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      抗真菌類芽孢桿菌菌株、殺鐮孢菌素型化合物和它們的用途的制作方法

      文檔序號:11528724閱讀:2014來源:國知局
      發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新分離的細(xì)菌菌株,其是類芽孢桿菌屬(paenibacillus)的成員,最初從土壤分離,顯示出抗廣譜病原體的拮抗活性并且能夠產(chǎn)生抗微生物代謝物。本發(fā)明還涉及微生物農(nóng)藥組合物,其包含該新細(xì)菌菌株、其全培養(yǎng)液或無細(xì)胞提取物或級分或其至少一種代謝物、和/或顯示出抗植物病原體的拮抗活性的、至少一種所述新細(xì)菌菌株的具有相應(yīng)細(xì)菌菌株的全部鑒定特征的突變體、或其全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、級分和/或代謝物。本發(fā)明還涉及通過施用這種組合物控制或抑制植物病原體或防止植物病原體感染的方法。本發(fā)明還涉及新的殺鐮孢菌素型(fusaricidin-type)化合物,其是本發(fā)明菌株產(chǎn)生的代謝物。發(fā)明背景在控制影響植物或作物的植物病原真菌的
      技術(shù)領(lǐng)域
      :中,熟知可以施用包含生物農(nóng)藥的活性化合物組合物,所述生物農(nóng)藥例如選自對待處理的植物或作物無害的細(xì)菌,如形成孢子的細(xì)菌,或真菌,并且所述生物控制劑可以進(jìn)一步與植物病原體的經(jīng)典有機(jī)化學(xué)拮抗劑組合。已經(jīng)將生物農(nóng)藥定義為基于微生物(細(xì)菌、真菌、病毒、線蟲等)或天然產(chǎn)物(來自生物來源的化合物或提取物)的農(nóng)藥形式(u.s.environmentalprotectionagency(美國環(huán)保署):http://www.epa.gov/pesticides/biopesticides/)。生物農(nóng)藥通常通過生長和濃縮天然產(chǎn)生的生物體和/或其代謝物來形成,包括細(xì)菌和其他微生物、真菌、病毒、線蟲、蛋白質(zhì)等。它們經(jīng)常被認(rèn)為是綜合病蟲害治理(ipm)項目的重要組成部分,并且作為合成的化學(xué)植物保護(hù)產(chǎn)品(ppp)的替代,已經(jīng)受到了很多實際關(guān)注。生物農(nóng)藥分成兩個主要的類別,微生物和生物化學(xué)農(nóng)藥:(1)微生物農(nóng)藥由細(xì)菌、真菌或病毒(并且常常包括細(xì)菌和真菌產(chǎn)生的代謝物)組成。昆蟲病原線蟲也歸為微生物農(nóng)藥,盡管它們是多細(xì)胞的。(2)生物化學(xué)農(nóng)藥是可以控制農(nóng)害(pest)或提供其他作物保護(hù)用途(見以下定義)、但對哺乳動物相對無毒的天然物質(zhì)。為了控制植物病原真菌,之前已經(jīng)描述了幾種微生物農(nóng)藥,包括形成孢子的細(xì)菌(如枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)),參見,例如,wo1988/050422;wo2000/029426;wo1998/50422和wo2000/58442。wo2009/0126473公開了包含細(xì)菌或真菌孢子的農(nóng)業(yè)上可接受的含水組合物,所述細(xì)菌或真菌孢子包含在水性/有機(jī)溶劑中,并且所述組合物可以進(jìn)一步包含昆蟲控制劑、殺蟲劑、殺真菌劑或其組合。芽孢桿菌(bacillus)屬細(xì)菌的孢子是優(yōu)選的。wo2006/017361公開了用于控制植物病原體的組合物,其包含至少一種有益細(xì)菌、至少一種有益真菌、至少一種營養(yǎng)素和至少一種延長所述組合物的有效期的化合物。有益細(xì)菌組例如包含多粘類芽孢桿菌(paenibacilluspolymyxa)和堅韌類芽孢桿菌(paenibacillusdurum)的細(xì)菌。ep-a-1168922涉及用于影響植物生長和/或賦予抗病性的組合物,其包含至少兩種植物根際促生菌(plant-growthpromotingrhizobacteria)菌株和幾丁質(zhì)化合物,其中所述菌株選自芽孢桿菌屬(bacillus)、類芽孢桿菌屬(paenibacillus)、短芽孢桿菌屬(brevibacillus)、枝芽孢桿菌屬(virgibacillus)、脂環(huán)酸芽孢桿菌屬(alicyclobacillus)和硫胺素芽孢桿菌屬(aneurinibacillus)。然而,沒有給出具體類芽孢桿菌菌株的例子以支持該聲稱的組合。wo1999/059412公開了多粘類芽孢桿菌菌株pkb1(具有atcc登錄號202127),其具有對抗幾種植物病原真菌的活性。wo2006/016558公開了類芽孢桿菌屬菌株bs-0048、bs-0074、bs-0277和多粘類芽孢桿菌菌株bs-0105以及殺鐮孢菌素a和殺鐮孢菌素b,用于保護(hù)植物免受真菌感染。另一個抗真菌類芽孢桿菌菌株brf-1已經(jīng)從大豆根際分離(africanj.microbiol.res.4(24),2692-2698,2010)。wo2011/069227公開了多粘類芽孢桿菌菌株jb05-01-1(具有atcc登錄號pta-10436),其具有對抗病原細(xì)菌(主要是經(jīng)食物傳播的人病原細(xì)菌)的高度抑制作用。budi等(applenvironmicrobiol,1999,65,5148-5150)已經(jīng)從高粱(sorghumbicolor)的菌根際分離了類芽孢桿菌菌株b2,其具有針對土壤傳播的真菌病原體,如寄生疫霉(phytophthoraparasitica),的拮抗活性。由delaporte,b.(labcytolveg,巴黎,法國)從科特迪瓦(coted’ivoire)土壤分離并且以nrrl保藏號bd-62保藏在農(nóng)業(yè)研究所(agriculturalresearchservice)開放保藏中心usda(美國)的皮爾瑞俄類芽孢桿菌(paenibacilluspeoriae)菌株11.d.3(int.j.systbacteriol.46(4),988-1003,1996,下文中也稱為菌株bd-62),顯示出對抗幾種植物病原細(xì)菌和真菌的抗菌活性(j.appl.microbiol.95,1143-1151,2003)。nrrl是農(nóng)業(yè)研究所培養(yǎng)物保藏中心的縮寫,是在關(guān)于國際認(rèn)可的用于專利程序目的的微生物保藏的布達(dá)佩斯條約下用于保藏微生物株目的的國際保藏單位,地址是美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究院國家農(nóng)業(yè)應(yīng)用研究中心,大學(xué)北街1815號,皮奧里亞,伊利諾伊,61604,usa。別處也報道了各種類芽孢桿菌菌株,例如,皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株,對抗各種細(xì)菌、真菌和酵母病原體的抗微生物活性(lett.appl.microbiol.43,541-547,2006)。raza等(brazilianarch.biol.techol.53,1145-1154,2010;eur.j.plantpathol.125:471-483,2009)描述了有效對抗尖鐮孢(fusariumoxysporum)的、產(chǎn)生殺鐮孢菌素型化合物的多粘類芽孢桿菌菌株sqr-21。殺鐮孢菌素(fusaricidin)是一組從類芽孢桿菌屬物種分離的抗生素,其屬于環(huán)狀脂縮酚酸肽(lipodepsipeptide)類。在整個家族中保守的其共同結(jié)構(gòu)特征如下:由6個氨基酸殘基組成的大環(huán),其中三個是l-thr、d-allo-thr和d-ala,以及通過酰胺鍵連接n-末端l-thr殘基的15-胍基-3-羥基十五酸尾部(chemmedchem7,871-882,2012;j.microbiol.meth.85,175-182,2011,本文中的表1)。這些化合物通過n-末端l-thr羥基基團(tuán)和c-末端d-ala羰基基團(tuán)之間的內(nèi)酯橋環(huán)化??s酚酸肽(depsipeptide)環(huán)內(nèi)氨基酸殘基的位置通常從上述l-thr(其自身也攜帶ghpd鏈)開始編號,并結(jié)束于c-末端d-ala。從類芽孢桿菌分離的殺鐮孢菌素的非限制性實例稱為li-f03、li-f04、li-f05、li-f07和li-f08(j.antibiotics40(11),1506-1514,1987;heterocycles53(7),1533-1549,2000;peptides32,1917-1923,2011)以及殺鐮孢菌素a(也稱為li-f04a)、殺鐮孢菌素b(也稱為li-f04b)、殺鐮孢菌素c(也稱為li-f03a)和殺鐮孢菌素d(也稱為li-f03b)(j.antibiotics49(2),129-135,1996;j.antibiotics50(3),220-228,1997)。殺鐮孢菌素的氨基酸鏈不是通過核糖體產(chǎn)生的,而是通過非核糖體肽合成酶產(chǎn)生的。已知的殺鐮孢菌素的結(jié)構(gòu)式顯示于表1中(biotechnollett.34,1327-1334,2012;其中的圖1)。稱為li-f03a、li-f03b直至li-f08a和li-f08b的化合物,由于其在殺鐮孢菌素家族內(nèi)的結(jié)構(gòu)(參見表1),在本文中也稱為殺鐮孢菌素li-f03a、li-f03b直至li-f08a和li-f08b。表1:殺鐮孢菌素家族的結(jié)構(gòu)殺鐮孢菌素x2x3x5a(li-f04a)d-vall-vald-asnb(li-f04b)d-vall-vald-glnc(li-f03a)d-vall-tyrd-asnd(li-f03b)d-vall-tyrd-glnli-f05ad-vall-iled-asnli-f05bd-vall-iled-glnli-f06ad-allo-ilel-vald-asnli-f06bd-allo-ilel-vald-glnli-f07ad-vall-phed-asnli-f07bd-vall-phed-glnli-f08ad-ilel-allo-iled-asnli-f08bd-ilel-allo-iled-gln其中箭頭定義在ghpd的羰基部分和l-thr(l-蘇氨酸)的氨基基團(tuán)之間或在一個氨基酸的羰基基團(tuán)和相鄰氨基酸的氨基基團(tuán)之間的單個(酰胺)鍵,其中箭頭的尖端表示連接到所述氨基酸l-thr或所述相鄰氨基酸的氨基基團(tuán);且其中單線(不帶箭頭)定義d-ala(d-丙氨酸)的羰基基團(tuán)和l-thr的羥基基團(tuán)之間的單個(酯)鍵;其中g(shù)hpd是15-胍基-3-羥基十五烷酸。在分離的殺鐮孢菌素抗生素中,殺鐮孢菌素a已經(jīng)顯示出最有前景的抗微生物活性,對抗各種臨床上相關(guān)的真菌和革蘭氏陽性細(xì)菌,如金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)(mic值范圍:0.78-3.12μg/ml)(chemmedchem7,871-882,2012)。已經(jīng)建立了含有替代天然ghpd的12-胍基-十二烷酸(12-gda)或12-氨基-十二烷酸(12-ada)的殺鐮孢菌素類似物的合成,但12-ada替代ghpd導(dǎo)致抗微生物活性的完全失去,而12-gda替代ghpd保留了抗微生物活性(tetrahedronlett.47,8587-8590,2006;chemmedchem7,871-882,2012)。殺鐮孢菌素a、b、c和d也被報道了可以抑制植物病原真菌,如尖鐮孢、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)和托姆青霉(penicillusthomii)(j.antibiotics49(2),129-135,1996;j.antibiotics50(3),220-228,1997)。殺鐮孢菌素,如li-f05、li-f07和li-f08,已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有對抗各種植物病原真菌(如串珠鐮孢(fusariummoniliforme)、尖鐮孢、粉紅鐮孢(f.roseum)、藤倉赤霉(giberellafujkuroi)、芝麻長蠕孢(helminthosporiumsesamum)和擴(kuò)展青霉(penicilliumexpansum))的一些抗真菌活性(j.antibiotics40(11),1506-1514,1987)。殺鐮孢菌素還具有對抗革蘭氏陽性細(xì)菌(包括金黃色葡萄球菌)的抗細(xì)菌活性(j.antibiotics49,129-135,1996;j.antibiotics50,220-228,1997)。此外,殺鐮孢菌素具有對抗斑點(diǎn)小球腔菌(leptosphaeriamaculans)的抗真菌活性(can.j.microbiol.48,159-169,2002),斑點(diǎn)小球腔菌引起卡諾拉油菜(canola)的根黑腐病。此外,發(fā)現(xiàn)某些類芽孢桿菌菌株產(chǎn)生的殺鐮孢菌素a和b及其相關(guān)的兩種化合物(其中,d-allo-thr經(jīng)由其羥基基團(tuán),使用酯橋,與另外的丙氨酸鍵接),在培養(yǎng)的歐芹細(xì)胞中誘導(dǎo)抗性反應(yīng)并且抑制尖鐮孢的生長(wo2006/016558;ep1788074a1)。wo2007/086645描述了從多粘類芽孢桿菌菌株e681分離的殺鐮孢菌素合成酶及其編碼基因,該酶參與殺鐮孢菌素a、b、c、d、li-f03、li-f04、li-f05、li-f07和li-f08的合成。迄今為止已經(jīng)公開了幾個多粘類芽孢桿菌菌株的基因組:例如,菌株m-1(ncbi登錄號nc_017542;j.bacteriol.193(29),5862-63,2011;bmcmicrobiol.13,137,2013)、菌株cr1(genbank登錄號cp006941;genomeannouncements2(1),1,2014)和菌株sc2(genbank登錄號cp002213和cp002214;ncbi登錄號nc_014622;j.bacteriol.193(1),311-312,2011),關(guān)于更多菌株,參見本文中圖12的圖例。多粘類芽孢桿菌菌株m-1已經(jīng)以保藏號cgmcc7581保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(cgmcc)。montefusco等在int.j.systematicbacteriol.(43,388-390,1993)中描述了一個新的芽孢桿菌屬細(xì)菌種并且建議命名為bacilluspeoriae,其可以與諸如栗褐芽孢桿菌(bacillusbadius)、凝固芽孢桿菌(b.coagulans)、多粘芽孢桿菌(b.polymyxa)等其他芽孢桿菌菌株區(qū)分開來。據(jù)報道,所述新芽孢桿菌菌株產(chǎn)生孢子,為革蘭氏陽性且產(chǎn)生過氧化氫酶,不產(chǎn)生氧化酶。其中概括了更多的生物化學(xué)特征。所述菌株可以從土壤或腐爛的蔬菜材料分離,命名為bd-57,并且以nrrlb-14750保藏于農(nóng)業(yè)研究所(usda,u.s.a.),以及還以菌株dsm8320保藏于dsmz(參見下文)?;谶M(jìn)一步的生物化學(xué)和遺傳分析,所述菌株之后被重新命名為皮爾瑞俄類芽孢桿菌(參見int.j.systematicbacteriol.46,988-1003,1996)。最近使用pcr-dgge方法評價了在玉米根際中類芽孢桿菌的多樣性,描述于j.microbiol.methods54,213-231,2003中。已經(jīng)在各種作物上建立了用于對抗作物疾病的生物農(nóng)藥。例如,生物農(nóng)藥已經(jīng)在控制霜霉病中起著重要作用。它們的益處包括:0-天安全間隔期(pre-harvestinterval,phi)以及能夠用于中度至重度疾病壓力下。用于生物農(nóng)藥的主要生長區(qū)域是在種子處理和土壤改良的區(qū)域中。生物農(nóng)藥種子處理例如用于控制引起種子腐爛、猝倒、根腐和苗枯的土傳真菌病原體。它們也可以用于控制種子內(nèi)部攜帶的真菌病原體以及在種子表面上的真菌病原體。許多生物農(nóng)藥產(chǎn)品還顯示出刺激植物宿主防御和其他生理過程的能力,這可以使得處理過的作物更加能夠抵抗各種生物和非生物脅迫。然而,生物農(nóng)藥在一些條件下也會具有缺陷,如特異性高(要求農(nóng)害/病原體的準(zhǔn)確識別和使用多重產(chǎn)品)、作用速度慢(因此,如果作物受到農(nóng)害爆發(fā)的即時威脅,其是不合適的)、由于各種生物和非生物因素的影響而功效不定(因為生物農(nóng)藥通常是活的生物體,其通過在靶標(biāo)昆蟲害蟲/病原體內(nèi)繁殖來實現(xiàn)害蟲/病原體控制)、和抗性產(chǎn)生。因此,還需要對抗植物病原性微生物,特別是真菌的其它細(xì)菌菌株和其它抗微生物代謝物,其特征在于對抗所有種類的植物病原真菌的廣譜活性。發(fā)明概述通過提供新的類芽胞桿菌屬細(xì)菌菌株,令人驚訝地解決了所述問題,所述新菌株的特征在于獨(dú)特的對抗植物病原真菌的拮抗活性譜,還延及植物葉病原體,例如選自鏈格孢屬(alternaria)、灰葡萄孢(botrytiscinerea)、致病疫霉(phytophthorainfestans)和核盤菌(sclerotiniasclerotiorum)。所述細(xì)菌菌株已經(jīng)保藏于國際保藏單位:德意志微生物和培養(yǎng)物保藏中心(deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturengmbh),inhoffenstraβe7b,38124braunschweig,德國(下文稱為dsmz)。此外,這些細(xì)菌菌株的全培養(yǎng)液、培養(yǎng)物基質(zhì)和無細(xì)胞提取物顯示出至少對抗鏈格孢屬、灰葡萄孢和致病疫霉的抑制活性。有機(jī)提取物的生物活性導(dǎo)向分離導(dǎo)致了兩種新的殺鐮孢菌素型化合物(化合物1a和1b)的分離,其結(jié)構(gòu)通過1d-和2d-nmr光譜以及質(zhì)譜進(jìn)行了闡明。因此,本發(fā)明涉及分離的微生物,其是類芽孢桿菌家族的成員,具有以下菌株之一的至少一個鑒別性特征(identifyingcharacteristics):1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu16774,2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17007,和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17015。如本文中使用的,術(shù)語類芽孢桿菌屬菌株與術(shù)語類芽孢桿菌菌株相同。如本文中使用的,“分離物”是指從其天然來源分離的純微生物培養(yǎng)物,如通過培養(yǎng)微生物單菌落獲得的分離物。分離物是源自異質(zhì)的野生微生物群體的純培養(yǎng)物。如本文中使用的,“菌株”是指,呈現(xiàn)出屬于相同譜系的表型、生理、代謝和/或遺傳性狀的分離物或一組分離物,其區(qū)別于相同物種的其他分離物或菌株。再一實施方案涉及如上定義的至少一種微生物的全培養(yǎng)液、上清液或無細(xì)胞提取物或級分或至少一種代謝物,其優(yōu)選呈現(xiàn)出對抗至少一種植物病原體的拮抗活性。如本文中使用的,“全培養(yǎng)液”(wholeculturebroth)是指,含有懸浮在培養(yǎng)基中的營養(yǎng)細(xì)胞和/或孢子和任選地由相應(yīng)微生物產(chǎn)生的代謝物的微生物液體培養(yǎng)物。如本文中使用的,“培養(yǎng)物基質(zhì)”(culturemedium)是指,可通過如下方法獲得的培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基(優(yōu)選液體肉湯)中培養(yǎng)微生物,在除去生長在培養(yǎng)基中的細(xì)胞后的剩余物,例如,通過離心、過濾、沉淀或本領(lǐng)域公知的其他方式除去生長在液體肉湯中的細(xì)胞后剩余的上清液;包含例如由相應(yīng)微生物產(chǎn)生并分泌至培養(yǎng)基中的代謝物。可以例如通過以約5,000至20,000×g(更優(yōu)選約15,000×g),在約2至30℃的溫度(更優(yōu)選在4至20℃的溫度),離心約10至60分鐘(更優(yōu)選約15至30分鐘),獲得有時候也稱為“上清液”的“培養(yǎng)物基質(zhì)”。如本文中使用的,“無細(xì)胞提取物”是指,微生物的營養(yǎng)細(xì)胞、孢子和/或全培養(yǎng)液的提取物,其可以通過本領(lǐng)域已知的細(xì)胞破壞方法獲得的,包含由相應(yīng)微生物產(chǎn)生的細(xì)胞代謝物,所述細(xì)胞破壞方法如基于溶劑的(例如,有機(jī)溶劑,如醇類,有時候與合適的鹽組合)、基于溫度的、施加剪切力、使用超聲發(fā)生器進(jìn)行的細(xì)胞破壞??梢酝ㄟ^常規(guī)濃縮技術(shù),如干燥、蒸發(fā)、離心等,來濃縮所需的提取物。優(yōu)選在使用前,也可以使用基于有機(jī)溶劑和/或水的介質(zhì),對粗提物進(jìn)行一些洗滌步驟。如本文中使用的,術(shù)語“代謝物”是指,由微生物(如真菌和細(xì)菌,特別是本發(fā)明的菌株)產(chǎn)生的具有本文中所述的任何有益作用的任何組分、化合物、物質(zhì)或副產(chǎn)物(包括但不限于小分子次生代謝物、聚酮、脂肪酸合酶產(chǎn)物、非核糖體肽、核糖體肽、蛋白質(zhì)和酶),所述有益作用如農(nóng)藥活性或改善植物生長、植物的水利用效率、植物健康、植物外觀、或與本文植物活性有關(guān)的土壤中的有益微生物群體。如本文中使用的,“分離物”是指從其天然來源分離的純微生物培養(yǎng)物,如通過培養(yǎng)微生物單菌落獲得的分離物。分離物是源自異質(zhì)的、野生微生物群體的純培養(yǎng)物。如本文中使用的,“菌株”是指,呈現(xiàn)出屬于相同譜系的,而不同于相同物種的其他分離物或菌株的、表型和/或遺傳性狀的分離物或一組分離物。再一實施方案涉及式i的新化合物及其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,其中r選自15-胍基-3-羥基十五烷酸(ghpd)和12-胍基十二烷酸(12-gda);x1是蘇氨酸;x2是異亮氨酸;x3是酪氨酸;x4是蘇氨酸;x5選自谷氨酰胺和天冬酰胺;x6是丙氨酸;且其中箭頭定義r的羰基部分和氨基酸x1的氨基基團(tuán)之間或一個氨基酸的羰基基團(tuán)和相鄰氨基酸的氨基基團(tuán)之間的單個(酰胺)鍵,其中箭頭的尖端表示連接到所述氨基酸x1或所述相鄰氨基酸的氨基基團(tuán);且其中單線(無箭頭頭部)定義x6的羰基基團(tuán)和x1的羥基基團(tuán)之間的單個(酯)鍵;并且涉及制備本發(fā)明的式i的化合物的方法,該方法包括培養(yǎng)本發(fā)明的菌株以及從全培養(yǎng)液中分離所述式i的化合物。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明還涉及化合物1a和1b,其具有式i,其中r是ghpd,其中在化合物1a的情況中,x5是天冬酰胺,在化合物1b的情況中,x5是谷氨酰胺:本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、或式i的化合物及其鹽的組合物,以及涉及其用于控制或抑制植物病原體或預(yù)防植物病原體感染或用于保護(hù)材料以對抗有害微生物的侵染破壞的用途;并涉及相應(yīng)的方法,包括用有效量的本發(fā)明的組合物、菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、或式i的化合物及其鹽,處理病原體、其棲息地、或待接受抗病原體攻擊保護(hù)的材料或植物,或土壤或繁殖材料。以下的發(fā)明詳述、權(quán)利要求和附圖中公開了本發(fā)明的其它實施方案。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及微生物菌株1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu16774,2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17007,和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17015。已經(jīng)從多個歐洲位置(包括德國)的土壤樣品中分離出菌株lu16774、lu17007和lu17015,并且依據(jù)布達(dá)佩斯條約于2013年2月20日由basfse(德國)以上述保藏號保藏于德意志微生物保藏中心deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturen(dsmz)。類芽孢桿菌屬(之前為rrna3組桿菌)已經(jīng)通過以下特征在表型和生理學(xué)上進(jìn)行表征(antonievanleeuwenhoek64,253-260(1993)):-革蘭氏陽性結(jié)構(gòu)的桿狀細(xì)胞,-革蘭氏染色弱反應(yīng),常常甚至是陰性染色的,-分化成橢圓形內(nèi)生孢子,其明顯脹大了孢子囊(母細(xì)胞),-兼性厭氧生長,在不存在空氣的情況下強(qiáng)烈生長,與是否存在硝酸鹽無關(guān),-發(fā)酵各種糖,-從各種糖(包括葡萄糖)形成酸和氣體,-從核糖醇和山梨糖醇不產(chǎn)生酸,-脲酶陰性(強(qiáng)壯類芽孢桿菌(p.validus)除外),-精氨酸二水解酶(dihydrolase)陰性,-不利用檸檬酸鹽,-在10%氯化鈉存在下不生長,-分泌多種降解dna、蛋白質(zhì)、淀粉的胞外水解酶;和/或-40%至54%的dna的g+c含量。