本發(fā)明涉及含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物及其制造方法。

背景技術(shù)：

作為顯示抗動(dòng)脈硬化作用、抑制血小板凝集作用、降低血脂作用等的成分，已知有作為ω3脂肪酸之一的二十碳五烯酸(EPA；(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸；本說明書中，當(dāng)僅記為“二十碳五烯酸”或“EPA”時(shí)，是指該物質(zhì)。)。作為二十碳五烯酸的酯之一的二十碳五烯酸乙酯(也記載為“EPA-E”，“二十碳五烯酸乙酯(ethyl icosapentate)”)被作為健康食品、轉(zhuǎn)換非處方藥(Switch OTC)、醫(yī)藥品等銷售。

由于這樣的EPA的優(yōu)異的功能性，EPA或EPA-E的制造方法也有大量報(bào)告。已知例如，將由天然油脂得到的混合物在高真空下利用三個(gè)以上的蒸餾塔進(jìn)行精密蒸餾，實(shí)質(zhì)上獲得僅碳原子數(shù)20的脂肪酸或其酯的餾分，并通過進(jìn)一步進(jìn)行精制，從而得到高純度的EPA或酯(參照日本特開平5-22239)。

另一方面，已知，在精制EPA-E中混合有源自原料魚油的除EPA以外的脂肪酸的乙酯、精制過程中生成的雜質(zhì)等。作為源自原料魚油的除EPA以外的脂肪酸，例如有被分類為ω6脂肪酸且被視為對(duì)心血管事件不利的物質(zhì)的花生四烯酸、飽和脂肪酸。作為精制過程中生成的雜質(zhì)，已知有因精制過程中的熱變性而產(chǎn)生的、EPA的5個(gè)順式雙鍵的一部分異構(gòu)化為反式的脂肪酸(例如，European Journal of Lipid Science and Technology,108(2006)589-597.“Geometrical isomerization of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acid at high temperatures”；JAOCS,66(1989)1822-1830.“Eicosapentaenoic acid geometrical isomer artifacts in heated fish oil esters")。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的課題

為了有效得到以高純度含有二十碳五烯酸乙酯那樣的二十碳五烯酸烷基酯且雜質(zhì)的含量更少的組合物，進(jìn)一步要求技術(shù)開發(fā)。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供減少了雜質(zhì)含量的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物及其制造方法、以及含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物的各種用途。

用于解決課題的方法

本發(fā)明人等對(duì)上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在二十碳五烯酸乙酯的精制過程中，產(chǎn)生具有與二十碳五烯酸乙酯極為類似的結(jié)構(gòu)且難以與二十碳五烯酸乙酯分離的雜質(zhì)；減少這些雜質(zhì)的含量，能夠制造以高純度含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，從而完成本發(fā)明。作為雜質(zhì)，通過本發(fā)明人等的研究明確了例如具有與二十碳五烯酸乙酯相同碳原子數(shù)的花生四烯酸(C20:4n-6)的乙酯、具有與二十碳五烯酸乙酯類似結(jié)構(gòu)的其他雜質(zhì)(C20:0、C20:4n-3、C20:5n-3(5,9,11,14,17)、C18:3n-3、C18:4n-3、C19:0、C19:5n-3、C21:5n-3、C22:6n-3的各乙酯)、二十碳五烯酸乙酯的單反式體。

即，本發(fā)明的方式包括以下的發(fā)明，但并不限于此。

[1]一種含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，其在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸烷基酯96～99面積％，花生四烯酸烷基酯的含量為0.7面積％以下，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體的含量為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[2]根據(jù)[1]的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體和二反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[3]根據(jù)[1]的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體、二反式體和三反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[4]根據(jù)[1]的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[5]根據(jù)[1]～[4]中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的5位、14位和17位雙鍵中的任一個(gè)為反式的單反式體的含量各自為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

[6]根據(jù)[1]～[5]中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的11位的雙鍵為反式的單反式體的含量為1.0面積％以下、0.9面積％以下、0.8面積％以下、0.6面積％以下、0.4面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

[7]一種組合物，其在使用氣相色譜利用下述分析條件進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸乙酯96～99面積％，花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[氣相色譜分析條件：GC-FID測(cè)定條件]

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID，0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min

注入口：300℃，1μL，分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID 300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

[8]根據(jù)[1]～[7]中任一項(xiàng)的組合物，花生四烯酸烷基酯的含量為0.1面積％以下或0.05面積％以下。

[9]根據(jù)[1]～[8]中任一項(xiàng)的組合物，二十碳四烯酸烷基酯的含量為0.7面積％以下、0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

[10]根據(jù)[1]～[9]中任一項(xiàng)的組合物，十八碳四烯酸烷基酯的含量為0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

[11]根據(jù)[1]～[10]中任一項(xiàng)的組合物，十九碳五烯酸烷基酯(alkyl Nonadecapentaenoate)的含量為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.049面積％以下或0.02面積％以下。

[12]根據(jù)[1]～[11]中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸烷基酯為二十碳五烯酸乙酯或二十碳五烯酸甲酯。

[13]根據(jù)[1]～[12]中任一項(xiàng)的組合物，正十九烷酸(C19:0)烷基酯的含量為0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

[14]根據(jù)[1]～[13]中任一項(xiàng)的組合物，花生酸(C20:0)烷基酯的含量為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

[15]根據(jù)[1]～[14]中任一項(xiàng)的組合物，飽和脂肪酸的烷基酯的含量為0.5面積％以下、0.3面積％以下或0.1面積％以下。

[16]根據(jù)[1]～[15]中任一項(xiàng)的組合物，5,9,11,14,17-二十碳五烯酸(C20:5n-3(5,9,11,14,17))烷基酯的含量為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

[17]根據(jù)[1]～[16]中任一項(xiàng)的組合物，二十一碳五烯酸烷基酯的含量為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.03面積％以下或0.02面積％以下。

[18]根據(jù)[1]～[17]中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸烷基酯的含量為96～98面積％。

[19]根據(jù)[1]～[18]中任一項(xiàng)的組合物，二均-γ-亞麻酸烷基酯的含量為0.05面積％以下。

[20]根據(jù)[1]～[19]中任一項(xiàng)的組合物，碳原子數(shù)20以上的單不飽和脂肪酸的烷基酯的含量為0.05面積％以下。

[21]一種醫(yī)藥組合物，其含有[1]～[20]中任一項(xiàng)的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物作為有效成分。

[22]根據(jù)[21]的醫(yī)藥組合物，其進(jìn)一步包含醫(yī)藥中可允許的添加成分。

[23]根據(jù)[21]或[22]的醫(yī)藥組合物，其為下述疾病的治療或預(yù)防劑，所述疾病是選自由動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病和癌組成的組中的至少一種。

[24]一種高濃度二十碳五烯酸乙酯的制造方法，其是在將含有二十碳五烯酸的原料油乙酯化后，進(jìn)行蒸餾和色譜，從而制造高濃度二十碳五烯酸乙酯的方法，其中，通過在0.2Torr以下的真空度及全塔190℃以下的溫度下進(jìn)行精密蒸餾來進(jìn)行蒸餾，減少花生四烯酸乙酯，并且抑制由熱引起的反式體的生成。

[25]一種含有高濃度二十碳五烯酸烷基酯的組合物的制造方法，其包括：對(duì)于通過將含有二十碳五烯酸的原料油烷基酯化而得到的包含二十碳五烯酸烷基酯的組合物，在0.2Torr以下的真空度及全塔190℃以下的溫度下進(jìn)行精密蒸餾；對(duì)于精密蒸餾后的組合物，使用色譜進(jìn)行濃縮處理。

[26]根據(jù)[25]的方法，使用碳原子數(shù)1或碳原子數(shù)2的低級(jí)醇進(jìn)行烷基酯化。

[27]根據(jù)[24]～[26]中任一項(xiàng)的方法，通過實(shí)施精密蒸餾和色譜，得到[1]～[20]中任一項(xiàng)的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物。

