本發(fā)明涉及?；鈮A組合物。本發(fā)明更特別地涉及使得?；鈮A能夠長期穩(wěn)定儲存的組合物。
背景技術(shù)：
：：酰基肉堿是一種當(dāng)在活體中脂肪酸運(yùn)輸?shù)骄€粒體的內(nèi)膜時通過脂肪酸和肉堿的結(jié)合生成的化合物。更特別地，?；鈮A是由于在線粒體的外膜中存在的肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I的作用從?；?輔酶A和肉堿生成的?；谄渲舅岵糠值奶兼滈L度、不飽和鍵的存在和數(shù)量、偶聯(lián)于碳鏈的氫原子取代成氧原子或羥基、等等，將酰基肉堿細(xì)分成乙?；鈮A、丙?；鈮A、硬脂?；鈮A、油烯基肉堿(oleylcarnitine)、亞油烯基(linoleylcarnitine)肉堿、丙二?；鈮A、3-羥基肉堿、等等。在此說明書中，將這些?；鈮A統(tǒng)稱為酰基肉堿。在此說明書中，也將沒有結(jié)合到其上的脂肪酸的游離肉堿包括在?；鈮A中。特別地，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域極有價值的是，分析生物樣品如血液和尿液中的?；鈮A，以評價代謝紊亂，并且因此，?；鈮A是在例如針對先天性代謝缺陷(inbornerrorsofmetabolism)的新生兒篩查中要分析的項目。在專利文獻(xiàn)1中描述了通過使用質(zhì)譜儀測量血漿中的酰基肉堿所獲得的?；鈮A的概況(profile)可以用于脂肪酸氧化紊亂(MCAD、VLCAD、SCAD、MAD、LCHAD和CPTII)以及有機(jī)酸血癥(organicacidemias)中的一些(如丙酸血癥、甲基丙二酸血癥、異戊酸血癥、1型戊二酸血癥、3-甲基巴豆酰-輔酶A羧化酶缺乏和β-酮硫解酶缺乏)的診斷。通常，當(dāng)通過使用質(zhì)譜儀定量測量酰基肉堿時，方法可以使用?；鈮A作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或使用同位素標(biāo)記的?；鈮A作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以通過單獨(dú)從試劑制造商購買或者通過購買試劑盒(如在非專利文獻(xiàn)1中描述的NeoBaseNon-DerivatizedMSMS試劑盒(由PerkinElmer制造))獲得。然而，這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是凍干的制品，并且在使用前需要通過添加合適的溶液完全溶解的步驟。引用文獻(xiàn)列表專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1：日本專利號4838129非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1："3040-0010NeoBaseNon-derivatizedMSMSkitInstructionManual(PerkinElmer)"非專利文獻(xiàn)2："StabilityofAcylcarnitineinLiquidSample,"HealthandLabourSciencesResearchGrantsinFY2011(BasicResearchProjectforPromotionofNextGenerationforOvercomingDevelopmentalDisease,etc.),"StudyontheDevelopmentandQualitativeImprovementofMass-ScreeningSystemforNewbornsthroughIntroductionofTandemMass,"General/AllottedResearchReportinFY2011,SeijiYamaguchi等人,pp40-43,MinistryofHealth,LaborandWelfare,2012發(fā)明概述技術(shù)問題為了一般地消除溶解標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的步驟，預(yù)先制成溶液的試劑可商購自若干制造商。例如，WakoPureChemicalIndustries,Ltd.