還通過16srdna分析(antonievanleeuwenhoek64,253-260(1993)),表征了類芽孢桿菌屬(之前為rrna3組桿菌):-在16srdna的可變區(qū)v5中具有特定的22-堿基序列(5’至3’):tcgatacccttggtgccgaagt(antonievanleeuwenhoek64,253-260(1993),參見其中的表3);和/或-分離的或pcr擴(kuò)增的染色體dna與bg3探針(5’-tcgatacccttggtgccgaagt-3’)雜交(參見antonievanleeuwenhoek64,253-260(1993))。基于以下的形態(tài)學(xué)和生理學(xué)觀察(參見本文中的實施例2.3),確定了本發(fā)明的保藏菌株lu16774、lu17007和lu17015屬于類芽孢桿菌屬:-桿狀細(xì)胞-橢圓形孢子-膨脹的孢子囊-厭氧生長-發(fā)酵各種糖,包括葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖醇(mannit)、果糖、棉子糖、海藻糖和甘油,伴隨酸形成-從葡萄糖產(chǎn)生氣體-精氨酸二水解酶陰性-不利用檸檬酸鹽-在5%或更高氯化鈉存在下不生長-產(chǎn)生降解淀粉、明膠、酪蛋白和七葉苷(esculin)的胞外水解酶。此外,還通過16srdna分析,通過在16srdna中具有類芽孢桿菌特定的22-堿基序列(5’至3’):5’-tcgatacccttggtgccgaagt-3’(參見本文序列表中的seqidno:1(核苷酸840-861)、seqidno:2(840-861)、seqidno:3(844-865)和seqidno:4(840-861)),確定了本發(fā)明的保藏菌株lu16774、lu17007和lu17015屬于類芽孢桿菌屬。此外,與24個不同的類芽孢桿菌菌株比較,完整16srdna的測序?qū)е铝吮2鼐阬u16774、lu17007和lu17015與模式菌株巴西類芽孢桿菌(paenibacillusbrasiliensis)、膠凍樣類芽孢桿菌(p.kribbensis)、杰米拉類芽孢桿菌(p.jamilae)、皮爾瑞俄類芽孢桿菌和多粘類芽孢桿菌,更優(yōu)選與皮爾瑞俄類芽孢桿菌,特別是皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62的聚類(參見本文中的圖1和2)。已知,多粘類芽孢桿菌和皮爾瑞俄類芽孢桿菌具有99.6至99.7%的16srdna序列同一性(j.gen.appl.microbiol.48,281-285(2002))。兩個核苷酸序列之間的“同一性百分?jǐn)?shù)”或“百分比相似性”表示,在比對序列的完整長度上殘基的同一性百分?jǐn)?shù),通過在比較窗口(由兩個序列之間的局部比對長度定義)中比較兩個最佳局部對齊的序列來確定,如,例如,(對于十分相似的序列)借助程序ae2(比對編輯器2)人工比對后計算的同一性。兩個序列之間的局部比對只包括根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為足夠相似的每個序列的區(qū)段,所述標(biāo)準(zhǔn)取決于用于進(jìn)行比對的算法(例如,ae2、blast、rrna分子的二級結(jié)構(gòu)等)。同一性百分?jǐn)?shù)計算如下:確定兩個序列中出現(xiàn)相同核酸的位置的數(shù)量來產(chǎn)生匹配位置數(shù),匹配位置數(shù)除以比較窗口中的總位置數(shù),結(jié)果乘以100。為了確定兩個核酸序列(例如,表1的核苷酸序列之一及其同源物)的百分比序列同一性,為最佳比較目的而比對序列(例如,為了與另一核酸最佳對齊,可以在一個核酸序列中引入空位)。然后比較位于相應(yīng)位置的堿基。當(dāng)一個序列中的一個位置與另一序列中的相應(yīng)位置被相同堿基占據(jù)時,則兩個分子在該位置是相同的??梢岳斫猓瑸榇_定序列同一性的目的,將dna序列與rna序列比較時,胸苷核苷酸等同于尿嘧啶核苷酸。為進(jìn)行比對,將序列數(shù)據(jù)輸入程序ae2(http://iubio.bio.indiana.edu/soft/molbio/unix/ae2.readme),根據(jù)所得到的rrna分子的二級結(jié)構(gòu)人工比對,并且與屬于厚壁菌門(firmicutes)的生物的代表性16srrna基因序列進(jìn)行比較(nucl.acidsres.27,171-173,1999)。為了獲得多個序列的%同一性值,將所有序列彼此比對(多重序列比對)。此外,與多重比對比較,為了獲得在比對序列的更長鏈上兩序列之間的%同一性值,按照以上所述的,使用ae2,進(jìn)行了人工成對序列比對(成對序列比對)。此外,使用限制性酶ecori,將類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015與皮爾瑞俄類芽孢桿菌bd-62相比,使用qualiconriboprintersystem,進(jìn)行了自動化核糖體分型(ribotyping),獲得了所有三個新菌株與皮爾瑞俄類芽孢桿菌bd-62的0.24至0.5之間的相似性(實施例2.2和圖12)??傊?,這些菌株已經(jīng)被指定到以下的分類學(xué)組。類芽孢桿菌菌株lu16774和lu17007都屬于物種多粘類芽孢桿菌。因此,本發(fā)明涉及微生物菌株1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu16774,2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17007,和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌屬菌株lu17015。根據(jù)本文中呈現(xiàn)的系統(tǒng)發(fā)生分析的結(jié)果(圖12至22)和德國borriss教授的未公開結(jié)果,提出異質(zhì)物種多粘類芽孢桿菌需要新的分類學(xué)分類,分成兩個亞種:1)多粘類芽孢桿菌多粘亞種(paenibacilluspolymyxassp.polymyxa)和2)多粘類芽孢桿菌植物亞種(paenibacilluspolymyxassp.plantarum)和3)新物種-即,類芽孢桿菌附生新物種(paenibacillusnov.spec.epiphyticus)。模式菌株多粘類芽孢桿菌dsm36,與多粘類芽孢桿菌菌株sqr-21、cf05、cicc10580、nrrlb-30509和a18一起,在針對五個保守的管家基因(dnan、gyrb、reca、recn和rpoa)分析的最大可能性樹狀圖之每一個中,形成分開的簇(圖17-21)。通過測定平均氨基酸同一性(aai)獲得了非常相似的結(jié)果,平均氨基酸同一性常常用于確定細(xì)菌物種之間的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系。該方法基于氨基酸水平上核心基因組的平均同一性的計算(proc.natl.acad.usa102,2567-2572,2005)。根據(jù)圖22中得到的aai-矩陣,多粘類芽孢桿菌dsm36與多粘類芽孢桿菌sqr-21菌株一起形成亞簇,不同于其中所示的另兩個亞簇。菌株lu16674和lu17007與菌株多粘類芽孢桿菌m-1、1-43、sc2和sb3-1一起,在針對五個保守的管家基因(dnan、gyrb、reca、recn和rpoa)分析的最大可能性樹狀圖之每一個中,形成第二個亞簇(圖17-21)。根據(jù)圖22中基于核心基因組分析的aai-矩陣,該第二亞簇通過其代表性菌株lu16674和lu17007與多粘類芽孢桿菌m-1和sc2菌株一起得到確認(rèn)。兩個亞簇之間的差異未顯著到確立新的物種,但兩個簇的代表菌株之間的aai同一性水平約為97.5%,從而說明分成兩個分開的亞種是合理的。因此提出,根據(jù)模式多粘類芽孢桿菌菌株dsm36t將第一亞簇命名為多粘類芽孢桿菌多粘亞種。除了菌株dsm36,多粘類芽孢桿菌菌株sqr-21、cf05、cicc10580、nrrlb-30509和a18應(yīng)當(dāng)也屬于多粘類芽孢桿菌多粘亞種。此外提出,將第二亞簇命名為新的亞種——多粘類芽孢桿菌植物亞種。除了菌株lu16674和lu17007,多粘類芽孢桿菌菌株m-1、1-43、sc2和sb3-1也應(yīng)當(dāng)屬于多粘類芽孢桿菌植物亞種。在核心基因組的基因中,菌株lu17015與模式菌株多粘類芽孢桿菌dsm36=atcc842只具有94.9%同一性(aai)(圖22)。因此,菌株lu17015不能指定為物種多粘類芽孢桿菌,也不能指定為任何其他已知的類芽孢桿菌物種。對于菌株e681(94.7%)和cr2(94.9%),發(fā)現(xiàn)了相似的值。這三個菌株彼此之間具有至少98.1%同一性(aai)。根據(jù)konstantinides和tiedje的物種定義(procnatl.acad.sci.usa.102,2567-2572,2005),菌株lu17015以及菌株e681和cr2可以被指定為新的物種。因此,在此提出新物種-即,類芽孢桿菌附生新物種。相應(yīng)地,類芽孢桿菌菌株lu17015屬于附生類芽孢桿菌(paenibacillusepiphyticus)。提出了所述菌株應(yīng)當(dāng)是模式菌株。同樣,基于五個管家基因的序列比較的樹狀圖(圖17-21)顯示出,這個簇與遠(yuǎn)離所有其他多粘類芽孢桿菌菌株。除了lu17015,提出多粘類芽孢桿菌菌株e681、cr2td94、dsm365和wly78也應(yīng)當(dāng)屬于類芽孢桿菌附生新物種。因此,本發(fā)明涉及微生物菌株4)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的多粘類芽孢桿菌植物亞種菌株lu16774,5)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的多粘類芽孢桿菌植物亞種菌株lu17007,6)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的附生類芽孢桿菌菌株lu17015。除了菌株lu16774、lu17007和lu17015,本發(fā)明還涉及任何類芽孢桿菌菌株,不管其是物理上源自lu16774、lu17007和lu17015任一個菌株的原始保藏物的或是獨(dú)立分離的,只要它們保留保藏的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的至少一個鑒別性特征即可。本發(fā)明這樣的類芽孢桿菌菌株包括菌株lu16774、lu17007和lu17015之任一個的任何后代,包括所述菌株的突變株。術(shù)語“突變株”是指,通過直接突變選擇獲得的微生物,但也包括已經(jīng)進(jìn)行了進(jìn)一步誘變或操縱(例如,通過引入質(zhì)粒)的微生物。因此,實施方案包括代表性微生物的突變株、變體和或衍生物,包括天然產(chǎn)生的和人工誘導(dǎo)的突變株。例如,可以通過使微生物接受已知的誘變劑(如,x-射線、uv照射或n-甲基-亞硝基胍),使用常規(guī)方法,來誘導(dǎo)突變株。所述處理后,可以進(jìn)行顯示出所需特征的突變菌株的篩選。可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法來獲得突變菌株,如直接突變選擇、化學(xué)誘變或基因操縱(例如,通過引入質(zhì)粒)。例如,可以通過施用已知的誘變劑(如,x-射線、uv照射或n-甲基-亞硝基胍)來獲得這樣的突變株。所述處理后,可以進(jìn)行顯示出所需特征的突變菌株的篩選。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是包含如下dna序列的菌株,所述dna序列表現(xiàn)出與菌株lu16774、lu17007和lu17015之任一個的16srdna序列(即,序列表中seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中所示的核苷酸序列之任一個)有至少99.6%,優(yōu)選至少99.8%,甚至更優(yōu)選至少99.9%和特別地100.0%的核苷酸序列同一性。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是包含如下dna序列的菌株,所述dna序列表現(xiàn)出與菌株lu16774、lu17007和lu17015之任一個的16srdna序列(即,序列表中seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中所示核苷酸序列之任一個)有100%的核苷酸序列同一性。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明類芽孢桿菌菌株是這樣的菌株,其完整的16srdna序列,在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后,與序列seqidno:1和seqidno:2中的至少一個具有至少99.6%同一性或與seqidno:3具有至少99.8%同一性;優(yōu)選與序列seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中的至少一個具有至少99.8%同一性;更優(yōu)選與序列seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中的至少一個具有至少99.9%同一性;甚至更優(yōu)選與序列seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中的至少一個具有高于99.9%同一性;特別地與序列seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3中的至少一個具有100%同一性。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株選自:a)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的菌株lu16774;b)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的菌株lu17007;c)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的菌株lu17015;d)包含dna序列的菌株,所述dna序列表現(xiàn)出d1)與dna序列seqidno:4或seqidno:9具有至少99.6%核苷酸序列同一性;或d2)與dna序列seqidno:14具有至少99.8%核苷酸序列同一性;或d3)與dna序列seqidno:5或seqidno:10具有至少99.9%核苷酸序列同一性;或d4)與dna序列seqidno:15具有至少99.2%核苷酸序列同一性;或d5)與dna序列seqidno:6或seqidno:11具有至少99.2%核苷酸序列同一性;或d6)與dna序列seqidno:16具有至少99.8%核苷酸序列同一性;或d7)與dna序列seqidno:7或seqidno:12具有至少99.8%核苷酸序列同一性;或d8)與dna序列seqidno:17具有至少99.3%核苷酸序列同一性;d9)與dna序列seqidno:8或seqidno:13具有100%核苷酸序列同一性;或d10)與dna序列seqidno:18具有至少99.8%核苷酸序列同一性。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與dna序列seqidno:4或seqidno:9呈現(xiàn)至少99.6%核苷酸序列同一性的dnandna序列或包含與dna序列seqidno:14呈現(xiàn)至少99.8%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株是,其完整的dnandna序列在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后與dna序列seqidno:4和seqidno:9中的至少一個呈現(xiàn)至少99.6%同一性或與seqidno:14呈現(xiàn)至少99.8%同一性;優(yōu)選與seqidno:14具有至少99.9%同一性;特別地與seqidno:14具有100%同一性的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與菌株lu16774、lu17007和lu17015之任一個的dnandna序列(即,dna序列seqidno:4、seqidno:9和seqidno:14中的任何一個)呈現(xiàn)至少99.8%,特別是100%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與dna序列seqidno:5或seqidno:10呈現(xiàn)至少99.9%核苷酸序列同一性的gyrbdna序列或包含與dna序列seqidno:15呈現(xiàn)至少99.2%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株是,其完整的gyrbdna序列在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后與dna序列seqidno:5和seqidno:10中的至少一個呈現(xiàn)至少99.9%同一性或與seqidno:15呈現(xiàn)至少99.9%同一性;優(yōu)選與seqidno:15呈現(xiàn)至少99.9%同一性;特別地與seqidno:15具有100%同一性的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與菌株lu16774、lu17007和lu17015的任一個的gyrbdna序列(即,dna序列seqidno:5、seqidno:10和seqidno:15中的任何一個)呈現(xiàn)100%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與dna序列seqidno:6或seqidno:11呈現(xiàn)至少99.2%核苷酸序列同一性的recfdna序列或包含與dna序列seqidno:16呈現(xiàn)至少99.8%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株是,其完整的recfdna序列在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后與dna序列seqidno:6和seqidno:11中的至少一個具有至少99.2%同一性或與seqidno:16具有至少99.8%同一性;優(yōu)選與seqidno:16具有至少99.9%同一性;特別地與seqidno:16具有100%同一性的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與菌株lu16774、lu17007和lu17015的任一個的recfdna序列(即,dna序列seqidno:6、seqidno:11和seqidno:16中的任何一個)呈現(xiàn)至少99.8%,特別是100%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與dna序列seqidno:7或seqidno:12呈現(xiàn)至少99.8%核苷酸序列同一性的recndna序列或包含與dna序列seqidno:17呈現(xiàn)至少99.3%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株是,其完整的recndna序列在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后與dna序列seqidno:7和seqidno:12中的至少一個具有至少99.8%同一性或與seqidno:17具有至少99.3%同一性;優(yōu)選與seqidno:17具有至少99.6%同一性;特別地與seqidno:17具有100%同一性的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與菌株lu16774、lu17007和lu17015的任一個的recndna序列(即,dna序列seqidno:7、seqidno:12和seqidno:17中的任何一個)呈現(xiàn)至少99.8%,特別是100%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與dna序列seqidno:8或seqidno:13呈現(xiàn)100%核苷酸序列同一性的rpoadna序列或包含與dna序列seqidno:18呈現(xiàn)至少99.8%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。根據(jù)再一實施方案,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株是,其完整的rpoadna序列在比對序列窗口內(nèi)最佳比對后與dna序列seqidno:8和seqidno:13中的至少一個具有100%同一性或與seqidno:18具有至少99.8%同一性;優(yōu)選與seqidno:17具有至少99.9%同一性;特別地與seqidno:18具有100%同一性的菌株。本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株特別是,包含與菌株lu16774、lu17007和lu17015的任一個的rpoadna序列(即,dna序列seqidno:8、seqidno:13和seqidno:18中的任何一個)呈現(xiàn)100%核苷酸序列同一性的dna序列的菌株。再一實施方案涉及分離的微生物,其是類芽孢桿菌家族的成員,具有以下菌株之一的至少一個鑒別性特征:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;或3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015。再一實施方案涉及類芽孢桿菌菌株,其選自:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的菌株lu17015,4)具有所述菌株lu16774、lu17007和lu17015之一的至少一個鑒別性特征的菌株。本發(fā)明的另一個實施方案涉及選自以下菌株的分離微生物:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015;其顯示出對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,能夠產(chǎn)生至少一種殺鐮孢菌素型化合物;或其保留所述能力的突變菌株,即,保留所述對抗至少一種植物病原體的拮抗活性和保留所述產(chǎn)生至少一種殺鐮孢菌素型化合物的能力。再一實施方案涉及選自以下的微生物:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015;或具有所述菌株之一的全部鑒別性特征的突變菌株。保藏的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的一個鑒別性特征是,它們能夠產(chǎn)生至少一種式i的化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b(其是相應(yīng)菌株的代謝物);及其在農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。因此,根據(jù)本發(fā)明的一個方面,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生至少一種式i的化合物,更優(yōu)選產(chǎn)生化合物1a或1b,特別地產(chǎn)生化合物1a和1b;及其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。因此,根據(jù)本發(fā)明的一個方面,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠在包含至少一種碳源和一種氮源(如本文中定義)的生長培養(yǎng)基中產(chǎn)生至少一種式i的化合物,更優(yōu)選產(chǎn)生化合物1a或1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b;及其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。因此,根據(jù)本發(fā)明的一個方面,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株在包含至少一種碳源和一種氮源(如本文中定義)的生長培養(yǎng)基中產(chǎn)生至少一種式i的化合物,更優(yōu)選產(chǎn)生化合物1a或1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b;及其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。本發(fā)明的另一個實施方案涉及選自以下的分離微生物:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015;其顯示出對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,和能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b;或其保留所述能力的突變菌株,即,保留所述對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,和保留所述產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b的能力。