[28]根據(jù)[24]～[27]中任一項(xiàng)的方法，精密蒸餾是使用兩個(gè)以上蒸餾塔的連續(xù)精密蒸餾。

[29]根據(jù)[24]～[28]中任一項(xiàng)的方法，色譜為反相色譜。

[30]根據(jù)[24]～[29]中任一項(xiàng)的方法，原料油為來自水產(chǎn)物原料的油脂。

[31][1]～[20]中任一項(xiàng)的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物在制造食品中的應(yīng)用。

[32][1]～[20]中任一項(xiàng)的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物在制造醫(yī)藥組合物中的應(yīng)用。

[33]根據(jù)[32]的應(yīng)用，醫(yī)藥組合物為下述疾病的治療或預(yù)防劑，所述疾病是選自由動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病和癌組成的組中的至少一種。

[34][1]～[20]中任一項(xiàng)的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物作為下述疾病的治療或預(yù)防劑的有效成分的應(yīng)用，所述疾病是選自由動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病和癌組成的組中的至少一種。

[35]一種疾病的預(yù)防、治療或緩解方法，包括：對(duì)患有下述疾病或具有患病危險(xiǎn)性的對(duì)象者給藥[21]～[23]中任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物，所述疾病是選自由動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病和癌組成的組中的至少一種疾病。

此外，本發(fā)明的方式還包括以下的發(fā)明，但并不限于此。

(1)一種組合物，其在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸乙酯96～99面積％，花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下，二十碳五烯酸乙酯的單反式體的含量為2.5面積％以下。

(2)根據(jù)(1)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的單反式體和二反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下。

(3)根據(jù)(1)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的單反式體、二反式體和三反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下。

(4)根據(jù)(1)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下。

(5)根據(jù)(1)至(4)中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的5位、14位、17位的雙鍵中任一個(gè)為反式的單反式體的含量各自為0.5面積％以下。

(6)根據(jù)(1)至(5)中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的11位的雙鍵為反式的單反式體的含量為1.0面積％以下。

(7)一種組合物，在使用氣相色譜利用下述分析條件測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸乙酯96～99面積％，花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量為2.5面積％以下，

[氣相色譜分析條件：GC-FID測(cè)定條件]

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID，0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min

注入口：300℃，1μL，分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID 300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

(8)根據(jù)(1)至(7)中任一項(xiàng)的組合物，正十九烷酸(C19:0)乙酯的含量為0.1面積％以下。

(9)根據(jù)(1)至(8)中任一項(xiàng)的組合物，花生酸(C20:0)乙酯的含量為0.2面積％以下。

(10)根據(jù)(1)至(9)中任一項(xiàng)的組合物，飽和脂肪酸的乙酯的含量為0.5面積％以下。

(11)根據(jù)(1)至(10)中任一項(xiàng)的組合物，5,9,11,14,17-二十碳五烯酸(C20:5n-3(5,9,11,14,17))乙酯的含量為0.2面積％以下。

(12)根據(jù)(1)至(11)中任一項(xiàng)的組合物，二十碳五烯酸乙酯的含量為96～98面積％。

(13)一種醫(yī)藥組合物，其含有(1)至(12)中任一項(xiàng)的組合物作為有效成分。

(14)一種高濃度二十碳五烯酸乙酯的制造方法，其是在將含有二十碳五烯酸的原料油乙酯化后，通過蒸餾工序和色譜工序，精制高濃度二十碳五烯酸乙酯的方法，其特征在于，通過在真空度0.2Torr以下、全塔190℃以下的溫度下進(jìn)行精密蒸餾而進(jìn)行蒸餾工序，減少花生四烯酸乙酯，并且抑制由熱引起的反式體的生成。

(15)根據(jù)(14)的方法，精密蒸餾為使用兩個(gè)以上蒸餾塔的連續(xù)精密蒸餾。

(16)根據(jù)(14)或(15)的方法，色譜工序?yàn)榉聪嗌V工序。

(17)一種組合物，其含有二十碳五烯酸乙酯96面積％以上、96～99面積％或96～98面積％，以及花生四烯酸乙酯0.7面積％以下、0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

(18)根據(jù)(17)的組合物，其在使用氣相色譜利用上述分析條件進(jìn)行測(cè)定時(shí)，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027或1.062的峰出現(xiàn)的各物質(zhì)的含量為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

(19)根據(jù)(17)或(18)的組合物，其在使用氣相色譜利用上述分析條件進(jìn)行測(cè)定時(shí)，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量為1.0面積％以下、0.8面積％以下、0.6面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

(20)根據(jù)(17)至(19)中任一項(xiàng)的組合物，α-亞麻酸(C18:3n-3)乙酯的含量為0.2面積％以下。

(21)一種組合物，其含有二十碳五烯酸乙酯96～99面積％，花生四烯酸乙酯的含量為0.2面積％以下，二十碳五烯酸乙酯的單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)為2.5面積％以下。

(22)根據(jù)(21)的組合物，進(jìn)一步地，飽和脂肪酸的乙酯的含量為0.5面積％以下。

(23)根據(jù)(21)或(22)的組合物，進(jìn)一步地，5,9,11,14,17-二十碳五烯酸(C20:5n-3(5,9,11,14,17))乙酯的含量為0.2面積％以下。

發(fā)明效果

本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，能夠制造減少具有與二十碳五烯酸烷基酯類似結(jié)構(gòu)的花生四烯酸烷基酯、二十碳五烯酸烷基酯的單反式體的含量，并且以高純度含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中的組合物也能夠在工業(yè)規(guī)模下制造，因此能夠用作具有安全性且需要大量生產(chǎn)的健康食品、醫(yī)藥品等，在該方面是有利的。

極力降低作為代表性的ω6系脂肪酸的花生四烯酸的含量是指，盡可能降低具有與二十碳五烯酸烷基酯的功能相反的功能的脂肪酸。因此，在使花生四烯酸的含量極力降低時(shí)，能夠有效發(fā)揮二十碳五烯酸烷基酯的功能。

一般已知如下關(guān)系：如果想要通過蒸餾減少花生四烯酸等，則作為熱變性物的反式異構(gòu)體會(huì)增加。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的方法中，能夠使與二十碳五烯酸具有這樣的關(guān)系的花生四烯酸和二十碳五烯酸的反式異構(gòu)體均比以往降低。

具體實(shí)施方式

本說明書中，“工序”這一用語(yǔ)不僅是指獨(dú)立的工序，即使在與其他工序不能明確區(qū)分的情況下，只要能夠?qū)崿F(xiàn)該工序所期望的目的，就包含于本用語(yǔ)中。本說明書中，關(guān)于組合物中各成分的量，在組合物中存在多種相當(dāng)于各成分的物質(zhì)的情況下，只要沒有特別說明，就意味著存在于組合物中的該多種物質(zhì)的合計(jì)量。

本說明書中，使用“～”表示的數(shù)值范圍表示包含記載在其前后的數(shù)值分別作為最小值和最大值的范圍。本說明書中，關(guān)于百分比，對(duì)于“以下”或“小于”這樣的用語(yǔ)，只要沒有特別記載下限值，就包含0％即“不含有”的情況，或者是指包含以目前的方法不能檢測(cè)的值的范圍。

本說明書中記載有對(duì)同一個(gè)對(duì)象提及的僅規(guī)定一個(gè)或多個(gè)上限值的數(shù)值范圍和僅規(guī)定一個(gè)或多個(gè)下限值的數(shù)值范圍的情況下，只要沒有特別說明，則將從一個(gè)或多個(gè)上限值中任意選擇的上限值與從一個(gè)或多個(gè)下限值中任意選擇的下限值組合而成立的數(shù)值范圍也包括在本發(fā)明的一個(gè)方式中。

本說明書中，“油”或“油脂”不僅為僅含甘油三酯的物質(zhì)，還包括以甘油三酯為主成分且含有甘油二酯、甘油單酯、磷脂、膽固醇、游離脂肪酸等其他脂質(zhì)的粗油?！坝汀被颉坝椭笔侵赴@些脂質(zhì)的組合物。