銷售氨基酸溶液如200mmol/LL-谷氨酰胺溶液(×100)和MEM非必需氨基酸溶液(×100)。然而，如在非專利文獻(xiàn)1中所述，在溶液狀態(tài)下的?；鈮A的穩(wěn)定性為在2℃至8℃30天，并且所述的是，對于超過一個月的時間段，?；鈮A溶液不具有儲存穩(wěn)定性。在非專利文獻(xiàn)2中，更詳細(xì)地研究了酰基肉堿溶液的穩(wěn)定性。因為在儲存在冰箱中(4℃)的pH8.0的緩沖溶液中檢測到長鏈酰基肉堿的降解，并且在儲存在正常溫度(21℃)下的健康人的血清中檢測到從短鏈到長鏈的多種?；鈮A的降解，所以對于所有在?；鈮A分析中使用的試樣(濾紙上的血液、血清、尿液)都推薦冷凍儲存(-30℃)。尤其是，因為溶液狀態(tài)的酰基肉堿的儲存穩(wěn)定性問題，酰基肉堿溶液是不可商購的。因此，對于可用作用于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的試劑和用于內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的試劑的、消除了對于將?；鈮A溶解的工作的需要的、并且具有長期儲存穩(wěn)定性的?；鈮A組合物，存在著來自測量從業(yè)者的需求。由此，本發(fā)明要解決的問題是提供一種易于在溶液狀態(tài)下處理并且具有長期儲存穩(wěn)定性的?；鈮A組合物。解決問題的手段本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過將?；鈮A溶解在含有有機(jī)酸的有機(jī)溶劑中，可以將酰基肉堿以溶液狀態(tài)穩(wěn)定地長期儲存，從而完成了本發(fā)明。在非專利文獻(xiàn)2中，建議了在pH6.0至8.0的中性緩沖劑中，?；鈮A的水解在pH8.0增加；然而，并未發(fā)現(xiàn)?；鈮A在酸性水溶液中是穩(wěn)定的。此外，也沒有提及?；鈮A在有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過將?；鈮A溶解在有機(jī)溶劑中并添加有機(jī)酸，顯著地改善?；鈮A在溶液中的儲存穩(wěn)定性。此外，本發(fā)明人通過使用通常在質(zhì)譜法中使用的有機(jī)酸完成了一種不影響質(zhì)譜儀酰基肉堿組合物。本發(fā)明涉及以下細(xì)節(jié)。<1>一種?；鈮A組合物，其中將至少一種以上式1的化合物溶解在含有有機(jī)酸的有機(jī)溶劑中：式1：(CH3)3N+CH2CH(OR1)CH2COO-其中在式1中，R1指代氫原子、或具有2至30的碳數(shù)的飽和或不飽和脂肪酸殘基，并且其中結(jié)合于所述脂肪酸殘基的一個或多個氫原子可以被一個或多個氧原子或一個或多個羥基取代。<2>根據(jù)<1>所述的酰基肉堿組合物，其中所述有機(jī)溶劑是具有1至5的碳數(shù)的有機(jī)溶劑。<3>根據(jù)<1>或<2>所述的?；鈮A組合物，其中所述有機(jī)溶劑是選自由具有1至5的碳數(shù)的醇和乙腈組成的組中的至少一種或多種。<4>根據(jù)<3>所述的酰基肉堿組合物，其中所述具有1至5的碳數(shù)的醇是選自由甲醇、乙醇和異丙醇組成的組中的至少一種或多種。<5>根據(jù)<1>至<4>中任一項所述的酰基肉堿組合物，其中所述有機(jī)酸是選自由一價至三價羧酸組成的組中的至少一種或多種。<6>根據(jù)<5>所述的?；鈮A組合物，其中所述羧酸是選自由以下各項組成的組中的至少一種或多種：甲酸、乙酸、草酸、三氟乙酸、檸檬酸、丁酸和乳酸。<7>根據(jù)<1>至<6>中任一項所述的?；鈮A組合物，其中所述有機(jī)酸的體積濃度為0.005％(v/v)至5％(v/v)。<8>根據(jù)<1>至<7>中任一項所述的?；鈮A組合物，其中?；鈮A是同位素標(biāo)記的。<9>根據(jù)<1>至<8>中任一項所述的酰基肉堿組合物，其中當(dāng)將所述酰基肉堿組合物在45℃儲存24小時時，從用質(zhì)譜儀的測量值算得的酰基肉堿的剩余率為80％至120％。<10>一種用質(zhì)譜儀測量?；鈮A的方法，所述方法包括：使用根據(jù)<1>至<9>中任一項所述的?；鈮A組合物。<11>根據(jù)<1>至<9>中任一項所述的?