發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及用于治療煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NAMPT)相關(guān)癌癥和炎性疾病的化合物，尤其是調(diào)節(jié)NAMPT功能的化合物。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物的可藥用組合物和使用所述組合物治療與NAMPT調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病和/或病癥的方法。
發(fā)明背景
NAD+(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)是在很多基本生理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的輔酶(Ziegler，M.Eur.J.Biochem.267，1550-1564，2000)。NAD+對(duì)于幾種信號(hào)通路過(guò)程是必不可少的，包括DNA修復(fù)中的聚ADP核糖基化、免疫反應(yīng)和G蛋白偶聯(lián)信號(hào)傳導(dǎo)中的單ADP核糖基化、sirtuins蛋白引起的脫酰作用(Garten，A.等，Trends in Endocrinology and Metabolism，20，130-138，2008)。
NAMPT(也被稱為前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子(PBEF)和內(nèi)脂素)是促進(jìn)煙酰胺磷酸核糖基化的酶，也是回收NAD+的兩條通路之一中的限速酶。
越來(lái)越多的證據(jù)表明，NAMPT抑制劑有成為抗癌劑的潛力。與正常細(xì)胞相比，癌細(xì)胞具有較高的基礎(chǔ)NAD+轉(zhuǎn)化率，也表現(xiàn)出較高的能量需求。此外，結(jié)腸直腸癌中發(fā)現(xiàn)了增加的NAMP T表達(dá)(Van Beijnum，J.R.等，Int.J.Cancer 101，118-127，2002)，并且血管生成也涉及NAMPT(Kim，S.R.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.357，150-156，2007)。經(jīng)證明，NAM PT的小分子抑制劑可造成細(xì)胞內(nèi)NAD+水平降低，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡(Hansen，C M等，An ticancer Res.20，4211-4220，2000)，并抑制異種移植模型中的腫瘤生長(zhǎng)(Olesen，U.H.等，Mol Cancer Ther.9，1609-1617，2010)。
NAMPT與SIRT1在人體前列腺癌細(xì)胞中存在顯著的過(guò)度表達(dá)。NAMPT表達(dá)的增加發(fā)生在前列腺瘤形成的早期。NAMPT的抑制可有效阻止培養(yǎng)液中的細(xì)胞生長(zhǎng)、軟瓊脂集落形成、細(xì)胞侵襲和小鼠的異種移植前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)(Wang，B.等，Oncogene，30(8)，907-921，2011)。此外，NAMPT也是EGFR基因突變的NSCLC治療過(guò)程中的重要治療對(duì)象(Okumura，Shunsuke等，Journal of Thoracic Oncology，7(1)，49-56，2012)。據(jù)報(bào)告，通過(guò)調(diào)節(jié)前列腺癌(PCa)細(xì)胞中的sirtuin蛋白活性，NAMPT在控制脂肪重新合成的過(guò)程中發(fā)揮了獨(dú)特的作用(Bowlby，Sarah C.等，PLoS One，7(6)，e40195，2012)。
NAMPT抑制劑還有作為炎癥和代謝紊亂治療劑的潛力(Galli，M.等，Cancer Res.70，8-11，2010)。例如，NAMPT是T和B淋巴細(xì)胞中的主導(dǎo)酶。NAMPT的選擇性抑制導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中的NAD+消耗，從而阻斷了伴隨自身免疫病情發(fā)展進(jìn)行的擴(kuò)展，而表達(dá)其他NAD+生成通路的細(xì)胞類型可能不會(huì)受到影響。經(jīng)證明，小分子NAMPT抑制劑(FK866)可選擇性阻斷增殖并誘導(dǎo)活化T細(xì)胞凋亡，它在關(guān)節(jié)炎(膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎)的動(dòng)物模型中是有效的(Busso，N.等，PloS One 3(5)，e2267，2008)。FK866改善了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(簡(jiǎn)稱EAE，即T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫紊亂模型)的表現(xiàn)(Bruzzone，S等，PloS One 4，e7897，2009)。如MTT檢測(cè)法和流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定，F(xiàn)K866通過(guò)更大程度地抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還提高了胃癌細(xì)胞對(duì)氟尿嘧啶的化學(xué)敏感性(Bi，Tie-Qiang等，Oncology Reports，26(5)，1251-1257，2011)。NA MPT活性提高了人體血管內(nèi)皮細(xì)胞中的NF-kB轉(zhuǎn)錄活性，從而導(dǎo)致MMP-2和MMP-9活化，這表現(xiàn)了NAMPT抑制劑在預(yù)防肥胖癥和2型糖尿病的炎癥介導(dǎo)并發(fā)癥中的作用(Adya，R.等，Diabetes Care，31，758-760，2008)。首批NAMPT抑制劑(FK866和CHS828)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，業(yè)內(nèi)人士對(duì)新分子合成表現(xiàn)出了濃厚的興趣(Journal of Medicinal Chemistry，56(16)，6279-6296，2013)。
NAMPT抑制劑在WO2013082150、US20120329786、WO2012177782、WO2012154194、WO2012150952、WO1997048696、WO2013067710、US20120122842、US20120122924、WO2012031197、WO2012031196、WO2012031199、WO2012154194、WO2012150952、WO2011109441、WO2011121055、WO2009086835、WO2015100322及很多其他申請(qǐng)中得到了公開。顯然，所有這些申請(qǐng)仍處于早期臨床前階段。人們需要更新的藥物來(lái)治療與提高的NAMPT水平有關(guān)的疾病和/或病癥，而這種需求似乎并未得到滿足。因此，本發(fā)明的目的是提供用于治療和/或預(yù)防或改善與NAMPT調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病和/或病癥的化合物。
發(fā)明概述
本文介紹了用作NAMPT抑制劑的4，5-二氫異噁唑衍生物及其藥物組合物。
在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明包含式(I)的化合物：
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，
環(huán)A是碳環(huán)基或雜環(huán)基；
X1、X2和X3各自獨(dú)立為C或N；前提是X1、X2和X3在任何情況下都不全部是C；
L1是-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NHSO2-或-SO2NH-；
L2是直接鍵、-CH＝CH-或-NRb(CH2)r-；
Z是O、S或NCN；
R1在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立為烷基、硝基、鹵素、鹵烷基、羥烷基、-ORa、-(CH2)nNRbRc、-(SO2)-烷基、-(SO2)-NRbRc、-NH(CO)烷基或-(CO)NHRb；
R2是任選取代的碳環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基，其中任選取代基是R6；
R3在每次出現(xiàn)時(shí)是氫、鹵素、氨基、硝基、氰基、烷基、羥基、烷氧基、鹵烷基或鹵代烷氧基；
R4和R5各自獨(dú)立為氫或烷基；
或者，R4和R5與它們所連接的碳原子一起形成任選取代的環(huán)烷基環(huán)，其中任選取代基是烷基或鹵素；
R6在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立為一個(gè)或多個(gè)烷基、氨基、鹵素、硝基、氰基、鹵烷基、羥基、烷氧基、-NHSO2-烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，其中任選取代基在每次出現(xiàn)時(shí)是鹵素、烷基、羥基、烷氧基或鹵烷基；
Ra是氫、烷基或芳烷基；
Rb和Rc各自獨(dú)立為氫或烷基；
m、n和p各自獨(dú)立為0、1、2或3；
q是1、2或3；以及
r是0、1或2。
在另一方面，本發(fā)明提供了包含式(I)化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體的藥物組合物，以及至少一種可藥用賦形劑(如可藥用載體或稀釋劑)。
在另一方面，本發(fā)明涉及式(I)化合物的制備。
在其他方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體的使用方法，用于治療和預(yù)防由提高的煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NAMPT)水平導(dǎo)致的疾病和/或病癥。
更具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及如何使用式(I)化合物或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體(包括用作藥物的其所有比例的混合物)來(lái)抑制NAMPT。
本發(fā)明的式(I)化合物具有抑制NAMPT的療效，可用于治療多種疾病和/或病癥，包括但不限于下組疾?。喊┌Y、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、皮膚癌、乳腺癌、子宮癌、腎癌、頭頸癌、腦癌、大腸癌、子宮頸癌、膀胱癌、白血病、淋巴癌、霍奇金氏病、包括成人呼吸窘迫綜合征在內(nèi)的病毒感染、毛細(xì)血管擴(kuò)張性運(yùn)動(dòng)失調(diào)、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、皰疹病毒、單純皰疹、炎性病變、大腸激躁癥、炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、纖維化疾病、皮膚病、異位性皮膚炎、牛皮癬、紫外線誘導(dǎo)的皮膚損傷、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、移植物抗宿主病、阿爾茨海默病、腦血管意外、動(dòng)脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄、糖尿病、腎小球腎炎、代謝癥候群、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、鱗狀細(xì)胞癌、腎癌、尿道和膀胱癌、頭頸癌。
發(fā)明詳述
除非另有定義，本文使用的所有科技術(shù)語(yǔ)具有與本文主題所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的通常理解相同的含義。除非有相反規(guī)定，本說(shuō)明和所附權(quán)利要求中使用的下列術(shù)語(yǔ)具有所示含義，以便理解本發(fā)明。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指主鏈中只含有碳原子和氫原子、無(wú)不飽和現(xiàn)象、通過(guò)單鍵與分子其他部分相連的烴鏈基團(tuán)。烷烴基可以是直鏈或支鏈。例如，術(shù)語(yǔ)“C1-C4烷基”是指包含1至4個(gè)碳原子的單價(jià)直鏈或支鏈脂肪族基團(tuán)(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指-O-烷基基團(tuán)，其中烷基如上文所定義。烷氧基的代表性實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基和庚氧基。烷氧基的烷基部分可任選取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指C3-C10飽和烴環(huán)。環(huán)烷基可以是一般包含3至7個(gè)碳環(huán)原子的單環(huán)。單環(huán)環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。環(huán)烷基也可以是多環(huán)或包含超過(guò)一個(gè)環(huán)。多環(huán)環(huán)烷基的實(shí)例包括橋接、稠合和螺環(huán)的環(huán)烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”在單獨(dú)使用或與其他術(shù)語(yǔ)組合使用時(shí)是指包含一個(gè)或多個(gè)環(huán)的碳環(huán)芳香族體系，其中這些環(huán)可以稠合。術(shù)語(yǔ)“稠合”是指第二個(gè)環(huán)通過(guò)與第一個(gè)環(huán)共有兩個(gè)相鄰的原子而連接或形成。除非另外說(shuō)明，芳基一般具有6至約14個(gè)碳原子，但是本發(fā)明并不受此限制。C6-C14芳基是指具有6至12個(gè)碳原子的芳基。芳基的實(shí)例包括但不限于苯基、萘基、茚滿基等。除非另外說(shuō)明，本文所述的所有芳基可任選取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)基”在單獨(dú)使用或與其他術(shù)語(yǔ)組合使用時(shí)是指飽和、部分飽和或不飽和的碳環(huán)體系。碳環(huán)基也包含“環(huán)烷基”和“芳基”的定義，它們的定義如上文所述。碳環(huán)基環(huán)可以是單環(huán)；或者它的一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以通過(guò)稠合形成雙環(huán)或多環(huán)碳環(huán)基環(huán)，如芳基稠合的環(huán)烷基或環(huán)烷基稠合的芳基等?！疤辑h(huán)基”的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、苯基、萘基、環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、2，3-二氫-1H-茚或1，2，3，4-四氫化萘等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“芳烷基”是指如上文所定義的烷基，其中烷基的一個(gè)或多個(gè)氫原子被如上文所定義的芳基所取代。芳烷基的實(shí)例包括但不限于苯甲基、二苯甲基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯丙基等。芳烷基可以被一個(gè)或多個(gè)合適的基團(tuán)取代或不被其他基團(tuán)取代。
“氰基”是指-CN基團(tuán)。
“硝基”是指-NO2基團(tuán)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”或“鹵族元素”在單獨(dú)使用或與其他術(shù)語(yǔ)組合使用時(shí)是指氟、氯、溴或碘。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氨基”是指-NH2基團(tuán)。所述的氨基可由一個(gè)或多個(gè)烷基任選取代，其中烷基如上文所定義。烷基氨基的代表性實(shí)例包括但不限于-NHCH3、-NHCH2CH3、-NHCH2-CH(CH3)2、-N(CH3)2等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵烷基”是指經(jīng)一個(gè)或多個(gè)鹵素原子置換的烷基，其中烷基如上文所定義。本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”可與意指F、Cl、Br或I的術(shù)語(yǔ)“鹵族元素”互換。“鹵烷基”的實(shí)例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”是指-O-鹵烷基，其中鹵烷基如上文所定義。鹵代烷氧基的代表性實(shí)例包括但不限于三氟甲氧基、氯甲氧基、2-氟乙氧基等。
