抗CD3抗體、可活化抗CD3抗體、多特異性抗CD3抗體、多特異性可活化抗CD3抗體及其使用方法與流程
相關(guān)申請本申請要求2014年7月25日申請的美國臨時申請?zhí)?2/029,325的權(quán)益，所述申請的內(nèi)容以其整體通過引用并入本文。公開領(lǐng)域本發(fā)明總體涉及特異性結(jié)合至少cd3的抗體、可活化抗體、多特異性抗體和多特異性可活化抗體，以及制備這些抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和在各種治療、診斷和預(yù)防適應(yīng)癥中使用這些抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的方法。公開背景cd3(分化簇3)t細胞共受體是由稱為ε、γ、δ和ζ鏈的四條不同多肽鏈構(gòu)成的多聚蛋白。cd3復(fù)合物充當與t細胞受體(tcr)的抗原結(jié)合a/b鏈非共價締合的t細胞受體的信號傳導(dǎo)模塊。因為cd3的直接接合導(dǎo)致t細胞活化，所以它是各種治療和/或診斷適應(yīng)癥的理想靶標。因此，需要靶向cd3/tcr途徑的抗體和治療劑。公開概述本公開提供了特異性結(jié)合cd3的ε鏈(也稱為cd3ε)的抗體及其抗原結(jié)合片段。本公開的抗cd3ε抗體及其抗原結(jié)合片段經(jīng)由接合t細胞上的cd3ε來活化t細胞。也就是說，此類抗體激動、刺激、活化和/或增強cd3介導(dǎo)的t細胞活化。這些抗體及其抗原結(jié)合片段在本文中被稱為“抗cd3ε抗體”或“抗cd3抗體”。本公開的抗cd3ε抗體及其抗原結(jié)合片段包括單克隆抗體，諸如例如哺乳動物單克隆抗體，靈長類單克隆抗體，完全人單克隆抗體，以及人源化單克隆抗體和嵌合抗體，以及其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，抗體及其抗原結(jié)合片段是igg同種型。在一些實施方案中，抗體及其抗原結(jié)合片段是igg1同種型。在一些實施方案中，抗體及其抗原結(jié)合片段具有本文公開的任何同種型之一。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；和至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，以及vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；和包括與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；包括與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列，以及vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr1序列；與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr2序列；與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr3序列，與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr1序列；與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr2序列；和與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr3序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:4的氨基酸序列的可變重鏈(hv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:4的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變重鏈(hv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體是結(jié)合cd3ε的scfv抗體片段。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括seqidno:6的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括seqidno:30的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括與seqidno:6的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括與seqidno:30的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體還包括與抗體綴合的試劑。在一些實施方案中，所述試劑是治療劑。在一些實施方案中，所述試劑是可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，所述試劑經(jīng)由接頭與抗cd3ε抗體綴合。在一些實施方案中，所述接頭是可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體天然含有一個或多個二硫鍵。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體可以進行工程改造以包括一個或多個二硫鍵。本公開還提供了編碼本文所述的抗cd3ε抗體的至少一部分的分離的核酸分子和/或編碼本文所述的抗cd3ε抗體的一種或多種核酸分子，諸如例如，至少編碼抗體的重鏈的至少一部分的第一核酸和編碼抗體的輕鏈的至少一部分的第二核酸，以及包括這些分離的核酸序列的載體。本公開提供了通過在導(dǎo)致表達抗cd3ε抗體的條件下培養(yǎng)細胞來產(chǎn)生抗cd3ε抗體的方法，其中所述細胞包含此類核酸分子。在一些實施方案中，所述細胞包含此載體。本公開還提供了可活化抗體和可活化抗體組合物，其包括與掩蔽部分(mm)偶聯(lián)或以其他方式連接的特異性結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)，使得mm的偶聯(lián)減少ab結(jié)合cd3ε的能力。這些可活化抗體在本文中統(tǒng)稱為可活化抗cd3ε抗體，本文中也稱為抗cd3ε可活化抗體或cd3ε可活化抗體。在一些實施方案中，mm經(jīng)由包括蛋白酶的底物的序列偶聯(lián)。例如，所述蛋白酶由接近表達cd3ε的細胞的腫瘤產(chǎn)生。在一些實施方案中，所述蛋白酶由與表達cd3ε的細胞共定位的腫瘤產(chǎn)生。本文提供的可活化抗cd3ε抗體在循環(huán)中是穩(wěn)定的，在預(yù)期的治療和/或診斷部位處被活化，但在正常(即健康)組織中不被活化，并且當被活化時展現(xiàn)與相應(yīng)的未修飾的抗體至少相當?shù)呐ccd3ε的結(jié)合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；和至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，以及vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；和包括與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；包括與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列，以及vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr1序列；與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr2序列；與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr3序列，與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr1序列；與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr2序列；和與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含可變重鏈互補決定區(qū)1(vhcdr1，本文中也稱為cdrh1)序列、可變重鏈互補決定區(qū)2(vhcdr2，本文中也稱為cdrh2)序列、可變重鏈互補決定區(qū)3(vhcdr3，本文中也稱為cdrh3)序列、可變輕鏈互補決定區(qū)1(vlcdr1，本文中也稱為cdrl1)、可變輕鏈互補決定區(qū)2(vlcdr2，本文中也稱為cdrl2)序列和可變輕鏈互補決定區(qū)3(vlcdr3，本文中也稱為cdrl3)序列的組合，其中至少一個cdr序列選自表18中所示的vhcdr1序列；表18中所示的vhcdr2序列；表18中所示的vhcdr3序列；表18中所示的vlcdr1序列；表18中所示的vlcdr2序列；和表18中所示的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中至少一個cdr序列選自包括與表18中所示的vhcdr1序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與表18中所示的vhcdr2序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；包括與表18中所示的vhcdr3序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列；包括與表18中所示的vlcdr1序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與表18中所示的vlcdr2序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與表18中所示的vlcdr3序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中所述組合是表18中所示的組合。在一些實施方案中，可活化抗體包含vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中組合中的每個cdr序列包含與表18中所示的組合中的相應(yīng)cdr序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:4的氨基酸序列的可變重鏈(hv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含seqidno:4的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變重鏈(hv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括包含與seqidno:4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括結(jié)合cd3ε的scfv抗體片段。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括seqidno:6的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括seqidno:30的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括與seqidno:6的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗cd3εscfv抗體片段包括與seqidno:30的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含選自表17中所示的重鏈序列的重鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含選自表17中所示的輕鏈序列的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含選自表17中所示的重鏈序列的重鏈氨基酸序列和選自表17中所示的輕鏈序列的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含與選自表17中所示的重鏈序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含與選自表17中所示的輕鏈序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包含與選自表17中所示的重鏈序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈氨基酸序列和與選自表17中所示的輕鏈序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的解離常數(shù)、即平衡狀態(tài)下的解離常數(shù)kd大于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不大于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不小于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd約等于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd小于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不超過ab與cd3ε的結(jié)合的kd的2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd是ab與cd3ε的結(jié)合的kd的1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000倍。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力小于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力不超過ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力約等于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力不小于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力大于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/2、1/3、1/4、1/5、1/10、1/25、1/50、1/100、1/250、1/500或1/1,000。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/1-1/5、1/2-1/5、1/2-1/10、1/5-1/10、1/5-1/20、1/5-1/50、1/5-1/100、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/20-1/100、1/20-1/1000或1/100-1/1,000。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/2-1/20。在一些實施方案中，未與ab共價連接的mm在與ab等摩爾濃度下不抑制ab與cd3ε的結(jié)合。在一些實施方案中，當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，mm不干擾ab結(jié)合cd3ε或不與ab競爭結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，mm是不超過40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，mm多肽序列不同于cd3ε的多肽序列。在一些實施方案中，mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于50%的同一性。在一些實施方案中，mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于25%的同一性。在一些實施方案中，mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于10%的同一性。在一些實施方案中，mm包含選自表7或表8中所示的序列的序列。在一些實施方案中，蛋白酶由接近表達cd3ε的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與表達cd3ε的細胞在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生，且其中當可活化抗體暴露于蛋白酶時蛋白酶切割可活化抗體中的cm。在一些實施方案中，cm是最多達15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，cm是選自表3中所列的蛋白酶的蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是選自以下的蛋白酶的底物：upa、豆莢蛋白(legumain)、基質(zhì)蛋白酶(matriptase)(本文中也稱為mt-sp1或mtsp1)、adam17、bmp-1、tmprss3、tmprss4、mmp-9、mmp-12、mmp-13、mmp-14和表3中所示的那些中的任一種。在一些實施方案中，cm是選自以下的蛋白酶的底物：upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，cm是基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)的底物。在一些實施方案中，其抗原結(jié)合片段選自fab片段、f(ab')2片段、scfv、scab、dab、單結(jié)構(gòu)域重鏈抗體和單結(jié)構(gòu)域輕鏈抗體。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的可活化抗體具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-cm-ab或ab-cm-mm。在一些實施方案中，可活化抗體包含在mm和cm之間的連接肽。在一些實施方案中，可活化抗體包含在cm和ab之間的連接肽。在一些實施方案中，可活化抗體包含第一連接肽(lp1)和第二連接肽(lp2)，其中未切割狀態(tài)下的可活化抗體具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-lp1-cm-lp2-ab或ab-lp2-cm-lp1-mm。在一些實施方案中，兩個連接肽不需要彼此相同。在一些實施方案中，lp1和lp2各自是約1-20個氨基酸長的肽。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體還包括與可活化抗體綴合的試劑。在一些實施方案中，所述試劑是治療劑。在一些實施方案中，所述試劑是可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，所述試劑經(jīng)由接頭與可活化抗cd3ε抗體綴合。在一些實施方案中，所述接頭是可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。本公開還提供了結(jié)合cd3的ε鏈(cd3ε)和第二靶標的多特異性抗體，其中所述抗體包含結(jié)合cd3的ε鏈(cd3ε)的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)和結(jié)合第二靶標的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，且其中ab1包含至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcd2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，和vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，活化狀態(tài)下的本文所述的可活化抗體結(jié)合cd3ε且包括(i)特異性結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)；(ii)當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時抑制ab與cd3ε的結(jié)合的掩蔽部分(mm)；和(c)與ab偶聯(lián)的可切割部分(cm)，其中cm是起蛋白酶的底物的作用的多肽。在一些實施方案中，mm經(jīng)由cm與ab偶聯(lián)。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的可活化抗體具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-cm-ab或ab-cm-mm。在一些實施方案中，可活化抗體包含在mm和cm之間的連接肽。在一些實施方案中，可活化抗體包含在cm和ab之間的連接肽。在一些實施方案中，可活化抗體包含第一連接肽(lp1)和第二連接肽(lp2)，且未切割狀態(tài)下的可活化抗體具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-lp1-cm-lp2-ab或ab-lp2-cm-lp1-mm。在一些實施方案中，兩個連接肽不需要彼此相同。在一些實施方案中，lp1或lp2中的至少一個包括選自(gs)n、(ggs)n、(gsggs)n(seqidno:59)和(gggs)n(seqidno:60)的氨基酸序列，其中n是至少1的整數(shù)。在一些實施方案中，lp1或lp2中的至少一個包括選自ggsg(seqidno:61)、ggsgg(seqidno:62)、gsgsg(seqidno:63)、gsggg(seqidno:64)、gggsg(seqidno:65)和gsssg(seqidno:66)的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括特異性結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體、結(jié)構(gòu)域抗體、單鏈、fab片段、f(ab')2片段、scfv、scab、dab、單一結(jié)構(gòu)域重鏈抗體或單一結(jié)構(gòu)域輕鏈抗體。在一些實施方案中，此類結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段是嚙齒動物(例如，小鼠或大鼠)、嵌合、人源化或全人單克隆抗體。在一些實施方案中，ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)為約100nm或更低。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的解離常數(shù)、即平衡狀態(tài)下的解離常數(shù)kd大于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不大于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不小于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd約等于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd小于ab與cd3ε的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd不超過ab與cd3ε的結(jié)合的kd的2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的kd是ab與cd3ε的結(jié)合的kd的1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000倍。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力小于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力不超過ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力約等于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力不小于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力大于ab與cd3ε的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/2、1/3、1/4、1/5、1/10、1/25、1/50、1/100、1/250、1/500或1/1,000。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/1-1/5、1/2-1/5、1/2-1/10、1/5-1/10、1/5-1/20、1/5-1/50、1/5-1/100、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/20-1/100、1/20-1/1000或1/100-1/1,000。在一些實施方案中，mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與cd3ε的結(jié)合的親和力的1/2-1/20。在一些實施方案中，未與ab共價連接的mm在與ab等摩爾濃度下不抑制ab與cd3ε的結(jié)合。在一些實施方案中，當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，mm不干擾ab結(jié)合cd3ε或不與ab競爭結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，mm是約2-40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，mm是不超過40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，mm多肽序列不同于cd3ε的多肽序列。在一些實施方案中，mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于50%的同一性。在一些實施方案中，mm多肽序列不同于cd3ε的多肽序列，且其中mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于25%的同一性。在一些實施方案中，mm多肽序列不同于cd3ε的多肽序列，且其中mm多肽序列與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于10%的同一性。在一些實施方案中，mm的偶聯(lián)降低ab結(jié)合cd3ε的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的kd的至少20倍。在一些實施方案中，mm的偶聯(lián)降低ab結(jié)合cd3ε的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的kd的至少40倍。在一些實施方案中，mm的偶聯(lián)降低ab結(jié)合cd3ε的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的kd的至少100倍。在一些實施方案中，mm的偶聯(lián)降低ab結(jié)合cd3ε的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的kd的至少1000倍。在一些實施方案中，mm的偶聯(lián)降低ab結(jié)合cd3ε的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對cd3ε的kd的至少10,000倍。在一些實施方案中，當使用靶標置換測定法、諸如例如pct公開號wo2010/081173(其內(nèi)容通過引用整體并入本文)中所述的測定法在體外測定時，在cd3ε存在的情況下，與當cm切割時相比，當cm未切割時，mm使ab結(jié)合cd3ε的能力降低至少90％。在一些實施方案中，mm不干擾切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab結(jié)合cd3ε靶標或不與切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab競爭結(jié)合cd3ε靶標。在一些實施方案中，mm是選自表7或8中所列的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些實施方案中，蛋白酶由接近表達cd3ε的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與cd3ε在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生，且當可活化抗體暴露于蛋白酶時蛋白酶切割可活化抗體中的cm。在一些實施方案中，cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，可活化抗體與cd3ε的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)的至少20倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，可活化抗體與cd3ε的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)的至少40倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，可活化抗體與cd3ε的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)的至少50倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，可活化抗體與cd3ε的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)的至少100倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，可活化抗體與cd3ε的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與cd3ε的結(jié)合的解離常數(shù)的至少200倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，cm是最多達15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，cm包括氨基酸序列l(wèi)sgrsdnh(seqidno:67)。在一些實施方案中，選擇可切割部分與特定蛋白酶一起使用，所述蛋白酶例如已知由接近表達可活化抗體的靶標(例如，cd3ε)的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與可活化抗體的靶標共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶。例如，用于本公開的可活化抗cd3ε抗體中的合適的可切割部分被至少蛋白酶諸如尿激酶、豆莢蛋白(legumain)和/或基質(zhì)蛋白酶(matriptase)(在本文中也稱為mt-sp1或mtsp1)切割。在一些實施方案中，合適的可切割部分包括以下序列中的至少一種：tgrgpswv(seqidno:68)；sargpsrw(seqidno:69)；targpsfk(seqidno:70)；lsgrsdnh(seqidno:67)；ggwhtgrn(seqidno:71)；htgrsgal(seqidno:72)；pltgrsgg(seqidno:73)；aargpaih(seqidno:74)；rgpafnpm(seqidno:75)；ssrgpayl(seqidno:76)；rgpatpim(seqidno:77)；rgpa(seqidno:78)；ggqpsgmwgw(seqidno:79)；fprplgitgl(seqidno:80)；vhmplgflgp(seqidno:81)；spltgrsg(seqidno:82)；sagfslpa(seqidno:83)；laplglqrr(seqidno:84)；sggplgvr(seqidno:85)；和/或plgl(seqidno:86)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnh(seqidno:67)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列tgrgpswv(seqidno:68)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列sargpsrw(seqidno:69)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列targpsfk(seqidno:70)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnh(seqidno:67)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列g(shù)gwhtgrn(seqidno:71)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列htgrsgal(seqidno:72)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列pltgrsgg(seqidno:73)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列aargpaih(seqidno:74)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列rgpafnpm(seqidno:75)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列ssrgpayl(seqidno:76)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列rgpatpim(seqidno:77)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列rgpa(seqidno:78)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列g(shù)gqpsgmwgw(seqidno:79)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列fprplgitgl(seqidno:80)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列vhmplgflgp(seqidno:81)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列spltgrsg(seqidno:82)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列sagfslpa(seqidno:83)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)aplglqrr(seqidno:84)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列sggplgvr(seqidno:85)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列plgl(seqidno:86)。在一些實施方案中，cm是mmp的底物，且包括序列issgllss(seqidno:321)；qnqalrma(seqidno:322)；aqnllgmv(seqidno:323)；stfpfgmf(seqidno:324)；pvgytssl(seqidno:325)；dwlywpgi(seqidno:326)；miapvayr(seqidno:327)；rpspmway(seqidno:328)；watprpmr(seqidno:329)；frlldwqw(seqidno:330)；lkaaprwa(seqidno:331)；gpshlvlt(seqidno:332)；lpgglspw(seqidno:333)；mglfseag(seqidno:334)；splplrvp(seqidno:335)；rmhlrslg(seqidno:336)；laaplgll(seqidno:337)；avgllapp(seqidno:338)；llapshra(seqidno:339)；paglwldp(seqidno:340)；和/或issglss(seqidno:341)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列issgllss(seqidno:321)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列qnqalrma(seqidno:322)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列aqnllgmv(seqidno:323)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列stfpfgmf(seqidno:324)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列pvgytssl(seqidno:325)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列dwlywpgi(seqidno:326)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列miapvayr(seqidno:327)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列rpspmway(seqidno:328)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列watprpmr(seqidno:329)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列frlldwqw(seqidno:330)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)kaaprwa(seqidno:331)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列g(shù)pshlvlt(seqidno:332)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)pgglspw(seqidno:333)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列mglfseag(seqidno:334)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列splplrvp(seqidno:335)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列rmhlrslg(seqidno:336)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)aaplgll(seqidno:337)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列avgllapp(seqidno:338)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列l(wèi)lapshra(seqidno:339)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列paglwldp(seqidno:340)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列issglss(seqidno:341)。在一些實施方案中，cm是凝血酶的底物。在一些實施方案中，cm是凝血酶的底物，且包括序列g(shù)prsfgl(seqidno:896)或gprsfg(seqidno:897)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列g(shù)prsfgl(seqidno:896)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列g(shù)prsfg(seqidno:897)。在一些實施方案中，cm包含選自以下的氨基酸序列：ntlsgrsenhsg(seqidno:898)；ntlsgrsgnhgs(seqidno:899)；tstsgrsanprg(seqidno:900)；tsgrsanp(seqidno:901)；vagrsmrp(seqidno:902)；vvpegrrs(seqidno:903)；ilprspaf(seqidno:904)；mvlgrsll(seqidno:905)；qgraitfi(seqidno:906)；sprsimla(seqidno:907)；和smlrsmpl(seqidno:908)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列ntlsgrsenhsg(seqidno:898)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列ntlsgrsgnhgs(seqidno:899)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列tstsgrsanprg(seqidno:900)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列tsgrsanp(seqidno:901)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列vagrsmrp(seqidno:902)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列vvpegrrs(seqidno:903)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列ilprspaf(seqidno:904)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列mvlgrsll(seqidno:905)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列qgraitfi(seqidno:906)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列sprsimla(seqidno:907)。在一些實施方案中，cm包含氨基酸序列smlrsmpl(seqidno:908)。在一些實施方案中，cm是中性粒細胞彈性蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是絲氨酸蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是upa的底物。在一些實施方案中，cm是豆莢蛋白(legumain)的底物。在一些實施方案中，cm是基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的底物。在一些實施方案中，cm是半胱氨酸蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是半胱氨酸蛋白酶、諸如組織蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是cm1-cm2底物，且包括序列issgllsgrsdnh(seqidno:909)；issgllssggsggslsgrsdnh(seqidno:910)；avgllappggtstsgrsanprg(seqidno:911)；tstsgrsanprgggavgllapp(seqidno:912)；vhmplgflgpggtstsgrsanprg(seqidno:913)；tstsgrsanprgggvhmplgflgp(seqidno:914)；avgllappgglsgrsdnh(seqidno:915)；lsgrsdnhggavgllapp(seqidno:916)；vhmplgflgpgglsgrsdnh(seqidno:917)；lsgrsdnhggvhmplgflgp(seqidno:918)；lsgrsdnhggsggsissgllss(seqidno:919)；lsgrsgnhggsggsissgllss(seqidno:920)；issgllssggsggslsgrsgnh(seqidno:921)；lsgrsdnhggsggsqnqalrma(seqidno:922)；qnqalrmaggsggslsgrsdnh(seqidno:923)；lsgrsgnhggsggsqnqalrma(seqidno:924)；qnqalrmaggsggslsgrsgnh(seqidno:925)和/或issgllsgrsgnh(seqidno:926)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物i包括序列issgllsgrsdnh(seqidno:909)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列issgllssggsggslsgrsdnh(seqidno:910)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列avgllappggtstsgrsanprg(seqidno:911)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列tstsgrsanprgggavgllapp(seqidno:912)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列vhmplgflgpggtstsgrsanprg(seqidno:913)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列tstsgrsanprgggvhmplgflgp(seqidno:914)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列avgllappgglsgrsdnh(seqidno:915)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnhggavgllapp(seqidno:916)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列vhmplgflgpgglsgrsdnh(seqidno:917)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnhggvhmplgflgp(seqidno:918)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnhggsggsissgllss(seqidno:919)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsgnhggsggsissgllss(seqidno:920)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列issgllssggsggslsgrsgnh(seqidno:921)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsdnhggsggsqnqalrma(seqidno:922)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列qnqalrmaggsggslsgrsdnh(seqidno:923)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列l(wèi)sgrsgnhggsggsqnqalrma(seqidno:924)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列qnqalrmaggsggslsgrsgnh(seqidno:925)。在一些實施方案中，cm1-cm2底物包含氨基酸序列issgllsgrsgnh(seqidno:926)。在一些實施方案中，cm是選自表3中所示的蛋白酶的蛋白酶的底物。在一些實施方案中，所述蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)、基質(zhì)蛋白酶(matriptase)、adam17、bmp-1、tmprss3、tmprss4、mmp-9、mmp-12、mmp-13和mmp-14。在一些實施方案中，所述蛋白酶是組織蛋白酶。在一些實施方案中，cm是選自以下的蛋白酶的底物：upa(尿激酶纖溶酶原激活物)、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，蛋白酶包含upa。在一些實施方案中，蛋白酶包含豆莢蛋白(legumain)。在一些實施方案中，蛋白酶包含基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，蛋白酶包含基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)。在一些實施方案中，cm是至少兩種蛋白酶的底物。在一些實施方案中，每種蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，cm是至少兩種蛋白酶的底物，其中蛋白酶之一選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)，而另一蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，cm是選自以下的至少兩種蛋白酶的底物：upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，可活化抗體至少包括第一cm和第二cm。在一些實施方案中，第一cm和第二cm各自是不超過15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的可活化抗體中的第一cm和第二cm具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-cm1-cm2-ab或ab-cm2-cm1-mm。在一些實施方案中，第一cm和第二cm中的至少一個是功能為選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的蛋白酶的底物的多肽。在一些實施方案中，第一cm在靶組織中被選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的第一切割劑切割，且第二cm在靶組織中被第二切割劑切割。在一些實施方案中，另一蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的相同的蛋白酶，且第一cm和第二cm是蛋白酶的不同的底物。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自表3中所示的那些的相同的蛋白酶。