本申請根據(jù)35U.S.C.§119(e)要求2014年5月22日提交的美國臨時申請?zhí)朜o.62/001,905的優(yōu)先權(quán)，將其整個公開內(nèi)容并入本申請中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一般地涉及對各種疾病的治療和處理，所述各種疾病包括但不限制于腫瘤疾病、免疫疾病、病毒感染以及與煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(NAMPT)相關(guān)的疾病。

背景技術(shù)：

兩種NAMPT抑制劑(FK866和CHS828)已進入臨床試驗。通常參見Galli等人，“Medicinal Chemistry of Nicotinamide Phosphoribosetransferase(NAMPT)Inhibitors”,J.Med.Chem.2013(56(16),pp 6279-6296。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明尤其提供式(I)化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中：

Y₁為-CR₁₄-或N，

Y₂為CR₁₅或N，

Y₃為–C(O)-，

Y₄為–CH₂或–N(R₁₆)-，

或Y₃和Y₄一起為–C(R₁₇)＝C(R₁₈)-，

X為芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基或酰胺，

Z為C₂或更大的烷基或烷氧基烷基，

R為H或C₁-C₆烷基，

R₁-R₁₈獨立地為–H或C₁-C₆烷基，和

Q為C或N；條件是當Q為N和R為H時，X不為

優(yōu)選地，X為苯基或取代的苯基，例如氟苯基；R為H；X為吡啶基或取代的吡啶基，例如氟吡啶基或甲基吡啶基。此外優(yōu)選地，Y₁為C；Y₁為N；Y₂為C；Y₂為N；Y₃為-C(O)-；Y₄為-C(H)＝。此外優(yōu)選Z為C₂-C₄烷基或丙基，例如異丙基。此外優(yōu)選地，Z為烷氧基烷基或環(huán)丁基甲基。此外優(yōu)選地，R₁₇和R₁₈，并且最優(yōu)選R₁-R₁₆也為–H。

在其他優(yōu)選的實施方式中，所述化合物具有下式(I)-A或(I)-B中的一種：

上述化合物可以通過向有此需要的患者給藥包含所述化合物的組合物用來抑制活化和/或增殖B細胞從而治療性調(diào)節(jié)免疫性疾病。例如，免疫性疾病可以為狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、硬皮病、銀屑病、舍格倫綜合征(Sjogren’s syndrome)、I型糖尿病或多發(fā)性硬化。所述化合物可以通過向有此需要的患者給藥包含所述化合物的組合物用于對移植物進行誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)或維持免疫抑制。其他醫(yī)療用途包括：抑制或調(diào)節(jié)對治療用生物制品的免疫應(yīng)答，所述治療用生物制品例如重組蛋白、核酸、抗體或肽；抑制腫瘤細胞生長，特別是抑制缺乏NAPRT的腫瘤細胞的腫瘤細胞生長；治療白血病(例如急性淋巴細胞白血病)和淋巴瘤；治療病毒感染，例如流行性感冒、呼吸道合胞病毒(RSV)、單純皰疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、人巨細胞病毒(CMV)、埃博拉病毒(EBOV)以及埃巴病毒(EBV)。所述化合物的其他用途包括通過使所述B細胞與所述化合物接觸，抑制B細胞(例如體內(nèi)或體外)分化為漿細胞。可以通過如下進行檢測在樣本(例如懷疑含有所述化合物的樣本)中存在根據(jù)本發(fā)明的化合物：使所述樣本與結(jié)合劑接觸，所述結(jié)合劑結(jié)合至所述化合物，并且檢測所述結(jié)合劑至所述化合物的結(jié)合。所述化合物可以進一步包含可檢測標記，例如以便于進行所述檢測。

在另一方面，本發(fā)明的特征在于，通過使苯甲酸衍生物與羰酰二咪唑和甲胺衍生物反應(yīng)，合成所述化合物。

這些化合物具有治療多種免疫疾病和腫瘤疾病的應(yīng)用，所述免疫疾病和腫瘤疾病包括但不限于，狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、舍格倫綜合征、I型糖尿病、多發(fā)性硬化、移植誘導(dǎo)與維持、硬皮病、急性淋巴細胞白血病以及惡性腫瘤，特別是缺乏NAPRT的固體或液體腫瘤。此外，這些化合物治療需要NAD的病毒感染，其包括但不限于，流行性感冒、RSV、HSV、HCV、HBV、HPV、HIV、CMV、EBOV以及EBV。

本發(fā)明也提供通過向患者給藥治療有效量的該類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽治療上述病癥的方法。本發(fā)明也提供所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療的用途或制品。本發(fā)明也提供該類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療本申請所述的疾病。

盡管不希望本身束縛于特定的作用機制，但所述化合物選擇性地抑制人初級B細胞同時保留T細胞。通常，所述化合物靶向NAMPT并且抑制初級人B細胞活化和增殖同時選擇性地保留初級人T細胞，所述化合物用于治療B細胞介導(dǎo)的增生性疾病，包括各種免疫介導(dǎo)性疾病和惡性腫瘤(特別是B細胞惡性腫瘤、缺乏NAPRT的固體或液體腫瘤)，以及NAD病毒感染，所述NAD病毒感染包括但不限于，流行性感冒、RSV、HSV、HCV、HBV、HPV、HIV、CMV、EBOV以及EBV。

在下面的附圖和說明書中闡述本發(fā)明中一個或多個實施方式的詳細內(nèi)容。從說明書、附圖以及權(quán)利要求中，本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點將是顯然的。

附圖說明

圖1為表明本申請所述化合物的作用機制的圖示。

圖2為顯示對大鼠靜脈內(nèi)給藥或口服給藥之后，1'-異丙基-3-甲基-6-(4-(3-(噻唑-5-基)丙?；?苯基)螺-[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-4(3H)-酮的平均血漿濃度隨時間變化的圖示。

圖3為顯示對大鼠靜脈內(nèi)給藥或口服給藥之后，4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的平均血漿濃度隨時間變化的圖示。

圖4為顯示對小鼠靜脈內(nèi)給藥或口服給藥之后，4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的平均血漿濃度隨時間變化的圖示。

圖5為顯示在NALM6白血病模型中4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的體內(nèi)試驗結(jié)果的圖示。

圖6為顯示在HCT116腫瘤模型中4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的體內(nèi)試驗結(jié)果的圖示。

圖7為顯示在另一個HCT116腫瘤模型中4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的體內(nèi)試驗結(jié)果的圖示。

具體實施方式

I.化合物

本申請尤其涉及上述式(I)、式(I)-A以及式(I)-B的化合物。

一般定義

理解的是，為清楚起見，在單獨實施方式的上下文中描述的本發(fā)明某些特征也可在單個實施方式中以組合的方式提供。相反，為簡潔起見，在單個實施方式的上下文中描述的各個特征也可以單獨形式或以任何適宜的亞組合形式提供。

對于術(shù)語"例如(e.g.)"和"例如(such as)"以及它們在語法上等同的術(shù)語，短語"不限制"理解為遵照，除非另外明確指明。如本申請中使用的，單數(shù)形式"一個"、"一種"以及"這個或這種"包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文中另外明確指明。如本申請中使用的，術(shù)語"約"是指"近似地"(例如指示值的約±10％)。