本發(fā)明的另一個實施方案涉及選自以下的分離微生物:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015;其顯示出對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,并且在包含至少一種碳源和一種氮源(如本文中定義)的生長培養(yǎng)基中能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b;或其保留所述能力的突變菌株,即,保留所述對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,和保留所述產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b的能力。本發(fā)明的另一個實施方案涉及選自以下的分離微生物:1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu16774;2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17007;和3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的類芽孢桿菌菌株lu17015;其顯示出對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,并產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b;或其保留所述能力的突變菌株,即,保留所述對抗至少一種植物病原體的拮抗活性,和保留所述產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b的能力。保藏的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015或其突變株的再一個鑒別性特征是,除了能夠產(chǎn)生至少一種式i的化合物(優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b)以外,它們還能夠產(chǎn)生至少一種選自殺鐮孢菌素a、殺鐮孢菌素b、殺鐮孢菌素c、殺鐮孢菌素d、li-f06a、li-f06b和li-f08b的化合物。因此,根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,如本文中公開的,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b,并能夠產(chǎn)生至少一種選自殺鐮孢菌素a、殺鐮孢菌素b、殺鐮孢菌素c、殺鐮孢菌素d、li-f06a、li-f06b和li-f08b的化合物。根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,如本文中公開的,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b,并能夠產(chǎn)生至少三種選自殺鐮孢菌素a、殺鐮孢菌素b、殺鐮孢菌素c、殺鐮孢菌素d、li-f06a、li-f06b和li-f08b的化合物。根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,如本文中公開的,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b,并能夠產(chǎn)生至少五種選自殺鐮孢菌素a、殺鐮孢菌素b、殺鐮孢菌素c、殺鐮孢菌素d、li-f06a、li-f06b和li-f08b的化合物。根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,如本文中公開的,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素,優(yōu)選選自化合物1a和1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b,并能夠產(chǎn)生殺鐮孢菌素a、殺鐮孢菌素b、殺鐮孢菌素c、殺鐮孢菌素d和li-f08b。保藏的類芽孢桿菌菌株的再一個鑒別性特征是它們的抗真菌活性。特別地,發(fā)現(xiàn)這些菌株能有效對抗植物病原體的感染,所述病原體包括鏈格孢屬物種、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢(a.solani)和鏈格孢(a.alternata),特別是茄鏈格孢。因此,根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株具有抗真菌活性,特別是對抗選自鏈格孢屬物種、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌的植物病原體,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢和鏈格孢,特別是茄鏈格孢。更特別地,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株具有對抗所述病原體中的至少兩種或全部四種的抗真菌活性。根據(jù)本發(fā)明的再一個活性,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株具有對抗植物病原體茄鏈格孢、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌的抗真菌活性??梢允褂盟璧闹参锊≡婢珂湼矜邔傥锓N、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌,在體外對抗測試中,證實類芽孢桿菌菌株對抗植物病原體的拮抗活性,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢和鏈格孢,特別是茄鏈格孢。作為這些植物病原真菌的生長培養(yǎng)基,使用每升包含以下物質(zhì)的isp2培養(yǎng)基:10g麥芽提取物(sigmaaldrich,70167);4g細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物(bectondickinson,212750);4g葡萄糖一水合物(sigmaaldrich,16301);20g瓊脂(bectondickinson,214510),ph約7,重蒸水。作為phytin的生長培養(yǎng)基,使用每升包含以下物質(zhì)的v8培養(yǎng)基:200ml蔬菜汁,3g碳酸鈣(merckmillipore,1020660250);30g瓊脂(bectondickinson,214510),ph6.8,重蒸水。將類芽孢桿菌菌株點(diǎn)種在瓊脂平板的一側(cè)。將含有一個活躍生長的植物病原體的瓊脂塊(大約0.3cm2)放在平板中央。在約25℃孵育7-14天后,檢查植物病原體的生長,尤其是針對抑制區(qū)??梢栽u價以下拮抗作用:通過評價無真菌區(qū)(抑制區(qū))的直徑,進(jìn)行抗生作用的評分。通過將帶有細(xì)菌菌株的平板上的真菌病原體的生長直徑與對照平板進(jìn)行比較,進(jìn)行競爭作用的評分。在細(xì)菌生長超過真菌病原體以及真菌寄生物生長超過病原體的情況中,可以記錄真菌寄生作用。這可以通過顯微鏡觀察。保藏的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的另一個鑒別性特征是,它們能夠產(chǎn)生和分泌至少一種分解酶(lyticenzyme),所述酶優(yōu)選選自幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和淀粉酶(參見實施例6),甚至更優(yōu)選至少幾丁質(zhì)酶和纖維素酶;特別是在如本文中定義的包含至少一種碳源和一種氮源的生長培養(yǎng)基中。因此,根據(jù)本發(fā)明的再一個方面,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株能夠產(chǎn)生和分泌至少一種分解酶,所述酶優(yōu)選選自幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和淀粉酶,甚至更優(yōu)選至少幾丁質(zhì)酶和纖維素酶;特別是在如本文中定義的包含至少一種碳源和一種氮源的生長培養(yǎng)基中。更具體地,本發(fā)明涉及保藏菌株lu16774、lu17007和lu17015以及任何具有保藏菌株的一個或多個鑒別性特征的類芽孢桿菌菌株,其中鑒別性特征選自:(a)如本文中公開的,對抗選自鏈格孢屬物種、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌的植物病原體的抗真菌活性,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢和鏈格孢,特別是茄鏈格孢;(b)如本文中公開的,產(chǎn)生至少一種式i的殺鐮孢菌素型化合物,特別是化合物1a和/或1b的能力;(c)如本文中公開的,產(chǎn)生至少一種選自殺鐮孢菌素a、b、c、d、li-f06a、li-f06b和li-f08b的化合物的能力;和(d)如本文中公開的,產(chǎn)生和分泌至少一種分解酶的能力,所述酶選自幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和淀粉酶。更優(yōu)選,所述類芽孢桿菌菌株在如本文中定義的包含至少一種碳源和一種氮源的生長培養(yǎng)基中具有(b)、(c)和(d)所述及的能力。特別地,本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株具有保藏菌株的兩個或更多個鑒別性特征,尤其優(yōu)選所述菌株具有至少特征(a)和(b)。例如,根據(jù)一個優(yōu)選實施方案,本發(fā)明的菌株(a)具有對抗選自鏈格孢屬物種、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌的植物病原體的抗真菌活性,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢和鏈格孢,特別是茄鏈格孢;和(b)能夠產(chǎn)生至少一種式i的化合物,并且特別是化合物1b。根據(jù)再一優(yōu)選的實施方案,本發(fā)明的菌株(a)具有對抗選自鏈格孢屬物種、灰葡萄孢、致病疫霉和核盤菌的三種或全部植物病原體的抗真菌活性,其中鏈格孢屬物種優(yōu)選選自茄鏈格孢和鏈格孢,特別是茄鏈格孢;和(b)能夠產(chǎn)生至少一種式i的化合物,更優(yōu)選產(chǎn)生化合物1a或1b,特別是產(chǎn)生化合物1a和1b。根據(jù)一個本發(fā)明的實施方案,以分離或基本上純化的形式提供本發(fā)明的菌株。術(shù)語“分離的”或“基本上純化的”用來表示,本發(fā)明的菌株已經(jīng)從天然環(huán)境取出并已經(jīng)進(jìn)行分離或分開,并且至少60%不含,優(yōu)選至少75%不含,和更優(yōu)選至少90%不含,甚至更優(yōu)選至少95%不含和最優(yōu)選至少99%不含與其天然相關(guān)的其他組分。通過培養(yǎng)微生物單菌落獲得的分離物是本發(fā)明的分離菌株的實例??梢砸匀魏紊頎顟B(tài)提供本發(fā)明的菌株,如活性的或休眠的。例如可以以冷凍、干燥或凍干或部分脫水(wo2008/002371中給出了產(chǎn)生部分脫水的生物體的程序)或孢子的形式提供休眠菌株。根據(jù)本發(fā)明的實施方案,以孢子的形式提供本發(fā)明的菌株。根據(jù)本發(fā)明再一個實施方案,以包含本發(fā)明菌株的全培養(yǎng)液的形式提供本發(fā)明的菌株。培養(yǎng)物優(yōu)選是分離的或基本上純化的培養(yǎng)物。術(shù)語“分離的培養(yǎng)物”或“基本上純化的培養(yǎng)物”是指,本發(fā)明菌株的培養(yǎng)物,其不包括顯著含量的、通常在菌株生長和/或菌株通??色@自的天然棲息地中發(fā)現(xiàn)的其他物質(zhì)。因此,這樣的“分離的培養(yǎng)物”或“基本上純化的培養(yǎng)物”至少60%不含,優(yōu)選至少75%不含,和更優(yōu)選至少90%不含,甚至更優(yōu)選至少95%不含和最優(yōu)選至少99%不含通常在菌株生長的和/或通常菌株可獲自的天然棲息地中發(fā)現(xiàn)的其他物質(zhì)。這樣的“分離的培養(yǎng)物”或“基本上純化的培養(yǎng)物”通常不包括含量足以干擾本發(fā)明菌株復(fù)制的任何其他微生物。然而,本發(fā)明的分離培養(yǎng)物可以組合以制備混合的本發(fā)明菌株培養(yǎng)物和其它的生物農(nóng)藥,優(yōu)選微生物農(nóng)藥。本發(fā)明涉及用于發(fā)酵生產(chǎn)如本文中所述的抗病原性生物農(nóng)藥的方法。根據(jù)本發(fā)明使用的菌株可以連續(xù)培養(yǎng),或在分批工藝中或在補(bǔ)料分批或重復(fù)的補(bǔ)料分批工藝中不連續(xù)培養(yǎng)。已知的培養(yǎng)方法的綜述參見chmiel的教科書(bioprozesstechnik1.einführungindiebioverfahrenstechnik(gustavfischerverlag,stuttgart,1991))或storhas的教科書(bioreaktorenundperiphereeinrichtungen(viewegverlag,braunschweig/wiesbaden,1994))。用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基必須以合適的方式滿足特定菌株的需求。用于各種微生物的培養(yǎng)基描述在美國細(xì)菌學(xué)協(xié)會的手冊“普通細(xì)菌學(xué)方法手冊”(washingtond.c.,usa,1981)中。根據(jù)本發(fā)明可以使用的這些培養(yǎng)基通常包含一種或多種碳源、氮源、無機(jī)鹽、維生素和/或微量元素。優(yōu)選的碳源是糖類,如單糖、雙糖或多糖。非常好的碳源例如是葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、棉子糖、淀粉或纖維素。糖類也可以經(jīng)由復(fù)雜化合物加入培養(yǎng)基中,如糖蜜、或其他來自糖精制的副產(chǎn)物。添加多種碳源也可以是有利的。其他可用的碳源是油類和脂肪,如大豆油、葵花油、花生油和椰子油,脂肪酸如棕櫚酸、硬脂酸或亞油酸,醇類如甘油、甲醇或乙醇,以及有機(jī)酸如乙酸或乳酸。氮源通常是有機(jī)或無機(jī)氮化合物或含有這些化合物的材料。氮源的實例包括氨氣或銨鹽(如硫酸銨、氯化銨、磷酸銨、碳酸銨或硝酸銨)、硝酸鹽、尿素、氨基酸、或復(fù)雜氮源,如玉米漿、大豆粉、大豆蛋白、酵母提取物、肉膏等。氮源可以分開使用或作為混合物使用??梢源嬖谟谂囵B(yǎng)基中的無機(jī)鹽化合物包括鈣、鎂、鈉、鈷、鉬、鉀、錳、鋅、銅和鐵的氯化物、磷酸鹽或硫酸鹽。無機(jī)含硫化合物,例如,硫酸鹽、亞硫酸鹽、連二亞硫酸鹽、連四硫酸鹽、硫代硫酸鹽、硫化物,以及有機(jī)硫化合物,如硫醇(mercaptan)和硫醇(thiol),可以用作硫源。磷酸、磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀或相應(yīng)的含鈉鹽可以用作磷源??梢詫Ⅱ蟿┘尤肱囵B(yǎng)基中,以將金屬離子保持在溶液中。尤為合適的螯合劑包括二羥基酚類,如兒茶酚,或原兒茶酸,或有機(jī)酸,如檸檬酸。根據(jù)本發(fā)明使用的發(fā)酵培養(yǎng)基還可以含有其他生長因子,如維生素或生長促進(jìn)劑,其包括例如生物素、核黃素、硫胺素、葉酸、煙酸、泛酸和吡哆醇。生長因子和鹽類常常來自培養(yǎng)基的復(fù)雜成分,如酵母提取物、糖蜜、玉米漿等。此外,可以將合適的前體加入培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基中化合物的確切組成強(qiáng)烈地取決于特定的實驗并且必須針對每種特定的情況單獨(dú)確定。關(guān)于培養(yǎng)基優(yōu)化的信息可以在教科書“應(yīng)用微生物學(xué)、生理學(xué)、實用方法”(publ.p.m.rhodes,p.f.stanbury,irlpress(1997)p.53-73,isbn0199635773)中找到。生長培養(yǎng)基也可以獲自商業(yè)供應(yīng)商,如standard1(merk)或bhi(腦心浸液,difco)等。根據(jù)本發(fā)明可以使用的優(yōu)選生長培養(yǎng)基包含一種或多種碳源,選自l-阿拉伯糖、n-乙?;?d-葡糖胺、d-半乳糖、l-天冬氨酸、d-海藻糖、d-甘露糖、甘油、d-葡糖酸、d-木糖、d-甘露糖醇、d-核糖、d-果糖、α-d-葡萄糖、麥芽糖、d-蜜二糖、胸苷、α-甲基-d-半乳糖苷、α-d-乳糖、乳果糖、蔗糖、尿苷、α-羥基戊二酸-γ-內(nèi)酯、β-甲基-d-葡糖苷、核糖醇、麥芽三糖、2-脫氧腺苷、腺苷、檸檬酸、粘酸、d-纖維二糖、肌苷、l-絲氨酸、l-丙氨酰-甘氨酸、d-半乳糖醛酸、α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、糊精、菊粉、果膠、苦杏仁苷、龍膽二糖、乳糖醇、d-松三糖、α-甲基-d-葡糖苷、β-甲基-d-半乳糖苷、β-甲基-d-木糖苷、帕拉金糖、d-棉子糖、水蘇糖、松二糖、γ-氨基丁酸、d-葡糖胺、d-乳酸、l-賴氨酸、3-羥基2-丁酮;和一種或多種氮源,選自氨、亞硝酸鹽、硝酸鹽、l-丙氨酸、l-天冬酰胺、l-天冬氨酸、l-谷氨酸、l-谷氨酰胺、甘氨酸、氨基酸二聚物:ala-asp、alagln、ala-glu、ala-his、gly-gln、gly-glu、gly-met和met-ala;特別是硝酸鹽。這些培養(yǎng)基可以補(bǔ)充無機(jī)鹽和維生素和/或微量元素。所述菌株能夠在這些生長培養(yǎng)基中產(chǎn)生化合物1a和1b。通過加熱(在2.0巴和121℃下20分鐘)或通過無菌過濾,將培養(yǎng)基的所有組分滅菌。組分可以一起滅菌,或如果需要,分開滅菌。培養(yǎng)基的所有組分可以在培養(yǎng)開始時就存在,或任選地可以連續(xù)或通過分批補(bǔ)料來添加。培養(yǎng)溫度通常為15℃至36℃,優(yōu)選25℃至33℃,并且在實驗過程中可以保持恒定或可以改變。培養(yǎng)基的ph值應(yīng)當(dāng)在5至8.5的范圍中,優(yōu)選大約7.0??梢酝ㄟ^添加堿性化合物,如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨或氨水,或酸性化合物,如磷酸或硫酸,控制培養(yǎng)過程中用于培養(yǎng)的ph值。消泡劑,例如,脂肪酸多元醇酯,可以用于控制泡沫。為了維持質(zhì)粒的穩(wěn)定性,具有選擇性作用的合適物質(zhì),例如,抗生素,可以加入培養(yǎng)基。將氧或含氧氣體混合物,例如,環(huán)境空氣,加入培養(yǎng)物中,以維持需氧條件。培養(yǎng)物的溫度通常為20℃至45℃。持續(xù)培養(yǎng)直至形成最大所需產(chǎn)物。這通常在10小時至160小時內(nèi)實現(xiàn)。特別地,本發(fā)明的菌株可以在各種標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)培養(yǎng)基,如luria-bertani肉湯(lb)、胰胨豆胨肉湯(tsb)、酵母提取物/麥芽提取物/葡萄糖肉湯(ymg,isp2)中,在液體培養(yǎng)基或在皮氏培養(yǎng)皿上瓊脂固化的培養(yǎng)基中,在15℃至36℃,培養(yǎng)18至360h。通氣可能是需要的??梢詫⒓?xì)菌細(xì)胞(營養(yǎng)細(xì)胞和孢子)洗滌并濃縮(例如,通過在7,000×g,在約15至30℃溫度,離心約15分鐘)。本發(fā)明還涉及,通過在培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的菌株并從培養(yǎng)液中分離出培養(yǎng)基可獲得的培養(yǎng)物基質(zhì)(因此,從全培養(yǎng)液中除去生長在培養(yǎng)基中的細(xì)胞后的剩余物),例如,全培養(yǎng)液的上清液,即,通過離心、過濾、沉淀或本領(lǐng)域公知的其他方式,除去生長在培養(yǎng)液中的細(xì)胞和其他碎片時剩余的液體培養(yǎng)液。例如,通過在約5,000至20,000×g下(更優(yōu)選在約15,000×g),在約2至30℃的溫度(更優(yōu)選在4至20℃的溫度),離心約10至60分鐘(更優(yōu)選約15至30分鐘),可以獲得上清液。這樣的培養(yǎng)物基質(zhì)含有培養(yǎng)菌株產(chǎn)生的農(nóng)藥代謝物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明菌株的無細(xì)胞提取物。為了產(chǎn)生無細(xì)胞提取物,可以按照以上所述的培養(yǎng)本發(fā)明的菌株。還可以通過高頻超聲波,通過高壓(例如,在弗氏壓碎器中),通過滲壓裂解(osmolysis),通過去污劑、分解酶或有機(jī)溶劑的作用,通過均質(zhì)機(jī)、或通過所列方法中的幾種的組合,來破壞細(xì)胞。提取優(yōu)選使用有機(jī)溶劑或溶劑混合物來進(jìn)行,更優(yōu)選使用醇(例如,甲醇、乙醇、正丙醇、2-丙醇等),甚至更優(yōu)選使用2-丙醇(例如,以與培養(yǎng)物體積1:1的比例)。通過添加鹽,如nacl,可以增強(qiáng)相分離??梢允占袡C(jī)相,并可以通過常規(guī)蒸餾和/或干燥,除去溶劑或溶劑混合物,接著重懸浮于甲醇中,并過濾。這樣的提取物含有培養(yǎng)菌株產(chǎn)生的農(nóng)藥代謝物。可以根據(jù)常規(guī)方法從這樣的培養(yǎng)基或提取物回收本發(fā)明菌株特異性的農(nóng)藥代謝物,特別是在已經(jīng)按照以上所述的培養(yǎng)了本發(fā)明的菌株后。本發(fā)明的方法可以進(jìn)一步包括回收各單個農(nóng)藥代謝物的步驟。術(shù)語“回收”包括從培養(yǎng)物基質(zhì)或無細(xì)胞提取物提取、收獲、分離或純化化合物??梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)分離或純化方法來進(jìn)行化合物的回收,所述方法包括,但不限于,使用常規(guī)樹脂(例如,陰離子或陽離子交換樹脂、非離子型吸附樹脂等)處理、使用常規(guī)吸附劑(例如,活性炭、硅酸、硅膠、纖維素、礬土等)處理、改變ph、溶劑提取(例如,使用常規(guī)溶劑,如醇、乙酸乙酯、己烷等)、蒸餾、透析、過濾、濃縮、結(jié)晶、重結(jié)晶、ph調(diào)節(jié)、凍干等。例如,可以通過首先除去微生物,從培養(yǎng)物基質(zhì)回收代謝物。然后將剩余的培養(yǎng)液通過陽離子交換樹脂,以除去不需要的陽離子,然后通過陰離子交換樹脂,以除去不需要的無機(jī)陰離子和有機(jī)酸。在新的類芽孢桿菌菌株的全培養(yǎng)液中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾種代謝物。詳細(xì)研究并鑒定了九種代謝物(參見實施7,圖1)。發(fā)現(xiàn)其中兩種是新的(化合物1a和化合物1b)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的三種類芽孢桿菌菌株全部產(chǎn)生化合物1a和1b(參見表17),但在相關(guān)的皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株nrrlbd-62的全培養(yǎng)液中沒有發(fā)現(xiàn)這些化合物。因此,本發(fā)明還涉及式i的化合物及其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽其中r選自15-胍基-3-羥基十五烷酸(ghpd)和12-胍基十二烷酸(12-gda);x1是蘇氨酸;x2是異亮氨酸;x3是酪氨酸;x4是蘇氨酸;x5選自谷氨酰胺和天冬酰胺;x6是丙氨酸;且其中箭頭定義r的羰基部分和氨基酸x1的氨基基團(tuán)之間或一個氨基酸的羰基基團(tuán)和相鄰氨基酸的氨基基團(tuán)之間的單個(酰胺)鍵,其中箭頭的尖端表示連接到所述氨基酸x1或所述相鄰氨基酸的氨基基團(tuán);且其中單線(無箭頭頭部)定義x6的羰基基團(tuán)和x1的羥基基團(tuán)之間的單個(酯)鍵。根據(jù)再一個實施方案,式i中的x1優(yōu)選是l-蘇氨酸。根據(jù)再一個實施方案,式i中的x2優(yōu)選是d-異亮氨酸或d-別-異亮氨酸。根據(jù)再一個實施方案,式i中的x3優(yōu)選是l-酪氨酸。根據(jù)再一個實施方案,式i中的x4優(yōu)選是d-別-蘇氨酸。根據(jù)再一個實施方案,式i中的x5優(yōu)選是d-谷氨酰胺或d-天冬酰胺。根據(jù)再一個實施方案,式i中的r優(yōu)選是ghpd。對于式i的化合物,式i也可以如下描繪:其中x選自-nh–(c=o)-ch2-ch(oh)-(ch2)12-nh-c(=nh)nh2和-nh–(c=o)-(ch2)11-nh-c(=nh)nh2;r1是1-羥乙基;r2是1-甲基丙基(叔-丁基);r3是4-羥基芐基;r4是1-羥乙基;r5選自氨基甲?;一桶被柞;谆?;r6是甲基。類似地,基于這種替代的式i描述的優(yōu)選實施方案如下:此式i中的r1優(yōu)選是(1s,2r)-1-羥乙基。此式i中的r2優(yōu)選是(1r,2r)-1-甲基丙基或(1r,2s)-1-甲基丙基。此式i中的r3優(yōu)選是(s)-4-羥基-芐基。此式i中的r4優(yōu)選是(1s,2r)-1-羥乙基。此式i中的r5優(yōu)選是(r)-氨基甲?;一?r)-氨基甲酰基甲基。此式i中的x優(yōu)選是-nh–(c=o)-ch2-ch(oh)-(ch2)12-nh-c(=nh)nh2。根據(jù)再一個實施方案,本發(fā)明還涉及化合物1a和1b,其具有式i,其中r是ghpd,并且在化合物1a的情況中,x4是天冬酰胺,在化合物1b的情況中,x4是谷氨酰胺。來自本發(fā)明菌株的農(nóng)藥代謝物優(yōu)選選自式i的化合物,其中r是ghpd,特別是選自化合物1a和1b,其可以通過從本發(fā)明菌株的培養(yǎng)物(即,全培養(yǎng)液)提取和分離獲得。