本申請要求2014年6月20日提交的美國臨時(shí)申請62/015,321的優(yōu)先權(quán)，將其全部內(nèi)容通過引用的方式并入本申請。以ASCII文本文件提交序列表將以ASCII文本文件提交的以下內(nèi)容的全部通過引用的方式并入本申請：計(jì)算機(jī)可讀格式(CRF)的序列表(文件名:606592001040SEQLIST.TXT,記錄日期:2015年6月16日,大小:44KB)。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為癌癥治療的領(lǐng)域，且提供針對經(jīng)抗體-藥物綴合物(ADC)形式遞送對癌細(xì)胞特異地具有細(xì)胞毒性藥物的效果及特異性。
背景技術(shù)：
：抗體-藥物綴合物(ADC)為一類將單克隆抗體(mAb)的特異性與細(xì)胞毒性分子的效力組合的治療劑。ADC的使用通過綴合細(xì)胞毒性劑賦予抗體的癌癥殺滅活性，同時(shí)靶標(biāo)特異性遞送避免由暴露于游離毒性劑而引起的全身毒性。到2014年5月為止，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)了兩種ADC用于治療人類癌癥。Adcetris(貝倫妥單抗維多汀(Brentuximabvedotin)或SGN-35)為一種與細(xì)胞毒性劑MMAE綴合的抗CD30抗體，其經(jīng)設(shè)計(jì)以治療CD30陽性復(fù)發(fā)性淋巴瘤。Kadcyla(T-DM1)為一種與細(xì)胞毒性劑DM1綴合的抗HER2抗體，其經(jīng)設(shè)計(jì)以治療HER2陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌。連接子技術(shù)顯著地影響ADC效力、特異性及安全性。酶不穩(wěn)定連接子利用細(xì)胞內(nèi)部與外部的蛋白酶的差異活性來達(dá)成對藥物釋放的控制。藥物可經(jīng)由肽鍵綴合至抗體，且僅可通過細(xì)胞內(nèi)部存在的溶酶體蛋白酶的作用且在某些腫瘤類型中以高水平特異地分裂(Koblinski等人(2000)Clin.Chem.Acta291：113-135)。這確保連接子于血流中的穩(wěn)定性，以限制對健康組織的損傷。然而，一些酶不穩(wěn)定連接子的增加的疏水性可導(dǎo)致ADC的聚集，尤其是在利用強(qiáng)疏水性藥物的情況下。親水性自消耗連接子可經(jīng)由特定酶不穩(wěn)定設(shè)計(jì)而提供較好血清穩(wěn)定性，以及經(jīng)由異源癌細(xì)胞上的旁觀者效應(yīng)(bystandereffect)而達(dá)成較好功效。葉酸受體α(葉酸受體α；FRA)為一種膜蛋白質(zhì)，其以高親和力結(jié)合葉酸且經(jīng)由受體介導(dǎo)的胞吞作用介導(dǎo)葉酸的細(xì)胞攝取(Leamon等人，1991,PNAS88：5572-5576)。在90％上皮卵巢癌以及包括子宮內(nèi)膜癌、腎癌、肺癌、間皮瘤、乳腺癌、腦癌及骨髓白血病的眾多其它癌癥中發(fā)現(xiàn)FRA的過表達(dá)，而大多數(shù)正常組織表達(dá)低水平至可忽略水平(Coney等人，1991,CancerRes.51：6125-6132)。FRA于癌癥中對比正常組織中的差異表達(dá)分布保證基于Ab的治療劑的開發(fā)。鼠類單克隆抗-FRA抗體的人源化形式經(jīng)證實(shí)在臨床前研究中為有效的(Ebel等人，2007,CancerImmun7:1-8)，且當(dāng)前正在具有表達(dá)FRA的腫瘤的患者中受評估(Kalli等人，2007,CurrOpinInvestig8:1067-1073)。此外，F(xiàn)RA介導(dǎo)胞吞作用的能力使其成為對癌癥靶向ADC的開發(fā)有吸引力的候選物。迄今為止，各種藥物綴合物及抗-FRA抗體正在臨床試驗(yàn)中受測試，且具有已證明的安全性(Xia等人，2010,JMedChem.53:6811-6824；Zacchetti等人，2009,NuclMedBiol.36:759-770)。對具有改善功效的抗癌癥治療劑存在需要，所述抗癌癥治療劑可經(jīng)由抗體-藥物綴合物(ADC)形式將細(xì)胞毒性藥物遞送至癌細(xì)胞。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本公開化合物包含藥物部分；靶向部分，其為能夠靶向選定細(xì)胞群體(諸如表達(dá)葉酸受體α(FRA)的細(xì)胞群體)的抗體；以及連接子，其含有?；鶈卧?、用于在藥物部分與靶向部分(諸如抗-FRA抗體)之間提供距離的任選間隔基單元、可在適當(dāng)條件下為可分裂的肽連接子、親水性自消耗連接子以及任選第二自消耗間隔基或環(huán)化自消除連接子。本公開提供式(I)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。本公開提供式(II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。本公開提供式(Ia)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。本公開提供式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，p為1至4。在某些實(shí)施方案中，L1為鍵。在某些實(shí)施方案中，L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子。在某些實(shí)施方案中，L1為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實(shí)施方案中，L1選自其中n為1或2。在某些實(shí)施方案中，L1選自在上述化合物的某些實(shí)施方案中，L2為鍵。在某些實(shí)施方案中，L2為第二自消耗連接子。在某些實(shí)施方案中，L2為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實(shí)施方案中，L2選自其中n為1或2。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，L3為1至10個(gè)氨基酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為2至4個(gè)氨基酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為包含至少一個(gè)賴氨酸或精氨酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：賴氨酸、D-賴氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸及谷氨酰胺。在某些實(shí)施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及酪氨酸。在某些實(shí)施方案中，L3為選自以下的二肽單元：纈氨酸-瓜氨酸、脯氨酸-賴氨酸、甲硫氨酸-D-賴氨酸、天冬酰胺-D-賴氨酸、異亮氨酸-脯氨酸、苯丙氨酸-賴氨酸及纈氨酸-賴氨酸。在某些實(shí)施方案中，L3為纈氨酸-瓜氨酸。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，L4為鍵。在某些實(shí)施方案中，L4為間隔基。在某些實(shí)施方案中，所述間隔基為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)、L4a-C(O)-NH、L4a-S(O)2或L4a-S(O)2-NH，其中每個(gè)L4a獨(dú)立為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基或聚胺。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚乙二醇。在某些實(shí)施方案中，所述間隔基具有式-CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-，其中m為0至30的整數(shù)。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為亞烷基。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，A選自其中每個(gè)Q2為NH或O，每個(gè)q獨(dú)立為1至10的整數(shù)，且每個(gè)q1獨(dú)立為1至10的整數(shù)。在某些實(shí)施方案中，q為2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，q1為2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，A選自其中每個(gè)Q2獨(dú)立為NH或O且每個(gè)q獨(dú)立為1至10的整數(shù)。在某些實(shí)施方案中，q為2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，A選自其中每個(gè)Q2獨(dú)立為NH或O。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的重鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)(例如人IgG的重鏈恒定區(qū))，其中所述重鏈恒定區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如CH1、CH2或CH3)用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)(例如人IgG的重鏈恒定區(qū))，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的重鏈恒定區(qū)，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)(例如人κ輕鏈恒定區(qū))，其中所述抗體的輕鏈恒定區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的輕鏈恒定區(qū)(諸如κ輕鏈恒定區(qū))，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在上述化合物的某些實(shí)施方案中，D經(jīng)由(或經(jīng))所添加的半胱氨酸殘基連接至T。在某些實(shí)施方案中，D經(jīng)所添加的半胱氨酸殘基的巰基連接至T，所述半胱氨酸殘基經(jīng)連接子部分(-A-L4-L3-L2-X-L1-)連接。在某些實(shí)施方案中，D為含有氨基的藥物部分，其中所述藥物經(jīng)所述氨基連接至L1或X。在某些實(shí)施方案中，D為倍癌霉素、多拉司他汀、微管結(jié)合素、多柔比星(DOX)、紫杉醇或絲裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。在某些實(shí)施方案中，D為選自以下的倍癌霉素的氨基衍生物：在某些實(shí)施方案中，D為多拉司他汀的氨基衍生物(例如單甲基多拉司他汀10)：在某些實(shí)施方案中，-A-L4-L3-L2-為在某些實(shí)施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在某些實(shí)施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在某些實(shí)施方案中，-A-L4-L3-L2-X-L1-D為：在上述化合物的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(1)所述重鏈可變區(qū)包含抗體hLK26的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體hLK26的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區(qū)包含抗體26B3的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體26B3的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含抗體hMov19的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體hMov19的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(1)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中(1)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列；(2)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:10的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:11的氨基酸序列；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈和輕鏈，其中(1)所述重鏈包含SEQIDNO:1的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(2)所述重鏈包含SEQIDNO:2的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(3)所述重鏈包含：可變區(qū)，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，和恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或所述輕鏈包含：可變區(qū)，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，和恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列；或(4)所述重鏈包含SEQIDNO:6的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含：人重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列；和人κ輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區(qū)的選自L201和T206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在這些實(shí)施方案中的一些中，在所述重鏈恒定區(qū)中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的至少一個(gè)(例如一個(gè))氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自L201和T206的至少一個(gè)(例如一個(gè))氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體為選自以下的抗原結(jié)合片段：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv和ScFv。本公開提供藥物組合物，包含如上和本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體以及藥用載體。本公開提供殺死表達(dá)人葉酸受體α(FRA)的細(xì)胞的方法，所述方法包括向所述細(xì)胞給予足以殺死所述細(xì)胞的量的本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞為癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞在個(gè)體(例如人)中。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞為淋巴瘤或白血病細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞為葉酸受體α(FRA)-陽性淋巴瘤或葉酸受體α(FRA)-陽性白血病細(xì)胞。本公開提供在個(gè)體中治療癌癥的方法，所述方法包括向所述個(gè)體給予有效量的本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體具有癌癥或已經(jīng)診斷有癌癥。在某些實(shí)施方案中，所述癌癥為卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌或腎細(xì)胞癌。在某些實(shí)施方案中，所述癌癥為葉酸受體α(FRA)-陽性癌癥。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體為人。本公開提供試劑盒，包含本申請所述的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。在某些實(shí)施方案中，所述試劑盒還包含治療癌癥使用的說明書。本申請?zhí)峁┝酥苽涫?II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧凰龇椒òㄊ顾隹贵w與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體反應(yīng)：本申請?zhí)峁┝酥苽涫?IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為靶向部分，其為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元；所述方法包括使所述抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體反應(yīng)：在本申請的方法和制備方法的某些實(shí)施方案中，所述抗體包含一個(gè)或多個(gè)巰基。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體的重鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如CH1、CH2或CH3)用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)(例如人IgG的重鏈恒定區(qū))，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的重鏈恒定區(qū)，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自位置155、157、165、169、197、199和442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在本申請的方法和制備方法的某些實(shí)施方案中，所述抗體的輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)(諸如人κ輕鏈恒定區(qū))，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p的輕鏈恒定區(qū)，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在某些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自位置201和206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基替代，其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在本申請的方法或制備方法的某些實(shí)施方案中，D經(jīng)由(或經(jīng))所添加的半胱氨酸殘基連接至T。在某些實(shí)施方案中，D經(jīng)所添加的半胱氨酸殘基的巰基連接至T，所述半胱氨酸殘基經(jīng)連接子部分(-A-L4-L3-L2-X-L1-)連接。在本申請的方法或制備方法的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(1)所述重鏈可變區(qū)包含抗體hLK26的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體hLK26的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區(qū)包含抗體26B3的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體26B3的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含抗體hMov19的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含抗體hMov19的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在本申請的方法或制備方法的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人抗體。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(1)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:14、15和16)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:17、18和19)；(2)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:20、21和22)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:23、24和25)；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的三個(gè)重鏈HVR(例如SEQIDNO:26、27和28)和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的三個(gè)輕鏈HVR(例如SEQIDNO:29、30和31)。在本申請的方法和制備方法的某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中：(1)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列；(2)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:10的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:11的氨基酸序列；或(3)所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列和/或所述輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述抗葉酸受體α(FRA)抗體包含重鏈和輕鏈，其中(1)所述重鏈包含SEQIDNO:1的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(2)所述重鏈包含SEQIDNO:2的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(3)所述重鏈包含可變區(qū)，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，和恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或所述輕鏈包含可變區(qū)，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，和恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列；或(4)所述重鏈包含SEQIDNO:6的氨基酸序列和/或所述輕鏈包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在本申請的方法和制備方法的一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，和人κ輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列，其中在所述重鏈恒定區(qū)中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基和/或在所述κ輕鏈恒定區(qū)中的選自L201和T206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在這些實(shí)施方案中的一些中，在所述重鏈恒定區(qū)中的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的至少一個(gè)(例如一個(gè))氨基酸殘基和/或在所述輕鏈恒定區(qū)中的選自L201和T206的至少一個(gè)(例如一個(gè))氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。本公開提供化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，其中所述化合物通過本申請所述的方法或制備方法制備，其中所述抗體包含一個(gè)或多個(gè)巰基。本公開提供藥物組合物，其包含化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體以及藥用載體，其中所述化合物通過本申請所述的方法制備，其中所述抗體包含一個(gè)或多個(gè)巰基。應(yīng)當(dāng)理解的是，本申請所述的各個(gè)實(shí)施方案的一種、一些或所有性質(zhì)可組合構(gòu)成本發(fā)明的其它實(shí)施方案。本發(fā)明的這些和其它方面將對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言變得顯而易見。附圖說明圖1顯示Tap-18H的NMR譜。圖2顯示Tap-18Hr1的NMR譜。圖3顯示Tap-18Hr2的NMR譜。圖4顯示hLK26-IgG1-Tap18Hr1針對衍生自卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3的異種移植物的體內(nèi)抗腫瘤活性。圖5顯示位點(diǎn)特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADChLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1和hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1針對衍生自卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3的異種移植物的體內(nèi)抗腫瘤活性。圖6顯示常規(guī)的hLK26-IgG1-Tap18Hr1以及位點(diǎn)特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADChLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1、hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1和hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr針對衍生自肺癌細(xì)胞系NCI-H2110的異種移植物體內(nèi)抗腫瘤活性。定義除非另有指示，否則以下術(shù)語具有以下意義。任何未定義術(shù)語具有其領(lǐng)域公認(rèn)的意義?！