本申請(qǐng)要求2014年5月2日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序號(hào)61/988,131和2015年2月10日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序號(hào)62/114,575的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其各自通過提述以其整體并入本文。ASCII文本文件上的序列表的提交ASCII文本文件上的如下提交的內(nèi)容通過提述以其整體并入本文：計(jì)算機(jī)可讀形式(CRF)的序列表(文件名：159792010440SEQLIST.txt，記錄日期：2015年4月29日，大?。?5KB)。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及變體重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體，其用于改進(jìn)對(duì)眼部和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的遞送；例如用于改進(jìn)的視網(wǎng)膜基因治療和改進(jìn)的CNS基因治療。發(fā)明概述視網(wǎng)膜退化性疾病對(duì)于腺相關(guān)載體(AAV)介導(dǎo)的基因治療是很有前景的焦點(diǎn)。AAV載體能介導(dǎo)視網(wǎng)膜中的長期基因表達(dá)和引發(fā)最小免疫響應(yīng)，使得這些載體對(duì)于向眼睛的基因遞送而言成為了吸引人的選擇。視網(wǎng)膜是眼睛的后部的光敏感性組織，其由多種細(xì)胞類型(包括感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞)組成。AAV基因治療載體的靶細(xì)胞類型和載體遞送途徑取決于疾病指征。例如，年齡相關(guān)性黃斑變性的I期臨床試驗(yàn)采用載體的玻璃體內(nèi)(intravitreally)遞送以實(shí)現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)，而用于治療患有Leber氏先天性黑矇2型(一種形式的視網(wǎng)膜色素變性)的患者的一項(xiàng)最近的臨床試驗(yàn)使用RPE65基因的視網(wǎng)膜下遞送以轉(zhuǎn)導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞。鑒于這樣的效用，需要開發(fā)用于改進(jìn)AAV至眼部遞送的新的藥劑和方法?；谙傧嚓P(guān)病毒(AAV)的載體也已成為用于神經(jīng)基因治療的優(yōu)選載體系統(tǒng)，在多個(gè)臨床試驗(yàn)中具有優(yōu)異的安全記錄((Kaplitt,M.G等(2007)Lancet369:2097-2105；Eberling,J.L等(2008)Neurology70:1980-1983；Fiandaca,M.S等(2009)Neuroimage.47Suppl2:T27-35)。然而，神經(jīng)系統(tǒng)病癥的有效治療已經(jīng)在很大程度上受到與將AAV載體遞送至受影響的細(xì)胞群體相關(guān)的問題的阻礙。此遞送問題對(duì)于涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的病癥是特別成問題的。因此，進(jìn)一步需要增強(qiáng)對(duì)CNS的AAV遞送。在一些方面中，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的眼部的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的視網(wǎng)膜下，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％，約至少25％，約至少50％，約至少75％，或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加rAAV顆粒對(duì)眼部或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加rAAV顆粒對(duì)眼部或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比增加約至少10％，約至少25％，約至少50％，約至少75％，或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述眼部的細(xì)胞是視網(wǎng)膜細(xì)胞、感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、雙極細(xì)胞、水平細(xì)胞、無長突細(xì)胞、Muller細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)、神經(jīng)元(neuron)、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞(brainparenchymacell)、小膠質(zhì)細(xì)胞(microglialcell)、室管膜細(xì)胞(ependemalcell)，和/或浦肯野細(xì)胞(Purkinjecell)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R532處的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV-2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1、AAV6或AAV9衣殼，且其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586和/或589處，編號(hào)基于AAV1、AAV6或AAV9的VP1編號(hào)；和/或其中所述rAAV顆粒包含AAV8或AAVrh10衣殼，且其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置487、490、535、588和/或591處，編號(hào)基于AAV8或AAVrh10的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和rAAV載體，其包含編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內(nèi)皮他汀(Endostatin)、血管他汀(Angiostatin)、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，其中所述異源核酸處于在視網(wǎng)膜中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于所述治療性多肽或治療性核酸在一個(gè)或多個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述視網(wǎng)膜細(xì)胞是感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、雙極細(xì)胞、水平細(xì)胞、無長突細(xì)胞、Muller細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子為視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子、視蛋白啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子、雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如，降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和異源核酸，用于將所述異源核酸遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸用于治療選自下組的眼部病癥：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(autosomalrecessivesevereearly-onsetretinaldegeneration)(Leber氏先天性黑矇(Leber’scongenitalamaurosis))、先天性全色盲、斯塔加特氏病(Stargardt’sdisease)、貝斯特氏病(Best’sdisease)、Doyne氏病(Doyne’sdisease)、錐體營養(yǎng)不良(conedystrophy)、視網(wǎng)膜色素變性(retinitispigmentosa)、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥(X-linkedretinoschisis)、Usher氏綜合征(Usher’ssyndrome)、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(proliferativediabeticretinopathy)(PDR)、囊樣黃斑水腫(cystoidmacularoedema)、中心性漿液性視網(wǎng)膜病(centralserousretinopathy)、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼和后葡萄膜炎。在一些方面中，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體的眼部后與用包含野生型衣殼的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞相比改進(jìn)細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，該方法包括在AAV衣殼蛋白中并入一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在其他方面中，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體的眼部后改進(jìn)異源核酸的表達(dá)的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中并入一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV-2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和rAAV載體，其包含編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，所述異源核酸處于在視網(wǎng)膜中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，其中所述異源核酸可操作地連接至適于所述治療性多肽或治療性核酸在一個(gè)或多個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述視網(wǎng)膜細(xì)胞是感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子、視蛋白啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子、雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和/或改進(jìn)的異源核酸表達(dá)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和異源核酸，用于將所述異源核酸遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸用于治療選自下組的眼部病癥：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、Usher氏綜合征、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼和后葡萄膜炎。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥，其中所述rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV-2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥，其中所述rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥；和包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥；和包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，其中所述異源核酸處于在視網(wǎng)膜中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于所述治療性多肽或治療性核酸在一個(gè)或多個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述視網(wǎng)膜細(xì)胞是感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子、視蛋白啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子、雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥；和包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，其中所述眼部病癥選自下列組成群組：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、Usher氏綜合征、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼和后葡萄膜炎。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括視網(wǎng)膜下遞送包含rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含編碼異源核酸的rAAV載體，其用于治療個(gè)體(例如人)中的眼部病癥；和包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中顆粒的濃度為約1x106DRP/ml至約1x1014DRP/ml。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒的組合物對(duì)于治療個(gè)體的視覺功能是有效的。在一些實(shí)施方案中，視覺功能通過微視野檢查法、暗適應(yīng)視野檢查法、視覺活動(dòng)性評(píng)估、視敏度、ERG或閱讀評(píng)估來評(píng)價(jià)。在一些實(shí)施方案中，所述方法導(dǎo)致個(gè)體的視覺功能的改進(jìn)。在一些實(shí)施方案中，所述方法導(dǎo)致預(yù)防由于眼部病癥的進(jìn)展所致的人的視覺功能衰退或是減緩所述衰退的進(jìn)展。在一些方面，本發(fā)明提供用于將載體視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體的眼的系統(tǒng)，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)；和b)用于視網(wǎng)膜遞送所述rAAV的裝置。在一些實(shí)施方案中，所述裝置包含細(xì)孔套管和注射器，其中所述細(xì)孔套管為27至45號(hào)(gauge)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒的組合物容納于注射器內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述套管附接于注射器。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中顆粒的濃度為約1x106DRP/ml至約1x1014DRP/ml。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的AAV2衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加rAAV顆粒對(duì)眼部或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加rAAV顆粒對(duì)眼或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，眼的細(xì)胞是視網(wǎng)膜細(xì)胞、感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、雙極細(xì)胞、水平細(xì)胞、無長突細(xì)胞、Muller細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的AAV2衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包括氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV-2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的AAV2衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和包含異源核酸的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和包含異源核酸的rAAV載體，其中所述異源核酸處于在視網(wǎng)膜中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于所述治療性多肽或治療性核酸在一個(gè)或多個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述視網(wǎng)膜細(xì)胞是感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子、視蛋白啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子、雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)的rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變HSPG結(jié)合(例如降低或去除結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和包含異源核酸的rAAV載體，其用于將所述異源核酸遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸用于治療選自下組的眼部病癥：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、Usher氏綜合征、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼和后葡萄膜炎。在一些方面，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供一種與用包含野生型衣殼的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞相比改進(jìn)對(duì)個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，該方法包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于所述個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供一種改進(jìn)異源核酸在個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中表達(dá)的方法，所述方法包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于所述個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在更進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供一種治療個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的病癥的方法，其包括將有效量的包含rAAV顆粒的組合物施用于所述個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸以增加的表達(dá)水平表達(dá)，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達(dá)水平相比。在一些實(shí)施方案中，將所述核酸的表達(dá)增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒導(dǎo)致與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒相比降低的神經(jīng)性炎癥(neuroinflammation)。在一些實(shí)施方案中，將神經(jīng)性炎癥減少至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加rAAV顆粒對(duì)眼或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將rAAV顆粒對(duì)眼或CNS中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述施用包含直接脊髓注射和/或腦內(nèi)施用。在一些實(shí)施方案中，所述腦內(nèi)施用位于選自下組的部位：大腦、髓質(zhì)、腦橋(pons)、小腦、顱內(nèi)腔、圍繞腦的腦膜、硬腦膜(duramater)、蛛網(wǎng)膜(arachnoidmater)、軟腦膜(piamater)、圍繞腦的蛛網(wǎng)膜下腔的腦脊液(CSF)、小腦的深部小腦核、大腦的腦室系統(tǒng)、蛛網(wǎng)膜下腔、紋狀體(striatum)、皮層、隔膜(septum)、丘腦、下丘腦和腦的實(shí)質(zhì)(parenchymaofthebrain)。在一些實(shí)施方案中，所述施用是腦室內(nèi)注射入至少一個(gè)大腦側(cè)腦室。在一些實(shí)施方案中，所述施用是鞘內(nèi)注射于頸(cervical)、胸和/或腰部中。在一些實(shí)施方案中，所述施用是紋狀體內(nèi)注射。在一些實(shí)施方案中，所述施用是丘腦內(nèi)注射。在一些實(shí)施方案中，所述施用是(腦)實(shí)質(zhì)內(nèi)注射。在一些實(shí)施方案中，所述施用包含直接脊髓注射、顱內(nèi)和/或腦內(nèi)施用。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒在單一部位施用。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒通過立體定向遞送(stereotacticdelivery)來遞送。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒通過對(duì)流增強(qiáng)遞送(convectionenhanceddelivery)來遞送。在一些實(shí)施方案中，使用CED遞送系統(tǒng)來施用所述rAAV顆粒。在一些實(shí)施方案中，CED遞送系統(tǒng)包含套管和/或泵。在一些實(shí)施方案中，所述套管是抗回流套管或階梯式套管。在一些實(shí)施方案中，泵是手動(dòng)泵。在一些實(shí)施方案中，泵是滲透泵。在一些實(shí)施方案中，泵是輸液泵。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細(xì)胞上表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在神經(jīng)元上表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在神經(jīng)元中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸僅在神經(jīng)元中表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包含R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代K532A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼CNS相關(guān)的基因。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：酶、神經(jīng)營養(yǎng)因子、在患有CNS相關(guān)的病癥的個(gè)體中缺乏或突變的多肽、抗氧化劑、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子、α-突觸核蛋白、酸性β-葡糖苷酶(GBA)、β-半乳糖苷酶-1(GLB1)、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)、半乳糖基神經(jīng)酰胺酶(GALC)、甘露糖苷酶、α-D-甘露糖苷酶(MAN2B1)、β-甘露糖苷酶(MANBA)、假芳基硫酸酯酶A(ARSA)、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶(GNPTAB)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、尼曼-皮克C蛋白(NPC1)、酸性α-1,4-葡糖苷酶(GAA)、己糖胺酶β亞基、HEXB、N-磺基葡糖胺磺基水解酶(MPS3A)、N-α-乙酰葡糖胺酶(NAGLU)、肝素乙酰-CoA、α-葡糖胺酶N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(MPS3C)、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶(GNS)、α-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)、β-葡糖醛酸酶(GUSB)、己糖胺酶α亞基(HEXA)、亨廷頓蛋白(HTT)、溶酶體酸性脂肪酶(LIPA)、天冬氨酰葡糖胺酶、α-半乳糖苷酶A、棕櫚酰蛋白硫酯酶、三肽基肽酶、溶酶體跨膜蛋白、半胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、酸性神經(jīng)酰胺酶、酸性α-L-巖藻糖苷酶、組織蛋白酶A、α-L-艾杜糖醛酸糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶A、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯、酸性β-半乳糖苷酶或α-神經(jīng)酰胺酶。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：神經(jīng)元細(xì)胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經(jīng)生長因子(NGF)、神經(jīng)膠質(zhì)來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環(huán)化水解酶(GTPCH)、氨基酸脫羧酶(AADC)、抗氧化劑，抗血管生成多肽、抗炎多肽，和天冬氨酸?；?aspartoacylase,ASPA)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于選自下組的啟動(dòng)子序列的控制下：巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動(dòng)子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動(dòng)子，猿猴病毒40(SV40)啟動(dòng)子，CK6啟動(dòng)子，甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白啟動(dòng)子(TTR)，TK啟動(dòng)子，四環(huán)素響應(yīng)性啟動(dòng)子(TRE)，HBV啟動(dòng)子，hAAT啟動(dòng)子，LSP啟動(dòng)子，嵌合肝特異性啟動(dòng)子(LSP)，E2F啟動(dòng)子，端粒酶(hTERT)啟動(dòng)子；巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白/兔β球蛋白啟動(dòng)子(CAG)啟動(dòng)子，延伸因子1-α啟動(dòng)子(EF1-α)啟動(dòng)子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動(dòng)子，雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子，逆轉(zhuǎn)錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動(dòng)子，二氫葉酸還原酶啟動(dòng)子，和13-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞包含腦的一種或多種細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述腦細(xì)胞是神經(jīng)元。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補(bǔ)體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內(nèi)堿基對(duì)。在一些實(shí)施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區(qū)的缺失并包含末端解析序列的突變。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼用于治療CNS的病癥的治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的病癥為溶酶體貯積病(LSD)、亨廷頓氏病、癲癇、帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、皮質(zhì)基底節(jié)變性(CBD)、皮質(zhì)基底神經(jīng)節(jié)變性(CBGD)、額顳葉癡呆(FTD)、多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)、進(jìn)行性核上麻痹(PSP)或腦癌。在一些實(shí)施方案中，所述病癥為選自下組的溶酶體貯積?。禾於滨Ｆ咸前纺虬Y(Aspartylglusoaminuria)、法布里病(Fabry)、嬰兒巴藤病(CNL1)、經(jīng)典嬰兒后期巴藤病(CNL2)、幼年巴藤病(CNL3)、巴藤病形式CNL4、巴藤病形式CNL5、巴藤病形式CNL6、巴藤病形式CNL7、巴藤病形式CNL8、胱氨酸貯積癥、法伯氏病、巖藻糖苷貯積癥、半乳糖苷貯積癥(Galactosidosialidosis)、戈謝病(Gaucherdisease)1型、戈謝病2型、戈謝病3型、GM1神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥、亨特病(Hunterdisease)、克拉伯病(Krabbedisease)、α甘露糖苷貯積癥、β甘露糖苷貯積癥、馬-拉病(Maroteaux-Lamy)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良癥、穆爾丘病(Morquio)A、穆爾丘病B、粘脂貯積病II/III、尼曼-皮克病(Niemann-Pick)A、尼曼-皮克病B、尼曼-皮克病C、蓬佩病(Pompedisease)、桑德霍夫病(Sandhoffdisease)、圣菲利柏氏癥(Sanfillipo)A、圣菲利柏氏癥B、圣菲利柏氏癥C、圣菲利柏氏癥D、辛德勒病(Schindlerdisease)、辛德勒-神崎病(Schindler-Kanzaki)、涎酸貯積癥、史萊氏癥(Slydisease)、泰-薩二氏病(Tay-Sachsdisease)和沃爾曼病(Wolmandisease)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的病癥是亨廷頓氏病或帕金森氏病。在一些方面，本發(fā)明提供在個(gè)體中治療亨廷頓氏病的方法，其包括將有效量的包含重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒的組合物施用于個(gè)體的紋狀體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是亨廷頓蛋白多肽或其片段。在一些實(shí)施方案中，所述亨廷頓蛋白多肽或其片段是功能性亨廷頓蛋白多肽或其功能片段。在一些實(shí)施方案中，所述治療性核酸包含針對(duì)亨廷頓蛋白的RNAi。在一些實(shí)施方案中，所述RNAi是miRNA。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體中的帕金森氏病的方法，其包括將有效量的包含重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒的組合物施用于個(gè)體的紋狀體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是AADC或其片段。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸以增加的表達(dá)水平表達(dá)，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達(dá)水平相比。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒導(dǎo)致與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒相比降低的神經(jīng)性炎癥。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或、約至少100％。在一些實(shí)施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒通過立體定向遞送來遞送。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒通過對(duì)流增強(qiáng)遞送來遞送。在一些實(shí)施方案中，使用CED遞送系統(tǒng)來施用所述rAAV顆粒。在一些實(shí)施方案中，所述套管是抗回流套管或階梯式套管。在一些實(shí)施方案中，所述CED遞送系統(tǒng)包含套管和/或泵。在一些實(shí)施方案中，使用CED遞送系統(tǒng)施用所述rAAV顆粒。在一些實(shí)施方案中，所述泵是手動(dòng)泵。在一些實(shí)施方案中，所述泵是滲透泵。在一些實(shí)施方案中，所述泵是輸液泵。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細(xì)胞上表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在神經(jīng)元上表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在神經(jīng)元中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸僅(exclusively)在神經(jīng)元中表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包括氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包括氨基酸取代K532A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代在位置485、488、528、533、586或589，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528或533處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于選自下組的啟動(dòng)子序列的控制下：巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動(dòng)子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動(dòng)子，猿猴病毒40(SV40)啟動(dòng)子，CK6啟動(dòng)子，甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白啟動(dòng)子(TTR)，TK啟動(dòng)子，四環(huán)素響應(yīng)性啟動(dòng)子(TRE)，HBV啟動(dòng)子，hAAT啟動(dòng)子，LSP啟動(dòng)子，嵌合肝特異性啟動(dòng)子(LSP)，E2F啟動(dòng)子，端粒酶(hTERT)啟動(dòng)子；巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白/兔β球蛋白啟動(dòng)子(CAG)啟動(dòng)子，延伸因子1-α啟動(dòng)子(EF1-α)啟動(dòng)子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動(dòng)子，雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子，逆轉(zhuǎn)錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動(dòng)子，二氫葉酸還原酶啟動(dòng)子，和13-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞包含腦的一種或多種細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述腦細(xì)胞是神經(jīng)元。