此外,可以以類似本領(lǐng)域已知的方法(biopolymers80(4),541,2005;j.peptidesci.12s,219,2006;tetrahedronlett.47(48),8587-90,2006;biopolymers88(4),568,2007;chemmedchem7,871-882,2012)來合成式i的殺鐮孢菌素型化合物,包括其中r是ghpd的那些化合物。本發(fā)明還涉及所述式i的殺鐮孢菌素型化合物的農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是酸加成鹽??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法獲得所述鹽,例如,通過將本發(fā)明的化合物與合適的酸反應(yīng)來形成酸加成鹽。有用的酸加成鹽的陰離子主要是氯離子、溴離子、氟離子、碘離子、硫酸氫根、甲基硫酸根、硫酸根、二氫磷酸根、氫-磷酸根、硝酸根、碳酸氫根、碳酸根、六氟硅酸根、六氟磷酸根、苯甲酸根、以及c1-c4-烷酸的陰離子,優(yōu)選甲酸、乙酸、丙酸和丁酸。因此,本發(fā)明還涉及微生物的全培養(yǎng)液,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述全培養(yǎng)液包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。根據(jù)再一個實施方案,本發(fā)明還涉及類芽孢桿菌屬的微生物的全培養(yǎng)液,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述全培養(yǎng)液包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。根據(jù)再一個實施方案,本發(fā)明還涉及如上鑒定和定義的本發(fā)明的至少一種類芽孢桿菌菌株的全培養(yǎng)液,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述全培養(yǎng)液包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。所述殺鐮孢菌素型化合物被分泌至能夠產(chǎn)生其的相應(yīng)微生物的培養(yǎng)物基質(zhì)中。因此,本發(fā)明還涉及微生物的培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。根據(jù)再一個實施方案,本發(fā)明還涉及類芽孢桿菌屬的微生物的培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。根據(jù)再一個實施方案,本發(fā)明還涉及如上鑒定和定義的本發(fā)明的至少一種類芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物,其包含至少一種式i的化合物或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,優(yōu)選選自化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽,特別是所述培養(yǎng)物基質(zhì)和/或無細(xì)胞提取物包含化合物1a和1b或其農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。本發(fā)明還涉及農(nóng)用化學(xué)組合物,其包含如下定義的輔助成分和本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)和式i化合物中的至少一種或多種。如本文中使用的,涉及本發(fā)明產(chǎn)品(微生物菌株、試劑或制劑)的“組合物”是指成分的組合,其中“配制”是,針對待加入形成制劑的成分的組合,使用配方(formula)(如制法(recipe))的過程。這樣的組合物在本文中也稱為制劑。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i化合物和組合物適宜作為抗真菌劑或殺真菌劑。它們的出眾之處在于:突出的對抗廣譜植物病原真菌的有效性,所述真菌包括土傳真菌,尤其是源自根腫菌綱(plasmodiophoromycetes)、peronosporomycetes(與卵菌綱(oomycetes)同義))、壺菌綱(chytridiomycetes)、接合菌綱(zygomycetes)、子囊菌綱(ascomycetes)、擔(dān)子菌綱(basidiomycetes)和半知菌綱(deuteromycetes)(與半知菌類(fungiimperfecti)同義)的真菌。一些是系統(tǒng)有效的并且它們可以作為葉殺真菌劑、拌種殺真菌劑和土壤殺真菌劑用于作物保護(hù)中。此外,它們適用于控制有害真菌,特別是出現(xiàn)在植物的木材或根部的那些真菌。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i化合物和組合物,對于各種栽培植物上以及在這些植物的植物繁殖材料(如種子)和作物材料上的多種植物病原真菌控制,特別重要,所述植物如谷類,例如,小麥、黑麥、大麥、黑小麥、燕麥或水稻;甜菜,例如,糖用甜菜或飼料甜菜;水果,如仁果、核果或無核小果(softfruit),例如,蘋果、梨、李、桃、杏、櫻桃、草莓、樹莓、黑莓或醋栗;豆科植物,如小扁豆、豌豆、苜?;虼蠖?;油料植物,如油菜、芥菜、橄欖、向日葵、椰子、可可豆、蓖麻油植物、油棕、花生或大豆;葫蘆科植物,如南瓜、黃瓜或甜瓜;纖維植物,如棉花、亞麻、大麻或黃麻;柑桔類水果,如橙、檸檬、葡萄柚或柑橘;蔬菜,如菠菜、萵苣、蘆筍、卷心菜、胡蘿卜、洋蔥、番茄、馬鈴薯、葫蘆或紅辣椒;月桂科植物,如鱷梨、肉桂或樟腦;能量和原料植物,如玉米、大豆、油菜、甘蔗或油棕;玉米;煙草;堅果;咖啡;茶;香蕉;藤本植物(食用葡萄(tablegrapes)和葡萄汁葡萄);蛇麻草;坪草;甜葉(也稱為甜葉菊);天然橡膠植物或觀賞植物和森林植物,如花、灌木、闊葉樹或常綠樹,例如,針葉樹。優(yōu)選,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物;和組合物可以用于控制田間作物(如,馬鈴薯、糖用甜菜、煙草、小麥、黑麥、大麥、燕麥、水稻、玉米、棉花、大豆、油菜、豆類、向日葵、咖啡或甘蔗);水果;藤本植物;觀賞植物;或蔬菜(如黃瓜、番茄、豆類或南瓜)上的多種真菌。術(shù)語“植物繁殖材料”理解為表示,植物的所有生殖部分如種子和可以用于繁殖植物的營養(yǎng)性植物材料,如插枝和塊莖(例如,馬鈴薯)。這包括植物的種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、枝、芽和其他部分,包括秧苗和幼苗,其可以在萌發(fā)后或從土壤萌出后移栽。也可以在移栽前通過浸沒或傾倒進(jìn)行整體或部分處理來保護(hù)這些幼苗。優(yōu)選,用本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物處理植物繁殖材料,用于控制谷類,如小麥、黑麥、大麥和燕麥;水稻、玉米、棉花和大豆上的多種真菌。術(shù)語“栽培的植物”理解為包括已經(jīng)通過育種、誘變或遺傳工程修飾的植物,包括但不限于銷售的或研發(fā)中的農(nóng)業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品(參考http://cera-gmc.org/,參見其中的gm作物數(shù)據(jù)庫)。遺傳修飾的植物是其遺傳物質(zhì)已經(jīng)通過使用重組dna技術(shù)修飾的植物,該修飾在自然環(huán)境下通過雜交育種、突變或自然重組不能容易獲得。通常,將一個或多個基因整合至遺傳修飾植物的遺傳物質(zhì)中,以改善植物的某些特性。這樣的遺傳修飾還包括但不限于蛋白質(zhì)、寡肽或多肽的靶向翻譯后修飾,例如,糖基化或聚合物添加(如異戊二烯化、乙?;蚍峄糠只騪eg部分)。已經(jīng)通過育種、誘變或遺傳工程修飾的植物,例如,作為常規(guī)育種或遺傳工程方法的結(jié)果,已被賦予對特定類別的除草劑施用的耐受性,所述除草劑如植物生長素除草劑,如麥草畏或2,4-d;漂白劑除草劑,如羥苯基丙酮酸雙加氧酶(hppd)抑制劑或八氫番茄紅素去飽和酶(pds)抑制劑;乙酰乳酸合酶(als)抑制劑,如磺酰脲或咪唑啉酮;烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(epsps)抑制劑,如草甘膦;谷氨酰胺合成酶(gs)抑制劑,如草銨膦;原卟啉原-ix氧化酶抑制劑;脂質(zhì)生物合成抑制劑,如乙酰coa羧化酶(accase)抑制劑;或苯腈類(即,溴苯腈或碘苯腈)除草劑。此外,通過多重遺傳修飾,可以使得植物抵抗多種類別的除草劑,如抵抗草甘膦和草銨膦兩者或抵抗草甘膦和來自另一種類別的除草劑,如als抑制劑、hppd抑制劑、生長素除草劑或accase抑制劑。這些除草劑抗性技術(shù)例如描述于pestmanagem.sci.61,2005,246;61,2005,258;61,2005,277;61,2005,269;61,2005,286;64,2008,326;64,2008,332;weedsci.57,2009,108;austral.j.agricult.res.58,2007,708;science316,2007,1185;以及其中引用的參考文獻(xiàn)。已經(jīng)通過常規(guī)育種(誘變)方法賦予了幾種栽培植物對除草劑的耐受性,例如,對咪唑啉酮(例如,咪草啶酸(imazamox))耐受的夏油菜(canola,basfse,德國),或?qū)酋k?例如,苯磺隆)耐受的向日葵(dupont,usa)。遺傳工程方法已經(jīng)用于賦予栽培植物(如大豆、棉花、玉米、甜菜和油菜)對除草劑(如草甘膦和草銨膦)的耐受性,其中一些可以以商品名(草甘膦-耐受,monsanto,u.s.a.)、(咪唑啉酮耐受,basfse,德國)和(草銨膦-耐受,bayercropscience,德國)在商業(yè)上購得。此外,還涵蓋這樣的植物,所述植物通過使用重組dna技術(shù)而能夠合成一種或多種殺蟲蛋白,尤其是:已知來自細(xì)菌芽孢桿菌屬,尤其是來自蘇云金芽孢桿菌(bacillusthuringiensis)的殺蟲蛋白,如δ-內(nèi)毒素,例如,cryia(b)、cryia(c)、cryif、cryif(a2)、cryiia(b)、cryiiia、cryiiib(b1)或cry9c;植物殺蟲蛋白(vip),例如,vip1、vip2、vip3或vip3a;定殖線蟲的細(xì)菌(例如,光桿狀菌屬(photorhabdus)或致病桿菌屬(xenorhabdus))的殺蟲蛋白;動物產(chǎn)生的毒素,如蝎子毒素、蜘蛛毒素、黃蜂毒素,或其他昆蟲特異性神經(jīng)毒素;真菌產(chǎn)生的毒素,如鏈霉菌綱(streptomycetes)毒素;植物凝集素(lectin),如豌豆或大麥凝集素;凝集素(agglutinin);蛋白酶抑制劑,如胰蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、patatin、半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cystatin)或木瓜蛋白酶抑制劑;核糖體-失活蛋白(rip),如蓖麻毒素、玉米-rip、相思豆毒素、軟瓜蛋白、皂草毒蛋白或異株瀉根毒蛋白;類固醇代謝酶,如3-羥基類固醇氧化酶、蛻皮類固醇-idp-糖基-轉(zhuǎn)移酶、膽固醇氧化酶、蛻皮素抑制劑或hmg-coa-還原酶;離子通道阻斷劑,如鈉或鈣通道的阻斷劑;保幼激素酯酶;利尿激素受體(helicokinin受體);芪合酶、聯(lián)芐合酶、幾丁質(zhì)酶或葡聚糖酶。在本發(fā)明中,這些殺蟲蛋白或毒素也明確地理解為前毒素、雜合蛋白、截短的或其他修飾的蛋白。雜合蛋白的特征在于蛋白結(jié)構(gòu)域的新組合(參見,例如,wo02/015701)。此類毒素或能夠合成此類毒素的遺傳修飾植物的更多實例公開于例如ep-a374753、wo93/007278、wo95/34656、ep-a427529、ep-a451878、wo03/18810和wo03/52073中。用于產(chǎn)生此類遺傳修飾植物的方法通常是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且描述于例如上述出版物中。遺傳修飾植物中含有的這些殺蟲蛋白賦予產(chǎn)生這些蛋白的植物對來自所有節(jié)肢動物分類學(xué)群組的有害害蟲的耐受性,尤其是甲蟲(鞘翅目(coeloptera))、雙翅昆蟲(雙翅目(diptera))和蛾(鱗翅目(lepidoptera))以及線蟲類(nematoda)。能夠合成一種或多種殺蟲蛋白的遺傳修飾植物例如描述于上述出版物中,并且其中一些是商業(yè)上可購得的,如(產(chǎn)生cry1ab毒素的玉米栽培品種)、plus(產(chǎn)生cry1ab和cry3bb1毒素的玉米栽培品種)、(產(chǎn)生cry9c毒素的玉米栽培品種)、rw(產(chǎn)生cry34ab1、cry35ab1和酶膦絲菌素-n-乙酰轉(zhuǎn)移酶[pat]);33b(產(chǎn)生cry1ac毒素的棉花栽培品種)、i(產(chǎn)生cry1ac毒素的棉花栽培品種)、ii(產(chǎn)生cry1ac和cry2ab2毒素的棉花栽培品種);(產(chǎn)生vip-毒素的棉花栽培品種);(產(chǎn)生cry3a毒素的馬鈴薯栽培品種);bt11(例如,cb)和來自syngentseedssas法國的bt176(產(chǎn)生cry1ab毒素和pat酶的玉米栽培品種)、來自syngentaseedssas法國的mir604(產(chǎn)生修飾形式的cry3a毒素的玉米栽培品種,參考wo03/018810)、來自monsantoeuropes.a.比利時的mon863(產(chǎn)生cry3bb1毒素的玉米栽培品種)、來自monsantoeuropes.a.比利時的ipc531(產(chǎn)生修飾形式的cry1ac毒素的棉花栽培品種)和來自pioneeroverseascorporation比利時的1507(產(chǎn)生cry1f毒素和pat酶的玉米栽培品種)。此外,還涵蓋這樣的植物,所述植物通過使用重組dna技術(shù)而能夠合成一種或多種蛋白來提高這些植物對細(xì)菌、病毒或真菌病原體的抗性或耐受性。此類蛋白的實例是所謂的“病原相關(guān)蛋白”(pr蛋白,參見,例如,ep-a392225)、植物疾病抗性基因(例如,馬鈴薯栽培品種,其表達(dá)對抗源自墨西哥野生馬鈴薯solanumbulbocastanum的致病疫霉的抗性基因)或t4-溶菌酶(例如,能夠合成這些蛋白的馬鈴薯栽培品種,具有提高的對抗細(xì)菌如解淀粉歐文氏菌(erwiniaamylvora)的抗性)。用于生產(chǎn)此類遺傳修飾植物的方法通常是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且描述于例如上述出版物中。此外,還涵蓋這樣的植物,所述植物通過使用重組dna技術(shù)而能夠合成一種或多種蛋白質(zhì)以提高生產(chǎn)力(例如,生物量生產(chǎn)、糧食產(chǎn)量、淀粉含量、油含量或蛋白質(zhì)含量),對干旱、鹽度或其他生長限制環(huán)境因素的耐受性、或?qū)@些植物的害蟲和真菌、細(xì)菌或病毒病原體的耐受性。此外,還涵蓋這樣的植物,所述植物通過使用重組dna技術(shù)而含有改變含量的內(nèi)含物質(zhì)或新的內(nèi)含物質(zhì),尤其是以提高人或動物營養(yǎng),例如,產(chǎn)生促進(jìn)健康的長鏈ω-3脂肪酸或不飽和ω-9脂肪酸的油料作物(例如,油菜,dowagrosciences,加拿大)。此外,還涵蓋這樣的植物,所述植物通過使用重組dna技術(shù)而含有改變含量的內(nèi)含物質(zhì)或新的內(nèi)含物質(zhì),尤其是以提高原料生產(chǎn),例如,產(chǎn)生提高量的支鏈淀粉的馬鈴薯(例如,馬鈴薯,basfse,德國)。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物特別適用于控制以下植物疾?。河^賞植物、蔬菜(例如,白銹菌(a.candida))和向日葵(例如,婆羅門參白銹(a.tragopogonis))上的白銹菌屬物種(albugospp.)(白銹病);蔬菜,油菜(蕓苔鏈格孢(a.brassicola或a.brassicae))、糖用甜菜(細(xì)鏈格孢(a.tenuis))、水果、稻、大豆、馬鈴薯(例如,茄鏈格孢(a.solani)或鏈格孢(a.alternata))、番茄(例如,茄鏈格孢或鏈格孢)和小麥上的鏈格孢屬物種(alternariaspp.)(鏈格孢葉斑病);糖用甜菜和蔬菜上的絲囊霉屬物種(aphanomycesspp.);谷類和蔬菜上的殼二孢屬物種(ascochytaspp.),例如,小麥上的小麥殼二孢(a.tritici)(炭疽病)和大麥上的大麥殼二孢(a.hordei);平臍蠕孢屬物種(bipolarisspp.)和內(nèi)臍蠕孢屬物種(drechsleraspp.)(有性型:旋孢腔菌屬物種(cochliobolusspp.)),例如,玉米上的小斑病(玉蜀黍內(nèi)臍蠕孢(d.maydis))或大斑病(玉米平臍蠕孢(b.zeicola)),例如,谷類上的斑枯病(麥根腐平臍蠕孢(b.sorokiniana))以及例如稻和坪草上的稻平臍蠕孢(b.oryzae);禾谷類上(例如,小麥或大麥上)的禾本科布氏白粉菌(blumeriagraminis)(前稱禾生白粉菌(erysiphegraminis)(白粉病);水果和無核小果(例如,草莓)、蔬菜(例如,萵苣、胡蘿卜、芹菜和卷心菜)、油菜、花卉、藤本植物、林業(yè)植物和小麥上的灰葡萄孢(botrytiscinerea)(有性型:富氏葡萄核盤菌(botryotiniafuckeliana):灰霉病);萵苣上的萵苣盤梗霉(bremialactucae)(霜霉病);闊葉樹和常綠樹上的長喙殼屬物種(ceratocystisspp.)(同義詞:ophiostoma.spp)(腐病或枯萎),例如,榆樹上的榆長喙殼(c.ulmi)(荷蘭榆樹病(dutchelmdisease));玉米(例如,灰斑病:玉蜀黍尾孢(c.zeae-maydis))、稻、糖用甜菜(例如,甜菜生尾孢(c.beticola))、甘蔗、蔬菜、咖啡、大豆(例如,大豆尾孢(c.sojina)或菊池尾孢(c.kikuchii))和稻上的尾孢屬物種(cercosporaspp.)(尾孢菌葉斑(cercosporaleafspot));番茄(例如,黃枝孢(c.fulvum):葉霉病)和谷類上的枝孢屬物種(cladosporiumspp.),例如,小麥上的多主枝孢(c.herbarum)(黑穗病(blackear));禾谷類上的麥角菌(clavicepspurpurea)(麥角病(ergot));玉米(炭色旋孢腔菌(c.carbonum))、禾谷類(例如,禾旋孢腔菌(c.sativus),無性型:麥根腐平臍蠕孢(b.sorokiniana))和稻(例如,宮部旋孢腔菌(c.miyabeanus),無性型:稻長蠕孢(h.oryzae))上的旋孢腔菌屬物種(cochliobolusspp.)(無性型:平臍蠕孢屬(bipolaris)或長蠕孢屬(helminthosporium))(葉斑病);棉花(例如,棉刺盤孢(c.gossypii))、玉米(例如,禾生刺盤孢(c.graminicola):炭疽病莖腐)、無核小果、馬鈴薯(例如,c.coccodes:黑斑病)、菜豆(例如,豆刺盤孢(c.lindemuthianum))和大豆(例如,平頭刺盤孢(c.truncatum)或盤長孢狀刺盤孢(c.gloeosporioides))上的刺盤孢屬物種(colletotrichumspp.)(有性型:小叢殼屬(glomerella))(炭疽病);伏革菌屬物種(corticiumspp.),例如,稻上的笹木伏革菌(c.sasakii)(紋枯病(sheathblight));大豆和觀賞植物上的山扁豆生棒孢菌(corynesporacassiicola)(葉斑病);cycloconium屬物種,例如,橄欖樹上的c.oleaginum;果樹上、藤本植物上(例如,鵝掌楸柱孢(c.liriodendri),有性型:鵝掌楸新叢赤殼(neonectrialiriodendri):黑腳病(blackfootdisease))和觀賞植物上的柱孢屬(cylindrocarpon)物種(例如,果樹潰瘍病或幼藤衰敗,有性型:叢赤殼屬(nectria)或新叢赤殼屬(neonectria)物種);大豆上的dematophoranecatrix(有性型:褐座堅殼(rosellinianecatrix)(根和莖腐病);間座殼屬物種(diaporthespp.),例如,大豆上的菜豆間座殼(d.phaseolorum)(猝倒);玉米、禾谷類如大麥(例如,大麥網(wǎng)斑內(nèi)臍蠕孢(d.teres),網(wǎng)斑病(netblotch))和小麥(例如,偃麥草內(nèi)臍蠕孢(d.tritici-repentis):黃褐斑病(tanspot))、稻和坪草上的內(nèi)臍蠕孢屬物種(drechsleraspp.,同義詞:長蠕孢屬,有性型:核腔菌屬(pyrenophora));藤本植物上的esca(梢枯病(dieback)、干枯病(apoplexy)),由層臥孔菌(fomitiporiapunctata)(同義詞:斑孔木層孔菌(phellinuspunctata))、地中海層臥孔菌(f.mediterranea)、phaeomoniellachlamydospora(之前phaeoacremoniumchlamydosporum)、phaeoacremoniumaleophilum和/或botryosphaeriaobtusa引起;仁果(梨痂囊腔菌(e.pyri))、無核小果(e.veneta:炭疽病)和藤本植物(痂囊腔菌(e.ampelina):炭疽病)上的痂囊腔菌屬物種(elsinoespp.);稻上的稻葉黑粉菌(entylomaoryzae)(葉黑粉病(leafsmut));小麥上的附球菌屬物種(epicoccumspp.)(黑霉病(blackmold));糖用甜菜(甜菜白粉菌(e.betae))、蔬菜(例如,豌豆白粉菌(e.pisi)),如葫蘆(例如,二孢白粉菌(e.cichoracearum))、卷心菜、油菜(例如,十字花科白粉菌(e.cruciferarum))上的白粉菌屬物種(erysiphespp.)(白粉病);果樹、藤本植物和觀賞木上的eutypalata(彎孢殼(eutypa)潰瘍病或梢枯病,無性型:cytosporinalata,同義詞:libertellablepharis);玉米(例如,大斑凸臍蠕孢(e.turcicum))上的凸臍蠕孢屬物種(exserohilumspp.)(同義詞:長蠕孢屬);多種植物上的鐮孢屬物種(fusariumspp.)(有性型:赤霉屬(gibberella))(萎蔫、根或莖腐病),如禾谷類(例如,小麥或大麥)上的禾本科鐮孢(f.graminearum)或大刀鐮孢(f.culmorum)(根腐病、瘡痂病(scab)或赤霉病(headblight))、番茄上的尖鐮孢(f.oxysporum)、大豆上的腐皮鐮孢(f.solani)(大豆?;?f.sp.glycines),同義詞:f.virguliforme)和f.tucumaniae及f.brasiliense(均引起猝死癥)和玉米上的輪枝鐮孢(f.verticillioides);禾谷類(例如,小麥或大麥)和玉米上的禾頂囊殼(gaeumannomycesgraminis)(全蝕病(take-all));禾谷類(例如,玉蜀黍赤霉(g.zeae)和稻(例如,藤倉赤霉(g.fujikuroi):惡苗病(bakanaedisease))上的赤霉屬物種(gibberellaspp.);藤本植物、仁果和其他植物上的圍小叢殼(glomerellacingulata)和棉花上的棉小叢殼(g.gossypii);稻上的顆粒染色復(fù)合體(grainstainingcomplex);藤本植物上的葡萄球座菌(guignardiabidwellii)(黑腐病(blackrot));薔薇科植物和杜松上的膠銹菌屬物種(gymnosporangiumspp.),例如,梨上的g.sabinae(銹病);玉米、禾谷類和稻上的長蠕孢屬物種(helminthosporiumspp.)(同義詞:內(nèi)臍蠕孢屬,有性型:旋孢腔菌屬);駝孢銹菌屬物種(hemileiaspp.),例如,咖啡上的咖啡駝孢銹菌(h.vastatrix)(咖啡葉銹病);藤本植物上的褐斑擬棒束孢(isariopsisclavispora)(同義詞:cladosporiumvitis);大豆和棉花上的菜豆殼球孢(macrophominaphaseolina)(同義詞:macrophominaphaseoli)(根莖腐病);禾谷類(例如,小麥或大麥)上的microdochiumnivale(同義詞:雪腐鐮孢fusariumnivale)(粉雪霉病(pinksnowmold));大豆上的擴(kuò)散叉絲殼(microsphaeradiffusa)(白粉病);核果和其他薔薇科植物上的鏈核盤菌屬物種(moniliniaspp.),例如,核果鏈核盤菌(m.laxa)、m.fructicola和果生鏈核盤菌(m.fructigena)(花腐枝枯病、褐腐病);禾谷類、香蕉、無核小果和落花生上的球腔菌屬物種(mycosphaerellaspp.),如小麥上的禾生球腔菌(m.graminicola)(無性型:小麥殼針孢(septoriatritici),殼針孢斑枯病)或香蕉上的斐濟(jì)球腔菌(m.fijiensis)(黑葉斑病(blacksigatokadisease));卷心菜(例如,蕓苔霜霉(p.brassicae))、油菜(例如,寄生霜霉(p.parasitica))、洋蔥(例如,蔥霜霉(p.destructor))、甘蔗(煙草霜霉(p.tabacina))和大豆(例如,東北霜霉(p.manshurica))上的霜霉屬物種(peronosporaspp.)(霜霉病);大豆上的豆薯層銹菌(phakopsorapachyrhizi)和山馬蝗層銹菌(p.meibomiae)(大豆銹病);瓶霉屬物種(phialophoraspp.),例如藤本植物(例如,p.tracheiphila和p.tetraspora)和大豆(例如,p.gregata:莖腐病)上;油菜和卷心菜上的黑脛莖點(diǎn)霉(phomalingam)(根莖腐病)和糖用甜菜上的甜菜莖點(diǎn)霉(p.betae)(根腐病、葉斑病和猝倒);向日葵、藤本植物(例如,葡萄生擬莖點(diǎn)霉(p.viticola):蔓和葉斑病)和大豆(例如,莖腐?。