巴榛敝竼蝺r(jià)飽和脂肪烴基，具有1至10個(gè)碳原子且優(yōu)選地具有1至6個(gè)碳原子。例如，本術(shù)語包括直鏈及支鏈烴基諸如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、異丙基((CH3)2CH-)、正丁基(CH3CH2CH2CH2-)、異丁基((CH3)2CHCH2-)、仲丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔丁基((CH3)3C-)、正戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)、新戊基((CH3)3CCH2-)及正己基(CH3(CH2)5-)。“亞烷基”指二價(jià)脂肪亞烴基，優(yōu)選地具有1至10個(gè)碳原子且更優(yōu)選地具有1至3個(gè)碳原子，為直鏈或支鏈。例如，本術(shù)語包括亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞正丙基(-CH2CH2CH2-)、亞異丙基(-CH2CH(CH3)-)、(-C(CH3)2CH2CH2-)、(-C(CH3)2CH2C(O)-)、(-C(CH3)2CH2C(O)NH-)、(-CH(CH3)CH2-)等?！跋┗敝钢辨溁蛑ф湡N基，具有2至10個(gè)碳原子且優(yōu)選地具有2至4個(gè)碳原子及具有至少1個(gè)位點(diǎn)的雙鍵不飽和性且優(yōu)選地具有1至2個(gè)位點(diǎn)的雙鍵不飽和性。例如，本術(shù)語包括二乙烯基(bi-vinyl)、烯丙基及丁-3-烯-1-基。本術(shù)語包括順式和反式異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物?！皝喯┗敝钢辨溁蛑ф渷啛N基，具有2至10個(gè)碳原子且優(yōu)選地具有2至4個(gè)碳原子及具有至少1個(gè)位點(diǎn)的雙鍵不飽和性且優(yōu)選地具有1至2個(gè)位點(diǎn)的雙鍵不飽和性。亞烯基的實(shí)例包括但不限于亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞烯丙基(-CH2C＝C-)和丁-3-烯-1-亞基(-CH2CH2C＝CH-)。本術(shù)語包括順式和反式異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物?！叭不敝钢辨溁蛑ф湡N基，具有2至6個(gè)碳原子且優(yōu)選地具有2至3個(gè)碳原子及具有至少1個(gè)位點(diǎn)的叁鍵不飽和性且優(yōu)選地具有1至2個(gè)位點(diǎn)的叁鍵不飽和性。此類炔基的實(shí)例包括乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)?！皝喨不敝钢辨溁蛑ф渷啛N基，具有2至6個(gè)碳原子且優(yōu)選地具有2至3個(gè)碳原子及具有至少1個(gè)位點(diǎn)的叁鍵不飽和性且優(yōu)選地具有1至2個(gè)位點(diǎn)的叁鍵不飽和性。亞炔基的實(shí)例包括但不限于亞乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。“氨基”指基團(tuán)-NH2。“經(jīng)取代的氨基”指基團(tuán)-NRR，其中每個(gè)R獨(dú)立選自由以下基團(tuán)組成的群組中：氫、烷基、經(jīng)取代的烷基、環(huán)烷基、經(jīng)取代的環(huán)烷基、烯基、經(jīng)取代的烯基、環(huán)烯基、經(jīng)取代的環(huán)烯基、炔基、經(jīng)取代的炔基、芳基、雜芳基及雜環(huán)基，前提條件是至少一個(gè)R不為氫?！胺蓟敝?至18個(gè)碳原子的單價(jià)芳族碳環(huán)基團(tuán)，具有單環(huán)(諸如苯基中所呈現(xiàn))或具有多個(gè)稠環(huán)的環(huán)系(此類芳族環(huán)系統(tǒng)的實(shí)例包括萘基、蒽基及二氫茚基)，所述稠環(huán)可或不可為芳族，前提條件是接附點(diǎn)通過芳族環(huán)的原子。例如，本術(shù)語包括苯基及萘基。除非對于芳基取代基的定義另有約束，否則此類芳基可任選用1至5個(gè)取代基或1至3個(gè)取代基取代，這些取代基選自酰氧基、羥基、巰基、?；⑼榛?、烷氧基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、經(jīng)取代的烷基、經(jīng)取代的烷氧基、經(jīng)取代的烯基、經(jīng)取代的炔基、經(jīng)取代的環(huán)烷基、經(jīng)取代的環(huán)烯基、氨基、經(jīng)取代的氨基、氨?；?、酰氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基酯、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨酰氧基、氧酰氨基、硫代烷氧基、經(jīng)取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經(jīng)取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-經(jīng)取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及三鹵代甲基。“環(huán)烷基”指3至10個(gè)碳原子的環(huán)狀烷基，具有單個(gè)環(huán)狀環(huán)或包括稠合、橋式及螺環(huán)系的多個(gè)環(huán)狀環(huán)。適宜環(huán)烷基的實(shí)例包括例如金剛烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等。例如，此類環(huán)烷基包括諸如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等的單環(huán)結(jié)構(gòu)或諸如金剛烷基等的多環(huán)結(jié)構(gòu)。“雜芳基”指1至15個(gè)碳原子諸如1至10個(gè)碳原子及1至10個(gè)選自由環(huán)內(nèi)的氧、氮及硫組成的群組的雜原子的芳族基團(tuán)。此類雜芳基可具有單個(gè)環(huán)(諸如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或環(huán)系中的多個(gè)稠環(huán)(例如諸如吲嗪基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基或苯并噻吩基那樣的基團(tuán))，其中環(huán)系內(nèi)的至少一個(gè)環(huán)為芳族且環(huán)系內(nèi)的至少一個(gè)環(huán)為芳族，前提條件是接附點(diǎn)通過芳族環(huán)的原子。在某些實(shí)施方案中，雜芳基的氮和/或硫環(huán)原子任選經(jīng)氧化以提供N-氧化物(N→O)、亞磺酰基或磺酰基部分。例如，本術(shù)語包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、硫苯基及呋喃基。除非對于雜芳基取代基的定義另有約束，否則此類雜芳基可任選用1至5個(gè)取代基或1至3個(gè)取代基取代，這些取代基選自酰氧基、羥基、巰基、?；?、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、經(jīng)取代的烷基、經(jīng)取代的烷氧基、經(jīng)取代的烯基、經(jīng)取代的炔基、經(jīng)取代的環(huán)烷基、經(jīng)取代的環(huán)烯基、氨基、經(jīng)取代的氨基、氨?；?、酰氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基酯、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨酰氧基、氧酰氨基、硫代烷氧基、經(jīng)取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經(jīng)取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-經(jīng)取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及三鹵代甲基。雜芳基的實(shí)例包括但不限于吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、吲哚基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、喋啶基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、啡啉基、異噻唑基、啡嗪基、異噁唑基、啡噁嗪基、啡噻嗪基、哌啶基、哌嗪基、鄰苯二甲酰亞氨基、4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩基、噻唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基等?！半s環(huán)”、“雜環(huán)的”、“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”指飽和或部分不飽和基團(tuán)，具有單個(gè)環(huán)或包括稠合、橋式或螺環(huán)系的多個(gè)稠環(huán)及具有3至20個(gè)環(huán)原子，包括1至10個(gè)雜原子。這些環(huán)原子選自由碳、氮、硫或氧組成的群組中，其中在稠環(huán)系統(tǒng)中，環(huán)中的一或多個(gè)可為環(huán)烷基、芳基或雜芳基，前提條件是接附點(diǎn)通過非芳族環(huán)。在某些實(shí)施方案中，雜環(huán)基的氮和/或硫原子任選經(jīng)氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或-SO2-部分。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于氮雜環(huán)丁烷基、二氫吲哚基、吲唑基、喹嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、哌啶基、哌嗪基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、噻唑烷基、嗎啉基、硫嗎啉基、1,1-二氧代硫嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、四氫呋喃基等。在雜芳基或雜環(huán)基為“經(jīng)取代”的情況下，除非對于雜芳基或雜環(huán)取代基的定義另有約束，否則此類雜芳基或雜環(huán)基可用1至5個(gè)取代基或1至3個(gè)取代基取代，這些取代基選自烷基、經(jīng)取代的烷基、烷氧基、經(jīng)取代的烷氧基、環(huán)烷基、經(jīng)取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、經(jīng)取代的環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、經(jīng)取代的氨基、氨?；滨Ｑ趸?、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環(huán)氧基、巰基、硫代烷氧基、經(jīng)取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-經(jīng)取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO-雜環(huán)基、-SO2-烷基、-SO2-經(jīng)取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基及-SO2-雜環(huán)基?！熬蹃喭榛肌敝钢辨溁蛑ф溇蹃喭榛季酆衔镏T如聚乙二醇、聚丙二醇及聚丁二醇。聚亞烷基二醇亞單元為單個(gè)聚亞烷基二醇單元。例如，聚乙二醇亞單元的實(shí)例將為乙二醇-O-CH2-CH2-O-或丙二醇-O-CH2-CH2-CH2-O-，該鏈終點(diǎn)處用氫封端。聚(亞烷基二醇)的其它實(shí)例包括但不限于PEG、諸如甲氧基聚(乙二醇)(mPEG)那樣的PEG衍生物、聚(氧化乙烯)、PPG、聚(丁二醇)、聚(氧化乙烯共氧化丙烯)或其共聚物及組合?！熬郯贰敝冈趩误w單元中具有胺官能團(tuán)的聚合物，將這些胺官能團(tuán)合并至主鏈中(如在聚亞烷基亞胺中)或在側(cè)基中(如在聚乙烯基胺中)。除本申請所公開的內(nèi)容之外，當(dāng)術(shù)語“經(jīng)取代”用于修飾指定基團(tuán)或殘基時(shí)，該術(shù)語也可意指指定基團(tuán)或殘基的一或多個(gè)氫原子各自彼此獨(dú)立地用如下文所定義的相同或不同的取代基替代。除本申請關(guān)于各個(gè)術(shù)語所公開的基團(tuán)的外，除另有規(guī)定外，用于在指定基團(tuán)或殘基中的飽和碳原子上取代一或多個(gè)氫(可用＝O、＝NR70、＝N-OR70、＝N2或＝S替代單個(gè)碳上的任何兩個(gè)氫)的取代基為-R60、鹵素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三鹵代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-S(O)2R70、-SO3–M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OSO3–M+、-OS(O)2OR70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O–M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2–M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60選自由以下基團(tuán)組成的群組中：任選取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基及雜芳基烷基；每個(gè)R70獨(dú)立為氫或R60；每個(gè)R80獨(dú)立為R70或可選擇地，兩個(gè)R80’與它們所鍵合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元雜環(huán)烷基，該雜環(huán)烷基可任選包括1至4個(gè)選自由O、N及S組成的群組中的相同或不同的額外雜原子，其中N可具有–H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-S(O)2C1-4烷基取代；且每個(gè)M+為具有凈單個(gè)正電荷的抗衡離子。例如，每個(gè)M+可獨(dú)立為堿離子，諸如K+、Na+、Li+；銨根離子，諸如+N(R60)4；或堿土離子，諸如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(下標(biāo)0.5意指對于此類二價(jià)堿土離子的抗衡離子中的一個(gè)可為實(shí)施方案的化合物的離子化形式及諸如氯離子那樣的其它典型抗衡離子，或本申請所公開的兩個(gè)離子化化合物可充當(dāng)對于此類二價(jià)堿土離子的抗衡離子，或?qū)嵤┓桨傅囊粋€(gè)雙重離子化化合物可充當(dāng)對于此類二價(jià)堿土離子的抗衡離子)。除本申請所公開的內(nèi)容之外，除另有規(guī)定外，用于在“經(jīng)取代的”烯基、炔基、芳基及雜芳基中的不飽和碳原子上的氫的取代基為-R60、鹵素、-O–M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三鹵代甲基、-CF3、―CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-S(O)R70、-S(O)2R70、-SO3–M+、-SO3R70、-OS(O)2R70、-OSO3–M+、-OSO3R70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-CO2–M+、-CO2R70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OCO2–M+、-OCO2R70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2–M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80及M+如先前所定義，前提條件是在經(jīng)取代的烯基或炔基的情況下，取代基不為-O-M+、-OR70、-SR70或-S-M+。除本申請關(guān)于各個(gè)術(shù)語所公開的取代基之外，除另有規(guī)定外，用于在“經(jīng)取代的”雜環(huán)烷基及環(huán)烷基中的氮原子上的氫的取代基為-R60、-O–M+、-OR70、-SR70、-S–M+、-NR80R80、三鹵代甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)R70、-S(O)2R70、-S(O)2O–M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O–M+、-OS(O)2OR70、-PO32–(M+)2、-P(O)(OR70)O–M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80及M+如先前所定義。除本申請所公開的內(nèi)容之外，在某一實(shí)施方案中，經(jīng)取代的基團(tuán)具有1、2、3或4個(gè)取代基、1、2或3個(gè)取代基、1或2個(gè)取代基或1個(gè)取代基。應(yīng)理解在上文所定義的所有經(jīng)取代的基團(tuán)中，本申請不意欲包括通過將具有進(jìn)一步取代基的取代基定義成其本身所獲得的聚合物(例如經(jīng)取代的芳基具有作為取代基的經(jīng)取代的芳基基團(tuán)，該經(jīng)取代的芳基基團(tuán)本身用經(jīng)取代的芳基基團(tuán)取代，該經(jīng)取代的芳基基團(tuán)進(jìn)一步被經(jīng)取代的芳基基團(tuán)取代等)。在此情況下，此類取代的最大數(shù)目為三層。例如，本申請所特定涵蓋的經(jīng)取代的芳基基團(tuán)的連續(xù)取代被限于經(jīng)取代的芳基-(經(jīng)取代的芳基)-經(jīng)取代的芳基。除非另有指示，否則本申請未明確定義的取代基的命名如下進(jìn)行：命名末端部分的官能團(tuán)，接著命名朝向接附點(diǎn)的相鄰官能團(tuán)。例如，取代基“芳基烷基氧羰基”指基團(tuán)(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。關(guān)于本申請所公開的含有一或多個(gè)取代基的任何基團(tuán)，毫無疑問應(yīng)理解此類基團(tuán)不含有在空間上不實(shí)用和/或在合成上不可行的任何取代或取代模式。另外，本申請化合物包括由于這些化合物的取代而出現(xiàn)的所有立體化學(xué)異構(gòu)體。術(shù)語“藥用鹽”意指就給藥于諸如哺乳動(dòng)物那樣的患者而言可接受的鹽(具有抗衡離子的對于給定劑量療法具有可接受的哺乳動(dòng)物安全性的鹽)。此類鹽可衍生自藥用無機(jī)或有機(jī)堿及衍生自藥用無機(jī)或有機(jī)酸。“藥用鹽”指化合物的藥用鹽，這些鹽衍生自本領(lǐng)域所熟知的各種有機(jī)及無機(jī)抗衡離子且僅例如包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、四烷基銨鹽等；且當(dāng)分子含有堿性官能團(tuán)時(shí)，有機(jī)或無機(jī)酸的鹽諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等。繪制基團(tuán)的結(jié)構(gòu)中的波浪線表示該基團(tuán)與母體結(jié)構(gòu)的連接點(diǎn)。術(shù)語“其鹽”意指當(dāng)酸的質(zhì)子由陽離子替代時(shí)所形成的化合物，該陽離子為諸如金屬陽離子或有機(jī)陽離子等。在可適用的情況下，鹽為藥用鹽，但是對于不意欲給藥于患者的中間體化合物的鹽不需要為藥用鹽。例如，本申請化合物的鹽包括以下那些鹽，其中由無機(jī)或有機(jī)酸使化合物質(zhì)子化以形成陽離子且無機(jī)或有機(jī)酸的共軛堿作為鹽的陰離子組分?！叭軇┗铩敝赣扇軇┓肿优c溶質(zhì)的分子或離亞組合形成的復(fù)合物。溶劑可為有機(jī)化合物、無機(jī)化合物或兩者的混合物。溶劑的一些實(shí)例包括但不限于甲醇、N,N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、二甲亞砜及水。當(dāng)溶劑為水時(shí)，所形成的溶劑化物為水合物。“立體異構(gòu)體”指具有相同原子連接性但空間上具有不同原子排列的化合物。立體異構(gòu)體包括順式-反式異構(gòu)體、E與Z異構(gòu)體、對映異構(gòu)體及非對映異構(gòu)體?！盎プ儺悩?gòu)體”指不同僅在于原子的電子鍵合方面和/或在于質(zhì)子的位置方面的分子的替代形式，諸如烯醇-酮及亞胺-烯胺互變異構(gòu)體；或含有-N＝C(H)-NH-環(huán)原子排列的雜芳基的互變異構(gòu)形式，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑及四唑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將辨識出其它互變異構(gòu)環(huán)原子排列是可能的。將了解的是，術(shù)語“或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體”意欲包括鹽、溶劑化物及立體異構(gòu)體的所有排列，諸如本申請化合物的立體異構(gòu)體的藥用鹽的溶劑化物。如本申請所使用，藥物、化合物、綴合物、藥物綴合物、抗體-藥物綴合物或藥物組合物的“有效劑量”或“有效量”為足以實(shí)現(xiàn)有益或期望結(jié)果的量。對于預(yù)防性使用，有益或期望結(jié)果包括諸如消除或減小疾病風(fēng)險(xiǎn)、減輕疾病嚴(yán)重程度或延遲疾病發(fā)作那樣的結(jié)果，包括疾病的生物化學(xué)癥狀、組織學(xué)癥狀和/或行為癥狀、其并發(fā)癥及疾病發(fā)展期間呈現(xiàn)的中間病理表型。對于治療性使用，有益或期望結(jié)果包括諸如減少由疾病引起的一或多個(gè)癥狀、提高罹患疾病的那些患者的生活質(zhì)量、減少治療疾病所需其它藥物的劑量、諸如經(jīng)由靶向增強(qiáng)另一藥物的功效、延遲疾病進(jìn)程和/或延長存活時(shí)間那樣的臨床結(jié)果。在癌癥或腫瘤的情況下，藥物的有效量可在以下方面具有效果：減少癌細(xì)胞數(shù)目；減小腫瘤大小；抑制(即在某種程度上放緩且優(yōu)選地停止)癌細(xì)胞浸潤至周邊器官中；抑制(即在某種程度上放緩且優(yōu)選地停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在某種程度上抑制腫瘤生長；和/或在某種程度上減輕與障礙關(guān)聯(lián)的癥狀中的一或多個(gè)。可在一或多次給藥中給藥有效劑量。針對本申請的目的，藥物、化合物或藥物組合物的有效劑量為足以直接或間接實(shí)現(xiàn)預(yù)防性或治療性處置的量。如臨床情境中所理解的那樣，藥物、化合物或藥物組合物的有效劑量可或不可聯(lián)用另一藥物、化合物或藥物組合物來實(shí)現(xiàn)。因此，可在給藥一或多種治療劑的情境中考慮“有效劑量”且若聯(lián)用一或多種其它藥物可實(shí)現(xiàn)或?qū)崿F(xiàn)理想結(jié)果，則可考慮以有效量給藥單個(gè)藥物。如本申請所使用，“聯(lián)用”指給藥一種治療模態(tài)外加另一治療模態(tài)。因此，“聯(lián)用”指在另一種治療模態(tài)給予前、給予期間或給予后將一種治療模態(tài)給予個(gè)體。如本申請所使用，“治療”為用于獲得有益或期望結(jié)果的途徑，這些結(jié)果包括且優(yōu)選為臨床結(jié)果。針對本申請的目的，有益或期望臨床結(jié)果包括但不限于以下結(jié)果中的一或多個(gè)：減少癌細(xì)胞的增殖(或消滅癌細(xì)胞)、減少由疾病引起的癥狀、提高罹患疾病的那些患者的生活質(zhì)量、減少治療疾病所需其它藥物的劑量、延遲疾病進(jìn)程和/或延長個(gè)體的存活時(shí)間。如本申請所使用，“延遲疾病的發(fā)展”意指延緩、阻礙、減緩、阻滯、穩(wěn)定化和/或推遲疾病(諸如癌癥)的發(fā)展。此延遲可具有不同的時(shí)間長度，取決于疾病史和/或正經(jīng)治療的個(gè)體。如對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的那樣，足夠或明顯的延遲可有效含有預(yù)防之意，即個(gè)體并未發(fā)展疾病。例如，可延遲晚期癌癥諸如轉(zhuǎn)移的發(fā)展?！皞€(gè)體”或“受試者”為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選地為人類。哺乳動(dòng)物也包括但不限于家畜、競技動(dòng)物、寵物(諸如貓類、犬類、馬匹)、靈長類動(dòng)物、小鼠及大鼠。如本申請所使用，術(shù)語“特異性識別”或“特異性結(jié)合”指可量測及可再現(xiàn)的相互作用諸如靶標(biāo)與抗體(或分子或部分)之間的吸引或結(jié)合，其在有包括生物分子在內(nèi)的分子的異質(zhì)群體參與的情況下決定靶標(biāo)的呈現(xiàn)。例如，特異性或優(yōu)先結(jié)合至抗原決定部位的抗體為結(jié)合至此抗原決定部位比結(jié)合至靶標(biāo)其它抗原決定部位或非靶標(biāo)抗原決定部位具有較大親合力、較大活動(dòng)性、較輕易和/或具有較長持續(xù)時(shí)間的抗體。例如，也應(yīng)理解的是，特異性或優(yōu)先結(jié)合至第一靶標(biāo)的抗體(或部分或抗原決定部位)可或不可特異性或優(yōu)先結(jié)合至第二靶標(biāo)。因此，“特異性結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”不一定需要(盡管可包括)獨(dú)占結(jié)合。特異性結(jié)合至靶標(biāo)的抗體可具有至少約103M-1或104M-1的締合常數(shù)，該締合常數(shù)有時(shí)約105M-1或106M-1，在其它情況下約106M-1或107M-1、約108M-1至109M-1或約1010M-1至1011M-1或更高。各種免疫測定方式可用于通過特定蛋白質(zhì)來選擇具有特異性免疫活性的抗體。例如，固相ELISA免疫測定常用于通過蛋白質(zhì)來選擇具有特異性免疫活性的單克隆抗體。請參見例如HarlowandLane(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPublications,NewYork，用于描述可用于確定特異性免疫反應(yīng)性的免疫測定方式及條件。如本申請所使用，術(shù)語“癌癥”、“腫瘤”、“癌性”及“惡性”是指或描述哺乳動(dòng)物中的生理病癥，該病癥通常以無限制細(xì)胞生長為特征。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌瘤，包括腺癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、黑素瘤及肉瘤。此類癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、胃腸癌、霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、宮頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、卵巢癌、諸如肝癌瘤及肝細(xì)胞瘤那樣的肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、諸如腎細(xì)胞癌瘤及韋爾姆斯腫瘤那樣的腎癌、基底細(xì)胞癌、黑素瘤、間皮瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、睪丸癌、食道癌、膽囊癌及各種類型頭頸癌。如本申請及所附權(quán)利要求書所使用，除非上下文另有清楚指示，否則單數(shù)形式“一”及“該”包括復(fù)數(shù)指代。例如，“抗體”的提及為一至多個(gè)抗體諸如摩爾量的提及且包括為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的其等價(jià)形式等。本申請?zhí)峒暗摹凹s”值或參數(shù)包括(及描述)針對該值或參數(shù)本身的實(shí)施方案。例如，提及“約X”的描述包括“X”的描述。應(yīng)理解本申請所描述的本發(fā)明的方面及變化包括“包含”和/或“基本包含”方面及變化。除非另有定義，否則本申請所使用的所有技術(shù)術(shù)語及科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬的
