過去的50年，避孕對(duì)人類社會(huì)具有重要影響并且影響到全世界的家庭規(guī)模分布和生育率差異(BongaartsandWatkins,1996；Bongaarts,1997)。這種影響很大程度上歸因于女性避孕方法、其有效度及經(jīng)濟(jì)和社會(huì)成本。另一方面，男性避孕的全球影響要小得多，主要局限于避孕套和輸精管切除術(shù)(NassandStrauss,2004)。雌性激素避孕藥通過停止排卵機(jī)制起作用，雄性激素避孕藥研究的目標(biāo)是類似的，即抑制精子發(fā)生以導(dǎo)致精子缺乏。但是，以可靠的方式實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)用于不同男性群體還需要許多年(Grimesetal.,2005；Potts,1996)。更遙遠(yuǎn)的理想是非激素雄性避孕藥，可預(yù)想的包括精子不發(fā)育、或不游動(dòng)、或不受精，或者所述精子變異的一些組合。許多避孕藥靶標(biāo)眾多，其中數(shù)種靶標(biāo)值得進(jìn)一步探索，包括阻斷跨膜離子電流(Kirichoketal.,2006；Brentonetal.,1996)、破壞支持細(xì)胞-生殖細(xì)胞粘附(Chengetal.,2002,2005)以及通過亞氨基糖類破壞精子形成(Waldenetal.,2006)。多年來顯示出具有很大希望的免疫避孕已失去吸引力。但是，免疫避孕可作為用于識(shí)別雄性體內(nèi)靶分子功能的策略。例如，EPPIN是一種包被在人類精子表面的附睪蛋白酶抑制劑。EPPIN可調(diào)節(jié)PSA(前列腺特異抗原，一種絲氨酸蛋白酶)活性及精液凝固蛋白(semenogelin)的水解作用。雖然EPPIN可通過PSA調(diào)節(jié)精液凝固蛋白的水解作用，但是EPPIN的抗體卻不能抑制PSA活性。猴類和人類的射精精子由EPPIN包被。在精子表面，EPPIN可結(jié)合精液凝固蛋白，其是射精過程中由精囊分泌的。EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體在射精后首個(gè)30分鐘精液的液化過程中被移除。未能移除精液凝固蛋白會(huì)形成不育精子。對(duì)于EPPIN和精液凝固蛋白的相互作用及其對(duì)人類精子影響的研究的描述可見例如Wang,Z.，Widgren,E.E.，Sivashanmugam,P.，O'Rand,M.G.和Richardson,R.T.2005.AssociationofEPPINwithsemenogelinonhumanspermatozoa,BiologyofReproduction72(4):1064-1070(2004年12月8日)。開發(fā)新避孕藥的一種策略是使用特異的精子表面抗原免疫靈長類，并測(cè)定免疫響應(yīng)對(duì)經(jīng)過免疫的雄性射精精子的影響。近期對(duì)于EPPIN(SPINLW1；類絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有Kunitz和WAP結(jié)構(gòu)域-1)的研究提供了免疫避孕法的應(yīng)用實(shí)例(O'Randetal.,2004；Wangetal.,2005；O'Randetal.,2006)。生育力研究(O'Randetal.,2004)顯示有效且可逆的靈長類雄性免疫避孕是可實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)。高血清滴度(>1:1000)可持續(xù)數(shù)月達(dá)到有效避孕水平。使用來自靈長類的EPPIN抗體處理人類精子顯示，處理精子的活力減低，結(jié)果見例如O’Rand,M.G.,Widgren,E.E.,Beyler,S.andRichardson,R.T.2009.Inhibitionofhumanspermmotilitybycontraceptiveanti-EPPINantibodiesfrominfertilemalemonkeys:effectoncyclicadenosinemonophosphate,BiologyofReproduction80:279-285(2008年10月22日)。數(shù)據(jù)來自純化的抗-EPPIN抗體的親和力分析。與對(duì)照相比，運(yùn)行的總距離減少71％(p<6.26×10-10)且直線距離減少57％(p<5.37×10-25)同時(shí)速率下降71％(p<3.96×10-8)，從而判斷抗-EPPIN抗體處理后人類精子的前向運(yùn)動(dòng)顯著改變。同時(shí)，所述抗體可增大直線向量(距離)和轉(zhuǎn)向之間的彎曲角，即頭部的前后運(yùn)動(dòng)(迂曲度)。結(jié)果，除人們希望得到關(guān)于使用免疫避孕可行性的結(jié)論之外，還可以從EPPING對(duì)生育力具有重要作用的研究中得出結(jié)論。抗體如果口服給藥則在胃中易被降解，因此通常通過注射給藥。如果需要常規(guī)注射則雄性避孕未必切實(shí)可行，因此具有小分子且能夠結(jié)合EPPIN并抑制抗-EPPIN或精液凝固蛋白結(jié)合將是有利的。本發(fā)明提供了所述化合物、鑒定所述化合物的測(cè)定及其使用方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了適用于通過抑制人類及其他靈長類精子的前向運(yùn)動(dòng)提供雄性避孕的化合物、鑒定所述化合物的方法及使用所述化合物提供避孕的方法。開發(fā)非激素雄性避孕藥可增強(qiáng)全球的家庭計(jì)劃，并給予男性和女性另外的避孕選擇。當(dāng)前男性的避孕選擇局限于避孕套和輸精管切除術(shù)。近期調(diào)查發(fā)現(xiàn)，女性對(duì)于除輸卵管結(jié)扎術(shù)之外所有方法的避孕滿意度低于60％，男性希望使用更好的避孕藥。因此，非激素雄性避孕藥將填補(bǔ)未能滿足的避孕需求。EPPIN(SPINLW1；附睪蛋白酶抑制劑)以含乳鐵傳遞蛋白和叢生蛋白的EPPIN蛋白復(fù)合體(EPC)包被人睪丸、附睪和射精精子的表面。EPPIN是本發(fā)明所述測(cè)定的靶標(biāo)。射精過程中，精液凝固蛋白(SEMG1)結(jié)合到復(fù)合體中的EPPIN，抑制射精精子的前向運(yùn)動(dòng)。EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體位于精子表面。然后，SEMG1被絲氨酸蛋白酶PSA水解并且EPPIN調(diào)節(jié)PSA對(duì)精子表面SEMG1的水解，產(chǎn)生前向運(yùn)動(dòng)精子。之前對(duì)來自不能生育猴類抗血清的研究發(fā)現(xiàn)了抗-EPPIN的2個(gè)線性B-細(xì)胞表位，一個(gè)在N-末端、另一個(gè)在C-末端。C-末端表位經(jīng)鑒定為TCSMFVYGGCQGNNNNFQKANCLN(SEQIDNO.1)。針對(duì)該表位的抗體可抑制精子活力及精液凝固蛋白結(jié)合。免疫避孕(即使用抗體產(chǎn)生避孕)未被認(rèn)為是市售產(chǎn)品的可行選擇，由于效率、安全和經(jīng)濟(jì)因素。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及可模擬抗-EPPIN抗體從而抑制精子前向運(yùn)動(dòng)的小的有機(jī)化合物(即以與抗-EPPIN抗體相同的位點(diǎn)或基本上相同的位點(diǎn)結(jié)合EPPIN，從而可作為所述抗體的小分子模擬物的化合物)、其鑒定方法及其用于提供雄性避孕的方法。所述化合物可以例如口服給藥，并且在射精之前相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)按需服用。基于2004年Science上的一篇文章顯示了阻斷EPPIN-SEMG1相互作用可導(dǎo)致用EPPIN以高滴度免疫的雄性猴完全且可逆的避孕的“原理循證”，將小的有機(jī)先導(dǎo)化合物開發(fā)作為精子避孕藥。相應(yīng)地，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物可抑制精液凝固蛋白結(jié)合到EPPIN。可通過裝配進(jìn)入精子表面上的EPPIN-SEMG1結(jié)合位點(diǎn)抑制精子活力的小的有機(jī)化合物可口服給藥，并根據(jù)需要在射精前相對(duì)較短的時(shí)間服用。該實(shí)施方案中，可用的化合物包括a)可結(jié)合到EPPIN上的精液凝固蛋白(本文中也稱作Sg)結(jié)合位點(diǎn)的化合物或者可通過抑制精液凝固蛋白結(jié)合的方式結(jié)合到變構(gòu)位點(diǎn)的化合物，以及可模擬精液凝固蛋白效應(yīng)即可阻止精子游動(dòng)的化合物。理想地，可干擾EPPIN與精液凝固蛋白結(jié)合的那些化合物以比精液凝固蛋白更高的親和力與活性結(jié)合口袋結(jié)合。這使得可給予比以較低親和力結(jié)合的化合物更低的有效濃度的化合物。以異構(gòu)方式結(jié)合的那些化合物理想地也是高親和力化合物，因此也可給予較低有效濃度的化合物。本發(fā)明除所述化合物以外，還包括測(cè)定，所述測(cè)定可鑒定能夠抑制精子前向運(yùn)動(dòng)的化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物可結(jié)合到與抗-EPPIN抗體相同的位點(diǎn)，因此可作為所述抗體的小分子模擬物。另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物可通過抑制EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合來抑制精子活力。已建立并驗(yàn)證了2種可高通量篩選(HTS)化合物的測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些測(cè)定是基于PerkinElmer(Waltham,MA)開發(fā)的AlphaScreenTM測(cè)定的改編。AlphaScreenTM(擴(kuò)增發(fā)光鄰近均質(zhì)測(cè)定)測(cè)定中，將供體珠和受體珠(～200nm)用于保持相互作用蛋白分子。當(dāng)相互作用蛋白分子結(jié)合時(shí)(例如EPPIN{在供體珠上}和抗-EPPIN{在受體珠上})，單重態(tài)氧分子從供體珠擴(kuò)散到受體珠(～4μsec)，隨后熒光團(tuán)發(fā)射520-620nm光。在初級(jí)化合物篩選中，將組氨酸標(biāo)記的重組人EPPIN附著到NTA-供體珠，將抗-EPPIN(S21C；針對(duì)EPPINC-末端結(jié)構(gòu)域)附著到蛋白A-受體珠。這種表位特異的測(cè)定產(chǎn)生EPPIN和抗體之間強(qiáng)且穩(wěn)定的結(jié)合。該實(shí)施方案的一個(gè)方面中，對(duì)于二級(jí)化合物篩選，可使用結(jié)合生物素化SEMG1的供體珠和通過抗-EPPIN(N-末端)抗體結(jié)合EPPIN的受體珠和蛋白A-受體珠。該測(cè)定可使得SEMG1結(jié)合到EPPINC-末端上的其EPPIN結(jié)合位點(diǎn)。該實(shí)施方案的另一方面中，對(duì)于對(duì)照化合物篩選，可將改良的TruHits測(cè)定用于非特異性磁珠結(jié)合。一旦確定了化合物活性，同樣重要的是確定其他藥理性質(zhì)，包括吸附、分布、代謝、排泄和毒理學(xué)。許多已知篩選實(shí)驗(yàn)中的任何一種均可用于該目的。例如，稱為的細(xì)胞毒性測(cè)定，Promaga公司的發(fā)光細(xì)胞活力測(cè)定，其是一種可用于確定化合物毒性的自動(dòng)化高通量細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性篩選。另一個(gè)實(shí)施方案中，計(jì)算機(jī)輔助精子分析(CASA)可作為用于確定化合物對(duì)人類精子活力影響的活細(xì)胞化合物篩選。此外，為促進(jìn)使用不同精液的化合物IC50評(píng)價(jià)，減少由于不同精液樣本中精子質(zhì)量差異而導(dǎo)致的測(cè)定間誤差，開發(fā)了相對(duì)活力抑制指數(shù)(RMI)。其計(jì)算為:RMI＝[％活力*VSL]；活動(dòng)精子百分比(％活力)或前向運(yùn)動(dòng)精子百分比(％前向運(yùn)動(dòng)，RPMI)乘以直線速度(VSL)；測(cè)定了從軌跡開始到結(jié)束的直線平均速度，以μm/sec為單位。歸一化RMI可通過用每種實(shí)驗(yàn)條件的RMI除以相應(yīng)的DMSO對(duì)照計(jì)算。使用上述測(cè)定，篩選了超過100,000種化合物。所述篩選的數(shù)據(jù)可鑒定先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)簇。本文中描述的一種活性化合物簇是TZ4系列。TZ4系列是具有1,3,5三嗪環(huán)的化合物。TZ4先導(dǎo)化合物家族是由其他系列的起始篩選循環(huán)開發(fā)的?；诨衔飳?duì)接研究，使用EPPINC-末端的SEMG1結(jié)合位點(diǎn)，合成了先導(dǎo)化合物。在體內(nèi)，避孕藥必須結(jié)合到附睪中的EPPIN，并且在射精過程中結(jié)合到抗-EPPIN抗體的結(jié)合位點(diǎn)，與精液凝固蛋白(SEMG1)競爭結(jié)合到精子表面的EPPIN，或者增強(qiáng)精液凝固蛋白與EPPIN的結(jié)合。計(jì)算所得SEMG1抑制精子活力的EC50值是8.8μM?；钚曰衔锢硐氲腅C50值在該EC50值的一個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)，雖然具有較高或較低EC50值的化合物也是有用的，只要其可以有效劑量安全地施用。TZ4先導(dǎo)化合物家族中，TZ4_121([4-(3-羥基-4-甲氧基羰基氨基-苯基氨基)-6-(N'甲氧基羰基-肼基)-1,3,5-三嗪-2-基硫烷基]-乙酸乙酯]和2.[2-氨基-5-[4-乙氧基羰基甲基硫烷基-6-(N'-甲氧基羰基-肼基)[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-苯甲酸甲酯])的CASAIC50RPMI值為7.5μM。TZ4_121可在3分鐘內(nèi)殺死>70％精子。預(yù)測(cè)其在體內(nèi)對(duì)活力的影響與SEMG1相同。Lipinski五規(guī)則是評(píng)價(jià)化合物是否具有可使其成為人類可口服活性藥物性質(zhì)的概測(cè)法。所述規(guī)則描述了對(duì)人體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)重要的分子性質(zhì)，包括其吸收、分布、代謝和排泄(“ADME”)。依據(jù)該規(guī)則，化合物應(yīng)具有不超過5個(gè)氫鍵供體(氮?dú)滏I和氧氫鍵總數(shù))，不超過10個(gè)氫鍵受體(所有氮或氧原子)，分子量小于500道爾頓，并且辛醇-水分配系數(shù)logP不大于5。本文所述化合物中，最具活性化合物TZ4_121(另外的氫鍵受體除外)不違反該規(guī)則。因此，相信本文所述化合物可口服生物利用。除可模擬抗-EPPIN抗體的化合物以外，還發(fā)現(xiàn)某些化合物與精液凝固蛋白結(jié)合相同的EPPIN位點(diǎn)(與變構(gòu)位點(diǎn)相反)，并且比精液凝固蛋白結(jié)合更緊密，因此可抑制EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體形成。