物的情況下，可以添加可逆蛋白酶抑制劑，例如包括硼酸鹽、4-甲?；交鹚帷⒈交鹚峒捌溲苌锏呐鸹衔?，或例如甲酸鈣、甲酸鈉和1,2-丙二醇的化合物，以進(jìn)一步改進(jìn)穩(wěn)定性。溶劑-適合的溶劑包括水和其他溶劑，例如親脂性流體。適合的親脂性流體的實(shí)例包括硅氧烷、其他硅酮、烴、乙二醇醚、甘油衍生物(例如甘油醚)、全氟化的胺、全氟化的和氫氟醚溶劑、低揮發(fā)性非氟化的有機(jī)溶劑、二醇溶劑、其他環(huán)境友好型溶劑及其混合物。結(jié)構(gòu)化劑/增稠劑-結(jié)構(gòu)化液體可以從內(nèi)部結(jié)構(gòu)化，由此結(jié)構(gòu)由初級(jí)成分(例如，表面活性劑材料)形成，和/或通過(guò)使用次級(jí)成分(例如，聚合物、粘土和/或硅酸鹽材料)提供三維基質(zhì)結(jié)構(gòu)而從外部結(jié)構(gòu)化。該組合物可以包括從0.01wt％至5wt％、或從0.1wt％至2.0wt％的結(jié)構(gòu)化劑。該結(jié)構(gòu)化劑典型地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：甘油二酯和甘油三酯、硬脂酸乙二醇雙酯、微晶纖維素、基于纖維素的材料、微纖維纖維素、疏水改性的堿性可膨脹的乳液(例如PolygelW30(3VSigma))、生物聚合物，黃原膠、吉蘭糖膠、及其混合物。適合的結(jié)構(gòu)化劑包括氫化的蓖麻油及其非乙氧基化的衍生物。適合的結(jié)構(gòu)化劑披露于US6855680中。此類結(jié)構(gòu)化劑具有螺紋樣結(jié)構(gòu)化系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有一系列縱橫比。其他適合的結(jié)構(gòu)化劑和用于制得它們的方法描述于WO10/034736中。調(diào)節(jié)劑-本發(fā)明的組合物可以包括高熔點(diǎn)脂肪化合物。在此有用的高熔點(diǎn)脂肪化合物具有25℃或更高的熔點(diǎn)，并且選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：脂肪醇、脂肪酸、脂肪醇衍生物、脂肪酸衍生物、及其混合物。此類具有低熔點(diǎn)的化合物并非旨在被包括在此部分中。高熔點(diǎn)化合物的非限制性實(shí)例發(fā)現(xiàn)于國(guó)際化妝品成分詞典，第五版，1993，以及CTFA化妝品成分手冊(cè)，第二版，1992中。鑒于提供改進(jìn)的調(diào)節(jié)益處(如在施用至濕發(fā)的過(guò)程中的濕滑感、柔和以及對(duì)干發(fā)的保濕感)，高熔點(diǎn)脂肪化合物被以從0.1wt％至40wt％、從1wt％至30wt％、從1.5wt％至16wt％、從1.5wt％至8wt％的水平包括在該組合物中。本發(fā)明的組合物可以包含陽(yáng)離子聚合物。在組合物中陽(yáng)離子聚合物的濃度典型地范圍為從0.05wt％至3wt％、從0.075wt％至2.0wt％、或從0.1wt％至1.0wt％。在預(yù)期使用該組合物的pH下，適合的陽(yáng)離子聚合物將具有至少0.5meq/gm、至少0.9meq/gm、至少1.2meq/gm、至少1.5meq/gm、或小于7meq/gm、以及小于5meq/gm的陽(yáng)離子電荷密度，該pH的范圍將大體上是從pH3至pH9、或在pH4與pH8之間。在此，聚合物的“陽(yáng)離子電荷密度”是指聚合物上的正電荷數(shù)目與聚合物的分子量之比。此類適合的陽(yáng)離子聚合物的平均分子量將大體上是在10,000與1000萬(wàn)之間、在50,000與500萬(wàn)之間、或在100,000與300萬(wàn)之間。用于在本發(fā)明的組合物中使用的適合的陽(yáng)離子聚合物包含陽(yáng)離子含氮部分，例如季銨或陽(yáng)離子質(zhì)子化的氨基部分?？梢詫⑷魏侮庪x子反離子與陽(yáng)離子聚合物關(guān)聯(lián)使用，只要聚合物保持溶解于水中、組合物中、或組合物的凝聚相中，并且只要反離子在物理和化學(xué)上與組合物的主要成分相容或以另外的方式不會(huì)不適當(dāng)?shù)負(fù)p害組合物性能、穩(wěn)定性或美感。此類反離子的非限制性實(shí)例包括鹵化物(例如，氯化物、氟化物、溴化物、碘化物)、硫酸鹽和甲基硫酸鹽。此類聚合物的非限制性實(shí)例描述于CTFA化妝品成分詞典，第三版，埃斯特林(Estrin)、克羅斯利(Crosley)、和海恩斯(Haynes)編寫(xiě)(化妝品、化妝用具以及香水聯(lián)合公司(TheCosmetic,Toiletry,andFragranceAssociation,Inc.)，華盛頓(1982))。用于在該組合物中使用的其他適合的陽(yáng)離子聚合物包括多糖聚合物，陽(yáng)離子瓜爾豆膠衍生物，含四價(jià)氮的纖維素醚，合成聚合物，醚化纖維素、瓜爾豆膠和淀粉的共聚物。當(dāng)使用的時(shí)候，在此的陽(yáng)離子聚合物可溶解于組合物中或可溶解于組合物中的復(fù)合凝聚相中，該凝聚相是由上文所述的陽(yáng)離子聚合物和陰離子、兩性和/或兼性離子表面活性劑組分形成。陽(yáng)離子聚合物的復(fù)合凝聚物還可以與組合物中其他帶電荷的材料形成。適合的陽(yáng)離子聚合物描述于US3962418；US3958581；和US2007/0207109中。本發(fā)明的組合物可以包括作為調(diào)節(jié)劑的非離子聚合物。在此具有大于1000的分子量的聚二醇(polyalkyleneglycol)是有用的。具有以下通式的那些是有用的：其中R95選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：H、甲基及其混合物。調(diào)節(jié)劑，并且特別是硅酮，可以被包括在組合物中。