本發(fā)明涉及對(duì)gip受體具有激動(dòng)劑活性的化合物及其在治療代謝紊亂中的用途。

背景技術(shù)：

糖尿病和肥胖是日益增加的全球健康問(wèn)題，其與多種其他疾病相關(guān)，特別是心血管疾病(cvd)、阻塞性睡眠呼吸暫停、中風(fēng)、外周動(dòng)脈疾病、微血管并發(fā)癥和骨關(guān)節(jié)炎。全世界有2.46億人患有糖尿病，估計(jì)到2025年將有3.8億人患有糖尿病。許多具有額外的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素，包括高/異常ldl和甘油三酯以及低hdl。心血管疾病在糖尿病患者的死亡率中占約50％，與肥胖和糖尿病相關(guān)的發(fā)病率和死亡率強(qiáng)調(diào)了醫(yī)學(xué)上對(duì)于有效的治療選擇的需求。

葡萄糖依賴(lài)性促胰島素多肽(“gip”，也稱(chēng)為“胃抑制性多肽”)是響應(yīng)于經(jīng)口營(yíng)養(yǎng)攝入而由小腸的腸內(nèi)分泌k細(xì)胞分泌到血流中的42個(gè)殘基的肽。gip抑制胃酸的分泌，并且已經(jīng)顯示其是經(jīng)口葡萄糖攝入后胰腺β細(xì)胞分泌胰島素的強(qiáng)效刺激物(“腸促胰島素效應(yīng)”)(creutzfeldt，w.等，1979，diabetologia，16：75-85)。

通過(guò)攝入葡萄糖和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)誘導(dǎo)的胰島素釋放是由于激素和神經(jīng)因素兩者(creutzfeldt，w.等，1985，diabetologia，28：565-573)。已經(jīng)提出數(shù)種胃腸調(diào)節(jié)肽作為腸促胰島素，在這些候選物中，只有g(shù)ip和胰高血糖素樣肽1(“glp-1”)似乎滿足了被認(rèn)為是餐后胰島素釋放的生理刺激物的要求(nauck等，1989，j.clin.endocrinolmetab.，69：654-662)。已經(jīng)表明，gip和glp-1的組合效應(yīng)足以解釋腸胰島軸的全部腸促胰島素效應(yīng)(fehmann，h.c等，1989，febslett，252：109-112)。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，gip的已知和潛在用途是多種多樣的。因此，為了引發(fā)激動(dòng)劑效應(yīng)，本發(fā)明化合物的施用可以具有與gip本身相同的效應(yīng)和用途。gip的這些不同用途可歸納如下：治療選自以下的疾?。?型糖尿病、2型糖尿病(visboll，t.，2004，dan.med.bull，51：364-70)、胰島素抵抗(wo2005/082928)、肥胖(green，b.d.等，2004，currentpharmaceuticaldesign，10：3651-3662)、代謝紊亂(gault，v.a.等，2003，biochem.biophys.res.commun.，308：207-213)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、神經(jīng)退行性疾病、充血性心力衰竭、低血糖癥以及期望減少食物攝入和減輕體重的紊亂。在胰島中，gip不僅急劇增強(qiáng)胰島素分泌，而且還通過(guò)增強(qiáng)胰島素原的轉(zhuǎn)錄和翻譯來(lái)刺激胰島素的產(chǎn)生(wang等，1996，molcell.endocrinol，116：81-87)，并且增強(qiáng)胰腺β細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活(trumper等，2003，diabetes，52：741-750)。除了影響胰腺以增強(qiáng)胰島素分泌之外，gip還直接影響胰島素靶組織以降低血漿葡萄糖：增加脂肪(eckel等，1979，diabetes，28：1141-1142)和肌肉(o′harte等，1998，j.endocrinol，156：237-243)中的葡萄糖攝取并且抑制肝葡萄糖產(chǎn)生(elahi，d.等，1986，can.j.physiol.pharmacol，65：a18)。

最近，據(jù)報(bào)道，當(dāng)共施用glp-1和gip時(shí)，與glp-1激動(dòng)劑治療相關(guān)的體重減輕得到增強(qiáng)(finan，scitranslmed.2013；5(209)：209ra151.irwinn等，2009，regulpept；153：70-76.gault等，2011，clinsci(lond)；121：107-117)。例如，在亞長(zhǎng)期共施用?；痝ip激動(dòng)劑和?；痝lp-1激動(dòng)劑后，finan和同事證明了在飲食誘導(dǎo)的肥胖(dio)小鼠中顯著減輕了體重。共施用比單獨(dú)的任一單激動(dòng)劑更大程度地降低了體重和脂肪質(zhì)量。證據(jù)還表明，glp-1和gip對(duì)血糖控制具有累加效應(yīng)(gault等，2011，clinsci(lond)；121：107-117)。gault等人的研究表明，在ob/ob小鼠的腹膜內(nèi)葡萄糖耐量測(cè)試中，與單獨(dú)注射glp-1激動(dòng)劑或gip激動(dòng)劑相比，glp-1類(lèi)似物和?；痝ip類(lèi)似物的亞長(zhǎng)期共施用導(dǎo)致更多的葡萄糖降低和促胰島素作用。因此，當(dāng)與glp-1受體激動(dòng)劑(作為相同的藥物制劑的一部分或作為單獨(dú)的制劑)組合施用時(shí)，gip激動(dòng)劑可以特別有效地改善血糖控制和減輕體重。

然而，未修飾的gip作為治療劑的應(yīng)用受到約2分鐘的短體內(nèi)半衰期的限制(said和mutt，1970，science，169：1217-1218)。在血清中，gip和glp-1兩種腸促胰島素都被二肽基肽酶iv(“dppiv”)降解。提高gip對(duì)蛋白水解的穩(wěn)定性不僅保持了gip對(duì)其受體的活性，而更重要的是防止gip片段的產(chǎn)生，其中一些充當(dāng)了gip受體拮抗劑(gault等，2002，j.endocrinol，175：525-533)。已報(bào)告的修飾包括通過(guò)n末端酪氨酸的修飾(o′harte等，2002，diabetologia，45：1281-1291)、2位丙氨酸的突變(hinke等，2002，diabetes，51：656-661)、3位谷氨酸的突變(gault等，2003，biochem.biophys.res.commun.，308：207-213)以及13位丙氨酸的突變(gault等，2003，cellbiol.international，27：41-46)來(lái)保護(hù)gip的n末端免于被dppiv蛋白水解。

以下專(zhuān)利申請(qǐng)已提交并且涉及gip類(lèi)似物對(duì)多種靶器官功能的影響及其作為治療劑的潛在用途：pct公開(kāi)wo00/58360公開(kāi)了刺激胰島素釋放的gip的肽基類(lèi)似物。特別地，該申請(qǐng)公開(kāi)了包含gip的n末端至少15個(gè)氨基酸殘基的特定肽基類(lèi)似物(i-42)。pct公開(kāi)wo03/082898公開(kāi)了gip的c末端截短的片段和n末端修飾的類(lèi)似物，以及具有減少的肽鍵或接近dppfv特異性切割位點(diǎn)的氨基酸改變的多種gip類(lèi)似物。該申請(qǐng)進(jìn)一步公開(kāi)了在gip的潛在受體結(jié)合位點(diǎn)之間具有不同接頭的類(lèi)似物。該申請(qǐng)的化合物據(jù)稱(chēng)可用于治療gip受體介導(dǎo)的病癥，如非胰島素依賴(lài)性糖尿病和肥胖。此外，在如本文所示的本發(fā)明化合物的其他治療效果中，更嚴(yán)格地控制血漿葡萄糖水平可以預(yù)防長(zhǎng)期的糖尿病并發(fā)癥，從而為患者提供改善的生活質(zhì)量。除了改善血糖控制之外，gip也可以增強(qiáng)glp-1介導(dǎo)的體重減輕。已經(jīng)顯示gip類(lèi)似物與例如peg(聚乙二醇)的綴合延長(zhǎng)了體內(nèi)半衰期，但已經(jīng)報(bào)道了聚乙二醇化的藥物產(chǎn)品如干擾素β和利巴韋林具有潛在副作用(jclingastroenterol.2004年9月；38(8)：717-22，gut2006；55：1350-1359doi：10.1136/gut.2005.076646)。

因此，仍然需要改進(jìn)和安全的gip類(lèi)似物，其在制劑中是穩(wěn)定的，并且其由于對(duì)蛋白水解的易感性降低和清除率降低而具有長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期，同時(shí)保持與gip受體的結(jié)合親和力以引起激動(dòng)劑效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明涉及gip類(lèi)似物，其可具有如在體外效力測(cè)定中所評(píng)估的改變的gip活性性質(zhì)，以及如在小鼠的體內(nèi)研究中所評(píng)估的改變的(優(yōu)選增加的)終末消除半衰期(t1/2)。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的gip受體激動(dòng)劑優(yōu)于現(xiàn)有的gip類(lèi)似物，因?yàn)樗鰃ip激動(dòng)劑提供長(zhǎng)的終末半衰期。因此，所述gip類(lèi)似物可用作代謝紊亂(包括但不限于2型糖尿病、肥胖及相關(guān)紊亂)的治療劑。

本發(fā)明在第一方面提供了由通式i表示的gip類(lèi)似物，或其可藥用鹽或溶劑合物，

r¹-tyr-x2-glu-gly-thr-phe-ile-ser-asp-x10-x11-x12-glu-leu-x15-x16-x17-x18-x19-x20-x21-phe-x23-x24-x25-leu-x27-x28-x29-y1-y2-r²(i)

其中

r¹是h-、ac或pglu焦谷氨酸(pglu；(s)-(-)-2-吡咯烷酮-5-羧酸)、c1-4烷基、乙酰基、甲?；⒈郊柞；腿阴；?，

x2是aib、ala、d-ala、gly、ser、n-me-ser、ac3c、ac4c或ac5c；

x10是tyr、leu或ser；

x11是ser或leu；

x12是lys、ψ或ile；

x15是asp或glu；

x16是ser、glu、lys或ψ；

x17是ile、lys、gln、arg或ψ；

x18是his、arg或ala；

x19是gln、lys、ala或glu；

x20是gln、lys、ala、his或arg；

x21是ala、leu、asp或glu；

x23是val或ile；

x24是asn或glu；

x25是tyr或trp；

x27是leu、glu、ser、lys或val；

x28是ala、ser或arg；

x29是aib、gly、ala、gln、thr、ser或lys或不存在；

y1是

lys-gly，gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，gly-pro-ser-ser-gly-aa-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser，gly-lys-lys-asn-asp-trp-lys-his-asn-ile-thr-gln或不存在；

y2是ψ或不存在；

r²是-nh2或-oh；

其中ψ是獨(dú)立地選自lys、arg、orn和cys的殘基，并且其中所述殘基的側(cè)鏈與親脂性取代基綴合；

并且其中所述gip類(lèi)似物包含一個(gè)且僅包含一個(gè)殘基ψ。

在一個(gè)方面，r¹是h-、ac或pglu。

可存在于式i的一些可變位置處的殘基組合包括：

aib2，asp15，lys20；

aib2，asp15，arg20；

aib2，asp15，arg20，ile23；

aib2，ile12，asp15，arg20，ile23，glu24；

ile12，asp15，ile23；

ile12，asp15，ile23，glu24；

ile12，asp15，ala21，ile23；

aib2，ala21，ile23，glu24；

aib2，asp15，ile23；

aib2，asp15，arg20，ile23，gln29；

aib2，asp15，arg20，gly29；

aib2，asp15，ile17，arg20，gly29；

aib2，asp15，ile17，lys20，gly29；

dala2，asp15，ile23；

dala2，asp15，ile23，ala28；

aib2，asp15，ile17，lys20，ala28；

asp15，ile23，glu24；

n-me-ser2，asp15，lys20；

n-me-ser2，asp15，arg20；

n-me-ser2，asp15，arg20，ile23；

n-me-ser2，ile12，asp15，arg20，ile23，glu24；

n-me-ser2，ala21，ile23，glu24；

n-me-ser2，asp15，ile23；

n-me-ser2，asp15，arg20，ile23，gln29；

n-me-ser2，asp15，arg20，gly29；

n-me-ser2，asp15，ile17，arg20，gly29；

n-me-ser2，asp15，ile17，lys20，gly29；

n-me-ser2，asp15，ile23；

n-me-ser2，asp15，ile23，ala28；

ac3c2，asp15，lys20；

ac3c2，asp15，arg20；

ac3c2，asp15，arg20，ile23；

ac3c2，ile12，asp15，arg20，ile23，glu24；

ac3c2，ala21，ile23，glu24；

ac3c2，asp15，ile23；

ac3c2，asp15，arg20，ile23，gln29；

ac3c2，asp15，arg20，gly29；

ac3c2，asp15，ile17，arg20，gly29；

ac3c2，asp15，ile17，lys20，gly29；

ac3c2，asp15，ile23；

ac3c2，asp15，ile23，ala28；

ac4c2，asp15，lys20；

ac4c2，asp15，arg20；

ac4c2，asp15，arg20，ile23；

ac4c2，ile12，asp15，arg20，ile23，glu24；

ac4c2，ala21，ile23，glu24；

ac4c2，asp15，ile23；

ac4c2，asp15，arg20，ile23，gln29；

ac4c2，asp15，arg20，gly29；

ac4c2，asp15，ile17，arg20，gly29；

ac4c2，asp15，ile17，lys20，gly29；

ac4c2，asp15，ile23；

ac4c2，asp15，ile23，ala28；

ac5c2，asp15，lys20；

ac5c2，asp15，arg20；

ac5c2，asp15，arg20，ile23；

ac5c2，ile12，asp15，arg20，ile23，glu24；

ac5c2，ala21，ile23，glu24；

ac5c2，asp15，ile23；

ac5c2，asp15，arg20，ile23，gln29；

ac5c2，asp15，arg20，gly29；

ac5c2，asp15，ile17，arg20，gly29；

ac5c2，asp15，ile17，lys20，gly29；

ac5c2，asp15，ile23；或ac5c2，asp15，ile23，ala28。

本發(fā)明在另一方面提供了由通式ii表示的gip類(lèi)似物，或其可藥用鹽或溶劑合物，

r¹-tyr-x2-glu-gly-thr-phe-ile-ser-asp-tyr-ser-x12-glu-leu-x15-x16-x17-x18-x19-x20-x21-phe-x23-x24-x25-leu-x27-x28-x29-y1-y2-r²(ii)

