相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2014年9月11日提交的美國申請系列號62/049,206，2014年12月3日提交的美國申請系列號62/087,218，和2014年12月4日提交的美國申請系列號62/087,755的優(yōu)先權(quán)，其全部內(nèi)容通過引用納入。

發(fā)明背景

本發(fā)明涉及用于含叔胺藥物向與給定疾病狀態(tài)相關(guān)的異常細胞或這類細胞附近靶向遞送的配體-藥物偶聯(lián)物(ldc)。這種ldc的靶向配體使異常細胞，而不是遠離異常細胞的正常細胞選擇性接觸含叔胺藥物。通過由ldc的靶向配體結(jié)合在異常細胞上或其附近在所需的作用位點處濃縮藥物來實現(xiàn)這種選擇性接觸。因此，減少了遠端正常細胞對藥物的暴露，由此降低了不希望的副作用，同時降低了異常細胞對疾病狀態(tài)的貢獻。

一般而言，ldc的設(shè)計包括考慮多種因素，包括藥物具有接頭部分接合的位點的要求，該接頭部分使藥物連接至靶向配體并且能夠在靶位點處釋放藥物。含叔胺化合物可能沒有合適的接合位點，因而需要對母體藥物進行修飾用于接合至ldc的接頭部分。在這些情況中，釋放的藥物不是母體藥物，而是經(jīng)修飾的藥物。例如，可通過去除其胺取代基之一來修飾含叔胺藥物以提供仲胺，其然后可通過含羰基的官能團整合至ldc。然而，與母體含叔胺藥物相比，通常經(jīng)修飾的藥物將具有明顯降低的生物活性，或其他藥物性質(zhì)上不希望的變化。

由于難以提供偶聯(lián)的替代位點并且希望保留含叔胺藥物的最大生物活性，本領(lǐng)域需要使用叔胺氮作為偶聯(lián)位點以允許在靶向的作用位點處釋放完全活性含叔胺藥物的ldc。即使降低的生物活性或其它藥物性質(zhì)的變化通過去除其氮取代基之一改變含叔胺藥物而變?yōu)榭扇萑痰?，或者?dāng)可得到或可導(dǎo)入偶聯(lián)的替代位點而不對所需生物活性產(chǎn)生嚴重后果時，本領(lǐng)域仍然需要用叔胺氮作為偶聯(lián)位點。存在這種需要是因為無法預(yù)期可能由含叔胺藥物呈現(xiàn)的可能偶聯(lián)位點中的哪個將提供活性藥物的最高效釋放并因此是最有活性的ldc。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的原理實施方式是配體藥物偶聯(lián)物(ldc)組合物，其中l(wèi)dc組合物由式1的結(jié)構(gòu)表示

其中“配體”來自靶向部分，其選擇性結(jié)合至靶部分；lb是配體共價結(jié)合部分；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，使得當(dāng)a不存在時下標a是0或者當(dāng)a存在并且任選地包含2、3或4個亞基時a是1；q²是w′w′-e-，其中q²在存在時結(jié)合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是可切割單元；其中與血清蛋白酶相比，q¹的ww能夠被調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，所述胞內(nèi)或調(diào)節(jié)性蛋白酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰募毎懈筇禺愋裕蛘吣軌虮话邢虻漠惓；蚱渌恍枰毎耘c正常細胞相比更大量分泌的蛋白酶選擇性切割，或者能夠通過二硫鍵交換被谷胱甘肽切割，或者在與血清的生理ph相比溶酶體中存在的較低ph條件下更易于發(fā)生水解反應(yīng)，并且q²的w′-e提供可由胞內(nèi)糖苷酶切割的糖苷鍵，其中與正常細胞相比，所述糖苷酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰募毎懈筇禺愋?，或者能夠被與正常細胞相比在靶向的異?；蚱渌恍枰募毎幸愿罅糠置诘奶擒彰高x擇性切割，其中所述下標w是0或1，使得當(dāng)w是0時w不存在或者w是1時w存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在或者w′是1時w’-e存在，并且其中w+w′是1(即，w，w′中的一個且僅一個存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基、或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，其中當(dāng)w是1時，v、z¹、z²和z³中的至少一個是＝c(r²⁴)-，并且當(dāng)w′是1時v、z¹、z²和z³中的至少2個是＝c(r²⁴)-，