用于本發(fā)明的組合物中的調(diào)節(jié)劑典型地包括形成乳化液體顆粒的水不溶性、水分散性、非揮發(fā)性的液體。用于在該組合物中使用的適合的調(diào)節(jié)劑是通常表征為以下項(xiàng)的那些調(diào)節(jié)劑：硅酮(例如，硅酮油、陽(yáng)離子硅酮、硅酮膠、高折射性硅酮、以及硅酮樹(shù)脂)、有機(jī)調(diào)節(jié)油(例如，烴油、聚烯烴、以及脂肪酯)或其組合，或者以另外方式在于此的水性表面活性劑基質(zhì)中形成液體分散顆粒的那些調(diào)節(jié)劑。此類調(diào)節(jié)劑應(yīng)該在物理和化學(xué)上是與組合物的主要組分相容的，并且不應(yīng)該以另外的方式不適當(dāng)?shù)負(fù)p害組合物穩(wěn)定性、美感或性能。在組合物中調(diào)節(jié)劑的濃度應(yīng)該足以提供所希望的調(diào)節(jié)益處。這種濃度可以隨著調(diào)節(jié)劑、所希望的調(diào)節(jié)性能、調(diào)節(jié)劑顆粒的平均大小、其他組分的類型和濃度以及其他類似因素而變化。硅酮調(diào)節(jié)劑的濃度范圍典型地是從0.01wt％至10wt％。適合的硅酮調(diào)節(jié)劑以及對(duì)于硅酮的任選的懸浮劑的非限制性實(shí)例描述于美國(guó)再公告專利號(hào)34,584；US5104646；US5106609；US4152416；US2826551；US3964500；US4364837；US6607717；US6482969；US5807956；US5981681；US6207782；US7465439；US7041767；US7217777；US2007/0286837A1；US2005/0048549A1；US2007/0041929A1；GB849433；DE10036533中，將所有文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合于此；硅酮的化學(xué)與技術(shù)，紐約：學(xué)術(shù)出版社(1968)；通用電氣硅酮橡膠產(chǎn)品數(shù)據(jù)列表SE30，SE33，SE54和SE76；硅酮化合物，彼特拉克系統(tǒng)公司(PetrarchSystems，Inc.)(1984)；以及聚合物科學(xué)與工程化百科全書(shū)，15卷，第2版，204-308頁(yè)，約翰威利父子公司(JohnWiley&Sons，Inc.)(1989)中。本發(fā)明的組合物還可以包括從0.05wt％至3wt％的至少一種有機(jī)調(diào)節(jié)油作為調(diào)節(jié)劑，單獨(dú)或與其他調(diào)節(jié)劑例如硅酮(在此所述的)組合。適合的調(diào)節(jié)油包括烴油、聚烯烴、以及脂肪酯。還適合用于在此的組合物中的是在US5674478和US5750122或在US4529586；US4507280；US4663158；US4197865；US4217914；US4381919；以及US4422853中所描述的調(diào)節(jié)劑。衛(wèi)生學(xué)與惡味-本發(fā)明的組合物還可以包括蓖麻酸鋅、百里酚、季銨鹽(例如)、聚乙烯亞胺(例如來(lái)自巴斯夫的)及其鋅復(fù)合物、銀和銀化合物(尤其是被設(shè)計(jì)為緩慢釋放Ag+或納米銀分散體的那些)中的一種或多種。益生素-這些組合物可以包括益生素，如描述于WO09/043709中的那些。增泡劑-如果高的起泡是希望的，增泡劑(例如C10-C16烷醇酰胺或C10-C14烷基硫酸酯)可以典型地以1wt％至10wt％的水平摻入組合物中。C10-C14單乙醇和二乙醇酰胺闡述了此類增泡劑的典型的類別。此類增泡劑與高的起泡佐劑表面活性劑(例如，以上提及的氧化胺、甜菜堿、以及磺基甜菜堿(sultaine))一起使用也是有利的。如果希望的話，水溶性鎂和/或鈣鹽(例如MgCl2、MgSO4、CaCl2、CaSO4等)可以典型地以0.1wt％至2wt％的水平添加，以提供另外的泡沫并且以增強(qiáng)油脂去除性能。泡沫抑制劑-用于減少或抑制泡沫形成的化合物可以摻入本發(fā)明的組合物中。泡沫抑制在如在US4489455和US4489574中描述的所謂“高濃度清潔工藝”中以及在前載式(front-loading-style)洗滌機(jī)中可能是特別重要的。多種多樣的材料可以用作泡沫抑制劑，并且泡沫抑制劑對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是熟知的。參見(jiàn)，例如柯克·奧思默化工百科全書(shū)(KirkOthmerEncyclopediaofChemicalTechnology)，第三版，第7卷，第430-447頁(yè)(約翰威利父子公司，1979)。泡沫抑制劑的實(shí)例包括單羧基脂肪酸以及其中的可溶鹽，高分子量烴例如石蠟，脂肪酸酯(例如，脂肪酸甘油三酯)，單價(jià)醇的脂肪酸酯，脂肪族C18-C40酮(例如硬脂酮)，N-烷基化的氨基三嗪，優(yōu)選具有約100℃之下的熔點(diǎn)的蠟烴，硅酮泡沫抑制劑，以及二級(jí)醇。泡沫抑制劑描述于US2954347；US4265779；US4265779；US3455839；US3933672；US4652392；US4978471；US4983316；US5288431；US4639489；US4749740；US4798679；US4075118；EP89307851.9；EP150872；以及DOS2,124,526中。對(duì)于有待用于自動(dòng)洗衣機(jī)中的任何洗滌劑組合物，泡沫不應(yīng)該形成到它們溢出洗滌機(jī)的程度。當(dāng)使用時(shí)，泡沫抑制劑優(yōu)選是以“泡沫抑制量”存在的?！芭菽种屏俊币庵附M合物的配制者可以選擇這種泡沫控制劑的量，這個(gè)量將充分地控制泡沫以導(dǎo)致用于自動(dòng)洗衣機(jī)中的低起泡衣物洗滌劑。在此的組合物將通常包含從0wt％至10wt％的泡沫抑制劑。