其中

r¹是h-、ac或pglu；

x2是aib、ala、d-ala或gly；

x12是lys、ψ或ile；

x15是asp或glu；

x16是ser、glu、lys或ψ；

x17是ile、lys、gln、arg或ψ；

x18是his、arg或ala；

x19是gln或ala；

x20是gln、lys、ala、his或arg；

x21是ala、asp或glu；

x23是ile或val；

x24是asn或glu；

x25是tyr或trp；

x27是leu、glu、ser、lys或val；

x28是ala、ser或arg；

x29是aib、gly、ala、gln、thr、ser或lys或不存在；

y1是

lys-gly，gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-，gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser，gly-lys-lys-asn-asp-trp-lys-his-asn-ile-thr-gln或不存在；

y2是ψ或不存在；

r²是-nh2或-oh；

其中ψ是lys殘基，其中所述lys殘基的側(cè)鏈與親脂性取代基綴合；

并且其中所述gip類(lèi)似物包含一個(gè)且僅包含一個(gè)殘基ψ。

可存在于式ii的一些可變位置處的殘基組合包括：

aib2，lys12，asp15，lys20；

aib2，lys12，asp15，arg20；

aib2，asp15，arg20；

alib2，ile12，asp15，arg20，glu24；

ile12，asp15，ile23；

ile12，asp15，glu24；

ile12，asp15，ala21；

aib2，lys12，ala21，glu24；

aib2，lys12，asp15；

aib2，lys，12，asp15，arg20，gln29；

aib2，lys，12，asp15，arg20，gly29；

aib2，lys12，asp15，ile17，arg20，gly29；

aib2，asp15，ile17，lys20，gly29；

dala2，asp15；

dala2，asp15，ala28；

aib2，asp15，ile17，lys20，ala28；

asp15，glu24；

ala2，lys12，asp15，lys20；

ala2，lys12，asp15，arg20；

ala2，asp15，arg20；

ala2，ile12，asp15，arg20，glu24；

ala2，ile12，asp15，ile23；

ala2，ile12，asp15，glu24；

ala2，ile12，asp15，ala21；

ala2，lys12，ala21，glu24；

ala2，lys12，asp15；

ala2，lys12，asp15，arg20，gln29；

ala2，lys12，asp15，arg20，gly29；

ala2，lys12，asp15，ile17，arg20，gly29；

ala2，asp15，ile17，lys20，gly29；

ala2，asp15；

ala2，asp15，ala28；

ala2，asp15，ile17，lys20，ala28；

gly2，lys12，asp15，lys20；

gly2，lys12，asp15，arg20；

gly2，asp15，arg20；

gly2，ile12，asp15，arg20，glu24；

gly2，ile12，asp15，ile23；

gly2，ile12，asp15，glu24；

gly2，ile12，asp15，ala21；

gly2，lys12，ala21，glu24；

gly2，lys12，asp15；

gly2，lys12，asp15，arg20，gln29；

gly2，lys12，asp15，arg20，gly29；

gly2，lys12，asp15，ile17，arg20，gly29；

gly2，asp15，ile17，lys20，gly29；

gly2，asp15；

gly2，asp15，ala28；

gly2，asp15，ile17，lys20，ala28；或

gly2，asp15，glu24。

本發(fā)明在另一方面提供了由通式iii表示的gip類(lèi)似物，或其可藥用鹽或溶劑合物，

r¹-tyr-aib-glu-gly-thr-phe-ile-ser-asp-tyr-ser-ile-glu-leu-x15-x16-x17-x18-x19-x20-x21-phe-val-x24-x25-leu-leu-ala-x29-y1-y2-r²(iii)

其中

r¹是h-、ac或pglu；

x15是asp或glu；

x16是lys或ψ；

x17是ile或ψ；

x18是his或ala；

x19是gln或ala；

x20是gln、lys或arg；

x21是ala、asp或glu；

x24是asn或glu；

x25是tyr或trp；

x28是ala、ser或arg；

x29是gln或不存在；

y1是lys-gly，gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser，gly-lys-lys-asn-asp-trp-lys-his-asn-ile-thr-gln或不存在；

y2是ψ或不存在；

r²是-nh2或-oh；

其中ψ是獨(dú)立地選自lys、arg、orn和cys的殘基，并且其中所述殘基的側(cè)鏈與親脂性取代基綴合；

并且其中所述gip類(lèi)似物包含一個(gè)且僅包含一個(gè)殘基ψ。

可存在于式iii的一些可變位置處的殘基組合包括：

asp15，lys20；

asp15，arg20；

asp15，arg20，glu24；

asp15，lys16；

asp15，lys16，glu24；

asp15，ψ16，ala21；

ala21，glu24；

asp15，arg20，gln29；

asp15，arg20，gly29；

asp15，ile17，arg20，gly29；

asp15，ile17，lys20，gly29；

asp15ala28；

asp15，ile17，lys20，ala28；

asp15，ile23，glu24；

asp15，ψ17，lys20；

asp15，ψ17，arg20；

asp15，ψ17，arg20

asp15，ψ17，arg20，glu24；

asp15，lys16，ψ17；

asp15，lys16，ψ17，glu24；

asp15，ψ17，ala21；

ala21，ψ17，glu24；

asp15，asp15，ψ17，arg20，gln29；

asp15，ψ17，arg20，gly29；

asp15，ile17，arg20，gly29；

asp15，ile17，lys20，gly29；

asp15；ψ17；

asp15，ψ17，ala28；

asp15，ile17，lys20，ala28；或

asp15，ψ17，ile23，glu24。

gip類(lèi)似物可具有式r1-z-r2，其中r1和r2如上所定義，并且z具有以下序列：

y-aib-egtfisdysieldkψhqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldψihqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielekψhqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgapppsψ；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgapppsψ；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqψ；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqkgψ；

y-aib-egtfisdysieldkψhqqdfvnyllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkψhqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkψaaqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielekψaakefvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielekψaqrafvewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaqgpssgapppsψ；

y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaqψ；

y-aib-egtfisdysieldkψaaqdfvnwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvnwllagpssgapppsψ；

y-aib-egtfisdysieldkkψaqrafvewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaqrafiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllagpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkiaqkefiewllagpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvewllagpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllaqgpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqafvnwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfvnwllaagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfinwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfiewllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfiewllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkψiaqrafiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdyskψeldkiaqrafiewllaqgpssgappps；

y-dala-egtfisdysieldkkψaqrafiewllaqgpssgappps；

y-dala-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgapppskψ；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqdfinwllaqgpssgappps.；或

y-aib-egtfisdysieldkkψaaqafiewllaqgpssgappps。

gip類(lèi)似物可具有式r1-z-r2，其中r1和r2如上所定義，并且z具有以下序列：

y-aib-egtfisdysieldk-k(十六烷?；?異glu)-hqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysield-k(十六烷酰基-異glu)-ihqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielek-k(十六烷酰基-異glu)-hqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgappps-k(十六烷?；?異glu)；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaq-k(十六烷酰基-異glu)；

y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqkg-k(十六烷?；?異glu)；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-hqqdfvnyllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-hqqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielek-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aakefvnwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielek-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafvewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaq-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvnwllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafvewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷酰基)-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷酰基)-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqrafvewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k((1g-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqkefvewllaagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqkefvewllaagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllagpssgappps-k([19-羰基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkiaqkefiewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙酰基]-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqafvnwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllaagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfinwllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfiewllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷酰基)-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aaqdfiewllagpssgappps；

y-aib-egtfisdysield-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-iaqrafiewllaqgpssgappps-；

y-aib-egtfisdys-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-eldkiaqrafiewllaqgpssgappps；

y-dala-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps；

y-dala-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙酰基]-peg3-peg3)；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfiewllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfinwllaqgpssgappps；

y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqafiewllaqgpssgappps：或

y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aaqafiewllaqgpssgappps。

gip類(lèi)似物可以是：

h-y-aib-egtfisdysieldk-k(十六烷酰基-異glu)-hqqdfvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物1)；

h-y-aib-egtfisdysield-k(十六烷酰基-異glu)-ihqqdfvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物2)；

h-y-aib-egtfisdysielek-k(十六烷?；?異glu)-hqqdfvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物3)；

h-y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物4)；

h-y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqgpssgappps-k(十六烷?；?異glu)-nh2(化合物5)；

h-y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaq-k(十六烷酰基-異glu)-nh2(化合物6)；

h-y-aib-egtfisdysieldkihqqdfvnwllaqkg-k(十六烷?；?異glu)-nh2(化合物7)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-hqqdfvnyllaqgpssgappps-nh2(化合物8)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-hqqdfvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物9)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物10)；

h-y-aib-egtfisdysielek-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aakefvnwllaqgpssgappps-nh2(化合物11)；

h-y-aib-egtfisdysielek-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafvewllaqgpssgappps-nh2(化合物12)；

h-y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物13)；

h-y-aib-egtfisdysielekiaqrafvewllaq-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物14)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllagpssgappps-nh2(化合物15)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvnwllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物16)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafvewll-aqgpssgappps-nh2(化合物17)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物18)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物19)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k((1g-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqrafvewllaqgpssgappps-nh2(化合物20)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aqkefvewllaagpssgappps-nh2(化合物21)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aqkefvewllaagpssgappps-nh2(化合物22)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物23)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaqkefiewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物24)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物25)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙酰基]-peg3-peg3)-nh2(化合物26)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaaqdfvewllagpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物27)；

h-y-aib-egtfisdysieldkiaqrafiewllaqgpssgappps-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-nh2(化合物28)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqafvnwllagpssgappps-nh2(化合物29)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfvnwllaagpssgappps-nh2(化合物30)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfinwllagpssgappps-nh2(化合物31)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqdfiewllagpssgappps-nh2(化合物32)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷酰基)-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-aaqdfiewllagpssgappps-nh2(化合物33)；

h-y-aib-egtfisdysield-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-iaqrafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物34)；

h-y-aib-egtfisdys-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-eldkiaqrafiewllaqgpssgappps-nh2；；(化合物35)；

h-y-dala-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aqrafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物36)；

h-y-dala-egtfisdysieldkiaaqdfiewllagpssgappps-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙?；鵠-peg3-peg3)-nh2(化合物37)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfiewllaqgpssgappps-nh2(化合物38)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3)-aaqdfinwllaqgpssgappps-nh2(化合物39)；

h-y-aib-egtfisdysieldk-k([19-羧基-十九烷酰基]-異glu-peg3-peg3)-aaqafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物40)；和

或

h-y-aib-egtfisdysieldk-k((19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙酰基]-peg3-peg3)-aaqafiewllaqgpssgappps-nh2(化合物41)。

本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含與載體(優(yōu)選可藥用載體)混合的如本文所述的gip類(lèi)似物或其可藥用鹽或溶劑合物。gip類(lèi)似物可以例如為可藥用酸加成鹽。

