本申請要求2014年4月1日提交的美國臨時申請?zhí)?1/973,366的權(quán)益，該案內(nèi)容據(jù)此以引用的方式并入。

有關(guān)聯(lián)邦資助的研究或開發(fā)的聲明

本研究獲得了國立衛(wèi)生研究院(NIH)撥款號5R01CA163764-03的支持。美國政府在本發(fā)明中可享有某些權(quán)利。

領(lǐng)域

本公開涉及σ-2受體結(jié)合化合物和組合物，及其作為藥物用于治療疾病的應(yīng)用。更確切地說，實施方案涉及σ-2受體配體-藥物綴合物、其合成及其用于治療如癌癥的過度增生性疾病的用途。

相關(guān)技術(shù)的說明

胰腺癌是癌癥死亡的第四大主導(dǎo)原因，并且預(yù)計到2020年將成為第二大主導(dǎo)原因。利用當(dāng)前的治療選擇，胰腺癌的五年存活率僅僅是5.8％，并且迫切需要新的療法。

σ-2受體(S2R)在胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)細(xì)胞中過表達(dá)并且對于S2R配體具有高親和力。S2R配體局限于PDAC細(xì)胞并且迅速被癌細(xì)胞內(nèi)化，最終引起細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡。在胰腺癌模型中，S2R配體還使常規(guī)抗癌化學(xué)療法更有效力，并提高存活率。

使用連接至小分子成像標(biāo)簽的S2R配體已經(jīng)證實，S2R配體優(yōu)先結(jié)合至胰腺癌，并且可以用于顯現(xiàn)癌細(xì)胞上的S2R。類似地，S2R配體可以連接至能夠選擇性遞送到癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)肽或擬肽。

埃拉汀(Erastin)，具有結(jié)構(gòu)：

是通過稱為鐵死亡(ferroptosis)的鐵依賴性非細(xì)胞凋亡過程介導(dǎo)細(xì)胞死亡，由此選擇性殺傷帶有致癌K-ras突變的細(xì)胞的一種藥物。然而，這一藥物在初始臨床試驗中表現(xiàn)不佳。

已經(jīng)在Stockwell，B.R.的美國專利申請公布2007/0161644中將埃拉汀描述為具有非細(xì)胞凋亡性的細(xì)胞殺傷特性。這一參考文獻(xiàn)還公開了某些埃拉汀類似物，如以下結(jié)構(gòu)的埃拉汀A

以下結(jié)構(gòu)的埃拉汀B

及以下結(jié)構(gòu)的脫甲基埃拉汀(稱為“化合物21”)

(本文中又稱SW V-27)。該申請的發(fā)明人聲稱，脫甲基埃拉汀的腫瘤細(xì)胞殺傷活性與埃拉汀相當(dāng)。Dixon，S.J.等人在Cell 149：1060-1072，2012中將埃拉汀描述為介導(dǎo)非細(xì)胞凋亡性、鐵依賴性氧化性細(xì)胞死亡(“鐵死亡”)。然而，這些參考文獻(xiàn)都未描述包含雙環(huán)部分的化合物，而且所描述的化合物也不介導(dǎo)細(xì)胞凋亡性細(xì)胞死亡。

McDunn，J.E.等人的美國專利8,143,222，以及Spitzer，D.等人，Cancer Res.72：201-209，2012和Hornick，J.R.等人，Molecular Cancer 9：298，2010公開了用于治療癌癥的化合物。這些參考文獻(xiàn)中公開的化合物包括了具有結(jié)合σ-2受體的靶向部分(Zeng，C.等人，Cancer Res，67：6708-6716，2007)及如細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)肽等細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)部分的分子。公開的化合物包括σ-2受體配體，如具有以下結(jié)構(gòu)的N-取代的9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基苯基氨基甲酸酯部分：

其中R可以選自由鍵、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₁₀烷基胺、C₁-C₁₀烷基酰胺、C₁-C₁₀雜烷基、C₁-C₁₀芳基、C₁-C₁₀雜芳基、酯及親水性聚合物組成的群組。在一些構(gòu)型中，該專利的化合物包括雙環(huán)苯基氨基甲酸酯部分的烷基胺衍生物，如

(當(dāng)n＝1時，稱為SV119)及具有以下結(jié)構(gòu)的SW43

盡管在這些參考文獻(xiàn)中公開的一些化合物被描述為具有腫瘤細(xì)胞殺傷活性，但公開的這些化合物都不介導(dǎo)鐵依賴性氧化性細(xì)胞死亡(鐵死亡)。

概述

因此，本發(fā)明人在本文中公開了新的組合物和化合物，及其合成方法，以及用于治療包括各種癌癥在內(nèi)的過度增生性病癥的方法。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括結(jié)構(gòu)式I的化合物

及其鹽，其中：W可以是芳基，如C₅-C₁₀芳基或C₅-C₁₀雜芳基，其中任一個可以被取代；X可以是連接部分，如但不限于，直鏈烷基鏈；并且Y可以是鐵死亡誘導(dǎo)部分，如埃拉汀、埃拉汀類似物如埃拉汀-A、埃拉汀-B、脫甲基埃拉汀，或埃拉汀模擬物。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了包含式I化合物及藥學(xué)上可接受的載劑、佐劑或媒介物的組合物。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了治療有需要的受試者的過度增生性病癥的方法，所述方法包括向該受試者施用式I化合物的步驟。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了治療有需要的受試者的過度增生性病癥的方法，所述方法包括依序施用或共施用式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及另一治療劑。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了用于人療法中的式I化合物。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了用于治療過度增生性病癥中的任何式I化合物。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了式I化合物用于制造供治療過度增生性病癥用的藥物的用途。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括以下結(jié)構(gòu)的化合物或其鹽

其中n是1至5的整數(shù)，并且R₁可以是H或甲基。在一些構(gòu)型中，這些實施方案的化合物或鹽包括化合物和鹽，n可以是1并且R₁可以是H。在一些構(gòu)型中，這些實施方案的化合物或鹽包括化合物和鹽，n可以是5并且R₁可以是H。在各種構(gòu)型中，這些實施方案的化合物的鹽可以是草酸鹽。

在各種實施方案中，這些化合物和其鹽可以用于治療癌癥的方法中。在各種構(gòu)型中，這些方法可以包括向有需要的受試者施用治療有效量的這些化合物或其鹽中的任一種。在各種構(gòu)型中，可以用這些化合物或其鹽中的任一種治療的癌癥可以是任何癌癥，如但不限于，胰腺癌或滑膜肉瘤。

在各種實施方案中，這些化合物和其鹽可以通過本文公開的方法合成。在一些構(gòu)型中，這些方法可以包括使結(jié)構(gòu)的化合物與結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng)，其中n可以是1至5的整數(shù)，并且R₁可以是甲基或H。在一些構(gòu)型中，n可以是1并且R₁可以是H。在一些構(gòu)型中，n可以是5并且R₁可以是H。

在一些構(gòu)型中，本教導(dǎo)包括用于治療癌癥的這些化合物或其鹽。在一些方面，癌癥可以是但不限于，胰腺癌或滑膜肉瘤。

在一些構(gòu)型中，本教導(dǎo)包括這些化合物或其鹽用于制造供治療癌癥用的藥物的用途。在一些方面，癌癥可以是但不限于，胰腺癌或滑膜肉瘤。

在各種實施方案中，本教導(dǎo)包括了合成式IV化合物的方法：

所述方法包括以下步驟：使結(jié)構(gòu)式V的化合物：

與結(jié)構(gòu)式VI的化合物反應(yīng)：

其中n是1至5的整數(shù)；并且R²可以是H或甲基。

附圖簡述

圖1示出埃拉汀和脫甲基埃拉汀(SW V-27)。

圖2A-C示出了本教導(dǎo)的化合物SW V-49s和SW V-50s的合成。

圖3示出了SW V-49s對Panc-1細(xì)胞中熒光σ-2配體SW120內(nèi)化的競爭性抑制作用。

圖4A-F示出了在體外在各種人(A-D)和鼠(E)胰腺癌細(xì)胞系上SW V-49s的活力分析。

圖5A-B示出在24小時(A)或7小時(B)治療后分析的由SW V-49s誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡性細(xì)胞死亡增加。

圖6示出了由SW V-49s誘導(dǎo)的鐵死亡性細(xì)胞死亡。

圖7示出在鼠模型系統(tǒng)中施用SW V-49s之后胰腺癌的腫瘤大小減小。

圖8示出在鼠模型系統(tǒng)中施用SW V-49s之后胰腺癌存活率是100％。

圖9示出SW V-49s和對照的細(xì)胞殺傷特征。

圖10示出用埃拉汀處理的細(xì)胞的細(xì)胞活力分析。

圖11A-B示出SW V-49s抑制胱氨酸攝取導(dǎo)致產(chǎn)生ROS。

圖12A-C示出SW V-49s處理誘導(dǎo)固有的細(xì)胞凋亡途徑。

圖13示出SW V-49s誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡性和ROS依賴性細(xì)胞死亡。

圖14A-E示出SW V 49s減少腫瘤生長并增加存活率。

詳述

縮寫和定義

為便于了解本公開，本文中使用的多個術(shù)語和縮寫定義如下：

在介紹本公開或其優(yōu)選實施方案的要素時，冠詞“一個”、“一種”“該”及“所述”意圖指存在一個或多個要素。

化學(xué)物質(zhì)和部分是根據(jù)Naming and Indexing of Chemical Substances for Chemical Abstacts^TM 2007版，American Chemical Society，2008命名，除非以下具體說明。

在未另外具體定義時，本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級”是指含有1至多至6個碳原子并且包括6個在內(nèi)。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級芳基”是指苯基或萘基，其中任一個可以任選被取代。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級雜芳基”是指1)包含五個或六個環(huán)成員的單環(huán)雜芳基，其中介于一個與四個之間的成員可以是選自由O、S及N組成的群組的雜原子；或2)雙環(huán)雜芳基，其中稠合環(huán)的每一個包含五個或六個環(huán)成員，其間包含一至四個選自由O、S及N組成的群組的雜原子。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級環(huán)烷基”是指具有介于三個與六個之間的環(huán)成員的單環(huán)環(huán)烷基。低級環(huán)烷基可以是不飽和的。低級環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基及環(huán)己基。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級雜環(huán)烷基”是指具有介于三個與六個之間的環(huán)成員的單環(huán)雜環(huán)烷基，其中介于一個或四個之間的環(huán)成員可以是選自由O、S及N組成的群組的雜原子。低級雜環(huán)烷基的實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基及嗎啉基。低級雜環(huán)烷基可以是不飽和的。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“低級氨基”是指-NRR′，其中R和R′獨立地選自由氫、烷基及低級雜烷基組成的群組，其中任一個可以任選被取代。此外，低級氨基的R和R′可以組合形成五元或六元雜環(huán)烷基，其中任一個可以任選被取代。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“氧基”或“氧雜”是指-O-。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“氧代”是指＝O。

術(shù)語“全鹵代烷氧基”是指所有氫原子都被鹵素原子置換的烷氧基。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“全鹵代烷基”是指所有氫原子都被鹵素原子置換的烷基。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“磺酸酯”、“磺酸”及“磺酸的”是指-SO₃H基團(tuán)及其陰離子，如用于形成鹽的磺酸。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“硫基”是指-S-。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“亞磺?；笔侵?S(O)-。

術(shù)語“N-磺酰胺基”是指RS(＝O)₂NR′-基團(tuán)，其中R和R′如本文所定義。

術(shù)語“S-磺酰胺基”是指-S(＝O)₂NRR’基團(tuán)，其中R和R′如本文所定義。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“硫雜”和“硫代”是指-S-基團(tuán)或氧原子被硫置換的醚。硫代基團(tuán)的氧化衍生物，即，亞磺?；突酋；?，包括在硫雜和硫代的定義中。

如本文中所使用，術(shù)語“硫代羰基”當(dāng)單獨使用時包括硫代甲酰基，即，-C(S)H，并且當(dāng)組合使用時是-C(S)-基團(tuán)。

術(shù)語“N-硫代氨甲?；笔侵窻OC(S)NR′-基團(tuán)，其中R和R′如本文所定義。

術(shù)語“O-硫代氨甲?；笔侵?OC(S)NRR’基團(tuán)，其中R和R′如本文所定義。

術(shù)語“硫代氰?！笔侵?CNS基團(tuán)。

術(shù)語“三鹵代甲烷磺酰胺基”是指X₃CS(O)₂NR-基團(tuán)，其中X是鹵素并且R如本文所定義。

術(shù)語“三鹵代甲烷磺?；笔侵竂₃CS(O)₂-基團(tuán)，其中X是鹵素。

術(shù)語“三鹵代甲氧基”是指X₃CO-基團(tuán)，其中X是鹵素。

本文中單獨或組合使用的術(shù)語“三取代的甲硅烷基”是指在三個自由價鍵處被本文在被取代的氨基定義下所列的基團(tuán)取代的硅酮基團(tuán)。實例包括三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基等。

本文中的任一定義都可以與任何其它定義組合使用以描述復(fù)合結(jié)構(gòu)基團(tuán)。按照慣例，任何此類定義的后綴元素是附接至母體部分的元素。舉例來說，復(fù)合基團(tuán)烷基酰胺基表示烷基通過酰胺基團(tuán)附接至母體分子，而術(shù)語烷氧基烷基表示烷氧基通過烷基附接至母體分子。