“氫氧基”或“羥基”是指-OH基團(tuán)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羥烷基”是指經(jīng)一個(gè)或多個(gè)羥基取代的烷基，其中烷基如上文所定義?！傲u烷基”的實(shí)例包括但不限于羥甲基、羥乙基、羥丙基等。
除非另外說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指被取代或未被取代的5至14元芳環(huán)基團(tuán)，所述雜芳基含有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自N、O或S的雜原子(即5至14元雜芳基)。雜芳基可以是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)體系。雜芳基環(huán)基團(tuán)可以連接至任何雜原子或碳原子的主結(jié)構(gòu)，從而形成一個(gè)穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。所述雜芳基環(huán)基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于噁唑基、異噁唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基、異吲哚基、吡咯基、三唑基、三嗪基、四唑基、噻吩基、噁二唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、嘧啶堿基、吡嗪基、噠嗪基、吡唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呲喃基、咔唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基等。除非有相反規(guī)定或說(shuō)明，否則本文所述或要求保護(hù)的所有雜芳基可以被取代或不被取代。
除非另外說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”是指被取代或未被取代的飽和3至15元環(huán)基團(tuán)(即3至15元雜環(huán)烷基)，包含碳原子和1至5個(gè)選自氮、氧、硫的雜原子。雜環(huán)烷基可以是包含稠合、橋接或螺環(huán)體系的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)體系，雜環(huán)基團(tuán)中的氮原子或硫原子可任選氧化為多個(gè)氧化狀態(tài)。雜環(huán)烷基可以連接至任何雜原子或碳原子的主結(jié)構(gòu)，從而形成一個(gè)穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。除非有相反規(guī)定或說(shuō)明，否則本文所述或要求保護(hù)的所有雜環(huán)烷基可以被取代或不被取代。雜環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于氮丙啶基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、2-氧代吡啶基、硫代嗎啉基、噻唑烷基、1，3-二氧戊環(huán)基、1，4-二氧雜環(huán)己基、1，1-二氧化并-2，3-二氫苯并[b]噻吩-5-基等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”在單獨(dú)使用或與其他術(shù)語(yǔ)組合使用時(shí)是指飽和、部分飽和或不飽和的雜環(huán)體系?！半s環(huán)基”也包含“雜環(huán)烷基”和“雜芳基”的定義，它們的定義如上文所述。雜環(huán)基環(huán)可以是單環(huán)的；或者它的一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以通過(guò)稠合形成雙環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基?！半s環(huán)基”的實(shí)例包括但不限于吖啶基、吡咯烷基、哌啶基、吡啶基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、噠嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“任選取代”是指將給定結(jié)構(gòu)中的一個(gè)或多個(gè)氫基置換為指定取代基，取代基包括但不限于：鹵素、烷基、烯基、炔基、芳基、雜環(huán)基、巰基、烷硫基、芳硫基、烷基硫代烷基、芳基硫代烷基、烷基磺酰基、烷基磺?；榛?、芳基磺酰基烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、鹵烷基、氨基、三氟甲基、氰基、硝基、烷基氨基、芳基氨基、烷基氨基烷基、芳基氨基烷基、氨基烷基氨基、羥基、烷氧基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基烷基、?；?、芳烷氧基羰基、羧酸、磺酸、磺酰基、膦酸、芳基、雜芳基、雜環(huán)和脂肪族化合物。應(yīng)該知道的是，取代基可以進(jìn)一步被取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“化合物”包括本發(fā)明中公開的化合物。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“包含”或“含有”一般用作涵蓋的意思，即允許存在一個(gè)或多個(gè)特征或部件。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“包括”及其他類似形式不是限制性的。
“可藥用”是指可用于制備藥物組合物，該藥物組合物一般是安全無(wú)毒的，在生物學(xué)上及其他方面均無(wú)不良作用，其包括對(duì)于獸醫(yī)學(xué)用途以及人類藥用而言可接受的藥物組合物。
術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”包括從可藥用堿或酸(包括無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸)制備的鹽?？伤幱名}的實(shí)例包括但不限于醋酸鹽、苯磺酸鹽、安息香酸鹽、重碳酸鹽、硫酸氫鹽、酒石酸鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽、克拉維酸鹽、二氫氯化物、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、羥乙酰氨基苯砷酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥萘酸鹽、氫碘酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(恩波酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、多聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘和戊酸鹽。源自無(wú)機(jī)堿的鹽的實(shí)例包括但不限于鋁、銨、鈣、銅、三價(jià)鐵、二價(jià)鐵、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅鹽。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用載體”是指任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物載體，例如磷酸鹽緩沖液、水、乳狀液(如油/水或水/油乳狀液)以及各種類型的潤(rùn)濕劑。該組合物也可以包含穩(wěn)定劑和防腐劑，例如文獻(xiàn)中已知的載體、穩(wěn)定劑和輔助劑?！翱伤幱谩币馕吨d體、稀釋劑或賦形劑必須與制劑的其他成分相容且對(duì)其受體無(wú)害。
對(duì)于病況、病癥或疾病，術(shù)語(yǔ)“治療”或“處理”包括：(a)預(yù)防或延遲在對(duì)象中發(fā)展的病況、病癥或疾病的臨床癥狀的出現(xiàn)，所述對(duì)象可能受到或易受病況、病癥或疾病折磨，但尚未體驗(yàn)或顯示病況、病癥或疾病的臨床或亞臨床癥狀；(b)抑制病況、病癥或疾病，即防止或減少疾病的發(fā)展或其至少一種臨床或亞臨床癥狀；或(c)緩解疾病，即，使病況、病癥或疾病或其至少一種臨床或亞臨床癥狀衰退。
術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”包括哺乳動(dòng)物(尤其是人類)及其他動(dòng)物，例如家畜(如包括貓和狗在內(nèi)的家養(yǎng)寵物)和非家畜動(dòng)物(如野生動(dòng)物)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指當(dāng)給對(duì)象服用用于治療病況、病癥或疾病時(shí)足以實(shí)現(xiàn)所述治療的化合物給藥量?！爸委熡行Я俊睂⒁蚧衔?、疾病及其嚴(yán)重程度和治療對(duì)象的年齡、體重、身體狀況及反應(yīng)性而異。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“組合物”意在包括包含規(guī)定量的規(guī)定成分的產(chǎn)品以及因規(guī)定量的規(guī)定成分的結(jié)合而直接或間接產(chǎn)生的任何產(chǎn)物。
術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指式(I)化合物的任何對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體，在此它們是手性的或含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵。如果式(I)化合物和相關(guān)結(jié)構(gòu)式是手性的，它們可以以外消旋形式或光學(xué)活性形式存在。應(yīng)該知道的是，本發(fā)明涵蓋了所有立體化學(xué)異構(gòu)形式，包括非對(duì)映異構(gòu)、對(duì)映異構(gòu)和差向異構(gòu)形式，以及d-異構(gòu)體、l-異構(gòu)體和它們的混合物?；衔锏母鞣N立體異構(gòu)體可以由包含手性中心的市售原料合成制備，也可以通過(guò)制備對(duì)映異構(gòu)體產(chǎn)物的混合物然后進(jìn)行分離來(lái)制備，例如轉(zhuǎn)化為非對(duì)映異構(gòu)體的混合物然后進(jìn)行分離或重結(jié)晶、使用色譜技術(shù)、在手性色譜柱上直接分離對(duì)映異構(gòu)體或者采用本領(lǐng)域已知的任何其他合適的方法。特定立體化學(xué)的原料化合物可以在市面上購(gòu)得，也可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備和分解。此外，本發(fā)明的化合物可以通過(guò)幾何異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明包括所有順式、反式、順、反、異側(cè)(E)和同側(cè)(Z)異構(gòu)體以及它們合適的混合物。
本發(fā)明提供了式(I)的4，5-二氫異噁唑衍生物，可用于抑制NAMPT。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含用作治療劑的所述4，5-二氫異噁唑衍生物的藥物組合物。
本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施方案提供了式(I)所示的化合物：
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，
環(huán)A是碳環(huán)基或雜環(huán)基；
X1、X2和X3各自獨(dú)立為C或N；前提是X1、X2和X3在任何情況下都不全部是C；
L1是-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NH-、-CO-、-NHCO-、-CONH-、-NHSO2-或-SO2NH-；
L2是直接鍵、-CH＝CH-或-NRb(CH2)r-；
Z是O、S或NCN；
R1在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立為烷基、硝基、鹵素、鹵烷基、羥烷基、-ORa、-(CH2)nNRbRc、-(SO2)-烷基、-(SO2)-NRbRc、-NH(CO)烷基或-(CO)NHRb；
R2是任選取代的碳環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基，其中任選取代基是R6；
R3在每次出現(xiàn)時(shí)是氫、鹵素、氨基、硝基、氰基、烷基、羥基、烷氧基、鹵烷基或鹵代烷氧基；
R4和R5各自獨(dú)立為氫或烷基；
或者，R4和R5與它們所連接的碳原子一起形成任選取代的環(huán)烷基環(huán)，其中任選取代基是烷基或鹵素；
R6在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立為一個(gè)或多個(gè)烷基、氨基、鹵素、硝基、氰基、鹵烷基、羥基、烷氧基、-NHSO2-烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，其中任選取代基在每次出現(xiàn)時(shí)是鹵素、烷基、羥基、烷氧基或鹵烷基；
Ra是氫、烷基或芳烷基；
Rb和Rc各自獨(dú)立為氫或烷基；
m、n和p各自獨(dú)立為0、1、2或3；
q是1、2或3；以及
r是0、1或2。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IA)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、L1、L2、X1、X2、X3、Z、R1、R2、R3、R4、R5、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IB)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、L2、X1、X2、X3、Z、R1、R2、R3、R4、R5、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IB)的化合物，其中R4和R5是氫。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IC)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、L2、X1、X2、X3、R1、R2、R3、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(ID)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、X1、X2、X3、R1、R2、R3、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IE)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、X1、X2、X3、R1、R2、R3、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IF)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，L2、X1、X2、X3、Z、R2、R3和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IG)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，L2、X1、X2、X3、Z、R2、R3和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(IH)的化合物，
或其可藥用鹽或立體異構(gòu)體；
其中，環(huán)A、X1、X2、X3、R1、R3、p和q與式(I)的定義相同。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中是
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中是吡啶基。
下列實(shí)施方案僅用于解釋本發(fā)明，而不是將權(quán)利要求限制于所列舉的具體實(shí)施方案。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中環(huán)A是雜芳基或芳基。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中環(huán)A是苯基、吡啶基或吡唑基。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中Z是O或S；在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，Z是O。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中L1是-O-或-S-；在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，L1是-O-。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中L2是直接鍵或-NRb(CH2)r-；其中Rb是H，r是O。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R1在每次出現(xiàn)時(shí)是C1-C4烷基、鹵素或-(CO)NHRb；其中Rb是甲基。