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補(bǔ)體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內(nèi)堿基對(duì)。在一些實(shí)施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區(qū)的缺失并包含末端解析序列的突變。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些方面，本發(fā)明提供用于任何上述具體實(shí)施方案的試劑盒，其包含重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的試劑盒，其包含含有重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療個(gè)體中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)病癥的試劑盒，其包含含有重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含用于治療CNS病癥的異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述CNS病癥是亨廷頓氏病。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是亨廷頓蛋白多肽或其片段。在一些實(shí)施方案中，所述亨廷頓蛋白多肽或其片段是功能性亨廷頓蛋白多肽或其功能片段。在一些實(shí)施方案中，所述治療性核酸包含針對(duì)亨廷頓蛋白的RNAi。在一些實(shí)施方案中，所述RNAi是miRNA。在一些實(shí)施方案中，所述CNS病癥是帕金森氏病。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽是AADC或其片段。在一些方面，本發(fā)明提供重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其用于在任何上述實(shí)施方案中使用。在一些方面，本發(fā)明提供重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其用于治療個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的病癥，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療個(gè)體中的亨廷頓氏病的重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)，其中所述rAAV顆粒經(jīng)配制用于遞送至紋狀體。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療個(gè)體中的帕金森氏病的重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)，其中所述rAAV顆粒經(jīng)配制用于遞送至紋狀體。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療個(gè)體中的亨廷頓氏病的重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)，其中所述rAAV顆粒經(jīng)配制用于單一部位遞送(例如至個(gè)體的CNS)。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療個(gè)體中的帕金森氏病的重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)，其中所述rAAV顆粒經(jīng)配制用于單一部位遞送(例如至個(gè)體的CNS)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸以增加的表達(dá)水平表達(dá)，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達(dá)水平相比。在一些實(shí)施方案中，與包含含有參考衣殼的rAAV衣殼的rAAV顆粒相比，所述rAAV顆粒導(dǎo)致降低的神經(jīng)性炎癥。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細(xì)胞上表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞為是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在神經(jīng)元上表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸在神經(jīng)元中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸僅在神經(jīng)元中表達(dá)。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置484、487、527、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包含R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包括氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包括氨基酸取代K532A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于AAVrh8R的VP1，所述AAVrh8R包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含一個(gè)或多個(gè)rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)氨基酸取代包括R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于選自下組的啟動(dòng)子序列的控制下：巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動(dòng)子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動(dòng)子，猿猴病毒40(SV40)啟動(dòng)子，CK6啟動(dòng)子，甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白啟動(dòng)子(TTR)，TK啟動(dòng)子，四環(huán)素響應(yīng)性啟動(dòng)子(TRE)，HBV啟動(dòng)子，hAAT啟動(dòng)子，LSP啟動(dòng)子，嵌合肝特異性啟動(dòng)子(LSP)，E2F啟動(dòng)子，端粒酶(hTERT)啟動(dòng)子；巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白/兔β球蛋白啟動(dòng)子(CAG)啟動(dòng)子，延伸因子1-α啟動(dòng)子(EF1-α)啟動(dòng)子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動(dòng)子，雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子，逆轉(zhuǎn)錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動(dòng)子，二氫葉酸還原酶啟動(dòng)子，和13-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞包含腦的一種或多種細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞，和/或浦肯野細(xì)胞。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補(bǔ)體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內(nèi)堿基對(duì)。在一些實(shí)施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區(qū)的缺失并包含末端解析序列的突變。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在上述方面和實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒在組合物中。在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含緩沖液和/或藥學(xué)上可接受的賦形劑。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒或rAAV顆粒進(jìn)一步包含用于將所述rAAV顆粒的組合物遞送至CNS的說明書。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒或rAAV顆粒進(jìn)一步包含用于將所述rAAV顆粒的組合物遞送至紋狀體的說明書。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAVrh8R衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAVrh8R衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置586處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置A586處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括A586R或A586K取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10的rAAV衣殼蛋白。在一些方面，本發(fā)明提供增加包含AAVrh8R衣殼蛋白的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合的方法，其包括將一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代引入衣殼蛋白，其中與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代位于位置586處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括位置A586處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代包括A586R或A586K取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10的rAAV衣殼蛋白。在一些方面，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒玻璃體內(nèi)施用于個(gè)體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒經(jīng)玻璃體內(nèi)遞送至個(gè)體眼部后與用包含野生型衣殼的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞相比改進(jìn)細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，所述方法包括將一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代并入AAV衣殼蛋白中，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒玻璃體內(nèi)遞送至個(gè)體眼部后改進(jìn)異源核酸的表達(dá)的方法，所述方法包括將一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代并入AAV衣殼蛋白中，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體中的眼部病癥的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物玻璃體內(nèi)遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供用于將載體玻璃體內(nèi)遞送至個(gè)體眼部的系統(tǒng)，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，和ii)載體，其包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)；和b)用于玻璃體內(nèi)遞送所述rAAV的裝置。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9或AAVrh10血清型衣殼。在一些方面，本發(fā)明提供用于治療眼部病癥的試劑盒，其包含a)含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含i)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)，和ii)rAAV載體，其包含用于治療眼部病癥的異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)；和b)適于玻璃體內(nèi)施用的藥物賦形劑。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9或AAVrh10衣殼。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAV1衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV1衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAV1衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAV6衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV6衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAV6衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAV8衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV8衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAV8衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAV9衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV9衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAV9衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAVrh10衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAVrh10衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其中與包含野生型AAVrh10衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，或其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些方面，本發(fā)明提供包含AAV3衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV3衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)導(dǎo)效率增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒對(duì)于眼部或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，眼的細(xì)胞是視網(wǎng)膜細(xì)胞、感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、雙極細(xì)胞、水平細(xì)胞、無長突細(xì)胞、Muller細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述帶正電荷的氨基酸殘基代替疏水性氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸、絲氨酸、谷氨酰胺或蘇氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置A586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A586R或A586K取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R或T589K取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型1(AAV1)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV1的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述AAV1的VP1包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAV1的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R或S586K取代，編號(hào)基于AAV1的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R或T589K取代，編號(hào)基于AAV1的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型6(AAV6)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV6的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAV6的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R取代，編號(hào)基于AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R或T589K取代，編號(hào)基于AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型8(AAV8)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代在位置588和/或591，編號(hào)基于AAV8的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述AAV8的VP1包含SEQIDNO:14的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置Q588和/或T591處的取代，編號(hào)基于AAV8的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號(hào)基于AAV8的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包含T591R取代，編號(hào)基于AAV8的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型9(AAV9)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV9的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述AAV9的VP1包含SEQIDNO:15的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或A589處的取代，編號(hào)基于AAV9的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R或S586K取代，編號(hào)基于AAV9的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A589R或A589K取代，編號(hào)基于AAV9的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh10(AAVrh10)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置588和/或591處，編號(hào)基于AAVrh10的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述AAVrh10的VP1包含SEQIDNO:16的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置Q588和/或A591處的取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A591R或A591K取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含AAV3衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV3衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒對(duì)于眼或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變與HSPG的結(jié)合(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，其中所述異源核酸處于在視網(wǎng)膜中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。在一些實(shí)施方案中，其中所述異源核酸可操作地連接至適于所述治療性多肽或治療性核酸在一個(gè)或多個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述視網(wǎng)膜細(xì)胞是感光細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、雙極細(xì)胞、水平細(xì)胞、無長突細(xì)胞、Muller細(xì)胞和/或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子、視蛋白啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子、雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸用于治療選自下組的眼部病癥：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、Usher氏綜合征、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼和后葡萄膜炎。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補(bǔ)體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內(nèi)堿基對(duì)。在一些實(shí)施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區(qū)的缺失并包含末端解析序列的突變。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一些實(shí)施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒對(duì)于眼或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。本文引用的所有參考文獻(xiàn)(包括專利申請(qǐng)和出版物)通過提述以其整體并入。附圖簡述圖1表示硫酸乙酰肝素蛋白聚糖結(jié)合中涉及的衣殼殘基和引入以生成AAV2HBKO突變體的突變。編號(hào)基于VP1氨基酸序列。圖2顯示與野生型AAV2顆粒(AAV2CBA-sFLT02)相比，用HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-sFLT02)觀察到的培養(yǎng)物中293細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)的減少。通過在用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)Flt表達(dá)的載體)注射后48小時(shí)測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的可溶性Flt(sFLT)的量來測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖3顯示與野生型AAV2顆粒(AAV2CBA-GFP)相比，用HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)觀察到的培養(yǎng)物中293和Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)的減少。通過在用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)的載體)的注射后48小時(shí)取得的細(xì)胞的熒光成像來測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖4A和4B顯示玻璃體內(nèi)(圖4A)或視網(wǎng)膜下(圖4B)注射野生型AAV2或HBKO突變體AAV2顆粒后所觀察到的轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過用編碼Flt的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)后的可溶性Flt(sFLT)的表達(dá)來測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)。對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)指示了注射的載體基因組的數(shù)目(108或109vg)。圖5顯示在玻璃體內(nèi)注射后HBKO突變體AAV2顆粒未能轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠眼。給予小鼠玻璃體內(nèi)注射的野生型(AAV2CBA-GFP)或HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)(其攜帶使用CBA啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)的載體)，并通過熒光顯微術(shù)將切片進(jìn)行顯像。圖6顯示在視網(wǎng)膜下注射后HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2CBAHBKO)與野生型顆粒(AAV2CBA)相比引起轉(zhuǎn)導(dǎo)的顯著增加。通過在用AAV2顆粒(其攜帶由使用CBA啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)Flt表達(dá)的載體)注射后可溶性Flt(sFLT)的表達(dá)來測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)。指示注射的載體基因組的數(shù)目(108或109vg)。圖7顯示與野生型顆粒(AAV2CBA-GFP)相比，HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)在視網(wǎng)膜下注射后引起感光細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)的顯著增加(如標(biāo)記的)。通過在用AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)后GFP表達(dá)的熒光成像來測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖8顯示與野生型顆粒(AAV2RK)相比，HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2RKHBKO)在視網(wǎng)膜下注射后引起感光物的轉(zhuǎn)導(dǎo)的顯著增加。通過在用AAV2顆粒(其攜帶有使用視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子來驅(qū)動(dòng)Flt表達(dá)的載體)注射后可溶性Flt(sFLT)的表達(dá)來測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)。指示注射的載體基因組的數(shù)目(108或109vg)。圖9A和9B顯示與野生型小鼠中的AAV2-EGFP(圖9B)相比，在紋狀體內(nèi)注射AAV2HBKO-EGFP(圖9A)后30天小鼠腦中EGFP的表達(dá)。在每個(gè)圖面中，EGFP的表達(dá)通過CBA啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，并使用熒光顯微術(shù)來顯現(xiàn)。圖10A和10B顯示與YAC128HD小鼠中的AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖10B)相比，在紋狀體內(nèi)注射AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖10A)后30天小鼠腦中GFP的表達(dá)。所述miRNA-Htt-GFP載體意指表達(dá)靶向人Htt的人工miRNA和GFP報(bào)告蛋白的構(gòu)建體。在每個(gè)圖面中，GFP的表達(dá)通過CBA啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，并使用熒光顯微術(shù)以三個(gè)不同的放大倍數(shù)(4X、10X和20X，如標(biāo)記的)來顯現(xiàn)。圖11A顯示與未處理的對(duì)照相比，注射AAV1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt后30天紋狀體小鼠腦穿孔物(brainpunches)中人HTTmRNA水平的qPCR分析。圖11B顯示與未處理的對(duì)照相比，注射AAV1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt后30天皮質(zhì)小鼠腦穿孔物中人Htt蛋白水平的Western印跡分析。圖12A-12C顯示與未處理的對(duì)照(圖12A)相比，用AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖12B)或AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖12C)注射后30天YAC128小鼠紋狀體中Iba1的表達(dá)。圖13A-13C顯示與未處理的對(duì)照(圖13A)相比，用AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖13B)或AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖13C)注射后30天YAC128小鼠紋狀體中GFP的表達(dá)。圖14比較了AAV2和AAVrh8R衣殼之間的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖結(jié)合中涉及的衣殼殘基。編號(hào)基于VP1氨基酸序列。圖15顯示AAV2和AAVrh8R在負(fù)責(zé)AAV2的乙酰肝素結(jié)合的殘基處的氨基酸比對(duì)。圈出了AAVrh8R精氨酸衣殼修飾的位置。圖16A顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RA586R突變體表現(xiàn)出的HeLa細(xì)胞的改進(jìn)的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染后48小時(shí)培養(yǎng)基中的sFLT02來監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖16B顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RR533A突變體表現(xiàn)出的HeLaRC32細(xì)胞的減少的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染后48小時(shí)培養(yǎng)基中的sFLT02來監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖17A-17D顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RA586R和R533A突變體表現(xiàn)出的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)水平。AAVrh8RA586R突變體(圖17B)顯示與野生型AAVrh8R(圖17A)相比NS1細(xì)胞的增加的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。AAVrh8RR533A突變體(圖17D)顯示與野生型AAVrh8R(圖17C)相比HeLa細(xì)胞的減少的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染后48小時(shí)細(xì)胞中的EGFP表達(dá)來監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖18A和18B顯示由AAVrh8RA586R和R533A突變體表現(xiàn)出的C57Bl6小鼠中視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)的水平。(圖18A)AAVrh8RA586R突變體顯示與野生型AAVrh8R相比減少的視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)。還測(cè)試了AAV2載體。(圖18B)AAVrh8RR533A突變體顯示與野生型AAVrh8R和未處理的小鼠(mice)相比增加的視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過視網(wǎng)膜下施用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體后30天C57Bl6小鼠的視網(wǎng)膜裂解物(lysate)中的sFLT02來監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖19顯示玻璃體內(nèi)施用AAV2、AAVrh8R或AAVrh8R-A586R載體后30天C57Bl6小鼠的視網(wǎng)膜裂解物中的sFLT02的水平。圖20顯示AAV2的負(fù)責(zé)乙酰肝素結(jié)合的殘基處與AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9和AAVrh10的氨基酸比對(duì)。發(fā)明詳述如本申請(qǐng)中所述，發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)：rAAV顆粒中對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585和/或588(編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào))的修飾證明了施用于受試者的眼或CNS后增加的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)。不愿受任何理論束縛，認(rèn)為這些rAAV顆粒具有降低的或去除的與HSPG的結(jié)合或在衣殼上具有修飾的電荷，使得所述rAAV顆粒的施用導(dǎo)致受試者的眼或CNS中的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)增加。因此，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的眼或CNS的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的眼或CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些方面，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送個(gè)體眼部的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的視網(wǎng)膜下，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些方面，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體眼部后與用包含野生型衣殼的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞相比改進(jìn)細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中并入一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體的眼部后改進(jìn)異源核酸的表達(dá)的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中并入一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發(fā)明提供在將rAAV顆粒視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體眼部后改進(jìn)異源核酸的表達(dá)的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中并入一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。