如本申請中使用的，短語"任選取代的"是指未取代的或取代的。如本申請中使用的，術(shù)語"取代的"是指除去氫原子并且被取代基替代。通常，所有的部分可以被取代，除非另外指明。要理解的是，給定原子上的取代受價態(tài)的限制。在整個定義中，術(shù)語"C_n-m"是指包括端點的范圍，其中n和m為整數(shù)并且表示碳數(shù)。實例包括C_1-4、C_1-6等。

術(shù)語"n元"(其中n為整數(shù))通常描述在成環(huán)原子個數(shù)為n的部分中的成環(huán)原子個數(shù)。例如，哌啶基為6元雜環(huán)烷基環(huán)的例子，吡唑基為5元雜芳環(huán)的例子，吡啶基為6元雜芳環(huán)的例子，以及1,2,3,4-四氫-萘為10元環(huán)烷基的例子。

如本申請中使用的，術(shù)語"C_n-m烷基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指飽和烴基，所述飽和烴基可以為直鏈或支鏈，具有n到m個碳。在一些實施方式中，烷基含有1到6個碳原子或1到4個碳原子或1到3個碳原子。烷基部分的例子包括但不限于化學(xué)基團，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基以及叔丁基。

如本申請中使用的，術(shù)語"C_n-m烷氧基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指式-O-烷基的基團，其中烷基具有n到m個碳。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基以及丙氧基(例如正丙氧基以及異丙氧基)。在一些實施方式中，烷基具有1到3個碳原子。

如本申請中使用的，"C_n-m烯基"是指具有一個或多個碳碳雙鍵并且具有n到m個碳的烷基。在一些實施方式中，烯基部分含有2到6或2到4個碳原子。烯基的例子包括但不限于，乙烯基、正丙烯基、異丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基等。

如本申請中使用的，"C_n-m炔基"是指具有一個或多個碳碳三鍵并且具有n到m個碳的烷基。炔基的例子包括但不限于，乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。在一些實施方式中，炔基部分含有2到6或2到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"C_n-m烷氨基"是指式-NH(烷基)的基團，其中烷基具有n到m個碳原子。在一些實施方式中，烷基具有1到6或1到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"二-C_n-m-烷氨基"是指式-N(烷基)₂的基團，其中兩個烷基中的每一個獨立地具有n到m個碳原子。在一些實施方式中，每個烷基獨立地具有1到6或1到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"C_n-m烷硫基"是指式-S-烷基的基團，其中烷基具有n到m個碳原子。在一些實施方式中，烷基具有1到6或1到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"氨基"是指式–NH₂的基團。

如本申請中使用的，術(shù)語"芳基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指單環(huán)或多環(huán)(例如具有2、3或4個稠環(huán))芳香環(huán)，例如但不限于，苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基、菲基等。在一些實施方式中，芳基為C_6-10芳基。在一些實施方式中，芳基為萘環(huán)或苯環(huán)。在一些實施方式中，芳基為苯基。

如本申請中使用的，術(shù)語"羰基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指-C(O)-基團。

如本申請中使用的，術(shù)語"環(huán)烷基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指非芳香族的環(huán)狀烴部分，其可以任選包含一個或多個亞烯基作為環(huán)結(jié)構(gòu)的部分。環(huán)烷基可包括單環(huán)或多環(huán)(例如具有2、3或4個稠環(huán))的環(huán)體系。環(huán)烷基的定義中也包括具有一個或多個芳香環(huán)的部分，所述芳香環(huán)稠合(即具有共同的鍵)到環(huán)烷基環(huán)，例如環(huán)戊烷、環(huán)戊烯、環(huán)己烯等的苯并衍生物。環(huán)烷基中的一個或多個成環(huán)碳原子可氧化成羰基鍵。在一些實施方式中，環(huán)烷基為單環(huán)或雙環(huán)的C_3-7環(huán)烷基。示例性環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚三烯基、降冰片基、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烷基(norcarnyl)等。在一些實施方式中，環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。

如本申請中使用的，"C_n-m鹵代烷氧基"是指式–O-鹵代烷基的基團，其具有n到m個碳原子。鹵代烷氧基的實例為OCF₃。鹵代烷氧基的另外例子為OCHF₂。在一些實施方式中，鹵代烷氧基僅為氟代的。在一些實施方式中，烷基具有1到6或1到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"鹵代"是指選自F、Cl、I或Br的鹵素原子。在一些實施方式中，"鹵代"是指選自F、Cl或Br的鹵素原子。在一些實施方式中，示例性鹵素基團為F。

如本申請中使用的，術(shù)語"C_n-m鹵代烷基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指具有一個鹵素原子到2s+1個鹵素原子的烷基，其可以相同或不同，其中"s"為烷基中的碳原子個數(shù)，其中烷基具有n到m個碳原子。在一些實施方式中，鹵代烷基僅為氟代的。在一些實施方式中，鹵代烷基為氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。在一些實施方式中，鹵代烷基為三氟甲基。在一些實施方式中，烷基具有1到6或1到4個碳原子。

如本申請中使用的，術(shù)語"雜芳基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指單環(huán)或多環(huán)(例如具有2、3或4個稠環(huán))芳香烴部分，具有一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子環(huán)成員。在一些實施方式中，雜芳基為5元到10元C_1-9雜芳基，其為單環(huán)或雙環(huán)并且具有1、2、3或4個獨立地選自氮、硫和氧的雜原子環(huán)成員。當雜芳基含有多于一個雜原子環(huán)成員時，雜原子可以相同或不同。雜芳基的環(huán)中的氮原子可氧化成N-氧化物。雜芳基的實例包括但不限于，吡啶、嘧啶、吡嗪、噠嗪、吡咯、吡唑、吡咯基(azolyl)、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、咪唑、呋喃、噻吩、三唑、四唑、噻二唑、喹啉、異喹啉、吲哚、苯并噻吩、苯并呋喃、苯并異噁唑、咪唑并[1,2-b]噻唑、嘌呤或三嗪等。

5元雜芳基為具有五個環(huán)原子的雜芳基，所述環(huán)原子包含碳和一個或多個(例如1、2或3)獨立地選自N、O和S的環(huán)原子。示例性五元環(huán)雜芳基為噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1、2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基以及1,3,4-噁二唑基。

6元雜芳基為具有六個環(huán)原子的雜芳基，其中一個或多個(例如1、2或3個)環(huán)原子為氮。示例性六元環(huán)雜芳基為吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和噠嗪基。