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是不同的蛋白酶。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由在靶組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生。在一些實施方案中，第一cm和第二cm在靶組織中被至少一種切割劑切割。在一些實施方案中，可活化抗體暴露于蛋白酶并被蛋白酶切割，使得當可活化抗體在活化或切割狀態(tài)下時，活化的抗體包括在蛋白酶已切割cm后包括lp2和/或cm序列的至少一部分的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，mm和cm包括選自本文呈現(xiàn)的那些的氨基酸序列。在一些實施方案中，所述可活化抗體還包括信號肽。在一些實施方案中，信號肽經(jīng)由間隔區(qū)與可活化抗體綴合。在一些實施方案中，間隔區(qū)在信號肽不存在的情況下與可活化抗體綴合。在一些實施方案中，間隔區(qū)直接連接至可活化抗體的mm。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的可活化抗體包含直接連接至mm的間隔區(qū)，且具有間隔區(qū)-mm-cm-ab的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgqg(seqidno:407)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgq(seqidno:87)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsg(seqidno:408)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqs(seqidno:409)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgq(seqidno:410)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qg(seqidno:411)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸殘基q。在一些實施方案中，mm和間隔區(qū)包含選自表7或表8中所列的序列的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括選自以下的重鏈序列：seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546。在一些實施方案中，可活化抗體包括選自以下的輕鏈序列：seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520。在一些實施方案中，可活化抗體包括選自seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546的重鏈序列；以及選自seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520的輕鏈序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括與選自以下的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈序列：seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546。在一些實施方案中，可活化抗體包括與選自以下的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈氨基酸序列：seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520。在一些實施方案中，可活化抗體包括與選自seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈序列；以及與選自seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括seqidno:506的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括與seqidno:506的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括seqidno:587或seqidno:588的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體包括與seqidno:587或seqidno:588的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，可活化抗體還包括與ab綴合的試劑。在一些實施方案中，所述試劑是治療劑。在一些實施方案中，所述試劑是可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，所述試劑經(jīng)由接頭與ab綴合。在一些實施方案中，所述接頭是可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。在一些實施方案中，所述可活化抗體還包括可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，可活化抗體的ab天然含有一個或多個二硫鍵。在一些實施方案中，ab可以進行工程改造以包括一個或多個二硫鍵。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的血清半衰期比相應(yīng)的多特異性抗體的血清半衰期更長；例如，多特異性可活化抗體的pk比相應(yīng)的多特異性抗體的pk更長。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的血清半衰期類似于相應(yīng)的多特異性抗體的血清半衰期。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少15天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少12天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少11天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少10天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少9天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少8天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少7天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少6天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少5天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少4天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少3天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少2天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少24小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少20小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少18小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少16小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少14小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少12小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少10小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少8小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少6小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少4小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，可活化抗體的血清半衰期是至少3小時。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體是單特異性的。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體是多特異性的，例如通過非限制性實例的方式，雙特異性或三功能性的。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體被配制為前雙特異性t細胞接合者(bite)分子的一部分。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體被配制為前嵌合抗原受體(car)修飾的t細胞或其他工程改造的受體的一部分。本文提供的組合物和方法使得能夠?qū)⒁环N或多種試劑連接至ab中的一個或多個半胱氨酸殘基，而不損害可活化抗cd3ε抗體的活性(例如，掩蔽、活化或結(jié)合活性)。在一些實施方案中，本文提供的組合物和方法使得能夠?qū)⒁环N或多種試劑連接至ab中的一個或多個半胱氨酸殘基，而不減少或以其他方式干擾mm內(nèi)的一個或多個二硫鍵。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生可活化抗cd3ε抗體，其與一種或多種試劑，例如多種治療劑、診斷劑和/或預(yù)防劑中的任一種綴合，優(yōu)選沒有任何試劑與可活化抗cd3ε抗體的mm綴合。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生綴合的可活化抗cd3ε抗體，其中mm保留有效且高效地掩蔽未切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab的能力。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生綴合的可活化抗cd3ε抗體，其中可活化抗體在可切割cm的蛋白酶存在的情況下仍被活化，即切割。在一些實施方案中，本文所述的抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體與一種或多種額外試劑或額外試劑的組合結(jié)合使用。合適的額外試劑包括用于預(yù)期應(yīng)用、諸如例如癌癥的當前藥物和/或手術(shù)療法。例如，抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體可以與額外化學(xué)治療劑或抗腫瘤劑結(jié)合使用。在一些實施方案中，將抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑配制于單一治療組合物中，且同時施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑彼此分開，例如，各自配制于分開的治療組合物中，且同時施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑，或在治療方案期間在不同的時間施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑。例如，在施用額外試劑之前施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體，在施用額外試劑之后施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體，或以交替的方式施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑。如本文所述，以單劑量或多劑量施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗cd3ε抗體和額外試劑。本公開還提供了編碼本文所述的可活化抗cd3ε抗體的至少一部分的分離的核酸分子，以及包括這些分離的核酸序列和/或編碼本文所述的抗cd3ε抗體的一種或多種核酸分子，諸如例如，編碼可活化抗體的重鏈的至少一部分的至少第一核酸和編碼可活化抗體的輕鏈的至少一部分的第二核酸，的載體。本公開提供了通過在導(dǎo)致表達可活化抗體的條件下培養(yǎng)細胞來產(chǎn)生可活化抗體的方法，其中所述細胞包含此類核酸分子。在一些實施方案中，所述細胞包含此載體。在一些實施方案中，可活化抗體由選自以下的重鏈核酸序列編碼：seqidno:445、451、453、455、459、461、463、465、469、471、475、477、479、485、487、489、491、493、495、497、499、501、503、511、513、517、522、525、529、531、533、535、537、539、541、543和546。在一些實施方案中，可活化抗體由選自以下的輕鏈核酸編碼：seqidno:447、449、457、467、473、481、483、507、515和519。在一些實施方案中，可活化抗體由選自seqidno:445、451、453、455、459、461、463、465、469、471、475、477、479、485、487、489、491、493、495、497、499、501、503、511、513、517、522、525、529、531、533、535、537、539、541、543和545的重鏈核酸序列；和選自seqidno:447、449、457、467、473、481、483、507、515和519的輕鏈核酸序列編碼。在一些實施方案中，可活化抗體由與選自以下的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈核酸序列編碼：seqidno:445、451、453、455、459、461、463、465、469、471、475、477、479、485、487、489、491、493、495、497、499、501、503、511、513、517、522、525、529、531、533、535、537、539、541、543和545。在一些實施方案中，可活化抗體由與選自以下的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈核酸序列編碼：seqidno:447、449、457、467、473、481、483、507、515和519。在一些實施方案中，可活化抗體由與選自seqidno:445、451、453、455、459、461、463、465、469、471、475、477、479、485、487、489、491、493、495、497、499、501、503、511、513、517、522、525、529、531、533、535、537、539、541、543和545的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈核酸序列；以及與選自seqidno:447、449、457、467、473、481、483、507、515和519的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈序列編碼。在一些實施方案中，可活化抗體由包括seqidno:505的核酸序列的核酸編碼。在一些實施方案中，可活化抗體包括與seqidno:505的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的核酸序列。本公開還提供了通過以下制備在活化狀態(tài)下結(jié)合cd3ε的可活化抗體的方法：(a)在導(dǎo)致表達可活化抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼可活化抗體的核酸構(gòu)建體的細胞，其中可活化抗體包含掩蔽部分(mm)、可切割部分(cm)和特異性結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)，和(b)回收可活化抗體。本公開還提供了通過以下制備在活化狀態(tài)下結(jié)合cd3ε的可活化抗體的方法：(a)在導(dǎo)致表達可活化抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼可活化抗體的核酸構(gòu)建體的細胞，其中可活化抗體包含掩蔽部分(mm)、可切割部分(cm)和特異性結(jié)合cd3ε的抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)，(i)其中所述cm是包括功能為蛋白酶的底物的氨基酸序列的多肽；且(ii)其中所述cm位于可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，mm干擾ab與cd3的特異性結(jié)合，且當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，mm不干擾ab特異性結(jié)合cd3ε或不與ab競爭特異性結(jié)合cd3ε；和(b)回收可活化抗體。本公開還提供了結(jié)合cd3的ε鏈(cd3ε)和第二靶標的多特異性抗體，其中所述抗體包含結(jié)合cd3的ε鏈(cd3ε)的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)和結(jié)合第二靶標的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，且其中ab1包含包括與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vhcdr2序列；包括與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vhcdr3序列，以及vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的vlcdr3序列。在一些實施方案中，多特異性抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，ab1含有包含seqidno:4的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含seqidno:2的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，ab1含有包含與seqidno:4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變重鏈(hv)和包含與seqidno:2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的可變輕鏈(lv)。在一些實施方案中，ab1包含scfv片段。在一些實施方案中，scfv片段包含seqidno:6的氨基酸序列。在一些實施方案中，scfv片段包含seqidno:30的氨基酸序列。在一些實施方案中，scfv片段包含與seqidno:6的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，scfv片段包含與seqidno:30的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性抗體包括與抗體綴合的試劑。在一些實施方案中，所述試劑是治療劑、可檢測部分或診斷劑。在一些實施方案中，所述試劑經(jīng)由接頭與抗體綴合。在一些實施方案中，所述接頭是可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。本公開還提供了結(jié)合至少cd3ε的多特異性抗體和多特異性可活化抗體。本文提供的多特異性抗體是識別兩個或更多個不同的抗原或表位的抗體，其中至少一個抗原或表位是cd3ε。本文提供的多特異性可活化抗體是這樣的多特異性抗體，其包括至少一個掩蔽部分(mm)，所述掩蔽部分與多特異性抗體的至少一個抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接，使得mm的偶聯(lián)降低抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合其靶標的能力。在一些實施方案中，mm經(jīng)由起蛋白酶的底物的作用的可切割部分(cm)與多特異性抗體的抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域偶聯(lián)。本文提供的可活化多特異性抗體在循環(huán)中是穩(wěn)定的，在預(yù)期的治療和/或診斷部位處被活化，但在正常(即健康)組織中不被活化，并且當被活化時展現(xiàn)與相應(yīng)的未修飾的多特異性抗體至少相當?shù)呐c靶標的結(jié)合。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體經(jīng)設(shè)計以接合免疫效應(yīng)細胞，在本文中也稱為免疫效應(yīng)細胞接合多特異性抗體和/或免疫效應(yīng)細胞接合多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體經(jīng)設(shè)計以接合白細胞，在本文中也稱為白細胞接合多特異性抗體和/或白細胞接合多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體經(jīng)設(shè)計以接合t細胞，在本文中也稱為t-細胞接合多特異性抗體和/或t-細胞接合多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體接合白細胞(諸如t細胞、天然殺傷(nk)細胞、骨髓單核細胞、巨噬細胞和/或另一種免疫效應(yīng)細胞)上的表面抗原。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是白細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是t細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是nk細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是單核細胞，諸如骨髓單核細胞。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體和/或t-細胞接合多特異性可活化抗體結(jié)合cd3ε。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞接合多特異性抗體包括靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和免疫效應(yīng)細胞接合抗體或其抗原結(jié)合部分，所述免疫效應(yīng)細胞接合抗體或其抗原結(jié)合部分包括抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞接合多特異性抗體包括癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和免疫效應(yīng)細胞接合抗體或其抗原結(jié)合部分。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞接合多特異性抗體包括癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段和免疫效應(yīng)細胞接合scfv。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是白細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是t細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是nk細胞。在一些實施方案中，免疫效應(yīng)細胞是骨髓單核細胞。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段和靶向抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3εscfv和靶向抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3εscfv和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括抗cd3εscfv和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括衍生自okt3的抗cd3epsilon(cd3ε)scfv。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性抗體包括衍生自sp34(可得自bdbiosciences目錄號556610)的抗cd3epsilon(cd3ε)scfv。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段，其中靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和/或抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合部分中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合部分，其中癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和/或抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合部分中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段和抗cd3ε，其中癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段和/或抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合部分中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括抗cd3εscfv和靶向抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗cd3εscfv和/或靶向抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括抗cd3εscfv和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗cd3εscfv和/或癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括抗cd3εscfv和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗cd3εscfv和/或癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，cd3εscfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體igg或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括衍生自okt3的抗cd3epsilon(cd3ε)scfv，其中靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和/或okt3scfv或okt3-衍生的scfv中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括okt3scfv或okt3-衍生的scfv和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段，其中okt3scfv或okt3-衍生的scfv和/或癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括okt3scfv或okt3-衍生的scfv和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段，其中okt3scfv或okt3-衍生的scfv和/或癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，okt3scfv或okt3-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體igg或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括衍生自sp34的抗cd3epsilon(cd3ε)scfv，其中靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和/或sp34scfv或sp34-衍生的scfv中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括sp34scfv或sp34-衍生的scfv和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段，其中sp34scfv或sp34-衍生的scfv和/或癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括sp34scfv或sp34-衍生的scfv和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段，其中sp34scfv或sp34-衍生的scfv和/或癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，sp34scfv或sp34-衍生的scfv包括結(jié)合cd3ε的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體igg或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括抗cd3epsilon(cd3ε)scfv，其包括以下互補決定區(qū)（cdr）序列：至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列，其中靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和/或抗cd3εscfv中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括具有上述cdr序列、即seqidno:53、54、55、56、57和58的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的抗cd3εscfv和癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗cd3εscfv和/或癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，t-細胞接合多特異性可活化抗體包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的抗cd3εdscfv和癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗cd3εscfv和/或癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段中的至少一種被掩蔽。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力。在一些實施方案中，癌癥靶向igg抗體或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，抗cd3εscfv包括包含seqidno:53、54、55、56、57和58的cdr序列的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合cd3ε的能力，且癌癥靶向抗體igg或其抗原結(jié)合片段包括第二抗體或其片段，其包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標，其中ab2與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm2的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二癌癥相關(guān)靶標的能力。在一些實施方案中，多抗原靶向抗體和/或多抗原靶向可活化抗體至少包括結(jié)合第一靶標和/或第一表位的第一抗體或其抗原結(jié)合片段和結(jié)合第二靶標和/或第二表位的第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中靶標和/或表位中的至少一個是cd3ε。在一些實施方案中，多抗原靶向抗體和/或多抗原靶向可活化抗體結(jié)合兩個或更多個不同的靶標，其中至少一個靶標是cd3ε。在一些實施方案中，多抗原靶向抗體和/或多抗原靶向可活化抗體結(jié)合cd3ε上的兩個或更多個不同的表位。在一些實施方案中，多抗原靶向抗體和/或多抗原靶向可活化抗體結(jié)合兩個或更多個不同的靶標和相同的靶標上的兩個或更多個不同的表位的組合，其中靶標和/或表位中的至少一個是cd3ε。本公開的多特異性可活化抗體的各個實施方案顯示于圖5a-5d、6a-6f、7a-7j、8a-8j、9a-9j、10a-10j、11a-11j和12a-12d中。在一些實施方案中，包含igg的多特異性可活化抗體具有被掩蔽的igg可變結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，包含scfv的多特異性可活化抗體具有被掩蔽的scfv結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體具有igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域兩者，其中igg可變結(jié)構(gòu)域中的至少一個與掩蔽部分偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體具有igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域兩者，其中scfv結(jié)構(gòu)域中的至少一個與掩蔽部分偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體具有igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域兩者，其中igg可變結(jié)構(gòu)域中的至少一個與掩蔽部分偶聯(lián)，且scfv結(jié)構(gòu)域中的至少一個與掩蔽部分偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體具有igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域兩者，其中igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域中的每個與其自身的掩蔽部分偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對t-細胞表面抗原的特異性。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對另一個靶抗原的特異性。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的一個表位的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的另一個表位的特異性。在多特異性可活化抗體中，scfv可以與igg可活化抗體的重鏈的羧基末端、與igg可活化抗體的輕鏈的羧基末端、或與igg可活化抗體的重鏈和輕鏈兩者的羧基末端融合。在多特異性可活化抗體中，scfv可以與igg可活化抗體的重鏈的氨基末端、與igg可活化抗體的輕鏈的氨基末端、或與igg可活化抗體的重鏈和輕鏈兩者的氨基末端融合。在多特異性可活化抗體中，scfv可以與igg可活化抗體的一個或多個羧基末端和一個或多個氨基末端的任何組合融合。在一些實施方案中，與可切割部分(cm)連接的掩蔽部分(mm)連接至igg的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域并使之掩蔽。在一些實施方案中，與可切割部分(cm)連接的掩蔽部分(mm)連接至至少一個scfv的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域并使之掩蔽。在一些實施方案中，與可切割部分(cm)連接的掩蔽部分(mm)連接至igg的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域并使之掩蔽，且與可切割部分(cm)連接的掩蔽部分(mm)連接至至少一個scfv的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域并使之掩蔽。在一些實施方案中，對于結(jié)合cd3ε特異性的單鏈可變結(jié)構(gòu)域與結(jié)合細胞表面抗原的完全人igg1抗體(靶向抗體)的羧基末端融合。scfv可以與重鏈的羧基末端、輕鏈的羧基末端或兩條鏈融合。在一些實施方案中，對于結(jié)合cd3ε特異性的單鏈可變結(jié)構(gòu)域與結(jié)合細胞表面抗原的完全人igg1抗體(靶向抗體)的氨基末端融合。scfv可以與重鏈的氨基末端、輕鏈的氨基末端或兩條鏈融合。將融合體構(gòu)建為單一遺傳構(gòu)建體并在培養(yǎng)物中的細胞中表達。靶向抗體可以對于結(jié)合一種或多種腫瘤表面抗原或靶向用于耗竭的任何細胞是特異性的。scfv可以對于相同或不同的抗原是特異性的。多特異性可活化抗體結(jié)構(gòu)的其他實例包括但不限于以下：或其中：vl和vh代表igg中包含的具有第一特異性的輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域；vl*和vh*代表scfv中包含的具有第二特異性的可變結(jié)構(gòu)域；l1是連接掩蔽部分(mm)和可切割部分(cm)的接頭肽；l2是連接可切割部分(cm)和抗體的接頭肽；l3是連接scfv的可變結(jié)構(gòu)域的接頭肽；l4是連接具有第一特異性的抗體與具有第二特異性的抗體的接頭肽；cl是輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；且ch1、ch2、ch3是重鏈恒定結(jié)構(gòu)域。第一和第二特異性可以針對任何抗原或表位。在t-細胞接合多特異性可活化抗體的一些實施方案中，一種抗原通常是cd3ε，而另一種是存在于腫瘤細胞或與疾病相關(guān)的其他細胞類型的表面上的抗原，諸如但不限于表1中所列的任何靶標，諸如但不限于egfr、erbb2、epcam、jagged、pd-l1、b7h3或cd71(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)。在一些實施方案中，靶向抗體包括抗egfr抗體。在一些實施方案中，靶向抗體包括c225v5，其特異性結(jié)合egfr。在一些實施方案中，靶向抗體包括c225，其特異性結(jié)合egfr。在一些實施方案中，靶向抗體包括c225v4，其特異性結(jié)合egfr。在一些實施方案中，靶向抗體包括c225v6，其特異性結(jié)合egfr。在一些實施方案中，靶向抗體包括抗jagged抗體。在一些實施方案中，靶向抗體包括4d11，其特異性結(jié)合人和小鼠jagged1和jagged2。在一些實施方案中，靶向抗體包括4d11v2，其特異性結(jié)合人和小鼠jagged1和jagged2。在一些實施方案中，靶向抗體可呈可活化抗體的形式。在一些實施方案中，scfv可呈pro-scfv的形式(參見例如wo2009/025846、wo2010/081173)。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合cd3ε，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合cd3ε，且含有vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合cd3ε，且含有至少包括氨基酸序列tyamn(seqidno:53)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)的vhcdr3序列；至少包括氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)的vlcdr3序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合cd3ε，且含有與氨基酸序列tyamn(seqidno:53)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr1序列；與氨基酸序列rirskynnyatyyadsvkd(seqidno:54)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr2序列；與氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqidno:55)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vhcdr3序列，與氨基酸序列rsstgavttsnyan(seqidno:56)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr1序列；與氨基酸序列g(shù)tnkrap(seqidno:57)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr2序列；和與氨基酸序列alwysnlwv(seqidno:58)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的vlcdr3序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列syams(seqidno:88)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列sidpegrqtyyadsvkg(seqidno:89)的vhcdr2序列；和至少包括氨基酸序列diggrsafdy(seqidno:90)的vhcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自至少包括氨基酸序列rasqsissy(seqidno:91)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列aasslqs(seqidno:92)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列qqtvvappl(seqidno:93)的vlcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列syams(seqidno:88)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列sidpegrqtyyadsvkg(seqidno:89)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；和包括與氨基酸序列diggrsafdy(seqidno:90)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rasqsissy(seqidno:91)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列aasslqs(seqidno:92)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列qqtvvappl(seqidno:93)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列至少包括氨基酸序列syams(seqidno:88)；vhcdr2序列至少包括氨基酸序列sidpegrqtyyadsvkg(seqidno:89)；vhcdr3序列至少包括氨基酸序列diggrsafdy(seqidno:90)；vlcdr1序列至少包括氨基酸序列rasqsissy(seqidno:91)；vlcdr2序列至少包括氨基酸序列aasslqs(seqidno:92)；和vlcdr3序列至少包括氨基酸序列qqtvvappl(seqidno:93)。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合jagged靶標，例如，jagged1和/或jagged2，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列包括與氨基酸序列syams(seqidno:88)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vhcdr2序列包括與氨基酸序列sidpegrqtyyadsvkg(seqidno:89)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vhcdr3序列包括與氨基酸序列diggrsafdy(seqidno:90)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vlcdr1序列包括與氨基酸序列rasqsissy(seqidno:91)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vlcdr2序列包括與氨基酸序列aasslqs(seqidno:92)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；且vlcdr3序列包括與氨基酸序列qqtvvappl(seqidno:93)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合表皮生長因子受體(egfr)，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的至少一個選自至少包括氨基酸序列nygvh(seqidno:94)的vhcdr1序列；至少包括氨基酸序列viwsggntdyntpfts(seqidno:95)的vhcdr2序列；至少包括氨基酸序列altyydyefay(seqidno:96)的vhcdr3序列；及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合egfr，且含有vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的至少一個選自至少包括氨基酸序列rasqsigtnih(seqidno:97)的vlcdr1序列；至少包括氨基酸序列kyasesis(seqidno:98)的vlcdr2序列；和至少包括氨基酸序列qqnnnwptt(seqidno:99)的vlcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合egfr，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列、vhcdr2序列和vhcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列nygvh(seqidno:94)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr1序列；包括與氨基酸序列viwsggntdyntpfts(seqidno:95)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr2序列；包括與氨基酸序列altyydyefay(seqidno:96)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vhcdr3序列；及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合egfr，且含有vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列中的至少一個選自包括與氨基酸序列rasqsigtnih(seqidno:97)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr1序列；包括與氨基酸序列kyasesis(seqidno:98)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr2序列；和包括與氨基酸序列qqnnnwptt(seqidno:99)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列的vlcdr3序列，及其組合。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合egfr，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列至少包括氨基酸序列nygvh(seqidno:94)；vhcdr2序列至少包括氨基酸序列viwsggntdyntpfts(seqidno:95)；vhcdr3序列至少包括氨基酸序列altyydyefay(seqidno:96)；vlcdr1序列至少包括氨基酸序列rasqsigtnih(seqidno:97)；vlcdr2序列至少包括氨基酸序列kyasesis(seqidno:98)；且vlcdr3序列至少包括氨基酸序列qqnnnwptt(seqidno:99)。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其特異性結(jié)合egfr，且含有vhcdr1序列、vhcdr2序列、vhcdr3序列、vlcdr1序列、vlcdr2序列和vlcdr3序列的組合，其中vhcdr1序列包括與氨基酸序列nygvh(seqidno:94)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vhcdr2序列包括與氨基酸序列viwsggntdyntpfts(seqidno:95)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vhcdr3序列包括與氨基酸序列altyydyefay(seqidno:96)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vlcdr1序列包括與氨基酸序列rasqsigtnih(seqidno:97)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；vlcdr2序列包括與氨基酸序列kyasesis(seqidno:98)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列；且vlcdr3序列包括與氨基酸序列qqnnnwptt(seqidno:99)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括選自本文提供的實施例中所示的那些序列的重鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括選自本文提供的實施例中所示的那些序列的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括選自本文提供的實施例中所示的那些序列的重鏈氨基酸序列和選自本文提供的實施例中所示的那些序列的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括與選自本文提供的實施例中所示的那些序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的重鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括與選自本文提供的實施例中所示的那些序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，本文提供的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體至少包括與選自本文提供的實施例中所示的那些序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的重鏈氨基酸序列和與選自本文提供的實施例中所示的那些序列的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體還包括與ab綴合的試劑。