本發(fā)明提供了新的基于血凝素(HA)蛋白的流感疫苗，其是易于制造的，有力的并且引發(fā)針對流感HA蛋白的莖區(qū)的廣泛中和性流感抗體。特別地，本發(fā)明提供了融合前構(gòu)象的修飾的流感HA莖區(qū)蛋白及其部分，其可用于誘導(dǎo)中和性抗體的產(chǎn)生。本發(fā)明還提供在其表面上表達(dá)流感HA蛋白的新型基于納米顆粒(np)的疫苗。此類納米顆粒包含融合蛋白，每個融合蛋白包含連接到來自流感HA蛋白的莖區(qū)的抗原性或免疫原性部分的鐵蛋白的單體亞基。因?yàn)榇祟惣{米顆粒在其表面上展示流感HA蛋白莖區(qū)，所以它們可以用于針對流感病毒對個體接種疫苗。

發(fā)明背景

通過針對流感病毒接種疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫應(yīng)答主要針對病毒HA蛋白，其是病毒表面上負(fù)責(zé)病毒與宿主細(xì)胞受體的相互作用的糖蛋白。病毒表面上的HA蛋白是HA蛋白單體的三聚體，其被酶促切割以產(chǎn)生氨基端末端HA1和羧基端末端HA2多肽。球狀頭部僅由HA1多肽的主要部分組成，而將HA蛋白錨定到病毒脂質(zhì)包膜中的莖由HA2和HA1的部分組成。HA蛋白的球狀頭部包括兩個結(jié)構(gòu)域：受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(RBD)，包括唾液酸結(jié)合位點(diǎn)的約148個氨基酸殘基結(jié)構(gòu)域，和退化酯酶結(jié)構(gòu)域(vestigial esterase domain)，剛好低于RBD的較小的約75個氨基酸殘基區(qū)域。球狀頭部牽涉幾個包括免疫顯性表位的抗原位點(diǎn)。實(shí)例包括Sa，Sb，Ca₁，Ca₂和Cb抗原位點(diǎn)(參見例如Caton AJ et al,1982,Cell 31,417-427)。RBD-A區(qū)包括Sa抗原位點(diǎn)和Sb抗原位點(diǎn)的部分。

針對流感的抗體通常靶向HA球狀頭中的可變抗原位點(diǎn)，其圍繞保守的唾液酸結(jié)合位點(diǎn)，因此僅中和抗原緊密相關(guān)的病毒。HA頭部的可變性是由于流感病毒的恒定抗原漂移所致，并且造成流感的季節(jié)性流行病。相比之下，HA莖是高度保守的，并且經(jīng)歷很少的抗原漂移。不幸的是，不同于免疫顯性頭部，保守的HA莖不是非常免疫原性的。此外，病毒基因組的基因區(qū)段可以在宿主物種中進(jìn)行重配(抗原漂移)，創(chuàng)建具有改變的抗原性的能夠變成大流行的新病毒[Salomon,R.et al.Cell 136,402-410(2009)]。直到現(xiàn)在，每年更新流感疫苗以反映即將到來的流行病毒的預(yù)測的HA和神經(jīng)氨酸酶(NA)。

最近，分離了一類全新的針對流感病毒的廣泛中和性抗體，其識別高度保守的HA莖[Corti,D.et al.J Clin Invest 120,1663-1673(2010)；Ekiert,D.C.et al.Science 324,246-251(2009)；Kashyap,A.K.et al.Proc Natl Acad Sci USA105,5986-5991(2008)；Okuno,Y.et al.J Virol 67,2552-2558(1993)；Sui,J.et al.Nat Struct Mol Biol 16,265-273(2009)；Ekiert,D.C.et al.Science 333,843-850(2011)；Corti,D.et al.Science 333,850-856(2011)]。與毒株特異性抗體不同，那些抗體能夠中和多種抗原性獨(dú)特的病毒，因此誘導(dǎo)此類抗體已成為下一代通用疫苗開發(fā)的焦點(diǎn)[Nabel,G.J.et al.Nat Med 16,1389-1391(2010)]。然而，通過疫苗接種用此類異源中和概況強(qiáng)力引發(fā)這些抗體是困難的[Steel,J.et al.MBio 1,e0018(2010)；Wang,T.T.et al.PLoS Pathog 6,e1000796(2010)；Wei,C.J.et al.Science 329,1060-1064(2010)]。通過遺傳操作除去HA(其含有競爭性表位)的免疫顯性頭部區(qū)和穩(wěn)定化所得莖結(jié)構(gòu)域是改善這些廣泛中和性莖抗體的引發(fā)的一種潛在方式。

目前用于流感的疫苗策略使用化學(xué)滅活或減毒活流感病毒。兩種疫苗通常在含胚卵中產(chǎn)生，其由于耗時的方法和有限的生產(chǎn)能力而存在主要的制造限制。當(dāng)前疫苗的另一個更關(guān)鍵的限制是其高度毒株特異性功效。在2009年H1N1大流行的出現(xiàn)期間，這些挑戰(zhàn)變得顯著，從而驗(yàn)證了能夠克服這些限制的新疫苗平臺的必要性。病毒樣顆粒代表了這種替代方法之一，目前正在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行評估[Roldao,A.et al.Expert Rev Vaccines 9,1149-1176(2010)；Sheridan,C.Nat Biotechnol 27,489-491(2009)]。代替含胚卵，通常包含HA，NA和基質(zhì)蛋白1(M1)的VLP可以在哺乳動物或昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中大規(guī)模生產(chǎn)[Haynes,J.R.Expert Rev Vaccines 8,435-445(2009)]。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是其顆粒，多價(jià)性質(zhì)和正確折疊、三聚體HA刺突的真實(shí)展示，其忠實(shí)模擬感染性病毒體。相比之下，由于其組裝的性質(zhì)，有包膜的VLP含有小的但有限的宿主細(xì)胞組分，其可以在重復(fù)使用該平臺后呈現(xiàn)潛在的安全性，免疫原性挑戰(zhàn)[Wu,C.Y.et al.PLoS One 5,e9784(2010)]。此外，VLP誘導(dǎo)的免疫與當(dāng)前疫苗基本相同，因此不可能顯著改善疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫的效力和廣度。除了VLP外，重組HA蛋白也已經(jīng)在人體中進(jìn)行了評估[Treanor,J.J.et al.Vaccine 19,1732-1737(2001)；Treanor,J.J.JAMA 297,1577-1582(2007)]，盡管誘導(dǎo)保護(hù)性中和性抗體滴度的能力有限。在這些試驗(yàn)中使用的重組HA蛋白在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生并且可能不優(yōu)先形成天然三聚體[Stevens,J.Science303,1866-1870(2004)]。

盡管常規(guī)流感疫苗有幾種替代，但在過去幾十年中生物技術(shù)的進(jìn)步已經(jīng)允許利用生物材料的工程化來產(chǎn)生新的疫苗平臺。鐵蛋白，幾乎所有活生物體中發(fā)現(xiàn)的鐵貯存蛋白，是已經(jīng)廣泛研究和工程化以用于許多潛在的生物化學(xué)/生物醫(yī)學(xué)目的的實(shí)例[Iwahori,K.U.S.Patent 2009/0233377(2009)；Meldrum,F.C.et al.Science 257,522-523(1992)；Naitou,M.et al.U.S.Patent2011/0038025(2011)；Yamashita,I.Biochim Biophys Acta 1800,846-857(2010)]，包括用于展示外源表位肽的潛在疫苗平臺[Carter,D.C.et al.U.S.Patent 2006/0251679(2006)；Li,C.Q.et al.Industrial Biotechnol 2,143-147(2006)]。其作為疫苗平臺的用途是特別有趣的，這是由于其自身組裝和抗原的多價(jià)呈遞，這比單價(jià)形式誘導(dǎo)更強(qiáng)的B細(xì)胞應(yīng)答以及誘導(dǎo)T細(xì)胞非依賴性抗體應(yīng)答[Bachmann,M.F.et al.Annu Rev Immunol 15,235-270(1997)；Dintzis,H.M.et al.Proc Natl Acad Sci USA 73,3671-3675(1976)]。此外，鐵蛋白的分子結(jié)構(gòu)，其由組裝成具有432對稱的八面體籠的24個亞基組成，具有在其表面上展示多聚體抗原的潛力。

仍然需要提供強(qiáng)力的針對流感病毒的保護(hù)的有效的流感疫苗。特別地，仍然需要保護(hù)個體免受流感病毒異源株，包括進(jìn)化中的未來的季節(jié)性和大流行性流感病毒株的流感疫苗。本發(fā)明通過提供新穎的基于納米顆粒的疫苗來滿足這種需要，所述疫苗由新的HA穩(wěn)定化的莖(SS)組成，沒有遺傳上融合到納米顆粒表面的可變免疫顯性頭部區(qū)(gen6HA-SS np)，從而產(chǎn)生流感疫苗，其是易于制造的，有力的，并且引發(fā)廣泛異亞型保護(hù)性的抗體。

附圖簡述

圖1a顯示了HA頭部的基于結(jié)構(gòu)的除去允許保留莖免疫原抗原性。帶狀模型描繪了HA-SS設(shè)計(jì)途徑，開始于融合到T4折疊物(foldon)三聚化結(jié)構(gòu)域(在HA胞外域下方為綠色)的HA胞外域的模型。最后三個HA-SS設(shè)計(jì)(Gen4-6)遺傳融合到鐵蛋白納米顆粒(下圖)。每個HA三聚體的一個單體被遮蔽。用于創(chuàng)建Gen6的核心穩(wěn)定化突變顯示為球體。每種HA-SS免疫原設(shè)計(jì)下方顯示了三聚化百分比(包括折疊物)和對規(guī)定mAb的抗原親和常數(shù)(K_D，M)。ND，未確定；NA，不適用。圖1b分別顯示沒有折疊物結(jié)構(gòu)域的H1N1HA胞外域(PDB ID 1GBN)，Gen4HA-SS和Gen6HA-SS的HA部分的表面呈現(xiàn)，其通過與H5N1 2004VN的序列保守加陰影(深灰色，可變；白色，保守)。分別對于Gen4和Gen6HA-SS，無折疊物結(jié)構(gòu)域的免疫原的HA莖百分比增加。*進(jìn)一步評估此免疫原，并且在本公開的實(shí)施例部分中稱為H1-SS-np。圖1c顯示了描繪在Gen6HA-SS中Glu103-Lys51鹽橋替換為Leu103-Met51疏水對的橫截面圖的帶狀圖。虛線(左)指示橫截面的位置。圖1d顯示了以其可溶性和納米顆粒形式呈現(xiàn)的Gen6HA-SS的抗原性。三個圖顯示了一個頭(CH65)和三個莖特異性抗體(CR6261，CR9114，F(xiàn)I6v3)對Gen6’HA-SS(左圖)，H1-SS-np(中圖)和H1-SS-np’(右圖)的ELISA結(jié)合。濃度范圍為10-6.40×10^-4μg/mL的抗體的ELISA結(jié)合。圖1e和圖1f顯示了H1-SS-np(圖1e)和H1-SS-np’(圖1f)與HA莖定向性bNAb結(jié)合的Octet傳感圖。將H1-SS-np固定在Octet探針上，并與不同濃度的抗體結(jié)合片段Fab或scFv莖定向性抗體溫育，其在每個傳感圖的頂部指示。圖1g顯示通過抗IgM(＝總受體活性)，空np，HA-np(HA含有Y98F突變，以消除與唾液酸的非特異性結(jié)合)和H1-SS-np’的野生型IGHV1-69v-基因逆轉(zhuǎn)的CR6261BCR(左圖)對雙重Ile53Ala/Phe54Ala CDRH2突變體BCR(右圖)的刺激通過流式細(xì)胞術(shù)測量為Ca²⁺敏感染料FuraRed的Ca²⁺結(jié)合/未結(jié)合狀態(tài)的比率。

圖2a顯示三聚體，而不是納米顆粒莖免疫原，展示HA莖展開。左圖描述了Gen3HA-SS(黑色和灰色)和mAb C179(標(biāo)記)之間的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)的帶狀圖。圖2a的中間圖示出了在兩個不同視圖(側(cè)面和底部)中比較晶體結(jié)構(gòu)(光)與模型(暗)的展開的草圖。圖2a的右圖顯示了Gen3HA-SS/C179結(jié)合界面與1957H2N2HA/C179結(jié)合界面(PDB ID 4HLZ)的重疊?？贵wCDR環(huán)對于重鏈用“H”標(biāo)記，對于輕鏈用“L”標(biāo)記。重鏈框架3環(huán)標(biāo)記為FR3。RMSD，均方根偏差。圖2b描繪了與圖2a中相同的圖格式，顯示了Gen4HA-SS，并且在右圖中，Gen4HA-SS/CR6261重鏈結(jié)合界面與1918H1N1HA/CR6261結(jié)合界面(PDB ID 3GBN)的重疊。圖2c顯示H1-SS-np冷凍電子顯微術(shù)(cryo-electron microscopy)分析。前兩個圖分別顯示了Gen4HA-SS晶體結(jié)構(gòu)(剪切(cropped))和H1-SS-np模型，分別適合于一個H1-SS-np刺突的冷凍電子顯微術(shù)圖。圖2c的接下來兩個圖顯示了適合到H1-SS-np低溫電子顯微術(shù)圖中的整個H1-SS-np模型的兩個不同視圖。圖2d顯示分別用Superdex 20010/300和Superose 610/300柱得到的HA，Gen4HA-SS和H1-SS-np’(左圖)和HA np，Gen4HA-SS-np np和H1-SS-np’和H1-SS-np(右圖)的大小排阻層析中流感病毒HA和HA-SS不溶性和納米顆粒形式的表征。圖2e是HA-np(左圖)和Gen4HA-SS-np(中圖)和H1-SS-np(右圖)的負(fù)染色透射電子顯微術(shù)圖像。最初以67,000×放大率記錄圖像。圖2f顯示H1-SS-np場的低溫EM圖像。箭頭描繪一些環(huán)樣納米顆粒；比例尺為20nm。圖2g顯示了通過納米顆粒(插圖)的全局圓形平均值的2D徑向密度概況(曲線)對H1-SS-np的大小分析。該概況示出了兩層結(jié)構(gòu)，其具有以距離顆粒中心約為中心的基峰和跨越約至范圍的第二峰。峰高度的差異對于以含有幾個離散刺突的層為頂部的更連續(xù)的蛋白質(zhì)層是一致的。圖2h顯示H1-SS-np的無參考的2D類平均值，沒有施加對稱。類別指示具有蛋白質(zhì)殼和突出的刺突密度的顆粒的不同視圖，并且視圖與預(yù)期的八面體對稱一致。圖2i通過傅里葉殼關(guān)聯(lián)(FSC)圖的H1-SS-np 3D重建的分辨率評估。遵循如在RELION軟件包中實(shí)施的金標(biāo)準(zhǔn)程序(gold-standard procedure)，使用FSC(0.143)作為截留值。

圖3a顯示免疫的小鼠和雪貂的免疫應(yīng)答。左圖顯示針對多種多樣的HA蛋白的抗體端點(diǎn)滴度，并且右圖顯示來自用SAS佐劑化(SAS-adjuvanted)的H1-SS-np免疫的小鼠(每組n＝10)的血清的中和滴度。圖3b顯示了用SAS-佐劑化的空np(n＝5)，H1-SS-np’(n＝6)，2006-07TIV(n＝6)或H5HA(2xDNA/1xMIV；n＝6)免疫的雪貂的免疫應(yīng)答。圖3b的左圖顯示了H1-SS-np’免疫血清對多種多樣的HA蛋白的抗體端點(diǎn)滴度，并且右圖顯示了來自四種免疫方案的血清的HA莖反應(yīng)性。圖3c顯示了用三種施用方案免疫的雪貂的血清的中和滴度。在加強(qiáng)后兩周對每個個體動物顯示抗體端點(diǎn)和IC₅₀滴度。虛線指示ELISA和假型化慢病毒報(bào)告物測定法兩者的基線(1:25稀釋)。誤差棒表示平均值±s.d。使用雙尾學(xué)生t檢驗(yàn)(two-tailed student’s t-test)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

圖4a顯示了在小鼠和雪貂中針對致死性H5N1 2004VN流感病毒攻擊賦予的免疫保護(hù)。在第0、8和11周，用SAS-佐劑化的空np或H1-SS-np對BALB/c小鼠(每組n＝10)接種疫苗三次，或保持未接種疫苗(未處理)。最后一次疫苗接種后四周，用高劑量(25LD50)的H5N1 2004VN病毒攻擊小鼠，并監(jiān)測體重減輕(左圖)和存活(右圖)達(dá)14天。圖4b顯示用SAS-佐劑化的空np(n＝5)，H1-SS-np’(n＝6)，2006-07TIV(n＝6)或H5HA(DNA/MIV；n＝6)，并在用1000TCID₅₀的H5N1 2004VN最后免疫后6周攻擊。監(jiān)測體重減輕(左圖)和存活(右圖)達(dá)14天。圖4c顯示在用高劑量(25LD₅₀)的H5N1 2004VN流感病毒攻擊之前24小時用來自未處理或H1-SS-np-免疫動物的10mg Ig被動免疫(腹膜內(nèi))的BALB/c小鼠(每組n＝10)。監(jiān)測體重減輕(左圖)和存活(右圖)達(dá)14天。在圖4a，4b和4c的每一個中，黑色虛線(右圖)指示50％存活。使用時序(Mantel-Cox)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。圖4d顯示了未處理和H1-SS-np免疫Ig的表征。通過ELISA，未處理Ig(左)和H1-SS-np-免疫Ig(右)對空鐵蛋白np和各種HA蛋白的結(jié)合。圖4e顯示在輸注多克隆Ig后24小時的小鼠血清中Gen6HA-SS特異性Ig的估計(jì)濃度。

圖5-24提供了用于產(chǎn)生本發(fā)明的肽構(gòu)建體的質(zhì)粒圖譜和序列。如本公開表2中詳細(xì)描述的，圖5顯示了包含SEQ ID NO:266的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖6顯示了包含SEQ ID NO:273的Gen6_H1CA09_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖7顯示包含SEQ ID NO:280的Gen6_H2Sing57_K394M/M445L/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖8顯示包含SEQ ID NO:287的Gen6_H5Ind05K394M/M445L/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L/S49bW_N19Q的圖譜。圖9顯示包含SEQ ID NO:294的Gen6_H1NC99_K394M/E446L_N19Q的圖譜。圖10顯示包含SEQ ID NO:301的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖11顯示包含SEQ ID NO:308的Gen6_H1NC99_K394I/E446I/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖12顯示包含SEQ ID NO:315的Gen6H1NC99K394L/E446I/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖13顯示包含SEQ ID NO:322的Gen6_H1NC99_K394L/E446L/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖14顯示包含SEQ ID NO:329的Gen6_H1NC99_K394M/E446M/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖15顯示包含SEQ ID NO:336的Gen6H1NC99K394Q/E446Q/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖16顯示包含SEQ ID NO:343的Gen6H1NC99K394M/E446L/Y437D/N438L/H45N/V47T_N19Q的圖譜。圖17顯示包含SEQ ID NO:350的Gen6H1NC99V36I/K394M/L445M/E446L/E448Q/R449F/D452L/Y437D/N438L N19Q的圖譜。圖18顯示包含SEQ ID NO:357的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402aN/G402cT/S402dG/T402fA/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖19顯示包含SEQ ID NO:364的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402bG/G402cN/S402eT/T402fA/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖20顯示包含SEQ ID NO:371的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402eN/Y437D/N438L_N19Q的圖譜。圖21顯示了包含SEQ ID NO:378的Gen6H1NC99K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/G402cN/G402eT/T402fA/Q370N/E372T/Y437D/N438L_S21T的圖譜。圖22顯示了包含SEQ ID NO:386的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/G402cN/G402eT/T402fA/Q370N/E372T/Y437D/N438L_S21T/Q69N的圖。圖23顯示了包含SEQ ID NO:392的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/Y437D/N438L/Δ172-174的圖。圖24顯示了包含SEQ ID NO:399的Gen6_H1NC99_rpk3_Dloop2的圖。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及用于流感病毒的新型疫苗。更具體地，本發(fā)明涉及新的基于流感HA蛋白的疫苗，其引發(fā)針對來自一大批流感病毒的HA蛋白的莖區(qū)的免疫應(yīng)答。它還涉及自組裝納米顆粒，所述自組裝納米顆粒在其表面上展示來自流感HA蛋白的莖區(qū)的融合前構(gòu)象的免疫原性部分。此類納米顆?？捎糜卺槍α鞲胁《緦€體接種疫苗。因此，本發(fā)明還涉及用于產(chǎn)生此類納米顆粒的蛋白質(zhì)構(gòu)建體和編碼此類蛋白質(zhì)的核酸分子。另外，本發(fā)明涉及生產(chǎn)本發(fā)明的納米顆粒的方法，以及使用此類納米顆粒對個體接種疫苗的方法。

在進(jìn)一步描述本發(fā)明前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于描述的具體實(shí)施方案，因此當(dāng)然可以有所變化。還應(yīng)當(dāng)理解，本文中使用的術(shù)語僅為了描述具體的實(shí)施方案，而并不意圖為限制性的，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅會以權(quán)利要求書為限。

應(yīng)當(dāng)注意到，如本文中及所附權(quán)利要求書中使用的，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該/所述”包括復(fù)數(shù)提及物，除非上下文另有明確規(guī)定。例如，核酸分子指一種或多種核酸分子。因此，術(shù)語“一個”、“一種”、“一個/種或多個/種”和“至少一個/種”可以互換使用。類似地，術(shù)語“包含”、“包括”和“具有”可以互換使用。進(jìn)一步注意到，權(quán)利要求書可以撰寫為排除任何任選要素。因此，此陳述意圖充當(dāng)與權(quán)利要求要素的敘述結(jié)合使用排除術(shù)語，如“單獨(dú)”、“僅”等，或者使用“負(fù)”限定的前置基礎(chǔ)。

在上文外，除非另有明確定義，本文中公開的各個實(shí)施方案共同的下列術(shù)語和短語如下定義：

如本文中使用的，蛋白質(zhì)構(gòu)建體是由人工制備的蛋白質(zhì)，其中兩個或更多個氨基酸序列以自然界中未發(fā)現(xiàn)的方式共價(jià)連接。被連接的氨基酸序列可以是相關(guān)的或不相關(guān)的。如本文所使用的，如果通常沒有發(fā)現(xiàn)多肽序列的氨基酸序列在其天然環(huán)境(例如細(xì)胞內(nèi))中通過共價(jià)鍵連接在一起，則它們是不相關(guān)的。例如，通常沒有發(fā)現(xiàn)構(gòu)成鐵蛋白的單體亞基的氨基酸序列和流感HA蛋白的氨基酸序列通過共價(jià)鍵連接在一起。因此，此類序列被認(rèn)為是不相關(guān)的。

蛋白質(zhì)構(gòu)建體還可以包含相關(guān)的氨基酸序列。例如，流感HA蛋白的結(jié)構(gòu)使得頭部區(qū)氨基酸序列在兩端側(cè)翼為莖區(qū)氨基酸序列。通過遺傳手段，可以通過從頭部區(qū)的中間除去氨基酸殘基，同時保持側(cè)翼為莖區(qū)序列的頭部區(qū)的部分，來創(chuàng)建HA蛋白的缺失形式。雖然最終分子中序列的順序保持相同，但氨基酸之間的空間關(guān)系將不同于天然蛋白。因此，此類分子將被認(rèn)為是蛋白質(zhì)構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明，蛋白質(zhì)構(gòu)建體也可以稱為融合蛋白。

蛋白質(zhì)構(gòu)建體中的氨基酸序列可以彼此直接連接，或者它們可以使用接頭序列連接。接頭序列，肽或多肽是用于連接具有期望特征(例如，結(jié)構(gòu)，表位，免疫原性，活性等)的兩種蛋白質(zhì)的短(例如，2-20)氨基酸序列。接頭序列通常不具有其自身的活性，并且通常用于允許蛋白質(zhì)構(gòu)建體的其它部分呈現(xiàn)期望的構(gòu)象。接頭序列通常由小氨基酸殘基和/或其運(yùn)行(runs)，例如絲氨酸，丙氨酸和甘氨酸制備，盡管不排除使用其它氨基酸殘基。

如本文中使用的，術(shù)語免疫原性是指特定蛋白質(zhì)或其特定區(qū)域引發(fā)對特定蛋白質(zhì)或包含與特定蛋白質(zhì)具有高度同一性的氨基酸序列的蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答的能力。根據(jù)本發(fā)明，具有高同一性程度的兩種蛋白質(zhì)具有至少80％相同，至少85％相同，至少87％相同，至少90％相同，至少92％相同，至少93％相同，至少94％相同，至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的氨基酸序列。測定兩個氨基酸或核酸序列之間的百分比同一性的方法是本領(lǐng)域已知的。

如本文中使用的，對本發(fā)明的疫苗或納米顆粒的免疫應(yīng)答是受試者中形成對疫苗中存在的HA蛋白的體液和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。為了本發(fā)明的目的，“體液免疫應(yīng)答”是指由抗體分子(包括分泌型(IgA)或IgG分子)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，而“細(xì)胞免疫應(yīng)答”是由T淋巴細(xì)胞和/或其它白血細(xì)胞介導(dǎo)的。細(xì)胞免疫的一個重要方面涉及溶細(xì)胞性T細(xì)胞(“CTL”)的抗原特異性應(yīng)答。CTL對肽抗原具有特異性，所述肽抗原與由主要組織相容性復(fù)合物(MHC)編碼并且在細(xì)胞表面上表達(dá)的蛋白質(zhì)聯(lián)合呈現(xiàn)。CTL有助于誘導(dǎo)和促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)微生物的破壞或被此類微生物感染的細(xì)胞的溶解。細(xì)胞免疫的另一方面涉及輔助T細(xì)胞的抗原特異性應(yīng)答。輔助T細(xì)胞作用為幫助刺激非特異性效應(yīng)細(xì)胞針對細(xì)胞的功能，并且聚焦非特異性效應(yīng)細(xì)胞針對細(xì)胞的活性，所述細(xì)胞在其表面上展示與MHC分子聯(lián)合的肽抗原。細(xì)胞免疫應(yīng)答還指由活化的T細(xì)胞和/或其它白細(xì)胞(包括源自CD4+和CD8+T細(xì)胞的那些)產(chǎn)生的細(xì)胞因子，趨化因子和其它此類分子的產(chǎn)生。

因此，免疫應(yīng)答可以是刺激CTL和/或輔助T細(xì)胞的產(chǎn)生或激活的應(yīng)答。也可以刺激趨化因子和/或細(xì)胞因子的產(chǎn)生。疫苗還可以引發(fā)抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。因此，免疫應(yīng)答可以包括一種或多種以下效應(yīng)：由B細(xì)胞產(chǎn)生抗體(例如IgA或IgG)；和/或特異性針對存在于疫苗中的HA蛋白的抑制物(suppressor)，細(xì)胞毒性或輔助T細(xì)胞和/或T細(xì)胞的活化。這些應(yīng)答可用來中和感染性(例如抗體依賴性保護(hù))，和/或介導(dǎo)抗體-補(bǔ)體或抗體依賴性細(xì)胞細(xì)胞毒性(ADCC)以向免疫的個體提供保護(hù)。此類反應(yīng)可以使用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)免疫測定法和中和測定法來測定。

如本文中使用的，術(shù)語抗原性的，抗原性等是指由抗體或一組抗體結(jié)合的蛋白質(zhì)。類似地，蛋白質(zhì)的抗原部分是被抗體或一組抗體識別的任何部分。根據(jù)本發(fā)明，通過抗體識別蛋白質(zhì)是指抗體選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合。如本文中使用的，短語選擇性地結(jié)合，選擇性結(jié)合等是指抗體與同HA無關(guān)的結(jié)合蛋白或樣品或測定法中非蛋白質(zhì)組分形成對比優(yōu)先結(jié)合HA蛋白的能力。優(yōu)先結(jié)合HA的抗體是結(jié)合HA但不顯著結(jié)合可能存在于樣品或測定法中的其它分子或組分的抗體。認(rèn)為顯著的結(jié)合是例如抗HA抗體與非HA分子的結(jié)合，其親和力或親合力大到足以干擾測定法檢測和/或測定樣品中抗流感抗體，或HA蛋白水平的能力?？纱嬖谟跇悠坊驕y定法中的其它分子和化合物的實(shí)例包括但不限于非HA蛋白，如白蛋白，脂質(zhì)和碳水化合物。根據(jù)本發(fā)明，非HA蛋白是具有與本文公開的流感HA蛋白的序列共享小于60％同一性的氨基酸序列的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，一種或多種抗體提供廣泛的異亞型保護(hù)。在一些實(shí)施方案中，一種或多種抗體是中和性的。