如本申請中使用的，術(shù)語"雜環(huán)烷基"，其單獨使用或與其他術(shù)語組合使用，均是指非芳香環(huán)體系，其可以任選地含有一個或多個亞烯基或亞炔基作為環(huán)結(jié)構(gòu)的部分，并且具有至少一個獨立地選自氮、硫和氧的雜原子環(huán)成員。當雜環(huán)烷基含有多于一個雜原子時，雜原子可以相同或不同。雜環(huán)烷基可包括單環(huán)或多環(huán)(例如具有2、3或4個稠環(huán))環(huán)體系，包括螺環(huán)體系。雜環(huán)烷基的定義中也包括具有一個或多個稠合(即具有共同的鍵)到非芳香環(huán)的芳香環(huán)的部分，例如1,2,3,4-四氫-喹啉和二氫苯并呋喃等。雜環(huán)烷基的環(huán)中的碳原子或雜原子可氧化成羰基或磺?；?或其他氧化的連接基)或氮原子可季銨化。在一些實施方式中，雜環(huán)烷基為5元到10元C_2-9雜環(huán)烷基，其為單環(huán)或雙環(huán)并且具有1、2、3或4個獨立地選自氮、硫和氧的雜原子環(huán)成員。雜環(huán)烷基的例子包括1,2,3,4-四氫-喹啉、二氫苯并呋喃、氮雜環(huán)丁烷、六亞甲基亞胺(azepane)、吡咯烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉以及吡喃。

本申請所述化合物可為不對稱的(例如具有一個或多個立體中心)。預(yù)想到所有的立體異構(gòu)體，例如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，除非另外指明。本發(fā)明中含有不對稱取代碳原子的化合物可以旋光或外消旋的形式進行分離。本領(lǐng)域中已知如何由不旋光的原料制備旋光形式的方法，例如通過拆分外消旋混合物或通過立體選擇合成。許多烯烴、C＝N雙鍵等的立體異構(gòu)體也可存在于本申請所述化合物中，并且本發(fā)明中預(yù)想到所有這種穩(wěn)定的異構(gòu)體。描述了本發(fā)明化合物的順式和反式幾何異構(gòu)體并且可以分離為異構(gòu)體的混合物或單獨的異構(gòu)體形式。

當本發(fā)明的化合物含有手性中心時，所述化合物可為可能的立體異構(gòu)體中的任一種。在具有單一手性中心的化合物中，手性中心的立體化學(xué)可為(R)或(S)。在具有兩個手性中心的化合物中，手性中心的立體化學(xué)可各自獨立地為(R)或(S)，因此手性中心的構(gòu)型可為(R)和(R)、(R)和(S)；(S)和(R)或(S)和(S)。在具有三個手性中心的化合物中，三個手性中心各自的立體化學(xué)可各自獨立地為(R)或(S)，因此手性中心的構(gòu)型可為(R)、(R)和(R)；(R)、(R)和(S)；(R)、(S)和(R)；(R)、(S)和(S)；(S)、(R)和(R)；(S)、(R)和(S)；(S)、(S)和(R)；或(S)、(S)和(S)。

可通過本領(lǐng)域中已知許多方法中的任一種進行拆分化合物的外消旋混合物。實例方法包括使用手性拆分酸進行分級重結(jié)晶，所述手性拆分酸為旋光的成鹽有機酸。適宜的分級重結(jié)晶方法的拆分劑為例如光學(xué)活性酸，例如D和L型的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、蘋果酸、乳酸，或各種光學(xué)活性樟腦磺酸例如D-樟腦磺酸。適于分級結(jié)晶方法的其他拆分劑包括純立體異構(gòu)型的α-甲基芐胺(例如S和R型或純非對映異構(gòu)體形式)、2-苯甘氨醇、降麻黃堿、麻黃堿、N-甲基麻黃堿、環(huán)己基乙胺、1,2-二氨基環(huán)己烷等。

也可通過在填充有光學(xué)活性拆分劑(例如二硝基苯甲?；礁拾彼?的柱上洗脫，進行拆分外消旋混合物。可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員確定適宜的洗脫溶劑組合物。

本發(fā)明的化合物也包括互變異構(gòu)形式。通過伴隨質(zhì)子遷移一起進行單鍵與鄰近雙鍵的交換得到互變異構(gòu)形式?；プ儺悩?gòu)形式包括質(zhì)子移變互變異構(gòu)體，其為同分異構(gòu)體的質(zhì)子化狀態(tài)，具有相同的經(jīng)驗式和總電荷。質(zhì)子移變互變異構(gòu)體的例子包括酮–烯醇對、酰胺–亞氨酸對、內(nèi)酰胺–內(nèi)酰亞胺對、酰胺–亞氨酸對、烯胺–亞胺對，以及其中質(zhì)子可占據(jù)雜環(huán)體系的兩個或更多個位置的多元環(huán)化物(annular)形式，例如¹H-和³H-咪唑，¹H-、²H-和⁴H-1,2,4-三唑，¹H-和²H-異吲哚，以及¹H-和²H-吡唑?；プ儺悩?gòu)形式可為平衡態(tài)形式或通過適宜替換在空間上鎖定為一種形式。

本發(fā)明的化合物也可包括中間體或最終化合物中出現(xiàn)的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序數(shù)但不同質(zhì)量數(shù)的那些原子。

本申請中使用的術(shù)語"化合物"，是指包括所有立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體以及所述同位素結(jié)構(gòu)。本申請中由名稱或結(jié)構(gòu)確定為一個特定互變異構(gòu)形式的化合物意在包括其他互變異構(gòu)形式，除非另外指定(例如在嘌呤環(huán)的情況下，除非另外指明，當化合物的名稱或結(jié)構(gòu)具有9H互變異構(gòu)體時，理解的是也包含7H互變異構(gòu)體)。

可得到與其他物質(zhì)例如水和溶劑(例如水合物和溶劑化物)在一起的所有化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽，或可將所有化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽與其他物質(zhì)例如水和溶劑(例如水合物和溶劑化物)進行分離。

在一些實施方式中，基本上分離本發(fā)明的化合物或其鹽。"基本上分離"意指將化合物至少部分或基本上與其中形成該化合物或檢測該化合物的環(huán)境分離。部分分離可包括，例如本發(fā)明化合物中富含的組成?；旧戏蛛x可包括包含按本發(fā)明化合物或其鹽的重量計至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約97％或至少約99％的組成?；衔镆约八鼈兊柠}的分離方法在本領(lǐng)域中是常規(guī)的。

短語"藥學(xué)上可接受的"在本申請中是指如下的那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型：在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適用于與人和動物的組織接觸而無過度毒性、刺激作用、變應(yīng)性應(yīng)答或其他問題或并發(fā)癥，與合理的效益-風(fēng)險比相匹配。

在本領(lǐng)域中理解如本申請中使用的表述"環(huán)境溫度"和"室溫"，通常是指這樣的溫度，例如反應(yīng)溫度，其接近于例如在約20℃到約30℃溫度進行反應(yīng)的室內(nèi)溫度。

本發(fā)明也包括本申請所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。如本申請中使用的，"藥學(xué)上可接受的鹽"是指所披露化合物的衍生物，其中通過將現(xiàn)有的酸或堿部分轉(zhuǎn)化為它的鹽形式將母體化合物進行改性。藥學(xué)上可接受的鹽的實例包括但不限于，堿性殘基例如胺的無機酸或有機酸鹽；以及酸性殘基例如羧酸的堿或有機鹽等。本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽包括例如由無毒無機酸或有機酸形成母體化合物的常規(guī)無毒鹽。本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽可由含有堿性或酸性部分的母體化合物通過常規(guī)化學(xué)方法合成。通常，該鹽可通過如下制備：在水中或在有機溶劑中或在水和有機溶劑的混合物中，將這些化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計量的適宜堿或酸反應(yīng)；通常，優(yōu)選非水介質(zhì)如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、異丙醇或丁醇)或乙腈(MeCN)。在如下文獻中得到適宜鹽的列舉：Remington's Pharmaceutical Sciences,17^th Ed.,(Mack Publishing Company,Easton,1985),p.1418,Berge等人，J.Pharm.Sci.,1977,66(1),1-19；Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(Wiley,2002)。在一些實施方式中，本申請所述化合物包括N-氧化物形式。