其他化合物可結(jié)合EPPIN的變構(gòu)位點(diǎn)，并以這種方式抑制EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體形成。還有其他化合物可增強(qiáng)EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體形成。任意所述實(shí)施方案可抑制精子前向運(yùn)動(dòng)?？赡M抗-EPPIN抗體與EPPIN結(jié)合或者可抑制精液凝固蛋白結(jié)合到EPPIN并因此可抑制精子前向運(yùn)動(dòng)的化合物可用于臨時(shí)且可逆地產(chǎn)生雄性不育。所述化合物可包含在組合物中，其理想地是口服或經(jīng)皮膚的組合物，其可釋放適量的化合物以產(chǎn)生所述效應(yīng)。例如，所述化合物可以每日一次的片劑或丸劑使用，或者以皮膚貼片使用超過一天的一段時(shí)間，很大程度上與女性避孕藥方式相同。另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物可用于補(bǔ)充或替代殺精子組合物中的殺精子劑，例如與避孕套、隔膜和殺精膠凍劑(jelly)結(jié)合使用的那些。也就是說，由于所述化合物與精子接觸即可具有抑制前向運(yùn)動(dòng)的功能，不需要將其攝入以發(fā)揮作用。因此，本文所述的本發(fā)明具有超越現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，所述優(yōu)勢(shì)在于使用者可選擇具有體內(nèi)活性的化合物的雄性避孕以在射精前抑制精子的前向運(yùn)動(dòng)，或者在射精后使用所述化合物以抑制精子的前向運(yùn)動(dòng)。參考以下詳細(xì)描述可更好地理解本發(fā)明。附圖說明圖1是示出TZ4_121化合物分析結(jié)果的圖表。圖2是示出TZ4_121化合物IC50值的圖表，數(shù)據(jù)以對(duì)照值vs.LogTZ4_121濃度的百分比示出。圖3和4是示出使用計(jì)算機(jī)輔助精子分析(CASA)所評(píng)估的精液凝固蛋白(圖3)及化合物TZ4-121(圖4)的IC50值的圖表。數(shù)據(jù)以log精液凝固蛋白濃度或logTZ4_121濃度(log(μM)vs.RMI(相對(duì)活力指數(shù)))示出。圖5是TZ4_121抑制精子活力有效度的時(shí)程研究，RMIvs.孵育分鐘?！链鞤MSO(對(duì)照)；圓代表濃度10μM的TZ4_121；三角形代表濃度20μM的TZ4_121。圖6是示出使用緩沖液(對(duì)照)、10μM和20μMTZ4_121以及抗-EPPIN抗體(Ab007)處理后內(nèi)部精子pH減低的圖表。圖7是示出使用12.5μM的TZ4_121處理后精子活力變化的圖表。3對(duì)柱的每一對(duì)中，最左邊柱為對(duì)照，最右邊柱是處理后的對(duì)照百分比?；盍σ运俣?μm/sec)、前向運(yùn)動(dòng)百分比和％活力形式示出。圖8是精液凝固蛋白(SEMG1)的氨基酸E229-Q247與EPPIN結(jié)合的圖示，圖示顯示精液凝固蛋白結(jié)合EPPIN的氨基酸Y107和N114。圖9示出TZ4_121與EPPIN的C-末端部分的對(duì)接結(jié)果，其使用Swiss-Dock法。圖10示出施用TZ4-121(在圖中稱為EP7)、EP12、TZ4-121的去甲基化代謝物后精子活力變化(RMI,使用％前向運(yùn)動(dòng)(PM))的圖表?？招沫h(huán)代表2013年7月12日進(jìn)行的EP7實(shí)驗(yàn)，三角形代表EP12，實(shí)心環(huán)代表與EP12相同時(shí)間進(jìn)行的EP7實(shí)驗(yàn)。具體實(shí)施方式提供了適用于提供雄性避孕的化合物、鑒定這些化合物的測(cè)定方法以及使用所述化合物提供避孕的方法。雄性避孕靶標(biāo)EPPIN通過結(jié)合精液凝固蛋白(SEMG1)控制精液中的精子活力，這種結(jié)合可降低精子pH值，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣的損失和精子活力的喪失?？?EPPIN抗體可替代SEMG1并具有類似的效果。本文描述了模擬抗EPPIN結(jié)合的小分子量化合物，其可代替SEMG1，并提供非抗體、非激素雄性避孕藥。本文還描述了用于鑒定所述化合物的測(cè)定法，以及將所述化合物用作避孕藥的方法。參考以下定義可更好地理解本發(fā)明。定義EPPIN(SPINLW1；類絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有Kunitz和WAP結(jié)構(gòu)域1)是乳清酸性蛋白(WAP)型四二硫化物核心域(WFDC)基因家族成員。WFDC基因位于人染色體20q12-q13上的著絲粒和端粒兩個(gè)基因簇中(Claussetal.,2002)。EPPIN是端粒簇中的WFDC7，并且是以編碼Kunitz-型和WAP-型四二硫化物核心域蛋白酶抑制劑共有序列為特征的WFDC基因的原型(Richardsonetal.,2001)。EPPIN是睪丸/附睪特異蛋白(Richardsonetal.,Gene270,93(2001)和Sivashanmugam,etal.,Gene312,125(2003))。人類20號(hào)染色體上的EPPIN基因編碼兩個(gè)亞型，一個(gè)含有分泌信號(hào)序列另一個(gè)不含，各包含Kunitz-型和WAP-型(四二硫化物核心域)蛋白酶抑制劑共有序列。EPPIN代表人類20號(hào)染色體上蛋白酶抑制劑家族的第一類成員，其特征在于雙抑制劑共有序列(ibid)。具有差異表達(dá)的3種EPPIN剪接變體，EPPIN-1在睪丸和附睪中表達(dá)，EPPIN-2在附睪中表達(dá)，EPPIN-3在睪丸中表達(dá)。重組人類EPPIN(rhEPPIN)的制備已有詳細(xì)描述(Wangetal.,BiologyofReproduction,72:1064-1070(2005))，并且用于本發(fā)明實(shí)施例中的rhEPPIN缺失部分N-末端分泌信號(hào)序列，如Wangetal.,ibid中所述。簡言之，在大腸桿菌菌株M15[pREP-4]中制備rhEPPIN，并且在Ni2+-NTA柱(Qiagen,Valencia,Calif.；21)上從細(xì)菌裂解液中純化蛋白。純化的rhEPPIN使用前用磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.2)徹底地透析。本文所述測(cè)定中使用的重組EPPIN已使用FLAG標(biāo)簽標(biāo)記。精液凝固蛋白I(SgI)和精液凝固蛋白II(SgII)是由新射出的人類精液形成的凝結(jié)物的主要蛋白組分。這些蛋白主要見于精囊中，雖然附睪中可產(chǎn)生少量SgII。這些蛋白迄今未在其他組織中檢測(cè)到，Lundwalletal.,Mol.Hum.Reprod.8(9):805-10(2002年9月)。精液凝固蛋白-1具有如下序列：MKPNIIFVLSLLLILEKQAAVMGQKGGSKGRLPSEFSQFPHGQKGQHYSGQKGKQQTESKGSFSIQYTYHVDANDHDQSRKSQQYDLNALHKTTKSQRHLGGSQQLLHNKQEGRDHDKSKGHFHRVVIHHKGGKAHRGTQNPSQDQGNSPSGKGISSQYSNTEERLWVHGLSKEQTSVSGAQKGRKQGGSQSSYVLQTEELVANKQQRETKNSHQNKGHYQNVVEVREEHSSKVQTSLCPAHQDKLQHGSDIFSTQDELLVYNKNQHQTKNLNQDQQHGRKANKISYQSSSTEERRLHYGENGVQKDVSQSSIYSQTEEKAQGKSQKQITIPSQEQEHSQKANKISYQSSSTEERRLHYGENGVQKDVSQRSIYSQTEKLVAGKSQIQAPNPKQEPWHGENAKGESGQSTNREQDLLSHEQKGRHQHGSHGGLDIVIIEQEDDSDRHLAQHLNNDRNPLFT(SEQIDNO.2)(FrenchKC,RoanNRandMakhatadzeGI,“Structuralcharacterizationofsemencoagulum-derivedSEM1(86-107)amyloidfibrilsthatenhanceHIV-1infection,”Biochemistry,53(20),3267-3277(2014))。本文中，重組精液凝固蛋白是His-標(biāo)記的重組蛋白，例如Wangetal.,BiologyofReproduction,72:1064-1070(2005)中所述的，其內(nèi)容通過引用納入本文，其首次描述了EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合。該論文中，描述了精液凝固蛋白的兩種重組片段，其是通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)鑒定的。起始于氨基酸164并延伸到氨基酸283的片段與EPPIN結(jié)合。該片段可適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行His-標(biāo)記并用于本文所述測(cè)定。術(shù)語“活性成分”或“活性劑”意指可抑制EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合且抑制精子前向運(yùn)動(dòng)的化合物及其任意前藥、所述化合物和前藥的藥學(xué)上可接受的鹽、水合物和溶劑合物。術(shù)語“其他成分”意指與本發(fā)明所述活性化合物或其任意前藥及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物和溶劑合物進(jìn)行配制的任意賦形劑、稀釋劑、粘結(jié)劑、潤滑劑、載體、表面活性劑及其混合物。術(shù)語“適當(dāng)?shù)臅r(shí)間段”或“適合的時(shí)間段”意指達(dá)到需要的效應(yīng)或結(jié)果所必須的一段時(shí)間。例如，可將混合物混合直至效價(jià)分布達(dá)到給定應(yīng)用或所混合的混合物的使用可接受的范圍。本文中“載體(carrier)”或“載體(vehicle)”是指適于藥物施用的載體材料，所述施用具體地包括口服和經(jīng)皮膚施用，并且包括本領(lǐng)域公知的任意所述材料例如任意液體、凝膠、溶劑、液體稀釋劑、增溶劑等，其應(yīng)是無毒的并且不以有害方式與所述組合物的其他組分相互作用?？捎糜诮?jīng)皮膚制劑的適合載體的實(shí)例包括水、醇類例如異丙醇和異丁醇、多元醇例如甘油，以及二醇類例如丙二醇和所述多元醇的酯類(例如單-、二-或三-甘油脂類)?！笆芸刂频摹币庵秆?、血漿或通常存在于藥理活性試劑的某些施用路徑中的其他生物學(xué)流體中減低的或最小化的峰和谷暴露周期。本文中，經(jīng)皮膚制劑的“有效的”或“足夠的”滲透促進(jìn)劑意指可提供期望的皮膚滲透度增加以及相應(yīng)地期望的滲透深度、施用速率及遞送的藥物量的滲透促進(jìn)劑。本文中，術(shù)語“有效量”意指通過本領(lǐng)域公知的考慮所確定的、可產(chǎn)生暫時(shí)和可逆的雄性避孕的量。本文中，與經(jīng)皮膚施用相關(guān)的“透性增強(qiáng)”或“滲透增強(qiáng)”是指皮膚對(duì)藥理活性劑滲透度的提高，即，以提高藥物滲透通過皮膚(即，通量)及進(jìn)入血流的速率。使用所述促進(jìn)劑增強(qiáng)的滲透可使用本發(fā)明實(shí)施例所述擴(kuò)散池裝置通過測(cè)定藥物通過動(dòng)物或人類皮膚或適合的高分子膜的擴(kuò)散率(或通量)來觀察?！敖?jīng)皮膚”遞送，申請(qǐng)人意圖包括經(jīng)皮膚(或“經(jīng)皮”)以及經(jīng)粘膜施用，即通過皮膚或粘膜組織傳遞藥物進(jìn)行遞送并進(jìn)入血液?！俺掷m(xù)的”意指持久保持活性化合物的穩(wěn)態(tài)血漿水平。術(shù)語“單位用量(unitdose)”、“單位劑量(unitdosage)”或“單位劑量形式”意指含有經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生期望的治療效應(yīng)的預(yù)定數(shù)量活性成分的物理離散單元。劑型可以是任意適于施用的形式，例如經(jīng)口服或經(jīng)皮膚施用，所述形式是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。本文中術(shù)語“獨(dú)立地”用于表示可獨(dú)立應(yīng)用的變量，不同應(yīng)用之間變量可獨(dú)立地變化。因此，例如化合物R”XYR”中，R”是“獨(dú)立的碳或氮”，可以兩個(gè)R”都是碳、兩個(gè)R”都是氮、或者可以一個(gè)R”是碳而另一個(gè)R”是氮。除非另有說明，否則本文中術(shù)語“烷基”是指飽和的直鏈、支鏈或環(huán)狀的伯、仲、叔烴，包括取代的和未被取代的烷基。烷基可任選地被不會(huì)另外干擾反應(yīng)或者可提供所述方法中的改進(jìn)的任意基團(tuán)取代，這些基團(tuán)包括但不限于鹵素、鹵代烷基、羥基、羧基、酰基、芳基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物，烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫醇、亞胺基、磺?；?、硫烷基、亞磺酰基、氨磺?；?sulfamonyl)、酯、羧酸、酰胺、膦?；?、氧膦基、磷?；?、膦、硫酯、硫醚、酰鹵、酸酐、肟、肼、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯，未保護(hù)或根據(jù)需要保護(hù)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，例如Greene,etal.,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWileyandSons,SecondEdition,1991中所述的，其通過引用納入本文。具體地包括CH2F和CHF2。本文中，當(dāng)使用術(shù)語C(烷基范圍)時(shí)，該術(shù)語獨(dú)立地包括該類的每個(gè)成員，如同具體且單獨(dú)列出的那樣。術(shù)語“烷基”包括C1-6烷基基團(tuán)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，相關(guān)的烷基基團(tuán)是通過使用后綴“-yl”取代后綴“-ane”命名的。術(shù)語“烯基”是指直鏈或支鏈的不飽和烴基，其包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵。本發(fā)明公開的烯基可任選地用不會(huì)不利影響反應(yīng)進(jìn)程的任意基團(tuán)取代，包括但不限于用于烷基基團(tuán)上的取代基的那些基團(tuán)。烯基的非限制性實(shí)例包括乙烯、甲基乙烯、異亞丙基、1,2-乙烷-二基、1,1-乙烷-二基、1,3-丙烷-二基、1,2丙烷-二基、1,3-丁烷-二基和1,4-丁烷-二基。術(shù)語“炔基”是指直鏈或支鏈的不飽和無環(huán)烴基，其包含一個(gè)或多個(gè)三鍵。炔基可任選地用不會(huì)不利影響反應(yīng)進(jìn)程的任意基團(tuán)取代，包括但不限于上述用于烷基的那些基團(tuán)。適合的炔基的非限制性實(shí)例包括乙炔基、丙炔基、羥基丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、4-甲氧基戊炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-1-基、己炔-2-基和己炔-3-基、3,3-二甲基丁炔-1-基。