術(shù)語“任選被取代”是指其之前的基團(tuán)可以是被取代或未取代的。當(dāng)被取代時，“任選被取代”的基團(tuán)的取代基可以包括但不限于，獨立地選自單獨或組合的以下基團(tuán)或一組特定基團(tuán)的一個或多個取代基：烷基、低級烯基、低級炔基、低級烷?；⒌图夒s烷基、低級雜環(huán)烷基、低級鹵代烷基、低級鹵代烯基、低級鹵代炔基、低級全鹵代烷基、低級全鹵代烷氧基、低級環(huán)烷基、苯基、芳基、芳氧基、低級烷氧基、低級鹵代烷氧基、氧代、低級酰氧基、羰基、羧基、烷基羰基、低級羧基酯、低級羧酰胺基、氰基、氫、鹵素、羥基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、酰胺基、硝基、硫醇、烷硫基、低級鹵代烷硫基、低級全鹵代烷硫基、芳硫基、磺酸酯、磺酸、三取代的甲硅烷基、N₃、SH、SCH₃、C(O)CH₃、CO₂CH₃、CO₂H、吡啶基、噻吩、呋喃基、低級氨基甲酸酯及低級脲。兩個取代基可以接合在一起形成由零個至三個雜原子組成的稠合五元、六元或七元碳環(huán)或雜環(huán)，例如形成亞甲基二氧基或亞乙基二氧基。任選被取代的基團(tuán)可以是未取代的(例如-CH₂CH₃)、完全取代的(例如-CF₂CF₃)、單取代的(例如-CH₂CH₂F)，或以介于完全取代與單取代之間的任何水平取代的(例如-CH₂CF₃)。當(dāng)陳述取代基，但未關(guān)于取代作出限定時，涵蓋被取代的形式和未取代的形式。當(dāng)限定取代基為“被取代的”時，特指被取代的形式。另外，必要時，可以針對特定部分界定幾組不同的可選取代基；在這些情況下，可選取代將如通常緊跟在短語“任選被......取代”之后定義。

除非另外定義，否則單獨并且無數(shù)字指示的術(shù)語R或術(shù)語R’是指選自由氫、烷基、環(huán)烷基、雜烷基、芳基、雜芳基及雜環(huán)烷基組成的群組的部分，其中任一個可以任選被取代。此類R和R’基團(tuán)應(yīng)理解為如本文所定義的任選被取代的。無論R基團(tuán)是否具有數(shù)字指示，每個R基團(tuán)，包括R、R′及Rn(其中n是整數(shù))，每個取代基，及每個術(shù)語都應(yīng)理解為就從一個群組選擇來說是彼此獨立的。在任何變量、取代基或術(shù)語(例如芳基、雜環(huán)、R等)在化學(xué)式或通用結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)超過一次的情況下，其在每次出現(xiàn)時的定義與在其它時候出現(xiàn)的定義無關(guān)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)進(jìn)一步認(rèn)識到，某些基團(tuán)可以附接至母體分子或者可以從書寫的任一端占據(jù)元素鏈中的位置。因此，僅舉例來說，不對稱基團(tuán)，如-C(O)N(R)-，可以在碳或氮處附接至母體部分。

本文所公開的化合物中存在不對稱中心?；衔锏膫€別立體異構(gòu)體可以由含有手性中心的可商購的起始物質(zhì)，以合成方式制備，或者通過制備對映異構(gòu)產(chǎn)物的混合物，隨后分離，如轉(zhuǎn)化成非對映異構(gòu)體混合物隨后分離或再結(jié)晶、色譜技術(shù)、在手性色譜柱上直接分離對映異構(gòu)體，或本領(lǐng)域中已知的任何其它適當(dāng)方法來制備。呈特定立體化學(xué)的起始化合物是可商購的，或者可以通過本領(lǐng)域中已知的技術(shù)制備和拆分。另外，本文所公開的化合物可以呈幾何異構(gòu)體存在。另外，化合物可以呈互變異構(gòu)體存在；本公開提供所有互變異構(gòu)體。另外，本文所公開的化合物可以呈其未溶劑化形式以及用藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、乙醇等)溶劑化的形式。一般來說，溶劑化形式被認(rèn)為與未溶劑化形式相當(dāng)。

術(shù)語“鍵”是指兩個原子，或當(dāng)由鍵接合的原子被視為較大子結(jié)構(gòu)的一部分時兩個部分之間的共價鍵聯(lián)。除非另外說明，否則鍵可以是單鍵、雙鍵或三鍵。在分子圖中，兩個原子之間的虛線指示可以在該位置存在或不存在另外的鍵。

本文中使用的術(shù)語“疾病”與術(shù)語“病癥”和“病況”(如在醫(yī)學(xué)病況中)同義并且可互換使用，因為這些術(shù)語都反映了人體或動物體或其損害正常功能的部分之一的異常狀況，典型地由有區(qū)別的征象和癥狀表現(xiàn)，并且使人或動物的壽命縮短或生活質(zhì)量降低。

術(shù)語“組合療法”是指施用兩種或更多種治療劑治療本公開中所描述的治療性病況或病癥。此類施用涵蓋以基本上同時的方式共施用這些治療劑，如在具有固定比率活性成分的單一膠囊中，或在各活性成分分開的多個膠囊中。此外，此類施用也涵蓋依序使用每一類治療劑。

短語“治療有效”意圖限定用于治療疾病或病癥或?qū)崿F(xiàn)臨床終點的活性成分的量。

術(shù)語“治療學(xué)上可接受”是指化合物(或鹽、前藥、互變異構(gòu)體、兩性離子形式等)適于與患者的組織接觸使用而無過度毒性、刺激及過敏反應(yīng)，與合理的效益/風(fēng)險比相稱并且有效用于預(yù)定用途。

在本公開中，術(shù)語“輻射”是指包含粒子或光子的電離輻射，這些粒子或光子具有足夠能量或者可以經(jīng)由核相互作用產(chǎn)生足夠能量以引起電離(電子增加或損失)。示例性并且優(yōu)選的電離輻射是x輻射。用于將x輻射遞送到靶組織或細(xì)胞的方式是本領(lǐng)域中眾所周知的。給定細(xì)胞所需的電離輻射的量一般取決于該細(xì)胞的性質(zhì)。用于確定輻射的有效量的方式是本領(lǐng)域中眾所周知的。本文中使用的術(shù)語電離輻射的“有效劑量”是指使細(xì)胞損傷或死亡增加的電離輻射劑量。

術(shù)語“輻射療法”是指使用電磁輻射或粒子輻射來治療瘤形成并且包括使用電離輻射和非電離輻射。

本文所公開的化合物可以呈治療學(xué)上可接受的鹽形式存在。本公開包括呈鹽形式，包括酸加成鹽形式的以上所列的化合物。適合鹽包括與有機(jī)和無機(jī)酸形成的鹽。此類酸加成鹽通常是藥學(xué)上可接受的。不過，非藥學(xué)上可接受的鹽可以用于制備和純化所論及的化合物。也可以形成堿加成鹽并且可以是藥學(xué)上可接受的。有關(guān)鹽的制備和選擇的更完整論述，參見Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use (Stahl，P.Heinrich.Wiley-VCHA，Zurich，Switzerland，2002)。

如本文所使用，術(shù)語“治療學(xué)上可接受的鹽”表示本文所公開的化合物的鹽或兩親離子形式，這些形式是水或油可溶或可分散的并且是如本文所定義的治療學(xué)上可接受的。這些鹽可以在化合物的最終分離和純化過程中制備，或者單獨通過使呈游離堿形式的適當(dāng)化合物與適合酸反應(yīng)來制備。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、L-抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽(苯磺酸鹽(besylate))、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、二葡糖酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、乙醇酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽(羥乙基磺酸鹽)、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、DL-扁桃酸鹽、均三甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基并酸鹽、膦酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、焦谷氨酸鹽、琥珀酸鹽、磺酸鹽、酒石酸鹽、L-酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽(對甲苯磺酸鹽(p-tosylate))及十一烷酸鹽。另外，本文所公開的化合物中的堿性基團(tuán)可以用甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；二甲基、二乙基、二丁基及二戊基硫酸酯；癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物；以及苯甲基和苯乙基溴化物四級化。可以用于形成治療學(xué)上可接受的加成鹽的酸的實例包括無機(jī)酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；及有機(jī)酸，如草酸、順丁烯二酸、琥珀酸及檸檬酸。還可以通過使化合物與堿金屬或堿土金屬離子配位來形成鹽。因此，本公開涵蓋本文所公開的化合物的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽及鈣鹽等。

堿加成鹽可以在化合物的最終分離和純化過程中，通過使羧基與適合堿，如金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或者與氨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)來制備。治療學(xué)上可接受的鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁，以及無毒季銨陽離子，如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己胺、普魯卡因、二苯甲胺、N，N-二苯甲基苯乙胺、1-二苯羥甲胺及N，N′-二苯甲基乙二胺?？捎糜谛纬蓧A加成鹽的其它代表性有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。

化合物

本公開提供一種結(jié)構(gòu)式I的化合物

或其鹽，其中：W選自任選被取代的C₅-C₁₀芳基和C₅-C₁₀雜芳基；X是連接部分；并且Y是鐵死亡誘導(dǎo)部分，該部分選自埃拉汀、埃拉汀類似物如埃拉汀-A、埃拉汀-B或脫甲基埃拉汀，或簡化的合成埃拉汀模擬物。

在一些構(gòu)型中，W可以是C₅-C₁₀芳基。

在一些構(gòu)型中，W可以是被取代的C₅-C₁₀芳基。

在一些構(gòu)型中，W可以是σ-2受體配體。

在一些構(gòu)型中，連接部分可以包含C₁-C₁₂直鏈。

在一些構(gòu)型中，連接部分可以另外包含1個或多個雜原子。在一些構(gòu)型中，該1個或多個雜原子的每一個可以獨立地選自由氧、硫及氮組成的群組。

在一些構(gòu)型中，連接部分可以具有結(jié)構(gòu)

其中是鍵，并且n是1至10的整數(shù)，即，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。9。在一些構(gòu)型中，n＝1。在一些構(gòu)型中，n＝5。

在一些構(gòu)型中，結(jié)構(gòu)式I化合物的鐵死亡誘導(dǎo)部分可以選自由埃拉汀、埃拉汀-A、埃拉汀-B及脫甲基埃拉汀組成的群組。

在一些構(gòu)型中，結(jié)構(gòu)式I化合物的鐵死亡誘導(dǎo)部分可以是埃拉汀。

在一些實施方案中，本教導(dǎo)包括式II的化合物

或其鹽，其中：W選自任選被取代的C₅-C₁₀芳基和C₅-C₁₀雜芳基；X是連接部分；并且R²選自氫和甲基。

在一些實施方案中，本教導(dǎo)包括式III的化合物：

或其鹽，其中：Z¹和Z³的每一個獨立地選自由以下組成的群組：鍵、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₁₀烯基、C₁-C₁₀炔基、C₅-C₁₀芳基、C₅-C₁₀雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜環(huán)烷基烷基、烷基雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基環(huán)烷基、-(CH₂)_a(OCH₂CH₂)_b(CH₂)_c-、-(CH₂)_a(CH₂CH₂O)_b(CH₂)_c-、-(CH₂)_aO(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O)₂(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)C(O)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aC(O)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)C(O)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O₂)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R)S(O₂)(CH₂)_c-；Z²選自C₁-C₁₀烷基、C₁-C₁₀烯基、C₁-C₁₀炔基、C₅-C₁₀芳基、C₅-C₁₀雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜環(huán)烷基烷基、烷基雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基環(huán)烷基、-(CH₂)_a(OCH₂CH₂)_b(CH₂)_c-及-(CH₂)_a(CH₂CH₂O)_b(CH₂)_c-、-(CH₂)_aO(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O)₂(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)C(O)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aC(O)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R¹)C(O)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aS(O₂)N(R¹)(CH₂)_c-、-(CH₂)_aN(R)S(O₂)(CH₂)_c-；其中Z¹、Z²及Z³的每一個可以任選被一個或多個選自鹵素、氧代及C₁-C₁₀烷基的基團(tuán)取代；各R¹獨立地選自氫、C₁-C₁₀烷基及C₁-C₁₀?；?；a和c各自是獨立地選自0、1、2、3及4的整數(shù)；各b是獨立地選自1、2、3、4、5及6的整數(shù)；并且Y是鐵死亡誘導(dǎo)部分，該部分選自埃拉汀、埃拉汀類似物如埃拉汀-A、埃拉汀-B或脫甲基埃拉汀，或簡化合成的埃拉汀模擬物。