本申請中可以使用以下縮寫：AcOH(乙酸)；Ac₂O(乙酸酐)；aq.(含水)；atm.(大氣壓)；Boc(叔丁氧羰基)；br(寬)；Cbz(羧基芐基)；calc.(計算的)；d(雙峰)；dd(雙二重峰)；DCM(二氯甲烷)；DIAD(偶氮二甲酸N,N’-二異丙酯)；DIPEA(N,N-二異丙基乙胺)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；g(克)；h(小時)；HATU(N,N,N',N'-四甲基O-(7-氮苯并三氮唑-1-基)脲鎓六氟磷酸鹽)；HCl(鹽酸)；HPLC(高效液相色譜法)；Hz(赫茲)；J(偶合常數(shù))；LCMS(液相色譜-質(zhì)譜)；m(多重峰)；M(摩爾)；mCPBA(3-氯過氧苯甲酸)；MgSO₄(硫酸鎂)；MS(質(zhì)譜)；Me(甲基)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；mg(毫克)；min.(分鐘)；mL(毫升)；mmol(毫摩爾)；N(當量)；NaHCO₃(碳酸氫鈉)；NaOH(氫氧化鈉)；Na₂SO₄(硫酸鈉)；NH₄Cl(氯化銨)；NH₄OH(氫氧化銨)；nM(納摩爾)；NMR(核磁共振波譜法)；OTf(三氟甲磺酸酯)；Pd(鈀)；Ph(苯基)；pM(皮摩爾)；POCl₃(磷酰氯)；RP-HPLC(反相高效液相色譜法)；s(單峰)；t(三重峰或叔)；TBS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；tert(叔)；tt(三重的三重峰)；t-Bu(叔丁基)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氫呋喃)；μg(微克)；μL(微升)；μM(微摩爾)；wt％(重量百分比)。

II.合成

本發(fā)明的化合物(包括其鹽)，可使用已知有機合成技術(shù)制備并且可根據(jù)許多可能合成路線中的任一種進行合成。

可在適宜溶劑中進行制備本發(fā)明化合物的反應(yīng)，有機合成領(lǐng)域中的本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地選擇所述溶劑。適宜溶劑可在反應(yīng)進行時的溫度基本上與原料(反應(yīng)物)、中間體或產(chǎn)物不反應(yīng)，所述溫度例如范圍可為溶劑的凍結(jié)溫度到溶劑沸點的溫度?？稍谝环N溶劑或多于一種溶劑的混合物中進行給定反應(yīng)。取決于特定的反應(yīng)步驟，本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇適于特定反應(yīng)步驟的溶劑。

制備本發(fā)明的化合物可涉及各種化學(xué)基團的保護和脫保護。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定是否需要保護和脫保護，并且選擇適宜保護基團?？衫缭谌缦轮械玫奖Ｗo基團化學(xué)：P.G.M.Wuts和T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis,4^th Ed.,Wiley&Sons,Inc.,New York(2006)，將其整體內(nèi)容并入本申請中以作參考。

可根據(jù)本領(lǐng)域中已知的任何適宜方法監(jiān)控反應(yīng)。例如，可通過如下監(jiān)控產(chǎn)物的生成：光譜手段例如核磁共振波譜法(例如¹H或¹³C)、紅外光譜法、分光光度測定法(例如紫外-可見)、質(zhì)譜法，或色譜方法例如高效液相色譜(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜(LCMS)或薄層色譜(TLC)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過各種方法純化化合物，所述方法包括高效液相色譜法(HPLC)("Preparative LC-MS Purification:Improved Compound Specific Method Optimization"Karl F.Blom,Brian Glass,Richard Sparks,Andrew P.Combs J.Combi.Chem.2004,6(6),874-883，將其整個內(nèi)容并入本申請中以作參考)和正相硅膠色譜法。

III.具體實施例

將通過具體實施例的方式更詳細描述本發(fā)明。提供以下實施例用于說明的目的，而并不意在以任何方式限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地認識到可改變或修改的各種非臨界參數(shù)，從而得到基本相同的結(jié)果。

實施例1：合成方法

實施例1-1：4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺

向4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酸(100mg)在DMF(2mL)中的溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(64mg，1.5eq)和(3-甲基異噁唑-5-基)甲胺(44mg，1.5eq)。在室溫將混合物攪拌過夜。然后將混合物用AcOEt稀釋并且用NaHCO₃的飽和溶液淬滅。將有機相用鹽水洗滌并且經(jīng)MgSO₄干燥。過濾后，在真空下將殘余物蒸發(fā)，得到粗制的黃色泡沫。將該物質(zhì)在硅膠柱上使用溶劑梯度為0-20％在DCM中的MeOH純化。得到黃色泡沫的4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺(71.5mg，79％)，LCMS RT＝3.34min。

實施例1-2：N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺

將4-(1'-異丙基-2-甲基-1-氧代-2,4-二氫-1H-螺[異喹啉-3,4'-哌啶]-7-基)苯甲酸-氯化鋰鹽(100mg，0.263mmol)和HATU(100mg，0.263mmol)合并到2mL DMF中。向溶液中加入DIEA(0.09mL)。在室溫將混合物攪拌5分鐘后，加入(5-氟吡啶-3-基)甲胺(0.289mmol)。在室溫將混合物攪拌過夜，然后將混合物使用NaHCO₃飽和溶液淬滅并且用AcOEt稀釋。用AcOEt萃取水相后，將合并的有機相使用Na₂SO₄干燥，過濾，并且在減壓下濃縮。將殘余物通過快速色譜使用梯度0-20％在DCM中的MeOH純化。反應(yīng)得到110mg N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺。

實施例1-3：3-氟-4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺

使用實施例1-1所述相同的方法，得到3-氟-4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝2.65min，MH+251.4，m＝30mg，收率＝21％)。

實施例1-4：6-(4-氧代-1'-丙基螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺

將6-(4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺(150mg，0.345mmol)與碳酸銫(135mg，0.41mmol)和1-碘丙烷(58.6mg，0.345mmol)在3mL DMF中混合。在室溫將反應(yīng)混合物攪拌72小時。然后將混合物用水淬滅并且用AcOEt稀釋。使用AcOEt萃取后，將合并的有機相用鹽水洗滌并且使用MgSO₄干燥。過濾后，在真空中除去溶劑，得到棕色半固體。將粗制物質(zhì)在硅膠柱上使用梯度0-15％在DCM中的MeOH純化。將需要的級分合并并且蒸發(fā)，得到褐色固體(LCMS RT＝3.07min，49mg，29％)。

實施例1-5：6-(1'-丁基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺

使用實施例1-4所述相同的方法，得到6-(1'-丁基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺。(LCMS RT＝3.25min，MH+490.8，m＝78mg的褐色固體，收率＝48.4％)。