術(shù)語“烷基氨基”或“芳基氨基”是指分別具有一個(gè)或兩個(gè)烷基或芳基取代基的氨基。除非另有定義，否則本文中術(shù)語“保護(hù)的”是指加入氧、氮或磷原子以阻止其進(jìn)一步反應(yīng)或?yàn)槠渌康牡幕鶊F(tuán)。各種各樣的氧和氮保護(hù)基團(tuán)是有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并描述于例如Greeneetal.,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis中，同上。單獨(dú)或組合使用的術(shù)語“芳基”是指包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)環(huán)的碳環(huán)芳族系統(tǒng)，其中所述環(huán)可以以懸垂方式連接在一起或者可以稠合。芳基的非限制性實(shí)例包括苯基、聯(lián)苯基或萘基，或在從芳環(huán)除去氫后殘留的其它芳族基團(tuán)。術(shù)語芳基包含取代的和未取代的基團(tuán)。芳基可任選地用不會(huì)不利影響化合物合成的任意基團(tuán)取代，包括但不限于上述用于烷基的那些基團(tuán)。一個(gè)實(shí)施方案中，芳基還可包括C5-10雜芳基環(huán)，例如噻吩、吡咯烷(pyrollidine)、吡啶和嘧啶，其可以與碳環(huán)芳基環(huán)相同的方式取代。術(shù)語“烷芳基”或“烷基芳基”是指具有芳基取代基的烷基。術(shù)語“芳烷基”或“芳基烷基”是指具有烷基取代基的芳基。更具體地，烷基芳基是C1-6烷基結(jié)合到C5-10芳基或雜芳基環(huán)，例如芐基，芳基烷基是C5-10芳基或雜芳基環(huán)結(jié)合到C1-6烷基。本文中，術(shù)語“鹵素”包括氯、溴、碘和氟。術(shù)語“酰基”是指羧酸酯，其中酯基的非羰基基團(tuán)選自直鏈、支鏈或環(huán)狀的烷基或低級(jí)烷基、烷氧基烷基包括但不限于甲氧基甲基、芳烷基包括但不限于芐基、酰氧基烷基例如苯氧基甲基、芳基包括但不限于苯基優(yōu)選地用鹵素(F、Cl、Br、I)、烷基(包括但不限于C1、C2、C3和C4)或烷氧基(包括但不限于C1、C2、C3和C4)取代、磺酸酯例如烷基或芳烷基磺?；ǖ幌抻诩谆酋；?、單磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯、三苯甲基或單甲氧基三苯甲基、取代的芐基、三烷基甲硅烷基(例如二甲基-叔丁基甲硅烷基)或二苯基甲基甲硅烷基。酯類中的芳基優(yōu)選地包含苯基。術(shù)語“低級(jí)酰基”是指其中的非羰基基團(tuán)為低級(jí)烷基的?；?。術(shù)語“烷氧基”和“烷氧基烷基”包括具有烷基的直鏈或支鏈含氧基團(tuán)，例如甲氧基。術(shù)語“烷氧基烷基”還包括具有連接到烷基的一個(gè)或多個(gè)烷氧基以形成單烷氧基烷基和二烷氧基烷基的烷基?！巴檠趸边€可被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子例如氟、氯、溴取代以提供“鹵代烷氧基”。所述基團(tuán)的實(shí)例包括氟甲氧基、氯甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟乙氧基、氟乙氧基、四氟乙氧基、五氟乙氧基和氟丙氧基。術(shù)語“烷基氨基”是指分別含有連接到氨基的一個(gè)或兩個(gè)烷基的“單烷基氨基”和“二烷基氨基”。術(shù)語芳基氨基是指分別含有連接到氨基的一個(gè)或兩個(gè)芳基的“單芳基氨基”和“二芳基氨基”。術(shù)語“芳烷基氨基”包含連接到氨基的芳烷基。術(shù)語芳烷基氨基是指分別含有連接到氨基的一個(gè)或兩個(gè)芳烷基的“單芳烷基氨基”和“二芳烷基氨基”。術(shù)語芳烷基氨基還指示包含一個(gè)芳烷基和連接到氨基的一個(gè)烷基的“單芳烷基單烷基氨基”。本文中，術(shù)語“雜原子”是指氧、硫、氮和磷。在一些實(shí)施方案中，活性化合物以胺類及其藥學(xué)上可接受的鹽的形式存在。適合的藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括無機(jī)酸加成鹽例如氯化物、溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽和硝酸鹽；有機(jī)酸加成鹽例如乙酸鹽、粘酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、乙醇酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、苯甲酸鹽和抗壞血酸鹽；含氨基酸的鹽例如賴氨酸鹽酸鹽、天冬氨酸鹽和谷氨酸鹽。所述鹽在某些情況下可以是水合的或乙醇溶劑化的。所述鹽可通過使本文所述活性化合物與適合的酸反應(yīng)來制備。對(duì)于經(jīng)皮膚施用，優(yōu)選的酸是脂肪酸以形成相對(duì)容易穿透皮膚的鹽。本文所述任意實(shí)施方案中，活性混合物的劑型通常包括一種或多種藥學(xué)上可接受的粘合劑、賦形劑、載體、稀釋劑、粘結(jié)劑、潤滑劑、助流劑或崩解劑，取決于活性成分應(yīng)用的目的。通常，經(jīng)皮膚制劑由其他成分制成，包括但不限于賦形劑、稀釋劑、載體、滲透促進(jìn)劑及其混合物。I.化合物在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物本身不抑制EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合，而是結(jié)合到EPPIN中抗-EPPIN抗體結(jié)合的部分。代表性抗-EPPIN抗體公開于O’Randetal.,BiologyofReproduction,80,279–285(2009)中。其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可抑制或增強(qiáng)EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合，并且可抑制人類及其他靈長類精子的前向運(yùn)動(dòng)。EPPIN-精液凝固蛋白復(fù)合體位于精子表面上?？捎玫幕衔锇╝)可結(jié)合到EPPIN上精液凝固蛋白(本文也稱為Sg)結(jié)合位點(diǎn)的化合物；b)以抑制精液凝固蛋白結(jié)合且模擬精液凝固蛋白效應(yīng)即阻止精子游動(dòng)的方式結(jié)合到變構(gòu)位點(diǎn)的化合物；和c)增強(qiáng)精液凝固蛋白與EPPIN的結(jié)合的化合物。理想地，模擬抗-EPPIN抗體結(jié)合的那些化合物可以比抗體本身更高的親和力結(jié)合，和/或干擾EPPIN精液凝固蛋白結(jié)合的那些化合物可以比精液凝固蛋白更高的親和力結(jié)合到活性結(jié)合口袋。這可使受試者施用比以較低結(jié)合親和力結(jié)合的化合物更低的有效濃度的所述化合物。理想地，以變構(gòu)方式結(jié)合的那些化合物也是高親和力化合物，以使得也可以施用較低有效濃度的所述化合物。經(jīng)高通量測(cè)定鑒定為可模擬抗-EPPIN抗體結(jié)合的化合物或可抑制EPPIN和精液凝固蛋白結(jié)合的化合物以及經(jīng)鑒定為對(duì)精子活力有負(fù)面影響的化合物可用于本發(fā)明的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通常具有下式之一：及其互變異構(gòu)體、前藥和藥學(xué)上可接受的鹽，其中：R1是-CH2R5,R2是H、C1-8烷基、C1-8鹵代烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、C(X)R6或C(X)XR6，R3是-NHR7、-C(X)NHR7、-NHC(X)R7、-NHC(X)XR7、-R8或–C(X)R8；R4是OR7或-C(X)OR7，R5是H、F、C1-8烷基、C1-8鹵代烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、-XC(X)XR6、C(X)XR6或C(X)R6,R6和R7是H、C1-8烷基、C1-8鹵代烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、芳基、芳基烷基或烷基芳基；R8是X是O、S或NR7，優(yōu)選是O,Y是O、S、NR7或C(R7)2,Zj是指數(shù)量為j的取代基Z，該取代基可以存在于苯環(huán)上的任意碳原子，其中j是0、1或2，每個(gè)Z取代基可獨(dú)立地選自包含C1-8烷基、C1-8取代的烷基、C2-8烯基、C2-8取代的烯基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、C3-8環(huán)烷基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基(包括雜芳基)、取代的芳基(包括雜芳基)、烷基芳基、取代的烷基芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、鹵素(例如F、Cl、Br或I)、-OR7、-N(R7)2、-CF3、-CN、-NO2、-C2R7、-SR7、-N3、-C(＝O)N(R7)2、-NR7C(＝O)R7、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7、-OC(＝O)R7、-O(CR6R7)rC(＝O)R7-、-O(CR6R7)rNR7C(＝O)R7、-O(CR6R7)rNR7SO2R7、-OC(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)OR7、-SO2R7、-SO2NR6R7和-NR7SO2R7的組。r是1到6的整數(shù)，且n是0、1、2或3。用于烷基、芳基(包括雜芳基)、環(huán)烷基等的術(shù)語“取代的”是指始于鹵素止于-NR7SO2R7的上述取代基；和其中所述化合物可以單個(gè)立體異構(gòu)體形式或立體異構(gòu)體混合物的形式存在。優(yōu)選的鹵代烷基是單-氟烷基，例如氟甲基。對(duì)于優(yōu)選的結(jié)構(gòu)，上式中所示的兩種類型雜芳環(huán)各包含三個(gè)環(huán)氮原子。當(dāng)進(jìn)行計(jì)算機(jī)分析和/或體外分析時(shí)，具有0、1或2個(gè)環(huán)氮原子的化合物不能很好地起作用。因此，上述提供的每一種式包含三個(gè)環(huán)氮原子。R5為H時(shí)，化合物的活性不如R5為F、-XC(X)XR6或C(X)XR6時(shí)的化合物活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種C＝X基團(tuán)是羰基(C＝O)。該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所有的C＝X基團(tuán)都是C＝O。當(dāng)C(X)XR6是酯(即兩個(gè)X變量都是O)時(shí)，所述酯可在體內(nèi)容易地被水解形成羧酸，也可能耐受體內(nèi)水解例如叔丁酯。這同樣適用于氨基甲酸酯和碳酸酯。當(dāng)C1-8鹵代烷基基團(tuán)存在并且是氟代甲基時(shí)，檢測(cè)到一個(gè)氟具有很好的作用，兩個(gè)氟作用較好但不如僅存在一個(gè)氟時(shí)，三氟甲基作用不好由于其將化合物推出了結(jié)合口袋。也就是說，存在一個(gè)氟或者兩個(gè)氟時(shí)是有利的。依據(jù)信息和理論，氟原子妨礙了化合物水解的速率。提供的代表性化合物如下：TZ4_121(EP007)EP012TZ4_121的脫乙基產(chǎn)物TZ4_125EP013TZ4_125的脫乙基產(chǎn)物TZ4_132EP025TZ4_132的脫乙基產(chǎn)物閉環(huán)結(jié)構(gòu)EP017(來自EP012)EP021(來自EP012)EP024(來自EP012)其中R1包含酯基的那些化合物例如-CH2-C(O)-OCH3，除非所述酯基空間受阻，否則其典型地在體內(nèi)代謝產(chǎn)生羧酸基團(tuán)。這些代謝產(chǎn)物是相對(duì)長久的，并且被認(rèn)為是活性形式。另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物通常具有下式：及其互變異構(gòu)體、前藥和藥學(xué)上可接受的鹽，該式中，R1、R3和R4定義如上。該實(shí)施方案的代表性化合物包括以下：本實(shí)施方案中最具活性的化合物是化合物B4(也稱作甲基N-{3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)硫烷基]-5-氧代-2,5-二氫-1,2,4-三嗪-6-基}甘氨酸鹽)。發(fā)現(xiàn)該化合物具有極強(qiáng)的活性(CASA＝11.4μM)。II.高通量測(cè)定開發(fā)了2種不同的高通量測(cè)定。一種是基于磁珠的測(cè)定，另一種是計(jì)算機(jī)測(cè)定。AlphaScreenTM測(cè)定AlphaScreen測(cè)定是基于磁珠的技術(shù)，其可研究不同類型的生物分子相互作用。當(dāng)受體珠和供體珠通過相互作用分子聚到一起(200nm)時(shí)，激發(fā)供體珠產(chǎn)生單重態(tài)氧分子(t1/2；4μsec)，其啟動(dòng)受體珠中的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)發(fā)射520–620nm光。AlphaScreen測(cè)定是在白色不透明384-孔微孔板(OptiPlate-384；PerkinElmer)中進(jìn)行的，終體積20μl或30μl，取決于所示的實(shí)驗(yàn)。除非另有說明，否則所有稀釋均使用測(cè)定緩沖液(100mMTris-HCl,0.1％牛血清白蛋白,質(zhì)量/體積,0.01％酪蛋白,質(zhì)量/體積,0.01％吐溫-20,體積/體積,pH8.0)制備。AlphaScreenTMIgG(蛋白A)檢測(cè)試劑盒(PerkinElmer)中，受體珠與蛋白A共軛，供體珠與鏈霉親和素共軛。實(shí)驗(yàn)在室溫、弱光下進(jìn)行。每種重組EPPIN構(gòu)建體(野生型、截短的和突變體)與抗-EPPINQ20E抗體和蛋白A受體珠預(yù)孵育30min。平行進(jìn)行地，重組生物素化的(bt)-SEMG1或bt-LTF與鏈霉親和素供體珠在相同條件下預(yù)孵育。將等體積的每種EPPIN/Q20E/蛋白A受體珠和bt-SEMG1/鏈霉親和素供體珠或bt-LTF/鏈霉親和素供體珠移入平板的孔中。測(cè)定組分的終濃度是58nMEPPIN、1nMbt-SEMG1或4nMbt-LTF、2nMQ20E抗體和10μg/ml珠。以至少4個(gè)重復(fù)吸取每組樣本。將平板頂部密封覆蓋并轉(zhuǎn)移到Synergy2多平臺(tái)自動(dòng)讀板裝置(Biotek)。搖動(dòng)2分鐘后，在16小時(shí)過程中每2小時(shí)進(jìn)行平板讀數(shù)：使用680/30濾波器激發(fā)，使用570/100濾波器發(fā)射，使用Gen5軟件(Biotek)中改良的AlphaScreenTM方案獲取數(shù)據(jù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生9個(gè)時(shí)間點(diǎn)。陰性對(duì)照在不含EPPIN、bt-SEMG1或bt-LTF且僅存在珠的相同條件下進(jìn)行。