如本文中使用的，中和性抗體是防止流感病毒完成一輪復(fù)制的抗體。如本文所定義的，一輪復(fù)制指病毒的生命周期，從病毒附著到宿主細(xì)胞開始，并以從宿主細(xì)胞出芽新形成的病毒結(jié)束。該生命周期包括但不限于以下步驟：附著于細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞，HA蛋白的切割和重排，病毒膜與內(nèi)體膜的融合，病毒核糖核蛋白向細(xì)胞質(zhì)的釋放，形成新病毒顆粒和自宿主細(xì)胞膜的病毒顆粒的出芽。根據(jù)本發(fā)明，中和性抗體是抑制一個或多個此類步驟的抗體。

如本文中使用的，廣泛中和性抗體是中和流感病毒的多于一種類型，亞型和/或毒株的抗體。例如，針對來自A型流感病毒的HA蛋白引發(fā)的廣泛中和性抗體可以中和B型或C型病毒。作為另一個實(shí)例，針對來自I型流感病毒的HA蛋白引發(fā)的廣泛中和性抗體可以中和組2病毒。作為另一個實(shí)例，針對來自病毒的一種亞型或株的HA蛋白引發(fā)的廣泛中和性抗體可以中和病毒的另一種亞型或株。例如，針對來自H1流感病毒的HA蛋白引發(fā)的廣泛中和性抗體可以中和來自一種或多種選自下組的亞型的病毒：H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H8,H10,H11,H12,H13,H14,H15,H16,H17或H18。

根據(jù)本發(fā)明，用于分類流感病毒的所有命名法是本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的。因此，流感病毒的類型或組是指A型流感，B型流感或C型流感。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，病毒作為特定類型的命名涉及在各自的M1(基質(zhì))蛋白質(zhì)或NP(核蛋白)中的序列差異。A型流感病毒進(jìn)一步分為組1和組2。這些組進(jìn)一步分為亞型，其指基于其HA蛋白的序列的病毒分類。目前普遍認(rèn)可的亞型的實(shí)例是H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H8,H10,H11,H12,H13,H14,H15,H16,H17或H18。組1流感亞型是H1,H2,H5,H6,H8,H9,H11,H12,H13,H16,H17和H18。組2流感亞型是H3,H4,H7,H10,H14,和H15。最后，術(shù)語毒株是指亞型內(nèi)彼此不同之處在于它們在其基因組中具有小的遺傳變異的病毒。

如本文中使用的，流感血凝素蛋白或HA蛋白是指全長流感血凝素蛋白或其任何部分，其可用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體和納米顆?；蚰軌蛞l(fā)免疫應(yīng)答。優(yōu)選的HA蛋白是能夠形成三聚體的那些。全長流感HA蛋白的表位是指此類蛋白質(zhì)的部分，其可以引發(fā)針對同源流感病毒株，即衍生HA的菌株的抗體應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，此類表位也可以引發(fā)針對異源流感病毒株，即具有與免疫原的HA不同的HA的毒株的抗體應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，表位引發(fā)廣泛異亞型保護(hù)性應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，表位引發(fā)中和性抗體。

如本文中使用的，變體指在序列上與參照序列相似但不相同的蛋白質(zhì)或核酸分子，其中變體蛋白質(zhì)(或由變體核酸分子編碼的蛋白質(zhì))的活性沒有顯著改變。這些序列變異可以是天然存在的變異或者它們可以經(jīng)由使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的遺傳工程化技術(shù)來工程化改造。此類技術(shù)的例子可見Sambrook J,Fritsch E F,Maniatis T等,于Molecular Cloning--A Laboratory Manual,2nd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989,pp.9.31-9.57)，或于Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6，這兩篇的完整內(nèi)容通過提及并入本文。

就變體而言，氨基酸或核酸序列的任何類型變化是可允許的，只要所得的變體蛋白質(zhì)保留引發(fā)針對流感病毒的中和性或非中和性抗體的能力。此類變異的例子包括但不限于缺失、插入、取代及其組合。例如，就蛋白質(zhì)而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的是，一個或多個(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10)氨基酸經(jīng)?？梢詮牡鞍踪|(zhì)的氨基和/或羧基端末端除去，而不顯著影響所述蛋白質(zhì)的活性。類似地，一個或多個(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10)氨基酸經(jīng)?？梢圆迦氲鞍踪|(zhì)中，而不顯著影響蛋白質(zhì)的活性。在已經(jīng)進(jìn)行插入的變體中，插入的氨基酸可以通過參考其后進(jìn)行插入的氨基酸殘基來提及。例如，在氨基酸殘基402之后插入四個氨基酸殘基可以稱為402a-402d。此外，如果那些插入的氨基酸之一隨后被另一個氨基酸取代，則這種變化可以參考字母位置提及。例如，用蘇氨酸取代插入的甘氨酸(在插入物的另一個位置中)可以稱為S402dT。

如記錄的，相對于本文中公開的流感HA蛋白，本發(fā)明的變體蛋白質(zhì)可以含有氨基酸取代。任何氨基酸取代是可允許的，只要蛋白質(zhì)的活性不受顯著影響。在這點(diǎn)上，本領(lǐng)域中應(yīng)當(dāng)理解，氨基酸可以基于其物理特性而分成組。此類組的例子包括但不限于帶電荷的氨基酸、不帶電荷的氨基酸、極性不帶電荷的氨基酸、和疏水性氨基酸。含有取代的優(yōu)選變體是那些其中的氨基酸用來自相同組的氨基酸取代的變體。此類取代稱為保守取代。

天然存在的殘基可以基于共同的側(cè)鏈特性而分成類：

1)疏水性：Met,Ala,Val,Leu,Ile；

2)中性親水性：Cys,Ser,Thr；

3)酸性：Asp,Glu；

4)堿性：Asn,Gln,His,Lys,Arg；

5)影響鏈取向的殘基：Gly,Pro；和

6)芳香基：Trp,Tyr,Phe。

例如，非保守取代可以牽涉用這些類別之一的成員替換來自另一類別的成員。

在進(jìn)行氨基酸變化中，可以考慮氨基酸的親水指數(shù)?；诿糠N氨基酸的疏水性和電荷性質(zhì)，已給每種氨基酸的親水指數(shù)賦值。親水指數(shù)是：異亮氨酸(+4.5)；纈氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；蘇氨酸(-0.7)；絲氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；組氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；賴氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。本領(lǐng)域一般了解親水氨基酸指數(shù)在賦予蛋白質(zhì)相互作用性生物學(xué)功能中的重要性(Kyte等,1982,J.Mol.Biol.157:105-31)。已知可以用某些氨基酸替代其它具有相似親水指數(shù)或分值的氨基酸，而仍然保留相似的生物學(xué)活性。在進(jìn)行基于親水指數(shù)的變化中，親水指數(shù)在±2之內(nèi)的氨基酸取代是優(yōu)選的，在±1之內(nèi)的那些氨基酸取代是特別優(yōu)選的，且在±0.5之內(nèi)的那些氨基酸取代是甚至更特別優(yōu)選的。

本領(lǐng)域還了解可以基于疏水性有效地進(jìn)行類似氨基酸的取代，特別是在意圖將由此產(chǎn)生的生物功能等同性蛋白質(zhì)或肽用于結(jié)合免疫學(xué)發(fā)明(本案就是如此)的情況中。蛋白質(zhì)的最大局部平均親水性(如由其相鄰氨基酸的親水性所決定的)與其免疫原性和抗原性，即與蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性相關(guān)聯(lián)。已將下列親水性數(shù)值(hydrophilicity value)賦予這些氨基酸殘基：精氨酸(+3.0)；賴氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；絲氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；蘇氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；組氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；纈氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；異亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；和色氨酸(-3.4)。在進(jìn)行基于相似親水性數(shù)值的變化時，親水性數(shù)值在±2之內(nèi)的氨基酸取代是優(yōu)選的，在±1之內(nèi)的那些氨基酸取代是特別優(yōu)選的，且在±0.5之內(nèi)的那些氨基酸取代是甚至更特別優(yōu)選的。還可以基于親水性鑒定來自一級氨基酸序列的表位。

在期望此類取代時，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定期望的氨基酸取代(無論是保守的還是非保守的)。例如，可以使用氨基酸取代來鑒定HA蛋白的重要?dú)埢?，或者提高或降低本文中描述的HA蛋白的免疫原性、溶解度或穩(wěn)定性。下文在表I中顯示了例示性的氨基酸取代。

表1

氨基酸取代

如本文中使用的，短語顯著影響蛋白質(zhì)活性指將蛋白質(zhì)活性降低至少10％，至少20％，至少30％，至少40％或至少50％。就本發(fā)明而言，此類活性可以例如以蛋白質(zhì)引發(fā)針對流感病毒的保護(hù)性抗體的能力測量。此類活性可以通過測量針對流感病毒的此類抗體的效價(jià)，此類抗體針對流感感染提供保護(hù)的能力或者通過測量由引發(fā)的抗體中和的類型、亞型或毒株的數(shù)目測量。測定抗體效價(jià)，實(shí)施保護(hù)測定法，和實(shí)施病毒中和測定法的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在上文描述的活性外，可以測量的其它活性包括凝集紅細(xì)胞的能力和蛋白質(zhì)對細(xì)胞的結(jié)合親和力。測量此類活性的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。

術(shù)語個體、受試者和患者是本領(lǐng)域中公知的，并且在本文中可互換使用，指對流感感染易感的任何人或其它動物。例子包括但不限于人和其它靈長類，包括非人靈長類，諸如黑猩猩及其它猿和猴物種；家畜，諸如牛、綿羊、豬、海豹、山羊和馬；馴養(yǎng)哺乳動物，諸如犬和貓；實(shí)驗(yàn)室動物，包括嚙齒類，諸如小鼠、大鼠和豚鼠；禽類，包括馴養(yǎng)禽類、野生禽類和獵禽，諸如雞、火雞和其它雞形目(gallinaceous)禽類、鴨、鵝，等等。術(shù)語個體、受試者和患者單獨(dú)不表示特定年齡、性別、人種，等等。因此，任何年齡的個體(無論雄性或雌性)意圖為本公開內(nèi)容覆蓋，并且包括但不限于老年人、成人、兒童、嬰孩(babies)、嬰兒(infant)、和幼童(toddler)。同樣地，本發(fā)明的方法可以適用于任何人種，包括例如高加索人(Caucasian)(白種人)、非洲裔美國人(African-American)(黑人)、美洲原住民(Native American)、夏威夷原住民(Native Hawaiian)、西班牙裔(Hispanic)、拉美裔(Latino)、亞裔(Asian)、和歐洲裔。感染的受試者是已知在其體內(nèi)具有流感病毒的受試者。

如本文中使用的，接種疫苗的受試者是已經(jīng)施用意圖提供針對流感病毒的保護(hù)性效果的疫苗的受試者。

如本文中使用的，術(shù)語暴露指受試者已經(jīng)與已知感染流感病毒的動物個體接觸。

本文中討論的出版物僅提供其在本申請的提交日前的公開內(nèi)容。本文中的任何內(nèi)容不應(yīng)解釋為承認(rèn)憑借在先發(fā)明，本發(fā)明沒有資格早于此類出版物。此外，提供的出版日期可以與實(shí)際出版日期不同，這可能需要獨(dú)立確認(rèn)。

除非另有定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的通常理解具有相同的意義。雖然與本文中描述的方法和材料類似或等同的任何方法和材料也可以用于實(shí)施或測試本發(fā)明，現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。本文中提及的所有出版物通過提及收入本文以公開并描述與結(jié)合出版物引用的方法和/或材料。

應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會，本發(fā)明的某些特征(為了清楚，其在不同實(shí)施方案的背景中描述)也可以在單一實(shí)施方案中組合提供。相反，本發(fā)明的各個特征(為了簡潔，其在單一實(shí)施方案的背景中描述)也可以分開或在任何合適的亞組合中提供。實(shí)施方案的所有組合是本發(fā)明明確涵蓋的，并且在本文中公開，就像每種組合單獨(dú)且明確公開一樣。另外，所有亞組合也是本發(fā)明明確涵蓋的，并且在本文中公開，就像每種此類亞組合在本文中單獨(dú)且明確公開一樣。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含流感HA蛋白的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其中流感HA蛋白的頭部區(qū)已被包含距HA蛋白頭部區(qū)少于5個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列替換。如本文中使用的，HA蛋白是指可用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體和納米顆粒的全長流感HA蛋白或其任何一個或多個部分和/或變體。因此，本發(fā)明涉及能夠引發(fā)對流感HA蛋白的莖區(qū)的免疫應(yīng)答的分子。在一些實(shí)施方案中，HA蛋白構(gòu)建體的序列已經(jīng)進(jìn)一步改變(即突變)，以穩(wěn)定蛋白的莖區(qū)，其形式可以呈遞給免疫系統(tǒng)。此類HA蛋白的一些代表性實(shí)例和由其制備的蛋白質(zhì)構(gòu)建體示于下表2中。

表2

病毒表面上的三聚體HA蛋白包含球狀頭部區(qū)和莖或柄區(qū)域，其將HA蛋白錨定到病毒脂質(zhì)包膜中。流感HA的頭部區(qū)僅由HA1多肽的主要部分形成，而柄區(qū)由HA1和HA2的區(qū)段制成。根據(jù)本發(fā)明，頭部區(qū)大致由對應(yīng)于流感H1N1NC的全長HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸59-291的HA蛋白的氨基酸組成。類似地，如本文所使用的，莖區(qū)大約由氨基酸1-58和對應(yīng)于流感H1N1NC的全長HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸328-564的HA蛋白的氨基酸組成。如本文中使用的，關(guān)于頭部和莖區(qū)的術(shù)語大約是指上述序列在長度上可以改變幾個氨基酸，而不影響本發(fā)明的性質(zhì)。因此，例如，頭部區(qū)可以由氨基酸50-291，氨基酸59-296或氨基酸59-285組成。通常，頭部和莖區(qū)域?qū)⒉粫纳鲜鑫恢酶淖兂^十個氨基酸；然而，在一個實(shí)施方案中，頭部區(qū)的羧基端末端可以延伸得遠(yuǎn)達(dá)對應(yīng)于SEQ ID NO:8的氨基酸327的氨基酸。在一個實(shí)施方案中，頭部區(qū)由在對應(yīng)于流感A/新喀里多尼亞/20/1999(SEQ ID NO:8)的Cys59和Cys291的氨基酸殘基之間的氨基酸序列組成，并且包括所述氨基酸殘基。關(guān)于HA蛋白，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，來自不同流感病毒的HA蛋白可能由于蛋白質(zhì)中的突變(插入，缺失)而具有不同的長度。因此，提及相應(yīng)的區(qū)域是指與所比較的區(qū)域在序列、結(jié)構(gòu)和/或功能上相同或幾乎相同(例如，至少90％相同，至少95％相同，至少98％相同或至少99％相同)的另一種蛋白質(zhì)的區(qū)域。例如，關(guān)于HA蛋白的莖區(qū)，另一HA蛋白中的相應(yīng)區(qū)域可以不具有相同的殘基數(shù)，但是將具有幾乎相同的序列并且將執(zhí)行相同的功能。作為實(shí)例，在上述實(shí)施方案中，來自A/新喀里多尼亞/20/1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的頭部區(qū)在氨基酸C291處結(jié)束。A/加利福尼亞/4/2009(H1)(SEQ ID NO:11)中頭部區(qū)末端的相應(yīng)氨基酸是半胱氨酸292。為了更好地闡明病毒之間的序列比較，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用編號系統(tǒng)，其將氨基酸位置與參考序列相關(guān)。因此，來自不同流感毒株的HA蛋白中的相應(yīng)氨基酸殘基相對于其與蛋白質(zhì)的n-末端氨基酸的距離可能不具有相同的殘基數(shù)。例如，使用H3編號系統(tǒng)，參考A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)中的殘基100并不意味著它是距離N-末端氨基酸的第100個殘基。相反，A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)的殘基100與流感H3N2毒株的殘基100對齊。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解這種編號系統(tǒng)的使用。雖然H3編號系統(tǒng)可用于鑒定氨基酸的位置，除非另有說明，HA蛋白中氨基酸殘基的位置將通過一般性參考來自本文公開的序列的相應(yīng)氨基酸的位置來鑒定。

本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，通過將流感病毒HA蛋白的特定序列與能夠?qū)A蛋白呈遞給免疫系統(tǒng)的不相關(guān)分子組合，可以引發(fā)對HA蛋白的靶向區(qū)域的免疫應(yīng)答。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含與單體亞基蛋白的至少部分連接的流感HA蛋白的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其中流感HA蛋白的頭部區(qū)已被包含來自HA蛋白的頭部區(qū)的少于5個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列替換，并且其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。

通過至少將流感HA蛋白的部分與單體亞基連接，本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠組裝成在其表面上表達(dá)HA的三聚體的納米顆粒。應(yīng)當(dāng)理解，構(gòu)成此類三聚體的HA蛋白是融合前形式，并且與單體亞基的連接和在納米顆粒上的表達(dá)使融合前蛋白以其三聚體形式穩(wěn)定化。這是重大的，因?yàn)镠A蛋白以更天然的形式呈現(xiàn)，意味著莖多肽的某些表面不被暴露，從而降低莖多肽可能誘導(dǎo)不利抗體應(yīng)答的風(fēng)險(xiǎn)。

在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自流感HA蛋白的莖區(qū)的至少一個免疫原性部分，其中所述蛋白引發(fā)針對流感病毒的保護(hù)性抗體。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的HA蛋白的莖區(qū)的至少一個免疫原性部分，其中蛋白質(zhì)引發(fā)針對流感病毒的保護(hù)性抗體。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自選自以下的HA蛋白的莖區(qū)的至少一個免疫原性部分：H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，流感H4病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白和H18流感病毒HA蛋白。

在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，包含HA蛋白的免疫原性部分的此類蛋白質(zhì)引發(fā)針對流感病毒的廣泛保護(hù)性抗體的產(chǎn)生。

蛋白質(zhì)的免疫原性部分包含表位，其是被免疫系統(tǒng)識別的氨基酸殘基的簇，從而引發(fā)免疫應(yīng)答。此類表位可以由連續(xù)的氨基酸殘基(即，在蛋白質(zhì)中彼此相鄰的氨基酸殘基)組成，或者它們可以由非連續(xù)的氨基酸殘基(即，蛋白質(zhì)中彼此不相鄰的氨基酸殘基)，但在最終折疊的蛋白質(zhì)中緊密空間接近。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全理解，表位需要最少六個氨基酸殘基，以便被免疫系統(tǒng)識別。因此，在一個實(shí)施方案中，來自流感HA蛋白的免疫原性部分包含至少一個表位。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自流感HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸，所述HA蛋白來自選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸，所述HA蛋白來自選自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白和H18流感病毒HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸，所述HA蛋白來自于選自下組的病毒株：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其變體。在一個實(shí)施方案中，氨基酸是來自HA蛋白的莖區(qū)的連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸的此類蛋白質(zhì)引發(fā)針對流感病毒的廣泛保護(hù)性抗體的產(chǎn)生。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸，所述HA蛋白包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自HA蛋白的莖區(qū)的至少6個氨基酸，至少10個氨基酸，至少25個氨基酸，至少50個氨基酸，至少75個氨基酸或至少100個氨基酸，所述HA蛋白包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:150,SEQ ID NO:152,SEQ ID NO:154,SEQ ID NO:156,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，氨基酸是來自HA蛋白的莖區(qū)的連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，氨基酸是非連續(xù)的，但在最終蛋白質(zhì)中緊密空間接近。

雖然本申請例示了來自幾種示例性HA蛋白的莖區(qū)序列的使用，但是本發(fā)明也可以使用來自包含所公開的HA序列的變異的蛋白質(zhì)的莖區(qū)來實(shí)施。因此，在一個實(shí)施方案中，HA蛋白來自選自下組的病毒：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其變體。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含與HA蛋白的莖區(qū)至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列，所述HA蛋白包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:,SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

在一個實(shí)施方案中，HA蛋白的頭部區(qū)序列被接頭序列替換?？梢允褂萌魏谓宇^序列，只要莖區(qū)序列能夠形成期望的結(jié)構(gòu)。雖然任何氨基酸可用于制備接頭序列，但優(yōu)選使用缺少大的或帶電荷的側(cè)鏈的氨基酸。優(yōu)選的氨基酸包括但不限于絲氨酸，甘氨酸和丙氨酸。在一個實(shí)施方案中，接頭由絲氨酸和甘氨酸殘基制成。接頭序列的長度可以變化，但是優(yōu)選的實(shí)施方案使用最短的可能序列，以允許莖序列形成期望的結(jié)構(gòu)。在一個實(shí)施方案中，接頭序列的長度小于10個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，接頭序列的長度小于5個氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，接頭序列缺乏來自HA蛋白的頭部區(qū)的連續(xù)氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，接頭序列包含來自HA蛋白頭部區(qū)的少于5個連續(xù)氨基酸。

如上所述，HA序列與單體亞基蛋白的部分連接。如本文中使用的，單體亞基蛋白是指能夠結(jié)合其它單體亞基蛋白的蛋白單體，使得單體亞基蛋白自組裝成納米顆粒。任何單體亞基蛋白可以用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，只要該蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成在其表面上展示HA蛋白的多聚體結(jié)構(gòu)。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是鐵蛋白。

鐵蛋白是在所有動物，細(xì)菌和植物中發(fā)現(xiàn)的球狀蛋白，其主要通過將水合鐵離子和質(zhì)子運(yùn)輸?shù)降V化核心和從礦化核心運(yùn)輸來控制多核Fe(III)₂O₃形成的速率和位置起作用。鐵蛋白的球狀形式由單體亞基蛋白(也稱為單體鐵蛋白亞基)組成，其是具有約17-20kDa的分子量的多肽。一個此類單體鐵蛋白亞基的序列的實(shí)例由SEQ ID NO:2表示。每個單體鐵蛋白亞基具有螺旋束的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，其包括四個反向平行螺旋基序，具有大致垂直于4螺旋束的長軸的第五較短螺旋(c-端螺旋)。根據(jù)慣例，螺旋分別從N-末端標(biāo)記為“A，B，C和D&E”。N-末端序列位于納米顆粒三折軸附近并延伸到表面，而E螺旋在四折疊軸上聚集在一起，C-末端延伸到顆粒核心中。這種包裝的結(jié)果在納米顆粒表面上創(chuàng)建兩個孔。預(yù)期這些孔中的一個或兩個代表水合鐵擴(kuò)散進(jìn)入和離開納米顆粒的點(diǎn)。產(chǎn)生后，這些單體鐵蛋白亞基蛋白自組裝成球狀鐵蛋白蛋白。因此，鐵蛋白的球狀形式包含24個單體，鐵蛋白亞基蛋白，并具有432對稱的殼體樣結(jié)構(gòu)。

根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的單體鐵蛋白亞基是鐵蛋白蛋白的全長單一多肽或其任何部分，其能夠指導(dǎo)單體鐵蛋白亞基自組裝成蛋白質(zhì)的球狀形式。此類蛋白質(zhì)的實(shí)例包括但不限于SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5。來自任何已知的鐵蛋白蛋白的單體鐵蛋白亞基的氨基酸序列可以用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，只要單體鐵蛋白亞基能夠自組裝成在其表面上展示HA的納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，單體亞基來自選自下組的鐵蛋白蛋白：細(xì)菌鐵蛋白蛋白，植物鐵蛋白蛋白，藻鐵蛋白蛋白，昆蟲鐵蛋白蛋白，真菌鐵蛋白蛋白和哺乳動物鐵蛋白蛋白。在一個實(shí)施方案中，所述鐵蛋白蛋白來自幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)。

本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體不需要包含鐵蛋白蛋白的單體亞基多肽的全長序列?？梢允褂脝误w鐵蛋白亞基蛋白的部分或區(qū)域，只要該部分包含指導(dǎo)單體鐵蛋白亞基自組裝成蛋白的球形形式的氨基酸序列。此類區(qū)域的一個實(shí)例位于幽門螺桿菌鐵蛋白蛋白的氨基酸5和167之間。更具體的區(qū)域描述于Zhang,Y.Self-Assembly in the Ferritin Nano-Cage Protein Super Family.2011,Int.J.Mol.Sci.,12,5406-5421，其通過引用整體并入本文。

在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與來自鐵蛋白的至少50個，至少100個或至少150個氨基酸連接，其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與來自SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5的至少50，至少100或至少150個氨基酸連接，其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與蛋白質(zhì)連接，所述蛋白質(zhì)包含與鐵蛋白序列至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與蛋白質(zhì)連接，所述蛋白質(zhì)包含與SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5至少85％，至少90％，至少95％相同的氨基酸序列，其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體形成納米顆粒。

在一個實(shí)施方案中，單體亞基是2,4-二氧四氫蝶啶合成酶(lumazine synthase)。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與來自2,4-二氧四氫蝶啶合酶的至少50個，至少100個或至少150個氨基酸連接，其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。因此，在一個實(shí)施方案中，HA蛋白與蛋白質(zhì)連接，所述蛋白質(zhì)與2,4-二氧四氫蝶啶合酶至少85％，至少90％，至少95％相同，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。

如本文中使用的，本發(fā)明的納米顆粒是指通過本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體(融合蛋白)的自組裝形成的三維顆粒。本發(fā)明的納米顆粒通常是球形形狀的，盡管不排除其它形狀，并且通常直徑為約20nm至約100nm。本發(fā)明的納米顆?？梢缘恍枰说鞍踪|(zhì)構(gòu)建體外的分子，如蛋白質(zhì)，脂質(zhì)，碳水化合物等，它們從所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體中形成。

可以使用重組技術(shù)制備本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體以將HA蛋白，接頭和單體亞基的各部分連接在一起。以這種方式，可以產(chǎn)生僅包含產(chǎn)生納米顆粒疫苗所必需的那些序列的蛋白質(zhì)構(gòu)建體。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體(也稱為融合蛋白)，其包含來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第一氨基酸序列和來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通過接頭序列共價(jià)連接，

其中所述第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；

其中所述第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；和，

其中所述第一或第二氨基酸序列與單體亞基結(jié)構(gòu)域的至少部分連接，使得所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亞/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自下組的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亞/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自下組的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，HA蛋白包含來自蛋白質(zhì)的至少一個免疫原性部分，所述蛋白質(zhì)包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

如上所述，第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語上游指與頭部區(qū)的第一個氨基酸殘基的氨基端末端連接的氨基酸序列的全部。在一個實(shí)施方案中，頭部區(qū)的氨基端末端位于對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的Cys59的氨基酸殘基。因此，在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基1-58的HA蛋白區(qū)域的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基1-58的HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少40個連續(xù)氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少40個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少40個連續(xù)氨基酸殘基。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的序列。

如上所述，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語下游指與頭部區(qū)的羧基端末端氨基酸殘基連接的整個氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，頭部區(qū)的羧基端末端位于對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的Cys291的氨基酸位置。因此，在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基292-517的HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少20個連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基328-517的HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少20個連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自選自下組的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少40個，至少60個，至少75個，至少100個或至少150個連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自HA蛋白的氨基酸區(qū)的至少40個，至少60個，至少75個，至少100個或至少150個連續(xù)氨基酸，所述氨基酸區(qū)對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基292-517。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少40個，至少60個，至少75個，至少100個或至少150個連續(xù)氨基酸，所述氨基酸區(qū)域?qū)?yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基328-517。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自序列的至少40，至少60，至少75，至少100或至少150個連續(xù)氨基酸，所述序列與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自下組的至少40，至少60，至少75，至少100或至少150個連續(xù)氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含選自下組的序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

如上所述，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的第一和第二氨基酸序列可以通過接頭序列連接?？梢允褂萌魏谓宇^序列，只要該接頭序列具有距HA蛋白的頭部區(qū)少于5個連續(xù)的氨基酸殘基，并且只要第一和第二氨基酸能夠形成期望的構(gòu)象即可。在一個實(shí)施方案中，接頭序列長度小于10個氨基酸，小于7個氨基酸或小于5個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，接頭序列包含甘氨酸和絲氨酸。在一個實(shí)施方案中，接頭序列將第一氨基酸序列的羧基端末端連接到第二氨基酸序列的氨基端末端。在一個實(shí)施方案中，接頭序列將第二氨基酸序列的羧基端末端連接到第一氨基酸序列的氨基端末端。