根據(jù)前述實(shí)施方案，所述的C1-C4烷基是甲基，所述的鹵素是氟或氯。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R2是任選取代的雜環(huán)基。
根據(jù)前述實(shí)施方案，所述的任選取代的雜環(huán)基是吡啶基、噠嗪基或咪唑并[1，2-a]吡啶基，其中任選取代基是甲基。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R3在每次出現(xiàn)時(shí)是鹵素、C1-C4烷基或氰基；其中，所述的鹵素是氟或氯，所述的C1-C4烷基是甲基。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R4和R5各自獨(dú)立為氫或烷基。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中R4和R5都是氫。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中m和n是1。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中p是0、1或2。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中q是1、2或3。
本申請(qǐng)還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含至少一種本文所述的化合物和至少一種可藥用賦形劑(如可藥用載體或稀釋劑)。該藥物組合物最好包含治療有效量的至少一種本文所述的化合物。本專利申請(qǐng)中描述的化合物可伴有可藥用賦形劑(如載體或稀釋劑)或被載體所稀釋，或者包含在載體內(nèi)，載體可以是膠囊、香袋、紙或其他容器的形式。
本發(fā)明的化合物和藥物組合物可用于抑制NAMPT的活性，NAMPT被認(rèn)為與多種疾病狀態(tài)有關(guān)。
本專利申請(qǐng)還提供了在有此需要的對(duì)象中抑制NAMPT的方法，即，給對(duì)象服用本文所述的一種或多種化合物，給藥量為造成受體抑制的有效量。
本發(fā)明的化合物一般以藥物組合物的形式給藥。該組合物可以使用藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的程序制備，且包含本發(fā)明的至少一種化合物。本專利申請(qǐng)的藥物組合物包含本文所述的一種或多種化合物以及一種或多種可藥用賦形劑。通常，可藥用賦形劑經(jīng)過(guò)監(jiān)管部門批準(zhǔn)，或一般被認(rèn)為對(duì)于人類或動(dòng)物的藥用是安全的?？伤幱觅x形劑包括但不限于載體、稀釋劑、助流劑和潤(rùn)滑劑、防腐劑、緩沖劑、螯合劑、聚合物、膠凝劑、稠化劑、溶劑等。
合適載體的實(shí)例包括但不限于水、鹽水、酒精、聚乙二醇、花生油、橄欖油、明膠、乳糖、白土、蔗糖、糊精、碳酸鎂、糖、多糖、硬脂酸鎂、滑石、凝膠、瓊脂、果膠、阿拉伯樹膠、硬脂酸、纖維素的低級(jí)烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺、脂肪酸單甘油酯和雙甘油酯、脂肪酸酯及聚氧乙烯。
該藥物組合物也可以包含一種或多種可藥用的助劑、潤(rùn)濕劑、懸浮劑、防腐劑、緩沖劑、甜味劑、增香劑、著色劑或前述之任意組合。
該藥物組合物可以是常規(guī)形式，如片劑、膠囊、溶液、懸浮液、注射液或局部用產(chǎn)品。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可以進(jìn)行配制，以提供所需的釋放特性。
無(wú)論是以純品形式還是適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物形式，本發(fā)明的化合物可以通過(guò)任何常規(guī)的藥物組合物給藥途徑進(jìn)行給藥。給藥途徑可以是任何向適當(dāng)或所需的作用位點(diǎn)有效傳送本專利申請(qǐng)所述的活性化合物的途徑。
本發(fā)明的藥物組合物可以口服，例如，片劑、膠囊(軟明膠或硬明膠)、丸劑、顆粒劑、糖衣錠劑(包含粉末或丸狀的活性成分)、錠劑和糖錠的形式。但是，該藥物組合物也可以經(jīng)直腸(例如，以栓劑形式)或經(jīng)胃腸道外(例如，經(jīng)靜脈、肌肉或皮下，以無(wú)菌注射液或懸浮液的形式)給藥，或局部施用(例如，以軟膏、乳膏或經(jīng)皮吸收藥劑的形式，或以貼片或浸漬敷料的形式)，或通過(guò)其他途徑給藥(例如，以氣霧劑、鼻噴霧劑、滴眼劑或滴耳劑的形式)，并且可以包含適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)添加劑(如防腐劑或有助于藥物滲透的溶劑)。
液體制劑包括但不限于糖漿、乳劑和無(wú)菌注射液，如懸浮液或溶液。
按重量計(jì)算，該藥物組合物一般包含約1％至99％(例如，約5％至75％或約10％至約30％)的式(I)化合物或其可藥用鹽。式(I)化合物或其可藥用鹽在該藥物組合物中的重量范圍可以是約1mg至約1000mg、約2.5mg至約500mg或約5mg至約250mg，也可以是1mg與1000mg之間的任何范圍或者高于或低于上述范圍。
本專利申請(qǐng)的藥物組合物可以通過(guò)文獻(xiàn)中已知的常規(guī)技術(shù)制備。
用于治療本文所述疾病或病癥的化合物的合適劑量可以由相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員決定。治療劑量一般通過(guò)對(duì)于人體的劑量范圍研究確定，該研究以從動(dòng)物研究中得出的初步證據(jù)為基礎(chǔ)。治療劑量必須足以產(chǎn)生預(yù)期的療效，而不會(huì)造成有害的副作用。給藥方式、劑型和合適的藥物賦形劑也可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)行妥善的使用和調(diào)整。所有變更和修改預(yù)計(jì)都在本專利申請(qǐng)的范圍之內(nèi)。
可以設(shè)想，本發(fā)明中公開的化合物將為患有免疫性或炎性病癥和/或疾病的對(duì)象帶來(lái)療效。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了治療選自免疫性或炎性病癥或疾病群組的病癥和/或疾病的方法。該方法包括向有此需要的對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明化合物，以改善該病癥或疾病的癥狀。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是癌癥。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是免疫性病癥或疾病。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是炎性病癥或疾病。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是自身免疫性病癥或疾病。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該病癥和/或疾病包括但不限于下組疾病：癌癥、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、皮膚癌、乳腺癌、子宮癌、腎癌、頭頸癌、腦癌、大腸癌、子宮頸癌、膀胱癌、白血病、淋巴癌、霍奇金氏病、包括成人呼吸窘迫綜合征在內(nèi)的病毒感染、毛細(xì)血管擴(kuò)張性運(yùn)動(dòng)失調(diào)、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、皰疹病毒、單純皰疹、炎性病變、大腸激躁癥、炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、纖維化疾病、皮膚病、異位性皮膚炎、牛皮癬、紫外線誘導(dǎo)的皮膚損傷、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、移植物抗宿主病、阿爾茨海默病、腦血管意外、動(dòng)脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄、糖尿病、腎小球腎炎、代謝癥候群、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、鱗狀細(xì)胞癌、腎癌、尿道和膀胱癌、頭頸癌。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是牛皮癬。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，牛皮癬是斑塊狀牛皮癬、點(diǎn)滴狀牛皮癬、皮褶牛皮癬、膿皰型牛皮癬或紅皮病型牛皮癬。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該病癥或疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，對(duì)象是人。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用作藥物的化合物。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于制造藥物的化合物。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于制造免疫性或炎性病癥或疾病治療藥物的化合物。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用作癌癥治療藥物的化合物。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，該藥物用于治療提高的煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NAMPT)水平導(dǎo)致的疾病或病癥。
本專利申請(qǐng)的治療方法包括向有此需要的患者(尤其是人)施用安全、有效劑量的式(I)化合物或其可藥用鹽或其立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物被指明用于上述疾病的治療性和/或預(yù)防性治療。當(dāng)然，對(duì)于上述的治療用途，給藥劑量因所用的化合物、給藥方式、所需的治療和所示的病癥或疾病而異。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物還可以在一個(gè)或多個(gè)組成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，本發(fā)明還包括經(jīng)同位素標(biāo)記的本發(fā)明變體，這些變體除以下事實(shí)外與本文所述的化合物相同：該化合物的一個(gè)或多個(gè)原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于其在自然界中的一般原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子置換。所述的任何特定原子或元素的所有同位素都包含在本發(fā)明的化合物及其用途的范圍之內(nèi)?？杉{入到本發(fā)明化合物中的示例性同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如2H(“D”)、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。經(jīng)同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物一般可如下制備：按照與以下方案和/或?qū)嵤├械恼f(shuō)明相似的步驟，使用經(jīng)同位素標(biāo)記的試劑代替未經(jīng)同位素標(biāo)記的試劑。
以下實(shí)施例中提供的MS(質(zhì)譜)(MS(Mass Spectral))數(shù)據(jù)是使用以下設(shè)備得到的：
API 2000 LC/MS/MS/Triplequad，
Agilent Technologies/LC/MS/DVL/Singlequad，
Shimadzu LCMS-2020/Singlequad。
以下實(shí)施例中提供的NMR數(shù)據(jù)是使用以下1H NMR設(shè)備得到的：Varian 600MHz、Varian 400MHz和Varian 300MHz
對(duì)于提供的實(shí)施例，HPLC是使用以下設(shè)備執(zhí)行的：
Agilent Technologies 1200系列，
Agilent Technologies 1100系列，
Shimadzu(UFLC)Prominence，
Shimadzu Nexera-UHPLC。
下列縮略語(yǔ)分別指以下定義：
NCS-N-氯代丁二酰亞胺；DMF-N，N-二甲基甲醯胺；BOP試劑-(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)膦六氟磷酸鹽；DMSO-二甲基亞砜；DIPEA-N，N-二異丙基乙基胺；HOBt-N-羥基苯并三唑；Dioxane.HCl-鹽酸二氧六環(huán)溶液；DEA-二乙胺；K2CO3-碳酸鉀；Tetrakis-四(三苯基膦)鈀(O)；H2O-水；ACN-乙腈；K3PO4-磷酸三鉀；br-寬峰；Pd(dppf)Cl2-[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀；PCy3-三環(huán)己基膦；Pd(dba)3-三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)；℃-攝氏度；-埃；B(OH)2-硼酸；conc-濃度；CDCl3-氘代氯仿；DMSO-d6-氘代二甲基亞砜；CH2Cl2-DCM-二氯甲烷；g-克；h-小時(shí)；1H-質(zhì)子；HCl-鹽酸；Hz-赫茲；J-耦合常數(shù)；LC-MS-液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用；HPLC-高效液相色譜法；手性HPLC-手性高效液相色譜法；MeOH-甲醇；M-摩爾濃度；MHz-兆赫(頻率)；MS-質(zhì)譜；mmol-毫摩爾；mL-毫升；min-分鐘；mol-摩爾；M+-分子離子；N-當(dāng)量濃度；NMR-核磁共振；Et3N/TEA-三乙胺；ppm-百萬(wàn)分率；rt/RT-室溫；s-單峰；d-雙峰；t-三重峰；q-四重峰；m-多重峰；dd-雙二重峰；td-三二重峰；qd-四二重峰；ddd-雙雙二重峰；dt-雙三重峰；ddt-雙雙三重峰；TLC-薄層色譜法；THF-四氫呋喃；％-百分比；μ-微米；-德爾塔；anh.-無(wú)水；PMS-吩嗪甲基硫酸鹽；XTT-2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-甲酰胺內(nèi)鹽；cDMEM-杜氏改良15 Eagle培養(yǎng)基；FBS-胎牛血清；NAM-Nam-煙酰胺；NMN-Nmn-煙酰胺單核苷酸；nm-納米；PRPP-磷酸核糖焦磷酸；ATP-三磷酸腺苷；BSA-牛血清白蛋白；DTT-二硫蘇糖醇；MgCl2-氯化鎂；IC50-半數(shù)抑菌濃度；RFU-相對(duì)熒光單位；以及Tris-三(羥甲基)氨基甲烷。
一般制備方式：
本文所述的化合物的制備方法在以下實(shí)施例中得到了說(shuō)明。以下提供的方案僅用于解釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍或精神。這些方案所示的原料可以從商業(yè)來(lái)源獲得或按照文獻(xiàn)中所述的步驟制備。此外，以下方案提到了具體的酸、堿、試劑、偶聯(lián)劑、溶劑等，應(yīng)該知道的是其他合適的酸、堿、試劑、偶聯(lián)劑等也可以使用，且包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，對(duì)于反應(yīng)條件、溫度、反應(yīng)持續(xù)時(shí)間或它們的組合的更改將作為本發(fā)明的一部分。所有可能的立體異構(gòu)體也將包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
合成所需的中間體可以在市面上購(gòu)得，也可以使用文獻(xiàn)中已知的方法制備。本發(fā)明通過(guò)具體的實(shí)施例得到了更詳細(xì)的說(shuō)明。
可以設(shè)想，本發(fā)明中公開的某些中間體在沒(méi)有任何表征數(shù)據(jù)的情況下用于下一個(gè)步驟。
應(yīng)該知道的是，這些流程的步驟順序可能有所差異，試劑、溶劑和反應(yīng)條件可以被具體提到的試劑、溶劑和反應(yīng)條件取代，易變部分可以根據(jù)需要受到保護(hù)和取消保護(hù)。
通用合成方案
方案1：
試劑和條件：i)方法A；ii)方法B；iii)NH2NH2.H2O，ACN，RT，16h；iv)方法C。
方法A：NCS，DMF，RT，3h，Et3N，0℃-RT，36h。
方法B：NCS，DMF，RT，3h，Et3N，0℃-RT，18h.