當(dāng)用作泡沫抑制劑時(shí)，單羧基脂肪酸以及其中的鹽將典型地以高至5wt％的量存在。優(yōu)選地，使用從0.5wt％至3wt％的脂肪單羧酸酯泡沫抑制劑。典型地以高至2.0wt％的量使用硅酮泡沫抑制劑，雖然可以使用更高的量。通常以從0.1wt％至2wt％的范圍的量使用單硬脂酰磷酸酯泡沫抑制劑。典型地以從0.01wt％至5.0wt％的范圍的量使用烴泡沫抑制劑，雖然可以使用更高的水平。典型地以0.2wt％至3wt％使用醇泡沫抑制劑。在此的組合物可以在寬的pH范圍內(nèi)具有清潔活性。在某些實(shí)施例中，這些組合物具有從pH4至pH11.5的清潔活性。在其他實(shí)施例中，這些組合物從pH6至pH11、從pH7至pH11、從pH8至pH11、從pH9至pH11、或從pH10至pH11,5具有活性。在此的組合物可以在寬范圍的溫度(例如從10℃或更低至90℃)內(nèi)具有清潔活性。優(yōu)選地，該溫度將低于50℃或40℃或甚至30℃。在某些實(shí)施例中，對(duì)于這些組合物來(lái)說(shuō)的最適溫度范圍是從10℃至20℃、從15℃至25℃、從15℃至30℃、從20℃至30℃、從25℃至35℃、從30℃至40℃、從35℃至45℃、或從40℃至50℃。組合物的形式在此描述的組合物被有利地用在例如洗衣應(yīng)用、硬表面清潔、餐具洗滌應(yīng)用，連同化妝品應(yīng)用(如義齒、牙齒、頭發(fā)和皮膚)中。本發(fā)明的組合物具體是固體或液體清潔和/或處理組合物。在一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其中該組合物的形式選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：一種常規(guī)的，壓縮的或濃縮的液體；一種凝膠；一種膏；一種皂?xiàng)l；一種常規(guī)的或壓縮的粉末；一種粒狀固體；一種具有兩個(gè)或更多個(gè)層(相同或不同相)的均勻或多層片劑；一種具有一個(gè)或多個(gè)室的袋；一種單個(gè)或多個(gè)室單位劑型；或其任何組合。該組合物的形式可以將多個(gè)室(例如像可水溶的袋)中或片劑的不同層中的組分物理地彼此分離。由此可以避免組分之間的負(fù)面的存儲(chǔ)相互作用。在洗滌溶液中，每個(gè)室的不同溶解曲線還可以引起選擇的組分的延遲溶解。袋可以被配置為單個(gè)或多個(gè)的室。它可以具有適合容持該組合物的任何形式、形狀和材料，例如在與水接觸之前，不允許該組合物從袋中釋放出來(lái)。袋由封裝內(nèi)體積的水溶性膜制成?？梢詫⑺鰞?nèi)體積分為具有袋的室。優(yōu)選的膜是形成膜或片的聚合材料，優(yōu)選是聚合物。優(yōu)選的聚合物、共聚物或其衍生物選自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素、糊精鈉、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、麥芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最優(yōu)選地是聚乙烯醇共聚物以及羥丙基甲基纖維素(HPMC)。優(yōu)選地，在膜中的聚合物(例如PVA)的水平是至少約60％。優(yōu)選的平均分子量將典型地是約20,000至約150,000。膜還可以是共混組合物，該共混組合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在貿(mào)易參考M8630下，如由美國(guó)印第安納州的MonoSolLLC公司銷(xiāo)售)加增塑劑，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。這些袋可以包括固體衣物清潔組合物或部分組分和/或液體清潔組合物或由水溶性膜分開(kāi)的部分組分。用于液體組分的室在組成上可以與包括固體的室不同(US2009/0011970A1)。水溶性膜-本發(fā)明的組合物還可以被包封于水溶性膜之內(nèi)。優(yōu)選地，優(yōu)選的膜材料是聚合物材料。膜材料可以是例如通過(guò)聚合物材料的鑄造、吹塑、擠出或吹脹擠塑來(lái)獲得，如本領(lǐng)域中已知的。適合用于用作袋材料的優(yōu)選的聚合物、共聚物或其衍生物是選自：聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚環(huán)氧烷、丙烯酰胺、丙烯酸、纖維素、纖維素醚、纖維素酯、纖維素酰胺、聚乙烯乙酸酯、聚羧酸和鹽、聚氨基酸或肽、聚酰胺、聚丙烯酰胺、馬來(lái)酸/丙烯酸的共聚物、多糖(包括淀粉和明膠)、天然膠(例如黃原膠和卡拉膠(carragum))。更優(yōu)選的聚合物選自聚丙烯酸酯和水溶性丙烯酸脂共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、糊精、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、麥芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，并且最優(yōu)選地選自聚乙烯醇、聚乙烯醇共聚物和羥丙基甲基纖維素(HPMC)、及其組合。優(yōu)選地，聚合物在袋材料(例如，PVA聚合物)中的水平是至少60wt％。聚合物可以具有任何重均分子量，優(yōu)選是從約1.000至1.000.000、從約10.000至300.000、從約20.000至150.000。聚合物的混合物還可以用作袋材料。天然地，不同的膜材料和/或不同厚度的膜可以用于制作本發(fā)明的室。在選擇不同的膜中的益處是所得的室可以展現(xiàn)不同溶解度或釋放特征。優(yōu)選的膜材料是在MonoSol商標(biāo)名稱M8630、M8900、H8779下已知的PVA膜，以及描述于US6166117和US6787512中的那些，以及具有相應(yīng)溶解度和變形特征的PVA膜。