條件是，當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬?/p>

條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬?/p>

r⁸和r⁹獨立地是氫，任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或是供電子基團；d⁺表示含季銨化叔胺藥物d的結(jié)構(gòu)；并且p是1-24的平均載藥量；其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致d從總ldc組合物的ldc排出。

在一些方面中，靶向部分是抗體，從而定義抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，并且靶向的部分是靶向的異常細胞的細胞表面抗原，其能夠進行結(jié)合的adc的細胞內(nèi)化，其中與正常細胞相比，所述抗原優(yōu)先存在于異常細胞上。

在一些方面中，q¹的w包含具有與j結(jié)合的肽的肽部分，與血清蛋白酶相比，j可被胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，胞內(nèi)蛋白酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋裕⑶移渲邪麅?nèi)蛋白酶對w的最用可能導(dǎo)致從ldc釋放含叔胺藥物(d)。在其他方面中，結(jié)合的肽可被與正常細胞相比由異常細胞以更大程度分泌的蛋白酶切割。

在其他方面中，與血清蛋白酶相比，w’能夠被調(diào)節(jié)性蛋白酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，所述調(diào)節(jié)性蛋白酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋浴?/p>

在其他方面中，與血清蛋白酶相比，w’能夠被溶酶蛋白酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，所述溶酶體蛋白酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋浴?/p>

在其他方面中，q²的w′是糖苷結(jié)合的糖，其中q²的w′-e中的糖苷鍵提供胞內(nèi)糖苷酶的切割位點，其中糖苷酶對w′-e的作用導(dǎo)致含叔胺藥物(d)從ldc釋放，其中與正常細胞相比，糖苷酶可能或可能不對靶向的異常或其他不需要細胞有更大特異性，或者能夠被靶向的異常或其他不需要細胞以與正常細胞相比更大量分泌的糖苷酶選擇性切割。

本發(fā)明的其他原理實施方式提供具有式2的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中l(wèi)b′是接頭共價結(jié)合前體部分；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選地包含2、3或4個亞基，使得下標a是0或1，其中當(dāng)a是0時a不存在并且當(dāng)a是1時a存在；q²是w′-e，其中q²在存在時結(jié)合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是在具有包含式1或式2的結(jié)構(gòu)的式i結(jié)構(gòu)的ldc中能夠切割的可切割單元；其中q¹的ww包含具有與j結(jié)合的肽的肽部分，j可被調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其與正向細胞相比，可能或可能不對異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋?，或者可被與正常細胞相比被異常細胞或不需要細胞優(yōu)先分泌的蛋白酶選擇性切割，或包含可通過二硫鍵交換被谷胱甘肽切割的二硫鍵部分或包含與血清的生理ph相比在溶酶體中存在的較低ph條件下更易于發(fā)生水解反應(yīng)的腙部分并且q²的w′-e提供了可被位于胞內(nèi)的糖苷酶切割的糖苷鍵，其中與正常細胞相比，糖苷酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋?，或者能夠被靶向的異?；蚱渌恍枰毎员日＜毎蟮牧糠置诘奶擒彰高x擇性切割，其中下標w是0或1，其中當(dāng)w是1時w存在或w是0時w不存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在并且當(dāng)w′是1時w’-e存在，并且其中w+w′是1(即，一個且僅一個w存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，條件是當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，并且條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬瑀⁸和r⁹獨立地是氫，任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或者是供電子基團；并且d⁺表示含季銨化叔胺的藥物d的結(jié)構(gòu)，其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致從來自式2化合物制備的ldc的d⁺排出d。