技術(shù)領(lǐng)域：
中的技術(shù)人員通常所理解的相同的意義。盡管也可將與本申請所描述的那些方法及材料類似或等價(jià)的任何方法及材料用于本發(fā)明的實(shí)施或測試中，但現(xiàn)描述優(yōu)選的方法及材料。本申請所論及的所有公開出版物以引用的方式引入本申請以結(jié)合這些公開出版物所記載的內(nèi)容揭示及描述方法和/或材料。除非另有說明，通常根據(jù)本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法及如在本說明書通篇中記載及論述的各種一般及較具體的實(shí)施方案所描述的那樣實(shí)施本發(fā)明的方法及技術(shù)。請參見例如Loudon,OrganicChemistry,第4版,NewYork:OxfordUniversityPress,2002,第360-361頁,第1084-1085頁；SmithandMarch,March’sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第5版,Wiley-Interscience,2001。在本申請的實(shí)施例中說明本申請用于命名本申請化合物的命名法。大體上已使用市售AutoNom軟件(MDL,SanLeandro,Calif)衍生此命名法。應(yīng)了解的是，出于清晰的目的在不同實(shí)施方案的上下文中所描述的本發(fā)明的某些特征也可在另一個(gè)實(shí)施方案中組合提供。相反地，出于簡潔的目的在單個(gè)實(shí)施方案的上下文中所描述的本發(fā)明的各個(gè)特征也可單獨(dú)或以任何適宜的亞組合提供。本發(fā)明具體包含關(guān)于由變量表示的化學(xué)基團(tuán)的實(shí)施方案的所有組合且本申請揭示這些組合恰如分別及明確揭示每個(gè)及每一組合，其程度是此類組合包含作為穩(wěn)定化合物的化合物(即可被分離、表征及針對生物活性進(jìn)行測試的化合物)。另外，本發(fā)明也具體包含描述此類變量的實(shí)施方案中所列出的化學(xué)基團(tuán)的所有亞組合且本申請揭示這些亞組合恰如本申請分別及明確揭示化學(xué)基團(tuán)的每個(gè)及每一此類亞組合。具體實(shí)施方式本申請?zhí)峁┚哂杏H水性自消耗連接子的化合物(抗-FRA抗體-藥物綴合物)，該連接子在適宜條件下可被裂解及合并親水性基團(tuán)以提供綴合物的較好的可溶性。親水性自消耗連接子可為通常疏水的細(xì)胞毒性藥物提供藥物綴合物的增加的可溶性。在藥物綴合物中使用親水性自消耗連接子的其它優(yōu)勢包括藥物綴合物的增加的穩(wěn)定性及藥物綴合物的減少的聚集性。本申請?zhí)峁┛删哂袃?yōu)越血清穩(wěn)定性的抗體-藥物綴合物。例如，與經(jīng)由在水性緩沖液或人類血清中對快速水解敏感的不穩(wěn)定碳酸酯連接方式將藥物的羥基連接至間隔基的抗體-藥物綴合物相比，使用芐基氧基羰基連接方式的本發(fā)明實(shí)施方案的抗體-藥物綴合物可在相同條件下是相對較穩(wěn)定的且可在使用蛋白酶例如組織蛋白酶B進(jìn)行處理后選擇性地經(jīng)歷斷裂以釋放藥物。血清穩(wěn)定性為抗體-藥物綴合物的理想特性，其中需要將非活性藥物給藥至患者血清，使得該非活性藥物作為配體集中于靶標(biāo)及隨后使得該抗體-藥物綴合物僅在靶標(biāo)附近轉(zhuǎn)化成活性形式。本申請?zhí)峁┛删哂袦p少的聚集的抗體-藥物綴合物。一些酶不穩(wěn)定連接子的增加的關(guān)聯(lián)疏水性可導(dǎo)致抗體-藥物綴合物的聚集，尤其是使用強(qiáng)疏水性藥物。隨著親水性基團(tuán)合并至連接子中，可存在抗體-藥物綴合物的減少的聚集。本申請的化合物(抗體-藥物綴合物)包含藥物部分、能夠靶向選定細(xì)胞群落(例如FRA表達(dá)細(xì)胞)的靶向部分及連接子，該連接子含有?；鶈卧⒂糜谠谒幬锊糠峙c靶向部分之間提供距離的任選間隔基單元、可在適宜條件下可裂解的肽連接子、親水性自消耗連接子及任選第二自消耗間隔基或環(huán)化自消除連接子。下文論述這些特征中的每個(gè)。本公開提供式(I)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分；X為親水性自消耗連接子；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。在某些實(shí)施方案中，所述靶向部分為特異性結(jié)合FRA(例如人FRA)的抗體。在某些實(shí)施方案中，所述靶向部分為抗-FRA抗體，其具有一個(gè)或多個(gè)連接位點(diǎn)用于連接至所述藥物部分。例如，靶向部分T可具有多個(gè)位點(diǎn)用于連接至連接子-藥物部分(例如A-L4-L3-L2-X-L1-D)。因此，還提供式(Ia)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中D、T、X、L1、L2、L3、L4和A如式(I)所定義，且p為1至20。在某些實(shí)施方案中，p為1至8。在某些實(shí)施方案中，p為1至6。在某些實(shí)施方案中，p為1至4。在某些實(shí)施方案中，p為2至4。在某些實(shí)施方案中，p為1、2、3或4。在某些實(shí)施方案中，p為2。在某些實(shí)施方案中，p為3。在某些實(shí)施方案中，p為4。肽連接子在式(I)中，L3為肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為1至10個(gè)氨基酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為2至4個(gè)氨基酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為二肽連接子。氨基酸殘基可為天然存在的氨基酸殘基或非天然氨基酸殘基。術(shù)語“天然氨基酸”及“天然存在的氨基酸”指Ala、Asp、Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp及Tyr?！胺翘烊话被帷?即非天然存在的氨基酸)包括作為非限制性實(shí)例的高絲氨酸、高精氨酸、瓜氨酸、苯基甘氨酸、?；撬帷⒌饫野彼?、硒基-半胱氨酸、正亮氨酸(“Nle”)、正纈氨酸(“Nva”)、β-丙氨酸、L-或D-萘氨酸、鳥氨酸(“Orn”)等。氨基酸也包括D-形式的天然及非天然氨基酸?！盌-”指定具有“D”(右旋)構(gòu)型的氨基酸，與天然存在的(“L-”)氨基酸中的構(gòu)型相反。在沒有指示特定構(gòu)型的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的是，氨基酸為L-氨基酸。然而，氨基酸也可為D-及L-構(gòu)型的外消旋混合物。可購得天然及非天然氨基酸(SigmaChemicalCo.；AdvancedChemtech)或使用本領(lǐng)域的已知方法合成這些氨基酸。只要保持其生物活性，便可基于殘基的極性、電荷、可溶性、疏水性、親水性和/或兩親性的相似性進(jìn)行氨基酸代替?？商刂瓢被釟埢蛄?，使得其將通過腫瘤相關(guān)蛋白酶中的一或多個(gè)從所得肽基衍生藥物綴合物中選擇性地酶性裂解。在某些實(shí)施方案中，L3為包含至少一個(gè)賴氨酸或精氨酸殘基的肽連接子。在某些實(shí)施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：賴氨酸、D-賴氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸及谷氨酰胺。在某些實(shí)施方案中，L3為包含選自以下的氨基酸殘基的肽連接子：纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及酪氨酸。在某些實(shí)施方案中，L3選自以下的二肽連接子：纈氨酸-瓜氨酸、脯氨酸-賴氨酸、甲硫氨酸-D-賴氨酸、天冬酰胺-D-賴氨酸、異亮氨酸-脯氨酸、苯丙氨酸-賴氨酸及纈氨酸-賴氨酸。在某些實(shí)施方案中，L3為纈氨酸-瓜氨酸?？稍O(shè)計(jì)適合于本申請使用的多種具體肽連接子分子及可最佳化這些肽連接子分子通過特定腫瘤相關(guān)蛋白酶的酶性裂解選擇性。本申請中所使用的某些肽連接子為對于蛋白酶即組織蛋白酶B及D經(jīng)最佳化的那些肽連接子。親水性自消耗連接子在式(I)中，X為親水性自消耗連接子。本申請的化合物使用親水性自消耗間隔基部分，該間隔基部分間隔且共價(jià)連接藥物部分及靶向部分及合并親水性基團(tuán)，此舉提供化合物的較好的可溶性。一些酶不穩(wěn)定連接子的增加的關(guān)聯(lián)疏水性可導(dǎo)致藥物綴合物的聚集，尤其是使用強(qiáng)疏水性藥物。隨著親水性基團(tuán)合并至連接子中，可存在藥物綴合物的減少的聚集?？蓪⒆韵拈g隔基定義為雙官能化學(xué)部分，該雙官能化學(xué)部分能夠共價(jià)連接兩個(gè)間隔的化學(xué)部分成為通常穩(wěn)定的三部分分子，該自消耗間隔基可經(jīng)由酶性裂解從三部分分子中釋放間隔的化學(xué)部分中的一個(gè)；且在酶性裂解后，該自消耗間隔基可自分子的剩余部分自發(fā)裂解以釋放間隔的化學(xué)部分中的另一個(gè)。在某些實(shí)施方案中，X為芐基氧基羰基。在某些實(shí)施方案中，X為其中R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基。在所述情況下，本公開提供式(II)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：D為藥物部分；T為靶向部分；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵、第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為酰基單元。在某些實(shí)施方案中，本申請?zhí)峁┦?IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中D、T、L1、L2、L3、L4和A如式(II)所定義，且p為1至20。在某些實(shí)施方案中，p為1至8。在某些實(shí)施方案中，p為1至6。在某些實(shí)施方案中，p為1至4。在某些實(shí)施方案中，p為2至4。在某些實(shí)施方案中，p為1、2、3或4。在某些實(shí)施方案中，p為2。在某些實(shí)施方案中，p為3。在某些實(shí)施方案中，p為4。在式(II)或(IIa)的某些實(shí)施方案中，R1為氫。在某些情況下，R1為甲基。意欲且應(yīng)理解的是，對式(I)或(Ia)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A的每個(gè)和每種變量可應(yīng)用于式(II)或(IIa)，就如同每個(gè)和每種變量及其組合被單獨(dú)描述的那樣。例如，在一些實(shí)施方案中，式(II)或(IIa)的靶向部分為特異性結(jié)合葉酸受體α(FRA)(例如人FRA)的抗體。其還意欲且應(yīng)理解的是，對式(I)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A中的一個(gè)的每個(gè)和每種變量可與對式(I)描述的D、T、L1、L2、L3、L4和A中的另一個(gè)的每個(gè)和每種變量組合，就如同每個(gè)和每種組合被單獨(dú)描述的那樣。藥物部分的釋放是基于氨基芐基氧基羰基的自消除反應(yīng)。出于說明的目的，下文圖示具有藥物及肽接附的氨基芐基氧基羰基的反應(yīng)方案。方案1參見方案1，在自肽裂解后，形成氨基芐基氧基羰基且氨基芐基氧基羰基能夠經(jīng)歷自發(fā)的1,6消除以形成環(huán)己-2,5-二烯亞胺衍生物及二氧化碳并釋放藥物。任選第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子提供額外連接子用于允許精細(xì)調(diào)節(jié)化合物的裂解以釋放藥物部分。在式(I)或(Ia)中，L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；且其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵。存在與親水性自消耗連接子相鄰的任選第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子。在某些實(shí)施方案中，L1為鍵且L2為鍵。在某些實(shí)施方案中，L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子且L2為鍵。在某些實(shí)施方案中，L1為鍵且L2為第二自消耗連接子。在式(I)或(Ia)中，在某些實(shí)施方案中，L1為鍵。在某些實(shí)施方案中，L1為第二自消耗間隔基或環(huán)化自消除連接子，該間隔基或連接子將親水性自消耗連接子與藥物部分分開。在某些實(shí)施方案中，L1為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實(shí)施方案中，L1選自：其中n為1或2。在某些實(shí)施方案中，第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子提供設(shè)計(jì)潛力用于可使用的更多種類的部分。例如，在式(II)或(IIa)中，在親水性自消耗連接子與藥物部分之間的氨基甲酸酯連接基(-O-C(O)-N(H)-)將提供穩(wěn)定的藥物綴合物及將易于裂解以提供游離藥物部分。親水性自消耗連接子通常將使用氧羰基(-O-C(O)-)終止。若藥物部分具有氨基反應(yīng)性基團(tuán)，該氨基反應(yīng)性基團(tuán)可用于反應(yīng)以形成氨基甲酸酯基團(tuán)，則不需要第二自消耗單元或環(huán)化自消除連接子；但是仍可使用第二自消耗單元或環(huán)化自消除連接子。然而，若藥物不含有氨基，但反而含有一些其它反應(yīng)性官能團(tuán)，則此類藥物仍可通過在藥物部分與氨基芐基氧基羰基之間包括第二中間體自消耗間隔基或環(huán)化自消除連接子被合并至本發(fā)明實(shí)施方案的含有氨基芐基氧基羰基的化合物中。以下L1的環(huán)化自消除連接子提供含有羥基或含有巰基的藥物部分與親水性自消耗連接子的氨基芐基氧基羰基的連接：實(shí)施方案的化合物中的環(huán)化自消除連接子提供化合物的裂解以釋放藥物部分。相鄰親水性自消耗連接子的消除機(jī)制將暴露L1的氨基。所述氨基隨后可在環(huán)化反應(yīng)中與L1的氨基甲酸酯基團(tuán)或硫代氨基甲酸酯連接基及藥物部分反應(yīng)以釋放含有羥基或含有巰基的藥物部分。在式(I)或(Ia)中，在某些實(shí)施方案中，L2為鍵。在某些實(shí)施方案中，L2為第二自消耗間隔基，該第二自消耗間隔基將親水性自消耗連接子與肽連接子分開。在某些實(shí)施方案中，L2為氨基芐基氧基羰基連接子。在某些實(shí)施方案中，L2選自其中n為1或2。任選間隔基在式(I)或(Ia)中，L4為鍵或間隔基。在某些實(shí)施方案中，L4為鍵。在某些實(shí)施方案中，L4為間隔基，該間隔基可提供在藥物部分與靶向部分之間的距離。在某些實(shí)施方案中，間隔基選自烷基、經(jīng)取代的烷基、烯基、經(jīng)取代的烯基、炔基、經(jīng)取代的炔基、芳基、經(jīng)取代的芳基、環(huán)烷基、經(jīng)取代的環(huán)烷基、雜芳基、經(jīng)取代的雜芳基、雜環(huán)基、經(jīng)取代的雜環(huán)基及雜原子及其組合。間隔基在其原子組成上可為均勻或不均勻(例如間隔基僅含有碳原子或間隔基含有碳原子及間隔基上所呈現(xiàn)的一或多個(gè)雜原子)。優(yōu)選地，間隔基含有1至50個(gè)碳原子及選自氧、氮及硫的0至30個(gè)雜原子。間隔基也可為手性或非手性、直鏈、支鏈或環(huán)狀。在某些實(shí)施方案中，L4為選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺的間隔基。亞烯基的實(shí)例包括但不限于亞乙烯基(-CH＝CH-)、亞丙烯基(-CH2C＝C-)及丁-3-烯亞基(-CH2CH2C＝CH-)。亞炔基的實(shí)例包括但不限于亞乙炔基(-C≡C-)及亞丙炔基(-CH2C≡C-)。在某些實(shí)施方案中，L4為包含官能團(tuán)的間隔基，該官能團(tuán)可提供與肽連接基的終端的連接。諸如C(O)、C(O)-NH、S(O)2及S(O)2-NH那樣的官能團(tuán)可提供與肽連接基的終端的連接。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)、L4a-C(O)-NH、L4a-S(O)2、L4a-S(O)2-NH，其中L4a選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a選自聚亞烷基二醇、亞烷基、亞烯基、亞炔基及聚胺。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚亞烷基二醇。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為聚乙二醇。在某些實(shí)施方案中，間隔基具有式-CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-，其中m為0至30的整數(shù)。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為亞烷基。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C1-10亞烷基、C1-8亞烷基或C1-6亞烷基。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C4亞烷基、C5亞烷基或C6亞烷基。在某些實(shí)施方案中，L4為L4a-C(O)，其中L4a為C5亞烷基。?；鶈卧谑?I)或(Ia)中，A為?；鶈卧Ｔ谀承?shí)施方案中，?；鶈卧盇”包含硫原子及經(jīng)由自靶向部分衍生的硫原子連接至靶向部分。在所述實(shí)例中，在?；鶈卧c靶向部分之間形成二硫鍵。在某些實(shí)施方案中，A選自其中Q2為NH或O，每個(gè)q獨(dú)立為1至10的整數(shù)，且每個(gè)q1獨(dú)立為1至10的整數(shù)。在一些實(shí)施方案中，q為2至5的整數(shù)，諸如2、3、4或5。在一些實(shí)施方案中，q1為2至5的整數(shù)，諸如2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，A為其中Q2為NH或O且q為1至10的整數(shù)。在某些情況下，q為2至5的數(shù)字，諸如2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，A為其中Q2為NH或O且q為1至10的整數(shù)。在某些情況下，q為2至5的數(shù)字，諸如2、3、4或5。在某些實(shí)施方案中，A選自其中Q2為NH或O。藥物部分本發(fā)明實(shí)施方案的藥物綴合物在對應(yīng)藥物有效的情況下對于通常目的有效且具有優(yōu)良的功效，因?yàn)榘邢虿糠种兴逃械哪芰δ軌驅(qū)⑺幬镞f送至期望細(xì)胞，該藥物在期望細(xì)胞中具有特定益處。本發(fā)明實(shí)施方案中所使用的優(yōu)選藥物為細(xì)胞毒性藥物，諸如用于癌癥治療的那些細(xì)胞毒性藥物。此類藥物大體上包括DNA損傷劑、抗代謝劑、天然產(chǎn)物及其類似物。細(xì)胞毒性劑的某些類別包括例如酶抑制劑諸如二氫葉酸還原酶抑制劑、胸苷酸合成酶抑制劑、DNA嵌入劑、DNA裂解劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、蒽環(huán)類藥物、長春花類藥物、絲裂霉素類、博來霉素類、細(xì)胞毒性核苷、喋啶類藥物、亞二炔類、鬼臼毒素類、分化誘導(dǎo)劑及紫杉醇類。那些類別的某些有用成員包括例如甲胺喋呤、甲基葉酸、二氯甲胺喋呤、5-氟脲嘧啶、6-巰基嘌呤、阿糖胞苷、美法侖、環(huán)氧長春堿、leurosideine、放線菌素、柔紅霉素、多柔比星、絲裂霉素C、絲裂霉素A、洋紅霉素、氨基蝶呤、他利霉素、鬼臼毒素及鬼臼毒素衍生物諸如依托泊苷或磷酸依托泊苷、長春堿、長春新堿、長春地辛、紫杉醇、多西紫杉醇維甲酸、丁酸、N8-乙?；鶃喚?、喜樹堿及其類似物。其它藥物包括多拉司他汀(dolastatin)及倍癌霉素(duocarmycin)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可對期望化合物進(jìn)行化學(xué)修飾以便使得該化合物的反應(yīng)更加便利以意欲用于制備本發(fā)明的綴合物。在某些實(shí)施方案中，D為具有化學(xué)反應(yīng)性官能團(tuán)的藥物部分，經(jīng)由該官能團(tuán)將藥物鍵合至L1或X。在某些實(shí)施方案中，所述官能團(tuán)選自伯胺、仲胺、羥基及巰基。在某些實(shí)施方案中，所述官能團(tuán)為伯胺或仲胺。在某些實(shí)施方案中，所述官能團(tuán)為羥基。在某些實(shí)施方案中，所述官能團(tuán)為巰基。如上文所論述的那樣，親水性自消耗連接子通常將使用氧羰基(-O-C(O)-)終止。因此，含有氨基的藥物部分將易于與氧羰基反應(yīng)以形成氨基甲酸酯基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，D為含有氨基的藥物部分，其中將該藥物經(jīng)由氨基連接至L1或X。然而，若藥物部分不含有氨基，則L1的第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子可提供設(shè)計(jì)潛力用于可使用的更多種類的部分。在某些實(shí)施方案中，D為含有羥基或含有巰基的藥物部分，其中將該藥物經(jīng)由羥基或巰基連接至L1。代表性含有氨基的藥物包括絲裂霉素-C、絲裂霉素-A、柔紅霉素、多柔比星、氨基蝶呤、放線菌素、博來霉素、9-氨基喜樹堿、N8-乙?；鶃喚?、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺?；?、他利霉素、阿糖胞苷、多拉司他汀及其衍生物。含有氨基的藥物也包括非天然含有氨基的藥物的氨基衍生物。在某些實(shí)施方案中，D為倍癌霉素、多拉司他汀、微管結(jié)合素(tubulysin)、多柔比星(DOX)、紫杉醇或絲裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。代表性含有羥基的藥物包括依托泊苷、喜樹堿、紫杉醇、埃斯培拉霉素、1,8-二羥基-二環(huán)[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-酮(美國專利第5,198,560號)、鬼臼毒素、蛇形菌素、長春新堿、長春堿、嗎啉-多柔比星、N-(5,5-二乙酰氧基-戊基)多柔比星、倍癌霉素及其衍生物。代表性含有巰基的藥物包括埃斯培拉霉素及6-巰基嘌呤及其衍生物。用作本發(fā)明實(shí)施方案中的藥物的一組細(xì)胞毒性劑包括具有以下式的藥物：靶向部分本申請中所描述的靶向部分指與給定細(xì)胞群落(例如FRA表達(dá)細(xì)胞)特異性結(jié)合、復(fù)合、反應(yīng)或關(guān)聯(lián)的部分或分子。在本申請所描述的綴合物中，本申請所描述的靶向部分經(jīng)由連接子連接至綴合物中的藥物部分。在一些實(shí)施方案中，靶向部分能夠遞送藥物部分(例如用于治療性目的的藥物部分)至特定靶細(xì)胞群落，該特定靶細(xì)胞群落與該靶向部分鍵合、復(fù)合、反應(yīng)或關(guān)聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分為抗體(或抗體部分或抗體靶向部分)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分包含巰基(-SH)基團(tuán)(例如游離反應(yīng)性巰基(-SH)基團(tuán))或可經(jīng)修飾以包含此巰基。在一些實(shí)施方案中，靶向部分包含具有巰基(例如游離反應(yīng)性巰基)的抗體。在一些實(shí)施方案中，靶向部分包含游離硫基諸如具有游離巰基的抗體或可經(jīng)修飾以包含此硫醇基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，包含巰基或硫醇基團(tuán)的靶向部分經(jīng)由巰基中的硫原子鍵合至連接子。在一些實(shí)施方案中，靶向部分(例如抗體靶向部分)具有一或多個(gè)接附位點(diǎn)用于連接至藥物部分。例如，靶向部分T(例如抗體)可具有多個(gè)位點(diǎn)(例如多個(gè)巰基)用于連接至連接子-藥物部分(例如A-L4-L3-L2-X-L1-D，其中A適合于鍵合至靶向抗體的巰基)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分可具有1至20個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分可具有1至20、1至10、1至8、1至6、1至4、2至8、2至6或2至4個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分具有1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分具有2個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分具有1個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，靶向部分具有4個(gè)接附的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，接附的某些潛在位點(diǎn)不可易于鍵合至藥物部分。因此，靶向部分T中的接附位點(diǎn)的數(shù)目可導(dǎo)致其中接附的藥物部分的數(shù)目比接附的潛在位點(diǎn)的數(shù)目更少的藥物綴合物。在一些實(shí)施方案中，接附的位點(diǎn)中的一或多個(gè)可易于鍵合藥物部分。例如，抗體靶向部分可在抗體的每個(gè)鏈上具有一或兩個(gè)可易于經(jīng)由連接子鍵合至藥物部分的巰基。本申請所描述的抗體指經(jīng)由至少一個(gè)抗原識別位點(diǎn)能夠特異性結(jié)合至靶標(biāo)(即FRA)的免疫球蛋白分子，所述抗原識別位點(diǎn)位于免疫球蛋白分子的可變區(qū)中。