藥物組合物可配制成適于通過(guò)注射或輸注施用的液體。藥物組合物可配制成使得所述gip類(lèi)似物受控釋放，例如緩慢釋放。

本發(fā)明還提供了包含本文所述的gip類(lèi)似物的治療藥盒以及包含本文所述的gip類(lèi)似物的裝置。

本發(fā)明還提供了本文所述的gip類(lèi)似物或其可藥用鹽或溶劑合物，其用于醫(yī)學(xué)治療的方法，例如用于治療和/或預(yù)防代謝紊亂。

本發(fā)明還提供了本文所述的gip類(lèi)似物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療和/或預(yù)防代謝紊亂之藥物中的用途。

本發(fā)明還提供了預(yù)防和/或治療對(duì)象中的代謝紊亂的方法，其包括向所述對(duì)象施用本文所述的gip類(lèi)似物或其可藥用鹽或溶劑合物。

代謝紊亂可以是糖尿病或糖尿病相關(guān)紊亂，或者肥胖或肥胖相關(guān)紊亂。肥胖與糖尿病之間的關(guān)聯(lián)是公知的，因此這些病癥可以但并不必須是分開(kāi)的或相互排斥的。

糖尿病相關(guān)紊亂包括胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、空腹血糖升高、前驅(qū)糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠期糖尿病高血壓、血脂異常及其組合。

糖尿病相關(guān)紊亂還包括動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)；或者與以下相關(guān)的病癥：致動(dòng)脈粥樣硬化性血脂異常、血脂紊亂、血壓升高、高血壓、血栓前狀態(tài)、促炎狀態(tài)和骨相關(guān)紊亂，如骨質(zhì)疏松癥。

血脂紊亂可選自高甘油三酯、低hdl膽固醇、高ldl膽固醇以及動(dòng)脈壁中斑塊堆積或其組合。

血栓前狀態(tài)可選自血液中高纖維蛋白原水平和血液中高纖溶酶原激活物抑制劑-1水平。

促炎狀態(tài)可以是血液中c反應(yīng)蛋白水平升高。

肥胖相關(guān)紊亂包括肥胖關(guān)聯(lián)的炎癥、肥胖關(guān)聯(lián)的膽囊疾病或肥胖誘發(fā)的睡眠呼吸暫停，或者可與選自以下的病癥相關(guān)：致動(dòng)脈粥樣硬化性血脂異常、血脂紊亂、血壓升高、高血壓、血栓前狀態(tài)和促炎狀態(tài)或其組合。

附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1：5小時(shí)禁食小鼠的ogtt中的血糖水平(a-c)和血糖曲線下面積(auc)(d)。在經(jīng)口強(qiáng)飼葡萄糖(t＝0)前4小時(shí)，用載劑、glp-1類(lèi)似物利拉魯肽(10nmol/kg)和gip受體激動(dòng)劑(化合物12、13、17和21，3-300nmol/kg)皮下(s.c.)注射小鼠。數(shù)據(jù)為平均值±sem；n＝6。與載劑相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：＊p＜0.05，＊＊p＜0.01，＊＊＊p＜0.001。

圖2：5小時(shí)禁食小鼠的ogtt中的血糖水平(a-d)和血糖曲線下面積(auc)(e)。在經(jīng)口強(qiáng)飼葡萄糖(t＝0)前4小時(shí)，用載劑和gip受體激動(dòng)劑(化合物12、18、41、33和35，3-300nmol/kg)皮下(s.c.)注射小鼠。數(shù)據(jù)為平均值±sem；n＝6。與載劑相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：＊＊＊p＜0.001。

圖3：三周處理期間dio小鼠的相對(duì)體重變化(δ體重＝每個(gè)研究日的體重-第1天的體重)。每天用兩種單獨(dú)的皮下注射處理動(dòng)物1次。第一次注射為用載劑1或glp-1類(lèi)似物利拉魯肽(20nmol/kg)。第二次注射為用載劑2或化合物12(3和30nmol/kg)。gip激動(dòng)劑僅在研究的每個(gè)第三天(從第1天開(kāi)始)給藥。在其他天，gip激動(dòng)劑替換為載劑2。數(shù)據(jù)為平均值±sem；n＝8-9。在第22天與載劑相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：＊＊＊p＜0.001。利拉魯肽與利拉魯肽和gip激動(dòng)劑共處理之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)用線表示。

圖4：使用載劑、glp-1類(lèi)似物利拉魯肽、利拉魯肽+化合物10或12(a)、利拉魯肽+化合物17(b)、利拉魯肽+化合物18(c)、利拉魯肽+化合物35(d)或利拉魯肽+化合物41(e)處理四周期間，dio小鼠的相對(duì)體重變化(δ體重＝每個(gè)研究日的體重-第0天的體重)。每天用兩種單獨(dú)的皮下注射處理動(dòng)物一次。第一次注射為用載劑1或利拉魯肽(20nmol/kg)。第二次注射為用載劑2或gip激動(dòng)劑(30和/或300nmol/kg)。gip激動(dòng)劑僅在研究的每個(gè)第三天(從第0天開(kāi)始)給藥。在其他天，gip激動(dòng)劑替換為載劑2。數(shù)據(jù)為平均值±sem；n＝9。在第27天與載劑相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：＊＊＊p＜0.001。利拉魯肽與利拉魯肽和gip激動(dòng)劑共處理之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)用線表示。

發(fā)明詳述

除非本文另有定義，否則本申請(qǐng)中所使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。通常，本文所述的與化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞和癌癥生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、藥理學(xué)以及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語(yǔ)和技術(shù)是本領(lǐng)域中公知和常用的。

定義

除非另有說(shuō)明，否則對(duì)于在以上書(shū)面描述中所使用的特定術(shù)語(yǔ)給出如下定義。

在整個(gè)本說(shuō)明書(shū)中，詞語(yǔ)“包含”或其變化形式將理解為暗示包含所述整體(或組分)或整體(或組分)的組，但不排除任何其他整體(或組分)或整體(或組分)的組。

除非上下文另有明確說(shuō)明，否則沒(méi)有數(shù)量詞修飾的對(duì)象包括多個(gè)所述對(duì)象。

術(shù)語(yǔ)“包括”用于表示“包括但不限于”。“包括”和“包括但不限于”可互換使用。

術(shù)語(yǔ)“患者”、“對(duì)象”和“個(gè)體”可互換使用并且是指人或非人動(dòng)物。這些術(shù)語(yǔ)包括哺乳動(dòng)物如人；靈長(zhǎng)動(dòng)物；家畜動(dòng)物(例如牛、豬)；伴侶動(dòng)物(例如犬、貓)和嚙齒類(lèi)動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)。

在本發(fā)明的上下文中的術(shù)語(yǔ)“溶劑合物”是指在溶質(zhì)(這里指的是根據(jù)本發(fā)明的肽綴合物或其可藥用鹽)與溶劑之間形成的確定化學(xué)計(jì)量的復(fù)合物。在這一點(diǎn)上，所述溶劑可以例如是水、乙醇或其他可藥用的代表性小分子有機(jī)物，例如但不限于乙酸或乳酸。當(dāng)上述溶劑是水時(shí)，這樣的溶劑合物通常被稱(chēng)為水合物。

本發(fā)明上下文中使用的術(shù)語(yǔ)“激動(dòng)劑”是指通過(guò)所討論的受體類(lèi)型活化信號(hào)傳導(dǎo)的物質(zhì)(配體)。本發(fā)明上下文中使用的術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”是指通過(guò)所討論的受體類(lèi)型減少信號(hào)傳導(dǎo)的物質(zhì)(配體)。

在整個(gè)說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，使用天然(或“蛋白質(zhì)的(proteinogenic)”)氨基酸的常規(guī)單字母和三字母代碼，以及其他(非天然或“非蛋白質(zhì)的(non-proteinogenic)”)α-氨基酸的普遍接受的三字母代碼，例如，aib(α-氨基異丁酸)、orn(鳥(niǎo)氨酸)和d-ala(d-丙氨酸)。除非明確指出，否則本發(fā)明的肽中的所有氨基酸殘基優(yōu)選為l構(gòu)型。

本文中所公開(kāi)的序列是在序列的氨基端(n端)處并入“h-”部分的序列，以及在序列的羧基端(c端)處并入“-oh”部分或“-nh2”部分的序列。在這樣的情況下，除非另有說(shuō)明，否則所述序列的n端處的“h-”部分表示氫原子(即r¹＝h)，對(duì)應(yīng)于在n端處存在游離的伯氨基或仲氨基，而在所述序列的c端處的“-oh”或“-nh2”部分(即r²＝oh或nh2)分別表示c端處的羧基(cooh)或酰胺基(conh2)。

本發(fā)明的化合物具有g(shù)ip生物活性，特別是在代謝疾病例如糖尿病和肥胖的治療中。這可在例如體內(nèi)測(cè)定中進(jìn)行評(píng)估，其中在測(cè)試動(dòng)物已經(jīng)用gip類(lèi)似物治療或暴露于gip類(lèi)似物之后測(cè)定血糖水平或另外的生物活性。當(dāng)將本發(fā)明的化合物與glp-1受體激動(dòng)劑一起施用于糖尿病患者和/或超重或肥胖對(duì)象時(shí)，其可特別有效地改善血糖控制(glycaemiccontrol)并減輕體重。當(dāng)按照相當(dāng)?shù)慕o藥方案給藥時(shí)，這種組合治療獲得的效果可優(yōu)于在相當(dāng)對(duì)象中單獨(dú)施用glp-1受體激動(dòng)劑所獲得的效果。本發(fā)明的化合物在單獨(dú)施用時(shí)還能夠改善血糖控制和減輕體重。y1和y2基團(tuán)對(duì)gip類(lèi)似物具有穩(wěn)定作用。不受任何理論的約束，認(rèn)為包含exendin-4的c末端部分和gip化合物的基團(tuán)對(duì)肽的折疊有影響。在糖尿病對(duì)象或超重對(duì)象的治療中，當(dāng)按照相當(dāng)?shù)慕o藥方案給藥時(shí)，用本發(fā)明的gip類(lèi)似物的治療效果可優(yōu)于在相當(dāng)對(duì)象中用等同量(以質(zhì)量或摩爾比計(jì))野生型人gip獲得的效果，無(wú)論單獨(dú)還是與另一種抗糖尿病藥劑或抗肥胖藥劑組合。

體外測(cè)定中的活性也可用作化合物活性的量度。

通常，所述化合物對(duì)gip受體(稱(chēng)為gip-r)具有活性(即，激動(dòng)劑活性)。ec50值可用作激動(dòng)劑對(duì)給定受體效力的數(shù)值量度。ec50值是在特定測(cè)定中實(shí)現(xiàn)化合物最大活性一半時(shí)所需的化合物濃度的測(cè)量值。在任何給定的測(cè)定中，可相對(duì)于人gip的ec50評(píng)估給定測(cè)定中化合物的ec50值。因此，在人gip受體的情況下，測(cè)試化合物的ec50值與野生型人gip的ec50的比率(ec50[測(cè)試化合物]/ec50[gip])可小于10、小于5、小于1、小于0.1、小于0.05或小于0.01。ec50值可使用下文實(shí)施例中描述的人gip受體測(cè)定法來(lái)測(cè)定。在這種測(cè)定中，化合物的ec50值可以為例如0.001-0.050nm、0.001-0.030nm、0.001-0.020nm或0.001-0.010nm。

在glp-1受體的情況下，化合物通常具有最小激動(dòng)劑活性或不具有激動(dòng)劑活性。例如，人gip受體的情況下，測(cè)試化合物的ec50值與glp-1激動(dòng)劑exendin-4的ec50值的比率(ec50[測(cè)試化合物]/ec50[ex4])可以為至少約100、至少約250、至少約500、至少約750、至少約1000、至少約5000或至少約10,000。(此處使用“約”表示+/-10％)。ec50值可以使用以下實(shí)施例中描述的人glp-1受體測(cè)定法來(lái)測(cè)定。在這種測(cè)定中，化合物的ec50值可以例如為至少1nm、至少3nm、至少5nm或至少10nm。

親脂性基團(tuán)

本發(fā)明的化合物包含殘基ψ，即選自lys、arg、orn和cys的殘基，在所述殘基中側(cè)鏈與親脂性取代基綴合。

不希望受到任何特定理論的約束，認(rèn)為所述取代基與血流中的血漿蛋白質(zhì)(例如白蛋白)結(jié)合，從而保護(hù)本發(fā)明化合物不被酶促降解，并因此提高所述化合物的半衰期。所述取代基還可調(diào)節(jié)所述化合物例如對(duì)gip受體的效力。

取代基在側(cè)鏈的遠(yuǎn)離α-碳的末端處與官能團(tuán)綴合。因此，通過(guò)存在所述取代基，可降低或完全消除lys、arg、orn或cys側(cè)鏈參與由官能團(tuán)介導(dǎo)的相互作用(例如，分子內(nèi)和分子間相互作用)的正常能力。因此，所述化合物的總體性質(zhì)可對(duì)實(shí)際作為殘基ψ存在的氨基酸變化相對(duì)不敏感。因此，認(rèn)為任何殘基lys、arg、orn和cys可存在于其中允許ψ的任何位置。然而，在某些實(shí)施方案中，ψ的氨基酸組分為lys可能是有利的。

