技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新型的化學(xué)化合物及其用于治療和制備的方法。特別地，本發(fā)明涉及某些經(jīng)取代的喹喔啉化合物，及其于抑制、調(diào)節(jié)及/或調(diào)制特定激酶和其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的用途。

現(xiàn)有技術(shù)

蛋白激酶(PKs)在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中扮演著重要的角色，其調(diào)控多種細(xì)胞功能，例如：細(xì)胞分化、增殖、遷移、存活和凋亡等。這類酶催化ATP的磷酸根轉(zhuǎn)移到基質(zhì)蛋白上的酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸的殘基。激酶的磷酸化和磷酸酶的去磷酸化反應(yīng)參與無(wú)數(shù)細(xì)胞過(guò)程，響應(yīng)不同的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或細(xì)胞外信號(hào)、細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)和細(xì)胞運(yùn)轉(zhuǎn)的活化或去活化。

異常PK活性已被證實(shí)與癌癥以及代謝、免疫和神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)。因此，蛋白激酶已成為治療人類疾病的具有吸引力的目標(biāo)。PK抑制劑，即阻斷PK活性的化合物，已開(kāi)發(fā)并廣泛應(yīng)用于臨床治療。雖然超過(guò)30種PK抑制劑已被批準(zhǔn)用于疾病的治療，例如癌癥治療，但仍然需要一種新的PK抑制劑來(lái)治療各種疾病或克服抗藥性。鑒別出可特異性抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞增殖的有效的小分子化合物，將有益于以調(diào)節(jié)PK活性來(lái)調(diào)節(jié)和調(diào)控對(duì)于導(dǎo)致癌癥過(guò)程所必需的不適當(dāng)細(xì)胞增殖、分化或代謝。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的具體實(shí)施方式基于出乎意料地發(fā)現(xiàn)某些喹喔啉化合物可以抑制蛋白激酶(例如B-RAF、B-RAF^V600E、C-Raf)的活性。這些性質(zhì)實(shí)現(xiàn)了將這些喹喔啉化合物用于治療蛋白激酶有關(guān)的疾病，包括癌癥。

在一方面，本發(fā)明的實(shí)施方式涉及式(I)所示的喹喔啉化合物

或其立體異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中L是NR⁸或O，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶及R⁷如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，式(I)的R¹選自由氫、鹵素、NR⁹R¹⁰、OR¹¹、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R⁹、R¹⁰、R¹¹、R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，式(I)的R²選自由氫、鹵素、硝基、CN、OR¹¹、COR¹²及NR¹³R¹⁴所構(gòu)成的組，限制條件為只有當(dāng)R¹是NR⁹R¹⁰時(shí)，R²才為氫或鹵素，其中R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³及R¹⁴獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，式(I)的R³選自由氫、鹵素、羥基、偶氮基、氰基、硝基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，限制條件為只有當(dāng)R¹是NR⁹R¹⁰時(shí)，R³才為氫或鹵素，其中R^a、R^b、R^c、R⁹及R¹⁰獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，式(I)的R⁴、R⁵及R⁶獨(dú)立地選自由氫、鹵素、羥基、氨基、CN、C₁-C₄烷基、烷氧基C₁-C₄烷氧基、二烷基氨基、C₁-C₄烷氧基及雜環(huán)基所構(gòu)成的組。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，式(I)的R⁷是C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基或芳基。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R⁸選自由氫、SO₂R¹⁵、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基及3元至6元雜環(huán)基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基及雜環(huán)基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R¹⁵、R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R⁹及R¹⁰獨(dú)立地選自由氫、COR¹⁵、SO₂R¹⁵、OR¹⁶、NR¹⁷R¹⁸、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，限制條件為只有當(dāng)R⁹及R¹⁰不為氫或C₁-C₄烷基時(shí)，R²及R³才獨(dú)立地選自氫或鹵素，其中R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

或者，R⁹及R¹⁰可以與它們所連接的氮原子共同形成3元至6元雜環(huán)基，其可任選地被鹵素、氧或C₁-C₃烷基取代。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹¹選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹²選自由氫、OR¹⁹、NR²⁰R²¹、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R¹⁹、R²⁰、R²¹、R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹³及R¹⁴獨(dú)立地選自由氫、COR¹⁵、SO₂R¹⁵、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R¹⁵、R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹⁵選自由C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹⁶選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹⁷及R¹⁸獨(dú)立地選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，其中R^a、R^b、R^c及R^d獨(dú)立地如下文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R¹⁹選自由氫、C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，R²⁰及R²¹獨(dú)立地選自由氫、C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，各R^a獨(dú)立地是氫或C₁-C₄烷基。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，各R^b及R^c獨(dú)立地選自由氫、SO₂R⁷及C₁-C₄烷基所構(gòu)成的組，其中該C₁-C₄烷基可任選地被鹵素取代，其中R⁷如上文中所定義。

根據(jù)上述實(shí)施方式中的任一者，各R^d獨(dú)立地選自由鹵素、氧基、C₁-C₄烷基及C₁-C₄烷氧基所構(gòu)成的組，其中該C₁-C₄烷基及C₁-C₄烷氧基可任選地被鹵素取代。