方法C：1，4-二氧六環(huán)鹽酸溶液，二氧六環(huán)，0℃-RT，12h。
本發(fā)明的式5、6a和6b中間體可以使用通用合成方案1中概述的流程合成。在適當(dāng)?shù)臈l件下，市售或合成的式1中間體在伴有合適的溶劑(DMF)和N-氯代丁二酰亞胺的情況下經(jīng)式2中間體處理會(huì)產(chǎn)生式4中間體，式4中間體在適當(dāng)?shù)臈l件下經(jīng)水合肼處理會(huì)產(chǎn)生式6a中間體。
或者，在適當(dāng)?shù)臈l件下，式1中間體在伴有合適的溶劑(DMF)和N-氯代丁二酰亞胺的情況下經(jīng)式3中間體處理會(huì)產(chǎn)生式5中間體，式5中間體經(jīng)1，4-二氧六環(huán)鹽酸溶液處理會(huì)產(chǎn)生式6b中間體。
方案2：
試劑和條件：i)方法D或方法E；ii)方法F或方法F(a)
方法D：EDCI.HCl，HOBt，DIPEA，DMF，RT，16h。
方法E：BOP試劑或HATU，DIPEA，DMF，RT，16h。
方法F：Pd(dppf)Cl2DCM，K2CO3，二氧六環(huán)：H2O，100℃，12h。
方法F(a)：Pd(dba)3，PCy3，K3PO4，二氧六環(huán)：H2O，100℃，16h。
合成通式(I)化合物的第一種通用方法記述于通用合成方案2中。在適當(dāng)?shù)臈l件下，式6a/6b中間體在伴有合適的堿(DIPEA)和合適的溶劑(DMF)的情況下經(jīng)式7中間體處理會(huì)產(chǎn)生式8中間體；在適當(dāng)?shù)鸟詈蠗l件下，式8中間體在伴有合適的堿(K2CO3)和合適的溶劑(二氧六環(huán)水溶液)的情況下經(jīng)式9中間體處理會(huì)產(chǎn)生所需的式(I)化合物。
方案3：
試劑和條件：i)方法F；ii)方法C；iii)方法D或方法E；iv)方法G。
方法C：1，4-二氧六環(huán)鹽酸溶液，二氧六環(huán)，0℃-RT，12h。
方法D：EDCI.HCl，HOBt，DIPEA，DMF，RT，16h。
方法E：BOP試劑或HATU，DIPEA，DMF，RT，16h。
方法F：Pd(dppf)Cl2DCM，K2CO3，二氧六環(huán)：H2O，100℃，12h。
方法F(a)：Pd(dba)3，PCy3，K3PO4，二氧六環(huán)：H2O，100℃，16h。
方法G：Et3N，DMSO，RT，16h。
合成式(I)化合物的另一種通用方法記述于通用合成方案3中。在適當(dāng)?shù)臈l件下，式5中間體在伴有合適的堿(K2CO3)和合適的溶劑(二氧六環(huán)水溶液)的情況下與式9中間體發(fā)生反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生式10中間體。式10中間體在適當(dāng)?shù)臈l件下(鹽酸二氧六環(huán)溶液中)經(jīng)去保護(hù)操作會(huì)產(chǎn)生式11中間體；在適當(dāng)?shù)臈l件下，式11中間體在伴有合適的堿(DIPEA)和合適的溶劑(DMF)的情況下與式7中間體耦合會(huì)產(chǎn)生所需的式(I)化合物。
或者，在適當(dāng)?shù)臈l件下，式11中間體在伴有合適的堿(Et3N)和合適的溶劑(DMSO)的情況下經(jīng)式12中間體處理也會(huì)產(chǎn)生所需的式(I)化合物。
本發(fā)明化合物的制備過(guò)程詳述于實(shí)驗(yàn)部分。
本發(fā)明應(yīng)通過(guò)某些實(shí)施例進(jìn)行解釋，這些實(shí)施例不應(yīng)被視為對(duì)于本發(fā)明范圍的限定。
實(shí)驗(yàn)
除非另有規(guī)定，否則后處理包括在所示的有機(jī)相和水相之間分配反應(yīng)混合物、分層、在無(wú)水硫酸鈉上干燥有機(jī)層以及過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑。除非另外說(shuō)明，否則純化處理包括通過(guò)硅膠色譜技術(shù)進(jìn)行提純，一般使用具有適當(dāng)極性的乙酸乙酯/石油醚混合物作為流動(dòng)相?？梢暻闆r使用不同的洗脫液系統(tǒng)。
除非另外說(shuō)明，否則本發(fā)明的化合物使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的通用方法進(jìn)行分析。本說(shuō)明通過(guò)某些優(yōu)選實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可通過(guò)本說(shuō)明了解其他實(shí)施方案。本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)行了進(jìn)一步的定義，這些實(shí)施例詳述了對(duì)于本發(fā)明化合物的解析過(guò)程。
對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，顯然可以在不偏離本發(fā)明范圍的情況下對(duì)材料和方法作出多項(xiàng)修改。
實(shí)施例
以下實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明化合物的制備過(guò)程，本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例得到了進(jìn)一步的例證，但并不受其限定。
實(shí)施例1：N-((5-(((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：2-(烯丙氧基)-3-溴吡啶。
向3-溴-2-氟吡啶(1.0g，5.68mmol)和烯丙醇(1.96mL，5.0mmol)的干THF(10mL)溶液中分批添加氫化鈉(0.55g，2.4mmol，60％)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。加水(50mL)冷卻反應(yīng)混合物，然后使用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。在硫酸鈉上干燥混合有機(jī)層并對(duì)其進(jìn)行減壓蒸發(fā)，以獲得油質(zhì)的目標(biāo)化合物(1.4g，98％)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。LCMS：m/z 214[M+2]+；1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ8.13-8.00(dd，J＝4.8，1.8Hz，1H)，7.88-7.72(dd，J＝7.6，1.7Hz，1H)，6.88-6.68(dd，J＝7.6，4.9Hz，1H)，6.22-5.97(ddt，J＝17.4，10.5，5.2，5.2Hz，1H)，5.53-5.37(dq，J＝17.2，1.7，1.6，1.6Hz，1H)，5.35-5.20(dq，J＝10.4，1.5，1.4，1.4Hz，1H)，4.99-4.82(dt，J＝5.0，1.7，1.7Hz，2H)。
步驟2：2-(2，2-二甲氧基乙基)異吲哚啉-1，3-二酮。
在室溫下向異苯并呋喃-1，3-二酮(80.0g，0.540mol)的甲苯(1000mL)溶液中先后添加2，2-二甲氧基乙胺(85.10g，0.811mol)和N，N-二異丙基乙基胺(0.187mL，1.080mol)。在120℃的溫度下使用迪安-斯塔克裝置攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物。使用二氯甲烷稀釋得到的殘留物，通過(guò)墊過(guò)濾，然后在硫酸鈉上干燥，再進(jìn)行濃縮處理。用石油醚洗滌得到的粗品，以獲得作為類白色固體的目標(biāo)化合物(100g，79％)。LCMS：m/z無(wú)電離現(xiàn)象；1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ7.89-7.81(m，2H)，7.76-7.68(m，2H)，4.77(td，J＝5.8，0.8Hz，1H)，3.82(dd，J＝5.8，0.8Hz，2H)，3.38(d，J＝0.9Hz，6H)。
步驟3：2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙醛。
在80℃的溫度下攪拌2-(2，2-二甲氧基乙基)異吲哚啉-1，3-二酮(步驟2的產(chǎn)物，100g，0.425mol)的1N HCl(100mL)溶液2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用水(200mL)稀釋，并用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。先后用水(2x200mL)和濃鹽水洗滌混合有機(jī)層，然后在硫酸鈉上干燥并進(jìn)行真空濃縮，以得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(60.0g，75％)。LCMS：m/z190.1[M+H]+；1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ9.66(d，J＝0.8Hz，1H)，7.92-7.88(m，2H)，7.79-7.74(m，2H)，4.57(d，J＝0.8Hz，2H)。
步驟4：2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙醛肟。
在室溫下向經(jīng)過(guò)攪拌的2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙醛(步驟3的產(chǎn)物，4.0g，21.15mmol)的乙醇(40mL)溶液先后添加鹽酸羥胺(2.930g，42.305mmol)和碳酸氫鈉(3.55g，42.305mmol)，然后在室溫下攪拌16小時(shí)。對(duì)溶劑進(jìn)行汽提并加水(50mL)，再使用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。先后用水(100mL)和濃鹽水洗滌混合有機(jī)層，然后在硫酸鈉上干燥并進(jìn)行真空濃縮，以得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(3.2g，74％)。LCMS：m/z204.1[M+H]+；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.36(s，1H)，7.98-7.78(m，4H)，6.83(t，J＝3.8Hz，1H)，4.39(dd，J＝3.9，0.9Hz，2H)。
步驟5：2-((5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)異吲哚啉-1，3-二酮(±)。
在室溫下向2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙醛肟(步驟4的產(chǎn)物，1.3g，6.54mmol)的DMF(20mL)溶液中添加N-氯代丁二酰亞胺(0.96g，7.2mmol)并攪拌3小時(shí)，然后冷卻至0℃，先一次性添加2-(烯丙氧基)-3-溴吡啶(步驟1的產(chǎn)物，1.4g，6.54mmol)，再滴加三乙胺(1.0mL，7.2mmol)的DMF(5mL)溶液超過(guò)10分鐘。在室溫下，再攪拌反應(yīng)混合物36小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水中，使用乙酸乙酯(50mL)萃取，再用水(4x50mL)洗滌乙酸乙酯層。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，以得到殘留物。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝80/20)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.400g，15％)。LCMS：m/z 417.6[M+H]+；1H NMR(300MHz，氯仿-d)8.08-7.99(dd，J＝4.9，1.7Hz，1H)，7.94-7.83(dd，J＝5.5，3.1Hz，2H)，7.83-7.69(ddt，J＝7.1，5.5，2.4，2.4Hz，3H)，6.82-6.71(dd，J＝7.6，4.9Hz，1H)，5.11-4.94(m，1H)，4.53-4.33(qd，J＝11.5，11.5，11.5，4.5Hz，3H)，3.28-3.00(m，3H)。
步驟6：(5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺(±)。
在室溫下，攪拌2-((5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)異吲哚啉-1，3-二酮(±)(步驟5的產(chǎn)物，0.400g，0.960mmol)的水合肼(2mL)懸浮液16小時(shí)。在反應(yīng)混合物中添加乙腈(50mL)，并過(guò)濾產(chǎn)生的沉淀物。減壓蒸發(fā)濾出液，以得到目標(biāo)化合物(0.070g，25％)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。LCMS：m/z287.9[M+2]+。
步驟7：N-((5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在0℃的溫度下，向(5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺(±)(步驟6的產(chǎn)物，0.07g，0.245mmol)和咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸(0.06g，0.367mmol)的DMF(2mL)溶液添加EDCI(0.094g，0.49mmol)、HOBT(0.066g，0.49mmol)和DIPEA(0.17mL，0.98mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。使用乙酸乙酯(250mL)稀釋反應(yīng)混合物。用碳酸氫鈉水溶液(50mL)和濃鹽水(3x50mL)洗滌有機(jī)相，然后在硫酸鈉上干燥并進(jìn)行真空濃縮，以得到殘留物。使用硅膠柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝96/4)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到作為粘性固體的目標(biāo)化合物(0.07g，66％)。LCMS：m/z431.40[M+2]+。
步驟8：N-((5-(((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在氮?dú)猸h(huán)境中，在室溫下向之前脫氣的N-((5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(步驟7的產(chǎn)物，0.070g，0.163mmol)的二氧六環(huán)∶水(3∶1)(3mL)溶液添加1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基)-1H-吡唑(0.050g，0.244mmol)，再添加碳酸鉀(0.067g，0.489mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.013g，0.016mmol)。在100℃的溫度下，將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)。用水(10mL)稀釋反應(yīng)混合物，再用乙酸乙酯(50mL)萃取，然后用水(4x50mL)洗滌乙酸乙酯層。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相，并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮。使用硅膠柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝96/4)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.035g，50％)。LCMS：m/z433.0[M+H]+；HPLC：94.02％；1HNMR(600MHz，cdcl3)δ8.82-8.75(d，J＝1.7Hz，1H)，8.00-7.94(dd，J＝5.0，1.8Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.83(s，1H)，7.73-7.65(m，2H)，7.65(s，1H)，7.61-7.56(d，J＝9.4Hz，1H)，7.46-7.37(dd，J＝9.4，1.7Hz，1H)，7.09-6.98(q，J＝7.7，7.7，5.7Hz，1H)，6.94-6.84(dd，J＝7.4，4.9Hz，1H)，5.15-5.04(ddt，J＝10.5，6.9，3.4，3.4Hz，1H)，4.62-4.53(dd，J＝11.8，2.8Hz，1H)，4.53-4.45(dd，J＝11.8，3.8Hz，1H)，4.43-4.27(qd，J＝16.9，16.9，16.8，5.6Hz，2H)，3.96(s，3H)，3.27-3.13(dd，J＝17.4，11.4Hz，1H)，3.06-2.93(dd，J＝17.4，6.8Hz，1H)。
實(shí)施例2：N-((5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
如實(shí)施例1步驟8中所述，在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝3∶1)(30mL)中用(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.207g，1.460mmol)處理N-((5-(((3-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(實(shí)施例1步驟7的產(chǎn)物，0.420g，0.980mmol)。使用預(yù)備的HPLC對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.191g，43％W/W)。LCMS：m/z447.1[M+H]+；HPLC：94.33％；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ9.06-8.90(d，J＝1.7Hz，1H)，8.63-8.44(d，J＝2.5Hz，1H)，8.31-8.07(m，2H)，8.05-7.88(td，J＝8.0，7.5，2.6Hz，1H)，7.82-7.60(m，5H)，7.15-6.97(m，2H)，5.15-4.98(m，1H)，4.76-4.61(dd，J＝12.0，2.6Hz，1H)，4.52-4.41(dd，J＝16.9，5.8Hz，1H)，4.39-4.25(m，2H)，3.35-3.19(m，1H)，3.10-2.99(dd，J＝17.4，6.6Hz，1H)。預(yù)備的HPLC方法：液相色譜柱：Zorbax Eclipse XDB C18(21.2x250mm x5μm)；0.1％TFA的水(A)和乙腈(B)溶液；等度洗脫流動(dòng)相：90∶10。
實(shí)施例3：N-((5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：4-(烯丙氧基)-3-碘吡啶。
在回流溫度下，3-碘-4-羥基吡啶(0.500g，2.250mmol)在丙酮(20mL)中與烯丙基溴(0.409g，3.380mmol)、碳酸鉀(0.780g，5.630mmol)和碘化鉀(0.016g，0.100mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過(guò)濾，再對(duì)濾出液進(jìn)行減壓濃縮。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.400g，67％)。LCMS：m/z261.9[M+1]+；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.85(d，J＝2.4Hz，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.41-6.38(d，J＝7.2Hz，1H)，5.97-5.86(m，1H)，5.43-5.40(dd，J＝9.6，1.5Hz，1H)，5.29-5.25(dd，J＝10.8，1.0Hz，1H)，4.40-4.38(m，2H)。
步驟2：叔丁基(2-(異亞硝基)乙基)氨基甲酸鹽(E和Z異構(gòu)體的混合物)。