在一些實施方案中，所述試劑是治療劑。在一些實施方案中，所述試劑是可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，所述試劑經(jīng)由接頭與多特異性抗體綴合。在一些實施方案中，所述接頭是可切割接頭。在一些實施方案中，所述接頭是不可切割接頭。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體還包括可檢測部分。在一些實施方案中，所述可檢測部分是診斷劑。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體天然含有一個或多個二硫鍵。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體天然可以進行工程改造以包括一個或多個二硫鍵。本公開還提供了編碼本文所述的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一部分的分離的核酸分子、諸如例如至少編碼多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的重鏈的至少一部分的第一核酸和編碼多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的輕鏈的至少一部分的第二核酸，以及包括這些分離的核酸序列的載體。本公開提供了通過在導(dǎo)致表達抗體的條件下培養(yǎng)細胞來產(chǎn)生多特異性抗體的方法，其中所述細胞包含此類核酸分子。在一些實施方案中，所述細胞包含此載體。本公開還提供了多特異性可活化抗體和/或多特異性可活化抗體組合物，其至少包括特異性結(jié)合第一靶標或第一表位的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)和結(jié)合第二靶標或第二表位的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其中至少ab1與掩蔽部分(mm1)偶聯(lián)或以其他方式連接，使得mm1的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合其靶標的能力。在一些實施方案中，mm1經(jīng)由第一可切割部分(cm1)序列與ab1偶聯(lián)，所述第一可切割部分(cm1)序列包括蛋白酶的底物，所述蛋白酶例如由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與ab1的靶標在主體中的治療部位或診斷部位處共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶。本文提供的多特異性可活化抗體在循環(huán)中是穩(wěn)定的，在預(yù)期的治療和/或診斷部位處被活化，但在正常(即健康)組織中不被活化，并且當被活化時展現(xiàn)與相應(yīng)的未修飾的多特異性抗體至少相當?shù)呐cab1的靶標的結(jié)合。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包含在mm1和cm1之間的連接肽。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包含在cm1和ab1之間的連接肽。在一些實施方案中，可活化抗體包含第一連接肽(lp1)和第二連接肽(lp2)，且未切割狀態(tài)下的多特異性可活化抗體的至少一部分具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm1-lp1-cm1-lp2-ab1或ab1-lp2-cm1-lp1-mm1。在一些實施方案中，兩個連接肽不需要彼此相同。在一些實施方案中，lp1或lp2中的至少一個包括選自(gs)n、(ggs)n、(gsggs)n(seqidno:59)和(gggs)n(seqidno:60)的氨基酸序列，其中n是至少1的整數(shù)。在一些實施方案中，lp1或lp2中的至少一個包括選自ggsg(seqidno:61)、ggsgg(seqidno:62)、gsgsg(seqidno:63)、gsggg(seqidno:64)、gggsg(seqidno:65)和gsssg(seqidno:66)的氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體至少包括特異性結(jié)合第一靶標或第一表位的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)和特異性結(jié)合第二靶標或第二表位的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個ab獨立地選自單克隆抗體、結(jié)構(gòu)域抗體、單鏈、fab片段、f(ab')2片段、scfv、scab、dab、單一結(jié)構(gòu)域重鏈抗體和單一結(jié)構(gòu)域輕鏈抗體。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個ab是嚙齒動物(例如，小鼠或大鼠)、嵌合、人源化或全人單克隆抗體。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個ab對于與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合具有約100nm或更低的解離常數(shù)。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的解離常數(shù)、即平衡狀態(tài)下的解離常數(shù)kd大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd不大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd不小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd約等于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd不超過ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd的2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的kd是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd的1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000倍。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力不大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力約等于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力不小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力的1/2、1/3、1/4、1/5、1/10、1/25、1/50、1/100、1/250、1/500或1/1,000。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力的1/1-1/5、1/2-1/5、1/2-1/10、1/5-1/10、1/5-1/20、1/5-1/50、1/5-1/100、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/20-1/100、1/20-1/1000或1/100-1/1,000。在一些實施方案中，mm1與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力1/2至1/20。在一些實施方案中，未與ab共價連接的mm在與ab等摩爾濃度下不抑制ab與其對應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合。在一些實施方案中，當多特異性可活化抗體在切割狀態(tài)下時，mm1不干擾其相應(yīng)的ab結(jié)合相應(yīng)的靶標或表位或不與其相應(yīng)的ab競爭結(jié)合相應(yīng)的靶標或表位。在一些實施方案中，mm1是約2-40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm是不超過40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，mm1的多肽序列不同于相應(yīng)的ab的靶標的多肽序列。在一些實施方案中，mm1的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過50%同一性。在一些實施方案中，mm1的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過25%同一性。在一些實施方案中，mm1的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過10%同一性。在一些實施方案中，mm1的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少20倍。在一些實施方案中，mm1的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少40倍。在一些實施方案中，mm1的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少100倍。在一些實施方案中，mm1的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少1000倍。在一些實施方案中，mm1的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm1偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少10,000倍。在一些實施方案中，mm1是選自本文提供的實施例中所示的mm的氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體至少包括：第二掩蔽部分(mm2)，其當所述多特異性可活化抗體在未切割狀態(tài)下時抑制ab2與其靶標的結(jié)合；和與ab2偶聯(lián)的第二可切割部分(cm2)，其中cm2是起第二蛋白酶的底物作用的多肽。在一些實施方案中，cm2是不超過15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，第二蛋白酶由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與第二靶標或表位在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生，且其中當多特異性可活化抗體暴露于第二蛋白酶時第二蛋白酶切割多特異性可活化抗體中的cm2。在一些實施方案中，第一蛋白酶和第二蛋白酶由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與第一靶標或表位和第二靶標或表位在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生。在一些實施方案中，第一蛋白酶和第二蛋白酶是相同的蛋白酶。在一些實施方案中，cm1和cm2是對于所述相同的蛋白酶而言不同的底物。在一些實施方案中，所述蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，第一蛋白酶和第二蛋白酶是不同的蛋白酶。在一些實施方案中，第一蛋白酶和第二蛋白酶是選自表3中所示的那些的不同的蛋白酶。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的解離常數(shù)、即平衡狀態(tài)下的解離常數(shù)kd大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd不大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd不小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd約等于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd不超過ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd的2、3、4、5、10、25、50、100、250、500或1,000倍。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的kd是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的kd的1-5、2-5、2-10、5-10、5-20、5-50、5-100、10-100、10-1,000、20-100、20-1000或100-1,000倍。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力不大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力約等于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力不小于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力大于ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力的1/2、1/3、1/4、1/5、1/10、1/25、1/50、1/100、1/250、1/500或1/1,000。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力的1/1-1/5、1/2-1/5、1/2-1/10、1/5-1/10、1/5-1/20、1/5-1/50、1/5-1/100、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/20-1/100、1/20-1/1000或1/100-1/1,000。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm與ab的結(jié)合的親和力是ab與其相應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合的親和力的1/2至1/20。在一些實施方案中，未與ab共價連接的mm在與ab等摩爾濃度下不抑制ab與其對應(yīng)的靶標或表位的結(jié)合。在一些實施方案中，當多特異性可活化抗體在切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體中的每個mm不干擾其相應(yīng)的ab結(jié)合相應(yīng)的靶標或表位或不與其相應(yīng)的ab競爭結(jié)合相應(yīng)的靶標或表位。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm是約2-40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm是不超過40個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm的多肽序列不同于相應(yīng)的ab的靶標的多肽序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過50%同一性。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過25%同一性。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個mm的多肽序列與相應(yīng)的ab的任何天然的結(jié)合配偶體具有不超過10%同一性。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少20倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少40倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少100倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少1000倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的解離常數(shù)(kd)是當不與mm偶聯(lián)時ab對其相應(yīng)的靶標或表位的kd的至少10,000倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少20倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1/20。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少40倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1/40。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少100倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1/100。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1,000倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1/1,000。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少10,000倍。在一些實施方案中，每個mm的偶聯(lián)降低相應(yīng)的ab結(jié)合其靶標或表位的能力，使得當與mm1偶聯(lián)時ab1的解離常數(shù)(kd)是當與mm2偶聯(lián)時ab2的kd的至少1/10,000。在一些實施方案中，每個mm是選自本文提供的實施例中所示的mm的氨基酸序列。在一些實施方案中，切割第一可切割部分(cm1)序列的蛋白酶由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與多特異性可活化抗體中的ab1的靶標在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生，且當多特異性可活化抗體暴露于蛋白酶時蛋白酶切割多特異性可活化抗體中的cm1。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括多于一個可切割部分序列，且切割至少一個可切割部分序列的蛋白酶由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與多特異性可活化抗體中的至少一個ab區(qū)域的靶標在組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生，且當多特異性可活化抗體暴露于蛋白酶時蛋白酶切割多特異性可活化抗體中的cm。在一些實施方案中，每個cm(例如，cm1和至少cm2)位于多特異性可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體與ab區(qū)域之一的靶標的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與其靶標的結(jié)合的解離常數(shù)的至少20倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合其靶標。在一些實施方案中，每個cm位于多特異性可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體與ab區(qū)域之一的靶標的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與其靶標的結(jié)合的解離常數(shù)的至少40倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合其靶標。在一些實施方案中，每個cm位于多特異性可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體與ab區(qū)域之一的靶標的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與其靶標的結(jié)合的解離常數(shù)的至少50倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合其靶標。在一些實施方案中，每個cm位于多特異性可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體與ab區(qū)域之一的靶標的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與其靶標的結(jié)合的解離常數(shù)的至少100倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合其靶標。在一些實施方案中，每個cm位于多特異性可活化抗體中，使得當可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，多特異性可活化抗體與ab區(qū)域之一的靶標的結(jié)合被降低至解離常數(shù)是未修飾的ab與其靶標的結(jié)合的解離常數(shù)的至少200倍，而當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，ab結(jié)合其靶標。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個cm是最多達15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個cm包括氨基酸序列l(wèi)sgrsdnh(seqidno:67)。在一些實施方案中，選擇至少一個可切割部分與特定蛋白酶一起使用，所述蛋白酶例如已知由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與多特異性可活化抗體的至少一種靶標共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶。例如，用于本公開的多特異性可活化抗體中的合適的可切割部分被至少蛋白酶諸如尿激酶、豆莢蛋白(legumain)和/或基質(zhì)蛋白酶(matriptase)(在本文中也稱為mt-sp1或mtsp1)切割。在一些實施方案中，合適的可切割部分包括以下序列中的至少一種：和/或。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個cm是選自表3中所示的那些的蛋白酶的底物。在一些實施方案中，所述蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)、基質(zhì)蛋白酶(matriptase)、adam17、bmp-1、tmprss3、tmprss4、中性粒細胞彈性蛋白酶、mmp-7、mmp-9、mmp-12、mmp-13和mmp-14。在一些實施方案中，蛋白酶是組織蛋白酶，諸如但不限于組織蛋白酶s。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個cm是選自upa(尿激酶纖溶酶原激活物)、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的蛋白酶的底物。在一些實施方案中，蛋白酶包含upa。在一些實施方案中，蛋白酶包含豆莢蛋白(legumain)。在一些實施方案中，蛋白酶包含基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，蛋白酶包含基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個cm是至少兩種蛋白酶的底物。在一些實施方案中，每種蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個cm是至少兩種蛋白酶的底物，其中蛋白酶之一選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)，而另一蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個cm是選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的至少兩種蛋白酶的底物。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的每個cm的蛋白酶中的至少一種是相同的蛋白酶。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的兩個cm的相同的蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的兩個cm的相同的蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的每個cm的蛋白酶中的至少兩種是相同的兩種蛋白酶。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的兩個cm的相同的兩種蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的兩個cm的至少兩種蛋白酶中的至少一種選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)，且至少兩種蛋白酶中的另一種蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的兩個cm的至少兩種蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，可以切割cm1的蛋白酶中的至少一種不同于可以切割多特異性可活化抗體中的cm2的蛋白酶中的至少一種。在一些實施方案中，蛋白酶中的至少一種可以切割多特異性可活化抗體中的cm1，但不能切割cm2。在一些實施方案中，蛋白酶中的至少一種可以切割多特異性可活化抗體中的cm2，但不能切割cm1。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的cm1、但不能切割cm2的至少一種蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，可以切割多特異性可活化抗體中的cm1、但不能切割cm2的至少一種蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體至少包括第一cm(cm1)和第二cm(cm2)。在一些實施方案中，cm1和cm2是連接mm與ab的單一可切割接頭的一部分。在一些實施方案中，cm1是連接mm1與ab1的可切割接頭的一部分，且cm2是連接mm2與ab2的分開的可切割接頭的一部分。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包含多于兩個cm。在一些實施方案中，此多特異性可活化抗體包含多于兩個cm和多于兩個mm。在一些實施方案中，cm1和cm2各自是不超過15個氨基酸長的多肽。在一些實施方案中，第一cm和第二cm中的至少一個是起選自表3中所列的那些的蛋白酶的底物作用的多肽。在一些實施方案中，第一cm和第二cm中的至少一個是起選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的蛋白酶的底物作用的多肽。在一些實施方案中，第一cm在靶組織中被選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的第一切割劑切割，且第二cm在靶組織中被第二切割劑切割。在一些實施方案中，另一蛋白酶選自表3中所示的那些。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自表3中所列的那些的相同的蛋白酶，且第一cm和第二cm是蛋白酶的不同的底物。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的相同的蛋白酶，且第一cm和第二cm是蛋白酶的不同的底物。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自表3中所列的那些的相同的蛋白酶，且第一cm和第二cm是相同的底物。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是不同的蛋白酶。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑是選自表3中所示的那些的不同的蛋白酶。在一些實施方案中，第一切割劑和第二切割劑由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由在靶組織中共定位的腫瘤產(chǎn)生。在一些實施方案中，第一cm和第二cm在靶組織中被至少一種切割劑切割。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體暴露于蛋白酶并被蛋白酶切割，使得當可活化抗體在活化或切割狀態(tài)下時，活化的多特異性可活化抗體包括在蛋白酶已切割cm后包括lp2和/或cm序列的至少一部分的輕鏈氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體還包括信號肽。在一些實施方案中，信號肽經(jīng)由間隔區(qū)與多特異性可活化抗體綴合。在一些實施方案中，間隔區(qū)在信號肽不存在的情況下與多特異性可活化抗體綴合。在一些實施方案中，間隔區(qū)直接連接至多特異性可活化抗體的至少一個mm。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的多特異性可活化抗體包含直接連接至第一mm的間隔區(qū)，且具有間隔區(qū)-mm1-cm-ab1的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgq(seqidno:87)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的血清半衰期比相應(yīng)的多特異性抗體的血清半衰期更長；例如，多特異性可活化抗體的pk比相應(yīng)的多特異性抗體的pk更長。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的血清半衰期類似于相應(yīng)的多特異性抗體的血清半衰期。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少15天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少12天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少11天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少10天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少9天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少8天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少7天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少6天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少5天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少4天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少3天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少2天。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少24小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少20小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少18小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少16小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少14小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少12小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少10小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少8小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少6小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少4小時。在一些實施方案中，當施用于生物體時，多特異性可活化抗體的血清半衰期是至少3小時。本公開還提供了包括多特異性可活化抗體的組合物和方法，所述多特異性可活化抗體至少包括特異性結(jié)合靶標的第一抗體或抗體片段(ab1)和第二抗體或抗體片段(ab2)，其中多特異性可活化抗體中的至少第一ab與降低ab1結(jié)合其靶標的能力的掩蔽部分(mm1)偶聯(lián)。在一些實施方案中，每個ab與降低其相應(yīng)的ab對每個靶標的能力的mm偶聯(lián)。例如，在雙特異性可活化抗體實施方案中，ab1與降低ab1結(jié)合其靶標的能力的第一掩蔽部分(mm1)偶聯(lián)，且ab2與降低ab2結(jié)合其靶標的能力的第二掩蔽部分(mm2)偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包含多于兩個ab區(qū)域；在此類實施方案中，對于多特異性可活化抗體中的每個ab，ab1與降低ab1結(jié)合其靶標的能力的第一掩蔽部分(mm1)偶聯(lián)，ab2與降低ab2結(jié)合其靶標的能力的第二掩蔽部分(mm2)偶聯(lián)，ab3與降低ab3結(jié)合其靶標的能力的第三掩蔽部分(mm3)偶聯(lián)等等。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體進一步包括作為蛋白酶的底物的至少一個可切割部分(cm)，其中cm連接mm與ab。例如，在一些實施方案中，多特異性可活化抗體至少包括特異性結(jié)合靶標的第一抗體或抗體片段(ab1)和第二抗體或抗體片段(ab2)，其中多特異性可活化抗體中的至少第一ab經(jīng)由第一可切割部分(cm1)與降低ab1結(jié)合其靶標的能力的掩蔽部分(mm1)偶聯(lián)。在一些雙特異性可活化抗體實施方案中，ab1經(jīng)由cm1與mm1偶聯(lián)，且ab2經(jīng)由第二可切割部分(cm2)與降低ab2結(jié)合其靶標的能力的第二掩蔽部分(mm2)偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包含多于兩個ab區(qū)域；在這些實施方案的一些中，對于多特異性可活化抗體中的每個ab，ab1經(jīng)由cm1與mm1偶聯(lián)，ab2經(jīng)由cm2與mm2偶聯(lián)，且ab3經(jīng)由第三可切割部分(cm3)與降低ab3結(jié)合其靶標的能力的第三掩蔽部分(mm3)偶聯(lián)等等。在一些實施方案中，本文所述的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體與一種或多種額外試劑或額外試劑的組合結(jié)合使用。合適的額外試劑包括用于預(yù)期應(yīng)用、諸如例如癌癥的當前藥物和/或手術(shù)療法。例如，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可以與額外化學(xué)治療劑或抗腫瘤劑結(jié)合使用。在一些實施方案中，將多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑配制于單一治療組合物中，且同時施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑彼此分開，例如，各自配制于分開的治療組合物中，且同時施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑，或在治療方案期間在不同的時間施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑。例如，在施用額外試劑之前施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體，在施用額外試劑之后施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體，或以交替的方式施用多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑。如本文所述，以單劑量或多劑量施用抗多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑。本公開還提供了編碼本文所述的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一部分的分離的核酸分子、諸如例如至少編碼多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的重鏈的至少一部分的第一核酸和編碼多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的輕鏈的至少一部分的第二核酸，以及包括這些分離的核酸序列的載體。本公開提供了通過在導(dǎo)致表達多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的條件下培養(yǎng)細胞來產(chǎn)生多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的方法，其中所述細胞包含此類核酸分子。在一些實施方案中，所述細胞包含此類載體。本公開還提供了通過以下制備本公開的多特異性抗體和/或本公開的多特異性可活化抗體的方法：(a)在導(dǎo)致表達多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的核酸構(gòu)建體的細胞，和(b)回收多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。本公開還提供了通過將本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗cd3ε抗體、特異性結(jié)合cd3ε的多特異性抗體和/或特異性結(jié)合cd3ε的多特異性可活化抗體施用于期望此類治療或預(yù)防的主體來治療、預(yù)防一種或多種病理的癥狀、延遲一種或多種病理的癥狀的進展或以其他方式改善一種或多種病理的癥狀或減輕與此類病理相關(guān)的癥狀的方法。待治療的主體是例如人或其他哺乳動物。在一些實施方案中，所述主體是非人哺乳動物，諸如非人靈長類動物、伴侶動物(例如，貓、狗、馬)、家畜、耕畜或動物園動物。在一些實施方案中，所述主體是嚙齒動物。本公開還提供了通過將本公開的多特異性可活化抗體施用于期望此誘導(dǎo)的主體來誘導(dǎo)靶標依賴性t-細胞活化和殺滅靶細胞的方法，其中當多特異性可活化抗體在切割狀態(tài)下、例如多特異性可活化抗體的每個掩蔽部分不再連接或以其他方式與相應(yīng)的ab結(jié)構(gòu)域締合時，發(fā)生靶標依賴性t-細胞活化和靶細胞的殺滅，且當多特異性可活化抗體在未切割狀態(tài)下、例如多特異性可活化抗體的至少一個掩蔽部分連接或以其他方式與相應(yīng)的ab結(jié)構(gòu)域締合時，靶標依賴性t-細胞活化和靶細胞的殺滅減少或以其他方式受到抑制。本文所述的任何多特異性可活化抗體適用于此類方法。待治療的主體是例如人或其他哺乳動物。在一些實施方案中，所述主體是非人哺乳動物，諸如非人靈長類動物、伴侶動物(例如，貓、狗、馬)、家畜、耕畜或動物園動物。在一些實施方案中，所述主體是嚙齒動物。在這些方法和用途的任何實施方案中使用的本公開的抗cd3ε抗體、可活化cd3ε抗體、特異性結(jié)合cd3ε的多特異性抗體和/或特異性結(jié)合cd3ε的多特異性可活化抗體可以在任何疾病階段施用。例如，此抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可以施用于患有任何階段的癌癥(從早期至轉(zhuǎn)移)的患者。術(shù)語主體和患者在本文可互換使用。在這些方法和用途的任何實施方案中使用的本公開的抗cd3ε抗體、可活化cd3ε抗體、特異性結(jié)合cd3ε的多特異性抗體和/或特異性結(jié)合cd3ε的多特異性可活化抗體可以在包含新輔助療法的治療方案中使用。在這些方法和用途的任何實施方案中使用的本公開的抗cd3ε抗體、可活化cd3ε抗體、特異性結(jié)合cd3ε的多特異性抗體和/或特異性結(jié)合cd3ε的多特異性可活化抗體可以單獨或與一種或多種額外試劑組合施用，所述額外試劑包括小分子抑制劑、其他基于抗體的療法、基于多肽或肽的療法、基于核酸的療法和/或其他生物制劑。在一些實施方案中，將抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體與一種或多種額外試劑組合施用，所述額外試劑諸如通過非限制性實例的方式，化學(xué)治療劑，諸如烷化劑，抗代謝藥，抗微管劑，拓撲異構(gòu)酶抑制劑，細胞毒性抗生素和任何其他核酸損傷劑。在一些實施方案中，所述額外試劑是紫杉烷，諸如紫杉醇(例如，abraxane?)。在一些實施方案中，所述額外試劑是抗代謝物，諸如吉西他濱。在一些實施方案中，所述額外試劑是烷化劑，諸如基于鉑的化學(xué)療法，諸如卡鉑或順鉑。在一些實施方案中，所述額外試劑是靶向試劑，諸如激酶抑制劑，例如索拉非尼或埃羅替尼。在一些實施方案中，所述額外試劑是靶向試劑，諸如另一種抗體，例如單克隆抗體(例如，貝伐單抗)，雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些實施方案中，所述額外試劑是蛋白酶體抑制劑，諸如硼替佐米或卡非佐貝。在一些實施方案中，所述額外試劑是免疫調(diào)節(jié)劑，諸如來那度胺或il-2。在一些實施方案中，所述額外試劑是輻射劑。在一些實施方案中，所述額外試劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員認為是護理標準的試劑。在一些實施方案中，所述額外試劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的化學(xué)治療劑。在一些實施方案中，將抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑配制在單一組合物中。在一些實施方案中，將抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑作為兩種或更多種單獨的組合物施用。在一些實施方案中，將抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑同時施用。在一些實施方案中，將抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和額外試劑依次施用。在一些實施方案中，所述額外試劑是化學(xué)治療劑，諸如選自多西他賽、紫杉醇、abraxane(即，白蛋白綴合的紫杉醇)、多柔比星、奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、伊立替康和吉西他濱的化學(xué)治療劑。在一些實施方案中，所述額外試劑是檢查點抑制劑、激酶抑制劑、靶向腫瘤微環(huán)境中的抑制劑的藥劑和/或t細胞或nk激動劑。在一些實施方案中，所述額外試劑是單獨或與其他額外試劑諸如化學(xué)治療劑或抗腫瘤劑組合的放射療法。在一些實施方案中，所述額外試劑是疫苗、腫瘤病毒和/或dc-活化劑，諸如，通過非限制性實例的方式，toll樣受體(tlr)激動劑和/或α-cd40。在一些實施方案中，所述額外試劑是設(shè)計為經(jīng)由adcc或經(jīng)由與毒素的直接綴合(例如，抗體藥物綴合物(adc))殺死腫瘤的腫瘤靶向抗體。在一些實施方案中，所述檢查點抑制劑是選自ctla-4、lag-3、pd-1、pdl1、tigit、tim-3、b7h4和vista的靶標的抑制劑。在一些實施方案中，所述激酶抑制劑選自b-rafi、meki和btk抑制劑，諸如依魯替尼。在一些實施方案中，所述激酶抑制劑是克里唑替尼。在一些實施方案中，所述腫瘤微環(huán)境抑制劑選自ido抑制劑、α-csf1r抑制劑、α-ccr4抑制劑、tgf-β、骨髓衍生的抑制細胞或t調(diào)節(jié)細胞。在一些實施方案中，所述激動劑選自ox40、gitr、cd137、icos、cd27和hvem。在一些實施方案中，所述檢查點抑制劑是結(jié)合選自ctla-4、pd-1和/或pd-l1的靶標的抗體。在一些實施方案中，所述檢查點抑制劑是抗ctla4抗體、抗pd-1抗體和抗pd-l1抗體和/或其組合。在一些實施方案中，所述檢查點抑制劑是抗ctla4抗體，諸如例如yervoy?。在一些實施方案中，所述檢查點抑制劑是抗pd-1抗體，諸如例如opdivo?和/或keytruda?。在一些實施方案中，抑制劑是ctla-4抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是lag-3抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是pd-1抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是pdl1抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是tigit抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是tim-3抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是b7h4抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是vista抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是b-rafi抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是meki抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是btk抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是依魯替尼。在一些實施方案中，抑制劑是克里唑替尼。在一些實施方案中，抑制劑是ido抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是α-csf1r抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是α-ccr4抑制劑。在一些實施方案中，抑制劑是tgf-β。在一些實施方案中，抑制劑是骨髓衍生的抑制細胞。在一些實施方案中，抑制劑是t-調(diào)節(jié)細胞。在一些實施方案中，激動劑是ox40。在一些實施方案中，激動劑是gitr。在一些實施方案中，激動劑是cd137。在一些實施方案中，激動劑是icos。在一些實施方案中，激動劑是cd27。在一些實施方案中，激動劑是hvem。在一些實施方案中，所述額外試劑是另一種抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種綴合的抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種可活化抗體或其抗原結(jié)合片段和/或另一種綴合的可活化抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，所述額外試劑是與第一抗體或其抗原結(jié)合片段、第一綴合的抗體或其抗原結(jié)合片段、可活化抗體或其抗原結(jié)合片段和/或綴合的可活化抗體或其抗原結(jié)合片段針對相同的靶標(例如，針對pdl1)的另一種抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種綴合的抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種可活化抗體或其抗原結(jié)合片段和/或另一種綴合的可活化抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，所述額外試劑是針對不同于第一抗體或其抗原結(jié)合片段、第一綴合的抗體或其抗原結(jié)合片段、可活化抗體或其抗原結(jié)合片段和/或綴合的可活化抗體或其抗原結(jié)合片段的靶標的靶標的另一種抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種綴合的抗體或其抗原結(jié)合片段、另一種可活化抗體或其抗原結(jié)合片段和/或另一種綴合的可活化抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體和/或可活化抗體在治療期間和/或之后與一種或多種額外試劑組合施用，所述額外試劑諸如例如化學(xué)治療劑、抗炎劑和/或免疫抑制劑。在一些實施方案中，將抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑配制于單一治療組合物中，且同時施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑?；蛘?，抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑彼此分開，例如，各自配制于分開的治療組合物中，且同時施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑，或在治療方案期間在不同的時間施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑。例如，在施用額外試劑之前施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體，在施用額外試劑之后施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體，或以交替的方式施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑。如本文所述，以單劑量或多劑量施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑。在一些實施方案中，同時施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑。例如，抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑可以配制在單一組合物中或作為兩種或更多種分開的組合物施用。在一些實施方案中，依次施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑，或者在治療方案期間在不同的時間施用抗cd3ε抗體和/或可活化抗體和額外試劑。本公開還提供了用于在各種診斷和/或預(yù)防適應(yīng)癥中使用本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗cd3ε抗體、特異性結(jié)合cd3ε的多特異性抗體和/或特異性結(jié)合cd3ε的多特異性可活化抗體的方法和試劑盒。例如，本公開提供了用于通過如下檢測主體或樣品中切割劑和目標靶標的存在或不存在的方法和試劑盒：(i)使主體或樣品與可活化抗體或多特異性可活化抗體接觸，所述可活化抗體或多特異性可活化抗體包括至少第一掩蔽部分(mm1)、被切割劑切割的第一可切割部分(cm1)和特異性結(jié)合目標靶標的至少第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或其片段(ab1)，(a)其中mm1是抑制ab1與靶標結(jié)合的肽，且其中mm1不具有ab1的天然存在的結(jié)合配偶體的氨基酸序列且不是ab1的天然結(jié)合配偶體的修飾形式；且(b)其中在未切割的非活化狀態(tài)下，mm1干擾ab1與靶標的特異性結(jié)合，且在切割的活化狀態(tài)下，mm1不干擾ab1特異性結(jié)合靶標或不與ab1競爭特異性結(jié)合靶標；和(ii)測量主體或樣品中的活化的抗體或活化的多特異性可活化抗體的水平，其中主體或樣品中的活化的抗體或活化的多特異性可活化抗體的可檢測水平表明切割劑和靶標存在于主體或樣品中，且其中主體或樣品中的活化的抗體或活化的多特異性可活化抗體的不可檢測水平表明切割劑、靶標或切割劑和靶標兩者不存在和/或不充分地存在于主體或樣品中。在一些實施方案中，可活化抗體或可活化多特異性可活化抗體是治療劑與其綴合的可活化抗體或可活化多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，可活化抗體或可活化多特異性可活化抗體不與試劑綴合。在一些實施方案中，可活化抗體或可活化多特異性可活化抗體包含可檢測標記。在一些實施方案中，所述可檢測標記位于ab1上。在一些實施方案中，測量主體或樣品中的可活化抗體或多特異性可活化抗體的水平使用特異性結(jié)合可活化抗體或可活化多特異性可活化抗體的第二試劑來實現(xiàn)，其中所述試劑包含可檢測標記。在一些實施方案中，第二試劑是包含可檢測標記的抗體。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，可活化抗體或多特異性可活化抗體包括可檢測標記。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，可檢測標記包括成像劑、造影劑、酶、熒光標記、發(fā)色團、染料、一種或多種金屬離子或基于配體的標記。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，成像劑包含放射性同位素。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，放射性同位素是銦或锝。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，造影劑包含碘、釓或氧化鐵。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，酶包含辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，熒光標記包含黃色熒光蛋白(yfp)、青色熒光蛋白(cfp)、綠色熒光蛋白(gfp)、修飾的紅色熒光蛋白(mrfp)、紅色熒光蛋白tdimer2(rfptdimer2)、hcred或銪衍生物。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，發(fā)光標記包含n-甲基吖啶鎓(methylacrydium)衍生物。在這些方法的一些實施方案中，標記包含alexafluor?標記，諸如alexfluor?680或alexafluor?750。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，基于配體的標記包含生物素、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白或一種或多種半抗原。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，主體是哺乳動物。在這些方法和試劑盒的一些實施方案中，主體是人。在一些實施方案中，所述主體是非人哺乳動物，諸如非人靈長類動物、伴侶動物(例如，貓、狗、馬)、家畜、耕畜或動物園動物。在一些實施方案中，所述主體是嚙齒動物。在這些方法的一些實施方案中，所述方法是體內(nèi)方法。在這些方法的一些實施方案中，所述方法是原位方法。在這些方法的一些實施方案中，所述方法是離體方法。在這些方法的一些實施方案中，所述方法是體外方法。在方法和試劑盒的一些實施方案中，所述方法或試劑盒用于鑒定或以其他方式精選適合于用本公開的多特異性可活化抗體治療的患者群體。例如，對于靶標和切割這些方法中所測試的多特異性可活化抗體的第一可切割部分(cm1)中的底物的蛋白酶兩者測試陽性的患者被鑒定為用包含此cm1的此可活化抗體或多特異性可活化抗體治療的合適的候選者。同樣，對于靶標和切割使用這些方法所測試的可活化抗體或多特異性可活化抗體中的cm1中的底物的蛋白酶兩者測試陰性的患者可被鑒定為另一種形式的療法的合適候選者。在一些實施方案中，方法或試劑盒用于鑒定或以其他方式精選適合于用本公開的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體治療的患者群體，隨后通過將該可活化抗體和/或多特異性可活化抗體施用于有需要的主體來治療。例如，對于靶標和切割這些方法中所測試的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的第一可切割部分(cm1)中的底物的蛋白酶兩者測試陽性的患者被鑒定為用包含此cm1的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體治療的合適的候選者，且然后向所述患者施用治療有效量的所測試的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體。同樣，對于靶標和切割使用這些方法所測試的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體中的cm1中的底物的蛋白酶中任一者或兩者測試陰性的患者可被鑒定為另一種形式的療法的合適候選者。在一些實施方案中，此類患者可用其他可活化抗體、綴合的可活化抗體或多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體進行測試，直至鑒定用于治療的合適的可活化抗體或綴合的可活化抗體或多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體，例如，包含在疾病部位處被患者切割的cm的可活化抗體或綴合的可活化抗體或多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，然后向患者施用治療有效量的患者對于其測試陽性的可活化抗體或綴合的可活化抗體或多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體。根據(jù)本公開的藥物組合物可以包括本公開的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和載體。這些藥物組合物可以包括于試劑盒諸如例如診斷試劑盒中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本公開的抗體具有多種用途。例如，本公開的蛋白用作用于多種病癥的治療劑。本公開的抗體還用作診斷試劑盒中的試劑或用作診斷工具，或這些抗體可用于競爭測定法中以產(chǎn)生治療劑。附圖簡述圖1是描繪本文使用的一般掩蔽選擇群體命名的說明。圖2a和2b是描繪sp34的scfv形式結(jié)合食蟹猴cd3ε的能力的一系列圖。圖1a描繪作為fc融合蛋白濃度的函數(shù)的sp34scfv(lvhv)-fc和sp34scfv(hvlv)-fc結(jié)合。圖2b描繪作為濃度的函數(shù)的小鼠sp34-2igg1結(jié)合。圖3a-3d是描繪本公開的掩蔽部分降低包含此類掩蔽部分的可活化抗cd3ε抗體結(jié)合jurkatt細胞上的cd3ε的能力的能力的一系列圖。每種可活化抗體通過其掩蔽部分名稱標記。抗體sp34scfv(lvhv)-fc通過lvhv標識。圖4a、4b和4c是描繪本公開的各種抗體和可活化抗體的一系列說明。圖4a描繪scfv-fc抗體的組分片段。圖4b描繪本公開的scfv(lvhv)-fc和scfv(hvlv)-fc抗體。圖4c描繪包含本公開的scfv(lvhv)-fc或scfv(hvlv)-fc抗體的可活化抗體。圖5a、5b、5c和5d是描繪本公開的多特異性抗體和多特異性可活化抗體的一系列說明。圖5a描繪包含ig抗體和scfv的本公開的多特異性抗體。圖5b描繪本公開的多特異性可活化抗體，其中一級抗體位點被掩蔽。圖5c描繪本公開的多特異性可活化抗體，其中二級scfv位點被掩蔽。圖5d描繪本公開的多特異性可活化抗體，其中一級抗體和二級scfv位點被掩蔽。圖6a、6b、6c、6d、6e和6f是描繪本公開的多特異性可活化抗體的各個實施方案的一系列說明。圖7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7h、7i和7j是本公開的多特異性抗體的可能排列的選擇集合的一系列示意圖。圖8a、8b、8c、8d、8e、8f、8g、8h、8i和8j是本公開的多特異性可活化抗體的可能排列的選擇集合的一系列示意圖。具體而言，該圖顯示多特異性可活化抗體，其中一級抗原結(jié)合位點被掩蔽(即，可活化)，且額外的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域未被掩蔽。圖9a、9b、9c、9d、9e、9f、9g、9h和9j是多特異性可活化抗體的陣列的一系列示意圖，其中所有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域都被掩蔽。圖10a、10b、10c、10d、10e、10f、10g、10h、10i和10j是多特異性可活化抗體的陣列的一系列示意圖，其中二級抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域被掩蔽，且額外的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域未被掩蔽。圖11a、11b、11c、11d、11e、11f、11g、11h、11i和11j是多特異性可活化抗體的陣列的一系列示意圖，其中大多數(shù)、但不是全部的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域被掩蔽，且至少一個額外的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域未被掩蔽。圖12a、12b、12c和12d是多特異性可活化抗體的陣列的一系列示意圖，其中一級抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和另一個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域被掩蔽，且剩余的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域未被掩蔽。圖13a和13b是描繪sp34scfv-fc與cd3ε陽性jurkat細胞的結(jié)合的一系列圖。圖13a是描繪sp34scfv-fc與cd3εjurkat細胞的結(jié)合的兩種取向的能力的圖。圖13b是描繪sp34-2igg的結(jié)合的圖。sp34的所有形式都以相似的ec50值結(jié)合。圖14a和14b是描繪本公開的掩蔽部分降低包含此類掩蔽部分的可活化抗cd3ε抗體結(jié)合jurkatt細胞上的cd3ε的能力的能力的一系列圖。圖15a、15b、15c和15d是描繪cd3ε掩蔽肽改變egfr掩蔽的多特異性可活化抗體中的cd3ε結(jié)合的ec50的一系列圖，所述egfr掩蔽的多特異性可活化抗體利用sp34scfv的兩種形式，同時保留有效的egfr掩蔽。圖16a和16b是描繪cd3ε和egfr掩蔽的多特異性可活化抗體的細胞毒性ec50相對于未掩蔽的對照改變的一系列圖。這用sp34scfv的兩種形式(即ci023和ci024中的scfv相比ci011和ci010中的scfv)是明顯的。圖17a和17b是一系列圖，其描繪在多特異性、可活化抗體的情況下，egfr結(jié)合ec50不受兩個cd3ε掩蔽的存在或不存在的影響；同樣地，cd3εec50不受egfr掩蔽的存在或不存在的影響。圖18a和18b是一系列圖，其描繪通過掩蔽egfr和cd3結(jié)合兩者獲得細胞毒性ec50的最大改變。此外，多特異性抗體和多特異性可活化抗體的細胞毒性是egfr依賴性的。圖19是描繪通過掩蔽egfr和cd3結(jié)合兩者獲得活化ec50的最大改變。圖20a和20b是一系列圖，其描述cd3掩蔽的多特異性抗體顯示可忽略的靶標非依賴性活化，如圖20a中所示的cd69+頻率分析和圖20b中所示的cd69平均熒光強度分析所證明。圖21a、21b、21c和21d是描述upa活化恢復(fù)多特異性、可活化ci011(m-egfr/m-hcd3)抗體的結(jié)合的一系列圖。所有多特異性、可活化抗體的細胞殺傷都通過upa活化恢復(fù)。圖22是描繪含有不同底物的雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體改變ec50細胞毒性的能力的圖。圖23是描繪經(jīng)7天以0.1mg/kg兩次給藥的雙特異性抗體ci005和持續(xù)8天以0.5mg/kg/天給藥的ci059(bite)防止ht-29luc2異種移植腫瘤的生長的圖。圖24是描繪ci048抗體限制ht-29luc2異種移植腫瘤的建立和ci011抑制ht-29luc2異種移植腫瘤的生長的圖。pbs和ci011之間的作用差異是顯著的(p<0.05)。圖25是描繪ci048雙特異性抗體用于消除ht-29luc2異種移植腫瘤的劑量-反應(yīng)的圖。圖26是描繪0.3mg/kg的ci048雙特異性抗體消除ht-29luc2異種移植腫瘤和0.1mg/kg的ci040雙特異性可活化抗體限制ht-29luc2異種移植腫瘤的生長的圖。圖27是描繪1.0mg/kg的ci040雙特異性可活化抗體和0.3mg/kg的ci048雙特異性抗體消除ht-29luc2異種移植腫瘤的圖。圖28是描繪1.0mg/kg的ci011雙特異性可活化抗體顯著抑制ht-29luc2異種移植腫瘤生長(p<0.05)的圖。圖29是描繪給藥后48小時的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)濃度的ci048、ci011和ci048的劑量-反應(yīng)圖的圖。圖30顯示并入egfr掩蔽的多特異性、可活化抗體的小鼠cd3ε掩蔽改變與小鼠cd3結(jié)合的ec50，同時保留有效的egfr掩蔽。圖31表明，通過掩蔽il6r和cd3結(jié)合最大程度地減弱il6r+molp-8細胞的殺傷。詳述本公開提供了至少結(jié)合cd3的ε鏈(cd3ε)的抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。如本文所用，可活化抗體是這樣的抗體，其包括掩蔽部分(mm)，所述掩蔽部分(mm)與抗體的抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接，使得mm的偶聯(lián)降低抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合其靶標的能力。如本文所用，多特異性抗體是識別兩種或更多種不同的抗原或表位的抗體，且多特異性可活化抗體是這樣的多特異性抗體，其包括與多特異性抗體的至少一個抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接的至少一個掩蔽部分(mm)，使得mm的偶聯(lián)降低抗原或表位結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合其靶標的能力。本文提供的可活化抗體和/或可活化多特異性抗體在循環(huán)中是穩(wěn)定的，在預(yù)期的治療和/或診斷部位處被活化，但在正常(即，健康)組織中不被活化，并且當被活化時，展現(xiàn)與相應(yīng)的未修飾的抗體或多特異性抗體至少相當?shù)呐c靶標的結(jié)合。本公開的抗體、活化的可活化抗體、多特異性抗體和/或活化的多特異性可活化抗體以≤1μm、例如在一些實施方案中≤100nm、≤10nm或≤1nm的結(jié)合常數(shù)(kd)結(jié)合cd3ε。本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體經(jīng)由接合t細胞上的cd3ε而用于活化t細胞。也就是說，此類抗體激動、刺激、活化和/或增強cd3介導(dǎo)的t細胞活化。cd3的生物活性包括例如t細胞活化和通過cd3和t細胞受體(tcr)的抗原結(jié)合亞基之間的相互作用的其他信號傳導(dǎo)。例如，抗cd3ε抗體、活化的可活化抗體、多特異性抗體和/或活化的多特異性可活化抗體通過部分或完全調(diào)節(jié)(例如，激動、刺激、活化或以其他方式增強)cd3介導(dǎo)的t細胞活化而經(jīng)由接合t細胞上的cd3ε來完全或部分活化t細胞。多特異性抗體的非限制性實例包括雙特異性抗體、三特異性抗體、四特異性抗體和其他多特異性抗體。本文提供的多特異性抗體也是多價的；如本文所用，多價是指抗體上的結(jié)合位點的總數(shù)量，不管所述結(jié)合位點是否識別相同或不同的抗原或表位。多特異性可活化抗體的非限制性實例包括雙特異性可活化抗體、三特異性可活化抗體、四特異性可活化抗體和其他多特異性可活化抗體。本文提供的多特異性可活化抗體也是多價的。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段和/或多特異性可活化抗體或其片段經(jīng)設(shè)計以接合t細胞和/或其他免疫效應(yīng)細胞。接合t細胞的多特異性可活化抗體或其片段在本文中也稱為t-細胞接合多特異性抗體或其片段和/或t-細胞接合多特異性可活化抗體或其片段。接合免疫效應(yīng)細胞的多特異性可活化抗體或其片段在本文中也稱為免疫效應(yīng)細胞接合多特異性抗體或其片段和/或免疫效應(yīng)細胞接合多特異性可活化抗體或其片段。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段和/或多特異性可活化抗體或其片段經(jīng)設(shè)計以與多于一種靶標和/或多于一種表位結(jié)合或以其他方式相互作用，在本文中也稱為多抗原靶向抗體或其片段和/或多抗原靶向可活化抗體或其片段。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段包括igg結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段包括igg可變結(jié)構(gòu)域和scfv結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對t-細胞表面抗原的特異性。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對另一個靶抗原的特異性。在一些實施方案中，多特異性抗體或其片段的一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對靶抗原的一個表位的特異性，且另一個抗體結(jié)構(gòu)域具有對同一靶抗原的另一個表位的特異性。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體經(jīng)工程改造以包括經(jīng)由不可切割接頭與抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)偶聯(lián)的掩蔽部分(mm)。例如，在一些實施方案中，多特異性可活化抗體是t-細胞接合多特異性可活化抗體，其包括靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和t-細胞接合抗體或其抗原結(jié)合部分，其中t-細胞接合抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合第一t-細胞接合靶標的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1經(jīng)由不可切割接頭與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合第一靶標的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合第二靶標的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)，其中ab2經(jīng)由可切割接頭與掩蔽部分(mm2)連接，使得mm的偶聯(lián)降低ab2結(jié)合第二靶標的能力。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體是t-細胞接合多特異性可活化抗體，其包括靶向抗體或其抗原結(jié)合片段和t-細胞接合抗體或其抗原結(jié)合部分，其中t-細胞接合抗體或其抗原結(jié)合片段包括結(jié)合第一t-細胞接合靶標的第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，其中ab1經(jīng)由不可切割接頭與掩蔽部分(mm1)連接，使得mm的偶聯(lián)降低ab1結(jié)合第一靶標的能力，且靶向抗體或其抗原結(jié)合片段未被掩蔽。定義除非另外定義，與本公開結(jié)合使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。術(shù)語“一個/種(a)”實體或“一個/種(an)”實體是指該實體中的一個/種或多個/種。例如，化合物是指一種或多種化合物。因此，術(shù)語“一個/種(a)”、“一個/種(an)”、“一個/種或多個/種”和“至少一個/種”可以互換使用。此外，除非上下文另外要求，單數(shù)術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)且復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)。通常，與本文描述的細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)和蛋白和寡核苷酸或多核苷酸化學(xué)和雜交結(jié)合使用的命名法及其技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知和通常使用的那些。標準技術(shù)用于重組dna、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如，電穿孔、脂轉(zhuǎn)染)。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)根據(jù)制造商的說明書或本領(lǐng)域通常實踐或本文所述進行。前述技術(shù)和程序通常根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法和如本說明書各處中引用和討論的各種通用和較特定的參考文獻中所述進行。參見例如，sambrook等人molecularcloning:alaboratorymanual(第2版,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1989))。與本文描述的分析化學(xué)、合成有機化學(xué)和醫(yī)用和藥用化學(xué)結(jié)合使用的命名法及其實驗室程序和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知和通常使用的那些。標準技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送，和治療患者。如根據(jù)本公開所用，除非另外說明，以下術(shù)語應(yīng)理解具有以下含義：如本文所用，術(shù)語“抗體”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(ig)分子的抗原結(jié)合部分，即，含有特異性結(jié)合抗原(與其免疫反應(yīng))的抗原結(jié)合位點的分子?！疤禺愋越Y(jié)合”或“與…免疫反應(yīng)”或“免疫特異性結(jié)合”意指抗體與所需抗原的一個或多個抗原決定簇反應(yīng)和不與其他多肽反應(yīng)或以低得多的親和力結(jié)合(kd>10-6)?？贵w包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、全人抗體、結(jié)構(gòu)域抗體、單鏈、fab和f(ab')2片段、scfv和fab表達文庫?；A(chǔ)抗體結(jié)構(gòu)單位已知包含四聚體。各四聚體由兩個相同的多肽鏈對構(gòu)成，每一對具有一個“輕”鏈(約25kda)和一個“重”鏈(約50-70kda)。各鏈的氨基末端部分包括約100-110或更多個氨基酸的可變區(qū)，其主要負責抗原識別。各鏈的羧基末端部分限定了恒定區(qū)，其主要負責效應(yīng)子功能。通常，獲得自人的抗體分子涉及類別igg、igm、iga、ige和igd中的任一類別，它們彼此不同之處在于分子中存在的重鏈的性質(zhì)。某些類別還具有亞類，諸如igg1、igg2、igg3、igg4等。此外，在人中，輕鏈可以是κ鏈或λ鏈。如本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”(mab)或“單克隆抗體組合物”，是指僅含有一個分子種類的抗體分子的抗體分子群，所述抗體分子由獨特的輕鏈基因產(chǎn)物和獨特的重鏈基因產(chǎn)物組成。具體而言，單克隆抗體的互補決定區(qū)(cdr)在所述群的所有分子中相同。mab含有能夠與抗原的特定表位起免疫反應(yīng)的抗原結(jié)合位點，特征在于對抗原有獨特的結(jié)合親和力。術(shù)語“抗原結(jié)合位點”或“結(jié)合部分”是指免疫球蛋白分子的一部分，其參與抗原結(jié)合?？乖Y(jié)合位點由重(“h”)和輕(“l(fā)”)鏈的n端可變(“v”)區(qū)的氨基酸殘基形成。在重鏈和輕鏈的v區(qū)內(nèi)的三個高度不同的區(qū)段，被稱為“超變區(qū)”，間插在稱為“框架區(qū)”或“fr”的較保守的側(cè)翼區(qū)段之間。因此，術(shù)語“fr”是指天然存在于免疫球蛋白的超變區(qū)之間并與其鄰近的氨基酸序列。在抗體分子中，輕鏈的三個超變區(qū)和重鏈的三個超變區(qū)在三維空間中彼此相對排列，以形成抗原結(jié)合表面?？乖Y(jié)合表面與結(jié)合的抗原的三維表面互補，重鏈和輕鏈各自的三個超變區(qū)被稱為“互補決定區(qū)”或“cdr”。指定氨基酸至各結(jié)構(gòu)域根據(jù)kabatsequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987和1991))或chothia&leskj.mol.biol.196:901-917(1987),chothia等人nature342:878-883(1989)中的定義來進行。如本文所用，術(shù)語“表位”包括能夠特異性結(jié)合免疫球蛋白、scfv或t-細胞受體的任何蛋白決定簇。術(shù)語“表位”包括能夠特異性結(jié)合免疫球蛋白或t-細胞受體的任何蛋白決定簇。表位決定簇通常由分子例如氨基酸或糖側(cè)鏈的化學(xué)活性表面簇(groupings)組成，和通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特征。例如，抗體可以針對多肽的n-端或c-端肽產(chǎn)生。當解離常數(shù)是≤1μm；例如，在一些實施方案中≤100nm和在一些實施方案中≤10nm時，認為抗體特異性結(jié)合抗原。如本文所用，術(shù)語“特異性結(jié)合”、“免疫結(jié)合”和“免疫結(jié)合性質(zhì)”是指在免疫球蛋白分子和免疫球蛋白對其具有特異性的抗原之間形成的類型的非共價相互作用。免疫結(jié)合相互作用的強度或親和力可表示為相互作用的解離常數(shù)(kd)，其中kd越小表示親和力越大。選擇的多肽的免疫結(jié)合性質(zhì)可使用本領(lǐng)域眾所周知的方法定量測定。一個此類方法要求測定抗原結(jié)合位點/抗原復(fù)合物形成和解離的速率，其中這些速率取決于復(fù)合物配偶體的濃度、相互作用的親和力和在兩個方向上同等影響速率的幾何參數(shù)。因此，“結(jié)合速率常數(shù)”(kon)和“解離速率常數(shù)”(koff)可通過計算濃度和締合和解離的實際速率來測定。(參見nature361:186-87(1993))。koff/kon之比使得能夠消除與親和力不相關(guān)的所有參數(shù)，和等于解離常數(shù)kd。(一般參見davies等人(1990)annualrevbiochem59:439-473)。當結(jié)合常數(shù)(kd)是≤1μm，例如在一些實施方案中≤100nm，在一些實施方案中≤10nm和在一些實施方案中≤100pm至約1pm時，認為本公開的抗體特異性結(jié)合egfr，如通過測定法諸如放射配體結(jié)合測定法或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的類似測定法所測量。如本文所用的術(shù)語“分離的多核苷酸”應(yīng)意指基因組、cdna或合成來源的多核苷酸，或其一些組合，根據(jù)其來源，“分離的多核苷酸”(1)不締合“分離的多核苷酸”天然存在于其中的多核苷酸的全部或一部分，(2)與天然不與其連接的多核苷酸可操作連接，或(3)不作為較大序列的一部分天然存在。根據(jù)本公開的多核苷酸包括編碼本文所示的重鏈免疫球蛋白分子的核酸分子，和編碼本文所示的輕鏈免疫球蛋白分子的核酸分子。本文提及的術(shù)語“分離的蛋白”意指cdna、重組rna或合成來源的蛋白或其一些組合，根據(jù)其來源或衍生源，“分離的蛋白”(1)不締合天然存在的蛋白，(2)不含相同來源的其他蛋白，例如，不含鼠蛋白，(3)通過不同物種的細胞表達，或(4)不天然存在。本文作為通稱使用的術(shù)語“多肽”是指具有多肽序列的天然蛋白、片段或類似物。因此，天然蛋白片段和類似物是多肽上位概念(genus)的下位概念(species)。根據(jù)本公開的多肽包含本文所示的重鏈免疫球蛋白分子和本文所示的輕鏈免疫球蛋白分子，以及由包含重鏈免疫球蛋白分子與輕鏈免疫球蛋白分子諸如κ輕鏈免疫球蛋白分子的組合(和反之亦然)形成的抗體分子以及其片段和類似物。如本文所用的術(shù)語“天然存在的”在應(yīng)用于物體時是指物體可天然存在的事實。例如，存在于生物體(包括病毒)中的、可自天然來源分離的和未在實驗室中經(jīng)人為有意修飾或以其他方式修飾的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。如本文所用的術(shù)語“可操作連接”是指所述組分的位置處于允許它們以其預(yù)期方式起作用的關(guān)系中。與編碼序列“可操作連接”的控制序列以使得編碼序列的表達在與控制序列相容的條件下實現(xiàn)的方式連接。如本文所用的術(shù)語“控制序列”是指實現(xiàn)與它們連接的編碼序列的表達和加工所必需的多核苷酸序列。此類控制序列的性質(zhì)取決于宿主生物體而不同，在原核生物中此類控制序列通常包括啟動子、核糖體結(jié)合位點和轉(zhuǎn)錄終止序列，在真核生物中通常此類控制序列包括啟動子和轉(zhuǎn)錄終止序列。術(shù)語“控制序列”意欲最少包括其存在是表達和加工所必需的所有元件，和還可包括其存在是有利的其他元件，例如前導(dǎo)序列和融合物配偶體序列。本文提及的術(shù)語“多核苷酸”意指至少10個堿基長的核苷酸，為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或任一類型的核苷酸的修飾形式。該術(shù)語包括單鏈和雙鏈形式的dna。本文提及的術(shù)語寡核苷酸包括通過天然存在的和非天然存在的寡核苷酸鍵(linkage)連接在一起的天然存在的和修飾的核苷酸。寡核苷酸是通常包含長度200個或更少的堿基的多核苷酸子集。在一些實施方案中，寡核苷酸是10-60個堿基長，例如在一些實施方案中12、13、14、15、16、17、18、19或20-40個堿基長。寡核苷酸通常是單鏈的，例如對于探針，但寡核苷酸也可以是雙鏈的，例如用于構(gòu)建基因突變體。本公開的寡核苷酸為有義或反義寡核苷酸。本文提及的術(shù)語“天然存在的核苷酸”包括脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。本文提及的術(shù)語“修飾的核苷酸”包括具有修飾的或取代的糖基團等的核苷酸。本文提及的術(shù)語“寡核苷酸鍵”包括寡核苷酸鍵，諸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺磷酸酯(phosphoraniladate)、氨基磷酸酯(phosphoronmidate)等。參見例如，laplanche等人nucl.acidsres.14:9081(1986);stec等人j.am.chem.soc.106:6077(1984),stein等人nucl.acidsres.16:3209(1988),zon等人anticancerdrugdesign6:539(1991);zon等人oligonucleotidesandanalogues:apracticalapproach,第87-108頁(f.eckstein編輯,oxforduniversitypress,oxfordengland(1991));stec等人美國專利號5,151,510;uhlmann和peymanchemicalreviews90:543(1990)。如果需要，寡核苷酸可包括用于檢測的標記。如本文所用，20種常規(guī)氨基酸和其縮寫按常規(guī)使用。參見immunology-asynthesis(第2版,e.s.golub和d.r.gren編輯,sinauerassociates,sunderland7mass.(1991))。20種常規(guī)氨基酸的立體異構(gòu)體(例如，d-氨基酸)、非天然氨基酸例如α-,α-二取代的氨基酸、n-烷基氨基酸、乳酸和其他非常規(guī)氨基酸也可以是本公開的多肽的合適的組分。非常規(guī)氨基酸的實例包括：4羥基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-n,n,n-三甲基賴氨酸、ε-n-乙?；嚢彼帷-磷酸絲氨酸、n-乙?；z氨酸、n-甲?；琢虬彼?、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、σ-n-甲基精氨酸和其他類似的氨基酸和亞氨基酸(例如，4-羥基脯氨酸)。在本文使用的多肽符號中，根據(jù)標準用法和慣例，左手方向是氨基末端方向和右手方向是羧基末端方向。類似地，除非另外說明，單鏈多核苷酸序列的左手末端是5'端，雙鏈多核苷酸序列的左手方向被稱為5'方向。新生rna轉(zhuǎn)錄物的5'至3'加入方向被稱為轉(zhuǎn)錄方向，dna鏈上具有與rna相同的序列和在rna轉(zhuǎn)錄物的5'末端的5'處的序列區(qū)被稱為“上游序列”，dna鏈上具有與rna相同的序列和在rna轉(zhuǎn)錄物的3'末端的3'處的序列區(qū)被稱為“下游序列”。應(yīng)用于多肽時，術(shù)語“基本同一性”意指，兩個肽序列當諸如通過程序gap或bestfit使用默認的空位權(quán)重最佳比對時，共有至少80%的序列同一性，例如在一些實施方案中，至少90%的序列同一性，在一些實施方案中至少95%的序列同一性，和在一些實施方案中至少99%的序列同一性。在一些實施方案中，不相同的殘基位置因保守氨基酸取代而不同。如本文所討論，抗體或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的較少變化預(yù)期包括在本公開中，條件是氨基酸序列中的所述變化保持至少75%，例如在一些實施方案中至少80%、90%、95%，和在一些實施方案中99%。具體而言，預(yù)期保守氨基酸替換。保守替換是在其側(cè)鏈上相關(guān)的氨基酸家族中發(fā)生的那些。遺傳編碼氨基酸通常分為以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸；(2)堿性氨基酸是賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性氨基酸是丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不帶電荷的極性氨基酸是甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸。親水氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸和蘇氨酸。疏水氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。氨基酸的其他家族包括(i)絲氨酸和蘇氨酸，其為脂肪族羥基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，其為含有酰胺的家族；(iii)丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸，其為脂肪族的家族；和(iv)苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其為芳香族的家族。例如，可合理預(yù)期單獨替換亮氨酸為異亮氨酸或纈氨酸、天冬氨酸為谷氨酸、蘇氨酸為絲氨酸或類似替換氨基酸為結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸，不將對所得分子的結(jié)合或性質(zhì)具有主要影響，尤其是如果所述替換不涉及框架位點內(nèi)的氨基酸。氨基酸變化是否產(chǎn)生功能肽可通過測定多肽衍生物的特定活性而容易地確定。本文詳細描述了測定法。抗體或免疫球蛋白分子的片段或類似物可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地制備。在一些實施方案中，片段或類似物的氨基末端和羧基末端出現(xiàn)在功能結(jié)構(gòu)域的邊界附近。結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域可通過將核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公開的或?qū)Ｓ械男蛄袛?shù)據(jù)庫比較來鑒定。計算機比較方法用于鑒定出現(xiàn)在具有已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其他蛋白中的序列基序或預(yù)測的蛋白構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。鑒定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白序列的方法是已知的。bowie等人science253:164(1991)。因此，前述實例證實，本領(lǐng)域技術(shù)人員可識別可用于定義根據(jù)本公開的結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域的序列基序和結(jié)構(gòu)構(gòu)象。在一些實施方案中，氨基酸取代為以下那些氨基酸取代，其：(1)降低對蛋白水解的敏感性，(2)降低對氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白復(fù)合物的結(jié)合親和力，(4)改變結(jié)合親和力，和(4)賦予或修改此類類似物的其他物理化學(xué)或功能性質(zhì)。類似物可包括具有并非天然存在的肽序列的序列的各種突變型蛋白。例如，可在天然存在的序列中，例如在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域外的多肽部分中進行單一或多個氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代不應(yīng)基本上改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征(例如，替換氨基酸不應(yīng)傾向于中斷在親本序列中出現(xiàn)的螺旋，或破壞親本序列所特有的其他類型的二級結(jié)構(gòu))。本領(lǐng)域公認的多肽二級和三級結(jié)構(gòu)的實例描述于proteins,structuresandmolecularprinciples(creighton編輯,w.h.freemanandcompany,newyork(1984));introductiontoproteinstructure(c.branden和j.tooze編輯,garlandpublishing,newyork,n.y.(1991));和thornton等人nature354:105(1991)。如本文所用的術(shù)語“多肽片段”是指具有氨基末端和/或羧基末端缺失和/或一個或多個內(nèi)部缺失的多肽，但其中剩余的氨基酸序列與從例如全長cdna序列中推論的天然存在的序列的相應(yīng)的位置相同。片段通常為至少5、6、8或10個氨基酸長，例如在一些實施方案中至少14個氨基酸長，在一些實施方案中至少20個氨基酸長，通常至少50個氨基酸長，和在一些實施方案中至少70個氨基酸長。如本文所用的術(shù)語“類似物”是指由至少25個氨基酸的區(qū)段構(gòu)成的多肽，所述區(qū)段與推論的氨基酸序列的一部分具有基本同一性和在合適的結(jié)合條件下與egfr特異結(jié)合。通常，多肽類似物包含相對于天然存在的序列的保守氨基酸取代(或添加或缺失)。類似物通常為至少20個氨基酸長，例如在一些實施方案中至少50個氨基酸長或更長，和通?？砷L至全長的天然存在的多肽。術(shù)語“試劑”在本文用于表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或自生物材料制備的提取物。如本文所用，術(shù)語“標記”或“標記的”是指并入可檢測標記物，例如，通過并入放射性標記的氨基酸或與可通過標記的抗生物素蛋白(例如，含有可通過光學(xué)或量熱方法檢測的熒光標記或酶活性的鏈霉抗生物素蛋白)檢測的生物素基部分的多肽連接。在某些情況下，標記或標記物也可以是治療性的。標記多肽和糖蛋白的各種方法是本領(lǐng)域已知的和可被使用。用于多肽的標記的實例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3h、14c、15n、35s、90y、99tc、111in、125i、131i)、熒光標記(例如，熒光團、若丹明、鑭系元素磷光體)、酶標記(例如，辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、螢光素酶、堿性磷酸酶)、化學(xué)發(fā)光、生物素基團、被第二報告分子識別的預(yù)定的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列、第二抗體的結(jié)合位點、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標簽)。在一些實施方案中，標記通過各種長度的間隔區(qū)臂連接以減少潛在的空間位阻。如本文所用的術(shù)語“藥劑或藥物”是指當適當施用于患者時能夠誘導(dǎo)所需的治療效果的化合物或組合物。如本文所用，“基本上純的”意指對象種類是存在的主要種類(即，在摩爾基礎(chǔ)上它比組合物中的任何其他個別種類更豐富)，基本上純化的部分是其中對象種類占存在的所有大分子種類的至少約50%(在摩爾基礎(chǔ)上)的組合物。通常，基本上純的組合物將包含組合物中存在的超過約80%的所有大分子種類，例如，在一些實施方案中，超過約85%、90%、95%和99%。在一些實施方案中，對象種類純化至基本均質(zhì)(通過常規(guī)檢測方法在組合物中不能檢測到污染物種類)，其中組合物基本上由單一大分子種類組成。術(shù)語患者包括人和獸醫(yī)主體。本文的其他化學(xué)術(shù)語根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)用法使用，如由themcgraw-hilldictionaryofchemicalterms(parker,s.編輯,mcgraw-hill,sanfrancisco(1985))所舉例。多特異性抗體和多特異性可活化抗體本公開的示例性的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體包括例如本文提供的實施例中顯示的那些和其變體。在一些非限制性的實施方案中，多特異性抗體中的至少一個ab對于cd3ε是特異性的，且至少一個其他ab是表1中所列的任一靶標的結(jié)合配偶體。在一些非限制性實施方案中，多特異性抗體的至少一個ab是或源自于本文提供的實施例中所列的序列。在一些非限制性的實施方案中，多特異性抗體的至少一個ab是或源自于表2中所列的抗體。表2：示例性ab來源抗體商品名(抗體名)靶標avastin?(貝伐單抗)vegflucentis?(雷珠單抗)vegferbitux?(西妥昔單抗)egfrvectibix?(帕尼單抗)egfrremicade?(英夫利昔單抗)tnfαhumira?(阿達木單抗)tnfαtysabri?(那他珠單抗)整聯(lián)蛋白α4simulect?(巴利昔單抗)il2rsoliris?(艾庫組單抗)補體c5raptiva?(伊伐珠單抗)cd11abexxar?(托西莫單抗)cd20zevalin?(替伊莫單抗)cd20rituxan?(利妥昔單抗)cd20奧瑞珠單抗(ocrelizumab)cd20arzerra?(奧法木單抗)cd20obinutuzumabcd20zenapax?(達珠單抗)cd25adcetris?(brentuximabvedotin)cd30myelotarg?(吉妥單抗)cd33mylotarg?(吉妥單抗奧佐米星)cd33campath?(阿侖單抗)cd52reopro?(阿昔單抗)糖蛋白受體iib/iiiaxolair?(奧馬珠單抗)igeherceptin?(曲妥單抗)her2kadcyla?(曲妥單抗emtansine)her2synagis?(帕利珠單抗)rsv的f蛋白yervoy?(易普利姆瑪)ctla-4(替西木單抗(tremelimumab))ctla-4hu5c8cd40l(帕妥珠單抗)her2-neu(ertumaxomab)cd3/her2-neuorencia?(阿巴西普)ctla-4(他尼珠單抗(tanezumab))ngf(巴維昔單抗)磷脂酰絲氨酸(zalutumumab)egfr(mapatumumab)egfr(馬妥珠單抗)egfr(尼妥珠單抗)egfricr62egfrmab528egfrch806egfrmdx-447egfr/cd64(依決洛單抗)epcamrav12raag12huj591psmaenbrel?(依那西普)tnf-ramevive?(阿法西普)1-92-lfa-3antril?,kineret?(阿那白滯素)il-1ragc1008tgfβnotch,例如,notch1jagged1或jagged2(阿德木單抗)epcam(figitumumab)igf1r(tocilizumab)il-6受體stelara?(優(yōu)特克單抗)il-12/il-23prolia?(地諾單抗)ranklkeytruda(派姆單抗(pembrolizumab))pd-1opdivo(納武單抗)pd-1atezolizumab(mpdl3280a)pd-l1本公開的結(jié)合cd3ε的示例性抗體、可活化抗體和其抗原結(jié)合片段包括實施例、例如實施例2和4中所述的cd3ε結(jié)合序列。示例性多特異性抗體和多特異性可活化抗體包括實施例、例如實施例4中所述的多特異性抗體和多特異性可活化抗體。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括選自以下的重鏈序列：seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括選自以下的輕鏈序列：seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括選自seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546的重鏈序列；以及選自seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520的輕鏈序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括與選自以下的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈序列：seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括與選自以下的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈序列：seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括與選自seqidno:446、452、454、456、460、462、464、466、470、472、476、478、480、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、510、512、514、518、524、526、530、532、534、536、538、540、542、544和546的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重鏈序列；以及與選自seqidno:448、450、458、468、474、482、484、508、516和520的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的輕鏈序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括seqidno:506的氨基酸序列。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體包括與seqidno:506的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列。本公開的結(jié)合cd3ε的示例性ab包括如下所示的cd3ε結(jié)合序列：在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括包含或衍生自表17中所示的重鏈氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括包含或衍生自表17中所示的輕鏈氨基酸序列的輕鏈。