；鈮A組合物在用質(zhì)譜儀針對先天性代謝缺陷的診斷和篩查中的用途。<12>一種試劑盒，所述試劑盒包括：根據(jù)<1>至<9>中任一項所述的酰基肉堿組合物。<13>一種試劑盒，所述試劑盒包括：有機(jī)酸、有機(jī)溶劑、和至少一種以上式1的酰基肉堿化合物：式1：(CH3)3N+CH2CH(OR1)CH2COO-其中在式1中，R1指代氫原子、或具有2至30的碳數(shù)的飽和或不飽和脂肪酸殘基，并且其中結(jié)合于所述脂肪酸殘基的一個或多個氫原子可以被一個或多個氧原子或一個或多個羥基取代。發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供了在不需要將?；鈮A溶解的工作的情況下具有長期儲存穩(wěn)定性的?；鈮A組合物。本發(fā)明的?；鈮A組合物可用于臨床檢查如先天性代謝缺陷的篩查。附圖簡述[圖1]圖1是在參考例1中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在甲醇中的穩(wěn)定性預(yù)測的圖線。[圖2]圖2是在實施例1中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有0.1％甲酸的甲醇和各種有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖3]圖3是在實施例2中獲得的對于乙酰基肉堿(C2)-穩(wěn)定同位素在含有1％甲酸的甲醇和各種有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖4]圖4是在實施例3中獲得的對于?；鈮A(C0至C18)-穩(wěn)定同位素在甲醇和含有1％甲酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖5]圖5是在實施例4中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有1％甲酸的乙腈和各種有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖6]圖6是在實施例5中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有指定濃度的甲酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖7]圖7是在實施例6中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有指定濃度的乙酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖8]圖8是在實施例7中獲得的對于乙酰基肉堿(C2)-穩(wěn)定同位素在含有指定濃度的乳酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖9]圖9是在實施例8中獲得的對于乙酰基肉堿(C2)-穩(wěn)定同位素在含有指定濃度的草酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。[圖10]圖10是在實施例9中獲得的對于乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有指定濃度的檸檬酸的乙醇中的穩(wěn)定性的柱狀圖。實施方案描述在本發(fā)明中，?；鈮A指的是由式1表示的化合物：式1：(CH3)3N+CH2CH(OR1)CH2COO-(在式1中，R1指代氫原子、或具有2至30的碳數(shù)的飽和或不飽和脂肪酸殘基，并且結(jié)合于所述脂肪酸殘基的一個或多個氫原子可以被一個或多個氧原子或一個或多個羥基取代。飽和或不飽和脂肪酸殘基可以是在表1中描述的那些，并且，在它們中，優(yōu)選使用具有2至18的碳數(shù)的脂肪酸殘基。用于如對先天性代謝缺陷進(jìn)行篩查的臨床評價的項目的主要?；鈮A列在表2中。[表1][表2]在本說明書中，術(shù)語“?；鈮A”包括同位素標(biāo)記的?；鈮A。根據(jù)本發(fā)明，同位素標(biāo)記的酰基肉堿具有相同的儲存穩(wěn)定性。例如，用穩(wěn)定同位素標(biāo)記的酰基肉堿(在下文中稱為?