用語(yǔ)“脂肪酸”不僅包括游離的飽和或不飽和脂肪酸它們自身，還包括作為游離的飽和或不飽和脂肪酸、飽和或不飽和脂肪酸醇酯、甘油三酯、甘油二酯、甘油單酯、磷脂、甾醇酯等中所包含的構(gòu)成單元的脂肪酸，換言之，也可稱為構(gòu)成脂肪酸。本說明書中，只要沒有特別說明，則有時(shí)省略包含脂肪酸的化合物的形態(tài)。作為包含脂肪酸的化合物的形態(tài)，可舉出游離脂肪酸形態(tài)、脂肪酸醇酯形態(tài)、甘油酯形態(tài)、磷脂形態(tài)、甾醇酯形態(tài)等。包含相同脂肪酸的化合物在油中可以以單一的形態(tài)包含，也可以作為兩種以上形態(tài)的混合物包含。

標(biāo)示脂肪酸時(shí)，有時(shí)采用如下數(shù)值表達(dá)：分別使用數(shù)字和字母來簡(jiǎn)略表示碳原子數(shù)、雙鍵數(shù)和雙鍵部位。例如，碳原子數(shù)20的飽和脂肪酸可標(biāo)示為“C20:0”，碳原子數(shù)18的單不飽和脂肪酸可標(biāo)示為“C18:1”等，花生四烯酸可標(biāo)示為“C20:4，n-6”等。“n-”表示從脂肪酸的甲基末端開始數(shù)的雙鍵的位置，例如，如果為“n-6”，則表示雙鍵的位置為從脂肪酸的甲基末端開始數(shù)的第6個(gè)位置。該方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的，關(guān)于根據(jù)該方法標(biāo)示的脂肪酸，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員就可容易地確定。

本說明書中，“粗油”是指上述脂質(zhì)的混合物，從生物提取的狀態(tài)的油。本說明書中，“精制油”是指對(duì)粗油進(jìn)行如下粗油精制處理的油，所述粗油精制處理通過進(jìn)行選自由脫膠工序、脫酸工序、脫色工序和脫臭工序組成的組中的至少一種的油脂的精制工序，去除磷脂和固醇等目標(biāo)物以外的物質(zhì)。

＜組合物＞

組成

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物含有下述含量的二十碳五烯酸乙酯(EPA-E)那樣的二十碳五烯酸烷基酯(以下稱為EPA烷基酯。)，可以含有下述含量的一種或兩種以上后述的其他成分即雜質(zhì)。

即，本發(fā)明的一個(gè)方式中的組合物為下述含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物：在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸烷基酯96～99面積％，花生四烯酸烷基酯的含量為0.7面積％以下，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體的含量為2.5面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中包含EPA烷基酯96～99面積％，優(yōu)選包含96～98面積％。由于EPA烷基酯的含量為96面積％以上，因此優(yōu)選在醫(yī)藥用途那樣需要高純度的EPA烷基酯時(shí)使用。由于EPA烷基酯的含量為99面積％以下，因此能夠在以高濃度含有EPA烷基酯的同時(shí)將濃縮工序中的EPA烷基酯的成品率維持在良好的范圍，可認(rèn)為工業(yè)上是合理的。

EPA烷基酯中的烷基為源自通常在脂肪酸的烷基酯化中使用的低級(jí)醇的烷基。作為EPA烷基酯中的烷基，優(yōu)選可舉出碳原子數(shù)1或碳原子數(shù)2的烷基，可舉出甲基和乙基。作為EPA烷基酯，可舉出EPA乙酯(EPA-E)和EPA甲酯(EPA-M)。

對(duì)于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中可包含的作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，可舉出EPA烷基酯所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的1個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的單反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，該單反式體的含量為2.5面積％以下，可以設(shè)為2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。在單反式體的含量變得更少的情況下，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物能夠以更高濃度含有EPA烷基酯，更加有效地發(fā)揮EPA烷基酯的功能性。

對(duì)于另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，可舉出EPA烷基酯所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的2個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的二反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，該單反式體和二反式體的含量的合計(jì)可以設(shè)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

在單反式體和二反式體的含量的合計(jì)變得更少的情況下，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物能夠以更高濃度含有EPA烷基酯，更加有效地發(fā)揮EPA烷基酯的功能性。

對(duì)于再另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，可舉出EPA烷基酯所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的3個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的三反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，這些單反式體、二反式體和三反式體的含量的合計(jì)可以設(shè)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

對(duì)于再另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，可舉出EPA-烷基酯所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的4個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的四反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，這些單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)可以設(shè)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

如上所述，在單反式體、二反式體、三反式體和四反式體中的兩種以上的含量的合計(jì)變得更少的情況下，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物能夠以更高濃度含有EPA烷基酯，更加有效地發(fā)揮EPA烷基酯的功能性。

對(duì)于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中的作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，例如可舉出EPA-E所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的1個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的單反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中可包含的該單反式體的含量為2.5面積％以下，可以設(shè)為2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

對(duì)于另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，例如，EPA-E所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的2個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的二反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中可包含的該單反式體和二反式體的含量的合計(jì)可以為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

對(duì)于再另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，例如可舉出EPA-E所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的3個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的三反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物可包含的這些單反式體、二反式體和三反式體的含量的合計(jì)可以為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

對(duì)于再另一種作為雜質(zhì)的異構(gòu)體，例如可舉出EPA-E所具有的5個(gè)順式體的雙鍵中的4個(gè)轉(zhuǎn)變?yōu)榉词襟w的四反式體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物可包含的這些單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)可以為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，如上所述的單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的含量的合計(jì)可以為1.417面積％以上。在組合物包含特定量以上的單反式體、二反式體、三反式體和四反式體的情況下，根據(jù)這些異構(gòu)體的含量，具有與EPA結(jié)構(gòu)不同的其他脂肪酸的含量低的傾向。在組合物包含特定以上的這些異構(gòu)體的情況下，具有難以從EPA分離的其他脂肪酸，特別是花生四烯酸烷基酯的含量低的傾向，與具有難以與組合物中的EPA烷基酯分離的傾向的其他脂肪酸烷基酯的含量平衡更加良好，而且具有生產(chǎn)性也提高的傾向。

如果EPA烷基酯的順式體的雙鍵在蒸餾時(shí)受熱，則首先一個(gè)雙鍵變?yōu)榉词襟w，如果進(jìn)一步受熱，則產(chǎn)生二、三、四反式體。因此，如果能夠抑制單反式體的生成，則也能夠抑制其以上的反式異構(gòu)體的生成。

在190℃以下的溫度對(duì)全塔進(jìn)行蒸餾的情況下，有時(shí)產(chǎn)生EPA烷基酯的異構(gòu)體。例如，如實(shí)施例中所示那樣，在190℃以下的溫度對(duì)全塔進(jìn)行蒸餾時(shí)產(chǎn)生的異構(gòu)體，如實(shí)施例中所示，為EPA-E的5位、11位、14位、17位的雙鍵中任一個(gè)變?yōu)榉词降膯畏词襟w。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，EPA烷基酯的5位、14位、17位的雙鍵中的任一個(gè)為反式的單反式體的含量各自可以設(shè)為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，EPA烷基酯的11位的雙鍵為反式的單反式體的含量可以設(shè)為1.0面積％以下、0.9面積％以下、0.8面積％以下、0.6面積％以下、0.4面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，例如EPA-E的5位、14位、17位的雙鍵中的任一個(gè)為反式的單反式體的含量各自可以設(shè)為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，例如EPA-E的11位的雙鍵為反式的單反式體的含量可以設(shè)為1.0面積％以下、0.9面積％以下、0.8面積％以下、0.6面積％以下、0.4面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

如上所述，在5位、14位、17位的雙鍵中的任一個(gè)為反式的單反式體的含量如上所述那樣變得更少的情況，或者11位的雙鍵為反式的單反式體的含量如上所述那樣變得更少的情況下，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物能夠以更高濃度含有EPA烷基酯例如EPA-E，更加有效地發(fā)揮EPA烷基酯例如EPA-E的功能性。在熔點(diǎn)低、具有在低溫下容易渾濁或固化的傾向的反式體的含量更加少的情況下，本組合物具有在低溫顯示良好的操作性的傾向。