在此的膜材料還可以包括一種或多種添加劑成分。例如，可以有益的是添加增塑劑，例如甘油、乙二醇、二乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。其他添加劑包括有待被遞送至洗滌用水的功能性洗滌劑添加劑，例如有機(jī)聚合物分散劑等。制造組合物的方法本發(fā)明的組合物可以被配制為任何適合的形式，并且可通過(guò)被配制者所選擇的任何方法來(lái)制備，這些方法的非限制性實(shí)例描述于申請(qǐng)人的實(shí)例中以及US4990280；US20030087791A1；US20030087790A1；US20050003983A1；US20040048764A1；US4762636；US6291412；US20050227891A1；EP1070115A2；US5879584；US5691297；US5574005；US5569645；US5565422；US5516448；US5489392；US5486303中，將所有文獻(xiàn)通過(guò)應(yīng)用結(jié)合于此。本發(fā)明的組合物或根據(jù)本發(fā)明制備的組合物包括清潔和/或處理組合物，包括但不限于用于在織物和家居護(hù)理領(lǐng)域中處理織物、硬質(zhì)表面和任何其他表面的組合物，包括：空氣護(hù)理(包括空氣清新劑和氣味遞送系統(tǒng))、汽車(chē)護(hù)理、洗碗、織物調(diào)節(jié)(包括軟化和/或清新)、洗衣去垢、洗衣和漂洗添加劑和/或護(hù)理、硬質(zhì)表面清潔和/或處理(包括地板和馬桶清潔劑)、顆?；蚍勰┬问酵ㄓ眯突颉爸刎?fù)荷”洗滌劑，尤其是清潔洗滌劑；液體、膠或膏形式通用型洗滌劑，尤其是所謂的重負(fù)荷液體類型；液體精細(xì)-織物洗滌劑；手工洗碗劑或輕負(fù)荷洗碗劑，尤其是高起泡類型的那些；機(jī)器洗碗劑，包括用于供家庭和公共機(jī)構(gòu)使用的不同的片劑、顆粒、液體和漂洗助劑類型：汽車(chē)或地毯香波，浴室清潔劑(包括馬桶清潔劑)；以及清潔輔助劑，例如漂白添加劑以及“污物-粘住(stain-stick)”或預(yù)處理類型、裝載基質(zhì)的組合物(例如添加干燥劑的片層)。優(yōu)選的是用于清潔和/或處理紡織品和/或硬表面(最優(yōu)選為紡織品)的組合物和方法。組合物優(yōu)選地是在洗滌過(guò)程的預(yù)處理步驟中或主要洗滌步驟中(最優(yōu)選用于紡織品洗滌步驟)使用的組合物。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“織物和/或硬質(zhì)表面清潔和/或處理組合物”是清潔和處理組合物的子集，除非另外指出，該子集包括顆?；蚍勰┬问酵ㄓ眯突颉爸刎?fù)荷”洗滌劑，尤其是清潔洗滌劑；液體、膠或膏形式通用型洗滌劑，尤其是所謂的重負(fù)荷液體類型；液體精細(xì)織物洗滌劑；手工洗碗劑或輕負(fù)荷洗碗劑，尤其是高起泡類型的那些；機(jī)器洗碗劑，包括用于供家庭和公共機(jī)構(gòu)使用的不同的片劑、顆粒、液體和漂洗助劑類型；液體清潔和消毒劑，汽車(chē)或地毯香波，浴室清潔劑(包括馬桶清潔劑)；織物調(diào)節(jié)組合物(包括軟化和/或清新)，可以處于液體、固體和/或干燥劑片層形式；連同清潔輔助劑，例如漂白添加劑和“去污棒”或預(yù)處理類型、裝載基質(zhì)的組合物(例如添加干燥劑的片層)。所有的可應(yīng)用的此類組合物可以是處于標(biāo)準(zhǔn)的、濃縮的或甚至高度濃縮的形式，甚至到此類組合物可以在某些方面呈非水性的程度。使用方法本發(fā)明包括在織物和/或家居護(hù)理領(lǐng)域中用于清潔任何表面(包括處理紡織品或硬表面或其他表面)的方法。在本發(fā)明的一個(gè)方面，該方法包括在洗滌過(guò)程的預(yù)處理步驟或主要洗滌步驟(最優(yōu)選用于在紡織品洗滌步驟中使用或可替代地用于在餐具洗滌(包括手動(dòng)以及自動(dòng)/機(jī)械餐具洗滌兩者)中使用)中接觸有待處理的表面的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將脂肪酶變體和其他組分順序地添加到用于清潔和/或處理表面的方法中。可替代地，同時(shí)地添加脂肪酶變體和其他組分。如在此使用的，洗滌包括但不限于擦洗和機(jī)械攪拌。洗滌可以用泡沫組合物進(jìn)行(如在WO08/101958中所述)，和/或通過(guò)施加交變壓力(壓力/真空)作為擦洗和機(jī)械攪拌的附加方法或替代方式來(lái)進(jìn)行。對(duì)此類表面或織物進(jìn)行干燥可以通過(guò)在家庭或工業(yè)環(huán)境中采用的通用手段的任一種來(lái)完成。本發(fā)明的清潔組合物理想地適用于在洗衣以及餐具洗滌應(yīng)用中使用。因此，本發(fā)明包括用于清潔物體(包括但不限于織物、餐具、刀具以及廚具)的方法。該方法包括使有待清潔的物體與所述清潔組合物接觸的步驟，該清潔組合物包括申請(qǐng)人的清潔組合物、清潔添加劑或其混合物中的至少一個(gè)實(shí)施例。織物可以包括能夠在常規(guī)消費(fèi)者或公共機(jī)構(gòu)使用條件下被洗滌的大多數(shù)任何織物。該溶液可以具有從8至10.5的pH。可以在溶液中以從500ppm至15.000ppm的濃度使用組合物。水溫范圍典型地是從5℃至90℃。水與織物之比典型地是從1:1至30:1。在一方面，本發(fā)明涉及使用多肽用于生產(chǎn)一種組合物的方法，該多肽與SEQIDNO:2具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％一致性。在一方面，本發(fā)明涉及該組合物用于清潔物體的用途。在一方面，本發(fā)明涉及生產(chǎn)組合物的方法，該方法包括添加與SEQIDNO:2具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％一致性的多肽，和表面活性劑。