如上所述，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的第一或第二氨基酸序列與單體亞基蛋白的至少部分連接，使得蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠形成納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少部分連接到第二氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少部分連接到第二氨基酸序列的羧基端末端。在一個實(shí)施方案中，所述部分包含來自單體亞基的至少50個，至少100個或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是鐵蛋白。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是2,4-二氧四氫蝶啶合成酶。在一個實(shí)施方案中，所述部分包含來自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194的至少50，至少100或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含與SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194具有至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含選自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，上述蛋白質(zhì)構(gòu)建體的流感HA序列的修飾導(dǎo)致蛋白質(zhì)構(gòu)建體的改進(jìn)的穩(wěn)定性。例如，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，從對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸N403-W435的氨基酸區(qū)的HA蛋白的缺失導(dǎo)致更穩(wěn)定的蛋白質(zhì)構(gòu)建體。在該區(qū)域缺失時，該區(qū)域側(cè)翼的氨基酸序列可以直接連接在一起，或者它們可以用接頭序列如例如甘氨酸-絲氨酸-甘氨酸連接。因此，在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，其中所述多肽序列缺少對應(yīng)于來自流感A/新喀里多尼亞1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135或SEQ ID NO:136的區(qū)域。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基，其中多肽序列缺乏對應(yīng)于流感A/新喀里多尼亞1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135或SEQ ID NO:136的區(qū)域。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，其中所述多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/加利福尼亞/4/2009的HA蛋白(SEQ ID NO:10)的SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139或SEQ ID NO:140的區(qū)域。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基，其中多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/加利福尼亞/4/2009的HA蛋白(SEQ ID NO:10)的SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139或SEQ ID NO:140的區(qū)域。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/新加坡/1957的HA蛋白(SEQ ID NO:12)的SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144的區(qū)域。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/新加坡/1957的HA蛋白(SEQ ID NO:12)的SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144的區(qū)域。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基，其中多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/印度尼西亞/05/2005(H5)的HA蛋白(SEQ ID NO:16)的SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147或SEQ ID NO:148的區(qū)域。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基，其中多肽序列缺少對應(yīng)于流感A/印度尼西亞/05/2005(H5)的HA蛋白(SEQ ID NO:16)的SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147或SEQ ID NO:148的區(qū)域。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:29的100個連續(xù)氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:136的序列。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:29的100個連續(xù)氨基酸，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自下組的序列：SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:136。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:44的100個連續(xù)氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:140的序列。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:44的100個連續(xù)氨基酸，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自下組的序列：SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:140。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:59的100個連續(xù)氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144的序列。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:59的100個連續(xù)氨基酸，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自下組的序列：SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:74的100個連續(xù)氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:148的序列。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:74的100個連續(xù)氨基酸，其中所述100個連續(xù)氨基酸不包含選自下組的序列：SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:148。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含與來自選自下組的序列的100個連續(xù)氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自選自下組的序列的至少100個連續(xù)氨基酸：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含選自下組的序列：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了，HA莖區(qū)序列的序列改變導(dǎo)致更穩(wěn)定的蛋白質(zhì)構(gòu)建體。例如，在折疊的HA蛋白中，對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的K394和E446(對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1和E53)的氨基酸殘基形成鹽橋，有助于穩(wěn)定折疊的蛋白質(zhì)。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過用合適的氨基酸取代賴氨酸和谷氨酸殘基，可以加強(qiáng)兩個氨基酸殘基之間的相互作用，這改善了分子的穩(wěn)定性并允許對其進(jìn)行更廣泛的操作。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第一氨基酸序列和來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸酸序列通過接頭序列共價(jià)連接，

其中所述第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸性殘基，

其中所述第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少60個連續(xù)氨基酸，

其中所述60個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于來自A/新喀里多尼亞/20/1999的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，且

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的所述多肽序列中的氨基酸殘基被除賴氨酸以外的氨基酸取代，

并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸殘基被除谷氨酸之外的氨基酸殘基取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于在野生型蛋白中的相互作用的強(qiáng)度。

如上所述，對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的K394和E446的氨基酸殘基形成鹽橋，其是一類鍵。本領(lǐng)域已知存在氨基酸之間的其它類型的鍵，其強(qiáng)度根據(jù)鍵的類型而變化。此類鍵的實(shí)例包括但不限于疏水鍵和氫鍵，二者通常比鹽橋更強(qiáng)。因此，在一個實(shí)施方案中，對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽中的氨基酸殘基和對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽中的氨基酸殘基被改變，使得它們在最終折疊的蛋白質(zhì)中形成氫鍵。在一個實(shí)施方案中，對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽中的氨基酸殘基和對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽中的氨基酸殘基被改變，使得它們在最終折疊的蛋白質(zhì)中形成疏水鍵。

對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1，SEQ ID NO:150的K1，SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸可以被任何氨基酸殘基取代，只要兩個氨基酸之間的所得相互作用比未改變的蛋白質(zhì)中的鹽橋更強(qiáng)。增加對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的K394和E446(SEQ ID NO:149的K1和E53)的氨基酸之間的相互作用強(qiáng)度的取代的實(shí)例包括但不限于：

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被甲硫氨酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被亮氨酸取代；

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被甲硫氨酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被甲硫氨酸取代；

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被亮氨酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被亮氨酸取代；

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被異亮氨酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被異亮氨酸取代；

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被亮氨酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被異亮氨酸取代；

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸殘基被谷氨酰胺取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基被谷氨酰胺取代。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亞/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自下組的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亞/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自下組的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基1-58的HA蛋白的區(qū)域的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基。

在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少40個連續(xù)氨基酸殘基，所述氨基酸區(qū)域?qū)?yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基1-58。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少40個連續(xù)氨基酸殘基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含來自選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少40個連續(xù)氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含與選自下組的序列至少85％，至少90％或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一個實(shí)施方案中，第一氨基酸序列包含選自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的HA蛋白的莖區(qū)。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自選自下組的病毒的HA蛋白的莖區(qū)：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白具有與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列來自HA蛋白的莖區(qū)，所述HA蛋白包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的序列。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列的至少60個連續(xù)氨基酸來自HA蛋白的氨基酸區(qū)，所述氨基酸區(qū)對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基292-517。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列的至少60個連續(xù)氨基酸來自HA蛋白的氨基酸區(qū)，其對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基328-517。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列的至少60個連續(xù)氨基酸來自與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列的至少60個連續(xù)氨基酸來自選自下組的序列

SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸，其中至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基，和多肽序列中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸殘基已經(jīng)分別被除了賴氨酸和谷氨酸外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于野生型蛋白質(zhì)中的相互作用的強(qiáng)度。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少75，至少100，至少150或至少200個連續(xù)氨基酸，所述HA蛋白對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基292-517，其中所述至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基，和對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸殘基分別被除了賴氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于強(qiáng)度的野生型蛋白中的相互作用。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自HA蛋白的氨基酸區(qū)域的至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸，所述氨基酸區(qū)域?qū)?yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸殘基328-517，其中至少75，至少100，至少150或至少200個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基，和對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸殘基分別被除了賴氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于強(qiáng)度的野生型蛋白中的相互作用。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少75，至少100，至少150或至少200個連續(xù)氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77，其中所述至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，和其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基和對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸殘基分別被除了賴氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于野生型蛋白質(zhì)中相互作用的強(qiáng)度。在一個實(shí)施方案中，第二氨基酸序列包含來自下組的至少75，至少100，至少150或至少200個連續(xù)氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。其中所述至少75個，至少100個，至少150個或至少200個連續(xù)氨基酸包含對應(yīng)于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基，并且多肽序列中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸殘基已經(jīng)分別被除了賴氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度大于野生型蛋白質(zhì)中的相互作用的強(qiáng)度。

含有規(guī)定位點(diǎn)特異性突變的蛋白質(zhì)構(gòu)建體可用于通過將本發(fā)明的納米顆粒連接到單體亞基來制備本發(fā)明的納米顆粒。因此，在一個實(shí)施方案中，將含有所公開的位點(diǎn)特異性突變(例如，SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的K1和SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20)的蛋白質(zhì)構(gòu)建體連接到單體亞基蛋白的至少部分，其中所述單體亞基蛋白的所述部分能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)構(gòu)建體的自組裝。在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少部分連接到第二氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少部分連接到第二氨基酸序列的羧基端末端。在一個實(shí)施方案中，所述部分包含來自單體亞基的至少50個，至少100個或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是鐵蛋白。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是2,4-二氧四氫蝶啶合成酶。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含與SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含選自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

盡管對本文公開的HA蛋白進(jìn)行的修飾已經(jīng)描述為單獨(dú)的實(shí)施方案，但是應(yīng)當(dāng)理解，所有此類修飾可以包含在單一蛋白質(zhì)構(gòu)建體中。例如，可以制備蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其中第一氨基酸序列通過接頭連接到第二氨基酸序列，其中第二氨基酸序列包含來自頭部區(qū)的羧基端末端下游的區(qū)域的氨基酸序列，但是缺乏由SEQ ID NO:133-148表示的內(nèi)部環(huán)序列，并且其中對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:50的K1和SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的第二氨基酸序列中的氨基酸分別被除了賴氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，以增加折疊蛋白中這些氨基酸殘基之間的相互作用的強(qiáng)度。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第一氨基酸序列和來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸酸序列通過接頭序列共價(jià)連接，

其中所述第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；

其中所述第二氨基酸序列包含與來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，

其中所述多肽序列包含對應(yīng)于由SEQ ID NO:150代表的流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)中的序列，由SEQ ID NO:152代表的流感A加利福尼亞/2009(H1)中的序列，由SEQ ID NO:154表示的流感A新加坡/1957(H2)中的序列和由SEQ ID NO:156表示的流感A印度尼西亞/2005H5)中的序列和，

其中對應(yīng)于SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸殘基已經(jīng)被除了賴氨酸之外的氨基酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:150的E20的氨基酸殘基已經(jīng)被除了谷氨酸外的氨基酸取代。

在一個實(shí)施方案中，多肽包含來自頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸。在一個實(shí)施方案中，所述至少100個連續(xù)氨基酸包含SEQ ID NO:150。在一個實(shí)施方案中，所述至少100個連續(xù)氨基酸包含SEQ ID NO:152。在一個實(shí)施方案中，所述至少100個連續(xù)氨基酸序列包含SEQ ID NO:154。在一個實(shí)施方案中，所述至少100個連續(xù)氨基酸包含SEQ ID NO:156。應(yīng)當(dāng)理解，在上述構(gòu)建體中，當(dāng)除去內(nèi)部環(huán)區(qū)時，剩余的HA蛋白的各個末端可以直接連接在一起。然而，在一些情況下，此類直接連接可能降低肽主鏈的柔性。因此，在一些情況下，用接頭序列替代內(nèi)部環(huán)區(qū)域可能是有益的。作為實(shí)例，如果六個氨基酸接頭序列插入SEQ ID NO:150，則最終序列可表現(xiàn)如下：VNSVIEKMGSGGSGTYNAELLVLL。

因此，在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的多肽序列包含SEQ ID NO:150，其中插入短接頭序列。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的多肽序列包含SEQ ID NO:152，其中插入短接頭序列。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的多肽序列包含SEQ ID NO:154，其中插入短接頭序列。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的多肽序列包含SEQ ID NO:156，其中插入短接頭序列。在一個實(shí)施方案中，接頭由絲氨酸和甘氨酸殘基制成。在一個實(shí)施方案中，接頭的長度少于10個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，接頭的長度少于5個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，接頭的長度少于3個氨基酸。

盡管上文所述的蛋白質(zhì)構(gòu)建體可用于產(chǎn)生能夠產(chǎn)生針對一種或多種流感病毒的免疫應(yīng)答的納米顆粒，但是在一些實(shí)施方案中，可能有用的是將進(jìn)一步的突變工程化改造到本發(fā)明的蛋白質(zhì)的氨基酸序列中。例如，可以有用的是改變單體亞基蛋白，三聚化結(jié)構(gòu)域或接頭序列中的位點(diǎn)，如酶識別位點(diǎn)或糖基化位點(diǎn)，以便對蛋白質(zhì)給予有益的性質(zhì)(例如溶解度，半衰期，免于免疫監(jiān)視的蛋白質(zhì)的掩蔽部分)。在這方面，已知鐵蛋白的單體亞基不是天然糖基化的。然而，如果其在哺乳動物或酵母細(xì)胞中作為分泌性蛋白質(zhì)表達(dá)，則其可以被糖基化。因此，在一個實(shí)施方案中，來自單體鐵蛋白亞基的氨基酸序列中的潛在N連接的糖基化位點(diǎn)被突變，使得突變的鐵蛋白亞基序列在突變位點(diǎn)不再被糖基化。突變的單體鐵蛋白亞基的一個此類序列由SEQ ID NO:5表示。

也可以改變蛋白質(zhì)構(gòu)建體序列以包括其它有用的突變。例如，在一些情況下，可以期望阻斷針對蛋白質(zhì)構(gòu)建體中的某些氨基酸序列的免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。這可以通過在待阻斷的位點(diǎn)附近添加糖基化位點(diǎn)來完成，使得聚糖在空間上阻礙免疫系統(tǒng)到達(dá)阻斷位點(diǎn)的能力。因此，在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的序列已經(jīng)改變?yōu)榘ㄒ粋€或多個糖基化位點(diǎn)。這樣的位點(diǎn)的實(shí)例包括但不限于Asn-X-Ser，Asn-X-Thr和Asn-X-Cys。在一些情況下，可以將糖基化位點(diǎn)引入接頭序列中。引入糖基化位點(diǎn)的有用位點(diǎn)的其它實(shí)例包括但不限于對應(yīng)于來自流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的氨基酸45-47或氨基酸370-372的氨基酸。引入糖基化位點(diǎn)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。

本文的公開內(nèi)容證明在HA或單體亞基蛋白中的特定位置處的突變產(chǎn)生有用的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，并因此產(chǎn)生本發(fā)明的納米顆粒。引入突變的鐵蛋白蛋白質(zhì)中有用位置的實(shí)例包括對應(yīng)于選自下組的氨基酸位置的氨基酸：SEQ ID NO:2的氨基酸位置18，氨基酸位置20和氨基酸位置68。引入突變的有用位置的實(shí)例包括HA蛋白中對應(yīng)于選自下組的氨基酸位置的氨基酸：流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸位置36，氨基酸位置45，氨基酸位置47，氨基酸位置49，氨基酸位置339，氨基酸位置340，氨基酸位置341，氨基酸位置342，氨基酸位置361，氨基酸位置372，氨基酸位置394，氨基酸位置402，氨基酸位置437，氨基酸位置438，氨基酸位置445，氨基酸位置446，氨基酸位置448，氨基酸449，氨基酸位置450和氨基酸位置452。表2中列出了此類突變的一些實(shí)例。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置處包含異亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基A。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置處包含天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置處包含色氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置處包含精氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基(H1)。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置處包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基(H1)。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置處包含天冬酰胺，蘇氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或具有與其相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有與其相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置處包含丙氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置處包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分缺少對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一個或多個氨基酸。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

在一個實(shí)施方案中，對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的氨基酸殘基的氨基酸殘基被除了賴氨酸之外的氨基酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基或SEQ ID NO:20的E20的氨基酸殘基被谷氨酸以外的氨基酸取代，使得在折疊蛋白中取代的氨基酸之間的相互作用的強(qiáng)度增加。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含選自下組的序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，當(dāng)與單體亞基蛋白連接時，蛋白構(gòu)建體能夠形成納米顆粒，其中納米顆粒能夠引發(fā)針對流感病毒的免疫應(yīng)答。

如前已經(jīng)描述，由流感HA蛋白制成的蛋白質(zhì)構(gòu)建體可以用于通過將其連接到單體亞基來制備本發(fā)明的納米顆粒。因此，在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體與單體亞基蛋白質(zhì)的至少一部分連接，其中單體亞基蛋白質(zhì)的部分能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)構(gòu)建體的自組裝。在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少一部分連接到第二氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，單體亞基蛋白的至少一部分連接到第二氨基酸序列的羧基末端。在一個實(shí)施方案中，所述部分包含來自單體亞基的至少50個，至少100個或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是鐵蛋白。在一個實(shí)施方案中，單體亞基是2,4-二氧四氫蝶啶合成酶。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含與SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含選自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。在一個實(shí)施方案中，對應(yīng)于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的氨基酸殘基被除了賴氨酸之外的氨基酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸殘基或SEQ ID NO:20的E20被除了谷氨酸之外的氨基酸取代，使得在折疊蛋白中取代的氨基酸之間的相互作用的強(qiáng)度增加。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置包含異亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置處包含天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置處包含色氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置處包含精氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基(H1)。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/20的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置處包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置處包含天冬酰胺，蘇氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或具有與其相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有與其相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置處包含丙氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置處包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分缺少對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一個或多個氨基酸。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含選自下組的序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是由核酸分子編碼的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述核酸分子包含與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是由核酸分子編碼的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述核酸分子包含選自下組的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本發(fā)明的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)構(gòu)建體由本發(fā)明的核酸分子編碼。此外，它們由本發(fā)明的核酸構(gòu)建體表達(dá)。如本文所使用的，核酸構(gòu)建體是重組表達(dá)載體，即連接到編碼蛋白質(zhì)的核酸分子的載體，使得當(dāng)將核酸構(gòu)建體施用于，例如，受試者或器官，組織或細(xì)胞時，核酸分子可以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)表達(dá)。載體還能夠?qū)⒑怂岱肿愚D(zhuǎn)運(yùn)到環(huán)境內(nèi)的細(xì)胞，例如但不限于生物體，組織或細(xì)胞培養(yǎng)物。本公開的核酸構(gòu)建體通過人類干預(yù)產(chǎn)生。核酸構(gòu)建體可以是DNA，RNA或其變體。載體可以是DNA質(zhì)粒，病毒載體或其它載體。在一個實(shí)施方案中，載體可以是巨細(xì)胞病毒(CMV)，逆轉(zhuǎn)錄病毒，腺病毒，腺伴隨病毒，皰疹病毒，牛痘病毒，脊髓灰質(zhì)炎病毒，辛德畢斯病毒或任何其它DNA或RNA病毒載體。在一個實(shí)施方案中，載體可以是假型化的慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。在一個實(shí)施方案中，載體可以是DNA質(zhì)粒。在一個實(shí)施方案中，載體可以是包含能夠進(jìn)行核酸分子遞送和表達(dá)的病毒組分和質(zhì)粒組分的DNA質(zhì)粒。構(gòu)建本公開的核酸構(gòu)建體的方法是公知的。參見，例如，Molecular Cloning:a Laboratory Manual,3^rd edition,Sambrook et al.2001Cold Spring Harbor Laboratory Press,以及Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel et al.eds.,John Wiley&Sons,1994。在一個實(shí)施方案中，載體是DNA質(zhì)粒，如CMV/R質(zhì)粒，如CMV/R或CMV/R 8KB(本文也稱為CMV/R 8kb)。本文提供了CMV/R和CMV/R 8kb的實(shí)例。CMV/R也在2006年8月22日授權(quán)的US 7,094,598B2中描述。

如本文中使用的，核酸分子包含編碼本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的核酸序列。核酸分子可以重組地，合成地或通過重組和合成程序的組合產(chǎn)生。本公開的核酸分子可以具有野生型核酸序列或密碼子修飾的核酸序列，以例如摻入由人翻譯系統(tǒng)更好識別的密碼子。在一個實(shí)施方案中，核酸分子可以被遺傳工程化以引入或消除編碼不同氨基酸的密碼子，如引入編碼N-連接的糖基化位點(diǎn)的密碼子。產(chǎn)生本公開核酸分子的方法是本領(lǐng)域已知的，特別是一旦知道核酸序列。應(yīng)當(dāng)理解，核酸構(gòu)建體可以包含一個核酸分子或多于一個核酸分子。還應(yīng)當(dāng)理解，核酸分子可以編碼一種蛋白質(zhì)或多于一種蛋白質(zhì)。

一個實(shí)施方案是編碼流感HA蛋白的核酸分子，所述流感HA蛋白包含與選自SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:156的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。一個實(shí)施方案是編碼流感HA蛋白的核酸分子，所述流感HA蛋白包含選自SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:156的氨基酸序列。

在一個實(shí)施方案中，核酸分子編碼流感HA蛋白，其包含與選自下組的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一個實(shí)施方案中，核酸分子編碼流感HA蛋白，其包含選自下組的氨基酸：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是核酸分子，所述核酸分子包含與選自下組的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的核酸序列：SEQ ID NO:79,SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:85,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:91,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:100,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:157,SEQ ID NO:163,SEQ ID NO:169,SEQ ID NO:175,SEQ ID NO:181,SEQ ID NO:187,SEQ ID NO:196,SEQ ID NO:202,SEQ ID NO:208,SEQ ID NO:216,SEQ ID NO:234,SEQ ID NO:260,SEQ ID NO:267,SEQ ID NO:274,SEQ ID NO:281,SEQ ID NO:288,SEQ ID NO:295,SEQ ID NO:302,SEQ ID NO:309,SEQ ID NO:316,SEQ ID NO:323,SEQ ID NO:330,SEQ ID NO:337,SEQ ID NO:344,SEQ ID NO:351,SEQ ID NO:358,SEQ ID NO:365,SEQ ID NO:372,SEQ ID NO:379,SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:393。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是核酸分子，其包含選自下組的核酸：SEQ ID NO:79,SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:85,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:91,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:100,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:157,SEQ ID NO:163,SEQ ID NO:169,SEQ ID NO:175,SEQ ID NO:181,SEQ ID NO:187,SEQ ID NO:196,SEQ ID NO:202,SEQ ID NO:208,SEQ ID NO:216,SEQ ID NO:234,SEQ ID NO:260,SEQ ID NO:267,SEQ ID NO:274,SEQ ID NO:281,SEQ ID NO:288,SEQ ID NO:295,SEQ ID NO:302,SEQ ID NO:309,SEQ ID NO:316,SEQ ID NO:323,SEQ ID NO:330,SEQ ID NO:337,SEQ ID NO:344,SEQ ID NO:351,SEQ ID NO:358,SEQ ID NO:365,SEQ ID NO:372,SEQ ID NO:379,SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:393。

優(yōu)選的核酸分子是編碼單體亞基，HA蛋白和/或包含與流感HA蛋白連接的單體亞基蛋白的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的那些。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含編碼蛋白質(zhì)的核酸序列的核酸分子，所述蛋白質(zhì)包含與流感HA蛋白連接的鐵蛋白蛋白的單體亞基。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含與選自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％序列相同的氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含選自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含編碼蛋白質(zhì)的核酸序列的核酸分子，所述蛋白質(zhì)包含與流感HA蛋白連接的2,4-二氧四氫蝶啶合酶單體亞基。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含與SEQ ID NO:194至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含SEQ ID NO:194。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是編碼蛋白質(zhì)構(gòu)建體的核酸分子，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與選自下組的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是編碼蛋白質(zhì)構(gòu)建體的核酸分子，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含選自下組的序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含核酸序列的核酸分子，所述核酸序列與選自下組的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同：SEQ ID NO:106,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:112,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:121,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:172,SEQ ID NO:178,SEQ ID NO:184,SEQ ID NO:190,SEQ ID NO:199,SEQ ID NO:205,SEQ ID NO:211,SEQ ID NO:219,SEQ ID NO:237,SEQ ID NO:263,SEQ ID NO:270,SEQ ID NO:277,SEQ ID NO:284,SEQ ID NO:291,SEQ ID NO:298,SEQ ID NO:305,SEQ ID NO:312,SEQ ID NO:319,SEQ ID NO:326,SEQ ID NO:333,SEQ ID NO:340,SEQ ID NO:347,SEQ ID NO:354,SEQ ID NO:361,SEQ ID NO:368,SEQ ID NO:375,SEQ ID NO:382,SEQ ID NO:389和SEQ ID NO:396。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含選自下組的核酸序列的核酸分子：SEQ ID NO:106,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:112,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:121,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:172,SEQ ID NO:178,SEQ ID NO:184,SEQ ID NO:190,SEQ ID NO:199,SEQ ID NO:205,SEQ ID NO:211,SEQ ID NO:219,SEQ ID NO:237,SEQ ID NO:263,SEQ ID NO:270,SEQ ID NO:277,SEQ ID NO:284,SEQ ID NO:291,SEQ ID NO:298,SEQ ID NO:305,SEQ ID NO:312,SEQ ID NO:319,SEQ ID NO:326,SEQ ID NO:333,SEQ ID NO:340,SEQ ID NO:347,SEQ ID NO:354,SEQ ID NO:361,SEQ ID NO:368,SEQ ID NO:375,SEQ ID NO:382,SEQ ID NO:389和SEQ ID NO:396。

本發(fā)明還涵蓋用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的表達(dá)系統(tǒng)。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸分子可操作地連接于啟動子。如本文中使用的，操作連接是指當(dāng)連接的啟動子被激活時，可以表達(dá)由連接的核酸分子編碼的蛋白質(zhì)。用于實(shí)施本發(fā)明的啟動子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含核酸序列的核酸分子，所述核酸序列與選自下組的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含選自下組的核酸序列的核酸分子：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含本發(fā)明的核酸分子的重組細(xì)胞。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含本發(fā)明的核酸分子的重組病毒。

如上指示，本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的重組生產(chǎn)可以使用本領(lǐng)域目前已知的任何合適的常規(guī)重組技術(shù)來完成。例如，可以如下在大腸桿菌(E.coli)中進(jìn)行編碼融合蛋白的核酸分子的產(chǎn)生，即使用編碼合適的單體亞基蛋白(如幽門螺桿菌鐵蛋白單體亞基)的核酸分子，并且將其融合到編碼本文公開的合適的流感蛋白的核酸分子。然后，可以將構(gòu)建體轉(zhuǎn)化成蛋白質(zhì)表達(dá)細(xì)胞，培養(yǎng)至合適的大小，并誘導(dǎo)產(chǎn)生融合蛋白。

如已經(jīng)描述的，因?yàn)楸景l(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含單體亞基蛋白質(zhì)，所以它們可以自組裝。根據(jù)本發(fā)明，由此類自組裝產(chǎn)生的超分子被稱為HA表達(dá)性、基于單體亞基的納米顆粒。為了便于討論，將HA表達(dá)性、基于單體亞基的納米顆粒簡稱為納米顆粒(np)。本發(fā)明的納米顆粒具有與制備它們的單體蛋白質(zhì)的納米顆粒相似的結(jié)構(gòu)特征。例如，關(guān)于鐵蛋白，基于鐵蛋白的納米顆粒含有24個亞基并且具有432對稱性。在本發(fā)明的納米顆粒的情況下，亞基是包含與流感HA蛋白連接的單體亞基(例如，鐵蛋白，2,4-二氧四氫蝶啶合酶等)的蛋白質(zhì)構(gòu)建體。此類納米顆粒在其表面上以HA三聚體展示HA蛋白的至少一部分。在此類構(gòu)建中，HA三聚體對于免疫系統(tǒng)是可及的，并且因此可以引發(fā)免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含本發(fā)明的蛋白構(gòu)建體的納米顆粒，其中所述蛋白構(gòu)建體包含來自與單體亞基蛋白連接的HA蛋白的莖區(qū)的氨基酸。在一個實(shí)施方案中，納米顆粒在其表面上以HA三聚體展示HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，流感HA蛋白能夠引發(fā)針對流感病毒的保護(hù)性抗體。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第一氨基酸序列和來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通過接頭序列共價(jià)連接，

其中所述第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；

其中所述第二氨基酸序列包含來自所述頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；且

其中所述第一或第二氨基酸序列與單體亞基結(jié)構(gòu)域的至少一部分連接。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第一氨基酸序列和來自流感病毒HA蛋白的莖區(qū)的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通過接頭序列共價(jià)連接，

其中所述第一氨基酸序列包含來自頭部區(qū)序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20個連續(xù)氨基酸殘基；

其中所述第二氨基酸序列包含與頭部區(qū)序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100個連續(xù)氨基酸殘基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，

其中所述多肽序列包含與由SEQ ID NO:150代表的流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)中的序列，由SEQ ID NO:150代表的流感A加利福尼亞/2009中的序列，由SEQ ID NO:154代表的流感A新加坡/1957(H2)中的序列和由SEQ ID NO:156代表的流感A印度尼西亞/2005H5中的序列對應(yīng)的序列；和

其中所述第一或第二氨基酸序列與單體亞基蛋白連接。

在另一個實(shí)施方案中，多肽序列中對應(yīng)于SEQ ID NO:150的K1的氨基酸殘基已被除賴氨酸以外的氨基酸取代，并且對應(yīng)于SEQ ID NO:150的E20的氨基酸殘基已經(jīng)被除谷氨酸以外的氨基酸取代。

在一個實(shí)施方案中，在構(gòu)成納米顆粒的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的單體亞基部分和/或第一和/或第二氨基酸序列中進(jìn)行了另外的突變。引入突變的鐵蛋白蛋白質(zhì)中有用位置的實(shí)例包括對應(yīng)于選自下組的氨基酸位置的氨基酸：SEQ ID NO:2的氨基酸位置18，氨基酸位置20和氨基酸位置68。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含在對應(yīng)于選自下組的氨基酸位置的氨基酸位置處的突變：流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸位置36，氨基酸位置45，氨基酸位置47，氨基酸位置49，氨基酸位置339，氨基酸位置340，氨基酸位置341，氨基酸位置342，氨基酸位置361，氨基酸位置372，氨基酸位置394，氨基酸位置402，氨基酸位置437，氨基酸位置438，氨基酸位置445，氨基酸位置446，氨基酸位置448，氨基酸449，氨基酸位置450和氨基酸位置452。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置包含異亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置處包含天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置處包含色氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置處包含精氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基(H1)。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置處包含蘇氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置處包含天冬酰胺，蘇氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置處包含谷氨酰胺或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有與其相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置處包含丙氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分在對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置處包含亮氨酸或與其具有相似性質(zhì)的氨基酸殘基(H1)。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分缺少對應(yīng)于流感A新喀里多尼亞/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一個或多個氨基酸。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米顆粒包含單體亞基蛋白，其包含來自2,4-二氧四氫蝶啶合酶的至少50個氨基酸，至少100個氨基酸或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白包含來自選自SEQ ID NO:194的氨基酸序列的至少50個氨基酸，至少100個氨基酸或至少150個氨基酸，和/或包含與SEQ ID NO:194至少85％，至少90％，至少95％，至少97％，至少99％相同的氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，單體亞基包含SEQ ID NO:194。