因此，ψ為lys、arg、orn或cys殘基，在所述殘基中側(cè)鏈與具有式-z¹或-z²-z¹的取代基綴合。

-z¹是在末端以-x-與ψ或z²連接的脂肪鏈；

其中

-x-是鍵、-co-、-so-或-so2-；

以及，任選地，z¹在鏈遠(yuǎn)離連接-x-的末端處具有極性基團(tuán)；所述極性基團(tuán)包括羧酸或羧酸生物電子等排體、膦酸或磺酸基團(tuán)；

并且其中-z²-(如果存在的話)是將z¹與ψ相連的下式的間隔物：

其中：

每個(gè)y獨(dú)立地為-nh、-nr、-s或-o，其中r是烷基、保護(hù)基團(tuán)或者與間隔物z²的另一部分形成鍵；

每個(gè)x獨(dú)立地為鍵、co-、so-或so2-；

前提條件是當(dāng)y是-s時(shí)，與其結(jié)合的x是鍵；

每個(gè)v獨(dú)立地為連接y和x的二價(jià)有機(jī)部分；

并且n是1至10。

基團(tuán)z¹

z¹是具有與ψ或與z²之連接(在本文中稱(chēng)為-x-)的脂肪鏈。-x-可以是例如鍵、?；?-co-)、亞磺酰基(-so-)或磺?；?-so2-)。當(dāng)z¹與ψ直接結(jié)合時(shí)，即，當(dāng)z²不存在時(shí)，優(yōu)選地，-x-是?；?-co-)、亞磺?；?-so-)或磺?；?-so2-)。最優(yōu)選地，-x-是?；?-co-)。

z¹還可具有極性基團(tuán)，所述極性基團(tuán)位于鏈遠(yuǎn)離連接-x-的末端處。換句話說(shuō)，所述連接相對(duì)于所述極性基團(tuán)位于ω位置。所述極性基團(tuán)可直接與脂肪鏈的末端結(jié)合，或者可以通過(guò)接頭結(jié)合。

優(yōu)選地，所述極性基團(tuán)是酸性或弱酸性基團(tuán)，例如，羧酸或羧酸生物電子等排體、膦酸鹽/酯或磺酸鹽/酯。所述極性基團(tuán)在水中的pka可為-2至12，更優(yōu)選1至7，更優(yōu)選3至6。某些優(yōu)選的極性基團(tuán)的pka為4至5。

例如，但并不限于，所述極性基團(tuán)可包括羧酸(-cooh)或羧酸生物電子等排體、膦酸(-p(o)(oh)2)或磺酸(-so2oh)基團(tuán)。

優(yōu)選地，所述極性基團(tuán)(如果存在的話)包括羧酸或羧酸生物電子等排體。合適的羧酸生物電子等排體是本領(lǐng)域中已知的。優(yōu)選地，所述生物電子等排體具有pka與相應(yīng)羧酸相似的質(zhì)子。合適的生物電子等排體的實(shí)例可以包括但不限于四唑、?；酋０?、酰基羥胺和方酸衍生物，如下所示(---表示連接點(diǎn))：

r是例如me、cf3

本文中所使用的脂肪鏈?zhǔn)侵赴荚渔湹牟糠郑鎏荚又饕粴浠蝾?lèi)氫原子(例如烴鏈)取代。這樣的脂肪鏈通常被稱(chēng)為是親脂性的，盡管可以理解取代可能改變整個(gè)分子的親脂性。

所述脂肪鏈可以是脂肪族的。其可以是完全飽和的或者可包含一個(gè)或更多個(gè)雙鍵或三鍵。每個(gè)雙鍵(如果存在的話)可以是e或z構(gòu)型。所述脂肪鏈在其長(zhǎng)度上也可具有一個(gè)或更多個(gè)環(huán)亞烷基或雜環(huán)亞烷基部分，并且另外地或者替代地在其長(zhǎng)度上可具有一個(gè)或更多個(gè)亞芳基或雜亞芳基部分。例如，所述脂肪鏈可在其長(zhǎng)度上并入例如如下所示的亞苯基或亞哌嗪基部分(其中---表示鏈內(nèi)的連接點(diǎn))。

所述脂肪鏈可以衍生自脂肪酸，例如，其可衍生自具有6至12個(gè)碳原子的脂肪族尾的中鏈脂肪酸(medium-chainfattyacid，mcfa)；具有13至21個(gè)碳原子的脂肪族尾的長(zhǎng)鏈脂肪酸(long-chainfattyacid，lcfa)；或具有22或更多個(gè)碳原子的脂肪族尾的非常長(zhǎng)鏈脂肪酸(lcfa)。線性飽和脂肪酸的實(shí)例包括十三(十三烷)酸、肉豆蔻(十四烷)酸、十五烷(十五烷)酸、棕櫚(十六烷)酸和十七(十七烷)酸，從所述線性飽和脂肪酸可以得到合適的脂肪鏈。線性不飽和脂肪酸的實(shí)例包括肉豆蔻油酸、棕櫚油酸、杉皮酸(sapieticacid)和油酸，從所述線性不飽和脂肪酸可以得到合適的脂肪鏈。

所述脂肪鏈可通過(guò)酰胺鍵、亞磺酰胺鍵、磺酰胺鍵，或者通過(guò)酯鍵，或者通過(guò)醚、硫醚或胺鍵與ψ或與z²連接。因此，所述脂肪鏈可具有至ψ或至z²的鍵或者酰基(-co-)、亞磺?；?-so-)或磺?；?-so2-)基團(tuán)。優(yōu)選地，所述脂肪鏈具有含有?；?-co-)的末端，并通過(guò)酰胺或酯鍵與ψ或z²連接。

在一些實(shí)施方案中，z¹為下式的基團(tuán)：

a-b-alk-x-

其中

a是氫或羧酸、羧酸生物電子等排體、膦酸或磺酸基；

b是鍵或接頭；

x是鍵、?；?-co-)、亞磺?；?-so-)或磺酰基(-so2-)；并且

alk是可任選地被一個(gè)或更多個(gè)取代基取代的脂肪鏈。所述脂肪鏈的長(zhǎng)度優(yōu)選是6至28個(gè)碳原子(例如，c6-28亞烷基)，更優(yōu)選地，長(zhǎng)度是12至26個(gè)碳(例如，c12-26亞烷基)，更優(yōu)選地，長(zhǎng)度是16至22個(gè)碳(例如，c16-22亞烷基)，并且可以是飽和或不飽和的。優(yōu)選地，alk是飽和的，即，優(yōu)選alk為亞烷基。

脂肪鏈上的任選取代基可獨(dú)立地選自氟、c1-4烷基，優(yōu)選甲基；三氟甲基、羥甲基、氨基、羥基、c1-4烷氧基，優(yōu)選甲氧基；氧代和羧基，并且可獨(dú)立地位于沿著鏈的任何點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，每個(gè)任選的取代基選自氟、甲基和羥基。在存在多于一個(gè)取代基的情況下，取代基可以相同或不同。優(yōu)選地，取代基的數(shù)目是0至3；更優(yōu)選地，所述脂肪鏈?zhǔn)俏唇?jīng)取代的。

b可以是鍵或接頭。當(dāng)b是接頭時(shí)，其可以是環(huán)亞烷基、雜環(huán)亞烷基、c6亞芳基或c5-6雜亞芳基、或c6亞芳基-o-或-c5-6雜亞芳基-o-。

當(dāng)b是亞苯基時(shí)，其可以例如選自1，2-亞苯基、1，3-亞苯基、1，4-亞苯基，優(yōu)選1，4-亞苯基(使得a-b-是4-苯甲酸取代基或4-苯甲酸生物電子等排體)。當(dāng)b是亞苯基-o-時(shí)，其可以例如選自1，2-亞苯基-o-、1，3-亞苯基-o-、1，4-亞苯基-o-，優(yōu)選1，4-亞苯基-o。b的每個(gè)亞苯基可以任選地被選自以下的一個(gè)或更多個(gè)取代基取代：氟、甲基、三氟甲基、氨基、羥基、和c1-4烷氧基，優(yōu)選甲氧基。應(yīng)當(dāng)理解，可以選擇取代基種類(lèi)(identity)和位置以精細(xì)地改變極性基團(tuán)的pka。合適地誘導(dǎo)的(inductively)或內(nèi)消旋的(mesomerically)吸電子或供電子基團(tuán)及其位置效應(yīng)是本領(lǐng)域中已知的。在一些實(shí)施方案中，b可以是c5-6雜亞芳基，例如，亞吡啶基或亞噻吩基，并且可如描述的任選地被取代。

例如，在一些實(shí)施方案中，a-b-可以選自：

優(yōu)選地，a為h或hooc-，并且b為鍵。

應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)a為氫時(shí)，b是鍵且alk是未經(jīng)取代的亞烷基，a-b-alk-為式h3c-(ch2)n-的烷基鏈。

在一些實(shí)施方案中，z¹為下式的?；?/p>

a-b-alk-(co)-

或下式的磺?；?/p>

a-b-alk-(so2)-。

優(yōu)選地，z¹為下式的酰基：

a-b-亞烷基-(co)-

其中a和b如以上所定義的。

在一些實(shí)施方案中，a是-cooh且b是鍵。因此，某些優(yōu)選的z¹來(lái)源于式hooc-(ch2)12-22-cooh的長(zhǎng)鏈飽和α，ω-二羧酸，優(yōu)選在脂肪鏈中具有偶數(shù)個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈飽和α，ω-二羧酸。在另一些實(shí)施方案中，a是h且b是鍵。因此，某些優(yōu)選的z¹來(lái)源于式hooc-(ch2)12-22-ch3的長(zhǎng)鏈飽和羧酸，優(yōu)選在脂肪鏈中具有偶數(shù)個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈飽和羧酸。

例如，但不限于，z¹可以是：

a-b-c16-20亞烷基-(co)-，其中a為h或-cooh且b為鍵，例如：

17-羧基-十七烷酰基hooc-(ch2)16-(co)-；

19-羧基-十九烷?；鵫ooc-(ch2)18-(co)-；

十八烷?；鵫3c-(ch2)16-(co)-；

二十烷酰基h3c-(ch2)18-(co)-；

羧酸基團(tuán)(如果存在的話)可被如本文所詳述的生物電子等排體替換。

基團(tuán)z²

z²是任選的間隔物，其將z¹與ψ的氨基酸組分的側(cè)鏈進(jìn)行連接。最通常而言，z²(如果存在的話)是在一端結(jié)合y而在另一端結(jié)合x(chóng)的間隔物，所述y可以是氮、氧或硫原子，所述x可以是鍵或酰基(-co-)、亞磺?；?-so-)、磺?；?-so2-)或不存在。因此，z²可以是下式(---表示連接點(diǎn))的間隔物：

其中：

y可以是-nh、-nr、-s或-o，其中r可以是烷基、保護(hù)基團(tuán)或者可與所述間隔物的另一部分形成鍵，剩余價(jià)鍵與z¹形成鍵；

x可以是鍵、co-、so-或so2-，剩余價(jià)鍵與ψ的氨基酸組分的側(cè)鏈的形成鍵；

v是連接y和x的二價(jià)有機(jī)部分；

并且n可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在n是2或更大的情況下，每個(gè)y、v和x獨(dú)立于每個(gè)其余的y、v和x。

因此，根據(jù)y和x的性質(zhì)以及z¹和側(cè)鏈上的相應(yīng)連接基團(tuán)，z²可在每側(cè)通過(guò)酰胺、亞磺酰胺、磺酰胺或酯鍵或通過(guò)氨基、醚或硫醚鍵相結(jié)合。在n是2或更大的情況下，每個(gè)v也可通過(guò)如所描述的鍵與各個(gè)相鄰的v結(jié)合。優(yōu)選地，連鍵是酰胺、酯或磺酰胺，最優(yōu)選酰胺。因此，在一些實(shí)施方案中，每個(gè)y是-nh或-nr且每個(gè)x是co-或so2-。最優(yōu)選地，-x-是酰基(-co-)。