實施例1-6：N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)-4-(4-氧代-1'-丙基螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺

使用實施例1-1所述相同的方法，得到N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)-4-(4-氧代-1'-丙基螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝3.27min，m＝11mg，收率＝12％)。

實施例1-7：N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)-6-(1'-丙基螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)煙酰胺

將N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)-6-(4-氧代-1'-丙基螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)煙酰胺(66mg，0.14mmol)溶解在1.5mL MeOH中。向反應(yīng)混合物中一次性加入硼氫化鈉(33mg，0.87mmol)。進行脫氣幾分鐘，然后淡黃色混合物變?yōu)闊o色。在室溫3小時后，反應(yīng)完全。將混合物用水淬滅并且用AcOEt稀釋。用AcOEt萃取水相，將合并的有機相用鹽水洗滌兩次。然后將有機相使用MgSO₄干燥并且在真空下濃縮。

然后向粗制物質(zhì)中加入8mL水和2mL濃H₂SO₄。將混合物劇烈攪拌并且在80℃加熱，在該溫度48小時后，將混合物用水稀釋，使用固體Na₂CO₃堿化。用AcOEt萃取水相，將合并的有機相用鹽水洗滌兩次。過濾和蒸發(fā)后，將粗制殘余物在硅膠柱上使用20％在DCM中的MeOH純化。將需要的級分合并并且在真空下濃縮。得到白色固體的N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)-6-(1'-丙基螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)煙酰胺(21mg，33.3％,LCMS RT＝3.30min，MH+459.3)。

實施例1-8：6-(1'-(3-甲氧基丙基)螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺

使用實施例1-7所述相同的方法，得到6-(1'-(3-甲氧基丙基)螺[色烯-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺。

實施例1-9：6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)煙酰胺

使用實施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)煙酰胺。

實施例1-10：6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺

使用實施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-(噻唑-5-基甲基)煙酰胺。

實施例1-11：4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((5-甲基異噁唑-3-基)甲基)苯甲酰胺

使用實施例1-1所述相同的方法，得到4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((5-甲基異噁唑-3-基)甲基)苯甲酰胺。(LCMS RT＝3.35min，m＝49.7mg，收率＝39％)。

實施例1-12：6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)煙酰胺

使用實施例1-2所述相同的方法，得到6-(1'-異丙基-3-甲基-4-氧代-3,4-二氫螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)煙酰胺。

實施例1-13：另外的式(I)化合物

根據(jù)與上述那些類似的方法合成另外的式(I)化合物，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說容易是顯然的。這些化合物總結(jié)于下表1中。

表1：另外的式(I)化合物

表1：另外的式(I)化合物

表1：另外的式(I)化合物

表1：另外的式(I)化合物

表1：另外的式(I)化合物

實施例2：體外實驗

實施例2-1：抑制NAMPT酶活性

在不存在抑制劑或存在抑制劑下簡單預(yù)培養(yǎng)重組NAMPT酶(MBL)，然后加入煙酰胺。允許在37℃進行酶促反應(yīng)6小時。反應(yīng)終止，使用如下所述的方法檢測NMN反應(yīng)產(chǎn)物：Zhang RY,Qin Y,Lv XQ,Wang P,Xu TY,Zhang L,Miao CY.,Anal.Biochem.2011May 1；412(1):18-25。

50％抑制濃度(IC₅₀)為抑制50％的最大活性時的濃度。

對代表性化合物的所述分析結(jié)果顯示于下表2中。

實施例2-2：對B細胞的抗增殖活性

在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指導(dǎo)說明進行生存力測定之前，將由分析生物服務(wù)(Wilmington,DE)得到的新鮮原代人B細胞在AIM-V培養(yǎng)基(Invitrogen)中稀釋為1×10⁶個細胞每毫升，并且在37℃/5％CO₂在不存在抑制劑或存在抑制劑下用抗IgM(10ug/ml)(KPL)刺激72小時。

50％抑制濃度(IC₅₀)為抑制50％的最大活性時的濃度。

對代表性化合物的所述分析結(jié)果顯示于下表2中。

實施例2-3：對T細胞的抗增殖活性

在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指導(dǎo)說明進行生存力測定之前，將由分析生物服務(wù)(Wilmington,DE)得到的新鮮原代人T細胞在AIM-V培養(yǎng)基(Invitrogen)中稀釋為1×10⁶個細胞每毫升，并且在37℃/5％CO₂在不存在抑制劑或存在抑制劑下用CD3/CD28磁珠(Invitrogen)刺激72小時。

50％抑制濃度(IC₅₀)為抑制50％的最大活性時的濃度。

對代表性化合物的所述分析結(jié)果顯示于下表2中。

表2：選擇的化合物的NAMPT、B細胞和T細胞的IC₅₀

表2：選擇的化合物的NAMPT、B細胞和T細胞的IC₅₀

表2：選擇的化合物的NAMPT、B細胞和T細胞的IC₅₀

表2：選擇的化合物的NAMPT、B細胞和T細胞的IC₅₀

實施例2-4：對各種細胞系的活性

在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指導(dǎo)說明進行生存力測定之前，將白血病/淋巴瘤細胞系(ATCC)在銷售商推薦的培養(yǎng)基中稀釋，并且在37℃/5％CO₂在不存在抑制劑或存在抑制劑下培養(yǎng)72小時。研究的人細胞系包括急性T細胞白血病(JURKAT)、慢性髓系白血病(K562)以及B細胞急性淋巴細胞白血病(NALM6和SUP-B15)。

選擇的化合物對這些細胞系的抗增殖活性顯示于下

表3中。

表3：選擇的化合物對各種細胞系活性的抗增殖活性

表3：選擇的化合物對各種細胞系活性的抗增殖活性

表3：選擇的化合物對各種細胞系活性的抗增殖活性

表3：選擇的化合物對各種細胞系活性的抗增殖活性

實施例2-5：作用機制

在使用CellTiterGlo(Promega)按照制造商的指導(dǎo)說明進行生存力測定之前，在37℃/5％CO₂在不存在抑制劑或存在抑制劑下將sup-B15細胞(ATCC)在缺乏或含有200μM煙酰胺單核苷酸(NMN)(Sigma)培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時。

化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)。將sup-B15細胞提取物用4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的生物素化衍生物進行培養(yǎng)，然后用鏈霉親和素磁珠(Invitrogen)收集化合物/蛋白質(zhì)復(fù)合物。大量洗滌后，使用游離的(非生物素化)4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺或惰性類似物，洗脫結(jié)合蛋白質(zhì)。SDS-PAGE之后，將一條突出的條帶切下并且通過LC/MS確認為NAMPT。

4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的分子靶標為煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NAMPT)，其為煙酰胺單核苷酸(NMN)的產(chǎn)物。4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺的抗增殖活性通過NMN抵消，并且4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺有效抑制NAMPT酶活性。在整個藥物化學(xué)運動中保持靶向選擇性抗增殖活性，因為式(I)的45個系列的所有成員可由NMN拯救(圖1)。