在乙醇(200mL)中溶解叔丁基(2-氧乙基)氨基甲酸鹽(18.5g，116mmol)、鹽酸羥胺(13.8g，232mmol)和碳酸氫鈉(24.3g，232mmol)，然后在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)。減壓蒸餾該溶劑。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，再用水(2x100mL)洗滌。在無(wú)水硫酸鈉上干燥有機(jī)相并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，得到作為液體(E和Z異構(gòu)體的混合物)的目標(biāo)化合物(18.5g，粗品)。在不進(jìn)行任何進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟3：叔丁基((5-(((3-碘吡啶-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
叔丁基(2-(異亞硝基)乙基)氨基甲酸鹽(步驟2的產(chǎn)物，0.300g，1.724mmol)在DMF(20mL)中先后與N-氯代丁二酰亞胺(0.346g，2.586mmol)和4-(烯丙氧基)-3-碘吡啶(步驟1的產(chǎn)物，0.400g，1.550mmol)發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例1步驟5所述。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝50/50)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.200g，27％)。LCMS：m/z434.0[M+H]+；1HNMR(300MHz，氯仿-d)δ7.99-7.86(d，J＝2.2Hz，1H)，7.46-7.31(d，J＝7.1Hz，1H)，6.44-6.31(d，J＝7.4Hz，1H)，5.06-4.78(m，2H)，4.19-3.76(m，4H)，3.33-3.14(m，1H)，2.86-2.65(dd，J＝17.5，6.8Hz，1H)，1.56(s，9H)。
步驟4：叔丁基((5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在惰性氣體環(huán)境中，在室溫下向叔丁基((5-(((3-碘吡啶-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.200g，0.462mmol)的1，4-二氧六環(huán)∶水(9∶1)(20mL)脫氣溶液添加(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.078g，0.554mmol)，然后再添加碳酸鉀(0.160g，1.150mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.038g，0.046mmol)。在90℃的溫度下，將產(chǎn)生的反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(50mL)稀釋，再用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。分離有機(jī)層并在無(wú)水硫酸鈉上干燥，然后對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮。使用中性氧化鋁柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝90/5)對(duì)得到的殘留物進(jìn)行提純，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.100g，54％)。LCMS：m/z403.1[M+H]+；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ8.37(s，1H)，8.27-8.13(t，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.71-(s，1H)，7.51-7.41(d，J＝7.1Hz，1H)，6.99-6.86(d，J＝8.4Hz，1H)，6.57-6.46(d，J＝7.5Hz，1H)，5.09-4.87(m，2H)，4.29-3.86(m，4H)，3.35-3.16(dd，J＝17.6，10.7Hz，1H)，2.87-2.71(dd，J＝17.5，6.6Hz，1H)，2.01(s，9H)。
步驟5：(5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
在0℃的溫度下，向叔丁基((5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.100g，2.487mmol)的1，4-二氧六環(huán)(10mL)溶液滴加1，4-dioxane.HCl(5mL)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)，然后對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮。用干乙醚(2x10mL)洗滌得到的固體，以獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.060g，粗品)。LCMS：m/z303.1[M+H]+。
步驟6：N-((5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有HATU(0.113g，0.297mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(0.100mL，0.495mmol)的情況下，(5-(((6’-氟-[3，3’-聯(lián)吡啶]-4-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟5的產(chǎn)物，0.060g，0.198mmol)在DMF(10mL)中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸(0.048g，0.297mmol)發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例1步驟7的合成部分所述)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.005g，6％)。LCMS：m/z447.1[M+H]+；HPLC：87.92％；1HNMR(400MHz，甲醇-d4)δ9.24(s，1H)，8.37-8.23(m，2H)，8.23-8.02(m，4H)，7.96-7.81(m，2H)，7.11-7.00(dd，J＝8.7，2.7Hz，1H)，6.57-6.47(d，J＝7.4Hz，1H)，5.14(s，1H)，4.43-4.25(m，2H)，4.20-4.04(dd，J＝14.5，6.1Hz，1H)，3.47-3.10(m，2H)，3.07-2.91(m，1H)。
實(shí)施例4：N-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：3-(烯丙氧基)-2-溴吡啶。
在回流溫度下，2-溴-3-羥基吡啶(2.0g，11.494mmol)在丙酮(50mL)中與烯丙基溴(2.08g，17.241mmol)、碳酸鉀(3.97g，28.730mmol)和碘化鉀(0.016g，0.100mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)2小時(shí)。在室溫下過(guò)濾反應(yīng)混合物；然后減壓濃縮濾出液。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝90/10)對(duì)得到的殘留物進(jìn)行提純，獲得液態(tài)的目標(biāo)化合物(1.80g，74％)。LCMS：m/z216.0[M+2]+；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ8.04-7.93(dd，J＝4.6，1.6Hz，1H)，7.34-7.03(m，2H)，6.17-5.87(ddt，J＝17.2，10.3，5.0，5.0Hz，1H)，5.61-5.40(dq，J＝17.2，1.6，1.6，1.6Hz，1H)，5.40-5.26(dq，J＝10.7，1.5，1.5，1.5Hz，1H)，4.69-4.44(dt，J＝4.8，1.6，1.6Hz，2H)。
步驟2：叔丁基((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在室溫下，向叔丁基(2-(異亞硝基)乙基)氨基甲酸鹽(實(shí)施例3步驟2的產(chǎn)物，1.770g，10.190mmol)的DMF(50mL)溶液添加NCS(1.710g，12.740mmol)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后冷卻至0℃，一次性添加3-(烯丙氧基)-2-溴吡啶(步驟1的產(chǎn)物，1.80g，8.490mmol)，再滴加三乙胺(3.0mL，21.230mmol)。在室溫下，再攪拌反應(yīng)混合物18小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，然后使用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相，并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝50/50)對(duì)得到的殘留物進(jìn)行提純，獲得液態(tài)的目標(biāo)化合物(1.20g，49.5％)。LCMS：m/z285.9[M-100]+；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ8.08-8.01(m，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.20-7.16(m，1H)，5.82-5.62(m，2H)，5.56-5.37(m，2H)，4.54-4.38(m，2H)，4.13-4.03(m，1H)，3.36-3.26(m，1H)，1.71-1.57(m，9H)。
步驟3：(5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
在0℃的溫度下，向叔丁基((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，1.20g，3.10mmol)的1，4-二氧六環(huán)(10mL)溶液中滴加1，4-dioxane.HCl(15mL)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)，然后對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，得到粗固體。用干乙醚(2x10mL)洗滌得到的固體，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.900g，粗品)。LCMS：m/z(未觀察到電離現(xiàn)象)。將得到的產(chǎn)物帶入下一步。
步驟4：N-((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有HATU(1.600g，4.190mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(1.210mL，6.980mmol)的情況下，(5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.900g，2.800mmol)在DMF(20mL)中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸(0.544g，3.350mmol)發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例1步驟7的合成部分所述)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.900g，75％)。LCMS：m/z433.0[M+2]+；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ8.80-8.72(d，J＝1.7Hz，1H)，8.00-7.91(dd，J＝4.4，1.7Hz，1H)，7.67-7.63(d，J＝1.4Hz，1H)，7.63-7.55(m，2H)，7.41-7.35(dd，J＝9.5，1.8Hz，1H)，7.17-7.09(m，2H)，6.84-6.69(m，1H)，5.12-4.88(tt，J＝8.0，8.0，3.6，3.6Hz，1H)，4.54-4.34(t，J＝4.8，4.8Hz，2H)，4.28-4.11(dd，J＝10.3，3.8Hz，1H)，4.14-3.96(dd，J＝10.3，3.3Hz，1H)，3.31-3.13(d，J＝8.7Hz，2H)。
步驟5：N-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有碳酸鉀(0.363g，1.100mmol)和[1’1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.086g，0.110mmol)的情況下，N-((5-(((2-溴吡啶-3基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.450g，1.050mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝9∶1)(20mL)中與(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.222g，1.570mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為90℃，具體如實(shí)施例1步驟8的合成部分所述。使用預(yù)備的HPLC對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.092g，36％W/W)。LCMS：m/z447.1[M+H]+；HPLC：93.38％；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ9.05-8.98(d，J＝1.7Hz，1H)，8.88-8.78(d，J＝2.5Hz，1H)，8.70(s，1H)，8.61-8.52(ddd，J＝8.6，7.6，2.5Hz，1H)，8.40-8.33(dd，J＝3.4，2.5Hz，1H)，7.82-7.74(dd，J＝9.5，1.9Hz，1H)，7.73-7.60(m，3H)，7.34-7.29(m，1H)，7.21-7.01(dd，J＝8.6，2.5Hz，1H)，5.15-5.00(dd，J＝12.0，6.7Hz，1H)，4.60-4.46(dd，J＝16.7，5.9Hz，1H)，4.43-4.27(m，2H)，4.22-4.08(dd，J＝10.1，1.8Hz，1H)，3.46-3.29(dd，J＝17.5，12.1Hz，1H)，3.24-3.10(dd，J＝17.5，6.7Hz，1H)。
預(yù)備的HPLC方法：液相色譜柱：Zorbax EclipseXDB C18(21.2x250mm x 5μm)；10mm NH4OAc的水(A)和乙腈(B)溶液；等度洗脫流動(dòng)相：90∶10。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟5的產(chǎn)物，0.080g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例4a和4b)。方法：液相色譜柱：Phenomenex LuxCellulose-4(250mm x 810mm x 5μm)；己烷：0.1％DEA的甲醇∶乙醇溶液：等度洗脫流動(dòng)相(50∶50)；流速：7mL/min。
實(shí)施例4a：N-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.029g；手性HPLC：96.15％(保留時(shí)間-10.948min)，HPLC：94.07％；LCMS：m/z447.1[M+H]+。
實(shí)施例4b：N-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)。
生成量：0.029g；手性HPLC：96.74％(保留時(shí)間-14.71min)，HPLC：97.04％；LCMS：m/z447.1[M+H]+。
實(shí)施例5：N-((5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有碳酸鉀(0.363g，2.620mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.086g，0.105mmol)的情況下，N-((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(實(shí)施例4步驟4的產(chǎn)物，0.450g，1.050mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝9∶1)(20mL)中與1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.328g，1.570mmol)發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例1步驟8的合成部分所述。使用中性氧化鋁柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝90/5)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.045g，10％)。LCMS：m/z432.2[M+H]+；HPLC：94.95％；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ8.82-8.76(d，J＝1.4Hz，1H)，8.24-8.18(dd，J＝4.8，1.3Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.09(s，1H)，7.75-7.67(d，J＝1.3Hz，1H)，7.67-7.57(m，2H)，7.50-7.43(dd，J＝9.4，1.9Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.22-7.16(dd，J＝8.2，1.3Hz，1H)，7.14-7.06(dd，J＝8.3，4.7Hz，1H)，5.16-5.05(t，J＝9.4，9.4Hz，1H)，4.54-4.29(m，3H)，4.15-4.02(dd，J＝10.3，2.9Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.40-3.23(dd，J＝17.4，11.4Hz，1H)，3.23-3.06(m，1H)。
實(shí)施例6：N-((5-(((2-(3-氟-4-(甲基氨基甲酰)苯基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有碳酸鉀(0.192g，1.392mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.037g，0.046mmol)的情況下，N-((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(實(shí)施例4步驟4的產(chǎn)物，0.200g，0.464mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)(12mL)中與2-氟-N-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.155g，0.557mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為100℃，具體如實(shí)施例1步驟8所述。使用CombiFlash柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝9/91)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.061g，26％)。LCMS：m/z503.2[M+H]+；HPLC：94.03％；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，8.99-8.93(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，8.32-8.26(d，J＝4.4Hz，2H)，8.07(s，1H)，7.88-7.77(m，2H)，7.71-7.58(m，5H)，7.45-7.37(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，4.97-4.89(dtd，J＝11.1，7.4，7.2，4.0Hz，1H)，4.27-4.11(m，4H)，3.25-3.13(dd，J＝17.6，11.1Hz，1H)，2.93-2.84(dd，J＝17.5，7.5Hz，1H)，2.82-2.74(d，J＝4.6Hz，3H)。