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的具體信號(hào)通過從其相應(yīng)的總信號(hào)減去背景信號(hào)(不存在bt-SEMG1或bt-LTF時(shí)得到)計(jì)算。為檢測(cè)測(cè)定敏感度和穩(wěn)定性，信號(hào)背景(S/B)比和Z0值依據(jù)此前描述[Wilsonetal.,J.Biomol.Screen,2003；8:522–532.]計(jì)算。濃度-響應(yīng)及競爭性實(shí)驗(yàn)濃度-響應(yīng)實(shí)驗(yàn)是在20μl測(cè)定體積中、使用漸增濃度的wt-EPPIN(1nM–1μM)、存在恒定濃度bt-SEMG1(0.5–4nM)或bt-LTF(4–8nM)條件下按照如上所述進(jìn)行的。類似地，漸增濃度的bt-SEMG1(0.1pM–1nM)或bt-LTF(3pM–8nM)存在恒定濃度EPPIN(58nM)條件下孵育。珠濃度為10μg/ml。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的具體計(jì)算按如上所述計(jì)算并用于通過非線性回歸曲線擬合確定EC50值。對(duì)于競爭性實(shí)驗(yàn)，30μl測(cè)定體積中將wt-EPPIN(10or30nM)和bt-SEMG1(1nM)或bt-LTF(2nM)在漸增濃度的非生物素化SEMG1(10pM–150nM)或LTF(100pM–600nM)存在下孵育。在此情況下，將wt-EPPIN和bt-SEMG1或bt-LTF與其上述相應(yīng)的珠預(yù)孵育，并將溶液按以下順序移入平板的孔中：5μl競爭蛋白稀釋液、10μlwt-EPPIN/Q20E/蛋白A受體珠和15μlbt-SEMG1/鏈霉親和素供體珠或bt-LTF/鏈霉親和素供體珠。珠濃度為15μg/ml。每種競爭濃度點(diǎn)具體信號(hào)的計(jì)算如上所述。通過非線性回歸曲線擬合計(jì)算IC50值，使用歸一化數(shù)據(jù)作為不存在競爭時(shí)特異性結(jié)合的百分比。與補(bǔ)充方法中所述相同條件下的AlphaScreenTruHits測(cè)定用作陽性對(duì)照(用于非特異性效應(yīng))。EPPIN同源建模使用SWISS-MODEL工作站[Arnoldetal.,Bioinformatics2006；22:195–201；Schwedeetal.,NucleicAcidsRes2003；31:3381–3385；andBordolietal.,NatProtocols2008；4:1–13]建立EPPINC-末端區(qū)域(K73-P133)的三維同源模型。模板鑒定后，基于與EPPINC-末端序列同一度百分比選擇(蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定[PDBID])4種模板：牛胰蛋白酶抑制劑(抑肽酶；1bpiA)、boophilin(2odyE)、textilinin-1(3bybB)和人類VI膠原蛋白α3鏈(1kthA)。然后使用所述模板作為參照結(jié)構(gòu)產(chǎn)生EPPIN結(jié)構(gòu)模型。使用QMEANZ-值比較所得三維模型的質(zhì)量(所產(chǎn)生模型的整體質(zhì)量)[22]。選擇具有最高QMEANZ值的模型，然后使用Swiss-PDBViewer4.04(瑞士生物信息研究所)產(chǎn)生EPPINC-末端模型圖并使用POV-Ray3.6(PersistenceofVisionRaytracerPtyLtd)渲染。在一個(gè)實(shí)施方案中，將計(jì)算機(jī)程序用于管理所述測(cè)定，通過記錄化合物的種類(identity)以及化合物的一種或多種性質(zhì)例如其對(duì)相關(guān)位點(diǎn)的結(jié)合親和力、活性等。通過此方式，可篩選一系列高通量多孔平板，并儲(chǔ)存可抑制EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合的化合物種類供以后使用。所述計(jì)算機(jī)程序是高通量篩選領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。II.化合物合成第一個(gè)實(shí)施方案的化合物可使用以下一般反應(yīng)制備：其中，DIPEA是N,N-二異丙基乙胺、ACN是丙烯腈、MeOH是甲醇、H2是氫、Pd是鈀。當(dāng)雜芳基不是三嗪時(shí)，可以使用以下起始材料：在一些實(shí)施方案中，-SR1是-SCH2C(O)OR7，一種可代謝形成碳環(huán)酸的酯。這些代謝物是活性化合物，并且可作為活性化合物施用。合成這些化合物時(shí)，由于羧酸基團(tuán)可能干擾用于制備最終化合物的任意反應(yīng)，可使用適合的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)羧酸基團(tuán)并在合成的稍后階段脫保護(hù)。芐酯是適合的保護(hù)基團(tuán)的一個(gè)實(shí)例，并且這些酯可與氫反應(yīng)形成游離酸和甲苯。本發(fā)明該實(shí)施方案中的化合物都包含至少1個(gè)芳環(huán)，并且每個(gè)芳環(huán)可獨(dú)立地被一種或多種如本文所定義的取代基進(jìn)一步取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)容易地理解，用作制備本發(fā)明化合物的起始材料的芳環(huán)以及化合物框架中的其他位點(diǎn)納入其他取代基可容易地實(shí)現(xiàn)。這些取代基本身可提供有用的性能，或者可用作進(jìn)一步合成加工的手柄。苯環(huán)可通過已知的化學(xué)作用(包括下述反應(yīng))進(jìn)行取代。例如，烷基取代基可以使用FriedelCraft烷基化反應(yīng)來添加。聯(lián)苯化合物可以通過用銅鹽處理芳基苯基鎂溴化物、通過芳環(huán)的氧化脫氫、或甲苯或其他甲基取代芳環(huán)的脫烷基化來合成。芳環(huán)可以是硝化的，并且所得苯環(huán)上的硝基可與亞硝酸鈉反應(yīng)形成重氮鹽。重氮鹽可通過已知的化學(xué)作用處理形成苯環(huán)上的多種取代基。重氮鹽可使用多種已知的方法被鹵化，這依據(jù)具體鹵素而不同。適合試劑的實(shí)例包括濃HBr中的溴/水、亞硫酰氯、pyr-ICl、氟和Amberlyst-A。在重氮化位置帶有取代基的多種其他類似物可由相應(yīng)的氨基化合物通過重氮中間體合成。重氮化合物可使用已知的化學(xué)方法制備，例如以上所述方法。硝基衍生物可通過與亞硝酸鹽的反應(yīng)而還原成胺化合物，典型地存在酸條件下。其他取代基類似物可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)由重氮鹽中間體產(chǎn)生，包括但不限于羥基、烷氧基、氟、氯、碘、氰基和巰基。例如，羥基-芳香族類似物可通過重氮鹽中間體與水反應(yīng)制備。芳環(huán)上的鹵素可以轉(zhuǎn)化為格氏試劑和有機(jī)鋰試劑，其然后可以與適合的醛或酮反應(yīng)以形成含醇的側(cè)鏈。同樣地，烷氧基類似物可由重氮化合物與醇反應(yīng)產(chǎn)生。重氮化合物還可用于合成氰基或鹵素化合物，如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。巰基取代基可使用Hoffmanetal.,J.Med.Chem.36:953(1993)中所述的技術(shù)獲得。以此產(chǎn)生的硫醇繼而可通過與氫化鈉及適合的烷基溴化物反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橥榱蚧〈?。隨后氧化可產(chǎn)生砜。上述化合物的酰氨基類似物可使用有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)通過相應(yīng)的氨基化合物與適合的酸酐或酰氯反應(yīng)來制備。羥基取代的類似物可用于通過與適合的酸、酰氯或酸酐反應(yīng)制備相應(yīng)的烷酰氧基取代的化合物。同樣地，羥基化合物是在缺電子芳環(huán)上通過親核芳族取代的芳氧基的前體。這種化學(xué)反應(yīng)是有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。醚衍生物也可以通過用烷基鹵化物與適合的堿進(jìn)行烷基化或通過Mitsunobu化學(xué)反應(yīng)由羥基化合物制備，其中通常使用三烷基-或三芳基膦和偶氮二甲酸二乙酯。典型Mitsunobu反應(yīng)條件見Hughes,Org.React.(N.Y.)42:335(1992)和Hughes,Org.Prep.Proced.Int.28:127(1996)。氰取代的類似物可被水解以提供相應(yīng)的甲酰胺取代的化合物。進(jìn)一步水解形成相應(yīng)的羧酸取代的類似物。使用氫化鋁鋰還原氰取代的類似物產(chǎn)生相應(yīng)的氨基甲基類似物。?；〈念愃莆锟捎上鄳?yīng)的羧酸取代的類似物通過與適合的烷基鋰反應(yīng)制備，使用有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)。羧酸取代的類似物可以通過與適合的醇和酸催化劑反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酯。具有酯基的化合物可以用硼氫化鈉或氫化鋁鋰還原，以產(chǎn)生相應(yīng)的羥甲基取代的類似物。這些類似物可通過使用常規(guī)技術(shù)與氫化鈉和適合的烷基鹵化物反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為帶有醚基團(tuán)的化合物?？蛇x擇地，羥甲基取代的類似物可與甲苯磺酰氯反應(yīng)以提供相應(yīng)的甲苯磺酰氧基甲基類似物，其可通過依次用亞硫酰氯和適合的烷基胺處理而轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的烷基氨基?；愃莆?。這些酰胺中的某些已知可容易地進(jìn)行親核酰基取代以產(chǎn)生酮。羥基取代的類似物可用于通過與N-烷基-或N-芳基異氰酸酯反應(yīng)制備N-烷基-或N-芳基氨基甲酰氧基取代的化合物。氨基取代的類似物可用于通過使用有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)分別與烷基氯甲酸酯和N-烷基-或N-芳基異氰酸酯反應(yīng)制備烷氧基甲酰胺基取代的化合物和脲衍生物。上述任意取代基可存在于本文所述化合物的任意或所有芳環(huán)上。第二個(gè)實(shí)施方案中的化合物可使用以下一般反應(yīng)方案制備。應(yīng)理解，所述方法步驟可產(chǎn)生多種異構(gòu)形式，所以步驟之間可能需要進(jìn)行產(chǎn)物分離。胺和羥基可以使用已知的化學(xué)反應(yīng)例如酰胺化、酯化、醚化等進(jìn)一步加工。III.包含所述化合物的藥物組合物存在藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑的條件下，使用本文所詳述的任意施用方式對(duì)患者施用有效量的上述化合物，可實(shí)現(xiàn)臨時(shí)且可逆的雄性避孕。當(dāng)然，所述處理對(duì)于任一精液來說未必是可逆的，但是一旦停止服用/使用所述化合物，對(duì)精子活力的影響即終止并且不育將逆轉(zhuǎn)。所述活性物質(zhì)可以液體或固體形式通過任意適合的路徑施用，例如經(jīng)口腔、腸胃外、腸內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、經(jīng)皮膚、鼻內(nèi)或局部施用。理想地，將所述化合物經(jīng)口腔或皮膚遞送以確保最大的患者依從度。所述活性化合物可包含在藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑中，其量足以向患者遞送治療有效量的化合物以抑制所治療患者的精子活力而不引起嚴(yán)重的毒性作用?！耙种屏俊币庵缸阋援a(chǎn)生對(duì)精子活力抑制效應(yīng)的活性成分量，如通過例如本文所述的測(cè)定所測(cè)量的。對(duì)于所有上述條件，優(yōu)選的化合物劑量范圍從約1到75mg/kg體重每天，優(yōu)選地1到20mg/kg體重每天，更普遍地每天給予受試者約0.1mg到約100mg每千克體重。所述化合物的有效劑量范圍可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方式計(jì)算。所述化合物可方便地以任意適合的劑型單位施用，包括但不限于每單位劑型包含7mg到3000mg，優(yōu)選地70mg到1400mg活性成分?？诜┝?0mg到1000mg通常是方便的。藥物組合物中活性化合物的濃度依賴于藥物的吸收、分布、代謝和排泄速率以及本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他因素。還應(yīng)理解，對(duì)于任意具體受試者，具體劑量方案應(yīng)依據(jù)個(gè)體需要和施用或指導(dǎo)所述組合物施用的人員的專業(yè)判斷隨時(shí)間調(diào)整，并且本文所列舉的濃度范圍僅為示例性的而不意圖限定要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。所述活性成分可一次施用或者可分為多個(gè)較小的劑量在不同時(shí)段施用。優(yōu)選地施用所述活性化合物的方式是口服?？诜M合物通常包含惰性稀釋劑或可食用載體。其可包含在膠囊中或者壓縮成片劑。為口服治療施用，可將所述活性化合物與賦形劑混合，并以片劑、錠劑或膠囊形式使用?？砂帉W(xué)上相容的粘合劑和/或佐劑材料作為組合物的部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可包含任意下述成分或類似性質(zhì)的化合物：粘合劑如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖、崩解劑如藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑如膠體二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時(shí)，除上述類型的物質(zhì)外還可包含液態(tài)載體例如脂肪油。此外，劑量單位形式可包含多種其他物質(zhì)，其改變劑量單位的物理形式，例如糖、蟲膠或其它腸溶劑的包衣。所述化合物可作為酏劑、懸液、糖漿劑、晶片、口香糖等的組分施用。除所述活性化合物外，糖漿劑還可包含蔗糖作為甜味劑以及某些防腐劑、染料及著色劑和調(diào)味劑。用于經(jīng)腸胃外、皮內(nèi)、皮下或局部施用的溶液或懸液可包含以下組分：無菌稀釋劑例如注射用水、鹽溶液、非揮發(fā)油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)張力的試劑如氯化鈉或右旋糖。腸胃外制劑可以封裝在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多劑量小瓶中?？蒯屩苿┍静糠忠玫年P(guān)于控釋制劑的所有美國專利均以引用方式全文納入本文。自從Kulkarnietal.,in1966("Polylacticacidforsurgicalimplants,"Arch.Surg.,93:839)報(bào)道了聚乳酸的合成和生物降解性以來，生物可降解聚合物領(lǐng)域發(fā)展迅速。已報(bào)道可用作遞送裝置的基質(zhì)材料的其他聚合物實(shí)例包括聚酐、聚酯如聚乙交酯和聚丙交酯-共-乙交酯、聚氨基酸如聚賴氨酸、聚環(huán)氧乙烷的聚合物和共聚物、丙烯酸封端的聚環(huán)氧乙烷、聚酰胺、聚氨酯、聚原酸酯、聚丙烯腈和聚磷腈。