如本申請所使用，術(shù)語“抗體”不僅涵蓋完整多克隆抗體或單克隆抗體，而且涵蓋其抗原結(jié)合片段(諸如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白質(zhì)及包含抗原識別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構(gòu)型。抗體包括任何類別的抗體諸如IgG、IgA或IgM(或其子類別)且該抗體不必具有任何特定類別。取決于其重鏈的恒定域的抗體氨基酸序列，可將免疫球蛋白指定給不同類別。存在五個(gè)主要類別的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且?guī)追N這些免疫球蛋白可進(jìn)一步分為子類別(同工型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應(yīng)于免疫球蛋白的不同類別的重鏈恒定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。免疫球蛋白的不同類別的亞單位結(jié)構(gòu)及三維構(gòu)型是已知的。本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)可含有單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等)、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體(例如完整人類抗體)、單鏈(ScFv)、雙特異性抗體、多特異性抗體、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白質(zhì)及包含所需特異性的抗原識別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任何其它修飾構(gòu)型?？贵w可為鼠類、大鼠、駱駝、人類或任何其它來源(包括人源化抗體)。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所使用的抗體(或抗體靶向部分)為以下抗體中的任一個(gè)：雙特異性抗體、多特異性抗體、單鏈、雙官能及嵌合和人源化分子，其對由抗體的至少一個(gè)高變區(qū)(HVR)或互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)授予的多肽具有親合力。本申請中所使用的抗體也包括單域抗體，這些抗體為抗體重鏈的可變域或者抗體輕鏈的可變域。Holt等人,TrendsBiotechnol.21:484-490,2003。在本領(lǐng)域中也已知制備包含抗體重鏈的可變域或者抗體輕鏈的可變域的域抗體的方法，這些域抗體含有抗體中六個(gè)天然存在的HVR或CDR中的三個(gè)。請參見例如Muyldermans,Rev.Mol.Biotechnol.74:277-302,2001。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為單克隆抗體。如本申請所使用，單克隆抗體指大體上均勻的抗體的抗體，即除可能天然存在的可少量呈現(xiàn)的突變外，構(gòu)成群體的各個(gè)抗體是相同的。此外，與通常針對不同決定因素(抗原決定部位)包括不同抗體的多克隆抗體制品對比，單克隆抗體并非分散抗體的混合物。修飾語“單克隆”指示抗體的特征為從抗體的大體均勻群體中獲得且不被看作需要通過任何特定方法生產(chǎn)抗體。例如，本申請中所使用的單克隆抗體可通過Kohler及Milstein,1975,Nature,256:495首次描述的雜交瘤方法制備或可通過諸如美國專利第4,816,567號中所描述的重組DNA方法制備。單克隆抗體也可使用例如McCafferty等人,1990,Nature,348:552-554中所描述的技術(shù)與所產(chǎn)生的噬菌體抗體庫分離。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為嵌合抗體。如本申請所使用，嵌合抗體指具有來自第一物種的可變區(qū)或可變區(qū)的部分及來自第二物種的恒定區(qū)的抗體。完整嵌合抗體包含嵌合輕鏈的兩個(gè)復(fù)本及嵌合重鏈的兩個(gè)復(fù)本。在本領(lǐng)域中已知嵌合抗體的生產(chǎn)(Cabilly等人(1984),Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:3273-3277；Harlow及Lane(1988),Antibodies:aLaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory)。通常，在這些嵌合抗體中，輕鏈及重鏈兩者的可變區(qū)模擬自哺乳動(dòng)物的一個(gè)物種衍生的抗體的可變區(qū)，而恒定部分與自另一物種衍生的抗體中的序列同源。此類嵌合形式的一種明顯優(yōu)勢在于例如可使用可易于取得的雜交瘤或來自非人類宿主有機(jī)體的B細(xì)胞與自例如人類細(xì)胞制品衍生的恒定區(qū)的結(jié)合便于自目前已知的來源衍生可變區(qū)。盡管可變區(qū)具有易于制備的優(yōu)勢且特異性不受其來源影響，但是當(dāng)注射抗體時(shí)人類恒定區(qū)在人類受試者中引起免疫反應(yīng)的可能性比非人類來源的恒定區(qū)更小。然而，該定義并不被限于此特定實(shí)例。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為人源化抗體。如本申請所使用，人源化抗體指非人類(例如鼠類)抗體的形式，這些非人類抗體為特定嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其含有自非人類免疫球蛋白衍生的最小序列的片段(諸如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗體的其它抗原結(jié)合子序列)。在很大部分上，人源化抗體為人類免疫球蛋白(接受體抗體)，其中來自接受體的HVR或CDR的殘基由來自諸如小鼠、大鼠或兔那樣的非人類物種(供體抗體)的HVR或CDR的殘基替代，該人源化抗體具有期望特異性、親合力及能力。在一些實(shí)施方案中，人類免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基由對應(yīng)的非人類殘基替代。此外，人源化抗體可包含在接受體抗體及輸入HVR或CDR或框架序列中皆無法找到的殘基，但包括這些殘基以進(jìn)一步改善及最佳化抗體效能。大體而言，人源化抗體將包含大體所有至少一個(gè)且通常兩個(gè)可變域，其中所有或大體所有HVR或CDR區(qū)對應(yīng)于非人類免疫球蛋白的那些區(qū)且所有或大體所有FR區(qū)為人類免疫球蛋白一致序列的那些區(qū)。人源化抗體最佳也將包含免疫球蛋白恒定區(qū)或恒定域(Fc)中的至少一部分，通常為人類免疫球蛋白的恒定區(qū)或恒定域?？贵w可具有如WO99/58572中所描述的修飾的Fc區(qū)。人源化抗體的其它形式具有一或多個(gè)HVR或CDR(一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè))，關(guān)于原始抗體改變這些HVR或CDR，此也稱為“衍生自”原始抗體中的一或多個(gè)HVR或CDR的一或多個(gè)HVR或CDR。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)為人類抗體。如本申請所使用，人類抗體意指具有氨基酸序列的抗體，該氨基酸序列對應(yīng)于由人類產(chǎn)生的抗體和/或已使用本領(lǐng)域中已知的制備人類抗體的任何技術(shù)制備。本申請所使用的人類抗體包括包含至少一個(gè)人類重鏈多肽或至少一個(gè)人類輕鏈多肽的抗體。一個(gè)此類實(shí)例為包含鼠類輕鏈及人類重鏈多肽的抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的各種技術(shù)產(chǎn)生人類抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，人類抗體選自噬菌體抗體庫，其中該噬菌體抗體庫表達(dá)人類抗體(Vaughan等人,1996,NatureBiotechnology,14:309-314；Sheets等人,1998,PNAS,(USA)95:6157-6162；Hoogenboom及Winter,1991,J.Mol.Biol.,227:381；Marks等人,1991,J.Mol.Biol.,222:581)。也可通過將人類免疫球蛋白基因座引入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)中來制備人類抗體，在這些轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體內(nèi)已部分或完全滅活內(nèi)源性免疫球蛋白基因。在美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號及第5,661,016號中描述此方法。可選擇地，可通過永生化針對靶抗原產(chǎn)生抗體的人類B淋巴細(xì)胞制備人類抗體(此類B淋巴細(xì)胞可自個(gè)體回收或可在體外已被免疫)。參見例如Cole等人,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,第77頁(1985)；Boerner等人,1991,J.Immunol.,147(1):86-95；及美國專利第5,750,373號。在某些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)特異性結(jié)合至葉酸受體α(即FRA)(例如人FRA)。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的靶向部分中所包括或使用的抗體(或抗體靶向部分)特異性結(jié)合至FRA的胞外域(例如人FRA的胞外域)。本申請使用的“FRA”是指野生型序列以及天然存在的變體序列兩者。由本發(fā)明的抗體所識別的FRA的非限制性實(shí)例為人FRA(AccessionNo.P15328)。如下提供了人葉酸受體α的氨基酸序列：SEQIDNO:35(人FRA)在一些實(shí)施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體結(jié)合至人細(xì)胞(例如，人癌細(xì)胞)的細(xì)胞表面上表達(dá)的成熟FRA(例如人FRA)。在某些實(shí)施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體結(jié)合人癌細(xì)胞(例如卵巢癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、子宮癌細(xì)胞、睪丸絨毛膜癌細(xì)胞、室管膜瘤細(xì)胞、間皮瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞或腎細(xì)胞癌瘤細(xì)胞)的細(xì)胞表面上表達(dá)的成熟FRA。抗-FRA抗體及其氨基酸序列的實(shí)例如下在表1中提供。表1:抗-FRA抗體的氨基酸序列IgG4p表示具有Ser228至Pro的突變(S228P)的人類IgG4抗體，該突變將防止Fab臂與另一IgG4在體內(nèi)交換(Stubenrauchetal.,(2010)DrugMetabDispos.38(1):84-91)。如下顯示的序列的下劃線部分表示可變區(qū)的序列。如下顯示的序列的粗體部分表示CDR。SEQIDNO:1(hLK26-IgG1重鏈):EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:2(hLK26-IgG4p重鏈):EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:3(hLK26-κ輕鏈):DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLPEDIATYYCFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNO:4(26B3(小鼠)IgG1重鏈):GPELVKPGASVKISCKASDYSFTWVMQSHGKSLEWIGRATLTVDKSSSTAHMELRSLASEDSAVYFCARWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKSEQIDNO:5(26B3(小鼠)κ輕鏈):PASLSASVGETVTITCWYQQKQGISPQLLVYGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCFGGGSKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNECSEQIDNO:6(hMov19-IgG1重鏈):QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTWVKQSPGQSLEWIGATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:7(hMov19-κ輕鏈):DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCWYHQKPGQQPRLLIYGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNO:8(hLK26重鏈可變區(qū))EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSSEQIDNO:9(hLK26輕鏈可變區(qū))DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCFGQGTKVEIKSEQIDNO:10(26B3重鏈可變區(qū))GPELVKPGASVKISCKASDYSFTWVMQSHGKSLEWIGRATLTVDKSSSTAHMELRSLASEDSAVYFCARWGQGTTLTVSSSEQIDNO:11(26B3輕鏈可變區(qū))PASLSASVGETVTITCWYQQKQGISPQLLVYGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCFGGGSKLEIKSEQIDNO:12(hMov19重鏈可變區(qū))QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTWVKQSPGQSLEWIGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRWGQGTTVTVSSSEQIDNO:13(hMov19輕鏈可變區(qū))DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCWYHQKPGQQPRLLIYGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCFGGGTKLEIK上述抗-FRA抗體的CDR提供于下表2。表2:抗-FRA抗體的CDR的氨基酸序列重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列如下提供：SEQIDNO:32(IgG1重鏈恒定區(qū))ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:33(IgG4p重鏈恒定區(qū))ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:34(κ輕鏈恒定區(qū))RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體為抗體hLK26、hMov19或由任一這些抗體衍生的抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體為抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)。抗體hLK26、hMov19和26B3的輕鏈和重鏈可變序列如上在表1中闡述。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈和/或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于所述抗體hLK26或hMov19(或自這些抗體的任一者衍生的抗體)的輕鏈和重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和/或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)輕鏈或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含來自于抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)，諸如如上在表2中闡述的CDR序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體hLK26或hMov19的片段或區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的片段或區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述片段包含抗體hLK26或hMov19的輕鏈可變區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述片段包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈可變區(qū)。在另一實(shí)施方案中，所述片段包含抗體hLK26或hMov19的重鏈可變區(qū)。在另一實(shí)施方案中，所述片段包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體hLK26或hMov19的輕鏈和重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含抗體26B3或自抗體26B3衍生的抗體(例如人源化或嵌合抗體)的輕鏈和重鏈可變區(qū)。在另一實(shí)施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈和/或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在另一實(shí)施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈或重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在另一實(shí)施方案中，所述片段包含來自于抗體hLK26、26B3或hMov19的輕鏈和重鏈的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，衍生自抗體hLK26、26B3或hMov19的一個(gè)或多個(gè)HVR(或CDR)與hLK26、26B3或hMov19的至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或至少六個(gè)HVR(或CDR)是至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:14-16的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:17-19的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:14-16的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:17-19的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:8的三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:9的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:14中闡述的重鏈可變區(qū)(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:15中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:16中闡述的VHCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:17中闡述的輕鏈可變區(qū)(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:18中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:19中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:14中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:15中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:16中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:17中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:18中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:19中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:8的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:9的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，和/或輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:8的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQIDNO:3的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:1或2的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含:重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:20-22的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:23-25的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:20-22的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:23-25的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:10的三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:11的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:20中闡述的重鏈可變區(qū)(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:21中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:22中闡述的VHCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:23中闡述的輕鏈可變區(qū)(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:24中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:25中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:20中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:21中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:22中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:23中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:24中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:25中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:10的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:11的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸SEQIDNO:10的序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸SEQIDNO:11的序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:10的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:26-28的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:29-31的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:26-28的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:29-31的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的三個(gè)HVR(或CDR)；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:12的三個(gè)HVR(或CDR)；以及輕鏈可變區(qū)，其包含來自SEQIDNO:13的三個(gè)HVR(或CDR)。