在某些實施方案中，本教導(dǎo)的化合物具有結(jié)構(gòu)式IV：

或其鹽，其中：n是選自1、2、3、4及5的整數(shù)；并且R²可以選自氫和甲基。

在一些構(gòu)型中，n可以是1；并且R²可以是氫。

在一些構(gòu)型中，n可以是5；并且R²可以是氫。

在一些構(gòu)型中，鹽可以是草酸鹽。

在一些構(gòu)型中，化合物可以選自如本文所公開的化合物1-24。

藥物組合物

盡管本教導(dǎo)的化合物可以按原料化合物形式施用，但也可以使其呈藥物制劑形式。因此，本文提供了藥物制劑，這些藥物制劑包含一種或多種本教導(dǎo)的化合物，或一種或多種其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、前藥、酰胺或溶劑化物，以及一種或多種其藥學(xué)上可接受的載劑和任選地一種或多種其它治療成分。從與制劑中的其它成分可相容并且對其接受者無害的意義上說，載劑必須是“可接受的”。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選施用途徑。適當(dāng)時并且如本領(lǐng)域中所了解，任何眾所周知的技術(shù)、載劑及賦形劑都可以使用；例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences中。本文公開的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域中已知的任何方式，例如借助于常規(guī)混合、溶解、制粒、制糖衣丸、粉碎、乳化、囊封、包封或壓縮方法制造。

制劑包括適于經(jīng)口、胃腸外(包括皮下、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)及髓內(nèi))、腹膜內(nèi)、透粘膜、透皮、直腸及局部(包括真皮、頰、舌下及眼內(nèi))施用的那些，但最適合的途徑可以取決于例如接受者的病況和病癥。制劑宜呈單位劑型并且可以通過藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備。典型地，這些方法包括使本公開的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、前藥或溶劑化物(“活性成分”)與構(gòu)成一種或多種輔助成分的載劑結(jié)合的步驟。一般來說，制劑是通過使活性成分與液體載劑或適時分開的細(xì)粉狀固體載劑或兩者均勻并緊密地結(jié)合，隨后視需要使產(chǎn)物成型成希望的制劑來制備。

本文所描述的化合物可以如下施用：

經(jīng)口施用

本教導(dǎo)的化合物可以經(jīng)口施用，包括吞咽，因此，該化合物進(jìn)入胃腸道，或直接從口吸收到血流中，包括舌下或頰施用。

適于經(jīng)口施用的組合物包括固體制劑，如片劑、丸劑、藥囊、糖錠以及硬質(zhì)或軟質(zhì)膠囊，這些制劑可以含有液體、凝膠、粉末或顆粒。

在片劑或膠囊劑型中，存在藥物量可以是該劑型重量的約0.05％至約95％，更典型地是約2％至約50％。

此外，片劑或膠囊可以含有以重量計占該劑型約0.5％至約35％，更典型地約2％至約25％的崩解劑。崩解劑的實例包括甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉或羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、淀粉等。

適用于片劑中的粘合劑包括明膠、聚乙二醇、糖、樹膠、淀粉、羥丙基纖維素等。適用于片劑中的稀釋劑包括甘露糖醇、木糖醇、乳糖、葡聚糖、蔗糖、山梨糖醇及淀粉。

適用于片劑或膠囊中的表面活性劑和助流劑以重量計可以是約0.1％至約3％的量，并且包括聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸鈉、滑石及二氧化硅。

適用于片劑或膠囊中的潤滑劑以重量計可以是約0.1％至約5％的量，并且包括硬脂酸鈣、硬脂酸鋅或硬脂酸鎂、硬脂基反丁烯二酸鈉等。

片劑可以任選在一種或多種輔助成分存在下，通過壓縮或模制制成。壓縮片劑可以通過在適合機(jī)器中，壓縮呈自由流動形式，如呈粉末或顆粒狀的活性成分，任選混入粘合劑、惰性稀釋劑或潤滑劑、表面活性劑或分散劑來制備。模制片劑可以通過在適合機(jī)器中模制用液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物來制造。可以向片劑中添加染料或顏料以標(biāo)識或表征不同的活性化合物劑量組合。

液體制劑可以包括乳液、溶液、糖漿、酏劑及懸浮液，這些制劑可以用于軟質(zhì)或硬質(zhì)膠囊中。此類制劑可以包括藥學(xué)上可接受的載劑，例如水、乙醇、聚乙二醇、纖維素或油。制劑還可以包括一種或多種乳化劑和/或懸浮劑。

經(jīng)口施用的組合物可以配制成立即釋放或改良釋放形式，包括延遲釋放或持續(xù)釋放形式，任選包覆腸衣。

在另一個實施方案中，藥物組合物包含治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

胃腸外施用

本教導(dǎo)的化合物可以通過注射，例如通過推注或連續(xù)輸注直接施用于血流、肌肉或內(nèi)臟中。適于胃腸外施用的方式包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、顱內(nèi)等。適于胃腸外施用的裝置包括注射器(包括有針和無針注射器)和輸注方法。制劑可以提供于單位劑量或多劑量容器中，例如密封安瓿和小瓶中。

大多數(shù)胃腸外制劑是含有賦形劑，包括鹽、緩沖劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑、抗氧化劑、抑菌劑、防腐劑及使制劑與預(yù)定接受者的血液等滲的溶質(zhì)，及碳水化合物的水溶液。

胃腸外制劑還可以制備為脫水形式(例如通過凍干)或無菌非睡醒溶液形式。這些制劑可以在適合媒介物，如無菌水存在下使用。也可以使用增溶劑制備胃腸外溶液。

胃腸外施用的組合物可以配制成立即釋放或改良釋放形式，包括延遲釋放或持續(xù)釋放形式?；衔镞€可以配制為儲積式制劑形式。此類長效制劑可以通過植入(例如皮下或肌肉內(nèi)植入)或通過肌肉內(nèi)注射進(jìn)行施用。因此，例如，化合物可以用適合的聚合物質(zhì)或疏水性物質(zhì)(例如，如在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂配制，或以難溶衍生物，例如難溶鹽形式配制。

局部施用

在一些構(gòu)型中，本教導(dǎo)的化合物可以局部(例如用于皮膚、粘膜、耳、鼻或眼)或透皮施用。供局部施用的制劑可以包括但不限于，洗液、溶液、乳膏、凝膠、水凝膠、油膏、泡沫劑、植入物、貼片等。供局部施用制劑的藥學(xué)上可接受的載劑可以包括水、醇、礦物油、甘油、聚乙二醇等。局部施用還可以通過例如電穿孔、離子電滲透、超聲透入療法等進(jìn)行。

典型地，供局部施用的活性成分可以占制劑的0.001％至10％w/w(以重量計)。在某些實施方案中，活性成分可以占制劑多達(dá)10％w/w；低于5％w/w；2％w/w至5％w/w；或0.1％w/w至1％w/w。

局部施用的組合物可以配制成立即釋放或改良釋放形式，包括延遲釋放或持續(xù)釋放形式。

直腸、頰及舌下施用

供直腸施用本教導(dǎo)的化合物的栓劑可以通過將活性劑與適合的無刺激性賦形劑，如可可脂、合成單酸甘油酯、二酸甘油酯或三酸甘油酯、脂肪酸或聚乙二醇混合來制備，聚乙二醇在常溫下是固體，但在直腸溫度下是液體，并因此將在直腸中熔融并釋放出藥物。

對于頰或舌下施用，組合物可以呈通過常規(guī)方式配制的片劑、糖錠、錠劑或凝膠形式。此類制劑可以包含以如蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠調(diào)味的活性成分。

通過吸入施用

對于通過吸入施用，在一些構(gòu)型中，本教導(dǎo)的化合物可以由吹藥器、噴霧器加壓包裝或其它遞送氣霧劑噴霧或粉末的慣用構(gòu)件遞送。加壓包裝可以包含適合推進(jìn)劑，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適合氣體。在加壓氣霧劑的情況下，可以通過提供閥遞送定計量來確定劑量單位?；蛘撸瑢τ谕ㄟ^吸入或吹入施用，根據(jù)本公開的化合物可以呈干粉組合物，例如化合物和適合粉末基質(zhì)(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的形式。在例如膠囊、藥筒、明膠或泡罩包裝中，粉末組合物可以呈單位劑型，借助于吸入器或吹藥器，可以由這些包裝施用粉末。

也可以使用制藥領(lǐng)域中已知的其它載劑物質(zhì)和施用模式。本教導(dǎo)的藥物組合物可以通過眾所周知的制藥技術(shù)，如有效配制和施用程序制備。優(yōu)選的單位劑量制劑是含有如本文所陳述的有效劑量，或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的活性成分的制劑。施用給患者的確切劑量將是主治醫(yī)師的職責(zé)。對于任何特定患者的具體劑量水平將取決于多種因素，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、施用時間、施用途徑、排泄速率、藥物組合、所治療的確切病癥，及所治療的適應(yīng)癥或病況的嚴(yán)重程度。此外，施用途徑可以取決于病況及其嚴(yán)重程度而變化。以上有關(guān)有效配制和施用程序的考慮是本領(lǐng)域中眾所周知的并且描述于標(biāo)準(zhǔn)教科書中。藥物的配制論述于例如Hoover，John E.，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1975；Liberman等人編，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；及Kibbe等人編，Handbook of Pharmaceutical Excipients(第3版)，American Pharmaceutical Association，Washington，1999中。

治療方法

本公開提供特征為結(jié)合σ-2受體的靶向部分并因此可以用于治療或預(yù)防與表達(dá)σ-2受體的細(xì)胞有關(guān)的病癥的化合物和藥物組合物，且所述病癥包括但不限于，癌癥。

癌癥

在一些實施方案中，本公開的化合物和藥物組合物可以用于治療或預(yù)防癌癥。

在某些實施方案中，癌癥可以選自腺癌、成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤、膀胱癌、胚細(xì)胞瘤、骨癌、乳癌、腦癌、癌瘤、髓樣肉瘤、子宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、食道癌、胃腸癌、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膽囊癌、胃癌、頭頸癌、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、腸癌、腎癌、喉癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、肝癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、間皮瘤、多發(fā)性骨髓瘤、眼癌、視神經(jīng)腫瘤、口腔癌、卵巢癌、垂體腫瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、前列腺癌、胰腺癌、咽癌、腎細(xì)胞癌瘤、直腸癌、肉瘤、皮膚癌、脊髓腫瘤、小腸癌、胃癌、滑膜肉瘤、T細(xì)胞淋巴瘤、睪丸癌、甲狀腺癌、咽喉癌、泌尿生殖道癌癥、尿路上皮癌、子宮癌、陰道癌或威爾姆氏腫瘤(Wilms’tumor)。

在特定實施方案中，癌癥可以是胰腺癌。在特定實施方案中，癌癥可以是滑膜肉瘤。

組合和組合療法

本教導(dǎo)的化合物可以單獨使用，或者與其它藥物活性化合物組合使用，以治療如先前在上文描述的那些病況。本教導(dǎo)的化合物及其它藥物活性化合物可以同時(以相同劑型或以分開的劑型)或依序施用。因此，在一個實施方案中，本教導(dǎo)包含了通過向受試者施用治療有效量的一種或多種本教導(dǎo)的化合物及一種或多種另外的藥物活性化合物來治療病況的方法。

在另一實施方案中，提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含一種或多種本教導(dǎo)的化合物、一種或多種另外的藥物活性化合物，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在另一實施方案中，該一種或多種另外的藥物活性化合物選自由抗癌藥、抗增生藥及抗炎藥組成的群組。

本文所描述的σ-2受體結(jié)合組合物還任選與其它治療試劑組合使用，這些治療試劑是針對其對有待治療的病況的治療價值進(jìn)行選擇。一般來說，在采用組合療法的實施方案中，本文所描述的化合物與其它藥劑不以同一藥物組合物施用，而且由于物理和化學(xué)特征不同，這些藥劑任選通過不同途徑施用。初始施用一般是根據(jù)確定的方案進(jìn)行，而且隨后基于觀察的效果、劑量、施用模式及施用時間進(jìn)行修改。在某些情形中，如本文所描述的σ-2受體結(jié)合化合物宜與另一治療劑組合施用。僅舉例來說，通過施用也具有治療益處的另一治療劑(也包括治療方案)來增進(jìn)σ-2受體結(jié)合化合物的治療效用。不管所治療的疾病、病癥或病況如何，患者所經(jīng)歷的總體益處是兩種治療劑的簡單加和，或患者經(jīng)歷增強(qiáng)的(即，協(xié)同)益處?；蛘?，如果本文所公開的化合物具有副作用，那么宜施用一種降低該副作用的藥劑；或者可以通過施用佐劑來增強(qiáng)本文所描述的化合物的治療效用。

當(dāng)藥物是以治療組合使用時，治療有效劑量不同。以實驗方式確定在組合治療方案中使用的藥物及其它藥劑的治療有效劑量的方法是有文獻(xiàn)記載的方法。組合治療另外包括周期治療，這些治療在各種時間開始和結(jié)束以幫助患者的臨床管理。在任何情形中，可以按任一次序或同時施用多種治療劑(其中之一是本文所描述的σ-2受體結(jié)合化合物)。如果同時施用，那么該多種治療劑任選是以單一形式或以多種形式(僅舉例來說，以單一丸劑或兩粒分開的丸劑)提供。

在一些實施方案中，治療劑之一是以多次劑量給予，或都以多次劑量給予。如果不是同時施用，那么這多次劑量之間的時間任選在超過零周至少于十二周之間變化。

此外，組合方法、組合物及制劑不僅僅限于使用兩種藥劑，也預(yù)期施用多種治療劑組合。應(yīng)了解，用于治療、預(yù)防或改善有待減輕的病況的劑量方案任選根據(jù)多種因素進(jìn)行修改。這些因素包括受試者所患病癥，以及受試者的年齡、體重、性別、飲食及醫(yī)學(xué)病況。因此，實際采用的劑量方案在一些實施方案中變化極大，并由此偏離本文所陳述的劑量方案。