在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白包含來自鐵蛋白蛋白的至少50個氨基酸，至少100個氨基酸或至少150個氨基酸。在一個實(shí)施方案中，單體亞基蛋白包含來自選自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列的至少50個氨基酸，至少100個氨基酸或至少150個氨基酸，和或包含與選自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少85％，至少90％，至少95％，至少97％，至少99％相同的氨基酸序列。在一個實(shí)施方案中，單體鐵蛋白亞基包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5。

在一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其包含與來自病毒的HA蛋白的至少一個免疫原性部分連接的本發(fā)明的單體蛋白質(zhì)，所述病毒選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一個實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與選自下組的HA蛋白的至少一個免疫原性部分連接的本發(fā)明的單體蛋白：H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，免疫原性部分包含至少一個表位。

在一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與氨基酸序列連接的本發(fā)明的單體蛋白，所述氨基酸序列與選自下組的序列是至少約80％，至少約85％，至少約90％，至少約95％，至少約97％或至少約99％相同的：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠選擇性結(jié)合抗流感抗體。在一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與氨基酸序列連接的本發(fā)明的單體蛋白，所述氨基酸序列選自下組：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠選擇性結(jié)合抗流感抗體。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與選自下組的序列至少80％，至少約85％，至少約90％，至少約95％，至少約97％或至少約99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠選擇性結(jié)合抗流感抗體。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含選自下組的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米顆粒包含由核酸分子編碼的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述核酸分子包含與選自下組的序列至少85％,至少90％,至少95％or至少97％相同的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的納米顆粒包含由核酸分子編碼的蛋白質(zhì)構(gòu)建體，所述核酸分子包含選自下組的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本發(fā)明的納米顆?？捎糜谝l(fā)對流感病毒的免疫應(yīng)答。一類免疫應(yīng)答是B細(xì)胞應(yīng)答，其導(dǎo)致產(chǎn)生針對引發(fā)免疫應(yīng)答的抗原的抗體。因此，在一個實(shí)施方案中，納米顆粒引發(fā)結(jié)合來自選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的流感HA蛋白的莖區(qū)的抗體。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是納米顆粒，其引發(fā)結(jié)合流感HA蛋白的莖區(qū)的抗體，所述流感HA蛋白選自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是納米顆粒，其引發(fā)結(jié)合來自病毒株的流感HA蛋白的莖區(qū)的抗體，所述病毒株選自流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其變體。

盡管所有抗體能夠結(jié)合引發(fā)導(dǎo)致抗體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答的抗原，但優(yōu)選的抗體是那些提供針對流感病毒的廣泛的異亞型保護(hù)的抗體。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)保護(hù)性抗體的納米顆粒，所述保護(hù)性抗體結(jié)合來自選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的流感HA蛋白的莖區(qū)。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)與流感HA蛋白的莖區(qū)結(jié)合的保護(hù)性抗體的蛋白質(zhì)，所述流感HA蛋白選自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)針對選自下組的病毒的抗體的納米顆粒：流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)and B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合蛋白質(zhì)的抗體的納米顆粒，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合蛋白質(zhì)的抗體的納米顆粒，所述蛋白質(zhì)包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體可通過影響病毒生命周期中的任何步驟來提供保護(hù)免受病毒感染。例如，保護(hù)性抗體可以防止流感病毒附著于細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞，將病毒核糖核蛋白釋放到細(xì)胞質(zhì)中，在受感染的細(xì)胞中形成新的病毒顆粒并從受感染的宿主細(xì)胞膜出芽新的病毒顆粒。在一個實(shí)施方案中，由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體防止流感病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體防止病毒膜與內(nèi)體膜的融合。在一個實(shí)施方案中，由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體防止核糖核蛋白釋放到宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。在一個實(shí)施方案中，由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體防止新病毒在感染的宿主細(xì)胞中的裝配。在一個實(shí)施方案中，由本發(fā)明的蛋白質(zhì)引發(fā)的保護(hù)性抗體防止新形成的病毒從感染的宿主細(xì)胞釋放。

因?yàn)榱鞲胁《镜那o區(qū)的氨基酸序列是高度保守的，所以由本發(fā)明的納米顆粒引發(fā)的保護(hù)性抗體可以是廣泛保護(hù)性的。也就是說，本發(fā)明的納米顆粒引發(fā)的保護(hù)性抗體可以針對多于一種類型，亞型和/或毒株的流感病毒提供保護(hù)。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合流感HA蛋白莖區(qū)的廣泛保護(hù)性抗體的蛋白質(zhì)。一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合來自多于一種類型的流感病毒的HA蛋白的莖區(qū)的抗體的納米顆粒，所述流感病毒選自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合來自多于一種亞型流感病毒的HA蛋白的莖區(qū)的抗體的納米顆粒，所述流感病毒選自H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合來自超過流感病毒株的HA蛋白的莖區(qū)的抗體的納米顆粒。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合超過一種蛋白質(zhì)的抗體的納米顆粒，所述蛋白質(zhì)包含與選自下組的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是引發(fā)結(jié)合多于一種蛋白質(zhì)的抗體的納米顆粒，所述蛋白質(zhì)包含選自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

因?yàn)楸景l(fā)明的納米顆?？梢砸l(fā)對流感病毒的免疫應(yīng)答，所以它們可用作保護(hù)個體免受流感病毒感染的疫苗。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含本發(fā)明的納米顆粒的疫苗。本發(fā)明的疫苗還可以含有其它成分，如佐劑，緩沖液等。盡管可以使用任何佐劑，但優(yōu)選的實(shí)施方案可以含有：化學(xué)佐劑，如磷酸鋁，benzyalkonium chloride，烏苯美司(ubenimex)和QS21；遺傳佐劑如IL-2基因或其片段，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)基因或其片段，IL-18基因或其片段，趨化因子(CC基序)配體21(CCL21)基因或其片段，IL-6基因或其片段，CpG，LPS，TLR激動劑和其它免疫刺激基因；蛋白質(zhì)佐劑如IL-2或其片段，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或其片段，IL-18或其片段，趨化因子(CC基序)配體21(CCL21)或其片段，IL-6或其片段，CpG，LPS，TLR激動劑和其它免疫刺激性細(xì)胞因子或其片段；脂質(zhì)佐劑如陽離子脂質(zhì)體，N3(陽離子脂質(zhì))，單磷酰脂質(zhì)A(MPL1)；其它佐劑，包括霍亂毒素，腸毒素，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶-3配體(Flt-3L)，布比卡因(bupivacaine)，丁哌卡因(marcaine)和左旋咪唑。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是包含多于一種流感HA蛋白的納米顆粒疫苗。此類疫苗可以包括在單個納米顆粒上或作為納米顆?；旌衔锏牟煌鞲蠬A蛋白的組合，其中至少兩種具有獨(dú)特的流感HA蛋白。多價(jià)疫苗可包含與必要一樣多的流感HA蛋白，以便導(dǎo)致提供保護(hù)免于期望的病毒毒株寬度必需的免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。在一個實(shí)施方案中，疫苗包含來自至少兩種不同流感株(二價(jià))的HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，疫苗包含來自至少三種不同流感株(三價(jià))的HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，疫苗包含來自至少四種不同流感株(四價(jià))的HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，疫苗包含來自至少五種不同流感株(五價(jià))的HA蛋白。在一個實(shí)施方案中，疫苗包含來自至少六種不同流感病毒株(六價(jià))的HA蛋白。在各種實(shí)施方案中，疫苗包含來自7、8、9或10種不同流感病毒株之每種的HA蛋白。此類組合的實(shí)例是包含流感A組1HA蛋白，流感A組2HA蛋白，和流感B HA蛋白的納米顆粒疫苗。在一個實(shí)施方案中，流感HA蛋白是H1HA，H3HA和B HA。在一個實(shí)施方案中，流感HA蛋白是包括在2011-2012流感疫苗中的那些。多價(jià)疫苗的另一個實(shí)例是包含來自四種不同流感病毒的HA蛋白的納米顆粒疫苗。在一個實(shí)施方案中，多價(jià)疫苗包含來自流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)和B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)的HA蛋白。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是針對流感病毒對個體接種疫苗的方法，所述方法包括向個體施用納米顆粒，使得在個體中產(chǎn)生針對流感病毒的免疫應(yīng)答，其中所述納米顆粒包含連接到流感HA蛋白的單體亞基蛋白，并且其中所述納米顆粒在其表面上展示所述流感HA。在一個實(shí)施方案中，納米顆粒是單價(jià)納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，納米顆粒是多價(jià)納米顆粒。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案是針對流感病毒感染對個體接種疫苗的方法，所述方法包括：

a)獲得包含單體亞基的納米顆粒，其中所述單體亞基與流感血凝素蛋白連接，并且其中所述納米顆粒在其表面上展示流感HA；并且，

b)將納米顆粒施用于個體，使得產(chǎn)生針對流感病毒的免疫應(yīng)答。

本發(fā)明的一個實(shí)施方案是針對流感病毒對個體接種疫苗的方法，所述方法包括向個體施用實(shí)施方案的疫苗，使得在個體中產(chǎn)生針對流感病毒的免疫應(yīng)答，其中所述疫苗包含至少一種納米顆粒，其包含與流感HA蛋白連接的單體亞基，并且其中所述納米顆粒在其表面上展示流感HA。在一個實(shí)施方案中，疫苗是單價(jià)疫苗。在一個實(shí)施方案中，疫苗是多價(jià)疫苗。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案是針對流感病毒感染對個體接種疫苗的方法，所述方法包括：

a)獲得包含至少一種包含本發(fā)明的蛋白質(zhì)構(gòu)建體的納米顆粒的疫苗，其中所述蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含與流感HA蛋白連接的單體亞基蛋白，并且其中所述納米顆粒在其表面上展示流感HA；并且，

b)將所述疫苗施用于個體，使得產(chǎn)生針對流感病毒的免疫應(yīng)答。

在一個實(shí)施方案中，納米顆粒是單價(jià)納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，納米顆粒是多價(jià)納米顆粒。

在一個實(shí)施方案中，納米顆粒具有八面體對稱。在一個實(shí)施方案中，流感HA蛋白能夠引發(fā)針對流感病毒的抗體。在一個實(shí)施方案中，流感HA蛋白能夠廣泛引發(fā)針對流感病毒的抗體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，引發(fā)的抗體是保護(hù)性抗體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，引發(fā)的抗體是廣泛異亞型保護(hù)性的。

本發(fā)明的疫苗可用于使用初免/加強(qiáng)方案對個體接種疫苗。此類方案在美國專利公開號20110177122中描述，其通過引用整體并入本文。在此類方案中，可以向個體施用第一疫苗組合物(初次)，然后在一段時間后，可以向個體施用第二疫苗組合物(加強(qiáng))。施用加強(qiáng)組合物通常是在施用引發(fā)組合物后數(shù)周或數(shù)月，優(yōu)選約2-3周或4周，或8周，或16周，或20周，或24周，或28周，或32周。在一個實(shí)施方案中，配制加強(qiáng)組合物，用于在施用引發(fā)組合物后約1周，或2周，或3周，或4周，或5周，或6周，或7周，或8周，或9周，或16周，或20周，或24周，或28周，或32周施用。

第一和第二疫苗組合物可以是，但不需要是相同的組合物。因此，在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，施用疫苗的步驟包括施用第一疫苗組合物，然后在稍后時間施用第二疫苗組合物。在一個實(shí)施方案中，第一疫苗組合物包含本發(fā)明的納米顆粒。在一個實(shí)施方案中，第一疫苗組合物包含納米顆粒，其包含來自流感病毒的HA蛋白的氨基酸序列，所述流感病毒選自A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005Indo,H5),B/佛羅里達(dá)/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。

在一個實(shí)施方案中，接種疫苗的個體已暴露于流感病毒。如本文所使用的，術(shù)語暴露的，暴露等指示受試者已經(jīng)與已知感染流感病毒的動物對象接觸。可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)來施用本發(fā)明的疫苗。用于配制和施用的技術(shù)可以在例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”,18^th ed.,1990,Mack Publishing Co.,Easton,PA中找到。疫苗可通過包括但不限于傳統(tǒng)注射器，無針注射裝置或微粒轟擊基因槍的手段施用。合適的施用途徑包括但不限于腸胃外遞送，如肌內(nèi)，皮內(nèi)，皮下，髓內(nèi)注射以及鞘內(nèi)，直接心室內(nèi)，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射，僅舉幾個例子。對于注射，本發(fā)明的一個實(shí)施方案的化合物可以配制在水溶液中，優(yōu)選在生理上相容的緩沖液如Hanks溶液，林格氏溶液或生理鹽水緩沖液中配制。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗或納米顆?？捎糜诒Ｗo(hù)個體免受異源流感病毒的感染。也就是說，使用來自流感病毒的一種毒株的HA蛋白制備的疫苗能夠保護(hù)個體免受不同流感病毒株的感染。例如，使用來自流感A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1)的HA蛋白制備的疫苗可以用于保護(hù)個體免受流感病毒感染，所述流感病毒包括但不限于A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亞/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亞/05/2005(2005indo,H5),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),和/或A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)。

在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗或納米顆?？捎糜诒Ｗo(hù)個體免于抗原性趨異的流感病毒的感染?？乖在叜惖氖侵噶鞲胁《局觌S時間突變的趨勢，從而改變展示給免疫系統(tǒng)的氨基酸。此類隨時間的突變也稱為抗原漂移。因此，例如，使用來自A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC,H1)流感病毒株的HA蛋白制備的疫苗能夠保護(hù)個體免受早期的，抗原性趨異的新喀里多尼亞流感毒株的感染，和未來的進(jìn)化(或趨異)流感毒株。

因?yàn)楸景l(fā)明的納米顆粒展示與完整HA在抗原性上相似的HA蛋白，所以它們可用于檢測針對流感病毒的抗體(抗流感抗體)的測定法中。

因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是使用本發(fā)明的納米顆粒檢測抗流感病毒抗體的方法。本發(fā)明的檢測方法通常可以通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

a.使測試抗流感抗體的存在的樣品的至少部分與本發(fā)明的納米顆粒接觸；并且，

b.檢測納米顆粒/抗體復(fù)合物的存在；

其中納米顆粒/抗體復(fù)合物的存在指示樣品含有抗流感抗體。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，從待測試抗流感病毒抗體的存在的個體獲得或收集樣品。個體可以是或不是懷疑具有抗流感抗體或已經(jīng)暴露于流感病毒的。樣品是從個體獲得的任何樣本，其可用于測試抗流感病毒抗體的存在。優(yōu)選的樣品是可用于檢測抗流感病毒抗體的存在的體液?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明方法的體液的實(shí)例包括但不限于血液，血漿，血清，淚液和唾液。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地鑒定適于實(shí)施所公開的方法的樣品。

血液或血液衍生的液體如血漿，血清等特別適合作為樣品?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的方法從個體收集和制備此類樣品。樣品可以在測定前冷藏或冷凍。

本發(fā)明的任何納米顆粒可用于實(shí)施所公開的方法，只要納米顆粒結(jié)合抗流感病毒抗體。有用的納米顆粒及其制備方法已在本文中詳細(xì)描述。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，納米顆粒包含蛋白質(zhì)構(gòu)建體，其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體包含連接到(融合到)來自流感HA蛋白的至少一個表位的來自單體亞基蛋白的至少25個，至少50個，至少75個，至少100個或至少150個連續(xù)氨基酸，使得納米顆粒在其表面上包含流感病毒HA蛋白表位的三聚體，并且其中蛋白質(zhì)構(gòu)建體能夠自組裝成納米顆粒。

如本文中使用的，術(shù)語接觸是指將測試抗流感抗體存在的樣品引入本發(fā)明的納米顆粒，例如通過組合或混合樣品和本發(fā)明的納米顆粒，使得納米顆粒能夠與樣品中的抗體(如果存在的話)物理接觸。當(dāng)抗流感病毒抗體存在于樣品中時，然后形成抗體/納米顆粒復(fù)合物。此類復(fù)合物形成是指抗流感病毒抗體選擇性結(jié)合納米顆粒中蛋白質(zhì)構(gòu)建體的HA部分以形成可檢測的穩(wěn)定復(fù)合物的能力。樣品中抗流感病毒抗體與納米顆粒的結(jié)合在適合形成復(fù)合物的條件下完成。此類條件(例如，適當(dāng)?shù)臐舛龋彌_液，溫度，反應(yīng)時間)以及優(yōu)化此類條件的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。結(jié)合可以使用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的多種方法測量，包括但不限于凝集測定法，沉淀測定法，酶免疫測定法(例如ELISA)，免疫沉淀測定法，免疫印跡測定法和其它免疫測定法，如例如記載于Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Labs Press,1989)和Harlow et al.,Antibodies,a Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Labs Press,1988)，兩者均通過引用整體并入本文。這些參考文獻(xiàn)還提供了復(fù)合物形成條件的實(shí)例。

如本文所使用的，短語選擇性地結(jié)合HA，選擇性結(jié)合HA等，是指與結(jié)合與HA無關(guān)的蛋白質(zhì)，或樣品或測定法中的非蛋白質(zhì)組分形成對比，抗體優(yōu)先結(jié)合HA蛋白的能力。選擇性結(jié)合HA的抗體是結(jié)合HA但不顯著結(jié)合可能存在于樣品或測定法中的其它分子或組分的抗體。顯著的結(jié)合被認(rèn)為是例如抗HA抗體與非HA分子的結(jié)合，以大到足以干擾測定法檢測和/或測定樣品中的抗流感抗體的水平的能力的親和力或親合力?？纱嬖谟跇悠坊驕y定法中的其它分子和化合物的實(shí)例包括但不限于非HA蛋白，例如白蛋白，脂質(zhì)和碳水化合物。

在一個實(shí)施方案中，可以在溶液中形成抗流感病毒抗體/納米顆粒復(fù)合物(本文中也稱為抗體/納米顆粒復(fù)合物)。在一個實(shí)施方案中，可以形成抗體/納米顆粒復(fù)合物，其中納米顆粒固定在(例如，涂覆到)基底上。固定化技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。合適的基底材料包括但不限于塑料，玻璃，凝膠，賽璐珞(celluloid)，織物，紙和顆粒材料?；撞牧系膶?shí)例包括但不限于膠乳，聚苯乙烯，尼龍，硝化纖維素，瓊脂糖，棉，PVDF(聚偏氟乙烯)和磁性樹脂。用于基底材料的合適形狀包括但不限于孔(例如，微量滴定盤孔)，微量滴定板，浸漬片，條，珠，側(cè)流裝置，膜，過濾器，管，盤，賽璐珞型基質(zhì)，磁性顆粒和其它顆粒。特別優(yōu)選的底物包括例如ELISA板，浸漬片，免疫斑點(diǎn)條，放射免疫測定板，瓊脂糖珠，塑料珠，乳膠珠，棉線，塑料芯片，免疫印跡膜，免疫印跡紙和流通膜。在一個實(shí)施方案中，基底，如顆粒，可以包括可檢測標(biāo)記物。對于基底材料的實(shí)例的描述，參見例如Kemeny,D.M.(1991)APractical Guide to ELISA,Pergamon Press,Elmsford,NY pp 33-44,以及Price,C.and Newman,D.eds.Principles and Practice of Immunoassay,2nd edition(1997)Stockton Press,NY,NY，兩者通過引用整體并入本文。

根據(jù)本發(fā)明，一旦形成，就檢測抗流感病毒抗體/納米顆粒復(fù)合物。檢測可以是定性，定量或半定量的。如本文所使用的，短語檢測復(fù)合物形成，檢測復(fù)合物等是指鑒定與納米顆粒復(fù)合的抗流感病毒抗體的存在。如果形成復(fù)合物，則可以但不需要量化形成的復(fù)合物的量。假定的抗流感病毒抗體和納米顆粒之間的復(fù)合物形成或選擇性結(jié)合可以使用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的多種方法測量(即檢測，測定)(參見例如Sambrook等人，同上)，其實(shí)例在本文中公開?？梢砸远喾N方式檢測復(fù)合物，包括但不限于使用一種或多種下列測定法：血凝抑制測定法，徑向擴(kuò)散測定法，酶聯(lián)免疫測定法，競爭性酶聯(lián)免疫測定法，放射免疫測定法，熒光免疫測定法，化學(xué)發(fā)光測定法，側(cè)向流測定法，流通測定法，基于顆粒的測定法(例如，使用顆粒，如但不限于磁性顆?；蛩芰暇酆衔?，如膠乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀測定法，BioCoreJ測定法(例如，使用膠體金)，免疫斑點(diǎn)測定法(例如，CMG＝s免疫印跡系統(tǒng)(s Immunodot System)，F(xiàn)riborg，Switzerland)和免疫印跡測定法(例如，western印跡)，磷光測定法，流通測定法，層析測定法，基于PAGe的測定，表面等離振子共振測定法，分光光度測定法和電子感覺測定。此類測定法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。

測定法可用于根據(jù)其使用方式給出定性或定量結(jié)果?？梢酝ㄟ^目視(例如，通過眼或通過機(jī)器，如密度計(jì)或分光光度計(jì))觀察到一些測定法，如凝集，顆粒分離和沉淀測定法，而不需要可檢測的標(biāo)記物。

在其它測定法中，可檢測標(biāo)記物與納米顆?；蚺c選擇性結(jié)合納米顆粒的試劑的綴合(即，附著)有助于檢測復(fù)合物形成?？蓹z測標(biāo)記物可以在不干擾納米顆粒結(jié)合抗流感病毒抗體的能力的位點(diǎn)與納米顆?；蚣{米顆粒結(jié)合試劑綴合。綴合方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。可檢測標(biāo)記物的實(shí)例包括但不限于放射性標(biāo)記物，熒光標(biāo)記物，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，發(fā)色標(biāo)記物，酶標(biāo)記物，磷光標(biāo)記物，電子標(biāo)記物；金屬溶膠標(biāo)記物，有色珠，物理標(biāo)記物或配體。配體是指與另一分子選擇性結(jié)合的分子。優(yōu)選的可檢測標(biāo)記物包括但不限于熒光素，放射性同位素，磷酸酶(例如堿性磷酸酶)，生物素，抗生物素蛋白，過氧化物酶(例如辣根過氧化物酶)，β-半乳糖苷酶和生物素相關(guān)化合物或抗生物素蛋白相關(guān)化合物(例如鏈霉抗生物素蛋白或ImmunoPure7NeutrAvidin)。

在一個實(shí)施方案中，可以通過使樣品與結(jié)合抗流感抗體，鐵蛋白或與抗體/納米顆粒復(fù)合物的特異性化合物(如抗體)接觸來檢測抗體/納米顆粒復(fù)合物，所述特異性化合物與可檢測標(biāo)記物綴合?？蓹z測標(biāo)記物可以以不阻斷化合物結(jié)合所檢測的復(fù)合物的能力的方式與特定化合物綴合。優(yōu)選的可檢測標(biāo)記物包括但不限于熒光素，放射性同位素，磷酸酶(例如堿性磷酸酶)，生物素，抗生物素蛋白，過氧化物酶(例如辣根過氧化物酶)，β-半乳糖苷酶和生物素相關(guān)化合物或抗生物素蛋白相關(guān)化合物(例如鏈霉抗生物素蛋白或ImmunoPure7NeutrAvidin)。

在另一個實(shí)施方案中，通過使復(fù)合物與指示劑分子接觸來檢測復(fù)合物。合適的指示劑分子包括可以結(jié)合抗流感病毒抗體/納米顆粒復(fù)合物，抗流感病毒抗體或納米顆粒的分子。因此，指示劑分子可以包括例如結(jié)合抗流感病毒抗體的試劑，如識別免疫球蛋白的抗體。作為抗體的優(yōu)選指示劑分子包括例如與來自其中產(chǎn)生抗流感病毒抗體的個體物種的抗體反應(yīng)的抗體。指示劑分子本身可以附著到本發(fā)明的可檢測標(biāo)志物。例如，抗體可以與生物素，辣根過氧化物酶，堿性磷酸酶或熒光素綴合。

本發(fā)明還可以包含能夠檢測指示劑分子存在的二級分子或其它結(jié)合分子的一個或多個層和/或類型。例如，選擇性結(jié)合指示劑分子的無標(biāo)簽的(即，不與可檢測標(biāo)志物綴合的)二抗可以與選擇性結(jié)合二抗的有標(biāo)簽的(即，與可檢測標(biāo)志物綴合的)三抗結(jié)合。合適的二抗，三抗和其它二級或三級分子可以容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇。優(yōu)選的三級分子也可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員基于第二分子的特性來選擇。相同的策略可以應(yīng)用于后續(xù)層。

優(yōu)選地，指示劑分子與可檢測標(biāo)志物綴合。如果需要的話，加入顯影劑，并將底物送到檢測裝置進(jìn)行分析。在一些方案中，在一個或兩個復(fù)合物形成步驟之后加入清洗步驟以除去過量的試劑。如果使用這些步驟，則它們牽涉本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件，使得除去過量的試劑，但保留復(fù)合物。

因?yàn)楸景l(fā)明的測定法可以檢測樣品(包括血液樣品)中的抗流感病毒抗體，所以此類測定法可用于鑒定具有抗流感抗體的個體。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是鑒定具有抗流感病毒抗體的個體的方法，所述方法包括：

a.使來自測試抗流感抗體的個體的樣品與本發(fā)明的納米顆粒接觸；和，

b.分析接觸的樣品的納米顆粒/抗體復(fù)合物的存在，

其中納米顆粒/抗體復(fù)合物的存在指示所述個體具有抗流感抗體。

任何公開的測定形式可用于進(jìn)行所公開的方法。有用的測定形式的實(shí)例包括但不限于徑向擴(kuò)散測定法，酶聯(lián)免疫測定法，競爭性酶聯(lián)免疫測定法，放射免疫測定法，熒光免疫測定法，化學(xué)發(fā)光測定法，側(cè)向流測定法，通過測定法，基于顆粒的測定法(例如，使用顆粒，如但不限于磁性顆?；蛩芰暇酆衔?，如膠乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀測定法，BioCoreJ測定(例如，使用膠體金)，免疫印跡測定法(例如，CMG＝s免疫印跡系統(tǒng)，F(xiàn)ribourg，Switzerland)和免疫印跡測定法(例如，western印跡)，磷光測定法，流通測定法，層析測定法，基于PAGe的測定法，表面等離振子共振測定法，生物層干涉測定法，分光光度測定法和電子感覺測定法。

如果在樣品中沒有檢測到抗流感抗體，則此類結(jié)果指示個體不具有抗流感病毒抗體。測試的個體可以是或不是懷疑具有針對流感病毒的抗體的。所公開的方法還可以用于確定個體是否已經(jīng)暴露于流感病毒的一種或多種特定類型，組，亞組或毒株。為了進(jìn)行此類測定，從個體獲得樣品，所述個體在其過去(例如，大于約1年，大于約2年，大于約3年，大于約4年，大于約5年等)的某個時候在針對流感病毒的一種或多種特定類型，組，亞組或毒株的抗體測試呈陰性(即，缺少抗體)。然后使用本發(fā)明的基于納米顆粒的測定法測試樣品的針對流感病毒的一種或多種類型，組，亞組或毒株的抗流感病毒抗體的存在。如果測定法指示存在此類抗體，則在鑒定它們?yōu)榭沽鞲锌贵w陰性的測試后的某個時候?qū)€體鑒定為已經(jīng)暴露于流感病毒的一種或多種類型，組亞組或毒株。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是鑒定已暴露于流感病毒的個體的方法，所述方法包括：

a.使來自正在測試抗流感抗體的個體的樣品的至少部分與本發(fā)明的納米顆粒接觸；和，

b.分析接觸的樣品的抗體/納米顆粒復(fù)合物的存在或水平，其中抗體/納米顆粒復(fù)合物的存在或水平指示最近的抗流感抗體的存在或水平；

c.將最近的抗流感抗體水平與過去的抗流感抗體水平進(jìn)行比較；

其中最近的抗流感抗體水平相對于過去的抗流感抗體水平的增加指示個體在確定過去的抗流感抗體水平之后已經(jīng)暴露于流感病毒。

本發(fā)明的方法還可用于確定個體對疫苗的響應(yīng)。因此，一個實(shí)施方案是用于測量個體對流感疫苗的響應(yīng)的方法，所述方法包括：

a.向個體施用流感病毒疫苗；

b.使來自所述個體的樣品的至少部分與本發(fā)明的納米顆粒接觸；

c.分析接觸的樣品的抗體/納米顆粒復(fù)合物的存在或水平，其中抗體/納米顆粒復(fù)合物的存在或水平指示最近的抗流感抗體的存在或水平

其中所述樣品中抗體的水平相對于所述個體中抗體的疫苗接種前水平的增加指示疫苗在所述個體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。