實施例2-6：對流行性感冒和呼吸道合胞病毒感染細胞的活性

為了確定呼吸道合胞病毒(RSV)抑制，將非洲綠猴腎細胞(Vero cells)在96孔板中培養(yǎng)至匯合率為80％。按半對數(shù)稀度加入化合物，開始為10uM然后降至3nM，重復(fù)三次，并且允許培養(yǎng)細胞一小時。將病毒在MOI為10時加入到孔中，并且允許復(fù)制72小時。使用熒光活性染料檢測免受病毒誘導(dǎo)的致細胞病變效應(yīng)(CPE)的活細胞。使用魯棒擬合方法(robust fit methodology)確定抑制CPE的EC₅₀。

為了確定流行性感冒病毒抑制，將mDCK細胞在96孔板中培養(yǎng)至匯合率為80％。按半對數(shù)稀度加入化合物，開始為10μM然后降至3nM，重復(fù)三次，并且允許培養(yǎng)細胞一小時。將病毒在MOI為10時加入到孔中，并且允許復(fù)制72小時。使用熒光活性染料檢測活細胞免受病毒誘導(dǎo)的致細胞病變效應(yīng)(CPE)。使用魯棒擬合方法確定抑制CPE的EC₅₀。

實施例3：體內(nèi)實驗

實施例3-1：藥代動力學(xué)研究

實施例3-1-a：斯普拉-道來大鼠(Sprague-Dawley Rats)中的口服和靜脈內(nèi)藥代動力學(xué)

評價在雄性斯普拉-道來大鼠中的試驗化合物的口服(PO)和靜脈內(nèi)(IV)藥代動力學(xué)，所述試驗化合物為1'-異丙基-3-甲基-6-(4-(3-(噻唑-5-基)丙?；?苯基)螺[苯并[e][1,3]噁嗪-2,4'-哌啶]-4(3H)-酮以及4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。研究設(shè)計概述顯示于下表4中。在試驗化合物給藥之前采集血樣。在T₀對動物給藥；在給藥后的2、5、15和30分鐘以及1、2、4、6、8和24小時，采集隨后的血樣。經(jīng)由頸靜脈插管采集血樣。將樣本在4℃以13,000rpm離心5分鐘。離心血漿樣本后，將血漿樣本采集到96孔板中。通過LC-MS/MS分析試驗化合物的血漿濃度。

表4：大鼠藥代動力學(xué)研究設(shè)計

進行靜脈內(nèi)給藥和口服給藥兩者的試驗化合物耐受良好。未觀察到不良生理異常。圖2和圖3顯示試驗化合物隨時間變化測量的口服血漿濃度與靜脈內(nèi)血漿濃度的圖解比較。

實施例3-1-b：小鼠中的口服和靜脈內(nèi)藥代動力學(xué)

評價在雌性NOD.Cg-Prkdc^scidII2^rgtm1WJI/SzJ鼠中的試驗化合物的口服和靜脈內(nèi)藥代動力學(xué)，所述試驗化合物為4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。研究設(shè)計概述顯示于下表5中。在試驗化合物給藥之前、在給藥后的特定時間點以及在動物處死后，采集血樣。通過尾巴剪斷或面靜脈采集活體血樣；在吸入麻醉后經(jīng)由心臟穿刺采集瀕死期的血樣。將樣本采集到K2EDTA管中并且儲存在濕冰上，直到在5℃通過離心在1小時內(nèi)進行采集血漿3000g。離心和在-80℃儲存后，將血漿樣本采集到96孔板中。通過LC-MS/MS分析試驗化合物的血漿濃度。

表5：小鼠藥代動力學(xué)研究設(shè)計

在研究過程中未觀察到明顯臨床癥狀。圖4顯示試驗化合物隨時間變化測量的口服血漿濃度與靜脈內(nèi)血漿濃度的圖解比較。

實施例3-2：藥效學(xué)研究

實施例3-2-a：NALM6白血病研究

在NALM6白血病模型中試驗4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。如圖6中所示，IP給藥4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺(也稱為GENZ-682945)，在該異種移植模型中產(chǎn)生了顯著的生存效益，超過了護理標準(氯法拉濱(clofarabine))。將5×10⁶NALM-6細胞經(jīng)由尾靜脈注射到雌性CB17SCID/Crl小鼠(Charles River)中。一周后，通過i.p.注射給藥4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺，一天兩次，共計35天。通過i.p.一天一次地注射給藥氯法拉濱，連續(xù)5天共四周(for 5days for four weeks)。研究終點為生存時間，并且出現(xiàn)嚴重疾病的系統(tǒng)體征例如麻痹或惡病質(zhì)時處死小鼠。結(jié)果示于圖5中。

實施例3-2-b：HCT116腫瘤生長研究

腫瘤生長研究：雌性無胸腺裸小鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles River)(n＝10/group)注射有5×10⁶HCT116細胞，并且在平均腫瘤大小為100mm³時開始治療。口服給藥4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺以及媒介物對照，一天兩次，共計8天。用彎腳規(guī)測量腫瘤大小，每周兩次。

腫瘤NAD測量：雌性無胸腺裸小鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles River)(n＝3/group)注射有5×10⁶HCT116細胞，并且在腫瘤大小為250-400mm³時開始治療。口服給藥4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺以及媒介物對照，一天兩次，共計1.5天(3個劑量)。最后一個劑量后的六小時，將腫瘤切除、洗凈、切片、稱重以及速凍。在通過LC/MS分析NAD含量之前，在乙醇/PBS(90:10)中通過三個循環(huán)的快速冷凍/解凍/超聲處理提取腫瘤部分。數(shù)據(jù)顯示于圖6中。

也在HCT116實體瘤模型中試驗4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺。每天兩次地口服給藥4-(1'-異丙基-4-氧代螺[色滿-2,4'-哌啶]-6-基)-N-((3-甲基異噁唑-5-基)甲基)苯甲酰胺，產(chǎn)生明顯的腫瘤生長延遲(圖7)，由于治療組死亡率為10％，所述明顯的腫瘤生長延遲在停止給藥后持續(xù)至少一周。

IV.制劑、劑型和給藥

當用作藥物時，可以藥物組合物的形式給藥本發(fā)明的化合物。因此，本申請?zhí)峁┙M合物，其包含式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其實施方式中的任一種以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。這些組合物可以藥物領(lǐng)域中公知的方式制備，并且可通過各種途徑給藥，這取決于指示是局部治療還是全身治療以及待治療的區(qū)域。給藥可以為局部的(包括經(jīng)皮、表皮、眼以及粘膜包括鼻內(nèi)、陰道和直腸遞送)，肺的(例如通過吸入或吹入粉末或氣溶膠，包括通過噴霧器；氣管內(nèi)或鼻內(nèi))，口服或腸胃外。腸胃外給藥包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)或注射或灌輸；或顱內(nèi)(例如鞘內(nèi)或室內(nèi))給藥。腸胃外給藥可為單次劑量的形式，或可以為例如通過連續(xù)灌注泵。局部給藥的藥物組合物和制劑可以包括透皮貼劑、軟膏、洗劑、乳劑、凝膠劑、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體和粉末。常規(guī)藥物載體以及含水、粉末或基礎(chǔ)油、增稠劑等可以是必要的或期望的。