在一方面，本發(fā)明涉及用于清潔表面的方法，該方法包括使待清潔的表面上存在的脂質(zhì)污漬與該清潔組合物接觸。在一方面，本發(fā)明涉及用于水解存在于表面上的污漬和/或污漬中的脂質(zhì)的方法，該方法包括使污漬和/或污漬與清潔組合物接觸。植物本發(fā)明還涉及植物，例如轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或植物細(xì)胞，這些植物包括本發(fā)明的多核苷酸，以便以可回收的量表達(dá)和產(chǎn)生該多肽。該多肽可以從植物或植物部分回收?？商娲?，可以按原樣將包含該多肽的植物或植物部分用于改善食品或飼料的質(zhì)量，例如，改善營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、適口性、以及流變性質(zhì)，或用以破壞抗?fàn)I養(yǎng)因子。轉(zhuǎn)基因植物可以是雙子葉的(雙子葉植物)或單子葉的(單子葉植物)。單子葉植物的實(shí)例是草例如草地早熟禾(藍(lán)草，早熟禾屬)，飼草例如羊茅屬(Festuca)、黑麥草屬(Lolium)，溫帶草例如剪股穎屬(Agrostis)和谷物例如小麥、燕麥、黑麥、大麥、水稻、高粱、和玉蜀黍(玉米)。雙子葉植物的實(shí)例是煙草、豆類(如羽扇豆(lupins)、馬鈴薯、糖甜菜(sugarbeet)、豌豆、豆(bean)和大豆(soybean))、以及十字花科植物(十字花科(familyBrassicaceae))(如花椰菜、油菜籽、以及緊密相關(guān)的模式生物擬南芥)。植物部分的實(shí)例是莖、愈傷組織、葉、根、果實(shí)、種子、以及塊莖、以及包括這些部分的獨(dú)立組織，例如，表皮、葉肉、薄壁組織(parenchyme)、維管組織、分生組織。特定植物細(xì)胞區(qū)室，如葉綠體、質(zhì)外體(apoplast)、線粒體、液泡、過(guò)氧化物酶體以及細(xì)胞質(zhì)也被認(rèn)為是植物部分。此外，任何植物細(xì)胞，無(wú)論是何種組織來(lái)源，都被認(rèn)為是植物部分。同樣地，植物部分，如分離以有助于本發(fā)明的利用的特定組織和細(xì)胞也被認(rèn)為是植物部分，例如胚、胚乳、糊粉和種皮。同樣包括于本發(fā)明范圍內(nèi)的是此類植物、植物部分以及植物細(xì)胞的子代。表達(dá)多肽的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法構(gòu)建。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)如下方法構(gòu)建該植物或植物細(xì)胞：將編碼多肽的一個(gè)或多個(gè)表達(dá)構(gòu)建體并入到植物宿主基因組或葉綠體基因組中，并且使所得的修飾植物或植物細(xì)胞繁殖為轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生本發(fā)明的多肽的方法，包括：(a)在有助于產(chǎn)生該多肽的條件下培養(yǎng)包括編碼該多肽的多核苷酸的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞；并且(b)回收該多肽。通過(guò)以下實(shí)例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但不應(yīng)將其理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。實(shí)例培養(yǎng)基和溶液除非另外指明，用作緩沖液和底物的化學(xué)品至少是試劑等級(jí)的商品?？缮藤?gòu)的酶LipolaseTM和LipexTM獲自諾維信公司。LipolaseTM包括來(lái)自疏棉狀嗜熱絲孢菌的、在米曲霉中表達(dá)的野生型三酰基甘油脂肪酶。LipexTM包括衍生自野生型疏棉狀嗜熱絲孢菌三酰基甘油脂肪酶的、具有突變T231R和N233R的并且在米曲霉中表達(dá)的三?；视椭久浮＞晔褂觅?gòu)自天根(TIANGEN)(天根生物科技有限公司(TIANGENBiotechCo.Ltd.)，北京，中國(guó))的大腸桿菌Top-10菌株來(lái)繁殖表達(dá)載體。使用米曲霉MT3568菌株用于編碼多肽的基因的異源表達(dá)，該多肽與具有脂肪酶活性的多肽具有同源性。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破壞的基因衍生物(WO02/40694)，其中通過(guò)用pyrG基因破壞米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因恢復(fù)pyrG營(yíng)養(yǎng)缺陷型。培養(yǎng)基YPM培養(yǎng)基由10g的酵母提取物、20g的細(xì)菌用蛋白胨、20g的麥芽糖、以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。LB板是由10g的細(xì)菌用胰蛋白胨(Bacto-Tryptone)、5g的酵母提取物、10g的氯化鈉、15g的細(xì)菌用瓊脂及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。LB培養(yǎng)基由10g的細(xì)菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物及10g的氯化鈉，以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。COVE蔗糖板由342g的蔗糖、20g的瓊脂粉、20ml的COVE鹽溶液及補(bǔ)足至1升的去離子水構(gòu)成。將培養(yǎng)基在15psi下通過(guò)高壓滅菌進(jìn)行滅菌15分鐘。