見例如Langer的美國專利No.4,891,225和No.4,906,474(聚酐)、Hutchinson的美國專利No.4,767,628(聚丙交酯，聚丙交酯-共-乙交酯酸)和Tice等的美國專利No.4,530,840(聚丙交酯、聚乙交酯和共聚物)。還可見于Hubbell等的美國專利No.5,626,863，其描述了作為組織接觸材料和可控釋放載體的可光聚合生物可降解水凝膠(聚合和交聯(lián)的大分子單體的水凝膠，其包含具有生物可降解單體或低聚物延伸的親水性低聚物，其是能夠聚合和交聯(lián)的封端單體或低聚物)；和Focal，Inc.提交的PCTWO97/05185，其涉及用作藥物遞送和組織治療劑的控制釋放劑的多嵌段生物可降解水凝膠。生物來源的可降解材料是公知的，例如交聯(lián)明膠。透明質(zhì)酸可交聯(lián)并作為可降解溶脹聚合物用于生物醫(yī)學(xué)用途(授予DellaValle等的美國專利No.4,957,744(1991)"Surfacemodificationofpolymericbiomaterialsforreducedthrombogenicity,"Polym.Mater.Sci.Eng.,62:731735])。許多分散系統(tǒng)目前用作或正在被開發(fā)用作物質(zhì)特別是生物活性化合物的載體。用于藥物和化妝品制劑的分散體系統(tǒng)可以分為懸液或乳劑。懸液定義為尺寸范圍從數(shù)納米到數(shù)百微米的固體顆粒，使用懸浮劑分散在液態(tài)介質(zhì)中。固體顆粒包括微球體、微膠囊和納米球。乳劑定義為一種液體在另一種液體中的分散體，其通過乳化劑例如表面活性劑和脂質(zhì)的界面膜穩(wěn)定。乳劑制劑包括油包水和水包油乳劑、多重乳劑、微乳劑、微滴和脂質(zhì)體。微滴是單層磷脂囊泡，其由具有內(nèi)部油相的球形脂質(zhì)層組成，如授予Haynes的美國專利No.4,622,219和No.4,725,442。脂質(zhì)體是通過將水不溶性極性脂質(zhì)與水溶液混合而制備的磷脂囊泡。將不溶性脂質(zhì)混入水中形成的不利熵可產(chǎn)生高度有序組裝的具有包埋的水溶液的同心封閉磷脂膜。Dunn,etal.,等的美國專利No.4,938,763公開了通過將非反應(yīng)性的水不溶性熱塑性聚合物溶解在生物相容性的水溶性溶劑中以形成液體，將液體置于體內(nèi)，并使溶劑消散以產(chǎn)生固體植入物而原位形成植入物的方法。聚合物溶液可以通過注射器置于體內(nèi)。植入物可以呈現(xiàn)其周圍空腔的形狀。另一個(gè)實(shí)施方案中，植入物由反應(yīng)性、液體低聚物聚合物形成，其不含溶劑并且在適當(dāng)位置固化以形成固體，通常添加固化催化劑。ElanCorporation，PLC的美國專利No.5,641,745公開了可控釋放的藥物制劑，其包含在生物可降解聚合物中的活性藥物以形成微球或納米球。生物可降解的聚合物適當(dāng)?shù)厥蔷?D,L-丙交酯或聚-D,L-丙交酯和聚-D,L-丙交酯-共-乙交酯的混合物。ElanCorporation，PLC的美國專利No.5,616,345描述了每天一次施用的可控吸收制劑，其包括與有機(jī)酸結(jié)合的活性化合物和圍繞該核心并含有主要比例的藥學(xué)上可接受的成膜的水不溶性合成聚合物和次要比例的藥學(xué)上可接受的成膜的水溶性合成聚合物的多層膜。美國專利No.5,641,515公開了基于生物可降解納米顆粒的可控釋放制劑。美國專利No.5,637,320公開了每天一次施用的可控吸收制劑。美國專利No.5,505,962描述了可控釋放的藥物制劑。經(jīng)皮膚遞送用于經(jīng)皮膚施用的組合物包括活性化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽包括脂肪酸鹽，并且可任選地還可以包括其他成分包括但不限于載體和賦形劑例如經(jīng)皮膚施用后可促進(jìn)活性成分經(jīng)皮膚吸收的滲透促進(jìn)劑。相對(duì)于口服劑型例如片劑或膠囊，經(jīng)皮膚遞送可以提供更快速或更持續(xù)的吸收，控制釋放并因此控制治療作用的開始，并避免肝首過代謝。對(duì)于吞咽片劑、膠囊或其他固體有困難的患者或具有腸衰竭的患者，可以優(yōu)選經(jīng)皮膚遞送途徑。由于其易于使用，對(duì)于否則可能忘記每日服用一次丸劑的患者，這種施用途徑也是優(yōu)選的。藥物的吸收量取決于許多因素。這些因素包括藥物濃度、藥物遞送載體、皮膚接觸時(shí)間、皮膚給藥面積、在吸收位點(diǎn)pH下藥物離子化和非離子化形式的比例、藥物分子的分子大小、藥物的相對(duì)脂溶性以及藥物對(duì)皮膚與制劑的相對(duì)親和力(如果藥物不容易從其制劑基質(zhì)釋放，則將實(shí)現(xiàn)非常少的藥物吸收)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地制備適合的經(jīng)皮膚組合物，其可考慮這些因素遞送適量的活性劑。經(jīng)皮膚遞送裝置用于遞送本發(fā)明化合物的經(jīng)皮膚遞送裝置可以是本領(lǐng)域公知的任意類型，包括通常用于通過經(jīng)皮膚途徑施用藥物的單片、基質(zhì)、膜和其它類型。除其他之外，所述裝置還公開于美國專利No.3,996,934、No.3,797,494、No.3,742,951、No.3,598,122、No.3,598,123、No.3,731,683、No.3,734,097、No.4,336,243、No.4,379,454、No.4,460,372、No.4,486,193、No.4,666,441、No.4,615,699、No.4,681,584和No.4,558,580、No.5,533,995中，其公開內(nèi)容以引用方式納入本文。所述裝置傾向于是柔性的，可良好地粘附到皮膚，并且具有對(duì)于待遞送藥物不可滲透的聚合物背襯(覆蓋物)，使得藥物通過皮膚施用。所述藥物或其藥學(xué)上可接受的鹽通常存在于溶液或分散相中，其可以是凝膠的形式，并且有助于藥物通過表皮的角質(zhì)層遞送并到達(dá)真皮供吸收。膜裝置膜裝置通常具有4層：(1)不可滲透的背襯；(2)儲(chǔ)層；(3)膜層(其可以是致密聚合物膜或微孔膜)，和(4)接觸粘合劑層，其以連續(xù)或不連續(xù)的涂層覆蓋整個(gè)裝置表面或圍繞膜層。可以用作不可滲透層的材料的實(shí)例是高、中和低密度聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚碳酸酯、聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯和層壓或涂覆有鋁箔的聚合物。其他的公開于本文提及的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)皮膚遞送裝置專利中。在其中儲(chǔ)層是流體或是聚合物的某些實(shí)施方案中，背襯層的外邊緣可以覆蓋儲(chǔ)層的邊緣并且通過與擴(kuò)散膜層的粘合或熔合而被密封。在這種情況下，儲(chǔ)層不需要具有暴露的表面。儲(chǔ)層在不可滲透的背襯下面并且含有載體液體通常為水和/或醇或其多元醇或酯，并且可包含或不含活性化合物。藥物在儲(chǔ)庫中的量取決于從所述裝置通過皮膚吸收的期望速率和預(yù)期的治療持續(xù)時(shí)間。除了載體液體和活性化合物之外，儲(chǔ)層還可包含稀釋劑、穩(wěn)定劑、載體、膠凝劑等。層壓裝置的擴(kuò)散膜層可以由致密或微孔的聚合物膜制成，其對(duì)藥物和載體液體具有必需的滲透度。優(yōu)選地，所述膜對(duì)于除藥物和載體液體以外的成分是不可滲透的，但是當(dāng)需要在皮膚表面緩沖時(shí)所述膜也應(yīng)當(dāng)對(duì)制劑中的緩沖液是可滲透的?？捎糜谥苽淠拥木酆衔锬さ膶?shí)例公開于美國專利No.3,797,454和No.4,031,894中。優(yōu)選的材料是聚氨酯、乙烯/乙烯醇共聚物或乙烯/乙酸乙烯酯。單片基質(zhì)(MonolithicMatrices)第二類經(jīng)皮膚系統(tǒng)是由單片基質(zhì)代表的。所述單片裝置的實(shí)例是美國專利No.4,291,014、美國專利No.4,297,995、美國專利No.4,390,520和美國專利No.4,340,043。其他的是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。經(jīng)皮膚遞送裝置的單片和基質(zhì)類型屏障通常包括：(1)多孔聚合物或開孔泡沫聚合物，例如聚氯乙烯(PVC)、聚氨酯、聚丙烯等。(2)高度溶脹或增塑的聚合物如纖維素、HEMA或MEMA或其共聚物、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基甲基纖維素(HEMC)等、聚乙烯醇(PVA)/聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或其它水凝膠或PVC、聚氨酯、乙烯/乙酸乙烯酯或其共聚物。(3)液體凝膠，通常包括水和/或含羥基溶劑如乙醇，并且通常含有膠凝劑如PVP、羧甲基纖維素(CMC)、Klucel、HPMC、藻酸鹽、高嶺石、膨潤土或蒙脫石、其他粘土填料、硬脂酸鹽、二氧化硅顆粒等。(4)無紡材料，由織物、纖維素、聚氨酯、聚酯或其他纖維制成。(5)海綿，其可以由天然或泡沫聚合物形成。(6)粘合劑，理想地，皮膚病學(xué)可接受的壓敏粘合劑例如有機(jī)硅粘合劑或丙烯酸粘合劑。下文更詳細(xì)地描述了經(jīng)皮膚遞送制劑的各種組分。聚合屏障材料代表性的聚合物屏障材料包括但不限于：聚碳酸酯，例如通過二羥基芳族化合物例如雙酚A的光氣化形成的那些，包括以商品名(通用電氣公司)出售的材料；聚氯乙烯，例如121(B.G.Goodrich化學(xué)公司)；聚酰胺類(“尼龍”)，例如聚己二酰己二胺，包括(E.I.DuPontdeNemours&Co.)。改性丙烯酸共聚物，例如由聚氯乙烯(60％)和丙烯腈(40％)形成的苯乙烯-丙烯酸共聚物等。聚砜，例如含有二亞苯基砜基團(tuán)的那些，例如P-1700(UnionCarbideCorporation)。鹵化聚合物，例如聚偏二氟乙烯例如(PennsaltChemicalCorporation)、聚氟乙烯例如(E.I.DuPontdeNemours&Co.)和聚氟鹵代烴例如(聯(lián)合化學(xué)公司)。聚氯醚，例如(HerculesIncorporated)及其它熱塑性聚醚?？s醛聚合物，例如聚甲醛例如(E.I.DuPontdeNemours&Co.)。丙烯酸樹脂，例如聚丙烯腈、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚甲基丙烯酸正丁酯等。也可以使用其它聚合物如聚氨酯、聚酰亞胺、聚苯并咪唑、聚乙酸乙烯酯、芳族和脂肪族、聚醚、纖維素酯例如三乙酸纖維素、纖維素、colledion(含11％氮的硝酸纖維素)、環(huán)氧樹脂、烯烴例如聚乙烯、聚丙烯、聚偏二氯乙烯、多孔橡膠、交聯(lián)的聚(環(huán)氧乙烷)、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)的聚(乙烯醇)、由兩種離子締合的聚合物形成的聚電解質(zhì)結(jié)構(gòu)，其類型如美國專利No.3,549,016和No.3,546,141所述，聚苯乙烯衍生物如聚(苯乙烯磺酸鈉)和聚(乙烯基芐基三甲基氯化銨)、聚(甲基丙烯酸羥乙酯)、聚(異丁基乙烯基醚)等。還可以使用來自上述聚合物列表的可通過多種比例單體反應(yīng)形成的大量共聚物。如果膜或其它屏障不具有足夠高的通量，則可以減小膜或屏障的厚度。但是，所述厚度不應(yīng)該降低到其可能撕裂的點(diǎn)，或者降低到可施用的藥物量太低的點(diǎn)。粘合劑經(jīng)皮膚藥物遞送制劑通常包括將裝置粘著到皮膚的接觸粘合劑層。在一些實(shí)施方案中，活性劑可以存在于粘合劑中。示例性粘合劑包括聚氨酯；丙烯酸或甲基丙烯酸樹脂例如丙烯酸或甲基丙烯酸與醇例如正丁醇、正戊醇、異戊醇、2-甲基丁醇、1-甲基丁醇、1-甲基戊醇、2-甲基戊醇、3-甲基戊醇、2-乙基丁醇、異辛醇、正癸醇或正十二烷醇的酯的聚合物，單獨(dú)或與烯鍵式不飽和單體如丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、N-烷氧基甲基丙烯酰胺、N-烷氧基甲基甲基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、衣康酸、乙酸乙烯酯、N-支鏈烷基馬來酰胺酸(其中所述烷基具有10到24個(gè)碳原子)、乙二醇二丙烯酸酯或其混合物共聚合；天然或合成橡膠例如苯乙烯丁二烯、丁基醚、氯丁橡膠、聚異丁烯、聚丁二烯和聚異戊二烯、聚乙酸乙烯酯、脲醛(unreaformaldehyde)樹脂、酚醛樹脂、間苯二酚甲醛樹脂、纖維素衍生物如乙基纖維素、甲基纖維素、硝化纖維素、乙酸丁酸纖維素和羧甲基纖維素和天然樹膠如瓜爾膠、阿拉伯膠、果膠、淀粉、糊精、白蛋白、明膠、酪蛋白等。粘合劑可以與增粘劑和穩(wěn)定劑復(fù)合，如本領(lǐng)域公知的。代表性有機(jī)硅粘合劑包括基于硅烷、鹵代硅烷或C1-18烷氧基硅烷單體的有機(jī)硅彈性體，特別是聚二甲基硅氧烷，其可以單獨(dú)使用或與有機(jī)硅增粘劑或有機(jī)硅增塑劑進(jìn)行制劑，并且其選自醫(yī)學(xué)上可接受的有機(jī)硅流體，即基于硅烷、鹵代硅烷或C1-18烷氧基硅烷的非彈性體有機(jī)硅。典型的有機(jī)硅粘合劑可從DowCorning獲得，商品名為液態(tài)載體經(jīng)皮膚制劑可包括多種組分，包括液態(tài)載體典型地C2-4烷醇例如乙醇、異丙醇、正丙醇、丁醇、多元醇或二醇如丙二醇、丁二醇、己二醇、乙二醇和/或純水。載體通常存在的量在約5％和約75％w/w之間，更典型地在約15.0％和約65.0％w/w之間，并且優(yōu)選在約20.0％和55.0％w/w之間。水可增加親水性活性劑在制劑中的溶解度，并可加速親脂性活性劑從制劑釋放。醇例如乙醇可增加角質(zhì)層脂質(zhì)流動(dòng)性或從角質(zhì)層提取脂質(zhì)的功能。如本文所討論的，二醇類也可以充當(dāng)滲透促進(jìn)劑。滲透促進(jìn)劑成功的經(jīng)皮膚遞送取決于藥物穿過皮膚的足夠的通量和足夠的皮膚表面積，以產(chǎn)生有效的血漿藥物濃度。出于消費(fèi)者接受的原因，經(jīng)皮膚系統(tǒng)的實(shí)際表面積被限制在約5cm2至100cm2。由于表面積的這種限制，許多藥物的治療性經(jīng)皮膚遞送需要增加固有的皮膚滲透度以獲得需要的通量。因此，開發(fā)了增強(qiáng)待施用藥物經(jīng)皮吸收的化合物。滲透促進(jìn)劑的描述可見于例如美國專利No.5,785,991、No.4,764,381、No.4,956,171、No.4,863,970、No.5,453,279、No.4,883,660、No.5,719,197以及文獻(xiàn)"PharmaceuticalSkinPenetrationEnhancement",J.Hadgraft,MarcelDekker,Inc.1993；"PercutaneousAbsorption",R.Bronaugh,H.Maibach,MarcelDekker,Inc.(1989)，B.W.Barry,"PenetrationEnhancersinSkinPermeation",Proceedingsofthe13thinternationalSymposiumonControlledReleaseofBioactiveMaterials,ed.byChaudry&Thies,ControlledReleaseSociety,Lincolnshire,Ill.,pp.136-137(1986),andCooper&Berner,"PenetrationEnhancers",inTheTransdermalDeliveryofDrugs,Vol.IIed.byKydonieusandBerner,CRCPress,BocaRaton,Fla.pp.57-62(1986),其每個(gè)的內(nèi)容以引用方式納入本文。