所述改進(jìn)是與包含野生型衣殼的rAAV顆粒相比的轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2衣殼的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體中的眼部病癥的方法，其包括將包含有效量的rAAV顆粒的組合物遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。本發(fā)明還提供用于將載體視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體眼部的系統(tǒng)，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，且ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)；和b)用于視網(wǎng)膜遞送所述rAAV的裝置。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發(fā)明還提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的CNS。所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。這些方法表現(xiàn)出在將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS后改進(jìn)的異源核酸表達(dá)和/或細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)，例如與用包含野生型衣殼的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞相比的改進(jìn)。而且，本發(fā)明的方法能夠感染特定的細(xì)胞(例如神經(jīng)元)同時(shí)仍實(shí)現(xiàn)普遍的和穩(wěn)固的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。所述rAAV顆粒和方法適用于治療CNS病癥，所述CNS病癥包括但不限于亨廷頓氏病。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸取代導(dǎo)致降低的或去除的與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。本發(fā)明還提供含有rAAV顆?；蚝瑀AAV顆粒的組合物的試劑盒，所述rAAV顆粒具有(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。這些試劑盒可用于將異源核酸遞送至個(gè)體的眼部或CNS，以及用于治療個(gè)體中的眼部或CNS病癥(例如治療視網(wǎng)膜病或亨廷頓氏病)。I.一般技術(shù)本領(lǐng)域的技術(shù)人員一般地充分理解并使用常規(guī)方法通常地采用本申請(qǐng)所描述或引用的技術(shù)和步驟，例如，如下文獻(xiàn)中描述的廣泛利用的方法：MolecularCloning:ALaboratoryManual(Sambrook等，第4版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,2012)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubel等編,2003)；MethodsinEnzymology系列(AcademicPress,Inc.)；PCR2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.HamesandG.R.Taylor編,1995)；Antibodies,ALaboratoryManual(Harlow和Lane,編,1988)；CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechniqueandSpecializedApplications(R.I.Freshney,第六版,J.WileyandSons,2010)；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait編,1984)；MethodsinMolecularBiology,HumanaPress；CellBiology:ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis編,AcademicPress,1998)；IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.Mather和P.E.Roberts,PlenumPress,1998)；CellandTissueCulture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,及D.G.Newell,編,J.WileyandSons,1993-8)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell編,1996)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.Miller和M.P.Calos編,1987)；PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullis等編,1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coligan等編,1991)；ShortProtocolsinMolecularBiology(Ausubel等編,J.WileyandSons,2002)；Immunobiology(C.A.Janeway等,2004)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:APracticalApproach(D.Catty編,IRLPress,1988-1989)；MonoclonalAntibodies:APracticalApproach(P.Shepherd和C.Dean編,OxfordUniversityPress,2000)；UsingAntibodies:ALaboratoryManual(E.Harlow和D.Lane,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999)；TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra編,HarwoodAcademicPublishers,1995)；和Cancer:PrinciplesandPracticeofOncology(V.T.DeVita等編,J.B.LippincottCompany,2011)。II.定義如本文所用的，“載體”意指重組質(zhì)?；虿《荆浒w外或體內(nèi)遞送入宿主細(xì)胞的核酸。如本文所用的術(shù)語“多核苷酸”或“核酸”意指聚合物形式的任何長度的核苷酸(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)。因此，此術(shù)語包括但不限于單鏈、雙鏈或多鏈DNA或RNA、基因組DNA、cDNA、DNA-RNA雜交體或包含嘌呤和嘧啶堿基的聚合物，或其他天然的、化學(xué)或生物化學(xué)修飾的、非天然的或衍生化的核苷酸堿基。多核苷酸的主鏈可以包含糖和磷酸基團(tuán)(如常見于RNA或DNA中的)，或修飾的或取代的糖或磷酸基團(tuán)。或者，多核苷酸的骨架可以包含合成的亞基如氨基磷酸酯(phosphoramidate)的聚合物，并由此可以是寡脫氧核苷氨基磷酸酯(P-NH2)或混合的氨基磷酸酯-磷酸二酯(phosphoramidate-phosphodiester)寡聚物。此外，雙鏈多核苷酸能夠從化學(xué)合成的單鏈多核苷酸產(chǎn)物通過合成互補(bǔ)鏈并在適當(dāng)?shù)臈l件下退火所述鏈，或者通過使用DNA聚合酶以適當(dāng)?shù)囊飶念^合成互補(bǔ)鏈來獲得。術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”可互換地使用，以意指氨基酸殘基的聚合物，并且不限于最小長度。所述氨基酸殘基的聚合物可以含有天然或非天然氨基酸殘基，其包括但不限于肽、寡肽、氨基酸殘基的二聚體、三聚體和多聚體。所述定義涵蓋全長蛋白質(zhì)和其片段二者。所述術(shù)語還包括多肽的表達(dá)后修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙?；?、磷酸化等。此外，就本發(fā)明而言，“多肽”意指這樣的蛋白質(zhì)，其包括對(duì)天然序列的修飾，如缺失、添加和取代(通常在性質(zhì)上是保守的)，只要所述蛋白質(zhì)維持所需的活性。這些修飾可以是故意的，如通過定點(diǎn)誘變(site-directedmutagenesis)，或可以是意外的，如通過產(chǎn)生所述蛋白質(zhì)的宿主的突變或由于PCR擴(kuò)增的錯(cuò)誤得到的?！爸亟M病毒載體”意指包含一個(gè)或多個(gè)異源序列(即非病毒來源的核酸序列)的重組多核苷酸載體。在重組AAV載體的情況中，重組核酸側(cè)翼有至少一個(gè)反向末端重復(fù)序列(ITR)。在一些實(shí)施方案中，重組核酸側(cè)翼有兩個(gè)ITR?！爸亟MAAV載體(rAAV載體)”意指多核苷酸載體，其包含一個(gè)或多個(gè)異源序列(即非AAV來源的核酸序列)，其側(cè)翼有至少一個(gè)AAV末端反向重復(fù)序列(ITR)。所述rAAV載體當(dāng)存在于已用合適的輔助病毒感染(或者正在表達(dá)合適的輔助功能的)且正在表達(dá)AAVrep和cap基因產(chǎn)物(即AAVRep和Cap蛋白質(zhì))的宿主細(xì)胞中時(shí)可復(fù)制并包裝入感染性病毒顆粒。當(dāng)將rAAV載體整合入較大的多核苷酸(例如整合入染色體中或于另一載體，如用于克隆或轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒中)時(shí)，則該rAAV載體可稱為“原載體(pro-vector)”，其能夠通過在AAV包裝功能和合適的輔助功能的存在下復(fù)制和衣殼化而被“拯救”。rAAV載體可以是多種形式中的任一種，包括但不限于質(zhì)粒、線性人工染色體、與脂質(zhì)復(fù)合、包囊于脂質(zhì)粒內(nèi)和在病毒顆粒(例如AAV顆粒)中衣殼化。可將rAAV載體包裝入AAV病毒衣殼以生成“重組腺相關(guān)病毒顆粒(rAAV顆粒)”?！皉AAV病毒”或“rAAV病毒顆?！币庵赣芍辽僖粋€(gè)AAV衣殼蛋白和衣殼化的rAAV載體基因組組成的病毒顆粒?！爱愒础币庵冈醋耘c其比較的或引入或整合入的實(shí)體的其余部分在基因型上截然不同的實(shí)體。例如，通過基因工程技術(shù)引入不同細(xì)胞類型的多核苷酸是異源多核苷酸(而且在表達(dá)時(shí)能夠編碼異源多肽)。類似地，并入病毒載體的細(xì)胞序列(例如基因或其部分)是相對(duì)于所述載體的異源核苷酸序列。術(shù)語“轉(zhuǎn)基因”意指引入細(xì)胞并能夠被轉(zhuǎn)錄成RNA且任選地在適當(dāng)條件下翻譯和/或表達(dá)的多核苷酸。在一些方面，它賦予它所引入的細(xì)胞以期望的性質(zhì)或以其他方式產(chǎn)生期望的治療或診斷結(jié)果。在另一個(gè)方面，它可以被轉(zhuǎn)錄為介導(dǎo)RNA干擾的分子，如miRNA、siRNA或shRNA。如涉及病毒效價(jià)使用的術(shù)語“基因組顆粒(gp)”、“基因組等同物”或“基因組拷貝”意指含有重組AAVDNA基因組的病毒體的數(shù)目，而無論感染性或功能性。特定載體制備物中的基因組顆粒的數(shù)目能夠通過如本文實(shí)施例中，或例如Clark等(1999)Hum.GeneTher.,10:1031-1039；Veldwijk等(2002)Mol.Ther.,6:272-278中所述的步驟來測(cè)量。如本申請(qǐng)使用的術(shù)語“載體基因組(vg)”可指一個(gè)或多個(gè)多核苷酸，其包含載體(例如病毒載體)的一組多核苷酸序列。載體基因組可衣殼化于病毒顆粒中。取決于特定的病毒載體，載體基因組可包含單鏈DNA、雙鏈DNA或單鏈RNA或雙鏈RNA。載體基因組可包含與特定病毒載體相關(guān)聯(lián)的內(nèi)源序列和/或通過重組技術(shù)插入特定病毒載體的任何異源序列。例如，重組AAV載體基因組可包含至少一個(gè)ITR序列，其位于啟動(dòng)子、填充片段(stuffer)、目的序列(例如RNAi)和多聚腺苷酸化序列的側(cè)翼。完全的載體基因組可包含載體的多核苷酸序列的完全組。在一些實(shí)施方案中，病毒載體的核酸效價(jià)可以vg/mL來測(cè)量。適于測(cè)量此效價(jià)的方法是本領(lǐng)域已知的(例如定量PCR)。如涉及病毒效價(jià)而使用的術(shù)語“感染單位(iu)”、“感染性顆粒”或“復(fù)制單位”指如通過感染性中心測(cè)定法(也稱為復(fù)制中心測(cè)定法，如例如McLaughlin等(1988)J.Virol.,62:1963-1973中所述)測(cè)量的感染性的且有復(fù)制能力的重組AAV載體顆粒的數(shù)目。如涉及病毒效價(jià)使用的術(shù)語“轉(zhuǎn)導(dǎo)單位(tu)”意指如功能測(cè)定法(如本文實(shí)施例中或例如Xiao等(1997)Exp.Neurobiol.,144:113-124中；或Fisher等(1996)J.Virol.,70:520-532(LFU測(cè)定法)中描述的)中測(cè)得的導(dǎo)致功能性轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物產(chǎn)生的感染性重組AAV載體顆粒的數(shù)目。“反向末端重復(fù)”或“ITR”序列是本領(lǐng)域中充分理解的術(shù)語并意指見于病毒基因組末端的處于反方向的相對(duì)短的序列。本領(lǐng)域中充分理解的術(shù)語“AAV反向末端重復(fù)(ITR)”序列是大約145-核苷酸的序列，其存在于天然單鏈AAV基因組的兩個(gè)末端。ITR的最外側(cè)的125個(gè)核苷酸能夠以兩個(gè)可選方向的任一個(gè)存在，這導(dǎo)致不同AAV基因組之間的異質(zhì)性和單個(gè)AAV基因組的兩個(gè)末端之間的異質(zhì)性。最外側(cè)的125個(gè)核苷酸也含有自身互補(bǔ)性的幾個(gè)較短區(qū)域(定名為A、A'、B、B'、C、C'和D區(qū))，其允許在ITR的此部分內(nèi)發(fā)生鏈內(nèi)堿基配對(duì)?！澳┒私馕鲂蛄小被颉皌rs”是AAVITR的D區(qū)中的序列，其在病毒DNA復(fù)制過程中被AAVrep蛋白切割。突變體末端解析序列難以被(refractoryto)AAVrep蛋白的切割。AAV的“輔助病毒”意指允許AAV(其是缺陷性細(xì)小病毒(defectiveparvovirus))被宿主細(xì)胞復(fù)制并包裝的病毒。已鑒定出多個(gè)這樣的輔助病毒，包括腺病毒、皰疹病毒和痘病毒如牛痘。腺病毒涵蓋多個(gè)不同的亞組，盡管C亞組的腺病毒5型(Ad5)是最通常使用的。人、非人哺乳動(dòng)物和禽來源的多種腺病毒是已知的，并可由保藏機(jī)構(gòu)如ATCC得到。還可由保藏機(jī)構(gòu)如ATCC得到的皰疹家族的病毒包括例如單純皰疹病毒(HSV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)和假狂犬病病毒(PRV)。相對(duì)于參考多肽或核酸序列的“百分比(％)序列同一性”定義為在比對(duì)序列并引入空位(如果需要)以實(shí)現(xiàn)最大百分比序列同一性而不考慮任何保守取代作為序列同一性的部分后，候選序列中與參考多肽或核酸序列中的氨基酸殘基或核苷酸相同的氨基酸殘基或核苷酸的百分比。意在確定百分比氨基酸或核酸序列同一性的比對(duì)能夠以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式實(shí)現(xiàn)，例如，使用公眾可獲得的計(jì)算機(jī)軟件程序，例如CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel等編，1987),增刊30，7.7.18節(jié)，表7.7.1中所述的那些，并包括BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。比對(duì)程序的一個(gè)實(shí)例是ALIGNPlus(ScientificandEducationalSoftware,Pennsylvania)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠確定測(cè)量比對(duì)的適當(dāng)?shù)膮?shù)，其包括實(shí)現(xiàn)參與比較的序列在全長上的最大對(duì)齊所需要的任何算法。就本文的目的而言，給定氨基酸序列A對(duì)、與或針對(duì)給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者其可描述為對(duì)、與或針對(duì)給定氨基酸序列B具有或包含一定％氨基酸序列同一性的給定氨基酸序列A)計(jì)算如下：100乘以分?jǐn)?shù)X/Y，其中X是該程序的A和B比對(duì)中由序列比對(duì)程序計(jì)分為相同匹配的氨基酸殘基的數(shù)目，而其中Y是B中氨基酸殘基的總數(shù)。可理解的是其中氨基酸序列A的長度不等于氨基酸序列B的長度，A對(duì)B的％氨基酸序列同一性不等于B對(duì)A的％氨基酸序列同一性。就本文的目的而言，給定核酸序列C對(duì)、與或針對(duì)給定核酸序列D的％核酸序列同一性(或者其可描述為對(duì)、與或針對(duì)給定核酸序列D具有或包含一定％核酸序列同一性的給定核酸序列C)計(jì)算如下：100乘以分?jǐn)?shù)W/Z，其中W是該程序的C和D比對(duì)中由序列比對(duì)程序計(jì)分為相同匹配的核苷酸的數(shù)目，而其中Z是D中核苷酸的總數(shù)?？衫斫獾氖瞧渲泻怂嵝蛄蠧的長度不等于核酸序列D的長度，C對(duì)D的％核酸序列同一性不等于D對(duì)C的％核酸序列同一性?！胺蛛x的”分子(例如核酸或蛋白質(zhì))或細(xì)胞意指其已被鑒定和分離和/或從其天然環(huán)境的組分回收?！坝行Я俊笔亲阋詫?shí)現(xiàn)有益或期望的結(jié)果，包括臨床結(jié)果(例如癥狀改善，達(dá)到臨床終點(diǎn)等)的量。有效量可以在一次或多次施用中施用。就疾病狀態(tài)而言，有效量是足以改善疾病、穩(wěn)定疾病、或延遲疾病進(jìn)展的量?！皞€(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括但不限于馴養(yǎng)動(dòng)物(例如，牛，羊，貓，狗，和馬)，靈長類動(dòng)物(例如，人和非人靈長類動(dòng)物如猴)，兔，和嚙齒類動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體或受試者是人。如本文所用的，“治療”是用于獲得有益的或期望的臨床結(jié)果的方法。對(duì)于本發(fā)明的目的，有益的或期望的臨床結(jié)果包括但不限于癥狀的減輕，疾病程度的降低，穩(wěn)定的(例如不惡化的)疾病狀態(tài)，防止疾病的擴(kuò)散(例如轉(zhuǎn)移)，疾病進(jìn)展的延遲或減緩，疾病狀態(tài)的改善或減輕，和緩解(無論部分或全部)，無論其是可檢測(cè)或不可檢測(cè)的?！爸委煛币材芤馕吨c不接受治療的預(yù)期存活期相比延長的存活期。如本文所用的，術(shù)語“預(yù)防性治療”指這樣的治療，在所述治療中個(gè)體已知患有或疑似患有病癥或處于患上病癥的風(fēng)險(xiǎn)但未表現(xiàn)出病癥的癥狀或表現(xiàn)出最少癥狀。經(jīng)歷預(yù)防性治療的個(gè)體可在癥狀發(fā)作前得到治療。如本文所用的，“治療”劑(例如治療性多肽、核酸或轉(zhuǎn)基因)是一種藥劑，其提供有益的或期望的臨床結(jié)果，如上述的示例性臨床結(jié)果。如此，治療劑可用于如上所述的治療。如本文所用的術(shù)語“中央視網(wǎng)膜”指外黃斑(outermacula)和/或內(nèi)黃斑(innermacula)和/或凹(fovea)。如本文所用的術(shù)語“中央視網(wǎng)膜細(xì)胞類型”意指中央視網(wǎng)膜的細(xì)胞類型，如例如RPE和感光細(xì)胞。術(shù)語“黃斑”意指靈長類中中央視網(wǎng)膜中的區(qū)，其含有與外周視網(wǎng)膜相比更高相對(duì)濃度的感光細(xì)胞，特別是視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞。如本文所用的術(shù)語“外黃斑”還可稱為“外周黃斑”。如本文所用的術(shù)語“內(nèi)黃斑”還可稱為“中央黃斑”。術(shù)語“凹”意指靈長類的中央視網(wǎng)膜中的小區(qū)，直徑約等于或小于0.5mm，其含有與外周視網(wǎng)膜和黃斑相比更高相對(duì)濃度的感光細(xì)胞，特別是視錐細(xì)胞。如本文所用的術(shù)語“視網(wǎng)膜下空間”意指視網(wǎng)膜中感光細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞之間的部位。視網(wǎng)膜下空間可以是潛在的空間，如在流體的任何視網(wǎng)膜下注射之前。視網(wǎng)膜下空間還可含有注射入潛在空間的流體。在此情況中，所述流體“與視網(wǎng)膜下空間接觸”?！芭c視網(wǎng)膜下空間接觸”的細(xì)胞包括毗連視網(wǎng)膜下空間邊界的細(xì)胞，如RPE和感光細(xì)胞。如本文所用的術(shù)語“泡(bleb)”意指眼的視網(wǎng)膜下空間內(nèi)的流體空間。本發(fā)明的泡可通過如下產(chǎn)生：將流體單次注射入單個(gè)空間，將一種或多種流體多次注射入相同空間，或多次注射入多個(gè)空間，其在復(fù)位時(shí)產(chǎn)生用于對(duì)視網(wǎng)膜下空間的期望的部分實(shí)現(xiàn)治療效果的總流體空間(totalfluidspace)?！耙曌霞t激酶(RK)啟動(dòng)子”意指源自視紫紅激酶基因(例如人RK，以GenBankEntrezGeneID6011表示)的多核苷酸序列，其驅(qū)動(dòng)視桿和視錐感光細(xì)胞以及視網(wǎng)膜細(xì)胞系如WERIRb-1中特異性的表達(dá)。如本文所用的，“視紫紅激酶啟動(dòng)子”可指整個(gè)啟動(dòng)子序列或足以驅(qū)動(dòng)光感受器特異性表達(dá)的所述啟動(dòng)子的片段，如Khani,S.C.等(2007)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.48(9):3954-61和Young,J.E.等(2003)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.44(9):4076-85中所述的序列。在一些實(shí)施方案中，RK啟動(dòng)子跨越-112至+180(相對(duì)于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn))?！半uβ-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子”意指源自雞β-肌動(dòng)蛋白基因(例如原雞β-肌動(dòng)蛋白，由GenBankEntrezGeneID396526表示)的多核苷酸序列。如本文所用的，“雞β-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子”可指這樣的啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子含有巨細(xì)胞病毒(CMV)早期增強(qiáng)子元件、雞β-肌動(dòng)蛋白基因的啟動(dòng)子和第一外顯子和內(nèi)含子，和兔β-球蛋白基因的剪接受體，如Miyazaki,J.等(1989)Gene79(2):269-77中所述的序列。如本文所用的，術(shù)語“CAG啟動(dòng)子”可互換使用。如本文所用的，術(shù)語“CMV早期增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白(CAG)啟動(dòng)子”可互換使用。本申請(qǐng)?zhí)峒爸祷騾?shù)的“約”包括(并描述)針對(duì)該值或參數(shù)本身的實(shí)施方案。例如，提及“約X”的描述包括“X”的描述。如本文所用的，物品的單數(shù)形式“一個(gè)/一種”、“所述”和“所述”包括復(fù)數(shù)指稱，除非另有說明?？衫斫獾氖?，本申請(qǐng)所述本發(fā)明的方面和實(shí)施方案包括“包含”、“由...組成”和/或“基本上由...組成”方面和實(shí)施方案。III.病毒顆粒本領(lǐng)域已知硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)充當(dāng)AAV2顆粒的細(xì)胞受體(Summerford,C.和Samulski,R.J.(1998)J.Virol.72(2):1438-45)。AAV2顆粒和細(xì)胞膜處的HSPG之間的結(jié)合用于將顆粒附接至細(xì)胞。其他細(xì)胞表面蛋白如成纖維細(xì)胞生長因子受體和αvβ5整聯(lián)蛋白也可促進(jìn)細(xì)胞感染。在結(jié)合之后，AAV2顆?？赏ㄟ^包括受體介導(dǎo)的胞吞作用的機(jī)制經(jīng)由網(wǎng)格蛋白包覆小窩(clathrin-coatedpit)進(jìn)入細(xì)胞。AAV2顆?？稍趦?nèi)體酸化(endosomalacidification)后從細(xì)胞內(nèi)小泡釋放。這允許AAV2顆粒行進(jìn)至核周區(qū)然后至細(xì)胞核。還已知AAV3顆粒結(jié)合乙酰肝素(Rabinowitz,J.E.等(2002)J.Virol.76(2)：791-801)。眼部病癥的基因治療程序需要將載體局部遞送至眼中的細(xì)胞(例如視網(wǎng)膜的細(xì)胞)?？勺鳛檫@些疾病中的治療靶標(biāo)的細(xì)胞可包括尤其是眼部的一種或多種細(xì)胞(例如感光物、眼神經(jīng)元等)。本發(fā)明的方法和試劑盒基于、至少部分基于如下發(fā)現(xiàn)：特定的rAAV衣殼(例如包含rAAV衣殼蛋白的那些，所述衣殼蛋白在與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代)允許在眼部細(xì)胞中廣布的載體分布。如此，這些衣殼可以特別有利地用于將異源核酸遞送至個(gè)體的眼部、改進(jìn)在將rAAV顆粒遞送至個(gè)體眼部后細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)、改進(jìn)將rAAV顆粒遞送至個(gè)體眼部后異源核酸的表達(dá)和/或使用rAAV顆粒治療個(gè)體的眼部病癥。同樣地，CNS的病癥的基因治療程序需要將載體局部遞送至CNS中的細(xì)胞?？勺鳛檫@些疾病中的治療靶標(biāo)的細(xì)胞可包括尤其是腦的一種或多種細(xì)胞(例如神經(jīng)元)。本發(fā)明的方法和試劑盒基于、至少部分基于如下發(fā)現(xiàn)：特定的rAAV衣殼(例如包含rAAV衣殼蛋白的那些，所述衣殼蛋白在與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代)允許在CNS的細(xì)胞中廣布的載體分布。如此，這些衣殼可特別有利地用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)、改進(jìn)將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS后細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)、改進(jìn)將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS后異源核酸的表達(dá)和/或使用rAAV顆粒治療個(gè)體的CNS的病癥。AAV(例如AAV2、AAVrh8R等)的衣殼已知包括三種衣殼蛋白：VP1、VP2和VP3。這些蛋白質(zhì)含有顯著量的重疊氨基酸序列和獨(dú)特的N-末端序列。AAV2衣殼包括通過二十面體對(duì)稱排布的60個(gè)亞基(Xie,Q.等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.99(16):10405-10)。已發(fā)現(xiàn)VP1、VP2和VP3以1:1:10比例存在。已知AAV2衣殼蛋白和HSPG之間的結(jié)合經(jīng)由堿性AAV2衣殼蛋白殘基和帶負(fù)電的糖胺聚糖殘基之間的靜電相互作用發(fā)生(Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006；Kern,A等，(2003)J.Virol.77:11072-11081)。這些相互作用中涉及的特定衣殼殘基包括R484、R487、K532、R585和R588。已顯示這些殘基中的突變可降低AAV2與Hela細(xì)胞和乙酰肝素自身的結(jié)合(Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006；Kern,A等，(2003)J.Virol.77:11072-11081；WO2004/027019A2、美國專利No.7,629,322)。此外，不愿受理論束縛，認(rèn)為位于一個(gè)或多個(gè)對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的殘基(編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào))處的氨基酸取代可調(diào)節(jié)不結(jié)合HSPG的AAV衣殼類型的轉(zhuǎn)導(dǎo)特性，或可不依賴于其對(duì)HSPG的結(jié)合能力而調(diào)節(jié)AAV衣殼類型的轉(zhuǎn)導(dǎo)特性。本發(fā)明的一些方面涉及將異源核酸遞送至個(gè)體的眼部或中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的眼部或CNS。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含含有rAAV衣殼蛋白的rAAV衣殼，所述衣殼蛋白在與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。如本申請(qǐng)中所述，在衣殼蛋白中在與HSPG相互作用的殘基處或在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)殘基(編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào))處具有突變的rAAV顆粒顯示出有利的性質(zhì)，如增強(qiáng)的表達(dá)和/或降低的神經(jīng)性炎癥。因此，在一些實(shí)施方案中，遞送后由rAAV載體編碼的異源核酸以增加的表達(dá)水平表達(dá)，所述增加是與包含含有參考rAAV衣殼蛋白(例如野生型rAAV衣殼蛋白)的rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達(dá)水平相比。在一些實(shí)施方案中，核酸的表達(dá)增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實(shí)施方案中，遞送后所述rAAV顆粒引起與包含參考rAAV衣殼蛋白(例如野生型rAAV衣殼蛋白)的rAAV顆粒相比降低的神經(jīng)性炎癥。在一些實(shí)施方案中，將神經(jīng)性炎癥減少至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。合適的參考rAAV衣殼蛋白可包括任何這樣的衣殼蛋白，所述衣殼蛋白在與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置缺乏一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代(參考衣殼可由此含有一個(gè)或多個(gè)“背景”取代，其不改變與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體眼部的方法，其包括將重組腺相關(guān)病毒(rAAV)顆粒施用于個(gè)體的視網(wǎng)膜下空間，其中所述rAAV顆粒包含a)包含rAAV衣殼蛋白的rAAV衣殼，所述rAAV衣殼蛋白含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV2的VP1、VP2和/或VP3的任一項(xiàng)的氨基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變r(jià)AAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP1AAV2的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP2AAV2的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP3AAV2的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV2的VP1、VP2和VP3的組合的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV2的VP1、VP2和/或VP3的任一者的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是SEQIDNO:1、3和/或5的衣殼蛋白的任一者的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含SEQIDNO：2、4和/或6的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型3(AAV3)衣殼。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV3的VP1、VP2和/或VP3的任一項(xiàng)的氨基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP1AAV3的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP2AAV3的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP3AAV3的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV3的VP1、VP2和VP3的組合的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAV3的VP1、VP2和/或VP3的任一者的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:7的衣殼蛋白的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼，例如，如U.S.PGPub.No.20090317417中所述。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的氨基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP1AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP2AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP3AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和VP3的組合的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是由SEQIDNO:9例示的衣殼蛋白的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低約至少10％、約至少15％、約至少20％、約至少25％、約至少30％、約至少35％、約至少40％、約至少45％、約至少50％、約至少55％、約至少60％、約至少65％、約至少70％、約至少75％、約至少80％、約至少85％、約至少90％、約至少95％，或約至少100％(與包含野生型衣殼的rAAV顆粒的結(jié)合相比)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合降低下述任一者：約10％至約100％、約20％至約100％、約30％至約100％、約40％至約100％、約50％至約100％、約60％至約100％、約70％至約100％、約80％至約100％、約90％至約100％、約10％至約90％、約20％至約90％、約30％至約90％、約40％至約90％、約50％至約90％、約60％至約90％、約70％至約90％、約80％至約90％、約10％至約80％、約20％至約80％、約30％至約80％、約40％至約80％、約50％至約80％、約60％至約80％、約70％至約80％、約10％至約70％、約20％至約70％、約30％至約70％、約40％至約70％、約50％至約70％、約60％至約70％、約10％至約60％、約20％至約60％、約30％至約60％、約40％至約60％、約50％至約60％、約10％至約50％、約20％至約50％、約30％至約50％、約40％至約50％、約10％至約40％、約20％至約40％、約30％至約40％、約10％至約30％、約20％至約30％或約10％至約20％(與包含野生型衣殼的rAAV顆粒的結(jié)合相比)。在一些實(shí)施方案中，與野生型rAAV顆粒的結(jié)合相比，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代導(dǎo)致沒有可檢測(cè)的rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。測(cè)量AAV顆粒與HSPG的結(jié)合的手段是本領(lǐng)域已知的；例如結(jié)合至硫酸乙酰肝素色譜介質(zhì)或結(jié)合至已知在其表面表達(dá)HSPG的細(xì)胞。