簆.phaseoli,有性型:菜豆間座殼(diaporthephaseolorum))上的擬莖點(diǎn)霉物種(phomopsisspp.);玉米上的玉蜀黍節(jié)壺菌(physodermamaydis)(褐斑病);在多種植物上的疫霉屬物種(phytophthoraspp.)(萎蔫、根、葉、果實和莖腐病),如紅辣椒和葫蘆(例如,辣椒疫霉(p.capsici))、大豆(例如,大雄疫霉(p.megasperma),同義詞:大豆疫霉(p.sojae))、馬鈴薯和番茄(例如,致病疫霉(p.infestans):晚疫病)和闊葉樹(例如,p.ramorum:櫟樹猝死);卷心菜、油菜、蘿卜和其他植物上的蕓苔根腫菌(plasmodiophorabrassicae)(根腫病(clubroot));單軸霉屬物種(plasmoparaspp.),例如,藤本植物上的葡萄生單軸霉(p.viticola)(葡萄霜霉病)和向日葵上的霍爾斯單軸霉(p.halstedii);薔薇科植物、蛇麻、仁果和無核小果上的叉絲單囊殼屬物種(podosphaeraspp.)(白粉病),例如,蘋果上的白叉絲單囊殼(p.leucotricha);多粘霉屬物種(polymyxaspp.),例如,禾谷類如大麥和小麥(禾谷多粘霉(p.graminis))和糖用甜菜(甜菜多粘霉(p.betae))上的多粘霉,和由此傳播的病毒??;禾谷類例如小麥或大麥上的pseudocercosporellaherpotrichoides(眼斑病,有性型:tapesiayallundae);多種植物上的假霜霉屬(pseudoperonospora)(霜霉病),例如,葫蘆上的古巴假霜霉(p.cubensis)或蛇麻上的葎草假霜霉(p.humili);藤本植物上的八孢假無柄盤菌(pseudopeziculatracheiphila)(紅火病(redfiredisease)或rotbrenner’,無性型:瓶霉屬);多種植物上的柄銹菌屬物種(pucciniaspp.)(銹病),例如禾谷類,如小麥、大麥或黑麥上的小麥柄銹菌(p.triticina)(褐銹病或葉銹病)、條形柄銹菌(p.striiformis)(條銹病或黃銹病)、大麥柄銹菌(p.hordei)(矮銹病)、禾柄銹菌(p.graminis)(稈銹病或黑銹病)或隱匿柄銹菌(p.recondita)(棕銹病或葉銹病),和蘆筍上的天門冬屬柄銹菌(p.asparagi));小麥上的偃麥草核腔菌(pyrenophoratritici-repentis)(無性型:偃麥草內(nèi)臍蠕孢(drechsleratritici-repentis)(褐斑病)或大麥上的圓核腔菌(p.teres)(網(wǎng)斑病);梨孢屬物種(pyriculariaspp.),例如,稻上的稻梨孢(p.oryzae)(有性型:magnaporthegrisea,稻瘟病)和坪草和禾谷類上的灰梨孢(p.grisea);坪草、稻、玉米、小麥、棉花、油菜、向日葵、大豆、糖用甜菜、蔬菜和多種其他植物上的腐霉屬物種(pythiumspp.)(猝倒)(例如,終極腐霉(p.ultimum)或瓜果腐霉(p.aphanidermatum));柱隔孢屬物種(ramulariaspp.),例如,大麥上的r.collo-cygni(柱隔孢葉斑病、生理葉斑病)和糖用甜菜上的甜菜生柱隔孢(r.beticola);棉花、稻、馬鈴薯、坪草、玉米、油菜、馬鈴薯、糖用甜菜、蔬菜和多種其他植物上的絲核菌屬物種(rhizoctoniaspp.),例如,大豆上的立枯絲核菌(r.solani)(根莖腐病)、稻上的立枯絲核菌(紋枯病)、或小麥或大麥上的禾谷絲核菌(r.cerealis)(絲核菌春葉枯病);草莓、胡蘿卜、卷心菜、藤本植物和番茄上的匐枝根霉(rhizopusstolonifer)(黑霉病、軟腐病);大麥、黑麥和黑小麥上的黑麥喙孢(rhynchosporiumsecalis)(灼枯病(scald));稻上的稻帚枝桿孢菌(sarocladiumoryzae)和s.attenuatum(鞘腐病);蔬菜和大田作物,如油菜、向日葵(例如,核盤菌(s.sclerotiorum))和大豆(例如,s.rolfsii或核盤菌)上的核盤菌屬物種(sclerotiniaspp.)(莖腐病或白霉);多種植物上的殼針孢屬物種(septoriaspp.),例如,大豆上的大豆殼針孢(s.glycines)(褐斑病)、小麥上的小麥殼針孢(s.tritici)(殼針孢葉枯病)、和禾谷類上的穎枯殼針孢(s.nodorum)(同義詞:穎枯殼多孢(stagonosporanodorum)(殼多孢葉枯病);藤本植物上的葡萄鉤絲殼(uncinulanecator)(同義詞:葡萄白粉菌(erysiphenecator)(白粉病,無性型:葡萄粉孢(oidiumtuckeri);玉米(例如,s.turcica,同義詞:大斑病長蠕孢(helminthosporiumturcicum))和坪草上的setospaeriaspp.(葉枯病);玉米、高粱和甘蔗上的軸黑粉菌屬物種(sphacelothecaspp.)(黑穗病)(例如,絲軸黑粉菌(s.reiliana):絲黑穗病);葫蘆上的單絲殼(sphaerothecafuliginea)(白粉病);馬鈴薯上的馬鈴薯粉痂菌(spongosporasubterranea)(粉痂病)和由此傳播的病毒??;禾谷類上的殼多孢屬物種(stagonosporaspp.),例如,小麥上的穎枯殼多孢(s.nodorum)(殼多孢黑斑病,有性型:穎枯小球腔菌(leptosphaerianodorum))[同義詞:穎枯暗球腔菌(phaeosphaerianodorum)];馬鈴薯上的內(nèi)生集壺菌(synchytriumendobioticum)(馬鈴薯癌腫病);外囊菌屬物種(taphrinaspp.),例如,桃上的畸形外囊菌(t.deformans)(縮葉病)和李樹上的李外囊菌(t.pruni)(李囊果病(plumpocket));甘蔗、仁果、蔬菜、大豆和棉花上的根串珠霉屬物種(thielaviopsisspp.)(黑根腐病),例如,根串珠霉(t.basicola)(同義詞:chalaraelegans);禾谷類上的腥黑粉菌屬物種(tilletiaspp.)(腥黑穗病(commonbunt或stinkingsmut)),例如,小麥上的小麥腥黑粉菌(t.tritici)(同義詞:小麥網(wǎng)腥黑粉菌(t.carie),小麥腥黑穗病)和小麥矮腥黑粉菌(t.controversa)(矮腥黑穗病);大麥或小麥上的肉孢核瑚菌(typhulaincarnate)(灰雪腐霉病(greysnowmold));條黑粉菌屬物種(urocystisspp.),例如,黑麥上的隱條黑粉菌(u.occulta)(稈黑穗病(stemsmut));蔬菜如菜豆(例如,疣頂單胞銹菌(u.appendiculatu),同義詞:菜豆單胞銹菌(u.phaseoli))和糖用甜菜(例如,甜菜單胞銹菌(u.betae))上的單胞銹菌屬物種(uromycesspp.)(銹病);禾谷類(例如,麥散黑粉菌(u.nuda)和燕麥散黑粉菌(u.avaenae)、玉米(例如,玉蜀黍黑粉菌(u.maydis):玉米黑粉病)和甘蔗上的黑粉菌屬物種(ustilagospp.)(散黑穗病(loosesmut));蘋果(例如,蘋果黑星菌(v.inaequalis))和梨上的黑星菌屬物種(venturiaspp.)(瘡痂病(scab));和多種植物,如水果和觀賞植物、藤本植物、無核小果、蔬菜和大田作物上的輪枝孢屬物種(verticilliumspp.)(萎蔫),例如,草莓、油菜、馬鈴薯和番茄上的大麗花輪枝孢(v.dahliae)。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物還適用于儲存品或收獲物的保護(hù)中和用于材料的保護(hù)中控制有害病原體,尤其是真菌。術(shù)語“材料的保護(hù)”理解為表示,向技術(shù)性無生命材料提供對抗有害微生物(如真菌和細(xì)菌)的侵染和破壞的保護(hù)作用,所述材料如粘合劑、膠、木材、紙張和紙板、紡織品、皮革、顏料分散體、塑料、冷卻潤滑劑、纖維或織物。關(guān)于木材和其他材料的保護(hù),特別關(guān)注以下有害真菌:子囊菌綱(ascomycetes),如ophiostomaspp.、長喙殼屬(ceratocystisspp.)、出芽短梗霉菌(aureobasidiumpullulans)、sclerophomaspp.、毛殼菌屬(chaetomiumspp.)、腐質(zhì)霉屬(humicolaspp.)、彼得殼屬(petriellaspp.)、毛束霉屬(trichurusspp.);擔(dān)子菌綱(basidiomycetes),如粉孢革菌屬(coniophoraspp.)、革蓋菌屬(coriolusspp.)、粘褶菌屬(gloeophyllumspp.)、香菇屬(lentinusspp.)、側(cè)耳屬(pleurotusspp.)、臥孔屬(poriaspp.)、serpulaspp.和干酪菌屬(tyromycesspp.);半知菌綱(deuteromycetes),如曲霉屬(aspergillusspp.)、枝孢屬(cladosporiumspp.)、青霉屬(penicilliumspp.)、木霉屬(trichormaspp.)、鏈格孢屬(alternariaspp.)、擬青霉屬(paecilomycesspp.);和接合菌綱(zygomycetes),毛霉屬(mucorspp.),此外,在儲存品和收獲物的保護(hù)中,以下的酵母真菌值得關(guān)注:假絲酵母屬(candida)和釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)。根據(jù)本發(fā)明的處理方法也可以用于保護(hù)儲存品或收獲物以對抗真菌和微生物攻擊的領(lǐng)域中。根據(jù)本發(fā)明,術(shù)語“儲存品”理解為表示,植物或動物來源的天然物質(zhì)及其經(jīng)加工的形式,其已經(jīng)取自天然生命周期并且對其需要進(jìn)行長期保護(hù)。作物來源的儲存品,如植物或其部分,例如,莖稈、葉、塊莖、種子、果實或谷粒,可以以新鮮采收狀態(tài)或以加工形式來保護(hù),所述加工形式如預(yù)先干燥的、潤濕的、切碎的、研磨的、壓制的或烘烤的,該過程也稱為采收后處理。木材也落入儲存品的定義中,不管是粗制木材形式,如建筑木材、電纜塔和障礙物,或精制成品的形式,如家具或從木材制得的物品。動物來源的儲存品是獸皮、皮革、毛皮、毛發(fā)等。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以防止不利影響,如腐爛、脫色或發(fā)霉。優(yōu)選,“儲存品”理解為植物來源的天然物質(zhì)和其加工形式,更優(yōu)選果實和其加工形式,如仁果、核果、無核小果和柑桔類水果及其加工形式。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以用于提高植物的健康。本發(fā)明還涉及,通過用有效量的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物處理植物、其繁殖材料和/或正在生長或待生長植物的場所來提高植物健康的方法。術(shù)語“植物健康”理解為表示,通過幾個指標(biāo)單獨(dú)或彼此結(jié)合以確定的植物和/或其產(chǎn)品的狀況,所述指標(biāo)如產(chǎn)量(例如,提高的生物量和/或提高的有價值成分的含量)、植物活力(例如,提高的植物生長和/或更綠的葉子(“增綠作用”))、品質(zhì)(例如,提高的特定成分的含量或組成)以及對非生物和/或生物脅迫的耐受性。以上鑒定的植物健康狀況指標(biāo)可以是互相依賴的或可以互為因果。更健康的植物是合乎需要的,因為它們可以導(dǎo)致例如植物或作物的更高產(chǎn)量和/或更高品質(zhì),尤其是采收的植物部分的更高品質(zhì)。更健康的植物也能更好地抵抗生物和/或非生物脅迫。對抗生物脅迫的高抗性又可以允許本領(lǐng)域技術(shù)人員降低使用的農(nóng)藥量并因此減緩對抗相應(yīng)農(nóng)藥的抗性的產(chǎn)生。必須強(qiáng)調(diào),在植物沒有處于生物脅迫下時,并且特別是植物沒有處于農(nóng)害壓力下時,以上所述的本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i化合物和組合物的作用,即,增強(qiáng)的植物健康,也是存在的。例如,對于種子處理和土壤應(yīng)用,明顯的是,與已經(jīng)接受對抗相應(yīng)農(nóng)害的治療性或預(yù)防性處理而可以不受生物脅迫因素?fù)p傷而生長的植物繁殖材料相比,遭受真菌或殺蟲攻擊的植物會顯示出降低的萌發(fā)和出苗,導(dǎo)致較差的植物或作物建植和活力,以及由此導(dǎo)致降低的產(chǎn)量。然而,根據(jù)本發(fā)明的方法導(dǎo)致增強(qiáng)的植物健康,即使在不存在任何生物脅迫的情況下。這意味著,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物的積極作用不能只解釋為本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物的農(nóng)藥活性,而是還基于其它的活性特征。因此,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物的施用也可以在不存在農(nóng)害壓力的情況下進(jìn)行。在一個同等優(yōu)選的實施方案中,本發(fā)明涉及用于提高從植物繁殖材料生長的植物的健康的方法,其中用有效量的至少一種本發(fā)明菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物或組合物處理植物繁殖材料。以下所列的每個植物健康指標(biāo)(選自產(chǎn)量、植物活力、品質(zhì)以及植物對非生物和/或生物脅迫的耐受性),將理解為各自單獨(dú)地或優(yōu)選彼此組合地構(gòu)成本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。根據(jù)本發(fā)明,植物“提高的產(chǎn)量”表示,相應(yīng)植物的產(chǎn)物產(chǎn)量,與在相同條件下但沒有施用本發(fā)明菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i化合物和組合物而產(chǎn)生的植物相同產(chǎn)物的產(chǎn)量相比,增加了可測量的量。對于種子處理,例如,作為接種物和/或葉面施用形式,提高的產(chǎn)量可以通過例如以下改善的植物特性來表征:提高的植物重量;和/或提高的植物高度;和/或提高的生物量,如更高的整體鮮重(fw);和/或提高的每株植物的花朵數(shù)量;和/或更高的谷粒和/或果實產(chǎn)量;和/或更多的分蘗或側(cè)芽(分枝);和/或更大的葉子;和/或提高的芽生長;和/或提高的蛋白質(zhì)含量;和/或提高的含油量;和/或提高的淀粉含量;和/或提高的色素含量;和/或提高的葉綠素含量(葉綠素含量與植物的光合作用速率具有正相關(guān),并因此,葉綠素含量越高,植物產(chǎn)量越高)和/或提高的植物品質(zhì)?!肮攘!焙汀肮麑崱崩斫鉃橛芍参锂a(chǎn)生的具有任何經(jīng)濟(jì)價值的任何植物產(chǎn)物,其在采收后進(jìn)一步被利用,例如,本來意義上的果實、蔬菜、堅果、谷粒、種子、木材(例如,在造林植物的情況中)、花卉(例如,在園林植物、觀賞植物的情況)等。根據(jù)本發(fā)明,產(chǎn)量提高至少4%。通常,產(chǎn)量提高甚至可以更高,例如5至10%,更優(yōu)選10至20%,或甚至20至30%。根據(jù)本發(fā)明,如果在不存在農(nóng)害壓力的情況下,產(chǎn)量提高至少2%。通常,產(chǎn)量提高甚至可以更高,例如,直至4%至5%,或甚至更高。用于植物狀況的另一個指標(biāo)是植物活力。植物活力呈現(xiàn)在幾個方面中,如一般視覺外觀。對于葉面施用,提高的植物活力可以例如通過以下提高的植物特性來表征:提高的植物生活力;和/或提高的植物生長;和/或提高的植物發(fā)育;和/或提高的視覺外觀;和/或提高的植株成活(較少植物歪倒(verse)/植物倒伏和/或較大的葉片;和/或較大的大小;和/或提高的植物高度;和/或提高的分蘗數(shù)量;和/或提高的側(cè)芽數(shù)量;和/或提高的每株植物的花朵數(shù)量;和/或提高的芽生長;和/或增強(qiáng)的光合活性(例如,基于提高的氣孔導(dǎo)度和/或提高的co2同化速率));和/或較早的開花;和/或較早的結(jié)果;和/或較早的谷粒成熟;和/或較少的無效分蘗;和/或較少的死基生葉;和/或較少的輸入需求(如肥料或水);和/或更綠的葉子;和/或在縮短的營養(yǎng)期下的完全成熟;和/或更容易的采收;和/或更快和更均勻的成熟;和/或較長的貨架期;和/或較長的穗(panicle);和/或衰老的延遲;和/或更強(qiáng)壯和/或更有效分蘗;和/或更好的成分可提取性;和/或提高的種子品質(zhì)(對于用于種子生產(chǎn)的下一季中的播種);和/或降低的乙烯產(chǎn)生和/或抑制其被植物吸收。用于植物狀況的另一個指標(biāo)是植物和/或其產(chǎn)物的“品質(zhì)”。根據(jù)本發(fā)明,增強(qiáng)的品質(zhì)表示某些植物特征,如某些成分的含量或組成,與相同條件下但沒有施用本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i化合物和組合物而產(chǎn)生的植物的相同因子相比,增加或提高了可測量的或顯著的量。增強(qiáng)的品質(zhì)可以例如通過以下改善的植物或其產(chǎn)物的品質(zhì)來表征:提高的營養(yǎng)素含量;和/或提高的蛋白質(zhì)含量;和/或提高的含油量;和/或提高的淀粉含量;和/或提高的脂肪酸含量;和/或提高的代謝物含量;和/或提高的類胡蘿卜素含量;和/或提高的糖含量;和/或提高的必需氨基酸含量;和/或改善的營養(yǎng)素組成;和/或改善的蛋白質(zhì)組成;和/或改善的脂肪酸組成;和/或改善的代謝物組成;和/或改善的類胡蘿卜素組成;和/或改善的糖組成;和/或改善的氨基酸組成;和/或改善的或優(yōu)化的果實顏色;和/或改善的葉色;和/或較高的存儲力;和/或采收產(chǎn)物更好的加工性。植物狀況的另一個指標(biāo)是植物對生物和/或非生物脅迫因素的耐受性或抵抗力。生物和非生物脅迫,尤其是長時間的,可以對植物具有有害影響。生物脅迫是由活的生物體引起的,而非生物脅迫是例如由環(huán)境極端情況引起的。根據(jù)本發(fā)明,“對生物和/或非生物脅迫因素增強(qiáng)的耐受性或抵抗力”表示:(1.)與暴露于相同條件但沒有用本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物處理的植物相比,由生物和/或非生物脅迫引起的某些負(fù)面因素可以以可測量的或顯著的量被減少;和(2.)通過本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物對脅迫因素的直接作用,例如,通過其直接破壞微生物或農(nóng)害的殺真菌或殺蟲作用,負(fù)面影響不能被減少,但通過刺激植物自身對抗所述脅迫因素的防御反應(yīng)則可以。由生物脅迫(如病原體和農(nóng)害)引起的負(fù)面因素是公知的并且是由活的生物體引起的,如競爭性植物(例如,雜草)、微生物(如植物病原真菌和/或細(xì)菌)和/或病毒。由非生物脅迫引起的負(fù)面因素也是公知的并且常??梢宰鳛榻档偷闹参锘盍?參見上文)觀察到,例如:較低產(chǎn)量和/或較低活力,對于這兩種影響,實例可以是例如焦枯的葉子、較少的花、過早的成熟、延后的作物成熟、降低的營養(yǎng)價值。非生物脅迫可以例如通過以下引起:溫度的極端情況,如熱或冷(熱脅迫/冷脅迫);和/或溫度的強(qiáng)烈變化;和/或?qū)τ谔囟竟?jié)不尋常的溫度;和/或干旱(干旱脅迫);和/或極端濕度;和/或高鹽度(鹽脅迫);和/或輻射(例如,由于減少的臭氧層引起的提高的uv輻射);和/或提高的臭氧水平(臭氧脅迫);和/或有機(jī)污染(例如,農(nóng)藥的植物毒性量);和/或無機(jī)污染(例如,重金屬污染)。作為生物和/或非生物脅迫因素的結(jié)果,受脅迫植物的數(shù)量和品質(zhì)下降。就品質(zhì)(如上文定義的)而言,生殖發(fā)育通常受到嚴(yán)重影響,在作物上造成對果實或種子重要的后果。蛋白質(zhì)的合成、累積和儲存主要受到溫度的影響;幾乎所有類型的脅迫會減緩生長;多糖合成,結(jié)構(gòu)和存儲都降低或改變:這些影響導(dǎo)致生物量(產(chǎn)量)降低和植物營養(yǎng)價值的改變。如上文指出的,以上針對植物的健康狀況定義的指標(biāo)可以相互依賴并可以互為因果。例如,提高的對生物和/或非生物脅迫的抵抗力可以導(dǎo)致更好的植物活力,例如,更好和更大的作物,并且因此導(dǎo)致提高的產(chǎn)量。相反,發(fā)育更好的根系可以導(dǎo)致提高的對生物和/或非生物脅迫的抵抗力。然而,這些相互依賴性和相互作用不是全部都是已知的,也沒有全面了解,因此分開描述這些不同的指標(biāo)。在一個實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以實現(xiàn)植物或其產(chǎn)物提高的產(chǎn)量。在另一個實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以實現(xiàn)植物或其產(chǎn)物提高的活力。在另一個實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以實現(xiàn)植物或其產(chǎn)物提高的品質(zhì)。再在另一個實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以實現(xiàn)植物或其產(chǎn)物提高的對抗生物脅迫的耐受性和/或抵抗力。再在另一個實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以實現(xiàn)植物或其產(chǎn)物提高的對抗非生物脅迫的耐受性和/或抵抗力。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物可以按原樣使用或以組合物的形式使用,通過用殺真菌有效量的活性物質(zhì)處理真菌,或處理待保護(hù)免受真菌攻擊的植物、植物繁殖材料(如種子)、土壤、表面、材料或房間??梢栽谥参铩⒅参锓敝巢牧?如種子)、土壤、表面、材料或房間被真菌感染之前和之后,進(jìn)行施用。術(shù)語“有效量”表示,足以在栽培植物上或在材料保護(hù)中控制有害真菌并且對所處理的植物不導(dǎo)致實質(zhì)性損害的量。這樣的量可以在寬范圍中變動并且取決于各種因素,如待控制的真菌物種,處理的栽培植物或材料,氣候條件、和使用的本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物或其鹽??梢杂帽景l(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物在種植或移栽時或之前預(yù)防性地處理植物繁殖材料。本發(fā)明的菌株可以配制成用于植物的接種物。術(shù)語“接種物”表示包括本發(fā)明的分離菌株和任選的載體(其可以包括生物學(xué)上可接受的介質(zhì))的組合物。這樣的接種物和其他合適的組合物可以通過常規(guī)方式(參見,例如,h.d.burges:formulationofmicrobialbiopesticides,springer,1998)制成組合物,所述組合物除了活性成分以外,還包含至少一種助劑(惰性成分)。為了生產(chǎn)干制劑,可以將細(xì)菌細(xì)胞,優(yōu)選孢子,懸浮于合適的干載體(例如,粘土)中。為了生產(chǎn)液體制劑,可以將細(xì)胞,優(yōu)選孢子,懸浮于合適的液體載體(例如,水基的)至所需的孢子密度??梢酝ㄟ^在瓊脂培養(yǎng)基(例如,馬鈴薯葡萄糖瓊脂)上在約20至約30℃的溫度下孵育幾天后鑒定集落形成單位(cfu)的數(shù)量來測定每ml的孢子密度數(shù)。根據(jù)一個實施方案,根據(jù)本發(fā)明的組合物的各單獨(dú)組分,如試劑盒的部件或二元或三元混合物的部分,可以通過使用者自身在噴霧罐或任何其他種類的用于施用的容器(例如,種子處理器鼓、種子造粒機(jī)、背負(fù)式噴霧器)中混合,并且如果合適,可以添加其它助劑。當(dāng)活的生物體,如本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株,形成此類試劑盒的一部分時,必須小心,試劑盒的其他部分(例如,化學(xué)農(nóng)藥)和其它助劑的選擇和含量應(yīng)當(dāng)不影響微生物農(nóng)藥在使用者混合的組合物中的生活力。尤其是對于殺細(xì)菌劑和溶劑,必須考慮與相應(yīng)微生物農(nóng)藥的相容性。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)和/或式i化合物可以轉(zhuǎn)化成慣用類型的農(nóng)用化學(xué)組合物,例如,溶液、乳液、懸浮液、散粉劑、粉末、糊狀物、顆粒、壓制物、膠囊,及其混合物。組合物類型的實例是懸浮液(例如,sc、od、fs)、可乳化濃縮物(例如,ec)、乳液(例如,ew、eo、es、me)、膠囊(例如,cs、zc)、糊狀物、錠劑、可潤濕的粉末或撒粉劑(例如,wp、sp、ws、dp、ds)、壓制物(例如,br、tb、dt)、顆粒(例如,wg、sg、fg、gg、mg)、殺蟲物品(例如,ln),以及用于處理植物繁殖材料(如種子)的凝膠制劑(例如,gf)。這些和更多組合物類型定義于“catalogueofpesticideformulationtypesandinternationalcodingsystem”,technicalmonographno.2,第6版,2008年5月,croplifeinternational??梢砸砸阎绞街苽浣M合物,如molletandgrubemann,formulationtechnology,wileyvch,weinheim,2001;或knowles,newdevelopmentsincropprotectionproductformulation,agrowreportsds243,t&finforma,london,2005中所述的。