施用于個體的流感疫苗可以但不需要包含本發(fā)明的疫苗，只要納米顆粒包含可以結(jié)合由施用的疫苗誘導(dǎo)的抗流感抗體的HA蛋白。施用流感疫苗的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。

可以使用任何公開的測定形式進(jìn)行對從個體獲得的樣品的分析。在一個實(shí)施方案中，使用選自以下的測定形式進(jìn)行樣品的分析：徑向擴(kuò)散測定法，酶聯(lián)免疫測定法，競爭性酶聯(lián)免疫測定法，放射免疫測定法，熒光免疫測定法，化學(xué)發(fā)光測定法，側(cè)向流測定法，流通測定法，基于顆粒的測定法(例如，使用顆粒，如但不限于磁性顆粒或塑料聚合物，如膠乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀測定法，BioCoreJ測定法(例如，使用膠體金)，免疫斑點(diǎn)測定法(例如，CMG＝s免疫印跡系統(tǒng)，F(xiàn)ribourg，Switzerland)和免疫印跡測定法(例如，western印跡)，磷光測定法，流通測定法，層析測定法，基于PAGE的測定法，表面等離振子共振測定法，生物層干涉測定測定法，分光光度測定法和電子感覺測定法。

在一個實(shí)施方案中，所述方法包括在施用疫苗之前測定個體中存在的抗流感抗體的水平的步驟。然而，如果此類信息可用，則也可以從先前的醫(yī)學(xué)記錄確定個體中存在的抗流感抗體的水平。

雖然不必實(shí)施所公開的方法，但優(yōu)選在施用疫苗的步驟和確定個體中抗流感抗體的水平的步驟之間等待一段時間。在一個實(shí)施方案中，對個體中存在的抗流感抗體的水平的測定在使用疫苗后的至少1天，至少2天，至少3天，至少4天，至少5天，至少6天，至少1周，至少2周，至少3周，至少4周，至少2個月，至少3個月或至少6個月實(shí)施。

本發(fā)明還包括適用于檢測抗流感抗體的試劑盒。合適的檢測手段包括利用本發(fā)明的納米顆粒的本文公開的技術(shù)。試劑盒還可以包含可檢測標(biāo)志物，如選擇性結(jié)合納米顆粒的抗體或其它指示劑分子的抗體。試劑盒還可以包含相關(guān)聯(lián)的組分，如但不限于緩沖液，標(biāo)記物，容器，插頁，管，小瓶，注射器等。

實(shí)施例

提出以下實(shí)施例以便向本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制備和使用實(shí)施方案的完整公開和描述，并且不旨在限制發(fā)明人認(rèn)為是其發(fā)明的范圍，它們也不意圖表示下面的實(shí)驗(yàn)是所進(jìn)行的全部或唯一的實(shí)驗(yàn)。已經(jīng)做出努力以確保關(guān)于使用的數(shù)字(例如量，溫度等)的準(zhǔn)確性，但是應(yīng)該考慮一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另有指示，份數(shù)是重量份，分子量是重量平均分子量，并且溫度以攝氏度計(jì)。使用標(biāo)準(zhǔn)縮寫。

實(shí)施例1：HA穩(wěn)定化莖(HA-SS)構(gòu)建體的基于結(jié)構(gòu)的迭代設(shè)計(jì)

該實(shí)施例顯示用于產(chǎn)生缺乏免疫顯性頭部結(jié)構(gòu)域的HA穩(wěn)定化莖(HA-SS)免疫原的基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)的六個迭代循環(huán)(Gen1-Gen6)。

流感A病毒包含18種HA亞型，其中兩種H1和H3目前導(dǎo)致大多數(shù)人類感染。季節(jié)性流感疫苗針對循環(huán)H1和H3株提供了一些保護(hù)，但很少提供針對趨異的H5，H7和H9亞型的保護(hù)，其導(dǎo)致人類感染的偶然暴發(fā)，作為來自禽類和/或豬庫的人畜共患病。本發(fā)明人假設(shè)聚焦于保守血凝素(HA)莖的免疫應(yīng)答可能潛在地引發(fā)針對多種多樣毒株的廣泛的異亞型流感保護(hù)。因此，本發(fā)明人使用基于結(jié)構(gòu)的迭代設(shè)計(jì)來開發(fā)缺乏免疫顯性HA頭部區(qū)的HA穩(wěn)定化莖(HA-SS)糖蛋白(圖1)。

A/新喀里多尼亞/20/1999(1999NC)HA的胞外域序列和A/南卡羅來納/1/1918(1918SC)的晶體結(jié)構(gòu)(PDB ID 1GBN)用作設(shè)計(jì)模板，并且對每代HA-SS變體評估作為可溶性三聚體的表達(dá)，以及基于與野生型(wt)HA三聚體相似的莖特異性單克隆抗體(mAb)反應(yīng)性評估抗原性。

使用人優(yōu)選密碼子合成編碼來自1999NC，1986SG，2009CA，H2 2005CAN，H5 2005IND和H5 2004VN的全長HA和神經(jīng)氨酸酶(NA)的質(zhì)粒。通過重疊PCR和定點(diǎn)誘變產(chǎn)生不同形式的HA-SS。在freestyle 293(293F；Life Technologies)細(xì)胞或293GnTI^-/-細(xì)胞(用于Gen4HA-SS結(jié)晶)中表達(dá)所有HA，HA-SS蛋白和mAb，并如前所述進(jìn)行純化(Wei,C.J.,et al.Elicitation of broadly neutralizing influenza antibodies in animals with previous influenza exposure.Sci.Transl.Med.4,147ra114(2012))。如所述(Kanekiyo,M.,et al.Nature 499,102-106(2013))進(jìn)行HA-np和Gen1-Gen6HA-SS和Gen4-6HA-SS-np的構(gòu)建，純化和表征。

第一代設(shè)計(jì)(Gen1HA-SS)用GSG接頭替換受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(殘基HA1 51-277，H3編號)(圖1)。各自產(chǎn)生HA胞外域三聚體和所有三聚體HA-SS設(shè)計(jì)，C-末端跨膜和胞質(zhì)殘基HA2 175-220(H3編號)替換為短接頭，T4折疊物，凝血酶切割位點(diǎn)和His標(biāo)簽。使HA1/HA2切割位點(diǎn)突變以防止切割。為了模擬HA-SS設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)，使用1918SC HA(PDB ID 1GBN)和噬菌體T4折疊物三聚體(PDB ID 1RFO)作為模板，使用LOOPY(Xiang,et.al.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,7432-7437(2002))設(shè)計(jì)環(huán)和連接，使用SCAP(Xiang,et al.,J.Mol.Biol.311,421-430(2001))突變側(cè)鏈，并且使用LSQMAN(Kleywegt,et al.,in International Tables for Crystallography,Vol.F,353-367(Kluwer Academic Publishers,Dordrecht,The Netherlands,2001))實(shí)施結(jié)構(gòu)重疊。使用Rosetta程序DDG_MONOMER(Kellogg,et al.,Proteins 79,830-838(2011))計(jì)算地評估特定突變的力能學(xué)(energetics)。使用Chimera(Pettersen,E.F.,et al.Journal of Computational Chemistry 25,1605-1612(2004))進(jìn)行表面積計(jì)算。檢查蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(PDB)中約700個三聚體結(jié)構(gòu)，以找到合適的三聚化結(jié)構(gòu)域，以進(jìn)一步穩(wěn)定化HA-SS免疫原。該搜索揭示了HIV-1gp41(PDB ID 1SZT)針對以下待被優(yōu)化(i)其大小(每個單體小于70個氨基酸)，(ii)其熱穩(wěn)定性(T_m＝70℃)，(iii)容易移植，其中N-和C-末端位于三聚體的相同末端，和(iv)gp41的內(nèi)部七價(jià)重復(fù)1(inner heptad repeat 1,HR1)螺旋的C-端末端與HA-SS三聚體的內(nèi)部C螺旋之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性。Gen1HA-SS不能表達(dá)為三聚體，盡管存在C末端折疊物三聚化結(jié)構(gòu)域。

為了增加第二代中的三聚體穩(wěn)定性，本發(fā)明人將HA-SS的膜遠(yuǎn)端區(qū)域處的HA2殘基66-85替換為熱穩(wěn)定性HIV-1gp41三聚化結(jié)構(gòu)域(參見Tan,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94,12303-12308(1997))，其中內(nèi)部七價(jià)重復(fù)1(HR1)螺旋在結(jié)構(gòu)上與HA莖的內(nèi)部C螺旋互補(bǔ)。連接gp41和HA-SS必需循環(huán)排列g(shù)p41螺旋HR1和HR2，其順序是顛倒的并用富含甘氨酸的接頭重新連接(圖1)。為了將HIV-1gp41的融合后形式的六螺旋束插入Gen2HA-SS中，將來自gp41的三個內(nèi)部螺旋的殘基28-32(殘基573-577，HXBc2編號)疊加到HA內(nèi)螺旋殘基HA2 81-85(來自PDB ID 1RU7)上，對于15個Cα原子具有的均方根偏差(RMSD)。HA2殘基66-85被gp41七價(jià)重復(fù)(HR)2螺旋(殘基628-654，HXBc2編號)替換，隨后是含有N-連接的糖基化位點(diǎn)的序列子的六殘基富含甘氨酸的接頭(NGTGGG)和gp41HR1螺旋(殘基548-577)。HR1設(shè)計(jì)成與HA2的螺旋C符合讀碼框，以產(chǎn)生長的中心嵌合螺旋。通過加入鹽橋，縮短環(huán)和降低其疏水性來穩(wěn)定F’區(qū)的膜遠(yuǎn)端部分的努力沒有改善Gen2HA-SS設(shè)計(jì)的三聚化或抗原性。Gen2HA-SS的表達(dá)導(dǎo)致29％的三聚化。

為了改善第三代中的三聚化，除去了具有不規(guī)則二級結(jié)構(gòu)的HA1F’區(qū)的44個殘基的部分，并且HA-SS的內(nèi)部螺旋C被截短了6個殘基，以在gp41和HA2之間具有更好的互補(bǔ)性。這導(dǎo)致具有77％三聚化的可溶性Gen3HA-SS，其被具有與可溶性HA三聚體(圖1)的親和力總體類似的親和力的HA莖廣泛中和性mAb(bNAb)識別。在Gen3中，用GWG接頭替換F’區(qū)的HA-SS HA2殘基43-50和278-313，并除去HA2殘基60-65和86-92。為了使gp41與HA莖的下部區(qū)域重比對，將來自gp41的三個內(nèi)部螺旋的殘基30-34(575-579Hxbc2編號)疊加到HA內(nèi)部螺旋殘基HA2 90-94上，對于15Cα原子具有的RMSD。對于CR6261和70-5B03觀察到更快的解離速率，這可能部分是由于可以與CR6261重鏈有限接觸的HAF’區(qū)域的喪失。

為了在原子水平表征Gen3HA-SS，本發(fā)明人以分辨率測定了與鼠bNAb C179的抗原結(jié)合片段(Fab)復(fù)合的Gen3HA-SS的晶體結(jié)構(gòu)(參見Okuno,Y.,et al.J.Virol.67,2552-2558(1993))(圖2a，左圖)；C179抗體是用異亞型中和發(fā)現(xiàn)的第一種廣泛中和性HA莖定向抗體。

將從雜交瘤細(xì)胞收獲的C179切割成Fab，如先前所述(Ofek,G.,et al.J.Virol.78,10724-10737(2004))，其中具有以下修改：LysC(Roche)與C179以1:20,000(w/w)比率使用，并且經(jīng)由通過在50mM Tris pH 8.0中的巰基-乙基-吡啶柱(Pall Life Sciences)從消化溶液中除去可結(jié)晶片段(Fc)，并且用50mM NaAc pH 5.0洗脫C179Fab。

通過使1:1.25(Gen3HA-SS/C179摩爾比)混合物通過Superdex 200 26/60(GE Healthcare)凝膠過濾柱，并且收集在152.0mL洗脫的峰獲得Gen3HA-SS(在293GnTI^-/-細(xì)胞中表達(dá))與C179Fab的復(fù)合物。將復(fù)合物在150mM NaCl，10mM Tris HCl pH7.5中濃縮至10mg/ml，并且通過在15％(W/V)聚乙二醇1500，5％(V/V)2-甲基-2,4-戊二醇，200mM NH₄Cl和100mM Tris HCl pH8.5中的懸滴蒸汽擴(kuò)散(hanging drop vapor diffusion)在20℃結(jié)晶，這來源于沉淀劑協(xié)同結(jié)晶篩選(Majeed,S.,et al.Structure 11,1061-1070(2003))。在沒有任何另外的冷凍保護(hù)劑的情況下將晶體冷凍，并在數(shù)據(jù)收集之前貯存在液氮中。

在Advanced Photon Source(APS),阿貢國家實(shí)驗(yàn)室(Argonne National Laboratory)的東南地區(qū)協(xié)作訪問團(tuán)隊(duì)(Southeast Regional Collaborative Access Team,SER-CAT)22-BM束線處，使用的波長，在100K的溫度下收集X射線數(shù)據(jù)到分辨率用HKL2000在三角空間群H3中處理X射線數(shù)據(jù)，并且通過使用五個單獨(dú)的搜索模型的分子替換來確定復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。使用PHASER(Mccoy,A.J.,et al.J.Appl.Crystallogr.40,658-674(2007))，與來自1934PR8結(jié)構(gòu)的HA莖單體(PDB ID 1RU7，殘基5-36，315-323HA1鏈A和殘基514-559，590-660HA2鏈B)，HIV-1gp41單體(PDB ID 1SZT，殘基3-29，42-67)，鼠抗體S25-2的重鏈可變域(PDB ID 1Q9K，殘基1-111)，和鼠抗體MN16C13F4的輕鏈可變域(PDB ID 1UWX,殘基3-108)一起搜索。使用MOLREP(Collaborative Computational Project.Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.50,760-763(1994))來定位T4折疊物單體(PDB ID1RFO，鏈A)，其證實(shí)了手工進(jìn)行的獨(dú)立擬合。通過眼將C179Fab恒定結(jié)構(gòu)域擬合入Fo-Fc密度中，之后使用上述Ab(PDB ID 1Q9K和1UWX)的恒定結(jié)構(gòu)域作為模板精修。使用COOT(Emsley,P.&Cowtan,K.Coot:D Biol.Crystallogr.60,2126-2132(2004))和PHENIX(Adams,P.D.,et al.Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.58,1948-1954(2002))及搭乘氫(riding hydrogen)實(shí)施模型建立和精修。除了HA切割環(huán)(殘基48-52)，連接gp41螺旋的富含甘氨酸的環(huán)(殘基139-144)，連接HA-SS到折疊物的接頭(殘基256-259)和折疊物域C端的凝血酶切割位點(diǎn)和His標(biāo)簽(殘基286-302)外，將Gen3HA-SS的所有殘基建模成電子密度。觀察到糖并建立在Asn殘基23、119和236上。C179結(jié)構(gòu)包括重鏈殘基1-213和輕鏈殘基1-214。如由PHENIX測定的Ramachandran統(tǒng)計(jì)學(xué)揭示了有利區(qū)域中91.64％的殘基，允許區(qū)域中的7.49％和作為異常值的0.86％。

共晶體結(jié)構(gòu)揭示Gen3HA-SS的C179識別類似于在最近公布的C179與A/日本/305/1957(1957JP)HA的共晶結(jié)構(gòu)中識別H2N2三聚體HA的識別(參見Dreyfus,et al.,J.Virol.87,7149-7154(2013))(圖2a，右圖)。雖然這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了Gen3HA-SS上的莖表位的保留；整體結(jié)構(gòu)揭示了幾個意想不到的差異(圖2a，左圖和中圖)。首先，莖三聚體亞基在其C末端相對于HA分開約(圖2a，中間圖)。第二，C-末端折疊物三聚化結(jié)構(gòu)域倒轉(zhuǎn)并且在莖三聚體內(nèi)部疊入到張開區(qū)域中(圖2a，左圖)。最后，HA莖的外部螺旋A與gp41六螺旋束的外部HR2螺旋形成連續(xù)螺旋，而不是形成由甘氨酸接頭分開的兩個單獨(dú)的螺旋。

為了解決這些問題，創(chuàng)建了含有三個突變(圖1中概述)的第四代HA-SS，以努力除去潛在的側(cè)鏈碰撞并且破壞HA2的螺旋B與gp41HR2之間的連續(xù)螺旋(圖2b)。

為了結(jié)晶Gen4HA-SS/CR6261復(fù)合物，通過與內(nèi)切糖苷酶H(77U/μg Gen4HA-SS)溫育4小時來使Gen4HA-SS(在293GnTI^-/-細(xì)胞中表達(dá))去糖基化，隨后通過刀豆蛋白A柱(Sigma)除去具有未切割的N-連接聚糖的蛋白質(zhì)。通過使1:1.25(Gen4HA-SS/CR6261摩爾比)混合物通過Superdex 200 10/300(GE Healthcare)凝膠過濾柱并收集在12.5mL處洗脫的峰來獲得與CR6261Fab的復(fù)合物。將復(fù)合物在150mM NaCl，10mM Tris HCl pH7.5中濃縮至11mg/ml，并通過在7％(w/v)聚乙二醇4000，4.5％(v/v)異丙醇，100mM咪唑pH6.5中的懸滴蒸汽擴(kuò)散在20℃結(jié)晶。將晶體在包含另外的5％(v/v)2R,3R丁二醇(Sigma)的貯存溶液中在室溫下浸泡6小時，然后簡短30秒轉(zhuǎn)移至含有15％2R,3R丁二醇的貯存溶液，之后快速冷卻。

在APS的SER-CAT BM-22束線處使用的波長在100K的溫度下收集X射線數(shù)據(jù)到分辨率。用空間群H3中的HKL2000(參考文獻(xiàn)37)處理數(shù)據(jù)，并通過使用三個單獨(dú)的搜索模型的分子置換來確定復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。使用PHASER來與來自1934PR8結(jié)構(gòu)的HA莖單體，HIV-1gp41單體(與上述相同模型)以及CR6261(PDB ID 3GBM)的可變和恒定結(jié)構(gòu)域一起搜索。分別使用COOT和PHENIX進(jìn)行模型建立和精制。除了HA切割環(huán)(殘基48-52)，連接gp41螺旋的富含甘氨酸的環(huán)(殘基137-145)和C末端折疊物(殘基256-259)，折疊結(jié)構(gòu)域C端的凝血酶切割位點(diǎn)和His標(biāo)簽(殘基286-302)外，將Gen4HA-SS的所有殘基建模為電子密度。盡管在Gen3HA-SS結(jié)構(gòu)中觀察到的相同區(qū)域中的HA莖內(nèi)部可見密度，但是它不足以唯一放置或穩(wěn)定精制折疊物結(jié)構(gòu)域。CR6261Fab結(jié)構(gòu)包括重鏈殘基1-213和輕鏈殘基3-107和113-215。如由PHENIX測定的Ramachandran統(tǒng)計(jì)學(xué)揭示有利區(qū)域中93.19％的殘基，允許區(qū)域中的6.09％和作為異常值的1.06％。

對于低溫電子顯微術(shù)分析，使用Vitrobot Mark IV(FEI Company,Hillsboro,OR)在多孔碳膜(Quantfoil,Germany)上將顆粒玻璃化。在Titan Krios電子顯微鏡(FEI公司，Hillsboro，OR)上收集顆粒的冷凍圖像，在液氮溫度下操作并在300kV下操作。在像素大小以范圍為約2.8至約6μm的散焦值，并且以范圍為約10至的劑量在4,096×4,096電荷耦合器件(CCD)照相機(jī)(Gatan Inc.，Warrendale，PA)上收集圖像。使用ctffind3(Mindell,J.A.&Grigorieff,N.J Struct Biol 142,334-347(2003))擬合觀察到的散焦值，并且將展示漂移或散光的圖像從進(jìn)一步分析中排除。從圖像中手動挑選顆粒(13,464)。無參考2D分類指示在3D精修期間施加的八面體對稱。使用平滑，無刺突的低通濾過的鐵蛋白(PDB ID 2JD6)作為起始模型。在精化過程中除去重疊顆粒之后，從6,540個顆粒計(jì)算重建(3D圖)。用Relion包(Scheres,S.H.W.J.Mol.Biol.415,406-418(2012))進(jìn)行所有圖像分析(2D和3D)。用Chimera進(jìn)行模型坐標(biāo)的可視化和分子?？俊?/p>

與C179復(fù)合的Gen3HA-SS和與CR6261復(fù)合的Gen4HA-SS復(fù)合物的原子坐標(biāo)和結(jié)構(gòu)因子分別保存在PDB代碼4MKD和4MKE下。H1-SS-np的冷凍電子顯微術(shù)圖已經(jīng)以EMDB代碼EMD-6332保存。

與bNAb CR6261的Fab復(fù)合的Gen4HA-SS的分辨率的共晶體結(jié)構(gòu)(參見Ekiert,D.C.,et al.Science 324,246-251(2009))揭示了相對于gp41的展開仍然存在，額外旋轉(zhuǎn)約19°(圖2b，中間圖)。然而，在Gen4HA-SS中三聚化水平(83％)，莖表位構(gòu)象的保持和HA莖bNAb結(jié)合(對四種bNAb為nM)接近最佳(圖1a和2b)。

發(fā)明人關(guān)注免疫原性HIV-1gp41區(qū)域的牽連，因此尋求用短的富含甘氨酸的接頭替換gp41(圖1a)，因?yàn)檫@還將增加HA莖在免疫原表面上的百分比(圖1b)。在兩種情況，Gen5HA-SS(其保留Gen4穩(wěn)定化莖區(qū))和Gen6HA-SS(其中包含Lys51-Glu103(HA2，H3編號)的內(nèi)部鹽橋被替換為幾乎等排的Met-Leu疏水對)(Gen6HA-SS，圖1c)下進(jìn)行g(shù)p41替換。

通過完全除去gp41三聚化結(jié)構(gòu)域，將HA2殘基58-93與GSGGSG環(huán)連接并引入HA2突變Y94D和N95L來創(chuàng)建Gen5HA-SS。

為了設(shè)計(jì)Gen6HA-SS，最初創(chuàng)建了五個突變以穩(wěn)定化HA莖HA2的內(nèi)部核心：K51M，E103L，E105Q，R106W和D109L(稱為Gen6’HA-SS)。對所有三種免疫原保留通過HA莖抗體的三聚化和識別(圖1a)。包含三個另外的內(nèi)部穩(wěn)定化突變的Gen6HA-SS的中間形式(稱為Gen6’HA-SS)展示相似的抗原性(圖1d)，但是最終觀察到突變E105Q，R106W和D109L不是穩(wěn)定化Gen6HA-SS和與鐵蛋白融合需要的，并且不用于最終的H1-SS-np構(gòu)建體(圖1c)。

實(shí)施例2：自組裝鐵蛋白納米顆粒的創(chuàng)建

該實(shí)施例描述了Gen4，Gen5，Gen6’和Gen6HA-SS通過它們各自的HA C末端與自組裝鐵蛋白納米顆粒的融合。

在自組裝納米顆粒(HA-np)的背景下，HA的免疫原性顯著增加(參見Kanekiyo,M.,et al.,Nature 499,102-106(2013))。此外，本發(fā)明人推測與納米顆粒的C-末端融合可以降低莖的近膜區(qū)域的張開。因此，本發(fā)明人將Gen4，Gen5，Gen6’和Gen6HA-SS通過它們各自的HA C-末端(替換折疊物)遺傳融合到幽門螺桿菌的自組裝鐵蛋白納米顆粒以創(chuàng)建HA-SS-納米顆粒(HA-SS-np)。

用SGG接頭將Gen4-6HA-SS與幽門螺桿菌鐵蛋白N-末端(殘基5-167)融合以產(chǎn)生HA-SS鐵蛋白納米顆粒(Gen4HA-SS-np,H1-SS-np和H1-SS-np’)，如描述的(Kanekiyo,M.,et al.Nature 499,102-106(2013))。

使用fortéBio Octet Red384儀器測量HA和HA-SS分子對mAb CR6261，CR9114，F(xiàn)10scFv和70-5B03的結(jié)合動力學(xué)。所有測定法在30℃下進(jìn)行，在補(bǔ)充有1％BSA的PBS中設(shè)定為1,000rpm的攪拌，以使非特異性相互作用最小化。所有溶液的最終體積為100μl/孔。在固體黑色96孔板(Geiger Bio-One)中在30℃進(jìn)行測定。使用在10mM乙酸鹽pH 5.0緩沖液中具有C-末端生物素化的Avi-Tag(25μg/ml)和HA-np或HA-SS-np的HA或HA-SS分別加載鏈霉抗生物素蛋白和胺反應(yīng)性生物傳感器探針達(dá)300s。典型的捕獲水平在0.8和1nm之間，并且一排八個尖端內(nèi)的變異性不超過0.1nm。將生物傳感器尖端在PBS/1％BSA緩沖液中平衡300s，之后進(jìn)行溶液中的Fab或F10scFv(0.01至0.5μM)的結(jié)合測量。加入抗體后，使結(jié)合進(jìn)行300s；然后使結(jié)合解離300s。僅使用解離孔一次以防止污染。通過減去對于在PBS/1％BSA中溫育的裝載有HA或HA-SS分子的傳感器記錄的測量，進(jìn)行平行校正以減去系統(tǒng)基線漂移。為了除去非特異性結(jié)合應(yīng)答，將生物素化的gp120表面重修核心分子加載到鏈霉抗生物素蛋白探針上，并與抗莖抗體一起溫育，并從HA和HA-SS響應(yīng)數(shù)據(jù)中減去非特異性應(yīng)答。使用Octet軟件7.0版進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和曲線擬合。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用描述1:1相互作用的結(jié)合方程擬合。假設(shè)結(jié)合是可逆的(完全解離)，使用非線性最小二乘法擬合進(jìn)行完整數(shù)據(jù)集的全局分析，所述非線性最小二乘法擬合允許對于每個實(shí)驗(yàn)中使用的所有濃度同時獲得單一組的結(jié)合參數(shù)。

如之前所述(Wei,C.J.,et al.Science 329:1060-1064(2010))進(jìn)行ELISA，血凝抑制(HAI)測定法和假型中和測定法。如描述(Wei,C.J.,et al.Sci.Transl.Med.2,24ra21(2010))，產(chǎn)生表達(dá)螢光素酶報(bào)告基因的重組HA/NA慢病毒載體。所有流感病毒均獲自疾病控制和預(yù)防中心(CDC；Atlanta，GA)。

Gen4，Gen6和Gen6’HA-SS-np各自表示為納米顆粒，如通過透射電子顯微鏡分析和凝膠過濾證實(shí)的(圖2)。然而，Gen5HA-SS-np未能表達(dá)。選擇Gen6和Gen6’HA-SS-np進(jìn)行進(jìn)一步評估，并且在下文中在這些實(shí)施例中分別稱為H1-SS-np和H1-SS-np’。以分辨率為實(shí)施的H1-SS-np的冷凍電子顯微術(shù)(EM)分析揭示了對稱的球形顆粒，每個顆粒具有從表面突出的八個刺突(圖2c)。值得注意的是，Gen6HA-SS莖的膜近端區(qū)域比Gen4HA-SS更好地適合于電子密度，這表明擴(kuò)展是減輕的或不再存在(圖2c，左圖)。此外，H1-SS-np和H1-SS-np’都具有期望的抗原性，在ELISA和生物層干涉測量法測量中被CR6261，CR9114，F(xiàn)10和70-5B03識別(參見Ekiert,D.C.,et al.Science 324,246-251(2009)；Sui,J.,et al.Nat.Struct.Mol.Biol.16,265-273(2009)；Dreyfus,C.,et al.Science 337,1343-1348(2012)；Wrammert,J.,et al.J.Exp.Med.208,181-193(2011))，表明在與鐵蛋白融合后保留了真正的HA-SS結(jié)構(gòu)(圖1a，1e和1f)。

實(shí)施例3：評估疫苗功效

該實(shí)施例證明了與HA構(gòu)建體融合的鐵蛋白納米顆粒的疫苗功效的各種測量的表征。

本發(fā)明人使用鈣流量測定法評估了與全長HA-np相比H1-SS-np通過膜錨定的種系恢復(fù)的CR6261B細(xì)胞受體(BCR)觸發(fā)信號傳導(dǎo)的能力(Novak,et.al.Cytometry 17,135-141(1994))。