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括包含或衍生自表17中所示的重鏈氨基酸序列的重鏈和包含或衍生自表17中所示的輕鏈氨基酸序列的輕鏈。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組a中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組b中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組c中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組d中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組e中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組f中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組g中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組h中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組i中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組j中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組k中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組l中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組m中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組n中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組o中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組p中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括來自表17中的組q中所示的組合的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包含或源自市售抗體，諸如例如來自boehringermannheimcorp.(indianapolis,ind.;目錄號1273485)的抗cd3抗體。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包含或源自由雜交瘤制備、分泌或以其他方式產(chǎn)生的抗體，所述雜交瘤諸如例如美國專利號4,361,549和/或4,658,019中公開且以登錄號atcccrl8001okt-3保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心的雜交瘤。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包含或源自由雜交瘤制備、分泌或以其他方式產(chǎn)生的抗體，所述雜交瘤諸如例如pct公開號wo1995/16037中公開且以登錄號dsmacc2152保藏于leibniz-institutdsmz-deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturengmbh的雜交瘤。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包含或源自由雜交瘤制備、分泌或以其他方式產(chǎn)生的抗體，所述雜交瘤諸如例如pct公開號wo1991/01752中公開且以登錄號hb10166保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心的雜交瘤。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括表18中所示的cdr序列、選自表18中所示的那些組合的vlcdr序列的組合和/或選自表18中所示的那些組合的vhcdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組r中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組r中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組s中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組s中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組t中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組t中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組u中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組u中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組v中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組v中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組w中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組w中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組x中所示的組合的重鏈cdr序列的組合。在一些實施方案中，可活化抗cd3ε抗體包括選自表18中的組x中所示的組合的輕鏈cdr序列的組合。本公開的多特異性可活化抗體中的ab至少特異性結(jié)合哺乳動物靶標。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合哺乳動物cd3ε。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合人靶標。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合非人靈長類靶標。本公開中還包括與本公開的抗體和/或本文所述的活化的可活化抗體結(jié)合相同的表位的ab。本公開中還包括與本文所述的抗體和/或活化的可活化抗體競爭結(jié)合靶標、例如人靶標的ab。本公開中還包括與本文所述的抗體和/或活化的可活化抗體交叉競爭結(jié)合靶標、例如人靶標的ab。在一些實施方案中，本公開的多特異性可活化抗體中的ab至少特異性結(jié)合cd3ε靶標、諸如例如哺乳動物cd3ε。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合哺乳動物cd3ε。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合人cd3ε。在一些實施方案中，此類ab結(jié)合非人靈長類cd3ε。本公開中還包括與本公開的抗體和/或本文所述的活化的可活化抗體結(jié)合相同的cd3ε表位的ab。本公開中還包括與本文所述的抗cd3ε抗體和/或活化的抗cd3ε可活化抗體競爭結(jié)合cd3ε靶標、例如人cd3ε的ab。本公開中還包括與本文所述的抗cd3ε抗體和/或活化的抗cd3ε可活化抗體交叉競爭結(jié)合cd3ε靶標、例如人cd3ε的ab。在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一個ab結(jié)合表皮生長因子受體(egfr)。在一些實施方案中，結(jié)合egfr的ab包括如下所示的重鏈和/或輕鏈序列中的一種或多種。c225v5抗體重鏈核苷酸序列：c225v5抗體重鏈氨基酸序列c225v5抗體輕鏈核苷酸序列：c225v5抗體輕鏈氨基酸序列：c225v4抗體重鏈核苷酸序列：c225v4抗體重鏈氨基酸序列：c225v6抗體重鏈核苷酸序列：c225v6抗體重鏈氨基酸序列c225抗體重鏈氨基酸序列在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一個ab結(jié)合白介素6受體(il-6r)。在一些實施方案中，結(jié)合il-6r的ab包括如下所示的重鏈和/或輕鏈序列中的一種或多種。av1抗體重鏈氨基酸序列：av1抗體輕鏈氨基酸序列：在一些實施方案中，ab結(jié)合jagged靶標，例如jagged1、jagged2或jagged1和jagged2兩者。在一些實施方案中，結(jié)合jagged靶標的ab包括如下所示的重鏈和/或輕鏈序列中的一種或多種。4d11輕鏈序列：4d11重鏈序列：4d11v2重鏈序列4d11v2輕鏈序列在一些實施方案中，多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一個ab結(jié)合jagged靶標，且包括如下所示的可變重鏈和/或可變輕鏈中的一種或多種?？勺冚p鏈氨基酸序列l(wèi)c4可變重鏈氨基酸序列hc4可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c5可變重鏈氨基酸序列hc5可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c7可變重鏈氨基酸序列hc7可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c8可變重鏈氨基酸序列hc8可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c13可變重鏈氨基酸序列hc13可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c16可變重鏈氨基酸序列hc16可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c19可變重鏈氨基酸序列hc19可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c21可變重鏈氨基酸序列hc21可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c24可變重鏈氨基酸序列hc24可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c26可變重鏈氨基酸序列hc26可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c27可變重鏈氨基酸序列hc27可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c28可變重鏈氨基酸序列hc28可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c30可變重鏈氨基酸序列hc30可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c31可變重鏈氨基酸序列hc31可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c32可變重鏈氨基酸序列hc32可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c37可變重鏈氨基酸序列hc37可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c39可變重鏈氨基酸序列hc39可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c40重鏈氨基酸序列hc40可變輕鏈氨基酸序列l(wèi)c47可變重鏈氨基酸序列hc47可變4b2輕鏈可變4b2重鏈可變4d11輕鏈可變4d11重鏈可變4e7輕鏈可變4e7重鏈可變4e11輕鏈可變4e11重鏈可變6b7輕鏈可變6b7重鏈可變6f8輕鏈可變6f8重鏈本公開的抗體和/或可活化抗體特異性結(jié)合給定靶標，例如人靶蛋白諸如人cd3ε。本公開中還包括與本文所述的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)合相同表位的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。本公開中還包括與本文所述的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體競爭結(jié)合cd3ε、例如人cd3ε的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。本公開中還包括與本文所述的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體交叉競爭結(jié)合cd3ε、例如人cd3ε的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，可能通過確定抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體是否阻止本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)合靶標而在無需過度實驗的情況下確定前者是否具有與后者相同或類似的特異性。如果所測試的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體與本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體競爭，如通過本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的結(jié)合降低所示，則所述抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、兩種多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)合相同或緊密相關(guān)的表位。用于確定抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體是否具有與本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體相同或類似的特異性的一個實施方案是將本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體與所述抗體與之正常反應(yīng)的可溶性靶標預(yù)孵育，然后添加所測試的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體以確定所測試的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體在其結(jié)合靶標的能力上是否受到抑制。如果所測試的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體受到抑制，則很可能其具有與本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體相同或功能等同的表位特異性?？筩d3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體例如使用下文提供的實施例中描述的程序產(chǎn)生。抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體也可以使用多種本領(lǐng)域公認的用于抗體生產(chǎn)和/或純化的技術(shù)中的任一種產(chǎn)生。用于抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的抗體片段，諸如fv、f(ab’)2和fab，可以通過切割完整蛋白，例如，通過蛋白酶或化學(xué)切割來制備。在一些實施方案中，設(shè)計截短的基因。例如，編碼f(ab’)2片段的一部分的嵌合基因?qū)ň幋ah鏈的ch1結(jié)構(gòu)域和鉸鏈區(qū)的dna序列，隨后是翻譯終止密碼子，以得到截短的分子。表達載體包括質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、yac、ebv來源的附加體等。適宜的載體是編碼功能完整的人ch或cl免疫球蛋白序列的載體，其具有工程改造的適當?shù)南拗菩晕稽c以使任何vh或vl序列可容易地插入和表達。在此類載體中，剪接通常發(fā)生在插入的j區(qū)的剪接供體位點和人c區(qū)之前的剪接受體位點之間，也發(fā)生在人ch外顯子內(nèi)存在的剪接區(qū)。多腺苷酸化和轉(zhuǎn)錄終止發(fā)生在編碼區(qū)下游的天然染色體位點。所得抗體可以與任何強啟動子連接，所述強啟動子包括逆轉(zhuǎn)錄病毒ltr，例如，sv-40早期啟動子(okayama等人mol.cell.bio.3:280(1983))、勞斯肉瘤病毒ltr(gorman等人p.n.a.s.79:6777(1982))和莫洛尼鼠白血病病毒ltr(grosschedl等人cell41:885(1985))。如將理解的是，也可使用天然ig啟動子等。此外，抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可使用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)通過展示型技術(shù)(包括但不限于噬菌體展示、逆轉(zhuǎn)錄病毒展示、核糖展示和其他技術(shù))產(chǎn)生，所得分子可進行額外成熟，諸如親和力成熟，因為此類技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。wright等人crit,reviewsinimmunol.12125-168(1992),hanes和plückthunpnasusa94:4937-4942(1997)(核糖體展示),parmley和smithgene73:305-318(1988)(噬菌體展示),scott,tibs,第17卷:241-245(1992),cwirla等人pnasusa87:6378-6382(1990),russel等人nucl.acidsresearch21:1081-1085(1993),hoganboom等人immunol.reviews130:43-68(1992),chiswell和mccaffertytibtech;10:80-8a(1992)和美國專利號5,733,743?？善谕槍π?yīng)子功能修飾本公開的抗cd3ε抗體、抗cd3ε可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體以增強或降低此功能來改進抗體在將cd3+細胞募集至一種或多種與待治療疾病相關(guān)的靶標、諸如例如在腫瘤細胞上表達的靶標中的有效性。例如，可將半胱氨酸殘基引入fc區(qū)，從而允許鏈間二硫鍵在該區(qū)中形成。由此產(chǎn)生的同型二聚體抗體可具有改進的內(nèi)在化能力和/或增加的補體介導(dǎo)的細胞殺傷和抗體依賴性細胞毒性(adcc)。(參見caron等人,j.expmed.,176:1191-1195(1992)和shopes,j.immunol.,148:2918-2922(1992))。在一些實施方案中，抗體可經(jīng)工程改造以具有雙fc區(qū)，從而可具有增強的補體溶解和adcc能力。(參見stevenson等人,anti-cancerdrugdesign,3:219-230(1989))。在一些實施方案中，進行fc突變以除去糖基化位點，從而降低fc功能?？苫罨贵w和多特異性可活化抗體本文提供的可活化抗體含有特異性結(jié)合靶標和/或表位的抗體或其抗體片段(在整個本公開中統(tǒng)稱為ab)，其中ab被掩蔽部分(mm)修飾。本文提供的多特異性可活化抗體至少含有特異性結(jié)合第一靶標和/或第一表位的第一抗體或其抗體片段(在整個本公開中統(tǒng)稱為ab1)和特異性結(jié)合第二靶標和/或第二表位的第二抗體或其抗體片段(在整個本公開中統(tǒng)稱為ab2)，其中至少一個ab被掩蔽部分(mm)修飾。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體中的每個ab被其自身的掩蔽部分修飾。當可活化抗體的ab或多特異性可活化抗體中的至少一個ab用mm修飾且在其靶標存在的情況下時，與未用mm修飾的ab的特異性結(jié)合或親本ab與靶標的特異性結(jié)合相比，ab與其靶標的特異性結(jié)合被降低或抑制。用mm修飾的ab對靶標的kd是未用mm修飾的ab或親本ab對靶標的kd的至少5、10、20、25、40、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更大，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍。相反，用mm修飾的ab對靶標的結(jié)合親和力是未用mm修飾的ab或親本ab對靶標的結(jié)合親和力的至多1/5、1/10、1/20、1/25、1/40、1/50、1/100、1/250、1/500、1/1,000、1/2,500、1/5,000、1/10,000、1/50,000、1/100,000、1/500,000、1/1,000,000、1/5,000,000、1/10,000,000、1/50,000,000或更低，或1/5-1/10、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/10-1/10,000、1/10-1/100,000、1/10-1/1,000,000、1/10-1/10,000,000、1/100-1/1,000、1/100-1/10,000、1/100-1/100,000、1/100-1/1,000,000、1/100-1/10,000,000、1/1,000-1/10,000、1/1,000-1/100,000、1/1,000-1/1,000,000、1/1000-1/10,000,000、1/10,000-1/100,000、1/10,000-1/1,000,000、1/10,000-1/10,000,000、1/100,000-1/1,000,000或1/100,000-1/10,000,000。mm對可活化抗體中的ab的解離常數(shù)(kd)通常大于ab對靶標的kd。mm對多特異性可活化抗體中的至少一個ab的解離常數(shù)(kd)通常大于ab對靶標的kd。mm對ab的kd可以是ab對靶標的kd的至少5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000或甚至10,000,000倍。相反，mm對ab的結(jié)合親和力通常低于ab對靶標的結(jié)合親和力。mm對ab的結(jié)合親和力可以是ab對靶標的結(jié)合親和力的至多1/5、1/10、1/25、1/50、1/100、1/250、1/500、1/1,000、1/2,500、1/5,000、1/10,000、1/100,000、1/1,000,000或甚至1/10,000,000。當可活化抗體中的ab用mm修飾且在其靶標存在的情況下時，與未用mm修飾的ab的特異性結(jié)合或親本ab與靶標的特異性結(jié)合相比，ab與其靶標的特異性結(jié)合被降低或抑制。當多特異性可活化抗體中的至少一個ab用mm修飾且在其靶標存在的情況下時，與未用mm修飾的ab的特異性結(jié)合或親本ab與靶標的特異性結(jié)合相比，ab與其靶標的特異性結(jié)合被降低或抑制。當與未用mm修飾的ab與靶標的結(jié)合或親本ab與靶標的結(jié)合相比時，當在體內(nèi)或在體外測定法中測量時，當用mm修飾時的ab結(jié)合靶標的能力可以降低至少50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%和甚至100%持續(xù)至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小時，或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月或更長。mm抑制可活化抗體中的ab與其靶標的結(jié)合。mm抑制可活化抗體中的至少一個ab與其靶標的結(jié)合。mm結(jié)合ab的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域且抑制ab與其靶標的結(jié)合。mm可以空間抑制ab與靶標的結(jié)合。mm可以變構(gòu)抑制ab與其靶標的結(jié)合。在這些實施方案中，與未經(jīng)mm修飾的ab、親本ab或未與mm偶聯(lián)的ab與靶標的結(jié)合相比，當ab用mm修飾或與mm偶聯(lián)且在靶標存在的情況下時，當在體內(nèi)或在體外測定法中測量時，不存在ab與靶標的結(jié)合或基本上無ab與靶標的結(jié)合，或不多于0.001%、0.01%、0.1%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%或50%的ab與靶標的結(jié)合，持續(xù)至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小時，或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月或更長。當可活化抗體中的ab與mm偶聯(lián)或被mm修飾時，mm“掩蔽”或降低或以其他方式抑制ab與其靶標的特異性結(jié)合。當可活化抗體中的ab與mm偶聯(lián)或被mm修飾時，此偶聯(lián)或修飾可以實現(xiàn)降低或抑制ab特異性結(jié)合其靶標的能力的結(jié)構(gòu)改變。當多特異性可活化抗體中的至少一個ab與mm偶聯(lián)或被mm修飾時，mm“掩蔽”或降低或以其他方式抑制ab與其靶標的特異性結(jié)合。當多特異性可活化抗體中的至少一個ab與mm偶聯(lián)或被mm修飾時，此偶聯(lián)或修飾可以實現(xiàn)降低或抑制ab特異性結(jié)合其靶標的能力的結(jié)構(gòu)改變。在可活化抗體中，當ab與mm偶聯(lián)或用mm修飾時，可活化抗體的至少一部分可以通過下式表示(以從氨基(n)端區(qū)域至羧基(c)端區(qū)域的順序)：(mm)-(ab)(ab)-(mm)(mm)-l-(ab)(ab)-l-(mm)其中mm是掩蔽部分，ab是抗體或其抗體片段，且l是接頭。在許多實施方案中，可期望將一個或多個接頭，例如，柔性接頭插入組合物中以提供柔性。在多特異性可活化抗體中，當至少一個ab與mm偶聯(lián)或用mm修飾時，多特異性可活化抗體的至少一部分可以通過下式表示(以從氨基(n)端區(qū)域至羧基(c)端區(qū)域的順序)：(mm)-(ab)(ab)-(mm)(mm)-l-(ab)(ab)-l-(mm)其中mm是掩蔽部分，ab是抗體或其抗體片段，且l是接頭。在許多實施方案中，可期望將一個或多個接頭，例如，柔性接頭插入組合物中以提供柔性。在某些實施方案中，mm不是ab的天然結(jié)合配偶體。在一些實施方案中，mm不含或基本上不含與ab的任何天然結(jié)合配偶體的同源性。在其他實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%的相似性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于25%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于50%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于20%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于10%的同一性。在一些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體包括通過mm修飾的ab且還包括一個或多個可切割部分(cm)。此類可活化抗體和/或多特異性可活化抗體展現(xiàn)與ab的靶標的可活化/可變換結(jié)合?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體通常包括被掩蔽部分(mm)和可修飾或可切割部分(cm)修飾或與掩蔽部分(mm)和可修飾或可切割部分(cm)偶聯(lián)的至少一個抗體或抗體片段(ab)。在一些實施方案中，cm含有起目標蛋白酶的底物作用的氨基酸序列。可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的元件經(jīng)排列，使得每個mm和cm經(jīng)放置，使得在切割(或者相對活性)狀態(tài)下且在靶標存在的情況下，相應(yīng)的ab結(jié)合靶標，而在未切割(或者相對無活性)狀態(tài)下在靶標存在的情況下，ab與其靶標的特異性結(jié)合被降低或抑制。ab與其靶標的特異性結(jié)合可以由于ab特異性結(jié)合其靶標的能力被mm抑制或掩蔽而降低。每個用mm和cm修飾的ab對靶標的kd是未用mm和cm修飾的ab或親本ab對靶標的kd的至少5、10、20、25、40、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000或更多倍，或5-10、10-100、10-1,000、10-10,000、10-100,000、10-1,000,000、10-10,000,000、100-1,000、100-10,000、100-100,000、100-1,000,000、100-10,000,000、1,000-10,000、1,000-100,000、1,000-1,000,000、1000-10,000,000、10,000-100,000、10,000-1,000,000、10,000-10,000,000、100,000-1,000,000或100,000-10,000,000倍。相反，每個用mm和cm修飾的ab對靶標的結(jié)合親和力是未用mm和cm修飾的ab或親本ab對靶標的結(jié)合親和力的至多1/5、1/10、1/20、1/25、1/40、1/50、1/100、1/250、1/500、1/1,000、1/2,500、1/5,000、1/10,000、1/50,000、1/100,000、1/500,000、1/1,000,000、1/5,000,000、1/10,000,000、1/50,000,000或更低，或1/5-1/10、1/10-1/100、1/10-1/1,000、1/10-1/10,000、1/10-1/100,000、1/10-1/1,000,000、1/10-1/10,000,000、1/100-1/1,000、1/100-1/10,000、1/100-1/100,000、1/100-1/1,000,000、1/100-1/10,000,000、1/1,000-1/10,000、1/1,000-1/100,000、1/1,000-1/1,000,000、1/1000-1/10,000,000、1/10,000-1/100,000、1/10,000-1/1,000,000、1/10,000-1/10,000,000、1/100,000-1/1,000,000或1/100,000-1/10,000,000。當至少一個ab用mm和cm修飾且在靶標存在的情況下、但不在修飾劑(例如蛋白酶)存在的情況下時，與未用mm和cm修飾的ab或親本ab與靶標的特異性結(jié)合相比，該ab與其靶標的特異性結(jié)合被降低或抑制。當與親本ab與其靶標的結(jié)合或未用mm和cm修飾的ab與其靶標的結(jié)合相比時，當在體內(nèi)或在體外測定法中測量時，當用mm和cm修飾時的ab結(jié)合靶標的能力可以降低至少50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%和甚至100%持續(xù)至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84或96小時或5、10、15、30、45、60、90、120、150或180天或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月或更長。如本文所用，術(shù)語切割狀態(tài)是指在cm被蛋白酶修飾后可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的狀況。如本文所用，術(shù)語未切割狀態(tài)是指在不存在cm被蛋白酶切割的情況下可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的狀況。如上所討論，術(shù)語“可活化抗體”在本文用于指呈其未切割(天然)狀態(tài)以及呈其切割狀態(tài)的可活化抗體。對普通技術(shù)人員顯而易見的是，在一些實施方案中，切割的可活化抗體可以由于cm被蛋白酶切割、導(dǎo)致至少mm的釋放而缺乏mm(例如，其中mm未通過共價鍵(例如，半胱氨酸殘基之間的二硫鍵)與可活化抗體連接)。如上所討論，術(shù)語“多特異性可活化抗體”在本文用于指呈其未切割(天然)狀態(tài)以及呈其切割狀態(tài)的多特異性可活化抗體。對普通技術(shù)人員顯而易見的是，在一些實施方案中，切割的多特異性可活化抗體可以由于cm被蛋白酶切割、導(dǎo)致至少mm的釋放而缺乏mm(例如，其中mm未通過共價鍵(例如，半胱氨酸殘基之間的二硫鍵)與多特異性可活化抗體連接)?？苫罨蚩勺儞Q的意指可活化抗體和/或多特異性可活化抗體當可活化抗體在抑制、掩蔽或未切割狀態(tài)下(即，第一構(gòu)象)時展現(xiàn)與靶標的第一結(jié)合水平，且當可活化抗體在未抑制、未掩蔽和/或切割狀態(tài)下(即，第二構(gòu)象)時展現(xiàn)與靶標的第二結(jié)合水平，其中第二靶標結(jié)合水平大于第一結(jié)合水平。通常，靶標對可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的相應(yīng)ab的接近在能夠切割cm的切割劑存在的情況下比在此切割劑不存在的情況下更大。因此，當可活化抗體和/或多特異性可活化抗體在未切割狀態(tài)下時，至少一個ab被抑制免于靶標結(jié)合且可以被掩蔽免于靶標結(jié)合(即，第一構(gòu)象使得ab不能結(jié)合靶標)，且當可活化抗體在切割狀態(tài)下時，對于靶標結(jié)合，ab未被抑制或未被掩蔽。選擇可活化抗體的cm和ab，使得第一ab代表cd3ε的結(jié)合部分，且cm代表由接近表達cd3ε的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與cd3ε在主體中的治療部位或診斷部位處共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶的底物。本文公開的可活化抗體特別可用于其中例如能夠切割cm中的位點的蛋白酶以比非治療部位的組織(例如健康組織)相對更高的水平存在于治療部位或診斷部位的含有cd3ε的組織中的情況。選擇可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的cm和ab，使得第一ab代表第一靶標和/或表位的結(jié)合部分，且cm代表由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與靶標在主體中的治療部位或診斷部位處共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶的底物。本文公開的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體特別可用于其中例如能夠切割cm中的位點的蛋白酶以比非治療部位的組織(例如健康組織)相對更高的水平存在于治療部位或診斷部位的含有靶標的組織中的情況。在一些實施方案中，可活化抗體提供降低的毒性和/或不良副作用，如果ab未被掩蔽或以其他方式被抑制免于結(jié)合cd3ε，則所述毒性和/或不良副作用可以其他方式由在非治療部位處的ab的結(jié)合導(dǎo)致。通常，可活化抗體可以通過如下來設(shè)計：首先選擇目標ab和構(gòu)建可活化抗體的剩余部分，使得當構(gòu)象上被限制時，mm提供ab的掩蔽或ab與cd3ε的結(jié)合的降低?？梢钥紤]結(jié)構(gòu)設(shè)計標準以提供該功能特征。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體提供降低的毒性和/或不良副作用，如果ab未被掩蔽或以其他方式被抑制免于結(jié)合其靶標，則所述毒性和/或不良副作用可以其他方式由在非治療部位處的第一ab的結(jié)合導(dǎo)致。通常，多特異性可活化抗體可以通過如下來設(shè)計：首先選擇目標ab和構(gòu)建可活化抗體的剩余部分，使得當構(gòu)象上被限制時，mm提供ab的掩蔽或ab與其靶標的結(jié)合的降低?？梢钥紤]結(jié)構(gòu)設(shè)計標準以提供該功能特征。提供了對在抑制構(gòu)象相比于非抑制構(gòu)象中的靶標結(jié)合展現(xiàn)所需動態(tài)范圍的可變換表型的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體。動態(tài)范圍通常是指(a)在第一組條件下參數(shù)的最大檢測水平與(b)在第二組條件下該參數(shù)的最小檢測值的比率。例如，在可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的背景下，動態(tài)范圍是指(a)在能夠切割可活化抗體的cm的蛋白酶存在的情況下與可活化抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)合的靶蛋白的最大檢測水平與(b)在蛋白酶不存在的情況下與可活化抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)合的靶蛋白的最小檢測水平的比率?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體的動態(tài)范圍可計算為可活化抗體和/或多特異性可活化抗體切割劑(例如，酶)處理的解離常數(shù)與可活化抗體切割劑處理的解離常數(shù)的比率?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體的動態(tài)范圍越大，可活化抗體的可變換表型越好。具有相對更高的動態(tài)范圍值(例如，大于1)的可活化抗體展現(xiàn)更加期望的變換表型，使得在能夠切割可活化抗體的cm的切割劑(例如，酶)存在的情況下比在切割劑不存在的情況下，可活化抗體的靶蛋白結(jié)合在更大的程度上發(fā)生(例如，主要發(fā)生)?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體可以各種結(jié)構(gòu)構(gòu)型提供。下文提供可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一部分的示例性式。特別考慮，ab、相應(yīng)的mm和cm的n-至c-末端順序可以在可活化抗體內(nèi)反轉(zhuǎn)。還特別考慮，cm和mm的氨基酸序列可以重疊，例如，使得cm包含于mm內(nèi)。例如，可活化抗體可活化抗體的至少一部分可以由下式代表(以從氨基(n)端區(qū)域至羧基(c)端區(qū)域的順序)：(mm)-(cm)-(ab)(ab)-(cm)-(mm)其中mm是掩蔽部分，cm是可切割部分，且ab是抗體或其片段。應(yīng)注意，盡管mm和cm在上式中表示為不同的組分，但在本文公開的所有示例性實施方案(包括式)中，考慮mm和cm的氨基酸序列可以重疊，例如，使得cm完全或部分地包含于mm內(nèi)。此外，上式提供額外氨基酸序列，其可以位于可活化抗體元件的n-末端或c-末端。例如，多特異性可活化抗體的至少一部分可以由下式代表(以從氨基(n)端區(qū)域至羧基(c)端區(qū)域的順序)：(mm)-(cm)-(ab)(ab)-(cm)-(mm)其中mm是掩蔽部分，cm是可切割部分，且ab是第一抗體或其片段。應(yīng)注意，盡管mm和cm在上式中表示為不同的組分，但在本文公開的所有示例性實施方案(包括式)中，考慮mm和cm的氨基酸序列可以重疊，例如，使得cm完全或部分地包含于mm內(nèi)。此外，上式提供額外氨基酸序列，其可以位于可活化抗體元件的n-末端或c-末端。在某些實施方案中，mm不是ab的天然結(jié)合配偶體。在一些實施方案中，mm不含或基本上不含與ab的任何天然結(jié)合配偶體的同源性。在其他實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%的相似性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于50%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于25%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于20%的同一性。在一些實施方案中，mm與ab的任何天然結(jié)合配偶體具有不多于10%的同一性。在許多實施方案中，可期望將一個或多個接頭、例如柔性接頭插入可活化抗體和/或多特異性可活化抗體構(gòu)建體，以在mm-cm連接、cm-ab連接或兩者中的一個或多個處提供柔性。例如，ab、mm和/或cm可以不含足夠數(shù)量的殘基(例如，gly、ser、asp、asn，尤其是gly和ser，特別是gly)以提供期望的柔性。因此，此類可活化抗體和/或多特異性可活化抗體構(gòu)建體的可變換表型可以獲益于引入一個或多個氨基酸以提供柔性接頭。此外，如下所述，在作為構(gòu)象受限的構(gòu)建體提供可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的情況下，可以可操作插入柔性接頭，以促進形成和維持未切割的可活化抗體和/或未切割的多特異性可活化抗體的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。例如，在某些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體包含下式之一(其中下式代表以n-至c-末端方向或c-至n-末端方向的氨基酸序列)：(mm)-l1-(cm)-(ab)(mm)-(cm)-l2-(ab)(mm)-l1-(cm)-l2-(ab)其中mm、cm和ab如上文所定義；其中l(wèi)1和l2各自獨立地且任選地存在或不存在，是相同或不同的柔性接頭，其包括至少1個柔性氨基酸(例如，gly)。此外，上式提供額外氨基酸序列，其可以位于可活化抗體和/或多特異性可活化抗體元件的n-末端或c-末端。實例包括但不限于靶向部分(例如，靶組織中存在的細胞的受體的配體)和血清半衰期延長部分(例如，結(jié)合血清蛋白諸如免疫球蛋白(例如，igg)或血清白蛋白(例如，人血清白蛋白(has))的多肽)。在一些非限制性實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個ab是表1中所列的任一靶標的結(jié)合配偶體。在一些非限制性實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個ab包含、是或衍生自本文提供的實施例中所述的序列。在一些非限制性實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個ab包含、是或衍生自本文提供的實施例中的實施例2和/或?qū)嵤├?中所述的序列。在一些非限制性實施方案中，多特異性可活化抗體中的至少一個ab是或衍生自表2中所列的抗體。在一些實施方案中，選擇掩蔽部分用于與特定抗體或抗體片段一起使用。例如，用于與結(jié)合egfr的抗體一起使用的合適的掩蔽部分包括包含序列cisprg(seqidno:164)的mm。通過非限制性實例的方式，mm可以包括序列諸如cisprgc(seqidno:165)；cisprgcg(seqidno:166)；cisprgcpdgpyvmy(seqidno:167)；cisprgcpdgpyvm(seqidno:168)，cisprgcepgtyvpt(seqidno:169)和cisprgcpgqiwhpp(seqidno:170)。其他合適的掩蔽部分包括pct公開號wo2010/081173中公開的任何egfr-特異性掩蔽物，諸如，通過非限制性實例的方式，和/或。與結(jié)合jagged靶標、例如jagged1和/或jagged2的抗體一起使用的合適的掩蔽部分包括，通過非限制性實例的方式，掩蔽部分，其包括序列，諸如和/或。與結(jié)合白介素6靶標、例如白介素6受體(il-6r)的抗體一起使用的合適的掩蔽部分包括，通過非限制性實例的方式，掩蔽部分，其包括序列，諸如和/或。在一些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的可切割部分(cm)包括可以充當?shù)鞍酌?通常為胞外蛋白酶)的底物的氨基酸序列。cm可以基于由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與多特異性可活化抗體的至少一個ab的期望靶標共定位于組織中的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶進行選擇。其中目標靶標由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與蛋白酶共定位的腫瘤產(chǎn)生的各種不同的條件是已知的，其中所述蛋白酶的底物是本領(lǐng)域已知的。在癌癥的實例中，靶組織可以是癌組織，特別是實體瘤的癌組織。文獻中報道，在許多癌癥(例如，實體瘤)中具有已知底物的蛋白酶的水平增加。參見，例如，larocca等人,(2004)britishj.ofcancer90(7):1414-1421。疾病的非限制性實例包括：所有類型的癌癥(乳腺癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、黑色素瘤、頭頸癌、胰腺癌等)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、sle、心血管損傷、缺血等。例如，適應(yīng)癥包括白血病，包括t-細胞急性成淋巴細胞性白血病(t-all)，成淋巴細胞性疾病，包括多發(fā)性骨髓瘤，和實體瘤，包括肺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、胰腺癌和乳腺癌，包括三重陰性乳腺癌。例如，適應(yīng)癥包括骨疾病或癌轉(zhuǎn)移，無論原發(fā)性腫瘤源；乳腺癌，包括，通過非限制性實例的方式，er/pr+乳腺癌、her2+乳腺癌、三重陰性乳腺癌；結(jié)腸直腸癌；子宮內(nèi)膜癌；胃癌；成膠質(zhì)細胞瘤；頭頸癌，諸如食管癌；肺癌，諸如，通過非限制性實例的方式，非小細胞肺癌；多發(fā)性骨髓瘤；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；肉瘤，諸如骨肉瘤；腎癌，諸如，通過非限制性實例的方式，腎細胞癌；和/或皮膚癌，諸如，通過非限制性實例的方式，鱗狀細胞癌、基底細胞癌或黑色素瘤。在一些實施方案中，癌癥是鱗狀細胞癌。在一些實施方案中，癌癥是皮膚鱗狀細胞癌。在一些實施方案中，癌癥是食管鱗狀細胞癌。在一些實施方案中，癌癥是頭頸鱗狀細胞癌。在一些實施方案中，癌癥是肺鱗狀細胞癌。cm被酶以約0.001-1500x104m-1s-1或至少0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、200、250、500、750、1000、1250或1500x104m-1s-1的速率特異性切割。對于酶的特異性切割，進行酶和cm之間的接觸。當包含與mm和cm偶聯(lián)的ab的可活化抗體在靶標和足夠的酶活性存在的情況下時，cm可以被切割。當至少包含與mm和cm偶聯(lián)的第一ab的多特異性可活化抗體在靶標和足夠的酶活性存在的情況下時，cm可以被切割。足夠的酶活性可以是指酶與cm進行接觸并實現(xiàn)切割的能力?？梢匀菀自O(shè)想，酶可以在cm的附近，但因為其他細胞因子或酶的蛋白修飾而不能切割。示例性底物包括但不限于可被一種或多種表3中的以下酶或蛋白酶切割的底物：例如，在一些實施方案中，底物可被以下酶或蛋白酶中的一種或多種切割：upa、豆莢蛋白(legumain)、基質(zhì)蛋白酶(matriptase)、adam17、bmp-1、tmprss3、tmprss4、mmp-9、mmp-12、mmp-13和/或mmp-14。在一些實施方案中，蛋白酶選自upa、豆莢蛋白(legumain)和基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，蛋白酶是基質(zhì)金屬蛋白酶。在一些實施方案中，蛋白酶包含upa。在一些實施方案中，蛋白酶包含豆莢蛋白(legumain)。在一些實施方案中，蛋白酶包含基質(zhì)蛋白酶(matriptase)。在一些實施方案中，選擇cm與特定蛋白酶一起使用。在一些實施方案中，cm是選自以下的至少一種蛋白酶的底物：adam17、bmp-1、半胱氨酸蛋白酶諸如組織蛋白酶、htra1、豆莢蛋白(legumain)、基質(zhì)蛋白酶(mt-sp1)、基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)、中性粒細胞彈性蛋白酶、tmprss諸如tmprss3或tmprss4、凝血酶和u-型纖溶酶原激活物(upa，也稱為尿激酶)。在一些實施方案中，cm是adam17的底物。在一些實施方案中，cm是bmp-1的底物。在一些實施方案中，cm是組織蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是半胱氨酸蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是htra1的底物。在一些實施方案中，cm是豆莢蛋白(legumain)的底物。在一些實施方案中，cm是基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的底物。在一些實施方案中，cm是mmp的底物。在一些實施方案中，cm是中性粒細胞彈性蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是凝血酶的底物。在一些實施方案中，cm是tmprss的底物。在一些實施方案中，cm是tmprss3的底物。在一些實施方案中，cm是tmprss4的底物。在一些實施方案中，cm是upa的底物。在一些實施方案中，選擇可切割部分與特定蛋白酶一起使用，所述蛋白酶例如已知由接近表達靶標的細胞的腫瘤產(chǎn)生和/或由與可活化抗體的靶標共定位的腫瘤產(chǎn)生的蛋白酶。例如，用于本公開的可活化抗體中的合適的可切割部分包括序列和/或。在一些實施方案中，cm是至少一種基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)的底物。mmp的實例包括mmp1；mmp2；mmp3；mmp7；mmp8；mmp9；mmp10；mmp11；mmp12；mmp13；mmp14；mmp15；mmp16；mmp17；mmp19；mmp20；mmp23；mmp24；mmp26；和mmp27。在一些實施方案中，cm是mmp9、mmp14、mmp1、mmp3、mmp13、mmp17、mmp11和mmp19的底物。在一些實施方案中，cm是mmp7的底物。在一些實施方案中，cm是mmp9的底物。在一些實施方案中，cm是mmp14的底物。在一些實施方案中，cm是兩種或更多種mmp的底物。在一些實施方案中，cm是至少mmp9和mmp14的底物。在一些實施方案中，cm包含相同的mmp的兩種或更多種底物。在一些實施方案中，cm包含至少兩種或更多種mmp9底物。在一些實施方案中，cm包含至少兩種或更多種mmp14底物。在一些實施方案中，cm是mmp的底物，且包括序列和/或。在一些實施方案中，cm是凝血酶的底物。在一些實施方案中，cm是凝血酶的底物，且包括序列g(shù)prsfgl(seqidno:896)或gprsfg(seqidno:897)。在一些實施方案中，cm包含選自以下的氨基酸序列：和。在一些實施方案中，cm是中性粒細胞彈性蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是絲氨酸蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是upa的底物。