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:26中闡述的重鏈可變區(qū)(VH)CDR1序列、在SEQIDNO:27中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:28中闡述的VHCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:29中闡述的輕鏈可變區(qū)(VL)CDR1序列、在SEQIDNO:30中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:31中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:26中闡述的VHCDR1序列、在SEQIDNO:27中闡述的VHCDR2序列和在SEQIDNO:28中闡述的VHCDR3序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含在SEQIDNO:29中闡述的VLCDR1序列、在SEQIDNO:30中闡述的VLCDR2序列和在SEQIDNO:31中闡述的VLCDR3序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:12的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:13的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；或輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:32或33的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:34的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；和/或輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；和/或輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含與SEQIDNO:6的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性的氨基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQIDNO:7的序列至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％同一性室溫氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；和/或輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：重鏈，其包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)，其包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，包括于或用于本申請所述的靶向部分(或抗體靶向部分)中的抗-FRA抗體特異性地結(jié)合至由癌細(xì)胞(例如FRA陽性卵巢癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、子宮癌細(xì)胞、睪丸絨毛膜癌細(xì)胞、室管膜瘤細(xì)胞、間皮瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞或腎細(xì)胞癌細(xì)胞)表達(dá)的FRA(諸如人FRA)。如本申請所使用，關(guān)于序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”及“同源性”指若需要在對齊序列及引進(jìn)間隙后與特定序列中的氨基酸殘基相同的候選序列中的氨基酸殘基的百分比以實(shí)現(xiàn)最大百分比序列同一性，而不考慮任何保守取代作為序列同一性的部分?？砂幢绢I(lǐng)域內(nèi)的各種方式實(shí)現(xiàn)意欲用于確定百分比氨基酸序列同一性的對齊，例如使用諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)軟件那樣的公用計(jì)算機(jī)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定用于測量對齊的適宜參數(shù)，包括在所比較的序列的全長上實(shí)現(xiàn)最大對齊所需的任何算法。在一些實(shí)施方案中，本申請所描述的CDR為KabatCDR、ChothiaCDR或接觸CDR。在一些實(shí)施方案中，CDR為KabatCDR。在一些實(shí)施方案中，CDR為ChothiaCDR。在其它實(shí)施方案中，CDR為KabatCDR與ChothiaCDR的組合(也稱為“組合CDR”或“延伸CDR”)。換言之，對于含有超過一個(gè)CDR的任何給定實(shí)施方案，CDR可為Kabat、Chothia和/或組合中的任一個(gè)。該領(lǐng)域中已知確定CDR的方法?？贵w的可變區(qū)指單獨(dú)或組合的抗體輕鏈的可變區(qū)或抗體重鏈的可變區(qū)。大體而言，可變區(qū)調(diào)節(jié)抗原結(jié)合及定義對于其特定抗原的特定抗體的特異性?？勺儏^(qū)可具有相對無變化的延伸，稱為框架區(qū)(FR)(例如15-30個(gè)氨基酸之FR)，所述框架區(qū)通過稱為“高變區(qū)”(“HVR”)的極端變化性的較短區(qū)分開(例如HVR每個(gè)為9-12個(gè)氨基酸長)。在一些實(shí)施方案中，天然重鏈及輕鏈的可變域每個(gè)包含四個(gè)FR，主要采用β片狀構(gòu)型，由三個(gè)高變區(qū)連接，形成連接β片狀結(jié)構(gòu)的環(huán)及在一些情況中形成β片狀結(jié)構(gòu)的一部分。每個(gè)鏈上的高變區(qū)可通過FR緊密固持于一起及與其它鏈上的高變區(qū)一起貢獻(xiàn)于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成(請參見Kabat等人,SequencesofProteinsofofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不可直接涉及結(jié)合抗體至抗原，但是可展示各種效應(yīng)功能，諸如抗體在抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)中的參與?？贵w的恒定區(qū)指單獨(dú)或組合的抗體輕鏈的恒定區(qū)或抗體重鏈的恒定區(qū)?？贵w的恒定區(qū)大體上提供結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性及其它生物功能，諸如抗體鏈關(guān)聯(lián)、分泌、經(jīng)胎盤移動(dòng)及補(bǔ)充結(jié)合，但是不涉及結(jié)合至抗原。恒定區(qū)的基因中的氨基酸序列及對應(yīng)的外顯子序列將取決于其所衍生來自的物種；然而，在物種內(nèi)部針對特定恒定區(qū)將相對限制氨基酸序列中導(dǎo)致異型的變異。每個(gè)鏈的可變區(qū)通過連接多肽序列接合至恒定區(qū)。通過輕鏈基因中的“J”序列及重鏈基因中的“D”序列及“J”序列的組合編碼連接序列。當(dāng)本申請所使用時(shí)的術(shù)語“高變區(qū)”(“HVR”)指導(dǎo)致抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。高變區(qū)大體上包含來自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基(例如VL中圍繞殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)周圍及VH中圍繞31-35B(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)周圍(在一個(gè)實(shí)施方案中，H1圍繞31-35周圍)；Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))和/或來自“高變環(huán)”的那些殘基(例如VL中的殘基26-32(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)及VH中的26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。存在多種方式用于確定CDR，例如基于交叉物種序列變化性的途徑(即Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,(第5版,1991,NationalInstitutesofHealth,BethesdaMD))；及基于抗原-抗體復(fù)合物的結(jié)晶研究的途徑(Al-lazikani等人(1997)J.Mol.Biol.273:927-948))。作為Kabat互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的HVR基于序列變化性且最常使用(前述Kabat等人)。Chothia反而指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia及LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMHVR表示KabatCDR與Chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折中且由OxfordMolecular的AbM抗體建模軟件使用?！敖佑|”HVR基于可得復(fù)晶體結(jié)構(gòu)的分析。如本申請所使用，CDR可為由上述措施中的任一個(gè)或上述措施中的任兩者或三者的組合定義的CDR。CDR可為KabatCDR、ChothiaCDR或接觸CDR。下文注釋來自這些HVR中的各者的殘基。HVR可包含如下“延伸HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)及89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(優(yōu)選實(shí)施方案)(H2)及93-102、94-102或95-102(H3)。根據(jù)前述Kabat等人針對這些延伸HVR定義中的各者編號可變域殘基。在一些實(shí)施方案中，抗體為用半胱氨酸工程化的抗體，該抗體在重鏈或輕鏈(例如重鏈和/或輕鏈恒定區(qū)，和/或重鏈和/或輕鏈可變區(qū))中包含游離半胱氨酸氨基酸?？贵w中游離半胱氨酸氨基酸的工程化可提供反應(yīng)性親電子官能團(tuán)，該官能團(tuán)可進(jìn)一步在特異性位點(diǎn)處賦能諸如抗體-藥物綴合物(ADC)化合物那樣的的抗體綴合物化合物與藥物分子(即位點(diǎn)特異性綴合)。用半胱氨酸工程化的抗體及產(chǎn)生用半胱氨酸工程化的抗體的手段的實(shí)例參見Junutula,JR等人,(2008)Nat.Biotech.26(8):925-932；Lyons,A等人,(1990)Prot.Engineering3(8):703-708；及Stimmel,JB等人,(2000)J.Biol.Chem.275(39):30445-30450。在一些實(shí)施方案中，對抗體進(jìn)行工程化以用一或多個(gè)半胱氨酸殘基代替重鏈(例如在恒定區(qū)中)或輕鏈(例如在恒定區(qū)中)上的氨基酸殘基(例如天然存在的氨基酸)，前提條件是半胱氨酸殘基的反應(yīng)性硫醇基團(tuán)對抗體折疊或組裝幾乎沒有影響且不明顯改變抗原結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，針對新引進(jìn)的工程化的半胱氨酸硫醇基團(tuán)的反應(yīng)性評估半胱氨酸殘基。硫醇反應(yīng)性值為0至1.0范圍內(nèi)的相對數(shù)值項(xiàng)且可針對任何用半胱氨酸工程化的抗體測量該值。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的用半胱氨酸工程化的抗體的硫醇反應(yīng)性值為約0.6至1.0、0.7至1.0或0.8至1.0中的任一個(gè)。WO2006/034488、WO2010/141902、WO2013/093809、WO2008/038024、WO2008/070593、WO2009/092011、WO2011/005481及WO2011/156328提供針對位點(diǎn)特異性綴合的用半胱氨酸工程化的抗體?？赏ㄟ^誘變處理母抗體的核酸序列制備用半胱氨酸工程化的抗體，誘變處理包括：由半胱氨酸替代一或多個(gè)氨基酸殘基以編碼用半胱氨酸工程化的抗體；表達(dá)用半胱氨酸工程化的抗體；及分離用半胱氨酸工程化的抗體。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸工程化的抗體為抗體片段；例如，F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’)2、Fv或單鏈(ScFv)抗體。在一些實(shí)施方案中，對抗體進(jìn)行工程化以包括重鏈中的氨基酸殘基T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442以及輕鏈中的氨基酸殘基L201、V205和T206(EU編號)的一或多個(gè)半胱氨酸代替。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本申請所述的抗體(例如抗體hLK26、hMov19，或自抗體26B3衍生的抗體諸如人源化或嵌合抗體)或自任一這些抗體衍生的抗體進(jìn)行工程化以包含一或多個(gè)游離半胱氨酸殘基。所述工程化的半胱氨酸殘基也稱為“添加的半胱氨酸殘基”。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgG重鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個(gè)氨基酸殘基：40、43、84、88、103、112、113、114、115、131、132、133、134、135、136、137、138、139、161、168、172、234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、283、284、287、289、292、293、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332、333、334、335、336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、370、373、376、378、380、382、383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、414、416、418、419、421、422、428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根據(jù)Kabat等人(1991,NIHPublication91-3242,NationalTechnicalInformationService,Springfield,VA,以下稱為“Kabat”)的EU索引編號。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgG重鏈的以下位置中的任何組合處的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)或十個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基：40、43、84、88、103、112、113、114、115、131、132、133、134、135、136、137、138、139、161、168、172、234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、283、284、287、289、292、293、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332、333、334、335、336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、370、373、376、378、380、382、383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、414、416、418、419、421、422、428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根據(jù)Kabat的EU索引編號。在一些實(shí)施方案中，在IgG重鏈(例如人IgG1、人IgG2、人IgG3、人IgG4或人IgG4p)的任意一個(gè)或多個(gè)以下位置的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代：T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442；所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。氨基酸的突變位置(EU編號)和側(cè)翼序列列于下表3。表3:氨基酸的突變位置(EU編號)和側(cè)翼序列在一些實(shí)施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本申請所述的抗-FRA抗體包含：重鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列；以及輕鏈恒定區(qū)，其包含SEQIDNO:34的氨基酸序列。在可針對位點(diǎn)特異性綴合進(jìn)行工程化為半胱氨酸的IgG重鏈上的額外位置包括(EU編號)118-215、234-239、246、248、249、254、265、267、269、270、273、276、278、279、282、283、284、286、287、289、292、293、294、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332-337、339、341-447(在US2012/0148580A1；WO2013/093809A1；US2009/0258420A1；US7521541B2；US7855275B2；US2011/0137017A1；US2012/0213705A1；US2011/0033378A1；US8455622B2中描述)。在可針對位點(diǎn)特異性綴合進(jìn)行工程化為半胱氨酸的IgG輕鏈上的額外位置包括(EU編號)108-211(在WO2013/093809A1；US2009/0258420A1；US7855275B2；US8455622B2中描述)。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGλ輕鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個(gè)氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、125、144、149、155、158、161、168、185、188、189、191、197、205、206、207、208和210，根據(jù)Kabat的EU索引編號。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGλ輕鏈的以下位置中的任何組合處的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)或十個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、125、144、149、155、158、161、168、185、188、189、191、197、205、206、207、208和210，根據(jù)Kabat的EU索引編號。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任一或多個(gè)處的一或多個(gè)氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、144、168、183和210，根據(jù)Kabat的編號。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任何組合處的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)或十個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基：7、15、20、22、25、43、110、111、144、168、183和210，根據(jù)Kabat的編號。在一些實(shí)施方案中，用半胱氨酸殘基替代IgGκ輕鏈的以下位置中的任一或多處的一或多個(gè)氨基酸殘基：L201、V205和T206，根據(jù)Kabat的EU索引編號。氨基酸的突變位置(EU編號)和側(cè)翼序列列于下表4。表4:氨基酸的突變位置(EU編號)和側(cè)翼序列EU編號側(cè)翼序列SEQIDNO:L201C(CL)EVTHQGCSSPVTKSFNRGEC51T206C(CL)EVTHQGLSSPVCKSFNRGEC52V205C(CL)EVTHQGLSSPCTKSFNRGEC53在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸或在所述輕鏈恒定區(qū)的選自L201和T206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)，其中在所述重鏈恒定區(qū)的選自T155、S157、S165、T169、T197、T199和S442的一個(gè)或多個(gè)氨基酸以及在所述輕鏈恒定區(qū)的選自L201和T206的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，且其中所述編號是根據(jù)Kabat的EU索引。在一些實(shí)施方案中，抗體為分離的。分離的抗體指已自天然環(huán)境的組分識別及分離和/或回收的抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為大體純的。術(shù)語“大體純的”可指材料至少50％純的(即無污染物)，更優(yōu)選地至少90％純的，更優(yōu)選地至少95％純的，更優(yōu)選地至少98％純的，更優(yōu)選地至少99％純的。在一些實(shí)施方案中，抗體為單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人類抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為IgG(諸如IgG1、IgG2或IgG4)。在一些實(shí)施方案中，抗體為人類IgG，諸如人類IgG1。在某些實(shí)施方案中，所述抗體為人IgG，其包含IgG4p恒定域。本申請所描述的抗體可進(jìn)一步包括經(jīng)修飾即通過任何類型分子的共價(jià)接附的類似物及衍生物，只要此共價(jià)接附容許抗體保持其抗原結(jié)合免疫特異性。例如，抗體的衍生物及類似物包括已進(jìn)一步經(jīng)修飾例如糖基化、乙?；?、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通過已知保護(hù)基/阻斷基進(jìn)行衍生化、蛋白質(zhì)裂解、連接至細(xì)胞配體或其它蛋白質(zhì)等的那些衍生物及類似物。可通過已知技術(shù)進(jìn)行化學(xué)修飾，這些技術(shù)包括但不限于特異性化學(xué)裂解、乙?；?、調(diào)配等。另外，類似物或衍生物可含有一或多個(gè)非天然氨基酸。在一些實(shí)施方案中，式(I)-(V)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體中的抗體靶向部分T為與藥物部分部分綴合的抗體，以使得其可進(jìn)一步連接至額外藥物部分。因此，在一些實(shí)施方案中，式(I)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體意欲涵蓋式(Ia)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。同樣，式(II)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體意欲涵蓋式(IIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；式(III)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體意欲涵蓋式(IIIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；式(IV)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體意欲涵蓋式(IVa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；及式(V)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體意欲涵蓋式(Va)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。本領(lǐng)域中已知制備靶向部分(例如抗體、多肽、肽或非肽基部分)的方法，諸如美國專利第7,674,605號、美國專利第7,982,017號、PCT/US2007/013587(專利公開第WO2007/146172號)或PCT/US2008/087515(專利公開第WO2009/079649號)中所描述的方法。代表性連接子在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-”或“-A-L4-L3-”部分為：在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的化合物中的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實(shí)例中，本公開提供式(III)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分。在某些實(shí)例中，在式(III)中，T為抗體。在一些實(shí)施方案中，T為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，T為抗體hLK26或hMOV19。在一些實(shí)施方案中，T為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實(shí)施方案中，本申請?zhí)峁┝耸?IIIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實(shí)施方案中，p為1至8。在一些實(shí)施方案中，p為1至6。在一些實(shí)施方案中，p為1至4。在一些實(shí)施方案中，p為2至4。在一些實(shí)施方案中，p為1、2、3或4。在一些實(shí)施方案中，p為2。在一些實(shí)施方案中，p為3。在一些實(shí)施方案中，p為4。在某些實(shí)例中，在式(IIIa)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代；或hMOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，所述抗-FRA抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(III)或(IIIa)化合物可使用合成中間體諸如式(VI)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(IX)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)化合物的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實(shí)例中，本公開提供式(IV)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分。在某些實(shí)例中，在式(IV)中，T為抗體。在一些實(shí)施方案中，T為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實(shí)施方案中，本申請?zhí)峁┝耸?IVa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實(shí)施方案中，p為1至8。在一些實(shí)施方案中，p為1至6。在一些實(shí)施方案中，p為1至4。在一些實(shí)施方案中，p為2至4。在一些實(shí)施方案中，p為1、2、3或4。在一些實(shí)施方案中，p為2。在一些實(shí)施方案中，p為3。在一些實(shí)施方案中，p為4。