對于BCR活化測定法，通過輕鏈和膜錨定的IgM重鏈對Ramos B細(xì)胞系的表面IgM陰性克隆的慢病毒轉(zhuǎn)染(FEEKW載體；Luo,X.M.,et al.Blood 113,1422-1431(2009))穩(wěn)定表達(dá)種系CR6261BCR(野生型和雙重I53A/F54A突變體)。然后通過流式細(xì)胞術(shù)(BD FACSAria；BD Biosciences)分選種系CR6261BCR陽性細(xì)胞并擴(kuò)增。評估對于種系CR6261BCR(野生型或I53A/F54A突變體)表達(dá)>95％陽性的細(xì)胞的表面表達(dá)和正確的HA抗原性。對于信號傳導(dǎo)，向表達(dá)種系CR6261BCR的1×10⁶個Ramos B細(xì)胞呈現(xiàn)2500nM的H1-SS-np，HA np(HA含有Y98F突變以消除與唾液酸的非特異性結(jié)合)或空np。通過流式細(xì)胞術(shù)測量響應(yīng)于BCR刺激的鈣流量的動力學(xué)，作為染料Fura Red的Ca²⁺結(jié)合/未結(jié)合狀態(tài)的比率。Ca²⁺流量的此比率在暴露于配體后10秒呈現(xiàn)。在刺激之前獲取30秒基線。對單個細(xì)胞的參比測量取平均值并通過動力學(xué)分析，F(xiàn)lowJo軟件變平滑。在暴露于0.5μg/μl抗人IgM F(ab’)₂(Southern Biotech)后，通過Ca²⁺流量比較種系CR6261BCR對具有I53A/F54A突變的種系CR6261BCR之間的功能性。

與空鐵蛋白顆粒相反，H1-SS-np通過野生型BCR誘導(dǎo)有效的信號傳導(dǎo)，全長HA-np在較小程度上亦然，并且通過在第二個重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR H2)中的兩個關(guān)鍵接觸殘基中突變的BCR沒有觀察到信號傳導(dǎo)(圖1g)。這一發(fā)現(xiàn)證實(shí)了H1-SS-np銜接CR6261的IGHV1-69種系前體并通過CDR H2依賴性識別刺激未免疫的B細(xì)胞的能力，在人中發(fā)現(xiàn)的廣泛中和性莖定向抗體的特征。

為了評估H1-SS-np疫苗功效，本發(fā)明人使用Sigma佐劑系統(tǒng)(SAS)免疫小鼠和雪貂，這是因?yàn)橐褕?bào)道類似于MF59(另一種被批準(zhǔn)用于人的基于角鯊烯的佐劑)，SAS誘導(dǎo)HA響應(yīng)。

對于免疫研究，對于該研究進(jìn)行總共三個動物實(shí)驗(yàn)，兩個在小鼠中，一個在雪貂中。在第一次小鼠實(shí)驗(yàn)中，在第0周和第2周時用2μg H1-SS-np，2μg空白鐵蛋白np，0.2μg H5 2005IND HA-np或TIV(HA摩爾當(dāng)量)肌肉內(nèi)免疫雌性BALB/c小鼠(6-8周齡，Jackson Laboratories)。在每次免疫后14天收集血液，并且分離血清。對于第二次小鼠免疫實(shí)驗(yàn)，在第0周、第8周和第12周用3μg的H1-SS-np或空鐵蛋白np免疫雌性BALB/c小鼠三次。對于雪貂免疫，飼養(yǎng)使用6月齡雄性Fitch雪貂(Triple F Farms,Sayre,PA)(對于暴露于目前循環(huán)的大流行H1N1，季節(jié)性H1N1，H3N2和B流感毒株呈血清陰性)，并在BIOQUAL，Inc.(Rockville，MD)護(hù)理。這些設(shè)施由美國實(shí)驗(yàn)動物保護(hù)國際認(rèn)可協(xié)會(American Association for the Accreditation of Laboratory Animal Care International)認(rèn)可，并滿足NIH標(biāo)準(zhǔn)，如“實(shí)驗(yàn)動物護(hù)理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)”中所述。在第0周和第4周，用在500μl PBS中的20μg H1-SS-np’或空鐵蛋白np或TIV(相當(dāng)于2.5μg H1HA)肌內(nèi)免疫雪貂。用250μg表達(dá)H5 2005IND的質(zhì)粒DNA，隨后在第0周和第4周用H5N1 2005IND MIV的2.5μg HA免疫陽性對照組中的雪貂。通過肌內(nèi)注射將疫苗施用到大腿上部肌肉中。Sigma佐劑系統(tǒng)(SAS，Sigma)用于所有蛋白質(zhì)或基于np的免疫。每次免疫后14天收集血液，并且分離血清。動物實(shí)驗(yàn)完全符合所有相關(guān)聯(lián)邦規(guī)定和NIH指南進(jìn)行。

對于被動轉(zhuǎn)移研究，在第0周和第4周首先用H1-SS-np蛋白(2μg/劑量，具有SAS)接種150只小鼠，以產(chǎn)生HA-SS免疫Ig，并在加強(qiáng)后第1周，第2周和第3周(末端)收集血清。使用制造商方案用蛋白G(Life Technologies)純化來自免疫血清的Ig。攻擊前24小時，兩組BALB/c小鼠(n＝10/組，Taconic inc。)通過腹膜內(nèi)途徑接受未免疫的(Molecular innovations)或免疫的Ig。在被動轉(zhuǎn)移后24小時從輸注的動物收集血清用于血清學(xué)分析。

對于病毒攻擊研究，從疾病控制和預(yù)防中心(Atlanta,GA)(CDC#2004706280,E1/E3(1/19/07)獲得H5N1毒株A/越南/1203/04，并且在BIOQUAL Inc.在10天齡的胚胎雞蛋(Charles River,North Franklin,CT)中擴(kuò)充。攻擊原液具有10¹⁰TCID₅₀/ml的感染滴度。對于血液收集，放血和攻擊程序，用配制為對每只動物提供25mg/kg氯胺酮和0.001mg/kg右美托咪定劑量的氯胺酮/右美托咪定溶液麻醉動物。將小鼠用50μl病毒鼻內(nèi)接種，每個鼻孔大約25μl，并且對雪貂鼻內(nèi)接種500μl病毒，每個鼻孔約250μl。攻擊劑量為小鼠中的25LD₅₀和雪貂中的1000TCID₅₀。根據(jù)以前的研究，這些攻擊劑量預(yù)期分別導(dǎo)致未免疫的對照小鼠和雪貂中的100％致死率。對于雪貂，每天記錄感染的臨床體征，體重和溫度兩次。如下分配活動得分：0，警惕和嬉戲；1，警醒但只在受刺激時嬉戲(playful)；2，警惕，但刺激時不嬉戲；和3，既不警惕，在刺激時也不嬉戲。對顯示嚴(yán)重疾病體征(延長的發(fā)燒，腹瀉，干擾飲食，飲水或呼吸的流涕；嚴(yán)重嗜睡；或神經(jīng)學(xué)體征)或體重減輕>20％的雪貂立即實(shí)施安樂死。

H1-SS-np和H1-SS-np’分別引發(fā)在小鼠和雪貂兩者中針對組1HA亞型(季節(jié)性和大流行H1，H2，H5和H9)的廣泛抗體響應(yīng)(圖3a，3b和3C)。此外，H1-SS-np在半數(shù)的小鼠中誘導(dǎo)出與H2和H5相當(dāng)?shù)膶?shí)質(zhì)性組2(H3和H7)應(yīng)答(圖3a，左圖)。在小鼠和雪貂兩者中，由H1-SS-np引發(fā)的對HA莖的抗體應(yīng)答顯著高于三價(jià)滅活的流感疫苗(TIV)的抗體應(yīng)答(圖3b，右圖)。雖然也觀察到對鐵蛋白的相當(dāng)大的應(yīng)答(圖3a和3b，左圖)，但先前的研究已顯示用細(xì)菌鐵蛋白免疫不誘導(dǎo)小鼠中自體鐵蛋白的免疫，它也不減輕對隨后免疫的HA特異性抗體應(yīng)答。使用高度靈敏的HA-NA慢病毒報(bào)告物測定法(Wei,C.J.,et al.Sci.Transl.Med.2,24ra21(2010))測量血清中和活性(NT)揭示了在小鼠和雪貂兩者中針對趨異的H1N1毒株A/加利福尼亞/04/2009(2009CA)和A/新加坡/6/1986(1986SG)和同源1999NC株的看得出的活性。然而，針對異亞型H5N1A/越南/1203/2004(H5N1 2004VN)，人起源H2N2A/加拿大/720/2005(H2N2 2005CA)，H7N9A/安徽(Anhui)/1/2013(H7N9 2013AN)和H9N2A/香港/1074/1999(H9N2 1999HK)在小鼠和雪貂兩者中都是低的或不可檢測的(圖3a和3c)。盡管強(qiáng)的異亞型抗體反應(yīng)性，但觀察到的最小異亞型中和可能是由于莖中和所需要的單個表位區(qū)域的精確靶向，使得其比在表面積上大20倍的HA莖的其它部分對次要結(jié)構(gòu)差異更敏感。TIV免疫的動物在小鼠和雪貂兩者中具有針對同源1999NC的最高NT，針對異源H1N1株的可檢測NT，以及沒有針對異亞型H5N1的NT(圖3b)。如預(yù)期的，TIV免疫的動物具有顯著的血凝抑制(HAI)滴度，并且由H1-SS-np和H1-SS-np’引發(fā)的NT活性與HAI無關(guān)。

為了評估保護(hù)，用高致死劑量的高致病性H5N1 2004VN病毒攻擊經(jīng)免疫的小鼠和雪貂。所有未免疫的小鼠和用空np免疫的小鼠死亡，并且顯著地，所有用H1-SS-np免疫的小鼠存活(圖4a)。用空鐵蛋白納米粒免疫的所有雪貂死于感染，并且用H5N1HA DNA/單價(jià)滅活疫苗(MIV)初免-加強(qiáng)免疫的所有雪貂存活(圖4b)。與小鼠研究一致，六個基于H1N1的H1-SS-np’免疫的雪貂中的四個幸免于H5N1攻擊。盡管六個TIV免疫的雪貂中的兩個存活，但是兩個存活者中的一個經(jīng)歷嚴(yán)重的體重減輕(圖4a)，并且在具有最小體重減輕的另一只存活者中沒有H5血清學(xué)應(yīng)答的證據(jù)，提示沒有發(fā)生感染。除了一個血清陰性動物之外，與空的鐵蛋白-np對照相比，TIV免疫的組在體重減輕或發(fā)燒方面沒有差異，并且如通過攻擊后活動評分證明，比H1-SS-np’-免疫的雪貂顯示更大的疾病。與空鐵蛋白免疫的對照相比，基于H1-SS-np’-免疫的雪貂中的活動評分，第6天體重減輕，發(fā)熱和疾病顯著減少(圖4)。在存活的雪貂中攻擊后第14天存在的針對H5N1 2004VN的HAI滴度指示雖然H1-SS-np’能夠預(yù)防疾病，但它不能防止感染。表3和4提供了小鼠和雪貂中的這些免疫研究的總結(jié)。

表3：在用H1-SS-np免疫的小鼠中針對H1N1 1999NC和H5N1 2004VN的攻擊后血清HAI抗體滴度。

*此小鼠在攻擊前1天死亡。

表4：用指定方案免疫的雪貂中針對同源H1N1 1999NC的攻擊前HAI抗體滴度和針對攻擊毒株H5N1 2004VN的攻擊后HAI抗體滴度。

由H1-SS-np’引發(fā)的可忽略的H5N1NT活性(圖3c)沒有解釋觀察到的異亞型保護(hù)。然而，在HA-SS-np’免疫的白鼬中，HA抗體滴度和存活之間以及抗體滴度和體重之間存在相關(guān)性。為了進(jìn)一步研究這種相關(guān)性，在用高致死劑量的H5N1 2004VN病毒攻擊前24小時，發(fā)明人被動轉(zhuǎn)移H1-SS-np免疫Ig至未免疫的小鼠(10mg/動物)。轉(zhuǎn)移的Ig具有與組1HA亞型(H1，H2，H5和H9)的強(qiáng)反應(yīng)性，與組2亞型(H3和H7)的較弱的結(jié)合和最小的NT活性(圖4d和4e)。在表5中顯示H1-SS-np免疫Ig對多種流感假病毒的IC50中和滴度。

表5：H1-SS-np免疫Ig的IC₅₀假病毒中和滴度。

雖然所有接受未免疫的Ig的小鼠都死于感染，但接受免疫Ig的10只小鼠中的8只完全被保護(hù)而免于致命的H5N1異亞型攻擊。在免疫Ig組中死亡的兩只小鼠中對同源H1 1999NC HA的低血清反應(yīng)性指示它們可能尚未接受適當(dāng)?shù)腎g施用(圖4c)。

這些數(shù)據(jù)一起顯示，基于除中和之外的功能機(jī)制(如抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)或抗體依賴性補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解)的抗體介導(dǎo)的的保護(hù)負(fù)責(zé)由H1-SS-np和H1-SS-np’免疫引發(fā)的保護(hù)。報(bào)告了通過廣泛中和性HA莖抗體在小鼠中的流感保護(hù)依賴于Fc相互作用(DiLillo,et.al.Nat Med 20,143-151(2014))，并且已經(jīng)在人和獼猴血漿兩者中報(bào)告了在不存在中和的情況下針對流感HA的交叉反應(yīng)性ADCC(Jegaskanda,S.,et al.J Immunol 190,1837-1848(2013)；Jegaskanda,et al.J.Virol.87,5512-5522(2013)；Jegaskanda,et al.J Immunol 193,469-475(2014))。與這些報(bào)告一致，本文中呈現(xiàn)的結(jié)果提示基于HA莖的流感疫苗不需要必然聚焦于中和性表位以誘導(dǎo)廣泛的保護(hù)。

使用基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)并避免對HA頭部結(jié)構(gòu)域的免疫顯性應(yīng)答，與納米顆?？乖故酒脚_組合，本發(fā)明人成功地產(chǎn)生了僅HA莖的納米顆粒疫苗免疫原，其在雪貂中引發(fā)針對H5N1疾病的抗體介導(dǎo)的異亞型保護(hù)性免疫。這些結(jié)果證明，通過僅HA莖的納米顆粒疫苗引發(fā)非中和性抗體可以提供針對嚴(yán)重疾病的廣泛保護(hù)，并且應(yīng)該用于開發(fā)通用流感疫苗。

序列表

<110> 美利堅(jiān)合眾國, 由健康及人類服務(wù)部部長代表

Mascola, John R.

Boyington, Jeffrey C.

Yassine, Hadi M.

Kwong, Peter D.

Graham, Barney S.

Kanekiyo, Masaru

<120> 穩(wěn)定化的流感血凝素莖區(qū)三聚體及其用途

<130> 6137NIAID-36-PCT

<140> 尚未分配

<141> 2015-05-27

<150> 62/003,471

<151> 2014-05-27

<160> 401

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 504

<212> DNA

<213> 幽門螺桿菌

<400> 1

atgctgtccg acatcatcaa gctgctgaac gaacaggtga acaaggagat gcagagctcc 60

aacctgtaca tgagtatgtc tagttggtgt tatacacact cactggacgg cgctgggctg 120

ttcctgtttg atcacgcagc cgaggaatac gaacatgcaa agaaactgat cattttcctg 180

aatgagaaca atgtgcccgt ccagctgact tcaatcagcg cccctgaaca taagttcgag 240

ggcctgaccc agatctttca gaaagcttac gaacacgagc agcatatttc cgaatctatc 300

aacaatattg tggaccacgc cattaagagc aaagatcatg ctaccttcaa ctttctgcag 360

tggtacgtgg ccgagcagca cgaggaggag gtcctgttta aggacatcct ggataaaatc 420

gaactgattg gaaacgagaa tcatggcctg tacctggcag atcagtatgt gaagggcatt 480

gccaagtcca gaaaaagtgg gtca 504

<210> 2

<211> 168

<212> PRT

<213> 幽門螺桿菌

<400> 2

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Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr

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His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala Glu

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Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn

50 55 60

Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe Glu

65 70 75 80

Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His Ile

85 90 95

Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys Asp

100 105 110

His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His Glu

115 120 125

Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly

130 135 140

Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile

145 150 155 160

Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

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<210> 3

<211> 504

<212> DNA

<213> 幽門螺桿菌

<400> 3

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

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<210> 4

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agtatgtcta gttggtgtta tacacactca ctggacggcg ctgggctgtt cctgtttgat 120

cacgcagccg aggaatacga acatgcaaag aaactgatca ttttcctgaa tgagaacaat 180

gtgcccgtcc agctgacttc aatcagcgcc cctgaacata agttcgaggg cctgacccag 240

atctttcaga aagcttacga acacgagcag catatttccg aatctatcaa caatattgtg 300

gaccacgcca ttaagagcaa agatcatgct accttcaact ttctgcagtg gtacgtggcc 360

gagcagcacg aggaggaggt cctgtttaag gacatcctgg ataaaatcga actgattgga 420

aacgagaatc atggcctgta cctggcagat cagtatgtga agggcattgc caagtccaga 480

aaaagtgggt ca 492

<210> 5

<211> 165

<212> PRT

<213> A流感病毒

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Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser

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Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu

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Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn

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His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser

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<212> DNA

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ctgaaaggca ttgcccctct gcagctgggc aattgttctg tggccggatg gattctgggc 240

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aatcctgaga atggcacctg ctaccctggc tacttcgccg attacgagga gctgcgcgag 360

cagctgtcta gcgtgtccag cttcgagaga ttcgagatct tccccaagga gtccagctgg 420

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tacgtgaaca acaaggaaaa ggaagtgctg gtgctgtggg gagtgcacca ccctcccaac 600

atcggaaatc agcgggccct gtaccacaca gagaacgcct atgtgagcgt ggtgtccagc 660

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ctgtatgaga aggtgaagag ccagctgaag aacaacgcca aggagatcgg caacggctgc 1440

ttcgagttct accacaagtg taacaacgag tgtatggaga gcgtgaagaa cggcacctac 1500

gactacccta agtacagcga ggagagcaag ctgaaccggg agaagatcga tggcgtgaag 1560

ctggagagca tgggcgtgta tcagatcctg gccatctaca gcacagtggc ctcttctctg 1620

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Asn Pro Glu Cys Glu Leu Leu Ile Ser Lys Glu Ser Trp Ser Tyr Ile

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Ala Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe

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Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Thr

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Val Thr Gly Val Ser Ala Ser Cys Ser His Asn Gly Lys Ser Ser Phe

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Leu Ser Arg Gly Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Pro Met

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Asp Glu Cys Asp Ala Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ala Ile Asn Ser

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Ser Leu Pro Phe Gln Asn Val His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro

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Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

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His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr

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Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu

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Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu

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Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys

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Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys

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Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys

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tcttctgctg tagtggctgg acaccacgct cacataggcg ttctctgtgt ggtacagggc 1080

ccgctgattt ccgatgttgg gagggtggtg cactccccac agcaccagca cttccttttc 1140

cttgttgttc acgtagctct tgctcaggtt ggggtacagg ccattcttgc ctgtcagcca 1200

cagcaggttc cggtagaagc tgcttttgcc gttgtggcta cagctggcag acacgcctgt 1260

cactgtgtga ttaggccagc tggactcctt ggggaagatc tcgaatctct cgaagctgga 1320

cacgctagac agctgctcgc gcagctcctc gtaatcggcg aagtagccag ggtagcaggt 1380

gccattctca ggattggggg tctccacgat gtagctccag ctctccttag aaatcagcag 1440

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<210> 10

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 10

atgaaggcta ttttggtcgt gctcctgtac acctttgcca cagccaatgc cgataccctt 60

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

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Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val

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Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly

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Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe

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Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp

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Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val

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Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Ser Ala Asp Gln Gln Ser Leu

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Tyr Gln Asn Ala Asp Thr Tyr Val Phe Val Gly Ser Ser Arg Tyr Ser

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Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys

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Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn

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<212> DNA

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 13

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tgt 1683

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<212> PRT

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<400> 14

Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

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Met Val Trp Leu Thr Lys Lys Gly Ser Asn Tyr Pro Val Ala Lys Gly

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Ser Tyr Asn Asn Thr Ser Gly Glu Gln Met Leu Ile Ile Trp Gly Val

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His His Pro Asn Asp Glu Thr Glu Gln Arg Thr Leu Tyr Gln Asn Val

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Pro Asp Tyr His Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Gly Gly

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Arg Met Glu Phe Ser Trp Thr Leu Leu Asp Met Trp Asp Thr Ile Asn

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Ser Lys Arg Gly Ser Ser Gly Ile Met Lys Thr Glu Gly Thr Leu Glu

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Tyr Val Lys Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val

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Pro Gln Ile Glu Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile

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Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His

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Ser Asn Asp Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln

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Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu

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Arg Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp

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Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg

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Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe

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Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn

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Leu Ala Ile Tyr Ala Thr Val Ala Gly Ser Leu Ser Leu Ala Ile Met

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Met Ala Gly Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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cat 1683

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<212> DNA

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Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

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Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

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Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val

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Glu Lys Ala Asn Pro Thr Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Ser Phe Asn

100 105 110

Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu

115 120 125

Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser

130 135 140

Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Ser Pro Ser Phe Phe

145 150 155 160

Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile

165 170 175

Lys Lys Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp

180 185 190

Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln

195 200 205

Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Ile Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg

210 215 220

Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly

225 230 235 240

Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn

245 250 255

Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile

260 265 270

Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly

275 280 285

Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser

290 295 300

Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys

305 310 315 320

Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser

325 330 335

Pro Gln Arg Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile

340 345 350

Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr

355 360 365

Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys

370 375 380

Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser

385 390 395 400

Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe

405 410 415

Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp

420 425 430

Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met

435 440 445

Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu

450 455 460

Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly

465 470 475 480

Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu

485 490 495

Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala

500 505 510

Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly

515 520 525

Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala

530 535 540

Leu Ala Ile Met Met Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly

545 550 555 560

Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile

565

<210> 18

<211> 1704

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 18

gatgcagatc ctgcactgca ggctgccatt gctgcacatc cacaggctca gtccggccat 60

cataatggcc agggccagag aagaggccac tgtgctgtag atgctcagga tctggtaggt 120

gccgatggat tccagtttca cgccgctgat ctcttccctc ttcagcctgg cttcctcgct 180

gtactgaggg tagttgtagg tgccgttccg gatgctttcc atgcactcgt tgtcgcactt 240

gtggtagaac tcgaagcagc cgttgcccag ctctttggcg ttgtctctca gctgcagccg 300

cactttgtcg tacaggttct tcacgttgct gtcgtggaag tccagggtcc gctcgttttc 360

catcagcacc agcagttcgg cattgtaggt ccacacatcc aggaagccat cttccatttt 420

cttgttcagg ttctcgatcc gccgttccag gttgttgaac tctctgccca cagcctcgaa 480

ctgggtgttc atcttgtcga tgatgctgtt caccttgttg gtgacgccgt cgatggcctt 540

ctgggtagac tctttgtcgg cggcatatcc agagccctgc tcattgctgt ggtggtagcc 600

gtaccagcca tccaccattc cctgccagcc gccttcaata aagccggcga tggctccaaa 660

caggcccctc ttctttcttc tgctctcccg ctgggggcta tttctcaggc ctgtggccag 720

caccagtctg ttgctcttca cgtacttagg gcactcgccg atggtcagag ggtggatgtt 780

gtggaagggc atgctgctgt tgatggcgcc cataggtgtc tggcacttgg tgttgcagtt 840

gccgtattcc agctcgctct tcatgatggc gctgtcgccc ttcttcacga tcttgtaggc 900

gtactcaggg gcgataaagt tgccgttgct ctcgaagttg atggcgtcgt tgggcttcag 960

gatggtccag aagaattcca tcctgccgct ctggccgttc accttggatc tggtggcgat 1020

cttgggcacc agtctctgat tcagggtgct ggtgccgatg ctgatatagg tggtggggtt 1080

ctggtacagt ctggtctgct cggcggcatc attagggtgg tggattcccc acaggaccag 1140

cagatcttcc tggttggtgt tgttgtagct cttcttgatg gtggggtagg tgctgttctt 1200

cttgatcagc cacaccacgt ttctgaagaa gctggggctg cccaggtaag gacaggcgct 1260

agacactccg ctagaggctt cgtgatcgct ccaagaggac ttggggatga tctggatctt 1320

ctcgaagtgg ttgatccggg acagcaggtg cttcagttcc tcgtaatcgt tgaagctgcc 1380

ggggtaacac agatcgttgg tggggttggc cttctccacg atatagctcc actcgggcac 1440

gttgatgaac tcgtcgcaca tagggttgcc cagcagccat ccagccacgc tacaatctct 1500

caggatcaga ggcttcacgc cgtccagatc acacagcttg ccgttgtggg tcttttccag 1560

gatgtcctga gcgtgggtca cggtcacgtt tttttccatg atggtgtcca cctgctctgt 1620

gctattgttg gcgtggtagc caatgcagat ctggtcgctc ttcaccaggc tcacaatggc 1680

cagcagcagc acgatctttt ccat 1704

<210> 19

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 19

atgaaggcca aactgctggt gctgctgtgt acctttaccg ccacctacgc cgacacaatc 60

tgtatcggct accacgccaa caatagcacc gacaccgtgg atacagtgct ggagaagaac 120

gtgaccgtga cccactctgt gaacctg 147

<210> 20

<211> 49

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 20

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu

<210> 21

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 21

caggttcaca gagtgggtca cggtcacgtt cttctccagc actgtatcca cggtgtcggt 60

gctattgttg gcgtggtagc cgatacagat tgtgtcggcg taggtggcgg taaaggtaca 120

cagcagcacc agcagtttgg ccttcat 147

<210> 22

<211> 678

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 22

gatgccaagt gccagacacc tcagggcgcc atcaatagca gcctgccctt ccagaatgtg 60

caccctgtga ccatcggcga gtgccccaag tatgtgagaa gcgccaagct gagaatggtg 120

accggcctga gaaacatccc tagcatccag agcagaggac tgtttggagc catcgccgga 180

ttcatcgagg gaggatggac aggcatggtg gatggctggt acggctacca ccaccagaat 240

gagcagggct ctggatatgc cgccgatcag aagtctaccc agaacgccat caacggcatc 300

accaacaagg tgaacagcgt gatcgagaag atgaacaccc agtttaccgc tgtgggcaag 360

gagttcaaca agctggagcg gaggatggag aacctgaaca agaaggtgga cgacggcttt 420

ctggacatct ggacctacaa tgccgaactc ctggtcctcc tcgagaatga gaggaccctg 480

gacttccacg acagcaacgt gaagaacctg tatgagaagg tgaagagcca gctgaagaac 540

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aaccgggaga agatcgat 678

<210> 23

<211> 226

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 23

Asp Ala Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro

1 5 10 15

Phe Gln Asn Val His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val

20 25 30

Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

35 40 45

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

50 55 60

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

65 70 75 80

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

85 90 95

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn

100 105 110

Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg

115 120 125

Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

130 135 140

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu

145 150 155 160

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser

165 170 175

Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

180 185 190

Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr

195 200 205

Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys

210 215 220

Ile Asp

225

<210> 24

<211> 678

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 24

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

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gttgctgtcg tggaagtcca gggtcctctc attctcgagg aggaccagga gttcggcatt 240

gtaggtccag atgtccagaa agccgtcgtc caccttcttg ttcaggttct ccatcctccg 300

ctccagcttg ttgaactcct tgcccacagc ggtaaactgg gtgttcatct tctcgatcac 360

gctgttcacc ttgttggtga tgccgttgat ggcgttctgg gtagacttct gatcggcggc 420

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tgtctggcac ttggcatc 678

<210> 25

<211> 576

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 25

gatgccaagt gccagacacc tcagggcgcc atcaatagca gcctgccctt ccagaatgtg 60

caccctgtga ccatcggcga gtgccccaag tatgtgagaa gcgccaagct gagaatggtg 120

accggcctga gaaacatccc tagcatccag agcagaggac tgtttggagc catcgccgga 180

ttcatcgagg gaggatggac aggcatggtg gatggctggt acggctacca ccaccagaat 240

gagcagggct ctggatatgc cgccgatcag aagtctaccc agaacgccat caacggcatc 300

accaacaagg tgaacagcgt gatcgagaag atgtacaatg ccgaactcct ggtcctcctc 360

gagaatgaga ggaccctgga cttccacgac agcaacgtga agaacctgta tgagaaggtg 420

aagagccagc tgaagaacaa cgccaaggag atcggcaacg gctgcttcga gttctaccac 480

aagtgtaaca acgagtgtat ggagagcgtg aagaacggca cctacgacta ccctaagtac 540

agcgaggaga gcaagctgaa ccgggagaag atcgat 576

<210> 26

<211> 193

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 26

Asp Ala Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro

1 5 10 15

Phe Gln Asn Val His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val

20 25 30

Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

35 40 45

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

50 55 60

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

65 70 75 80

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

85 90 95

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr

100 105 110

Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp

115 120 125

Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser Gln

130 135 140

Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr

145 150 155 160

His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr

165 170 175

Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile

180 185 190

Asp

<210> 27

<211> 576

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 27

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

gccgatctcc ttggcgttgt tcttcagctg gctcttcacc ttctcataca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtcctctc attctcgagg aggaccagga gttcggcatt 240

gtacatcttc tcgatcacgc tgttcacctt gttggtgatg ccgttgatgg cgttctgggt 300

agacttctga tcggcggcat atccagagcc ctgctcattc tggtggtggt agccgtacca 360

gccatccacc atgcctgtcc atcctccctc gatgaatccg gcgatggctc caaacagtcc 420

tctgctctgg atgctaggga tgtttctcag gccggtcacc attctcagct tggcgcttct 480

cacatacttg gggcactcgc cgatggtcac agggtgcaca ttctggaagg gcaggctgct 540

attgatggcg ccctgaggtg tctggcactt ggcatc 576

<210> 28

<211> 570

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 28

ctgagaatgg tgaccggcct gagaaacatc cctagcatcc agagcagagg actgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg acaggcatgg tggatggctg gtacggctac 120