在一些實(shí)施方案中，z²是式-sa-、-sb-、-sa-sb-或-sb-sa-的間隔物，其中sa和sb如下所定義。

在一些實(shí)施方案中，z²選自-sa-或-sb-sa-，即，[側(cè)鏈]-z²z¹是[側(cè)鏈]-sa-z¹或[側(cè)鏈]-sb-sa-z¹。

基團(tuán)sa

sa可以是單個(gè)氨基酸殘基或氨基酸衍生物的殘基，特別是在c端處用亞磺?；蚧酋；骠然糠值陌被嵫苌餁埢?。另外地或替代地，單個(gè)氨基酸殘基可具有在n端處代替氮原子的氧或硫原子。

sa可以是或可包含含氮雜環(huán)，所述含氮雜環(huán)在一端通過(guò)鍵、羧基、亞磺酰基或磺?；?，在另一端通過(guò)環(huán)氮原子結(jié)合在親脂性基團(tuán)內(nèi)。例如，sa可包含哌嗪環(huán)。

適當(dāng)?shù)?，sa是具有1或2個(gè)氮原子并被x基團(tuán)取代的5至8元雜環(huán)，其中x為鍵、co-、so-或so2-，并且其中l(wèi)(如果存在的話)是c1-4亞烷基(-表示親脂性基團(tuán)內(nèi)的連接點(diǎn))。

優(yōu)選地，sa是具有1或2個(gè)(優(yōu)選2個(gè))氮原子并且被-ch2co-、-ch2so-或-ch2so2-基團(tuán)取代的6元雜環(huán)。

例如，sa可以是：

例如，sa可以是：

(本文稱(chēng)為哌嗪-1-基-乙?；?。

優(yōu)選地，sa是單個(gè)氨基酸殘基或哌嗪-1-基-乙?；?。更優(yōu)選地，sa是單個(gè)氨基酸殘基。

在一些實(shí)施方案中，氨基酸可選自γ-glu、α-glu、α-asp、β-asp、ala、β-ala(3-氨基丙酸)、dapa(2，3-二氨基丙酸)、dab(2，4-二氨基丁酸)和gaba(4-氨基丁酸)。應(yīng)當(dāng)理解，在存在多于一個(gè)羧酸或氨基部分的情況下，只要合適，連接可以在任何部分處。在殘基內(nèi)未結(jié)合的任何羧酸或氨基殘基可以是游離的，即，作為游離羧酸或伯胺存在，或者可以是衍生化的。合適的衍生化是本領(lǐng)域中已知的。例如，羧酸部分可作為酯(例如作為甲基酯)存在于sa氨基酸殘基中。氨基部分可作為烷基化的(例如，甲基化的)胺存在，或者可作為酰胺或氨基甲酸酯部分被保護(hù)。其他合適的氨基酸包括β-ala(3-氨基丙酸)和gaba(4-氨基丁酸)和類(lèi)似的ω氨基酸。

應(yīng)當(dāng)理解，氨基酸可以是d或l，或外消旋或?qū)τ掣患幕旌衔?。在一些?shí)施方案中，氨基酸是l-氨基酸。在一些實(shí)施方案中，氨基酸是d-氨基酸。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，sa具有羧酸取代基，優(yōu)選γ-glu、α-glu、α-asp和β-asp及其亞磺?；突酋；苌?。因此，在一些實(shí)施方案中，氨基酸殘基是：

其中，-x-是-co-、-so-、-so2-，優(yōu)選-co-，并且a是1或2，優(yōu)選2。在一些實(shí)施方案中，羧酸是酯，并且氨基酸殘基是：

其中，-x-為-co-、-so-、-so2-，優(yōu)選-co-，并且a為1或2，優(yōu)選2，并且r為c1-4烷基或c6芳基。優(yōu)選地，r為c1-4烷基，優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選乙基。

優(yōu)選的具有羧酸的sa基團(tuán)是γ-glu。

優(yōu)選地，sa選自dapa或γ-glu。最優(yōu)選地，sa為γ-glu。

基團(tuán)sb

sb可以是以下通式的接頭：

其中pu是聚合單元，并且n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。連接基團(tuán)sb的一端是-nh、-nr、-s或-o，其中r可以是烷基、保護(hù)基團(tuán)或者可與所述聚合單元的另一部分形成鍵；而另一端是鍵或co-、so-或so2-。因此，根據(jù)y和x的性質(zhì)以及z1、sa和lys上的相應(yīng)連接基團(tuán)，每個(gè)聚合單元pu可在每側(cè)通過(guò)酰胺、亞磺酰胺、磺酰胺或酯鍵或通過(guò)氨基、醚或硫醚鍵結(jié)合。

在一些實(shí)施方案中，每個(gè)pu可獨(dú)立地為下式的單元：

其中：

y可以是-nh、-nr、-s或-o，其中r可以是烷基、保護(hù)基團(tuán)或者可與間隔物的另一部分形成鍵，剩余價(jià)鍵與z¹形成鍵；

x可以是鍵、co-、so-或so2-，剩余價(jià)鍵與ψ側(cè)鏈形成鍵；

并且v是連接y和x的二價(jià)有機(jī)部分。

在一些實(shí)施方案中，v是天然或非天然氨基酸的α碳，即v是-chr^aa-，其中r^aa是氨基酸側(cè)鏈；或者v是任選取代的c1-6亞烷基，或者v是包含串聯(lián)的一個(gè)或更多個(gè)乙二醇單元的鏈，也稱(chēng)為peg鏈，例如，-ch2ch2-(och2ch2)m-o-(ch2)p-，其中m是0、1、2、3、4或5，并且p是1、2、3、4或5；當(dāng)x是co-時(shí)，p優(yōu)選是1、3、4或5。任選的亞烷基取代基包括氟、甲基、羥基、羥甲基和氨基。

優(yōu)選的pu單元包括：

(i).單個(gè)氨基酸殘基：puⁱ；

(ii).二肽殘基：puⁱⁱ；以及

(iii).氨基-(peg)m-羧酸殘基：puⁱⁱⁱ，

并且可以任意組合或順序存在。例如，sb可以任意順序包含每個(gè)puⁱ、puⁱⁱ和puⁱⁱⁱ中的一個(gè)或更多個(gè)，或者可僅包含puⁱ、puⁱⁱ和puⁱⁱⁱ中的一個(gè)或更多個(gè)單元，或者選自puⁱ和puⁱⁱ、puⁱ和puⁱⁱⁱ、或puⁱⁱ和puⁱⁱⁱ的一個(gè)或更多個(gè)單元。

(i).puⁱ單個(gè)氨基酸殘基

每個(gè)puⁱ可獨(dú)立地選自任何天然或非天然氨基酸殘基，并且例如可選自gly、pro、ala、val、leu、ile、met、cys、phe、tyr、trp、his、lys、arg、gln、asn、α-glu、γ-glu、asp、ser、thr、dapa、gaba、aib、β-ala、5-氨基戊?；?-氨基己酰基、7-氨基庚?；?-氨基辛?；?、9-氨基壬酰基和10-氨基癸?；?yōu)選地，puⁱ氨基酸殘基選自gly、ser、ala、thr和cys，更優(yōu)選地選自gly和ser。

在一些實(shí)施方案中，sb是-(puⁱ)n-，其中n是1至8，更優(yōu)選5至7，最優(yōu)選6。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，sb是-(puⁱ)n-，n是6，并且每個(gè)puⁱ獨(dú)立地選自gly或ser，優(yōu)選序列是-gly-ser-gly-ser-gly-gly-。

(ii).puⁱⁱ二肽殘基

每個(gè)puⁱⁱ可獨(dú)立地選自任何二肽殘基，所述二肽殘基包含通過(guò)酰胺鍵結(jié)合的兩個(gè)天然或非天然氨基酸殘基。優(yōu)選的puⁱⁱ二肽殘基包括gly-gly、gly-ser、ser-gly、gly-ala、ala-gly和ala-ala，更優(yōu)選gly-ser和gly-gly。

在一些實(shí)施方案中，sb是-(puⁱⁱ)n-，其中n是2至4，更優(yōu)選3，并且每個(gè)puⁱⁱ獨(dú)立地選自gly-ser和gly-gly。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，sb是-(puⁱⁱ)n-，n是3，并且每個(gè)puⁱⁱ獨(dú)立地選自gly-ser和gly-gly，優(yōu)選序列是-(gly-ser)-(gly-ser)-(gly-gly)。

在puⁱ和puⁱⁱ內(nèi)具有立構(gòu)(stereogenic)中心的氨基酸可以是外消旋的、對(duì)映富集的或?qū)τ臣兊?。在一些?shí)施方案中，所述或每個(gè)氨基酸獨(dú)立地為l-氨基酸。在一些實(shí)施方案中，所述或每個(gè)氨基酸獨(dú)立地為d-氨基酸。

(iii).puⁱⁱⁱ氨基-(peg)m-羧酸殘基

每個(gè)puⁱⁱⁱ可獨(dú)立地為以下通式的殘基：

其中m為0、1、2、3、4或5，優(yōu)選1或2，并且p為1、3、4或5，優(yōu)選1。

在一些實(shí)施方案中，m是1且p是1，即，puⁱⁱⁱ是8-氨基-3，6-二氧雜辛酸(也稱(chēng)為{2-[2-氨基乙氧基]乙氧基}乙酸和h2n-peg3-cooh)的殘基。該殘基在本文中被稱(chēng)為-peg3-。

其他更長(zhǎng)的peg鏈也是本領(lǐng)域中已知的。例如，11-氨基-3，6，9-三氧雜十一烷酸(也稱(chēng)為h2n-peg4-cooh或-peg4-)。

在一些實(shí)施方案中，sb是-(puⁱⁱⁱ)n-，其中n是1至3，更優(yōu)選2。

最優(yōu)選地，sb是-peg3-peg3-。

優(yōu)選的組合

應(yīng)理解，上述優(yōu)選可獨(dú)立地組合以得到優(yōu)選的-z¹和-z²-z¹部分。

一些優(yōu)選的-z¹和-z²-z¹部分如下所示(在每種情況下，---表示與ψ的氨基酸組分側(cè)鏈的連接點(diǎn))：

(i)[17-羧基-十七烷酰基]-異glu-peg3-peg3

(ii)[17-羧基-十七烷?；鵠-異glu

(iii)十八烷?；?異glu-peg3-peg3

(iv)二十烷酰基-異glu-peg3-peg3

(v)[19-羧基-十九烷?；鵠-異glu-peg3-peg3

(vi)十八烷酰基-dapa-peg3-peg3

(vii)十六烷?；?異glu

(viii)(19-羧基-十九烷?；?-[(哌嗪-1-基)-乙酰基]-peg3-peg3

本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地知道用于制備本發(fā)明的上下文中使用的化合物的合適技術(shù)。合適的化學(xué)反應(yīng)的實(shí)例參見(jiàn)例如wo98/08871、wo00/55184、w000/55119、madsen等(j.med.chem.2007，50，6126-32)以及knudsen等2000(j.medchem.43，1664-1669)。

臨床應(yīng)用

本發(fā)明上下文中使用的gip類(lèi)似物可提供針對(duì)代謝疾病的有吸引力的治療選擇，所述代謝疾病包括肥胖、糖尿病、肥胖相關(guān)紊亂和糖尿病相關(guān)紊亂。當(dāng)本發(fā)明的gip類(lèi)似物與glp-1受體激動(dòng)劑(作為相同的藥物制劑的一部分或作為單獨(dú)的制劑)組合施用時(shí)，其可以特別有效地改善血糖控制和減輕體重。也稱(chēng)為glp-1受體激動(dòng)劑或腸促胰島素模擬物的胰高血糖素樣肽-1受體激動(dòng)劑是glp-1受體的激動(dòng)劑。與較早的胰島素促分泌素(例如磺酰脲類(lèi)或氯茴苯酸類(lèi))相比，其優(yōu)點(diǎn)之一是降低了引起低血糖的風(fēng)險(xiǎn)。

glp-1激動(dòng)劑的實(shí)例包括但不限于：艾塞那肽利拉魯肽semaglutide、利西拉來(lái)阿必魯泰(albiglutide)和他司魯泰(taspoglutide)。

糖尿病包括以高血糖為特征的一系列代謝疾病，其由胰島素分泌、胰島素作用或二者的缺陷引起。根據(jù)致病特征將糖尿病分為1型糖尿病、2型糖尿病和妊娠期糖尿病。1型糖尿病占所有糖尿病病例的5-10％，其由分泌胰島素的胰腺β細(xì)胞的自身免疫破壞所導(dǎo)致。糖尿病的急性癥狀包括：過(guò)量尿液的產(chǎn)生、導(dǎo)致補(bǔ)償性的口渴和增加的流體攝取、視力模糊、無(wú)法解釋的體重減輕、昏睡以及能量代謝方面的改變。然而，在2型糖尿病中，癥狀往往不嚴(yán)重或可以不存在。糖尿病的長(zhǎng)期高血糖與多種器官的長(zhǎng)期損傷、功能失調(diào)和障礙有關(guān)，尤其是眼、腎、神經(jīng)、心臟和血管。