；鈮A穩(wěn)定同位素(acylcarnitine-stableisotope))的例子有2H9-肉堿、2H3-乙?；鈮A、2H3-丙酰肉堿、2H3-丁?；鈮A、2H9-異戊?；鈮A、2H3-辛酰基肉堿、2H9-肉豆蔻酰基肉堿和2H3-棕櫚?；鈮A。同位素標(biāo)記可以是用放射性同位素標(biāo)記或用其他元素如碳、氮和氧標(biāo)記，并且不限于氘標(biāo)記，盡管以氘標(biāo)記作為同位素標(biāo)記的實例。此外，取代的原子的數(shù)量和取代的位置不限于示例的?；鈮A穩(wěn)定同位素的那些。對在本發(fā)明中使用的有機(jī)溶劑沒有特別的限定，只要有機(jī)溶劑是通常在生物化學(xué)中使用的即可。因為對于高效溶解碳數(shù)不同的酰基肉堿的混合物、容易處理、以及可獲得性的需要，有機(jī)溶劑優(yōu)選為具有1至5的碳數(shù)的有機(jī)溶劑，更優(yōu)選具有1至5的碳數(shù)的醇和乙腈，并且進(jìn)一步優(yōu)選甲醇、乙醇和異丙醇。因為?；鈮A可以被水解，溶劑優(yōu)選不含有水。本發(fā)明的有機(jī)溶劑包括如在下文描述的情況中的有機(jī)酸。對溶解在有機(jī)溶劑中的?；鈮A的濃度范圍沒有特別的限定，并且所述濃度范圍可以優(yōu)選具有1μmol/L的下限和優(yōu)選100μmol/L的上限，且在一些情況下上限可以優(yōu)選為70μmol/L、50μmol/L、40μmol/L或35μmol/L。如果?；鈮A的濃度小于1μmol/L，化學(xué)降解發(fā)生，并且在長期儲存情況下對穩(wěn)定性有不利影響。如果?；鈮A的濃度超過100μmol/L，當(dāng)進(jìn)行質(zhì)譜法時必須對?；鈮A進(jìn)行多次稀釋，到適合于測量的濃度，這使得實驗操作繁冗。游離肉堿在甲醇中的溶解性為最多約0.4g/mL(約2.48mol/L)，并且已知游離肉堿易溶于醇中。對在本發(fā)明中使用的有機(jī)酸沒有特別的限定，只要有機(jī)酸是通常用于生物化學(xué)中的即可。因為操作的容易性和可獲得性，有機(jī)酸優(yōu)選為一價至三價羧酸，并且可以舉例為甲酸、乙酸、草酸、三氟乙酸、檸檬酸、丁酸和乳酸。從對于用質(zhì)譜儀測量所需的揮發(fā)性看來，甲酸、乙酸、草酸和三氟乙酸是優(yōu)選的，并且從腐蝕性看來，甲酸、乙酸和草酸是更優(yōu)選的。盡管對有機(jī)酸的濃度范圍沒有特別的限定，按體積濃度計的濃度范圍具有為0.005％(v/v)的優(yōu)選下限，而在一些情況下優(yōu)選的下限可以為0.01％(v/v)、0.15％(v/v)、0.2％(v/v)、0.25％(v/v)、0.3％(v/v)、0.35％(v/v)、0.4％(v/v)或0.45％(v/v)，并且更優(yōu)選的下限為0.5％(v/v)。該濃度范圍具有為5％(v/v)的優(yōu)選上限，而在一些情況下優(yōu)選的上限可以為4.5％(v/v)、4.0％(v/v)或3.5％(v/v)，并且更優(yōu)選的上限為3％(v/v)。如果有機(jī)酸的濃度低于下限，不預(yù)期?；鈮A組合物的儲存穩(wěn)定性有改善。如果有機(jī)酸的濃度高于上限，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明用質(zhì)譜儀進(jìn)行測量時，仍然存在有機(jī)酸不利地影響裝置和測量結(jié)果的可能性。根據(jù)本發(fā)明的酰基肉堿組合物可以優(yōu)選作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)物、對照、內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等，用在使用質(zhì)譜儀的?；鈮A測量中。在本發(fā)明的實施方案中，將?；鈮A、有機(jī)酸和有機(jī)溶劑預(yù)先以溶液狀態(tài)混合并供應(yīng)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，單獨(dú)準(zhǔn)備每種組分，并且當(dāng)使用時將它們以溶液狀態(tài)混合，或者將預(yù)先混合的兩種組分和單獨(dú)準(zhǔn)備的剩余的一種組分在使用時以溶液狀態(tài)混合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，可以準(zhǔn)備隨后可以向其中添加有機(jī)溶劑的組合物。