在某些實(shí)例中，在式(IVa)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代；或MOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(IV)或(IVa)化合物可使用合成中間體諸如式(VII)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(X)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實(shí)例中，式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)化合物的“-A-L4-L3-L2-X-L1-D”部分為：在所述實(shí)例中，本公開提供式(V)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分。在某些實(shí)例中，在式(V)中，T為抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實(shí)施方案中，本申請?zhí)峁┝耸?Va)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中T為靶向部分且p為1至20。在一些實(shí)施方案中，p為1至8。在一些實(shí)施方案中，p為1至6。在一些實(shí)施方案中，p為1至4。在一些實(shí)施方案中，p為2至4。在一些實(shí)施方案中，p為1、2、3或4。在一些實(shí)施方案中，p為2。在一些實(shí)施方案中，p為3。在一些實(shí)施方案中，p為4。在某些實(shí)例中，在式(Va)中，T為抗體，任選地其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為hLK26或hMOV19或其衍生物，或hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，或MOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，所述抗體為26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在某些實(shí)施方案中，式(I)或(Ia)化合物諸如式(V)或(Va)化合物可使用合成中間體諸如式(VIII)化合物或其鹽或溶劑化物和/或式(XI)化合物或其鹽或溶劑化物來制備。在某些實(shí)施方案中，本申請所述的式(I)或(Ia)化合物或其任何變體或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體可使用式(XII)化合物制備：其中R為NO2或NH2?？芍苽浜?或調(diào)配式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物作為藥用鹽。藥用鹽為化合物的游離堿形式的無毒鹽，所述鹽具有游離堿的期望藥理學(xué)活性。這些鹽可衍生自無機(jī)酸或有機(jī)酸。藥用鹽的非限制性實(shí)例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、一氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽及扁桃酸鹽。其它適宜的藥用鹽的列表參見Remington’sPharmaceuticalSciences,第17版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.,1985。對于含有堿性氮的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)中的任一個(gè)的化合物，可通過本領(lǐng)域中可得的任何適宜方法制備藥用鹽，例如使用無機(jī)酸處理游離堿，所述無機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等，或使用有機(jī)酸處理游離堿，所述有機(jī)酸諸如乙酸、苯基乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、羥基乙磺酸、丁二酸、戊酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、油酸、棕櫚酸、月桂酸、吡喃糖苷酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(諸如扁桃酸、檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(諸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(諸如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如月桂磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸或乙磺酸)或酸的任何可兼容混合物(諸如本申請實(shí)施例所提供的那些酸)及根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)水平被視為等效或可接受的代替的任何其它酸及其混合物。也提供包含式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的一或多種化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的組合物。在式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體中，靶向部分可具有一或多個(gè)接附的位點(diǎn)用于連接至藥物部分。取決于在形成綴合物中靶向部分中的接附位點(diǎn)的可接近性及藥物部分的相對濃度，接附位點(diǎn)的一部分不可在所形成的綴合物中鍵合至藥物部分?？尚纬稍诿總€(gè)靶向部分處具有各種數(shù)目的藥物部分的化合物的混合物。因此，也提供組合物，該組合物包含式(Ia)-(Va)的一或多種化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。例如，對于具有4個(gè)接附的位點(diǎn)的靶向分子，組合物可包含選自以下化合物中的一或多種化合物：式(Ia)的化合物，其中p為1；式(Ia)的化合物，其中p為2；式(Ia)的化合物，其中p為3；及式(Ia)的化合物，其中p為4?？烧{(diào)節(jié)組合物中的化合物的相對量以實(shí)現(xiàn)藥物部分與靶向部分之間的理想比例。在一些實(shí)施方案中，組合物主要包含化合物中的一種或兩種。本發(fā)明的化合物或組合物中的“藥物-抗體比例”(DAR)定義為化合物或組合物中的藥物部分與化合物或組合物中的抗體之間的摩爾比例。在抗體具有超過一個(gè)接附的位點(diǎn)的情況下，可將超過一個(gè)藥物部分連接至每個(gè)抗體。在一些實(shí)例中，獲得包含超過一種抗體-藥物綴合物(ADC)分子的混合物?？赏ㄟ^本領(lǐng)域中已知的分析方法例如Jeffrey等人,Bioconjug.Chem.24(7):1256-1263(2013)及Sun等人,Bioconjug.Chem.16(5):1282-1290(2005)中所描述的方法測量抗體-藥物綴合物的藥物-抗體比例。在一些實(shí)施方案中，包含本申請所詳細(xì)描述的一或多種ADC的組合物所具有的平均DAR為約0.5至約6、約1至約5、約1至約4、約1.5至約3.5或約2至約4。在一些實(shí)施方案中，所述組合物所具有的平均DAR為約1.5至約3.5、或約2至約3.5、或約2.7至約3.5、或約2至約3、或約3至約3.3、或約2、或約3。在一些其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物所具有的平均DAR為約2.5±10％(例如，約2.25至約2.75)。在一些實(shí)施方案中，靶向抗體含有用半胱氨酸工程化的接附位點(diǎn)及組合物所具有的平均DAR為約1.6至約2.1或約2.0。藥物組合物和治療方法出于治療的目的，實(shí)施方案的藥物組合物包含至少一種式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其藥用鹽。藥物組合物可進(jìn)一步包含一或多種藥用賦形劑或藥用載體。藥用賦形劑為一種無毒及以其它方式在生物學(xué)上適合于給藥于受試者的物質(zhì)。此類賦形劑促進(jìn)本申請所描述的化合物的給藥及可與活性成份相容。藥用賦形劑的實(shí)例包括穩(wěn)定劑、潤滑劑、表面活性劑、稀釋劑、抗氧化劑、粘合劑、著色劑、填充劑、乳化劑或味覺改良劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)實(shí)施方案的藥物組合物為無菌組合物。可使用已知混合技術(shù)或?qū)Ρ绢I(lǐng)域技術(shù)人員變得可用的技術(shù)制備藥物組合物。也通過實(shí)施方案涵蓋無菌組合物，包括符合管理此類組合物的國家及當(dāng)?shù)胤傻慕M合物。本申請所描述的藥物組合物及化合物可調(diào)配為適宜藥學(xué)溶劑或載體中的溶液、乳液、混懸液、分散液或包合復(fù)合物(諸如環(huán)糊精)或調(diào)配為與固體載體一起的丸劑、片劑、口含劑、栓劑、藥囊、糖衣片劑、顆粒、粉末、復(fù)溶用粉末或膠囊，根據(jù)本領(lǐng)域中已知的常規(guī)方法用于制備各種劑型?？赏ㄟ^遞送的適宜途徑(諸如口服、胃腸外、直腸、鼻道、局部或眼睛途徑)或通過吸入給藥實(shí)施方案的藥物組合物。優(yōu)選地，針對靜脈或口服給藥調(diào)配組合物。對于口服給藥，可按諸如片劑或膠囊的固體形式或作為溶液、乳液或混懸液提供實(shí)施方案的化合物。為制備口服組合物，可調(diào)配實(shí)施方案的化合物以得到劑量，例如每日約0.01至約50mg/kg或每日約0.05至約20mg/kg或每日約0.1至約10mg/kg。口服片劑可包括與可兼容藥用賦形劑混合的活性成份，這些賦形劑諸如稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑及防腐劑。適宜惰性填充劑包括碳酸鈉及碳酸鈣、磷酸鈉及磷酸鈣、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露糖醇、山梨糖醇等。示例性液體口服賦形劑包括乙醇、甘油、水等。示例性崩解劑為淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥基乙酸淀粉鈉、微晶纖維素及海藻酸。粘合劑可包括淀粉及明膠。若存在，則潤滑劑可為硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。若需要，則片劑可包衣有諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯那樣的材料以延遲胃腸道內(nèi)的吸收或可包衣有腸溶衣。對于口服給藥的膠囊包括硬明膠膠囊及軟明膠膠囊。為制備硬明膠膠囊，可將活性成份與固體、半固體或液體稀釋劑混合。可通過將活性成份與水、油(諸如花生油或橄欖油)、液體石蠟、短鏈脂肪酸的單甘油酯及二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合制備軟明膠膠囊。對于口服給藥的液體可呈混懸液、溶液、乳液或糖漿形式或可經(jīng)凍干或呈現(xiàn)為干燥產(chǎn)物以在使用前用水或其它適宜媒介物復(fù)溶。此類液體組合物可任選含有：藥用賦形劑，諸如助懸劑(例如山梨糖醇、甲基纖維素、海藻酸鈉、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠等)；無水媒介物，例如油(例如杏仁油或分級椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)；潤濕劑，諸如卵磷脂；及若需要，調(diào)味劑或著色劑。針對直腸給藥可將實(shí)施方案的組合物調(diào)配為栓劑。對于包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或皮下途徑的胃腸外使用，可按無菌水溶液或混懸液提供實(shí)施方案的藥物(將這些液體緩沖至適宜pH及等滲性)或在藥用油中提供。適宜水溶液媒介物包括林格溶液及等滲氯化鈉?？蓪⒋祟愋问匠尸F(xiàn)為單位劑量形式(諸如安瓿或一次性注射裝置)、多劑量形式(諸如可撤回適宜劑量的小瓶)或固體形式或可用于制備注射劑的預(yù)濃縮物。在自數(shù)分鐘至數(shù)日范圍內(nèi)的一段時(shí)間中將自約1μg/kg/分鐘至1000μg/kg/分鐘的說明性輸注劑量范圍的藥物與藥物載體混合。對于鼻道、吸入或口服給藥，可使用例如也含有適宜載體的噴霧劑給藥實(shí)施方案的藥物組合物。對于局部應(yīng)用，將實(shí)施方案的化合物優(yōu)選地調(diào)配為乳膏或軟膏或適合于局部給藥的類似媒介物。對于局部給藥，可按藥物與媒介物比例為約0.1％至約10％的濃度將本發(fā)明化合物與藥物載體混合。給藥實(shí)施方案的藥物的另一模式可使用貼片劑以產(chǎn)生經(jīng)皮遞送的效果。本公開提供殺死表達(dá)葉酸受體α(FRA)的細(xì)胞的方法，包括向所述細(xì)胞給予有效量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構(gòu)體。在一些實(shí)施方案中，本申請?zhí)峁┝藲⑺辣磉_(dá)人葉酸受體α(FRA)的細(xì)胞的方法，包括向所述細(xì)胞給予足以殺死所述細(xì)胞的量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構(gòu)體。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞為癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、子宮癌細(xì)胞、睪丸絨毛膜癌細(xì)胞、室管膜瘤細(xì)胞、間皮瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞或腎細(xì)胞癌瘤細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞為FRA-陽性卵巢癌細(xì)胞、FRA-陽性肺癌細(xì)胞、FRA-陽性子宮癌細(xì)胞、FRA-陽性睪丸絨毛膜癌細(xì)胞、FRA-陽性室管膜瘤細(xì)胞、FRA-陽性間皮瘤細(xì)胞、FRA-陽性乳腺癌細(xì)胞、FRA-陽性結(jié)腸癌細(xì)胞或FRA-陽性腎細(xì)胞癌瘤細(xì)胞。在另一方面，本公開提供在個(gè)體中治療癌癥的方法，包括向所述個(gè)體給予有效量的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構(gòu)體?？捎帽旧暾埶龅姆椒ㄖ委煹陌┌Y的實(shí)例包括但不限于癌瘤，包括腺癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、黑素瘤及肉瘤。此類癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、胃腸癌、霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、宮頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、卵巢癌、諸如肝癌瘤及肝細(xì)胞瘤那樣的肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌瘤、唾液腺癌瘤、諸如腎細(xì)胞癌及韋爾姆斯腫瘤那樣的腎癌、基底細(xì)胞癌、黑素瘤、間皮瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、睪丸癌、食道癌、膽囊癌以及各種類型的頭頸癌。在治療癌癥的方法的某些實(shí)施方案中，所述癌癥選自卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌或腎細(xì)胞癌瘤。在一些實(shí)施方案中，所述癌癥為FRA-陽性癌癥。在某些實(shí)施方案中，所述癌癥為FRA-陽性卵巢癌、FRA-陽性肺癌、FRA-陽性子宮癌、FRA-陽性睪丸絨毛膜癌、FRA-陽性室管膜瘤、FRA-陽性間皮瘤、FRA-陽性乳腺癌、FRA-陽性結(jié)腸癌或FRA-陽性腎細(xì)胞癌瘤。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體具有癌癥或已經(jīng)診斷有癌癥。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體具有FRA-陽性惡性病或已經(jīng)診斷有FRA-陽性惡性病(諸如卵巢癌、肺癌、子宮癌、睪丸絨毛膜癌、室管膜瘤、間皮瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌或腎細(xì)胞癌)。在某些實(shí)施方案中，所述個(gè)體為人。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括以下步驟：在給予化合物之前，檢測癌細(xì)胞上的FRA的表達(dá)水平。在某些實(shí)施方案中，將化合物腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、口服、經(jīng)腸、腸胃外、鼻內(nèi)、經(jīng)皮、舌下或通過吸入來給藥。試劑盒本公開提供一種藥學(xué)包裝或試劑盒，該藥學(xué)包裝或試劑盒包含一或多個(gè)容器，這些容器包含對治療或預(yù)防癌癥有用的式(I)-(V)或(Ia)-(Va)的化合物或其鹽、溶劑化物或立體異構(gòu)體。所述試劑盒可進(jìn)一步包含在癌癥的治療中的使用說明。本公開也提供一種藥學(xué)包裝或試劑盒，該藥學(xué)包裝或試劑盒包含一或多個(gè)容器，這些容器包含本發(fā)明實(shí)施方案的藥物組合物的成份中的一或多種。與此類容器任選關(guān)聯(lián)的可為由規(guī)范藥品或生物學(xué)產(chǎn)品的制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)所規(guī)定形式的通知，該通知反映了政府機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)針對人類給藥的制造、使用或銷售。藥物綴合物的合成實(shí)施方案也涉及對制備主題化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體有用的方法及中間體。可取得眾多一般參考，這些參考提供對合成本申請化合物有用的通常已知的化學(xué)合成方案及條件(請參見例如SmithandMarch,March’sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,第5版,Wiley-Interscience,2001)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域中已知的任何手段純化本申請所描述的化合物，這些手段包括色譜手段諸如高效液相色譜法(HPLC)、制備性薄層色譜法、快速柱色譜法及離子交換色譜法?？墒褂萌魏芜m宜固定相，包括正相和反相以及離子樹脂。最典型的是，經(jīng)由硅膠和/或氧化鋁色譜法純化本申請化合物。請參見例如IntroductiontoModernLiquidChromatography,第2版，L.R.Snyder及J.J.Kirkland編者,JohnWileyandSons,1979；及ThinLayerChromatography,E.Stahl(編者),Springer-Verlag,NewYork,1969。在制備主題化合物的任何方法期間，保護(hù)所參與的任何分子上的敏感基團(tuán)或反應(yīng)基團(tuán)可為必需和/或理想的?？山?jīng)由權(quán)威著作中所描述的常規(guī)保護(hù)基實(shí)現(xiàn)此舉，這些著作諸如T.W.Greene及P.G.M.Wuts,“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,第4版,Wiley,NewYork2006?？墒褂帽绢I(lǐng)域中已知的方法在方便的后續(xù)階段中除去保護(hù)基?，F(xiàn)將參考本申請大體制備的說明性合成方案及隨后的特定實(shí)施例描述對實(shí)施方案的方法有用的示例性化學(xué)實(shí)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的是，為獲得本申請的各種化合物，可適當(dāng)選擇起始物質(zhì)以使得將在具有或不具有保護(hù)的情況下酌情經(jīng)由反應(yīng)方案實(shí)施最終期望取代基以得到期望產(chǎn)物?？蛇x擇地，不使用最終期望取代基，而是使用可經(jīng)由反應(yīng)方案實(shí)施及酌情使用期望取代基替代的適宜基團(tuán)可為必需或理想的。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的是，可按與特定側(cè)基的官能性兼容的任何次序執(zhí)行下文方案中所示的轉(zhuǎn)化。優(yōu)選地在自約0℃至所使用的有機(jī)溶劑的回流溫度的溫度執(zhí)行大體方案中所描述的反應(yīng)中的各者。除另有規(guī)定外，變量如上文關(guān)于式(I)所定義?？赏ㄟ^將藥物部分經(jīng)由包含親水性自消耗間隔基的連接子接附至抗體上構(gòu)造本發(fā)明實(shí)施方案的綴合物。在下文方案及隨后的特定實(shí)施例中描述針對式(I)的化合物的連接子部分的代表性合成。方案2在方案2中展示自4-硝基苯甲醛的化合物C的合成。使用諸如SOCl2、PCl3或PCl5那樣的氯化試劑將4-硝基苯基乙醇酸轉(zhuǎn)化成對應(yīng)的酰氯。隨后酰氯與1-甲基哌嗪反應(yīng)以提供酮酰胺中間體?？蛇x擇地，可使用諸如EDCI那樣的偶聯(lián)劑將4-硝基苯基乙醇酸偶聯(lián)至1-甲基哌嗪。酮酰胺中間體含有酮基，隨后使用諸如DIBAL-H、BH3、LiAlH4-AlCl3、LiAlH4-BF3-Et2O或氫硼化鈉那樣的還原劑還原該酮基以產(chǎn)生化合物C。方案3參見方案3，通過使用諸如鈀、鎳或鉑那樣的催化劑的催化氫化還原化合物C的硝基以在化合物I中得到苯胺基團(tuán)。適宜氫化催化劑的實(shí)例包括Pd/C及蘭尼鎳(Raneynickel)。方案4參見方案4，化合物I提供本發(fā)明實(shí)施方案的化合物中的親水性自消耗連接子部分?；衔颕的氨基可經(jīng)由標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)條件與化合物W反應(yīng)以得到化合物X。可在諸如DIEA那樣的堿或?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其它堿參與的情況下及在適宜溶劑中使用諸如EDCI/HOBt、HOBt、PyBOP、HATU或BEM那樣的試劑(Carpino,L.A.J.Am.Chem.Soc.1993,115,4397.Carpino,L.A.；El-Faham,A.J.Am.Chem.Soc.1995,117,5401.Li,P.；Xu,J.C.J.Pept.Res.2001,58,129.)。繼續(xù)參見方案4，使用氯甲酸4-硝基苯基酯將化合物X的羥基轉(zhuǎn)化成活化碳酸酯。有了化合物Y，與具有氨基的藥物反應(yīng)可得到化合物Z。若藥物不含有氨基，則如上文所論述的那樣，第二中間體自消耗間隔基或環(huán)化自消除連接子可位于藥物部分與氨基芐基氧基羰基之間。在某些實(shí)施方案中，參見下文方案5，連接子的-L3-L2-部分接附于化合物I。隨后接附-A-L4-部分。方案5用于制備本申請實(shí)施方案的化合物的方法包括制備抗體在緩沖液中的溶液及用諸如TCEP那樣的還原劑的溶液處理。確定游離巰基的量。當(dāng)游離巰基的量達(dá)到預(yù)定量時(shí)，使用連接子-藥物部分對部分還原的抗體進(jìn)行烷基化。在一些實(shí)施方案中，提供用于制備式(I)或(Ia)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中D、T、X、L1、L2、L3、L4、A及p在適當(dāng)情況下如就式(I)或(Ia)所定義，所述方法包括將包含靶向部分T的化合物與式：A-L4-L3-L2-X-L1-D的化合物反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，T為特異性結(jié)合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。在一些實(shí)施方案中提供由所述方法產(chǎn)生的化合物。進(jìn)一步提供包含由所述方法產(chǎn)生的一或多種化合物的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供用于制備式(II)或(IIa)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中D、T、L1、L2、L3、L4、A及p在適當(dāng)情況下如就式(II)或(IIa)所定義，所述方法包括將含有一或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體反應(yīng)：在一些實(shí)施方案中，帶有一個(gè)或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體為抗-FRA抗體。在一些實(shí)施方案中，帶有一個(gè)或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體為抗體hLK26或hMOV19。在一些實(shí)施方案中，帶有一個(gè)或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)。在一些實(shí)施方案中，帶有一個(gè)或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體為hLK26，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代，或hMOV19，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。在一些實(shí)施方案中，帶有一個(gè)或多個(gè)游離巰基(或巰基)的抗體為抗體26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)或26B3的衍生物(例如人源化或嵌合抗體)，其中所述抗體的重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替代。。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括用于制備如本申請所詳細(xì)描述的化合物Z的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括用于制備產(chǎn)生如本申請所詳細(xì)描述的化合物Z的合成中間體(例如化合物Y及化合物X)中的一或多個(gè)的方法。在一些實(shí)施方案中提供由本申請所詳細(xì)描述的方法中的任一個(gè)產(chǎn)生的化合物。進(jìn)一步提供包含由本申請所詳細(xì)描述的方法中的任一個(gè)產(chǎn)生的一或多種化合物的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供用于制備式(II)的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：D為藥物部分；T為抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧凰龇椒òㄊ箍贵w與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體反應(yīng)：在一些實(shí)施方案中，T為特異性結(jié)合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。