合適的助劑是溶劑、液體載體、固體載體或填充劑、表面活性劑、分散劑、乳化劑、潤濕劑、佐劑、增溶劑、滲透增強(qiáng)劑、保護(hù)性膠體、粘附劑、增稠劑、濕潤劑、驅(qū)避劑、引誘劑、攝食刺激劑、配伍劑、殺細(xì)菌劑、抗凍劑、消泡劑、著色劑、增粘劑和粘合劑。合適的溶劑和液體載體是水和有機(jī)溶劑,如中至高沸點(diǎn)的礦物油級分,例如,煤油、柴油;植物或動物來源的油;脂肪族、環(huán)狀或芳香族烴,例如,甲苯、石蠟、四氫化萘、烷基化萘;醇類,例如,乙醇、丙醇、丁醇、芐醇、環(huán)己醇;甘醇;dmso;酮類,例如,環(huán)己酮;酯類,例如,乳酸酯、碳酸酯、脂肪酸酯、γ-丁內(nèi)酯;脂肪酸;膦酸酯;胺;酰胺類,例如,n-甲基吡咯烷酮、脂肪酸二甲基酰胺;及其混合物。合適的固體載體或填充劑是礦物土,例如,硅酸鹽、硅膠、滑石、高嶺土、石灰石、石灰、粘土、白云石、硅藻土、膨潤土、硫酸鈣、硫酸鎂、氧化鎂;多糖類,例如,纖維素、淀粉;肥料,例如,硫酸銨、磷酸銨、硝酸鈉、尿素;植物來源的產(chǎn)物,例如,谷粉、樹皮粉、木粉、堅果殼粉,及其混合物。合適的表面活性劑是表面活性化合物,如陰離子型、陽離子型、非離子型和兩性表面活性劑、嵌段聚合物、聚電解質(zhì),及其混合物。這樣的表面活性劑可以用作乳化劑、分散劑、增溶劑、潤濕劑、滲透增強(qiáng)劑、保護(hù)性膠體或助劑。表面活性劑的實例列于mccutcheon’s,vol.1:emulsifiers&detergents,mccutcheon’sdirectories,glenrock,usa,2008(國際版或北美版)。合適的陰離子表面活性劑是磺酸、硫酸、磷酸、羧酸的堿、堿土或銨鹽,及其混合物。磺酸鹽的實例是烷基芳基磺酸鹽、聯(lián)苯磺酸鹽、α-烯烴磺酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、脂肪酸和油的磺酸鹽、乙氧基化烷基酚的磺酸鹽、烷氧基化芳基酚的磺酸鹽、縮合萘的磺酸鹽、十二烷基-和十三烷基苯的磺酸鹽、萘和烷基萘的磺酸鹽、磺基琥珀酸鹽或磺基琥珀酰胺酸鹽。硫酸鹽的實例是脂肪酸和油的硫酸鹽、乙氧基化烷基酚的硫酸鹽、醇的硫酸鹽、乙氧基化醇的硫酸鹽,或脂肪酸酯的硫酸鹽。磷酸鹽的實例是磷酸鹽酯。羧酸鹽的實例是烷基羧酸鹽和羧化醇或烷基酚乙氧基化物。合適的非離子型表面活性劑是烷氧基化物、n-取代的脂肪酸酰胺、氧化胺、酯、基于糖的表面活性劑、聚合表面活性劑,及其混合物。烷氧基化物的實例是如醇類、烷基酚、胺、酰胺、芳基酚、脂肪酸或脂肪酸酯的化合物,其已經(jīng)進(jìn)行了1至50當(dāng)量的烷氧基化。環(huán)氧乙烷和/或環(huán)氧丙烷可以用于烷氧基化,優(yōu)選環(huán)氧乙烷。n-取代的脂肪酸酰胺的實例是脂肪酸葡糖胺或脂肪酸鏈烷醇酰胺。酯的實例是脂肪酸酯、甘油酯或單甘油酯?;谔堑谋砻婊钚詣┑膶嵗巧嚼婢厶恰⒁已趸嚼婢厶?、蔗糖和葡萄糖酯或烷基聚葡糖苷。聚合表面活性劑的實例是乙烯吡咯烷酮、乙烯醇或乙酸乙烯酯的同聚物或共聚物。合適的陽離子型表面活性劑是季鹽型表面活性劑,例如,具有一個或兩個疏水性基團(tuán)的季銨化合物,或長鏈伯胺的鹽。合適的兩性表面活性劑是烷基甜菜堿和咪唑啉。合適的嵌段聚合物是包含聚環(huán)氧乙烷和聚環(huán)氧丙烷嵌段的a-b或a-b-a型的嵌段聚合物,或包含烷醇、聚環(huán)氧乙烷和聚環(huán)氧丙烷的a-b-c型的嵌段聚合物。合適的聚電解質(zhì)是聚酸或聚堿。聚酸的實例是聚丙烯酸或聚酸梳形聚合物的堿鹽。聚堿的實例是聚乙烯基胺或聚乙烯胺。合適的助劑是其自身具有可忽略的乃至不具有農(nóng)藥活性并且其提高無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物對靶標(biāo)的生物學(xué)性能的化合物。實例是表面活性劑、礦物油或植物油,和其他輔助劑。更多的實例由knowles,adjuvantsandadditives(輔助劑和添加劑),agrowreportsds256,t&finformauk,2006,第5章。合適的增稠劑是多糖(例如,黃原膠、羧甲基纖維素)、無機(jī)粘土(有機(jī)修飾或未修飾的)、聚羧酸鹽和硅酸鹽。合適的殺細(xì)菌劑是溴硝醇和異噻唑啉酮衍生物,如烷基異噻唑啉酮和苯基異噻唑啉酮。合適的抗凍劑是乙二醇、丙二醇、尿素和甘油。合適的消泡劑是硅酮、長鏈醇和脂肪酸的鹽。合適的著色劑(例如,紅色、藍(lán)色或綠色)是低水溶性的色素和水溶性染料。實例是無機(jī)著色劑(例如,氧化鐵、氧化鈦、六氰鐵酸鐵)和有機(jī)著色劑(例如,茜素-、偶氮-和酞菁著色劑)。合適的增粘劑或粘合劑是聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯乙酸酯、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯、生物或合成蠟和纖維素酯?;畹奈⑸?,如本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株,以細(xì)胞或孢子形式形成組合物的一部分時,這樣的組合物可以通過常規(guī)方式(參見,例如,h.d.burges:formulationofmicrobialbiopesticides,springer,1998)制成除了活性成分外還包含至少一種助劑(惰性成分)的組合物。合適的慣用類型的此類組合物是懸浮液、散粉劑、粉末、糊狀物、顆粒、壓制物、膠囊,及其混合物。組合物類型的實例是懸浮液(例如,sc、od、fs)、膠囊(例如,cs、zc)、糊狀物、錠劑、可潤濕的粉末或散粉劑(例如,wp、sp、ws、dp、ds)、壓制物(例如,br、tb、dt)、顆粒(例如,wg、sg、fg、gg、mg)、殺蟲物品(例如,ln),以及用于處理植物繁殖材料(如種子)的凝膠制劑(例如,gf)。在此,必須考慮,每種制劑類型或助劑的選擇不應(yīng)當(dāng)影響組合物儲存過程中以及最終施用于土壤、植物或植物繁殖材料時微生物的生活力。合適的制劑例如在wo2008/002371、us6,955,912、us5,433,107中有提及。合適助劑的實例是本文中前文提及的那些,其中必須考慮此類助劑的選擇和含量不應(yīng)當(dāng)影響組合物中的微生物農(nóng)藥的生活力。尤其對于殺細(xì)菌劑和溶劑,必須考慮與相應(yīng)微生物農(nóng)藥中的相應(yīng)微生物的相容性。此外,含有微生物農(nóng)藥的組合物可以進(jìn)一步含有穩(wěn)定劑或營養(yǎng)素和uv防護(hù)劑。合適的穩(wěn)定劑或營養(yǎng)素例如為α-生育酚、海藻糖、谷氨酸鹽、山梨酸鉀、各種糖,如葡萄糖、蔗糖、乳糖和麥芽糖糊精(h.d.burges:formulationofmicrobialbiopesticides,springer,1998)。合適的uv防護(hù)劑例如是無機(jī)化合物,如二氧化鈦、氧化鋅和氧化鐵色素,或有機(jī)化合物,如二苯甲酮、苯并三唑、苯基三嗪。除了針對包含本文中的化合物i的組合物提及的助劑,組合物還可以任選包含0.1-80%穩(wěn)定劑或營養(yǎng)素和0.1-10%uv防護(hù)劑。農(nóng)用化學(xué)組合物通常包含0.01至95%,優(yōu)選0.1至90%,和特別地0.5至75%重量的活性物質(zhì)?;钚晕镔|(zhì)可以以90%至100%的純度,優(yōu)選95%至100%的純度(根據(jù)nmr光譜)來使用。組合物類型及其制備的實例為:i)水溶性濃縮物(sl,ls)將10-60wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物和5-15wt%潤濕劑(例如,醇烷氧基化物)溶解于水和/或水溶性溶劑(例如,醇)中,補(bǔ)足100wt%。用水稀釋后,活性物質(zhì)溶解。ii)可分散濃縮物(dc)將5-25wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物和1-10wt%分散劑(例如,聚乙烯吡咯烷酮)溶解于有機(jī)溶劑(例如,環(huán)己酮)中,補(bǔ)足100wt%。用水稀釋獲得分散體。iii)可乳化濃縮物(ec)將15-70wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物和5-10wt%乳化劑(例如,十二烷基苯磺酸鈣和乙氧基化蓖麻油)溶解于水不溶性有機(jī)溶劑(例如,芳烴)中,補(bǔ)足100wt%。用水稀釋獲得乳液。iv)乳液(ew、eo、es)將5-40wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物和1-10wt%乳化劑(例如,十二烷基苯磺酸鈣和乙氧基化蓖麻油)溶解于20-40wt%水不溶性有機(jī)溶劑(例如,芳烴)中。通過乳化機(jī),將這個混合物引入水中,補(bǔ)足100wt%,并制成均質(zhì)乳液。用水稀釋獲得乳液。v)懸浮液(sc、od、fs)在攪拌球磨機(jī)中,將20-60wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物粉碎,并添加2-10wt%分散劑和潤濕劑(例如,木質(zhì)素磺酸鈉和醇乙氧基化物)、0.1-2wt%增稠劑(例如,黃原膠)和水,補(bǔ)足100wt%,獲得細(xì)的活性物質(zhì)懸浮液。用水稀釋獲得穩(wěn)定的活性物質(zhì)的懸浮液。對于fs型組合物,加入高達(dá)40wt%的粘合劑(例如,聚乙烯基醇)。vi)水分散顆粒和水溶性顆粒(wg、sg)將50-80wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物細(xì)磨,并添加分散劑和潤濕劑(例如,木質(zhì)素磺酸鈉和醇乙氧基化物),補(bǔ)足100wt%,并通過技術(shù)設(shè)備(例如,擠出、噴霧塔、流化床)制成水分散或水溶性顆粒。用水稀釋獲得穩(wěn)定的活性物質(zhì)的分散液或溶液。vii)水分散性粉末和水溶性粉末(wp、sp、ws)將50-80wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物在轉(zhuǎn)子-定子研磨機(jī)中研磨,并添加1-5wt%分散劑(例如,木質(zhì)素磺酸鈉)、1-3wt%潤濕劑(例如,醇乙氧基化物)和固體載體(例如,硅膠),補(bǔ)足100wt%。用水稀釋獲得穩(wěn)定的活性物質(zhì)的分散體或溶液。viii)凝膠(gw,gf)在攪拌球磨機(jī)中,將5-25wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物粉碎,并添加3-10wt%分散劑(例如,木質(zhì)素磺酸鈉)、1-5wt%增稠劑(例如,羧甲基纖維素)和水,補(bǔ)足100wt%,獲得活性物質(zhì)的細(xì)懸浮液。用水稀釋獲得穩(wěn)定的活性物質(zhì)的懸浮液。ix)微乳液(me)將5-20wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物加入5-30wt%有機(jī)溶劑混合物(例如,脂肪酸二甲基酰胺和環(huán)己酮)、10-25wt%表面活性劑混合物(例如,醇乙氧基化物和芳基酚乙氧基化物)和水,補(bǔ)足100%。將該混合物攪拌1h,以自發(fā)地產(chǎn)生熱力學(xué)穩(wěn)定的微乳液。x)微膠囊(cs)將包含5-50wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物、0-40wt%水不溶性有機(jī)溶劑(例如,芳烴)、2-15wt%丙烯酸單體(例如,甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸和二-或三丙烯酸酯)的油相,分散于保護(hù)性膠體(例如,聚乙烯基醇)的水溶液中。通過自由基引發(fā)劑啟動的自由基聚合導(dǎo)致聚(甲基)丙烯酸酯微膠囊的形成?;蛘撸瑢?-50wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物,0-40wt%水不溶性有機(jī)溶劑(例如,芳烴)和異氰酸酯單體(例如,聯(lián)苯-亞甲基-4,4’-二異氰酸酯)的油相,分散于保護(hù)性膠體(例如,聚乙烯基醇)的水溶液中。添加聚胺(例如,六亞甲基二胺)導(dǎo)致聚脲微膠囊的形成。單體占1-10wt%。wt%相對于整個cs組合物。xi)粉劑(dp、ds)將1-10wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物細(xì)磨并與固體載體(例如,細(xì)碎的高嶺土)密切混合,補(bǔ)足100wt%。xii)顆粒(gr、fg)將0.5-30wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物細(xì)磨并與固體載體(例如,硅酸鹽)組合,補(bǔ)足100wt%。通過擠出、噴霧干燥或流化床來造粒。xiii)超低容量液體(ul)將1-50wt%本發(fā)明的全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)或代謝物溶解于有機(jī)溶劑(例如,芳烴)中,補(bǔ)足100wt%。組合物類型i)至xiii)可以任選包含其它助劑,如0.1-1wt%殺細(xì)菌劑、5-15wt%抗凍劑、0.1-1wt%消泡劑和0.1-1wt%著色劑。用于種子處理的溶液(ls)、懸乳液(se)、可流動濃縮物(fs)、用于干處理的粉末(ds)、用于漿液處理的水分散粉末(ws)、水溶性粉末(ss)、乳液(es)、可乳化濃縮物(ec)和凝膠(gf)通常用于植物繁殖材料(特別是種子)的處理。用于預(yù)混組合物的種子處理制劑類型或土壤施用的優(yōu)選實例是ws、ls、es、fs、wg或cs-類型。通常,用于種子處理應(yīng)用的預(yù)混制劑包含0.5至99.9%,尤其是1至95%所需成分,和99.5至0.1%,尤其是99至5%固體或液體助劑(包括,例如,溶劑,如水),其中基于預(yù)混制劑,助劑可以是0至50%,尤其是0.5至40%含量的表面活性劑。而商業(yè)產(chǎn)品將優(yōu)選配制成濃縮物(例如,預(yù)混組合物(制劑)),最終使用者將正常地使用稀釋制劑(例如,罐混組合物)。用于將本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物施用于或處理植物繁殖材料(尤其是種子)的種子處理方法是本領(lǐng)域已知的,并且包括繁殖材料的涂敷、涂層、涂膜、丸?;徒]施用方法。這樣的方法也適用于根據(jù)本發(fā)明的組合物。在優(yōu)選實施方案中,本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物通過萌發(fā)不受到負(fù)面影響的方法,施用于或處理植物繁殖材料。因此,用于施用于(或處理)植物繁殖材料(如種子)的合適方法的實例是種子拌種、種子包衣或種子大?;?。優(yōu)選植物繁殖材料是種子、插條(即,莖稈)、種球(seedbulb)。盡管認(rèn)為本發(fā)明的方法可以施用于任何生理狀態(tài)的種子,但優(yōu)選種子處于足夠堅固的狀態(tài),使得在處理過程中不發(fā)生損傷。通常,種子將是已經(jīng)從田間采收的種子;從植物取下的種子;以及從任何穗軸、莖稈、外殼和周圍果肉或其他非種子植物材料分離的種子。種子優(yōu)選還將是一定程度生物穩(wěn)定的,從而處理不會對種子引起生物損傷。認(rèn)為可以在種子采收與種子播種之間的任何時間或在播種過程中的任何時間,對種子施以處理(種子指向的應(yīng)用)。還可以在處理之前或之后引發(fā)(prime)種子。在繁殖材料處理過程中,希望本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物中的成分均勻分布并均勻粘附于種子上。處理可以從植物繁殖材料(如種子)上的含有組合(例如,活性成分的混合物)的制劑的薄膜(涂敷(dressing))——其中初始大小和/或形狀可識別,至中間狀態(tài)(如涂層(coating)),至較厚的膜(如用許多層不同材料(如,載體,例如,粘土;不同制劑,如其他活性成分的制劑;聚合物;和著色劑)丸?;?pelleting))——其中種子的初始形狀和/或大小不再可識別。本發(fā)明的一個方面包括將本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物以靶向方式施用于植物繁殖材料,包括將組合物中成分放置在整個植物繁殖材料上或僅放置在其一部分上,包括只放置在單側(cè)或單側(cè)的一部分上。從ep954213b1和wo06/112700提供的描述中,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解這些施用方法。本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物還可以以“丸劑”或“丸粒”或合適基質(zhì)的形式來使用,將處理過的丸劑或基質(zhì)放置或播種在植物繁殖材料旁邊。這樣的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的,特別是在ep1124414、wo07/67042和wo07/67044中。將本文中所述的本發(fā)明菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物施用于植物繁殖材料上,還包括通過將一個或多個含有農(nóng)藥的顆粒放置在經(jīng)農(nóng)藥處理過的種子旁邊,以保護(hù)用本發(fā)明的組合處理過的植物繁殖材料,其中農(nóng)藥的含量將使得經(jīng)農(nóng)藥處理過的種子加上含有農(nóng)藥的顆粒一起包含有效劑量的農(nóng)藥,并且農(nóng)藥處理過的種子中含有的農(nóng)藥劑量低于或等于農(nóng)藥的最大無植物毒性劑量。這樣的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的,特別是在wo2005/120226中。將本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物施用于種子上,還包括種子上的控釋涂層,其中本發(fā)明組合物中的成分摻入可以隨著時間釋放所述成分的材料中??蒯尫N子處理技術(shù)的實例是本領(lǐng)域公知的并且包括聚合物膜、蠟或其他種子涂層,其中所述成分可以摻入控釋材料中或應(yīng)用在兩材料層之間,或兩者??梢砸匀魏嗡桧樞蚧蛲瑫r,將本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物和組合物施用于種子來處理種子。種子處理可以針對未播種的種子進(jìn)行,并且術(shù)語“未播種的種子”意在包括處于種子采收與為了植物發(fā)芽和生長的目的在田間播種種子之間的任何時間段的種子。對未播種的種子的處理不旨在包括其中將活性物質(zhì)施用于土壤的那些實踐,但包括種植過程中靶向種子的任何施用實踐。優(yōu)選,處理在種子播種前進(jìn)行,使得播種的種子已經(jīng)用本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物或組合物預(yù)處理過。特別地,優(yōu)選種子涂層或種子丸?;?。作為處理的結(jié)果,成分粘附于種子上并且因此可用于農(nóng)害控制。處理過的種子可以按照與任何其他活性成分處理過的種子一樣的方式儲存、操作、播種和耕作。特別地,本發(fā)明涉及用于保護(hù)植物繁殖材料免受農(nóng)害和/或提高從所述植物繁殖材料生長的植物的健康的方法,其中用有效量的本發(fā)明菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物或組合物,處理播種植物繁殖材料的土壤。特別地,本發(fā)明涉及用于保護(hù)植物繁殖材料免受農(nóng)害的方法,其中用有效量的本發(fā)明的菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物或組合物,處理其中播種植物繁殖材料的土壤。特別地,本發(fā)明涉及用于保護(hù)植物繁殖材料免受有害真菌的方法,其中用有效量的本發(fā)明的菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物或組合物,處理其中播種植物繁殖材料的土壤。特別地,本發(fā)明涉及用于保護(hù)植物繁殖材料免受動物農(nóng)害(昆蟲、螨蟲或線蟲)的方法,其中用有效量的本發(fā)明的菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物或組合物,處理其中播種植物繁殖材料的土壤。使用者通常從預(yù)定劑量裝置、背負(fù)式噴霧器、噴霧罐、噴灑飛機(jī)或灌溉系統(tǒng)來施用本發(fā)明的組合物。通常,用水、緩沖液和/或其它助劑將農(nóng)用化學(xué)組合物制成所需的施用濃度,并且因此獲得根據(jù)本發(fā)明的即可使用的噴霧液體或農(nóng)用化學(xué)組合物。通常,每公頃農(nóng)業(yè)有用面積施用20至2000升,優(yōu)選50至400升該即可使用的噴霧液體。處理植物繁殖材料(尤其是種子)時,本文中公開的組合物在二至十倍稀釋后,在即可使用的制備物中提供0.01至60%重量,優(yōu)選0.1至40%的活性成分濃度。施用可以在播種前或播種過程中進(jìn)行。用于將本發(fā)明的菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物或組合物施用于植物繁殖材料(尤其是種子)上的方法,包括植物繁殖材料的涂敷、涂層、?;?、撒粉、浸泡和犁溝內(nèi)(in-furrow)施用方法。優(yōu)選,通過使得不會誘導(dǎo)發(fā)芽的方法,例如通過種子涂敷、?;?、涂層或撒粉,將本發(fā)明的菌株、全培養(yǎng)液、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、式i的化合物或組合物施用于植物繁殖材料上。將本發(fā)明的菌株用于作物保護(hù)中時,其中菌株作為葉面處理施用或施用至土壤,施用率通常為約1×106至5×1015(或更高)cfu/ha,優(yōu)選約1×107至約1×1013cfu/ha,甚至更優(yōu)選1×109至5×1012cfu/ha。將本發(fā)明的菌株用于種子處理中時,關(guān)于植物繁殖材料的施用率通常為約1×109至1×1012(或更高)cfu/種子,優(yōu)選約1×103至約1×1010cfu/種子,和甚至更優(yōu)選約1×103至約1×106cfu/種子?;蛘?,關(guān)于植物繁殖材料的施用率優(yōu)選為約1×107至約1×1016(或更高)cfu/100kg種子,優(yōu)選1×109至約1×1015cfu/100kg種子,甚至更優(yōu)選1×1011至約1×1015cfu/100kg種子。使用無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)和/或式i的化合物時,固體材料(干物質(zhì))被認(rèn)為是活性成分,例如,在液體制劑的情況中,在干燥或蒸發(fā)提取介質(zhì)或懸浮介質(zhì)后獲得的。用于植物保護(hù)中時,根據(jù)所需的作用類型,施用的活性成分量為0.001至2kg/ha,優(yōu)選0.005至2kg/ha,更優(yōu)選0.05至0.9kg/ha,并且特別是0.1至0.75kg/ha。在植物繁殖材料(如種子)的處理中,例如,通過給種子撒粉、涂層或澆灌,通常需要每100公斤植物繁殖材料(優(yōu)選種子)0.1至1000g,優(yōu)選1至1000g,更優(yōu)選1至100g活性成分量。用于材料或儲存產(chǎn)品的保護(hù)中時,施用的活性成分的量取決于施用區(qū)域的種類和所需的效果。通常用于材料保護(hù)中的量為每立方米處理材料0.001g至2kg,優(yōu)選0.005g至1kg活性成分。根據(jù)一個實施方案,本發(fā)明組合物的各組分,如試劑盒的部分或二元或三元混合物的部分,可以通過使用者自己在噴霧罐或任何其他種類的用于施用的容器(例如,種子處理器鼓、種子粒化機(jī)、背負(fù)式噴霧器)中混合,并且如果合適,可以加入其它助劑。如果活的生物體,如本發(fā)明的菌株,形成此類試劑盒的一部分,必須小心,組分(例如,化學(xué)農(nóng)藥)和其它助劑的選擇和量不應(yīng)當(dāng)影響微生物在使用者混合的組合物中的生活力。尤其是對于殺細(xì)菌劑和溶劑,必須考慮與相應(yīng)微生物的相容性。各種類型的油、潤濕劑、助劑、肥料或微量營養(yǎng)素和其它農(nóng)藥(例如,除草劑、殺昆蟲劑、殺真菌劑、生長調(diào)節(jié)劑、安全劑、生物農(nóng)藥)可以加入本發(fā)明的菌株、無細(xì)胞提取物、培養(yǎng)物基質(zhì)、代謝物、式i的化合物或組合物,作為預(yù)混物,或如果合適,直到臨施用前加入(罐混合)。這些試劑可以與根據(jù)本發(fā)明的組合物以1:100至100:1的重量比混合,優(yōu)選1:10至10:1。優(yōu)選,本發(fā)明的組合物包含其它生物農(nóng)藥。甚至更優(yōu)選,本發(fā)明的組合物除了助劑和至少一種式i的化合物外,還包含微生物農(nóng)藥。農(nóng)藥通常是通過其作用來阻止農(nóng)害、使農(nóng)害失能、殺滅農(nóng)害或妨礙農(nóng)害的化學(xué)或生物學(xué)劑(如病毒、細(xì)菌、抗微生物劑或消毒劑)。靶農(nóng)害可以包括破壞財產(chǎn)、造成滋擾、傳播疾病或構(gòu)成疾病載體的昆蟲、植物病原體、雜草、軟體動物、鳥類、哺乳動物、魚、線蟲(蛔蟲)和微生物。術(shù)語農(nóng)藥還包括改變預(yù)期的植物生長、開花或繁殖速率的植物生長調(diào)節(jié)劑;引起葉或其他樹葉從植物掉落的落葉劑,通常以有助于采收;促進(jìn)活組織(如不需要的植物頂端)干燥的干燥劑;激活植物用于對抗某些農(nóng)害的防御生理學(xué)的植物激活劑;降低農(nóng)藥在作物上的不合需要的除草作用的安全劑;和影響植物生理學(xué)以提高植物生長、作物的可采收物的生物量、產(chǎn)量或任何其他品質(zhì)參數(shù)的植物生長促進(jìn)劑。實施例將通過以下實施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。