2型糖尿病占糖尿病病例的90％至95％，其由一系列復(fù)雜的代謝紊亂引起。然而，癥狀往往不嚴(yán)重或可以不存在。2型糖尿病是內(nèi)源性胰島素產(chǎn)生不足以保持血漿糖水平低于診斷閾值的結(jié)果。

妊娠期糖尿病是指在懷孕期間鑒定出的任何程度的葡萄糖耐受不良。

前驅(qū)糖尿病包括空腹葡萄糖受損和葡萄糖耐量受損，其是指當(dāng)血糖水平升高但低于確立的糖尿病臨床診斷水平時(shí)出現(xiàn)的那些狀態(tài)。

由于另一些代謝風(fēng)險(xiǎn)因素的高度流行，一大部分2型糖尿病和前驅(qū)糖尿病患者的發(fā)病和死亡風(fēng)險(xiǎn)升高，所述代謝風(fēng)險(xiǎn)因素包括腹部肥胖(腹部?jī)?nèi)臟周?chē)^(guò)多的脂肪組織)、致動(dòng)脈粥樣硬化性血脂異常(血脂紊亂，包括高甘油三酯、低hdl膽固醇和/或高ldl膽固醇，其促使斑塊在動(dòng)脈壁中堆積)、血壓升高(高血壓)、血栓前狀態(tài)(例如，血液中高纖維蛋白原或纖溶酶原激活物抑制劑-1)和/或促炎狀態(tài)(例如，血液中c反應(yīng)蛋白升高)。

相反地，肥胖導(dǎo)致前驅(qū)糖尿病、2型糖尿病以及例如某些類(lèi)型的癌癥、阻塞性睡眠呼吸暫停和膽囊疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高。血脂異常與心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)升高相關(guān)。高密度脂蛋白(hdl)具有臨床重要性，原因是血漿hdl濃度與動(dòng)脈粥樣硬化疾病的風(fēng)險(xiǎn)之間存在負(fù)相關(guān)性。存儲(chǔ)在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的大多數(shù)膽固醇來(lái)源于ldl，因此升高濃度的低密度脂蛋白(ldl)與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)。hdl/ldl比是動(dòng)脈粥樣硬化特別是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的臨床風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)。

本發(fā)明的gip類(lèi)似物可用作藥劑，用于防止體重增長(zhǎng)、促進(jìn)體重降低、減少過(guò)重體重或治療肥胖(例如，通過(guò)控制食欲、進(jìn)食、食物攝取、卡路里攝入和/或能量消耗和脂類(lèi)分解)，包括病態(tài)肥胖以及相關(guān)疾病和健康狀況，包括但不限于肥胖關(guān)聯(lián)的炎癥、肥胖關(guān)聯(lián)的膽囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停。本發(fā)明上下文中使用的gip類(lèi)似物還可用于治療胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、前驅(qū)糖尿病、空腹血糖升高、2型糖尿病、高血壓、血脂異常(或這些代謝風(fēng)險(xiǎn)因素的組合)、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)。這些是可與肥胖相關(guān)的所有病癥。然而，在本發(fā)明的上下文中使用的化合物的作用可全部或部分地通過(guò)對(duì)體重的作用來(lái)介導(dǎo)，或者可不依賴(lài)于對(duì)體重的作用。

因此，本發(fā)明的gip類(lèi)似物可用于治療和/或預(yù)防本文中所述的任何疾病、失調(diào)或病癥，包括胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、空腹血糖升高、前驅(qū)糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠期糖尿病高血壓、血脂異常或其組合。在某些實(shí)施方案中，糖尿病相關(guān)病癥選自動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)；或者與選自以下的病癥有關(guān)：致動(dòng)脈粥樣硬化性血脂異常、血脂紊亂、血壓升高、高血壓、血栓前狀態(tài)和促炎狀態(tài)或其組合。在某些實(shí)施方案中，血脂紊亂選自高甘油三酯、低hdl膽固醇、高ldl膽固醇、動(dòng)脈壁中斑塊堆積或其組合。在某些實(shí)施方案中，血栓前狀態(tài)選自血液中高纖維蛋白原水平和血液中高纖溶酶原激活物抑制劑-1水平。在某些實(shí)施方案中，促炎狀態(tài)是血液中c反應(yīng)蛋白水平升高。在某些實(shí)施方案中，肥胖相關(guān)紊亂選自肥胖關(guān)聯(lián)的炎癥、肥胖關(guān)聯(lián)的膽囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停。

本發(fā)明的gip類(lèi)似物還可用于治療和/或預(yù)防與糖尿病相關(guān)骨質(zhì)疏松癥(包括提高的骨折風(fēng)險(xiǎn))有關(guān)的任何疾病、失調(diào)或病癥(khazainb等，2009，currentopinioninendocrinology，diabetesandobesity，第16卷，第6期，435-445)。骨折風(fēng)險(xiǎn)升高可能與骨質(zhì)受損而不是骨礦物質(zhì)密度有關(guān)。相關(guān)機(jī)制尚未完全了解，至少部分是由于高血糖、神經(jīng)病和更高的維生素d缺乏癥發(fā)生率(takiishit等，2010，endocrinologyandmetabolismclinicsofnorthamerica，第39卷，第2期，419-446)。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供包含任選地與可藥用載體組合的本發(fā)明的gip類(lèi)似物(例如gip激動(dòng)劑化合物)的治療藥盒。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的gip類(lèi)似物的裝置，用于將gip類(lèi)似物遞送至對(duì)象。

藥物組合物

本發(fā)明的gip類(lèi)似物(例如，gip激動(dòng)劑化合物)或其鹽或溶劑合物可配制成用于儲(chǔ)存或施用的藥物組合物，其通常在可藥用載體中包含治療有效量的本發(fā)明上下文中所使用的化合物或其鹽或溶劑合物。在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物被配制成適合于通過(guò)注射或輸注施用的液體，或配制成引起gip類(lèi)似物的緩慢釋放。

本發(fā)明化合物的治療有效量會(huì)取決于例如施用途徑、接受治療的哺乳動(dòng)物的類(lèi)型和所考慮的具體哺乳動(dòng)物的身體特征。決定該量的這些因素及其關(guān)系是醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。可調(diào)整該量和施用方法以實(shí)現(xiàn)最佳效力，并且可取決于醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)人員公知的因素，例如體重、飲食、同時(shí)用藥情況(concurrentmedication)等。人用最適劑量大小和給藥方案可參考本發(fā)明得到的結(jié)果，并且可在適當(dāng)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)中驗(yàn)證。

可通過(guò)常規(guī)方法確定有效劑量和治療方案，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中從低劑量開(kāi)始，然后在提高劑量的同時(shí)監(jiān)測(cè)效果，并且還系統(tǒng)地改變給藥方案。在確定針對(duì)給定對(duì)象的最佳劑量時(shí)，臨床醫(yī)生可考慮多種因素。這樣的考慮是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。術(shù)語(yǔ)“可藥用載體”包括任何標(biāo)準(zhǔn)藥用載體。用于治療用途的可藥用載體是制藥領(lǐng)域中公知的，并描述于例如remington′spharmaceuticalsciences，mackpublishingco.(a.r.gennaro編著.1985)中。例如，可使用弱酸性或生理ph下的無(wú)菌鹽水和磷酸鹽緩沖鹽水。合適的ph緩沖劑可以是例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、n-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(taps)、碳酸氫銨、二乙醇胺、組氨酸(其在某些實(shí)施方案中是優(yōu)選的緩沖劑)、精氨酸、賴(lài)氨酸和醋酸鹽，或其混合物。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋在美國(guó)藥典中列出的用于動(dòng)物(包括人)的任何試劑。

術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”是指所述化合物的鹽。鹽包括可藥用鹽，例如酸加成鹽和堿式鹽。酸加成鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽、檸檬酸鹽和醋酸鹽。堿式鹽的實(shí)例包括其中陽(yáng)離子選自堿金屬(例如鈉和鉀)、堿土金屬(例如鈣)和銨離子⁺n(r³)3(r⁴)的鹽，其中r³和r⁴獨(dú)立地表示任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基。可藥用鹽的其他實(shí)例描述于“remington′spharmaceuticalsciences”，第17版.alfonsor.gennaro(編著)，markpublishingcompany，easton，pa，u.s.a.，1985及更新的版本中，以及encyclopaediaofpharmaceuticaltechnology中。

“治療”是指用于獲得有益或期望的臨床結(jié)果的方法。出于本發(fā)明的目的，有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于癥狀緩解、疾病程度減輕、疾病狀態(tài)穩(wěn)定(即，不惡化)、疾病發(fā)展延后或減緩、疾病狀態(tài)改善或減輕以及(部分地或全部地)消除(remission)，無(wú)論是可檢測(cè)還是不可檢測(cè)的?！爸委煛边€可指與未接受治療時(shí)的預(yù)期存活相比延長(zhǎng)存活期?！爸委煛笔且苑乐辜膊“l(fā)生或改變疾病的病理狀況為目的而進(jìn)行的介入。因此，在某些實(shí)施方案中，“治療”指治療性治療以及預(yù)防或防護(hù)性手段二者。需要治療的對(duì)象包括已患病的對(duì)象和待預(yù)防疾病發(fā)生的對(duì)象?！爸委煛笔侵概c未治療相比抑制或減輕病理狀況或癥狀(例如，體重增長(zhǎng)、高血糖)的升高，并不必然暗示相關(guān)病癥的完全終止。

本發(fā)明的藥物組合物可以是單位劑量形式。在這樣的形式中，組合物被分成包含合適量活性組分的單位劑量。單位劑量形式可以是包裝的制劑，所述包裝包含離散量的制劑，例如盒裝片劑、膠囊劑以及小瓶或安瓿中的粉末。單位劑量形式本身還可以是膠囊劑、扁囊劑(cachet)或片劑，或可以是合適數(shù)量的任何這些包裝形式。其可以單劑量可注射形式提供，例如采用注射筆(pen)的形式?？蓪⒔M合物配制成適于任何合適的施用途徑和方式?？伤幱幂d體或稀釋劑包括適合于經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)和經(jīng)皮)施用的制劑中使用的那些。可方便地將所述制劑以單位劑量形式提供，并且可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域中公知的任何方法來(lái)制備。皮下或經(jīng)皮施用方式可特別適合于本文中所述的某些化合物。

組合療法

在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明上下文中使用的gip類(lèi)似物可作為組合療法的一部分與至少一種用于治療糖尿病、肥胖、血脂異?；蚋哐獕旱钠渌巹┮黄鹗┯谩?/p>

在這樣的情況下，至少兩種活性劑可同時(shí)施用或分開(kāi)施用，并作為相同藥物制劑的一部分或作為單獨(dú)的制劑。因此，本發(fā)明上下文中使用的gip類(lèi)似物(或其鹽或溶劑合物)可與抗糖尿病藥劑組合使用，所述抗糖尿病藥劑包括但不限于：胰高血糖素樣肽受體1激動(dòng)劑、二甲雙胍、磺酰脲類(lèi)、格列奈類(lèi)(glinide)、dpp-iv抑制劑、格列酮或胰島素。在某些實(shí)施方案中，所述化合物或其鹽或溶劑合物與胰島素、dpp-iv抑制劑、磺酰脲類(lèi)或二甲雙胍(特別是磺酰脲類(lèi)或二甲雙胍)組合使用，以實(shí)現(xiàn)充分的血糖控制。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物或其鹽或溶劑合物與胰島素或胰島素類(lèi)似物組合使用以實(shí)現(xiàn)充分的血糖控制。胰島素類(lèi)似物的實(shí)例包括但不限于actraphane和

在某些實(shí)施方案中，所述gip類(lèi)似物或其鹽或溶劑合物還可與一種或更多種抗肥胖藥劑組合使用，所述抗肥胖藥劑包括但不限于胰高血糖素樣肽受體1激動(dòng)劑、肽yy或其類(lèi)似物、大麻素受體1拮抗劑、脂肪酶抑制劑、黑皮質(zhì)素受體4激動(dòng)劑或黑色素濃集激素受體1拮抗劑。

在某些實(shí)施方案中，所述gip類(lèi)似物或其鹽或溶劑合物可與抗高血壓劑組合使用，所述抗高血壓劑包括但不限于血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張素ii受體阻斷劑、利尿劑、β阻斷劑或鈣通道阻斷劑。

在某些實(shí)施方案中，所述gip類(lèi)似物或其鹽還可與抗血脂異常劑組合使用，所述抗血脂異常劑包括但不限于他汀類(lèi)、貝特類(lèi)(fibrate)、煙酸類(lèi)和/或膽固醇吸收抑制劑。