例如，參見Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006和Kern,A等，(2003)J.Virol.77：11072-11081。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供rAAV顆粒用于視網(wǎng)膜下遞送治療性核酸，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合，其中所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的VP1的位置484、487、532、585或588處。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的VP2的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的VP1、AAV2的VP2和/或AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，rAAV2的VP1包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV3的VP1的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV3的VP2的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV3的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1處。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV3的VP1、AAV3的VP2和/或AAV3的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，rAAV2的VP1包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的AAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代位于位置485、488、528、533、586或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基取代帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用疏水性氨基酸殘基取代所述帶正電荷的氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置R533和/或A586處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代A586R和/或R533A，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的rAAV衣殼蛋白。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用不帶正電荷的氨基酸殘基(例如不含有帶正電荷的側(cè)鏈的氨基酸)取代帶正電荷的氨基酸殘基(例如具有帶正電荷的側(cè)鏈的氨基酸)。帶正電荷的氨基酸包括精氨酸、組氨酸和賴氨酸。不帶正電荷的氨基酸殘基的實(shí)例包括帶負(fù)電的氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)、具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(絲氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺)、具有疏水側(cè)鏈的氨基酸(丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)、甘氨酸、半胱氨酸和脯氨酸。在一些實(shí)施方案中，AAV衣殼的一個(gè)或多個(gè)帶正電荷的氨基酸殘基用疏水性氨基酸殘基取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包含用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用帶正電荷的氨基酸殘基取代不帶正電荷的氨基酸殘基。在一些實(shí)施方案中，用帶正電荷的氨基酸殘基取代疏水性氨基酸殘基。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括在AAV2的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括在AAV2的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532和/或R588處的取代，編號(hào)基于SEQIDNO:1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括AAV2的VP1、VP2和/或VP3的R484A、R487A、R585A和/或R588A取代的一個(gè)或多個(gè)，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位于AAV3的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括AAV3的VP1、VP2和/或VP3的R484A、R487A、R585A和/或R588A取代的一個(gè)或多個(gè)，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:2、4和/或6的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R485、R488、R533、A586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R485、R488、R533、A586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1，編號(hào)基于SEQIDNO:9。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括AAV2的VP1、VP2和/或VP3的R533A和/或A586R取代的一個(gè)或多個(gè)，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的rAAV衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼在與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼在降低或去除與HSPG的結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)位置處包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)氨基酸取代，其降低或去除與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼具有一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個(gè)氨基酸取代，其降低或去除與HSPG的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含位于位置R484和R487處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼具有位置R484和R487處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼具有位置R585和R588處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含取代R484A和R487A，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼具有取代R484A和R487A，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含取代R585A和R588A，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼具有取代R585A和R588A，編號(hào)基于rAAV2的VP1。已知硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)在遍及身體的多個(gè)組織中表達(dá)，并在細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞黏附和細(xì)胞信號(hào)傳輸中起重要的作用。在一些實(shí)施方案中，所述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細(xì)胞上表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述CNS的一種或多種細(xì)胞是神經(jīng)元。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供rAAV顆粒用于治療性核酸的CNS遞送，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。如本文所用的，“編號(hào)基于AAV2的VP1”指所述衣殼蛋白的氨基酸對(duì)應(yīng)于AAV2的VP1的所述氨基酸。例如，如果一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1，則所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于所述衣殼蛋白對(duì)應(yīng)于AAV2的VP1的氨基酸347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588的氨基酸處。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的位置484、487、532、585或588處。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于AAV2的VP1、AAV2的VP2和/或AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV2的VP1(例如rAAV2)包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:2、4和/或6的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含位置R484和R487或R585和R588處的取代，編號(hào)基于rAAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代R585A和R588A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述AAV衣殼包含氨基酸取代K532A，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號(hào)基于AAV2的VP1。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供rAAV顆粒用于治療性核酸的CNS遞送，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼，例如，如U.S.PGPub.No.20090317417中所述。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一項(xiàng)的氨基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP1AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP2AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是VP3AAVrh8R的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和VP3的組合的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是由SEQIDNO:9例示的衣殼蛋白的氨基酸殘基的取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述編號(hào)基于包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置A586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A586R取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R或T589K取代，編號(hào)基于AAVrh8R的VP1。如上文所討論的，不愿受理論束縛，認(rèn)為位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)殘基處的氨基酸取代(編號(hào)基于AAV2的VP1編號(hào))可調(diào)節(jié)不結(jié)合HSPG的AAV衣殼類型的轉(zhuǎn)導(dǎo)特性，或可不依賴于其結(jié)合HSPG的能力而調(diào)節(jié)AAV衣殼類型的轉(zhuǎn)導(dǎo)性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包含對(duì)應(yīng)于圖20中所示的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。例如，在一些實(shí)施方案中，在對(duì)應(yīng)于氨基酸585和/或588(編號(hào)基于AAV2的VP1)的位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被精氨酸殘基替代(例如AAV1或AAV6的S586和/或T589；AAV9的S586和/或A589；AAVrh8R的A586和/或T589；AAV8的Q588和/或T591；和AAVrh10的Q588和/或A591)。這些修飾的衣殼可用于尤其是改善靶向視網(wǎng)膜的玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在其他實(shí)施方案中，在對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、527和/或532(編號(hào)基于AAV2的VP1)的位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸(例如精氨酸或賴氨酸)被不帶正電荷的氨基酸如丙氨酸替代(例如AAV1或AAV6的R485、R488、K528和/或K533；AAV9或AAVrh8R的R485、R488、K528和/或R533；和AAV8或AAVrh10的R487、R490、K530和/或R535)。這些修飾的衣殼可用于尤其是改善視網(wǎng)膜下或CNS轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型1(AAV1)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV1的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述AAV1的VP1包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAV1的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R或S586K取代，編號(hào)基于AAV1的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R取代，編號(hào)基于AAV1的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型6(AAV6)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV6的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，編號(hào)基于包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號(hào)基于AAV6的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R或S586K取代，編號(hào)基于AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T589R取代，編號(hào)基于AAV6的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型8(AAV8)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置588和/或591處，編號(hào)基于AAV8的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，編號(hào)基于包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的AAV8的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置Q588和/或T591處的取代，編號(hào)基于AAV8的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號(hào)基于AAV8的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括T591R取代，編號(hào)基于AAV8的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型9(AAV9)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置586和/或589處，編號(hào)基于AAV9的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，編號(hào)基于包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的AAV9的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置S586和/或A589處的取代，編號(hào)基于AAV9的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括S586R或S586K取代，編號(hào)基于AAV9的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A589R或A589K取代，編號(hào)基于AAV9的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh10(AAVrh10)衣殼。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代位于位置588和/或591處，編號(hào)基于AAVrh10的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，編號(hào)基于包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的AAVrh10的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括位置Q588和/或A591處的取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1編號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1。在一些實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代包括A591R取代，編號(hào)基于AAVrh10的VP1。IV.治療方法用于視網(wǎng)膜疾病如LCA、視網(wǎng)膜色素變性和與年齡相關(guān)的黃斑退化性改變的基因治療程序需要將載體局部遞送至視網(wǎng)膜中的細(xì)胞。在這些疾病中作為治療靶標(biāo)的細(xì)胞是視網(wǎng)膜中的感光細(xì)胞或感覺神經(jīng)性視網(wǎng)膜下的(underlyingtheneurosensoryretina)RPE的細(xì)胞。將基因治療載體遞送至這些細(xì)胞需要注射入視網(wǎng)膜和RPE之間的視網(wǎng)膜下空間中。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供將rAAV基因治療載體遞送至視網(wǎng)膜的細(xì)胞的方法，其中所述rAAV載體衣殼化于AAV衣殼中，所述AAV衣殼包含與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體的CNS的病癥的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包括所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。此外，本申請(qǐng)所述的用于將異源核酸遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的方法、在將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS后改進(jìn)細(xì)胞的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法和在將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS后改進(jìn)異源核酸的表達(dá)的方法可用于遞送例如異源核酸，如編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。這些方法可用于尤其是治療CNS的病癥。在一些實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。治療載體本發(fā)明提供眼部病癥的基因治療的方法，其中將包含治療載體的rAAV顆粒遞送至個(gè)體的視網(wǎng)膜。視網(wǎng)膜的細(xì)胞的改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)可通過將rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)中衣殼化來實(shí)現(xiàn)，其中衣殼的與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被取代從而降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結(jié)合。所述載體可包含編碼多肽(例如治療性或診斷性多肽)的異源核酸和/或治療性核酸。編碼治療性或診斷性多肽和/或治療性核酸的核酸能夠使用本領(lǐng)域已知的方法用標(biāo)準(zhǔn)的合成和重組方法來生成。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼診斷性多肽。編碼治療性多肽的核酸的非限制性實(shí)例包括：用于替換已知引起視網(wǎng)膜疾病的缺失或突變基因的核酸，例如Prph2、RPE65、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3和GNAT2。編碼治療性多肽的核酸的其他非限制性實(shí)例包括編碼神經(jīng)營養(yǎng)因子(如GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO)、抗凋亡基因(如BCL2、BCL-X、NFκB)、抗血管生成因子(如內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt)和抗炎因子(如IL10、IL1-ra、TGFβ、IL4)的那些。用于眼部病癥的其他治療性多肽包括但不限于Myo7a、ABCA4、REP1、GUCY2D、PDE6C、RS1、RPGRIP、Lpcat1、AIPL1、RDH12、CHM。在一些實(shí)施方案中，編碼的多肽是多肽的人變體。本發(fā)明的核酸可編碼多肽，所述多肽是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、錨定于細(xì)胞膜中、保持在細(xì)胞內(nèi)，或由用本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞分泌。對(duì)于由接受載體的細(xì)胞分泌的多肽；所述多肽可以是可溶的(即不附接于細(xì)胞)。例如，可溶的多肽缺乏跨膜區(qū)并從細(xì)胞分泌。鑒定并移除編碼跨膜域的核酸序列的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的?？筛鶕?jù)本發(fā)明施用的載體還包括包含核酸的載體，所述核酸編碼RNA(例如RNAi、核酶、miRNA、siRNA、反義RNA)，所述RNA在從載體的核酸轉(zhuǎn)錄時(shí)可通過干擾與本發(fā)明的疾病狀態(tài)相關(guān)的異常或過量蛋白翻譯或轉(zhuǎn)錄來治療眼部病癥。例如，本發(fā)明的核酸可編碼RNA，所述RNA通過對(duì)編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性清除或減少來治療疾病。治療性RNA序列包括RNAi、小抑制RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)和/或核酶(如錘頭核酶和發(fā)夾核酶)，其可通過對(duì)編碼所述異常和/或過量蛋白質(zhì)的mRNA的高度特異性清除或減少來治療疾病，所述蛋白質(zhì)如遺傳的視網(wǎng)膜退化的多種形式中存在的那些?？赏ㄟ^治療性RNA序列治療的眼部病癥的非限制性實(shí)例包括，例如常染色體顯性視網(wǎng)膜色素變性(ADRP)和糖尿病視網(wǎng)膜病變。可用于本發(fā)明的治療性RNA序列和編碼這些序列的核酸的實(shí)例包括例如，美國專利號(hào)6,225,291中所述的那些，其公開內(nèi)容通過提述以其整體并入本文。在一些實(shí)施方案中，所述治療性RNA序列是miR-708。在一些實(shí)施方案中，miR-708與編碼野生型視紫紅質(zhì)的核酸組合使用，作為相同rAAV載體的一部分或者作為另一rAAV載體的一部分。在一些實(shí)施方案中，編碼所述野生型視紫紅質(zhì)的核酸缺乏位于視紫紅質(zhì)基因的3’非翻譯區(qū)中的miR-708靶序列。編碼miR-708和/或視紫紅質(zhì)的rAAV載體由美國臨時(shí)專利申請(qǐng)序號(hào)No.61/969,027提供，其通過提述以其整體并入本文。本發(fā)明的一些方面涉及rAAV顆粒(例如治療載體)的用途，所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。如本文所用的，治療性核酸可表達(dá)本發(fā)明的任何治療性核酸或編碼本發(fā)明的治療性多肽的任何核酸。例如，可使用治療性核酸以改善病癥的癥狀、防止或延遲病癥的進(jìn)展和/或提供對(duì)病癥(例如本申請(qǐng)所述的病癥)的治療。CNS的細(xì)胞的改進(jìn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)可通過將rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等)中衣殼化來實(shí)現(xiàn)，其中所述衣殼的與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被取代，從而降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結(jié)合。所述載體可包含編碼多肽(例如治療性或診斷性多肽)和/或治療性核酸的異源核酸。編碼治療性或診斷性多肽和/或治療性核酸的核酸可使用本領(lǐng)域已知的方法使用標(biāo)準(zhǔn)的合成和重組方法生成。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼診斷性多肽。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼CNS相關(guān)的基因。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在一些實(shí)施方案中，治療性核酸可包括而不限于siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。如此，治療性核酸可編碼RNA，所述RNA在從所述載體的核酸轉(zhuǎn)錄時(shí)可通過干擾與本發(fā)明的病癥相關(guān)的異常或過量蛋白轉(zhuǎn)錄或翻譯來治療本發(fā)明的病癥(例如CNS的病癥)。例如，本發(fā)明的核酸可編碼RNA，所述RNA通過對(duì)編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性消除或減少來治療病癥。治療性RNA序列包括RNAi、小抑制RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)和/或核酶(如錘頭核酶和發(fā)夾核酶)，其可通過對(duì)編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性消除或減少來治療病癥。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。例如，治療性多肽可提供多肽和/或酶活性，其在細(xì)胞或生物體中不存在或以降低的水平存在。或者，治療性多肽可提供多肽和/或酶活性，其間接地抵消了細(xì)胞或生物體中的不平衡。例如，用于涉及由代謝酶或活性的缺乏而引起的代謝物的積累的病癥的治療性多肽可提供丟失的代謝酶或活性，或其可提供導(dǎo)致代謝物減少的供選擇的代謝酶或活性。例如，還可用治療性多肽通過充當(dāng)顯性負(fù)性(dominant-negative)多肽來降低多肽的活性(例如過表達(dá)的、被功能獲得型突變激活的、或其活性被以其他方式誤調(diào)節(jié)的(misregulated))。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼選自如下的多肽：酶、神經(jīng)營養(yǎng)因子、在患CNS相關(guān)病癥的個(gè)體中缺乏或突變的多肽、抗氧化劑、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。此類多肽可用于通過如下來治療CNS的病癥：例如提供在CNS的病癥中減少、不存在或誤調(diào)節(jié)的多肽和/或酶活性，改善CNS病癥的病因和/或癥狀，和/或減輕由CNS病癥引起的對(duì)CNS的損害(例如細(xì)胞凋亡、炎癥或其他形式的細(xì)胞死亡)。編碼治療性多肽的核酸的非限制性實(shí)例包括：用于替換已知引起CNS的病癥的缺失或突變基因的核酸，例如Prph2、RPE65、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3和GNAT2。編碼治療性多肽的核酸的其他非限制性實(shí)例包括編碼如下的那些：神經(jīng)營養(yǎng)因子(如GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO)、抗凋亡基因(如BCL2、BCL-X、NFκB)、抗血管生成因子(如內(nèi)皮他汀、血管他汀、sFlt)和抗炎因子(如IL10、IL1-ra、TGFβ、IL4)。用于CNS病癥的其他治療性多肽包括但不限于Myo7a、ABCA4、REP1、GUCY2D、PDE6C、RS1、RPGRIP、Lpcat1、AIPL1、RDH12、CHM。在一些實(shí)施方案中，編碼的多肽是所述多肽的人變體。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸編碼神經(jīng)元細(xì)胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經(jīng)生長因子(NGF)、神經(jīng)膠質(zhì)來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環(huán)化水解酶(GTPCH)、氨基酸脫羧酶(AADC)、抗氧化劑、抗血管生成多肽、抗炎多肽和天冬氨酸?；?ASPA)?？寡趸瘎┑膶?shí)例包括而不限于SOD1；SOD2；過氧化氫酶；Sirtuins1、3、4或5；NRF2；PGC1a；GCL(催化亞基)；GCL(修飾亞基)；脂聯(lián)素(adiponectin)；谷胱甘肽過氧化物酶1；和神經(jīng)球蛋白(neuroglobin)?？寡苌啥嚯牡膶?shí)例包括而不限于血管他汀、內(nèi)皮他汀、PEDF、可溶性VEGF受體和可溶性PDGF受體?？寡锥嚯牡膶?shí)例包括而不限于IL-10、可溶性IL17R、可溶性TNF-R、TNF-R-Ig、IL-1抑制劑和IL18抑制劑?？捎糜谥委烠NS的病癥的這些類型的其他例示性多肽在下文提供。本發(fā)明的核酸可編碼多肽，所述多肽是細(xì)胞內(nèi)蛋白、錨定于細(xì)胞膜中、保持在細(xì)胞內(nèi)，或由用本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞分泌。對(duì)于由接受載體的細(xì)胞分泌的多肽；所述多肽可為可溶的(即不附接于細(xì)胞)。例如，可溶的多肽缺乏跨膜區(qū)并從細(xì)胞分泌。鑒定并移除編碼跨膜域的核酸序列的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至啟動(dòng)子。例示性的啟動(dòng)子包括但不限于巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動(dòng)子、RSVLTR、MoMLVLTR、磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動(dòng)子、猿猴病毒40(SV40)啟動(dòng)子、CK6啟動(dòng)子、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白啟動(dòng)子(TTR)、TK啟動(dòng)子、四環(huán)素響應(yīng)性啟動(dòng)子(TRE)、HBV啟動(dòng)子、hAAT啟動(dòng)子、LSP啟動(dòng)子、嵌合肝特異性啟動(dòng)子(LSP)、E2F啟動(dòng)子、端粒酶(hTERT)啟動(dòng)子；巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白/兔β球蛋白啟動(dòng)子(CAG啟動(dòng)子；Niwa等，Gene,1991,108(2):193-9)、延伸因子1-α啟動(dòng)子(EF1-α)啟動(dòng)子(Kim等，Gene,1990,91(2)：217-23和Guo等，GeneTher.,1996,3(9):802-10)。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子包含人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動(dòng)子或與雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子連接的巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子。所述啟動(dòng)子可以是組成型、誘導(dǎo)型或阻抑型啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供重組載體，其包含編碼本發(fā)明的異源轉(zhuǎn)基因的核酸，所述核酸可操作地連接至CBA啟動(dòng)子。例示性的啟動(dòng)子和描述可見于例如U.S.PGPub.20140335054中。組成型啟動(dòng)子的實(shí)例包括而不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動(dòng)子(任選地與RSV增強(qiáng)子一起)、巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子(任選地與CMV增強(qiáng)子一起)[參見例如Boshart等，Cell,41:521-530(1985)]、SV40啟動(dòng)子、二氫葉酸還原酶啟動(dòng)子、13-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、磷酸甘油激酶(PGK)啟動(dòng)子和EF1a啟動(dòng)子[Invitrogen]。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子允許調(diào)節(jié)基因表達(dá)并能夠經(jīng)由如下來調(diào)節(jié)：外源供給的化合物，環(huán)境因子如溫度，或特定生理狀態(tài)的存在，例如急性期、細(xì)胞的特定分化狀態(tài)或僅在正在復(fù)制的細(xì)胞中。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子和誘導(dǎo)型系統(tǒng)可由多種商業(yè)來源得到，包括而不限于Invitrogen、Clontech和Ariad。本領(lǐng)域技術(shù)人員已描述并能夠容易地選擇許多其他系統(tǒng)。由外源供給的啟動(dòng)子調(diào)節(jié)的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的實(shí)例包括鋅誘導(dǎo)的羊金屬硫蛋白(MT)啟動(dòng)子、地塞米松(Dex)誘導(dǎo)型小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)啟動(dòng)子、T7聚合酶啟動(dòng)子系統(tǒng)(WO98/10088)；昆蟲蛻皮激素啟動(dòng)子(No等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:3346-3351(1996))、四環(huán)素阻遏系統(tǒng)(Gossen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992))、四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)(Gossen等，Science,268:1766-1769(1995)，另見Harvey等，Curr.Opin.Chem.Biol.,2:512-518(1998))、RU486-誘導(dǎo)系統(tǒng)(Wang等，Nat.Biotech.,15:239-243(1997)和Wang等，GeneTher.,4:432-441(1997))和雷帕霉素-誘導(dǎo)系統(tǒng)(Magari等，J.Clin.Invest.,100:2865-2872(1997))。