本發(fā)明中，“面積％”是指，在使用帶有氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)的氣相色譜來分析組合物的圖表中，鑒定各成分的峰，使用安捷倫化學(xué)工作站(Agilent ChemStation)積分算法(修訂本C.01.03[37]，安捷倫科技)，求出各脂肪酸的峰面積，以各峰面積相對(duì)于脂肪酸的峰面積的總和的比例表示該峰的成分的含有比率。油化學(xué)領(lǐng)域中，作為與重量％幾乎相同的含義而使用面積％。參照日本油化學(xué)會(huì)(JOCS)制定的基準(zhǔn)油脂分析試驗(yàn)法2013版的2.4.2.1-2013脂肪酸組成(FID恒溫氣相色譜法)以及該文獻(xiàn)的2.4.2.2-2013脂肪酸組成(FID升溫氣相色譜法)。氣相色譜的分析條件如下。

在將EPA烷基酯設(shè)為EPA-E的情況下，鑒定為EPA-E的單反式體的化合物，在以下的氣相色譜測(cè)定條件下的峰的保持時(shí)間可以分別顯示出實(shí)施例1的表1中所示的數(shù)值。本發(fā)明中，相對(duì)保持時(shí)間是指氣相色譜測(cè)定的各峰的實(shí)際保持時(shí)間除以二十碳五烯酸乙酯的保持時(shí)間的數(shù)字。即，表示將二十碳五烯酸乙酯的保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的各峰的相對(duì)保持時(shí)間。各峰的保持時(shí)間的測(cè)定值根據(jù)每次測(cè)定、或者樣品中所含的成分的濃度而稍有偏差，但在以相對(duì)保持時(shí)間表現(xiàn)時(shí)，該偏差落在±0.01以內(nèi)。本說明書中，對(duì)于相對(duì)保持時(shí)間使用的“約”這一用語(yǔ)意味著包括該偏差的范圍。

GC-FID測(cè)定條件

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID、0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min

注入口：300℃，1μL，分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID，300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

在為將EPA烷基酯設(shè)為EPA-E的組合物的情況下，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量可以設(shè)為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下1.8面積％以下或1.5面積％以下。

在為將EPA烷基酯設(shè)為EPA-E的組合物的情況下，將二十碳五烯酸乙酯的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量可以設(shè)為1.417面積％以上。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及的組合物中，作為雜質(zhì)，可舉出花生四烯酸烷基酯等碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯等。碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯具有與EPA烷基酯類似的結(jié)構(gòu)或者極其類似的結(jié)構(gòu)，在蒸餾工序和色譜工序中，通常具有難以與EPA烷基酯分離的傾向。

碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯中的烷基是源自通常在脂肪酸的烷基酯化中使用的低級(jí)醇的烷基。作為碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯中的烷基，優(yōu)選可舉出碳原子數(shù)1或碳原子數(shù)2的烷基，具體可舉出乙基和甲基。例如，作為碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯，可舉出碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸乙酯、和碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸甲酯。對(duì)于以下描述的碳原子數(shù)18以上的飽和或不飽和脂肪酸烷基酯的具體例中的烷基也同樣。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“花生四烯酸烷基酯”(C20:4n-6烷基酯，(5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-二十碳四烯酸烷基酯)的含量為0.7面積％以下，更優(yōu)選可以為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下，進(jìn)一步優(yōu)選可以為0.1面積％以下或0.05面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，例如“花生四烯酸乙酯”(C20:4n-6乙酯，(5Z,8Z,11Z,14Z)-5,8,11,14-二十碳四烯酸乙酯)的含量為0.7面積％以下，更優(yōu)選可以為0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下，進(jìn)一步優(yōu)選可以為0.1面積％以下或0.05面積％以下。

像這樣，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，如上所述那樣通過極力降低作為代表性的ω6系脂肪酸的花生四烯酸的含量，能夠有效發(fā)揮EPA-E那樣的EPA烷基酯的功能。

作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中所含的花生四烯酸烷基酯以外的雜質(zhì)，例如可舉出以下物質(zhì)。它們主要是具有與EPA烷基酯類似結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，并被認(rèn)為是在色譜工序中難以從EPA烷基酯分離的物質(zhì)。在本發(fā)明的各實(shí)施方式的組合物中，這些一種或多種雜質(zhì)的含量低，因此能夠以高含量包含EPA烷基酯。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C20:5n-3(5,9,11,14,17)烷基酯”(5,9,11,14,17-二十碳五烯酸烷基酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C20:5n-3(5,9,11,14,17)乙酯”(5,9,11,14,17-二十碳五烯酸乙酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C18:3n-3烷基酯”(α-亞麻酸烷基酯，(9Z,12Z,15Z)-9,12,15-十八碳三烯酸烷基酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C18:3n-3乙酯”(α-亞麻酸乙酯，(9Z,12Z,15Z)-9,12,15-十八碳三烯酸乙酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C18:4n-3烷基酯”(十八碳四烯酸烷基酯，(6Z,9Z,12Z,15Z)-6,9,12,15-十八碳四烯酸烷基酯)的含量可以為0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C18:4n-3乙酯”(ODTA-E，十八碳四烯酸乙酯，(6Z,9Z,12Z,15Z)-6,9,12,15-十八碳四烯酸乙酯)的含量可以為0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

C18:4n-3烷基酯已知為功能性成分，因此在C18:4n-3烷基酯、例如C18:4n-3乙酯的含量更低的組合物中，附加給組合物的追加功能的影響變得更弱。因此，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，考慮其他功能的必要性變低，組合物的操作性變得容易。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C19:5n-3烷基酯”(十九碳五烯酸烷基酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.049面積％以下或0.02面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C19:5n-3乙酯”(NDPA-E，十九碳五烯酸乙酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.049面積％以下或0.02面積％以下。

C19:5n-3烷基已知為功能性成分，因此在C19:5n-3烷基酯、例如C19:5n-3乙酯的含量更低的組合物中，附加給組合物的追加功能的影響變得更弱。因此，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，考慮其他功能的必要性變低，組合物的操作性變得容易。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C20:4n-3烷基酯”(二十碳四烯酸烷基酯)的含量可以為0.7面積％以下、0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C20:4n-3乙酯”(ETA-E，二十碳四烯酸乙酯)的含量可以為0.7面積％以下、0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下。

C20:4n-3烷基已知為功能性成分，因此在C20:4n-3烷基酯、例如C20:4n-3乙酯的含量更低的組合物中，附加給組合物的追加功能的影響變得更弱。因此，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，考慮其他功能的必要性變低，組合物的操作性變得容易。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C21:5n-3烷基酯”(二十一碳五烯酸烷基酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.03面積％以下或0.02面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C21:5n-3乙酯”(HPA-E，二十一碳五烯酸乙酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.03面積％以下或0.02面積％以下。

C21:5n-3烷基酯已知為功能性成分，因此在C21:5n-3烷基酯、例如C21:5n-3乙酯的含量更低的組合物中，附加給組合物的追加功能的影響變得更弱。因此，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，考慮其他功能的必要性變低，組合物的操作性變得容易。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，雖然魚油中包含碳原子數(shù)14～22的飽和脂肪酸，但在用于心血管系統(tǒng)中的用途的情況下，優(yōu)選避免攝取飽和脂肪酸，飽和脂肪酸的含量越低越優(yōu)選。飽和脂肪酸的烷基酯的含量的合計(jì)可以為0.5面積％以下、0.3面積％以下或0.1面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，飽和脂肪酸的乙酯的含量的合計(jì)可以為0.5面積％以下、0.3面積％以下或0.1面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，飽和脂肪酸中的“C19:0烷基酯”(正十九烷酸烷基酯)的含量可以為0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，例如“C19:0乙酯”(正十九烷酸乙酯)的含量可以為0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，飽和脂肪酸中“C20:0烷基酯”(花生酸烷基酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，“C20:0乙酯”(花生酸乙酯)的含量可以為0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，可以使除EPA烷基酯和上述的脂肪酸以外的其他脂肪酸的含量低。由此，能夠以更高含量包含EPA烷基酯，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，能夠降低考慮其他功能的必要性。