構(gòu)成本文所公開的組合療法的藥劑任選是預(yù)定用于基本上同時施用的組合劑量形式或獨立劑量形式。構(gòu)成組合療法的藥劑還任選依序施用，其中任一藥劑是根據(jù)需要兩步施用的方案施用。該兩步施用方案任選要求依序施用活性劑或間隔分開施用個別活性劑。取決于每一藥劑的特性，如藥劑的效力、溶解性、生物利用率、血漿半衰期及動力學(xué)型態(tài)，多個施用步驟之間的時間在數(shù)分鐘至數(shù)小時范圍內(nèi)。

在另一實施方案中，σ-2受體結(jié)合化合物抑制劑任選與向患者提供另外益處的程序組合使用。σ-2受體結(jié)合化合物抑制劑和任何另外的療法任選在疾病或病況發(fā)生之前、期間或之后施用，并且在一些實施方案中，施用含σ-2受體結(jié)合化合物的組合物的時程不同。因此，例如，σ-2受體結(jié)合化合物是作為預(yù)防措施使用并且向有發(fā)生病況或疾病的傾向的受試者連續(xù)施用，以防止疾病或病況的發(fā)生。σ-2受體結(jié)合化合物及組合物任選在癥狀發(fā)作期間或在癥狀發(fā)作后盡可能快地施用給受試者。盡管本文中已顯示并描述本教導(dǎo)的優(yōu)選實施方案，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易見，這些實施方案僅借助實施例提供。在不偏離本教導(dǎo)的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以作出多種變更、改變及取代。在本教導(dǎo)的一些實施方案中，可以采用本文所描述的實施方案的各種替代方案實踐本教導(dǎo)。

σ-2受體結(jié)合化合物可以與抗癌藥組合使用，這些抗癌藥包括但不限于以下類別：烷化劑、血管生成素1和/或2抑制劑、蒽環(huán)類藥物、抗代謝藥物、極光激酶抑制劑、B-raf抑制劑、BTK抑制劑、c-met抑制劑、CDK 4和/或6抑制劑、CDK4和/或CDK6抑制劑、cFMS抑制劑、交聯(lián)劑、DNA復(fù)制抑制劑、內(nèi)皮生長因子(EGF)抑制劑、肝細(xì)胞生長因子/分散因子(HGF/SF)抑制劑、HER2和HER3抑制劑、類胰島素生長因子1受體(IGFR-1)抑制劑、嵌入劑、MEK抑制劑、微管破壞劑、mTOR抑制劑、全ErbB酪氨酸激酶抑制劑、PARP抑制劑、P13K抑制劑、PKB抑制劑、PKB抑制劑、類polo激酶抑制劑、擬輻射劑、輻射增敏劑、重組人apo2配體、斷鏈劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、腫瘤壞死因子相關(guān)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)性配體(TRAIL)激動劑，及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)抑制劑。

本文所公開的化合物，包括式I化合物在內(nèi)，也可用作癌癥治療的化學(xué)增敏劑和輻射增敏劑。這些化合物可用于治療先前曾經(jīng)歷或正在經(jīng)歷或即將經(jīng)歷癌癥治療的哺乳動物。此類其它治療包括化學(xué)療法、輻射療法、手術(shù)或免疫療法，如癌癥疫苗。

本發(fā)明化合物特別適于與治療性抗癌劑和/或輻射治療劑組合使用。因此，本公開提供了用于同時、分開或依序施用的本發(fā)明式I化合物與治療性抗癌劑和/或輻射治療劑的組合。本公開的化合物及另一抗癌劑可以加和地或協(xié)同地起作用。本發(fā)明化合物與另一抗癌劑的協(xié)同組合允許使用這些藥劑之一或兩種的較低劑量和/或本發(fā)明化合物與其它抗癌劑之一或兩種的不太頻繁的劑量，和/或不太頻繁地施用這些藥劑可以減少與施用這些藥劑給受試者相關(guān)的任何毒性，同時不會降低這些藥劑在癌癥治療中的功效。此外，協(xié)同作用可以提高這些藥劑在癌癥治療中的功效和/或減少與單獨使用任一藥劑有關(guān)的任何不良或不想要的副作用。

治療劑、抗癌劑和/或輻射療法可以根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的治療方案施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，治療劑、抗癌劑和/或輻射療法的施用可以取決于所治療的疾病以及該抗癌劑和/或輻射療法對該疾病的已知作用而變化。另外，根據(jù)熟練臨床醫(yī)師的技能，治療方案(例如施用劑量和時間)可以根據(jù)觀察到的所施用的治療劑(即，抗贅生劑或輻射)對患者的影響，以及根據(jù)觀察到的疾病對所施用的治療劑的反應(yīng)，和觀察到的不良作用而變化。

x射線的劑量范圍是50至200倫琴的日劑量持續(xù)較長時間段(3至4周)到2000至6000倫琴的單次劑量。放射性同位素的劑量范圍變化極大，并且取決于同位素的半衰期、所發(fā)射的輻射的強(qiáng)度和類型，及贅生性細(xì)胞的吸收情況。

用于將輻射遞送至組織的任何適合方式都可以用于本公開中。將輻射遞送至組織的常用方式是在所治療的身體外部的電離輻射源。用于將輻射遞送至組織的替代方法包括例如，首先在體內(nèi)遞送與腫瘤抗原免疫反應(yīng)的經(jīng)放射性標(biāo)記的抗體，隨后在體內(nèi)將有效量的放射性標(biāo)記的抗體遞送至組織中。此外，可以使用放射性同位素將電離輻射遞送至組織或細(xì)胞。另外，輻射可以借助于擬輻射劑遞送。如本文所使用，“擬輻射劑”是引起與輻射療法相同類型的細(xì)胞損害，但無需施加輻射的一種化學(xué)治療劑，例如美法蘭(melphalan)。

就用于癌癥和贅生性疾病來說，σ-2受體結(jié)合化合物最佳與以下抗癌劑的非限制性實例中的一種或多種結(jié)合使用：(1)烷化劑，包括但不限于，順鉑(PLATIN)、卡鉑(PARAPLATIN)、奧沙利鉑(oxaliplatin；ELOXATIN)、鏈佐星(streptozocin；ZANOSAR)、白消安(busulfan；MYLERAN)及環(huán)磷酰胺(ENDOXAN)；(2)抗代謝物，包括但不限于，巰基嘌呤(PURINETHOL)、硫鳥嘌呤、噴司他汀(pentostatin；NIPENT)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(ARA-C)、吉西他濱(gemcitabine；GEMZAR)、氟尿嘧啶(CARAC)、左亞葉酸(leucovorin；FUSILEV)及甲氨蝶呤(methotrexate；RHEUMATREX)；(3)植物生物堿及萜類化合物，包括但不限于，長春新堿(vincristine；ONCOVIN)、長春花堿(vinblastine)及紫杉醇(paclitaxel；TAXOL)；(4)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括但不限于，伊立替康(irinotecan；CAMPTOSAR)、拓?fù)涮婵?topotecan；HYCAMTIN)及依托泊苷(etoposide；EPOSIN)；(5)細(xì)胞毒性抗生素，包括但不限于，放線菌素D(actinomycin D；COSMEGEN)、多柔比星(doxorubicin；ADRIAMYCIN)、博萊霉素(bleomycin；BLENOXANE)及絲裂霉素(mitomycin；MITOSOL)；(6)血管生成抑制劑，包括但不限于，舒尼替尼(sunitinib；SUTENT)和貝伐單抗(bevacizumab；AVASTIN)；及(7)酪氨酸激酶抑制劑，包括但不限于，伊馬替尼(imatinib；GLEEVEC)、厄洛替尼(erlotinib；TARCEVA)、拉帕替尼(lapatininb；TYKERB)及阿西替尼(axitinib；INLYTA)。

該另外的治療劑可以選自5-氟尿嘧啶、阿霉素(adriamycin)、阿法替尼(afatinib)、艾圖單抗(alemtuzmab)、六甲密胺(altretamine)、氨魯米特(aminoglutethimide)、氨基乙酰丙酸、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、阿瑞匹坦(aprepitant)、天冬酰胺酶(asparaginase)、阿西替尼、阿扎胞苷(azacitidine)、bcg、bertozimib、貝伐單抗、倍薩羅丁(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、博萊霉素、硼替佐米(bortezomib)、博舒替尼(bosutinib)、布舍瑞林(buserelin)、白消安、喜樹堿(campothecin)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑、卡博替尼(carbozantimib)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫司汀(carmustine)、色瑞替尼(ceritinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯喹(chloroquine)、順鉑、卡迪NaCl水溶液(cladisat.aq.NaCl solution)、克拉屈濱(cladribine)、氯屈膦酸鹽(clodronate)、氯法拉濱(clofarabine)、考比替尼(cobimetinib)、秋水仙堿(colchicine)、克唑替尼(crizotinib)、環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酸胺(cyclophosphamine)、環(huán)丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素D(dactinomycin)、達(dá)沙替尼(dasatinib)、道諾霉素(daunorubicin)、debratinib、decarazine、地西他濱(decitabine)、脫甲綠膠酶素(demethoxyviridin)、達(dá)薩替尼(desatinib)、右雷佐生(dexrazoxane)、二氯乙酸鹽、己二烯雌酚(dienestrol)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、多西他賽(docetaxel)、多柔比星、恩雜魯胺(enzalutamide)、表柔比星(epirubicin)、厄洛替尼、雌二醇(estradiol)、雌莫司汀(estramustine)、依托泊苷、依維莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、非格司亭(filgrastim)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、氟氫可的松(fludrocortisone)、氟尿嘧啶、氟甲睪酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、氟維司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他濱、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、金雀異黃酮(genistein)、戈合瑞林(goserelin)、羥基脲(hydroxyurea)、依魯替尼(ibrutanib)、伊達(dá)比星(idarubicin)、idelalisib、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、伊馬替尼、咪喹莫特(imiquimod)、干擾素、伊立替康(irinotecan)、伊諾替康(ironotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、拉帕替尼(lapatinib)、來那度胺(lenalidomide)、來曲唑(letrozole)、亞葉酸(leucovorin)、亮丙瑞林(leuprolide)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼達(dá)明(lonidamine)、氮芥(mechlorethamine)、甲羥孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美法蘭、巰基嘌呤、美司鈉(mesna)、二甲雙胍(metformin)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤、米拉霉素(mithram)、絲裂霉素、mitosmycin、米托坦(mitotane)、mitoxane、米托蒽醌(mitoxantrone)、奈拉濱(nelarabine)、來那替尼(neratinib)、尼洛替尼(nilotinib)、尼魯米特(nilutamide)、諾考達(dá)唑(nocodazole)、奧曲肽(octreotide)、奧拉帕利(olaparib)、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸鹽(pamidronate)、帕唑帕尼(pazopanib)、培門冬酶(pegaspargase)、培美曲塞(pemetrexed)、噴司他丁、哌立福辛(perifosine)、普卡霉素(plicamycin)、泊馬度胺(pomalidomide)、帕納替尼(ponatinib)、卟吩姆(porfimer)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲賽(raltitrexed)、瑞格非尼(regorafinib)、利妥昔單抗(rituximab)、索拉非尼(sorafenib)、鏈佐星、舒尼替尼、舒拉明(suramin)、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、西羅莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睪酮(testosterone)、沙立度胺(thalidomide)、硫鳥嘌呤、噻替哌(thiotepa)、二氯二茂鈦(titanocene dichloride)、拓?fù)涮婵?、曲美替?trametinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、維甲酸(tretinoin)、維利帕尼(veliparib)、長春花堿、長春新堿、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、伏拉塞替(volasertib)、伏立諾他(vorinostat)及唑來膦酸(zoledronic acid)。

當(dāng)受試者罹患炎癥性病況或有患炎癥性病況的風(fēng)險時，本文所描述的σ-2受體結(jié)合化合物任選與一種或多種治療炎癥性病況的藥劑或方法以任何組合結(jié)合使用。用于治療自身免疫和/或炎癥性病況的治療劑/治療方法包括但不限于，以下實例中的任一種：(1)皮質(zhì)類固醇，包括但不限于，可的松(cortisone)、地塞米松(dexamethasone)及甲潑尼龍(methylprednisolone)；(2)非類固醇抗炎藥(NSAID)，包括但不限于，布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、對乙酰氨基酚(acetaminophen)、阿司匹林(aspirin)、非諾洛芬(fenoprofen；NALFON))、氟比洛芬(flurbiprofen；ANSAID)、酮洛芬(ketoprofen)、奧沙普秦(oxaprozin；DAYPRO)、雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium；VOLTAREN)、雙氯芬酸鉀(CATAFLAM)、依托度酸(etodolac；LODINE)、吲哚美辛(indomethacin；INDOCIN))、酮洛酸(ketorolac；TORADOL))、舒林酸(sulindac；CLINORIL))、托美丁(tolmetin；TOLECTIN)、甲氯滅酸鹽(meclofenamate；MECLOMEN)、甲芬那酸(mefenamic acid；PONSTEL)、萘丁美酮(nabumetone；RELAFEN)及吡羅昔康(piroxicam；FELDENE)；(3)免疫抑制劑，包括但不限于，甲氨蝶呤(RHEUMATREX)、來氟米特(leflunomide；ARAVA)、硫唑嘌呤(azathioprine；IMURAN)、環(huán)孢素(cyclosporine；NEORAL、SANDIMMUNE)、他克莫司(tacrolimus)及環(huán)磷酰胺(CYTOXAN)；(4)CD20阻斷劑，包括但不限于，利妥昔單抗(RITUXAN)；(5)腫瘤壞死因子(TNF)阻斷劑，包括但不限于，依他普特(etanercept；ENBREL)、英利昔單抗(infliximab；REMICADE)及阿達(dá)木單抗(adalimumab；HUMIRA)；(6)白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑，包括但不限于，阿那白滯素(anakinra；KINERET)；(7)白細(xì)胞介素-6抑制劑，包括但不限于，托珠單抗(tocilizumab；ACTEMRA)；(8)白細(xì)胞介素-17抑制劑，包括但不限于，AIN457；(9)Janus激酶抑制劑，包括但不限于，托法替尼(tasocitinib)；(10)syk抑制劑，包括但不限于，福他替尼(fostamatinib)。