本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式涉及選自由以下所構(gòu)成的組的化合物：N1-3-[(3-{2,6-二氟-3-[(丙基磺?；?氨基]苯胺基}-6-喹喔啉基)氨基]-2,4-二氟苯基-1-丙烷磺酰胺，N1-(3-{[3-(2,6-二氟苯胺基)-6-喹喔啉基]氨基}-2,4-二氟苯基)-1-丙烷磺酰胺，N1-{3-[(5-氨基-3-甲氧基-6-喹喔啉基)氨基]-2,4-二氟苯基}-1-丙烷磺酰胺，N1-{2,4-二氟-3-[(3-甲氧基-5-硝基-6-喹喔啉基)氨基]苯基}-1-丙烷磺酰胺，N1-{2,4-二氟-3-[(3-甲氧基-5-硝基-6-喹喔啉基)氨基]苯基}-3-氟-1-丙烷磺酰胺，N1-(2,4-二氟-3-{[3-(2-嗎啉代乙氧基)-5-硝基-6-喹喔啉基]氨基}苯基)-1-丙烷磺酰胺，N1-(2,4-二氟-3-[3-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基-6-喹喔啉基]氨基苯基)-1-丙烷磺酰胺，N1-(7-{2,6-二氟-3-[(丙基磺?；?氨基]苯胺基}-2-喹喔啉基)-1-環(huán)丙烷羧酰胺，N1-[3-({3-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-5-硝基-6-喹喔啉基}氨基)-2,4-二氟苯基]-1-丙烷磺酰胺，N1-{3-[(5-氰基-3-甲氧基-6-喹喔啉基)氨基]-2,4-二氟苯基}-1-丙烷磺酰胺，N1-(2,4-二氟-3-{[3-(2-氟苯胺基)-6-喹喔啉基]氨基}苯基)-1-丙烷磺酰胺，N1-(2,4-二氟-3-{[3-(3-吡啶基氨基)-6-喹喔啉基]氨基}苯基)-1-丙烷磺酰胺，N1-(3-{[3-(2,4-二氟苯胺基)-6-喹喔啉基]氨基}-2,4-二氟苯基)-1-丙烷磺酰胺，N-{2,4-二氟-3-[(3-甲氧基-5-硝基-6-喹喔啉基)氨基]苯基}甲烷磺酰胺，N1-{3-[(5-氰基-3-羥基-6-喹喔啉基)氨基]-2,4-二氟苯基}-1-丙烷磺酰胺，N1-(3-{[5-氰基-3-(2-嗎啉代乙氧基)-6-喹喔啉基]氨基)-2,4-二氟苯基)-1-丙烷磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-乙氧基喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-(二甲基氨基)喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-(甲氨基)喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2,6-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(5-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-乙氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)甲烷磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-乙氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)甲烷磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-(二甲基氨基)喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(2,4-二氟-3-(5-甲?；?3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)苯基)丙烷-1-磺酰胺，6-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基氨基)-3-甲氧基喹喔啉-5-羧酸，6-(2,6-二氟-3-(丙基磺酰胺基)苯基氨基)-3-甲氧基喹喔啉-5-羧酸甲酯，N-(2,4-二氟-3-(3-甲氧基-7-甲基喹喔啉-6-基氨基)苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-乙氧基喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-乙氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-(二甲基氨基)喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-2-甲基苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-甲基苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-甲基苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)甲烷磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)-N-乙基丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2,4-二氟苯基)-N-甲基丙烷-1-磺酰胺，N-(3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2-甲基苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(5-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-2-甲基苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(2-氯-3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(2-氯-3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，N-(2-氯-3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)丙烷-1-磺酰胺，N-(2-氯-3-(5-氰基-3-嗎啉代喹喔啉-6-基氨基)-4-氟苯基)苯磺酰胺，及，N-(2-氰基-3-(5-氰基-3-甲氧基喹喔啉-6-基氨基)苯基)丙烷-1-磺酰胺。

本發(fā)明的另一方面涉及用于預(yù)防或治療由蛋白質(zhì)激酶調(diào)制/介導(dǎo)或與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病或病癥的方法。該蛋白質(zhì)激酶可包括但不限于B-Raf、B-RafV^600E、C-Raf、MEK1等。一種例示性的用于預(yù)防或治療由蛋白質(zhì)激酶介導(dǎo)/介入或與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病或病癥的方法包含對(duì)需要此類治療的個(gè)體(例如哺乳動(dòng)物)給予有效劑量的本發(fā)明化合物、或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑合物、前藥或藥學(xué)上可接受的鹽。這類疾病或病癥的示例包括但不限于過(guò)度增殖性疾病(例如癌癥，包括黑色素瘤及皮膚的其他癌癥)，神經(jīng)退化性疾病，心臟肥大，疼痛，偏頭痛及神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病，腎臟疾病(例如多囊性腎臟疾病)等。

本發(fā)明的另一方面提供本發(fā)明的化合物用于制造治療過(guò)度增殖性疾病的藥物的用途。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該過(guò)度增殖性疾病可為癌癥(或者更進(jìn)一步，是本文中所定義的特定癌癥)。

本發(fā)明的另一方面提供本發(fā)明的化合物用于制造治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病或病癥的藥物的用途，所述疾病或病癥是例如過(guò)度增殖性疾病(例如癌癥，包括黑色素瘤及皮膚的其他癌癥)，神經(jīng)退化性疾病，心臟肥大，疼痛，偏頭痛及神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病，腎臟疾病(例如多囊性腎臟疾病)。該蛋白質(zhì)激酶可為B-Raf，且該藥物為B-Raf抑制劑。

本發(fā)明的另一方面提供一種藥物組合物，包含本發(fā)明化合物、其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑合物、前藥或藥學(xué)上可接受的鹽，以及醫(yī)藥上可接受的載劑或賦形劑。

本發(fā)明的其他方面及優(yōu)點(diǎn)經(jīng)由以下敘述及后附的權(quán)利要求而更明確。

發(fā)明詳述

定義

詳參特定實(shí)施方式，結(jié)合結(jié)構(gòu)及化學(xué)式對(duì)實(shí)施方式的示例進(jìn)行說(shuō)明。當(dāng)描述列舉實(shí)施方式時(shí)，應(yīng)理解，其并非用來(lái)將本發(fā)明限定于這些實(shí)施方式。相反地，本發(fā)明欲涵蓋所有的替代物、改良物及均等物，其均可涵蓋于權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將可確認(rèn)許多可用于實(shí)施本發(fā)明的類似于或相當(dāng)于本文中所描述的方法及材料。本發(fā)明并不在任何方面受限于本文中所描述的方法及材料。在一件或多件并入本文的文獻(xiàn)及類似材料與本申請(qǐng)不同或矛盾的情況下，包括但不限于所定義的術(shù)語(yǔ)、術(shù)語(yǔ)用法、所描述的技術(shù)等，則均以本申請(qǐng)為主。

除非另有說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“烷基”是指包含1至20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈單價(jià)飽和烴。該描述中的數(shù)值范圍在于包含所定義的范圍內(nèi)的任何數(shù)值，如同單獨(dú)的數(shù)值已被分別公開(kāi)一樣。例如，具有1至20個(gè)碳原子的烷基將包括C₁、C₂…C₂₀以及C₁-C₂₀、C₁-C₁₅、C₁-C₁₀、C₁-C₆、C₁-C₄等。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及叔丁基。

術(shù)語(yǔ)“烯基”是指包含2至20個(gè)碳原子(例如C₂-C₁₀)及一或多個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈單價(jià)烴。烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基及1,4-丁二烯基。

術(shù)語(yǔ)“炔基”是指包含2至20個(gè)碳原子(例如C₂-C₁₀)及一或多個(gè)三鍵的直鏈或支鏈單價(jià)烴，烯基的例子包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基及2-丁炔基，及1-甲基-2-丁炔基。

術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指-O-烷基基團(tuán)，其中該烷基部分如上述所定義。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基及叔丁氧基。

術(shù)語(yǔ)“酰氧基”是指-O-C-(O)-R基團(tuán)，其中R可為H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基、芳基或雜芳基。