本發(fā)明化合物的合成

核酸分子可以編碼式i至iii中任一項(xiàng)的氨基酸序列或其前體。編碼的氨基酸序列可被認(rèn)為是本發(fā)明化合物的前體。

通常，這樣的核酸序列會(huì)作為表達(dá)構(gòu)建體提供，其中所述編碼核酸與合適的控制序列功能性地連接以指導(dǎo)其表達(dá)。所述表達(dá)構(gòu)建體可在能夠表達(dá)(以及任選地還分泌)所述氨基酸前體的宿主細(xì)胞的環(huán)境中或在無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中提供。

本發(fā)明提供了生產(chǎn)本發(fā)明gip類(lèi)似物的方法，所述方法包括表達(dá)所述gip類(lèi)似物的氨基酸前體并對(duì)所述前體進(jìn)行修飾以提供gip類(lèi)似物。所述修飾可包括對(duì)存在于第17位處的lys、arg或cys殘基進(jìn)行化學(xué)修飾以引入親脂性部分，n端或c端的修飾，和/或分子中任何其他氨基酸側(cè)鏈的修飾(例如，以引入非天然存在的氨基酸殘基)。

本發(fā)明的化合物也可如下制備：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)肽合成方法，例如，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)固相或液相方法；逐步或通過(guò)片段組裝，并分離和純化最終的肽化合物產(chǎn)物，或者通過(guò)重組和合成方法的任意組合。

可優(yōu)選通過(guò)固相或液相肽合成方法來(lái)合成本發(fā)明的肽化合物。關(guān)于這點(diǎn)，可參考wo98/11125或尤其是fields，g.b.等，“principlesandpracticeofsolid-phasepeptidesynthesis”；在syntheticpeptides中，gregorya.grant(編輯)，oxforduniversity出版社(第二版，2002)以及本文中的合成實(shí)施例。

實(shí)施例

以下實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明的某些實(shí)施方案。然而，應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例不意味著也不旨在完全限定本發(fā)明的條件和范圍。這些實(shí)施例是使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)實(shí)施的，除非另外詳細(xì)說(shuō)明，否則所述標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知和常規(guī)的技術(shù)。以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明目的，并且不應(yīng)以任何方式解釋為限制本發(fā)明的范圍。

公開(kāi)了呈現(xiàn)信號(hào)傳導(dǎo)選擇性的gip類(lèi)似物以及用于篩選這些化合物的方法。信號(hào)傳導(dǎo)選擇性可以是例如優(yōu)選通路活化或優(yōu)選通路抑制，或者二者皆有。單獨(dú)施用或與glp-1激動(dòng)劑組合施用所述類(lèi)似物可用于治療和/或預(yù)防因體重過(guò)重導(dǎo)致的或以體重過(guò)重為特征的疾病或病癥，包括但不限于：肥胖、病態(tài)肥胖、肥胖關(guān)聯(lián)的炎癥、肥胖關(guān)聯(lián)的膽囊疾病、肥胖誘發(fā)的睡眠呼吸暫停、代謝綜合征、前驅(qū)糖尿病、胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病、1型糖尿病、高血壓、致動(dòng)脈粥樣硬化性血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)或微血管疾病。

盡管已經(jīng)以示例的方式描述了本發(fā)明的一些實(shí)施方案，但明顯的是，在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，可在實(shí)踐中對(duì)本發(fā)明進(jìn)行許多不同的修改、變化和改造，以及使用許多等同或替選的方案，其并不偏離本發(fā)明的精神或超出權(quán)利要求的范圍。

本文中參考的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)?jiān)诖艘韵嗤潭韧ㄟ^(guò)引用整體并入本文，如同每個(gè)單獨(dú)的出版物、專(zhuān)利或?qū)＠暾?qǐng)具體和單獨(dú)地表明通過(guò)引用以其整體并入本文一樣。

除非另外清楚指明，否則本發(fā)明中所使用的方法描述如下。

實(shí)施例1

?；痝ip類(lèi)似物的一般合成

使用標(biāo)準(zhǔn)fmoc化學(xué)在cemliberty肽合成儀上進(jìn)行了固相肽合成。在使用之前將tentagelsram樹(shù)脂(1g；0.25mmol/g)在nmp(10ml)中溶脹，并使用dcm和nmp在管和反應(yīng)器之間轉(zhuǎn)移。

偶聯(lián)

向cemdiscover微波裝置中的樹(shù)脂中添加dmf/dcm(2：1；0.2m；5ml)中的fmoc-氨基酸以及hatu/dmf或comu/dmf(0.5m；2ml)和dipea-dmf/dcm(2：1)(2.0m；1mi)。將所述偶聯(lián)混合物加熱至75℃持續(xù)5分鐘，同時(shí)用氮?dú)夤呐萃ㄟ^(guò)所述混合物。然后用dmf(4×10ml)洗滌樹(shù)脂。

去保護(hù)

將哌啶/dmf(20％；10ml)添加到樹(shù)脂中用于初始去保護(hù)，并通過(guò)微波加熱(30秒；40℃)混合物。將反應(yīng)器排干，并且添加第二部分的哌啶/nmp(20％；10ml)并再次加熱(75℃；3分鐘)。然后用dmf洗滌(6×10ml)樹(shù)脂。

側(cè)鏈酰化

將fmoc-lys(ivdde)-oh或替代地具有正交側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)的另一種氨基酸引入到?；恢?。然后在最后的偶聯(lián)中使用boc2o或者替代地通過(guò)使用boc-保護(hù)的氨基酸來(lái)boc-保護(hù)肽骨架的n端。當(dāng)肽仍與樹(shù)脂相連時(shí)，使用在nmp中新鮮制備的水合肼(2-4％)選擇性地切割所述正交側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)2×15分鐘。未保護(hù)的賴(lài)氨酸側(cè)鏈?zhǔn)紫扰cfmoc-glu-otbu或另一個(gè)間隔氨基酸偶聯(lián)，其隨后使用如上所述的肽偶聯(lián)方法用哌啶去保護(hù)并用親脂性部分?；?。

所使用的縮寫(xiě)如下：

comu：1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基氨基氧基)-二甲基氨基-嗎

啉代亞甲基)]甲銨六氟磷酸鹽

ivdde：1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亞環(huán)己基)3-甲基-丁基

dde：1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亞環(huán)己基)-乙基

dcm：二氯甲烷

dmf：n，n-二甲基甲酰胺

dipea：二異丙基乙胺

etoh：乙醇

et2o：乙醚

hatu：n-[(二甲氨基)-1h-1，2，3-三唑[4，5-b]吡啶-1-基亞甲基]-n-甲基甲銨六氟磷酸鹽n-氧化物

mecn：乙腈

nmp：n-甲基吡咯烷酮

tfa：三氟乙酸

tis：三異丙基硅烷。

切割

將樹(shù)脂用etoh(3×10ml)和et2o(3×10ml)洗滌并在室溫(r.t.)下干燥至恒重。通過(guò)用tfa/tis/水(95/2.5/2.5；40ml，2小時(shí)；r.t.)處理將粗制肽從樹(shù)脂上切割下來(lái)。在減壓下除去大部分的tfa，使粗制肽沉淀并用乙醚洗滌三次，并在室溫下干燥至恒重。

粗制肽的hplc純化

使用配備有c-18柱(5cm；10μm)和級(jí)分收集器的perseptivebiosystemsvisionworkstation，用緩沖液a(0.1％tfa，水溶液)和緩沖液b(0.1％tfa，90％mecn，水溶液)的梯度以35ml/分鐘運(yùn)行，通過(guò)制備型反相hplc將粗制肽純化至大于90％。通過(guò)分析型hplc和ms分析了級(jí)分，將相關(guān)級(jí)分合并并凍干。最終產(chǎn)物通過(guò)hplc和ms進(jìn)行表征。

表1示出了合成的化合物。

表1.

化合物9的合成

使用標(biāo)準(zhǔn)fmoc化學(xué)在cemliberty肽合成儀上進(jìn)行固相肽合成。將tentagelsrams樹(shù)脂(1.05g；0.23mmol/g)在使用前在dmf(10ml)中溶脹并且使用dcm和dmf在管和反應(yīng)器之間轉(zhuǎn)移。

偶聯(lián)

向cemdiscover微波裝置中的樹(shù)脂中添加dmf/dcm(2：1；0.2m；5ml)中的fmoc-氨基酸以及comu/dmf(0.5m；2ml)和dipea-dmf/dcm(2：1)(2.0m；1ml)。將所述偶聯(lián)混合物加熱至75℃持續(xù)5分鐘，同時(shí)用氮?dú)夤呐萃ㄟ^(guò)所述混合物。然后用dmf(4×10ml)洗滌樹(shù)脂。對(duì)于從c末端計(jì)數(shù)的第29和30號(hào)氨基酸使用fmoc-tyr(otbu)-ser(psime，me)-oh假脯氨酸。將lys17作為fmoc-lys(dde)-oh并入用于正交偶聯(lián)。前9個(gè)氨基酸和第24號(hào)氨基酸(從c末端計(jì)數(shù))是雙重偶聯(lián)的，意味著在去保護(hù)之前所述結(jié)構(gòu)單元被偶聯(lián)兩次。在n末端并入boc-tyr(tbu)-oh作為最終的結(jié)構(gòu)單元。

去保護(hù)

將哌啶/dmf(20％；10ml)添加到樹(shù)脂中用于初始去保護(hù)，并且通過(guò)微波加熱(30秒；40℃)混合物。將反應(yīng)容器排干，添加第二部分的哌啶/dmf(20％；10ml)并且再次加熱(75℃；3分鐘)。然后用dmf洗滌(6×10ml)樹(shù)脂。

側(cè)鏈?；?/p>

當(dāng)肽仍與樹(shù)脂相連時(shí)，使用在nmp中新制備的水合肼(2-4％)選擇性地切割正交側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)2×15分鐘。首先使用如上所述的標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)和去保護(hù)條件，將未保護(hù)的賴(lài)氨酸側(cè)鏈與fmoc-glu-otbu和兩個(gè)peg3結(jié)構(gòu)單元偶聯(lián)。最后，使用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)條件，再次將親脂性部分作為19-羧基-十九烷酸單叔丁基酯并入。

切割

將樹(shù)脂用etoh(3×10ml)和et2o(3×10ml)洗滌，并在室溫(r.t.)下干燥至恒重。通過(guò)用tfa/tis/h2o(95/2.5/2.5；60ml，2h；r.t.)處理將粗制肽從樹(shù)脂上切割下來(lái)。在減壓下除去大部分tfa，使粗制肽沉淀并用乙醚洗滌三次，在室溫下干燥至恒重。

粗制肽的hplc純化

使用配備有g(shù)emininx5μc-18110a，10×250mm柱和gilsongx281級(jí)分收集器的gilson331泵，用緩沖液a(0.1％tfa，水溶液)和緩沖液b(0.1％tfa，90％mecn，水溶液)的梯度以47ml/分鐘運(yùn)行，通過(guò)制備型反相hplc將粗制肽首先由30％進(jìn)行純化。通過(guò)分析型hplc和ms對(duì)級(jí)分進(jìn)行分析，并將相關(guān)級(jí)分合并并凍干。使用相同的方法進(jìn)行第二次純化以獲得純度為96％的產(chǎn)物(53mg)，如通過(guò)hplc和ms所表征的。單一同位素質(zhì)量計(jì)算值＝5025,54，實(shí)測(cè)值為5025,72。

實(shí)施例2

人gip受體(gipr)活性測(cè)定

如本發(fā)明概述的，通過(guò)使用來(lái)自perkin-elmer的camp試劑盒并根據(jù)說(shuō)明書(shū)，在用gip或其類(lèi)似物刺激各自受體之后，通過(guò)測(cè)量camp的誘導(dǎo)來(lái)評(píng)估本發(fā)明的肽綴合物的體外作用。簡(jiǎn)言之，將表達(dá)人gipr的hek293細(xì)胞(通過(guò)用人gipr的cdna轉(zhuǎn)染并且選擇穩(wěn)定克隆產(chǎn)生的穩(wěn)定細(xì)胞系)以30,000個(gè)細(xì)胞/孔接種在包被有0.01％聚l-賴(lài)氨酸的96孔微量滴定板上，在200μl生長(zhǎng)培養(yǎng)基(dmem，10％fcs，青霉素(100iu/ml)、鏈霉素(100μg/ml))中生長(zhǎng)一天。在分析當(dāng)天，移除生長(zhǎng)培養(yǎng)基并將細(xì)胞用150μl臺(tái)氏緩沖液(tyrode’ssalts(9.6g/l)，10mmhepes，ph7.4)洗滌一次。然后將細(xì)胞在含有升高濃度的對(duì)照化合物和測(cè)試化合物的100μl測(cè)定緩沖液(臺(tái)氏緩沖液中0.1％w/v堿處理的酪蛋白和100μmibmx)中于37℃下孵育15分鐘。移除測(cè)定緩沖液并將細(xì)胞在每孔80μl裂解緩沖液(0.1％w/vbsa，5mmhepes，0.3％v/vtween-20)中裂解。從每個(gè)孔轉(zhuǎn)移10μl裂解的細(xì)胞到384孔板中，并且與15μl珠-混合物(測(cè)定緩沖液中1單位/15μl抗camp接受體(acceptor)珠，1單位/15μl供體珠和1單位/15μl生物素化的camp)混合。將板混合并且在室溫下黑暗孵育1小時(shí)，之后使用envision^tm平板閱讀器(perkin-elmer)測(cè)量。