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<210> 29

<211> 194

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 29

Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln Arg Glu Thr Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

50 55 60

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn

65 70 75 80

Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg

85 90 95

Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

100 105 110

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu

115 120 125

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser

130 135 140

Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

145 150 155 160

Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr

165 170 175

Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys

180 185 190

Ile Asp

<210> 30

<211> 570

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 30

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

gccgatctcc ttggcgttgt tcttcagctg gctcttcacc ttctcataca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtcctctc attctcgagg aggaccagga gttcggcatt 240

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<210> 31

<211> 468

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 31

ctgagaatgg tgaccggcct gagaaacatc cctagcatcc agagcagagg actgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg acaggcatgg tggatggctg gtacggctac 120

caccaccaga atgagcaggg ctctggatat gccgccgatc agaagtctac ccagaacgcc 180

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tatgagaagg tgaagagcca gctgaagaac aacgccaagg agatcggcaa cggctgcttc 360

gagttctacc acaagtgtaa caacgagtgt atggagagcg tgaagaacgg cacctacgac 420

taccctaagt acagcgagga gagcaagctg aaccgggaga agatcgat 468

<210> 32

<211> 157

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 32

Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln Arg Glu Thr Arg

1 5 10 15

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly

20 25 30

Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

35 40 45

Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asn Gly Ile

50 55 60

Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

65 70 75 80

Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser

85 90 95

Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn

100 105 110

Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn

115 120 125

Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

130 135 140

Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

145 150 155

<210> 33

<211> 468

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 33

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

gccgatctcc ttggcgttgt tcttcagctg gctcttcacc ttctcataca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtcctctc attctcgagg aggaccagga gttcggcatt 240

gtacatcttc tcgatcacgc tgttcacctt gttggtgatg ccgttgatgg cgttctgggt 300

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<210> 34

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 34

atgaaggcta ttttggtcgt gctcctgtac acctttgcca cagccaatgc cgataccctt 60

tgtattggct accatgcaaa caactctacc gatacggtcg acacggtgct cgaaaagaat 120

gttactgtca cccactctgt gaacttg 147

<210> 35

<211> 49

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 35

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu

<210> 36

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 36

caagttcaca gagtgggtga cagtaacatt cttttcgagc accgtgtcga ccgtatcggt 60

agagttgttt gcatggtagc caatacaaag ggtatcggca ttggctgtgg caaaggtgta 120

caggagcacg accaaaatag ccttcat 147

<210> 37

<211> 672

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 37

acatgtcaga caccgaaggg cgccatcaac acgagcttgc cctttcagaa tatacatcca 60

atcacaatcg gaaaatgccc caagtacgtg aaaagcacta aactgagact cgccaccgga 120

ctcaggaata tcccaagcat ccagtcacgg ggtctgttcg gcgctatcgc cggatttatt 180

gaaggcggct ggacggggat ggtggacggt tggtacggct accatcatca aaatgagcag 240

ggctccggat acgccgctga cctgaaatct acgcagaatg ccatagatga gatcacaaac 300

aaggtcaata gtgtgataga aaaaatgaat actcagttca cagctgttgg aaaggagttt 360

aaccacctcg agaagcgaat tgagaacctg aacaagaagg tggacgatgg ctttttggat 420

atctggacgt ataacgctga gctgcttgtt ctgctggaga acgaaagaac ccttgactac 480

cacgattcca acgtgaagaa tctgtatgag aaagtgcgaa gccagttgaa aaacaacgca 540

aaagaaatag gcaacggctg tttcgagttc taccacaaat gcgataacac ctgcatggag 600

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gaggagatag ac 672

<210> 38

<211> 224

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 38

Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn Thr Ser Leu Pro Phe Gln

1 5 10 15

Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

20 25 30

Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln

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Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

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Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln

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Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp

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Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln

100 105 110

Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu

115 120 125

Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr

130 135 140

Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr

145 150 155 160

His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu

165 170 175

Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His

180 185 190

Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp

195 200 205

Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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gttcttcaca ctctccatgc aggtgttatc gcatttgtgg tagaactcga aacagccgtt 120

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 40

acatgtcaga caccgaaggg cgccatcaac acgagcttgc cctttcagaa tatacatcca 60

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<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 41

Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn Thr Ser Leu Pro Phe Gln

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Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

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Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln

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Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

50 55 60

Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln

65 70 75 80

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp

85 90 95

Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn

100 105 110

Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His

115 120 125

Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys

130 135 140

Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys

145 150 155 160

Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr

165 170 175

Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

180 185 190

<210> 42

<211> 573

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 42

gtctatctcc tccctattga gtttggcctc ctcggagtat tttggataat cgtacgttcc 60

gttcttcaca ctctccatgc aggtgttatc gcatttgtgg tagaactcga aacagccgtt 120

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 43

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg

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Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly

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Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

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Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile

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Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr

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Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu

85 90 95

Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala

100 105 110

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Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn

130 135 140

Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys

145 150 155 160

Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro

165 170 175

Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

180 185 190

<210> 45

<211> 507

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 45

cttcacactc tccatgcagg tgttatcgca tttgtggtag aactcgaaac agccgttgcc 60

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 46

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gctatcgccg gatttattga aggcggctgg acggggatgg tggacggttg gtacggctac 120

catcatcaaa atgagcaggg ctccggatac gccgctgacc tgaaatctac gcagaatgcc 180

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Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

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Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile

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Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

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Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn

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Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

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<211> 471

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 48

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gttcttcaca ctctccatgc aggtgttatc gcatttgtgg tagaactcga aacagccgtt 120

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<400> 49

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

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Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

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Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile

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<211> 141

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 51

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<212> DNA

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<400> 52

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Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro Phe His

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Asn Val His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

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Glu Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

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Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

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Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

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Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

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Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln

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Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu

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Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr

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Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe

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His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu

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Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His

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Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp

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Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

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<211> 672

<212> DNA

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<400> 54

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

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Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro Phe His

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Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala

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Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg Asp

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Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys

145 150 155 160

Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro

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Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

180 185 190

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 60

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg gagttcatac actcgtcgtc acacttgtgg tagaactcga agcagccatt 120

gcccagttcc ttcacgttgt ccctcagctg catcctcact ttgtcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc attctccatc agcaccagca gttcggcatt 240

gtaggtccac acatccagga agccgtcctc catcttcttg ttcaggttct ccagtctccg 300

ctccaggttg ctaaactcct tgcccacagc ctcaaactgg gtgttcatct tctcgatcac 360

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atagccagag ccctgatcat tgctgtggtg gtagccgtac cagccatcga ccattccctg 480

ccatcctccc tcgatgaatc cggcgatggc tccaaacagg cctctgctct cgatctgggg 540

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<210> 61

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 61

ctggtgctgg ccacaggact gagaaacgtg ccccagatcg agagcagagg cctgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg cagggaatgg tcgatggctg gtacggctac 120

caccacagca atgatcaggg ctctggctat gccgccgata aggagtctac ccagaaggcc 180

tttgacggca tcaccaacaa ggtgaacagc gtgatcgaga agatgaccta caatgccgaa 240

ctgctggtgc tgatggagaa tgagcggacc ctggacttcc acgacagcaa cgtgaagaac 300

ctgtacgaca aagtgaggat gcagctgagg gacaacgtga aggaactggg caatggctgc 360

ttcgagttct accacaagtg tgacgacgag tgtatgaact ccgtgaagaa cggcacctac 420

gactacccta agtacgagga ggagagcaag ctgaaccgga acgagatcaa g 471

<210> 62

<211> 157

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 62

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu Ser Arg

1 5 10 15

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly

20 25 30

Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln Gly Ser

35 40 45

Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp Gly Ile

50 55 60

Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

65 70 75 80

Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser

85 90 95

Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn

100 105 110

Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp

115 120 125

Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

130 135 140

Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

145 150 155

<210> 63

<211> 471

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 63

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg gagttcatac actcgtcgtc acacttgtgg tagaactcga agcagccatt 120

gcccagttcc ttcacgttgt ccctcagctg catcctcact ttgtcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc attctccatc agcaccagca gttcggcatt 240

gtaggtcatc ttctcgatca cgctgttcac cttgttggtg atgccgtcaa aggccttctg 300

ggtagactcc ttatcggcgg catagccaga gccctgatca ttgctgtggt ggtagccgta 360

ccagccatcg accattccct gccatcctcc ctcgatgaat ccggcgatgg ctccaaacag 420

gcctctgctc tcgatctggg gcacgtttct cagtcctgtg gccagcacca g 471

<210> 64

<211> 150

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 64

gccaccatgg aaaagatcgt gctgctgctg gccattgtga gcctggtgaa gagcgaccag 60

atctgcattg gctaccacgc caacaatagc acagagcagg tggacaccat catggaaaaa 120

aacgtgaccg tgacccacgc tcaggacatc 150

<210> 65

<211> 48

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 65

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

<210> 66

<211> 150

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 66

gatgtcctga gcgtgggtca cggtcacgtt tttttccatg atggtgtcca cctgctctgt 60

gctattgttg gcgtggtagc caatgcagat ctggtcgctc ttcaccaggc tcacaatggc 120

cagcagcagc acgatctttt ccatggtggc 150

<210> 67

<211> 681

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 67

aagtgccaga cacctatggg cgccatcaac agcagcatgc ccttccacaa catccaccct 60

ctgaccatcg gcgagtgccc taagtacgtg aagagcaaca gactggtgct ggccacaggc 120

ctgagaaata gcccccagcg ggagagcaga agaaagaaga ggggcctgtt tggagccatc 180

gccggcttta ttgaaggcgg ctggcaggga atggtggatg gctggtacgg ctaccaccac 240

agcaatgagc agggctctgg atatgccgcc gacaaagagt ctacccagaa ggccatcgac 300

ggcgtcacca acaaggtgaa cagcatcatc gacaagatga acacccagtt cgaggctgtg 360

ggcagagagt tcaacaacct ggaacggcgg atcgagaacc tgaacaagaa aatggaagat 420

ggcttcctgg atgtgtggac ctacaatgcc gaactgctgg tgctgatgga aaacgagcgg 480

accctggact tccacgacag caacgtgaag aacctgtacg acaaagtgcg gctgcagctg 540

agagacaacg ccaaagagct gggcaacggc tgcttcgagt tctaccacaa gtgcgacaac 600

gagtgcatgg aaagcatccg gaacggcacc tacaactacc ctcagtacag cgaggaagcc 660

aggctgaaga gggaagagat c 681

<210> 68

<211> 227

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 68

Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His

1 5 10 15

Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

20 25 30

Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu

35 40 45

Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile

50 55 60

Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His

65 70 75 80

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln

85 90 95

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys

100 105 110

Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu

115 120 125

Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp

130 135 140

Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg

145 150 155 160

Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val

165 170 175

Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe

180 185 190

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn

195 200 205

Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg

210 215 220

Glu Glu Ile

225

<210> 69

<211> 681

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 69

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtccacaca tccaggaagc catcttccat tttcttgttc aggttctcga tccgccgttc 300

caggttgttg aactctctgc ccacagcctc gaactgggtg ttcatcttgt cgatgatgct 360

gttcaccttg ttggtgacgc cgtcgatggc cttctgggta gactctttgt cggcggcata 420

tccagagccc tgctcattgc tgtggtggta gccgtaccag ccatccacca ttccctgcca 480

gccgccttca ataaagccgg cgatggctcc aaacaggccc ctcttctttc ttctgctctc 540

ccgctggggg ctatttctca ggcctgtggc cagcaccagt ctgttgctct tcacgtactt 600

agggcactcg ccgatggtca gagggtggat gttgtggaag ggcatgctgc tgttgatggc 660

gcccataggt gtctggcact t 681

<210> 70

<211> 582

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 70

aagtgccaga cacctatggg cgccatcaac agcagcatgc ccttccacaa catccaccct 60

ctgaccatcg gcgagtgccc taagtacgtg aagagcaaca gactggtgct ggccacaggc 120

ctgagaaata gcccccagcg ggagagcaga agaaagaaga ggggcctgtt tggagccatc 180

gccggcttta ttgaaggcgg ctggcaggga atggtggatg gctggtacgg ctaccaccac 240

agcaatgagc agggctctgg atatgccgcc gacaaagagt ctacccagaa ggccatcgac 300

ggcgtcacca acaaggtgaa cagcatcatc gacaagatga cctacaatgc cgaactgctg 360

gtgctgatgg aaaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 420

gacaaagtgc ggctgcagct gagagacaac gccaaagagc tgggcaacgg ctgcttcgag 480

ttctaccaca agtgcgacaa cgagtgcatg gaaagcatcc ggaacggcac ctacaactac 540

cctcagtaca gcgaggaagc caggctgaag agggaagaga tc 582

<210> 71

<211> 194

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 71

Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His

1 5 10 15

Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

20 25 30

Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu

35 40 45

Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile

50 55 60

Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His

65 70 75 80

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln

85 90 95

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys

100 105 110

Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr

115 120 125

Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg

130 135 140

Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu

145 150 155 160

Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly

165 170 175

Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu

180 185 190

Glu Ile

<210> 72

<211> 582

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 72

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtcatcttg tcgatgatgc tgttcacctt gttggtgacg ccgtcgatgg ccttctgggt 300

agactctttg tcggcggcat atccagagcc ctgctcattg ctgtggtggt agccgtacca 360

gccatccacc attccctgcc agccgccttc aataaagccg gcgatggctc caaacaggcc 420

cctcttcttt cttctgctct cccgctgggg gctatttctc aggcctgtgg ccagcaccag 480

tctgttgctc ttcacgtact tagggcactc gccgatggtc agagggtgga tgttgtggaa 540

gggcatgctg ctgttgatgg cgcccatagg tgtctggcac tt 582

<210> 73

<211> 579

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 73

ctggtgctgg ccacaggcct gagaaatagc ccccagcggg agagcagaag aaagaagagg 60

ggcctgtttg gagccatcgc cggctttatt gaaggcggct ggcagggaat ggtggatggc 120

tggtacggct accaccacag caatgagcag ggctctggat atgccgccga caaagagtct 180

acccagaagg ccatcgacgg cgtcaccaac aaggtgaaca gcatcatcga caagatgaac 240

acccagttcg aggctgtggg cagagagttc aacaacctgg aacggcggat cgagaacctg 300

aacaagaaaa tggaagatgg cttcctggat gtgtggacct acaatgccga actgctggtg 360

ctgatggaaa acgagcggac cctggacttc cacgacagca acgtgaagaa cctgtacgac 420

aaagtgcggc tgcagctgag agacaacgcc aaagagctgg gcaacggctg cttcgagttc 480

taccacaagt gcgacaacga gtgcatggaa agcatccgga acggcaccta caactaccct 540

cagtacagcg aggaagccag gctgaagagg gaagagatc 579

<210> 74

<211> 193

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 74

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu Ser Arg

1 5 10 15

Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala

50 55 60

Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn

65 70 75 80

Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg

85 90 95

Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

100 105 110

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu

115 120 125

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu

130 135 140

Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

145 150 155 160

Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr

165 170 175

Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu

180 185 190

Ile

<210> 75

<211> 579

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 75

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtccacaca tccaggaagc catcttccat tttcttgttc aggttctcga tccgccgttc 300

caggttgttg aactctctgc ccacagcctc gaactgggtg ttcatcttgt cgatgatgct 360

gttcaccttg ttggtgacgc cgtcgatggc cttctgggta gactctttgt cggcggcata 420

tccagagccc tgctcattgc tgtggtggta gccgtaccag ccatccacca ttccctgcca 480

gccgccttca ataaagccgg cgatggctcc aaacaggccc ctcttctttc ttctgctctc 540

ccgctggggg ctatttctca ggcctgtggc cagcaccag 579

<210> 76

<211> 480

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 76

ctggtgctgg ccacaggcct gagaaatagc ccccagcggg agagcagaag aaagaagagg 60

ggcctgtttg gagccatcgc cggctttatt gaaggcggct ggcagggaat ggtggatggc 120

tggtacggct accaccacag caatgagcag ggctctggat atgccgccga caaagagtct 180

acccagaagg ccatcgacgg cgtcaccaac aaggtgaaca gcatcatcga caagatgacc 240

tacaatgccg aactgctggt gctgatggaa aacgagcgga ccctggactt ccacgacagc 300

aacgtgaaga acctgtacga caaagtgcgg ctgcagctga gagacaacgc caaagagctg 360

ggcaacggct gcttcgagtt ctaccacaag tgcgacaacg agtgcatgga aagcatccgg 420

aacggcacct acaactaccc tcagtacagc gaggaagcca ggctgaagag ggaagagatc 480

<210> 77

<211> 160

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 77

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu Ser Arg

1 5 10 15

Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala

50 55 60

Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Thr

65 70 75 80

Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp

85 90 95

Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln

100 105 110

Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr

115 120 125

His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr

130 135 140

Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile

145 150 155 160

<210> 78

<211> 480

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 78

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtcatcttg tcgatgatgc tgttcacctt gttggtgacg ccgtcgatgg ccttctgggt 300

agactctttg tcggcggcat atccagagcc ctgctcattg ctgtggtggt agccgtacca 360

gccatccacc attccctgcc agccgccttc aataaagccg gcgatggctc caaacaggcc 420

cctcttcttt cttctgctct cccgctgggg gctatttctc aggcctgtgg ccagcaccag 480

<210> 79

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 79

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 80

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 80

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 81

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 81

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 82

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 82

atgaaggcaa tcctggtcgt cctgctgtat actttcgcta ccgctaacgc tgacaccctg 60

tgcatcggct atcacgctaa caactcaacc gacacagtgg atactgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactctgt gaatctgggc agtggactga ggctggcaac tggactgcga 180

aacatcccac agcgggaaac cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaacga gcagggatca 300

ggctacgccg ctgacctgaa gagcacacag aatgcaatcg atgaaattac taacatggtg 360

aattccgtca tcgagaaaat gggcagcgga ggctccggaa ccgacctggc agaactgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gacactgctg taccacgata gtaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaagtcc gatcacagct gaagaacaat gctaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcgacaa cacctgtatg gagagcgtga aaaatggcac atacgattat 600

cccaagtatt ccgaggaagc caaactgaac agagaggaaa ttgac 645

<210> 83

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 83

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

210 215

<210> 84

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 84

gtcaatttcc tctctgttca gtttggcttc ctcggaatac ttgggataat cgtatgtgcc 60

atttttcacg ctctccatac aggtgttgtc gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttagcattgt tcttcagctg tgatcggact ttctcataca gattcttcac 180

gttactatcg tggtacagca gtgtccactg gttcagcagc agcaccagca gttctgccag 240

gtcggttccg gagcctccgc tgcccatttt ctcgatgacg gaattcacca tgttagtaat 300

ttcatcgatt gcattctgtg tgctcttcag gtcagcggcg tagcctgatc cctgctcgtt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctctggtttc ccgctgtggg atgtttcgca gtccagttgc 480

cagcctcagt ccactgccca gattcacaga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

agtatccact gtgtcggttg agttgttagc gtgatagccg atgcacaggg tgtcagcgtt 600

agcggtagcg aaagtataca gcaggacgac caggattgcc ttcat 645

<210> 85

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 85

atggctatca tctacctgat cctgctgttc actgctgtgc ggggggacca gatttgcatc 60

ggctaccacg ctaataattc aactgagaag gtggatacta tcctggagcg gaacgtgacc 120

gtcacacacg ctaaagacat tggcagcgga ctggtgctgg caaccggact gaggaatgtc 180

ccacagatcg agtcccgcgg actgttcggc gctatcgcag ggtttattga aggcgggtgg 240

cagggaatga ttgatgggtg gtacggctac caccattcta acgaccaagg aagtggctac 300

gccgctgata aggagagtac tcagaaagcc ttcgatggca tcaccaacat ggtgaattca 360

gtcattgaga agatgggcag cggaggctcc ggaaccgacc tggcagaact gctggtgctg 420

ctgctgaatc agtggacact gctgtttcac gactctaacg tgaagaatct gtatgataaa 480

gtccggatgc agctgagaga caacgtgaag gagctgggga atggatgctt cgaattttac 540

cataagtgcg acgatgagtg tatgaacagt gtcaaaaatg gcacatacga ttatcccaag 600

tatgaggaag agtcaaaact gaaccgaaat gaaatcaag 639

<210> 86

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 86

Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

1 5 10 15

Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

20 25 30

Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

50 55 60

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

65 70 75 80

Gln Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

85 90 95

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

100 105 110

Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu Asn Gln

130 135 140

Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys

145 150 155 160

Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys

165 170 175

Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys

180 185 190

Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn

195 200 205

Arg Asn Glu Ile Lys

210

<210> 87

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 87

cttgatttca tttcggttca gttttgactc ttcctcatac ttgggataat cgtatgtgcc 60

atttttgaca ctgttcatac actcatcgtc gcacttatgg taaaattcga agcatccatt 120

ccccagctcc ttcacgttgt ctctcagctg catccggact ttatcataca gattcttcac 180

gttagagtcg tgaaacagca gtgtccactg attcagcagc agcaccagca gttctgccag 240

gtcggttccg gagcctccgc tgcccatctt ctcaatgact gaattcacca tgttggtgat 300

gccatcgaag gctttctgag tactctcctt atcagcggcg tagccacttc cttggtcgtt 360

agaatggtgg tagccgtacc acccatcaat cattccctgc cacccgcctt caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc cgcgggactc gatctgtggg acattcctca gtccggttgc 480

cagcaccagt ccgctgccaa tgtctttagc gtgtgtgacg gtcacgttcc gctccaggat 540

agtatccacc ttctcagttg aattattagc gtggtagccg atgcaaatct ggtccccccg 600

cacagcagtg aacagcagga tcaggtagat gatagccat 639

<210> 88

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 88

atggaaaaaa tcgtgctgct gctggctatc gtgtccctgg tgaagtccga ccagatctgt 60

attgggtatc atgctaacaa ctccacagaa caggtggata ctatcatgga gaagaacgtg 120

accgtcacac acgctcagga cattggatgg ggactggtcc tggcaaccgg actgagaaat 180

tcaccacaga gggaaagccg gagaaagaaa cgcggactgt tcggcgctat cgcagggttt 240

attgagggcg ggtggcaggg aatggtggat gggtggtacg gctaccacca ttccaacgaa 300

cagggatctg gctacgccgc tgataaggag tctactcaga aagctatcga cggcgtgacc 360

aacatggtca atagtatcat tgataagatg ggctctggag gcagtggaac cgacctggca 420

gagctgctgg tgctgctgct gaaccagtgg acactgctgt tccacgactc taacgtgaag 480

aatctgtatg ataaagtccg actgcagctg cgggacaacg ccaaggaact ggggaatgga 540

tgcttcgagt tctaccataa gtgcgataac gaatgtatgg agagcatccg aaacggcaca 600

tacaattatc cccagtattc cgaggaagct aggctgaaac gcgaggaaat t 651

<210> 89

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 89

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

Gly Trp Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg

50 55 60

Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

65 70 75 80

Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His

85 90 95

His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr

100 105 110

Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Met Val Asn Ser Ile Ile Asp

115 120 125

Lys Met Gly Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val

130 135 140

Leu Leu Leu Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys

145 150 155 160

Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu

165 170 175

Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys

180 185 190

Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu

195 200 205

Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile

210 215

<210> 90

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 90

aatttcctcg cgtttcagcc tagcttcctc ggaatactgg ggataattgt atgtgccgtt 60

tcggatgctc tccatacatt cgttatcgca cttatggtag aactcgaagc atccattccc 120

cagttccttg gcgttgtccc gcagctgcag tcggacttta tcatacagat tcttcacgtt 180

agagtcgtgg aacagcagtg tccactggtt cagcagcagc accagcagct ctgccaggtc 240

ggttccactg cctccagagc ccatcttatc aatgatacta ttgaccatgt tggtcacgcc 300

gtcgatagct ttctgagtag actccttatc agcggcgtag ccagatccct gttcgttgga 360

atggtggtag ccgtaccacc catccaccat tccctgccac ccgccctcaa taaaccctgc 420

gatagcgccg aacagtccgc gtttctttct ccggctttcc ctctgtggtg aatttctcag 480

tccggttgcc aggaccagtc cccatccaat gtcctgagcg tgtgtgacgg tcacgttctt 540

ctccatgata gtatccacct gttctgtgga gttgttagca tgatacccaa tacagatctg 600

gtcggacttc accagggaca cgatagccag cagcagcacg attttttcca t 651

<210> 91

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 91

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 92

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 92

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 93

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 93

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 94

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 94

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccattct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgatgc tgaaccagtt cactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 95

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 95

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 96

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 96

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtgaactg gttcagcatc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccagaat 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 97

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 97

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcaatgga acaggcggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 98

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 98

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Gly Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 99

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 99

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctccg cctgttccat tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 100

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 100

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 101

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 101

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 102

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 102

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctcca gtgccatttc cgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 103

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 103

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggcaacggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 104

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 104

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Asn Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 105

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 105

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg ttgcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 106

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 106

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 107

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 107

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 108

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 108

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 109

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 109

atgaaggcaa tcctggtcgt cctgctgtat actttcgcta ccgctaacgc tgacaccctg 60

tgcatcggct atcacgctaa caactcaacc gacacagtgg atactgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactctgt gaatctgggc agtggactga ggctggcaac tggactgcga 180

aacatcccac agcgggaaac cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaacga gcagggatca 300

ggctacgccg ctgacctgaa gagcacacag aatgcaatcg atgaaattac taacatggtg 360

aattccgtca tcgagaaaat gggcagcgga ggctccggaa ccgacctggc agaactgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gacactgctg taccacgata gtaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaagtcc gatcacagct gaagaacaat gctaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcgacaa cacctgtatg gagagcgtga aaaatggcac atacgattat 600

cccaagtatt ccgaggaagc caaactgaac agagaggaaa ttgactctgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtcaacaag gagatgcaga gctccaatct gtacatgtcc 720

atgtctagtt ggtgttatac ccactctctg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaacga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacatcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gactcagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagtaaaga tcatgctacc ttcaattttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gagccggaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 110