可用于此語境的其他類型的誘導(dǎo)性啟動(dòng)子是由特定的生理狀態(tài)(例如溫度、急性期、細(xì)胞的特定分化狀態(tài)或僅在正在復(fù)制的細(xì)胞中)調(diào)節(jié)的那些。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，對(duì)轉(zhuǎn)基因使用天然啟動(dòng)子或其片段。當(dāng)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)應(yīng)模擬天然表達(dá)是所需的時(shí)，可使用所述天然啟動(dòng)子。當(dāng)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)必須暫時(shí)地或進(jìn)行性地、或以組織特異性方式、或響應(yīng)于特定的轉(zhuǎn)錄刺激物而受調(diào)節(jié)時(shí)，可使用所述天然啟動(dòng)子。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，還可使用其他天然表達(dá)調(diào)控組件，如增強(qiáng)子組件、多腺苷酸化位點(diǎn)或Kozak共有序列以模擬天然表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，調(diào)控序列賦予組織特異性基因表達(dá)能力。在一些情況中，所述組織特異性調(diào)控序列結(jié)合組織特異性轉(zhuǎn)錄因子，其以組織特異性方式誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄。所述組織特異性調(diào)控序列(例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等)是本領(lǐng)域熟知的。例示的組織特異性調(diào)控序列包括但不限于如下組織特異性啟動(dòng)子：神經(jīng)元的如神經(jīng)元-特異性烯醇化酶(NSE)啟動(dòng)子(Andersen等，Cell.Mol.Neurobiol.,13:503-15(1993))、神經(jīng)絲輕鏈基因啟動(dòng)子(Piccioli等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:5611-5(1991))和神經(jīng)元-特異性vgf基因啟動(dòng)子(Piccioli等，Neurons,15:373-84(1995))。在一些實(shí)施方案中，所述組織特異性啟動(dòng)子是選自如下的基因的啟動(dòng)子：神經(jīng)元核(NeuN)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、腺瘤性結(jié)腸息肉病(APC)和離子化鈣結(jié)合銜接分子1(Iba-1)。其他適當(dāng)?shù)慕M織特異性啟動(dòng)子對(duì)于技術(shù)人員會(huì)是顯而易見的。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是雞β-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸處于在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列的控制下。本領(lǐng)域已知上文列出的許多啟動(dòng)子序列(例如CBA啟動(dòng)子)在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子序列可在生物體中遍在地表達(dá)，且因而可在CNS的一種或多種細(xì)胞中通過其向CNS的遞送來表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，可使用在CNS或一種或多種CNS細(xì)胞的亞組中特異性表達(dá)的啟動(dòng)子序列。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適于治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。如此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療性多肽或治療性核酸可用于治療CNS的病癥。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子在腦細(xì)胞中表達(dá)所述異源核酸。腦細(xì)胞可指本領(lǐng)域已知的任何腦細(xì)胞，包括而不限于神經(jīng)元(如感覺神經(jīng)元、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、中間神經(jīng)元、多巴胺能神經(jīng)元、中型多棘神經(jīng)元、膽堿能神經(jīng)元、GABA能神經(jīng)元、錐體神經(jīng)元等)、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(如小膠質(zhì)細(xì)胞、大膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞、放射狀膠質(zhì)細(xì)胞等)、腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞，室管膜細(xì)胞和/或浦肯野細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子在神經(jīng)元中表達(dá)所述異源核酸。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸僅在神經(jīng)元中表達(dá)(例如在神經(jīng)元中表達(dá)而不在CNS的其他細(xì)胞如膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá))。在一些方面，本發(fā)明提供rAAV載體用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防或治療一個(gè)或多個(gè)基因缺陷(例如遺傳的基因缺陷、體細(xì)胞基因改變等)，如例如導(dǎo)致受試者中多肽缺乏或多肽過量的基因缺陷的方法，或用于在受試者中治療缺陷或降低缺陷的嚴(yán)重性或程度的方法，所述受試者顯示出與細(xì)胞和組織中所述多肽的缺陷相聯(lián)系的CNS相關(guān)病癥。在一些實(shí)施方案中，方法涉及將編碼一個(gè)或多個(gè)治療性肽、多肽、功能性RNA、抑制核酸、shRNA、微RNA、反義核苷酸等的rAAV載體于藥學(xué)上可接受的載體中施用于受試者，其施用的量和時(shí)間足以在患有或疑似患有CNS相關(guān)病癥的受試者中治療所述病癥。rAAV載體可包含轉(zhuǎn)基因、編碼蛋白或功能性RNA的核酸，其調(diào)節(jié)或治療CNS相關(guān)病癥。如下是與CNS相關(guān)病癥相關(guān)的基因的非限制性的列表：神經(jīng)元細(xì)胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經(jīng)生長因子(NGF)、神經(jīng)膠質(zhì)來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環(huán)化水解酶(GTPCH)、天冬氨酸酰基酶(ASPA)、超氧化物歧化酶(SOD1)、抗氧化劑，抗血管生成多肽、抗炎多肽，和氨基酸脫羧酶(AADC)。例如，在帕金森氏病的治療中有用的轉(zhuǎn)基因編碼TH，其是多巴胺的合成中的限速酶。在帕金森氏病的治療中還可使用編碼GTPCII的轉(zhuǎn)基因，其生成TII輔因子四氫生物蝶呤。還可用編碼GDNF或BDNF或AADC的轉(zhuǎn)基因來治療帕金森氏病，所述轉(zhuǎn)基因促進(jìn)L-Dopa至DA的轉(zhuǎn)化。對(duì)于ALS的治療而言，有用的轉(zhuǎn)基因可編碼：GDNF、BDNF或CNTF。同樣對(duì)于ALS的治療而言，有用的轉(zhuǎn)基因可編碼功能性RNA，例如shRNA、miRNA，其抑制SOD1的表達(dá)。對(duì)于缺血的治療，有用的轉(zhuǎn)基因可編碼NAIP或NGF。編碼β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)的轉(zhuǎn)基因可用于治療一些溶酶體貯積癥(例如粘多糖病類型VII(MPSVII))。編碼前藥激活基因(例如HSV-胸苷激酶，其將更昔洛韋(ganciclovir)轉(zhuǎn)化為破壞DNA合成并導(dǎo)致細(xì)胞死亡的毒性核苷酸)的轉(zhuǎn)基因可用于治療一些癌癥，例如，當(dāng)與所述前藥組合施用時(shí)。編碼內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)(opioid)如β-內(nèi)啡肽的轉(zhuǎn)基因可用于治療疼痛?？寡趸瘎┑膶?shí)例包括而不限于SOD1；SOD2；過氧化氫酶；Sirtuins1、3、4或5；NRF2；PGC1a；GCL(催化亞基)；GCL(修飾亞基)；脂聯(lián)素；谷胱甘肽過氧化物酶1；和神經(jīng)球蛋白?？寡苌啥嚯牡膶?shí)例包括而不限于血管他汀、內(nèi)皮他汀、PEDF、可溶性VEGF受體和可溶性PDGF受體?？寡锥嚯牡膶?shí)例包括而不限于IL-10、可溶性IL17R、可溶性TNF-R、TNF-R-Ig、IL-1抑制劑和IL18抑制劑。可用于本發(fā)明的rAAV載體的轉(zhuǎn)基因的其他實(shí)例對(duì)于技術(shù)人員是顯而易見的(參見例如CostantiniLC，等，GeneTherapy(2000)7,93-109)。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽或治療性核酸用于治療CNS的病癥。不愿受理論束縛，認(rèn)為治療性多肽或治療性核酸可用于減少或消除多肽的表達(dá)和/或活性，所述多肽的功能獲得已與病癥相關(guān)，或用于增強(qiáng)多肽的表達(dá)和/或活性以補(bǔ)足與病癥相關(guān)的缺陷(例如其表達(dá)顯示出相似或相關(guān)活性的基因中的突變)?？赏ㄟ^本發(fā)明的治療性多肽或治療性核酸治療的本發(fā)明的病癥的非限制性實(shí)例(對(duì)于每種病癥，可被靶向或供給的例示性基因提供于括號(hào)中)包括中風(fēng)(例如半胱天冬酶-3、Beclin1、Ask1、PAR1、HIF1α、PUMA和/或Fukuda,A.M.和Badaut,J.(2013)Genes(Basel)4:435-456中所述的任何基因)、亨廷頓氏病(突變體HTT)、癲癇(例如，SCN1A、NMDAR、ADK和/或Boison,D.(2010)Epilepsia51:1659-1668中所述的任何基因)、帕金森氏病(α-突觸核蛋白)、LouGehrig氏病(亦稱為肌萎縮側(cè)索硬化；SOD1)、阿爾茨海默氏病(tau，淀粉樣前體蛋白質(zhì))、皮質(zhì)基底變性或CBD(tau)、皮質(zhì)基底神經(jīng)節(jié)變性或CBGD(tau)、額顳葉癡呆或FTD(tau)、進(jìn)行性核上麻痹或PSP(tau)、多系統(tǒng)萎縮或MSA(α-突觸核蛋白)、腦的癌癥(例如腦癌中涉及的突變或過表達(dá)的癌基因)，和溶酶體貯積病(LSD)。本發(fā)明的病癥可包括涉及大面積的皮質(zhì)，例如多于一個(gè)的皮質(zhì)功能區(qū)域、多于一個(gè)的皮質(zhì)葉(lobe)和/或整個(gè)皮質(zhì)。本發(fā)明的病癥的其他非限制性實(shí)例可由本發(fā)明的治療性多肽或治療性核酸治療，其包括外傷性腦損傷、酶功能障礙病癥，精神病癥(包括創(chuàng)傷后應(yīng)激綜合征)、神經(jīng)退化性疾病和認(rèn)知病癥(包括癡呆癥、自閉癥和抑郁癥)。酶功能障礙病癥包括而不限于腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(包括Canavan氏病)和下述的任何溶酶體貯積病。在一些實(shí)施方案中，所述治療性多肽或治療性核酸用于治療溶酶體貯積病。如本領(lǐng)域中通常已知的，溶酶體貯積病是罕見的、特征為溶酶體功能缺陷的遺傳性代謝病癥。所述病癥常常由正常的粘多糖、糖蛋白和/或脂質(zhì)代謝所需的酶的缺乏引起，導(dǎo)致溶酶體儲(chǔ)存的細(xì)胞材料的病理學(xué)積累?？捎帽景l(fā)明的治療性多肽或治療性核酸治療的本發(fā)明的溶酶體貯積病的非限制性實(shí)例(對(duì)于每種病癥可被靶向或提供的例示性基因提供于括號(hào)中)包括戈謝病2型或3型(酸性β-葡糖苷酶，GBA)、GM1神經(jīng)節(jié)苷脂貯積癥(β-半乳糖苷酶-1，GLB1)、亨特病(艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶，IDS)、克拉伯病(半乳糖基神經(jīng)酰胺酶，GALC)、甘露糖苷貯積癥(甘露糖苷酶，如α-D-甘露糖苷酶，MAN2B1)、β甘露糖苷貯積癥(β-甘露糖苷酶，MANBA)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良癥(假芳基硫酸酯酶A，ARSA)、粘脂病II/III疾病(N-乙酰葡糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶，GNPTAB)、尼曼-皮克病A(酸性鞘磷脂酶，ASM)、尼曼-皮克病C(尼曼-皮克C蛋白質(zhì)，NPC1)、蓬佩病(酸性α-1,4-葡糖苷酶，GAA)、桑德霍夫病(己糖胺酶β亞基，HEXB)、圣菲利柏氏癥A(N-磺基葡糖胺磺基水解酶(N-sulfoglucosaminesulfohydrolase)，MPS3A)、圣菲利柏氏癥B(N-α-乙酰葡糖胺酶，NAGLU)、圣菲利柏氏癥C(肝素乙酰CoA:α-葡糖胺酶N-乙酰轉(zhuǎn)移酶，MPS3C)、圣菲利柏氏癥D(N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶，GNS)、辛德勒病(α-N-乙酰半乳糖胺酶，NAGA)、史萊氏癥(β-葡糖醛酸糖苷酶，GUSB)、泰-薩二氏病(己糖胺酶α亞基，HEXA)和沃爾曼病(溶酶體酸性脂肪酶，LIPA)。其他的溶酶體貯積癥以及與每個(gè)疾病相關(guān)的缺陷的酶列于下表1中。在一些實(shí)施方案中，下表中所列的疾病通過本發(fā)明的治療性多肽或治療性核酸治療，其補(bǔ)足或以其他方式補(bǔ)償相應(yīng)的酶缺陷。表1.溶酶體貯積癥及相關(guān)的缺陷型酶亨廷頓氏病疾病(其中載體可能是有利的)的一個(gè)實(shí)例是亨廷頓氏病(HD)，其由編碼突變體亨廷頓蛋白(mHTT)中擴(kuò)展的聚谷氨酰胺(polyQ)重復(fù)的CAG重復(fù)擴(kuò)展突變引起。HD對(duì)于基于DNA和RNA的治療是有吸引力的靶標(biāo)，因?yàn)樗怯蓡蝹€(gè)等位基因的突變引起的常染色體顯性疾病。AAV載體可為核酸治療劑提供理想的遞送系統(tǒng)并允許這些亨廷頓蛋白降低分子在腦中的持久和連續(xù)表達(dá)。如本申請(qǐng)中所述，顱內(nèi)施用具有rAAV衣殼蛋白的rAAV顆粒(例如治療性載體)產(chǎn)生了普遍的神經(jīng)元轉(zhuǎn)導(dǎo)，所述rAAV衣殼蛋白含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。因此，本發(fā)明的方法提供了使用本申請(qǐng)所述的重組病毒顆粒將異源核酸遞送至中樞神經(jīng)系統(tǒng)用于治療亨廷頓氏病的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法和組合物用于治療個(gè)體中的亨廷頓氏病，其包括向哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的藥物組合物(例如包含本發(fā)明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發(fā)明提供用于抑制htt在患有亨廷頓氏病的哺乳動(dòng)物中的表達(dá)的方法和組合物，其包括向所述個(gè)體施用本發(fā)明的藥物組合物(例如包含本發(fā)明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發(fā)明提供用于抑制htt在患有亨廷頓氏病的個(gè)體的細(xì)胞中的累積的方法和組合物，其包括向所述個(gè)體施用本發(fā)明的藥物組合物(例如包含本發(fā)明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發(fā)明提供用于改善個(gè)體中的HD癥狀的方法和組合物，其包括向個(gè)體的CNS施用有效量的重組病毒顆粒，其包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，其中所述rAAV顆粒包含編碼RNAi的載體，所述RNAi抑制HTT在個(gè)體中的表達(dá)和/或積累。在一些實(shí)施方案中，HD的癥狀包括但不限于舞蹈病(chorea)、僵直(rigidity)、無法控制的身體動(dòng)作、肌肉失控、缺乏協(xié)調(diào)、躁動(dòng)、眼部運(yùn)動(dòng)減緩、姿態(tài)異常、不穩(wěn)(instability)、共濟(jì)失調(diào)步態(tài)(ataxicgait)、異常的表情、言語障礙、咀嚼和/或吞咽困難、睡眠障礙、癲癇發(fā)作、癡呆、認(rèn)知缺陷(例如關(guān)于規(guī)劃、抽象思維、靈活性、規(guī)則獲取、人際關(guān)系敏感、自我控制、注意力、學(xué)習(xí)、記憶的能力減退)、抑郁、焦慮、人格改變、侵略、強(qiáng)制行為、強(qiáng)迫行為、性欲亢進(jìn)、精神病、情感淡漠(apathy)、煩躁、自殺的念頭、減重、肌肉萎縮、心臟衰竭、糖耐量降低、睪丸萎縮和骨質(zhì)疏松。在一些方面，本發(fā)明提供預(yù)防HD或延遲HD的進(jìn)展的方法。常染色體顯性HD是一種能夠進(jìn)行基因分型的遺傳疾病。例如，HTT中的CAG重復(fù)的數(shù)目可通過基于PCR的重復(fù)大小分析(repeatsizing)來確定。這種類型的診斷可以通過直接檢測(cè)幼年或成年(例如連同臨床癥狀的呈現(xiàn))、產(chǎn)前篩查或產(chǎn)前排除測(cè)試(例如通過絨毛取樣或羊膜穿刺術(shù))或胚胎的植入前篩選而在生命的任何階段進(jìn)行。此外，HD可以通過腦成像、尋找尾狀核(caudatenuclei)和/或核殼(putamen)的收縮和/或腦室擴(kuò)大來進(jìn)行診斷。這些癥狀，與HD家族史和/或臨床癥狀組合，可指示HD。用于確定的HD癥狀改善的手段是本領(lǐng)域已知的。例如，統(tǒng)一亨廷頓氏病評(píng)定量表(UHDRS)可用于評(píng)估運(yùn)動(dòng)功能、認(rèn)知功能、行為異常度和功能的能力(參見例如HuntingtonStudyGroup(1996)MovementDisorder11:136-42)。該量表經(jīng)開發(fā)而為疾病病理多個(gè)方面提供統(tǒng)一的、全面的測(cè)試，并入來自測(cè)試的因素，所述測(cè)試如HD活動(dòng)和日常生活量表、馬斯登和奎因氏舞蹈病嚴(yán)重性量表、肢體殘疾和獨(dú)立性量表、HD運(yùn)動(dòng)評(píng)定量表(HDMRS)、HD功能的能力量表(HDFCS)和定量的神經(jīng)學(xué)檢查(QNE)。用于確定HD癥狀的改善的其他測(cè)試可包括而不限于蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估(MontrealCognitiveAssessment)、腦成像(例如，MRI)，類別流暢性測(cè)試(CategoryFluencyTest)、連線測(cè)試(TrailMakingTest)、地圖搜索(MapSearch)、斯特魯字閱讀測(cè)試(StroopWordReadingTest)，加快輕觸任務(wù)(SpeededTappingTask)和符號(hào)數(shù)字模式測(cè)試(SymbolDigitModalitiesTest)。在本發(fā)明的一些方面中，所述方法和組合物用于治療患有HD的人。如上所述，HD以常染色體顯性方式遺傳并由HTT基因中的CAG重復(fù)擴(kuò)展引起。青少年發(fā)病HD最經(jīng)常從父系方繼承。亨廷頓病-樣表型也與其它遺傳基因座相關(guān)，如HDL1、PRNP、HDL2、HDL3和HDL4。認(rèn)為其它遺傳基因座可修飾HD癥狀的表現(xiàn)，包括GRIN2A、GRIN2B、MSX1、GRIK2和APOE基因中的突變。rAAV組合物在一些方面，本發(fā)明提供包含任何本文所述的rAAV顆粒的組合物。通常，用于本發(fā)明的方法和系統(tǒng)的組合物包含有效量的rAAV顆粒，其包含編碼多肽和/或RNA的rAAV載體，任選地在藥學(xué)上可接受的賦形劑中。所述病毒顆粒包含AAV衣殼(例如AAV2或AAVrh8R衣殼)，其中與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被取代從而減少或去除rAAV顆粒與HSPG的結(jié)合。如本領(lǐng)域中熟知的，藥學(xué)上可接受的賦形劑是相對(duì)惰性的物質(zhì)，其促進(jìn)藥理學(xué)有效物質(zhì)的施用并可作為液體溶液或懸浮物、作為乳劑、或作為使用前適于溶解或懸浮于液體中的固體形式提供。例如，賦形劑可給予形式或稠度，或充當(dāng)稀釋劑。合適的賦形劑包括但不限于穩(wěn)定劑、潤濕劑和乳化劑、用于改變滲透性的鹽、包囊劑、pH緩沖物質(zhì)和緩沖液。所述賦形劑包括適于直接遞送至眼的任何藥劑，其可被施用而無過度的毒性。藥學(xué)上可接受的賦形劑包括但不限于山梨醇，多種TWEEN化合物中的任一種，和液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。藥學(xué)上可接受的鹽可包含在其中，例如，無機(jī)酸鹽如氫氯化物、氫溴化物、磷酸鹽、硫酸鹽等；和有機(jī)酸的鹽如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。藥學(xué)上可接受的賦形劑的全面討論可在REMINGTON’SPHARMACEUTICALSCIENCES(MackPub.Co.,N.J.1991)中獲得。通常，這些組合物經(jīng)配制用于通過視網(wǎng)膜下注射施用。因此，這些組合物可與藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體如鹽水、林格氏(Ringer’s)平衡鹽溶液(pH7.4)等組合。雖然并非必需的，所述組合物可任選地以適于施用精確量的單位劑量形式供給。視網(wǎng)膜下遞送rAAV的方法視網(wǎng)膜下遞送的方法是本領(lǐng)域已知的。例如參見WO2009/105690，其通過提述并入本文。簡單地，用于將rAAV顆粒(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)遞送至黃斑和凹的視網(wǎng)膜下的一般方法可通過如下簡單概要來說明。此實(shí)施例僅僅意欲說明所述方法的某些特征，而并非意在限制。通常，可將所述rAAV載體以眼內(nèi)(視網(wǎng)膜下)注射的組合物的形式在使用手術(shù)顯微鏡的直接觀察下遞送。在一些實(shí)施方案中，所述載體在rAAV顆粒中衣殼化，其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼，所述rAAV衣殼包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用(例如抑制或去除HSPG結(jié)合)的一個(gè)或多個(gè)位置處；和rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。此步驟可涉及玻璃體切割術(shù)，然后使用精細(xì)套管通過一個(gè)或多個(gè)小視網(wǎng)膜切口將rAAV載體懸浮物注射入視網(wǎng)膜下空間。簡言之，可以在適當(dāng)位置縫合輸注套管以通過在整個(gè)操作中輸注(例如，鹽水)維持正常的球體積。使用適當(dāng)孔尺寸的套管(例如20至27號(hào))進(jìn)行玻璃體切割，其中移出的玻璃體凝膠的所述體積通過輸注來自輸注套管的鹽水或其他等滲溶液替代。有利的進(jìn)行玻璃體切割術(shù)，是因?yàn)?1)去除它的皮質(zhì)(玻璃樣后膜)促進(jìn)通過所述套管的視網(wǎng)膜滲透；(2)其去除和用流體(例如鹽水)替換創(chuàng)造了空間以容納載體的眼內(nèi)注射，和(3)其的受控去除降低了視網(wǎng)膜撕裂和計(jì)劃外的視網(wǎng)膜脫落的可能性。在一些實(shí)施方案中，通過利用適當(dāng)孔徑(例如27-45號(hào))的套管將所述rAAV組合物直接注射入中央視網(wǎng)膜外的視網(wǎng)膜下空間，因而在視網(wǎng)膜下空間創(chuàng)建泡(bleb)。在其他實(shí)施方案中，在視網(wǎng)膜下注射rAAV組合物之前將小體積(例如約0.1至約0.5ml)的適當(dāng)?shù)牧黧w(如鹽水或林格氏溶液)視網(wǎng)膜下注射入中央視網(wǎng)膜外的視網(wǎng)膜下空間。此種初始的進(jìn)入視網(wǎng)膜下空間的注射建立了視網(wǎng)膜下空間內(nèi)的初始流體泡，引起在初始泡的位置處的局部視網(wǎng)膜脫落。此初始流體泡能夠促進(jìn)將rAAV組合物靶向遞送至視網(wǎng)膜下空間(通過在rAAV遞送前限定注射平面(planeofinjection)，并使可能的rAAV施用進(jìn)入脈絡(luò)膜和rAAV注射或回流入玻璃體腔的可能性最小化。在一些實(shí)施方案中，可以進(jìn)一步用流體注射該初始流體泡，所述流體包含一個(gè)或多個(gè)的rAAV組合物和/或一種或多種另外的治療劑，這通過將這些流體用相同或其他的細(xì)孔套管直接施用于初始流體泡來進(jìn)行。所述rAAV組合物和/或初始小體積流體的眼內(nèi)施用可使用附接于注射器的細(xì)孔套管(例如27-45號(hào))來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，此注射器的柱塞可由機(jī)械化的設(shè)備(如通過腳踏踏板的壓力)驅(qū)動(dòng)。所述細(xì)孔套管穿過鞏膜前進(jìn)，穿過玻璃體腔并根據(jù)被靶向的視網(wǎng)膜的區(qū)域(但在中央視網(wǎng)膜外)進(jìn)入視網(wǎng)膜處于每個(gè)受試者中預(yù)先確定的位點(diǎn)。在直接目測(cè)下，用自密封非膨脹性視網(wǎng)膜切開術(shù)將載體懸浮物機(jī)械注入感覺神經(jīng)性視網(wǎng)膜，引起局部的視網(wǎng)膜脫落。如上所述，可將所述rAAV組合物直接注射入創(chuàng)建中央視網(wǎng)膜外泡的視網(wǎng)膜下空間或者可將所述載體注射入中央視網(wǎng)膜外的初始泡，引起其膨脹(并使視網(wǎng)膜脫落的區(qū)域擴(kuò)展)。在一些實(shí)施方案中，注射rAAV組合物然后將另一流體注射入所述泡。不愿受理論束縛，視網(wǎng)膜下注射的速率和位置可導(dǎo)致局部化剪切力，其能夠損害黃斑、凹和/或下方的RPE細(xì)胞。所述視網(wǎng)膜下注射可以以這樣的速率進(jìn)行，所述速率使剪切力最小化或避免剪切力。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物在約15-17分鐘注射。在一些實(shí)施方案中，所述載體在約17-20分鐘注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物在約20-22分鐘注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約35至約65μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約35μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約40μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約45μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約50μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約55μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約60μl/分鐘的速率注射。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV組合物以約65μl/分鐘的速率注射。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，泡的注射的速率和時(shí)間可取決于：例如產(chǎn)生足夠的視網(wǎng)膜脫落以接近中央視網(wǎng)膜的細(xì)胞所需的泡的大小或rAAV組合物的體積、用于遞送所述rAAV組合物的套管的大小和安全地維持本發(fā)明的套管的位置的能力。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，注射至視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜下空間的組合物的體積是大于約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl、或1mL的任一項(xiàng)，或其之間的任何量。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于眼部(例如通過視網(wǎng)膜下和/或玻璃體內(nèi)施用)，所述病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，所述病毒顆粒還包含編碼異源核酸的載體。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109或50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任何。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于個(gè)體(例如人)的眼部(例如通過視網(wǎng)膜下和/或玻璃體內(nèi)施用)，所述病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，施用于所述個(gè)體的病毒顆粒的劑量為至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，施用于所述個(gè)體的病毒顆粒的劑量為約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)?？梢援a(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)(例如2、3或更多個(gè))泡。通常，由本發(fā)明的系統(tǒng)和方法產(chǎn)生泡的總體積不能超過眼睛的流體體積，例如在典型的人受試者中為約4ml。每個(gè)單獨(dú)泡的總體積可為至少約0.3ml，或至少約0.5ml，以促進(jìn)足夠尺寸的視網(wǎng)膜脫落以暴露中央視網(wǎng)膜的細(xì)胞類型并產(chǎn)生對(duì)于最佳操縱有足夠依賴性的泡。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)理解，在根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和方法產(chǎn)生泡時(shí)必須維持適當(dāng)?shù)难蹆?nèi)壓以避免對(duì)眼結(jié)構(gòu)的損壞。每個(gè)個(gè)體泡的大小可以是例如約0.5至約1.2ml，約0.8至約1.2ml，約0.9至約1.2ml，約0.9至約1.0ml，約1.0至約2.0ml，約1.0至約3.0ml。因此，在一個(gè)實(shí)例中，為了注射總共3ml的rAAV組合物懸浮液，可建立每個(gè)約1ml的3個(gè)泡。組合中所有泡的總體積可以是例如約0.5至約3.0ml，約0.8至約3.0ml，約0.9至約3.0ml，約1.0至約3.0ml，約0.5至約1.5ml，約0.5至約1.2ml，約0.9至約3.0ml，約0.9至約2.0ml，約0.9至約1.0ml。為了安全地和有效地轉(zhuǎn)導(dǎo)泡的原始位置的邊緣以外的靶視網(wǎng)膜(例如中央視網(wǎng)膜)區(qū)域，可操縱泡以將泡復(fù)位位于轉(zhuǎn)導(dǎo)的目標(biāo)區(qū)域。泡的操縱可通過泡的依賴性而發(fā)生，所述依賴性由泡的體積、含有泡的眼的復(fù)位、用含有一個(gè)或多個(gè)泡的眼睛對(duì)人的頭部的復(fù)位和/或通過流體空氣交換而產(chǎn)生。這與中央視網(wǎng)膜特別相關(guān)，因?yàn)榇藚^(qū)域通常通過視網(wǎng)膜下注射而抵抗剝離。在一些實(shí)施方案中，用流體-空氣交換來復(fù)位位泡；來自輸注套管的流體暫時(shí)由空氣置換，例如由空氣吹到視網(wǎng)膜的表面上。隨著空氣的體積從視網(wǎng)膜的表面置換玻璃體腔流體，玻璃體腔中的流體可流出套管。暫時(shí)缺乏來自玻璃體腔流體的壓力使泡移動(dòng)并受重力作用吸引至眼的從屬部分。通過適當(dāng)定位眼球，視網(wǎng)膜下rAAV組合物的泡被操縱以影響到鄰近區(qū)域(例如黃斑和/或凹)。在一些情況中，所述泡的質(zhì)量足以導(dǎo)致其受重力作用吸引，即使沒有使用流體-空氣交換?？赏ㄟ^改變受試者的頭部位置以進(jìn)一步促進(jìn)泡移動(dòng)至所需位置從而促進(jìn)所述泡受重力作用吸引至眼的所需位置。一旦實(shí)現(xiàn)泡的所需配置，流體返回到玻璃體腔。該流體是適當(dāng)?shù)牧黧w，例如新鮮的鹽水。通常，視網(wǎng)膜下rAAV組合物可留在原位而無需對(duì)視網(wǎng)膜切開進(jìn)行視網(wǎng)膜填充(retinotomy)且無需眼內(nèi)填充(intraoculartamponade)，而視網(wǎng)膜會(huì)自發(fā)在約48小時(shí)內(nèi)重新附接。通過安全而有效地用包含治療性多肽或RNA序列的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)眼細(xì)胞(例如黃斑和/或凹的RPE和/或感光細(xì)胞)，本發(fā)明的方法可用于治療個(gè)體；例如患有眼部病癥的人，其中轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞產(chǎn)生足以治療所述眼部病癥的量的治療性多肽或RNA序列。在一些實(shí)施方案中，眼細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)可通過使用包含AAV衣殼蛋白的rAAV顆粒(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)來改進(jìn)，所述AAV衣殼蛋白包含氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代，所述氨基酸與HSPG相互作用(例如抑制或去除與HSPG的結(jié)合)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒顯示出與HSPG的降低的結(jié)合；例如降低大于約10％、25％、50％、75％、100％或其間的任何數(shù)目。在一些實(shí)施方案中，rAAV與HSPG的結(jié)合降低約5％至約100％，約10％至約50％，約10％至約30％，約25％至約75％，約25％至約50％或約30％至約50％。取決于治療的目的，施用有效量的rAAV(在一些實(shí)施方案中為顆粒的形式)。例如當(dāng)?shù)桶俜直鹊霓D(zhuǎn)導(dǎo)能實(shí)現(xiàn)所需的治療效果時(shí)，則治療的目的通常在于滿足或超過此轉(zhuǎn)導(dǎo)水平。在一些情況中，此轉(zhuǎn)導(dǎo)水平可通過僅轉(zhuǎn)導(dǎo)約1至5％的靶細(xì)胞來達(dá)到，在一些實(shí)施方案中為所需的組織類型的至少約20％的細(xì)胞，在一些實(shí)施方案中為至少約50％，在一些實(shí)施方案中為至少約80％，在一些實(shí)施方案中為至少約95％，在一些實(shí)施方案中為所需的組織類型的至少約99％的細(xì)胞。如上文所討論的，rAAV衣殼的與HSPG相互作用的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代改進(jìn)rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)。作為指導(dǎo)，每次注射施用的顆粒的數(shù)目通常為約1x106至約1x1014顆粒，約1x107至1x1013顆粒、約1x109至1x1012顆?；蚣s1x1011顆粒。所述rAAV組合物可通過在同一步驟過程中或間隔數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年的一次或多次視網(wǎng)膜下注射來施用。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)載體可用于治療人。在一些實(shí)施方案中，對(duì)視網(wǎng)膜施用有效量的rAAV病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)施用位點(diǎn)或其附近的感光細(xì)胞，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)了多于約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或100％的任一項(xiàng)的感光細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)了約5％至約100％、約10％至約50％、約10％至約30％、約25％至約75％、約25％至約50％、或約30％至約50％的感光細(xì)胞。