例如，將?；鈮A和有機(jī)酸的混合物與有機(jī)溶劑混合，向混合物中添加能夠保持有機(jī)酸的多孔膜或賦形劑，并且隨后，移除有機(jī)溶劑，以獲得該組合物。備選地，將?；鈮A、有機(jī)酸和有機(jī)溶劑混合，并且隨后，移除有機(jī)溶劑，以獲得該組合物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，向凍干的?；鈮A添加有機(jī)酸和有機(jī)溶劑，或者，向在多孔膜中含有的?；鈮A添加有機(jī)酸和有機(jī)溶劑的混合物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，將?；鈮A和有機(jī)溶劑混合，并隨后添加有機(jī)酸，或者將有機(jī)溶劑和有機(jī)酸預(yù)先混合，并隨后添加至酰基肉堿中。如果當(dāng)儲存在室溫時酰基肉堿的穩(wěn)定性不受損害，并且如果多孔膜不溶于樣品提取液并且具有將酰基肉堿洗脫到溶液中和在干燥狀態(tài)保持?；鈮A的能力，可以無限制地使用多孔膜。多孔膜可以是已知的多孔膜，并且可以是由例如濾紙、無紡織物、紡織物、片狀泡沫體等制成的多孔膜。關(guān)于材料，已知的天然和合成聚合物是可用的，例如，棉、羊毛、纖維素、聚苯乙烯、聚烯烴、聚氨酯、硝酸纖維素、乙酸纖維素、聚酯、環(huán)氧樹脂、酚樹脂、蠶絲、絲蛋白、木質(zhì)素、半纖維素、幾丁質(zhì)、硬橡膠、橡膠、玻璃、石英、陶瓷、等等。在它們中，材料優(yōu)選為天然聚合物，更優(yōu)選纖維素和棉，且特別優(yōu)選纖維素。本發(fā)明的酰基肉堿組合物可以通過使用質(zhì)譜儀的?；鈮A測量用于針對先天性代謝缺陷的篩查。本發(fā)明的?；鈮A組合物可以以測量試劑盒的形式提供，所述試劑盒包括有機(jī)酸、有機(jī)溶劑、和至少一種以上?；鈮A化合物，并且試劑盒可以另外包括其他測定試劑、試樣稀釋劑、說明書手冊、等等。其他測定試劑可以是用于期望同時被測量的氨基酸或琥珀酰丙酮的測定試劑，具體地，試劑可以是其內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液。[參考例1]乙?；鈮A(C2)在甲醇中的穩(wěn)定性預(yù)測首先，為了從?；鈮A中找到較不穩(wěn)定的?；鈮A，在于室溫下儲存在甲醇溶液中一個月和兩個月的情況下，計算在表3中所列的?；鈮A穩(wěn)定同位素的剩余率。通過將?；鈮A穩(wěn)定同位素溶解在甲醇中達(dá)到表3中所列的濃度，獲得酰基肉堿溶液。在以下條件下測量?；鈮A穩(wěn)定同位素。在儲存之前(使用時準(zhǔn)備)和儲存預(yù)定時間段之后立即測量?；鈮A溶液，并且使用下述等式2從獲得的峰面積計算剩余率(％)。系統(tǒng)：LC-20A系列(由ShimadzuCorporation制造)和4000QTRAP(由ABSciex制造)<LC條件>流動相：流動相A，0.5％(v/v)甲酸水溶液流動相B，500mmol/L甲酸銨水溶液：500mmol/L氫氧化銨(9:1)/甲醇＝1/9分析時間：70分鐘洗脫方法：在以下梯度條件下線性增加或減少洗脫液B的共混比率。0分鐘(0％洗脫液B)→5分鐘(0％洗脫液B)5.1分鐘(0％洗脫液B)→40分鐘(100％洗脫液B)40分鐘(100％洗脫液B)→55分鐘(100％洗脫液B)55分鐘(100％洗脫液B)→55.1分鐘(0％洗脫液B)55.1分鐘(0％洗脫液B)→70分鐘(0％洗脫液B)流速：0.2mL/分鐘LC柱：ScherzoSS-C18,3μm,3.0×150mm(由ImtactCorporation制造)柱溫度：50℃樣品注入量：5μL<MS條件>電離模式：ESI(電噴霧電離)離子源：TurboIonSpray掃描類型：MRM極性：正Q1/Q3描述于表3中。等式2：[表3]1M：一個月2M：兩個月Sol.Conc.：溶液濃度St.Pd.：儲存期Res.Rt.：剩余率為了預(yù)測酰基肉堿的穩(wěn)定性，使用在表3中觀察到的剩余率最大下降的乙?；鈮A(C2)作為指數(shù)。通過將乙?