術(shù)語(yǔ)“氨基”是指NH₂。術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”是指-N(R)-烷基基團(tuán)，其中R可為H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基、芳基或雜芳基。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有3至30個(gè)碳原子(例如C₃-C₆或C₃-C₁₂)的單價(jià)飽和烴環(huán)。環(huán)烷基的例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基及金剛烷基。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指具有3至30個(gè)碳原子(例如C₃-C₆或C₃-C₁₂)以及一或多個(gè)雙鍵的單價(jià)非芳族烴環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烯基的例子包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基及環(huán)庚烯基。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”是指具有一或多個(gè)雜原子(例如O、N、S或Se)的單價(jià)非芳族5元至8元單環(huán)、8元至12元雙環(huán)、或11元至14元三環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)基的例子包括但不限于哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、二噁烷基、嗎啉基及四氫呋喃基。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烯基”是指具有一或多個(gè)雜原子(例如O、N、S或Se)及一或多個(gè)雙鍵的單價(jià)非芳族5元至8元單環(huán)、8元至12元雙環(huán)、或11元至14元三環(huán)系統(tǒng)。

術(shù)語(yǔ)“芳基”是指單價(jià)6碳單環(huán)、10碳雙環(huán)或14碳三環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)。芳基的例子包括、但不限于苯基、萘基及蒽基。

術(shù)語(yǔ)“芳氧基”是指-O-芳基。術(shù)語(yǔ)“芳基氨基”是指-N(R)-芳基，其中R可為H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指具有一或多個(gè)雜原子(例如O、N、S或Se)的單價(jià)芳族5元至8元單環(huán)、8元至12元雙環(huán)、或11元至14元三環(huán)系統(tǒng)。雜芳基的例子包括吡啶基、呋喃基、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基、喹啉基、吲哚基、噻唑基、吡咯基、異喹啉基、嘌呤基、噁唑基、吡唑基及咔唑基。在所有這些術(shù)語(yǔ)中，“芳基”部分如上述所定義。

術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指F、Cl、Br或I。

上述的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、芳基及雜芳基可以是經(jīng)取代或未經(jīng)取代的。氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、芳基及雜芳基上可能的取代基包括但不限于C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀烯基、C₂-C₁₀炔基、C₃-C₂₀環(huán)烷基、C₃-C₂₀環(huán)烯基、C₁-C₂₀雜環(huán)烷基、C₁-C₂₀雜環(huán)烯基、C₁-C₁₀烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、氨基、C₁-C₁₀烷基氨基、芳基氨基、羥基、鹵素基團(tuán)、氧基(O＝),硫酮基(S＝)(thioxo),硫基、C₁-C₁₀烷硫基、芳硫基、C₁-C₁₀烷基磺?；?、芳基磺?；?、酰基氨基、氨基?；?、氨基硫?；?、脒基、巰基、酰胺基、硫脲基、硫氰基、磺酰胺基、胍基、脲基、氰基、硝基、?；?、硫酰基、酰氧基、脲基(carbamido)、氨甲?；?-C(O)NH₂)、羧酸基(-COOH)、及羧酸酯。另一方面，烷基、烯基或炔基上可能的取代基包括上述除了C₁-C₁₀烷基以外的全部取代基。環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基、芳基及雜芳基也可彼此稠合。

Raf抑制劑

本文提供可用于治療或預(yù)防與蛋白質(zhì)激酶(例如B-Raf)調(diào)制/介導(dǎo)的或與蛋白質(zhì)激酶有關(guān))的疾病、癥狀和/或病癥的化合物及該化合物的藥物組合物。

在一種實(shí)施方式中，提供式(I)化合物

或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑合物、前藥及藥物上可接受的鹽，其中：

L是NR⁸或O；

R¹選自由氫、鹵素、NR⁹R¹⁰、OR¹¹、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R²選自由氫、鹵素、硝基、CN、OR¹¹、COR¹²及NR¹³R¹⁴所構(gòu)成的組，限制條件為只有當(dāng)R¹是NR⁹R¹⁰時(shí)，R²才為氫或鹵素；

R³選自由氫、鹵素、羥基、偶氮基、氰基、硝基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，限制條件為只有當(dāng)R¹是NR⁹R¹⁰時(shí)，R³才能為氫或鹵素；

R⁴、R⁵及R⁶獨(dú)立地選自由氫、鹵素、羥基、氨基、CN、C₁-C₄烷基、烷氧基C₁-C₄烷氧基、二烷基氨基、C₁-C₄烷氧基及雜環(huán)基所構(gòu)成的組；

R⁷是C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基或芳基；

R⁸選自由氫、SO₂R¹⁵、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基及3元至6元雜環(huán)基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基及雜環(huán)基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R⁹及R¹⁰獨(dú)立地選自由氫、COR¹⁵、SO₂R¹⁵、OR¹⁶、NR¹⁷R¹⁸、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代，限制條件為只有當(dāng)R⁹及R¹⁰不為氫或C₁-C₄烷基時(shí)，R²及R³才獨(dú)立地選自氫或鹵素；

R⁹及R¹⁰與它們所連接的氮原子共同形成3元至6元雜環(huán)基，其可任選地被鹵素、氧或C₁-C₃烷基取代；

R¹¹選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R¹²選自由氫、OR¹⁹、NR²⁰R²¹、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R¹³及R¹⁴獨(dú)立地選自由氫、COR¹⁵、SO₂R¹⁵、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R¹⁵選自由C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組；

R¹⁶選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R¹⁷及R¹⁸獨(dú)立地選自由氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環(huán)烷基、苯基、3元至6元雜環(huán)基及5元至6元雜芳基所構(gòu)成的組，其中該烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、苯基、雜環(huán)基及雜芳基可任選地被鹵素、氧基(除了苯基或雜芳基的情況)、OR^a、SR^a、NR^bR^c、苯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基及環(huán)丙基取代，其中該烷基、烷氧基及環(huán)丙基可任選地被R^d取代；

R¹⁹選自由氫、C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組；

R²⁰及R²¹獨(dú)立地選自由氫、C₁-C₄烷基、C₁-C₄鹵烷基及芳基所構(gòu)成的組；

其中，各R^a獨(dú)立地為氫或C₁-C₄烷基；

其中，各R^b及R^c獨(dú)立地選自由氫、SO₂R⁷及C₁-C₄烷基所構(gòu)成的組，其中該C₁-C₄烷基可任選地被鹵素取代；

其中，各R^d獨(dú)立地選自由鹵素、氧基、C₁-C₄烷基及C₁-C₄烷氧基所構(gòu)成的組，其中該C₁-C₄烷基及C₁-C₄烷氧基可任選地被鹵素取代。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知，在上述式(I)中，不同取代基的所有組合或排列均落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。這些化合物可藉由使用容易獲得的材料/試劑及已知化學(xué)反應(yīng)而制得?；诒绢I(lǐng)域的公知常識(shí)及本公開(kāi)的揭示，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能夠制備及使用這些化合物，無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)。

以下反應(yīng)流程(反應(yīng)流程1至反應(yīng)流程14)提供可用于制備式(I)化合物的示例性操作。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，這些示例僅供例示的目的，在未背離本發(fā)明的范圍內(nèi)，改良及變化是可能的。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式合成的喹喔啉化合物可以任何已知技術(shù)純化，例如藉由快速管柱層析法，高性能液體層析法，結(jié)晶法，或其它任何適當(dāng)?shù)姆椒ā?/p>