在一些實(shí)施方案中，提供用于制備式(IIa)化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：p為1至20；D為藥物部分；T為抗體；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧凰龇椒òㄊ箍贵w與化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體反應(yīng)：在一些實(shí)施方案中，T為特異性結(jié)合葉酸受體α(例如人FRA)的抗體。本公開進(jìn)一步提供通過本申請?jiān)敿?xì)描述的任何制備化合物的方法和/或制備化合物的方法所產(chǎn)生的化合物。本公開也提供包含通過本申請?jiān)敿?xì)描述的任何制備化合物的方法和/或制備化合物的方法所產(chǎn)生的化合物中的一或多個(gè)的組合物(例如藥物組合物)。本公開提供用于制備方案4及方案5中的化合物及中間體的方法。方案4及方案5中所表示的化合物意指具有完整化合價(jià)或適宜時(shí)用任選保護(hù)基或離去基適當(dāng)封端。例如，如方案“化合物TAP-18H的合成”中所示那樣，L3-L2可為：本公開提供用于制備化合物X或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L2為鍵或第二自消耗連接子；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?；所述方法包括使化合物W：A-L4-L3-L2和化合物I：反應(yīng)。本公開提供用于制備化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：D為藥物部分；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?；所述方法包括：使化合物X:和氯甲酸對硝基苯酯反應(yīng)以形成化合物Y：且使化合物Y與包含L1-D的化合物反應(yīng)。本公開提供用于制備化合物X1或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L2為鍵或第二自消耗連接子；且L3為肽連接子；所述方法包括：使化合物W1：L3-L2和化合物I：反應(yīng)。本公開提供用于制備化合物Y1或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；且L3為肽連接子；所述方法包括：使化合物X1：和包含L1-D的化合物反應(yīng)。本公開提供用于制備化合物Z或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法：其中：D為藥物部分；R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?；所述方法包括：使化合物Y1：和包含A-L4的化合物反應(yīng)。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L2為鍵或第二自消耗連接子；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧１竟_提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；L3為肽連接子；L4為鍵或間隔基；且A為?；鶈卧?。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；L2為鍵或第二自消耗連接子；且L3為肽連接子。本公開提供下式的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體：其中：R1為氫、未取代或經(jīng)取代的C1-3烷基或未取代或經(jīng)取代的雜環(huán)基；D為藥物部分；L1為鍵、第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子；L2為鍵或第二自消耗連接子；其中若L1為第二自消耗連接子或環(huán)化自消除連接子，則L2為鍵；其中若L2為第二自消耗連接子，則L1為鍵；且L3為肽連接子。認(rèn)為本說明書足以使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)嵺`本發(fā)明。除本申請所示及所述的那些之外，本發(fā)明的各種修改將根據(jù)前述描述而對本領(lǐng)域技術(shù)人員變得明顯，且落入隨附權(quán)利要求的范疇內(nèi)。本申請引用的所有出版物、專利及專利申請均以全文通過引用的方式并入本申請以用于所有目的。實(shí)施例本發(fā)明可進(jìn)一步通過參考以下實(shí)施例來進(jìn)一步理解，所述實(shí)施例通過示例說明方式提供且不意在限制。實(shí)施例1:實(shí)施例2-6的材料及方法連接子-藥物的合成下文方案中展示化合物Tap-18H的合成。下文方案中也展示中間體化合物M及O的合成?；衔颩的合成化合物O的合成化合物TAP-18H的合成參見化合物Tap-18H的合成的方案，使用PCl5或在DMF中的EDCI及NiPr2Et或在CH2Cl2中的2-氯基-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪及N-甲基嗎啉作為偶聯(lián)劑將市購的4-硝基苯基乙醛酸(glyoxylicacid)與N-甲基哌嗪縮合以產(chǎn)生期望酮酰胺。在典型過程中，在0-5℃連續(xù)攪拌下將N-甲基嗎啉(15mmol)添加至CH2Cl2(20ml)中的2-氯基-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(5mmol)的溶液中。30-40分鐘后形成白色混懸液并將CH2Cl2(10ml)中的4-硝基苯基乙醛酸添加至此混合物中，引起透明溶液的形成。在攪拌混合物1小時(shí)后，在室溫添加N-甲基哌嗪(5mmol)。在反應(yīng)完成(TLC,10分鐘)后，使用10％NaHCO3水溶液(2×10ml)繼之以H2O(3×10ml)洗滌混合物。用無水硫酸鈉干燥有機(jī)層及在減壓下除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，通過重結(jié)晶或柱色譜法(石油醚:乙酸乙酯＝8:2)進(jìn)一步純化該粗產(chǎn)物。在THF或DIBAL-H或硼氫化鈉存在的情況下通過0.5當(dāng)量的LiAlH4進(jìn)一步還原酮酰胺化合物以產(chǎn)生硝基化合物C。[B.P.BandgarandS.S.Pandit,TetrahedronLetters44(2003)3855-3858]通過使用SnCl2處理或在室溫在甲醇中使用Pd/C(10％w/w)作為催化劑催化氫化約6-11小時(shí)將硝基化合物C還原至苯胺化合物I，產(chǎn)率為65-81％。其可使用MultiMaxIR系統(tǒng)與RB04-50反應(yīng)器B經(jīng)由以下過程獲得。最初使用35ml甲醇、0.03mg10％Pd/C及0.0252mol硝基化合物C填充反應(yīng)器并將氫氣添加至反應(yīng)器中高達(dá)6.3巴壓力(H2,恒定)。參見化合物M的合成的方案，經(jīng)Boc保護(hù)的L-纈氨酸用在DCM中的N-羥基琥珀酰亞胺及EDAC-HCl或在DCM中的N-羥基琥珀酰亞胺及EDC處理以提供琥珀酰亞胺酯。此活化酯與L-瓜氨酸及CH3CN、H2O、NaHCO3反應(yīng)以提供經(jīng)Boc保護(hù)的化合物M。參見化合物Tap-18H的合成的方案，經(jīng)由在室溫在DMF中的DCC/HOBt反應(yīng)32小時(shí)提供化合物N(產(chǎn)率78-82％)或使用PS-碳二亞胺將苯胺化合物I與經(jīng)Boc保護(hù)的化合物M偶聯(lián)，在所述反應(yīng)中在兩當(dāng)量PS-碳二亞胺及在DCM中的1.7當(dāng)量HOBt存在下從100mg化合物M與1.5當(dāng)量苯胺化合物I開始?xì)v時(shí)24小時(shí)實(shí)施化合物N的合成反應(yīng)。通過LC/MS的分析展示具有期望質(zhì)量的峰及大約50-60％的轉(zhuǎn)化。隨后偶聯(lián)產(chǎn)物化合物N在DCM中的2,6-二甲基吡啶參與的情況下在RT與氯甲酸4-硝基苯基酯反應(yīng)8小時(shí)，得到碳酸酯化合物P，LC/MS展示具有期望質(zhì)量的峰。在DMF中的HOAt及Et3N存在的情況下，使用單甲基多拉司他汀10處理碳酸酯化合物P，引起化合物Q的形成。參見化合物O的合成的方案，用DMF中的馬來酸酐處理β-丙氨酸且由此獲得的酸在DCC偶聯(lián)下與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應(yīng)，得到NHS酯。通過使用TFA處理除去市購t-boc-N-酰氨基-dPEG4-酸中的BOC保護(hù)基，得到胺的TFA鹽，該TFA鹽與先前合成的NHS酯反應(yīng)。分離由此獲得的羧酸及使用EDCI將羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺偶聯(lián)，得到NHS酯化合物O。參見化合物Tap-18H的合成的方案，使用TFA除去化合物Q中的Boc基及在室溫在無水乙腈及NaHCO3中將游離胺與NHS酯化合物O偶聯(lián)12-36小時(shí)，得到最終產(chǎn)物Tap-18H，產(chǎn)率為35-45％。圖1顯示Tap-18H的NMR譜化合物TAP-18Hr1的合成合成具有下文所示的式的Tap-18Hr1。圖2顯示Tap-18Hr1的NMR光譜?；衔颰AP-18Hr2的合成合成具有下文所示的式的Tap-18Hr2。圖3顯示Tap-18Hr2的NMR光譜。細(xì)胞系將卵巢癌細(xì)胞SK-OV-3(目錄號HTB-77TM)在補(bǔ)充有10％FBS(目錄號SH30071.03)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素(目錄號15140)的McCoy5A培養(yǎng)基(目錄號16600)中培養(yǎng)。將卵巢癌細(xì)胞OVCAR-3(BioresourceCollectionandResearch目錄號60551)在補(bǔ)充有20％FBS、1mM丙酮酸鈉(目錄號11360)、0.01mg/mL牛胰島素(目錄號I6634)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基1640(目錄號22400)中培養(yǎng)。卵巢癌細(xì)胞OVCAR-3B由OVCAR-3適應(yīng)，且在補(bǔ)充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉(目錄號11360)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基1640(目錄號22400)中培養(yǎng)。胰腺癌細(xì)胞Panc02.03B由Panc02.03(目錄號CRL-2553TM)適應(yīng)，且在補(bǔ)充有15％FBS、1mM丙酮酸鈉及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基1640中不利用胰島素培養(yǎng)。將肺癌細(xì)胞NCI-H2110(目錄號CRL-5924TM)在補(bǔ)充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉、2.5g/升D-葡萄糖(目錄號G8270)及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基1640中培養(yǎng)。將肺癌細(xì)胞NCI-H292(BIORESOURCECOLLECTIONANDRESEARCH目錄號60372)在補(bǔ)充有10％FBS、1mM丙酮酸鈉及100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素的RPMI培養(yǎng)基1640中培養(yǎng)。試劑DTT及DTPA由(St.Louis,MO)獲得。TCEP由Acros(MorrisPlains,NJ)獲得。DTNB由ThermoScientific(Rockford,IL)獲得。磷酸鈉、硼酸鈉及氯化鈉由J.T.BAKERTM(CenterValley,PA)獲得。半胱氨酸由(WardHill,MA)獲得。表5:抗-FRA抗體hLK26的氨基酸序列SEQIDNO:1(hLK26-IgG1重鏈)EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:2(hLK26-IgG4p重鏈)EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSWVRQAPGKGLEWVARFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKSEQIDNO:3(hLK26-κ輕鏈)DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCWYQQKPGKAPKPWIYGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEChLK26-半胱氨酸變體的產(chǎn)生利用定位突變(site-directedmutagenesis)方法將半胱氨酸殘基引入hLK26的重鏈(CH)或κ輕鏈(CL)的恒定區(qū)中。簡言之，通過重疊PCR進(jìn)行突變?？赏ㄟ^并入核苷酸改變的引物引入期望堿基中的特異性變更(alternation)。隨著將引物延長，在所得擴(kuò)增子中產(chǎn)生突變。氨基酸的突變位置(EU編號)及側(cè)翼序列在以下表6中列出。表6:氨基酸的突變位置(EU編號)和側(cè)翼序列表達(dá)hLK26-Cys變體的穩(wěn)定細(xì)胞系的產(chǎn)生hLK26-半胱氨酸(hLK26-Cys)變體于Flp-InCHO細(xì)胞(InvitrogenTM，目錄號：R758-07)中穩(wěn)定地表達(dá)并產(chǎn)生。將半胱氨酸取代的抗體變體的DNA序列插入pcDNA5/FRT載體(InvitrogenTM，目錄號：V6010-20)中，且按照由供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)操作與pOG44(InvitrogenTM，目錄號V6005-20)共同轉(zhuǎn)染。收集所建立的細(xì)胞系的培養(yǎng)物上清液，且利用蛋白質(zhì)A瓊脂糖珠粒(GEHealthcareTM，目錄號：17-5280-04)純化。利用SDS-PAGE及尺寸排阻色譜分析純化蛋白質(zhì)，以確?？贵w的品質(zhì)。hLK26-IgG1抗體的常規(guī)綴合常規(guī)藥物綴合物通過經(jīng)由四鏈間二硫鍵的還原使連接子有效負(fù)載與抗體綴合而實(shí)現(xiàn)，且綴合因此限于游離半胱氨酸的八個(gè)暴露的巰基。每個(gè)抗體的連接子-藥物可在0-8個(gè)范圍變化。hLK26-IgG1抗體部分地由0.025M硼酸鈉pH8、0.025MNaCl、1mMDTPA中的1.85當(dāng)量的TCEP在37℃還原2小時(shí)。使用針對1.0mg/mL溶液在280nm為1.616的吸光度值定量蛋白質(zhì)濃度，且使用145,055g/mol的分子量確定摩爾濃度。通過以DTNB滴定來確定所產(chǎn)生的mAb-半胱氨酸巰基的濃度。典型地獲得3.22個(gè)巰基/mAb。部分還原的抗體由1.2摩爾的馬來酰亞胺己?；?藥物(Tap18Hr1、Tap-18Hr1)/mAb-半胱氨酸巰基或馬來酰亞胺基-藥物/mAb-半胱氨酸巰基烷基化。在4℃進(jìn)行烷基化反應(yīng)12～16小時(shí)。半胱氨酸(最終1mM)用于淬滅任何未反應(yīng)的過量馬來酰亞胺己酰基-藥物或馬來酰亞胺基-藥物。首先用綴合緩沖液、10mM磷酸鈉、10mMNaCl、5％DMSO(pH7.0)將綴合混合物稀釋5倍，且針對hLK26-IgG1-Tap18Hr1純化，以每20mg綴合抗體1mL羥磷灰石的負(fù)荷容量施用于羥磷灰石柱(MacroprepceramicI型40μm,Hercules,CA)。柱先前用5倍柱體積的結(jié)合緩沖液平衡。在樣本施用的后，用3倍柱體積的結(jié)合緩沖液洗滌柱，且用5倍柱體積的10mM磷酸鈉、10mMNaCl(pH7.0)使其平衡。結(jié)合ADC隨后用200mM磷酸鈉、10mMNaCl(pH7.0)洗脫。洗脫后，將緩沖液改變成Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水，使用HIPREPTM26/10脫鹽柱(任選)。hLK26-Cys變體的位點(diǎn)特異性綴合位點(diǎn)特異性藥物綴合物通過將連接子有效負(fù)載(即，包含連接至藥物部分的連接子的分子)與抗體的恒定域(CH或CL)經(jīng)由兩個(gè)工程化半胱氨酸殘基的還原來綴合而實(shí)現(xiàn)，且綴合因此限于游離半胱氨酸的兩個(gè)暴露的巰基。為特異地綴合引入半胱氨酸上的連接子有效負(fù)載，使用還原/氧化操作。為移除所引入半胱氨酸位點(diǎn)上可在培養(yǎng)條件期間出現(xiàn)的半胱氨酸或谷胱甘肽，首先用10～15倍摩爾過量的TCEP(ACROS目錄號：363830100)在37℃、于含有1mMDTPA(目錄號：D6518)的PBS(目錄號：21600-069)中處理hLK26-Cys變體-Tap18Hr1及hLK26-T155C和hLK26-S442C的重鏈突變體2～5小時(shí)。在移除過量TCEP之后，隨后用去氫抗壞血酸(dehydroascorbicacid；DHA)(目錄號：261556)以超過蛋白質(zhì)的20～30倍摩爾過量在室溫將抗體再氧化3～5小時(shí)，以確保鏈間二硫鍵的重新形成。將樣本緩沖液更換成PBS。隨后添加馬來酰亞胺連接的藥物有效負(fù)載Tap18Hr1，以與所處理抗體上的游離巰基反應(yīng)。過量有效負(fù)載以N-乙?；?L-半胱氨酸(目錄號：A7250)淬滅，且CHT陶瓷羥磷灰石珠粒(目錄號：157-0040)用于純化位點(diǎn)特異性綴合hLK26-Cys變體-Tap18Hr1、hLK26-T155C-Tap18Hr1及hLK26-S442C-Tap18Hr1。還原/氧化操作也與一些修飾一起使用，以特異地綴合重鏈的T199處及在κ輕鏈的L201及T206處的所引入半胱氨酸上的連接子有效負(fù)載。首先用15～50倍摩爾過量的TCEP(ACROS目錄號：363830100)在37℃、于含有1～50mMDTPA(目錄號：D6518或E5134)的PBS(目錄號：21600-069)中處理T199C的hLK26重鏈突變體及L201C和T206C的輕鏈突變體2～5小時(shí)。在移除過量TCEP之后，隨后用去氫抗壞血酸(DHA)(目錄號：261556)以超過蛋白質(zhì)的50～70倍摩爾過量在室溫將抗體在4℃再氧化2～5小時(shí)，以確保鏈間二硫鍵的重新形成。將樣本緩沖液更換成PBS。隨后添加馬來酰亞胺連接的藥物有效負(fù)載Tap18Hr1，以與所處理抗體上的游離巰基反應(yīng)。過量有效負(fù)載以N-乙酰基-L-半胱氨酸(目錄號：A7250)淬滅，且CHT陶瓷羥磷灰石珠粒(目錄號：157-0040)用于純化這些位點(diǎn)特異性ADC。通過反相HPLC分析確定藥物抗體比(DAR)開發(fā)由還原及變性反相HPLC(RP-HPLC)組成的方法來分離并定量各種輕鏈物及重鏈物，以確定綴合ADC的DAR。在HPLC分析之前，綴合物樣品用6M胍鹽酸鹽及20mMDTT于50℃加熱下處理15min。將100μg的所處理綴合物樣品施用于PLRP-S柱(2.1x150mm,8μm,Aligent)。流速設(shè)定在0.8mL/min，且柱溫設(shè)定在80℃，恒定地貫穿該分析。溶劑A為MilliQ水中的0.05％三氟乙酸，且溶劑B為乙腈中的0.04％三氟乙酸。該梯度程序由以下組成：3ml的等度25％B、25ml線性梯度至50％B、2ml線性梯度至95％B、1ml線性梯度至25％B以及2ml的等度25％B。在此方法中，用過量DTT預(yù)處理ADC使鏈間及鏈內(nèi)二硫化物斷裂，且允許具有0或1個(gè)藥物的輕鏈(L0及L1)與具有0、1、2或3個(gè)藥物的重鏈(H0、H1、H2及H3)分離。通過每一分離物的洗脫時(shí)間及UV光譜(A248/280比隨藥物負(fù)荷增加)歸屬所述物的峰。基于所測試ADC的RP-HPLC分布中的個(gè)別峰的面積計(jì)算的DAR在表7A及7B中列出。表7:藥物抗體比(A)測量1(B)測量2hLK26-Cys-變體和Tap18Hr1綴合物與癌細(xì)胞的結(jié)合在V形底96孔板中，以每孔接種1x105個(gè)細(xì)胞，且用50μl的未綴合Ab或ADC以所滴定濃度，或用同種型對照抗體人類IgG以10μg/mL溫育。在4℃溫育60分鐘之后，將細(xì)胞用200μlFACS緩沖液(含有1％FBS的1xPBS)洗滌一次，用FACS緩沖液中的50μl的1μg/mL山羊F(ab’)2-抗-人類IgG(H+L)-RPE或山羊抗-人類IgG-RPE(SOUTHERN目錄號2043-09或2040-09)染色，且隨后在4℃溫育30min。將細(xì)胞用FACS緩沖液洗滌一次，且通過流式細(xì)胞儀(BDLSR,BDLifeSciences)分析。體外WST-8細(xì)胞毒性測定在96孔微量滴定板上，分別以每孔1x103～1x104個(gè)細(xì)胞接種SK-OV-3、OVCAR-3、OVCAR-3B及Panc02.03B細(xì)胞。以在以下于最終體積200μl/孔中的最終指示濃度范圍，一式三份或一式五份添加Tap18Hr綴合的ADC或未綴合的抗體：針對SK-OV-3及Panc02.03B利用2.5倍或3倍連續(xù)稀釋以達(dá)600nM至0.03nM(90μg/mL至0.005μg/mL)，以及針對OVCAR-3及OVCAR-3B利用3倍連續(xù)稀釋以達(dá)200nM至0.01nM(30μg/ml至0.005μg/ml)。隨后將細(xì)胞在37℃及5％CO2溫育。在針對OVCAR-3為3天且針對SK-OV-3、Panc02.03B及OVCAR-3B為3-6天的溫育之后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CellCountingKit-8)(Dojindo，目錄號CK04)按照制造商的說明書測量細(xì)胞存活力。簡言之，在溫育結(jié)束時(shí)，移除100μL/孔的培養(yǎng)基且將10μL/孔的試劑染料(WST-8)添加至每一孔中。在最佳色彩顯影(當(dāng)未處理對照的OD450≧1時(shí))之后，通過分光光度計(jì)(MOLECULARVERSAMAXTM微板閱讀器)測量450nm的吸光度(OD450值)。獲得平行測試(replicates)的平均值，且減去背景(培養(yǎng)基對照)。所得OD450值隨后用于根據(jù)下式計(jì)算生長抑制％：[未處理OD450-樣本OD450]/[未處理OD450]*100。在癌癥異種移植物模型中的ADC處理用hLK26-IgG1-Tap18Hr1處理的卵巢腫瘤SK-OV-3為建立皮下異種移植物模型，將于含有25％BDMATRIGELTM基底膜基質(zhì)高濃度(BDBiosciences，目錄號354248)的120μLPBS中的1x107個(gè)SK-OV-3細(xì)胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側(cè)腹中。在腫瘤細(xì)胞接種之后約1小時(shí)，以于100μL中的3mg/kg靜脈內(nèi)注射hLK26-IgG1-Tap18Hr1(標(biāo)記為第1天)。用卡尺在兩個(gè)垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據(jù)式(0.52*長度*寬度*寬度)來計(jì)算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。用與Tap18Hr1綴合的hLK26-Cys變體處理的卵巢腫瘤SK-OV-3為建立皮下異種移植物模型，將于含有50％BDMATRIGELTM基底膜基質(zhì)(BDBiosciences，目錄號354234)的100μLPBS中的1x107個(gè)SK-OV-3細(xì)胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側(cè)腹中。在腫瘤細(xì)胞接種之后約2小時(shí)，以于150μL中的5mg/kg靜脈內(nèi)注射位點(diǎn)特異性ADChLK26-Cys變體-Tap18Hr1(標(biāo)記為第1天)。用卡尺在兩個(gè)垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據(jù)式(0.52*長度*寬度*寬度)來計(jì)算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。用常規(guī)hLK26-IgG1-Tap18Hr1以及位點(diǎn)特異性綴合的hLK26-Cys變體-Tap18Hr1處理的肺腫瘤NCI-H2110為建立皮下異種移植物肺腫瘤模型，將于100μLPBS中的5x106個(gè)NCI-H2110細(xì)胞植入6周齡雌性C.B-17SCID小鼠(Lasco,Taipei,Taiwan)的右側(cè)腹中。在腫瘤細(xì)胞接種之后約6小時(shí)，各以于150μL中的5mg/kg靜脈內(nèi)注射常規(guī)的綴合hLK26-IgG1-Tap18Hr1及位點(diǎn)特異性hLK26-Cys變體-Tap18Hr1(標(biāo)記為第1天)。用卡尺在兩個(gè)垂直尺寸上每周測量腫瘤體積一次，且根據(jù)式(0.52*長度*寬度*寬度)來計(jì)算腫瘤體積。為確定所處理小鼠中的潛在藥物毒性，每周記錄體重。實(shí)施例2:基于hLK26的抗體藥物綴合物(ADC)在卵巢和肺癌細(xì)胞中的結(jié)合活性hLK26-IgG1-Tap18Hr1結(jié)合活性在表達(dá)FRA的SK-OV-3、OVCAR-3、NCI-h2110及NCI-h292細(xì)胞中通過流式細(xì)胞分析評估hLK26-IgG1裸Ab及hLK26-IgG1-Tap18Hr1的結(jié)合活性。結(jié)果(表8)顯示為利用一系列Ab/ADC濃度實(shí)現(xiàn)最佳結(jié)合所處的平均螢光強(qiáng)度(MFI)。hLK26-IgG1-Tap18Hr1正性地結(jié)合至所有所測試的FRA表達(dá)細(xì)胞系，且展現(xiàn)與裸AbhLK26-IgG1等效的結(jié)合能力。這些數(shù)據(jù)證明：常規(guī)的ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1保持hLK26-IgG1的抗原反應(yīng)性，且有效地結(jié)合至表達(dá)FRA的癌細(xì)胞。表8:hLK26-IgG1-Tap18Hr1和未綴合的hLK26-IgG1與癌細(xì)胞的結(jié)合在卵巢癌SK-OV-3及OVCAR-3B(表9-10)及肺癌NCI-H2110及NCI-H292(表11-12)細(xì)胞中通過流式細(xì)胞分析評估hLK26-Cys變體-Tap18Hr1的位點(diǎn)特異性綴合物的結(jié)合活性。表中的平均螢光強(qiáng)度(MFI)值表示ADC于測試濃度的結(jié)合活性。在IgG1變體中，hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1及hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1與野生型、裸hLK26-IgG1相當(dāng)?shù)亟Y(jié)合，但hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1顯示結(jié)合反應(yīng)性的稍微降低。IgG4p變體-Tap18Hr1綴合物也結(jié)合至在此測試的所有FRA陽性癌細(xì)胞，但螢光強(qiáng)度通常低于利用IgG1變體所觀察到的那些螢光強(qiáng)度。結(jié)合活性的該降低可能歸因于IgG4同種型而非半胱氨酸突變。