鑒定由AAV病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)的感光細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域已知的，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代；例如免疫組化或使用標(biāo)記物，如增強(qiáng)的綠色熒光蛋白可用于檢測(cè)病毒顆粒的轉(zhuǎn)導(dǎo)，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的rAAV病毒顆粒施用于哺乳動(dòng)物的視網(wǎng)膜下(例如視網(wǎng)膜下空間)用于治療患眼部病癥的個(gè)體(例如患眼部病癥的人)，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射至視網(wǎng)膜下中的一個(gè)或多個(gè)位置以允許在感光細(xì)胞中表達(dá)異源核酸。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入視網(wǎng)膜下的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十個(gè)或多于十個(gè)位置的任一項(xiàng)中。在一些實(shí)施方案中，將所述rAAV病毒顆粒同時(shí)或序貫施用于多于一個(gè)位置，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在一些實(shí)施方案中，rAAV病毒顆粒的多次注射間隔不多于一小時(shí)、兩小時(shí)、三小時(shí)、四小時(shí)、五小時(shí)、六小時(shí)、九小時(shí)、十二小時(shí)或24小時(shí)。玻璃體內(nèi)注射的方法用于玻璃體內(nèi)注射的一般方法可通過如下簡要概述來說明。此實(shí)例僅意在說明本方法的一些特征，而不意在進(jìn)行限制。用于玻璃體內(nèi)注射的步驟是本領(lǐng)域已知的(參見例如Peyman,G.A等.(2009)Retina29(7):875-912和Fagan,X.J和Al-Qureshi,S.(2013)Clin.Experiment.Ophthalmol.41(5):500-7)。簡言之，玻璃體內(nèi)注射的受試者可準(zhǔn)備進(jìn)行瞳孔擴(kuò)張、眼的消毒和施用麻醉的步驟。本領(lǐng)域已知的任何合適的散瞳劑均可用于瞳孔擴(kuò)張?？稍谥委熐白C實(shí)充分散瞳。滅菌可通過消毒的眼治療例如含碘溶液如聚維酮碘()實(shí)現(xiàn)。還可用類似的方案來清潔眼瞼、睫毛和附近的任何其他組織(例如皮膚)?？梢匀魏芜m當(dāng)?shù)臐舛葋硎褂萌魏魏线m的麻醉劑，如利多卡因或丙美卡因。麻醉劑可通過本領(lǐng)域已知的任何方法施用，包括但不限于局部滴劑(drop)、凝膠(gel)或膠狀物(jelly)，和結(jié)膜下施用麻醉劑。在注射前，可將滅菌的眼瞼窺器用于清除(clear)所述區(qū)域的睫毛。注射的位點(diǎn)可用注射器標(biāo)記。注射的位點(diǎn)可基于患者的晶狀體(lens)來選擇。例如，注射位點(diǎn)可距離人工晶狀體眼或無晶狀體眼患者中的(角膜)緣(limbus)3-3.5mm，和距有晶狀體眼患者中的(角膜)緣3.5-4mm。所述患者可看向注射位點(diǎn)相反的方向。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于眼部(例如通過視網(wǎng)膜下和/或玻璃體內(nèi)施用)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代且包含編碼異源核酸的載體，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109、或50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于個(gè)體(例如人)的眼(例如經(jīng)由視網(wǎng)膜下和/或玻璃體內(nèi)施用)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，施用于所述個(gè)體的病毒顆粒的劑量為至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，施用于所述個(gè)體的病毒顆粒的劑量為約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)。在注射過程中，可將針垂直插入鞏膜并指向眼的中央。可插入針使得尖端結(jié)束于玻璃體而非視網(wǎng)膜下空間。可使用本領(lǐng)域已知用于注射的任何合適的體積。注射后，可用滅菌劑如抗生素處理眼。還可沖洗眼以去除過量的滅菌劑。視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)和測(cè)定rAAV遞送的有效性的手段已知視網(wǎng)膜含有多層。視網(wǎng)膜中的細(xì)胞層可包括內(nèi)界膜、神經(jīng)纖維、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、內(nèi)網(wǎng)、內(nèi)核、外網(wǎng)、外核、外界膜、感光細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮層。最接近玻璃體的層是內(nèi)界膜。此層可含有Müller細(xì)胞，其為一類神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)纖維層可含有來自形成視神經(jīng)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層可包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和無長突細(xì)胞。內(nèi)網(wǎng)層可含有神經(jīng)節(jié)和無長突細(xì)胞的樹突之間的突觸和雙極細(xì)胞的軸突。內(nèi)核層可含有無長突、雙極和水平細(xì)胞的細(xì)胞核。外網(wǎng)層可含有水平細(xì)胞樹突和感光細(xì)胞突起物(projections)之間的突觸。外核層可含有感光細(xì)胞體。外部或外界膜可包括Müller細(xì)胞頂突過程中和這些過程與感光細(xì)胞內(nèi)段之間的細(xì)胞聯(lián)系，如黏附連接和橋粒。感光細(xì)胞層也稱為視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞和Jacob膜層，其可含有感光細(xì)胞，包括視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞。視網(wǎng)膜層距玻璃體最遠(yuǎn)的是視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)，其可包括含有色素顆粒的六角形的上皮細(xì)胞的層。還已知視網(wǎng)膜含有許多不同的細(xì)胞類型。視網(wǎng)膜神經(jīng)元可包括感光細(xì)胞、雙極細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、無長突細(xì)胞和水平細(xì)胞。感光細(xì)胞是對(duì)光敏感的。它們可感受光并通過將信號(hào)通過雙極細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞傳遞至視神經(jīng)來響應(yīng)。感光細(xì)胞可包括視桿細(xì)胞(其一般在低光條件下感受光)和視錐細(xì)胞(其一般感受顏色和更明亮的光感)。雙極細(xì)胞可接收來自感光細(xì)胞和無長突細(xì)胞或神經(jīng)節(jié)細(xì)胞上的突觸的輸入。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可接收來自無長突細(xì)胞或水平細(xì)胞的信息，而且它們的軸突形成視神經(jīng)。水平細(xì)胞可整合來自多個(gè)感光細(xì)胞的輸入并有助于調(diào)節(jié)至光水平。無長突細(xì)胞是中間神經(jīng)元，其幫助調(diào)節(jié)雙極細(xì)胞并將輸入提供至神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。神經(jīng)膠質(zhì)視網(wǎng)膜的細(xì)胞可包括Müller細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。通過視網(wǎng)膜下或玻璃體內(nèi)注射的rAAV遞送效果可通過如本文所述的幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測(cè)。例如，使用本發(fā)明的方法在受試者中處理后，可通過一個(gè)或多個(gè)臨床參數(shù)(包括本文所述的那些)來評(píng)估受試者的例如在疾病狀態(tài)的一個(gè)或多個(gè)跡象或癥狀的改善和/或穩(wěn)定和/或進(jìn)展延遲。所述測(cè)試的實(shí)例是本領(lǐng)域已知的，且包括客觀和主觀(例如受試者報(bào)告的)量度。例如，為了測(cè)量治療對(duì)受試者的視覺功能的有效性，可以評(píng)價(jià)如下的一項(xiàng)或多項(xiàng)：受試者的主觀視覺質(zhì)量或改進(jìn)的中央視覺功能(例如受試者流暢閱讀和識(shí)別面孔的能力的改進(jìn))，受試者的視覺活動(dòng)性(例如通行迷宮所需的時(shí)間減少)，視敏度/視力(例如，受試者的logMAR評(píng)分的改進(jìn))，微視野檢查(例如受試者的dB評(píng)分的改進(jìn))，暗適應(yīng)視野檢查(例如受試者的dB評(píng)分的改進(jìn))，精細(xì)矩陣映像(例如受試者的dB評(píng)分的改進(jìn))，Goldmann視野檢查(例如減少的盲點(diǎn)區(qū)域(即盲區(qū))的大小和解析較小目標(biāo)的能力的改進(jìn))，閃爍的敏感性(例如Hertz的改進(jìn))，自發(fā)熒光，和電生理學(xué)測(cè)量(例如ERG的改進(jìn))。在一些實(shí)施方案中，通過受試者的視覺活動(dòng)性測(cè)量視覺功能。在一些實(shí)施方案中，通過受試者的視敏度/視力測(cè)量視覺功能。在一些實(shí)施方案中，通過微視野檢查測(cè)量視覺功能。在一些實(shí)施方案中，通過暗適應(yīng)視野檢查測(cè)量視覺功能。在一些實(shí)施方案中，通過ERG測(cè)量視覺功能。在一些實(shí)施方案中，通過受試者的主觀視覺質(zhì)量測(cè)量視覺功能。在導(dǎo)致進(jìn)展的退化性視覺功能的疾病的情況下，在早期治療受試者不僅可導(dǎo)致減慢或停止疾病進(jìn)展，它也可以改善或防止由于后天弱視導(dǎo)致的視覺功能損失。弱視可為兩類。在非人靈長類動(dòng)物和小貓的研究中，它們從出生直到幾個(gè)月齡保持在完全黑暗中，所述動(dòng)物即使后續(xù)暴露于光也成為功能上不可逆的失明，盡管有由視網(wǎng)膜發(fā)送的功能信號(hào)。此失明的發(fā)生是因?yàn)樯窠?jīng)連接和對(duì)皮層的“教育”由于刺激停止而從出生開始就在發(fā)育上停止。這個(gè)功能是否能恢復(fù)是未知的。在視網(wǎng)膜退化疾病的情況下，正常的視覺皮層回路最初是“學(xué)習(xí)的”或發(fā)育上適當(dāng)?shù)?，直至退化產(chǎn)生的顯著功能障礙的點(diǎn)。在功能障礙的眼的信號(hào)傳導(dǎo)中視覺刺激的損失產(chǎn)生“獲得的”或“習(xí)得的”功能障礙(“后天弱視”)，導(dǎo)致大腦無法解釋信號(hào)，或“使用”該眼。在“后天弱視”的這些情況中未知的是，作為弱視眼的基因治療的結(jié)果，改進(jìn)的來自視網(wǎng)膜的信號(hào)傳導(dǎo)除了使疾病狀態(tài)穩(wěn)定或減慢其進(jìn)展之外，是否可導(dǎo)致更多正常功能的獲得。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于30歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于20歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于18歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于15歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于14歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于13歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于12歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于10歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于8歲。在一些實(shí)施方案中，治療的人小于6歲。在一些眼部病癥中，存在“哺育細(xì)胞”現(xiàn)象，其中一類細(xì)胞的功能的改進(jìn)可改進(jìn)另一類細(xì)胞的功能。例如，通過本發(fā)明的rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)中央視網(wǎng)膜的RPE可以改進(jìn)視桿細(xì)胞的功能，而視桿細(xì)胞功能的改進(jìn)又導(dǎo)致視錐細(xì)胞功能的改進(jìn)。因此，對(duì)一個(gè)細(xì)胞類型的治療可導(dǎo)致另一個(gè)細(xì)胞類型中功能的改進(jìn)。特定的rAAV載體和組合物的選擇取決于許多不同的因素，包括但不限于個(gè)體人的病史和被治療的病況及個(gè)體特征。這些特征的評(píng)價(jià)和適當(dāng)?shù)闹委煼桨傅脑O(shè)計(jì)最終是處方醫(yī)師的責(zé)任。在一些實(shí)施方案中，待治療的人患有遺傳的眼部病癥但還未顯示出臨床的跡象或癥狀。在一些實(shí)施方案中，待治療的人患有眼部病癥。在一些實(shí)施方案中，待治療的人顯示出眼部病癥的一個(gè)或多個(gè)跡象或癥狀。可通過本發(fā)明的系統(tǒng)和方法治療的眼部病癥的非限制性實(shí)例包括：常染色體隱性重度早發(fā)型視網(wǎng)膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性、X連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、Usher氏綜合征、年齡相關(guān)性黃斑變性、萎縮性年齡相關(guān)性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜脫落、眼內(nèi)炎、青光眼、后葡萄膜炎、無脈絡(luò)膜癥(choroideremia)，和Leber遺傳性視神經(jīng)病變。本發(fā)明的組合物(例如用于視網(wǎng)膜下或玻璃體內(nèi)遞送AAV病毒顆粒，所述AAV病毒顆粒包含AAV衣殼，所述AAV衣殼具有氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代，所述氨基酸與HSPG相互作用或位于對(duì)應(yīng)于氨基酸484、487、532、585或588的一個(gè)或多個(gè)位置)可單獨(dú)或與用于治療眼部病癥的一種或多種另外的治療劑組合使用。序貫施用之間的間隔可以至少(或可替換地少于)數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)或數(shù)天為單位。在一些實(shí)施方案中，一種或多種另外的治療劑可施用于視網(wǎng)膜下或玻璃體(例如通過玻璃體內(nèi)施用)。另外的治療劑的非限制性實(shí)例包括多肽神經(jīng)營養(yǎng)因子(例如GDNF、CNTF、BDNF、FGF2、PEDF、EPO)，多肽抗血管生成因子(例如sFlt、血管他汀、內(nèi)皮他汀)，抗血管生成核酸(例如siRNA、miRNA、核酶)，例如針對(duì)VEGF的抗血管生成核酸，抗血管生成嗎啉代(morpholinos)，例如針對(duì)VEGF的抗血管生成嗎啉代，抗血管生成抗體和/或抗體片段(例如Fab片段)，例如針對(duì)VEGF的抗血管生成抗體和/或抗體片段。用于CNS遞送的方法在一些實(shí)施方案中，施用有效量的本發(fā)明的重組病毒顆粒(例如AAV2、AAVrh8R顆粒等)轉(zhuǎn)導(dǎo)施用位點(diǎn)處或附近的神經(jīng)元(例如紋狀體神經(jīng)元，如棘神經(jīng)元)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖與相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)了多于約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或100％任一項(xiàng)的神經(jīng)元。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)了約5％至約100％，約10％至約50％，約10％至約30％，約25％至約75％，約25％至約50％，或約30％至約50％的神經(jīng)元。鑒定通過表達(dá)異源核酸的重組病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)的神經(jīng)元的方法是本領(lǐng)域已知的；例如，可使用免疫組化、RNA檢測(cè)(例如qPCR、Northern印跡、RNA-seq、原位雜交等)或使用共表達(dá)的標(biāo)記物如增強(qiáng)的綠色熒光蛋白來檢測(cè)表達(dá)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的本發(fā)明的重組病毒顆粒施用于哺乳動(dòng)物的腦，用于治療哺乳動(dòng)物(例如人)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射至腦的一個(gè)或多個(gè)位置以允許本發(fā)明的異源核酸在至少神經(jīng)元中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入腦中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或多于十個(gè)位置中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入紋狀體。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入背側(cè)紋狀體。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入殼核(putamen)。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入尾狀核(caudatenucleus)。在一些實(shí)施方案中，將所述組合物注射入殼核并注射入尾狀核。在一些實(shí)施方案中，將所述重組病毒顆粒通過立體定位注射施用于個(gè)體的CNS(例如紋狀體)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，將所述重組病毒顆粒通過對(duì)流增強(qiáng)遞送(CED)施用于個(gè)體的CNS(例如CED至紋狀體)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。所述rAAV顆粒的施用可通過多種途徑進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所述施用包括直接脊髓注射和/或腦內(nèi)施用。在一些實(shí)施方案中，所述施用處于選自如下的部位：大腦、髓質(zhì)、腦橋、小腦、顱內(nèi)腔、圍繞大腦的腦膜、硬腦膜、蛛網(wǎng)膜、軟腦膜、圍繞腦的蛛網(wǎng)膜下腔的腦脊液(CSF)、小腦的深部小腦核、大腦的腦室系統(tǒng)、蛛網(wǎng)膜下腔、紋狀體、皮層、隔膜、丘腦、下丘腦和腦的實(shí)質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述施用包括腦室內(nèi)注射入至少一個(gè)大腦側(cè)腦室。在一些實(shí)施方案中，所述施用包括鞘內(nèi)注射到頸、胸和/或腰部中。在一些實(shí)施方案中，所述施用包括紋狀體內(nèi)注射。在一些實(shí)施方案中，所述施用包括丘腦內(nèi)注射。適于這些施用途徑的多種技術(shù)和設(shè)備在本文中描述，例如，CED和/或立體定位注射。在一些實(shí)施方案中，將所述重組病毒顆粒施用于腦的一個(gè)半球，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，將所述重組病毒顆粒施用于腦的兩個(gè)半球。在一些實(shí)施方案中，將所述重組病毒顆粒同時(shí)或順序施用于多于一個(gè)位置，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，重組病毒顆粒的多次注射間隔不多于一小時(shí)、兩小時(shí)、三小時(shí)、四小時(shí)、五小時(shí)、六小時(shí)、九小時(shí)、十二小時(shí)或24小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療患有CNS的病癥的人的方法，其通過施用有效量的本發(fā)明的藥物組合物來治療CNS的病癥，所述藥物組合物包含重組病毒顆粒，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含一個(gè)或多個(gè)藥學(xué)上可接受的賦形劑。通常，可遞送約1μL至約1mL的本發(fā)明的組合物(例如約100μL至約500μL的組合物)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，注射至紋狀體的重組病毒顆粒的體積是約或多于約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl或1mL中的任一項(xiàng)，或其間的任何量，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，將第一體積的重組病毒顆粒注射入腦的第一區(qū)，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，且將第二體積的變體rAAV顆粒注射入腦的第二區(qū)。例如在一些實(shí)施方案中，將第一體積的變體rAAV顆粒注射入尾狀核，且將第二體積的所述組合物注射入殼核。在一些實(shí)施方案中，將1X體積的變體rAAV顆粒注射入尾狀核，且將1.5X、2X、2.5X、3X、3.5X或4X體積的所述組合物注射入殼核，其中X是約或多于約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl或1mL中的任一項(xiàng)，或其間任何量的體積。本發(fā)明的組合物(例如本發(fā)明的重組病毒顆粒，其包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處)可單獨(dú)或與用于治療CNS的病癥(例如HD)的一種或多種額外治療劑組合使用。順序施用之間的間隔可以至少(或可替換地少于)數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)或數(shù)天為單位。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于CNS，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代且包含編碼異源核酸的載體，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)為至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109、或50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述組合物的病毒效價(jià)是至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于個(gè)體(例如人)的CNS，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，施用于個(gè)體的病毒顆粒的劑量是至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，施用于個(gè)體的病毒顆粒的劑量是約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用于個(gè)體(例如人)的CNS，所述重組病毒顆粒包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，施用于個(gè)體的病毒顆粒的總量是至少約1×109至約1×1014基因組拷貝中的任一項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，施用于個(gè)體的病毒顆粒的總量是約1×109至約1×1014基因組拷貝中的任一項(xiàng)。V.表達(dá)構(gòu)建體在一些方面，本發(fā)明提供通過視網(wǎng)膜下遞送包含異源核酸的rAAV載體從而將所述異源核酸遞送至眼部的方法，且其中所述rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2衣殼、rAAVrh8R衣殼等)中衣殼化，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在一些方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體的CNS的病癥的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個(gè)體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述異源核酸(例如轉(zhuǎn)基因)可操作地連接至啟動(dòng)子。例示性的啟動(dòng)子包括但不限于巨細(xì)胞病毒(CMV)立即早期啟動(dòng)子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動(dòng)子，猿猴病毒40(SV40)啟動(dòng)子和CK6啟動(dòng)子，甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白啟動(dòng)子(TTR)，TK啟動(dòng)子，四環(huán)素響應(yīng)性啟動(dòng)子(TRE)，HBV啟動(dòng)子，hAAT啟動(dòng)子，LSP啟動(dòng)子，嵌合肝特異性啟動(dòng)子(LSP)，E2F啟動(dòng)子，端粒酶(hTERT)啟動(dòng)子；巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子/雞β-肌動(dòng)蛋白/兔β球蛋白啟動(dòng)子(CAG啟動(dòng)子；Niwa等，Gene,1991,108(2):193-9)和延伸因子1-α啟動(dòng)子(EF1-α)啟動(dòng)子(Kim等，Gene,1990,91(2):217-23和Guo等，GeneTher.,1996,3(9):802-10)。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子包含人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動(dòng)子或與雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子連接的巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子。所述啟動(dòng)子可以是組成型、誘導(dǎo)型或阻抑型啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子能夠在眼的細(xì)胞中表達(dá)所述異源核酸。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子能夠在感光細(xì)胞或RPE中表達(dá)所述異源核酸。在具體實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子；例如人RK啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，所述啟動(dòng)子是視蛋白啟動(dòng)子；例如人視蛋白啟動(dòng)子或小鼠視蛋白啟動(dòng)子。本發(fā)明涵蓋重組病毒基因組用于引入一個(gè)或多個(gè)編碼治療性多肽和/或核酸的核酸序列的用途，用于包裝入包含與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代的rAAV病毒顆粒。所述重組病毒基因組可包括建立所述治療性多肽和/或核酸的表達(dá)的任何元件，例如啟動(dòng)子、ITR、核糖體結(jié)合元件、終止子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記物、內(nèi)含子、多聚A信號(hào)(polyAsignal)和/或復(fù)制起點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV載體是自身互補(bǔ)的rAAV載體，例如包含重組自身互補(bǔ)的(術(shù)語“自身互補(bǔ)的”在本文中可互換使用)基因組的rAAV載體。具有自身互補(bǔ)的基因組的AAV病毒顆粒和使用自身互補(bǔ)的AAV基因組的方法描述于美國專利號(hào)6,596,535；7,125,717；7,465,583；7,785,888；7,790,154；7,846,729；8,093,054；和8,361,457；以及WangZ.等，(2003)GeneTher10:2105-2111中，其各自通過提述以其整體并入本文。包含自身互補(bǔ)的基因組的rAAV憑借其部分互補(bǔ)序列(例如轉(zhuǎn)基因的互補(bǔ)的編碼和非編碼鏈)會(huì)迅速地形成雙鏈DNA分子。在一些實(shí)施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補(bǔ)體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內(nèi)堿基對(duì)。在一些實(shí)施方案中，所述第一異源核酸序列和所述第二異源核酸序列經(jīng)由突變的ITR(例如右側(cè)(right)ITR)連接。在一些實(shí)施方案中，所述ITR包含多核苷酸序列5’-CACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCG–3’(SEQIDNO:8)。所述突變的ITR包含D區(qū)的缺失并包含末端解析序列。結(jié)果，在AAV病毒基因組的復(fù)制中，所述rep蛋白質(zhì)不會(huì)在突變的ITR處切割病毒基因組，并由此，可以5'至3'順序?qū)缦碌闹亟M病毒基因組包裝在病毒衣殼中：AAVITR、包含調(diào)節(jié)序列的第一異源多核苷酸序列、突變的AAVITR、與第一異源多核苷酸方向相反的第二異源多核苷酸和第三AAVITR。VI.病毒顆粒和產(chǎn)生病毒顆粒的方法rAAV病毒顆粒在一些方面，本發(fā)明提供通過視網(wǎng)膜下遞送包含異源核酸的rAAV載體而將所述異源核酸遞送至眼部的方法，且其中所述rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等)中衣殼化，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。在一些方面，本發(fā)明提供涉及將rAAV顆粒遞送至個(gè)體的CNS的方法和試劑盒。在一些實(shí)施方案中，所述rAAV顆粒包含rAAV載體。在一些實(shí)施方案中，所述病毒顆粒是包含核酸的重組AAV顆粒，所述核酸包含側(cè)翼有一個(gè)或兩個(gè)AAV末端反向重復(fù)(ITR)的異源轉(zhuǎn)基因。所述核酸在AAV顆粒中衣殼化。所述AAV顆粒還包含衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述核酸包含目的編碼序列(例如異源轉(zhuǎn)基因)，其以轉(zhuǎn)錄的方向可操作地連接組分，調(diào)控序列(包括轉(zhuǎn)錄起始和終止序列)，由此形成表達(dá)盒。所述表達(dá)盒在5'和3'端側(cè)翼有至少一個(gè)功能性AAVITR序列?！肮δ苄訟AVITR序列”是指ITR序列發(fā)揮所意欲的功能，用于AAV病毒體的拯救、復(fù)制和包裝。參見Davidson等，PNAS,2000,97(7)3428-32；Passini等，J.Virol.,2003,77(12):7034-40；和Pechan等，GeneTher.,2009,16:10-16，其全部通過提述以其整體并入本文。為了實(shí)施本發(fā)明的一些方面，所述重組載體至少包含對(duì)于衣殼化和用于rAAV感染的物理結(jié)構(gòu)所必需的全部AAV序列。用于在本發(fā)明中使用的載體的AAVITR不需要具有野生型核苷酸序列(例如，如Kotin,Hum.GeneTher.,1994,5:793-801中所述)，并可通過核苷酸的插入、缺失或取代而改變，或者所述AAVITR可源自數(shù)種AAV血清型的任一項(xiàng)。目前已知AAV的多于40個(gè)血清型，而且繼續(xù)在對(duì)新的血清型和現(xiàn)存的血清型的變體進(jìn)行鑒定。參見Gao等，PNAS,2002,99(18):11854-6；Gao等，PNAS,2003,100(10):6081-6；和Bossis等，J.Virol.,2003,77(12):6799-810。任何AAV血清型的使用都視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，rAAV載體是源自AAV血清型的載體，其包括而不限于，AAVITR為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAVITR等。在一些實(shí)施方案中，所述AAV中的核酸包含AAVITR的ITR，其為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAV等。在一些實(shí)施方案中，所述AAV中的核酸包含AAV2ITR。如上文所述，所述rAAV顆粒可進(jìn)一步包含含有rAAV衣殼蛋白的衣殼，所述rAAV衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，載體可包括填充核酸。在一些實(shí)施方案中，所述填充核酸可編碼綠色熒光蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述填充核酸可位于啟動(dòng)子和編碼所述RNAi的核酸之間。不同的AAV血清型用于優(yōu)化特定靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)或用于靶向特定靶組織(例如CNS組織)內(nèi)特定的細(xì)胞類型。rAAV顆粒可包含相同血清型或混合的血清型的病毒蛋白質(zhì)和病毒核酸。例如在一些實(shí)施方案中，rAAV顆?？砂景l(fā)明的AAV2衣殼蛋白和至少一個(gè)AAV2ITR，或其可包含AAV2衣殼蛋白和至少一個(gè)AAV1ITR。用于產(chǎn)生rAAV顆粒的AAV血清型的任何組合在本文中提供，如同各組合已明確地?cái)⑹鲇诒疚闹心菢印Ｔ谝恍?shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的AAV2衣殼的rAAV顆粒。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的AAVrh8R衣殼的rAAV顆粒。AAV顆粒的產(chǎn)生本領(lǐng)域已知許多方法用于生產(chǎn)rAAV載體，包括轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定的細(xì)胞系的生產(chǎn)，和感染性雜交病毒生產(chǎn)系統(tǒng)，其包括腺病毒-AAV雜交體、皰疹病毒-AAV雜交體(Conway,JE等，(1997)J.Virology71(11):8780-8789)和桿狀病毒-AAV雜交體。用于產(chǎn)生rAAV病毒顆粒的rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)物都需要：1)合適的宿主細(xì)胞，包括例如源自人的細(xì)胞系如HeLa細(xì)胞、A549或293細(xì)胞，或源自昆蟲的細(xì)胞系如SF-9(對(duì)于桿狀病毒生產(chǎn)系統(tǒng)的情況而言)；2)合適的輔助病毒功能，其由野生型或突變體腺病毒(如溫度敏感的腺病毒)、皰疹病毒、桿狀病毒或提供輔助功能的質(zhì)粒構(gòu)建體提供；3)AAVrep和cap基因和基因產(chǎn)物；4)轉(zhuǎn)基因(如治療性轉(zhuǎn)基因)，其側(cè)翼有至少一個(gè)AAVITR序列；和5)合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)基組分，以支持rAAV生產(chǎn)。本領(lǐng)域中已知的合適培養(yǎng)基可用于產(chǎn)生rAAV載體。這些培養(yǎng)基包括而不限于由HycloneLaboratories和JRH生產(chǎn)的培養(yǎng)基，包括改良的Eagle培養(yǎng)基(MEM)，Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，定制的配制物如美國專利No.6,566,118中所述的那些，和如美國專利No.6,723,551中所述的SF-900IISFM培養(yǎng)基，其各自通過提述以其整體并入本文，特別是關(guān)于用于產(chǎn)生重組AAV載體的定制的培養(yǎng)基配制物。所述rAAV顆粒能夠使用本領(lǐng)域中已知的方法來產(chǎn)生。參見例如美國專利No.6,566,118；6,989,264和6,995,006。在本發(fā)明的實(shí)施中，用于產(chǎn)生rAAV顆粒的宿主細(xì)胞包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、微生物和酵母。