中間物I

反應(yīng)流程1

在0℃下，將濃硝酸(1.1當(dāng)量)逐滴加入苯甲酸乙酯(1)(1.0當(dāng)量)于發(fā)煙硫酸(1.25M)中的混合物中。將此混合物留置于室溫下并攪拌1小時(shí)。接著，將反應(yīng)混合物倒入冰中，并以乙酸乙酯(EtOAc)萃取水相。將有機(jī)層分離，以飽合碳酸氫鈉(NaHCO₃)及水清洗，干燥，然后濃縮，獲得產(chǎn)物2。

在N₂氣氛中，將10％(wt.)Pd/活性碳(0.05當(dāng)量)加入已裝入3-硝基苯甲酸乙酯(2)(1.0當(dāng)量)的燒瓶中。添加甲醇(0.25M)至該燒瓶中，并在2個(gè)H₂氣球氣壓下攪拌至過(guò)夜。待反應(yīng)完成后，以N₂氣體充入燒瓶，并將反應(yīng)混合物以硅藻土過(guò)濾。移除揮發(fā)物以得到粗制3-氨基苯甲酸乙酯(3)。

將烷基-1-磺酰基氯化物(1.2當(dāng)量)緩慢添加至放置在冷水浴中的3-氨基苯甲酸乙酯(3)(1.1當(dāng)量)于吡啶(0.5M)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后倒入冷水中。以EtOAc萃取水相。將有機(jī)層分離，以飽合NH₄Cl及鹽水清洗，于MgSO₄中干燥，過(guò)濾，并且濃縮，以獲得3-(N-烷基磺酰基)亞磺酰胺基)苯甲酸乙酯(4)。

將1N的NaOH水溶液(3.0當(dāng)量)加入3-(N-烷基亞磺酰胺基)苯甲酸乙酯(4)(1.0當(dāng)量)于4:1THF/MeOH(0.2M)中的溶液中。并使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。在真空中移除大部分的有機(jī)溶劑。將1N的HCl緩慢添加至該混合物中，然后將所獲得的固體過(guò)濾，并以水清洗。將此物質(zhì)以Et₂O清洗，以獲得3-烷基亞磺酰胺基苯甲酸(5)。

中間物II

反應(yīng)流程2

在N₂氣氛中及在0oC下，將N,N-二異丙基乙基胺(2.0當(dāng)量)及氯甲基甲基醚(2.0當(dāng)量)加入酚(6)(1.0當(dāng)量)于干燥CH₂Cl₂的溶液中。將所得的黃色混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后于室溫下靜置過(guò)夜。以10％NaOH水溶液將有機(jī)混合物稀釋，并以二氯甲烷萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO₄干燥，過(guò)濾，并且在真空中濃縮。粗制產(chǎn)物在二氧化硅管柱中純化。用乙酸乙酯于己烷中的洗脫液獲得所需的產(chǎn)物7。

在氮?dú)庵胁⒂?70℃下，在甲氧基甲氧基苯(7)(1.0當(dāng)量)于THF(0.35M)中的溶液中，用10分鐘逐滴加入1.4M的正丁基鋰于己烷(0.99當(dāng)量)中的溶液。將混合物在-70℃下攪拌1.5小時(shí)，然后傾析至粉碎的干冰中。一旦發(fā)泡作用消失，使混合物回溫至室溫(RT)，并添加水。水溶液以醚萃取2次，以提供化合物8。將化合物8溶解于甲醇中，并通過(guò)添加濃鹽酸酸化至pH值為1。將所得懸浮液以超聲波處理5分鐘，然后以CH₂Cl₂萃取兩次。經(jīng)合并的CH₂Cl₂萃取物以MgSO₄干燥，并于真空中蒸發(fā)，以提供產(chǎn)物9。

在冷水浴中，將烷基磺酰氯(1.2當(dāng)量)緩慢添加至3-羥基苯甲酸(9)(1.0當(dāng)量)于三乙胺(0.5M于CH₂Cl₂中)中的溶液中。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1小時(shí).添加水，將有機(jī)層分離，以水及鹽水清洗，然后以MgSO₄干燥，過(guò)濾并濃縮，以提供產(chǎn)物10。

中間物III

反應(yīng)流程3

對(duì)苯甲酸(11)(1當(dāng)量)于THF(0.25M)中的溶液添加三乙胺(2.3當(dāng)量)及疊氮磷酸二苯酯(DPPA)(1.15當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌3小時(shí)，然后回溫至80℃并保持2小時(shí)。添加水，將反應(yīng)混合物于80℃下攪拌15小時(shí)。將反應(yīng)混合物以EtOAc稀釋，以飽和NaHCO₃水溶液及鹽水清洗有機(jī)層。于減壓下移除溶劑，殘余物經(jīng)由二氧化硅管柱層析法純化，以提供化合物12。

中間物IV

反應(yīng)流程4

將溴(1.0當(dāng)量)緩慢添加至經(jīng)取代的喹喔啉(20)于乙酸(0.1M)的溶液中。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1.5小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集所得固體并用己烷清洗，以提供7-溴取代的喹喔啉(14)。

將7-溴取代的喹喔啉(14)(1.0當(dāng)量)于POCl₃(1.0M)中的懸浮液加熱以回流6小時(shí)。然后使所得的澄清溶液冷卻至室溫，并加入水進(jìn)行淬冷。以過(guò)濾收集所得固體，以提供7-溴-2-氯取代的喹喔啉(15)，可接著進(jìn)行以下步驟而無(wú)需進(jìn)一步的純化。

中間物V

反應(yīng)流程5

將乙醛酸或乙醛酸烷酯及經(jīng)取代的4-氯苯-1,2-二胺(16)在有機(jī)溶劑中攪拌6小時(shí)。使所得的產(chǎn)物純化，以提供7-氯取代的喹喔啉酮(17)。

將7-氯取代的喹喔啉酮(17)(1.0當(dāng)量)于POCl₃(1.0M)中的懸浮液加熱以回流6小時(shí)。然后使所得的澄清溶液冷卻至室溫并通過(guò)水淬冷。通過(guò)過(guò)濾收集所得固體，以提供2,7-二氯取代的喹喔啉(18)，可接著進(jìn)行以下步驟而無(wú)需進(jìn)一步的純化。

中間物VI

反應(yīng)流程6

在室溫下對(duì)2-氯取代的喹喔啉(19)(1.0當(dāng)量)于R¹³OH(0.5M)中的溶液添加碳酸鉀(1.1當(dāng)量)，并將反應(yīng)在40℃加熱2小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾并于真空中濃縮。所得的殘余物以乙酸乙酯稀釋，以鹽水清洗，用MgSO₄干燥，并于真空中濃縮，以提供化合物20。