化合物合成

本教導(dǎo)的化合物可以使用以下詳述的通用合成方案及實驗程序制備。通用合成方案和實驗程序是出于說明的目的提供，并且不打算作限制。用于制備本教導(dǎo)的化合物的起始物質(zhì)是可商購的或者可以使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)方法制備。

縮寫清單

aq.＝水溶液；CDCl₃＝氘化氯仿；DMSO-d₆＝氘化二甲亞砜；DMSO＝二甲亞砜；h＝小時；THF＝四氫呋喃。

本教導(dǎo)的一些實施方案包括了合成式IV的化合物的方法：

在各種構(gòu)型中，這些方法包括使結(jié)構(gòu)式V的化合物：

與結(jié)構(gòu)式VI的化合物反應(yīng)：

其中n是1至5的整數(shù)，并且R²是氫或甲基。

在一些構(gòu)型中，n可以是1；并且R²可以是氫。

在一些構(gòu)型中，n可以是5；并且R²可以是氫。

在一些構(gòu)型中，該反應(yīng)可以在還原劑存在下發(fā)生，如但不限于，氫氧化鋁、硼烷-四氫呋喃、兒茶酚硼烷、二異丁基氫化鋁、二異戊基硼烷、肼、氫化鋰鋁、硼氫化鋰、三叔丁氧基氫化鋁鋰、三乙基硼氫化鋰、三仲丁基硼氫化鉀、硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、三乙酰氧基硼氫化鈉或其混合物。

用于制備化合物的通用方法

可以使用以下方案實踐本教導(dǎo)的合成方法。可以并入另外的結(jié)構(gòu)基團(tuán)，包括但不限于，在本說明書別處定義并且未在方案中描述的化合物中顯示的那些，以得到本文所公開的各種化合物，或在使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)進(jìn)一步操作后可以轉(zhuǎn)化成本教導(dǎo)的化合物的中間化合物。

實施例1：3-(鄰乙氧基苯基)-2-{[4-(2-{對-[(6-{3-(2-甲氧基氨基甲苯羰氧基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-9-基}己基氨基)甲基]苯氧基)乙酰基)-1-哌嗪基]甲基}-3H-喹唑啉-4-酮)(SW V-49s)

中間體1A.N-9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-醇(2)。

在冰浴中冷卻LiAlH(o-tert-Bu)₃(20.0g，78.5mmol)于無水THF(30mL)中的混合物。逐滴添加化合物9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3-酮(1)(5.0g，21.8mmol)于無水THF(45mL)中的溶液。在室溫下攪拌混合物過夜。用飽和NH₄Cl水溶液中止反應(yīng)。濾出固體并用THF洗滌。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥，過濾并蒸發(fā)至干，得到呈淺黃色油狀的N-9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-醇(4.8g，95％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.20-7.35(m，5H)，4.22-4.32(m，.1H)，3.79(s，2H)，3.02-3.06(m，2H)，2.33-2.43(m，2H)，2.12-2.26(m，1H)，1.85-1.99(m，3H)，1.30-1.54(m，3H)，1.08-1.13(m，2H)。

中間體1B.N-(9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)氨基甲酸酯(3)

在室溫下，將中間體1A(4.8g，20.6mmol)、異氰酸2-甲氧基-5-甲基苯酯(3.8g，23.5mmol)、二乙酸二丁基錫(幾滴)于CH₂Cl₂(45ml)中的混合物攪拌過夜。用水、飽和NaHCO₃水溶液及鹽水洗滌反應(yīng)混合物，然后經(jīng)Na₂SO₄干燥。減壓去除溶劑并且殘余物通過硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯/三乙胺，80∶20∶1)純化，得到呈白色固體狀的N-(9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)氨基甲酸酯(6.8g，83％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.97(s，1H)，7.16-7.37(m，6H)，6.73-6.80(m，2H)，5.22-5.30(m，1H)，3.84(s，3H)，3.81(s，2H)，3.04-3.07(m，2H)，2.42-2.52(m，2H)，2.30(s，3H)，1.91-2.20(m，3H)，1.48-1.56(m，3H)，1.15-1.18(m，2H)。

中間體1C.O-(9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基苯基)-氨基甲酸酯(4)。

向中間體1B(6.8g，17.3mmol)于甲醇/乙酸乙酯(1∶1，160mL)中的溶液中添加20％w/w的氫氧化鈀/碳(1.35g)和甲酸銨(5.4g，86.5mmol)。使混合物回流6小時，冷卻，經(jīng)由硅藻土墊過濾并蒸發(fā)。將所得殘余物溶解于乙酸乙酯中，用飽和NaHCO₃水溶液、水及鹽水洗滌，然后經(jīng)Na₂SO₄干燥。去除溶劑，得到呈淺褐色油狀的脫保護(hù)的雙環(huán)胺O-(9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基苯基)-氨基甲酸酯4(定量)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.94(s，1H)，7.16(s，1H)，6.73-6,80(m，2H)，4.96-5.04(m，1H)，3.84(s，3H)，3.33-3.36(m，2H)，2.33-2.41(m，2H)，2.30(s，3H)，2.06-2.14(m，1H)，1.45-1.75(m，8H)。

中間體1D.N-(9-(6-氨基己基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)氨基甲酸酯(6a)。

將來自中間體1C的仲胺(3.3g，11.0mmol)、N-(6-溴己基)鄰苯二甲酰亞胺(3.5g，11.3mmol)、KI(2.0g，12.4mmol)及K₂CO₃(7.8g，56.5mmol)于乙腈(90mL)中的混合物在回流下攪拌過夜。過濾后，在真空中蒸發(fā)揮發(fā)性組分。所得殘余物通過硅膠柱色譜法(5％甲醇于二氯甲烷中)純化，得到呈淺褐色油狀的所希望的中間體受鄰苯二甲酰亞胺基保護(hù)的胺5a(5.8g，96％產(chǎn)率)。

使化合物5a(2.8g，5.3mmol)與水合肼(540mg，10.7mmol)一起于乙醇(100mL)中回流5小時。蒸發(fā)溶劑并添加10％的NaOH水溶液(20mL)。用CH₂Cl₂萃取混合物，經(jīng)Na₂SO₄干燥并蒸發(fā)，得到呈淺黃色油狀的所希望的伯胺N-(9-(6-氨基己基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)氨基甲酸酯6a(1.9g，88％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.96(s，1H)，7.14(s，1H)，6.72-6.80(m，2H)，5.10-5.18(m，1H)，3.84(s，3H)，3.05-3.07(m，2H)，2.66-2.71(m，2H)，2.55-2.59(m，2H)，2.39-2.49(m，2H)，2.29(s，3H)，2.10-2.20(m，1H).1.81-1.94(m，2H)，1.18-1.54(m，15H)。

中間體1E.2-(4-甲?；窖趸?乙酸乙酯(7)。

將2-溴乙酸乙酯(3.7g，22.0mmol)和碳酸鉀(8.3g，60.0mmol)添加至4-羥基苯甲醛(2.4g，20.0mmol)于乙腈(60mL)中的溶液中。使反應(yīng)混合物回流24小時。冷卻后，過濾反應(yīng)混合物，并蒸發(fā)，得到呈淺黃色液體狀的2-(4-甲酰基苯氧基)乙酸乙酯(定量)。¹H NMR(CDCl₃)δ9.90(s，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，2H)，7.01(d，J＝8.4Hz，2H)，4.71(s，2H)，4.28(q，J＝7.1Hz，2H)，1.31(t，J＝7.1Hz，3H)。

中間體1F.2-(4-甲?；窖趸?乙酸(8)。

在甲醇/水(2∶1，90mL)中，用氫氧化鈉(2.2eq)水解中間體1E達(dá)24小時，隨后用10％HCl溶液酸化，得到呈灰白色固體狀的2-(4-甲酰基苯氧基)乙酸(3.1g，87％產(chǎn)率)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ13.18(br s，1H)，9.91(s，1H)，7.89(d，J＝8.6Hz，2H)，7.13(d，J＝8.6Hz.2H)，4.86(s，2H)。

中間體1G.2-(2-氯乙酰胺基)苯甲酸(9)。

將三乙胺(4.06g，40.1mmol)添加至2-氨基苯甲酸(5.0g，36.5mmol)于二氯甲烷(90mL)中的溶液中，并在冰浴中冷卻該混合物。逐滴添加氯乙酰氯(4.5g，40.1mmol)于二氯甲烷(40mL)中的溶液并在環(huán)境溫度下，使混合物攪拌過夜。過濾固體并依序用冷水和含5％乙醚的己烷洗滌，并且空氣干燥，得到呈白色固體狀的2-(2-氯乙酰胺基)苯甲酸(7.4g，95％產(chǎn)率)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ11.82(s，1H)，8.52(d，J＝7.5Hz，1H).8.01(d，J＝7.5Hz，1H)，7.63(t，J＝7.5Hz，1H)，7.21(t，J＝7.5Hz，1H)，4.45(s，2H)。

中間體1H.2-(氯甲基)-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮(10)。

將磷酰氯(6.5g，42.4mmol)逐滴添加至中間體1G(3.1g，14.5mmol)和2-乙氧基苯胺(2.0g，14.5mmol)于乙腈(50mL)中的混合物中。在回流下加熱混合物過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入冰/飽和Na₂CO₃溶液的漿液中。過濾所得固體，用水洗滌并空氣干燥，得到呈褐色固體狀的2-(氯甲基)-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮(10)(2.5g，53％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ8.31(d，J＝7.8Hz，1H)，7.78-7.82(m，2H)，7.47-7.55(m，2H)，7.35(d，J＝7.4Hz，1H)，7.06-7.14(m，2H)，4.35(d，J＝11.9Hz，1H)，4.17(d，J＝11.9Hz，1H)，4.06(q，J＝6.9Hz，2H)，1.23(t，J＝6.9Hz，3H)。

中間體1L.3-(2-乙氧基苯基)-2-(哌嗪-1-基-甲基)喹唑啉-4(3H)-酮(11)。

將哌嗪(2.7g，32.0mmol)添加至中間體1H(2.5g，8.0mmol)、K₂CO₃(4.4g，32.0mmol)及KI(1.7g，10.4mmol)于乙腈(75mL)中的混合物中。在85-90℃下，將反應(yīng)混合物加熱過夜。冷卻后，將其過濾并用乙腈洗滌固體。蒸發(fā)合并的有機(jī)層。使所得殘余物分散于水中并用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)Na₂SO₄干燥，過濾并蒸發(fā)。粗殘余物通過柱色譜法(10％甲醇、0.5％NH₄OH于二氯甲烷中)純化，得到呈黃色油狀的3-(2-乙氧基苯基)-2-(哌嗪-1-基-甲基)喹唑啉-4(3H)-酮(2.3g，79％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ8.30(d，J＝7.8Hz，1H)，7.75-7.77(m，2H)，7.39-7.50(m，2H)，7.28(d，J＝7.0Hz，1H)，7.01-7.08(m，2H)，4.05(q，J＝6.8Hz，2H)，3.18-3.28(m，2H)，2.73(s，4H)，2.33-2.37(m，2H)，2.17-2.20(m，2H)，1.22(t，J＝6.8Hz，3H)。

中間體1J.4-(2-(4-((3-(2-乙氧基苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)-哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯甲醛(12)。

將酸8(360mg，2.0mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(280mg，2.4mmol)于乙腈(12mL)中的冷卻的混合物添加至DCC(500mg，2.4mmol)于乙腈(4mL)中的溶液中。在室溫下攪拌45分鐘后，添加中間體H(800mg，2.2mmol)于乙腈(10mL)中的溶液，隨后繼續(xù)攪拌過夜。濾出固體并蒸發(fā)濾液。所得殘余物通過柱色譜法(8％甲醇于二氯甲烷中)純化，得到呈灰白色固體狀的4-(2-(4-((3-(2-乙氧基苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙氧基)苯甲醛(847mg，80％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ9.89(s，1H)，8.27-8.31(m，1H)，7.72-7.84(m，4H)，7.42-7.52(m，2H)，7.25(d，J＝6.3Hz，1H)，7.02-7.09(m，4H)，4.74(s，2H)，4.05(q，J＝7.0Hz，2H)，3，42-3.49(m，4H)，3.22-3.31(m，2H)，2.18-2.46(m，4H)，1.22(t，J＝7.0Hz，3H)。