；鈮A溶液以表3中列出的濃度儲存在包括嚴(yán)苛條件在內(nèi)的四個溫度(45℃、22℃、4℃和-20℃)下，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，以預(yù)測在-20℃和4℃的穩(wěn)定期。對于進(jìn)行了評價的樣品，用此預(yù)測方法計算出，儲存在45℃達(dá)24小時對應(yīng)于儲存在4℃達(dá)約3個月和儲存在-20℃達(dá)約5年。<預(yù)測方法>溶劑：甲醇評價溫度：45℃,22℃,4℃,-20℃預(yù)測方法：阿侖尼烏斯(Arrhenius)模型所得的結(jié)果示于圖1中。[實施例1]乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有0.1％(v/v)甲酸的甲醇和各種有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性針對在選擇的?；鈮A中在參考例1中確認(rèn)剩余率最大下降的乙?；鈮A(C2)，進(jìn)行對溶解溶劑的研究。<試驗條件>溶劑：甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、含有0.1％(v/v)甲酸的甲醇、50％(v/v)甲醇水溶液儲存溫度：45℃儲存時間：24小時以與參考例1相同的方式，進(jìn)行剩余率的測量和計算。所得的結(jié)果示于圖2中。[實施例2]乙酰基肉堿(C2)-穩(wěn)定同位素在含有1％(v/v)甲酸的甲醇和各種有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性如實施例1的情況，用乙酰基肉堿(C2)進(jìn)行研究，以證實添加有機(jī)酸的效果。<試驗條件>溶劑：甲醇、含有1％(v/v)甲酸的甲醇、含有1％(v/v)甲酸的乙醇、含有1％(v/v)甲酸的異丙醇、DMF儲存溫度：45℃儲存時間：24小時以與參考例1中相同的方式，進(jìn)行剩余率的測量和計算。所得的結(jié)果示于圖3中。[實施例3]?；鈮A(C0至C18)-穩(wěn)定同位素在含有1％(v/v)甲酸的乙醇和甲醇中的穩(wěn)定性將在表3中所示的?；鈮A(代碼：C0、C2、C3、C4、C5、C5OH、C5DC、C8、C12、C14、C16、C18)溶解在含有1％(v/v)甲酸的乙醇中和在實施例2中研究的含有1％(v/v)甲酸的甲醇中，并且也在儲存穩(wěn)定性方面檢查了除乙?；鈮A(C2)之外的?；鈮A。如下制備含有1％(v/v)甲酸和酰基肉堿的乙醇溶液。將酰基肉堿(代碼：C0、C2、C3、C4、C5、C5OH、C5DC、C8、C12、C14、C16和C18)溶解在含有1％(v/v)甲酸的乙醇中，分別達(dá)到在表3中所述的濃度的15倍那么高的濃度，以制備含有1％(v/v)甲酸和酰基肉堿的乙醇溶液(12種溶液)。隨后，將100μL每種溶液收集和混合，并添加300μL含有1％(v/v)甲酸的乙醇。將液體混合物充分?jǐn)嚢?，以?zhǔn)備1500μL的以在表3中所述的濃度含有每種?；鈮A的含有1％(v/v)甲酸的乙醇溶液。類似地，對于含有?；鈮A的甲醇，將?；鈮A溶解在甲醇中，分別達(dá)到在表3中所述的濃度的15倍那么高的濃度，將100μL每種溶液(12種溶液)收集和混合，隨后進(jìn)一步添加300μL的甲醇。充分?jǐn)嚢枰后w混合物，以制備1500μL的以在表3中所述的濃度含有?；鈮A的甲醇溶液。<試驗條件>溶劑：甲醇、含有1％(v/v)甲酸的乙醇儲存溫度：45℃儲存時間：24小時以與參考例1中相同的方式，進(jìn)行剩余率的測量和計算。所得的結(jié)果示于圖4中。對實施例1、2和3的結(jié)果和討論實施例1(圖2)的結(jié)果如下。盡管在50％(v/v)甲醇水溶液中乙?；鈮A(C2)的儲存穩(wěn)定性最低，導(dǎo)致5.4％的剩余率，但在有機(jī)溶劑(甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈)中觀察到剩余率改善到56.7％至65.9％，并且證實，在含有0.1％甲酸的甲醇中，剩余率明顯改善到84.8％。在實施例2(圖3)中，將實施例1中的0.1％的甲酸含量增加到1％。不僅向甲醇中，也向乙醇和異丙醇中，添加乙酸。