以下實施例是為了舉例說明的目的,并且不是用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1:本發(fā)明的新細(xì)菌菌株的分離從多個歐洲位置(包括德國)收集了土壤樣品。通過對這些土壤應(yīng)用公知的微生物分離程序,發(fā)明人獲得了多個細(xì)菌,將其進(jìn)一步使用常規(guī)分離技術(shù)以提供本文中所述的純分離物。按照標(biāo)準(zhǔn)微生物富集技術(shù)(c.a.reddy,t.j.beveridge,j.a.breznak,g.a.marzluf,t.m.schmidt和l.r.snyder(編輯),methodsforgeneralandmolecularmicrobiology,am.soc.microbiol.,washington,districtofcolumbia),分離每種類型的細(xì)菌。以下菌株已經(jīng)分離并且于2013年2月20日依據(jù)布達(dá)佩斯條約保藏于德意志微生物和培養(yǎng)物保藏中心(deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturen,dsmz):1)以保藏號dsm26969保藏于dsmz的lu16774,2)以保藏號dsm26970保藏于dsmz的lu17007,3)以保藏號dsm26971保藏于dsmz的lu17015。實施例2-新細(xì)菌菌株的表征實施例2.1:16s-rdna測序在dsmz,braunschweig,德國,通過pcr擴(kuò)增的16srdna的直接測序,測定了這些類芽孢桿菌菌株的16srrna基因序列。根據(jù)制造商的說明,使用來自epicentrebiotechnologies的masterpuretm革蘭氏陽性dna純化試劑盒,進(jìn)行了基因組dna提取。按照之前所述(int.j.syst.bacteriol.46,1088-1092,1996),進(jìn)行了16srdna的pcr-介導(dǎo)的擴(kuò)增和pcr產(chǎn)物的純化。按照制造商實驗方案的指導(dǎo),使用terminatorv1.1環(huán)測序試劑盒(appliedbiosystems),對純化的pcr產(chǎn)物測序。使用來自appliedbiosystems的3500xl遺傳分析儀,將序列反應(yīng)物電泳。序列的不定性可能是由于單個基因組內(nèi)存在幾個具有不同序列的編碼16srrna的順反子(j.bacteriol.178(19),5636-5643,1996)。將從菌株得到的序列數(shù)據(jù)輸入比對編輯器ae2(http://iubio.bio.indiana.edu/soft/molbio/unix/ae2.readme)中,根據(jù)所得到的rrna分子的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行人工比對,并與屬于厚壁菌門(firmicutes)的生物體的代表性16srrna基因序列進(jìn)行比較(nucl.acidsres.27,171-173,1999)。為了比較,從embl和rdp數(shù)據(jù)庫獲得16srrna序列。本發(fā)明菌株的16srrna序列列于序列表中,如表2中所示。表2:類芽孢桿菌菌株的16srrna的序列表參考號通過在所比較序列的比對中進(jìn)行序列的成對比較,計算了以%計的16srrna基因同一性?;诔蓪π蛄斜葘M(jìn)行的僅兩個序列的比較,在本文中表示為二元值(binaryvalue)。其他值所基于的是比較中全部序列的多重序列比對。來自多重序列比較的較高同一性值是由所比較序列的序列數(shù)據(jù)具有不同長度引起的,導(dǎo)致了較短的比對。來自三個新菌株lu16774、lu17007和lu17015的完整rdna序列的成對比較的%同一性為99.5%至99.9%(表3,二元值)。表3:三個新的類芽孢桿菌菌株的完整16srrna序列的%同一性(括號中為二元值)。三個新菌株lu16774、lu17007和lu17015的完整16srrna序列與相關(guān)分類群的比較(參見圖9),揭示了與皮爾瑞俄類芽孢桿菌(模式菌株dsm8320)具有99.8%的高同一性百分?jǐn)?shù)。對于皮爾瑞俄類芽孢桿菌與新菌株的成對序列比對,二元值分別如下:lu6774:99.5%,lu17007:99.5%;和lu17015,99.7%同一性。對新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015所屬物種的最終評價,基于16srrna序列數(shù)據(jù)是不可能的。針對皮爾瑞俄類芽孢桿菌nrrlbd-62的完整rdna的測序獲得與皮爾瑞俄類芽孢桿菌(模式菌株dsm8320)的100.0%同一性,證實針對這個菌株bd-62的物種命名皮爾瑞俄類芽孢桿菌(參見圖9)。通過與皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62的16srrna序列的比較,獲得了99.8%的同一性值,證實了所有三個新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015與皮爾瑞俄類芽孢桿菌的密切關(guān)系(參見圖9)。為了構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹,使用了arb包的操作(nucl.acidsres.35,7188-7196,2007):基于進(jìn)化距離值,使用jukes和cantor的校正(mol.biol.evol.4,406-425,1987),通過鄰接法(jukes,t.h.&cantorc.r.(1969)。evolutionofproteinmolecules.inmammalianproteinmetabolism,pp.21-132.h.n.munro.編輯,newyork:academicpress),構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)生樹。通過將耐熱科恩氏菌的16srrna基因序列包括至分析中來確定樹根。系統(tǒng)樹下面的比例尺表示每100個核苷酸1個核苷酸置換。圖10中給出了結(jié)果。這些序列的系統(tǒng)發(fā)生樹(圖10)顯示出三個新菌株lu16774、lu17007和lu17015彼此最相關(guān),對于它們之每一個,已知的最相關(guān)親屬是皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株nrrlbd-62。實施例2.2:riboprint-分析使用qualiconriboprintersystem進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化的、自動化的核糖體分型。riboprinter系統(tǒng)將核糖體分型的分子處理步驟組合在單機(jī)自動化儀器中。該程序包括細(xì)胞裂解、用限制性酶ecori消化染色體dna、通過電泳分離片段、dna片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜、與自大腸桿菌的rrnb操縱子產(chǎn)生的探針雜交、化學(xué)發(fā)光檢測探針與含有rrn操縱子序列的片段的雜交、圖像檢測和riboprint模式的計算機(jī)化分析(foodtechnology50(1),77-81,1996;proc.natl.acad.sci.usa92,5229-5233,1995;int.journ.syst.bact.44(3),454-460,1994)。使用限制性酶ecori,通過dsmz德國,使用新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015,與皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62相比,進(jìn)行了核糖體分型。使用riboprinter系統(tǒng)的軟件、集成dupont識別文庫以及bionumerics軟件(appliedmaths,比利時),比較了所得到的模式。所有三個新菌株與bd-62的相似性在0.24至0.5之間(圖11)。三個新菌株歸在兩個組中,第一個包含lu17015,而第二個組中包含菌株lu16774和lu17007。沒有一個新菌株與dupont識別文庫內(nèi)的任何菌株具有高于0.84的相似性,并且因此沒有得到自動識別?;赿upont識別文庫的條目dup-13142(基于皮爾瑞俄類芽孢桿菌dsm8320的條目),菌株bd-62已經(jīng)被鑒定為皮爾瑞俄類芽孢桿菌。實施例2.3:形態(tài)學(xué)和生理學(xué)表征在dsmz,以類似于gordon,r.e.,haynes,w.c.&pang.c.h.-n.(1973):thegenusbacillus,agriculturehandbookno.427.washingtondc:usdepartmentofagriculture中所述的方法,表征了菌株。結(jié)果在表4中給出。表4:本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的表征數(shù)據(jù)以及與已知的皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株nrrlbd-62的比較。*n.g.=無生長在dsmz進(jìn)行了細(xì)胞脂肪酸分析,所有菌株顯示出類芽孢桿菌屬物種的典型特征。使用可得的遺傳、生理和生物化學(xué)數(shù)據(jù),證實菌株lu16774、lu17007和lu17015屬于類芽孢桿菌屬。因為菌株lu16774、lu17007和lu17015以及bd-62從葡萄糖產(chǎn)生氣體,所以它們均不屬于杰米拉類芽孢桿菌(paenibacillusjamilae)。主要可以使用從一些底物產(chǎn)酸的特征(int.j.syst.bacteriol.43(2),388-390,1993;in.j.syst.bacteriol.46(6),988-1003,1996),進(jìn)行皮爾瑞俄類芽孢桿菌和多粘類芽孢桿菌之間的表型區(qū)分。沒有一個新菌株與表4中針對這兩個物種之任一個完全列出的特征完全匹配,但可得的遺傳、生理和生物化學(xué)數(shù)據(jù)總體上最可能指向物種皮爾瑞俄類芽孢桿菌和多粘類芽孢桿菌或至少與皮爾瑞俄類芽孢桿菌和多粘類芽孢桿菌非常密切相關(guān)的另一個物種。由于迄今為止描述的類芽孢桿菌物種的眾多性,故不可能基于表4的生理學(xué)和形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)確定所測試的三個分離物的正確分類學(xué)物種(rainerborriss,humboldtuniversityberlin,未公開的結(jié)果)。然而,完全確定這個屬內(nèi)的物種是不可能的?;?6s-rdna分析,發(fā)現(xiàn)最密切相關(guān)的物種和菌株是皮爾瑞俄類芽孢桿菌bd-62(參見,例如,圖11)。實施例2.4:基于編碼dnan、gyrb、recf、recn和rpoa的基因的系統(tǒng)發(fā)生分析已經(jīng)從完整基因組序列或從公共數(shù)據(jù)庫中提取了編碼dnan、gyrb、recf、recn和rpoa的基因的核苷酸序列(如表28中列出的序列表)。用全對全的方法(allagainstallapproach)產(chǎn)生了同一性表(圖12至16),在所述方法中,將每個序列與每另一個序列比對。用程序針(embosspackage6.6.0;trendsingenetics16(6);276-277)進(jìn)行了序列比對。使用了標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)(空位形成10.0;空位延伸0.5)?;诒葘τ嬎懔送恍栽u分,沒有考慮任何空位。對于系統(tǒng)發(fā)生樹(圖17至21),使用clustalomega(版本1.2.0;molecularsystemsbiology7:539,doi:10.1038/msb.2011.75)進(jìn)行了多序列比對。通過最大似然法,使用軟件dnaml(在phylip3.696包中執(zhí)行;felsenstein1981,http://evolution.genetics.washington.edu/phylip.html),計算了系統(tǒng)發(fā)生樹。使用f84距離模型,同時使用二(2)的轉(zhuǎn)換/顛換率(transition/transversionratio),建立了系統(tǒng)樹圖。用工具dendroscope(http://dendroscope.org/)繪制樹。表28:類芽孢桿菌菌株的dnan、gyrb、recf、recn和rpoadna序列的序列表參考號實施例2.5:核心基因組比較和aai矩陣使用gieβen大學(xué)的軟件包edgar(bmcbioinformatics10,154,2009;(https://edgar.computational.bio.uni-giessen.de/cgi-bin/edgar.cgi))進(jìn)行了基因組比較。使用軟件包edgar,基于完整基因組序列和aai矩陣值,進(jìn)行了核心基因組的確定和系統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果顯示于圖22。實施例3:用于體內(nèi)測試的菌株的生長(可發(fā)酵性)對于溫室和田間試驗,首先將類芽孢桿菌菌株生長于isp2平板上(來自bd[usa]的即可使用瓊脂,目錄編號277010)。此后,在含有液體isp2培養(yǎng)基的帶擋板的搖瓶中接種來自瓊脂平板的菌落并在150rpm和25℃下孵育5-7天。根據(jù)該測試,將全培養(yǎng)液、或離心且h2o洗后的細(xì)胞沉淀物、或上清液施用于植物??梢詳U(kuò)大規(guī)模至10l發(fā)酵罐。將類芽孢桿菌菌株在isp2液體培養(yǎng)基(10g/l麥芽提取物、4g/l細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物、4g/l葡萄糖單水合物)在22℃和150rpm下生長6天。在不同時間點(diǎn)測量指示細(xì)菌生長的od600nm。表5:液體isp2培養(yǎng)基中類芽孢桿菌菌株的細(xì)菌生長實施例4-針對抗真菌活性的體外對抗測試在體外對抗測試中證實了類芽孢桿菌菌株對抗植物病原體的拮抗活性。使用的植物病原真菌是核盤菌(sclerotinasclerotiorum)(sclscl)、灰葡萄孢(botrytiscinerea)(botrci)、鏈格孢屬物種(alternaria)(altesp)和致病疫霉(phytin)。作為用于botrci、altesp、sclscl的生長培養(yǎng)基,使用了isp2培養(yǎng)基,其每升包含:10g麥芽提取物(sigmaaldrich,70167);4g細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物(bectondickinson,212750);4g葡萄糖單水合物(sigmaaldrich,16301);20g瓊脂(bectondickinson,214510),ph約7,重蒸水。作為用于phytin的生長培養(yǎng)基,使用了v8培養(yǎng)基,其每升包含:200ml蔬菜汁,3g碳酸鈣(merckmillipore,1020660250);30g瓊脂(bectondicknson,214510),ph6.8,重蒸水。將類芽孢桿菌菌株點(diǎn)接種于瓊脂平板的一側(cè)。將含有一種活躍生長的植物病原體的瓊脂塊(大約0.3cm2)放在平板中央。在25℃孵育7-14天后,檢查植物病原體的生長,尤其是抑制區(qū)。此后,在評價前,將瓊脂平板在℃下孵育約7-14天。通過評價無真菌區(qū)(抑制區(qū))的直徑,對抗生作用進(jìn)行評分。通過將帶細(xì)菌菌株的平板上真菌病原體的生長直徑與對照平板相比,對競爭作用進(jìn)行評分。在細(xì)菌生長超過真菌病原體并且還寄生于病原體的情況中,可以記錄真菌寄生作用。這可以通過顯微鏡來觀察。新的類芽孢桿菌菌株顯示出對抗所有測試的植物病原體的抗真菌活性。表6:體外對抗測試結(jié)果實施例5-溫室測試抗植物病原真菌活性用途實施例5.1:使用保護(hù)性施用,對抗致病疫霉引起的番茄晚疫病的活性將商業(yè)上可得的番茄幼苗(“goldene”)用于所述的溫室試驗。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株6天培養(yǎng)物的粗/全培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。用于菌株的培養(yǎng)條件描述于實施例3中。施用一天后,給處理過的植物接種致病疫霉(phytin)的孢子囊懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。未處理的對照中,真菌攻擊在80-100%之間,并且出于比較原因,將其設(shè)為100%。表7:類芽孢桿菌菌株phytin(%真菌攻擊)lu170074lu1677420bd-6253用途實施例5.2:使用保護(hù)性施用,對抗灰葡萄孢在辣椒上引起的灰霉病的活性將商業(yè)可得的辣椒幼苗(“neusiedlerideal”)用于所述的溫室試驗。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株6天培養(yǎng)物的粗/全培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。用于菌株的培養(yǎng)條件描述于實施例3中。施用一天后,給處理過的植物接種灰葡萄孢(botrci)的孢子懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。未處理對照中,真菌攻擊在80-100%之間,并且出于比較原因,將其設(shè)為100%。表8:用途實施例5.3:使用保護(hù)性施用,對抗茄鏈格孢菌引起的番茄早疫病的活性將商業(yè)可得的番茄幼苗(“goldene”)用于所述的溫室測試。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株6天培養(yǎng)物的粗/全培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。用于菌株的培養(yǎng)條件描述于實施例3中。施用一天后,給處理過的植物接種茄鏈格孢菌(alteso)的孢子懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。未處理對照中真菌攻擊在80-100%之間,并且出于比較原因,將其設(shè)為100%。表9:類芽孢桿菌菌株alteso(%真菌攻擊)lu170073lu1701516bd-6296用途實施例5.4:使用保護(hù)性施用,對抗豆薯層銹菌(phakopsorapachyrhizi)在大豆上引起的大豆銹病的活性將商業(yè)上可得的大豆幼苗(“mentor”)用于所述的溫室測試。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株2-6天培養(yǎng)物的粗培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。施用一天后,給處理過的植物接種豆薯層銹菌(phakpa)的孢子懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。用途實施例5.5:使用保護(hù)性施用,對抗禾本科鐮孢(fusariumgraminearum)在小麥上引起的赤霉病(fusariumheadblight)的活性將商業(yè)上可得的小麥幼苗用于所述的溫室測試。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃下生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株2-6天培養(yǎng)物的粗培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。培養(yǎng)條件如實施例3中所述。施用一天后,給處理過的植物接種禾本科鐮孢(gibbze)的孢子懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。用途實施例5.6:使用保護(hù)性施用,對抗小麥殼針孢(septoriatritici)引起的小麥葉枯病(speckledleafblotch)的活性將商業(yè)上可得的小麥幼苗用于所述的溫室測試。每個處理使用2個重復(fù)(每盆各1株植物)。將植物在溫室中,在商業(yè)上可得的基質(zhì)(universal,floragard)中,在大約22℃下生長。使用專用設(shè)備控制濕度(~90%濕度)。使用噴霧箱給植物噴霧相應(yīng)類芽孢桿菌菌株2-6天培養(yǎng)物的粗培養(yǎng)液(取決于設(shè)置),至滾落。培養(yǎng)條件如實施例3中所述。施用一天后,給處理過的植物接種小麥殼針孢(septtr)的孢子懸浮液。接種后,將測試植物立即轉(zhuǎn)移至潮濕的房間中。在接種后21-28天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。用途實施例5.7:使用保護(hù)性施用,類芽孢桿菌細(xì)胞和上清液對抗各種病原體的活性根據(jù)實施例3,獲得來自類芽孢桿菌菌株lu17007的6天培養(yǎng)物的全培養(yǎng)液,并用于用途實施例5.1至5.3的實驗設(shè)置中。或者,將全培養(yǎng)液通過具有0.2μm孔徑的濾器進(jìn)行過濾,以獲得培養(yǎng)物基質(zhì)和粗細(xì)胞級分??梢杂贸跏俭w積的磷酸鹽緩沖鹽水,將粗細(xì)胞級分進(jìn)一步洗滌三次,以獲得洗滌過的細(xì)胞。按照以上針對各病原體致病疫霉、灰葡萄孢和茄鏈格孢的用途實施例5.1、5.2和5.3所述的,進(jìn)行了玻璃暖房測試。在接種后5-7天,通過視覺評價葉子上真菌攻擊的程度。未處理對照中,真菌攻擊在80-100%之間,并且出于比較原因,將其設(shè)為100%。表10:實施例6-酶試驗用途實施例6.1:幾丁質(zhì)酶幾丁質(zhì)酶試驗固體培養(yǎng)基:2g/lnano3、1g/lk2hpo4、0.5g/lmgso4、0.5g/lkcl、0.2g/l蛋白胨、15g/l瓊脂、10g/l來自蟹殼的幾丁質(zhì)(sigma-aldrichc7170)。將試驗固體培養(yǎng)基高壓滅菌并且裝入9cm皮氏培養(yǎng)皿中。將類芽孢桿菌菌株接種在平板中心并在27℃下孵育兩天。此后,用1:3稀釋的lugol溶液(carlrothn052.2)將平板染色5至10分鐘。將lugol溶液倒出并且將平板拍照并評價。不同菌株的生長不超過5-10mm。未染色區(qū)(用幾丁質(zhì)酶活性校正)從0mm(無活性,表11中的“-”)至幾cm(表11中的“+”)。用途實施例6.2:纖維素酶纖維素酶試驗固體培養(yǎng)基:2g/lnano3、1g/lk2hpo4、0.5g/lmgso4、0.5g/lkcl、0.2g/l蛋白胨、15g/l瓊脂、羧甲基纖維素,鈉鹽(sigma-aldrich419273)。將培養(yǎng)基高壓滅菌,裝入9cm皮氏培養(yǎng)皿中。將類芽孢桿菌菌株接種在平板中心并在27℃下孵育兩天。此后,用1:3稀釋的lugol溶液(carlrothn052.2)將平板染色5至10分鐘。將lugol溶液倒出并且將平板拍照并評價。用途實施例6.3:淀粉酶淀粉酶試驗固體培養(yǎng)基:2g/lnano3、1g/lk2hpo4、0.5g/lmgso4、0.5g/lkcl、0.2g/l蛋白胨、15g/l瓊脂、10g/l可溶性淀粉(merck1.01252)。將培養(yǎng)基高壓滅菌,倒入9cm皮氏培養(yǎng)皿中。將類芽孢桿菌菌株接種在平板中心并在27℃下孵育兩天。此后,用1:3稀釋的lugol溶液(carlrothn052.2)將平板染色5至10分鐘。將lugol溶液倒出并且將平板拍照并評價。表11:類芽孢桿菌菌株的幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和淀粉酶活性菌株幾丁質(zhì)酶纖維素酶淀粉酶lu16774++-lu17007++++lu17015+++bd-62----,無活性;(+),低活性;+,常規(guī)活性;++,高活性實施例7-獲自類芽孢桿菌菌株的殺鐮孢菌素型代謝物實施例7.1:大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞分離物和提取殺鐮孢菌素型代謝物a)培養(yǎng)將類芽孢桿菌菌株在含有g(shù)ym培養(yǎng)基(10g/l葡萄糖、4g/l酵母提取物、10g/l麥芽提取物;ph5.5,在高壓滅菌前調(diào)節(jié))和20g/l瓊脂的瓊脂平板上培養(yǎng)。培養(yǎng)在室溫下進(jìn)行10至20天。對于維持,使用具有相同培養(yǎng)基的瓊脂斜面,并儲存在4℃。給小規(guī)模液體培養(yǎng)物(500ml燒瓶中250mlgym培養(yǎng)基)接種4-5塊生長良好的瓊脂培養(yǎng)物并且在室溫下(20-23℃)在120rpm下在軌道搖床中培養(yǎng)。大規(guī)模發(fā)酵在20l發(fā)酵罐中進(jìn)行,使用15lgym培養(yǎng)基(由于形成泡沫,沒有使用發(fā)酵罐的總?cè)萘?,接種了250ml生長良好的液體培養(yǎng)物并且在室溫下(20-23℃)使用攪拌(120rpm)和通氣(3l/分鐘)進(jìn)行發(fā)酵5至8天。b)提取將一份等體積的異丙醇加入全培養(yǎng)液中(沒有自液體培養(yǎng)物分離生物質(zhì))。攪拌并孵育2至16小時后,將普通食鹽(氯化鈉-100至200g/l)加入混合物中,直至可見有機(jī)相和水相的相分離。將異丙醇相真空濃縮。將所得到的提取物,仍然含有大量鹽,溶解于甲醇中,離心以更好地沉淀鹽殘余物,將有機(jī)相再次濃縮。重復(fù)這個步驟,直至不存在任何鹽沉淀物。c)純化i)硅膠色譜將30克提取物溶解于甲醇中并結(jié)合于50g硅膠(merck,k60,70-230目),在40℃干燥,并且在1kg硅膠上(柱大約10cm直徑,30cm高)分層。