作為另一種脂肪酸，可舉出碳原子數(shù)20以上的單不飽和脂肪酸(MUFA)的烷基酯，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物中，MUFA烷基酯的含量可以為0.05面積％以下。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及的組合物中，“C20:1n-11乙酯”(鱈油酸乙酯)、“C20:1n-9乙酯”(巨頭鯨魚酸乙酯)、“C22:1n-11乙酯”(鯨蠟烯酸乙酯)和“C22:1n-9乙酯”(芥酸乙酯)那樣的MUFA乙酯的含量的合計(jì)可以為0.05面積％以下。

作為再另一種脂肪酸，“C20:3n-6烷基酯”(二均-γ-亞麻酸烷基酯，DGLA烷基酯)的含量可以為0.05面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及的組合物中，“C20:3n-6乙酯”(二均-γ-亞麻酸乙酯，DGLA乙酯)的含量可以為0.05面積％以下。有時(shí)發(fā)揮與EPA相反作用的n-6系的脂肪酸的含量低的組合物能夠良好地發(fā)揮基于EPA烷基酯的功能。

作為再另一種脂肪酸，“C22:6n-3烷基酯”(二十二碳六烯酸烷基酯)的含量可以為0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.03面積％以下。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及的組合物中，“C22:6n-3乙酯”(二十二碳六烯酸乙酯，DHA乙酯)的含量可以為0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.03面積％以下。

C22:6n-3烷基酯已知為功能性成分，因此C22:6n-3烷基酯、例如C22:6n-3乙酯的含量更低的組合物中，附加給組合物的追加功能的影響變得更弱。因此，在使用本組合物作為基于EPA烷基酯的功能性組合物時(shí)，考慮其他功能的必要性變低，組合物的操作性變得容易。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，例如可以包含更加有效獲得EPA烷基酯的功能的以下組合物的任一種：

(1)下述含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，其在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有96～99面積％的EPA烷基酯例如EPA-E，花生四烯酸烷基酯例如花生四烯酸乙酯的含量為0.1面積％以下或0.05面積％以下，二十碳五烯酸烷基酯例如EPA-E的單反式體的含量為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

(2)下述含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，其在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有96～99面積％的EPA烷基酯例如EPA-E，花生四烯酸烷基酯例如花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下，二十碳五烯酸烷基酯例如EPA-E的單反式體的含量為1.417面積％以上、并且為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

(3)下述含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，其在使用氣相色譜利用下述分析條件進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有96～99面積％的EPA-E，花生四烯酸乙酯的含量為0.1面積％以下或0.05面積％以下，將EPA-E的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[氣相色譜分析條件：GC-FID測(cè)定條件]

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID，0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min

注入口：300℃，1μL，分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID，300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

(4)下述含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物，其在使用氣相色譜利用下述分析條件進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有96～99面積％的EPA-E，花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下，將EPA-E的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量為1.417面積％以上、并且為2.5面積％以下、2.3面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

[氣相色譜分析條件：GC-FID測(cè)定條件]

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID，0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min

注入口：300℃，1μL，分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID，300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

(5)上述(1)的組合物中，二十碳五烯酸烷基酯例如EPA-E的單反式體的含量為1.417面積％以上的組合物。

(6)上述(3)的組合物中，將EPA-E的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的相對(duì)保持時(shí)間以約0.955、1.027、1.062或1.077的峰出現(xiàn)的物質(zhì)的含量的合計(jì)量為1.417面積％以上的組合物。

(7)上述(2)的組合物中，花生四烯酸乙酯的含量為0.1面積％以下或0.05面積％以下的組合物。

(8)上述(4)的組合物中，花生四烯酸乙酯的含量為0.1面積％以下或0.05面積％以下的組合物。

進(jìn)一步地，上述(1)～(8)的組合物中，DGLA烷基酯、例如DGLA乙酯的含量可以為0.05面積％以下，代替DGLA烷基酯的含量或者在其基礎(chǔ)上，MUFA烷基酯、例如MUFA乙酯的含量可以為0.05面積％以下。

進(jìn)一步地，上述(1)～(8)的組合物除了DGLA、MUFA或DGLA與MUFA的組合之外，還可以組合選自由以下物質(zhì)組成的組中的至少一種：

0.7面積％以下、0.5面積％以下、0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下的二十碳四烯酸烷基酯、例如二十碳四烯酸乙酯；

0.4面積％以下、0.3面積％以下、0.2面積％以下或0.1面積％以下的十八碳四烯酸烷基酯、例如十八碳四烯酸乙酯；

0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.049面積％以下或0.02面積％以下的十九碳五烯酸烷基酯、例如十九碳五烯酸乙酯；

0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下的正十九烷酸(C19:0)烷基酯、例如正十九烷酸乙酯；

0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下的花生酸(C20:0)烷基酯、例如花生酸乙酯；

0.5面積％以下、0.3面積％以下或0.1面積％以下的飽和脂肪酸的烷基酯、例如飽和脂肪酸乙酯；

0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.07面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下的5,9,11,14,17-二十碳五烯酸(C20:5n-3(5,9,11,14,17))烷基酯、例如5,9,11,14,17-二十碳五烯酸(C20:5n-3(5,9,11,14,17))乙酯；

0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下、0.03面積％以下或0.02面積％以下的二十一碳五烯酸烷基酯、例如二十一碳五烯酸乙酯；

0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.03面積％以下的二十二碳六烯酸烷基酯、例如二十二碳六烯酸乙酯；

0.2面積％以下、0.15面積％以下、0.1面積％以下、0.05面積％以下或0.02面積％以下的α-亞麻酸烷基酯、例如α-亞麻酸乙酯。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式還包含如下含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物：在通過氣相色譜進(jìn)行測(cè)定時(shí)，含有二十碳五烯酸烷基酯96～99面積％，花生四烯酸烷基酯的含量為0.1面積％以下。如上所述，二十碳五烯酸烷基酯、例如EPA-E在精制工序中具有難以與結(jié)構(gòu)類似的花生四烯酸烷基酯、例如ARA-E分離的傾向。本實(shí)施方式的組合物中，以96～99面積％以上這樣的高含量含有處于該難以分離的關(guān)系的兩種化合物中作為目標(biāo)物的二十碳五烯酸烷基酯，并且作為非目標(biāo)的花生四烯酸烷基酯的含量極低為0.1面積％以下。因此，在本組合物中，由花生四烯酸烷基酯造成的影響極少，由此本組合物能夠優(yōu)選用于要求高含量的二十碳五烯酸烷基酯的用途。在本實(shí)施方式的組合物中，二十碳五烯酸烷基酯的單反式體的含量可以為10面積％以下、5.0面積％以下、3.0面積％以下、2.5面積％以下、2.0面積％以下、1.8面積％以下或1.5面積％以下。

＜組合物的制造方法＞

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式包含含有高濃度二十碳五烯酸烷基酯的組合物的制造方法，該制造方法包括：對(duì)于通過將含有二十碳五烯酸的原料油烷基酯化而得到的包含二十碳五烯酸烷基酯的組合物，在0.2Torr以下的真空度及全塔190℃以下的溫度下進(jìn)行精密蒸餾；對(duì)于精密蒸餾后的組合物，使用色譜進(jìn)行濃縮處理，根據(jù)需要還包括其他工序。

此外，本發(fā)明的另一個(gè)方實(shí)施方式包含高濃度二十碳五烯酸乙酯的制造方法，其是在將含有二十碳五烯酸的原料油乙酯化后，通過進(jìn)行蒸餾和色譜，從而制造高濃度二十碳五烯酸乙酯的方法，其中，通過在0.2Torr以下的真空度及全塔190℃以下的溫度下進(jìn)行精密蒸餾來進(jìn)行蒸餾，減少花生四烯酸乙酯，并且抑制由熱引起的反式體的生成。