實(shí)施例7：N-((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：叔丁基((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀(0.535g，3.883mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.105g，0.129mmol)的情況下，叔丁基((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(實(shí)施例4步驟2的產(chǎn)物，0.500g，1.294mmol)在1，4二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)(20mL)中與吡啶-3-硼酸(0.198g，1.553mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為100℃，具體如實(shí)施例3步驟4的合成部分所述。使用CombiFlash柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝10/90)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.390g，78％)，并將該化合物帶入下一步。
步驟2：(5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
叔丁基((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟1的產(chǎn)物，0.390g，1.015mmol)與dioxane.HCl發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟5所述)，得到目標(biāo)化合物(0.320g，98.5％)。
步驟3：N-((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑(0.485g，1.096mmol)和DIPEA(0.525mL，2.991mmol)的情況下，(5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.320g，0.997mmol)在DMF(10mL)中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸(0.193g，1.197mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為室溫。用水(10mL)稀釋反應(yīng)混合物，再用乙酸乙酯(50mL)萃取，然后用水洗滌(4x50mL)。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，以得到殘留物。使用CombiFlash柱色譜法(二氯甲烷/甲醇/三乙胺＝91/8/1)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.150g，35％)。LCMS：m/z428.7[M+H]+；HPLC：97.93％；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.16-9.12(d，J＝1.8Hz，1H)，9.11(s，1H)，9.05-8.99(t，J＝5.5，5.5Hz，1H)，8.61-8.54(dt，J＝3.3，1.5，1.5Hz，1H)，8.37-8.31(d，J＝4.5Hz，1H)，8.30-8.25(m，1H)，8.11(s，1H)，7.68-7.60(m，4H)，7.51-7.45(dd，J＝7.9，4.8Hz，1H)，7.45-7.39(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，5.01-4.91(dq，J＝10.4，5.6，5.6，5.4Hz，1H)，4.28-4.12(m，4H)，3.27-3.15(dd，J＝17.6，11.2Hz，1H)，3.00-2.86(dd，J＝17.7，7.1Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟3的產(chǎn)物，0.070g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例7a和7b)。方法：液相色譜柱：CHIRALPAK-IA(250x10mm，5μm)；己烷∶0.1％DEA的乙醇溶液：等度洗脫流動(dòng)相(62∶38)；流速：7mL/min。
實(shí)施例7a：N-((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.018g；手性HPLC：98.54％(保留時(shí)間-15.419min)，HPLC：97.55％；LCMS：m/z429.0[M+H]+。
實(shí)施例7b：N-((5-(([2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺((異構(gòu)體2)。
生成量：0.018g；手性HPLC：99.42％(保留時(shí)間-17.955min)，HPLC：99.42％；LCMS：m/z429.0[M+H]+。
實(shí)施例8：N-((5-(((6’-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有碳酸鉀(0.096g，0.696mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.019g，0.023mmol)的情況下，N-((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)(實(shí)施例4步驟4的產(chǎn)物，0.100g，0.232mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)(5mL)中與2-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡啶(0.066g，0.278mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為90℃，具體如實(shí)施例1步驟8的合成部分所述。使用預(yù)備的TLC(二氯甲烷/甲醇＝95/5)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.033g，30％)。LCMS：m/z463.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(d，J＝1.7Hz，1H)，8.98(t，J＝5.8Hz，1H)，8.94(d，J＝2.4Hz，1H)，8.37-8.322(m，2H)，8.08(d，J＝1.2Hz，1H)，7.67-7.60(m，5H)，7.448(dd，J＝8.7，2.9Hz，1H)，4.94(d，J＝13.6Hz，1H)，4.37-4.12(m，4H)，3.21(dd，J＝17.7，11.2Hz，1H)，2.94(dd，J＝17.6，7.3Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(實(shí)施例8的產(chǎn)物，0.024g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例8a和8b)。方法：液相色譜柱：LuxCellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶[乙醇∶異丙醇(8∶2)]等度洗脫流動(dòng)相(30∶70)；流速：20mL/min。
實(shí)施例8a：N-((5-(((6’-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.008g；手性HPLC：98.71％(保留時(shí)間-15.777min)，HPLC：98.51％；LCMS：m/z463.0[M+H]+。
實(shí)施例8b：N-((5-(((6’-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)。
生成量：0.008g；手性HPLC：92.67％(保留時(shí)間-22.224min)，HPLC：93.60％；LCMS：m/z463.1[M+H]+。
實(shí)施例9：N-((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)
步驟1：3-(烯丙氧基)-2-氯-5-氟吡啶。
在伴有碳酸鉀和碘化鉀的情況下，2-氯-5-氟吡啶-3-羥(0.500g，3.389mmol)在丙酮中與烯丙基溴發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟1所述)，得到液態(tài)的目標(biāo)化合物(0.630g，99％)。LCMS：m/z188.1[M+1]+。
步驟2：叔丁基((5-(((2-氯-5-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
3-(烯丙氧基)-2-氯-5-氟吡啶(步驟1的產(chǎn)物，0.630g，3.368mmol)在DMF中與NCS發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例4步驟2所述)，得到液態(tài)的目標(biāo)化合物(0.88g，66％)。LCMS：m/z360.2[M+H]+。
步驟3：叔丁基((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
向預(yù)先通入氮?dú)?持續(xù)15分鐘)的叔丁基((5-(((2-氯-5-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.100g，0.278mmol)、(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.047g，0.334mmol)和K3PO4(0.176g，0.834mmol)的1，4-二氧六環(huán)∶水(4∶1)(5ML)溶液添加Pd2(dba)3(0.0127g，0.0139mmol)和PCy3(0.0093g，0.033mmol)。在100℃的溫度下，將得到的反應(yīng)混合物在密封管內(nèi)攪拌16小時(shí)。在TLC的反應(yīng)結(jié)束之后，通過(guò)Celite墊過(guò)濾反應(yīng)混合物。用乙酸乙酯(10mL)稀釋濾出液，并用濃鹽水清洗，然后在Na2SO4上干燥，再進(jìn)行濃縮。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝40/40)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.050g，42.0％)。LCMS：m/z421.3[M+H]+。
步驟4：(5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.050g，0.118mmol)，如實(shí)施例3步驟5所述。用干乙醚洗滌得到的固體，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.030g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟5：N-((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.030g，0.084mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例7步驟3所述。使用預(yù)備的HPLC[方法：液相色譜柱：X Bridge C-18(19mm x 150mm)，水∶乙腈(1∶1)，流速：5ml/min]對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得目標(biāo)化合物(0.015g，38％)。LCMS：m/z465.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)69.13(d，J＝1.7Hz，1H)，8.97(t，J＝5.8Hz，1H)，8.71(d，J＝2.4Hz，1H)，8.42(td，J＝8.4，2.6Hz，1H)，8.34(d，J＝2.2Hz，1H)，8.08(d，J＝1.2Hz，1H)，7.73(dd，J＝10.8，2.3Hz，1H)，7.69-7.59(m，3H)，7.28(dd，J＝8.7，2.9Hz，1H)，4.94(d，J＝13.6Hz，1H)，4.37-4.12(m，4H)，3.22(dd，J＝17.7，11.2Hz，1H)，2.89(dd，J＝17.6，7.3Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟5的產(chǎn)物，0.170g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例9a和9b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶[乙醇∶異丙醇(8∶2)]等度洗脫流動(dòng)相(50∶50)；流速：20mL/min。
實(shí)施例9a：N-((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.050g；手性HPLC：96.47％(保留時(shí)間-11.691min)，HPLC：96.11；LCMS：m/z465.3[M+H]+。
實(shí)施例9b：N-((5-(((5，6’-二氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)。
生成量：0.070g；手性HPLC：97.42％(保留時(shí)間-15.442min)，HPLC：97.71；LCMS：m/z465.3[M+H]+。
實(shí)施例10：N-((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)
步驟1：3-(烯丙氧基)-2-氯-6-碘吡啶
在伴有碳酸鉀和碘化鉀的情況下，2-氯-6-碘吡啶-3-羥(4.65g，18.199mmol)在丙酮中與烯丙基溴發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟1所述)，得到液態(tài)的目標(biāo)化合物(5.3g，98％)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將產(chǎn)物帶入下一步。
步驟2：叔丁基((5-(((2-氯-6-碘吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)甲酰胺(±)
3-(烯丙氧基)-2-氯-6-碘吡啶(步驟1的產(chǎn)物，5.3g，17.935mmol)在DMF中與NCS發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例4步驟2所述)，得到液態(tài)的目標(biāo)化合物(5.1g，61％)。LCMS：m/z368.1[M-100]+。
步驟3：叔丁基((5-(((2-氯-6-氰基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
向叔丁基((5-(((2-氯-6-碘吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)甲酰胺(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.500g，1.069mmol)和氰化鋅(0.094g，0.801mmol)的DMF溶液中通入氬氣，持續(xù)15分鐘，然后在反應(yīng)管中添加Tetrakis(0.098g，0.085mmol)，在80℃的溫度下密封攪拌2小時(shí)。在TLC的反應(yīng)結(jié)束之后，通過(guò)Celite墊過(guò)濾反應(yīng)混合物。在Na2SO4上干燥濾出液，然后對(duì)其進(jìn)行濃縮。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝60/40)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.240g，粗品)。LCMS：m/z267.2[M-100]+。
步驟4：叔丁基((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有Pd2(dba)3、PCy3和K3PO4的情況下，在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)中用(6-氟吡啶-3-基)硼酸處理叔丁基((5-(((2-氯-6-氰基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.240g，0.653mmol)，如實(shí)施例9步驟3所述。使用硅膠柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝20/80)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.090g，粗品)。LCMS：m/z328.3[M-100]+。
步驟5：3-((3-(氨甲基)-4，5-二氫異噁唑-5-基)甲氧基)-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-6-甲腈鹽酸鹽(±)。
如實(shí)施例3步驟5所述，用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.090g，粗品)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.060g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟6：N-((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，3-((3-(氨甲基)-4，5-二氫異噁唑-5-基)甲氧基)-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-6-甲腈鹽酸鹽(±)(步驟5的產(chǎn)物，0.060g，0.164mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例7步驟3所述。使用預(yù)備的TLC(二氯甲烷/甲醇＝95/5X3)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，得到目標(biāo)化合物(0.020g，26％)。LCMS：m/z 472.0[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.12(t，J＝1.4Hz，1H)，8.95(t，J＝5.7Hz，1H)，8.74(d，J＝2.4Hz，1H)，8.45(td，J＝8.3，2.5Hz，1H)，8.15-8.02(m，2H)，7.81(d，J＝8.7Hz，1H)，7.64(dd，J＝14.2，1.3Hz，3H)，7.32(dd，J＝8.6，2.8Hz，1H)，4.95(d，J＝10.5Hz，1H)，4.45-4.05(m，4H)，3.28-3.09(m，1H)，2.90(dd，J＝17.7，7.3Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟6的產(chǎn)物，0.600g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例10a和10b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶[甲醇∶異丙醇(8∶2)]等度洗脫流動(dòng)相(70∶30)；流速：10mL/min。
實(shí)施例10a：N-((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.270g；手性HPLC：98.70％(保留時(shí)間-16.431min)，HPLC：95.78；LCMS：m/z472.3[M+H]+。