9-(6-((4-(2-(4-((3-(2-乙氧基苯基)-4-氧代-3，4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)-哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯甲基)氨基)己基)-N-(9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基苯基)氨基甲酸酯草酸鹽(SW V-49s)。

將胺中間體1D(6a)(386mg，0.95mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液添加至中間體1J(12)(480mg，0.91mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。攪拌混合物4小時，然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解于乙醇(5mL)中，然后添加NaBH₄(100mg，2.6mmol)。攪拌混合物6小時，隨后用10％HCl溶液中止。蒸發(fā)溶劑后，將其用10％NaOH溶液堿化，用二氯甲烷萃取并蒸發(fā)。所得殘余物通過柱色譜法(10％甲醇、0.5％NH₄OH于二氯甲烷中)純化，得到呈游離胺形式的產(chǎn)物(460mg，55％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ8.30(d，J＝7.8Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.74-7.78(m，2H)，7.41-7.51(m，2H)，7.23-7.26(m，3H)，7.14(s，1H)，7.03-7.09(m，2H)，6.86(d，J＝8.6Hz，2H)，6.73-6.79(m，2H)，5.10-5.16(m，1H)，4.62(s，2H)，4.04(q，J＝6.9Hz，2H)，3.85(s，3H)，3.74(s，2H)，3.43-3.48(m，4H)，3.22-3.30(m，2H)，3.12(br s，2H)，2.60-2.64(m，4H)，2.37-2.50(m，4H)，2.29(s，3H)，2.19-2.25(m，3H)，1.90-1.96(m，2H)，1.48-1.58(m，7H)，1.28-1.34(m，6H)，1.22(t，J＝6.9Hz，3H)。使用1當(dāng)量草酸在乙醇中制備草酸鹽，得到呈灰白色固體狀的SW V-49s(470mg，93％產(chǎn)率)。熔點164-165℃。分析(C₅₅H₆₉N₇O₁₁·2H₂O)：計算值，％：C 63.51，H 7.07，N 9.43；實驗值，％：C 63.54，H 7.06，N 9.76。

實施例2：3-(鄰乙氧基苯基)-2-{[4-(2-(對-[(10-{3-(2-甲氧基氨基甲苯羰氧基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-9-基}癸基氨基)甲基]苯氧基)乙酰基)-1-哌嗪基]甲基}-3H-喹唑啉-4-酮)草酸鹽(SW V-50s)

中間體2A.N-(9-(10-氨基癸基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基苯基)氨基甲酸酯(6b)。

在回流下，將來自中間體1C的仲胺(3.6g，11.8mmol)、N-(10-溴癸基)鄰苯二甲酰亞胺(4.4g，12.0mmol)、KI(2.0g，12.4mmol)及K₂CO₃(8.2g，59.4mmol)于乙腈(90mL)中的混合物攪拌過夜。過濾后，在真空中蒸發(fā)揮發(fā)性組分。所得殘余物通過硅膠柱色譜法(5％甲醇于二氯甲烷中)純化，得到呈淺褐色油狀的所希望的受鄰苯二甲酰亞胺基保護(hù)的中間體5b(6.0g，86％產(chǎn)率)。

使化合物5b(2.9g，4.9mmol)與水合肼(700mg，13.9mmol)一起于乙醇(100mL)中回流5小時。蒸發(fā)溶劑并添加10％的NaOH水溶液(20mL)。用CH₂Cl₂萃取混合物，經(jīng)Na₂SO₄干燥并蒸發(fā)，得到呈淺黃色油狀的伯胺N-(9-(10-氨基癸基)-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3α-基)-N’-(2-甲氧基-5-甲基苯基)氨基甲酸酯6b(2.2g，95％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ7.96(s，1H)，7.14(s，1H)，6.72-6.80(m，2H)，5.10-5.18(m，1H)，3.84(s，3H)，3.04-3.07(m，2H)，2.65-2.70(m，2H)，2.53-2.58(m，2H)，2.39-2.49(m，2H)，2.29(s，3H)，2.08-2.20(m，1H)，1.83-1.94(m，2H)，1.18-1.54(m，23H)。

將胺中間體2A(343mg，0.74mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液添加至12(380mg，0.72mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。攪拌混合物4小時，然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解于乙醇(5mL)中，然后添加NaBH₄(100mg，2.6mmol)。攪拌混合物6小時，隨后用10％HCl溶液中止。蒸發(fā)溶劑后，將其用10％NaOH溶液堿化，用二氯甲烷萃取并蒸發(fā)。所得殘余物通過柱色譜法(10％甲醇、0.5％NH₄OH于二氯甲烷中)純化，得到呈游離胺形式的產(chǎn)物(295mg，42％產(chǎn)率)。¹H NMR(CDCl₃)δ8.29(d，J＝7.8Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.73-7.78(m，2H)，7.41-7.51(m，2H)，7.21-7.24(m，3H)，7.14(s，1H)，7.02-7.08(m，2H)，6.86(d，J＝8.2Hz，2H)，6.73-6.79(m，2H)，5.10-5.16(m，1H)，4.61(s，2H)，4.04(q，J＝6.9Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.72(s，2H)，3.44-3.48(m，4H)，3.21-3.31(m，2H)，3.09(br s，2H)，2.59-2.62(m，4H)，2.36-2.50(m，4H)，2.29(s，3H)，2.17-2.24(m，3H)，1.88-1.94(m，2H)，1.40-1.57(m，7H)，1.24-1.30(m，6H)，1.21(t，J＝6.9Hz，3H)。使用1當(dāng)量草酸在乙醇中制備草酸鹽，得到呈淺褐色固體狀的SW V-50(308mg，95％產(chǎn)率)，熔點183-184℃。分析(C₅₉H₇₇N₇O₁₁·2H₂O)：計算值，％：C 64.64，H 7.45，N 8.94；實驗值，％：C 64.84，H 7.41，N 8.62。

表1.雙結(jié)構(gòu)域σ-2受體配體藥物綴合物化合物，包括σ-2受體配體埃拉汀綴合物化合物和σ-2受體配體埃拉汀類似物綴合物化合物的另外的實例。

生物活性分析

以下分析可以用于評價式(I)化合物的生物功效。

本文所描述的方法和組合物利用了熟練技術(shù)人員眾所周知的實驗室技術(shù)，并且可以見于實驗室手冊，如Sambrook，J.等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，2001；Spector，D.L.等人，Cells：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1998；Nagy，A.，Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual(第三版)，Cold Spring Harbor，NY，2003；Harlow，E.，Using Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1999；及Carruthers，W.，和Coldham，I.，Modern Methods of Organic Synthesis(第4版)，Cambridge University Press，Cambridge，U.K.，2004。藥物的施用方法及劑量方案可以根據(jù)熟練技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)原理，使用如Remington：the Science and Practice of Pharmacy(Alfonso R.Gennaro編，第19版，1995)；Hardman，J.G.等人，Goodman&Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第九版，McGraw-Hill，1996；及Rowe，R.C.等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients，第四版，Pharmaceutical Press，2003等標(biāo)準(zhǔn)參考書提供的方法來測定。如本說明和所附權(quán)利要求書中所使用，單數(shù)形式“一個(種)”和“所述”意圖也包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文另作指示。

毒性研究方法

將六只成年雌性小鼠送去尸檢。這些小鼠的品系名稱是C57BL/6。先前的程序包括在2周時間內(nèi)每日腹膜內(nèi)施用鐵死亡誘導(dǎo)藥物或媒介物對照。另外，預(yù)先對小鼠皮下移植KCKO異種移植物(Besmer，D.M.等人，Cancer Res.17：4432-4442，2011)。

細(xì)胞系

CFPAC-1、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1及Mia PaCa-2細(xì)胞系是從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Manasas，VA)獲得。SYO-1細(xì)胞系，一種滑膜肉瘤細(xì)胞系(Kawai，A.等人，Cancer Lett 204：105-113，2004)是由Brian Van Tine博士(Washington University School of Medicine，St.Louis，MO)提供。KCKO細(xì)胞系是從表達(dá)人MUC1的轉(zhuǎn)基因小鼠的胰腺腫瘤分離(Besmer等人，Cancer Research 2011；71：4432-4442；Tinder等人，J Immunol 2008；181：3116-3125)。KCKO細(xì)胞系是由Pinku Mukherjee博士(University of North Carolina，Charlotte，NC)提供。PANC-1細(xì)胞在含有4mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氫鈉及10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良型Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)。Mia PaCa-2細(xì)胞系是在含10％FBS和2.5％馬血清的Dulbecco改良型Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)。BxPC-3、AsPC-1及KCKO細(xì)胞系是在含10％FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。SYO-1滑膜肉瘤細(xì)胞是在含10％FBS的Dulbecco改良型Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)。向培養(yǎng)基中添加抗生素青霉素(100mg/ml)和鏈霉素(100mg/ml)并將細(xì)胞維持在37℃并含5％CO₂的潮濕恒溫箱中。

統(tǒng)計學(xué)

統(tǒng)計學(xué)分析和數(shù)據(jù)作圖是使用第6版GraphPad Prism軟件(San Diego，CA)進(jìn)行。結(jié)果表示為至少3次生物重復(fù)實驗的平均值±SEM。IC₅₀值是通過擬合正規(guī)化活力隨藥物濃度變化的曲線來計算。使用單因素ANOVA，利用NAC和ZVAD測試分析IC₅₀值和SW V-49s抑制作用的差異。使用不成對雙尾t測試評價CBC和生物化學(xué)分析的差異，并確認(rèn)胱氨酸攝取、胱天蛋白酶及ROS檢測分析亞組的差異。使用雙因素ANOVA分析腫瘤體積差異。使用Kaplan-Meier存活率分析并用對數(shù)秩測試比較各組之間的差異。對于所有分析，p值＜0.05被認(rèn)為是顯著的。

尸檢前檢查

小鼠A(ID：732)是媒介物對照。剃除右側(cè)腹上的被毛，其中部分再生長。在右側(cè)腹中可觸知極小的皮下增厚。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是21克。

小鼠B(ID：727)用測試藥物處理。剃除右側(cè)腹上的被毛，其中部分再生長。在腰脊柱上觀察到1.5×0.6cm大小的皮下腫塊，并且緊密地粘附于下伏的肌肉組織中。在此腫塊上覆的皮膚中觀察到4-5mm直徑的漬瘍。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是21克。

小鼠C(ID：735)是媒介物對照。在此動物中觀察到后部麻痹，并且拖拽后肢。深部痛覺反應(yīng)可以從左后腿引起，但不從右后腿引起。使右側(cè)腹上的被毛略微變薄。在腰脊柱上觀察到堅硬的皮下腫塊。此腫塊牢固地附著于下伏組織。在右側(cè)腹上觀察到0.2-0.3cm直徑的皮膚增厚，其內(nèi)是0.1cm直徑的潰瘍。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是20克。

小鼠D(ID：737)用測試藥物處理。在脊柱上可觸知皮下腫塊。被毛正常。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是19克。

小鼠E(ID：746)是媒介物對照。剃除右側(cè)腹上的被毛，其中部分再生長。在右側(cè)腹中觀察到0.6cm直徑的堅硬皮下結(jié)節(jié)。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是23克。

小鼠F(ID：738)用測試藥物處理。被毛正常。在腰脊柱上方可觸知堅硬的皮下腫塊。脊柱易于觸知，表明可能發(fā)生肌肉消瘦。未出現(xiàn)鼻或眼分泌物或腹瀉。水合作用和體脂正常。體重是22克。

肉眼尸檢檢查

關(guān)于小鼠A，在尸檢前檢查時觀察到的皮下增厚是0.5×0.1cm大小的堅硬腫塊。不受理論限制，在靠近遠(yuǎn)端結(jié)腸的腸系膜中觀察到的0.4×0.1cm增厚區(qū)域可能是淋巴結(jié)增大的結(jié)果。在左肺中觀察到2mm直徑的發(fā)紅病灶。心臟和肝臟輕微泛白。在腸道、肌肉骨骼系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、腦、胸腺、脾、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

關(guān)于小鼠B，皮下腫塊是具有多小葉的，并且大小是1.8×0.6cm，附有1.0cm直徑結(jié)節(jié)。皮下腫塊位于皮下腰脊柱和右側(cè)背上方。脊柱中未發(fā)生浸潤。該腫塊向腹側(cè)突出，碰撞腹部。肝臟略微泛白。心臟輕微泛白。在呼吸系統(tǒng)、腸道、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、腦、胸腺、脾、淋巴結(jié)、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

關(guān)于小鼠C，皮下腫塊大小是1.8×1.7×1.5cm并且看來覆蓋中部腰脊柱。腫塊呈淺棕褐色、堅硬并且略帶結(jié)節(jié)。心臟和肝臟輕微泛白。在呼吸系統(tǒng)、腸道、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、腦、胸腺、脾、淋巴結(jié)、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

關(guān)于小鼠D，皮下腫塊大小是1.2×0.8cm并且覆蓋腰脊柱。不受理論束縛，椎骨的背部棘狀突起可能被腫瘤侵蝕。肝臟輕微泛白。在呼吸系統(tǒng)、腸道、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心臟、腦、胸腺、脾、淋巴結(jié)、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

關(guān)于小鼠E，肺呈斑點狀紅色。肝臟略微泛白。在腸道、肌肉骨骼系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心臟、腦、胸腺、脾、淋巴結(jié)、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

關(guān)于小鼠F，在皮膚和皮下組織中觀察到兩個腫塊。一個大小是0.5×0.5×0.3cm并且位于皮膚中，而另一個大小是0.5×0.5×0.2cm并且在皮下組織中，上覆腰脊柱。在呼吸系統(tǒng)、腸道、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、心臟、腦、胸腺、脾、淋巴結(jié)、腎上腺、甲狀腺、垂體、中耳或眼中無肉眼病變。

組織病理學(xué)檢查.