宿主細(xì)胞也可以是包裝細(xì)胞，其中所述AAVrep和cap基因被穩(wěn)定地保持在宿主細(xì)胞或生產(chǎn)者細(xì)胞中，其中所述AAV載體基因組被穩(wěn)定地保持。例示性的包裝和生產(chǎn)者細(xì)胞源自293、A549或HeLa細(xì)胞。使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)純化和配制AAV載體。在一些實(shí)施方案中，rAAV顆?？赏ㄟ^三重轉(zhuǎn)染方法來生產(chǎn)，如示例性三重轉(zhuǎn)染方法在下文提供。簡言之，可將含有rep基因和衣殼基因的質(zhì)粒以及輔助腺病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(例如使用磷酸鈣法)入細(xì)胞系(例如HEK-293細(xì)胞)中，并可收集和任選地純化病毒。在一些實(shí)施方案中，rAAV顆?？赏ㄟ^生產(chǎn)者細(xì)胞系方法產(chǎn)生，如下文提供的示例性的生產(chǎn)者細(xì)胞系方法(另見(Martin等，(2013)HumanGeneTherapyMethods24:253-269中引用的)。簡言之，細(xì)胞系(例如HeLa細(xì)胞系)可用含有rep基因、衣殼基因和啟動(dòng)子-轉(zhuǎn)基因序列的質(zhì)粒穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染?？珊Y選細(xì)胞系以選擇引導(dǎo)克隆用于rAAV生產(chǎn)，然后可將其擴(kuò)展到生產(chǎn)生物反應(yīng)器并用作為輔助者的腺病毒(例如野生型腺病毒)來感染以啟動(dòng)rAAV生產(chǎn)。隨后可收獲病毒，可以將腺病毒滅活(例如通過加熱)和/或去除，且可純化所述rAAV顆粒。在一些方面，提供了用于產(chǎn)生如本文公開的任何rAAV顆粒的方法，其包括：(a)在產(chǎn)生rAAV顆粒的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞包含(i)一個(gè)或多個(gè)AAV包裝基因，其中每個(gè)AAV包裝基因編碼AAV復(fù)制和/或衣殼化蛋白；(ii)rAAV原-載體，其包含編碼如本文所述的治療性多肽和/或核酸的核酸，所述核酸側(cè)翼有至少一個(gè)AAVITR，和(iii)AAV輔助功能；和(b)回收由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的rAAV顆粒。在一些實(shí)施方案中，所述至少一個(gè)AAVITR是選自下組的AAVITR：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAV等。在一些實(shí)施方案中，所述衣殼化蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處。在一些實(shí)施方案中，所述衣殼化蛋白是AAV2衣殼化蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述衣殼化蛋白是AAVrh8R衣殼化蛋白。本發(fā)明的合適的rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)基可以0.5％-20％(v/v或w/v)的水平補(bǔ)充血清或血清來源的重組蛋白質(zhì)。或是如本領(lǐng)域已知的，rAAV載體可在無血清條件下產(chǎn)生，其也可稱為無動(dòng)物來源產(chǎn)品的培養(yǎng)基。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可理解，經(jīng)設(shè)計(jì)以支持rAAV載體產(chǎn)生的商用或定制培養(yǎng)基也可以補(bǔ)充有本領(lǐng)域已知的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)組分，包括但不限于葡萄糖、維生素、氨基酸和或生長因子，以增加生產(chǎn)培養(yǎng)物中rAAV的效價(jià)(titer)。rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)物可以在適于所使用的特定宿主細(xì)胞的多種條件(在寬的溫度范圍，進(jìn)行不同的時(shí)間長度等)下生長。如本領(lǐng)域已知的，rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)包括附接依賴性培養(yǎng)，其可在合適的附接依賴性容器如，例如，滾瓶、中空纖維濾器、微載體和填充床或流化床生物反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)。rAAV載體生產(chǎn)培養(yǎng)物還可包括適應(yīng)懸浮液的宿主細(xì)胞如HeLa細(xì)胞、293和SF-9細(xì)胞，其可以多種方式，包括例如旋轉(zhuǎn)瓶、攪拌罐生物反應(yīng)器和一次性系統(tǒng)如Wave袋系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明的rAAV載體顆?？蓮膔AAV生產(chǎn)培養(yǎng)物通過裂解所述生產(chǎn)培養(yǎng)物的宿主細(xì)胞或通過從生產(chǎn)培養(yǎng)物收獲用過的培養(yǎng)基來收獲，只要將細(xì)胞在本領(lǐng)域中已知的條件下培養(yǎng)以引起rAAV顆粒從完整細(xì)胞釋放入培養(yǎng)基，如更充分地于美國專利No.6,566,118中所描述的)。裂解細(xì)胞的合適方法也是本領(lǐng)域中已知的且包括例如多個(gè)凍/融循環(huán)、聲處理、微流化，和用化學(xué)品(如洗滌劑和/或蛋白酶)處理。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，純化所述rAAV顆粒。如本文所用的術(shù)語“純化”包括制備缺少了至少一些其它組分的rAAV顆粒，所述其它組分還可能存在于天然存在的或由其起始制備的rAAV顆粒中。因此，例如，分離的rAAV顆粒可使用純化技術(shù)從來源混合物(如培養(yǎng)裂解物或生產(chǎn)培養(yǎng)物上清液)將其富集來制備。富集可以多種方式測(cè)量，如，例如通過存在于溶液中的脫氧核酶抗性顆粒(DRP)或基因組拷貝(gc)的比例，或通過感染性來測(cè)量，或其可相對(duì)于來源混合物中存在的第二、潛在的干擾物質(zhì)而測(cè)量，所述干擾物質(zhì)如污染物，包括生產(chǎn)培養(yǎng)污染物或過程中的污染物，包括輔助病毒，培養(yǎng)基組分等。在一些實(shí)施方案中，將所述rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)收獲物澄清以除去宿主細(xì)胞碎片。在一些實(shí)施方案中，生產(chǎn)培養(yǎng)收獲物通過一系列的深度過濾器(包括，例如，等級(jí)(grade)DOHCMilliporeMillistak+HCPod過濾器、等級(jí)A1HCMilliporeMillistak+HCPod過濾器，和0.2μm過濾器OpticapXL1OMilliporeExpressSHC親水膜過濾器)通過過濾澄清。澄清也可以通過多種本領(lǐng)域已知的其它標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，如離心或通過本領(lǐng)域中已知的0.2μm或更大孔尺寸的任何醋酸纖維素濾膜過濾。在一些實(shí)施方案中，將所述rAAV生產(chǎn)培養(yǎng)收獲物進(jìn)一步用處理以消化所述生產(chǎn)培養(yǎng)物中存在任何高分子量DNA。在一些實(shí)施方案中，所述消化在本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行，包括例如終濃度為1-2.5單位/ml的在環(huán)境至37℃的溫度進(jìn)行30分鐘至數(shù)小時(shí)的時(shí)段?？墒褂靡粋€(gè)或多個(gè)如下純化步驟來分離或純化rAAV顆粒：平衡離心；穿過(flow-through)陰離子交換過濾；用于濃縮所述rAAV顆粒的切向流過濾(TFF)；通過磷灰石色譜進(jìn)行的rAAV捕獲；輔助病毒的熱滅活；通過疏水相互作用色譜的rAAV捕獲；通過大小排阻色譜(SEC)的緩沖液交換；納米過濾；和通過陰離子交換色譜、陽離子交換色譜或親和色譜的rAAV捕獲。這些步驟可以單獨(dú)、以多種組合，或以不同的順序使用。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括以如下所述的順序的所有步驟。純化rAAV顆粒的方法見于，例如，Xiao等，(1998)JournalofVirology72:2224-2232；美國專利號(hào)6,989,264和8,137,948；和WO2010/148143中。本申請(qǐng)還提供了包含rAAV顆粒和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，所述rAAV顆粒包含編碼治療性多肽和/或治療性核酸的異源核酸，其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)取代。所述藥物組合物可適于本文所述的任何施用方式；例如經(jīng)通過視網(wǎng)膜下施用。在一些實(shí)施方案中，包含本文所述的rAAV和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物適于施用于人。此類載體是本領(lǐng)域熟知的(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences，第15版，第1035-1038和1570-1580頁)。在一些實(shí)施方案中，包含本申請(qǐng)所述的rAAV和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物適于眼部注射。所述藥學(xué)上可接受的載體可以是無菌液體，如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來源的那些，如花生油、大豆油、礦物油等。鹽水溶液和含水右旋糖、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用于可注射溶液。所述藥物組合物可進(jìn)一步包含另外的成分，例如防腐劑、緩沖液、等滲劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑、非離子型潤濕或澄清劑，增粘劑等。本文所述的藥物組合物可以包裝于單個(gè)單位劑量或多劑量形式中。所述組合物通常配制為無菌和基本上等滲的溶液。VII.系統(tǒng)和試劑盒如本文所述的rAAV組合物可包含于經(jīng)設(shè)計(jì)在本文所述的本發(fā)明的方法之一中使用的系統(tǒng)之內(nèi)。視網(wǎng)膜下遞送在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于將載體視網(wǎng)膜下遞送至個(gè)體的眼部的系統(tǒng)，其包含a)包含有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，且ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個(gè)AAV末端重復(fù)；和b)用于視網(wǎng)膜遞送所述rAAV的裝置。通常，所述系統(tǒng)包含細(xì)孔套管(其中所述套管為27至45號(hào))、一個(gè)或多個(gè)注射器(例如1、2、3、4或更多)和適用于本發(fā)明的方法的一種或多種流體(例如1、2、3、4或更多)。所述細(xì)孔套管適于將載體懸浮物和/或待注射的其他流體視網(wǎng)膜下注射入視網(wǎng)膜下空間。在一些實(shí)施方案中，所述套管為27至45號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)孔套管為35-41號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)孔套管為40或41號(hào)。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)孔套管為41-號(hào)。所述套管可以是任何合適的套管類型，例如，套管或套管。所述注射器可以是任何合適的注射器，條件是它能夠連接于用于遞送流體的套管。在一些實(shí)施方案中，所述注射器是系統(tǒng)注射器。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)具有一個(gè)注射器。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)具有兩個(gè)注射器。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)具有三個(gè)注射器。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)具有四個(gè)或更多個(gè)注射器。所述系統(tǒng)可進(jìn)一步包含自動(dòng)化的注射泵，其可通過例如踏板啟動(dòng)。適用于本發(fā)明的方法的流體包括本申請(qǐng)所述的那些，例如各自包含有效量的本文所述的一個(gè)或多個(gè)載體的一種或多種流體，用于產(chǎn)生起始泡的一種或多種流體(例如鹽水或其他適當(dāng)?shù)牧黧w)，和包含一個(gè)或多個(gè)治療劑的一種或多種流體。適用于在本發(fā)明的方法中使用的流體包括本申請(qǐng)所述的那些，例如各包含有效量的本文所述的一個(gè)或多個(gè)載體的一種或多種流體，用于產(chǎn)生起始泡的一種或多種流體(例如鹽水或其他適當(dāng)?shù)牧黧w)，和包含一個(gè)或多個(gè)治療劑的一種或多種流體。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約0.9ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約1.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約1.5ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約2.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8至約3.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8至約2.5ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8至約2.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8至約1.5ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大于約0.8至約1.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約3.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約2.5ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約2.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約1.5ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約1.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約1.0至約3.0ml。在一些實(shí)施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約1.0至約2.0ml。用于產(chǎn)生起始泡的流體可以是例如約0.1至約0.5ml。在一些實(shí)施方案中，系統(tǒng)中所有流體的總體積是約0.5至約3.0ml。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)包含單一流體(例如包含有效量的載體的流體)。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)包含2種流體。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)包含3種流體。在一些實(shí)施方案中，所述系統(tǒng)包含4種或更多種流體。本發(fā)明的系統(tǒng)可進(jìn)一步包裝入試劑盒中，其中所述試劑盒可進(jìn)一步包含使用說明。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包含用于視網(wǎng)膜下遞送rAAV顆粒的組合物的裝置。在一些實(shí)施方案中，所述使用說明包括根據(jù)本申請(qǐng)所述方法之一的說明。在一些實(shí)施方案中，所述使用說明包括用于視網(wǎng)膜下遞送rAAV顆粒的說明，所述rAAV顆粒包含具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的衣殼，所述氨基酸取代改變、降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結(jié)合。CNS遞送本發(fā)明提供用于將異源核酸遞送至個(gè)體的CNS的試劑盒，其包含含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。本文進(jìn)一步提供用于治療個(gè)體中的CNS病癥的試劑盒，其包含含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處，和(b)rAAV載體，其包含用于治療CNS病癥的異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。所述試劑盒可包含本發(fā)明的任何rAAV顆?；騬AAV顆粒組合物。例如，所述試劑盒可包括具有rAAV衣殼的rAAV顆粒，所述rAAV衣殼包含含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述氨基酸取代位于與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用的一個(gè)或多個(gè)位置處(例如降低所述rAAV顆粒與硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代，如位于R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號(hào)基于AAV2的VP1)；和rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個(gè)AAV反向末端重復(fù)。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包含用于所述rAAV顆粒的組合物的CNS遞送的裝置。用于CNS遞送(例如用于遞送包含rAAV顆粒的組合物)的裝置是本領(lǐng)域已知的并可利用泵(例如滲透泵和/或輸液泵，如下所述)和注射裝置(例如導(dǎo)管、套管等)。任選地，成像技術(shù)可用于指導(dǎo)注射裝置和/或監(jiān)測(cè)輸注物(例如包含rAAV顆粒的組合物)的遞送。CNS遞送可包括通過立體定位注射或通過對(duì)流增強(qiáng)遞送(CED)的遞送?？蓪⑺鲎⑸溲b置插入受試者中的CNS組織。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠確定用于將注射裝置定位于靶CNS組織中的合適的坐標(biāo)。在一些實(shí)施方案中，定位通過例如由受試者的腦的CT和/或MRI成像獲得的解剖圖譜來完成，以將注射裝置引導(dǎo)至靶CNS組織。在一些實(shí)施方案中，可進(jìn)行遞送的術(shù)中磁共振成像(iMRI)和/或?qū)崟r(shí)成像。在一些實(shí)施方案中，該裝置用于通過本發(fā)明的方法將rAAV顆粒施用于哺乳動(dòng)物。本領(lǐng)域已知iMRI作為在手術(shù)過程中用于患者的基于MRI的成像的技術(shù)，這有助于證實(shí)成功的手術(shù)過程(例如將rAAV顆粒遞送至CNS)和降低損傷組織的其它部分的風(fēng)險(xiǎn)(對(duì)于進(jìn)一步的描述，參見例如Fiandaca等，(2009)Neuroimage47Suppl.2:T27-35)。在一些實(shí)施方案中，追蹤劑(例如MRI造影增強(qiáng)劑)可與輸注物(例如包括rAAV顆粒的組合物)共遞送以提供輸注物的組織分布的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。參見例如Fiandaca等,(2009)Neuroimage47Suppl.2:T27-35；U.S.PGPub2007/0259031；和美國專利No.7,922,999。使用追蹤劑可以通知遞送的停止。本領(lǐng)域已知的其他追蹤和成像手段技術(shù)也可用于追蹤輸注物分布。在一些實(shí)施方案中，rAAV顆粒可以通過標(biāo)準(zhǔn)的立體定位(術(shù)語“立體定向”在本文中可互換使用)注射使用本領(lǐng)域中已知的用于遞送rAAV顆粒的裝置和方法來施用。通常，這些方法可以使用注射裝置，用于將靶向遞送組織的區(qū)域轉(zhuǎn)換成一系列坐標(biāo)(例如沿側(cè)(latero-lateral)，背腹(dorso-ventral)，和尾(rostro-caudal)軸的參數(shù))的規(guī)劃系統(tǒng)，和根據(jù)計(jì)劃的坐標(biāo)用于立體定位的裝置(例如立體定位裝置，任選地包括探頭和用于將頭固定在與坐標(biāo)系對(duì)齊的位置的結(jié)構(gòu))。可用于MRI引導(dǎo)手術(shù)和/或立體定向注射的系統(tǒng)的非限制性例子是系統(tǒng)(MRIInterventions,Memphis,TN)。用于將rAAV顆粒遞送至CNS的另一個(gè)例示性和非限制性方法是對(duì)流增強(qiáng)遞送(CED)。如本文所用的，術(shù)語“對(duì)流增強(qiáng)遞送(CED)”可意指將治療劑通過輸注以這樣的速率遞送至CNS，在所述速率中靜水壓力導(dǎo)致對(duì)流分布。在一些實(shí)施方案中，輸注以大于0.5μL/分鐘的速率完成。然而，可使用任何合適的流速使得顱內(nèi)壓保持在合適的水平從而不會(huì)傷害腦組織。例如，可通過使用合適的導(dǎo)管或套管(例如分步設(shè)計(jì)無回流(step-designreflux-free)套管)通過將套管的尖端定位于至少靠近靶CNS組織(例如將尖端插入CNS組織)來完成CED。定位套管后，將其連接至泵，所述泵將治療劑經(jīng)由套管尖端遞送至靶CNS組織。可在輸注過程中保持來自套管尖端的壓力梯度。在一些實(shí)施方案中，可通過追蹤劑來監(jiān)測(cè)輸注，所述追蹤劑是可由成像方法如術(shù)中MRI(iMRI)或另外的實(shí)時(shí)MRI技術(shù)來檢測(cè)的。CED是基于在組織間流體的靜水壓力得到克服的壓力下將輸注物(例如含有rAAV顆粒的組合物)泵送入CNS。這使得所述輸注物與CNS血管周(perivasculature)接觸，其被用作泵以將所述輸注物通過對(duì)流來分布并增強(qiáng)其遞送的程度(參見例如Hadaczek等，(2006)Hum.GeneTher.17:291-302；Bankiewicz等，(2000)Exp.Neurol.164:2-14；Sanftner,LM等，(2005)Exp.Neurol.164:2-14；Forsayeth,JR等，(2006)Mol.Ther.14(4):571-577；美國專利No.6,953,575；美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2002/0141980；美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2007/0259031；和WO2010/088560)。在一些實(shí)施方案中，用于對(duì)流增強(qiáng)遞送的裝置包含滲透泵和/或輸液泵。滲透泵和/或輸液泵是商業(yè)上可得到的(例如獲取自Corp.,HamiltonCorp.,ALZAInc.于PaloAlto,CA)。泵系統(tǒng)可以是可植入的。示例性的泵系統(tǒng)可見于例如，美國專利No.7,351,239；7,341,577；6,042,579；5,735,815；和4,692,147中。用于CED的示例性裝置，包括抗回流和階梯式套管，可見于WO99/61066和WO2006/042090中，其在此通過提述以其整體并入。在一些實(shí)施方案中，用于對(duì)流增強(qiáng)遞送的裝置包含抗回流套管(例如無回流分步設(shè)計(jì)套管)。抗回流套管的進(jìn)一步描述和例示可見于例如Krauze等，MethodsEnzymol.465:349-362；U.S.PGPub2006/0135945；U.S.PGPub2007/0088295；和PCT/US08/64011中。在一些實(shí)施方案中，僅使用一個(gè)套管。在其他實(shí)施方案中，使用多于一個(gè)套管。在一些實(shí)施方案中，用于對(duì)流增強(qiáng)遞送的裝置包含與泵連接的抗回流套管，所述泵產(chǎn)生足夠的壓力以引起輸注物以受控的速率通過套管流至靶組織?？墒褂萌魏魏线m的流速使得顱內(nèi)壓保持在合適的水平從而不會(huì)傷害腦組織。在一些實(shí)施方案中，輸注物的滲透通過使用促進(jìn)劑而進(jìn)一步擴(kuò)大。促進(jìn)劑能夠進(jìn)一步促進(jìn)輸注物遞送至靶組織(例如CNS靶組織)。促進(jìn)劑的非限制性實(shí)例是低分子量肝素(參見例如美國專利No.7,922,999)。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包含用于所述rAAV顆粒的組合物的CNS遞送的說明書。本申請(qǐng)所述的試劑盒可進(jìn)一步包括由商業(yè)和用戶立場(chǎng)出發(fā)所需的其他材料，包括其他緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭、注射器和具有用于實(shí)施本文所述的任何方法的說明的包裝插頁。還可包括合適的包裝材料且其可以是本領(lǐng)域已知的任何包裝材料，例如小瓶(如密封小瓶)、容器、安瓿、瓶、罐、柔性包裝(例如密封的Mylar或塑料包)等。這些制造物品可進(jìn)一步加以滅菌和/或密封。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒包含使用本文所述的任何方法和/或rAAV顆粒治療本文所述的CNS的病癥的說明書。所述試劑盒可包括適于注射入個(gè)體的CNS的藥學(xué)上可接受的載體，和如下的一種或多種：緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭、注射器和具有用于實(shí)施注射入個(gè)體的CNS的說明的包裝說明書。賦形劑在涉及視網(wǎng)膜下和/或CNS遞送的一些具體實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步含有緩沖液和/或藥學(xué)上可接受的賦形劑。如本領(lǐng)域中熟知的，藥學(xué)上可接受的賦形劑是相對(duì)惰性的物質(zhì)，其促進(jìn)藥理學(xué)有效物質(zhì)的施用并可作為液體溶液或懸浮物、作為乳劑或作為適于在使用前溶解或懸浮于液體中的固體形式來提供。例如，賦形劑可給予形式或稠度(consistency)或充當(dāng)稀釋劑。合適的賦形劑包括但不限于穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、用于改變滲透壓的鹽、包囊劑、pH緩沖物質(zhì)和緩沖液。所述賦形劑包括任何適于直接遞送至眼的藥劑，其可被施用而無過度的毒性。藥學(xué)上可接受的賦形劑包括但不限于山梨糖醇、任何多種TWEEN化合物，和液體如水、鹽水、甘油和乙醇。藥學(xué)上可接受的鹽可包含于其中，例如無機(jī)酸鹽如氫氯化物、氫溴化物、磷酸鹽、硫酸鹽等；和有機(jī)酸的鹽如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。藥學(xué)上可接受的賦形劑的全面討論可在REMINGTON’SPHARMACEUTICALSCIENCES(MackPub.Co.,N.J.1991)中獲得。在涉及視網(wǎng)膜下和/或CNS遞送的一些實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的賦形劑可包括藥學(xué)上可接受的載劑。所述藥學(xué)上可接受的載劑可以是滅菌的液體，如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來源的那些，如花生油、大豆油、礦物油等。鹽水溶液和含水右旋糖、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用于可注射溶液。還可使用額外的成分，例如防腐劑、緩沖液、等滲劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑、非離子型潤濕或澄清劑，增粘劑等。本文所述的試劑盒可以單個(gè)單位劑量或多劑量形式包裝。所述試劑盒的內(nèi)容物通常配制為無菌和基本上等滲的溶液。實(shí)施例通過參考如下實(shí)施例可更加充分地理解本發(fā)明。然而，它們不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。可理解的是本申請(qǐng)所述的實(shí)施例和具體實(shí)施方案僅出于說明目的，而且在其啟示下的多種修飾或變化會(huì)被本領(lǐng)域的技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到并包括在本申請(qǐng)的精神和范圍以及所附權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。實(shí)施例1：HSPG結(jié)合所需的精氨酸殘基的突變?cè)谂囵B(yǎng)的細(xì)胞系中降低AAV2-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)AAV2基因治療載體目前用于眼適應(yīng)癥的臨床試驗(yàn)。這些載體可經(jīng)玻璃體內(nèi)施用途徑遞送，其在小鼠和非人靈長類中導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和Müller細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)，或是經(jīng)視網(wǎng)膜下施用途徑遞送，其靶向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和感光細(xì)胞。不同血清型的AAV使用不同的細(xì)胞表面受體和共受體用于感染。已知AAV2的初級(jí)細(xì)胞表面受體是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)(Summerford,C.和Samulski,R.J.(1998)J.Virol.72(2):1438-45)。理解AAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)視網(wǎng)膜的機(jī)制對(duì)于進(jìn)一步開發(fā)AAV基因治療載體是重要的。為了研究HSPG結(jié)合在視網(wǎng)膜的AAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用，用衣殼蛋白生成了AAV2載體，所述衣殼蛋白在已知用于HSPG結(jié)合所需的精氨酸殘基中攜帶突變(AAV2HBKO)。這些載體導(dǎo)致與野生型AAV2相比對(duì)293和HeLa細(xì)胞在培養(yǎng)物中顯著降低的轉(zhuǎn)導(dǎo)。令人驚訝地，視網(wǎng)膜下遞送至小鼠眼部的AAV2HBKO載體導(dǎo)致轉(zhuǎn)導(dǎo)與野生型AAV2相比的2-log增加。然而，當(dāng)玻璃體內(nèi)遞送AAV2HBKO載體時(shí)，沒有明顯的轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些結(jié)果指示在AAV2顆粒的視網(wǎng)膜下注射后，相對(duì)于玻璃體內(nèi)注射，HSPG結(jié)合所需的氨基酸中的突變對(duì)于轉(zhuǎn)導(dǎo)效率具有相反的作用。方法構(gòu)建AAV2精氨酸突變體質(zhì)粒使用QuikchangeLightning多重定點(diǎn)誘變?cè)噭┖?AgilentTechnologies)將所述AAV2rep/cap質(zhì)粒pIM45BD進(jìn)行突變。設(shè)計(jì)PCR突變引物以引入精氨酸585和588至丙氨酸的變化。通過測(cè)序證實(shí)陽性突變體。生成rAAV載體使用pIM45BD或pIM45BDR585A/R588Arep/cap質(zhì)粒和pAdHelper通過293細(xì)胞的三重轉(zhuǎn)染產(chǎn)生表達(dá)增強(qiáng)的綠色熒光蛋白(EGFP)或可溶的VEGF受體雜交體(sFLT02)的重組AAV載體。轉(zhuǎn)基因處于雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)或人視紫紅激酶啟動(dòng)子(RK)的控制下。體外轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)定法將293或HeLa細(xì)胞鋪板入24孔板(1-2x105個(gè)細(xì)胞/孔)。鋪板后24小時(shí)，以1x103vg/細(xì)胞(+)Ad5ts149感染細(xì)胞。感染后48小時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，所述測(cè)量通過EGFP熒光或通過ELISA以定量培養(yǎng)基中的sFLT02(通過R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA)來進(jìn)行。動(dòng)物購買由JacksonLaboratories(BarHarbor,ME)獲得的成年C57BL/6小鼠并維持在Genzyme的動(dòng)物飼養(yǎng)室(vivarium)中。在研究期間使所述動(dòng)物自由接觸食物和水。所有步驟在由動(dòng)物保護(hù)和利用委員會(huì)(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)批準(zhǔn)的規(guī)程下進(jìn)行。玻璃體內(nèi)注射使用經(jīng)由鼻錐(nosecone)遞送至動(dòng)物的運(yùn)載于800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導(dǎo)并保持麻木(torpor)。使用裝配有33號(hào)斜式針頭(beveledneedle)的Hamilton注射器(HamiltonCo.,Reno,NV)將一微升的測(cè)試物品注入玻璃狀液(vitreoushumor)。引導(dǎo)針頭在(角膜)緣(limbus)的大約2mm下通過鞏膜并小心地前進(jìn)至玻璃體腔以避免接觸晶狀體。將測(cè)試物品在1-2秒的時(shí)間遞送。注射后，將針頭保持在原位約五秒然后抽出。允許動(dòng)物從麻醉恢復(fù)然后回到它的籠。視網(wǎng)膜下注射局部施用托吡卡胺(Tropicamide)(Alcon,FortWorth,TX)誘導(dǎo)瞳孔散大和睫狀肌麻痹。使用經(jīng)鼻錐遞送至動(dòng)物的運(yùn)載于800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導(dǎo)并保持麻木。使用環(huán)頭鉗(ringtippedforceps)(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)固定眼，且使用30號(hào)針頭將試點(diǎn)切口置于(角膜)緣下大約2mm的鞏膜上。通過切口導(dǎo)入33號(hào)鈍尖針頭并向后進(jìn)針直到尖端穿透后視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層(posteriorneurosensoryretina)。將一微升的測(cè)試物品在1秒遞送。將針頭保持在原位約五秒然后抽出。允許動(dòng)物從麻醉恢復(fù)然后回到它的籠。EGFP的組織學(xué)使用落射熒光顯微鏡(epifluorescencemicroscope)在福爾馬林固定的石蠟包埋處理的眼上觀察到原始EGFP信號(hào)。結(jié)果如圖1中所描繪，已顯示五個(gè)衣殼殘基對(duì)于AAV2與HSPG的結(jié)合是關(guān)鍵的。構(gòu)建AAV2突變體，其攜帶這些殘基中的兩個(gè)氨基酸取代：R585A和R588A(編號(hào)基于VP1氨基酸序列)。此突變體稱為HBKO，測(cè)試其在培養(yǎng)物中轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的能力。使人細(xì)胞系在培養(yǎng)物中生長并用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)。為了測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，將兩種類型的AAV2顆粒的病毒基因組進(jìn)行修飾以包含使用遍在CBA啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)基因從而驅(qū)動(dòng)可溶性Flt(人VEGF受體1)表達(dá)。轉(zhuǎn)導(dǎo)后48小時(shí)，使用基于ELISA的免疫測(cè)定法定量產(chǎn)生的Flt的量來測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。圖2證明HBKO突變體顯示出在培養(yǎng)物中轉(zhuǎn)導(dǎo)人293細(xì)胞的能力大大降低。使用相等數(shù)目的AAV2顆粒和293細(xì)胞，所述HBKO突變體相比于野生型顯示轉(zhuǎn)導(dǎo)效率降低99.6％。為了在多種人細(xì)胞系中測(cè)量此效果，如上所述轉(zhuǎn)導(dǎo)了293和Hela細(xì)胞。對(duì)于這些測(cè)定法，修飾所述載體以從CBA啟動(dòng)子表達(dá)EGFP而不是Flt。