滲透促進(jìn)劑應(yīng)該既可增強(qiáng)皮膚的滲透度，又在重復(fù)暴露時(shí)是無毒的、非刺激性的和非致敏的。代表性滲透促進(jìn)劑包括例如蔗糖單椰油酸酯、單油酸甘油酯、蔗糖單月桂酸酯、單月桂酸甘油酯、二甘醇單烷基醚如二甘醇單乙基或單甲基醚(P)、酯組分如丙二醇單月桂酸酯、月桂酸甲酯和乙酸月桂酯、單甘油酯如單月桂酸甘油酯、脂肪醇如月桂醇和2-乙基-1,3-己二醇，單獨(dú)或與油酸組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了具有皮膚滲透促進(jìn)益處的經(jīng)皮膚組合物，通過將活性化合物與飽和脂肪醇組合或形成所述化合物與一種或多種脂肪酸例如分別為式CH3-(CH2)n-CH2OH或CH3-(CH2)n-CH2COOH，其中n是8到22的整數(shù)，優(yōu)選8到12，最優(yōu)選10；或者與分別為式CH3-(CnH2(n-x))-OH或CH3-(CnH2(n-x))-COOH的不飽和脂肪醇或脂肪酸(其中n是8到22的整數(shù)并且x是雙鍵的數(shù)量)形成的鹽；并且優(yōu)選載體(vehicle)或載體(carrier)組合物中還有第二組分，其是二甘醇的單烷基醚優(yōu)選二甘醇單乙基醚或二甘醇單甲基醚，整合有C1-4醇優(yōu)選乙醇，多元醇優(yōu)選丙二醇以及純水?？墒褂枚w系，包括油酸或油醇和低級(jí)醇的組合或聚羧酸的低級(jí)烷基酯、脂肪族單羥基醇和脂肪族二醇的組合。代表性滲透增強(qiáng)劑包括脂肪醇和脂肪酸，以及二甘醇的單烷基醚例如二甘醇單乙基醚或二甘醇單甲基醚。脂肪醇通常以約0.1％至約20.0％w/w，優(yōu)選約0.2％至約10.0％w/w，更優(yōu)選約0.4％至約3.0％w/w的量存在。二甘醇單烷基醚通常以至多40.0％w/w，優(yōu)選約0.2％至25.0％w/w，更優(yōu)選約2.0％至約8.0％w/w的量存在。盡管不希望受特定理論的束縛，但據(jù)信某些滲透增強(qiáng)劑起作用以增強(qiáng)活性劑通過角質(zhì)層的滲透性的機(jī)制如下：脂肪醇因?yàn)槠溆H脂性主要分布于角質(zhì)層，并與角質(zhì)層脂質(zhì)相互作用。二甘醇單烷基醚可將親水性和親脂性活性劑溶解其中，并且促進(jìn)活性劑滲透到皮膚。二醇例如丙二醇充當(dāng)活性劑的助溶劑，因此可增加他們?cè)谥苿┲械娜芙舛?。此外，其傾向于溶劑化角質(zhì)層的細(xì)胞內(nèi)角蛋白，從而增強(qiáng)藥物的流動(dòng)性和皮膚含水量。膠凝劑膠凝劑例如卡波姆、羧乙烯或聚丙烯酸例如980或940NF、981或941NF、1382或1342NF、5984或934NF、ETD2020、2050、934PNF、971PNF、974PNF、AA-1USP等；纖維素衍生物如乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、乙基羥乙基纖維素(EHEC)、羧甲基纖維素(CMC)、羥丙基纖維素(HPC)(不同級(jí)別)、羥乙基纖維素(HEC)(級(jí))、HPMCP55，級(jí)等；天然樹膠如阿拉伯膠、黃原膠、瓜爾膠、藻酸鹽等；聚乙烯吡咯烷酮衍生物例如級(jí)；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物例如F級(jí)68,127等；其他例如殼聚糖、聚乙烯醇、果膠、veegun級(jí)等也可使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉可適用于本發(fā)明的其他膠凝劑或粘度劑(viscosant)。代表性膠凝劑包括但不限于980NF、F127、F68和AA-1USP。膠凝劑可存在約0.2％到約30.0％w/w，取決于聚合物的類型。防腐劑經(jīng)皮膚組合物還可包括一種或多種防腐劑和/或抗氧化劑。代表性防腐劑包括季銨鹽例如勞拉氯銨、苯扎氯銨、苯度氯銨、十六烷基氯化吡啶、溴化十六烷基三甲銨、度米芬；醇類例如芐醇、氯丁醇、鄰甲酚、苯乙醇；有機(jī)酸或其鹽例如苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、對(duì)羥基苯甲酸酯；或者絡(luò)合物形成劑如EDTA。代表性抗氧化劑包括丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、乙二胺四乙酸及其鈉鹽、D,L-α-生育酚。其他組分其它組分可包括稀釋劑例如纖維素、微晶纖維素、羥丙基纖維素、淀粉、羥丙基甲基纖維素等。可以加入賦形劑以調(diào)節(jié)組合物的張力，例如氯化鈉、葡萄糖，右旋糖、甘露醇、山梨醇、乳糖等。也可加入酸性或堿性緩沖液以控制pH。也可加入共溶劑或增溶劑如甘油、聚乙二醇、聚乙二醇衍生物、聚乙二醇660羥基硬脂酸酯(來自BASF的SolutolHS15)、丁二醇、己二醇等?？刂漆尫呕钚詣┛墒褂每蒯屩苿﹣砜刂苹钚詣┑氖┯?，其可依據(jù)所述制劑提供快速或持續(xù)的釋放，或其二者。存在多種本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的顆粒狀藥物遞送載體，其可以包括活性成分并以可控制的方式遞送他們。實(shí)例包括顆粒狀聚合藥物遞送載體例如生物可降解聚合物和非聚合組分形成的顆粒。所述顆粒狀藥物遞送載體可以是粉末、微粒、納米顆粒、微膠囊、脂質(zhì)體等形式。典型地，如果活性劑是未加入組分的顆粒形式，則其釋放速率依賴于活性劑自身的釋放。相反地，如果活性劑是作為活性劑和聚合物共混物的顆粒形式，則活性劑的釋放至少部分地通過除去聚合物(通常通過溶解或生物降解)來控制。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可提供起始快速釋放活性成分，然后持續(xù)釋放活性成分。美國專利No.5,629,011提供了該類型制劑的實(shí)例，其以引用方式全文納入本文。有多種使用經(jīng)皮膚遞送以時(shí)間-釋放方式遞送尼古丁的經(jīng)皮膚組合物(例如速率控制膜)，包括目前市售的用于女性避孕和尼古丁替代的治療劑。其還適于施用本發(fā)明的組合物。IV.提供可逆和臨時(shí)雄性避孕的方法用于口服或皮膚施用的化合物和組合物可用于提供可逆且臨時(shí)的雄性避孕。因?yàn)樗龌衔锿ㄟ^模擬抗-EPPIN抗體與EPPIN的結(jié)合或者抑制或增強(qiáng)EPPIN與精液凝固蛋白的結(jié)合起作用，一旦終止化合物施用，這種結(jié)合的抑制將終止，從而恢復(fù)生育力。一方面，所述化合物經(jīng)口服施用，優(yōu)選以每日一次形式，以提供雄性避孕。另一方面，所述化合物經(jīng)皮膚施用，理想地以較低頻率，例如每周一次或者每月一次，以提供雄性避孕。本領(lǐng)域技術(shù)人員可有效地遵循這些治療的施用而不需要過度試驗(yàn)。在確定用于個(gè)體患者適合的劑量以前，可能需要患者服用所述劑量一段特定的時(shí)間，例如一周或者一月，并定期測(cè)定精子活力以確保用于具體患者的劑量是適合的劑量。對(duì)于雄性避孕，所述組合物可以數(shù)種不同的劑量水平提供，以提供每個(gè)患者最佳的劑量。理想的劑量是，能可靠地提供避孕但不顯著超越實(shí)現(xiàn)所述避孕需要的劑量。V.殺精子組合物對(duì)于某些個(gè)體，預(yù)防疾病傳播與預(yù)防懷孕同樣重要。因此，需要與避孕套結(jié)合使用本發(fā)明的化合物來抑制精子前向運(yùn)動(dòng)(從而抑制受精)。對(duì)于某些其他個(gè)體，希望預(yù)防懷孕、希望避免口服避孕藥(個(gè)體或其配偶)以及希望避免使用避孕套。對(duì)于這類個(gè)體，需要與隔膜、女用避孕套或殺精潤滑劑或膠凍劑結(jié)合使用本發(fā)明的化合物以抑制精子前向運(yùn)動(dòng)(從而抑制受精)。這些實(shí)施方案中，所述組合物可包含其他試劑例如可局部抑制病毒、真菌和/或細(xì)菌感染的試劑。潤滑劑組合物在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物存在于用于性關(guān)系期間的預(yù)防性潤滑劑組合物中。所述潤滑劑組合物可以不與避孕套、女性避孕套或隔膜一起使用，但是當(dāng)與這樣的裝置一起使用時(shí)，可以在常規(guī)裝置有缺陷的情況下提供額外的安全限度(safetymargin)。潤滑劑組合物通常包括有效的潤滑劑、有效濃度的活性化合物以及可任選的抗微生物化合物，其可有效破壞人類免疫缺陷病毒(HIV，例如HIV-1和HIV-2)、皰疹病毒、人類乳頭瘤病毒(HPV)、乙型肝炎或丙型肝炎(HBV和HCV)病毒和其他病毒和/或細(xì)菌例如梅毒、淋病或衣原體，或真菌例如可引起酵母感染的真菌。所述抗微生物化合物也可以是以與本發(fā)明化合物不同的方式起作用的殺精子劑(即不抑制EPPIN-精液凝固蛋白結(jié)合或不抑制精子前向運(yùn)動(dòng))。例如，某些化合物與陰道粘膜反應(yīng)以形成對(duì)精子細(xì)胞滲入子宮的屏障，而沒有實(shí)質(zhì)性的有害副作用。預(yù)防性潤滑劑組合物還可以包括殺真菌劑，例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯。一種代表性的抗微生物化合物是氯己定及其鹽，特別是葡萄糖酸鹽或者雙葡糖酸鹽。氯己定擴(kuò)散到宮頸粘液中，產(chǎn)生限制排卵期間精子細(xì)胞穿透的懸浮液，并且導(dǎo)致其迅速失去活力。這在氯己定濃度超過0.1％時(shí)發(fā)生。因此，通過使用氯己定作為依據(jù)本發(fā)明的活性抗微生物化合物，氯己定在射精之前擴(kuò)散到宮頸粘液中并且實(shí)際上產(chǎn)生陰道的“密封袋”，其將保留所有的身體分泌物包括精液。存在的任何病毒也可以被氯己定破壞，高于0.1％濃度的氯己定可有效地破壞病毒的包膜，從而防止病毒穿透人體細(xì)胞。因此，包含本發(fā)明化合物和抗微生物化合物的潤滑劑可應(yīng)用于性器官以減少陰莖和陰道壁之間的摩擦，殺死體液中的任何細(xì)菌和病毒，并抑制精子活力(并可能破壞精子)。理想地，潤滑劑組合物的pH接近陰道組織的pH，因?yàn)槿绻麧櫥瑒┑膒H顯著超出該正常范圍，則這些組織可能被抑制再生。潤滑劑可以是化妝品應(yīng)用可接受的任何有效的潤滑劑或潤滑劑的組合。潤滑劑組合物可以包括醇或醇的混合物，并且優(yōu)選是水溶性的，因此它們可以與避孕套、女性避孕套和隔膜一起使用，并且還使可能在衣服或床單上形成的任何污漬最小化。可以使用任何水溶性潤滑劑，優(yōu)選的潤滑劑包括甘油和丙二醇。代表性的水溶性潤滑劑包括KY-膠凍劑和其它水基潤滑劑組合物中的那些。通過以下非限制性實(shí)施例可更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例1:制備本發(fā)明化合物的合成方法本文所述化合物TZ4_121、TZ4_125和TZ4_132的結(jié)構(gòu)如下所示：討論合成的所有化合物經(jīng)歷通用中間體3。從氰尿酰氯1開始，巰基乙酸乙酯取代一個(gè)氯，得到化合物2。然后用肼基甲酸甲酯處理化合物2，得到化合物3。TZ4_121的合成開始于使用氯甲酸甲酯和碳酸鈣形成氨基甲酸甲酯。然后將硝基官能團(tuán)還原，得到化合物6，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。兩當(dāng)量的化合物6與化合物3反應(yīng)，得到TZ4_121。TZ4_125的合成始于羧酸7。甲酯在含有催化性硫酸的甲醇中形成。然后將氨基甲酸甲酯引入步驟-2，一鍋法，但用光氣處理苯胺，然后用甲醇和分子篩處理，得到化合物9。還原硝基官能團(tuán)，得到化合物10，其無需進(jìn)一步純化即可使用。使化合物10與化合物3在Hunig's堿(DIPEA)存在下反應(yīng)，得到TZ4_125。TZ4_132從羧酸7開始，其用在MeOH中的催化性硫酸處理以形成甲酯8。將硝基官能團(tuán)還原，得到化合物11，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。使化合物11與化合物3在Hunig’s堿的存在下反應(yīng)，得到TZ4_132。結(jié)論:合成了多種TZ4系列的類似物并測(cè)試其活性。氰尿酰氯的容易獲得性允許通過改變分子的單個(gè)“臂”來合成多種類似物。例如，硫醇可以隨任意數(shù)量的硫醇而變化，氨基甲酸酯也可以改變?yōu)楦鞣N其它胺類，并且第三臂也可以變化以產(chǎn)生大量的類似物。實(shí)驗(yàn):分析方法細(xì)節(jié)分析性HPLC按如下進(jìn)行：化合物2(338BPAL58):將氰尿酰氯(5.4g，29.2mmol)和二異丙基乙胺(8ml，46.8mmol)在四氫呋喃(THF)(50ml)中合并，冷卻至0℃。在30分鐘內(nèi)滴加巰基乙酸乙酯(3.5g，29.2mmol)的THF溶液(10ml+2×1ml沖洗液)。將溶液溫?zé)嶂潦覝?，一旦達(dá)到室溫即反應(yīng)完成。除去溶劑。通過硅膠色譜(10％EtOAc/庚烷)純化，得到4.13g純化合物2。53％產(chǎn)率?；衔?(333PAL05):使化合物2(2.4g，9mmol)與二異丙基乙胺(1.9ml)在DCM(50mL)中合并。將反應(yīng)混合物在冰水浴中冷卻，滴加肼基甲酸甲酯(0.822g，9.1mmol)的DCM(20ml)溶液。使反應(yīng)燒瓶溫?zé)嶂潦覝?，其中通過LC/MS確定反應(yīng)完成。將混合物倒入水中，有機(jī)層用水(3×)洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。通過硅膠色譜法(20-50％EtOAc的庚烷溶液)純化，得到2.2g純物質(zhì)。77％產(chǎn)率?；衔?(336PAL36):向化合物4(1.5g，9.7mmol)在二惡烷(30ml)中的溶液中加入碳酸鈣(0.49g，4.9mmol)，然后加入氯甲酸甲酯(1.38g，14.6mmol)。將混合物加熱至80℃過夜。通過LC-MS指示反應(yīng)完成。過濾固體，真空蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法(3-10％MeOH/DCM)純化殘余物，得到1.3g純物質(zhì)。63％產(chǎn)率。化合物6(336PAL38):向化合物5(06.g，2.8mmol)在MeOH(25ml)中的溶液中加入Pd/C(10％，0.1g)，并用氫氣(50psi)處理1小時(shí)。通過LC-MS指示反應(yīng)完成。過濾固體，并濃縮得到0.6g產(chǎn)物。材料用于下一步而不需要純化。TZ4_121(336PAL39):向化合物3(0.1g，0.3mmol)在乙腈(10ml)中的溶液中加入化合物5(0.113g，0.6mmol)。將混合物室溫?cái)嚢柽^夜。LC-MS顯示形成約83％的產(chǎn)物。將溶劑蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物加載到ISCO柱上，通過色譜法(4-50％丙酮在二氯甲烷(DCM)中)純化，得到125mg產(chǎn)物。86％產(chǎn)率?；衔?(316PAL51):將5-硝基鄰氨基苯甲酸(1g，5.5mmol)懸浮于MeOH(20mL)中，加入0.5ml濃H2SO4。開始加熱，當(dāng)溫度達(dá)到回流時(shí)，固體開始溶解。將混合物在回流下加熱24小時(shí)，然后使其冷卻至室溫經(jīng)過整個(gè)周末。加入甲苯(20ml)，并將大部分甲醇(MeOH)煮沸掉。將溶液加熱至95℃3小時(shí)，并濃縮。將材料溶于乙酸乙酯(EtOAc)，用飽和NaHCO3(3×50mL)洗滌，然后用鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮成黃色固體。