實(shí)施例10b：N-((5-(((6-氰基-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)
生成量：0.180g；手性HPLC：95.83％(保留時(shí)間-18.691min)，HPLC：91.63；LCMS：m/z472.3[M+H]+。
實(shí)施例11：N-((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：3-(烯丙氧基)-2-氯-5-甲基吡啶。
在伴有碳酸鉀和碘化鉀的情況下，2-氯-5-甲基吡啶-3-羥(1.5g，10.447mmol)在丙酮中與烯丙基溴發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例3步驟1所述。使用CombiFlash柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝75/25)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得目標(biāo)化合物(1.56g，80％)。LCMS：m/z 184.2[M+H]+。
步驟2：叔丁基((5-(((2-氯-5-甲基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
如實(shí)施例4步驟2的合成部分所述，3-(烯丙氧基)-2-氯-5-甲基吡啶(步驟1的產(chǎn)物，1.55g，8.44mmol)在DMF中與NCS發(fā)生反應(yīng)，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(1.45g，48％)。在不進(jìn)行任何解析的情況下將該產(chǎn)物帶入下一步。
步驟3：叔丁基((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有Pd2(dba)3、PCy3和K3PO4的情況下，在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)中用(6-氟吡啶-3-基)硼酸處理叔丁基((5-(((2-氯-5-甲基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.500g，1.405mmol)，如實(shí)施例9步驟3所述，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.350g，60％)。LCMS：m/z417.1[M+H]+。
步驟4：(5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
如實(shí)施例3步驟5的合成部分所述，用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.350g，0.840mmol)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.250g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟5：N-((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.250g，0.708mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例7步驟3所述)，得到目標(biāo)化合物(0.120g，37％)。LCMS：m/z461.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(t，J＝1.4Hz，1H)，8.97(t，J＝5.7Hz，1H)，8.75(d，J＝2.4Hz，1H)，8.46(td，J＝8.4，2.5Hz，1H)，8.19-8.13(m，1H)，8.07(d，J＝1.3Hz，1H)，7.70-7.58(m，3H)，7.53-7.46(m，1H)，7.25(dd，J＝8.7，2.8Hz，1H)，4.95(td，J＝10.5，5.0Hz，1H)，4.34-4.06(m，4H)，3.21(dd，J＝17.6，11.1Hz，1H)，2.89(dd，J＝17.6，7.3Hz，1H)，2.33(s，3H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟5的產(chǎn)物，0.090g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例11a和11b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶乙醇；等度洗脫流動(dòng)相(40∶60)；流速：9mL/min。
實(shí)施例11a：N-((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)。
生成量：0.045g；手性HPLC：96.02％(保留時(shí)間15.872min)，HPLC：97.47；LCMS：m/z460.9[M+H]+。
實(shí)施例11b：N-((5-(((6’-氟-5-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)。
生成量：0.035g；手性HPLC：95.19％(保留時(shí)間-19.250min)，HPLC：95.74；LCMS：m/z461.0[M+H]+。
實(shí)施例12：N-((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
步驟1：3-(烯丙氧基)-2-溴-6-甲基吡啶。
在伴有碳酸鉀和碘化鉀的情況下，2-溴-6-甲基吡啶-3-羥(2.0g，10.63mmol)在丙酮中與烯丙基溴發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟1所述)，得到目標(biāo)化合物(2.47g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟2：叔丁基((5-(((2-溴-6-甲基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
如實(shí)施例4步驟2所述，3-(烯丙氧基)-2-溴-6-甲基吡啶(步驟1的產(chǎn)物，2.47g，10.82mmol)在DMF中與NCS發(fā)生反應(yīng)，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(1.4g，32％)。LCMS：m/z402.2[M+H]+。
步驟3：叔丁基((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物的情況下，叔丁基((5-(((2-溴-6-甲基吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.500g，1.249mmol)與吡啶-3-基硼酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟4所述)，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.450g，86.0％)。LCMS：m/z417.3[M+H]+。
步驟4：(5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
如實(shí)施例3步驟5所述，用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.450g，1.08mmol)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.380g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟5：N-((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.380g，1.077mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)，如實(shí)施例7步驟3所述。使用預(yù)備的HPLC方法：液相色譜柱：Gemini NXC-18(21.2x250mm，10mM)，醋酸銨水溶液∶[乙腈∶甲醇(1∶1)]，流速：15ml/min對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.120g，24％)。LCMS：m/z461.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.12(t，J＝1.4Hz，1H)，8.95(q，J＝7.0，6.3Hz，1H)，8.75(d，J＝2.4Hz，1H)，8.46(td，J＝8.4，2.5Hz，1H)，8.07(d，J＝1.3Hz，1H)，7.69-7.58(m，3H)，7.54(d，J＝8.6Hz，1H)，7.30-7.20(m，2H)，4.92(ddq，J＝10.7，6.6，4.0，3.4Hz，1H)，4.30-4.00(m，4H)，3.26-3.10(m，1H)，2.88(dd，J＝17.6，7.3Hz，1H)，2.46(s，3H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟5的產(chǎn)物，0.090g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例12a和12b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶乙醇；等度洗脫流動(dòng)相(30∶70)；流速：9mL/min。
實(shí)施例12a：N-((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)
生成量：0.040g；手性HPLC：98.5％(保留時(shí)間-14.451min)，HPLC：98.77％；LCMS：m/z461.1[M+H]+。
實(shí)施例12b：N-((5-(((6’-氟-6-甲基-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)
生成量：0.040g；手性HPLC：93.13％(保留時(shí)間-20.649min)，HPLC：99.57；LCMS：m/z460.8[M+H]+。
實(shí)施例13：N-((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)
步驟1：3-(烯丙氧基)-5-氯-2-碘吡啶。
在伴有碳酸鉀和碘化鉀的情況下，5-氯-2-碘吡啶-3-羥(根據(jù)US2012/238548 A1合成)(2.40g，9.391mmol)在丙酮中與烯丙基溴發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟1所述)，得到液態(tài)的目標(biāo)化合物(2.6g，93％)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將得到的產(chǎn)物帶入下一步。
步驟2：叔丁基((5-(((5-氯-2-碘吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
如實(shí)施例4步驟2所述，3-(烯丙氧基)-5-氯-2-碘吡啶(步驟1的產(chǎn)物，2.6g，8.798mmol)在DMF中與NCS發(fā)生反應(yīng)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(1.6g，39％)。LCMS：m/z368.1[M+H]+。
步驟3：叔丁基((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物的情況下，叔丁基((5-(((5-氯-2-碘吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.400g，0.855mmol)與吡啶-3-基硼酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟4的合成部分所述)，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.350g，97.0％)。LCMS：m/z419.1[M+H]+。
步驟4：(5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.350g，0.835mmol)，如實(shí)施例3步驟5所述。用干乙醚洗滌得到的固體，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.300g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟5：N-((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟4的產(chǎn)物，0.300g，0.838mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例7步驟3所述)，得到白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.150g，37％)。LCMS：m/z463.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14(s，1H)，9.09-8.97(m，2H)，8.58(dd，J＝4.6，1.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H)，8.25(dt，J＝8.0，1.9Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.84(d，J＝2.2Hz，1H)，7.71-7.60(m，3H)，7.49(dd，J＝8.0，4.7Hz，1H)，4.96(d，J＝9.6Hz，1H)，4.41-4.11(m，4H)，3.21(dd，J＝17.7，11.3Hz，1H)，2.90(dd，J＝17.4，7.3Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟5的產(chǎn)物，0.150g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例13a和13b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶[甲醇∶異丙醇(1∶1)]等度洗脫流動(dòng)相(50∶50)；流速：9mL/min。
實(shí)施例13a：N-((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)
生成量：0.045g；手性HPLC：98.35％(保留時(shí)間-18.443min)，HPLC：97.1％；LCMS：m/z462.9[M+H]+。
實(shí)施例13b：N-((5-(((5-氯-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)
生成量：0.055g；手性HPLC：98.5％(保留時(shí)間-27.244min)，HPLC：99.02％；LCMS：m/z462.9[M+H]+。
實(shí)施例14：N-((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)
步驟1：叔丁基((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物的情況下，叔丁基((5-(((5-氯-2-碘吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(實(shí)施例13步驟2的產(chǎn)物，0.400g，0.855mmol)與(6-氟吡啶-3-基)硼酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例3步驟4所述)，得到作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.300g，80％)。LCMS：m/z437.3[M+H]+。
步驟2：(5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟1的產(chǎn)物，0.300g，0.686mmol)，如實(shí)施例3步驟5所述。用干乙醚洗滌得到的固體，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.150g，58％)。將得到的產(chǎn)物帶入下一步。
步驟3：N-((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.150g，0.401mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例7步驟3所述)，得到白色固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.045g，23％)。LCMS：m/z481.3[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.13(t，J＝1.4Hz，1H)，8.97(t，J＝5.7Hz，1H)，8.75(d，J＝2.4Hz，1H)，8.46(td，J＝8.3，2.5Hz，1H)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝1.3Hz，1H)，7.86(d，J＝2.0Hz，1H)，7.69-7.59(m，3H)，7.29(dd，J＝8.6，2.8Hz，1H)，4.95(ddt，J＝10.7，6.5，3.7Hz，1H)，4.27(ddd，J＝38.1，10.4，4.4Hz，4H)，3.22(dd，J＝17.6，11.1Hz，1H)，2.88(dd，J＝17.6，7.2Hz，1H)。
此外，使用預(yù)備的手性HPLC分離外消旋混合物(步驟3的產(chǎn)物，0.420g)，得到兩種分離的對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例14a和14b)。方法：液相色譜柱：Lux Cellulose-4(250x10mm，5μm)；己烷∶0.2％的二乙胺乙醇溶液：等度洗脫流動(dòng)相(50∶50)；流速：8mL/min。
實(shí)施例14a：N-((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體1)
生成量：0.140g；手性HPLC：97.30％(保留時(shí)間-15.257min)，HPLC：96.26％；LCMS：m/z481.2[M+H]+。
實(shí)施例14b：N-((5-(((5-氯-6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(異構(gòu)體2)
生成量：0.140g；手性HPLC：97.77％(保留時(shí)間-18.959min)，HPLC：97.90％；LCMS：m/z480.9[M+H]+。
實(shí)施例15：N-((5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)
步驟1：叔丁基((5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)
在伴有Pd2(dba)3、PCy3和K3PO4的情況下，在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)中用吡啶-3-基硼酸處理叔丁基((5-(((2-氯-5-氟吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(實(shí)施例9步驟2的產(chǎn)物，0.480g，1.337mmol)，如實(shí)施例9步驟3所述。使用CombiFlash柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝70/30)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得作為類白色固體的目標(biāo)化合物(0.360g，66％)。將得到的產(chǎn)物帶入下一步。
步驟2：(5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)