在一些實施方案中，cm是豆莢蛋白(legumain)的底物。在一些實施方案中，cm是基質(zhì)蛋白酶(matriptase)的底物。在一些實施方案中，cm是半胱氨酸蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是半胱氨酸蛋白酶、諸如組織蛋白酶的底物。在一些實施方案中，cm是cm1-cm2底物，且包括序列和/或。在一些實施方案中，本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體和/或多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可以使用重組dna技術(shù)和在真核或原核物種中表達來生物合成制備。對于可活化抗體和/或多特異性可活化抗體，編碼掩蔽部分、接頭序列(其可包括可切割部分(cm)和抗體鏈(重鏈或輕鏈))的cdna可以5’至3’(翻譯產(chǎn)物的n-至c-末端)序列連接，以產(chǎn)生核酸構(gòu)建體，其遵循常規(guī)抗體表達方法表達為可活化抗體蛋白和/或多特異性可活化抗體蛋白。在一些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可以通過表達cm-抗體、然后在蛋白的n-末端處或附近化學(xué)偶聯(lián)掩蔽物來半合成產(chǎn)生。在一些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可以通過如下產(chǎn)生：表達抗體，然后在蛋白的n-末端處或附近化學(xué)偶聯(lián)掩蔽物和cm，使得未切割狀態(tài)下的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的至少一部分具有如下的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列：mm-cm-ab或ab-cm-mm。適合用于本文所述的組合物的接頭通常是提供修飾的ab或多特異性可活化抗體的柔性以促進至少第一ab與靶標的結(jié)合的抑制的接頭。此類接頭通常被稱為柔性接頭。合適的接頭可以容易地選擇，且可以具有任何合適的不同長度，諸如1個氨基酸(例如，gly)至20個氨基酸、2個氨基酸至15個氨基酸、3個氨基酸至12個氨基酸，包括4個氨基酸至10個氨基酸、5個氨基酸至9個氨基酸、6個氨基酸至8個氨基酸或7個氨基酸至8個氨基酸，且可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個氨基酸長。示例性柔性接頭包括甘氨酸聚合物(g)n、甘氨酸-絲氨酸聚合物(包括例如，(gs)n、(gsggs)n(seqidno:59)和(gggs)n(seqidno:60)，其中n是至少1的整數(shù))、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-絲氨酸聚合物和本領(lǐng)域已知的其他柔性接頭。甘氨酸和甘氨酸-絲氨酸聚合物相對無結(jié)構(gòu)，因此可能能夠充當各組分之間的中性系鏈。甘氨酸獲得比甚至丙氨酸顯著更多的phi-psi空間，且比具有更長側(cè)鏈的殘基受到少得多的限制(參見scheraga,rev.computationalchem.11173-142(1992))。示例性柔性接頭包括但不限于ggsg(seqidno:61)、ggsgg(seqidno:62)、gsgsg(seqidno:63)、gsggg(seqidno:64)、gggsg(seqidno:65)、gsssg(seqidno:66)等。普通技術(shù)人員將認識到，可活化抗體的設(shè)計可以包括全部或部分柔性的接頭，使得接頭可以包括柔性接頭以及賦予較少柔性結(jié)構(gòu)的一個或多個部分，以提供期望的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體結(jié)構(gòu)。除了上述元件之外，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可以含有額外元件，諸如例如可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的n-或c-末端氨基酸序列。例如，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可以包括靶向部分，以促進遞送至目標細胞或組織?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體可以與試劑綴合，所述試劑諸如治療劑、可檢測部分或診斷劑。本文公開了試劑的實例?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體還可以包括與本公開的可活化抗體和/或多特異性抗體結(jié)合的綴合的試劑、接頭和本文所述的其他組分中的任一種，包括，通過非限制性實例的方式，表4中所列的任何試劑和/或表5和/或表6中所列的任何接頭。綴合的抗體、綴合的可活化抗體、綴合的多特異性抗體和綴合的多特異性可活化抗體在一些實施方案中，本公開的抗體和/或可活化抗體可以與試劑綴合，所述試劑諸如例如治療劑、可檢測部分或診斷劑。通過非限制性實例的方式，合適的治療劑包括用于靶向t細胞衍生的淋巴瘤的治療劑。通過非限制性實例的方式，合適的可檢測劑包括熒光染料(例如熒光團、異硫氰酸熒光素(fitc)、若丹明異硫氰酸鹽(tritc)、alexafluor?標記)，近紅外(nir)染料(例如，qdot?納米晶體)，膠體金屬，半抗原，放射性標記，生物素和擴增試劑諸如鏈霉抗生物素蛋白或酶(例如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)?？苫罨筩d3ε抗體具有試劑的至少一個綴合點，但在本文提供的方法和組合物中，少于所有可能的綴合點可用于與試劑綴合。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與鏈間二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與鏈間硫化物鍵的硫原子，但不是參與鏈內(nèi)二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是半胱氨酸或含有硫原子的其他氨基酸殘基的硫原子。此類殘基可以天然存在于抗體結(jié)構(gòu)中，或者可以通過定點誘變、化學(xué)轉(zhuǎn)化或錯誤并入非天然氨基酸而并入抗體中。還提供了制備具有ab中的一個或多個鏈間二硫鍵和mm中的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵的可活化抗cd3ε抗體和與游離硫醇反應(yīng)的藥物的綴合物的方法。該方法通常包括用還原劑(諸如例如tcep)部分還原可活化抗體中的鏈間二硫鍵；和將與游離巰基反應(yīng)的藥物與部分還原的可活化抗體綴合。如本文所用，術(shù)語部分還原是指其中可活化抗cd3ε抗體與還原劑接觸且少于所有二硫鍵，例如少于所有可能的綴合位點被減少的情況。在一些實施方案中，少于99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或少于5％的所有可能的綴合位點被還原。在還有其他實施方案中，提供了將試劑例如藥物還原和綴合至可活化抗cd3ε抗體、導(dǎo)致試劑放置的選擇性的方法。該方法通常包括用還原劑部分還原可活化抗cd3ε抗體，使得可活化抗體的掩蔽部分或其他非ab部分中的任何綴合位點不被還原，并將該試劑綴合至ab中的鏈間巰基。選擇綴合位點以便允許試劑的期望放置，以允許在期望的位點發(fā)生綴合。還原劑例如為tcep。通過鑒定產(chǎn)生其中mm保留有效和高效地掩蔽未切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab的能力的綴合的可活化抗體的條件來確定還原反應(yīng)條件，諸如例如還原劑與可活化抗體的比率，孵育時間，孵育期間的溫度，還原反應(yīng)溶液的ph等。還原劑與可活化抗cd3ε抗體的比率將根據(jù)可活化抗體而變化。在一些實施方案中，還原劑與可活化抗cd3ε抗體的比率將范圍為約20:1至1:1、約10:1至1:1、約9:1至1:1、約8:1至1:1、約7:1至1:1、約6:1至1:1、約5:1至1:1、約4:1至1:1、約3:1至1:1、約2:1至1:1、約20:1至1:1.5、約10:1至1:1.5、約9:1至1:1.5、約8:1至1:1.5、約7:1至1:1.5、約6:1至1:1.5、約5:1至1:1.5、約4:1至1:1.5、約3:1至1:1.5、約2:1至1:1.5、約1.5:1至1:1.5或約1:1至1:1.5。在一些實施方案中，比率在約5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約5:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約8:1至約1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約2.5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，提供了還原可活化抗cd3ε抗體的ab中的鏈間二硫鍵和將試劑(例如，含巰基的試劑，諸如藥物)綴合至所得鏈間巰基以將試劑選擇性定位在ab上的方法。該方法通常包括用還原劑部分還原ab以形成至少兩個鏈間巰基，而不在可活化抗體中形成所有可能的鏈間巰基；和將所述試劑綴合至部分還原的ab的鏈間巰基。例如，以還原劑:可活化抗體的期望比率將可活化抗體的ab在約37℃下部分還原約1小時。在一些實施方案中，還原劑與可活化抗體的比率將范圍為約20:1至1:1、約10:1至1:1、約9:1至1:1、約8:1至1:1、約7:1至1:1、約6:1至1:1、約5:1至1:1、約4:1至1:1、約3:1至1:1、約2:1至1:1、約20:1至1:1.5、約10:1至1:1.5、約9:1至1:1.5、約8:1至1:1.5、約7:1至1:1.5、約6:1至1:1.5、約5:1至1:1.5、約4:1至1:1.5、約3:1至1:1.5、約2:1至1:1.5、約1.5:1至1:1.5或約1:1至1:1.5。在一些實施方案中，比率在約5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約5:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約8:1至約1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約2.5:1至1:1的范圍內(nèi)。含巰基的試劑可以是例如半胱氨酸或n-乙酰半胱氨酸。還原劑可以是例如tcep。在一些實施方案中，可以在綴合之前使用例如柱色譜、透析或滲濾純化還原的可活化抗體。在一些實施方案中，在部分還原后和綴合之前不純化還原的抗體。本公開還提供了部分還原的可活化抗cd3ε抗體，其中可活化抗體中的至少一個鏈間二硫鍵已用還原劑還原，而不干擾可活化抗體中的任何鏈內(nèi)二硫鍵，其中可活化抗體包括特異性結(jié)合cd3ε靶標的抗體或其抗原結(jié)合片段(ab)，抑制未切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab與cd3ε靶標的結(jié)合的掩蔽部分(mm)，和與ab偶聯(lián)的可切割部分(cm)，其中所述cm是功能為蛋白酶的底物的多肽。在一些實施方案中，mm經(jīng)由cm與ab偶聯(lián)。在一些實施方案中，可活化抗體的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵不被還原劑干擾。在一些實施方案中，可活化抗體內(nèi)的mm的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵不被還原劑干擾。在一些實施方案中，未切割狀態(tài)下的可活化抗體具有如下的從n-端至c-端的結(jié)構(gòu)排列：mm-cm-ab或ab-cm-mm。在一些實施方案中，還原劑是tcep。本文提供的組合物和方法使得能夠?qū)⒁环N或多種試劑連接至任何ab區(qū)域中的一個或多個半胱氨酸殘基，而不損害多特異性可活化抗體的活性(例如，掩蔽、活化或結(jié)合活性)。在一些實施方案中，本文提供的組合物和方法使得能夠?qū)⒁环N或多種試劑連接至任何ab區(qū)域中的一個或多個半胱氨酸殘基，而不減少或以其他方式干擾任何mm內(nèi)的一個或多個二硫鍵。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生多特異性可活化抗體，其與一種或多種試劑，例如多種治療劑、診斷劑和/或預(yù)防劑中的任一種綴合，優(yōu)選沒有任何試劑與多特異性可活化抗體的任何mm綴合。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生綴合的多特異性可活化抗體，其中每個mm保留有效且高效地掩蔽未切割狀態(tài)下的多特異性可活化抗體的其相應(yīng)ab的能力。本文提供的組合物和方法產(chǎn)生綴合的多特異性可活化抗體，其中可活化抗體在可切割cm的蛋白酶存在的情況下仍被活化，即切割。多特異性可活化抗體具有試劑的至少一個綴合點，但在本文提供的方法和組合物中，少于所有可能的綴合點可用于與試劑綴合。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與鏈間二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是參與鏈間硫化物鍵的硫原子，但不是參與鏈內(nèi)二硫鍵的硫原子。在一些實施方案中，一個或多個綴合點是半胱氨酸或含有硫原子的其他氨基酸殘基的硫原子。此類殘基可以天然存在于抗體結(jié)構(gòu)中，或者可以通過定點誘變、化學(xué)轉(zhuǎn)化或錯誤并入非天然氨基酸而并入抗體中。還提供了制備具有一個或多個ab中的一個或多個鏈間二硫鍵和相應(yīng)mm中的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵的多特異性可活化抗體和與游離硫醇反應(yīng)的藥物的綴合物的方法。該方法通常包括用還原劑(諸如例如tcep)部分還原可活化抗體中的鏈間二硫鍵；和將與游離巰基反應(yīng)的藥物與部分還原的可活化抗體綴合。如本文所用，術(shù)語部分還原是指其中多特異性可活化抗體與還原劑接觸且少于所有二硫鍵，例如少于所有可能的綴合位點被還原的情況。在一些實施方案中，少于99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或少于5％的所有可能的綴合位點被還原。在還有其他實施方案中，提供了將試劑例如藥物還原和綴合至多特異性可活化抗體、導(dǎo)致試劑放置的選擇性的方法。該方法通常包括用還原劑部分還原多特異性可活化抗體，使得可活化抗體的掩蔽部分或其他非ab部分中任一種的任何綴合位點不被還原，和將該試劑綴合至多特異性可活化抗體的一個或多個ab區(qū)域中的鏈間巰基。選擇綴合位點以便允許試劑的期望放置，以允許在期望的位點發(fā)生綴合。還原劑例如為tcep。通過鑒定產(chǎn)生其中mm保留有效且高效地掩蔽未切割狀態(tài)下的可活化抗體的ab的能力的綴合的可活化抗體的條件來確定還原反應(yīng)條件，諸如例如還原劑與可活化抗體的比率，孵育時間，孵育期間的溫度，還原反應(yīng)溶液的ph等。還原劑與多特異性可活化抗體的比率將根據(jù)可活化抗體而變化。在一些實施方案中，還原劑與多特異性可活化抗體的比率將范圍為約20:1至1:1、約10:1至1:1、約9:1至1:1、約8:1至1:1、約7:1至1:1、約6:1至1:1、約5:1至1:1、約4:1至1:1、約3:1至1:1、約2:1至1:1、約20:1至1:1.5、約10:1至1:1.5、約9:1至1:1.5、約8:1至1:1.5、約7:1至1:1.5、約6:1至1:1.5、約5:1至1:1.5、約4:1至1:1.5、約3:1至1:1.5、約2:1至1:1.5、約1.5:1至1:1.5或約1:1至1:1.5。在一些實施方案中，比率在約5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約5:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約8:1至約1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約2.5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，提供了還原多特異性可活化抗體的一個或多個ab區(qū)域中的鏈間二硫鍵和將試劑(例如，含巰基的試劑，諸如藥物)綴合至所得鏈間巰基以將試劑選擇性定位在ab上的方法。該方法通常包括用還原劑部分還原一個或多個ab區(qū)域以形成至少兩個鏈間巰基，而不在可活化抗體中形成所有可能的鏈間巰基；和將所述試劑綴合至部分還原的ab的鏈間巰基。例如，以還原劑:可活化抗體的期望比率將多特異性可活化抗體的一個或多個ab區(qū)域在約37℃下部分還原約1小時。在一些實施方案中，還原劑與可活化抗體的比率將范圍為約20:1至1:1、約10:1至1:1、約9:1至1:1、約8:1至1:1、約7:1至1:1、約6:1至1:1、約5:1至1:1、約4:1至1:1、約3:1至1:1、約2:1至1:1、約20:1至1:1.5、約10:1至1:1.5、約9:1至1:1.5、約8:1至1:1.5、約7:1至1:1.5、約6:1至1:1.5、約5:1至1:1.5、約4:1至1:1.5、約3:1至1:1.5、約2:1至1:1.5、約1.5:1至1:1.5或約1:1至1:1.5。在一些實施方案中，比率在約5:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約5:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約4:1至1.5:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約8:1至約1:1的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，比率在約2.5:1至1:1的范圍內(nèi)。含巰基的試劑可以是例如半胱氨酸或n-乙酰半胱氨酸。還原劑可以是例如tcep。在一些實施方案中，可以在綴合之前使用例如柱色譜、透析或滲濾純化還原的可活化抗體。在一些實施方案中，在部分還原后和綴合之前不純化還原的抗體。本公開還提供了部分還原的多特異性可活化抗體，其中多特異性可活化抗體中的至少一個鏈間二硫鍵已用還原劑還原，而不干擾多特異性可活化抗體中的任何鏈內(nèi)二硫鍵，其中多特異性可活化抗體包括特異性結(jié)合靶標的至少第一抗體或其抗原結(jié)合片段(ab1)，抑制未切割狀態(tài)下的多特異性可活化抗體的ab1與靶標的結(jié)合的第一掩蔽部分(mm1)，和與ab1偶聯(lián)的第一可切割部分(cm1)，其中所述cm1是功能為蛋白酶的底物的多肽，和特異性結(jié)合第二靶標的第二抗體或其抗原結(jié)合片段(ab2)。在一些實施方案中，mm1經(jīng)由cm1與ab1偶聯(lián)。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵不被還原劑干擾。在一些實施方案中，多特異性可活化抗體內(nèi)的mm1的一個或多個鏈內(nèi)二硫鍵不被還原劑干擾。在一些實施方案中，還原劑是tcep。本公開還涉及免疫綴合物，其包含與細胞毒性劑諸如毒素(例如，細菌、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即，放射性綴合物)綴合的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體。用于靶向患病t細胞諸如t細胞來源的淋巴瘤的合適的細胞毒性劑包括例如多拉司他汀和其衍生物(例如，阿里他汀e、afp、mmad、mmaf、mmae)。例如，細胞毒性劑是單甲基阿里他汀e(mmae)。在一些實施方案中，試劑是單甲基阿里他汀e(mmad)。在一些實施方案中，試劑是選自表4中所列的試劑。在一些實施方案中，試劑是多拉司他汀。在一些實施方案中，試劑是阿里他汀或其衍生物。在一些實施方案中，試劑是阿里他汀e或其衍生物。在一些實施方案中，試劑是單甲基阿里他汀e(mmae)。在一些實施方案中，試劑是單甲基阿里他汀d(mmad)。在一些實施方案中，試劑是類美登素或類美登素衍生物。在一些實施方案中，試劑是dm1或dm4。在一些實施方案中，試劑是倍癌霉素(duocarmycin)或其衍生物。在一些實施方案中，試劑是卡奇霉素或其衍生物。在一些實施方案中，試劑是吡咯并苯并二氮雜?？墒褂玫拿富钚远舅睾推淦伟ò缀韆鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素a鏈(來自綠膿假單胞菌)、蓖麻毒素a鏈、相思豆毒素a鏈、朔蓮根毒素a鏈、α-帚曲霉素、油桐(aleuritesfordii)蛋白、石竹素蛋白、美國商陸(phytolacaamericana)蛋白(papi、papii和pap-s)、苦瓜(momordicacharantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白、巴豆毒素、肥阜草(sapaonariaofficinalis)抑制劑、白樹毒素、mitogellin、局限曲菌素、酚霉素、依諾霉素和單端孢霉烯類(tricothecenes)。各種放射性核素可用于制備放射性綴合的抗體。實例包括212bi、64cu、125i、131i、131in、99mtc、90y、186re和89zr?？贵w和細胞毒性劑的綴合物使用各種雙官能蛋白偶聯(lián)劑制備，所述雙官能蛋白偶聯(lián)劑諸如n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)丙酸鹽(spdp)、亞氨基硫雜環(huán)戊烷(thiolane)(it)、亞氨酸酯的雙官能衍生物(諸如二甲基己二酰亞胺酸酯hcl)、活性酯(諸如二琥珀酰亞胺基辛二酸酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲?；?己二胺)、雙-重氮鹽衍生物(諸如雙-(對重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二異氰酸酯類(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)和雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可如vitetta等人,science238:1098(1987)中所述制備。碳-14-標記的1-異硫氰酸根合芐基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(mx-dtpa)是將放射性核素(radionucleotide)與抗體綴合的示例性螯合劑。(參見wo94/11026)。表4列舉了可用于本文所述的公開內(nèi)容的一些示例性的藥劑，但其絕不意指為詳盡的列表。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認識到，很多可能的部分可與本公開的所得抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體偶聯(lián)。(參見例如“conjugatevaccines”,contributionstomicrobiologyandimmunology,j.m.cruse和r.e.lewis,jr(編輯),cargerpress,newyork,(1989)，其完整內(nèi)容通過引用并入本文)。偶聯(lián)可通過結(jié)合兩個分子的任何化學(xué)反應(yīng)進行，只要抗體和另一部分保持它們各自的活性。該鍵可包括許多化學(xué)機制，例如共價結(jié)合、親和力結(jié)合、嵌入、配位結(jié)合和絡(luò)合。然而在一些實施方案中，優(yōu)選的結(jié)合是共價結(jié)合。共價結(jié)合可通過現(xiàn)有側(cè)鏈的直接縮合或通過并入外部的橋接分子實現(xiàn)。許多二價或多價連接劑可用于將蛋白分子，諸如本公開的抗體，與其他分子偶聯(lián)。例如，代表性的偶聯(lián)劑可包括有機化合物，諸如硫代酸酯、碳二亞胺、琥珀酰亞胺酯、二異氰酸酯、戊二醛、重氮苯和六亞甲基二胺。該列表不意欲窮盡本領(lǐng)域已知的各種類別的偶聯(lián)劑，而是較常見偶聯(lián)劑的例示。(參見killen和lindstrom,jour.immun.133:1335-2549(1984);jansen等人,immunologicalreviews62:185-216(1982);和vitetta等人,science238:1098(1987)。在一些實施方案中，除了本文提供的組合物和方法以外，綴合的可活化抗體還可通過插入或以其他方式包括在可活化抗體序列中的修飾的氨基酸序列，經(jīng)修飾用于位點特異性綴合。這些修飾的氨基酸序列經(jīng)設(shè)計以允許在綴合的可活化抗體內(nèi)受控的放置和/或給藥綴合的試劑。例如，可活化抗體可經(jīng)工程改造以在輕鏈和重鏈的位置上包括半胱氨酸取代，其提供反應(yīng)性巰基和不負面影響蛋白折疊和裝配，也不改變抗原結(jié)合。在一些實施方案中，可活化抗體可經(jīng)工程改造以在可活化抗體內(nèi)包括或以其他方式引入一個或多個非天然氨基酸殘基，以提供用于綴合的合適位點。在一些實施方案中，可活化抗體可經(jīng)工程改造以在可活化抗體序列內(nèi)包括或以其他方式經(jīng)酶促引入可活化肽序列。合適的接頭描述于文獻中(參見例如ramakrishnan,s.等人,cancerres.44:201-208(1984)，描述使用mbs(m-馬來酰亞胺基苯甲?；?n-羥基琥珀酰亞胺酯)。也參見美國專利號5,030,719，描述使用通過寡肽接頭與抗體偶聯(lián)的鹵代乙酰基酰肼衍生物。特別合適的接頭包括：(i)smpt(4-琥珀酰亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-聯(lián)硫基)-甲苯(piercechem.co.,目錄號(21558g)；(ii)spdp(琥珀酰亞胺基-6[3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)丙酰胺基]己酸酯(piercechem.co.,目錄號21651g)；和(iii)磺基-lc-spdp(磺基琥珀酰亞胺基6[3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)-丙酰胺]己酸酯(piercechem.co.目錄號2165-g。額外的接頭包括但不限于smcc、磺基-smcc、spdb或磺基-spdb。上述接頭含有具有不同屬性的元件，因此產(chǎn)生具有不同物理化學(xué)性質(zhì)的綴合物。例如，接頭smpt含有空間阻礙的二硫鍵，且可形成具有增加的穩(wěn)定性的綴合物。二硫鍵通常比其他鍵更不穩(wěn)定，因為二硫鍵被體外切割，導(dǎo)致較少的可獲得綴合物。以羧酸和伯胺或仲胺開始，試劑edc(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽可用于產(chǎn)生羧酰胺。因此，edc可用于連接抗體中的賴氨酸殘基與接頭或毒素中的羧酸，或連接抗體中的天冬氨酸或谷氨酸殘基與接頭或毒素中的胺。此類利用edc的綴合反應(yīng)可通過加入nhs(n-羥基琥珀酰亞胺)或磺基-nhs(n-羥基-3-氧基磺酰基琥珀酰亞胺)而增強。加入nhs或磺基-nhs至此類綴合反應(yīng)中可增強綴合反應(yīng)的速率、完全性、選擇性和/或再現(xiàn)性。在一些實施方案中，接頭是可切割的。在一些實施方案中，接頭是不可切割的。在一些實施方案中，存在兩個或更多個接頭。所述兩個或更多個接頭全都相同，例如是可切割的或不可切割的，或所述兩個或更多個接頭是不同的，例如至少一個可切割且至少一個不可切割。本公開利用幾種方法來將試劑連接至抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的ab：(a)連接至ab的碳水化合物部分，或(b)連接至ab的巰基，或(c)連接至ab的氨基，或(d)連接至ab的羧酸基團。根據(jù)本公開，ab可通過具有至少兩個反應(yīng)性基團的中間體接頭共價連接至試劑，一個基團與ab反應(yīng)和一個基團與所述試劑反應(yīng)?？砂ㄈ魏蜗嗳莸挠袡C化合物的接頭可經(jīng)選擇使得與ab(或試劑)的反應(yīng)不會不利地影響ab的反應(yīng)性和選擇性。此外，連接接頭至試劑，可能不破壞試劑的活性。對于與氧化的抗體或氧化的抗體片段反應(yīng)，合適的接頭包括含有胺的那些，所述胺選自伯胺、仲胺、肼、酰肼、羥胺、苯肼、氨基脲和氨基硫脲基團。此類反應(yīng)性官能團可作為接頭結(jié)構(gòu)的部分存在，或可通過不含此類基團的接頭的合適化學(xué)修飾引入。根據(jù)本公開，用于連接至抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的還原的ab的合適的接頭包括具有能夠與還原抗體或片段的巰基反應(yīng)的某些反應(yīng)性基團的那些。此類反應(yīng)性基團包括但不限于：反應(yīng)性鹵代烷基(包括例如，鹵代乙酰基)、對汞基苯甲酸基團和能夠michael-型加成反應(yīng)的基團(包括例如，馬來酰亞胺和mitra和lawton,1979,j.amer.chem.soc.101:3097-3110描述的類型的基團)。根據(jù)本公開，用于連接至抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的非氧化也非還原的ab的合適的接頭包括具有能夠與存在于ab的未經(jīng)修飾的賴氨酸殘基中的伯氨基反應(yīng)的某些官能團的那些。此類反應(yīng)性基團包括但不限于nhs羧酸或碳酸酯、磺基-nhs羧酸或碳酸酯、4-硝基苯基羧酸或碳酸酯、五氟苯基羧酸或碳酸酯、?；溥?、異氰酸酯和異硫氰酸酯。根據(jù)本公開，用于連接至非氧化也非還原的ab的合適的接頭包括具有能夠與存在于ab的天冬氨酸或谷氨酸殘基中的羧酸基團反應(yīng)的某些官能團的那些，所述羧酸基團已被合適的試劑活化。合適的活化試劑包括edc(具有或不具有加入的nhs或磺基-nhs)和用于羧酰胺形成的其他脫水劑。這些實例中，存在于合適的接頭中的官能團包括伯胺和仲胺、肼、羥胺和酰肼。所述試劑可在接頭與ab連接之前或之后與接頭連接。在某些應(yīng)用中，首先產(chǎn)生ab-接頭中間體可能是需要的，其中接頭不包含相關(guān)的試劑。根據(jù)具體的應(yīng)用，特定的試劑可然后與接頭共價連接。在其他實施方案中，ab首先與mm、cm和相關(guān)的接頭連接，且然后與用于綴合目的的接頭連接。分支接頭：在特定的實施方案中，利用具有多個試劑連接位點的分支接頭。對于多位點接頭，與ab的單一共價連接將產(chǎn)生能夠在多個位點上結(jié)合試劑的ab-接頭中間體。所述位點可以是醛基團或巰基或試劑可連接的任何化學(xué)位點。在一些實施方案中，通過在ab的多個位點上連接單一位點接頭，可獲得較高的特異活性(或較高的試劑:ab比)。通過兩種方法的任一種，該多個位點可引入ab中。第一，可在同一ab上產(chǎn)生多個醛基團和/或巰基。第二，可連接ab的醛或巰基與具有用于隨后連接接頭的多個功能位點的"分支接頭"。分支接頭或多位點接頭的功能位點可以是醛基團或巰基，或可以是接頭可連接的任何化學(xué)位點。還更高的特異活性可通過組合這兩種方法獲得，即在ab的數(shù)個位點上連接多位點接頭?？汕懈畹慕宇^：在本公開的一個實施方案中，可使用易于被補體系統(tǒng)的酶(諸如但不限于尿激酶、組織纖溶酶原激活物、胰蛋白酶、纖溶酶或具有蛋白水解活性的另一種酶)切割的肽接頭。根據(jù)本公開的一種方法，試劑經(jīng)由對補體切割敏感的接頭連接?？贵w選自可活化補體的類別。因此，抗體-試劑綴合物活化補體級聯(lián)且在靶標位點上釋放試劑。根據(jù)本公開的另一種方法，試劑經(jīng)由易于被具有蛋白水解活性的酶(例如尿激酶、組織纖溶酶原激活物、纖溶酶或胰蛋白酶)切割的接頭連接。這些可切割的接頭可用于綴合的可活化抗體，其包括胞外毒素，例如通過非限制性實例的方式的表4中所示的任何胞外毒素?？汕懈畹慕宇^序列的非限制性實例提供于表5中。此外，試劑可經(jīng)由二硫鍵(例如半胱氨酸分子上的二硫鍵)與ab連接。因為許多腫瘤天然釋放高水平的谷胱甘肽(還原劑)，所以這可還原二硫鍵，隨后在遞送位點上釋放試劑。在某些具體的實施方案中，修飾cm的還原劑也將修飾綴合的可活化抗體的接頭。間隔區(qū)和可切割的元件：在又另一個實施方案中，以使得優(yōu)化試劑和可活化抗體的ab之間的間隔的方式構(gòu)建接頭可能是必需的。這可通過使用以下通式結(jié)構(gòu)的接頭實現(xiàn)：w–(ch2)n–q其中w是--nh--ch2--或--ch2--；q是氨基酸、肽；且n是0-20的整數(shù)。在還有其他實施方案中，接頭可包含間隔區(qū)元件和可切割的元件。間隔區(qū)元件用于定位可切割的元件遠離ab的核心，使得可切割的元件更易接近負責切割的酶。上述的某些分支接頭可用作間隔區(qū)元件。在整個討論中，應(yīng)理解接頭與試劑(或間隔區(qū)元件與可切割的元件、或可切割的元件與試劑)的連接不需要是特定的連接或反應(yīng)模式。提供具有合適的穩(wěn)定性和生物相容性的產(chǎn)物的任何反應(yīng)都是可接受的。血清補體和接頭選擇：根據(jù)本公開的一種方法，當需要試劑釋放時，使用作為可活化補體的類型的抗體的ab。所得綴合物同時保留結(jié)合抗原和活化補體級聯(lián)的能力。因此，根據(jù)本公開的該實施方案，試劑連接可切割的接頭或可切割的元件的一個末端，且接頭基團的另一末端與ab上的特定位點連接。例如，如果試劑具有羥基或氨基，其可與肽、氨基酸或其他合適選擇的接頭的羧基末端分別經(jīng)由酯或酰胺鍵連接。例如，此類試劑可與接頭肽經(jīng)由碳二亞胺反應(yīng)連接。如果試劑含有會干涉接頭連接的官能團，這些干涉官能團可在連接之前被封閉且在產(chǎn)物綴合物或中間體制備后解封閉。接頭的相對或氨基端然后直接或在進一步修飾后用于結(jié)合能夠活化補體的ab。接頭(或接頭的間隔區(qū)元件)可具有任何需要的長度，其一個末端可與可活化抗體的ab的特定位點共價連接。接頭或間隔區(qū)元件的另一末端可與氨基酸或肽接頭連接。因此，當這些綴合物在補體的存在下結(jié)合抗原時，連接試劑與接頭的酰胺或酯鍵將被切割，導(dǎo)致釋放呈其活性形式的試劑。這些綴合物當施用于主體時，將在靶標位點上實現(xiàn)試劑的遞送和釋放，且對于藥劑、抗生素、抗代謝物、抗增殖藥等(如在表4中(但不限于此)提供的那些)的體內(nèi)遞送特別有效。用于無補體活化下的釋放的接頭：在靶向遞送的又一種應(yīng)用中，無補體活化的試劑釋放是需要的，因為補體級聯(lián)的活化將最終溶解靶細胞。因此，當試劑的遞送和釋放應(yīng)在不殺死靶細胞的情況下實現(xiàn)時該方法是有用的。這是當需要遞送細胞介質(zhì)諸如激素、酶、皮質(zhì)類固醇、神經(jīng)遞質(zhì)、基因或酶至靶細胞時的目標。這些綴合物可通過將試劑與不能活化補體的ab經(jīng)由接頭連接制備，所述接頭對通過血清蛋白酶的切割輕度敏感。當將該綴合物施用于個體時，抗原-抗體復(fù)合物將快速形成，而試劑的切割將緩慢發(fā)生，因此導(dǎo)致在靶標位點上釋放化合物。生物化學(xué)交叉接頭：在其他實施方案中，使用某些生物化學(xué)交叉接頭，可活化抗體可與一種或多種治療劑綴合。交叉連接試劑形成分子橋，其將兩個不同分子的官能團系在一起。為了以逐步方式連接兩個不同的蛋白，可使用雜-雙官能交叉-接頭，其排除不需要的均聚物形成。還可使用通過溶酶體蛋白酶可切割的肽基接頭，例如val-cit、val-ala或其他二肽。此外，可使用在溶酶體的低ph環(huán)境中可切割的酸不穩(wěn)定性接頭，例如：雙-唾液酸醚。其他合適的接頭包括組織蛋白酶不穩(wěn)定性底物，特別是在酸性ph下顯示最佳功能的那些。示例性的雜-雙官能交叉-接頭在表6中提及。不可切割的接頭或直接連接：在本公開的還有其他實施方案中，綴合物可經(jīng)設(shè)計，使得所述試劑被遞送至靶標而不釋放。這可通過將試劑與ab直接或經(jīng)由不可切割的接頭連接實現(xiàn)。這些不可切割的接頭可包括氨基酸、肽、d-氨基酸或可經(jīng)修飾以包括可隨后用于通過本文所述的方法連接ab的官能團的其他有機化合物。此類有機接頭的通式可以是w–(ch2)n–q其中w是--nh--ch2--或--ch2--；q是氨基酸、肽；且n是0-20的整數(shù)。不可切割的綴合物：在一些實施方案中，化合物可與不活化補體的ab連接。當使用不能補體活化的ab時，該連接可使用對活化的補體的切割敏感的接頭或使用對活化的補體的切割不敏感的接頭來實現(xiàn)。本文公開的抗體還可被配制為免疫脂質(zhì)體。含有抗體的脂質(zhì)體通過本領(lǐng)域已知的方法制備，諸如epstein等人,proc.natl.acad.sci.usa,82:3688(1985);hwang等人,proc.natlacad.sci.usa,77:4030(1980);和美國專利號4,485,045和4,544,545中描述的方法。具有提高的循環(huán)時間的脂質(zhì)體公開于美國專利號5,013,556。特別有用的脂質(zhì)體可用包含磷脂酰膽堿、膽固醇和peg-衍生的磷脂酰乙醇胺(peg-pe)的脂質(zhì)組合物通過反相蒸發(fā)方法產(chǎn)生。脂質(zhì)體通過限定孔徑的濾器擠出，以得到具有所需直徑的脂質(zhì)體。本公開的抗體的fab’片段可按martin等人,j.biol.chem.,257:286-288(1982)中所述，經(jīng)由二硫化物交換反應(yīng)與脂質(zhì)體綴合。具有非結(jié)合空間部分或非結(jié)合空間部分的結(jié)合配偶體的可活化抗體和多特異性可活化抗體本公開還提供包括非結(jié)合空間部分(nb)或非結(jié)合空間部分的結(jié)合配偶體(bp)的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體，其中bp募集或以其他方式吸引nb至可活化抗體和/或多特異性可活化抗體。本文提供的可活化抗體包括例如，包括非結(jié)合空間部分(nb)、可切割接頭(cl)和結(jié)合第一靶標或表位的抗體或抗體片段(ab)的可活化抗體；包括非結(jié)合空間部分的結(jié)合配偶體(bp)、cl和ab的多特異性可活化抗體；和包括nb所募集的bp、cl和結(jié)合第一靶標或表位的ab的多特異性可活化抗體。本文提供的多特異性可活化抗體包括例如，包括非結(jié)合空間部分(nb)、可切割接頭(cl)和結(jié)合第一靶標或表位的至少第一抗體或抗體片段(ab1)的多特異性可活化抗體；包括非結(jié)合空間部分的結(jié)合配偶體(bp)、cl和ab1的多特異性可活化抗體；和包括nb所募集的bp、cl和結(jié)合第一靶標或表位的ab1的多特異性可活化抗體。其中nb與cl和ab共價連接或通過與cl和ab共價連接的bp相互作用而締合的可活化抗體在本文被稱為“含有nb的可活化抗體”。其中nb與cl和ab1共價連接或通過與cl和ab1共價連接的bp相互作用而締合的多特異性可活化抗體在本文被稱為“含有nb的多特異性可活化抗體”。可活化或可變換的是指可活化抗體當可活化抗體在抑制、掩蔽或未切割狀態(tài)(即，第一構(gòu)象)時，顯示與靶標的第一結(jié)合水平，且當可活化抗體在未抑制、未掩蔽和/或切割狀態(tài)(即，第二構(gòu)象，即，活化的抗體)時顯示與靶標的第二結(jié)合水平，其中第二靶標結(jié)合水平大于第一靶標結(jié)合水平。與常規(guī)抗體療法相比，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體組合物可顯示增加的生物利用度和更有利的生物分布。在一些實施方案中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體提供降低的毒性和/或不利的副作用，如果可活化抗體和/或多特異性可活化抗體未被掩蔽或以其他方式抑制免于結(jié)合非治療部位和/或非診斷部位，所述毒性和/或副作用否則可因在此部位上可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的結(jié)合而產(chǎn)生。包括非結(jié)合空間部分(nb)的抗cd3ε可活化抗體可使用pct公開號wo2013/192546(其內(nèi)容在此以其整體通過引用并入)中所述的方法制備?？筩d3ε、可活化抗體、多特異性抗體和多特異性可活化抗體的用途應(yīng)理解，本公開的治療實體的施用將與合適的載體、賦形劑和并入制劑中以提供改進的轉(zhuǎn)移、遞送、耐受性等的其他試劑一起施用。大多數(shù)合適的制劑可見于所有制藥化學(xué)家已知的藥典：remington'spharmaceuticalsciences(第15版,mackpublishingcompany,easton,pa(1975))，特別是其中blaug,seymour的第87章。這些制劑包括例如，粉劑、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、蠟、油、脂質(zhì)、含脂質(zhì)(陽離子或陰離子)的囊泡(諸如lipofectin?)、dna綴合物、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳劑、乳劑聚乙二醇(各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠和含有聚乙二醇的半固體混合物。任何前述的混合物可適合于本公開的治療和療法，條件是制劑中的活性成分未被制劑失活和制劑與施用途徑在生理學(xué)上是相容和耐受的。對于與制藥化學(xué)家眾所周知的制劑、賦形劑和載體相關(guān)的其他信息，還參見baldrickp.“pharmaceuticalexcipientdevelopment:theneedforpreclinicalguidance”regul.toxicolpharmacol.32(2):210-8(2000)；wangw.“l(fā)yophilizationanddevelopmentofsolidproteinpharmaceuticals”int.j.pharm.203(1-2):1-60(2000)；charmanwn“l(fā)ipids,lipophilicdrugs,andoraldrugdelivery-someemergingconcepts”jpharmsci.89(8):967-78(2000)；powell等人“compendiumofexcipientsforparenteralformulations”pdajpharmscitechnol.52:238-311(1998)和其中的引文。在一個實施方案中，本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可用作治療劑。此類試劑通常用于診斷、預(yù)測、監(jiān)測、治療、減輕和/或預(yù)防主體的疾病或病理。使用標準方法通過鑒定主體例如患有病癥(或處于發(fā)生病癥的風(fēng)險)的人患者或其他哺乳動物，進行治療方案。將抗cd3ε抗體和/或可活化抗體制劑施用于主體，且通常將具有由于其與cd3ε的結(jié)合導(dǎo)致的作用。將多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體制劑，例如在一些實施方案中，對其兩種或更多種靶抗原具有高特異性和高親和力的制劑，施用于主體和其通常由于其與靶標結(jié)合而具有效果。施用抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可經(jīng)由接合t細胞上的cd3ε來活化t細胞。施用抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可激動、刺激、活化和/或增強cd3介導(dǎo)的t細胞活化。通常，緩解或治療疾病或病癥包括減輕與所述疾病或病癥相關(guān)的一個或多個癥狀或醫(yī)學(xué)問題。例如，在癌癥的情況下，治療有效量的藥物可實現(xiàn)以下方面的一個或其組合：減少癌細胞數(shù)；減少腫瘤大?。灰种?即，在某種程度上降低和/或終止)癌細胞侵潤至周圍器官；抑制腫瘤轉(zhuǎn)移；在某種程度上抑制腫瘤生長；和/或在某種程度上緩解與癌癥相關(guān)的一個或多個癥狀。在一些實施方案中，本公開的組合物可用于預(yù)防主體(例如，人或其他哺乳動物諸如非人靈長類動物、伴侶動物(例如，貓、狗、馬)、家畜、耕畜或動物園動物)的疾病或病癥的發(fā)作或復(fù)發(fā)。術(shù)語主體和患者在本文可互換使用。治療有效量的本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體通常涉及實現(xiàn)治療目標所需要的量。如上文所述，這可以是抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體和其靶抗原之間的結(jié)合相互作用，其在某些情況下激動、刺激、活化和/或增強cd3介導(dǎo)的t細胞活化。此外，施用所需的量將取決于抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體對其特定抗原的結(jié)合親和力，且還將取決于施用的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體從其所施用的自由體積其他主體中耗盡的速度。本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或抗體片段和/或多特異性可活化抗體的治療有效劑量的常見范圍可以是通過非限制性實例的方式的約0.01μg/kg體重至約10mg/kg體重。在一些實施方案中，本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或抗體片段和/或多特異性可活化抗體的治療有效劑量可以是通過非限制性實例的方式的約0.01mg/kg體重至約5-10mg/kg體重。常見的給藥頻率范圍可以是例如每天兩次至每周一次。結(jié)合用于診斷或治療特定病癥的任何已知的方法，確定治療的有效性。用于篩選具有所需特異性的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的方法包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)和本領(lǐng)域內(nèi)已知的其他免疫學(xué)介導(dǎo)的技術(shù)。在另一個實施方案中，針對兩種或更多種靶標的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體用于本領(lǐng)域中已知的涉及靶標的定位和/或定量的方法(例如，用于測量合適的生理學(xué)樣品中一種或多種靶標的水平，用于診斷方法，用于將蛋白成像等)。在一個給定實施方案中，針對兩種或更多種靶標的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體，或其含有抗體衍生的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的衍生物、片段、類似物或同源物，用作藥理學(xué)活性化合物(下文稱為“治療劑”)。在另一個實施方案中，針對兩種或更多種靶標的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體用于通過標準技術(shù)，諸如免疫親和力、色譜或免疫沉淀分離一種或多種靶標。針對兩種或更多種靶標(或其片段)的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體在診斷上用于監(jiān)測組織中的蛋白水平，作為臨床檢驗程序的一部分，例如，以檢測給定治療方案的效力?？赏ㄟ^偶聯(lián)(即，物理連接)抗體與可檢測物質(zhì)促進檢測。可檢測物質(zhì)的實例包括各種酶、輔基、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、生物發(fā)光物質(zhì)和放射性物質(zhì)。合適的酶的實例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實例包括鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光物質(zhì)的實例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、若丹明、二氯三吖嗪基胺熒光素、丹酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光物質(zhì)的實例包括魯米諾；生物發(fā)光物質(zhì)的實例包括螢光素酶、螢光素和水母發(fā)光蛋白；和合適的放射性物質(zhì)的實例包括125i、131i、35s或3h。在又另一個實施方案中，針對兩種或更多種靶標的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可用作檢測樣品中一種或多種靶標(或其片段)的存在的試劑。在一些實施方案中，抗體含有可檢測標記。抗體是多克隆的，或在一些實施方案中，是單克隆的。使用完整抗體或其片段(例如fab、scfv或f(ab)2)。對于探針或抗體，術(shù)語“標記的”意欲包括通過偶聯(lián)(即物理連接)可檢測的物質(zhì)與探針或抗體直接標記探針或抗體，以及通過與直接標記的另一試劑的反應(yīng)性間接標記探針或抗體。間接標記的實例包括使用熒光標記的第二抗體檢測第一抗體，和用生物素末端標記抗體使得其可用熒光標記的鏈霉親和素檢測。術(shù)語“生物樣品”意欲包括自主體分離的組織、細胞和生物流體，以及在主體內(nèi)存在的組織、細胞和流體。因此，血液和血液級分或組分(包括血清、血漿或淋巴)包括在術(shù)語“生物樣品”的用法內(nèi)。即，本公開的檢測方法可用于體外以及體內(nèi)檢測生物樣品中的蛋白。例如，用于檢測分析物蛋白的體外技術(shù)包括酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)、western印跡、免疫沉淀和免疫熒光。用于進行免疫測定的程序描述于例如“elisa:theoryandpractice:methodsinmolecularbiology”,vol.42,j.r.crowther(編輯)humanpress,totowa,nj,1995；“immunoassay”,e.diamandis和t.christopoulus,academicpress,inc.,sandiego,ca,1996；和“practiceandtheoryofenzymeimmunoassays”,p.tijssen,elseviersciencepublishers,amsterdam,1985。此外，用于檢測分析物蛋白的體內(nèi)技術(shù)包括將標記的抗分析物蛋白抗體引入主體。例如，抗體可用放射性標記物進行標記，在主體中所述標記物的存在和位置可通過標準成像技術(shù)檢測。本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體還可用于各種診斷性和預(yù)防性制劑。在一個實施方案中，將抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體施用于處于發(fā)生一種或多種前述病癥的風(fēng)險的患者?；颊呋蚱鞴賹σ环N或多種病癥的素因可使用基因型、血清學(xué)或生物化學(xué)標記物確定。在本公開的另一個實施方案中，將抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體施用于診斷患有與一種或多種前述病癥相關(guān)的臨床適應(yīng)癥的人個體。在診斷后，施用抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體以減輕或逆轉(zhuǎn)臨床適應(yīng)癥的影響?？筩d3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體還可用于檢測患者樣品中的一種或多種靶標且因此可用作診斷劑。例如，本公開的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體用于體外測定法，例如，elisa，以檢測患者樣品中的一種或多種靶標水平。