將該培養(yǎng)基冷卻至60℃并且添加10mM的乙酰胺、15mM的CsCl、曲通X-100(50μl/500ml)。用于分離的COVE-2板/管：30g/L蔗糖、20ml/LCOVE鹽溶液、10mM乙酰胺、30g/L諾布爾(noble)瓊脂(Difco，目錄號(hào)214220)。COVE鹽溶液由26g的MgSO4·7H2O、26g的KCl、26g的KH2PO4、50ml的COVE痕量金屬溶液、以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。COVE痕量金屬溶液由0.04g的Na2B4O7·10H2O、0.4g的CuSO4·5H2O、1.2g的FeSO4·7H2O、0.7g的MnSO4·H2O、0.8g的Na2MoO4·2H2O、10g的ZnSO4·7H2O、以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。菌株使用購(gòu)自天根(TIANGEN)(天根生物科技有限公司(TIANGENBiotechCo.Ltd.)，北京，中國(guó))的大腸桿菌Top-10菌株來(lái)繁殖表達(dá)載體。將米曲霉(Aspergillusoryzae)MT3568菌株用于異源表達(dá)。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破壞的基因衍生物(WO02/40694)，其中通過(guò)用pyrG基因破壞米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因恢復(fù)pyrG營(yíng)養(yǎng)缺陷型。培養(yǎng)基YPM培養(yǎng)基由10g的酵母提取物、20g的細(xì)菌用蛋白胨、20g的麥芽糖、以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。LB板是由10g的細(xì)菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物、10g的氯化鈉、15g的細(xì)菌用瓊脂及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。LB培養(yǎng)基由1g的細(xì)菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物及10g的氯化鈉，以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。COVE蔗糖板由342g的蔗糖、20g的瓊脂粉、20ml的COVE鹽溶液及補(bǔ)足至1升的去離子水構(gòu)成。將培養(yǎng)基在15psi下通過(guò)高壓滅菌進(jìn)行滅菌15分鐘。將該培養(yǎng)基冷卻至60℃并且添加10mM乙酰胺、15mMCsCl、TritonX-100(50μl/500ml)。用于分離的COVE-2板/管：30g/L蔗糖、20mL/LCOVE鹽溶液、10mM乙酰胺、30g/L諾布爾(noble)瓊脂(Difco，目錄號(hào)214220)。COVE鹽溶液由26g的MgSO4·7H2O、26g的KCl、26g的KH2PO4、50ml的COVE痕量金屬溶液、以及補(bǔ)足至1000ml的去離子水構(gòu)成。COVE痕量金屬溶液由0.04g的Na2B4O7·10H2O、0.4g的CuSO4·5H2O、1.2g的FeSO4·7H2O、0.7g的MnSO4·H2O、0.8g的Na2MoO4·2H2O、10g的ZnSO4·7H2O及補(bǔ)足到1000ml的去離子水構(gòu)成。實(shí)例1：鑒別和克隆來(lái)自閃光須霉的脂肪酶基因通過(guò)QIAampDNA血液迷你試劑盒(凱杰公司，希爾登，德國(guó))分離來(lái)自閃光須霉(來(lái)自英國(guó)，分離的菌株CBS304.58，1958)的染色體DNA。將5ug的染色體DNA送至FASTERISSA，瑞士進(jìn)行測(cè)序。針對(duì)編碼脂肪分解酶的開(kāi)放閱讀框分析基因組序列，并且鑒定閃光須霉脂肪酶基因D234Z5(SEQIDNO:1)。從D234Z5的編碼DNA序列(CDS)，翻譯蛋白質(zhì)序列(SEQIDNO:2)?；赟EQIDNO:2的蛋白質(zhì)序列，根據(jù)米曲霉密碼子使用設(shè)計(jì)編碼這種閃光須霉脂肪酶的合成的CDS(SEQIDNO:3)，并且放入pUC57載體中。為了亞克隆到表達(dá)載體中，將該合成基因用表1中所示的引物進(jìn)行擴(kuò)增。*大寫(xiě)字母表示有待擴(kuò)增的基因的5'-和3'-區(qū)域，而小寫(xiě)字母在pCaHj505載體的插入位點(diǎn)處與載體序列同源。對(duì)于PCR擴(kuò)增，在PCR反應(yīng)中使用了20pmol的引物對(duì)(正向和反向中每一個(gè))，該P(yáng)CR反應(yīng)是由以下各項(xiàng)構(gòu)成：1μl的包括SEQIDNO:3的質(zhì)粒DNA、10uL的5XGC緩沖液、1.5uL的DMSO、2.5mM的dATP、dTTP、dGTP及dCTP中每一種，及0.6個(gè)單位的PhusionTM高保真度DNA聚合酶，最終體積為50μl。擴(kuò)增是使用帕爾帖熱循環(huán)儀(MJ研究有限公司，南舊金山，加利福尼亞州，美國(guó))進(jìn)行的，編程為：在98℃下變性1分鐘；10個(gè)循環(huán)，在98℃下變性15秒、在65℃下退火30秒(其中每個(gè)循環(huán)降低1℃)和在72℃下延長(zhǎng)90秒；以及另外的26個(gè)循環(huán)，各自在98℃下15秒、60℃下30秒和72℃下90秒；在72℃下最終延伸10分鐘。然后將加熱塊轉(zhuǎn)到4℃浸泡循環(huán)。使用TBE緩沖液通過(guò)0.7％瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物，其中在UV光下看到1.1kb的產(chǎn)物帶。