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 110

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 111

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 111

tgacccactt ttccggctct tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaaattgaag gtagcatgat ctttactctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgatgtcag 300

ctggacgggc acattgttct cgttcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agagagtggg tataacacca 420

actagacatg gacatgtaca gattggagct ctgcatctcc ttgttgacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cagagtcaat ttcctctctg ttcagtttgg cttcctcgga 540

atacttggga taatcgtatg tgccattttt cacgctctcc atacaggtgt tgtcgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttagca ttgttcttca gctgtgatcg 660

gactttctca tacagattct tcacgttact atcgtggtac agcagtgtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagttctg ccaggtcggt tccggagcct ccgctgccca ttttctcgat 780

gacggaattc accatgttag taatttcatc gattgcattc tgtgtgctct tcaggtcagc 840

ggcgtagcct gatccctgct cgttctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctctgg tttcccgctg 960

tgggatgttt cgcagtccag ttgccagcct cagtccactg cccagattca cagagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacagtatc cactgtgtcg gttgagttgt tagcgtgata 1080

gccgatgcac agggtgtcag cgttagcggt agcgaaagta tacagcagga cgaccaggat 1140

tgccttcat 1149

<210> 112

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 112

atggctatca tctacctgat cctgctgttc actgctgtgc ggggggacca gatttgcatc 60

ggctaccacg ctaataattc aactgagaag gtggatacta tcctggagcg gaacgtgacc 120

gtcacacacg ctaaagacat tggcagcgga ctggtgctgg caaccggact gaggaatgtc 180

ccacagatcg agtcccgcgg actgttcggc gctatcgcag ggtttattga aggcgggtgg 240

cagggaatga ttgatgggtg gtacggctac caccattcta acgaccaagg aagtggctac 300

gccgctgata aggagagtac tcagaaagcc ttcgatggca tcaccaacat ggtgaattca 360

gtcattgaga agatgggcag cggaggctcc ggaaccgacc tggcagaact gctggtgctg 420

ctgctgaatc agtggacact gctgtttcac gactctaacg tgaagaatct gtatgataaa 480

gtccggatgc agctgagaga caacgtgaag gagctgggga atggatgctt cgaattttac 540

cataagtgcg acgatgagtg tatgaacagt gtcaaaaatg gcacatacga ttatcccaag 600

tatgaggaag agtcaaaact gaaccgaaat gaaatcaaga gcgggggcga catcatcaag 660

ctgctgaacg agcaagtgaa taaggaaatg cagagctcca acctgtacat gtccatgtct 720

agttggtgtt atactcactc tctggatggc gccgggctgt tcctgtttga ccacgcagcc 780

gaagagtacg agcatgctaa gaaactgatc attttcctga acgaaaacaa cgtgcccgtc 840

cagctgacat caatcagcgc acctgagcat aagttcgaag gcctgactca gatctttcag 900

aaagcttacg agcacgaaca gcatatttcc gagtctatca acaatattgt ggaccacgcc 960

atcaagagca aagatcatgc taccttcaac tttctgcagt ggtacgtggc cgagcagcac 1020

gaagaggaag tcctgtttaa ggacatcctg gataaaatcg agctgattgg aaacgaaaat 1080

catggcctgt acctggcaga ccagtatgtg aagggcattg ccaagtccag aaaaagtggg 1140

tca 1143

<210> 113

<211> 381

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 113

Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

1 5 10 15

Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

20 25 30

Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

50 55 60

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

65 70 75 80

Gln Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

85 90 95

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

100 105 110

Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu Asn Gln

130 135 140

Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys

145 150 155 160

Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys

165 170 175

Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys

180 185 190

Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn

195 200 205

Arg Asn Glu Ile Lys Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu

210 215 220

Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser

225 230 235 240

Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe

245 250 255

Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe

260 265 270

Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro

275 280 285

Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu

290 295 300

His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala

305 310 315 320

Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val

325 330 335

Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys

340 345 350

Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln

355 360 365

Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 114

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 114

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tggtctgcca ggtacaggcc 60

atgattttcg tttccaatca gctcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacttcctc 120

ttcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

gatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ctcggaaata tgctgttcgt gctcgtaagc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccttcgaa cttatgctca ggtgcgctga ttgatgtcag 300

ctggacgggc acgttgtttt cgttcaggaa aatgatcagt ttcttagcat gctcgtactc 360

ttcggctgcg tggtcaaaca ggaacagccc ggcgccatcc agagagtgag tataacacca 420

actagacatg gacatgtaca ggttggagct ctgcatttcc ttattcactt gctcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cgctcttgat ttcatttcgg ttcagttttg actcttcctc 540

atacttggga taatcgtatg tgccattttt gacactgttc atacactcat cgtcgcactt 600

atggtaaaat tcgaagcatc cattccccag ctccttcacg ttgtctctca gctgcatccg 660

gactttatca tacagattct tcacgttaga gtcgtgaaac agcagtgtcc actgattcag 720

cagcagcacc agcagttctg ccaggtcggt tccggagcct ccgctgccca tcttctcaat 780

gactgaattc accatgttgg tgatgccatc gaaggctttc tgagtactct ccttatcagc 840

ggcgtagcca cttccttggt cgttagaatg gtggtagccg taccacccat caatcattcc 900

ctgccacccg ccttcaataa accctgcgat agcgccgaac agtccgcggg actcgatctg 960

tgggacattc ctcagtccgg ttgccagcac cagtccgctg ccaatgtctt tagcgtgtgt 1020

gacggtcacg ttccgctcca ggatagtatc caccttctca gttgaattat tagcgtggta 1080

gccgatgcaa atctggtccc cccgcacagc agtgaacagc aggatcaggt agatgatagc 1140

cat 1143

<210> 115

<211> 1158

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 115

atggaaaaaa tcgtgctgct gctggctatc gtgtccctgg tgaagtccga ccagatctgt 60

attgggtatc atgctaacaa ctccacagaa caggtggata ctatcatgga gaagaacgtg 120

accgtcacac acgctcagga cattggatgg ggactggtcc tggcaaccgg actgagaaat 180

tcaccacaga gggaaagccg gagaaagaaa cgcggactgt tcggcgctat cgcagggttt 240

attgagggcg ggtggcaggg aatggtggat gggtggtacg gctaccacca ttccaacgaa 300

cagggatctg gctacgccgc tgataaggag tctactcaga aagctatcga cggcgtgacc 360

aacatggtca atagtatcat tgataagatg ggctctggag gcagtggaac cgacctggca 420

gagctgctgg tgctgctgct gaaccagtgg acactgctgt tccacgactc taacgtgaag 480

aatctgtatg ataaagtccg actgcagctg cgggacaacg ccaaggaact ggggaatgga 540

tgcttcgagt tctaccataa gtgcgataac gaatgtatgg agagcatccg aaacggcaca 600

tacaattatc cccagtattc cgaggaagct aggctgaaac gcgaggaaat tagctccggg 660

ggagacatca ttaagctgct gaacgaacag gtgaacaagg agatgcagtc tagtaacctg 720

tacatgagta tgtcaagctg gtgttatact cactcactgg atggcgccgg gctgttcctg 780

tttgaccacg cagccgagga atacgaacat gctaagaaac tgatcatttt cctgaatgag 840

aacaatgtgc ccgtccagct gacatccatc tctgcacctg aacataagtt cgagggcctg 900

actcagatct ttcagaaagc ctacgaacac gagcagcata ttagtgagtc aatcaacaat 960

attgtggacc acgccatcaa gagcaaagat catgctacct tcaattttct gcagtggtac 1020

gtggccgagc agcacgagga agaggtcctg tttaaggaca tcctggataa aatcgaactg 1080

attggaaacg agaatcatgg cctgtacctg gcagaccagt atgtgaaggg cattgccaag 1140

tccaggaaaa gcgggtcc 1158

<210> 116

<211> 386

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 116

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

Gly Trp Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg

50 55 60

Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

65 70 75 80

Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His

85 90 95

His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr

100 105 110

Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Met Val Asn Ser Ile Ile Asp

115 120 125

Lys Met Gly Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val

130 135 140

Leu Leu Leu Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys

145 150 155 160

Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu

165 170 175

Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys

180 185 190

Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu

195 200 205

Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Ser Gly Gly Asp Ile Ile

210 215 220

Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu

225 230 235 240

Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala

245 250 255

Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys

260 265 270

Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr

275 280 285

Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe

290 295 300

Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn

305 310 315 320

Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe

325 330 335

Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys

340 345 350

Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu

355 360 365

Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser

370 375 380

Gly Ser

385

<210> 117

<211> 1158

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 117

ggacccgctt ttcctggact tggcaatgcc cttcacatac tggtctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcttc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaaattgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

gatggcgtgg tccacaatat tgttgattga ctcactaata tgctgctcgt gttcgtaggc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccctcgaa cttatgttca ggtgcagaga tggatgtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttcttagcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tggtcaaaca ggaacagccc ggcgccatcc agtgagtgag tataacacca 420

gcttgacata ctcatgtaca ggttactaga ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttaatg atgtctcccc cggagctaat ttcctcgcgt ttcagcctag cttcctcgga 540

atactgggga taattgtatg tgccgtttcg gatgctctcc atacattcgt tatcgcactt 600

atggtagaac tcgaagcatc cattccccag ttccttggcg ttgtcccgca gctgcagtcg 660

gactttatca tacagattct tcacgttaga gtcgtggaac agcagtgtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctctg ccaggtcggt tccactgcct ccagagccca tcttatcaat 780

gatactattg accatgttgg tcacgccgtc gatagctttc tgagtagact ccttatcagc 840

ggcgtagcca gatccctgtt cgttggaatg gtggtagccg taccacccat ccaccattcc 900

ctgccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtccgcgtt tctttctccg 960

gctttccctc tgtggtgaat ttctcagtcc ggttgccagg accagtcccc atccaatgtc 1020

ctgagcgtgt gtgacggtca cgttcttctc catgatagta tccacctgtt ctgtggagtt 1080

gttagcatga tacccaatac agatctggtc ggacttcacc agggacacga tagccagcag 1140

cagcacgatt ttttccat 1158

<210> 118

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 118

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 119

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 119

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 120

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 120

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 121

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 121

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccattct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgatgc tgaaccagtt cactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 122

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 122

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 123

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 123

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtga actggttcag 720

catcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca gaatggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 124

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 124

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcaatgga acaggcggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 125

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 125

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Gly Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 126

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 126

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccgcctgtt ccattgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 127

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 127

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 128

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 128

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 129

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 129

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

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gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

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tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

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gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 130

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 130

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

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ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggcaacggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 131

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 131

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Asn Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 132

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 132

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccgttgcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 133

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 133

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile

20 25 30

Trp

<210> 134

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 134

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn

1 5 10

<210> 135

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 135

Asn Lys Leu Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys

1 5 10

<210> 136

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 136

Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 137

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 137

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys

1 5 10 15

Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile

20 25 30

Trp

<210> 138

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 138

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe

1 5 10

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 139

Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu

1 5 10

<210> 140

<211> 13

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 140

Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 141

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 141

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val

20 25 30

Trp

<210> 142

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 142

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe

1 5 10

<210> 143

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 143

Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu Asn

1 5 10

<210> 144

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 144

Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

1 5 10

<210> 145

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 145

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val

20 25 30

Trp

<210> 146

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 146

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe

1 5 10

<210> 147

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 147

Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn

1 5 10

<210> 148

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 148

Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

1 5 10

<210> 149

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 149

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Leu Glu

50

<210> 150

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 150

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Glu

20

<210> 151

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 151

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Leu Glu

50

<210> 152

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 152

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Glu

20

<210> 153

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 153

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Met Glu

50

<210> 154

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 154

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Met Glu

20

<210> 155

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 155

Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val

1 5 10 15

Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Met Glu

50

<210> 156

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 156

Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Met Glu

20

<210> 157

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 157

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 158

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 158

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Met

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 159

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 159

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 160

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 160

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 161

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 161

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Met

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 162

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 162

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcat 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 163

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 163

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatcgtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 164

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 164

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 165

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 165

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttgatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacga tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 166

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 166

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatcgtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 167

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 167

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 168

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 168

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttgat 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc acgatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 169

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 169

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 170

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 170

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 171

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 171

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttgatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca ggttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 172

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 172

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 173

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 173

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 174

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 174

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

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ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

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ggccttcat 1149

<210> 175

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 175

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

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gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

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cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 176

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 176

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 177

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 177

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

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catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

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<210> 178

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 178

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

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ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 179

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 179

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

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His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 180

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 180

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

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ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

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gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcag 720

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tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

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gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 181

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 181

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

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gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 182

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 182

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

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100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 183

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 183

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

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catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 184

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 184

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgaaca gcaccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 185

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 185

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Thr Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 186

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 186

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggtgct gttcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctggg tattgttatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 187

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 187

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 188

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 188

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 189

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 189

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctcca gtgccatttc cgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgggtatt 360

gttatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 190

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 190

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgaaca gcaccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtcaacc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 191

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 191

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Thr Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Asn Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 192

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 192

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

gttgacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggtgct gttcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctggg tattgttatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 193

<211> 465

<212> DNA

<213> Aquifex aeolicus

<400> 193

atgcaaattt acgaagggaa actaaccgct gaagggctga ggttcggtat agtggcttcc 60

aggttcaacc acgcactcgt ggatagacta gttgagggag ctatagactg catagtaaga 120

cacgggggaa gggaagaaga cataacgctc gttagagtgc cgggctcctg ggaaattccc 180

gtggctgcgg gagagcttgc gagaaaagag gacatagacg ctgtgatagc gataggagtt 240

ctaataaggg gggctactcc ccactttgat tacatagcct ctgaagtgtc aaaagggctt 300

gcgaaccttt ccttagaact gagaaaaccc ataaccttcg gtgttataac tgcggacacc 360

ttggagcagg cgatagaaag ggcgggaaca aagcacggga ataagggctg ggaagctgca 420

ctttccgcaa tagaaatggc aaacttattt aagagtctga gatga 465

<210> 194

<211> 154

<212> PRT

<213> Aquifex aeolicus

<400> 194

Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala Glu Gly Leu Arg Phe Gly

1 5 10 15

Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu Val Asp Arg Leu Val Glu

20 25 30

Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly Gly Arg Glu Glu Asp Ile

35 40 45

Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu Ile Pro Val Ala Ala Gly

50 55 60

Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala Val Ile Ala Ile Gly Val

65 70 75 80

Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala Ser Glu Val

85 90 95

Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu Leu Arg Lys Pro Ile Thr

100 105 110

Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile Glu Arg Ala

115 120 125

Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu Ala Ala Leu Ser Ala Ile

130 135 140

Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

145 150

<210> 195

<211> 465

<212> DNA

<213> Aquifex aeolicus

<400> 195

tcatctcaga ctcttaaata agtttgccat ttctattgcg gaaagtgcag cttcccagcc 60

cttattcccg tgctttgttc ccgccctttc tatcgcctgc tccaaggtgt ccgcagttat 120

aacaccgaag gttatgggtt ttctcagttc taaggaaagg ttcgcaagcc cttttgacac 180

ttcagaggct atgtaatcaa agtggggagt agcccccctt attagaactc ctatcgctat 240

cacagcgtct atgtcctctt ttctcgcaag ctctcccgca gccacgggaa tttcccagga 300

gcccggcact ctaacgagcg ttatgtcttc ttcccttccc ccgtgtctta ctatgcagtc 360

tatagctccc tcaactagtc tatccacgag tgcgtggttg aacctggaag ccactatacc 420

gaacctcagc ccttcagcgg ttagtttccc ttcgtaaatt tgcat 465

<210> 196

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 196

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggag gc 642

<210> 197

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 197

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly

210

<210> 198

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 198

gcctccctcg cggttcagct tgctttcctc gctgtacttg gggtagtcgt aggtgccgtt 60

cttcacgctt tccatgcact cgttgttgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

gatctctttg gcgttgttct tcagctggga cttcactttc tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt cagcagcagg accagcagtt cagccagatc 240

ggtgccgctg ccgccggagc ccatcttctc gatcacgctg ttcaccatgt tggtgatgcc 300

gttgatggcg ttctgggtgg acttctggtc ggcggcgtag ccgctgccct gctcgttctg 360

gtggtggtag ccgtaccacc cgtccaccat gccggtccag ccgccctcga taaagccggc 420

aatggcgccg aacaggcccc gtgtctctct ctgggggatg ttccgcaggc ctgtcaccat 480

ccgcaggccg ctgcccaggt tcacgctgtg ggtcacggtc acgttctttt ccagcacggt 540

atccacggtg tcggtgctgt tgttggcgtg gtagccgatg cagatggtgt cggcgtaggt 600

ggcggtgaag gtgcacagga gcaccagcag cttggccttc at 642

<210> 199

<211> 1104

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 199

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggag gcatgcaaat ctacgagggc 660

aagctgacag ccgagggcct gagattcggc atcgtggcca gccggttcaa ccacgccctg 720

gtggacagac tggtggaagg cgccatcgac tgcatcgtgc ggcacggcgg cagagaagag 780

gacatcaccc tggtccgcgt gcccggcagc tgggaaattc ctgtggctgc cggcgagctg 840

gcccggaaag aggatatcga cgccgtcatc gccatcggcg tgctgatcag aggcgccacc 900

ccccacttcg actatatcgc cagcgaggtg tccaagggcc tggccaacct gagcctggaa 960

ctgcggaagc ccatcacctt cggagtgatc accgccgaca ccctggaaca ggccatcgag 1020

agagccggca ccaagcacgg caacaaggga tgggaagccg ccctgagcgc catcgagatg 1080

gccaatctgt tcaagagcct gcgc 1104

<210> 200

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 200

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala

210 215 220

Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu

225 230 235 240

Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly

245 250 255

Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu

260 265 270

Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala

275 280 285

Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp

290 295 300

Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu

305 310 315 320

Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu

325 330 335

Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu

340 345 350

Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360 365

<210> 201

<211> 1104

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 201

gcgcaggctc ttgaacagat tggccatctc gatggcgctc agggcggctt cccatccctt 60

gttgccgtgc ttggtgccgg ctctctcgat ggcctgttcc agggtgtcgg cggtgatcac 120

tccgaaggtg atgggcttcc gcagttccag gctcaggttg gccaggccct tggacacctc 180

gctggcgata tagtcgaagt ggggggtggc gcctctgatc agcacgccga tggcgatgac 240

ggcgtcgata tcctctttcc gggccagctc gccggcagcc acaggaattt cccagctgcc 300

gggcacgcgg accagggtga tgtcctcttc tctgccgccg tgccgcacga tgcagtcgat 360

ggcgccttcc accagtctgt ccaccagggc gtggttgaac cggctggcca cgatgccgaa 420

tctcaggccc tcggctgtca gcttgccctc gtagatttgc atgcctccct cgcggttcag 480

cttgctttcc tcgctgtact tggggtagtc gtaggtgccg ttcttcacgc tttccatgca 540

ctcgttgttg cacttgtggt agaactcgaa gcagccgttg ccgatctctt tggcgttgtt 600

cttcagctgg gacttcactt tctcgtacag gttcttcacg ttgctgtcgt ggaagtccag 660

ggtccgctcg ttcagcagca ggaccagcag ttcagccaga tcggtgccgc tgccgccgga 720

gcccatcttc tcgatcacgc tgttcaccat gttggtgatg ccgttgatgg cgttctgggt 780

ggacttctgg tcggcggcgt agccgctgcc ctgctcgttc tggtggtggt agccgtacca 840

cccgtccacc atgccggtcc agccgccctc gataaagccg gcaatggcgc cgaacaggcc 900

ccgtgtctct ctctggggga tgttccgcag gcctgtcacc atccgcaggc cgctgcccag 960

gttcacgctg tgggtcacgg tcacgttctt ttccagcacg gtatccacgg tgtcggtgct 1020

gttgttggcg tggtagccga tgcagatggt gtcggcgtag gtggcggtga aggtgcacag 1080

gagcaccagc agcttggcct tcat 1104

<210> 202

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 202

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggaa gcggc 645

<210> 203

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 203

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly

210 215

<210> 204

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 204

gccgcttccc tcgcggttca gcttgctttc ctcgctgtac ttggggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctttccatgc actcgttgtt gcacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

gccgatctct ttggcgttgt tcttcagctg ggacttcact ttctcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc gttcagcagc aggaccagca gttcagccag 240

atcggtgccg ctgccgccgg agcccatctt ctcgatcacg ctgttcacca tgttggtgat 300

gccgttgatg gcgttctggg tggacttctg gtcggcggcg tagccgctgc cctgctcgtt 360

ctggtggtgg tagccgtacc acccgtccac catgccggtc cagccgccct cgataaagcc 420

ggcaatggcg ccgaacaggc cccgtgtctc tctctggggg atgttccgca ggcctgtcac 480

catccgcagg ccgctgccca ggttcacgct gtgggtcacg gtcacgttct tttccagcac 540

ggtatccacg gtgtcggtgc tgttgttggc gtggtagccg atgcagatgg tgtcggcgta 600

ggtggcggtg aaggtgcaca ggagcaccag cagcttggcc ttcat 645

<210> 205

<211> 1107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 205

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggaa gcggcatgca aatctacgag 660

ggcaagctga cagccgaggg cctgagattc ggcatcgtgg ccagccggtt caaccacgcc 720

ctggtggaca gactggtgga aggcgccatc gactgcatcg tgcggcacgg cggcagagaa 780

gaggacatca ccctggtccg cgtgcccggc agctgggaaa ttcctgtggc tgccggcgag 840

ctggcccgga aagaggatat cgacgccgtc atcgccatcg gcgtgctgat cagaggcgcc 900

accccccact tcgactatat cgccagcgag gtgtccaagg gcctggccaa cctgagcctg 960

gaactgcgga agcccatcac cttcggagtg atcaccgccg acaccctgga acaggccatc 1020

gagagagccg gcaccaagca cggcaacaag ggatgggaag ccgccctgag cgccatcgag 1080

atggccaatc tgttcaagag cctgcgc 1107

<210> 206

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 206

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr

210 215 220

Ala Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala

225 230 235 240

Leu Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His

245 250 255

Gly Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp

260 265 270

Glu Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp

275 280 285

Ala Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe

290 295 300

Asp Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu

305 310 315 320

Glu Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu

325 330 335

Glu Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp

340 345 350

Glu Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu

355 360 365

Arg

<210> 207

<211> 1107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 207

gcgcaggctc ttgaacagat tggccatctc gatggcgctc agggcggctt cccatccctt 60

gttgccgtgc ttggtgccgg ctctctcgat ggcctgttcc agggtgtcgg cggtgatcac 120

tccgaaggtg atgggcttcc gcagttccag gctcaggttg gccaggccct tggacacctc 180

gctggcgata tagtcgaagt ggggggtggc gcctctgatc agcacgccga tggcgatgac 240

ggcgtcgata tcctctttcc gggccagctc gccggcagcc acaggaattt cccagctgcc 300

gggcacgcgg accagggtga tgtcctcttc tctgccgccg tgccgcacga tgcagtcgat 360

ggcgccttcc accagtctgt ccaccagggc gtggttgaac cggctggcca cgatgccgaa 420

tctcaggccc tcggctgtca gcttgccctc gtagatttgc atgccgcttc cctcgcggtt 480

cagcttgctt tcctcgctgt acttggggta gtcgtaggtg ccgttcttca cgctttccat 540

gcactcgttg ttgcacttgt ggtagaactc gaagcagccg ttgccgatct ctttggcgtt 600

gttcttcagc tgggacttca ctttctcgta caggttcttc acgttgctgt cgtggaagtc 660

cagggtccgc tcgttcagca gcaggaccag cagttcagcc agatcggtgc cgctgccgcc 720

ggagcccatc ttctcgatca cgctgttcac catgttggtg atgccgttga tggcgttctg 780

ggtggacttc tggtcggcgg cgtagccgct gccctgctcg ttctggtggt ggtagccgta 840

ccacccgtcc accatgccgg tccagccgcc ctcgataaag ccggcaatgg cgccgaacag 900

gccccgtgtc tctctctggg ggatgttccg caggcctgtc accatccgca ggccgctgcc 960

caggttcacg ctgtgggtca cggtcacgtt cttttccagc acggtatcca cggtgtcggt 1020

gctgttgttg gcgtggtagc cgatgcagat ggtgtcggcg taggtggcgg tgaaggtgca 1080

caggagcacc agcagcttgg ccttcat 1107

<210> 208

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 208

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccaa gcatccagag cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 209

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 209

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 210

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 210

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctctgctctg gatgcttggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 211

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 211

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccaa gcatccagag cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 212

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 212

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 213

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 213

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctctgc tctggatgct 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 214

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 214

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 215

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 215

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 216

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 216

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa catacaacgc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 217

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 217

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 218

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 218

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcagcagc agcaccagca gctcagcgtt 240

gtatgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 219

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 219

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa catacaacgc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 220

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 220

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 221

<211> 1151

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 221

rctgacccac tttttctgga cttggcaatg cccttcacat actgatctgc caggtacagg 60

ccatgattct cgtttccaat cagttcgatt ttatccagga tgtccttaaa caggacctcc 120

tcctcgtgct gctcggccac gtaccactgc agaaagttga aggtagcatg atctttgctc 180

ttaatggcgt ggtccacaat attgttgata gattcggaaa tatgctgctc gtgttcgtaa 240

gctttctgaa agatctgggt caggccctcg aacttatgtt caggggcgct gattgaagtc 300

agctggacgg gcacattgtt ctcattcagg aaaatgatca gtttctttgc atgttcgtat 360

tcctcggctg cgtgatcaaa caggaacagc ccagcgccgt ccagtgagtg tgtataacac 420

caactagaca tactcatgta caggttggag ctctgcatct ccttgttcac ctgttcgttc 480

agcagcttga tgatgtcgcc cccactgtca attttctctc gattcagctt actctcttca 540

gaatatttgg gatagtcgta agtgccgttc ttcacagact ccatacattc attgttgcac 600

ttatggtaaa actcgaagca tccattcccg atttctttgg cattgttctt cagctgggat 660

ttgaccttct catacagatt cttcacgttg ctatcgtgga aatccagagt ccgctcgttc 720

agcagcagca ccagcagctc agcgttgtat gttccggagc ctccgctgcc cattttttcg 780

atgacagaat tcaccatgtt agtaatgcca ttgattgcgt tctgtgtaga cttctgatca 840

gcggcgtagc cgctgccctg ctcattctga tggtggtagc cgtaccaccc gtccaccatt 900

cctgtccacc cgccctcaat aaaccctgcg atagcgccga acagtcctct tgtttcccgc 960

tgtgggatgt tgcgcagtcc ggtgaccatc ctcagtccgc tgcccagatt cactgagtgg 1020

gtgacagtca cgttcttctc caggacggta tccactgtgt cggtggagtt gtttgcgtga 1080

tagccgatgc agatagtgtc agcgtaggtt gcggtaaaag tacacagcag gaccagcagt 1140

ttggccttca t 1151

<210> 222

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 222

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 223

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 223

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 224

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 224

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 225

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 225

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 226

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 227

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<210> 228

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 228

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<210> 229

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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275 280 285

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gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

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<210> 235

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210 215

<210> 236

<211> 645

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 236

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<210> 237

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 237

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca ccaactcaac taatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

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cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

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gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 238

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 238

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1 5 10 15

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100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

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Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

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Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

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305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

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Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

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<210> 239

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<210> 240

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 240

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<212> PRT

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<220>

<223> 合成

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210 215

<210> 243

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 243

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 244

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<223> 合成

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 248

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210 215

<210> 249

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 249

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Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

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Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

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Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 250

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 250

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

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65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 251

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 251

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Thr Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Asn Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 252

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 252

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly

210

<210> 253

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 253

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala

210 215 220

Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu

225 230 235 240

Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly

245 250 255

Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu

260 265 270

Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala

275 280 285

Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp

290 295 300

Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu

305 310 315 320

Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu

325 330 335

Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu

340 345 350

Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360 365

<210> 254

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 254

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly

210 215

<210> 255

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 255

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr

210 215 220

Ala Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala

225 230 235 240

Leu Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His

245 250 255

Gly Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp

260 265 270

Glu Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp

275 280 285

Ala Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe

290 295 300

Asp Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu

305 310 315 320

Glu Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu

325 330 335

Glu Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp

340 345 350

Glu Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu

355 360 365

Arg

<210> 256

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 256

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Gly Gly

210

<210> 257

<211> 364

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 257

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Gly Gly Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala Glu Gly Leu Arg

210 215 220

Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu Val Asp Arg Leu

225 230 235 240

Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly Gly Arg Glu Glu

245 250 255

Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu Ile Pro Val Ala

260 265 270

Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala Val Ile Ala Ile

275 280 285

Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala Ser

290 295 300

Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu Leu Arg Lys Pro

305 310 315 320

Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile Glu

325 330 335

Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu Ala Ala Leu Ser

340 345 350

Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360

<210> 258

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 258

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Gly Ser Gly

210

<210> 259

<211> 365

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 259

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Gly Ser Gly Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala Glu Gly Leu

210 215 220

Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu Val Asp Arg

225 230 235 240

Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly Gly Arg Glu

245 250 255

Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu Ile Pro Val

260 265 270

Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala Val Ile Ala

275 280 285

Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala

290 295 300

Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu Leu Arg Lys

305 310 315 320

Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile

325 330 335

Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu Ala Ala Leu

340 345 350

Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360 365

<210> 260

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(645)

<400> 260

atg aag gcc aaa ctg ctg gtc ctg ctg tgt act ttt acc gca acc tac 48

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

gct gac act atc tgc atc ggc tat cac gca aac aac tcc acc gac aca 96

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat acc gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tca gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agc gga ctg agg atg gtc acc gga ctg cgc aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa aca aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aat 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag ggc agc ggc tac gcc gct gat cag aag tct aca cag aac gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc aat ggc att act aac atg gtg aat tct gtc atc gaa aaa atg ggc 384

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

agc gga ggc tcc gga aca gac ctg gct gag ctg ctg gtg ctg ctg ctg 432

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

aac cag tgg act ctg ctg ttc cac gat agc aac gtg aag aat ctg tat 480

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

gag aag gtc aaa tcc cag ctg aag aac aat gcc aaa gaa atc ggg aat 528

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

gga tgc ttc gag ttt tac cat aag tgc aac aat gaa tgt atg gag tct 576

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

gtg aag aac ggc act tac gac tat ccc aaa tat tct gaa gag agt aag 624

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

ctg aat cga gag aaa att gac 645

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 261

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成構(gòu)建體

<400> 261

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 262

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 262

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 263

<211> 1155

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1155)

<400> 263

atg aag gcc aaa ctg ctg gtc ctg ctg tgt act ttt acc gca acc tac 48

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

gct gac act atc tgc atc ggc tat cac gca aac aac tcc acc gac aca 96

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat acc gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tca gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agc gga ctg agg atg gtc acc gga ctg cgc aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa aca aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aat 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag ggc agc ggc tac gcc gct gat cag aag tct aca cag aac gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc aat ggc att act aac atg gtg aat tct gtc atc gaa aaa atg ggc 384

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125