本說明書中，在上述本發(fā)明的各實(shí)施方式中所包含的制造方法中，有時(shí)將進(jìn)行蒸餾的工序簡(jiǎn)稱為蒸餾工序，有時(shí)將進(jìn)行色譜的工序簡(jiǎn)稱為色譜工序。此外，本說明書中，有時(shí)將蒸餾工序和色譜工序進(jìn)一步歸納稱為精制工序。

作為本發(fā)明的原料，可以使用含有二十碳五烯酸作為構(gòu)成脂肪酸的油脂、或者磷脂等。已知微生物油、海產(chǎn)動(dòng)物油等中大量含有二十碳五烯酸。作為原料油，具體可以例示沙丁魚、金槍魚、鰹魚等魚類、磷蝦等甲殼類的海產(chǎn)動(dòng)物油；源自耶羅維亞酵母(Yarrowia)屬等的酵母、被孢霉屬等的絲狀菌類、裸藻屬等的藻類、不等鞭毛類等產(chǎn)生脂質(zhì)的微生物的油。這些原料油也可以是源自基因重組微生物的油，所述基因重組微生物導(dǎo)入有改變基因的變異Δ9延長(zhǎng)酶那樣的基因。在這些微生物油中，除了EPA以外還包含花生四烯酸等碳原子數(shù)20的脂肪酸，因此存在同樣的課題。此外，源自基因重組植物的油也可以用作原料油，所述基因重組植物是基于通過重組技術(shù)導(dǎo)入有變異Δ9延長(zhǎng)酶等基因的蕓苔屬物種、向日葵、玉米、棉、亞麻、紅花等油料種子植物而得的。對(duì)于基因重組植物油和基因重組微生物油等，例如可以例示W(wǎng)O2012/027698、WO2010/033753等中記載的物質(zhì)。

例如，在魚油中以1分子的甘油與3分子的脂肪酸進(jìn)行酯結(jié)合而成的甘油三酯的狀態(tài)包含EPA。由于在魚油中包含碳原子數(shù)為14～22、雙鍵數(shù)為0～6的多種脂肪酸，因此EPA的濃度有限。因此，在催化劑或酶的存在下，使結(jié)合于甘油三酯的脂肪酸與低級(jí)醇反應(yīng)來進(jìn)行烷基酯化，從而通過例如與乙醇反應(yīng)進(jìn)行乙酯化而從丙三醇分離脂肪酸，然后去除EPA-E那樣的EPA烷基酯以外的脂肪酸烷基酯，由此制造高純度的EPA烷基酯、例如EPA-E。在本發(fā)明的一個(gè)方式的制造方法中，可以包括準(zhǔn)備這樣的通過烷基酯化而得到的EPA烷基酯的工序，也可以包括調(diào)制原料油、以及利用低級(jí)醇將原料油酯化而得到EPA烷基酯的工序(以下，有時(shí)稱為酯化工序)。

粗油精制工序

烷基酯化中所使用的原料油可以是粗油，也可以是精制油。粗油可以是由水產(chǎn)物原料得到的油脂，也可以是由微生物原料得到的油脂。例如，由水產(chǎn)物原料得到粗油的方法可以是任一種方法，但在魚油的例子中，通常用如下方法來采集。將整條魚或由水產(chǎn)加工產(chǎn)生的魚頭、皮、脊骨、內(nèi)臟等加工殘?jiān)鬯椴⒄糁笾螅瑝赫ザ蛛x成煮汁(濃稠魚汁)和壓榨粉。通過離心分離，從煮汁分離與煮汁一同得到的油脂，作為魚油粗油。

一般而言，魚油的粗油經(jīng)由粗油精制工序而制成精制魚油，所述粗油精制工序根據(jù)原料進(jìn)行脫膠工序、脫酸工序、使用活性白土或活性炭的脫色工序、水洗工序、利用水蒸氣蒸餾等的脫臭工序等，去除磷脂和固醇等目標(biāo)物以外的物質(zhì)。本發(fā)明的一個(gè)方式中，也可以使用該精制魚油作為原料。

酯化工序

將作為原料油的油脂通過使用低級(jí)醇的醇解而分解為低級(jí)醇酯。作為低級(jí)醇，可舉出通常用于脂肪酸的烷基酯化的低級(jí)醇、例如碳原子數(shù)1或碳原子數(shù)2的低級(jí)醇。醇解是在油脂中加入低級(jí)醇例如乙醇和催化劑或酶并使其反應(yīng)，由結(jié)合于丙三醇的脂肪酸生成乙酯。作為催化劑，使用堿催化劑、酸催化劑等。作為酶，可以使用脂肪酶。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)已明確脂肪酸的醇解反應(yīng)效率高，在醇解后，可得到主要包含它們的烷基酯形態(tài)的脂肪酸的組合物。因此，在本說明書中，關(guān)于酯化工序后的脂肪酸，只要沒有特別說明，則有時(shí)省略脂肪酸為烷基酯形態(tài)的脂肪酸而表述。但是，并不完全排除包含烷基酯形態(tài)以外的形態(tài)的脂肪酸。

精制工序

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物的制造包括：利用蒸餾工序及使用高效液相柱色譜(HPLC)那樣的色譜的色譜工序的精制工序。在此，例如EPA-E和花生四烯酸乙酯雖然具有同樣的分子結(jié)構(gòu)，但分子量稍有不同，因此可認(rèn)為，能夠通過利用沸點(diǎn)之差(EPA-E；417℃/760mmHg，花生四烯酸乙酯；418.1℃/760mmHg)來提高精度的蒸餾來分離。根據(jù)該觀點(diǎn)可認(rèn)為為了提高分離度，需要增加塔板數(shù)和/或增加回流量。然而，增加塔板數(shù)會(huì)導(dǎo)致增加壓力阻力，從而不得不提高蒸餾溫度。同樣地，增加回流量也需要提高蒸餾溫度。另一方面，已知EPA因熱而異構(gòu)化(European Journal of Lipid Science and Technology,108(2006)589-597；JAOCS,66(1989)1822-1830)。由此，用于提高蒸餾精度的進(jìn)一步的加熱會(huì)引起異構(gòu)化，增加異構(gòu)體。如此，很難在不生成EPA-E的異構(gòu)體或者保持生成量少的同時(shí)，在工業(yè)上即兼顧成品率和純度地分離EPA-E那樣的EPA烷基酯與花生四烯酸乙酯那樣的花生四烯酸烷基酯。

此外，日本特開平5-222392號(hào)中記載的蒸餾為收集C20餾分的方法，因此無法實(shí)現(xiàn)EPA-E與花生四烯酸乙酯的分離。雖然通過之后的利用HPLC的精制工序可以在某種程度上實(shí)現(xiàn)EPA-E與花生四烯酸乙酯的分離，但為了得到高純度的EPA-E，必須截?cái)?cut)EPA-E與花生四烯酸乙酯重疊的部分，使EPA-E回收率大幅下降。日本特開平5-222392號(hào)中，由圖2可知大幅截?cái)郋PA-E餾分，則即使將EPA精制至99％以上，包含花生四烯酸的C20:4乙酯也被視為雜質(zhì)(0033段)。進(jìn)而，該實(shí)施例中的EPA回收率為60％，很低，無法實(shí)現(xiàn)實(shí)質(zhì)上減少花生四烯酸乙酯的EPA-E的工業(yè)生產(chǎn)。

因此，在按照日本特開平5-222392號(hào)等中記載的方法，將上述酯化工序中得到的乙酯那樣的烷基酯的粗產(chǎn)物進(jìn)行蒸餾的情況下，在本發(fā)明的一個(gè)方式中的組合物的制造方法中，通過一邊將壓力和溫度條件保持在真空度0.2Torr(26.7Pa)以下、全塔的溫度190℃以下一邊進(jìn)行精密蒸餾，能夠不大幅增加因熱產(chǎn)生的異構(gòu)體而分離EPA-E與花生四烯酸乙酯。