然后，通過(guò)使用GFXPCRDNA和凝膠帶純化試劑盒(GelBandPurificationKit)(GE醫(yī)療集團(tuán)(GEHealthcare)，白金漢郡，英國(guó))從溶液中純化出這些PCR產(chǎn)物。用來(lái)自NEB(新英格蘭生物實(shí)驗(yàn)室(NewEnglandBiolabs)，法蘭克福，德國(guó))的BamHI和XhoI消化質(zhì)粒pCaHj505(WO2013029496)，并且使用TBE緩沖液通過(guò)0.7％瓊脂糖凝膠電泳分離產(chǎn)生的片段，并且使用GFXPCRDNA和凝膠帶純化試劑盒(GE醫(yī)療集團(tuán)(GEHealthcare)，白金漢郡，英國(guó))進(jìn)行純化。通過(guò)與IN-FUSIONTMCF脫水克隆試劑盒(克隆技術(shù)實(shí)驗(yàn)室有限公司(ClontechLaboratories,Inc.)，山景城，加利福尼亞州，美國(guó))連接，將60ng的這種純化的PCR產(chǎn)物克隆到200ng的之前消化的表達(dá)載體pCaHj505中。將2.5uL體積的稀釋的連接混合物用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。從每ml包含100μg氨比西林的LB瓊脂糖平板選擇4個(gè)菌落，并且通過(guò)菌落PCR用載體引物證實(shí)。通過(guò)DNA測(cè)序用載體引物(由中國(guó)北京的諾賽基因有限公司(SinoGenoMaxCompanyLimited)，北京，中國(guó))驗(yàn)證閃光須霉脂肪酶合成序列。選擇被指定為D235M8#1的包括SEQIDNO:3的質(zhì)粒用于在米曲霉宿主細(xì)胞MT3568中進(jìn)行原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化及其編碼的脂肪酶的異源表達(dá)。將重組大腸桿菌轉(zhuǎn)化細(xì)胞在3ml的、每ml補(bǔ)充以100μg的氨比西林的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜。使用凱杰公司(Qiagen)旋轉(zhuǎn)迷你制備型(SpinMiniprep)試劑盒(目錄27106)(凱杰股份有限公司(QIAGENGmbH)，希爾登，德國(guó))純化質(zhì)粒DNA。發(fā)現(xiàn)閃光須霉脂肪酶成熟蛋白由340個(gè)氨基酸(SEQIDNO:2的氨基酸1至340)組成。計(jì)算等電點(diǎn)為6.8。實(shí)例2：用編碼來(lái)自閃光須霉的脂肪酶的基因轉(zhuǎn)化米曲霉宿主細(xì)胞根據(jù)WO95/002043，制備米曲霉MT3568的原生質(zhì)體。將100μl的原生質(zhì)體與2.5-10μg的包括D235M8#1(實(shí)例1)的曲霉屬表達(dá)載體和250uL的60％PEG4000、10mMCaCl2、和10mMTris-HCl(pH7.5)混合，并且輕輕混合。將混合物在37℃下孵育30分鐘并且將這些原生質(zhì)體涂布到COVE蔗糖平板上用于選擇。在37℃下孵育4-7天后，將四個(gè)轉(zhuǎn)化體的孢子接種到3ml的YPM培養(yǎng)基中。在30℃下培養(yǎng)3天之后，使用4％-20％Tris-甘氨酸凝膠(英杰公司，卡爾斯巴德，加州，美國(guó)(InvitrogenCorporation,Carlsbad,CA,USA))通過(guò)SDS-PAGE分析培養(yǎng)液，以鑒定從閃光須霉產(chǎn)生最大量的重組脂肪酶的轉(zhuǎn)化體。使用橄欖油/瓊脂糖平板(1％蛋白質(zhì)級(jí)瓊脂糖；1％橄欖油；0.008％亮綠；50mMHepes；pH7.2)調(diào)研由曲霉屬轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生的脂肪酶的脂肪分解活性。將來(lái)自不同轉(zhuǎn)化體的20μl等分試樣的培養(yǎng)液、緩沖液(陰性對(duì)照)分配到直徑為3mm的沖孔中并且在37℃下孵育1小時(shí)。隨后檢查這些平板中的孔周?chē)嬖诨虿淮嬖趯?duì)應(yīng)于脂肪分解活性的深綠區(qū)。基于這兩個(gè)選擇標(biāo)準(zhǔn)，將最好的轉(zhuǎn)化體的孢子涂布于用于再分離的COVE-2板上，以分離單個(gè)菌落。然后將單個(gè)菌落涂布于COVE-2管上并且孵育直到孢子形成。實(shí)例3：轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的發(fā)酵和從閃光須霉生產(chǎn)脂肪酶在80rpm攪拌下在30℃溫度下的3天期間，將來(lái)自最好轉(zhuǎn)化體的孢子在搖瓶的2400ml的YPM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。通過(guò)使用0.2μm過(guò)濾裝置過(guò)濾收獲培養(yǎng)肉湯。過(guò)濾的發(fā)酵液用于酶表征。首先，由(NH4)2SO4沉淀培養(yǎng)液，然后在pH5.5下用20mMNaAC進(jìn)行透析。然后將該樣品施加到用pH5.5的NaAC平衡的Q快流(通用電氣醫(yī)療集團(tuán))上。以16倍柱體積，從0至0.35MNaCl施加NaCl濃度梯度，然后以5倍柱體積進(jìn)行施加，直至1MNaCl。收集并濃縮具有脂肪酶活性的部分。實(shí)例4：脂肪酶的鑒定根據(jù)以下方法，對(duì)以上實(shí)例中所純化的本發(fā)明的脂肪酶進(jìn)行表征。所有反應(yīng)都一式兩份來(lái)進(jìn)行。SDS-PAGE：使用SDS-PAGE，確定脂肪酶的分子量為約26kDa。pNP-C8測(cè)定：使用pNP-C8測(cè)定來(lái)量化脂肪分解活性。將來(lái)自西格瑪?shù)?