用1，4-dioxane.HCl處理叔丁基((5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟1的產(chǎn)物，0.360g，0.894mmol)，如實(shí)施例3步驟5的合成部分所述。用干乙醚洗滌得到的固體，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.300g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟3：N-((5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(±)。
在伴有BOP試劑和DIPEA的情況下，(5-(((5-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.300g，0.885mmol)在DMF中與咪唑并[1，2-a]吡啶-6-羧酸發(fā)生反應(yīng)(如實(shí)施例7步驟3所述)，得到目標(biāo)化合物(0.210g，53.2％)。LCMS：m/z446.9[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14(t，J＝1.4Hz，1H)，9.07-8.98(m，2H)，8.57(dd，J＝4.8，1.7Hz，1H)，8.38-8.31(m，1H)，8.22(dt，J＝8.1，2.0Hz，1H)，8.12-8.05(m，1H)，7.72(dd，J＝10.9，2.4Hz，1H)，7.68-7.59(m，3H)，7.49(ddd，J＝8.0，4.8，0.9Hz，1H)，5.06-4.86(m，1H)，4.36-4.11(m，4H)，3.22(dd，J＝17.6，11.1Hz，1H)，2.90(dd，J＝17.6，7.2Hz，1H)。
實(shí)施例16：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(2-甲基吡啶-4-基)脲(±)
步驟1：苯基(2-甲基吡啶-4-基)氨基甲酸鹽
在0℃的溫度下，向2-甲基吡啶-4-胺(0.150g，1.388mmol)的吡啶(5mL)溶液添加氯甲酸苯酯(0.261g，1.66mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后用水(50mL)稀釋反應(yīng)混合物，再用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。在無(wú)水硫酸鈉上干燥混合有機(jī)層并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，以得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.210g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟2：叔丁基((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀(5.350g，38.838mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(1.050g，1.294mmol)的情況下，叔丁基((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(實(shí)施例4步驟2的產(chǎn)物，5.00g，12.946mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)(62mL)中與(6-氟吡啶-3-基)硼酸(2.180g，15.535mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為100℃，具體如實(shí)施例3步驟4的合成部分所述。使用CombiFlash柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝30/70)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(4.60g，88％)，并在不進(jìn)行解析的情況下將該化合物帶入下一步。
步驟3：(5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
如實(shí)施例3步驟5的合成部分所述，叔丁基((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，4.60g，11.434mmol)與dioxane.HCl發(fā)生反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物(3.800g，98.4％)。LCMS：m/z 436.2[M+H]+。
步驟4：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(2-甲基吡啶-4-基)脲(±)。
在氮?dú)猸h(huán)境中，將(5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟3的產(chǎn)物，0.20g，0.590mmol)、苯基(2-甲基吡啶-4-基)氨基甲酸鹽(步驟1的產(chǎn)物，0.161g，0.708mmol)和三乙胺(0.245mL，1.770mmol)的DMSO(5mL)溶液在室溫下攪拌16小時(shí)。用水(20mL)稀釋反應(yīng)混合物，再用乙酸乙酯(50mL)對(duì)其進(jìn)行萃取，然后用水(4x50mL)洗滌。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮，以得到殘留物。使用CombiFlash柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝94/6)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.061g，23％)。LCMS：m/z436.7[M+H]+；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14(s，1H)，8.78-8.74(d，J＝2.4Hz，1H)，8.52-8.44(td，J＝8.4，8.3，2.5Hz，1H)，8.36-8.29(dd，J＝4.6，1.2Hz，1H)，8.20-8.14(d，J＝5.6Hz，1H)，7.69-7.60(dd，J＝8.4，1.3Hz，1H)，7.47-7.40(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，7.29-7.24(m，2H)，7.22-7.16(dd，J＝5.7，2.1Hz，1H)，6.76-6.69(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，5.00-4.89(td，J＝11.2，11.1，5.2Hz，1H)，4.27-4.13(m，2H)，4.06-3.95(d，J＝5.4Hz，2H)，3.23-3.12(dd，J＝17.5，11.1Hz，1H)，2.98-2.86(dd，J＝17.5，7.2Hz，1H)，2.41(s，3H)。
實(shí)施例17：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(吡啶-4-基)脲(±)
步驟1：苯基(吡啶-4-基)氨基甲酸鹽。
如實(shí)施例16步驟1所述，4-氨基吡啶(0.300g，3.19mmol)在吡啶(5mL)中與氯甲酸苯酯(0.600g，3.83mmol)發(fā)生反應(yīng)，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.5g，粗品)。在不進(jìn)行進(jìn)一步提純的情況下將粗品帶入下一步。
步驟2：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(吡啶-4-基)脲(±)
在氮?dú)猸h(huán)境中，在伴有三乙胺(0.245mL，1.770mmol)的情況下，在DMSO(5mL)中用苯基(吡啶-4-基)氨基甲酸鹽(步驟1的產(chǎn)物，0.151g，0.708mmol)處理(5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(實(shí)施例16步驟3的產(chǎn)物，0.200g，0.590mmol)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為室溫，具體如實(shí)施例16步驟4所述。使用CombiFlash柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝94/6)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.028g，10％)。HPLC：93.37％；LCMS：m/z422.7[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.27(s，1H)，8.80-8.73(d，J＝2.5Hz，1H)，8.54-8.44(td，J＝8.4，8.4，2.5Hz，1H)，8.35-8.26(ddd，J＝8.2，4.7，1.5Hz，3H)，7.68-7.61(dd，J＝8.5，1.4Hz，1H)，7.47-7.39(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，7.39-7.34(m，2H)，7.30-7.24(dd，J＝8.5，2.8Hz，1H)，6.78-6.70(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，5.00-4.88(dd，J＝11.3，5.7Hz，1H)，4.29-3.96(m，4H)，3.24-3.11(dd，J＝17.6，10.9Hz，1H)，2.97-2.84(dd，J＝17.5，7.3Hz，1H)。
實(shí)施例18：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(噠嗪-4-基)脲(±)。
步驟1：苯基(噠嗪-4-基)氨基甲酸鹽。
在0℃的溫度下，向噠嗪-4-氨基鹽酸鹽(0.090g，0.680mmol)和吡啶(0.120g，1.500mmol)的乙腈∶四氫呋喃(1∶1)(10mL)溶液添加氯甲酸苯酯(0.090mL，0.750mmol)。在室溫下，將上述反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)。用水(50mL)稀釋反應(yīng)混合物，然后用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。在硫酸鈉上干燥混合有機(jī)層，并對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮。使用柱色譜法(乙酸乙酯/己烷＝60/40)對(duì)殘留物進(jìn)行提純，得到固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.100g，68％)。
步驟2：1-((5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(噠嗪-4-基)脲(±)
在伴有三乙胺(0.245mL，1.770mmol)的情況下，在DMSO(5mL)中用苯基(噠嗪-4-基)氨基甲酸鹽(步驟1的產(chǎn)物，0.152g，0.708mmol)處理(5-(((6’-氟-[2，3’-聯(lián)吡啶]-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(實(shí)施例16步驟3的產(chǎn)物，0.200g，0.590mmol)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為室溫，具體如實(shí)施例16步驟4所述。使用CombiFlash柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝94/6)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.051g，20％)。LCMS：m/z 423.7[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.49(s，1H)，9.15-9.11(dd，J＝2.6，1.2Hz，1H)，8.91-8.85(d，J＝6.0Hz，1H)，8.79-8.74(d，J＝2.4Hz，1H)，8.53-8.44(td，J＝8.3，8.3，2.4Hz，1H)，8.37-8.29(dd，J＝4.5，1.3Hz，1H)，7.77-7.72(dd，J＝6.0，2.7Hz，1H)，7.67-7.61(dd，J＝8.4，1.3Hz，1H)，7.47-7.40(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，7.29-7.23(dd，J＝8.6，2.8Hz，1H)，7.03-6.94(t，J＝5.6，5.6Hz，1H)，5.01-4.91(dq，J＝10.9，5.2，5.2，4.3Hz，1H)，4.28-4.11(m，2H)，4.10-3.95(d，J＝5.5Hz，2H)，3.26-3.14(dd，J＝17.5，11.1Hz，1H)，2.97-2.83(dd，J＝17.5，7.2Hz，1H)。
實(shí)施例19：1-((5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(2-甲基吡啶-4-基)脲(±)
步驟1：叔丁基((5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)。
在伴有碳酸鉀(3.210g，23.301mmol)和[1，1’-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(0.630g，0.776mmol)的情況下，叔丁基((5-(((2-溴吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(實(shí)施例4步驟2的產(chǎn)物，3.00g，7.767mmol)在1，4-二氧六環(huán)水溶液(二氧六環(huán)∶水＝4∶1)(38mL)中與1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-7H-吡唑(1.940g，9.321mmol)發(fā)生反應(yīng)，持續(xù)16小時(shí)，反應(yīng)溫度為100℃，具體如實(shí)施例3步驟4所述。使用CombiFlash柱色譜法(己烷/乙酸乙酯＝5/95)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(2.200g，73％)。
步驟2：(5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)。
如實(shí)施例3步驟5所述，叔丁基((5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)氨基甲酸鹽(±)(步驟1的產(chǎn)物，2.200g，6.495mmol)與dioxane.HCl發(fā)生反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物(1.80g，85％)。
步驟3：1-((5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲基)-3-(2-甲基吡啶-4-基)脲(±)
在伴有三乙胺(0.256mL，1.851mmol)的情況下，在DMSO(5mL)中用苯基(2-甲基吡啶-4-基)氨基甲酸鹽(實(shí)施例16步驟1的產(chǎn)物，0.169g，0.741mmol)處理(5-(((2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氧基)甲基)-4，5-二氫異噁唑-3-基)甲胺鹽酸鹽(±)(步驟2的產(chǎn)物，0.200g，0.617mmol)，如實(shí)施例16步驟4所述。使用CombiFlash柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝8/92)對(duì)得到的粗品進(jìn)行提純，獲得固態(tài)的目標(biāo)化合物(0.068g，26％)。LCMS：m/z421.8[M+H]+；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.11(s，1H)，8.20-8.07(m，3H)，8.03(s，1H)，7.48-7.41(dd，J＝8.5，1.4Hz，1H)，7.25-7.20(d，J＝2.1Hz，1H)，7.19-7.13(m，2H)，6.80-6.72(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，5.08-4.98(td，J＝11.2，11.0，4.8Hz，1H)，4.25-4.11(qd，J＝10.3，10.1，10.1，4.6Hz，2H)，4.10-4.02(d，J＝5.4Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.27-3.17(dd，J＝17.5，10.9Hz，1H)，2.96-2.85(dd，J＝17.6，7.5Hz，1H)，2.37(s，3H)。
生物學(xué)檢測(cè)：
MiaPaCa-2中的細(xì)胞毒性檢測(cè)：
在96孔板(Costar透明平底板)中以3000細(xì)胞/孔的密度接種MiaPaCa-2細(xì)胞(ATCC)，使其沉降過(guò)夜。在二甲基亞砜(DMSO-Sigma Aldrich，D2650)中溶解試驗(yàn)化合物，并以MiaPaCa-2細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)。72小時(shí)后，在100μl的cDMEM(Sigma Aldrich-D5648)+10％FBS(Hyclone-5430088-03)+1X Pen Strep(Sigma Aldrich-P0781)中向所述細(xì)胞添加50μl XTT(1mg/mL；Invitrogen，X 6493)和PMS(8μM；Sigma Aldrich，P9625)試劑。在用XTT和PMS培養(yǎng)1小時(shí)后，使用Spectramax M3(分子裝置)監(jiān)測(cè)吸光率。通過(guò)把DMSO控制視為0％抑制，計(jì)算10μM和1μM濃度的增殖抑制百分率。然后使用Graphpad prism軟件(GraphPad公司，美國(guó)加州拉霍亞市)標(biāo)注IC50值。
NAMPT熒光檢測(cè)：
通過(guò)使用來(lái)自大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)和NAM(Cat#47865-U)的NAMPT野生型蛋白(經(jīng)過(guò)內(nèi)部重組)作為培養(yǎng)基，對(duì)酶檢測(cè)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。在連續(xù)與苯乙酮/KOH和蟻酸反應(yīng)之后，酶促反應(yīng)后形成的NMN產(chǎn)物衍生為熒光衍生物。在382nm的激發(fā)波長(zhǎng)和445nm的發(fā)射波長(zhǎng)下檢測(cè)經(jīng)過(guò)衍生的NMN熒光衍生物。最終檢測(cè)條件為50ng NAMPT、2μM Nam(Km conc.)、0.4mM PRPP(Cat#P8296)、2mM ATP(Cat#A7699)、0.02％BSA、2mM DTT、12mM MgCl2、50mM Tris HCl pH-7.5、2％DMSO(25μL的反應(yīng)體積：以化合物預(yù)培養(yǎng)酶15分鐘，再為整個(gè)反應(yīng)培養(yǎng)15分鐘)及96孔黑板。使用Victor3 V熒光計(jì)測(cè)量熒光(激發(fā)波長(zhǎng)：382nm，發(fā)射波長(zhǎng)：445nm)。同時(shí)使用RFU值計(jì)算數(shù)據(jù)。本次檢測(cè)的最終DMSO濃度為2％。通過(guò)使用將非線性回歸曲線擬合用于S形劑量反應(yīng)曲線(可變斜率)的GraphPad Prism軟件第4版(美國(guó)加州圣迭戈市)生成的10點(diǎn)劑量反應(yīng)曲線，確定每個(gè)單獨(dú)的IC50值。
在測(cè)定IC50之后，以1μM/10μM的濃度篩選化合物，其結(jié)果及細(xì)胞毒性檢測(cè)數(shù)據(jù)歸納于下表中。細(xì)胞毒性檢測(cè)數(shù)據(jù)按范圍給定，其中“+++”指IC50值小于50μM，“++”指IC50值介于50.01μM與250μM之間，“+”指IC50值大于250μM。
體外熒光檢測(cè)的IC50(nM)數(shù)據(jù)也歸納于下表中，其中“A”指IC50值小于10nM，“B”指IC50值介于10.01nM與25nM之間，“C”指IC50值大于25nM。