關(guān)于壓力和溫度條件，可以通過降低壓力阻力、選擇真空泵種類、組合真空泵等來保持真空度0.2Torr以下、且190℃以下的全塔溫度。作為降低壓力阻力，例如可舉出加粗配管、使配管的角度平滑。對(duì)于物質(zhì)而言，由于壓力越低，沸點(diǎn)就越低，因此如果為高真空(低壓)，則能夠在更低的溫度下進(jìn)行蒸餾，能夠抑制由熱引起的物質(zhì)的變性。另一方面，如果沸點(diǎn)降低，則更加容易蒸發(fā)而能夠增加回流量。通過將精密蒸餾的條件設(shè)為真空度0.2Torr以下、且全塔溫度190℃以下，能夠在更低的溫度下且以充分的回流量進(jìn)行精密蒸餾。通過回流量的增加，利用蒸餾的分離精度提高，與花生四烯酸烷基酯那樣的沸點(diǎn)與EPA烷基酯接近的物質(zhì)的分離也變得容易。由此，根據(jù)與花生四烯酸烷基酯那樣的其他脂肪酸烷基酯的分離以及抑制由熱引起的雜質(zhì)的產(chǎn)生的雙方平衡的觀點(diǎn)，能夠得到EPA烷基酯的含量更高的組合物。

本說明書中，精密蒸餾是指如下技術(shù)：將在加熱條件下產(chǎn)生的蒸氣的一部分作為回流液返回至蒸餾塔，利用在塔內(nèi)上升的蒸氣與液體狀的試樣之間的氣液平衡，精度良好地進(jìn)行成分的分離(參照日本特開平4-128250和日本特開平5-222392號(hào))。

本說明書中，針對(duì)蒸餾工序中的壓力和溫度條件使用的“全塔”是指，蒸餾工序中可使用的全部蒸餾塔中的條件。當(dāng)蒸餾工序中使用的蒸餾塔為一個(gè)時(shí)，是指該一個(gè)蒸餾塔中的條件，當(dāng)存在多個(gè)蒸餾工序中使用的蒸餾塔時(shí)，是指存在的全部蒸餾塔中的條件。

蒸餾工序可以使用一個(gè)蒸餾塔來進(jìn)行，也可以設(shè)為使用兩個(gè)以上、三個(gè)以上或四個(gè)以上蒸餾塔的連續(xù)精密蒸餾。在使用兩個(gè)以上蒸餾塔的連續(xù)精密蒸餾中，真空度的維持變得更加重要。原料向真空內(nèi)的供給、餾分或殘余物的提取成為真空度變動(dòng)的原因，因此優(yōu)選在高真空下的連續(xù)生產(chǎn)中通過注意穩(wěn)定地維持真空度，從而抑制真空度的變動(dòng)。在優(yōu)選使用三個(gè)以上、進(jìn)一步優(yōu)選使用四個(gè)以上蒸餾塔進(jìn)行的連續(xù)蒸餾中，可以將全塔的真空度設(shè)為0.2Torr以下。如果使真空度更低，則能夠使溫度進(jìn)一步降低。從包括更高性能的設(shè)備的設(shè)置必要性的工業(yè)觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選在溫度為150～190℃、優(yōu)選為170～190℃下進(jìn)行。

繼蒸餾工序之后的利用HPLC等的色譜工序?yàn)?，通過去除蒸餾工序中得到的組合物中的非目標(biāo)成分等，從而減少非目標(biāo)成分的含量，進(jìn)一步濃縮精密蒸餾后的組合物中的EPA烷基酯的工序，可以按照以往公知的方法、例如日本特開平5-222392號(hào)等中記載的方法來進(jìn)行。作為濃縮處理中使用的色譜，適用反相柱色譜。作為固定相，只要是反相分配系的吸附劑，就可以無特別指定地使用，優(yōu)選為使用十八烷基甲硅烷基(ODS)的ODS柱。

通過蒸餾工序，能夠減少花生四烯酸烷基酯的含量，因此HPLC中的EPA烷基酯截?cái)嗦实玫礁纳?，回收率變得良好，能夠以工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)花生四烯酸烷基酯等雜質(zhì)的含量少的EPA烷基酯。此外，根據(jù)本方法，也能夠減少以往難以分離的C20:0、C20:4n-3、C20:5n-3(5,9,11,14,17)、C18:3n-3、C18:4n-3、C19:0、C19:5n-3、C21:5n-3、C22:6n-3的各低級(jí)烷基酯、EPA-E的單反式異構(gòu)體那樣的EPA烷基酯的單反式異構(gòu)體等花生四烯酸烷基酯以外的雜質(zhì)的含量。

＜利用形態(tài)＞

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物的利用形態(tài)沒有特別限定，優(yōu)選為口服劑型，典型地可以設(shè)為顆粒劑、片劑、膠囊劑、液劑等口服用制劑的形態(tài)。本發(fā)明的組合物的用途中包括例如飲食品(健康食品、營(yíng)養(yǎng)輔助食品、特定保健用食品、補(bǔ)充劑、乳制品、清涼飲料、寵物用飲食品、家畜飼料等)、醫(yī)藥品、準(zhǔn)藥品等，特別優(yōu)選為補(bǔ)充劑和醫(yī)藥品。除了食品材料或食品之外，還可以用作動(dòng)物用的飼料用添加成分。因此，本發(fā)明的一個(gè)方式中的組合物可以用作這些飲食品、醫(yī)藥品、準(zhǔn)藥品的材料或有效成分，在制造它們時(shí)，可優(yōu)選使用。

＜醫(yī)藥組合物＞

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式包括含有上述組合物作為有效成分的醫(yī)藥組合物。醫(yī)藥組合物中的上述組合物的含量沒有特別限定，優(yōu)選為25重量％以上，更優(yōu)選為50重量％以上，進(jìn)一步優(yōu)選為70重量％以上，再進(jìn)一步優(yōu)選為85重量％以上，特別優(yōu)選為96重量％以上，尤其優(yōu)選為98重量％以上。

醫(yī)藥組合物可以用于治療或預(yù)防動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、高脂血癥等生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病、癌等疾病，例如可用作閉塞性動(dòng)脈硬化癥治療藥、高脂血癥治療藥等。

就本發(fā)明的一個(gè)方式的組合物而言，由于雜質(zhì)的含量降低，因此安全性極高，能夠使用其調(diào)制安全裕度寬的醫(yī)藥制劑。例如，能夠制造EPA-E的一天給藥量為通常用量的3倍以上、優(yōu)選為5倍以上的高純度EPA-E制劑那樣的高純度EPA乙酯制劑，或者EPA-E的一天給藥量為6g以上、優(yōu)選為10g以上的高純度EPA-E制劑那樣的高純度EPA乙酯制劑。使用這些制劑，對(duì)于例如高脂血癥等中以通常用量無法期待治療效果的疾病，也能夠安全地治療。

本發(fā)明的一個(gè)方式的醫(yī)藥組合物除了有效成分之外還可以包含醫(yī)藥中可允許的添加成分。包含這樣的添加成分的醫(yī)藥組合物可以包含醫(yī)藥中可允許的賦形劑。醫(yī)藥組合物可以適當(dāng)含有公知的抗氧化劑、包衣劑、凝膠化劑、甜味劑、芳香劑、保存劑、抗氧化劑、乳化劑、pH調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、著色劑等。作為抗氧化劑，例如含有有效量的選自丁基化羥基甲苯、丁基化羥基茴香醚、沒食子酸丙脂、沒食子酸、可作為醫(yī)藥的醌、抗壞血酸棕櫚酸酯等抗壞血酸酯、及生育酚類中的至少一種作為抗氧化劑是理想的。