使用在含有0.1％(v/v)dmso的krbh緩沖液中制備的camp標(biāo)準(zhǔn)曲線將結(jié)果轉(zhuǎn)化成camp濃度。將所得camp曲線繪制成相對(duì)于log(測(cè)試化合物濃度)的絕對(duì)camp濃度(nm)，并使用曲線擬合程序xlfit進(jìn)行分析。

描述每種測(cè)試化合物對(duì)受體的效力和激動(dòng)劑活性二者的所計(jì)算參數(shù)為：

ec50，導(dǎo)致camp水平半數(shù)最大提高的濃度，反映了測(cè)試化合物的效力。結(jié)果總結(jié)在表2中。

表2：與對(duì)照肽相比，化合物對(duì)gip-r的ec50平均值。

實(shí)施例3

人gip受體(gipr)和人glp-1受體(glp-1r)的活性測(cè)定

使用來(lái)自perkin-elmer的camp試劑盒并根據(jù)說(shuō)明書(shū)，在用各自受體刺激之后，通過(guò)測(cè)量camp的誘導(dǎo)來(lái)評(píng)估肽綴合物的體外作用。簡(jiǎn)言之，將表達(dá)gipr或glp-1r的hek293細(xì)胞(通過(guò)含有所討論受體的cdna的表達(dá)載體的轉(zhuǎn)染并且選擇穩(wěn)定克隆產(chǎn)生的穩(wěn)定細(xì)胞系)以30,000個(gè)細(xì)胞/孔接種在包被有0.01％聚l-賴(lài)氨酸的96孔微量滴定板上，在200μl生長(zhǎng)培養(yǎng)基(dmem，10％fcs，青霉素(100iu/ml)、鏈霉素(100μg/ml))中培養(yǎng)生長(zhǎng)一天。在分析當(dāng)天，移除生長(zhǎng)培養(yǎng)基并將細(xì)胞用150μl臺(tái)氏緩沖液(tyrode’ssalts(9.6g/l)，10mmhepes，ph7.4)洗滌一次。然后將細(xì)胞在含有升高濃度的對(duì)照化合物和測(cè)試化合物的100μl測(cè)定緩沖液(臺(tái)氏緩沖液中0.05％w/v堿處理的酪蛋白和100μmibmx)中于37℃下孵育15分鐘。移除測(cè)定緩沖液并將細(xì)胞在每孔80μl裂解緩沖液(0.1％w/vbsa，5mmhepes，0.3％v/vtween-20)中裂解。從每個(gè)孔轉(zhuǎn)移10μl裂解的細(xì)胞到384孔平板中，并且與15μl珠混合物(測(cè)定緩沖液中1單位/15μl抗camp接受者珠，1單位/15μl供體珠和1單位/15μl生物素化的camp)混合。將平板混合并且在室溫下黑暗孵育1小時(shí)，之后使用envision^tm平板讀板儀(perkin-elmer)測(cè)量。

相對(duì)于陽(yáng)性和陰性對(duì)照(分別為參照激動(dòng)劑(0.1nm人gip或1nmexendin-4)和測(cè)定緩沖液)，將camp應(yīng)答歸一化以由使用4參數(shù)對(duì)數(shù)(4pl)非線性回歸模型進(jìn)行了曲線擬合的濃度響應(yīng)曲線計(jì)算ec50和最大響應(yīng)。

ec50(導(dǎo)致camp水平半數(shù)最大提高的濃度)總結(jié)在表2a中，反映了測(cè)試激動(dòng)劑化合物的效力。

表2a：與對(duì)照肽相比，化合物的ec50平均值。nt＝未測(cè)試，na＝無(wú)活性。

實(shí)施例4

選定化合物在小鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)

方法

向c57bl/6j小鼠(體重為約25g的雄性)單次皮下(s.c.)推注或單次靜脈內(nèi)(i.v.)推注給予待測(cè)試的每種肽。

在皮下施用選定化合物(50、100或200nmol/kg)之后，在給藥后直到96小時(shí)的8(八)個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取血樣。在靜脈內(nèi)施用選定化合物(50、100或200nmol/kg)后，在給藥后直到72小時(shí)的8(八)個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取血樣。通過(guò)舌下采血抽取血樣。給藥載劑是含甘露醇的磷酸鹽緩沖液(ph7.5)。

在每個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)，從兩只小鼠抽取樣品，即，對(duì)于每種化合物和每種施用途徑包括了16只小鼠。在取血樣之后，通過(guò)頸椎脫臼法立即處死小鼠。在固相萃取(spe)或蛋白質(zhì)沉淀后，通過(guò)液相色譜質(zhì)譜(lc-ms/ms)，對(duì)血漿樣品進(jìn)行分析。利用phoenixwinnonlin6.3中的非分區(qū)法，使用平均血漿濃度來(lái)計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。血漿終末清除半衰期(t¹/2)測(cè)定為ln(2)/λz，其中λz是終末階段期間log濃度對(duì)時(shí)間曲線的log線性回歸的斜率大小。生物利用度被確定為aucinf(s.c)/aucinf(i.v)×100，其中aucinf是外推到無(wú)窮大的血漿濃度-時(shí)間曲線下面積(aucinf＝auc最終+c最終/λz，其中c最終是最終觀察到的血漿濃度)。tmmax是觀察到最大血漿濃度時(shí)的給藥后時(shí)間。結(jié)果總結(jié)在表3中。

表3.在皮下和靜脈內(nèi)施用選定化合物后，小鼠中的終末清除半衰期(h)和生物利用度。

＊：生物利用度上限為100％

^λ：在重復(fù)測(cè)試中，化合物10的生物利用度為77％，化合物12的生物利用度為98％。

實(shí)施例5

在正常小鼠中的ogtt(口服葡萄糖耐量測(cè)試)。

使用標(biāo)準(zhǔn)飼料(altromin1324，brogaardena/s，gentofte，denmark)和添加檸檬酸至ph約3.6的家庭用水喂養(yǎng)雄性c57bl/6j小鼠(charlesriver，germany)。將動(dòng)物以每組3只圈養(yǎng)在光照、溫度和濕度控制的房間(12:12小時(shí)光暗循環(huán)中，光照為06.00-18.00時(shí)；21±1℃；50-80％相對(duì)濕度)。在ogtt前，將10至12周齡的小鼠禁食5小時(shí)。在經(jīng)口強(qiáng)飼葡萄糖(t＝0分鐘；2g/kg；5ml/kg)前4小時(shí)，經(jīng)皮下(s.c.)施用(5ml/kg)gip受體激動(dòng)劑(3-300nmol/kg)、glp-1類(lèi)似物利拉魯肽(10nmol/kg)和載劑。在時(shí)間t＝0(葡萄糖施用前)、15、30、60和120分鐘取尾靜脈血用于血糖測(cè)量。來(lái)自2次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果(血糖水平和血糖曲線下面積(auc)，數(shù)據(jù)為平均值±sem；n＝6)示于圖1(a-d)和圖2(a-e)中。

使用graphpadprism第5版進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用單因素方差分析(one-wayanova)比較血糖auc，之后通過(guò)dunnett多重比較測(cè)試與載劑組。p＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。相對(duì)于載劑的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性：＊p＜0.05，＊＊p＜0.01，＊＊＊p＜0.001。

實(shí)施例6

gip受體激動(dòng)劑和glp-1受體激動(dòng)劑的共同處理對(duì)飲食誘導(dǎo)的肥胖(dio)c57bl/6j小鼠體重的亞長(zhǎng)期作用

使用經(jīng)高脂飼料(總能量的45％來(lái)自脂肪，d12451，researchdietinc.)喂養(yǎng)約4個(gè)月的雄性c57bl/6j(jax)小鼠(charlesriver，uk)。將動(dòng)物以每組3只圈養(yǎng)在光照、溫度和濕度控制的房間(12:12小時(shí)的光暗循環(huán)，光照為07.00-19.00時(shí)；21±2℃；55±20％的相對(duì)濕度)。在開(kāi)始模擬階段之前，將小鼠單獨(dú)圈養(yǎng)兩周。對(duì)所有小鼠模擬處理(每天一次皮下注射載劑)一周以使動(dòng)物適應(yīng)操作和注射。隨后，將小鼠按體重分級(jí)成處理組(n＝8至9)。平均起始體重是39至40克。此后，從第1天至第22天每天用兩次單獨(dú)的皮下注射(每次注射3ml/kg)處理動(dòng)物一次。第一次注射為用載劑1(25mm磷酸鹽，125mm氯化鈉緩沖液，ph7.4)或glp-1類(lèi)似物利拉魯肽(20nmol/kg)。第二次注射為用載劑2(25mm磷酸鹽，205mmd-甘露醇，ph7.5)或gip激動(dòng)劑(3和30nmol/kg)。gip激動(dòng)劑僅在研究的每個(gè)第三天給藥(從第1天開(kāi)始)。在其他天，用載劑2替換gip激動(dòng)劑。每日的注射在早上進(jìn)行(在9.00-10.00)。整個(gè)研究中每天測(cè)定體重。在研究期間的體重變化如圖3所示(δ＝每個(gè)研究日的體重-第1天的體重。數(shù)據(jù)是平均值±sem)。

使用graphpadprism第5版進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過(guò)雙因素方差分析隨后用bonferroni事后檢驗(yàn)比較利拉魯肽處理的小鼠與共施用利拉魯肽和gip激動(dòng)劑的小鼠的體重變化。p＜0.05認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。通過(guò)雙因素方差分析隨后用bonferroni事后檢驗(yàn)比較載劑處理的對(duì)照小鼠與化合物處理的小鼠的體重變化。＊＊＊相對(duì)于載劑p＜0.001。圖3中示出了第22天相對(duì)于載劑的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

實(shí)施例7

gip受體激動(dòng)劑和glp-1受體激動(dòng)劑的共處理對(duì)飲食誘導(dǎo)的肥胖(dio)c57bl/6j小鼠中體重的些長(zhǎng)期作用

使用經(jīng)高脂飼料(總能量的60％來(lái)自脂肪，來(lái)自testdiet的diorodentpurified58y1-58126)喂養(yǎng)約5個(gè)月的雄性c57bl/6j小鼠(charlesriver，germany)。將動(dòng)物以每組n＝3只圈養(yǎng)在光照、溫度和濕度控制的房間(12:12小時(shí)的光暗循環(huán)，光照為06.00-18.00時(shí)；21±1℃；65±15％相對(duì)濕度)。對(duì)所有小鼠模擬處理(每天一次皮下注射載劑)一周以使動(dòng)物適應(yīng)操作和注射。隨后，將小鼠按體重分級(jí)成處理組(n＝9)。平均起始體重是40至41克。此后，從第0天至第27天每天用兩次單獨(dú)的皮下注射(每次注射5ml/kg)處理動(dòng)物一次。第一次注射為用載劑1(25mm磷酸鹽，125mm氯化鈉緩沖液，ph7.4)或glp-1類(lèi)似物利拉魯肽(20nmol/kg)。第二次注射為用載劑2(25mm磷酸鹽，205mmd-甘露醇，ph7.5)或gip激動(dòng)劑(30和/或300nmol/kg)。gip激動(dòng)劑僅在研究的每個(gè)第三天給藥(從第0天開(kāi)始)。在其他天，用載劑2替換gip激動(dòng)劑。每日注射在早上進(jìn)行(在9.00-10.00)。整個(gè)研究中每天測(cè)定體重。在研究期間的體重變化如圖4a(化合物10和12)、b(化合物17)、c(化合物18)、d(化合物35)和e(化合物41)所示(δ體重＝每個(gè)研究日的體重-第0天的體重。數(shù)據(jù)是平均值±sem)。

使用graphpadprism第5版進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過(guò)雙因素方差分析隨后用bonferroni事后檢驗(yàn)比較利拉魯肽處理的小鼠與共施用利拉魯肽和gip激動(dòng)劑的小鼠的體重變化。p＜0.05認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(在體重曲線下用線示出)。通過(guò)雙因素方差分析隨后用bonferroni事后檢驗(yàn)比較載劑處理的對(duì)照小鼠與化合物處理的小鼠的體重變化。＊＊＊相對(duì)于載劑p＜0.001。示出了第27天相對(duì)于載劑的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖4a-e)。