圖3顯示野生型AAV2能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)兩種細(xì)胞系，如通過EGFP熒光所測(cè)量的。相比之下，HBKO突變體在兩種細(xì)胞系的轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有引人注目的降低。這些結(jié)果證實(shí)HBKO突變體在培養(yǎng)物中轉(zhuǎn)導(dǎo)人胚腎和宮頸癌細(xì)胞系的能力急劇降低。實(shí)施例2：玻璃體內(nèi)注射后對(duì)比視網(wǎng)膜下注射后，用于HSPG結(jié)合所需的精氨酸殘基的突變對(duì)于的AAV2-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)具有相反的作用在小鼠中測(cè)試了玻璃體內(nèi)和視網(wǎng)膜下注射后HBKO突變體AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)眼細(xì)胞的能力。圖4A和4B比較了玻璃體內(nèi)或視網(wǎng)膜下注射后野生型和HBKOAAV2顆粒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。對(duì)于這些實(shí)驗(yàn)，通過測(cè)量用攜帶轉(zhuǎn)基因的AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)后可溶性Flt(sFLT)的表達(dá)而測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，所述轉(zhuǎn)基因使用遍在CBA啟動(dòng)子以驅(qū)動(dòng)Flt的表達(dá)。使用玻璃體內(nèi)注射，HBKO突變體顯示出轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的能力大大降低(圖4A)。令人驚訝地，HBKO突變體顯示了在視網(wǎng)膜下注射后轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)(圖4B)。當(dāng)注射的AAV2載體基因組的量變化10倍(108和109vg，如標(biāo)記的)時(shí)，此增加可始終觀察到。這些結(jié)果與在培養(yǎng)的細(xì)胞系中和在玻璃體內(nèi)注射后觀察到的那些形成對(duì)比。這些數(shù)據(jù)指向HSPG結(jié)合能力在介導(dǎo)通過不同類型的眼內(nèi)注射轉(zhuǎn)導(dǎo)不同眼細(xì)胞類型和視網(wǎng)膜層中的重要性。為了使視網(wǎng)膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)可視化，使用攜帶由普遍CBA啟動(dòng)子表達(dá)EGFP的轉(zhuǎn)基因的野生型或HBKO突變體AAV2顆粒。如圖5中所示，野生型AAV2顆粒在玻璃體內(nèi)注射后能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)視網(wǎng)膜，如通過GFP熒光所證明的那樣。然而，AAV2HBKO突變體顆粒在玻璃體內(nèi)注射后未顯示出可檢測(cè)的GFP熒光。這些結(jié)果與圖4A中存在的相一致。圖6定量了視網(wǎng)膜下注射后野生型(AAV2CBA)和HBKO突變體(AAV2CBAHBKO)AAV2顆粒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。為了測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)，兩種AAV2顆粒具有載體基因組，其包含使用普遍CBA啟動(dòng)子表達(dá)Flt的轉(zhuǎn)基因。將兩種量的載體基因組用于注射，如圖6中指示。這些結(jié)果證實(shí)圖4B中所示的觀察結(jié)果，并證明令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，即突變用于HSPG結(jié)合所需的殘基增加了在視網(wǎng)膜下注射后AAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的能力。為了使轉(zhuǎn)導(dǎo)可視化，使用攜帶由普遍CBA啟動(dòng)子表達(dá)EGFP的轉(zhuǎn)基因的野生型或HBKO突變體AAV2顆粒。如圖7中所示，視網(wǎng)膜中的GFP熒光在用HBKO突變體AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)后與野生型相比得到增強(qiáng)。因?yàn)橐阎暰W(wǎng)膜下注射靶向具有感光細(xì)胞的細(xì)胞層，研究了HBKO突變體AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)感光細(xì)胞的能力。在眼中，已知視紫紅激酶(RK)啟動(dòng)子特異性地驅(qū)動(dòng)感光細(xì)胞如視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞中的表達(dá)(Khani,S.C.等Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.48(9):3954-61)。因此，生成了具有載體基因組的野生型和HBKO突變體AAV2顆粒，所述基因組攜帶使用RK啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Flt的表達(dá)的轉(zhuǎn)基因。如圖8所示，HBKO突變體AAV2顆粒在視網(wǎng)膜下注射后與野生型相比顯示出感光細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)的增強(qiáng)。此觀察結(jié)果在用10倍不同量的載體基因組(108和109vg，如標(biāo)記的)注射后始終觀察到。這些結(jié)果證明了令人驚訝的結(jié)果，即突變用于HSPG結(jié)合所需的殘基增強(qiáng)了視網(wǎng)膜下注射后AAV2顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的能力。這些殘基的突變代表了增強(qiáng)用于AAV2-介導(dǎo)的基因治療的感光細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的潛在方式。AAV是單鏈、無包膜的DNA病毒，其是細(xì)小病毒家族的成員。AAV的不同血清型包括AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6等顯示出不同的組織分布概貌。這些AAV衣殼的不同的組織向性使基于AAV的載體用于肝、骨骼肌、腦、視網(wǎng)膜、心和脊髓的體外和體內(nèi)的普遍的基因轉(zhuǎn)移應(yīng)用成為可能(Wu,Z.，等，(2006)MolecularTherapy,14:316-327)。病毒對(duì)宿主細(xì)胞的附接需要病毒衣殼與細(xì)胞受體分子的特異性相互作用。先前已顯示AAV2衣殼使用硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)、V5整聯(lián)蛋白和人成纖維細(xì)胞生長因子受體1作為初級(jí)和次級(jí)受體以介導(dǎo)基于AAV2的基因治療載體的細(xì)胞進(jìn)入(Summerford,C.和R.J.Samulski(1998)J.Virology,72:1438-1445；Summerford,C.等，(1999)Nat.Medicine,5:78-82；Qing,K.等，(1999)Nat.Medicine,5:71-77)。AAV2衣殼蛋白的突變分析已顯示一組堿性氨基酸，即精氨酸R484、R487、R585、R588和賴氨酸K532有助于AAV2載體的乙酰肝素結(jié)合和對(duì)細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)和體內(nèi)肝轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些氨基酸殘基中的突變導(dǎo)致基于AAV2的載體通過靜脈內(nèi)施用途徑的肝轉(zhuǎn)導(dǎo)大大降低和心及骨骼肌基因轉(zhuǎn)移的增加(Kern,A.等，(2003)J.Virology,77:11072-11081；Muller,O.J.等，(2006)CardiovascularResearch,70:70-78)。研究了這些堿性氨基酸對(duì)于AAV2載體通過載體施用的玻璃體內(nèi)途徑和視網(wǎng)膜下途徑兩者在視網(wǎng)膜中的轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。R585和R588的突變顯著地消除了HEK293細(xì)胞和Hela細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)(圖2和3)。DalkaraD等，((2009)MolecularTherapy,17:2096-2102)表明玻璃體內(nèi)遞送的AAV2載體由于與視網(wǎng)膜的內(nèi)界膜中富含的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的結(jié)合而未能穿透入外視網(wǎng)膜。如本實(shí)施例所示，在玻璃體內(nèi)遞送后，R585/R588突變的載體與野生型AAV2載體相比轉(zhuǎn)導(dǎo)內(nèi)視網(wǎng)膜的能力較差(圖4A和5)，這表明與HSPG的結(jié)合對(duì)于視網(wǎng)膜的玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)是重要的。視網(wǎng)膜下遞送基于AAV2的載體主要導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)轉(zhuǎn)導(dǎo)和一些感光細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)。令人驚訝地，發(fā)現(xiàn)R585/R588突變的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外視網(wǎng)膜為野生型AAV2載體的至少10倍(圖4B、6和7)。使用感光細(xì)胞特異性視紫紅激酶啟動(dòng)子(RK)，感光細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)以AAV2R585/R588突變體載體顯著增加(圖8)。這些基于AAV2衣殼上的堿性氨基酸殘基中的突變的載體會(huì)高度有益于外視網(wǎng)膜特別是感光細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)，用于治療多種視網(wǎng)膜病癥。實(shí)施例3：紋狀體內(nèi)AAV2HBKO載體遞送后普遍的GFP表達(dá)通過引入至AAV2衣殼的定點(diǎn)突變，生成了不能結(jié)合肝素的AAV2HBKO突變體載體。使用單一紋狀體內(nèi)注射在野生型小鼠和HD小鼠模型(YAC128)二者中評(píng)價(jià)了此HBKO載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)概貌。方法AAV2精氨酸突變體質(zhì)粒的構(gòu)建使用QuikchangeLightning多重定點(diǎn)突變?cè)噭┖?AgilentTechnologies)突變了AAV2rep/cap質(zhì)粒pIM45BD。設(shè)計(jì)PCR突變引物以在殘基585和588引入精氨酸至丙氨酸的變化。通過測(cè)序證實(shí)了陽性突變體。AAV載體的產(chǎn)生通過人胚腎癌瘤293細(xì)胞(HEK-293)的三重轉(zhuǎn)染(使用磷酸鈣)產(chǎn)生重組AAV載體，如先前所述(Xiao等(1998)J.Virol.72:2224-2232)。簡言之，使用了含有來自血清型2的rep基因和來自血清型1或2的衣殼基因的質(zhì)粒連同輔助腺病毒質(zhì)粒(Stratagene,PaloAlto,CA)。轉(zhuǎn)基因處于雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子的控制下。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)收集病毒并如先前所述進(jìn)行柱純化(Xiao等(1998)J.Virol.72:2224-2232)。動(dòng)物使用由Genzyme(建新)，賽諾菲公司(SanofiCompany)(衛(wèi)生和人類服務(wù)部(DepartmentofHealthandHumanServices),NIHPublication86-23)的動(dòng)物保護(hù)和利用委員會(huì)(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)批準(zhǔn)的規(guī)程進(jìn)行所有步驟。使用的小鼠包括YAC128小鼠(在純FVB/NJ背景上攜帶全長人突變體HTT轉(zhuǎn)基因及128CAG重復(fù)的酵母人工染色體)和野生型FVB/NJ同窩小鼠(Slow等(2003)Hum.Mol.Genet.12:1555-1567；VanRaamsdonk等(2005)Hum.Mol.Genet.14:3823-3835)。YAC128小鼠和FVB/NJ同窩小鼠二者從位于CharlesRiverLaboratories的Genzyme群落獲得。小鼠維持在12小時(shí)光/暗循環(huán)，食物和水可任取(adlibitum)。所述行為測(cè)試在動(dòng)物的光循環(huán)期間(在上午8時(shí)-下午4時(shí)的時(shí)間)進(jìn)行。所有實(shí)驗(yàn)的N-值示于下表2和3中。表2.用表達(dá)GFP的AAV顆粒處理的野生型小鼠(實(shí)驗(yàn)1)處理n-值(WT小鼠)劑量(DRPs)AAV2HBKO-CBA-GFP66x109AAV2-CBA-GFP66x109表3.用表達(dá)HttmiRNA和GFP的AAV顆粒處理的YAC128小鼠(實(shí)驗(yàn)2)處理n-值(YAC128小鼠)劑量(DRPs)AAV2HBKO-CBA-miRNA-Htt-GFP86x109AAV1-CBA-miRNA-Htt-GFP81.5x1010未處理的8N/A手術(shù)步驟用3％異氟醚將動(dòng)物麻醉并置于立體定位架。顱內(nèi)注射如先前所述進(jìn)行(Stanek等(2014)Hum.GeneTher.25:461-474))。簡言之，使用10μlHamilton注射器以0.5μl/分鐘的速率將3μl的重組病毒載體注入紋狀體(AP,+0.50；ML,±2.00；DV,-2.5從前囟和硬腦膜；門牙棒(incisorbar),0.0)。完成輸注后將針在原處保留1分鐘。手術(shù)前一小時(shí)和手術(shù)后24小時(shí)，對(duì)該小鼠經(jīng)皮下施用酮洛芬(ketoprofen)(5mg/kg)用于止痛。動(dòng)物灌注和組織收集用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)通過心臟灌注小鼠以除去所有血液。對(duì)于實(shí)驗(yàn)1，將腦沿冠狀面切割，后固定于4％多聚甲醛，然后是30％蔗糖。使用低溫恒溫器切割20-μm冠狀切片。對(duì)于實(shí)驗(yàn)2，沿中線矢狀切割腦，并將左半球進(jìn)行后固定于4％多聚甲醛然后是30％蔗糖，然后使用低溫恒溫器切片成20-μm切片。使用小鼠腦模具(matrix)(HarvardApparatus,Holliston,MA)將右半球(用于生化測(cè)定法)沿冠狀軸線切割，并使用3mm的活檢穿孔器解剖紋狀體和皮質(zhì)區(qū)。然后將腦組織在液氮中速凍并儲(chǔ)存在-80℃直至使用。定量實(shí)時(shí)PCR(TaqMan)通過定量實(shí)時(shí)RT-PCR測(cè)量RNA水平。紋狀體穿孔物用于所有RT-PCR分析。使用QIAGENRNeasyMini試劑盒提取總RNA，然后根據(jù)制造商的說明使用RT-PCRMasterMix試劑盒(AppliedBiosystems)反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增。進(jìn)行TaqMan定量RT-PCR反應(yīng)并在7500實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)(AppliedBiosystems)上進(jìn)行分析。HTTmRNA的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化至次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶1(HPRT1)mRNA水平。使用小鼠腦cDNA的5倍連續(xù)稀釋物生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)樣品一式兩份運(yùn)行。通過使用標(biāo)準(zhǔn)曲線或ΔΔCT方法并標(biāo)準(zhǔn)化至HPRT1mRNA水平來確定相對(duì)基因表達(dá)。對(duì)于人HTT的檢測(cè)，使用如下引物：5’CTCCGTCCGGTAGACATGCT3’和5’CCATTTTGAGGGTTCTGATTTCC3’。對(duì)于小鼠HTT的檢測(cè)，使用如下引物：5’TGCTACACCTGACAGCGAGTCT3’和5’ATCCCTTGCGGATCCTATCA3’。Western印跡通過Western印跡分析測(cè)量蛋白質(zhì)水平。皮質(zhì)穿孔物用于所有Western印跡分析。將組織(以T-Per裂解緩沖液(Pierce)中的50mg/ml的終濃度并含有完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche))勻漿。將勻漿物通過在4℃以10,000×g離心6分鐘澄清。通過使用BSA測(cè)定法(Pierce)測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。將二十至三十微克的勻漿物在3-8％NovexTris-乙酸凝膠上解析和然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。將膜用小鼠抗亨廷頓蛋白單克隆抗體(Mab2166；1:2,000稀釋，Millipore)和兔多克隆抗β-微管蛋白抗體(1:750稀釋，SantaCruzBiotechnology)探測(cè)。然后將膜與紅外第二抗體(1:20,000稀釋，Rockland)溫育，并使用Odyssey(LI-CORBiosciences)通過定量熒光使所述蛋白質(zhì)可視化。為了控制加載量差異，將Htt蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化至β微管蛋白并表示為未處理的或鹽水處理的動(dòng)物的百分比。分子量標(biāo)記物用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)的身份。免疫組化將冷凍腦切片用兔抗GFAP抗體染色以染色星形膠質(zhì)細(xì)胞(1:2,500；DAKO,Glostrup,Germany)，或用抗Iba1抗體染色以使小膠質(zhì)細(xì)胞(1:500；WAKOChemicalsUSA,Richmond,VA)可視化。所用的二級(jí)抗體是綴合有FITC或Cy3的驢抗物種特異性抗體。使用NikonEclipseE800熒光顯微鏡(Nikon,Melville,NY)使切片可視化。統(tǒng)計(jì)學(xué)將平均值用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM。對(duì)于使用兩組的研究，用Student’st-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。對(duì)于超過兩個(gè)組的比較，使用單因素方差分析(one-wayANOVA)，然后是Tukey多重比較事后檢驗(yàn)(PrismGraphPad)。將p<0.05視為統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差異。結(jié)果如上所述，在實(shí)驗(yàn)1中將AAV2-eGFP和AAV2HBKO-GFP載體注入野生型小鼠(表2)。注射后30天處死所有動(dòng)物。熒光顯微術(shù)揭示AAV2和AAV2HBKO載體二者驅(qū)動(dòng)GFP轉(zhuǎn)基因在轉(zhuǎn)導(dǎo)的神經(jīng)元中的表達(dá)(圖9A和9B)。GFP表達(dá)受限于AAV2的注射路徑(track)，其具有最小的超過注射部位的擴(kuò)展(圖9B)。然而，當(dāng)與傳統(tǒng)AAV2相比時(shí)，AAV2HBKO驅(qū)動(dòng)更穩(wěn)固而廣泛的GFP表達(dá)，具有在遠(yuǎn)超注射位點(diǎn)觀察到的表達(dá)(圖9A)。這些結(jié)果證明了使用AAV2HBKO載體遞送至CNS的轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)固而普遍的表達(dá)。實(shí)施例4：比較在紋狀體內(nèi)注射入YAC128小鼠腦后AAV2HBKO-和AAV1-介導(dǎo)的GFP表達(dá)如上所述，在實(shí)驗(yàn)2中將AAV2HBKO和AAV1血清型載體注入YAC128小鼠(表3)。這些載體驅(qū)動(dòng)靶向人HTT和GFP報(bào)告蛋白的人工miRNA的表達(dá)。AAV1和AAV2HBKO載體兩者在注射入紋狀體后30天顯示出穩(wěn)固的GFP分布(圖10A和10B)。然而，GFP表達(dá)的圖樣在兩種載體血清型之間似乎明顯不同。GFP的AAV1表達(dá)(圖10A)比AAV2HBKOGFP表達(dá)(圖10B)更不調(diào)和(patchy)且較不均一。載體轉(zhuǎn)導(dǎo)在AAV2HBKO腦中看起來僅是神經(jīng)元的，相比于AAV1血清型其轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(主要是星形膠質(zhì)細(xì)胞)兩者。這些結(jié)果證明當(dāng)與傳統(tǒng)AAV1相比時(shí)AAV2HBKO顯示出非常不同的表達(dá)和轉(zhuǎn)導(dǎo)概貌。實(shí)施例5：AAV2HBKO-miRNA-Htt注射入YAC128小鼠導(dǎo)致HTTmRNA的減少接下來，評(píng)估了AAV1和AAV2HBKO載體血清型在YAC128小鼠紋狀體中表達(dá)使HTT表達(dá)沉默的miRNA的能力。成年YAC128小鼠接受了雙側(cè)紋狀體內(nèi)注射AAV2/1-miRNA-Htt或AAV2HBKO-miRNA-Htt，并在處理后30天分析腦。在用AAV2/1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt注射的小鼠中突變體人HTTmRNA的紋狀體水平與未處理的對(duì)照相比顯著降低(圖11A)。皮質(zhì)腦穿孔物的Western印跡分析在兩個(gè)治療組中都顯示出趨向Htt降低的趨勢(shì)；然而，未處理的對(duì)照樣品中的變異性使得數(shù)據(jù)未到達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖11B)。這些結(jié)果證明了使用AAV1和AAV2HBKO載體通過RNAi進(jìn)行基因敲低的功效。實(shí)施例6：AAV2HBKO-miRNAHtt注射入YAC128小鼠不引起神經(jīng)性炎癥為確定AAV的注射是否帶來神經(jīng)性炎癥，在處理后30天檢查了神經(jīng)炎性標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP，星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物)和Iba1(小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物)的水平。在AAV2HKO處理后與未處理的腦相比，未觀察到Iba1水平的顯著增加(參考圖12A和12B)。然而AAV2/1處理確實(shí)導(dǎo)致Iba1水平在注射位點(diǎn)的增加(圖12C)，這之前已觀察到。在注射后30天任何處理的腦中與未處理的對(duì)照相比未觀察到GFAP水平的顯著增加(圖13A-13C)。這些結(jié)果說明，當(dāng)與AAV1血清型相比，AAV2HBKO能夠驅(qū)動(dòng)定向于人HTT的miRNA的表達(dá)并在缺乏小膠質(zhì)細(xì)胞活化的情況下產(chǎn)生HTT減少(reduction)。結(jié)論當(dāng)前AAV載體血清型在單一位點(diǎn)施用后顯示腦中有限的分布(例如，Christine,C.W.等(2009)Neurology73:1662-1669；Mandel,R.J.(2010)Curr.Opin.Mol.Ther.12:240-247)。如在本文中詳細(xì)討論的，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，具有與細(xì)胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的降低的結(jié)合的AAV載體的施用增強(qiáng)了CNS中的AAV轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些結(jié)果證明具有修飾的HSPG結(jié)合的AAV用于CNS基因治療的用途，其中廣泛的載體分布是期望的。而且，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)HSPG結(jié)合降低的AAV2載體呈現(xiàn)理想的安全概貌(因?yàn)樗鼈儍H靶向神經(jīng)元)，同時(shí)實(shí)現(xiàn)普遍而穩(wěn)固的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。因此所述載體可用于需要來自(腦)實(shí)質(zhì)內(nèi)遞送的普遍的神經(jīng)元轉(zhuǎn)導(dǎo)的CNS適應(yīng)癥。實(shí)施例7：AAVrh8R和AAVrh8R突變體載體的體外和視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)方法AAVrh8R精氨酸修飾的質(zhì)粒的構(gòu)建使用QuikchangeLightning多重定點(diǎn)誘變?cè)噭┖?AgilentTechnologies)突變了AAVrh8Rrep/cap質(zhì)粒。設(shè)計(jì)PCR誘變引物以引入丙氨酸586至精氨酸(AAVrh8R-A586R)或精氨酸533至丙氨酸(AAVrh8R-R533A)的變化。通過測(cè)序證實(shí)了陽性突變體。rAAV載體的生成使用pAAVrh8R、pAAVrh8R-A586R或pAAVrh8R-R533Arep/cap質(zhì)粒和pAdHelper通過293細(xì)胞的三重轉(zhuǎn)染產(chǎn)生了表達(dá)增強(qiáng)的綠色熒光蛋白(EGFP)或可溶的VEGF受體雜交體(sFLT02)的重組AAV載體。轉(zhuǎn)基因處于雞β-肌動(dòng)蛋白(CBA)啟動(dòng)子的控制下。體外轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)定法將HeLa、HeLaRC32或NS1細(xì)胞鋪板入24孔板(1-2x105個(gè)細(xì)胞/孔)。鋪板后24小時(shí)，以1x104vg/細(xì)胞-1x105vg/細(xì)胞(+)Ad5ts149感染細(xì)胞。感染后48小時(shí)通過EGFP熒光或通過ELISA以定量培養(yǎng)基中的sFLT02(R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA)來測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。動(dòng)物購買由JacksonLaboratories(BarHarbor,ME)獲得的成年C57BL/6小鼠并維持在動(dòng)物飼養(yǎng)室中。在研究期間使所述動(dòng)物自由接觸食物和水。所有步驟在由動(dòng)物保護(hù)和利用委員會(huì)批準(zhǔn)的規(guī)程下進(jìn)行。視網(wǎng)膜下注射局部施用托吡卡胺(Alcon,FortWorth,TX)誘導(dǎo)瞳孔散大和睫狀肌麻痹。使用經(jīng)由鼻錐遞送至動(dòng)物的800mL/分鐘的氧氣中運(yùn)載的3.5％異氟醚誘導(dǎo)并保持麻木。使用環(huán)頭鉗(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)固定眼，且使用30號(hào)針頭將試點(diǎn)切口置于(角膜)緣下大約2mm的鞏膜上。通過切口導(dǎo)入33號(hào)鈍尖針頭并向后進(jìn)針直到尖端穿透后視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層。將一微升的測(cè)試物品在1秒遞送。將針頭保持在原位約五秒然后抽出。允許動(dòng)物從麻醉恢復(fù)然后回到它的籠。視網(wǎng)膜裂解物中sFLT02的定量通過R&DSystems使用人可溶性VEGFR1ELISA試劑盒測(cè)量小鼠視網(wǎng)膜裂解物中的sFLT02。結(jié)果為了研究衣殼表面精氨酸殘基在視網(wǎng)膜的AAVrh8轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用，生成了具有衣殼蛋白的AAVrh8載體，所述衣殼蛋白攜帶有對(duì)應(yīng)于涉及HSPG結(jié)合的AAV2精氨酸的殘基中的突變。圖14比較了對(duì)于AAV2與HSPG的結(jié)合關(guān)鍵的五個(gè)衣殼殘基與AAVrh8R中的對(duì)應(yīng)殘基。如圖15中所示，構(gòu)建了兩個(gè)AAVrh8R突變體，其每一個(gè)攜帶這些殘基中的氨基酸取代：A586R和R533A(編號(hào)基于VP1氨基酸序列)。為了評(píng)估將精氨酸殘基添加至AAVrh8R衣殼對(duì)于體外轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，用AAVrh8R-sFLT02或在位置A586添加有精氨酸(AAVrh8RA586R)的修飾的AAVrh8R-A586R-sFLT02載體來感染HeLa細(xì)胞，二者均以1x104DRP/細(xì)胞進(jìn)行。感染后48小時(shí)，通過測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)基中的sFLT02而評(píng)估轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。AAVrh8R-A586R呈現(xiàn)出與未修飾的AAVrh8R相比數(shù)倍高的轉(zhuǎn)導(dǎo)(圖16A)。為了評(píng)價(jià)去除衣殼精氨酸對(duì)體外轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，以AAVrh8R或AAVrh8R-R533A載體(均以1x104DRP/細(xì)胞)感染HeLaRC32細(xì)胞。當(dāng)與AAVrh8R相比時(shí)，AAVrh8R-R533A具有顯著降低的轉(zhuǎn)導(dǎo)(圖16B)。使用EGFP表達(dá)作為轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的量度進(jìn)行了類似的實(shí)驗(yàn)。AAVrh8R-A586R-EGFP與AAVrh8R相比呈現(xiàn)基本上改進(jìn)的NS1細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)(將圖17B與圖17A相比)。反之，AAVrh8R-R533A-EGFP載體與AAVrh8R相比對(duì)于HeLa細(xì)胞具有降低的轉(zhuǎn)導(dǎo)(將圖17D與圖17C相比)。這些實(shí)驗(yàn)共同表明將精氨酸添加至AAVrh8R衣殼改進(jìn)AAVrh8R體外轉(zhuǎn)導(dǎo)，而從AAVrh8R衣殼去除精氨酸則削弱體外轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些結(jié)果證明AAVrh8R的體外轉(zhuǎn)導(dǎo)被衣殼上的精氨酸殘基強(qiáng)烈地影響。為了確定精氨酸對(duì)于AAVrh8R視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，以1x108DRP的由CBA啟動(dòng)子表達(dá)sFLT02的AAVrh8R、AAVrh8R-A586R或AAVrh8R-R533A注射C57Bl6小鼠。載體施用后30天將小鼠處死，并在視網(wǎng)膜裂解物中測(cè)量sFLT02。與AAVrh8R相比，小鼠視網(wǎng)膜的AAVrh8R-A586R轉(zhuǎn)導(dǎo)大幅降低，而且實(shí)際上與AAV2相當(dāng)，其在此相同的位置R585也具有精氨酸(圖18A)。與AAVrh8R相比，小鼠視網(wǎng)膜的AAVrh8R-R533A轉(zhuǎn)導(dǎo)得到改進(jìn)(圖18B)。這些數(shù)據(jù)凸顯衣殼精氨酸對(duì)于AAVrh8R的視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響并表明通過從AAVrh8R衣殼去除精氨酸改進(jìn)了視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些結(jié)果證明AAVrh8R的視網(wǎng)膜下轉(zhuǎn)導(dǎo)被衣殼上的精氨酸殘基強(qiáng)烈的影響。實(shí)施例8：通過在位置586處添加精氨酸改進(jìn)了AAVrh8R的玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)方法玻璃體內(nèi)注射使用經(jīng)鼻錐遞送至動(dòng)物的運(yùn)載于800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導(dǎo)并保持麻木。使用裝配有33號(hào)斜式針頭的Hamilton注射器(HamiltonCo.,Reno,NV)將一微升的測(cè)試物品注入玻璃狀液。引導(dǎo)針頭在(角膜)緣(limbus)下大約2mm通過鞏膜并小心地前進(jìn)至玻璃體腔以避免接觸晶狀體。將測(cè)試物品在1-2秒的時(shí)間遞送。注射后，將針頭保持在原位約五秒然后抽出。允許動(dòng)物從麻醉恢復(fù)然后回到它的籠。視網(wǎng)膜裂解物中sFLT02的定量使用R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA試劑盒測(cè)量了小鼠視網(wǎng)膜裂解物中的sFLT02。結(jié)果為了評(píng)價(jià)將精氨酸添加至AAV衣殼對(duì)于玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，用1x109DRP的AAV2、AAVrh8R或AAVrh8R-A586R注射C57Bl6小鼠，各自攜帶由CBA啟動(dòng)子表達(dá)sFLT02的構(gòu)建體。載體施用30天后將小鼠處死，并在視網(wǎng)膜裂解物中測(cè)量sFLT02。與AAVrh8R相比，小鼠視網(wǎng)膜的AAVrh8R-A586R轉(zhuǎn)導(dǎo)得到改進(jìn)，而且實(shí)際上與AAV2相當(dāng)，其在此相同的位置R585也具有精氨酸(圖19)。此數(shù)據(jù)指示可通過將精氨酸添加至AAV衣殼而改進(jìn)視網(wǎng)膜的玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)?；谶@些結(jié)果和AAV衣殼間的序列同源性(圖20)，由攜帶AAV1、AAV6、AAV8、AAV9和AAVrh10衣殼的AAV顆粒的視網(wǎng)膜的玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)可類似地改善視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)導(dǎo)。序列除另行說明外，所有多肽序列以N-末端至C-末端呈示。除另行說明外，所有核酸序列以5’至3’呈示。AAV2VP1氨基酸序列MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:1)AAV2VP1HBKO氨基酸序列MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQAGNAQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:2)AAV2VP2氨基酸序列MAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:3)AAV2VP2HBKO氨基酸序列MAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQAGNAQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:4)AAV2VP3氨基酸序列MATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:5)AAV2VP3HBKO氨基酸序列MATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQAGNAQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:6)AAV3VP1氨基酸序列MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:7)用于scAAV載體的突變ITRCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCG(SEQIDNO:8)AAVrh8RVP1氨基酸序列MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYD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