如下進(jìn)行四步洗脫:步驟1-4∣乙酸乙酯步驟2-4∣乙酸乙酯:甲醇(3:1,v/v)步驟3-7∣乙酸乙酯:甲醇(1:1,v/v)步驟4-4∣甲醇。將含有活性化合物的第三個級分(中間體1)真空干燥并溶解于0.1%甲酸(fa)中的40%甲醇(meoh)中(濃度:100mg/ml)。丟棄其他級分。ii)chromabondhr-x分級將20ml中間體1加載至之前(用0.1%fa中的40%meoh)平衡的chromabondhr-x筒(macherey-nagel,1000mg,ref730941)上。用100ml0.1%fa中的40%meoh洗滌筒并用60ml0.1%fa中的70%meoh洗脫。然后將該中間體1-1真空干燥。iii)sunfirec18柱上制備性hplc將中間體1-1溶解于dmso中(濃度:200mg/ml)并將300μl的中間體1-1在sunfirec18柱(19×250mm,5μm,waters)上按如下進(jìn)行色譜:以10ml/分鐘,16分鐘,等度70%0.2fa;30%乙腈(acn),以14ml/分鐘,1分鐘,梯度至65%0.2fa;35%acn,以14ml/分鐘,5分鐘,等度65%0.2fa;35%acn。可以檢測到五個級分。將所有五個所得到的級分真空干燥并溶解于dmso中(濃度:125mg/ml)。使用相同柱進(jìn)行進(jìn)一步純化,并針對每個級分,調(diào)節(jié)等度條件(流速:10.5ml/分鐘)(12.5mg/運(yùn)行):級分1:69%0.2fa;31%acn;檢測到兩個峰(1-1和1-2)級分2:69%0.2fa;31%acn;檢測到兩個峰(2-1和2-2)級分3:69%0.2fa;31%acn;檢測到三個峰(3-1、3-2和3-3)級分4/5:67%0.2fa;33%acn;檢測到一個峰(4/5)級分6:65%0.2fa;35%acn;檢測到兩個峰(6-1和6-2)以下樣品的純度和品質(zhì)足以用于nmr分析和結(jié)構(gòu)解析:峰1-2,2-1,3-2,4/5,和6-1。實施例7.2:新化合物1a和1b的結(jié)構(gòu)解析對于級分2的峰2-1,作為棕色油獲得了化合物1a和1b(比例約3:7)的混合物([α]d25=+20.9(c=0.6,dmso-d6))。從hr-esi-ms光譜推斷出主要組分化合物1b的分子式c47h78n10o12,其在m/z975.5863[m+h]+;esi-ms:975.6(100%,[m+h]+),488.4(51%,[m+2h]2+)產(chǎn)生峰。此外,混合物還含有作為主要組分的較輕的同系物1a,兩種化合物之間的質(zhì)量差為14amu。在esi-ms光譜中在m/z961.6處觀察到的第二個峰,支持了這種觀察結(jié)果。除了δ6.83和8.58之間可交換質(zhì)子的信號,nmr光譜(表12)包括δ166.0-174.5范圍的羰基共振以及δ47.8和δ60.4之間的次甲基信號(指示肽)?;衔?b的1d-和2d-nmr數(shù)據(jù)的廣泛分析揭示了六個氨基酸的存在,包括酪氨酸(tyr)、谷氨酰胺(gln)、丙氨酸(ala)、兩個蘇氨酸(thr1和thr2)和異亮氨酸(ile)。使用跨酰胺官能的兩個或三個鍵聯(lián)系,發(fā)現(xiàn)了它們的序列。因此,cosy、noesy(圖2)和hmbc(圖3)光譜描繪了從δ8.58的thr2氮質(zhì)子到δ3.84的thr2的次甲基質(zhì)子信號和δ166.7的tyr的羰基的聯(lián)系,同時在δ8.52的tyr的氮質(zhì)子以及δ2.60的tyr的亞甲基質(zhì)子信號和δ170.4的ile的羰基之間,注意到了相同關(guān)系。此外,δ4.16的ile的次甲基氫與δ170.4的ile的羰基信號具有強(qiáng)烈聯(lián)系,并且與δ168.6的thr1具有弱接觸;δ5.30的thr1的β-次甲基質(zhì)子信號與δ170.4的ala的羰基信號關(guān)聯(lián)。除了上述關(guān)聯(lián),從ala的δ7.27的n-質(zhì)子到相同氨基酸的δ4.20的次甲基質(zhì)子展示了其他關(guān)聯(lián),而這后一質(zhì)子與其氨基的羰基和gln的羰基具有相同的相互作用。此外,從gln的δ8.20的可交換質(zhì)子到gln的δ3.87的次甲基氫和δ170.6的thr2的羰基,揭示了交叉峰;這些上述的數(shù)據(jù)表明了化合物1b的環(huán)縮酚酸肽結(jié)構(gòu)(cyclodepsipeptidicstructure)。這種環(huán)縮酚酸肽1b含有連接至thr1的末端胍β-羥基脂肪酸,因為在δ4.39的α-次甲基質(zhì)子信號和δ171.9的羰基共振之間觀察到了關(guān)鍵的聯(lián)系;進(jìn)一步觀察到hmbc接觸,從δ171.9的羰基至δ2.35的α-亞甲基質(zhì)子和δ3.77的β-次甲基質(zhì)子,以及在δ3.03的亞甲基質(zhì)子和δ157.2的胍碳之間。基于在m/z256.2的母體[m+h]+離子的apci-ms-ms光譜中觀察到的碎片離子,推斷側(cè)鏈在β-羥基和胍基團(tuán)之間含有十二個亞甲基基團(tuán)。同樣,這個光譜提供了信息(圖4b),其證實了氨基酸的連接序列并導(dǎo)致闡明如圖1中所示的化合物1b的結(jié)構(gòu)。在1d-和2d-光譜中在2.80、2.52/36.3的ch2基團(tuán)信號推測對應(yīng)于化合物1a中的天冬酰胺(asn)的β-ch2基團(tuán)。這種結(jié)論得到已報道的數(shù)據(jù)(heterocycles53,1533-1549,2000)和獲自m/z961.6的母峰的ms/ms的片段的支持。同樣,后面的分析提供了信息(圖4a、4b),其證實了兩種化合物中的氨基酸連接序列并導(dǎo)致闡明如圖1中所示的化合物1a和1b的結(jié)構(gòu)。實施例7.3:作為殺鐮孢菌素c和d的化合物2a和2b的結(jié)構(gòu)鑒定從級分1的峰1-2,獲得了作為棕色油的化合物2a和2b的混合物(比例約為1:1)?;诘头直媛寿|(zhì)譜,較重組分化合物2b的分子式測定為c46h76n10o12。nmr數(shù)據(jù)的分析(表13)允許鑒定化合物2b為殺鐮孢菌素d?;旌衔锏妮^輕組分化合物2a,同樣鑒定為殺鐮孢菌素c,其中殺鐮孢菌素c的gln殘基被asn替代。分別針對化合物2b和2a的m/z961.6和947.6的母體離子的質(zhì)譜碎裂方式(圖5a、5b)證實了取代脂肪酸側(cè)鏈的長度與化合物1b中的相同。殺鐮孢菌素c和d之前已經(jīng)被kajimura等報道過(j.antibiot.50,220-228,1997)。實施例7.4:作為li-f08b的化合物3的結(jié)構(gòu)鑒定從級分6的峰6-1,作為棕色油分離了化合物3,并且其低分辨率呈現(xiàn)了m/z925.6[m+h]+的峰,這結(jié)合nmr數(shù)據(jù)(表14),形成分子式c44h80n10o11?;衔?在nmr譜中顯示出與化合物1b和2b(殺鐮孢菌素d)相似的特征,除了芳香族信號的存在(表14)。因此,觀察到了肽的特征性共振,即δ6.89和8.49之間連接氮的質(zhì)子的十個信號,范圍在δ168.1和174.3之間的羰基的八個共振,以及δ48.0和59.5之間包括的n-次甲基的六個信號。hmqc、cosy和tocsy譜的詳細(xì)分析揭示了存在六個氨基酸,包括gln,兩個thr單元,兩個ile單元和ala。此外,這些光譜顯示出歸因于與化合物1a、1b以及殺鐮孢菌素c(2a)和d(2b)相同的具有末端胍的β-羥基脂肪酸的化學(xué)位移?;趖hr1的δ4.44的n-次甲基的質(zhì)子信號和脂肪酸的δ172.1的羰基信號之間的hmbc譜發(fā)現(xiàn)的長范圍關(guān)聯(lián),確定了這個側(cè)鏈的位置。從noesy相互作用和碎裂方式推斷氨基酸的序列(圖6)。nmr數(shù)據(jù)(表14)和質(zhì)譜的組合導(dǎo)致將代謝物化合物3鑒定為li-f08b,在本文中也稱為殺鐮孢菌素li-f08b,首次由kuroda等報道(heterocycles53,1533-1549,2000)。實施例7.5:分別作為li-f06a和li-f06b的化合物4a和4b以及作為殺鐮孢菌素a和b的化合物5a和5b的結(jié)構(gòu)鑒定從級分4/5的峰4/5,獲得了兩種另外的代謝物化合物4a和4b的混合物(比例約為1:3),其在esi-ms光譜中給出了m/z897.5(4a)和911.6(4b)的兩個峰,表明兩種另外的類似環(huán)縮酚酸肽(cyclodepsipeptide)。在其nmr譜(表15)中觀察到了表示肽的共振以及末端為胍基團(tuán)的β-羥基脂肪酸的那些。針對化合物4a和4b(圖7a、7b)發(fā)現(xiàn)的兩種母體離子的碎裂方式允許確定氨基酸的序列以及將混合物的組分分別鑒定為li-f06a(4a)和li-f06b(4b)。以相同方式分析了從級分3的峰3-2獲得的化合物5a和5b的混合物(比例約為1:3)。混合物的esi質(zhì)譜顯示出m/z883.6(5a)和897.5(5b)的兩個峰,并且這些母體離子的碎裂方式(圖8a,8b)結(jié)合nmr數(shù)據(jù)(表16)允許將組分鑒定為殺鐮孢菌素a(5a)和殺鐮孢菌素b(5b)。針對4a、4b、5a和5b發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)與之前報道的那些匹配(j.antibiot.50,220-228,1997;heterocycles53,1533-1549,2000)。表12.化合物1a和1b的1h(dmso-d6,600mhz)和13c-nmr(dmso-d6,150mhz)數(shù)據(jù)*pos.=位置;fa=脂肪酸;gu=胍;nf=未發(fā)現(xiàn)。圖例也適用于表13至16。表13.化合物2a和2b的1h(dmso-d6,600mhz)和13c-nmr(dmso-d6,150mhz)數(shù)據(jù)表14.作為li-f08b的化合物3的1h(dmso-d6,600mhz)和13c-nmr(dmso-d6,150mhz)數(shù)據(jù)表15.化合物4a和4b的1h(dmso-d6,600mhz)和13c-nmr(dmso-d6,150mhz)數(shù)據(jù)表16.化合物5a和5b的1h(dmso-d6,600mhz)和13c-nmr(dmso-d6,150mhz)數(shù)據(jù)沒有進(jìn)行水解實驗來測定組成氨基酸的構(gòu)型。實施例8-類芽孢桿菌菌株產(chǎn)生的代謝物實施例8.1:類芽孢桿菌菌株的代謝物產(chǎn)生以上實施例7.1中所述的程序步驟后,測定類芽孢桿菌菌株的一般殺鐮孢菌素和特別是已知的殺鐮孢菌素a、b、c、d、li-f06a、li-f06b和li-f08b以及新的殺鐮孢菌素型化合物1a和1b的存在。表17:類芽孢桿菌菌株的殺鐮孢菌素型代謝物產(chǎn)生。說明:-,化合物不可檢測;+,化合物可檢測;++,與等級+相比化合物以較高含量可檢測。所有新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的全培養(yǎng)液都含有至少一種實施例7中鑒定的殺鐮孢菌素型代謝物(表17)。在皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62的全培養(yǎng)液中沒有檢測到這些殺鐮孢菌素型代謝物。新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的全培養(yǎng)液全部含有新的殺鐮孢菌素型化合物1a和1b。此外,新的類芽孢桿菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的全培養(yǎng)液全部含有殺鐮孢菌素a、b、c和d以及l(fā)i-f08b。此外,新的殺鐮孢菌素菌株lu17007和lu17015的全培養(yǎng)液含有殺鐮孢菌素li-f06a和li-f06b。在密切相關(guān)的皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62的全培養(yǎng)液中沒有檢測到化合物1a和1b。在皮爾瑞俄類芽孢桿菌菌株bd-62的全培養(yǎng)液中也沒有檢測到殺鐮孢菌素a、b、c和d、li-f06a、li-f06b和li-f08b。實施例9:類芽孢桿菌菌株的代謝物對抗各種真菌病原體的活性將獲得的化合物1a和1b、殺鐮孢菌素a、b和d用于以下實驗中。在96孔平板中進(jìn)行真菌生長測試,使用病原體灰葡萄孢(botrci,在yba中[10g細(xì)菌培養(yǎng)用蛋白胨(bectondickinson211677),10g酵母提取物(bectondickinson212750),20g醋酸鈉,用重蒸水補(bǔ)足1000ml])或茄鏈格孢(alteso,在ybg中[10g細(xì)菌培養(yǎng)用蛋白胨(bectondickinson211677),10g酵母提取物(bectondickinson212750),20g甘油99%,用重蒸水補(bǔ)足1000ml])的孢子懸浮液。將殺鐮孢菌素以及化合物1a和1b在dmso中溶解并稀釋。將從60μm降至0.3μm的不同濃度范圍吸移至微滴定平板中。加入104個孢子/ml的水性懸浮液。將平板在約18℃孵育。通過在接種孢子后3天和7天在微平板讀數(shù)儀中在600nm下測量光密度來測定真菌生長并與未處理對照(dmso)進(jìn)行比較。此后測定了ic50(50%真菌生長抑制需要的各代謝物的濃度[μm])。值得注意的是,化合物1a和1b顯示出最高的抗真菌功效,具有0.4-0.6μm的ic50值(表18)。表18.類芽孢桿菌代謝物ic50值的抗真菌生長抑制“-”表示在測試濃度范圍的生長抑制不足以測定ic50。此外,按照以上針對各自的病原體灰葡萄孢(botrci)、茄鏈格孢(alteso)、致病疫霉(phytin)、豆薯層銹菌(phakpa)和禾谷鐮刀菌(gibbze)的用途實施例5.1至5.5所述的,用化合物1a和1b進(jìn)行了溫室測試。在接種后5-7天通過視覺評價葉上真菌攻擊的程度。值得注意的是,化合物1a和1b已經(jīng)在低如7.2ppm的劑量水平下在控制作物上的重要真菌疾病中是有效的并且顯示出高于殺鐮孢菌素a、b和d的抗真菌功效(表19至21)。表19.在植物中原位測定的代謝物的抗真菌功效。表20.保護(hù)性應(yīng)用的代謝物對抗番茄上由致病疫霉引起的晚疫病的功效。測試的代謝物濃度%功效(%真菌攻擊)未處理的-0(100)殺鐮孢菌素a7.2ppm15殺鐮孢菌素b7.2ppm4殺鐮孢菌素d7.2ppm0化合物1b7.2ppm44表21.保護(hù)性應(yīng)用的代謝物對抗小麥上由禾谷鐮刀菌引起的穗疫病的功效。測試的代謝物濃度%功效(%真菌攻擊)未處理的-0(100)殺鐮孢菌素a360ppm31殺鐮孢菌素b360ppm0化合物1a360ppm49表22.保護(hù)性應(yīng)用的代謝物對抗小麥上由小麥殼針孢引起的穗疫病的功效。實施例10:溫室測試中本發(fā)明的多粘類芽孢桿菌植物新亞種菌株lu16674和lu17007與多粘類芽孢桿菌植物新亞種m-1對抗各種病原體的活性的比較根據(jù)用途實施例3獲得了類芽孢桿菌菌株lu17007、lu16674和m1的6天培養(yǎng)物的全培養(yǎng)液并且按照用途實施例5.1至5.5的實驗設(shè)置來使用。按照以上針對各自病原體的用途實施例5.1至5.5中所述的來進(jìn)行溫室測試。接種后5-7天通過視覺評價葉上的真菌攻擊程度。值得注意的是,類芽孢桿菌菌株lu16774和lu17007即使在高稀釋倍數(shù)下對控制作物上的重要真菌疾病是有效的,并且顯示出高于密切相關(guān)的菌株m-1的抗真菌功效(表22至27)。表22.類芽孢桿菌菌株全培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)botrci%功效(%真菌攻擊)未處理的0(100)lu166741:1095m-11:1086lu166741:5076lu170071:5098m-11:5051表23.表24.類芽孢桿菌菌株全培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)alteso%功效(%真菌攻擊)未處理的0(100)lu166741:1077m-11:1041表25.類芽孢桿菌菌株全培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)phytin%功效(%真菌攻擊)未處理的0(100)lu170071:1083m-11:1042lu166741:5013lu170071:5030m-11:500表26.類芽孢桿菌菌株全培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)phakpa%功效(%真菌攻擊)未處理的0(100)lu17007未稀釋的94m-1未稀釋的87表27.本文中引用的文獻(xiàn)通過引用并入作為參考。附圖簡述圖1.化合物1a、1b、2a、2b、3、4a、4b、5a和5b。圖2.化合物1b的主要noesy和cosy關(guān)聯(lián)。圖3.化合物1b的hmbc關(guān)聯(lián)。圖4.化合物1a的碎裂方式a)和化合物1b的碎裂方式b)。圖5.化合物2a(殺鐮孢菌素c)的碎裂方式a)和化合物2b(殺鐮孢菌素d)的碎裂方式b)。圖6.化合物3(li-f08b)的碎裂方式。圖7.化合物4a(li-f06a)的碎裂方式a)和化合物4b(li-f06b)的碎裂方式b)。圖8.化合物5a(殺鐮孢菌素a)的碎裂方式a)和化合物5b(殺鐮孢菌素b)的碎裂方式b)。圖9顯示了多個序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株與相關(guān)分類群的完整16srdna序列的同一性百分?jǐn)?shù)。圖例:*菌株編號:1=類芽孢桿菌菌株lu16774;2=類芽孢桿菌菌株lu17015;3=類芽孢桿菌菌株lu17007;4=皮爾瑞俄類芽孢桿菌nrrlbd-62;5=安艾瑞克類芽孢桿菌(paenibacillusanaericanus)mh21;6=巴西類芽孢桿菌pb172;7=坎皮納斯類芽孢桿菌(paenibacilluscampinasensis)324;8=奇本類芽孢桿菌(paenibacilluschibensis)jcm9905;9=解葡糖類芽孢桿菌(paenibacillusglucanolyticus)dsm5162;10=湖南類芽孢桿菌(paenibacillushunanensis)fel05;11=杰米拉類芽孢桿菌cect5266;12=膠凍樣類芽孢桿菌(paenibacilluskribbensis)am49;13=乳類芽孢桿菌(paenibacilluslactis)mb1871;14=燦爛類芽孢桿菌(paenibacilluslautus)jcm9073;15=浸麻類芽孢桿菌(paenibacillusmacerans)iam12467;16=瑪斯里類芽孢桿菌(paenibacillusmassiliensis)2301065;17=飼料類芽孢桿菌(paenibacilluspabuli)hscc492;18=皮爾瑞俄類芽孢桿菌dsm8320(bd-57);19=皮尼類芽孢桿菌(paenibacilluspini)s22;20=多粘類芽孢桿菌iam13419;21=普里斯帕蒂類芽孢桿菌(paenibacilluspurispatii)es_ms17;22=沉積物類芽孢桿菌(paenibacillussediminis)gt-h3;23=土地類芽孢桿菌(paenibacillusterrae)am141;24=土壤類芽孢桿菌(paenibacillusterrigena)a35;25=提摩類芽孢桿菌(paenibacillustimonensis)2301032;26=圖列茨類芽孢桿菌(paenibacillusturicensis)mol722;27=潮濕類芽孢桿菌(paenibacillusuliginis)n3/975;28=耐熱科恩氏菌(cohnellathermotolerans)ccug47242。菌株6至28是用于各自物種的模式菌株。新菌株與皮爾瑞俄類芽孢桿菌(nrrlbd-62和dsm8320)的相似性已經(jīng)以粗體標(biāo)注。圖10顯示了從本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株與其他分類群的16s-rdna序列的%同一性(圖9)計算的系統(tǒng)發(fā)育樹。通過將耐熱科恩氏菌的16srrna基因序列包括在分析中來確定樹根。發(fā)育圖下面的比例尺表示每100個核苷酸1個核苷酸置換。圖11顯示了使用riboprinter微生物表征系統(tǒng)和從其得到的系統(tǒng)發(fā)育樹,從本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的樣品與密切相關(guān)的皮爾瑞俄類芽孢桿菌的樣品相比獲得的riboprint模式。圖12顯示了多序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的dnan基因的dna序列與相關(guān)類芽孢桿菌菌株的同一性百分?jǐn)?shù)。圖例:*菌株編號:1=類芽孢桿菌菌株lu16774;2=類芽孢桿菌菌株lu17007;3=類芽孢桿菌菌株lu17015;4=皮爾瑞俄類芽孢桿菌dsm8320t=kctc3763t(genbank登錄號agfx00000000;j.bacteriol.194,1237-1238,2012);5=多粘類芽孢桿菌1-43(genbank登錄號asrz01000000;保藏號gcmcc4965;cn102352332b);6=多粘類芽孢桿菌a18(genbankacc.nojwjj00000000.1;ncbiprojectid225496);7=多粘類芽孢桿菌atcc842t=dsm36t=kctc3858t(genbank登錄號afox00000000;j.bacteriol.193(18),5026–5027,2011);8=多粘類芽孢桿菌cf05(genbank登錄號cp009909;genomeannounc3(2):e00198-15.doi:10.1128/genomea.00198-15);9=多粘類芽孢桿菌cicc10580(genbank登錄號jncb00000000;genomeannounc.2(4):e00854-14.doi:10.1128/基因組a.00854-14);10=多粘類芽孢桿菌dsm365(genbank登錄號jmiq00000000;j.biotechnol.195,72-73,2015);11=多粘類芽孢桿菌e681(genbank登錄號cp000154;genomenetrefseqnc_014483.2;j.bacteriol.192(22),6103-6104,2010);12=多粘類芽孢桿菌m-1(genbank登錄號he577054.1;genomenetrefseqnc_017542.1);13=多粘類芽孢桿菌nrrlb-30509(genbank登錄號jtho00000000;genomeannounc.2015mar-apr;3(2):e00372-15);14=多粘類芽孢桿菌sc2(genbank登錄號cp002213;j.bacteriol.193(1),311-312,2011);15=多粘類芽孢桿菌sqr-21(genbank登錄號cp006872;genomenetrefseqnz_cp006872.1;genomeannounc.2014mar-apr;2(2):e00281-14);16=多粘類芽孢桿菌sb3-1(genbank登錄號cp010268;genomeannounc.2015mar-apr;3(2):e00052-15);17=多粘類芽孢桿菌td94(genbank登錄號assa00000000);17=多粘類芽孢桿菌wly78(genbank登錄號aljv00000000);土地類芽孢桿菌hpl-003(genbank登錄號cp003107;ncbirefseqnc_016641.1);多粘類芽孢桿菌cr1(genbank登錄號cp006941;genomeannounc.2014jan-feb;2(1):e01218-13)。圖13顯示了多序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的完整gyrb基因的dna序列與相關(guān)類芽孢桿菌菌株的同一性百分?jǐn)?shù)。菌株編號如圖12中圖例所述。圖14顯示了多序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的完整recf基因的dna序列與相關(guān)類芽孢桿菌菌株的同一性百分?jǐn)?shù)。菌株編號如圖12中圖例所述。圖15顯示了多序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的完整recn基因的dna序列與相關(guān)類芽孢桿菌菌株的同一性百分?jǐn)?shù)。菌株編號如圖12中圖例所述。圖16顯示了多序列比對后本發(fā)明的類芽孢桿菌菌株的完整rpoa基因的dna序列與相關(guān)類芽孢桿菌菌株的同一性百分?jǐn)?shù)。菌株編號如圖12中圖例所述。圖17顯示了基于多粘類芽孢桿菌復(fù)合物菌株的完整dnan基因序列的最大似然聚類圖。所示的0.1刻度對應(yīng)于1%核苷酸交換。圖18顯示了基于多粘類芽孢桿菌復(fù)合物菌株的完整gyrb基因序列的最大似然聚類圖。所示的0.1刻度對應(yīng)于1%核苷酸交換。圖19顯示了基于多粘類芽孢桿菌復(fù)合物菌株的完整recf基因序列的最大似然聚類圖。所示的0.1刻度對應(yīng)于1%核苷酸交換。圖20顯示了基于多粘類芽孢桿菌復(fù)合物菌株的完整recn基因序列的最大似然聚類圖。所示的0.1刻度對應(yīng)于1%核苷酸交換。圖21顯示了基于多粘類芽孢桿菌復(fù)合物菌株的完整rpoa基因序列的最大似然聚類圖。所示的0.1刻度對應(yīng)于1%核苷酸交換。圖22顯示了根據(jù)實施例2.5進(jìn)行的多粘類芽孢桿菌復(fù)合物的代表性基因組的氨基酸指數(shù)(aai)矩陣。菌株編號如圖12中圖例所述。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12
      當(dāng)前第1頁1 2 
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