1g。93％產(chǎn)率。化合物9(338BPAL62):在氮?dú)庀?，向苯?(0.2g，1.02mmol)和K2CO3(0.42g，3.06mmol)的甲苯(10mL)溶液中逐滴加入光氣(15％的甲苯溶液，1.5mL)。立即產(chǎn)生黃色沉淀。攪拌1小時(shí)，直到反應(yīng)停止進(jìn)行(通過TLC消耗約50％起始材料)。加入干MeOH并使其劇烈攪拌～15小時(shí)。用EtOAc(100ml)和H2O(100ml)稀釋。將有機(jī)層用H2O(3×)洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。通過柱色譜法(15％EtOAc的庚烷溶液)純化該物質(zhì)，得到100mg產(chǎn)物。41％產(chǎn)率?；衔?0(338BPAL63):將硝基化合物9(100mg，0.42mmol)與Pd/C(10％，25mg)一起懸浮于乙醇(EtOH)(15ml)中。將反應(yīng)混合物氫化1.5小時(shí)，通過TLC確定反應(yīng)完成。通過硅藻土過濾催化劑并濃縮濾液。90mg。100％產(chǎn)率。TZ4_125(338BPAL64):向0℃下、化合物3(115mg，0.36mmol)和二異丙基乙基胺(DIPEA)(73μl，0.43mmol)的乙腈(20ml)溶液中歷時(shí)30分鐘逐滴加入苯胺10(82.5mg，0.36mmol)的乙腈(8ml+4ml沖洗液)溶液。除去冰水浴，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。將物質(zhì)通過硅膠色譜法純化，但仍不純。將柱中的物質(zhì)懸浮于Et2O(75ml)中并超聲處理。濾出固體，將濾液蒸發(fā)至泡沫狀。將泡沫狀物溶于Et2O(5ml)中，加入戊烷(50ml)。將燒瓶置于冷凍器中過夜。將固體過濾，用戊烷洗滌并干燥，得到所需化合物。19mg。11％產(chǎn)率?；衔?1(316PAL53):在Parr瓶中將化合物8(1g，5.1mmol)溶解于THF(50ml)中，并脫氣。加入Pd/C(10％，150mg)，吹掃燒瓶并充入氫氣。在40psi氫化24小時(shí)。LC-MS顯示起始物質(zhì)被消耗。通過硅藻土過濾掉催化劑，并用MeOH洗滌。將濾液濃縮成棕色油狀物?！?g。>95％產(chǎn)率。TZ4_132(316PAL54):向化合物3(250mg，0.78mmol)的ACN(5ml)溶液中加入化合物11(129mg，0.78mmol)，攪拌內(nèi)容物直至溶解。加入DIPEA(110mg，0.86mmol)的ACN(2ml)溶液，將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)濃縮至棕色油狀物，然后在EtOAc和水之間分配。分離有機(jī)層。將水層用EtOAc反萃取，并將合并的有機(jī)萃取物用0.1NHCl和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮。用乙醚(Et2O)研磨后，HPLC純度僅為93％。用ISCO泵(0-5％MeOH的DCM溶液)純化，得到白色固體。150mg。43％產(chǎn)率。實(shí)施例2：化合物TZ4121的多種性質(zhì)分析使用上述合成方法制備化合物TZ4_121，其具有以下結(jié)構(gòu)：該化合物的某些物理特性在下表中提供，其它性質(zhì)在圖1中提供。LogP2.9LogD(7.4)2.88分子量467.456極性表面積211.22范德華SA615.77受體，供體11，5pl5.54使用15個(gè)主要物理化學(xué)描述符的主成分分析(PCA)評(píng)價(jià)化合物，并與eDrugs和DrugBank的兩個(gè)亞文庫進(jìn)行比較，這些文庫定義了口服生物可利用的化合物。該評(píng)價(jià)顯示該化合物落在與其它已知的口服活性藥物相同的空間(特征)內(nèi)。進(jìn)行ADME(吸收、分布、代謝和排泄)研究。確定該化合物具有以下性質(zhì)：1.良好的溶解度100μM；2.Caco-2細(xì)胞滲透性差；0.2×10-6cm/sec；3.回收率高(93％)；無非特異性結(jié)合；4.人肝微粒體代謝T1/2＝41分鐘；5.體外毒理學(xué)；IC50～2×10-5M可以使用相同的方案測(cè)試另外的化合物：ADME-Tox:溶液性質(zhì)水溶解度(比濁測(cè)量法)在具體的測(cè)試濃度下由DMSO儲(chǔ)備溶液制備測(cè)試化合物的溶液。將溶液充分混合并等分到384孔板中，在37℃孵育1小時(shí)，并使用基于激光的微板濁度計(jì)在635nm下測(cè)量每種溶液中的光散射程度。計(jì)算每個(gè)濃度下的平均濁度計(jì)讀數(shù)，并與空白溶液和陽性對(duì)照(足以產(chǎn)生高于空白溶液的平均讀數(shù)的最小濃度下的膠乳溶液，通過校準(zhǔn)曲線確定)進(jìn)行比較。如果平均讀數(shù)小于陽性對(duì)照的讀數(shù)，則判定該化合物在該具體濃度可溶。如果平均讀數(shù)大于或等于陽性對(duì)照，將溶液報(bào)告為具有沉淀，并使用下式計(jì)算沉淀百分比值：％沉淀＝(測(cè)試化合物平均值–空白對(duì)照平均值)/(陽性對(duì)照平均值–空白對(duì)照平均值)×100體外吸收體外吸收使用Hidalgo,I.J.etal.(1989),Gastroenterology,96:736-749中所述方法進(jìn)行測(cè)量。滲透度測(cè)試化合物的表觀滲透系數(shù)(Papp)如下計(jì)算：其中，VR是受體室的體積，CR,end是在結(jié)束時(shí)間點(diǎn)受體室中測(cè)試化合物的濃度，Δt是孵育時(shí)間，A是細(xì)胞單層的表面積。CD,mid是供體側(cè)測(cè)試化合物的經(jīng)計(jì)算的中點(diǎn)濃度，其是在時(shí)間0分鐘的供體濃度和在結(jié)束時(shí)間點(diǎn)的供體濃度的平均值。CR,mid是受體側(cè)測(cè)試化合物的中點(diǎn)濃度，其是結(jié)束時(shí)間點(diǎn)的受體濃度的一半。將測(cè)試化合物的濃度表示為測(cè)試化合物的峰面積。從滲透度測(cè)定中回收測(cè)試化合物測(cè)試化合物的回收率計(jì)算如下：其中VD和VR分別是供體室和受體室的體積。CD,end是在結(jié)束時(shí)間點(diǎn)供體樣本中測(cè)試化合物的濃度。CR,end是在結(jié)束時(shí)間點(diǎn)受體樣本中測(cè)試化合物的濃度。CD0是在零時(shí)間時(shí)供體樣本中測(cè)試化合物的濃度。將測(cè)試化合物的濃度表示為測(cè)試化合物的峰面積。用于滲透度測(cè)定的熒光素評(píng)估使用熒光素作為細(xì)胞單層完整性標(biāo)記。在測(cè)試化合物的滲透度測(cè)定之后進(jìn)行熒光素滲透度評(píng)價(jià)(在兩側(cè)在pH7.4下的A-B方向)。Caco-2和MDR1-MDCKII細(xì)胞具有小于1.5×10-6cm/s的熒光素滲透度和MDCKII細(xì)胞具有2.5×10-6cm/s的熒光素滲透度的細(xì)胞單層被認(rèn)為是完整的，報(bào)告來自完整細(xì)胞單層的測(cè)試化合物的滲透度結(jié)果。ADME-Tox:體外代謝使用Obach,R.S.etal.(1997),J.Pharmacol.Exp.Ther.,283:46-58所述的方法評(píng)價(jià)體外代謝。固有清除率(微粒體，S9，冷凍保存的肝細(xì)胞，重組CYP，重組UGT)代謝穩(wěn)定性，表示為剩余母體化合物的百分比，通過比較化合物在某時(shí)間點(diǎn)相對(duì)于時(shí)間-0的峰面積進(jìn)行計(jì)算。根據(jù)化合物剩余(％)對(duì)時(shí)間的對(duì)數(shù)曲線初始線性范圍的斜率估計(jì)半衰期(T1/2)，假設(shè)一級(jí)動(dòng)力學(xué)。根據(jù)下式計(jì)算表觀固有清除率(CLint，單位為μL/min/pmol，μL/min/mg或μL/min/Mcell)：ADME-Tox:體外毒性細(xì)胞活力通過比較存在測(cè)試化合物時(shí)的熒光讀數(shù)與不存在測(cè)試化合物(對(duì)照)時(shí)的熒光讀數(shù)來計(jì)算對(duì)照活性百分比。隨后，通過從100減去對(duì)照值的百分比計(jì)算抑制百分比。通過濃度-響應(yīng)曲線的非線性回歸分析確定IC50值。參數(shù)通過Hill方程曲線擬合獲得。見例如Nociari,M.M.etal.(1998),J.Immunol.Meth.,213:157-167。結(jié)果見圖2,其顯示IC50約為17μM。實(shí)施例3:計(jì)算機(jī)測(cè)定該實(shí)施例的目的是確定保持與EPPIN結(jié)合并可抑制精子活力的關(guān)鍵SEMG1(在NCBI數(shù)據(jù)庫記錄的基因ID：6406)，殘基Cys239(肽中的C11)的任一側(cè)上的最小序列。確定該SEMG1序列為E229至Q247：E1HS3SKVQ7TS9LC11PAHQDKLQ19(SEQIDNO:3)作為該信息的結(jié)果，使用Silvaetal.,BiologyofReproduction,(2012)87(3):56,1–8中討論的方法構(gòu)建3D肽模型。簡言之，使用SWISS-MODEL工作站[Arnoldetal.,Bioinformatics2006；22:195–201；Schwedeetal.,NucleicAcidsRes2003；31:3381–3385；andBordolietal.,NatProtocols2008；4:1–13.]構(gòu)建了EPPINC末端區(qū)域(K73-P133)的三維同源性模型。模板鑒定后，基于與EPPINC-末端序列同一度百分比選擇(蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定[PDBID])4種模板：牛胰蛋白酶抑制劑(抑肽酶；1bpiA)、boophilin(2odyE)、textilinin-1(3bybB)和人類VI型膠原蛋白α3鏈(1kthA)。然后使用所述模板作為參照結(jié)構(gòu)產(chǎn)生EPPIN結(jié)構(gòu)模型。使用QMEANZ-值比較所得三維模型的質(zhì)量(所產(chǎn)生模型的整體質(zhì)量)[22]。選擇具有最高QMEANZ值的模型，然后使用Swiss-PDBViewer4.04(瑞士生物信息研究所)產(chǎn)生EPPINC-末端模型圖并使用POV-Ray3.6(PersistenceofVisionRaytracerPtyLtd)渲染。使用該模型，將SEMG1肽對(duì)接到EPPIN上。對(duì)接結(jié)果可將結(jié)合該肽的EPPIN的氨基酸殘基作圖。確定與SEMG1肽殘基特異性結(jié)合的EPPIN殘基：盡管不希望受到具體理論的束縛，但據(jù)信這些EPPIN殘基最可能是阻斷以抑制精子活力的關(guān)鍵殘基。如本文所述，化合物TZ4_121可結(jié)合EPPIN殘基Y107、N116和Q118。來自SEMG1肽結(jié)合的信息表明，活性化合物需要覆蓋結(jié)合位點(diǎn)約的表面積。這種相對(duì)大的尺寸對(duì)于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用位點(diǎn)并非出乎意料。實(shí)施例5:AlphaScreenTM測(cè)定:表位測(cè)定顯示可抑制抗EPPIN結(jié)合到EPPIN該化合物篩選測(cè)定中，將組氨酸標(biāo)記的重組人EPPIN附著到NTA-供體珠，將抗-EPPIN(S21C；針對(duì)EPPINC-末端結(jié)構(gòu)域)附著到蛋白A-受體珠。所述表位特異的測(cè)定產(chǎn)生EPPIN和抗體之間強(qiáng)且穩(wěn)定的結(jié)合。為高通量篩選(HTS)化合物，調(diào)整了PerkinElmer(Waltham,MA)開發(fā)的AlphaScreenTM測(cè)定。AlphaScreenTM(擴(kuò)增發(fā)光鄰近均質(zhì)測(cè)定)測(cè)定中，將供體珠和受體珠(～200nm)用于保持相互作用蛋白分子。當(dāng)相互作用蛋白分子結(jié)合時(shí)(例如EPPIN{在供體珠上}和抗-EPPIN{在受體珠上})，單重態(tài)氧分子從供體珠擴(kuò)散到受體珠(～4μsec)，隨后熒光團(tuán)發(fā)射520-620nm光。實(shí)施例4:計(jì)算機(jī)輔助精子測(cè)定(CASA)結(jié)果將計(jì)算機(jī)輔助精子測(cè)定(CASA)作為用于確定化合物對(duì)人類精子活力影響的活細(xì)胞化合物篩選。計(jì)算機(jī)輔助精子測(cè)定(CASA)使用Mitraetal.,BiologyofReproduction,Vol.82,p491(2010)所指示的方法進(jìn)行，以確定對(duì)照比化合物處理精子的參數(shù)。測(cè)量的參數(shù)是：平均路徑速度(VAP：以lm/sec為單位的平滑細(xì)胞路徑的平均速度)、直線速度(VSL：在從軌跡的開始到結(jié)束的直線上測(cè)量的平均速度lm/sec)、曲線速度(VCL：以lm/sec計(jì)的在細(xì)胞的實(shí)際點(diǎn)對(duì)點(diǎn)軌跡上測(cè)量的平均速度)、頭部側(cè)向移位幅度(ALH：以1m計(jì)的頭部側(cè)向位移的幅度)、交打頻率(BCF：精子頭部穿過精子平均路徑的頻率，單位為Hz)、平直度(STR：VSL/VAP比率的平均值，以％計(jì))和線性度(LIN：VSL/VCL比率的平均值，以％計(jì))。精子活力參數(shù)在預(yù)熱(37℃)的兩或四室20-mmLeja載玻片中評(píng)估，每個(gè)室中分別加載5μL或2μL樣品，并立即使用CASA。該計(jì)算機(jī)測(cè)定裝置包括相差顯微鏡(OlympusCX41)、照相機(jī)、微型熱臺(tái)加熱器、圖像數(shù)字化儀和用于存儲(chǔ)和分析數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)。用于數(shù)據(jù)分析的軟件是HTRCeros12.3(Hamilton-ThorneBiosciences)。從每個(gè)室掃描13至20個(gè)視野的范圍。前向運(yùn)動(dòng)細(xì)胞必須具有最小25μm/sec的VAP和80％的STR。Hamilton-ThorneCeros12.3的參數(shù)列于下表中。Hamilton-ThorneCeros12.3的參數(shù)參數(shù)值幀速率(Hz)60采集的幀數(shù)60最小對(duì)比度80最小尺寸(像素)3默認(rèn)單元格大小(像素)6VAP(μm/sec)25STR(％)80慢細(xì)胞靜態(tài)VAP截值(μm/sec)5VSL截值(μm/sec)11標(biāo)準(zhǔn)物鏡10X腔室深度(μm)20溫度(℃)37在圖3和4中分別顯示了精液凝固蛋白和TZ4-121的數(shù)據(jù)。精液凝固蛋白的IC50值(約9μM)和TZ4-121的IC50值(約7.5μM)比較接近，因此預(yù)期活性大致相當(dāng)，TZ4-121活性略強(qiáng)。所述圖中，RMI＝相對(duì)活力。為促進(jìn)使用不同精液的化合物IC50評(píng)價(jià)，減少由于不同精液樣品中精子質(zhì)量差異而導(dǎo)致的測(cè)定間誤差，開發(fā)了相對(duì)活力抑制指數(shù)(RMI)。計(jì)算為：RMI＝[％活力*VSL]；活動(dòng)精子的百分比(％活力)或前向運(yùn)動(dòng)精子百分比(％前向運(yùn)動(dòng)，RPMI)乘以直線速度(VSL)；在從精子軌跡的開始到結(jié)束的直線上測(cè)量的以μm/sec為單位的平均速度。