制劑的劑型根據(jù)有效成分的并用形態(tài)的不同而不同，沒有特別限定，優(yōu)選為口服制劑，例如可以以片劑、薄膜包衣片、膠囊劑、微膠囊劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、散劑、口服用液體制劑、糖漿劑、凝膠劑、吸入劑的形態(tài)使用。尤其優(yōu)選封入膠囊例如軟膠囊或微膠囊，以膠囊劑口服給藥。此外，優(yōu)選可以作為腸溶制劑或緩釋制劑口服給藥，對(duì)于透析患者、吞咽困難的患者等，也可以作為凝膠劑口服給藥。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以根據(jù)常規(guī)方法制造或制劑化。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式包含疾病的預(yù)防、治療或緩解方法，該方法包括：對(duì)患有下述疾病或具有患病危險(xiǎn)性的對(duì)象者給藥本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的醫(yī)藥組合物，所述疾病是選自由動(dòng)脈硬化、腦梗塞、心肌梗塞、血栓癥、生活習(xí)慣病、過敏、炎癥性疾病和癌組成的組中的至少一種疾病。作為給藥方式，可以是口服給藥或局部給藥。給藥量只要是對(duì)治療或預(yù)防有效的量即可，可根據(jù)目標(biāo)疾病的種類、癥狀的程度、給藥對(duì)象的年齡、體重和健康狀態(tài)等條件適當(dāng)設(shè)定。例如，如果是成人，則可以以有效成分量計(jì)1mg～1g/kg/天、優(yōu)選為5mg～300mg/kg/天的量，一天1次或分為2～4次或更多次并適當(dāng)隔開間隔來口服或非口服給藥本組合物。

本說明書中，治療劑是指在發(fā)現(xiàn)因目標(biāo)疾病而導(dǎo)致的癥狀時(shí)，為了抑制或緩和這樣的癥狀的發(fā)展而使用的藥物。另一方面，預(yù)防劑是指在預(yù)料到因目標(biāo)疾病而會(huì)導(dǎo)致癥狀發(fā)生時(shí)，為了預(yù)先給藥來抑制其發(fā)病的藥物。但是，這些用語(yǔ)可根據(jù)使用時(shí)期或使用時(shí)的癥狀來混合使用，并不解釋為限定性的。

本說明書中，帶有不定冠詞“a”或“an”的要素只要在上下文中沒有明確表示或關(guān)聯(lián)，就不排除一個(gè)或多個(gè)要素存在的可能性。因此，不定冠詞“a”或“an”通常是指“至少一個(gè)”。

本說明書中記載的動(dòng)詞“包含(comprising)”及其活用以非限定性含義使用，并且包含該用語(yǔ)之后的特征，意味著不排除沒有特別提及的特征。

本說明書中，發(fā)明的各方式(aspect)涉及的一個(gè)實(shí)施方式(embodiment)中說明的各發(fā)明特定特征(feature)可以作為任意組合而成的新的實(shí)施方式，應(yīng)理解為這樣的新的實(shí)施方式也可包含在本發(fā)明的各方式中。

實(shí)施例

以下，通過實(shí)施例，更具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。需要說明的是，下述實(shí)施例中，在沒有特別記載時(shí)，“％”是指“重量％”。

以下項(xiàng)中的實(shí)施例和比較例中，使用EPA-E作為EPA烷基酯，但本發(fā)明并不限于此，也可以是EPA-M等其他EPA烷基酯。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)已明確，使用乙醇的魚油的乙酯化率通常為95％～100％。因此可推測(cè)，在本實(shí)施例項(xiàng)中記載的原料乙酯(魚油乙酯)中，所含有的飽和或不飽和脂肪酸幾乎均為脂肪酸乙酯形態(tài)。因此，在本實(shí)施例項(xiàng)中，原料油中所含的飽和或不飽和脂肪酸均記載為乙酯形態(tài)的飽和或不飽和脂肪酸。但是，并不完全排除包含乙酯形態(tài)以外的脂肪酸的情況。

實(shí)施例1

＜調(diào)制方法＞

對(duì)于利用常規(guī)方法調(diào)制的魚油乙酯(脂肪酸中EPA 16面積％以上，酸值0.8以下，POV30以下)，使用多級(jí)式蒸餾裝置，在全塔的真空度0.2Torr以下、溫度190℃以下的條件下，進(jìn)行連續(xù)精密蒸餾，分餾為初餾分、主餾分、殘餾分。對(duì)于所得到的主餾分，利用在柱中填充有反相分配系的十八烷基化二氧化硅凝膠的高效液相柱色譜(HPLC)進(jìn)行精制，得到精制EPA-E。

＜評(píng)價(jià)方法＞

使用不同的原料，制造精制11批(lot)的EPA-E，使用氣相色譜(GC)分析脂肪酸組成。將各脂肪酸乙酯的峰的平均保持時(shí)間、相對(duì)保持時(shí)間、含量的平均值、最高值、最低值(面積％)示于表1。表1的相對(duì)保持時(shí)間是將EPA-E的平均保持時(shí)間設(shè)為1時(shí)的各峰的平均保持時(shí)間。

需要說明的是，脂肪酸組成的分析中使用的GC的測(cè)定條件如下。

GC-FID測(cè)定條件

GC：6890N(安捷倫科技)

色譜柱：DB-WAX(安捷倫科技)

30m×0.25mm ID，0.25μm膜厚

載氣：氦氣，0.5mL/min(調(diào)節(jié)成EPA-E經(jīng)約30分鐘溶出)

注入口：300℃，1μL、分流(1:100)

柱溫：200℃恒溫

檢測(cè)器：FID、300℃

補(bǔ)充氣體：氮?dú)猓?0mL/min。

[表1]

對(duì)于異構(gòu)體A～D，使用強(qiáng)制加熱而制造的異構(gòu)體的樣品，進(jìn)行了利用GC-FID的異構(gòu)體組成的確認(rèn)、利用GC-MS的各峰的雙鍵數(shù)量的確定、以及各峰的NMR解析。其結(jié)果可確認(rèn)異構(gòu)體A～D分別是EPA-E的5個(gè)雙鍵中的14、17、5、11位的僅一個(gè)變成反式體的EPA-E的異構(gòu)體。由于異構(gòu)體D與異構(gòu)體E的峰重疊而無法分離，因此異構(gòu)體D的量以與異構(gòu)體E的合計(jì)量記載。

＜評(píng)價(jià)結(jié)果＞

精密蒸餾中，通過將全塔的真空度設(shè)為0.2Torr以下、溫度設(shè)為190℃以下，能夠在減少花生四烯酸乙酯、C20:0乙酯、C20:4n-3乙酯、C20:5n-3(5,9,11,14,17)乙酯、C18:3n-3乙酯、C18:4n-3乙酯、C19:0乙酯、C19:5n-3乙酯、C21:5n-3乙酯、C22:6n-3乙酯等難以分離的雜質(zhì)的同時(shí)，還減少EPA-E的反式異構(gòu)體。此外，在所得到的組合物中，MUFA乙酯和DHA乙酯各自為0.05面積％以下。

在精密蒸餾后，實(shí)施使用了ODS柱的HPLC，從而得到含有二十碳五烯酸乙酯96～99面積％、花生四烯酸乙酯的含量為0.7面積％以下、二十碳五烯酸乙酯的單反式體的含量為2.5面積％以下的含有二十碳五烯酸烷基酯的組合物。

本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，能夠制造與以往相比進(jìn)一步減少了雜質(zhì)含量的、以高純度含有二十碳五烯酸乙酯那樣的二十碳五烯酸烷基酯的組合物。本發(fā)明的一個(gè)方式的組合物還能夠以工業(yè)規(guī)模制造，因此能夠用作具有安全性并且需要大量生產(chǎn)的健康食品、醫(yī)藥品等的原料，在該方面上是有利的。

2014年9月17日申請(qǐng)的日本專利申請(qǐng)第2014-188997號(hào)的公開的全部?jī)?nèi)容通過參照引入本說明書中。

本說明書中記載的全部文獻(xiàn)、專利申請(qǐng)及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，與具體且分別記載有各文獻(xiàn)、專利申請(qǐng)以及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)通過參照而引入的事項(xiàng)的情況相同程度地，通過參照而引入到本說明書中。