總之，位點(diǎn)特異性綴合hLK26-Cys變體保持對所測試卵巢及肺癌細(xì)胞的抗原反應(yīng)性。表9:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與SK-OV-3細(xì)胞的結(jié)合(1)T155C和S442C突變體的位點(diǎn)特異性ADC抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr11888hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr11885hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr12474hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr12077hLK26-IgG12446僅2ndAb6(2)T199C、L201C和T206C突變體的位點(diǎn)特異性ADC抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1966hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr11004hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr11274hLK26-IgG11403僅2ndAb5表10:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與OVCAR-3B細(xì)胞的結(jié)合抗體(1.1μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1806hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1769hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr11062hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1967hLK26-IgG11154僅2ndAb5表11:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與NCI-H2110細(xì)胞的結(jié)合(1)T155C和S442C突變體的位點(diǎn)特異性ADC抗體(3.3μg/mL)MFIhLK26-T155C-IgG4p-Tap18Hr1494hLK26-S442C-IgG4p-Tap18Hr1479hLK26-T155C-IgG1-Tap18Hr1649hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1605hLK26-IgG1679僅2ndAb5(2)T199C、L201C和T206C突變體的位點(diǎn)特異性ADC抗體(3.3μg/mL)MFIhLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1898hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1890hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr11180hLK26-IgG11186僅2ndAb5表12:未綴合的hLK26-IgG1和hLK26-Cys變體-Tap18Hr1與NCI-H292細(xì)胞的結(jié)合實(shí)施例3:hLK26-IgG1-Tap18Hr1ADC和hLK26-IgG1在表達(dá)FRA的細(xì)胞系中的體外細(xì)胞毒性在FRA陽性癌細(xì)胞系(SK-OV-3及OVCAR-3)及FRA陰性細(xì)胞系(Panc02.03B)評估hLK26-IgG1-Tap18Hr1的體外細(xì)胞毒性活性。也平行測試通過裸hLK26-IgG1抗體引起的細(xì)胞毒性。ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1誘導(dǎo)針對FRA陽性癌細(xì)胞(SK-OV-3及OVCAR-3)的特異性及劑量依賴性生長抑制，而其對FRA-陰性細(xì)胞Panc02.03B具有更加小的生長抑制效應(yīng)，從而證明此細(xì)胞毒性的抗原特異性(表13)。相較于ADC，裸AbhLK26-IgG1對所處理細(xì)胞的存活力具有可忽略影響。表13:hLK26-IgG1-Tap18Hr1和hLK26-IgG1的體外細(xì)胞毒性活性也在SK-OV-3及OVCAR-3B細(xì)胞中評估位點(diǎn)特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1的體外細(xì)胞毒性活性。表14顯示IgG1變體的結(jié)果，且表15顯示IgG4p變體。如常規(guī)綴合的ADC一樣(表13)，hLK26Cys變體-Tap18Hr1針對FRA陽性癌細(xì)胞(SK-OV-3及OVCAR-3)誘導(dǎo)特異性及劑量依賴性生長抑制。它們對FRA-陰性細(xì)胞Panc02.03B的存活力具有更加小的影響，從而證明此細(xì)胞毒性的抗原特異性(表14及15)。這些數(shù)據(jù)證明：常規(guī)和位點(diǎn)特異性綴合的hLK26-Tap18Hr1ADC均可以抗原特異性將細(xì)胞毒性藥物遞送至靶標(biāo)癌細(xì)胞。表14:綴合的hLK26IgG1Cys變體的體外細(xì)胞毒性活性表15:綴合的hLK26IgG4pCys變體的體外細(xì)胞毒性活性實(shí)施例4:常規(guī)ADChLK26-IgG1-Tap18Hr1在卵巢癌中的體內(nèi)效果在來源于卵巢癌細(xì)胞SK-OV-3的異種移植物模型中體內(nèi)評估hLK26-IgG1-Tap18Hr1的效力。在腫瘤細(xì)胞植入之后約一小時(shí)，用媒介物(PBS)或單一劑量的ADC以3mg/kg靜脈內(nèi)處理小鼠(標(biāo)記為第1天，參見圖4中的箭頭)。歸因于細(xì)胞-Matrigel混合物的接種體積，第1天的腫瘤大小因此記錄為120mm3。所注射的Matrigel在第15天呈現(xiàn)吸收，在此期間產(chǎn)生腫瘤且如媒介物對照組中所觀察穩(wěn)定地生長。在第57天，媒介物對照的平均腫瘤大小已超過500mm3(圖4)，而在研究結(jié)束時(shí)，用hLK26-IgG1-Tap18Hr1處理的小鼠的組中(6只中的6只)未檢測到腫瘤生長。未觀察到毒性，因?yàn)閮蓚€(gè)組的體重改變保持無差異(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，研究證明：單獨(dú)的hLK26-IgG1-Tap18Hr1ADC為對卵巢癌有效的抗腫瘤劑。實(shí)施例5:位點(diǎn)特異性ADChLK26Cys變體-Tap18Hr1在卵巢癌中的體內(nèi)效果SCID小鼠中的SK-OV-3異種移植物模型也用于評估位點(diǎn)特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)。將癌細(xì)胞皮下移植于SCID小鼠中，且在腫瘤細(xì)胞植入之后約兩小時(shí)給予5mg/kgADC或媒介物對照的單一劑量(標(biāo)記為第1天)。比較四個(gè)處理組：hLK26-S442C-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T155C-IgG4P-Tap18Hr1、hLK26-S442C-IgG4P-Tap18Hr1及媒介物對照，其中每一處理組6只小鼠。每周測量腫瘤大小一次。結(jié)果示于圖5中。歸因于所接種細(xì)胞-Matrigel混合物的體積，第1天的腫瘤大小記錄為100mm3。相較于媒介物對照，5mg/kghLK26Cys變體-Tap18Hr1的單一劑量在所有ADC處理組中延遲腫瘤生長(p值<0.005，自處理之后第16天起)。圖5中的箭頭指示給予處理的時(shí)間。在用ADC處理的小鼠組中未觀察到明顯毒性，因?yàn)樗薪M的體重改變保持無差異(數(shù)據(jù)未顯示)。研究證明：位點(diǎn)特異性綴合的hLK26Cys變體-Tap18Hr1為用于卵巢癌的有效抗腫瘤劑，即使利用一些變體觀察到細(xì)胞結(jié)合活性的一些降低亦如此。實(shí)施例6:基于抗-FRA的Tap18Hr1綴合物針對肺癌的體內(nèi)抗腫瘤活性在來源于肺癌細(xì)胞NCI-H2110的異種移植物模型中體內(nèi)評估常規(guī)和位點(diǎn)特異性抗-FRA-Tap18Hr1綴合物的效果。將癌細(xì)胞皮下移植于SCID小鼠中，且在腫瘤細(xì)胞植入之后約6小時(shí)，給予5mg/kgADC或媒介物對照的單一劑量(標(biāo)記為第1天，參見圖6中的箭頭)，所述ADC包括：hLK26-IgG1-Tap18Hr1、hLK26-T206C-IgG1-Tap18Hr1、LK26-T155C-IgG4p-Tap18hr1、hLK26-T199C-IgG4p-Tap18Hr1及hLK26-L201C-IgG4p-Tap18Hr1。歸因于所接種細(xì)胞混合物的體積，第1天的腫瘤大小記錄為100mm3。每周測量一次具有5只動(dòng)物的每一處理組的腫瘤大小。5mg/kg常規(guī)的hLK26-IgG1-Tap18Hr1或位點(diǎn)特異性hlk26Cys變體-Tap18Hr1綴合物的單一劑量完全地抑制所處理小鼠中的腫瘤生長。在所有ADC處理組中，至多第29天均未檢測到腫瘤生長。對比而言，媒介物組的腫瘤快速地生長且在第29天超過1000mm3(p值<0.05，自處理之后第7天起)。在用ADC處理的小鼠組中未觀察到明顯毒性，因?yàn)樗薪M的體重增加保持無差異(數(shù)據(jù)未顯示)。研究證明：無論常規(guī)的還是位點(diǎn)特異性基于抗FRA的Tap18Hr1綴合物，它們單獨(dú)對肺癌而言均為有效抗腫瘤劑。參考文獻(xiàn)1.Carter,PJandSenter,PD.Antibody-drugconjugatesforcancertherapy.CancerJ.2008；14:154-169)2.Teicher,BA.Antibody-drugconjugatetargets.CurrentcancerDrugTargets2009,9:982-1004.3.Ducry,LandStump,B.Antibody-drugconjugates:linkingcytotoxicpayloadstomonoclonalantibodies.Bioconjugatechem.,2010,21:5-13.4.Koblinski,JE.,Ahram,MandSloane,BF.Unravelingtheroleofproteasesincancer.Clin.Chem.Acta2000；291:113-135.本申請引用的所有專利、專利申請、文件及論文均以全文通過引用方式并入本申請中。序列表<110>荷商臺醫(yī)(有限合伙)公司臺醫(yī)國際股份有限公司林榮華林士瑤謝昱祁黃久珍李叔樺蔡育英蔣鳳琳胡立安<120>抗葉酸鹽受體α(FRA)抗體-藥物綴合物及其使用方法<130>606592001040<140>未指定<141>ConcurrentlyHerewith<150>US62/015,321<151>2014-06-20<160>53<170>針對Windows版本4.0的FastSEQ<210>1<211>449<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建物<400>1GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysSerAlaSerGlyPheThrPheSerGlyTyr202530GlyLeuSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaMetIleSerSerGlyGlySerTyrThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgAspAsnAlaLysAsnThrLeuPhe65707580LeuGlnMetAspSerLeuArgProGluAspThrGlyValTyrPheCys859095AlaArgHisGlyAspAspProAlaTrpPheAlaTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrProValThrValSerSerAlaSerThrLysGlyProSerValPhe115120125ProLeuAlaProSerSerLysSerThrSerGlyGlyThrAlaAlaLeu130135140GlyCysLeuValLysAspTyrPheProGluProValThrValSerTrp145150155160AsnSerGlyAlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaValLeu165170175GlnSerSerGlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValProSer180185190SerSerLeuGlyThrGlnThrTyrIleCysAsnValAsnHisLysPro195200205SerAsnThrLysValAspLysLysValGluProLysSerCysAspLys210215220ThrHisThrCysProProCysProAlaProGluLeuLeuGlyGlyPro225230235240SerValPheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSer245250255ArgThrProGluValThrCysValValValAspValSerHisGluAsp260265270ProGluValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsn275280285AlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgVal290295300ValSerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGlu305310315320TyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLys325330335ThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThr340345350LeuProProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGlnValSerLeuThr355360365CysLeuValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGlu370375380SerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeu385390395400AspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLys405410415SerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGlu420425430AlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGly435440445Lys<210>2<211>446<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建物<400>2GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyValValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysSerAlaSerGlyPheThrPheSerGlyTyr202530GlyLeuSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaMetIleSerSerGlyGlySerTyrThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgAspAsnAlaLysAsnThrLeuPhe65707580LeuGlnMetAspSerLeuArgProGluAspThrGlyValTyrPheCys859095AlaArgHisGlyAspAspProAlaTrpPheAlaTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrProValThrValSerSerAlaSerThrLysGlyProSerValPhe115120125ProLeuAlaProCysSerArgSerThrSerGluSerThrAlaAlaLeu130135140GlyCysLeuValLysAspTyrPheProGluProValThrValSerTrp145150155160AsnSerGlyAlaLeuThrSerGlyValHisThrPheProAlaValLeu165170175GlnSerSerGlyLeuTyrSerLeuSerSerValValThrValProSer180185190SerSerLeuGlyThrLysThrTyrThrCysAsnValAspHisLysPro195200205SerAsnThrLysValAspLysArgValGluSerLysTyrGlyProPro210215220CysProProCysProAlaProGluPheLeuGlyGlyProSerValPhe225230235240LeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThrPro245250255GluValThrCysValValValAspValSerGlnGluAspProGluVal260265270GlnPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLysThr275280285LysProArgGluGluGlnPheAsnSerThrTyrArgValValSerVal290295300LeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCys305310315320LysValSerAsnLysGlyLeuProSerSerIleGluLysThrIleSer325330335LysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThrLeuProPro340345350SerGlnGluGluMetThrLysAsnGlnValSerLeuThrCysLeuVal355360365LysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsnGly370375380GlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSerAsp385390395400GlySerPhePheLeuTyrSerArgLeuThrValAspLysSerArgTrp405410415GlnGluGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeuHis420425430AsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerLeuGlyLys435440445<210>3<211>217<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建物<400>3AspIleGlnLeuThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysSerValSerSerSerIleSerSerAsn202530AsnLeuHisTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysProTrp354045IleTyrGlyThrSerAsnLeuAlaSerGlyValProSerArgPheSer505560GlySerGlySerGlyThrAspTyrThrPheThrIleSerSerLeuGln65707580ProGluAspIleAlaThrTyrTyrCysGlnGlnTrpSerSerTyrPro859095TyrMetTyrThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluIleLysArgThr100105110ValAlaAlaProSerValPheIlePheProProSerAspGluGlnLeu115120125LysSerGlyThrAlaSerValValCysLeuLeuAsnAsnPheTyrPro130135140ArgGluAlaLysValGlnTrpLysValAspAsnAlaLeuGlnSerGly145150155160AsnSerGlnGluSerValThrGluGlnAspSerLysAspSerThrTyr165170175SerLeuSerSerThrLeuThrLeuSerLysAlaAspTyrGluLysHis180185190LysValTyrAlaCysGluValThrHisGlnGlyLeuSerSerProVal195200205ThrLysSerPheAsnArgGlyGluCys210215<210>4<211>433<212>PRT<213>小鼠<400>4GlyProGluLeuValLysProGlyAlaSerValLysIleSerCysLys151015AlaSerAspTyrSerPheThrGlyTyrPheMetAsnTrpValMetGln202530SerHisGlyLysSerLeuGluTrpIleGlyArgIlePheProTyrAsn354045GlyAspThrPheTyrAsnGlnLysPheLysGlyArgAlaThrLeuThr505560ValAspLysSerSerSerThrAlaHisMetGluLeuArgSerLeuAla65707580SerGluAspSerAlaValTyrPheCysAlaArgGlyThrHisTyrPhe859095AspTyrTrpGlyGlnGlyThrThrLeuThrValSerSerAlaLysThr100105110ThrProProSerValTyrProLeuAlaProGlySerAlaAlaGlnThr115120125AsnSerMetValThrLeuGlyCysLeuValLysGlyTyrPheProGlu130135140ProValThrValThrTrpAsnSerGlySerLeuSerSerGlyValHis145150155160ThrPheProAlaValLeuGlnSerAspLeuTyrThrLeuSerSerSer165170175ValThrValProSerSerProArgProSerGluThrValThrCysAsn180185190ValAlaHisProAlaSerSerThrLysValAspLysLysIleValPro195200205ArgAspCysGlyCysLysProCysIleCysThrValProGluValSer210215220SerValPheIlePheProProLysProLysAspValLeuThrIleThr225230235240LeuThrProLysValThrCysValValValAspIleSerLysAspAsp245250255ProGluValGlnPheSerTrpPheValAspAspValGluValHisThr260265270AlaGlnThrGlnProArgGluGluGlnPheAsnSerThrPheArgSer275280285ValSerGluLeuProIleMetHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGlu290295300PheLysCysArgValAsnSerAlaAlaPheProAlaProIleGluLys305310315320ThrIleSerLysThrLysGlyArgProLysAlaProGlnValTyrThr325330335IleProProProLysGluGlnMetAlaLysAspLysValSerLeuThr340345350CysMetIleThrAspPhePheProGluAspIleThrValGluTrpGln355360365TrpAsnGlyGlnProAlaGluAsnTyrLysAsnThrGlnProIleMet370375380AsnThrAsnGlySerTyrPheValTyrSerLysLeuAsnValGlnLys385390395400SerAsnTrpGluAlaGlyAsnThrPheThrCysSerValLeuHisGlu405410415GlyLeuHisAsnHisHisThrGluLysSerLeuSerHisSerProGly420425430Lys<210>5<211>207<212>PRT<213>小鼠<400>5ProAlaSerLeuSerAlaSerValGlyGluThrValThrIleThrCys151015ArgThrSerGluAsnIlePheSerTyrLeuAlaTrpTyrGlnGlnLys202530GlnGlyIleSerProGlnLeuLeuValTyrAsnAlaLysThrLeuAla354045GluGlyValProSerArgPheSerGlySerGlySerGlyThrGlnPhe505560SerLeuLysIleAsnSerLeuGlnProGluAspPheGlySerTyrTyr65707580CysGlnHisHisTyrAlaPheProTrpThrPheGlyGlyGlySerLys859095LeuGluIleLysArgAlaAspAlaAlaProThrValSerIlePhePro100105110ProSerSerGluGlnLeuThrSerGlyGlyAlaSerValValCysPhe115120125LeuAsnAsnPheTyrProLysAspIleAsnValLysTrpLysIleAsp130135140GlySerGluArgGlnAsnGlyValLeuAsnSerTrpThrAspGlnAsp145150155160SerLysAspSerThrTyrSerMetSerSerThrLeuThrLeuThrLys165170175AspGluTyrGluArgHisAsnSerTyrThrCysGluAlaThrHisLys180185190ThrSerThrSerProIleValLysSerPheAsnArgAsnGluCys195200205<210>6<211>448<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建物<400>6GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValValLysProGlyAla151015SerValLysIleSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrGlyTyr202530PheMetAsnTrpValLysGlnSerProGlyGlnSerLeuGluTrpIle354045GlyArgIleHisProTyrAspGlyAspThrPheTyrAsnGlnLysPhe505560GlnGlyLysAlaThrLeuThrValAspLysSerSerAsnThrAlaHis65707580MetGluLeuLeuSerLeuThrSerGluAspPheAlaValTyrTyrCys859095ThrArgTyrAspGlySerArg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