中間物VII

反應(yīng)流程7

于室溫下對(duì)2-氯取代的喹喔啉(19)(1.0當(dāng)量)于R¹¹R¹²NH(0.5M)中的溶液添加三乙胺(1.1當(dāng)量)，并將反應(yīng)在60℃加熱2小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾并于真空中濃縮。所得的殘余物以乙酸乙酯稀釋，以鹽水清洗，用MgSO₄干燥，并于真空中濃縮，以提供化合物21。

中間物VIII

反應(yīng)流程8

對(duì)7-溴取代的喹喔啉(22)(1.0當(dāng)量)于硫酸中的溶液添加硝酸。將此反應(yīng)混合物于室溫下攪拌8小時(shí)。將混合物倒入冰-H₂O混合物中，并且過(guò)濾。以乙酸乙酯清洗固體，以提供7-溴-8-硝基取代的喹喔啉(23)。

對(duì)7-溴-8-硝基取代的喹喔啉(23)(1.0當(dāng)量)于乙酸乙酯/二甲基甲酰胺(6:1)中的溶液添加氯化錫(II)(SnCl₂；10.0當(dāng)量)。將此反應(yīng)混合物于100℃下攪拌16小時(shí)。冷卻后，將反應(yīng)混合物于真空中濃縮。所得的殘余物以乙酸乙酯稀釋，以飽和NaHCO₃水溶液及鹽水清洗，用MgSO₄干燥，并于真空中濃縮，以提供6-溴取代的喹喔啉-5-胺(24)。

中間物IX

反應(yīng)流程9

在-10℃下，對(duì)7-溴取代的喹喔啉-5-胺(24)(1.0當(dāng)量)、氯化氫(1.5當(dāng)量)及亞硝酸鈉(1.1當(dāng)量)于H₂O中的溶液添加碘化鉀(1.2當(dāng)量)。將此反應(yīng)混合物于室溫下攪拌16小時(shí)。將粗制反應(yīng)混合物以EtOAc稀釋，將有機(jī)層以鹽水清洗，用MgSO₄干燥，并且過(guò)濾。于減壓下移除溶劑，殘余物經(jīng)由二氧化硅凝膠管柱層析法純化，以提供7-溴-8-碘取代的喹喔啉(25)。

于密封試管中，將7-溴-8-碘取代的喹喔啉(25)(1.0當(dāng)量)、氰化鉀(2.0當(dāng)量)、碘化銅(1.1當(dāng)量)及1,10-菲咯啉單水合物(0.2當(dāng)量)于二甲基甲酰胺中的溶液于110℃下加熱24小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾并以甲醇清洗，在真空中去除溶劑。粗制的反應(yīng)混合物以EtOAc稀釋，有機(jī)層以飽和NaHCO₃水溶液及鹽水清洗，用MgSO₄干燥，并且過(guò)濾。于減壓下去除乙酸乙酯，殘余物經(jīng)由二氧化硅凝膠管柱層析法純化，以提供7-溴-8-氰基取代的喹喔啉(26)。

終產(chǎn)物I

反應(yīng)流程10

將經(jīng)取代的喹喔啉酮(27))(1.0當(dāng)量)、碳酸銫(3.0當(dāng)量)、Pd(OAc)₂(0.1當(dāng)量)、化合物12(1.0當(dāng)量)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(xantphos)(0.02當(dāng)量)于二噁烷(0.3M)中的溶液于110℃下加熱2小時(shí)。將溶液過(guò)濾，以甲醇清洗，并于真空中濃縮。殘余物經(jīng)由二氧化硅凝膠管柱層析法純化，以提供喹喔啉化合物28。

上述反應(yīng)流程說(shuō)明可以如何制備本發(fā)明的喹喔啉化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知涉及的反應(yīng)及所使用的試劑是本領(lǐng)域已知的。因此，基于以上教示和本領(lǐng)域的公知常識(shí)，如本文中所定義的具有各種取代基的喹喔啉化合物可由本領(lǐng)域技術(shù)人員制備，無(wú)需發(fā)明性嘗試。

本文提到的喹喔啉化合物可以含有非芳香族雙鍵和一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，例如：位于連接于核心芳香環(huán)的取代基。因此，這些化合物可作為消旋物和外消旋混合物、單一對(duì)映體、單個(gè)非對(duì)映立體異構(gòu)體、非對(duì)映體混合物，以及順式或反式異構(gòu)體形式存在。所有這些異構(gòu)體形式都含括在本發(fā)明范圍的內(nèi)。本發(fā)明的喹喔啉化合物可具有酸性或堿性官能團(tuán)(例如：在取代基上)，所述官能團(tuán)可以形成鹽類，特別是藥學(xué)上可接受的鹽類。這種鹽類的形成為制藥工業(yè)中的常規(guī)做法。可用于本發(fā)明的喹喔啉化合物的鹽的例子包括供堿性官能基用的鹽酸鹽、硫酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、蘋果酸鹽、及琥珀酸鹽等，及供酸性官能基用的氫氧化物、銨、及烷基銨等。此種喹喔啉鹽類在本發(fā)明的范圍內(nèi)。類似地，酸性或堿性基團(tuán)可以被官能基化，例如形成酯。這樣的官能化衍生物會(huì)在體內(nèi)水解。因此，此類衍生物可以作為本發(fā)明的喹喔啉化合物的前藥。前藥的形成只涉及常規(guī)技能，本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)需過(guò)多的實(shí)驗(yàn)即可理解如何制備及使用此類前藥。

本發(fā)明的范圍還包含(1)一種藥物組合物，其包含有效劑量的至少一種本發(fā)明的喹喔啉化合物及藥學(xué)上可接受的載劑，(2)一種用于治療蛋白激酶相關(guān)疾病的方法(例如癌癥)，其通過(guò)給予需要此類治療的個(gè)體所需有效劑量的此類喹喔啉化合物的方式來(lái)達(dá)成；以及(3)降低至少一種蛋白激酶活性的方法，其通過(guò)使本發(fā)明的至少一種喹喔啉化合物與至少一種蛋白激酶接觸來(lái)實(shí)現(xiàn)。

在此術(shù)語(yǔ)“蛋白激酶相關(guān)的疾病/病癥”或“與蛋白質(zhì)激酶相關(guān)疾病/病癥”，或“由蛋白質(zhì)激酶調(diào)節(jié)的疾病/病癥”，是指一種有PK活性異常表征的疾病/病癥或者是可透過(guò)改變至少一PK活性的方式來(lái)治療的疾病或病癥。異常的PK活性會(huì)是PK基因表達(dá)水平提高所引起的或是在正常時(shí)不會(huì)發(fā)生的情況下表達(dá)PK所引起的。在此所描述的PK相關(guān)疾病/病癥，包括但不限于，癌癥、糖尿病、過(guò)度增殖疾病、腎臟過(guò)度增殖性疾病、腎臟疾病、馮希伯-林島氏疾病(von Hippel-Lindau disease)、再生狹窄、纖維癥、牛皮癬、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、發(fā)炎性疾病、免疫疾病如自體免疫性疾病(如AIDS、紅斑狼瘡等)、心血管疾病(如動(dòng)脈粥狀硬化)和血管增殖性疾病如異常血管新生。