在一個實施方案中，抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體固定在固體支持物(例如，微量滴定板的孔)上。固定的抗體和/或可活化抗體用作測試樣品中可存在的任何靶標的捕獲抗體。將固定的抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或固定的多特異性可活化抗體與患者樣品接觸之前，將固體支持物清洗，和用封閉試劑諸如乳蛋白或白蛋白處理以防止分析物的非特異性吸附。隨后，將孔用疑似含有抗原的測試樣品或用含有標準量的抗原的溶液處理。此樣品是例如來自疑似具有被認為是病理診斷的循環(huán)抗原水平的主體的血清樣品。在洗去測試樣品或標準品后，固體支持物用可檢測標記的第二抗體處理。標記的第二抗體用作檢測抗體。測量可檢測標記的水平，測試樣品中靶抗原的濃度通過與自標準樣品產(chǎn)生的標準曲線相比較來測定。應(yīng)理解，基于在體外診斷測定法中使用抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體獲得的結(jié)果，可能基于靶抗原的表達水平將主體的疾病分期。對于給定的疾病，從診斷為處于疾病進展中的各種階段和/或處于疾病的治療處理中的各個點的主體獲取血液樣品。使用對進展或治療的各階段提供統(tǒng)計學(xué)顯著結(jié)果的一組樣品，指定可被認為是各階段的特征的抗原的濃度范圍。抗cd3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體還可用于診斷和/或成像方法。在一些實施方案中，此類方法為體外方法。在一些實施方案中，此類方法為體內(nèi)方法。在一些實施方案中，此類方法為原位方法。在一些實施方案中，此類方法為離體方法。例如，具有酶促可切割的cm的多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體可用于檢測能夠切割cm的酶的存在或不存在。此類可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可用于診斷，其可包括通過在給定宿主生物體的給定細胞或組織中測量的多特異性活化抗體(即，由可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的切割所產(chǎn)生的抗體)的積聚，體內(nèi)檢測(例如定性或定量)酶活性(或者在一些實施方案中，還原電位增加的環(huán)境，諸如其可提供二硫鍵的還原)?；罨亩嗵禺愋钥贵w的此類積聚不僅表明所述組織表達酶活性(或增加的還原電位，取決于cm的性質(zhì))，而且還表明所述組織表達活化的抗體結(jié)合的至少一種靶標。例如，可選擇cm為在腫瘤部位處、在病毒或細菌感染部位處、在生物學(xué)限制的部位處(諸如在膿腫中、在器官中等)等存在的蛋白酶的蛋白酶底物。至少一個ab可以是結(jié)合靶抗原的ab。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法，可檢測的標記(例如熒光標記或放射性標記或放射性示蹤劑)可與ab或多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的其他區(qū)域綴合。合適的可檢測的標記在上述篩選方法的文中進行討論，且其他具體的實例在下文提供。使用對疾病狀態(tài)的蛋白或肽特異性的至少一個ab以及在目標疾病組織中其活性升高的蛋白酶，可活化抗體將表現(xiàn)出相對于其中cm特異性的酶不以可檢測的水平存在或以比在疾病組織中低的水平存在或無活性(例如，呈酶原形式或與抑制劑復(fù)合)的組織，對疾病組織的結(jié)合率增加。因為小的蛋白和肽從血液中通過腎過濾系統(tǒng)快速清除，且因為對cm特異性的酶不以可檢測的水平存在(或在非疾病組織中以較低水平存在或以無活性構(gòu)象存在)，在疾病組織中活化的多特異性抗體的積聚相對于非疾病組織提高。在另一個實例中，可活化抗體和/或可活化多特異性抗體可用于檢測樣品中切割劑的存在或不存在。例如，在可活化抗體和/或多特異性可活化抗體含有對酶切割敏感的cm的情況下，多特異性可活化抗體可用于檢測(定性地或定量地)樣品中酶的存在。在另一個實例中，在可活化抗體和/或多特異性可活化抗體含有對還原劑切割敏感的cm的情況下，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可用于檢測(定性地或定量地)樣品中還原條件的存在。為了便于在這些方法中分析，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可經(jīng)可檢測標記，且可結(jié)合至支持物(例如，固體支持物，諸如載片或珠粒)?？蓹z測的標記可置于在切割后不釋放的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的部分上，例如可檢測的標記可以是直到發(fā)生切割時才可檢測的猝滅的熒光標記或其他標記。測定法可如下進行：例如通過使固定的可檢測標記的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體與疑似含有酶和/或還原劑的樣品接觸足以發(fā)生切割的一段時間，然后洗滌以除去過量的樣品和污染物。然后通過在與樣品接觸之前可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的可檢測信號的變化，例如由于樣品中的切割劑切割可活化抗體和/或多特異性可活化抗體導(dǎo)致的可檢測信號的存在和/或增加，評價在樣品中切割劑(例如酶或還原劑)的存在或不存在。此類檢測方法可適合于還提供當切割時能夠結(jié)合多特異性可活化抗體的至少一個ab的靶標的存在或不存在的檢測。因此，所述測定法可適合于評價切割劑的存在或不存在和目標靶標的存在或不存在。切割劑的存在或不存在可通過上述多特異性可活化抗體的可檢測的標記的存在和/或增加來檢測，且靶標的存在或不存在可通過檢測靶標-ab復(fù)合物，例如通過使用可檢測標記的抗靶標抗體來檢測?？苫罨贵w和/或多特異性可活化抗體還可用于原位成像以驗證可活化抗體活化(例如通過蛋白酶切割)和與特定靶標的結(jié)合。原位成像是能夠在生物樣品諸如細胞培養(yǎng)物或組織切片中定位蛋白水解活性和靶標的技術(shù)。使用該技術(shù)，可能基于可檢測的標記(例如熒光標記)的存在證實與給定靶標的結(jié)合和蛋白水解活性兩者。這些技術(shù)可用于源自疾病部位(例如腫瘤組織)或健康組織的任何冷凍細胞或組織。這些技術(shù)還可用于新鮮細胞或組織樣品。在這些技術(shù)中，可活化抗體和/或多特異性可活化抗體用可檢測的標記進行標記?？蓹z測的標記可以是熒光染料(例如熒光團、異硫氰酸熒光素(fitc)、異硫氰酸若丹明(tritc)、alexafluor?標記)、近紅外(nir)染料(例如qdot?納米晶體)、膠體金屬、半抗原、放射性標記物、生物素和放大試劑例如鏈霉親和素或酶(諸如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)。已與標記的多特異性可活化抗體孵育的樣品中標記的檢測表明，樣品含有靶標和含有對可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的cm特異性的蛋白酶。在一些實施方案中，蛋白酶的存在可使用廣譜蛋白酶抑制劑諸如本文描述的那些和/或通過使用對蛋白酶特異性的試劑(例如抗體諸如a11，其對蛋白酶基質(zhì)蛋白酶(mt-sp1)特異性并抑制基質(zhì)蛋白酶的蛋白水解活性；參見例如，公開于2010年11月11日的國際公開號wo2010/129609)來證實。使用廣譜蛋白酶抑制劑諸如本文描述的那些和/或通過使用更有選擇性的抑制劑的相同方法可用于鑒定對可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的cm特異性的一種蛋白酶或一類蛋白酶。在一些實施方案中，靶標的存在可使用對靶標特異性的試劑來證實，或可檢測的標記可與未標記的靶標競爭。在一些實施方案中，未標記的可活化抗體和/或多特異性可活化抗體可用于通過標記的第二抗體或更復(fù)雜的檢測系統(tǒng)進行的檢測。類似的技術(shù)也可用于體內(nèi)成像，其中在主體(例如哺乳動物，包括人類)中熒光信號的檢測表明疾病部位包含靶標和包含對可活化抗體和/或多特異性可活化抗體的cm特異性的蛋白酶。這些技術(shù)還可用于試劑盒和/或用作試劑以基于多特異性可活化抗體中的蛋白酶特異性cm在各種細胞、組織和生物體中檢測、鑒定或表征蛋白酶活性?？筩d3ε抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體的治療性施用和制劑應(yīng)理解，施用根據(jù)本公開的治療實體將與并入制劑中以提供改進的轉(zhuǎn)移、遞送、耐受等的合適的載體、賦形劑和其他試劑一起施用。許多合適的制劑可在所有制藥化學(xué)家已知的藥典中找到：remington’spharmaceuticalsciences(第15版,mackpublishingcompany,easton,pa(1975))，特別是其中blaug,seymour的第87章。這些制劑包括例如粉劑、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、蠟、油、脂質(zhì)、含有脂質(zhì)(陽離子或陰離子)的囊泡(諸如lipofectin?)、dna綴合物、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳劑、聚乙二醇乳劑(各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠和含有聚乙二醇的半固體混合物。任何前述混合物可適合于本公開的治療和療法，條件是制劑中的活性成分未被制劑失活，且制劑與施用途徑是生理學(xué)上相容和耐受的。對于與制藥化學(xué)家眾所周知的制劑、賦形劑和載體相關(guān)的其他信息，還參見baldrickp.“pharmaceuticalexcipientdevelopment:theneedforpreclinicalguidance.”regul.toxicolpharmacol.32(2):210-8(2000)；wangw.“l(fā)yophilizationanddevelopmentofsolidproteinpharmaceuticals.”int.j.pharm.203(1-2):1-60(2000)；charmanwn“l(fā)ipids,lipophilicdrugs,andoraldrugdelivery-someemergingconcepts.”jpharmsci.89(8):967-78(2000)；powell等人“compendiumofexcipientsforparenteralformulations”pdajpharmscitechnol.52:238-311(1998)和其中的引文。在一些實施方案中，抗cd3ε抗體、綴合的抗cd3ε抗體、可活化抗體、綴合的可活化抗體、多特異性抗體、多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體組合物(本文中統(tǒng)稱為治療劑)與一種或多種額外的試劑或額外的試劑的組合結(jié)合施用。合適的額外的試劑包括用于預(yù)期應(yīng)用的當前的藥物和/或手術(shù)療法。例如，所述治療劑可與額外的化學(xué)治療劑或抗腫瘤劑結(jié)合使用。例如，所述治療劑和額外的試劑配制成單一治療組合物，所述治療劑和額外的試劑同時施用。在一些實施方案中，所述治療劑和額外的試劑彼此分開，例如，各自配制成單獨的治療組合物，且所述治療劑和額外的試劑同時施用，或所述治療劑和額外的試劑在治療方案期間在不同的時間施用。例如，所述治療劑在施用額外的試劑之前施用，所述治療劑在施用額外的試劑之后施用，或所述治療劑和額外的試劑以交替的方式施用。如本文所述，所述治療劑和額外的試劑以單劑量或多個劑量施用。在一些實施方案中，額外的試劑與治療劑偶聯(lián)或以其他方式連接。合適的額外的試劑根據(jù)預(yù)期應(yīng)用的目的(即，殺死、防止細胞增殖、激素療法或基因療法)進行選擇。此類試劑可包括但不限于例如，藥劑、毒素、毒素的片段、烷化劑、酶、抗生素、抗代謝物、抗增殖劑、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、dna、rna、sirna、寡核苷酸、反義rna、適體、診斷劑、不透射線染料、放射性同位素、發(fā)熒光化合物、磁性標記、納米粒、標記化合物、凝集素、改變細胞膜通透性的化合物、光化學(xué)化合物、小分子、脂質(zhì)體、膠束、基因療法載體、病毒載體等。最后，可使用試劑的組合或不同類別的試劑的組合。本公開的抗cd3ε抗體、綴合的抗cd3ε抗體、可活化抗體、綴合的可活化抗體、多特異性抗體、多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體組合物(在本文中也稱為“治療劑”或“活性化合物”)和其衍生物、片段、類似物和同源物，可并入適合于給藥的藥物組合物中。制備此類組合物中涉及的原理和考量以及組分選擇的指導(dǎo)提供于例如remington’spharmaceuticalsciences：thescienceandpracticeofpharmacy第19版(alfonsor.gennaro,等人編輯)mackpub.co.,easton,pa.:1995；drugabsorptionenhancement:concepts,possibilities,limitations,andtrends,harwoodacademicpublishers,langhorne,pa.,1994；和peptideandproteindrugdelivery(advancesinparenteralsciences,vol.4),1991,m.dekker,newyork。此類組合物通常包含抗cd3ε抗體、綴合的抗cd3ε抗體、可活化抗體、綴合的可活化抗體、多特異性抗體、多特異性可活化抗體和/或綴合的多特異性可活化抗體組合物和藥學(xué)上可接受的載體。在抗體、可活化抗體、多特異性抗體和/或多特異性可活化抗體包括ab結(jié)構(gòu)域的片段時，可使用特異性結(jié)合靶標蛋白的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的ab的最小片段。例如，根據(jù)抗體的可變區(qū)序列，可設(shè)計保留ab結(jié)合靶標蛋白序列的能力的肽分子。此類肽可經(jīng)化學(xué)合成和/或通過重組dna技術(shù)產(chǎn)生。(參見例如，marasco等人,proc.natl.acad.sci.usa,90:7889-7893(1993))。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”意圖包括與藥物施用相容的任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣料、抗細菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。合適的載體描述于最新版的remington’spharmaceuticalsciences，其為本領(lǐng)域的標準參考科教書，其通過引用并入本文。此類載體或稀釋劑的合適的實例包括但不限于水、鹽水、林格溶液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。也可使用脂質(zhì)體和非水媒介物諸如固定油。用于藥物活性物質(zhì)的此類介質(zhì)和試劑的使用是本領(lǐng)域眾所周知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容，考慮其在組合物中的使用。用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。這通過無菌濾膜過濾容易實現(xiàn)。本公開的藥物組合物經(jīng)配制以與其預(yù)期施用途徑相容。施用途徑的實例包括胃腸外，例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、經(jīng)口(例如吸入)、經(jīng)皮(即局部)、經(jīng)粘膜和直腸施用。用于胃腸外、皮內(nèi)或皮下施用的溶液或混懸液可包括以下組分：無菌稀釋劑諸如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑、抗細菌劑諸如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑諸如乙二胺四乙酸(edta)；緩沖劑諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，和用于調(diào)節(jié)張力的試劑諸如氯化鈉或葡萄糖?？捎盟峄驂A諸如鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph?？蓪⑽改c外制劑包封在用玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。適合于可注射使用的藥物組合物包括無菌水性溶液(在水溶性的情況下)或分散體和用于臨時制備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉劑。對于靜脈內(nèi)施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、cremophoreltm(basf,parsippany,n.j.)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。在所有情況下，組合物都必須是無菌的，且應(yīng)該是流動的至存在容易可注射性的程度。在制備和儲存的條件下其必須是穩(wěn)定的，且必須針對微生物諸如細菌和真菌的污染作用而防腐。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)和其合適的混合物?？杀３趾线m的流動性，例如通過使用包衣料諸如卵磷脂，在分散體的情況下通過保持所需的粒度和通過使用表面活性劑。預(yù)防微生物作用可通過各種抗細菌和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等實現(xiàn)。在許多情況下，合適的是在組合物中包括等滲劑例如糖、多元醇諸如甘露醇、山梨醇、氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可通過在組合物中包括延長吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠產(chǎn)生。無菌可注射溶液可通過將所需量的活性化合物并入含有上文列舉的成分之一或成分的組合(根據(jù)需要)的合適的溶劑中，隨后無菌過濾而制備。通常，分散體通過將活性化合物并入含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自上文列舉的那些的所需的其他成分的無菌媒介物制備。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉劑的情況下，制備方法為真空干燥和冷凍干燥，其自它們之前的無菌過濾溶液產(chǎn)生活性成分加任何其他所需成分的粉末?？诜M合物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。它們可包封在明膠膠囊中或壓制成片劑。為了口服治療施用的目的，活性化合物可摻有賦形劑和以片劑、錠劑或膠囊劑的形式使用。口服組合物還可使用液體載體制備，用作漱口劑，其中液體載體中的化合物經(jīng)口施用，并漱口和吐出或咽下。可包括藥學(xué)上相容的粘合劑和/或輔助材料作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等可含有任何以下成分或具有類似性質(zhì)的化合物：粘合劑諸如微晶纖維素、西黃蓍膠或明膠；賦形劑諸如淀粉或乳糖；崩解劑諸如藻酸、primogel或玉米淀粉；潤滑劑諸如硬脂酸鎂或sterotes；助流劑諸如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑諸如蔗糖或糖精；或矯味劑諸如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)料。對于通過吸入施用，化合物以氣溶膠噴霧劑的形式從含有合適的拋射劑例如氣體諸如二氧化碳的加壓容器或分配器，或噴霧器遞送。全身性施用還可通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方式進行。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，適合于待滲透屏障的滲透劑用于制劑中。此類滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的，和對于經(jīng)粘膜施用，包括例如去污劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。經(jīng)粘膜施用可通過使用經(jīng)鼻噴霧劑或栓劑實現(xiàn)。對于經(jīng)皮施用，將活性化合物配制成本領(lǐng)域通常已知的軟膏劑、油膏劑、凝膠劑或霜劑。化合物還可以用于直腸遞送的栓劑(例如，用常規(guī)栓劑基料諸如可可脂和其他甘油酯)或滯留灌腸劑的形式制備。在一個實施方案中，活性化合物用將保護化合物免于快速從身體清除的載體制備，諸如持續(xù)/控制釋放制劑，包括植入體和微囊遞送系統(tǒng)。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制備此類制劑的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。例如，活性成分可被包封在微囊中，所述微囊在膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米粒和納米囊)或大乳劑中例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合(例如分別為羥甲基纖維素或明膠-微囊和聚-(異丁烯酸甲酯)微囊)制備?？芍苽涑掷m(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適的實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質(zhì)，所述基質(zhì)呈成型物的形式，例如，膜或微囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-異丁烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利號3,773,919)、l-谷氨酸和γ乙基-l-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羥乙酸共聚物諸如luprondepottm(由乳酸-羥乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的可注射微球)和聚-d-(-)-3-羥基丁酸。盡管聚合物諸如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羥乙酸能夠釋放分子超過100天，但某些水凝膠釋放蛋白較短的時間。所述材料還可市售獲得自alzacorporation和novapharmaceuticals,inc。脂質(zhì)體混懸液(包括具有針對病毒抗原的單克隆抗體的靶向感染細胞的脂質(zhì)體)也可用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如如美國專利號4,522,811中所述。為了易于施用和劑量均勻，特別有利的是以劑量單位形式配制口服或胃腸外組合物。如本文所用的劑量單位形式是指作為單元劑量適合于待治療的主體的物理離散單位；各單位含有經(jīng)計算以產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性化合物以及所需藥用載體。本公開的劑量單位形式的規(guī)格由活性化合物的獨特性質(zhì)和待實現(xiàn)的特定治療效果以及配制此活性化合物用于治療個體的本領(lǐng)域固有的限制來支配，并直接依賴于它們。所述藥物組合物以及用于施用的說明書可包括在容器、包或分配器中。所述制劑還可含有所治療的特定適應(yīng)癥所必需的超過一種活性化合物，例如具有補充活性的那些，它們不會不利地彼此影響。在一些實施方案中或另外，組合物可包含提高其功能的試劑，諸如例如細胞毒性劑、細胞因子、化學(xué)治療劑或生長抑制劑。此類分子以對預(yù)期目的有效的量合適地組合存在。在一個實施方案中，活性化合物以組合療法施用，即，與其他試劑(例如，治療劑)組合，所述試劑可用于治療病理性病況或病癥，諸如自身免疫性病癥和炎性疾病。在該背景下，術(shù)語“組合”意指基本上同期(同時或依次)施用試劑。如果依次施用，在開始施用第二化合物時，兩種化合物的第一種仍可在治療部位處以有效濃度可檢測到。例如，組合療法可包括本公開的一種或多種抗體，其與一種或多種額外的治療劑共配制和/或與一種或多種額外的治療劑共同施用，所述額外的治療劑例如一種或多種細胞因子和生長因子抑制劑、免疫抑制劑、抗炎劑、代謝抑制劑、酶抑制劑和/或細胞毒性或細胞生長抑制劑，如下文更詳細所述。此外，本文所述的一種或多種抗體可與兩種或更多種本文所述的治療劑組合使用。此類組合療法可有利地使用較低劑量的所施用的治療劑，從而避免與各種單一療法相關(guān)的可能的毒性或并發(fā)癥。在其他實施方案中，本公開的一種或多種抗體可與一種或多種抗炎藥、免疫抑制劑或代謝或酶抑制劑共配制和/或與一種或多種抗炎藥、免疫抑制劑或代謝或酶抑制劑共同施用。可與本文所述的抗體組合使用的藥物或抑制劑的非限制性實例包括但不限于以下的一種或多種：非甾類抗炎藥(nsaid)，例如，布洛芬、替尼達普、萘普生、美洛昔康、吡羅昔康、雙氯芬酸和吲哚美辛；柳氮磺吡啶；皮質(zhì)類固醇諸如潑尼松龍；細胞因子抑制性抗炎藥(csaid)；核苷酸生物合成的抑制劑，例如，嘌呤生物合成的抑制劑、葉酸拮抗劑(例如，甲氨喋呤(n-[4-[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲?；鵠-l-谷氨酸)；和嘧啶生物合成的抑制劑，例如，二氫乳清酸脫氫酶(dhodh)抑制劑。與本公開的抗體組合使用的合適的治療劑包括nsaid、csaid、(dhodh)抑制劑(例如，來氟米特)和葉酸拮抗劑(例如，甲氨喋呤)。額外的抑制劑的實例包括以下的一種或多種：皮質(zhì)類固醇(口服、吸入和局部注射)；免疫抑制劑，例如，環(huán)孢霉素、他克莫司(fk-506)；和mtor抑制劑，例如，西羅莫司(雷帕霉素-rapamunetm或雷帕霉素衍生物，例如，可溶性雷帕霉素衍生物(例如，酯雷帕霉素衍生物，例如，cci-779)；干擾通過促炎細胞因子諸如tnfα或il-1的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑(例如irak、nik、ikk、p38或map激酶抑制劑)；cox2抑制劑，例如，塞來考昔、羅非考昔和其變體；磷酸二酯酶抑制劑，例如，r973401(磷酸二酯酶iv型抑制劑)；磷脂酶抑制劑，例如，細胞溶質(zhì)磷脂酶2(cpla2)的抑制劑(例如，三氟甲基酮類似物)；血管內(nèi)皮細胞生長因子或生長因子受體的抑制劑，例如，vegf抑制劑和/或vegf-r抑制劑；和血管發(fā)生的抑制劑。與本公開的抗體組合使用的合適的治療劑是免疫抑制劑，例如，環(huán)孢霉素、他克莫司(fk-506)；mtor抑制劑，例如，西羅莫司(雷帕霉素)或雷帕霉素衍生物，例如，可溶性雷帕霉素衍生物(例如，酯雷帕霉素衍生物，例如，cci-779)；cox2抑制劑，例如，塞來考昔和其變體；和磷脂酶抑制劑，例如，細胞溶質(zhì)磷脂酶2(cpla2)的抑制劑，例如，三氟甲基酮類似物?？膳c本公開的抗體組合的治療劑的額外的實例包括以下的一種或多種：6-巰基嘌呤(6-mp)；硫唑嘌呤柳氮磺吡啶；美沙拉秦；奧沙拉秦；氯喹/羥氯喹(plaquenil?)；青霉胺；aurothiornalate(肌內(nèi)和口服)；硫唑嘌呤；秋水仙堿；β-2腎上腺素受體激動劑(沙丁胺醇、特布他林、沙美特羅)；黃嘌呤(茶堿、氨茶堿)；色甘酸酯；奈多羅米；酮替芬；異丙托銨和氧托品(oxitropium)；麥考酚酸莫酯；腺苷激動劑；抗凝血劑；補體抑制劑；和腎上腺素能劑。本文引用的所有出版物和專利文件通過引用并入本文，如同各個此類出版物或文件具體且單獨地指出通過引用并入本文一樣。出版物和專利文件的引用不意欲承認任何是相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，也不構(gòu)成關(guān)于出版物和專利文件的內(nèi)容或日期的任何承認。本發(fā)明現(xiàn)在已通過書面描述的方式進行了描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，本發(fā)明可以各種實施方案實施，和前述描述和下文的實施例為說明的目的，并不限制所附的權(quán)利要求。實施例實施例1.可活化抗cd3ε抗體掩蔽部分本實施例描述了鑒定掩蔽部分(mm)以減少可活化抗cd3ε抗體與其靶標的結(jié)合。macs1和macs2選擇使用與2005年5月26日公開的pct國際公開號wo2005/047461和2009年1月29日公開的wo2009/014726中描述的細菌展示技術(shù)相似的方法，使用抗cd3ε抗體sp34(本文中也稱為sp34抗體)篩選具有6x1010個成員的插入大腸桿菌中的環(huán)形排列的外膜蛋白ompx中的肽文庫。選擇涉及兩輪磁性活化的細胞分離(macs)，隨后是兩種不同的基于熒光活化的細胞分選(facs)的選擇策略。圖1顯示在選擇過程期間的macs和facs群體的通用命名方案：磁性活化的細胞分離(macs)用“m”表示，且熒光活化的細胞分選(facs)選擇用“f”表示?？s寫的順序指示選擇/分選的順序，且數(shù)字指示該群體已經(jīng)經(jīng)歷的那種類型的選擇/分選的輪數(shù)。例如，m2f3群體已經(jīng)歷2輪macs選擇，隨后為3輪facs選擇。經(jīng)歷選擇以得到給定群體的起始群體被假定為命名中最右側(cè)分選指示符的n-1。例如，被分選以產(chǎn)生m2f3群體的群體被假定為m2f2群體。使用蛋白-gdynabeads(invitrogen目錄號:10003d)和濃度為100nm的sp34抗體(可得自bdbiosciences目錄號556610)進行初始macs(m1)。對于m1，篩選6x1011個細胞用于結(jié)合，且收集6.6x107個細胞。以與第一輪類似且具有以下差異的方式進行第二輪macs分選(m2)。將sp34抗體添加至50nm的終濃度，且篩選總共4.5x1011個細胞用于結(jié)合，且收集3.1x105個細胞。facs選擇選擇#1對于所有facs選擇，將50μl誘導(dǎo)的培養(yǎng)物離心下來(以3000xg離心5分鐘)，并用指定濃度的抗體標記。對于m2，將macs2facs1(m2f1)和macs2facs2(m2f2)選擇細胞用500μlpbs,0.5%bsa中的1nmsp34-dylight-488(thermoscientificcat#:53025)標記，并且通過熒光活化的細胞分選(facs)使用facsariai儀器(bdbiosciences)分選最好0.5％的陽性細胞。對于m2分選，分選3x106個細胞，且收集5000個細胞。對于后續(xù)分選，分選至少1x106個細胞。macs2facs3(m2f3)群體如本文所述分選，但添加100nm未標記的同種型對照抗體(bdbiosciences目錄號：556657)。facs選擇的最終macs2facs4(m2f4)輪如前所述分選，但使用用抗小鼠igg-488次級1:100(jacksonimmunoresearch目錄號:315-486-045)標記的未標記的sp34抗體標記，導(dǎo)致macs2facs5(m2f5)群體。通過表明在100nm可溶性人cd3ε蛋白(sinobiologics目錄號：10977-h08h)存在的情況下抑制1nmsp34-dylight-488結(jié)合，驗證了最終的m2f5群體特異性結(jié)合sp34。選擇100個單獨的克隆用于序列分析，且91個給出可解釋的數(shù)據(jù)。結(jié)果概述于表7中。對于所有facs選擇，將50μl誘導(dǎo)的培養(yǎng)物離心下來(以3000xg離心5分鐘)，并用指定濃度的抗體標記。m2、m2f1和m2f2分選，細胞如本文所述用500μlpbs,0.5%bsa,100nm未標記的同種型對照抗體中的10nmsp34-dylight-488標記，且分別分選最好的10％、38％和60％的結(jié)合劑。在每種情況下，分選約3x106個細胞。選擇20個單獨的克隆用于序列分析，且19個給出可解釋的數(shù)據(jù)。結(jié)果概述于表8中。關(guān)于細胞肽表征選擇8個肽(5個來自選擇#1m2f5且3個來自選擇#2m2f2群體)用于在細胞上進一步表征。將單個克隆如本文所述在100nm未標記的同種型對照抗體存在的情況下用100、10、1和0.1nmsp34-dylight-488標記。將每個克隆分別用ypet-mona標記以定量肽的細胞表面表達水平，允許計算表達歸一化的結(jié)合。并且假設(shè)：。為了驗證結(jié)合肽抑制sp34與人cd3ε的相互作用的能力，將每個克隆在100nm人cd3ε存在的情況下用1nmsp34-dylight-488標記。結(jié)果概述于表9中。所有評估的肽特異性結(jié)合sp34-dylight-488，并且被抑制免于被過量游離人cd3ε結(jié)合。實施例2.可活化抗cd3ε抗體本實施例描述了本公開的可活化抗cd3ε抗體的產(chǎn)生。使用標準分子生物學(xué)技術(shù)組裝sp34scfv(lvhv)-fc融合構(gòu)建體的表達載體。簡言之，用引物cx2005和cx2008使用合成的sp34scfv(lvhv)序列作為模板，擴增編碼sp34scfv(lvhv)區(qū)域的dna片段。使用引物cx2007和cx2006從pfil-chig-hg1載體(invitrogen)擴增編碼fc結(jié)構(gòu)域的dna。將重疊片段組合并用引物cx2005和cx2006擴增，隨后使用ecori和noti限制性位點克隆至pophyg表達載體(修飾的pcdna3.1表達載體(invitrogen))中，以形成抗體sp34scfv(lvhv)-fc。以類似且具有以下差異的方式產(chǎn)生編碼抗體sp34scfv(hvlv)-fc的dna片段。使用引物cx2001和cx200,4擴增編碼psp34scfv(hvlv)的dna片段，且使用引物cx2002和cx2003擴增編碼fc結(jié)構(gòu)域的dna。將重疊片段組合并使用引物cx2001和c2002擴增。所有引物序列顯示于表10中。發(fā)現(xiàn)抗體sp34scfv(lvhv)-fc和sp34scfv(hvlv)-fc結(jié)合jurkatt細胞的親和力類似于sp34igg結(jié)合jurkatt細胞的能力。圖4a-4c描述了scfv(lvhv)-fc和scfv(hvlv)-fc抗體以及本公開的可活化抗體。還測試抗體sp34scfv(lvhv)-fc和sp34scfv(hvlv)-fc結(jié)合食蟹猴(本文中也稱為cyno)cd3ε的能力。為了確定抗體sp34scfv(lvhv)-fc和sp34scfv(hvlv)-fc是否可以結(jié)合食蟹猴cd3ε，進行基于elisa的結(jié)合測定。在4℃下以0.1μg/ml的濃度將在c末端具有多組氨酸親和標簽的重組食蟹猴(macacafascicularis)cd3ε在50μlpbs(pbs,gibcolifetechnologies,目錄號20012-043)中過夜包被至96孔、平底板(maxisorbnunc,thermoscientific,目錄號12-565-226)。將板用250μl/孔pbs-t(0.05％的吐溫20)洗滌3次，用200μlpbs-t2％bsa(bsa級分v，fisherscientific，產(chǎn)品bp1600-1)在環(huán)境溫度下封閉1小時并用250μl/孔pbs-t洗滌3次。使用50μl/孔，將稀釋至pbs-t2%bsa中的37nm至0.017nm的濃度范圍在環(huán)境溫度下將任一抗體sp34scfv(lvhv)-fc或sp34scfv(hvlv)-fc(純化至>95％單體)孵育1小時。將板用250μl/孔pbs-t洗滌三次，與1/5000稀釋至pbs-t2%bsa(過氧化物酶affinipure小鼠抗人igg,fcγ片段特異性,jacksonimmunoresearch,catalog209-035-098)中的二級抗人fc-hrp在環(huán)境溫度下孵育30分鐘，并用250μl/孔pbs-t洗滌3次。將hrp底物(tmb-elisa，thermoscientific，產(chǎn)品34029)以50μl/孔添加至板2分鐘，然后用50μl/孔1mhcl猝滅，然后在tecaninfinite200pro上讀取450nm處的吸光度，并用prism6(graphpad)通過將數(shù)據(jù)擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來分析。在分開的cynocd3ε包被的elisa板上，以相同的方式并使用二級抗小鼠igg-hrp綴合物(jacksonimmunoresearch，目錄號715-035-150)包被并分析sp34小鼠抗體(sp34-2，bdbiosciences，目錄號551916)。圖2a和2b表明scfv抗體sp34scfv(lvhv)-fc和sp34scfv(hvlv)-fc以及抗體sp34-2在0.1-0.3nm的ec50的類似范圍內(nèi)結(jié)合獼猴cd3εhis。編碼可活化抗體sp34scfv(lvhv)-fc的載體如下構(gòu)建。使用重疊正向引物cx2013和cx2014和反向引物cx2014來使用sp34scfv(lvhv)-fc構(gòu)建體作為模板來擴增可活化scfv抗體。然后使用ecor1和bstxi限制性位點將dna片段克隆至sp34scfv(lvhv)-fc載體中。使用sp34scfv(lvhv)-fc融合載體作為模板，使用肽15003、15263、15860、15864和15865分別的正向引物cx2041-cx2045和反向引物cx2002添加掩蔽肽序列，隨后使用sfii和noti限制性位點來克隆以產(chǎn)生編碼可活化抗cd3ε抗體的核酸分子。sp34lv核苷酸序列氨基酸序列sp34hv核苷酸序列氨基酸序列sp34scfv(lvhv)核苷酸序列氨基酸序列抗體sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列氨基酸序列15003-1204-sp34scfv(lvhv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的抗體15003-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:547)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的抗體15003-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:548)]可活化抗體15003-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15003-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:549)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:407)][無間隔區(qū)的可活化抗體15003-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:550)]15263-1204-sp34scfv(lvhv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15263-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:551)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15263-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:552)]可活化抗體15263-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15263-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:553)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15263-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:554)]]15860-1204-sp34scfv(lvhv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15860-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:555)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15263-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:556)]可活化抗體15860-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15860-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:557)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15860-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:558)]15864-1204-sp34scfv(lvhv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15864-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:559)]氨基酸[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15864-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:560)]可活化抗體15864-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15864-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:561)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15864-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:562)]15865-1204-sp34scfv(lvhv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15865-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:563)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15865-1204-sp34scfv(lvhv)(seqidno:564)]可活化抗體15865-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15865-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:565)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15865-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體(seqidno:566)]sp34scfv(hvlv)核苷酸序列氨基酸序列抗體sp34scfv(hvlv)-fc融合體核苷酸序列氨基酸序列15003-1204-sp34scfv(hvlv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15003-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:567)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15003-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:568)]可活化抗體15003-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15003-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:569)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15003-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:570)]15263-1204-sp34scfv(hvlv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15263-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:571)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15263-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:572)]可活化抗體15263-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15263-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:573)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15263-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:574)]15860-1204-sp34scfv(hvlv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15860-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:575)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15860-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:576)]可活化抗體15860-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15860-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:577)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15860-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:578)]15864-1204-sp34scfv(hvlv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15864-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:579)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15864-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:580)]可活化抗體15864-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15864-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:581)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15864-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:582)]15865-1204-sp34scfv(hvlv)核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的15865-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:583)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的15865-1204-sp34scfv(hvlv)(seqidno:584)]可活化抗體15865-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的可活化抗體15865-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:585)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的可活化抗體15865-1204-sp34scfv(hvlv)-fc融合體(seqidno:586)]實施例3.可活化抗cd3ε抗體的體外表征本實施例描述了本公開的掩蔽部分降低包含此掩蔽部分的本公開的可活化抗cd3ε抗體結(jié)合cd3ε的能力的能力。為了確定先前實施例中描述的掩蔽肽是否可以抑制sp34scfv-fc背景下的結(jié)合，進行基于流式細胞術(shù)的結(jié)合測定。根據(jù)atcc指南將jurkatt細胞(克隆e6-1，atcc，tib-152)在rpmi-1640+glutamax(lifetechnologies，目錄號72400-120)、10%熱滅活的胎牛血清(hi-fbs,lifetechnologies，目錄號10438-026)、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(lifetechnologies，目錄號15140-122)中培養(yǎng)。通過離心(200xg，4℃，5分鐘)收獲細胞，并重懸浮于補充有2%hi-fbs的pbs(facs緩沖液)中。將約180,000個jurkats/孔轉(zhuǎn)移至96孔u底板，收獲，并重懸浮于50μl一抗中?？苫罨贵w的起始濃度為1μm，隨后3倍連續(xù)稀釋，總共12個濃度。測試以下可活化抗體；15003-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體；15860-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體；15864-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體；和15865-1204-sp34scfv(lvhv)-fc融合體；如同抗體sp34scfv(lvhv)-fc。將細胞在4℃下振蕩孵育約1小時，收獲，并用3x200μlfacs緩沖液洗滌。將jurkats重懸浮于50μlalexafluor488綴合的抗人iggfc(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品109-546-098)中，并在4℃下振蕩孵育約30分鐘。收集細胞，用3x200μlfacs緩沖液洗滌，并重懸浮于最終體積為120μl的facs緩沖液中。在bdaccuric6(bdbiosciences)上收集樣品，并使用flowjov10(treestar)計算活細胞的中值熒光強度(mfi)。在graphpadprism6中通過將數(shù)據(jù)曲線擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來計算ec50值。