本發(fā)明也包括藥物組合物，其包含作為活性成分的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體(賦形劑)的組合。在一些實施方式中，所述組合物適于局部給藥。制備本發(fā)明的組合物時，活性成分通常與賦形劑混合、通過賦形劑稀釋或以例如膠囊、囊劑、紙或其他容器的形式封裝在該類載體中。當賦形劑用作稀釋劑時，其可為固體、半固體或液體材料，用作活性成分的媒介物、載體或培養(yǎng)基。因此，所述組合物可為如下形式：片劑、丸劑、粉劑、錠劑、囊劑、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿劑、氣溶膠(作為固體的形式或在液體培養(yǎng)基中)、含有例如至多10重量％的活性化合物的軟膏、軟膠囊和硬膠囊、栓劑、注射用無菌溶液以及無菌包裝的粉末。

制備制劑時，在與其他成分組合之前，可將活性化合物研磨以得到適宜粒徑。如果活性化合物基本上不溶，則可將其研磨為小于200篩目的粒徑。如果活性化合物基本上為水可溶性的，則可通過研磨調(diào)節(jié)粒徑以得到在制劑中基本上均勻分布，例如約40篩目。

本發(fā)明的化合物可以使用已知的研磨工序例如濕磨法進行研磨，以得到適于片劑制劑和其他制劑類型的粒徑?？赏ㄟ^本領(lǐng)域中已知的方法制備本發(fā)明化合物的細粒狀(納米顆粒)制劑，所述方法參見例如WO 2002/000196。

適宜賦形劑的一些實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇；甘露醇、淀粉、樹膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。所述制劑可另外包括：潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑例如苯甲酸甲酯和苯甲酸丙羥酯；以及甜味劑和調(diào)味劑?？膳渲票景l(fā)明組合物，從而在通過本領(lǐng)域中已知的程序給藥至患者后得到快速、持續(xù)或延遲釋放的活性成分。

在一些實施方式中，藥物組合物包含硅化微晶纖維素(SMCC)和至少一種本申請所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實施方式中，硅化微晶纖維素包含約98％的微晶纖維素以及約2％的二氧化硅w/w。

在一些實施方式中，所述組合物為持續(xù)釋放組合物，其包含至少一種本申請所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方式中，所述組合物包含至少一種本申請所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及至少一種選自以下的成分：微晶纖維素、乳糖一水合物、羥丙基甲基纖維素以及聚環(huán)氧乙烷。在一些實施方式中，所述組合物包含至少一種本申請所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及微晶纖維素、乳糖一水合物和羥丙基甲基纖維素。在一些實施方式中，所述組合物包含至少一種本申請所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及微晶纖維素、乳糖一水合物和聚環(huán)氧乙烷。在一些實施方式中，所述組合物進一步包含硬脂酸鎂或二氧化硅。在一些實施方式中，微晶纖維素為Avicel PH102^TM。在一些實施方式中，乳糖一水合物為Fast-flo 316^TM。在一些實施方式中，羥丙基甲基纖維素為羥丙基甲基纖維素2208K4M(例如Methocel K4M Premier^TM)和/或羥丙基甲基纖維素2208K100LV(例如Methocel K00LV^TM)。在一些實施方式中，聚環(huán)氧乙烷為聚環(huán)氧乙烷WSR 1105(例如Polyox WSR 1105^TM)。

在一些實施方式中，濕法造粒方法用于制備所述組合物。

在一些實施方式中，干法造粒方法用于制備所述組合物。所述組合物可配制為單位劑型的形式，每個劑量含有約5至約1,000mg(1g)、更通常為約100mg至約500mg的活性成分。在一些實施方式中，每個劑量含有約10mg的活性成分。在一些實施方式中，每個劑量含有約50mg的活性成分。

在一些實施方式中，每個劑量含有約25mg的活性成分。術(shù)語"單位劑型"是指物理上獨立的單元，適宜作為人患者和其他哺乳動物的單一劑量，每個單位含有經(jīng)計算預(yù)定量的活性物質(zhì)，其與適宜的藥物賦形劑聯(lián)合產(chǎn)生預(yù)期的治療效果。

用于配制藥物組合物的成分純度高，并且基本上不含潛在的有害污染物(例如至少國家食品級，通常至少分析等級，并且更通常至少藥物級)。

特別是對人類的消費，優(yōu)選在根據(jù)美國食品藥品監(jiān)督管理局有關(guān)規(guī)定的優(yōu)良生產(chǎn)操作規(guī)程下制備或配制所述組合物。例如，適宜的制劑可以為無菌的和/或基本上等滲的和/或完全符合美國食品藥品監(jiān)督管理局的所有良好生產(chǎn)規(guī)范。

活性化合物可以在寬的劑量范圍內(nèi)是有效的，并且通常以治療有效量給藥。但是，將會理解的是，化合物的實際給藥量將會通常由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)情況來確定，所述相關(guān)情況包括：待治療的條件，選擇的給藥途徑，給藥的實際化合物，個體患者的年齡、重量和反應(yīng)，以及患者癥狀的嚴重程度等。

本發(fā)明化合物的治療劑量可根據(jù)例如如下情況而變化：進行治療的特定用途、化合物的給藥方式、患者的健康狀況以及處方醫(yī)師的判斷。在藥物組合物中本發(fā)明化合物的比例或濃度可取決于許多因素而變化，所述因素包括劑量、化學(xué)特性(例如疏水性)以及給藥途徑。例如，可以含水生理緩沖液含有約0.1至約10％w/v化合物的形式提供本發(fā)明的化合物用于腸胃外給藥。一些通常劑量為每天約1μg/kg至約1g/kg的體重。在一些實施方式中，劑量為每天約0.01mg/kg至約100mg/kg的體重。劑量可能取決于如下的可變因素：疾病或病癥進展的類型和程度、特定患者的整體健康狀況、所選化合物的相對生物有效性、賦形劑的制劑以及其給藥途徑?？蓮捏w外或動物模型試驗系統(tǒng)所得到的劑量-反應(yīng)曲線進行外推有效劑量。

為了制備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥物賦形劑混合以形成固體預(yù)制劑組合物，所述固體預(yù)制劑組合物含有本發(fā)明化合物的均勻混合物。當提及這些預(yù)制劑組合物為均勻的組合物時，活性成分通常均勻分布在整個所述組合物中，使得所述組合物可容易細分到同等有效的單位劑型中，例如片劑、丸劑和膠囊。然后將該固體預(yù)制劑細分到上述類型的單位劑型中，所述單位劑型含有例如約0.1至約1000mg本發(fā)明的活性成分。

本發(fā)明的片劑或丸劑可進行包覆或在其他情況下配制以得到提供長效的優(yōu)勢的劑型。例如，片劑或丸劑可包含內(nèi)劑量成分和外劑量成分，外劑量成分為在內(nèi)劑量成分上的包膜形式。兩種成分可通過腸溶層進行分離，腸溶層用于抵抗在胃中的崩解并且允許內(nèi)成分完整進入到十二指腸中或延遲釋放。各種物質(zhì)可用于所述腸溶層或包衣，所述物質(zhì)包括許多高分子酸以及高分子酸與如下物質(zhì)的混合物：蟲膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素。