術(shù)語(yǔ)“治療”是指對(duì)于患有蛋白激酶相關(guān)疾病或出現(xiàn)病征的個(gè)體或者易患病的體質(zhì)，給予喹喔啉化合物，其目的是治愈、恢復(fù)、減輕、緩解、改變、矯正、改善、改進(jìn)、影響或降低疾病的風(fēng)險(xiǎn)、癥狀或易患病的體質(zhì)。例如，癌癥治療是指治療導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)或腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制、腫瘤生長(zhǎng)的退化(即，其降低可檢測(cè)腫瘤的大小)，或癌癥的消失。

術(shù)語(yǔ)“有效劑量”是指在個(gè)體中達(dá)到預(yù)期治療效果所需的活性劑劑量。有效劑量可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員以本領(lǐng)域的已知技術(shù)、給藥途徑、賦形劑的使用，以及可能同時(shí)使用其它藥物而有所差異。有效劑量的測(cè)定，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)僅需要常規(guī)技能，即可確定預(yù)定用途的有效劑量。需要治療的個(gè)體可為哺乳動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”是指人類或非人類的哺乳動(dòng)物，例如：狗、貓、豬、牛、綿羊、山羊、馬、大鼠、或小鼠。

可通過(guò)本發(fā)明方法治療的癌癥，包括任何異常的細(xì)胞或組織的生長(zhǎng)，例如：腫瘤，無(wú)論是惡性的、前惡性或非惡性的。癌癥的特征在于細(xì)胞不受控制的增殖，而該細(xì)胞可能侵入或不侵入周圍組織，因此，可能轉(zhuǎn)移或不轉(zhuǎn)移至新的身體部位。癌癥包括上皮細(xì)胞癌，而上皮細(xì)胞癌包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、黑色素瘤和肝癌。癌癥還包括肉瘤，這是間質(zhì)細(xì)胞起源的腫瘤；肉瘤包括成骨肉瘤、白血病和淋巴瘤。癌癥可以包括一個(gè)或多個(gè)腫瘤細(xì)胞類型。術(shù)語(yǔ)“癌癥＂舉例但不限于，肺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、腎癌、唾液腺癌、卵巢癌、子宮體癌、子宮頸癌、口腔癌、皮膚癌、腦癌、淋巴瘤和白血病。還包括抗藥性癌癥(包括但不限于多藥耐藥性的癌癥)。

本發(fā)明所述的化合物可以與放射線療法、免疫療法、單克隆抗體療法、激素療法、使用其它藥物的化療及/或手術(shù)合并施予哺乳動(dòng)物。合并治療不需發(fā)生在同一時(shí)間，可以是連續(xù)，或是相互及/或與休息和恢復(fù)期交替進(jìn)行。

根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，治療如癌癥等與蛋白激酶有關(guān)疾病的方法，包括將有效劑量的本發(fā)明至少一種喹喔啉化合物和至少一種化療藥物施予哺乳動(dòng)物。化療藥物的實(shí)例包括但不限于在此所述的PK抑制劑，(例如伊馬替尼(imatinib)甲磺酸鹽、吉非替尼(gefitinib)、達(dá)沙替尼(dasatinib)、埃羅替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、尼洛替尼(nilotinib)及索拉菲尼(sorafenib))；抗體，其包括：例如曲妥珠單抗(trastuzumab)、利妥昔單抗(rituximab)、西妥昔單抗(cetuximab)及貝伐單抗(bevacizumab)；米托蒽醌(mitoxantrone)；地塞米松(dexamethasone)；潑尼松(prednisone)；及替莫唑胺(temozolomide)；烷化劑(例如美法侖(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、白消安(busulfan)、噻替派(thiotepa)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、鏈脲霉素(streptozocin)、胺烯咪胺(decarbazine)及環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide))；有絲分裂抑制劑；抗代謝物(例如截瘤達(dá)錠(capecitibine)、吉西他濱(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)或5-氟尿嘧啶/甲酰四氫葉酸(leucovorin)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、巰嘌呤(mercaptopurine)、硫鳥(niǎo)嘌呤、噴托他丁(pentostatin)及胺甲蝶呤(methotrexate))；細(xì)胞循環(huán)抑制劑；酶；荷爾蒙；抗荷爾蒙；生長(zhǎng)因子抑制劑；植物堿及萜類化合物；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、喜樹(shù)堿(camptothecin)、拓?fù)涮婵?topotecan)、依立替康(irinotecan)、多柔比星(doxorubicin)及柔紅霉素(daunorubicin))；抗腫瘤抗生素(例如放線菌素D(actinomycin D)、博萊霉素(bleomycin)、絲裂霉素C(mitomycin C)、亞德里亞霉素(adriamycin)、道諾霉素(daunorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、多柔比星(doxorubicin)及聚乙二醇脂質(zhì)體多柔比星(pegylated liposomal doxorubicin))；長(zhǎng)春花生物堿(vinca alkaloid)(例如長(zhǎng)春堿(vinblastine)及長(zhǎng)春地辛(vindesine))；鉑化學(xué)治療劑(例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)及奧沙利鉑(oxaliplatin))；沙利度胺(thalidomide)及有關(guān)類似物(例如CC-5013及CC-4047)；單株抗體；及抗血管生成劑。

術(shù)語(yǔ)“接觸”在此是指利用一種方法將本發(fā)明的化合物與至少一種PK處在一起，該化合物可通過(guò)與PK本身作用而直接降低PK的活性，或通過(guò)與另一種和PK活性有關(guān)的分子作用而間接降低PK的活性?！敖佑|”可以發(fā)生在體外或體內(nèi)，例如：將本發(fā)明的化合物給予含至少一種PK的試管、具有生長(zhǎng)的全細(xì)胞的培養(yǎng)皿、或哺乳動(dòng)物。以PK為標(biāo)靶的實(shí)例包括但不限于EGFR、CDK1、Aurora A&B激酶、MAP、CDK2、Raf、NEK(包括NEK 4a、NEK 4b、NEK 5與NEK 6)、BUB1、VEGFR、C-MET、HER2、HER3、HER4、IR、IGF-IR、IRR、PDGFRct、PDGFRO、CSFIR、C-Kit、C-fms、Flk-1R、Flk4、KDRlFlk-1、FLT-1、FLT3、FGFR-1、FGFR-2、FGFR-3、FGFR4、Src、Frk、Btk、Csk、Abl、ZAP70、Fes、Fps、Fak、Jak、Ack、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr、Aur2和Yrk。