關(guān)于小鼠A，在包括巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞的腸系膜脂肪中觀察到輕微的多灶性炎癥性浸潤。觀察到反應(yīng)性腸系膜淋巴結(jié)，伴隨的淋巴樣增生、組織細(xì)胞增多及髓竇擴(kuò)張。在不受理論束縛情況下，在一個肺葉中觀察到的中度灶性出血可能與CO₂安樂死有關(guān)。在腦、心臟、肝臟、腎臟、脾、胰臟或胃腸道中無明顯病變。

關(guān)于小鼠B，在腸系膜中并且沿小腸道和大腸道及胃以及在胰臟周圍觀察到輕度至中度慢性腹膜炎。這以巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞的浸潤以及纖維化區(qū)域為特征。在回腸中觀察到輕度粘膜增生。如先前所描述，位于胰臟附近的腸系膜淋巴結(jié)具有反應(yīng)性。在胰實質(zhì)內(nèi)未觀察到病變。在膽囊周圍以及沿右腎小囊表面觀察到輕度腹膜炎。在肝臟或腎臟中未觀察到其它病變。沿脾觀察到輕度囊性增厚和間皮細(xì)胞性增生。在脾髓中出現(xiàn)髓外紅細(xì)胞生成的中度增加。在腦、心臟或肺中無明顯病變。

關(guān)于小鼠C，肺檢查揭露原發(fā)腫瘤的幾個小轉(zhuǎn)移灶。不受理論限制，原發(fā)腫瘤看來侵襲到骨骼，因為在腫塊內(nèi)觀察到較小骨骼片段。在腦、心臟、肝臟、腎臟、脾、胰臟或胃腸道中無明顯病變。

關(guān)于小鼠D，沿胃、小腸的漿膜表面以及在胰臟周圍觀察到微小至輕度慢性腹膜炎，并且如先前所述，存在炎性細(xì)胞和纖維化區(qū)域。沿肝臟和腎臟的囊性表面也觀察到腹膜炎病灶。在胃腸道、胰臟、肝臟及腎臟中未觀察到其它病變。在脾中，出現(xiàn)髓外紅細(xì)胞生成的中度增加。在一個肺葉中觀察到2個較小的化膿性肉芽腫病灶。其病因未知；未觀察到相關(guān)外來物質(zhì)。腫瘤明顯侵入腰部肌肉組織。腫瘤細(xì)胞還緊密接近椎體并且包圍較小骨骼片段，不受理論限制，推測此表示椎體的背部棘狀突起。在腦或心臟中無明顯病變。

關(guān)于小鼠E，在腸系膜脂肪中，出現(xiàn)微小至輕度巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤。如先前所描述，在胰臟附近觀察到輕度反應(yīng)性淋巴結(jié)。在腦、心臟、肺、肝臟、腎臟、胰臟、脾或胃腸道中未觀察到明顯病變。

關(guān)于小鼠F，如先前所描述，沿腸道漿膜表面并且在胰臟周圍的腸系膜中觀察到輕度慢性腹膜炎。在一個胰小葉中出現(xiàn)腺細(xì)胞損失及巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞替代，這可能表示在腸系膜中觀察到的反應(yīng)的擴(kuò)展。在腎小囊上及腎臟周圍的腸系膜中也觀察到輕度腹膜炎。在腸道、肝臟及腎臟中未觀察到其它病變。在脾中，出現(xiàn)髓外紅細(xì)胞生成和粒細(xì)胞生成的中度增加。在腦、心臟、肺或胃中無肉眼病變。

血液學(xué)檢驗

藥物處理的動物與對照動物之間的差異是在藥物處理的動物中，沿腸道和腹部器官的漿膜表面以及在胰臟周圍的腸系膜中微小至中度慢性腹膜炎的存在。而對照動物在腸系膜中顯示微小至輕度多灶性炎性浸潤，無纖維組織增生。其它發(fā)現(xiàn)包括在小鼠C中觀察到的ALT和AST升高。不受理論限制，此發(fā)現(xiàn)的病因尚不明了。正如所預(yù)期的，無肝細(xì)胞損傷的組織學(xué)證據(jù)。不受理論限制，其它可能原因包括血液樣品的溶血，或由腫瘤侵襲引起的骨骼損傷。

在小鼠C中，腫瘤侵入腰部肌肉組織中，并出現(xiàn)骨骼片段化，不受理論限制，這可能與椎體突起的情形相同，并且發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。在小鼠D中，腫瘤侵入腰部肌肉組織中并且背部棘狀突起片段化。

表2：全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果

*觀察到輕度血小板凝塊。

表3：差異結(jié)果

表4：臨床化學(xué)結(jié)果

化合物SW V-49s的σ-2受體結(jié)合特性

在這些實驗中，在以下結(jié)構(gòu)的熒光標(biāo)記的σ-2配體SW120存在下，對SW V-49s進(jìn)行競爭性結(jié)合分析：

將AsPC-1細(xì)胞(5×10⁵個/孔)接種于6孔板中，保持24小時，隨后進(jìn)行處理。接著，在37℃下，將細(xì)胞與0、10、30及50μM的SW V-49s一起孵育30分鐘。隨后，向含有SW V-49s的細(xì)胞培養(yǎng)基中添加10nM熒光標(biāo)記的σ-2配體SW120。在37℃下孵育30分鐘之后，用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)洗滌細(xì)胞兩次，并用0.05％胰蛋白酶EDTA(Life Technologies，Grand Island，NY)收獲。此后，以1000×g離心細(xì)胞5分鐘，并用PBS洗滌細(xì)胞團(tuán)兩次。SW 120的內(nèi)化通過流式細(xì)胞儀(FACSCalibur^TM，BD Biosciences，San Jose，CA)測定。

圖3顯示在人Panc-1細(xì)胞中10μM熒光標(biāo)記的SW 120的內(nèi)化(Spitzer，D.等人，Cancer Res.72：201-209，2012)與SW V-49s的競爭性抑制作用。這些數(shù)據(jù)指示在遞增濃度的SW V-49s存在下，SW 120內(nèi)化得到有效阻斷。這些結(jié)果表明，SW V-49s有效結(jié)合σ-2受體。

SW V-49s在體外對癌細(xì)胞系展現(xiàn)致死作用

在這些實驗中，在用SW V-49s或其單獨或組合的母體化合物SV 119和埃拉汀處理人和鼠胰腺癌細(xì)胞系和滑膜肉瘤細(xì)胞系24小時后進(jìn)行活力分析。數(shù)據(jù)顯示，SW V-49s針對人胰腺癌細(xì)胞系Panc-1(CRL-1469^TM)的IC₅₀濃度是4.3μM(圖4A)；SW V-49s針對人胰腺癌細(xì)胞系BxPC-3(CRL-1687^TM)的IC₅₀濃度是2.3μM(圖4B)；SW V-49s針對人胰腺癌細(xì)胞系MIA PaCa-2(CRL-1420^TM)的IC₅₀濃度是2.3μM(圖4C)；SW V-49s針對人胰腺癌細(xì)胞系A(chǔ)sPC-1(CRL-1682^TM)的IC₅₀濃度是3μM(圖4D)；及SW V-49s針對鼠胰腺癌細(xì)胞系(KCKO細(xì)胞)的IC₅₀濃度是2.2μM(圖4E)。相比之下，單獨埃拉汀針對測試的所有人和鼠胰腺癌細(xì)胞系展現(xiàn)的IC₅₀＞100μMM；單獨SV 119針對測試的所有人和鼠胰腺癌細(xì)胞系展現(xiàn)的IC₅₀＞54μM；并且埃拉汀與SV 119的等摩爾濃度混合物針對測試的所有人和鼠胰腺癌細(xì)胞系展現(xiàn)的IC₅₀＞44μM。

滑膜肉瘤細(xì)胞系(圖4F，SYO-1，ME1缺陷型)對SW V-49s如此敏感以致難以測量殺傷50％的癌細(xì)胞所需的最低藥物濃度，但測量的IC₅₀是約1.0μM。相比之下，測試的其它化合物針對滑膜肉瘤細(xì)胞的IC₅₀如下：埃拉汀，＞16μM；SV 119，6.2μM；埃拉汀+SV119，4.9μM。

這些數(shù)據(jù)表明，SW V-49s針對癌細(xì)胞，包括人和鼠胰腺癌細(xì)胞和滑膜肉瘤細(xì)胞的致死作用遠(yuǎn)高于其單獨或組合的組分母體化合物。

SW V-49s的雙重功能

在這些實驗中，本發(fā)明人研究了本教導(dǎo)的化合物是通過觸發(fā)細(xì)胞凋亡性細(xì)胞死亡途徑、鐵死亡性細(xì)胞死亡途徑還是其組合而對胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生致死作用。本發(fā)明人因此進(jìn)行了以胱天蛋白酶3/7作為細(xì)胞凋亡性細(xì)胞死亡的指示的分析，及以活性氧物質(zhì)(ROS)的產(chǎn)生作為鐵死亡性細(xì)胞死亡的指示的分析。如圖5A中所示，用50μM埃拉汀、SV 119或埃拉汀加SV 119的等摩爾濃度混合物處理AsPC-1細(xì)胞24小時所引起的胱天蛋白酶活性遠(yuǎn)低于4μM的SW V-49s。在圖5B中，顯示了用8μM SW V-49s、8μM埃拉汀、8μM SV 119或8μM埃拉汀與SV 119的等摩爾濃度混合物處理Aspc-1細(xì)胞7小時的(Promega)分析的結(jié)果。相較于所有對照，用SW V-49s處理的細(xì)胞中胱天蛋白酶3/7活性顯著增加(約3倍)，*p＜0.0001。

在圖6中，顯示了用8μM 8μM SW V-49s、8μM埃拉汀、8μM SV 119或8μM埃拉汀與SV 119的等摩爾濃度混合物，或陽性對照處理Aspc-1細(xì)胞30分鐘的活性氧物質(zhì)(ROS)分析的結(jié)果。相較于所有埃拉汀、SV 119或其組合，用SW V-49s處理的細(xì)胞中ROS胱天蛋白酶顯著(50％)增加，*p＜0.0001，與鐵死亡性細(xì)胞死亡相符。用于細(xì)胞的單獨或組合的母體化合物SV 119和埃拉汀在相同濃度下沒有影響。

不受理論限制，這些數(shù)據(jù)表明，SW V-49s在胰腺癌細(xì)胞中同時誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡性和鐵死亡性細(xì)胞死亡途徑。

施用SW V-49s可以在體內(nèi)減小胰腺腫瘤大小

圖7示出在向帶有確定的同基因皮下KCKO鼠胰腺腫瘤的C57BL/6小鼠施用10天的SW V-49s、埃拉汀、SV119、埃拉汀與SV119的混合物及媒介物對照之后平均腫瘤體積(以mm³表示)的變化。SW V-49s處理引起腫瘤體積的顯著減小，但其它處理則不然(p＜0.05)。這些處理引起極小脫靶效應(yīng)。在圖7中觀察到，在SW V 49s處理的小鼠中腫瘤體積從約40mm³減小到約20mm³，而其它處理從約40mm³增加至約140mm³。

在鼠模型系統(tǒng)中施用SW V-49s可以增加胰腺癌的存活率

在這些實驗中，在實施例9中所報導(dǎo)的小鼠存活率研究中，接受SW V-49s的組100％存活(圖8)。在所有其它組中，平均存活期集中在約18天。

SW V-49s誘導(dǎo)胰腺癌的細(xì)胞死亡

利用發(fā)光細(xì)胞活力分析(Promega，Madison，WI)評價藥物的細(xì)胞毒性。將胰腺細(xì)胞系以2×10⁴個/孔的密度涂鋪于底部透明的白色96孔板中，保持24小時，隨后處理。將藥物溶解于DMSO中并在培養(yǎng)基中連續(xù)稀釋以使DMSO的最終濃度低于1％。接著，處理細(xì)胞24小時，并向每個孔中添加100μl試劑。施用回轉(zhuǎn)式振蕩器混合板的內(nèi)含物，隨后在室溫下孵育10分鐘。使用多模式微量板讀取器(BioTek instruments，Winooski，VT)測量發(fā)光信號。一式三份分析不同藥物濃度。為了評價藥物的功效，在體外計算化合物針對一組人和鼠來源的胰腺癌細(xì)胞系的IC₅₀。用SW V-49s、SV119、埃拉汀及SV119與埃拉汀的等摩爾濃度混合物處理細(xì)胞24小時，隨后進(jìn)行活力分析。埃拉汀是活性最低的化合物，并且IC₅₀＞150μM。SV119展現(xiàn)適度功效，該功效因添加埃拉汀而增大。然而，SW V-49s顯示穩(wěn)健的細(xì)胞毒性，并且IC₅₀相較于用SV119與埃拉汀的等摩爾濃度混合物處理有17-20倍減小(表4和圖9)。這些結(jié)果表明，SW V49s選擇性遞送至胰腺癌細(xì)胞中。

表5.用不同化合物處理胰腺細(xì)胞系24小時的IC₅₀(μM).