通過用每個(gè)實(shí)驗(yàn)條件的RMI除以其各自的DMSO對(duì)照計(jì)算歸一化RMI(RPMI)。評(píng)估精子活力的時(shí)間曲線(圖5)，并且數(shù)據(jù)顯示在約20μM的濃度下，TZ4-121可能在約3-5分鐘內(nèi)導(dǎo)致不育。使用該篩選測(cè)定，可以高通量方式鑒定可有效抑制EPPIN與精液凝固蛋白結(jié)合的化合物。此技術(shù)已設(shè)計(jì)用于高通量篩選，并可適用于384孔板篩選化合物數(shù)據(jù)庫。強(qiáng)的陽性結(jié)果可以系列稀釋后重新測(cè)試，并且可以檢查仍然保持陽性的那些化合物的水溶解度、親脂性(穿過細(xì)胞膜的能力)和化學(xué)穩(wěn)定性。具有藥物開發(fā)潛力(即溶解度、選擇性和效力)的化合物將被作為進(jìn)一步藥物開發(fā)的候選物，并且可能用于先導(dǎo)物優(yōu)化的化學(xué)過程。實(shí)施例6.作用機(jī)制–降低內(nèi)部精子pH進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)以確定本發(fā)明化合物的作用機(jī)制。如O’RandandWidgren,“LossofCalciuminHumanSpermatozoaviaEPPIN,theSemenogelinReceptor,”BiologyofReproduction,(2012)86(2):55,1–7中所述進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)。精子活力測(cè)定精子活力測(cè)定使用計(jì)算機(jī)輔助精子測(cè)定(CASA)(Cerosversion12.3software；Hamilton-Thorne)進(jìn)行，使用Mitraetal.,BiologyofReproduction,Vol.82,p491(2010)中所述技術(shù)。測(cè)定細(xì)胞內(nèi)游離鈣在37℃在50μlM16M中以1.13105-0.93105個(gè)精子/孔將負(fù)載Fluo-4AM的精子移入96孔黑壁板(PerkinElmer，Waltham，MA)中，并在BioTek(Winookski，VT)Synergy2多平臺(tái)自動(dòng)平板讀數(shù)器(帶加熱器和振動(dòng)器)中讀數(shù)。使用485/20濾器激發(fā)孔，用528/20濾器讀取發(fā)射，并使用Gen5軟件程序(BioTek)中的Alexafluor488方案的動(dòng)力學(xué)修飾獲得數(shù)據(jù)。在板中Fluo-4的校準(zhǔn)表明，無金屬的Fluo-4具有鈣飽和復(fù)合物的熒光的1/183。在用對(duì)照或測(cè)試試劑處理每個(gè)孔中的精子處理完成后(10-15分鐘)，通過加入離子霉素(2.5μM)校準(zhǔn)每個(gè)孔精子中的Fluo-4，15分鐘后加入Mn2(2mMMnCl2)使熒光(F)達(dá)到飽和染料的30％。15分鐘后，用1％TritonX-100裂解精子得到背景信號(hào)。使用每個(gè)孔的值，根據(jù)Kao等人的方法計(jì)算Fmax和Fmin[Kaoetal.，JBiolChem。1989；264：8179-8184]。依據(jù)以下等式將熒光測(cè)定值轉(zhuǎn)換為鈣濃度[Ca2+]＝Kd([F-Fmin]/[Fmax-F])Fluo-4的Kd(解離常數(shù))＝345nM將每個(gè)孔的讀數(shù)歸一化、平均，并且表示為百分?jǐn)?shù)。報(bào)告來自3個(gè)精液樣品的數(shù)據(jù)。每15分鐘(從t＝5分鐘至t＝65分鐘)從培養(yǎng)基中移出精子，離心并測(cè)量上清液中Fluo-4熒光，測(cè)定來自Fluo-4負(fù)載精子的染料滲漏[12]。在15分鐘時(shí)滲漏最小，孵育1小時(shí)后滲漏為5％。pH檢測(cè)將pH-敏感染料BCECF的AM酯衍生物(5μM；分子探針)用于檢測(cè)經(jīng)SEMG1處理的精子的pH變化。在不含牛血清白蛋白的培養(yǎng)基中用BCECF-AM加載精子30分鐘，離心以除去胞外染料，并重懸于M16M中。調(diào)節(jié)到50μlM16M中1.13105-0.93105個(gè)精子/孔，在37℃3.2μMSEMG1處理后使用BioTek(Winookski，VT)Synergy2多平臺(tái)自動(dòng)平板讀數(shù)器(帶加熱器和振動(dòng)器)檢測(cè)，使用485/20濾器激發(fā)孔，用528/20濾器讀取發(fā)射。立即讀取熒光并每10秒進(jìn)行記錄，將每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的讀數(shù)歸一化，進(jìn)行平均，并表示為相對(duì)熒光單位降低的百分?jǐn)?shù)。報(bào)告來自3個(gè)精液樣品的數(shù)據(jù)。經(jīng)活性化合物處理的精子中的鈣變化避孕的EPPIN的C-末端表位經(jīng)鑒定為氨基酸101-125(TCSMFVYGGCQGNNNNFQSKANCLN)(SEQIDNO.1)。針對(duì)EPPINS21C表位(SMFVYGGAQGNNNNFQSKANC)(SEQIDNO.4)的親和純化的兔抗體(抗-S21C抗體)具有與重組SEMG1類似的效應(yīng)，即可劑量依賴地抑制精子前向運(yùn)動(dòng)[O’Rand,etal.,Biol.Reprod.2009；80:279–285]。為確定施用本發(fā)明的化合物是否會(huì)導(dǎo)致[Ca2+]損失，在具有150μg/ml抗S21C抗體的自動(dòng)讀板儀中的單個(gè)96孔黑壁板的孔中在M16-改良的介質(zhì)(M16M)中，使用所述化合物例如濃度為10μM處理負(fù)載鈣指示劑Fluo-4的精子，并測(cè)定鈣水平。使用活性化合物處理人類精子用TZ4-121處理精子導(dǎo)致鈣顯著損失，其伴隨著pH的顯著降低(圖6)和前向運(yùn)動(dòng)顯著降低(圖7)。這些圖顯示，所述化合物具有與精液凝固蛋白類似的作用，即，可降低精細(xì)胞中的pH，導(dǎo)致活力抑制。該研究的結(jié)果顯示，靶向EPPIN的雄性避孕藥可通過結(jié)合活性化合物、導(dǎo)致pH降低及其后的細(xì)胞內(nèi)鈣損失，控制精液中的精子活力。因此，所述活性化合物可取代SEMG1并模擬抗-EPPIN結(jié)合，提供非抗體非激素雄性避孕藥的基礎(chǔ)。實(shí)施例7:使用ClusPro2的對(duì)接結(jié)果ClusPro2是基于網(wǎng)絡(luò)的服務(wù)，使用來自波士頓大學(xué)結(jié)構(gòu)生物信息學(xué)實(shí)驗(yàn)室的交互軟件程序。可將受體(蛋白)和配體(肽)輸入程序，并確定肽與受體對(duì)接位點(diǎn)的最佳匹配。ClusPro2的描述可見于例如Kozakovetal.,“HowgoodisautomatedproteindockingProteins:Structure,Function,andBioinformatics,”2013Aug；2159–2166中。SEMG1肽結(jié)合到EPPIN經(jīng)確定可保持結(jié)合EPPIN并抑制精子活力的關(guān)鍵SEMG1殘基Cys239(肽中的C11)任一側(cè)上的最小序列是SEMG1序列E229至Q247：E1HS3SKVQ7TS9LC11PAHQDKLQ19(SEQIDNO.3)。所述信息被用于構(gòu)建3D肽模型，并隨后將SEMG1肽對(duì)接至EPPIN。結(jié)果見圖8。實(shí)施例8:應(yīng)用SwissDock的對(duì)接結(jié)果SwissDock，基于EADockDSS的蛋白質(zhì)小分子對(duì)接網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，是來自瑞士生物信息研究所的交互式軟件程序?？蓪⑿〉挠袡C(jī)化合物結(jié)構(gòu)和具有對(duì)接位點(diǎn)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)輸入所述程序，并確定所述化合物與對(duì)接位點(diǎn)的最佳匹配。EPPIN同源建模使用SWISS-MODEL工作站(Silvaetal.,BiologyofReproduction(2012)87(3):56,1–8)構(gòu)建EPPINC-末端區(qū)(K73-P133)的三維同源模型。模板鑒定后，基于與EPPINC-末端序列同一度百分比選擇(蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定[PDBID])4種模板：牛胰蛋白酶抑制劑(抑肽酶；1bpiA)、boophilin(2odyE)、textilinin-1(3bybB)和人類VI膠原蛋白α3鏈(1kthA)。然后使用所述模板作為參考結(jié)構(gòu)產(chǎn)生EPPIN結(jié)構(gòu)模型。使用QMEANZ-值比較所得三維模型的質(zhì)量(所產(chǎn)生模型的整體質(zhì)量)[22]。選擇具有最高QMEANZ值的模型，然后使用Swiss-PDBViewer4.04(瑞士生物信息研究所)產(chǎn)生EPPINC-末端模型圖并使用POV-Ray3.6(PersistenceofVisionRaytracerPtyLtd)渲染。由于ClusPro僅能分析肽，并且目標(biāo)是評(píng)價(jià)小分子與EPPIN的結(jié)合，因此使用Swiss-Dock。將EPPIN結(jié)合位點(diǎn)的氨基酸輸入，然后添加TZ4_121的化學(xué)式，并使用所述軟件計(jì)算“最佳匹配”(最低能量：Δg)。通過該方法，評(píng)價(jià)了TZ4_121化合物(實(shí)心圓)在EPPIN表面的SEMG1結(jié)合位點(diǎn)的對(duì)接(圖9)。EPPIN與所述化合物之間的氫鍵如下所示(n＝3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn))。實(shí)施例9:代謝物的結(jié)果TZ4_121包含乙酯基團(tuán)。該基團(tuán)在體內(nèi)可代謝，因此使用以上所列技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以比較TZ4_121及其脫乙基化代謝物對(duì)精子活力的影響。圖10中數(shù)據(jù)顯示，代謝物的活性略強(qiáng)，其前向活力的IC50約為3.4μM，而母體化合物為4.3μM。雖然上述說明書教導(dǎo)了本發(fā)明的原理，提供了實(shí)施例用于說明目的，應(yīng)理解本發(fā)明的實(shí)踐包括落入所附權(quán)利要求及其等同物的范圍內(nèi)的所有通常的變化，修改和/或修改。本文引用的所有參考文獻(xiàn)以引用方式全文納入本文用于所有目的。序列表<110>北卡羅來納大學(xué)，教堂山<120>用于抑制雄性生育力的小分子<130>33859-001PCT(223022)<150>61/953,293<151>2014-03-14<160>4<170>PatentInversion3.5<210>1<211>24<212>PRT<213>人類<400>1ThrCysSerMetPheValTyrGlyGlyCysGlnGlyAsnAsnAsnAsn151015PheGlnLysAlaAsnCysLeuAsn20<210>2<211>461<212>PRT<213>人類<400>2MetLysProAsnIleIlePheValLeuSerLeuLeuLeuIleLeuGlu151015LysGlnAlaAlaValMetGlyGlnLysGlyGlySerLysGlyArgLeu202530ProSerGluPheSerGlnPheProHisGlyGlnLysGlyGlnHisTyr354045SerGlyGlnLysGlyLysGlnGlnThrGluSerLysGlySerPheSer505560IleGlnTyrThrTyrHisValAspAlaAsnAspHisAspGlnSerArg65707580LysSerGlnGlnTyrAspLeuAsnAlaLeuHisLysThrThrLysSer859095GlnArgHisLeuGlyGlySerGlnGlnLeuLeuHisAsnLysGlnGlu100105110GlyArgAspHisAspLysSerLysGlyHisPheHisArgValValIle115120125HisHisLysGlyGlyLysAlaHisArgGlyThrGlnAsnProSerGln130135140AspGlnGlyAsnSerProSerGlyLysGlyIleSerSerGlnTyrSer145150155160AsnThrGluGluArgLeuTrpValHisGlyLeuSerLysGluGlnThr165170175SerValSerGlyAlaGlnLysGlyArgLysGlnGlyGlySerGlnSer180185190SerTyrValLeuGlnThrGluGluLeuValAlaAsnLysGlnGlnArg195200205GluThrLysAsnSerHisGlnAsnLysGlyHisTyrGlnAsnValVal210215220GluValArgGluGluHisSerSerLysValGlnThrSerLeuCysPro225230235240AlaHisGlnAspLysLeuGlnHisGlySerAspIlePheSerThrGln245250255AspGluLeuLeuValTyrAsnLysAsnGlnHisGlnThrLysAsnLeu260265270AsnGlnAspGlnGlnHisGlyArgLysAlaAsnLysIleSerTyrGln275280285SerSerSerThrGluGluArgArgLeuHisTyrGlyGluAsnGlyVal290295300GlnLysAspValSerGlnSerSerIleTyrSerGlnThrGluGluLys305310315320AlaGlnGlyLysSerGlnLysGlnIleThrIleProSerGlnGluGln325330335GluHisSerGlnLysAlaAsnLysIleSerTyrGlnSerSerSerThr340345350GluGluArgArgLeuHisTyrGlyGluAsnGlyValGlnLysAspVal355360365SerGlnArgSerIleTyrSerGlnThrGluLysLeuValAlaGlyLys370375380SerGlnIleGlnAlaProAsnProLysGlnGluProTrpHisGlyGlu385390395400AsnAlaLysGlyGluSerGlyGlnSerThrAsnArgGluGlnAspLeu405410415LeuSerHisGluGlnLysGlyArgHisGlnHisGlySerHisGlyGly420425430LeuAspIleValIleIleGluGlnGluAspAspSerAspArgHisLeu435440445AlaGlnHisLeuAsnAsnAspArgAsnProLeuPheThr450455460<210>3<211>19<212>PRT<213>人類<400>3GluHisSerSerLysValGlnThrSerLeuCysProAlaHisGlnAsp151015LysLeuGln<210>4<211>21<212>PRT<213>人類<400>4SerMetPheValTyrGlyGlyAlaGlnGlyAsnAsnAsnAsnPheGln151015SerLysAlaAsnCys20當(dāng)前第1頁1 2 3