為了實(shí)施本發(fā)明的方法，上述藥物組合物可以經(jīng)由口服、腸胃外(parenterally)、噴霧吸入、局部表面涂用、直腸、鼻腔、臉頰、陰道或植入式儲(chǔ)藥槽(implanted reservoir)的方式給藥。術(shù)語(yǔ)“腸胃外”包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、脊髓內(nèi)、患處內(nèi)和顱內(nèi)注射或注入技術(shù)。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方式，本發(fā)明的喹喔啉化合物通過(guò)靜脈注射方式給藥，合適的載體可包括但不限于生理鹽水或磷酸緩沖鹽水(PBS)，以及含有增稠劑和增溶劑的溶液，例如葡萄糖，聚乙二醇溶液和聚丙二醇及其混合物。

無(wú)菌可注射組合物，如無(wú)菌可注射水性或油性懸浮液，可根據(jù)本領(lǐng)域中已知技術(shù)使用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑(如TWEEN 80)和懸浮劑來(lái)配制。無(wú)菌注射制劑也可以是無(wú)毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液或懸浮液，例如1,3-丁二醇的溶液形式?？山邮艿馁x形劑和溶劑中可采用甘露醇、水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌且無(wú)揮發(fā)性油(fixed oil)常用作溶劑或懸浮介質(zhì)(例如：合成的單或雙甘油酯)。脂肪酸(如油酸及其甘油酯衍生物)可用于制備注射劑，天然的藥學(xué)上可接受的油，如橄欖油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙烯化型態(tài)，同樣可用于注射劑的制備中。這些油溶液或懸浮液也可以含有長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑，或羧甲基纖維素或類似的分散劑。其它常用的界面活性劑(如Tweens、或Spans)或其他類似的乳化劑或常用于制備藥學(xué)上可接受的固體、液體或其它劑型的生物可利用度增強(qiáng)劑也可以用于制備目的。

用于口服給藥的組合物可以是任何口服可接受的劑型，包括但不限于膠囊、錠劑、乳液和水性懸浮液、分散液和溶液。在用于口服用錠劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還可加入潤(rùn)滑劑，比如硬脂酸鎂。對(duì)于以膠囊形式的口服給藥而言，可用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。當(dāng)口服施予水性懸浮液或乳劑時(shí)，活性成分可懸浮或溶解在與乳化劑或懸浮劑結(jié)合的油相中。如果需要，可加入某些甜味劑，調(diào)味劑或著色劑。鼻用氣霧劑或吸入組合物可根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域中眾所熟知的技術(shù)來(lái)制備。含有喹喔啉化合物的組合物也可以用于直腸給藥的栓塞劑形式來(lái)給予。

藥物組合物中的載體必須是“可接受的”，即能夠與組合物中的活性成分相容(優(yōu)選能夠使其穩(wěn)定化)且對(duì)待治療的個(gè)體無(wú)害。一種或多種增溶劑(例如環(huán)糊精)，其可與有活性的喹喔啉化合物形成更易溶解的復(fù)合物可作為遞送活性化合物的藥物載體。其它載體的實(shí)例包括膠體二氧化硅、硬脂酸鎂和十二烷基硫酸鈉。

適合的體外測(cè)定可用于初步評(píng)估本發(fā)明的喹喔啉化合物在諸如抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抗癌活性方面的功效。可進(jìn)一步檢查這種化合物在治療癌癥方面的療效。例如：化合物可以施用于具有癌癥的動(dòng)物(例如，小鼠模型)，接著評(píng)估其治療效果。也可基于這些結(jié)果來(lái)確定適當(dāng)?shù)膭┝糠秶徒o藥途徑。

無(wú)需進(jìn)一步說(shuō)明，以上的描述已經(jīng)充分地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，以下的實(shí)施例應(yīng)被解釋為僅是說(shuō)明性的，而非用以限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例

例示性的喹喔啉化合物列于表1中，這些化合物的計(jì)算質(zhì)譜(mass)數(shù)據(jù)及觀察得到的ESI-MS數(shù)據(jù)提供于表2中。

表1喹喔啉化合物

表2計(jì)算質(zhì)譜數(shù)據(jù)及觀察得到的ESI-MS數(shù)據(jù)

生物活性

生物活性

檢測(cè)多種式I化合物對(duì)多種蛋白質(zhì)激酶的抑制能力。下文簡(jiǎn)要說(shuō)明不同的分析方法。

1.B-Raf激酶分析

本文中所公開(kāi)的受測(cè)化合物對(duì)激酶活性的抑制能力，通過(guò)在該受測(cè)化合物的存在下定量基質(zhì)中并入的[³³P]的量來(lái)評(píng)價(jià)。標(biāo)準(zhǔn)的分析條件為5ng的重組B-Raf激酶(昂斯特生物技術(shù)公司(Upstate Biotechnology))與500ng MEK1(Map-erk激酶，K97R)于分析緩沖液(8μM ATP、0.5μCi[³³P]ATP(特異活性3000Ci/毫摩爾,帕金埃爾默公司(PerkinElmer))、50mM Tris/HCl(pH7.5)及1mM EGTA、1mM Na₃VO₄、1％2-巰基乙醇、0.1％Brij 35及0.2mg/ml BSA)，最終體積為25μL。反應(yīng)于30℃下作用30分鐘，并通過(guò)加入3％磷酸終止反應(yīng)，以細(xì)胞收集器(ulifilter harvester,PerkinElmer)將產(chǎn)物收集到96孔GF/B微量多孔盤(UniFilter,PerkinElmer)中，并用微板閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount microplate scintillation counter,PerkinElmer)計(jì)數(shù)。抑制劑的IC₅₀值通過(guò)測(cè)試各化合物的3倍連續(xù)稀釋濃度而得，每種化合物進(jìn)行重復(fù)測(cè)試(duplication)。所得的結(jié)果以線性回歸軟件(GraphPad Prism 4；圖形軟件有限公司(GraphPad Software Inc.))進(jìn)行分析。

表1中所列經(jīng)選擇的化合物的抑制活性總結(jié)于表3中。IC₅₀值定義為激酶(B-Raf激酶)最大活性被抑制一半時(shí)測(cè)試化合物的濃度。+表示該濃度(IC₅₀值)為10,000～1,000nM；++表示該濃度為1,000-300nM；以及+++表示該濃度為小于300nM。