(平均值±SEM)。n≥3。P＜0.05

由于埃拉汀在所有胰腺細(xì)胞系中未展現(xiàn)作用，故本發(fā)明人使用SYO-1細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量控制實驗。將AsPC-1和SYO-1細(xì)胞涂鋪于96孔板中過夜，然后用類似濃度的埃拉汀處理24小時。24小時后進(jìn)行活力分析。用40μM埃拉汀處理引起84％的SYO-1細(xì)胞死亡，與AsPC-1細(xì)胞的2％形成對比(p＜0.0001)(圖10)。本實驗證實，所用埃拉汀具有生物活性并且胰腺細(xì)胞系對埃拉汀具有抗性。

SW V-49s抑制胱氨酸攝取并產(chǎn)生活性氧物質(zhì)

在這些實驗中，如先前所描述(Dixon，S.J.等人，Cell 2012；149：1060-1072)進(jìn)行胱氨酸攝取分析。簡單點說，將5×10⁵個AsPC-1細(xì)胞/孔接種于6孔板中過夜。次日，細(xì)胞在預(yù)先加溫的無Na⁺攝取緩沖液(137mM膽堿氯化物、3mM KCl、1mM CaCl₂、1mM MgCl₂、5mM D-葡萄糖、0.7mM K₂HPO₄及10mM HEPES[pH 7.4])中洗滌兩次。隨后，在37℃下，細(xì)胞在1ml攝取緩沖液中孵育10分鐘以耗盡細(xì)胞氨基酸。用600μl含有200μM SW V-49s和0.12μCi(80-110mCi/mmol)L-[3，3′-¹⁴C]-胱氨酸(American Radiolabeled Chemicals，St Louis，MO)的攝取緩沖液更換該緩沖液，并在37℃下孵育3分鐘。之后，用冰冷的攝取緩沖液洗滌細(xì)胞三次，并將其溶解于500μl的0.1M NaOH中。向此溶解產(chǎn)物中添加1ml閃爍液，并通過使用閃爍計數(shù)器獲得每分鐘的放射性計數(shù)。

經(jīng)顯示，埃拉汀通過抑制胱氨酸/谷氨酸反向轉(zhuǎn)運體(系統(tǒng)x_c^-)，引起ROS依賴性細(xì)胞死亡來阻斷胱氨酸攝取(Dixon等人，Cell 2012：149：1060-1072)。為了評價此機(jī)制，將AsPC-1細(xì)胞涂鋪于6孔板中，保持24小時。接著用相同濃度的SV119、埃拉汀、SV119與埃拉汀的組合、SW V-49s及作為對照的DMSO處理細(xì)胞。隨后，進(jìn)行胱氨酸攝取分析。用SW V-49s處理的細(xì)胞展現(xiàn)胱氨酸攝取減少85％(比半胱氨酸攝取低3.7倍)，與用SV119、埃拉汀及SV119與埃拉汀的組合處理的細(xì)胞各自的25％、41％及44％減少形成對比(p＝0.004，圖11A)。

使用總ROS/過氧化物檢測試劑盒(Enzo life sciences，F(xiàn)armingdale，NY)，根據(jù)制造商的說明測量ROS。簡單點說，將AsPC-1細(xì)胞以2×10⁴個細(xì)胞/孔的密度接種于黑色壁、透明底的96孔板中，保持24小時。將化合物溶解于DMSO中并在培養(yǎng)基中稀釋以使DMSO的最終濃度低于1％。用8μM SV119、埃拉汀及SV119與埃拉汀的等膜濃度混合物處理AsPC-1細(xì)胞。處理一小時后進(jìn)行ROS分析。處理細(xì)胞一小時，隨后去除培養(yǎng)基并添加100μL/孔ROS/過氧化物檢測混合物。使用多模式微量板讀取器(Bio-Tek，Winooski，VT)測量熒光信號。該分析是一式六份進(jìn)行。

用SW V-49s處理的細(xì)胞的ROS水平比其它高1.5倍。在用該濃度的SV119、埃拉汀及SV119與埃拉汀的等摩爾濃度混合物處理的細(xì)胞中ROS水平?jīng)]有增加(圖11B，p＜0.0001)。

化合物SW V-49s可以誘導(dǎo)固有的細(xì)胞凋亡途徑

在這些實驗中，使用相應(yīng)的分析，根據(jù)制造商的說明(Promega，Madison，WI)測量AsPC-1細(xì)胞中胱天蛋白酶-3/7、8及9的活性。本分析是基于胱天蛋白酶特異性底物，該底物被裂解而釋放氨基熒光素，這是熒光素酶的底物，會產(chǎn)生胱天蛋白酶特異性發(fā)光信號。將細(xì)胞以2×10⁴的密度接種于底部透明的白色96孔板中，保持24小時，隨后用4μM化合物處理。然后，使用板振蕩器混合內(nèi)含物30秒，隨后在室溫下孵育90分鐘。使用多模式微量板讀取器(BioTek)測量法光信號。分析是以一式三份進(jìn)行，并且DMSO的胱天蛋白酶活性視為基線。

本發(fā)明人顯示，SV119誘導(dǎo)胱天蛋白酶-3依賴性細(xì)胞凋亡(Kashiwagi，H.等人，Mol Cancer 2007；6：48)。在這些實驗中，用4μM SW V-49s、SV119、埃拉汀及SV119與埃拉汀的等摩爾濃度混合物處理AsPC-1細(xì)胞24小時。使用分析，測量胱天蛋白酶-3水平以評估SW V-49s化合物的SW119結(jié)構(gòu)域的活性，并測量胱天蛋白酶-8和胱天蛋白酶-9的水平以鑒別所涉及的細(xì)胞凋亡途徑。用SW V-49s處理的細(xì)胞中胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-9有顯著增加(分別高于基線3.4倍和3.2倍，***p＜0.001，分別是圖12A和圖12B)。相比之下，胱天蛋白酶8無顯著增加，ns＞0.5(圖12C)。其它測試化合物在類似濃度下不活化任何胱天蛋白酶(圖12A-C)。這些結(jié)果表明，SW V-49s可以選擇性遞送至癌細(xì)胞中并且其兩個結(jié)構(gòu)域可以協(xié)同作用以活化固有的細(xì)胞凋亡途徑。

SW V-49s可以誘導(dǎo)ROS和細(xì)胞凋亡依賴性細(xì)胞死亡

本發(fā)明人證實，SW V-49s可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和ROS產(chǎn)生。為了評估這兩種機(jī)制對誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的作用，測試了全胱天蛋白酶抑制劑和抗氧化劑對SW V-49s功效的影響。在這些實驗中，用10mM抗氧化劑N-乙?；腚装彼?NAC)、20μM全胱天蛋白酶抑制劑ZVAD及作為對照的DMSO對AsPC-1細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，持續(xù)1小時。然后，這3組用10μM的SW V-49s處理5小時，隨后進(jìn)行分析。結(jié)果表明，用單獨SW V-49s處理的細(xì)胞的活力降低到39％，與用NAC和ZVAD預(yù)處理的細(xì)胞分別是63％和91％形成對比(圖13，p＜0.0001)。由此發(fā)現(xiàn)NAC在抑制SW V-49s活性方面更有效(圖13，p＜0.002)。這些數(shù)據(jù)證實了SW V-49s的雙重功能并且表明它可以同時誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡依賴性和ROS依賴性細(xì)胞死亡。

SW V-49s在小鼠和患者源性胰腺癌異種移植模型中減少腫瘤生長并增加存活率。

根據(jù)Washington University institutional Animal Care Facility批準(zhǔn)的動物研究方案進(jìn)行動物研究。用小鼠進(jìn)行體內(nèi)研究以比較SW V-49s、SV119、埃拉汀、SV119與埃拉汀的組合及媒介物的作用。在體內(nèi)研究中使用的媒介物是25％克列莫佛(cremophor)與75％H₂O的混合物。向C57BL/6小鼠(6周齡；National Cancer Institute Laboratories)的右側(cè)腹中注射200μL的KCKO細(xì)胞于RPMI培養(yǎng)基中的單細(xì)胞懸浮液(25×10⁴/10⁵個細(xì)胞/小鼠)。將小鼠隨機(jī)分成四組(n＝15)。當(dāng)平均腫瘤直徑達(dá)到約5mm時，開始治療。小鼠每天經(jīng)腹膜內(nèi)注射375nmol的SW V-49s以及媒介物、SV119、埃拉汀、SV119與埃拉汀的等摩爾濃度混合物，每劑100μL，持續(xù)10天。每隔一天用數(shù)顯卡尺測量腫瘤。將來自不同治療組的若干小鼠送至本協(xié)會的比較醫(yī)學(xué)分會(Division of Comparative Medicine)進(jìn)行病理學(xué)評價。對收集的血液進(jìn)行全血細(xì)胞計數(shù)(CBC)和生化分析(AST、ALT、BUN、總膽紅素及Cr)。通過肉眼和組織學(xué)方法檢查各器官。

在同基因癌癥模型(KCKO于C57BL/6中)中，僅SW V-49s能夠減小平均腫瘤體積(圖14A，p＝0.0003)。單獨其它試劑或其組合都不會減少腫瘤生長，并且其都與媒介物(對照)具有類似生長速率(圖14A，p＝0.9)。SW V49s治療組的中值存活期是48天，與其它組的(18-21)天形成對比(圖14B，Kaplan-Meier存活率曲線，p＜0.001)。值得注意的是，沒有關(guān)于肉眼可見的小鼠行為(梳毛)異?；蛉魏嗡幬锵嚓P(guān)死亡的記錄。這一點得到了未改變的血清實驗(CBC、AST、ALT、BUN、總膽紅素及Cr)的支持(表5和6)。此外，器官分析(腦、心臟、肺、消化道、腎臟、肝臟及胰腺)除輕度腹膜炎外，未顯示任何明顯的不良藥物作用征象。

表6：SW V-49s在治療C57BL/6小鼠后不誘導(dǎo)血液細(xì)胞學(xué)(CBC)變化。

表6包含了從SW V-49s和媒介物(對照)處理10天的C57BL/6小鼠得到的CBC數(shù)據(jù)。2個組之間的細(xì)胞計數(shù)差異在統(tǒng)計學(xué)上不顯著。

表7：SW V-49s在治療帶有腫瘤的C57BL/6小鼠之后不誘導(dǎo)血清化學(xué)的改變。

表7顯示了用SW IV-134和媒介物(對照)處理10天的C57BL/6小鼠的生化分析。2個組之間的實驗室值的差異在統(tǒng)計學(xué)上不顯著。

另外，在臨床上更相關(guān)的PDAC患者源性小鼠異種移植模型上測試SW V-49s。手術(shù)獲得PDAC試樣(2×2mm薄片)并將其皮下植入麻醉的NOD SCID小鼠的側(cè)腹中。接著，收集腫瘤并植入無胸腺雌性裸小鼠(6周齡，National Cancer Institute Laboratories)的右側(cè)腹中。每天經(jīng)腹膜內(nèi)注射SW IV-134和媒介物來處理這些小鼠，持續(xù)14天。小鼠隨機(jī)分成2組(n＝15)。當(dāng)平均腫瘤直徑達(dá)到約6mm時，開始藥物治療。小鼠每天經(jīng)腹膜內(nèi)注射375nmol的SW V-49s和媒介物，每只小鼠100μL，持續(xù)2周。每隔一天測量腫瘤。當(dāng)腫瘤達(dá)到2cm直徑或潰爛時，對小鼠實施安樂死。

在此模型中，SW V-49s明顯減慢確定的腫瘤的生長速率(圖14C，p＜0.0001)。SW V-49s治療組的中值存活期是58天，與媒介物組的33天形成對比(圖14D，Kaplan-Meier存活率曲線，p＝0.0002)。小鼠對治療的耐受性良好，無明顯脫靶效應(yīng)。

另外，用300nmol SW V-49處理SYO-1滑膜肉瘤(SS)異種移植物。觀察到SS的快速生長模型的生長抑制。圖14E描繪了用SW V-49(300nmol)處理14天的無胸腺裸小鼠中的SS細(xì)胞系SYO-1的異種移植物及后續(xù)跟蹤，p＜0.0001。SYO異種移植物需要較小劑量的SW V-49就能達(dá)到與針對PDAC所達(dá)到的結(jié)果類似的結(jié)果。這些結(jié)果證實SW V-49s在胰腺癌和滑膜肉瘤中具有高功效并且表明其選擇性遞送。

其它實施方案

以上陳述的詳細(xì)說明將幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員實踐本公開。然而，本文描述并且要求的公開內(nèi)容不打算限制本文公開的具體實施方案的范圍，因為這些實施方案打算作為本公開的若干方面的說明。任何等效實施方案都意圖在本公開的范圍內(nèi)。實際上，除本文所描述和顯示的那些外，本領(lǐng)域技術(shù)人員從前述說明將易于了解對本公開的各種修改，而這些修改不偏離本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)的精神或范圍。這些修改也打算在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。

引用的所有參考文獻(xiàn)各自通過引用整體并入本文中。申請人有權(quán)質(zhì)疑任何參考文獻(xiàn)的作者所呈現(xiàn)的任何結(jié)論。