其中可并入本發(fā)明的化合物和組合物從而口服給藥或注射給藥的液體形式包括：水溶液，適當調(diào)味的糖漿劑,含水或油懸浮劑，以及用食用油調(diào)味的乳劑，所述食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油，和酏劑與類似的藥物媒介物。

吸入或吹入的組合物包括在藥學(xué)上可接受的含水或有機溶劑或其混合物中的溶液和懸浮劑、以及粉末。液體或固體組合物可以包含適宜的如上所述藥學(xué)上可接受的賦形劑。在一些實施方式中，所述組合物通過口服或鼻呼吸途徑進行給藥用于局部或系統(tǒng)性作用?？赏ㄟ^使用惰性氣體使組合物霧化?？梢灾苯訌撵F化裝置吸入霧化溶液，或霧化裝置可與面具、帳篷狀物(tent)或間歇式正壓呼吸機連接?？蓮难b置口服給藥或經(jīng)鼻給藥溶液、懸浮液或粉末組合物，所述裝置以適宜方式遞送制劑。局部制劑可包含一種或多種常規(guī)載體。在一些實施方式中，軟膏可包含水和一種或多種疏水性載體，所述一種或多種疏水性載體選自例如液體石蠟、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇以及白色(石油膏)等。乳劑的載體組合物可基于水與甘油和一種或多種其他成分的組合，所述一種或多種其他成分例如甘油單硬酸酯、PEG-甘油單硬酸酯和鯨蠟硬脂醇。凝膠可使用異丙醇和水適宜地與其他成分例如甘油和羥乙基纖維素等組合配制。在一些實施方式中，局部制劑包含至少約0.1、至少約0.25、至少約0.5、至少約1、至少約2或至少約5wt％的本發(fā)明化合物。局部制劑可適宜地封裝在管內(nèi)例如100g，其任選地與指導(dǎo)說明相關(guān)聯(lián)地用于治療選擇適應(yīng)癥，例如牛皮癬或其他皮膚病癥。

向患者給藥化合物或組合物的量將取決于如下而變化：給藥的藥物、給藥目的(例如預(yù)防或治療)、患者狀況以及給藥方式等。在治療應(yīng)用中，可向已經(jīng)患有疾病的患者以足以治愈或至少部分抑制疾病的癥狀及其并發(fā)癥的量給藥組合物。有效劑量將取決于治療的病情以及根據(jù)主治醫(yī)生來判斷，這取決于例如疾病嚴重程度以及患者的年齡、重量和一般情況等因素。

向患者給藥的組合物可為上述藥物組合物的形式。這些組合物可通過常規(guī)滅菌技術(shù)進行滅菌或可以無菌過濾。水溶液可按原樣或凍干包裝使用，在給藥之前，凍干制劑與無菌含水載體組合?；衔镏苿┑膒H通常將為3到11、更優(yōu)選5到9以及最優(yōu)選7到8。將會理解的是，使用某些前述賦形劑,載體或穩(wěn)定劑將導(dǎo)致形成藥物鹽。

本發(fā)明化合物的治療劑量可根據(jù)例如如下而變化：進行治療的特定用途、化合物的給藥方式、患者的健康狀況以及處方醫(yī)師的判斷。藥物組合物中本發(fā)明化合物的比例或濃度可取決于許多因素而變化，包括劑量、化學(xué)特性(例如疏水性)以及給藥途徑。例如，本發(fā)明的化合物可提供為含有約0.1至約10％w/v化合物的含水生理緩沖液用于腸胃外給藥。一些通常劑量為每天約1μg/kg至約1g/kg的體重。在一些實施方式中，劑量為每天約0.01mg/kg至約100mg/kg的體重。劑量可能取決于如下的可變因素：疾病或病癥進展的類型和程度、特定患者的整體健康狀況、所選化合物的相對生物有效性、賦形劑的制劑以及其給藥途徑?？蓮捏w外或動物模型試驗系統(tǒng)所得到的劑量-反應(yīng)曲線外推有效劑量。

V.標記化合物和測定方法

本發(fā)明的化合物可進一步用于研究如實施例2：體外實驗和實施例3：體內(nèi)實驗中所述的生物過程。因此，本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的標記化合物(放射性標記、熒光標記等)，其會不僅用于成像技術(shù)而且用于體外和體內(nèi)兩者的測定，用于定位和定量包括人在內(nèi)的組織樣本中的NAMPT，并且通過抑制結(jié)合標記化合物用于識別NAMPT配體。因此，本發(fā)明包括進行包含所述標記化合物的NAMPT測定。

本發(fā)明進一步包括本發(fā)明的同位素標記化合物。"同位素標記"或"放射性標記"化合物為本發(fā)明的化合物，其中一個或多個原子由具有與通常在自然界發(fā)現(xiàn)(即天然存在)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子所替代或取代。適宜的可以并入本發(fā)明化合物中的放射性核素(即放射性同位素)包括但不限于，³H(也寫為T，氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。并入本申請放射性標記化合物中的放射性核素將取決于此放射性標記化合物的特定應(yīng)用。例如，對于體外Pim激酶標記和競爭分析，并入³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I或³⁵S的化合物將通常是最有用的。對于放射成像應(yīng)用，¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br將通常是最有用的。

要理解的是，"放射性標記"或"標記化合物"為已經(jīng)并入至少一種放射性核素的化合物。在一些實施方式中，放射性核素選自以下：³H、¹⁴C、¹²⁵I、³⁵S和⁸²Br。在一些實施方式中，化合物并入1、2或3個氘原子。本領(lǐng)域中已知放射性同位素并入到有機化合物中的合成方法。

具體地，本發(fā)明的標記化合物可用于篩選試驗以鑒定和/或評價化合物。例如，可通過跟蹤標記來監(jiān)測標記的新合成或鑒定的化合物(即試驗化合物)與NAMPT接觸時的濃度變化，進行評價其結(jié)合NAMPT的能力。例如，可評價試驗化合物(標記)降低結(jié)合另一化合物的能力，所述另一化合物已知結(jié)合NAMPT(即標準化合物)。因此，試驗化合物與標準化合物進行競爭結(jié)合NAMPT的能力直接關(guān)聯(lián)到其親合力。相反，在一些其他篩選試驗中，標準化合物為標記的，試驗化合物為未標記的。因此，監(jiān)測標記標準化合物的濃度從而評價標準化合物與試驗化合物之間的競爭，并且因此確定試驗化合物的相對親合力。

VI.試劑盒

本申請也包括藥物試劑盒，其用于例如治療或預(yù)防NAMPT相關(guān)的疾病或病癥，例如惡性腫瘤，所述藥物試劑盒包括一個或多個容器，所述一個或多個容器容納包含治療有效量的式(I)化合物或其實施方式中的任一種的藥物組合物。所述試劑盒可進一步包括各種常規(guī)藥物試劑盒組件中的一個或多個，例如具有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的容器、另外的容器等，如對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將會容易想到的。試劑盒中也可包括說明書，作為插入物或標簽的形式，從而表明待給藥成分的量、給藥規(guī)范和/或混合成分的規(guī)范。

已經(jīng)描述了本發(fā)明的許多實施方式。但是，將會理解的是，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的前提下可以進行各種修改，因此，其他實施方式在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。