作為結(jié)果，隨著甲酸含量的增加，乙酰基肉堿的剩余率增加，即，在含有0.1％甲酸的甲醇中剩余率為84.8％(實施例1)，且在含有1％(v/v)甲酸的甲醇中剩余率為97.0％。在含有1％甲酸的乙醇和含有1％(v/v)甲酸的異丙醇中的剩余率分別為97.2％和96.9％，并且因此，和在含有1％(v/v)甲酸的甲醇中的剩余率為相同水平。在實施例3(圖4)中，將酰基肉堿(代碼：C0、C2、C3、C4、C5、C5OH、C5DC、C8、C12、C14、C16和C18)溶解在含有1％(v/v)甲酸的乙醇中，以研究由于?；鈮A的脂肪酸的鏈長導(dǎo)致的穩(wěn)定性的差異。作為結(jié)果，剩余率為94.8％至103.3％，并且從短鏈、中鏈和長鏈脂肪酸的鏈長度差異未鑒別剩余率上的差異。從圖2、3和4的這些結(jié)果，關(guān)于?；鈮A在溶液中的儲存穩(wěn)定性，已經(jīng)揭示了，與水溶液相比，當(dāng)儲存在有機(jī)溶劑中時，酰基肉堿更加穩(wěn)定，并且與當(dāng)將它僅溶解在有機(jī)溶劑中相比，在含有有機(jī)酸的有機(jī)溶劑中更加穩(wěn)定。此外，已經(jīng)指明，當(dāng)有機(jī)酸含量增加時，改善?；鈮A的儲存穩(wěn)定性。沒有觀察到由于?；鈮A的脂肪酸的鏈長導(dǎo)致的酰基肉堿在含有有機(jī)酸的有機(jī)溶劑中的儲存穩(wěn)定性有明顯差異。[實施例4]乙酰基肉堿(C2)-穩(wěn)定同位素在含有1％(v/v)甲酸的乙腈中的儲存穩(wěn)定性如實施例1的情況，通過使用乙腈作為有機(jī)溶劑，證實對于乙?；鈮A(C2)來說添加有機(jī)酸的儲存穩(wěn)定性效果。為了比較，也各自每個單獨(dú)測試乙腈、甲醇和乙醇，以證實儲存穩(wěn)定性效果。<試驗條件>溶劑：甲醇、乙醇、乙腈和含有1％(v/v)甲酸的乙腈儲存溫度：60℃儲存時間：24小時以與參考例1相同的方式，進(jìn)行剩余率的測量和計算。所得的結(jié)果示于圖5中。[實施例5]乙?；鈮A(C2)穩(wěn)定同位素在含有甲酸的乙醇中的儲存穩(wěn)定性如實施例1的情況，對于在通過向乙醇以指定的濃度添加甲酸獲得的溶劑中的乙?；鈮A(C2)，證實儲存穩(wěn)定性效果。<試驗條件>溶劑：含有0.005％、0.1％、1％和5％(v/v)的濃度的甲酸的乙醇儲存溫度：60℃儲存時間：24小時以與參考例1相同的方式，進(jìn)行剩余率的測量和計算。所得的結(jié)果示于圖6中。[實施例6至9]乙?；鈮A(C2)-穩(wěn)定同位素在含有有機(jī)酸的乙醇中的儲存穩(wěn)定性通過以與實施例5相同的方式進(jìn)行測試，證實儲存穩(wěn)定性效果，不同之處在于使用乙酸、乳酸、草酸和檸檬酸作為有機(jī)酸。所得的結(jié)果示于圖7至10中。對于實施例4的結(jié)果和討論從實施例4(圖5)的結(jié)果可知，盡管在每種單獨(dú)使用的有機(jī)溶劑中乙?；鈮A(C2)的儲存穩(wěn)定性低并且在乙腈中為26.2％，但是在通過向乙腈中添加有機(jī)酸獲得的含有1％(v/v)甲酸的乙腈中，剩余率為100％(甚至是在60℃和24小時的嚴(yán)苛條件下)，并且證實，通過添加有機(jī)酸，顯著改善了剩余率。由此證實了，甚至當(dāng)使用乙腈作為有機(jī)溶劑時添加有機(jī)酸的效果。對于實施例5至9的結(jié)果和討論從實施例5至9(圖6至10)的結(jié)果可知，當(dāng)使用甲酸、乙酸、乳酸、草酸或檸檬酸的任一種作為有機(jī)酸并添加到有機(jī)溶劑中時，乙?；鈮A(C2)的儲存穩(wěn)定性都是高的，并且因此，證實了添加各種有機(jī)酸的效果。關(guān)于添加濃度，觀察到通過在0.005％至5％的寬范圍內(nèi)添加有機(jī)酸得到的儲存穩(wěn)定性的改善。工業(yè)實用性根據(jù)本發(fā)明的?；鈮A組合物可以優(yōu)選作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)物、對照物、內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等用在使用質(zhì)譜儀的?；鈮A測量中，并且具有大的工業(yè)實用性。當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3