表3

2.B-Raf^V600E激酶分析

本文中所公開(kāi)的受測(cè)化合物對(duì)激酶活性的抑制能力，通過(guò)在該受測(cè)化合物的存在下定量基質(zhì)中并入的[³³P]的量來(lái)評(píng)價(jià)。標(biāo)準(zhǔn)的分析條件為5ng的重組B-Raf^V600E激酶(Upstate Biotechnology)與500ng MEK1(K97R)于分析緩沖液(8μM ATP、0.5μCi[³³P]ATP(特異活性3000Ci/毫摩爾,PerkinElmer)、50mM Tris/HCl(pH7.5)及1mM EGTA、1mM Na₃VO₄、1％2-巰基乙醇、0.1％Brij 35及0.2mg/ml BSA)，與受測(cè)化合物(以4％DMSO稀釋)或單獨(dú)DMSO(對(duì)照組)，最終體積為25μL。反應(yīng)于30℃下作用30分鐘，并通過(guò)加入3％磷酸終止反應(yīng)，以細(xì)胞收集器(ulifilter harvester,PerkinElmer)將產(chǎn)物收集到96孔GF/B微量多孔盤(UniFilter,PerkinElmer)中，并用微板閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount microplate scintillation counter,PerkinElmer)計(jì)數(shù)。抑制劑的IC₅₀值通過(guò)測(cè)試各化合物的3倍連續(xù)稀釋濃度而得，并進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。所得的結(jié)果以線性回歸軟件(GraphPad Prism 4；GraphPad Software Inc.)進(jìn)行分析。

表1中所列經(jīng)選擇的化合物的抑制活性總結(jié)于表4中。IC₅₀值定義為激酶(B-Raf^V600E激酶)最大活性被抑制一半時(shí)測(cè)試化合物的濃度。。+表示該濃度(IC₅₀值)為10,000～1,000nM；++表示該濃度為1,000-300nM；以及+++表示該濃度為小于300nM。

表4

3.C-Raf激酶分析

本文中所公開(kāi)的受測(cè)化合物對(duì)激酶活性的抑制能力，通過(guò)在該受測(cè)化合物的存在下定量基質(zhì)中并入的[³³P]的量來(lái)評(píng)價(jià)。標(biāo)準(zhǔn)的分析條件為2ng的重組C-Raf^V600E激酶(Upstate Biotechnology)與500ng MEK1(K97R)于分析緩沖液(8μM ATP、0.5μCi[³³P]ATP(特異活性3000Ci/毫摩爾,PerkinElmer)、50mM Tris/HCl(pH7.5)及1mM EGTA、1mM Na₃VO₄、1％2-巰基乙醇、0.1％Brij 35及0.2mg/ml BSA)，與受測(cè)化合物(以4％DMSO稀釋)或單獨(dú)DMSO(對(duì)照組)，最終體積為25μL。反應(yīng)于30℃下作用30分鐘，并通過(guò)加入3％磷酸終止反應(yīng)，以細(xì)胞收集器(ulifilter harvester,PerkinElmer)將產(chǎn)物收集到96孔GF/B微量多孔盤(UniFilter,PerkinElmer)中，并用微板閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount microplate scintillation counter,PerkinElmer)計(jì)數(shù)。抑制劑的IC₅₀值通過(guò)測(cè)試各化合物的3倍連續(xù)稀釋濃度而得，并進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。所得的結(jié)果以線性回歸軟件(GraphPad Prism 4；GraphPad Software Inc.)進(jìn)行分析。

經(jīng)選擇的化合物的抑制B-Raf激酶的活性總結(jié)于表5中。IC₅₀值定義為激酶(C-Raf激酶)最大活性被抑制一半時(shí)測(cè)試化合物的濃度。+表示該濃度(IC₅₀值)為10,000～1,000nM；++表示該濃度為1,000-300nM；以及+++表示該濃度為小于300nM。

表5

4.細(xì)胞增殖分析

如上所述，本發(fā)明化合物可用于治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病或病癥。該與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病可為癌癥、糖尿病、腎臟疾病、馮希伯-林島氏疾病、囊腫纖維癥、牛皮癬、骨關(guān)節(jié)炎、過(guò)度增殖性病癥、腎臟的過(guò)度增殖性病癥、再狹窄、囊腫纖維癥、牛皮癬、骨關(guān)節(jié)炎、自體免疫疾病或血管增殖性病癥。該癌癥可為肺癌、大腸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰臟癌、膀胱癌、胃癌、腎臟癌、唾液腺癌、卵巢癌、子宮體癌、子宮頸癌、口腔癌、皮膚癌、腦癌、淋巴瘤或白血病。

化合物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制能力通過(guò)使用CellTiter^TM-96分析法來(lái)量測(cè)?；衔锏募?xì)胞毒性在下列細(xì)胞中進(jìn)行評(píng)估：B-Raf^V600E突變的A375黑色素瘤細(xì)胞、B-Raf^V600E突變的COLO205大腸癌細(xì)胞及具有野生型B-Raf(B-Raf^wt)及NRAS^Q61R突變的SK-MEL-2黑色素瘤細(xì)胞。A375及COLO205細(xì)胞培養(yǎng)于37℃、5％CO₂環(huán)境下含有10％FCS的DMEM培養(yǎng)基中。SK-MEL-2細(xì)胞培養(yǎng)于37℃、5％CO₂環(huán)境下含有10％FCS的MEM培養(yǎng)基中。將A375、COLO205及SK-MEL-2細(xì)胞分別以2000、2000及4000細(xì)胞/孔的量接種至96孔平盤中，并培養(yǎng)過(guò)夜。然后將這些細(xì)胞以遞增濃度的受測(cè)化合物處理并再培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，將CellTiter^TM-96一號(hào)水溶液試劑(Aqueous One Solution Reagent(Promega))加入其中并再培養(yǎng)4小時(shí)。使用微量盤樣品測(cè)讀機(jī)(microplate reader,Molecular Devices)測(cè)定490nm處的吸光度來(lái)測(cè)定細(xì)胞的存活率。

將生長(zhǎng)抑制百分率對(duì)應(yīng)于化合物濃度的結(jié)果以線性回歸軟件(GraphPad Prism 5)進(jìn)行分析來(lái)計(jì)算該半抑制濃度(IC₅₀)值。表1中所列經(jīng)選擇的化合物的抗增殖活性總結(jié)于表6中。+表示該濃度(IC₅₀值)為10,000～1,000nM；++表示該濃度為1,000-300nM；以及+++表示該濃度為小于300nM。

表6

表6的數(shù)據(jù)清楚顯示本發(fā)明的化合物可抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，特別是表達(dá)為B-Raf突變的癌細(xì)胞。因此，這些化合物可用于治療癌癥。

本發(fā)明的某些實(shí)施方式涉及治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)疾病的方法。根據(jù)本發(fā)明一種實(shí)施方式的一種方法包含給予需此治療的個(gè)體有效量的本發(fā)明化合物。

雖然本發(fā)明已描述有限數(shù)量的實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員基于本發(fā)明公開(kāi)的幫助，可了解在不偏離本說(shuō)明書(shū)所述范圍的情況下能衍生出其他實(shí)施方式。因此，本發(fā)明的范圍應(yīng)僅受限于本案的權(quán)利要求書(shū)。