圖3a-3d表明，將掩蔽肽并入sp34scfv-fc背景下以產(chǎn)生可活化抗體，將cd3ε結(jié)合的ec50值從單位數(shù)nm改變至三位數(shù)nm。實施例4.雙特異性可活化抗體本實施例描述了本公開的雙特異性可活化抗體的產(chǎn)生、表達和表征。載體構(gòu)建：使用標準分子生物學(xué)技術(shù)將重鏈和輕鏈分別克隆至哺乳動物表達載體中。簡言之，用結(jié)合末端的引物擴增編碼目標區(qū)域的dna片段。組合重疊片段并根據(jù)需要用側(cè)接引物擴增以構(gòu)建完整的所需區(qū)域。隨后使用市售的同源重組試劑盒(mclabs,southsanfrancisco,ca)將dna片段克隆至表達載體中。內(nèi)部哺乳動物表達載體是來自invitrogen的cdna3.1(+)的修飾版本，其具有g(shù)418或潮霉素的選擇標記。使用quikchange試劑盒(agilent,santaclara,ca)引入突變。使用標準轉(zhuǎn)染試劑盒(lifetechnologies,grandisland,ny)在哺乳動物細胞中表達雙特異性抗體和雙特異性可活化抗體。簡言之，使用基于脂質(zhì)的系統(tǒng)，遵循制造商推薦的方案用核酸轉(zhuǎn)染293細胞。使用蛋白a珠粒(ge,piscataway,nj)從無細胞上清液純化雙特異性可活化抗體和雙特異性抗體，并使用標準緩沖液交換柱(millipore,temecula,ca)濃縮。下表11描述了本公開的各種雙特異性抗體和雙特異性可活化抗體的重鏈和輕鏈。表12a提供了用于每種構(gòu)建體的引物，而表12b提供了所用引物的序列。雙特異性抗體和雙特異性可活化抗體的序列如下所示。在一些實施方案中，可活化抗體還包括間隔區(qū)序列。在一些實施方案中，間隔區(qū)直接連接至可活化抗體的mm。在一些實施方案中，間隔區(qū)以間隔區(qū)-mm-cm-ab的n-末端至c-末端的結(jié)構(gòu)排列直接連接至可活化抗體的mm。在一些實施方案中，直接連接至可活化抗體的mm的n-末端的間隔區(qū)選自qgqsgqg(seqidno:407)、qgqsgq(seqidno:87)、qgqsg(seqidno:408)、qgqs(seqidno:409)、qgq(seqidno:410)、qg(seqidno:411)和q.在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgqg(seqidno:412)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgqg(seqidno:407)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsgq(seqidno:87)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqsg(seqidno:408)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgqs(seqidno:409)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qgq(seqidno:410)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸序列qg(seqidno:411)。在一些實施方案中，間隔區(qū)至少包括氨基酸殘基q。盡管以下所示的一些序列包括seqidno:362的間隔區(qū)序列，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解本公開的多特異性可活化抗體可以包括任何合適的間隔區(qū)序列，諸如例如，選自qgqsgqg(seqidno:407)、qgqsgq(seqidno:87)、qgqsg(seqidno:408)、qgqs(seqidno:409)、qgq(seqidno:410)、qg(seqidno:411)和q的間隔區(qū)序列。ci005:c225v5n297q-cd3-h-n核苷酸序列氨基酸序列opp007:lcc225il2ss核苷酸序列氨基酸序列ci007:3954-1204-c225v5n297q-cd3-h-nplw019:hcc225v5n297q-cd3hvlv-h-n核苷酸序列氨基酸序列opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci009:c225v5n297q-15865-cd3lvhv-h-nplw023:c225v5n297q-15865-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw023(seqidno:511)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw023(seqidno:512)]opp007:lcc225il2ss核苷酸序列氨基酸序列ci010:3954-1204-c225v5n297q-15003-cd3lvhv-h-nplw022:c225v5n297q-15865-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw022(seqidno:895)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw022(seqidno:510)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci011:3954-1204-c225v5n297q-15865-cd3lvhv-h-nplw023:hcc225v5n297q-15865-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw023(seqidno:511)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw023(seqidno:512)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci012:c225v5n297qplw006:c225v5n297q核苷酸序列氨基酸序列opp021:lcc225核苷酸序列氨基酸序列ci015:c225v5n297q-cd3lvhv-h-nplw057:hcc225v5n297q-cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列opp021:lcc225核苷酸序列氨基酸序列ci016:3954-1204-c225v5n297q-cd3lvhv-h-nplw057:hcc225v5n297q-cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci025:il6rn297qplw078:hcil6rn297q核苷酸序列氨基酸序列plw077:lcil6r核苷酸序列氨基酸序列ci026:il6rn297q-cd3lvhv-h-nplw083:hcil6rn297q-cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列plw077:lcil6r核苷酸序列氨基酸序列ci027:il6rn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-nplw085:hcil6rn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:513)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:514)]plw077:lcil6r核苷酸序列氨基酸序列ci029:4792-1204-il6rn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-nplw085:hcil6rn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:513)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:514)]plw080:lcil6r47921204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:515)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:516)]ci036:4792-1204-il6rn297q-cd3lvhv-h-nplw083:hcav1n297q-cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列plw080:lcil6r47921204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:515)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:516)]ci039:3954-2001-c225v5n297q-15865-2001-cd3lvhv-h-nplw101:hcc225v5n297q-15865-2001-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw101(seqidno:517)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw101(seqidno:518)]lcc225-3954-2001核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的3954-2001-c225v5(seqidno:519)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:520)]ci040:3954-2001-c225v5n297q-cd3lvhv-h-nplw057:hcc225v5n297q-cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列l(wèi)cc225-3954-2001核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的3954-2001-c225v5(seqidno:519)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:520)]ci021:c225v5n297q-15003-cd3hvlv-h-nplw047:hcc225v5n297q-15003-cd3hvlv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw047(seqidno:522)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw047(seqidno:524)]opp021:lcc225核苷酸序列氨基酸序列ci022:c225v5n297q-15865-cd3hvlv-h-nplw048:hcc225v5n297q-15865-cd3hvlv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw048(seqidno:525)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw048(seqidno:526)]opp021:lcc225核苷酸序列氨基酸序列ci023:3954-1204-c225v5n297q-15003-cd3hvlv-h-nplw047:hcc225v5n297q-15003-cd3hvlv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw047(seqidno:522)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw047(seqidno:524)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci024:3954-1204-c225v5n297q-15865-cd3hvlv-h-nplw048:hcc225v5n297q-15865-cd3hvlv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw048(seqidno:525)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw048(seqidno:526)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci028:il6r4792nsubn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-nplw085:hcil6rn297q-15865_1204-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:513)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw085(seqidno:514)]plw079:lcil6r4792nsub核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw079(seqidno:527)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw079(seqidno:528)]ci030:il6rn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-nplw087:hcil6rn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:529)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:530)]plw077:lcil6r核苷酸序列氨基酸序列ci031:il6r4792nsubn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-nplw087:hcil6rn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:529)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:530)]plw079:lcil6r4792nsub核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw079(seqidno:527)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw079(seqidno:528)]ci032:4792-1204-il6rn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-nplw087:hcil6rn297q-15865_nsub-cd3lvhv-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:529)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:530)]plw080:lcil6r47921204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:515)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw080(seqidno:516)]ci048:活化的ci011hcc225v5n297q-*cd3lvhv-h-n核苷酸序列氨基酸序列活化的輕鏈核苷酸序列氨基酸序列ci052:c225v5n297q-mcd3-h-nplw100:hcc225v5n297q-mcd3-h-n核苷酸序列氨基酸序列opp021:lcc225核苷酸序列氨基酸序列ci053:3954-1204-c225v5n297q-mc01-2001-mcd3-h-nplw117:hcc225v5n297q-mc01-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw117(seqidno:531)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw117(seqidno:532)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci054:3954-1204-c225v5n297q-mc02-2001-mcd3-h-nplw118:hcc225v5n297q-mc02-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:521)][無間隔區(qū)的plw118(seqidno:533)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:407)][無間隔區(qū)的plw118(seqidno:534)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci055:3954-1204-c225v5n297q-mc03-2001-mcd3-h-nplw119:hcc225v5n297q-mc03-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw119(seqidno:535)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw119(seqidno:536)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci056:3954-1204-c225v5n297q-mc04-2001-mcd3-h-nplw120:hcc225v5n297q-mc04-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw120(seqidno:537)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw120(seqidno:538)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci049:3954-1204-c225v5n297q-mc05-2001-mcd3-h-nplw121:hcc225v5n297q-mc05-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw121(seqidno:539)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw121(seqidno:540)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci050:3954-1204-c225v5n297q-mc06-2001-mcd3-h-nplw122:hcc225v5n297q-mc06-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw122(seqidno:541)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw122(seqidno:542)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci051:3954-1204-c225v5n297q-mc07-2001-mcd3-h-nplw123:hcc225v5n297q-mc07-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:521)][無間隔區(qū)的plw123(seqidno:543)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:407)][無間隔區(qū)的plw123(seqidno:544)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci057:3954-1204-c225v5n297q-mc08-2001-mcd3-h-nplw124:hcc225v5n297q-mc08-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw124(seqidno:545)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw124(seqidno:546)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci058:3954-1204-c225v5n297q-mc09-2001-mcd3-h-nplw125:hcc225v5n297q-mc09-2001-mcd3-h-n核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的plw125(seqidno:475)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的plw087(seqidno:476)]opp022:lcc2253954-1204核苷酸序列[間隔區(qū)(seqidno:507)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:509)]氨基酸序列[間隔區(qū)(seqidno:87)][無間隔區(qū)的opp022(seqidno:508)]ci059:bite420bite420核苷酸序列氨基酸序列實施例5.sp34scfv-fc與cd3ε陽性jurkat細胞的結(jié)合為了確定sp34scfvfc融合體是否可以結(jié)合cd3ε陽性jurkatt細胞，進行基于流式細胞術(shù)的結(jié)合測定。根據(jù)atcc指南將jurkatt細胞(克隆e6-1，atcc，tib-152)在rpmi-1640+glutamax(lifetechnologies，目錄號72400-120)、10%熱滅活的胎牛血清(hi-fbs,lifetechnologies，目錄號10438-026)、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(lifetechnologies，目錄號15140-122)中培養(yǎng)。通過離心(200xg，4℃，5分鐘)收獲細胞，并重懸浮于補充有2%hi-fbs的pbs(facs緩沖液)中。將約250,000個jurkats/孔轉(zhuǎn)移至96孔u底板，收獲，并重懸浮于50μl一抗中。抗體的起始濃度為200nm，隨后5倍連續(xù)稀釋，總共8個濃度。測試以下化合物：sp34lvhvscfvfc、sp34hvlvscfvfc和sp34-2。將細胞在4℃下振蕩孵育約2小時，收獲，并用3x200μlfacs緩沖液洗滌。將用sp34scfv-fc融合體處理的jurkats重懸浮于50μlalexafluor488綴合的抗人iggfc(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品109-546-098)中。將用sp34-2和小鼠同種型處理的細胞重懸浮于50μlalexafluor647綴合的抗-小鼠igg(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品715-605-150)中。將jurkats在4℃下振蕩孵育約30分鐘，收獲，用3x200μlfacs緩沖液洗滌，并重懸浮于最終體積為120μl的facs緩沖液中。在bdaccuric6(bdbiosciences)上分析樣品，并使用flowjov10(treestar)計算活細胞的中值熒光強度(mfi)。在graphpadprism6中通過將數(shù)據(jù)曲線擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來計算ec50值。圖13a和13b表明sp34的所有形式以相似的ec50值結(jié)合cd3εjurkat細胞。實施例6.可活化抗cd3ε抗體與cd3εjurkat細胞的結(jié)合為了確定先前實施例中描述的掩蔽肽是否可以抑制sp34scfv-fc背景下的結(jié)合，進行基于流式細胞術(shù)的結(jié)合測定。如所述將jurkatt細胞培養(yǎng)并在facs緩沖液中處理。將約100,000個jurkats/孔轉(zhuǎn)移至96孔u底板，收獲，并重懸浮于50μl一抗中。滴定開始于1μm或333nm，隨后在facs緩沖液中進行3倍系列稀釋。測試以下抗體和可活化抗體：150031204sp34lvhvfc；158601204sp34lvhvfc；158651204sp34lvhv,sp34lvhv,150031204sp34hvlv；158601204sp34hvlvfc；158651204sp34hvlv,sp34hvlvfc和小鼠sp34。將細胞在4℃下振蕩孵育約1小時，收獲，并用3x200μlfacs緩沖液洗滌。將用sp34fc融合體處理的jurkats重懸浮于50μlalexafluor647綴合的抗人iggfc(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品109-606-008)中。將用小鼠sp34處理的細胞重懸浮于50μlalexafluor647綴合的抗-小鼠igg(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品715-605-150)中。將jurkats在4℃下振蕩孵育約30分鐘，收獲，用3x200μlfacs緩沖液洗滌，并重懸浮于最終體積為100μl的含有2.5μg/ml7-aad(bdbiosciences，目錄號559925)的facs緩沖液中。在macsquant?analyzer10(miltenyi)上收集樣品，并使用flowjov10(treestar)計算活細胞的中值熒光強度(mfi)。在graphpadprism6中通過將數(shù)據(jù)曲線擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來計算ec50值。圖14a和14b表明，掩蔽肽并入sp34scfv-fc背景下以產(chǎn)生可活化抗體將cd3ε結(jié)合的ec50值從單位數(shù)nm改變至三位數(shù)nm。實施例7.雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體與egfr+ht-29細胞和cd3ε+jurkat細胞的結(jié)合為了確定先前實施例中描述的cd3ε掩蔽肽是否可以抑制egfr掩蔽的多特異性、可活化抗體的背景下的結(jié)合，進行基于流式細胞術(shù)的結(jié)合測定。根據(jù)制造商指南將egfr+ht-29-luc2(caliper)在rpmi-1640+glutamax(lifetechnologies，目錄號72400-120)、10%熱滅活的胎牛血清(hi-fbs,lifetechnologies，目錄號10438-026)、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(lifetechnologies，目錄號15140-122)中培養(yǎng)。將細胞用細胞解離緩沖液(sigma，目錄號c5789)提升(lifted)，洗滌，并重懸浮于50μl一抗中。滴定開始于圖15a-15d中所示的濃度，隨后在facs緩沖液中進行3倍系列稀釋。測試以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體：ci005(egfr/hcd3)、ci023(m-egfr/m-hcd3)、ci024(m-egfr/m-hcd3)、ci015(egfr/hcd3)、ci011(m-egfr/m-hcd3)、ci010(m-egfr/m-hcd3)。利用sp34scfv的兩種形式，即ci005、ci023、ci024中的scfv相比ci015、ci011、ci010中的scfv。多特異性抗體的結(jié)合特異性由抗原名稱(在本實施例中為egfr和cd3)指示，且字母m指示抗原結(jié)合的掩蔽。將ht29-luc2細胞在4℃下振蕩孵育約1小時，收獲，并用3x200μlfacs緩沖液洗滌。將細胞重懸浮于50μlalexafluor647綴合的抗人iggfc(1:100稀釋液，jacksonimmunoresearch，產(chǎn)品109-606-008)中，并在4℃下振蕩孵育約30分鐘。將ht29-luc2收獲，用3x200μlfacs緩沖液洗滌，并重懸浮于最終體積為100μl的含有2.5μg/ml7-aad(bdbiosciences，目錄號559925)的facs緩沖液中。在macsquant?analyzer10(miltenyi)上收集樣品，并使用flowjov10(treestar)計算活細胞的中值熒光強度(mfi)。在graphpadprism6中通過將數(shù)據(jù)曲線擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來計算ec50值。如前所述測試多特異性抗體和多特異性、可活化抗體與cd3εjurkats的結(jié)合。圖15a-15c表明，cd3ε掩蔽肽并入egfr掩蔽的多特異性可活化抗體將cd3ε結(jié)合的ec50值從單位數(shù)nm改變至三位數(shù)nm。該結(jié)合改變在利用sp34scfv的兩種形式(即ci005、ci023、ci024中的scfv相比ci015、ci011、ci010中的scfv)的多特異性、可活化抗體中是明顯的。此外，egfr掩蔽在針對egfr和cd3結(jié)合兩者被掩蔽的多特異性、可活化抗體中仍然是有效的。實施例8.雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體與egfr+ht-29細胞和cd3ε+jurkat細胞的細胞毒性為了確定先前實施例中描述的cd3ε掩蔽肽是否可以在egfr掩蔽的多特異性、可活化抗體的背景下起作用，進行細胞毒性測定。人pbmc作為冷凍等分試樣(hemacare,目錄號pb009c-1)購買或經(jīng)由ficoll密度梯度離心分離自獲得自健康供體的血沉棕黃層(stanfordbloodcenter)(參考文獻=isolationofmononuclearcellsandgranulocytesfromhumanblood.b?yum,a.,scand.j.,clin.lab.invest.21suppl,97,77–89(1968))。將人pbmc與表達egfr的ht29-luc2細胞以10:1的pbmc:ht29-luc比率在白壁96孔板中的rpmi-1640+glutamax、5%熱滅活的人血清(sigma，目錄號h3667)和100u/ml青霉素以及100μg/ml鏈霉素中共培養(yǎng)。測試以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體的滴度：ci005(egfr/hcd3)、ci023(m-egfr/m-hcd3)、ci024(m-egfr/m-hcd3)、ci011(m-egfr/m-hcd3)、ci010(m-egfr/m-hcd3)。此外，egfr抗體(ci012)和同種型用作單一濃度的陰性對照。添加效應(yīng)細胞、靶細胞和抗體后的總體積為150μl。48小時后，將cytotox-glo?細胞毒性測定(promega)的發(fā)光肽底物直接添加至板以測量釋放的蛋白酶活性。在infinitem200pro(tecan)上添加底物后50分鐘測量發(fā)光。結(jié)果以未處理值的背景減去后的發(fā)光表示，并在prism中用曲線擬合分析log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))進行繪制。圖16a和16b表明，相對于未掩蔽的對照，egfr和cd3ε掩蔽的多特異性、可活化抗體改變細胞毒性ec50。該改變在利用sp34scfv的兩種形式(即ci023和ci024中的scfv相比ci011和ci010中的scfv)的多特異性、可活化抗體中是明顯的。實施例9.單一和雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體與egfr+ht-29細胞和cd3ε+jurkat細胞的結(jié)合為了確定cd3ε和egfr掩蔽是否可以減弱多特異性、可活化抗體中的結(jié)合，進行流式細胞術(shù)測定。如前所述對以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體進行cd3ε+jurkat細胞和egfr+ht-29細胞的結(jié)合：ci005(egfr/hcd3)、ci007(m-egfr/hcd3)、ci008(egfr/m1-hcd3)、ci009(egfr/m2-hcd3)、ci010(m-egfr/m1-hcd3)和ci011(m-egfr/m2-hcd3)。圖17a和17b表明，在cd3ε掩蔽的存在(ci010，ci011)和不存在(ci007)的情況下，egfr掩蔽可以改變egfr結(jié)合的ec50。在egfr掩蔽的存在(ci010，ci011)和不存在(ci008，c009)的情況下，兩種cd3ε掩蔽可以改變cd3ε結(jié)合的ec50。實施例10.單一和雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體的egfr依賴性細胞毒性為了確定cd3ε和egfr掩蔽是否可以減弱多特異性、可活化抗體的細胞殺傷，進行細胞毒性測定。如前所述通過共培養(yǎng)pbmc和egfr+ht-29luc細胞來評估egfr依賴性細胞殺傷。通過將pbmc與egfr陰性u266細胞系(atcc，目錄號tib-196)共培養(yǎng)來評估egfr非依賴性細胞殺傷。根據(jù)atcc指南在rpmi-1640+glutamax、10％熱滅活的胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素中培養(yǎng)u266細胞。測試以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體的滴度：ci005(egfr/hcd3)、ci007(m-egfr/hcd3)、ci009(egfr/m2-hcd3)、ci011(m-egfr/m2-hcd3)。在前面實施例中描述了共培養(yǎng)條件和細胞毒性的定量。圖18a和18b表明，通過掩蔽多特異性、可活化抗體中的egfr和cd3結(jié)合最大程度地減弱egfr+ht29-luc2細胞的殺傷。相比之下，在相同的共培養(yǎng)條件下，egfr陰性u266細胞的殺傷是檢測不到的。實施例11.單一和雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體的egfr依賴性原代t細胞活化為了確定cd3ε和egfr掩蔽是否可以減弱多特異性、可活化抗體的原代t細胞活化，進行流式細胞術(shù)測定。pbmc和egfr+ht-29luc2共培養(yǎng)條件描述于前面實施例中。在24小時孵育后，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至u底板，并用0.25％胰蛋白酶(lifetechnologies，目錄號25200-056)分離剩余的細胞。通過添加3個體積的facs緩沖液猝滅胰蛋白酶活性，并將細胞懸浮液轉(zhuǎn)移至同一u底板。收獲后，將細胞重懸浮于50μl的抗-cd69pe/抗-cd8apc-vio770混合物(抗-cd69pe，bdbiosciences，目錄號555531；抗-cd8apc-vio770，miltenyibiotec，目錄號130-096-561)，apc-vio770同種型對照(miltenyibiotec，目錄號130-099-637)或pe同種型對照(bdbiosciences，目錄號340761)。所有抗體以制造商推薦的濃度使用。將細胞在4℃下振蕩染色1小時，收獲并重懸浮于最終體積為100μl的具有2.5μg/ml7-aad的facs緩沖液中。在macsquant?analyzer10(miltenyi)上收集樣品，并在flowjov10(treestar)中將活化定量為cd69表達高于pe同種型對照的cd8+t細胞的百分比。在graphpadprism6中通過將數(shù)據(jù)曲線擬合至log(激動劑)vs.響應(yīng)(三個參數(shù))來計算ec50值。圖19表明，通過掩蔽多特異性、可活化抗體中的egfr和cd3結(jié)合最大程度地減弱原代cd8+t細胞的活化。實施例12.單一和雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體的egfr非依賴性原代t細胞活化為了確定cd3ε掩蔽是否可以減弱多特異性、可活化抗體的egfr非依賴性活化，進行流式細胞術(shù)測定。pbmc和egfr陰性u266共培養(yǎng)條件描述于前面實施例中。如前所述通過cd69染色評價原代cd8+t細胞的活化。評估以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體：ci005(egfr/hcd3)、ci007(m-egfr/hcd3)、ci009(egfr/m2-hcd3)、ci011(m-egfr/m2-hcd3)。圖20a和20b表明，未掩蔽的雙特異性抗體的靶標非依賴性t細胞活化僅僅是非常小的，并且在掩蔽抗-cd3部分后，該低活性程度被消除。實施例13.多特異性、可活化抗體的upa消化恢復(fù)與egfr+ht-29luc2細胞和cd3+jurkat細胞的結(jié)合以及針對egfr+ht-29luc2細胞的細胞毒性多特異性可活化抗體的活化如下進行：通過將upa(r&dsystems,catalog1310-se)添加至約1μm的最終濃度來切割pbs中的多特異性可活化抗體。將消化物在37℃下孵育過夜，并通過移取等分試樣用于毛細管電泳分析(gx-ii毛細管電泳，perkinelmer)或sds-page來證實切割。通過蛋白a純化除去蛋白酶和切割的掩蔽部分。簡言之，將消化的樣品用pbs稀釋至2ml，并加載至平衡的mabselectsure?珠粒(gehealthcarelifesciences，產(chǎn)品11-0026-01ad)。將珠粒用5個柱體積(cv)的1xpbs洗滌，隨后用5cv的補充有5％異丙醇(ipa)的5xpbs洗滌，最后用5cv的1xpbs洗滌。將抗體用10cv的0.1m甘氨酸(ph3.0)洗脫，并將級分用1mtris(ph8.0)中和，合并，濃縮并緩沖液交換至pbs。如前所述進行與cd3ε+jurkat細胞和egfr+ht-29細胞的結(jié)合和針對ht-29luc2細胞的細胞殺傷。圖21a-21d表明upa活化恢復(fù)多特異性、可活化ci011(m-egfr/m-hcd3)抗體與egfr+ht29-luc2細胞和cd3+jurkat細胞的結(jié)合。此外，所有多特異性、可活化抗體的細胞殺傷都通過upa活化恢復(fù)。實施例14.并入不同底物的雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體為了確定不同底物是否影響雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體的egfr依賴性殺傷，進行細胞毒性測定。如前所述進行針對ht-29luc2細胞的細胞殺傷。圖22表明含有不同底物的雙重掩蔽的多特異性、可活化抗體改變ec50細胞毒性。實施例15.實施方案的多特異性抗體和多特異性可活化抗體防止小鼠中的ht-29luc2腫瘤生長在本實施例中，分析靶向egfr和cd3ε的多特異性抗體和多特異性可活化抗體防止免疫缺陷的nod-scid小鼠中的ht-29luc2異種移植物腫瘤的生長的能力。人結(jié)腸癌細胞系ht-29luc2獲得自perkinelmer,inc.,waltham,ma(以前為caliperlifesciences,inc.)。新鮮人pbmc和針對t細胞富集的pbmc通過hemacare,inc.,vannuys,ca獲得自人供體，并將其過夜送至cytomx。將ht-29luc2細胞與人pbmc或針對t細胞富集的新鮮pbmc皮下植入nodscid(nod.cb17-prkdcscid/j)小鼠(jacksonlaboratory,barharbor,me)的右側(cè)腹。在37℃下，在空氣中5%co2的氣氛中，使ht-29luc2細胞在含有10％胎牛血清(gibco-brand,thermofisher,inc.waltham,ma)的mccoy's5a培養(yǎng)基(atcc,manassas,va)中生長。將腫瘤細胞常規(guī)地每周二次繼代培養(yǎng)。在對數(shù)生長期期間收獲細胞并保持在環(huán)境溫度用于腫瘤誘導(dǎo)。在一項預(yù)防研究中，用100μl含有2x106個腫瘤細胞且有或無2x106個新鮮、未刺激的pbmc的細胞懸液皮下接種小鼠(第0天)。在同一天，小鼠通過靜脈內(nèi)注射接受第一劑量的測試或?qū)φ罩破?第0天)。使用數(shù)字卡尺以二維每周兩次測量腫瘤體積，且體積使用式v=0.5axb2以mm3表示，其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑。如表13中所示將小鼠分組并給藥。表13.ht-29luc2異種移植物研究的組別和劑量。*bite以0.5mg/kg/天給藥。組別計數(shù)腫瘤pbmc治療劑量(mg/kg)時間表18ht-29luc2--pbs--q7dx2,iv28ht-29luc2供體apbs--q7dx2,iv38ht-29luc2供體aci0050.10q7dx2,iv48ht-29luc2供體aci059(bite)0.5*qdx8,iv圖23(其繪制初始劑量后的腫瘤體積相比天數(shù))表明以0.1mg/kg兩次給藥(分開7天)的多特異性抗體ci005和連續(xù)8天以0.5mg/kg/天給藥的ci059(bite)防止ht-29luc2異種移植腫瘤的生長。在分開的研究中，使用與上述方法類似的方法，測試靶向egfr和cd3ε的多特異性抗體ci048和多特異性可活化抗體ci011防止或抑制ht-29luc2異種移植腫瘤的生長的能力。組別和劑量描述于表14中。該研究中的效應(yīng)細胞是從pbmc富集的新鮮、未刺激的cd3+t細胞，并以效應(yīng)細胞:腫瘤細胞的1:1比率共注射。圖24(其繪制初始劑量后腫瘤體積相比天數(shù))表明，ci048多特異性抗體限制ht-29luc2異種移植腫瘤的建立且ci011多特異性可活化抗體抑制ht-29luc2異種移植物腫瘤的生長。第26天時pbs和ci011之間的作用差異是統(tǒng)計學(xué)顯著的(p<0.05)。實施例16.實施方案的多特異性抗體和多特異性可活化抗體誘導(dǎo)小鼠中建立的ht-29luc2腫瘤的消退在本實施例中，分析靶向egfr和cd3ε的多特異性抗體和多特異性可活化抗體在人t細胞移植的nsg小鼠中產(chǎn)生建立的ht-29luc2異種移植腫瘤的退化或生長降低的能力。人結(jié)腸癌細胞系ht-29luc2獲得自perkinelmer,inc.,waltham,ma(以前為caliperlifesciences,inc.)并如實施例15中所述進行培養(yǎng)。純化的冷凍人pbmc通過hemacare,inc.,vannuys,ca獲得自人供體。nsg(nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjl/szj)小鼠獲得自thejacksonlaboratories,barharbor,me。在用于腫瘤干預(yù)研究的準備中，每只小鼠在右側(cè)腹皮下接種100μlrpmi+glutamax、無血清培養(yǎng)基中的2x106個ht-29luc2細胞。分析來自單個供體(“a”)的先前冷凍的pbmc以測定cd3+t細胞的百分比。該值用于計算實現(xiàn)2:1的cd3+t細胞:腫瘤細胞比率所需的pbmc的總數(shù)。在腫瘤細胞植入當天，將該總數(shù)的pbmc(1020萬)注入每只小鼠的腹膜中。在pbmc接種后11天從所有小鼠收集血液(~100μl)，以通過流式細胞術(shù)評估每只小鼠中人t細胞移植的程度。測定全血(抗凝血劑，肝素鋰)的人cd3+的存在與cd4+和cd8+t細胞百分比。每周兩次測量腫瘤體積和體重，并如實施例15中所述計算腫瘤體積。在腫瘤接種后13天，將具有足夠的t細胞移植且具有目標大小范圍(50-100mm3；平均~70mm3)腫瘤的小鼠隨機分組，每組8只。第二天，將分配至治療組的小鼠根據(jù)表15iv給藥(5ml/kg)。圖25(其繪制初始治療劑量后的腫瘤體積相比天數(shù))表明ci048多特異性抗體對ht-29luc2異種移植腫瘤生長的劑量依賴性作用。ci048的最有效劑量是0.3mg/kg，其導(dǎo)致100％小鼠中持續(xù)、完全的腫瘤消退。0.1mg/kg的ci048也是高度有效的，其中大多數(shù)小鼠展現(xiàn)腫瘤消退。圖26(其繪制初始治療劑量后腫瘤體積相比天數(shù))表明，0.3mg/kg的ci048多特異性抗體消除ht-29luc2異種移植腫瘤，并且0.1mg/kg的ci040多特異性可活化抗體比ci048效力更低，但相對于pbs對照限制ht-29luc2異種移植腫瘤的生長。使用來自攜帶ht-29luc2腫瘤的人t細胞移植的nsg小鼠的相同合并物的未指定動物設(shè)置兩個額外的效力研究。第一項研究在腫瘤植入后18天開始，其中平均起始腫瘤體積為107mm3。該研究比較了ci048多特異性抗體和ci040多特異性可活化抗體的活性。如表16、組1-4中所示將小鼠分組并給藥。第二項研究在腫瘤植入后26天開始，其中平均起始腫瘤體積為190mm3。該研究評估ci011多特異性可活化抗體的效力。如表16、組5和6中所示將小鼠分組并iv給藥。圖27(其繪制初始治療劑量后的腫瘤體積相比天數(shù))表明1.0mg/kg的ci040多特異性可活化抗體和0.3mg/kg的ci048多特異性抗體在100％的處理的小鼠中產(chǎn)生完全的腫瘤消退。在用0.3mg/kgci040給藥的大多數(shù)小鼠中觀察到腫瘤消退。圖28(其繪制初始治療劑量后的腫瘤體積相比天數(shù))表明相對于媒介物對照，1.0mg/kg的ci011多特異性可活化抗體顯著抑制ht-29luc2異種移植腫瘤生長(p<0.05)。實施例17.食蟹猴中多特異性抗體和多特異性可活化抗體的最大耐受劑量(mtd)測定在本實施例中，遞增劑量研究設(shè)計用于建立在向未處理(na?ve)雄性食蟹猴單次iv推注施用后ci048egfrxcd3ε多特異性抗體和ci011和ci040(兩種多特異性可活化抗體)的最大耐受劑量。所述猴來自柬埔寨，且體重范圍為2.5至4kg。ci011和ci040僅在蛋白酶可切割位點的氨基酸序列中不同。向每劑量水平一個動物各自施用ci048、ci011和ci040，對于ci048，以0.1微克/kg(μg/kg)開始，對于ci011和ci040，以60μg/kg開始。劑量以2至10倍增量遞增，直到達到或超過每種制品的mtd。然后使用一只額外動物來證實mtd。每個研究動物給藥一次，并監(jiān)測至少7天。基于臨床體征、體重、食物消耗和包括血清化學(xué)和血液學(xué)的實驗室分析來評估耐受性。在適應(yīng)期間一次和在給藥后48小時和7天收集血液用于標準血清化學(xué)和血液學(xué)分析。用劑量為10μg/kg和以上的未掩蔽的ci048多特異性抗體和劑量≥200μg/kg的ci011或ci040多特異性可活化抗體觀察到異常臨床體征，包括嘔吐、弓背和食物攝入減少。在20μg/kg(ci048)、≥200μg/kg(ci040)和≥600μg/kg(ci011)的mtd時，這些發(fā)現(xiàn)(當存在時)是短暫的，并且通常限于給藥時段后48小時。在mtd的血清化學(xué)發(fā)現(xiàn)包括在48小時時丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt，在肝細胞裂解后在血清中發(fā)現(xiàn)的肝酶標記物)的輕度至中度升高，其在第8天完全逆轉(zhuǎn)。用60μg/kg的ci048給藥的單個動物表明更嚴重和持久的臨床體征，與在給藥后48小時的顯著升高的alt、ast、膽紅素和血液尿素氮相關(guān)。該動物還具有在給藥后1或4小時的血清細胞因子(包括il-6、ifn-γ和tnf-α)的顯著增加，以及在第8天大量擴增的淋巴細胞群體。在超過mtd的ci048劑量下的肝和腎損傷的發(fā)現(xiàn)類似于lutterbuese和同事在用egfrxcd3雙特異性分子的研究中指出的那些(pnas2010,vol.107(28)12605-12610)，并且可以歸因于t細胞介導(dǎo)的組織損傷。圖29描繪作為測試制品劑量的函數(shù)的給藥后48小時的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alt)的血清濃度。在60μg/kgci048多特異性抗體下觀察到alt的顯著增加。以20μg/kg重新給藥ci048建立20μg/kg的耐受劑量。以600μg/kg的劑量施用ci011和ci040多特異性可活化抗體導(dǎo)致與10-20μg/kgci048相關(guān)的血清alt濃度相當?shù)难錫lt水平。實施例18.雙重掩蔽的多特異性可活化抗體與egfr+ht-29細胞和小鼠cd3ε+tk1細胞的結(jié)合為了確定小鼠cd3ε和egfr掩蔽是否可以減弱多特異性可活化抗體中的結(jié)合，進行流式細胞術(shù)測定。根據(jù)atcc指南在rpmi-1640+glutamax、10％熱滅活的胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素中培養(yǎng)小鼠cd3ε+tk1細胞(atcc，目錄號crl-2396)。如先前所述對以下多特異性抗體和多特異性可活化抗體進行與小鼠cd3ε+tk1細胞和egfr+ht-29細胞的結(jié)合：ci052(egfr/mcd3)、ci053(m-egfr/m01-mcd3)、ci054(m-egfr/m02-mcd3)、ci055(m-egfr/m03-mcd3)、ci056(m-egfr/m04-mcd3)、ci049(m-egfr/m05-mcd3)、ci050(m-egfr/m06-mcd3)、ci051(m-egfr/m07-mcd3)、ci057(m-egfr/m08-mcd3)和ci058(m-egfr/m09/mcd3)。圖30表明，將小鼠cd3ε掩蔽物并入egfr掩蔽的多特異性可活化抗體改變小鼠cd3ε結(jié)合的ec50值，同時保留有效的egfr掩蔽。實施例19.靶向il6r的雙重掩蔽的多特異性可活化抗體的表征為了確定多特異性可活化抗體的cd3ε和il6r掩蔽是否可以減弱細胞殺傷，進行細胞毒性測定。通過以6:1比率共同培養(yǎng)純化的人cd8+細胞和il6r+molp-8細胞來評估細胞殺傷。通過使用dynabeads?untouched?人cd8t細胞試劑盒(lifetechnologies，目錄號11348d)的陰性選擇從冷凍的pbmc分離人cd8+t細胞。根據(jù)dsmz指南在rpmi-1640+glutamax、20％熱滅活的胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素中培養(yǎng)molp-8cells(dsmz，目錄號acc569)。測試以下多特異性抗體和多特異性、可活化抗體的滴度：ci026(il6r/hcd3)、ci027(il6r/m-hcd3)、ci036(m-il6r/hcd3)和ci029(m-il6r/m-hcd3)。在前面實施例中描述了共培養(yǎng)條件和細胞毒性的定量。圖31表明，通過掩蔽多特異性、可活化抗體中的il6r和cd3結(jié)合最大程度地減弱il6r+molp-8細胞的殺傷。其他實施方案盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合其詳述進行了描述，但前面的描述意欲說明而非限制由隨附權(quán)利要求書的范圍限定的本公開的范圍。其他方面、優(yōu)點和改變在隨附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。當前第1頁12
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