-硝基苯基辛酸鹽(C8:21742)以16.5mM的終濃度溶解于異丙醇中作為原液，然后用所需pH的緩沖液或水稀釋10倍，該緩沖液或水包含0.4％TritonX-100、10mMCaCl2。通過(guò)將處于0.5mg/ml的20μl酶樣品或作為空白的水和150μl的底物工作溶液混合開(kāi)始該反應(yīng)，此后讀取OD405。pH曲線：將20uL酶樣品和在B&R緩沖液(伯瑞坦-羅賓森(Britton-Robinson)緩沖液：100mM丁二酸、HEPES、CHES、CAPSO、1mMCaCl2、150mMKCl、0.01％TritonX-100，用HCl和NaOH將pH調(diào)節(jié)至3.0、4.0、5.0、6.07.0、8.0、9.0和10.0)中的150μlpNP-C8在微量滴定板中混合并且在反應(yīng)前置于冰上。通過(guò)將微量滴定板轉(zhuǎn)移至設(shè)置為15℃的艾本德恒溫混勻儀來(lái)開(kāi)始該測(cè)定，并且孵育40分鐘，此后讀取OD405。本發(fā)明的脂肪酶的最適pH是約pH8。溫度曲線將20μl酶樣品和pH7.0的、在Tris-HCl中的150μlpNP-C8在微量滴定板中進(jìn)行混合，并置于冰上。通過(guò)將微量滴定板轉(zhuǎn)移至設(shè)置為15℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃和75℃測(cè)定溫度的艾本德恒溫混勻儀來(lái)開(kāi)始該測(cè)定40分鐘，并且讀取OD405。該脂肪酶具有約30℃的最適溫度，但是還顯示出在從30℃至75℃的范圍中的良好活性。熱穩(wěn)定性將酶樣品在50℃下孵育0、10、30、60、和120分鐘并且置于冰上。將20μl酶添加到pH8.0的、具有Tris-HCl的150μpNP-C8溶液中，并且在150℃下孵育40分鐘，此后讀取OD405。在50℃下，該脂肪酶是非常穩(wěn)定的。在孵育120分鐘的最長(zhǎng)測(cè)試時(shí)間后，只有略微的活性降低。實(shí)例5：相對(duì)的洗滌性能自動(dòng)機(jī)械應(yīng)力測(cè)定(AMSA)：為了評(píng)估在衣物洗滌中的洗滌性能，使用自動(dòng)機(jī)械應(yīng)力測(cè)定(AMSA)進(jìn)行洗滌實(shí)驗(yàn)。AMSA平板具有許多用于測(cè)試溶液的縫和蓋子，蓋子針對(duì)所有縫開(kāi)口強(qiáng)力擠壓洗滌樣品(有待洗滌的紡織品)。在洗滌時(shí)間期間，將平板、測(cè)試溶液、紡織品和蓋子劇烈振動(dòng)從而使測(cè)試溶液與紡織品接觸并以規(guī)則、周期性振蕩方式施加機(jī)械壓力。關(guān)于進(jìn)一步描述，參見(jiàn)WO02/42740，尤其是第23-24頁(yè)的“特定方法實(shí)施例(Specialmethodembodiments)”段落。在不同pH的甘氨酸緩沖液中并且在具有不同表面活性劑水平的標(biāo)準(zhǔn)洗滌劑中進(jìn)行衣物洗滌實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)條件在以下指定：用NaOH或檸檬酸進(jìn)行最后調(diào)節(jié)至指定pH。通過(guò)將CaCl2和MgCl2(Ca2+:Mg2+＝4:1)添加到測(cè)試系統(tǒng)中，將水硬度調(diào)節(jié)至15°dH。洗滌之后，將紡織品在自來(lái)水中沖洗并且使用濾紙將過(guò)量的水從紡織品中去除，并且之后立即將紡織品在85℃下干燥5min。將洗滌性能測(cè)量為所洗滌的臟紡織品的顏色變化。該污漬是與姜黃混合的奶油。姜黃包含著色劑姜黃素，其作為pH指示劑通過(guò)具有pH依賴性顏色變化起作用。脂肪酶活性導(dǎo)致游離脂肪酸從乳脂?；视王メ尫挪⑶疫@導(dǎo)致pH降低并且由此導(dǎo)致姜黃素pH指示劑的顏色變化。脂肪酶洗滌性能因此可以被表示為當(dāng)用白光照亮?xí)r，從所洗滌的臟紡織品反射-發(fā)射的光的變色程度。使用專業(yè)平板掃描儀(EPSONEXPRESSION10000XL，阿特亞公司(AteaA/S)，Lautrupvang6，2750巴勒魯普，丹麥)進(jìn)行顏色測(cè)量，該掃描儀用于捕獲所洗滌的臟紡織品的圖像。為了從掃描的圖像中提取光強(qiáng)度值，將來(lái)自圖像的24位像素值轉(zhuǎn)化為紅色、綠色和藍(lán)色(RGB)值。歸因于脂肪酶活性的顏色變化被測(cè)量為相對(duì)于反射-發(fā)射的藍(lán)色(B)和紅色(R)光的總和，綠色光(G)的反射-發(fā)射的增加。相對(duì)于參比脂肪酶(LipolaseTM)，脂肪酶的洗滌性能(RP(洗滌))被計(jì)算為：RP(洗滌)＝(G/(B+R)(測(cè)試的脂肪酶)-G/(B+R)(無(wú)酶))/(G/(B+R)(參比脂肪酶)-G/(B+R)(無(wú)酶))。實(shí)例6：通過(guò)差示掃描量熱法測(cè)定Td。使用一臺(tái)VP-毛細(xì)管差示掃描量熱儀(微量熱公司(MicroCalInc.),皮斯卡塔韋,新澤西州,美國(guó))通過(guò)差示掃描熱量測(cè)定(DSC)測(cè)定本發(fā)明脂肪酶的熱穩(wěn)定性。在200K/小時(shí)的恒定的程序化加熱速率下，加熱在緩沖液(50mMHEPES，pH8.0)中的酶溶液后獲得的熱分析圖(Cp對(duì)T)中，將熱變性溫度Td(℃)當(dāng)作變性峰(主要的吸熱峰)的頂端。將樣品溶液和參比溶液(大約0.2mL)從10℃下持續(xù)3小時(shí)(混合)的儲(chǔ)存條件下裝載到量熱儀中(參比溶液：不具有酶的緩沖液)，并且在20℃下熱預(yù)平衡約20分鐘，隨后從20℃至100℃進(jìn)行DSC掃描。以大約+/-1℃的精確度確定變性溫度為49℃。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3