在一些方面中，本發(fā)明提供了從式1的化合物在合適條件下接觸具有反應(yīng)性巰基、氨基或醛基部分的靶向部分以實現(xiàn)該反應(yīng)性部分與式2化合物的lb’部分縮合制備的ldc偶聯(lián)物組合物，其中l(wèi)b'被轉(zhuǎn)化成從所述接觸產(chǎn)生的lb。

在一些方面中，lb'具有以下之一的結(jié)構(gòu)

其中r是氫或c1-c6任選取代的烷基；r’是氫或鹵素或者r和r’獨立地是選擇的鹵素；t是-cl、-br、-i、-o-甲磺酰基或-o-甲苯磺?；蚱渌撬犭x去基團；u是-f、-cl、-br、-i、-o-n-琥珀酰亞胺、-o-(4-硝基苯基)、-o-五氟苯基、-o-四氟苯基或-o-c(＝o)-or⁵⁷；x²是c1-10亞烷基、c3-c8-碳環(huán)、-o-(c1-c6烷基)、-亞芳基-、c1-c10亞烷基-亞芳基、-亞芳基-c1-c10亞烷基、-c1-c10亞烷基-(c3-c6-碳環(huán))-、-(c3-c8碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、c3-c8-雜環(huán)、-c1-c10亞烷基-(c3-c8雜環(huán))-、-c3-c8-雜環(huán))-c1-c10亞烷基、-(ch2ch2o)u、或-ch2ch2o)u-ch2-，其中u是1至10的整數(shù)并且r⁵⁷是c1-c6烷基或芳基。

附圖的簡要說明

圖1。用釋放游離含叔胺藥物(奧瑞他汀e)的具有組織蛋白酶可切割單元的季銨化-連接的奧瑞他汀抗體配體藥物偶聯(lián)物(cac10-14)與釋放去甲基藥物(mmae)的相應(yīng)氨基甲酸酯-連接的抗體配體藥物偶聯(lián)物(cac10-c)對比其相應(yīng)非靶向?qū)φ张悸?lián)物h00-14和h00-c處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植物。

圖2。用釋放游離含叔胺藥物(奧瑞他汀e)的具有葡糖醛酸糖苷酶可切割單元的季銨化-連接的奧瑞他汀抗體配體藥物偶聯(lián)物(cac10-8)與釋放去甲基藥物(mmae)的相應(yīng)氨基甲酸酯-連接的抗體配體藥物偶聯(lián)物(cac10-b)對比其相應(yīng)非靶向?qū)φ张悸?lián)物h00-8和h00-b處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植物。

圖3。具有組織蛋白酶可切割單元或葡糖醛酸糖苷酶可切割單元的季銨化連接的奧瑞他汀ldc的離體血漿穩(wěn)定性。

圖4。從季銨化連接的ldc模型系統(tǒng)中釋放游離含叔胺藥物(奧瑞他汀e)的動力學(xué)。

圖5。用季銨化特吡萊辛(tubulysin)m配體藥物偶聯(lián)物處理karpas299alcl異種移植模型，其中cac10抗體配體單元靶向cd30抗原，于4d⁺藥物單元/mab的dar，以0.3mg/kg和1mg/kg單劑量腹膜內(nèi)注射，對比相同季銨化藥物接頭的對照非靶向偶聯(lián)物和等同類似物。

圖6。用從藥物-接頭32制備的季銨化特吡萊辛m配體藥物偶聯(lián)物處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型，其中cac10抗體配體單元靶向cd30抗原，于6d⁺藥物單元/mab的dar，以0.3mg/kg和1mg/kg單劑量腹膜內(nèi)注射，對比假擬(sham)處理。

圖7。對比對照偶聯(lián)物，從季銨化藥物-接頭32制備的特吡萊辛m配體藥物偶聯(lián)物的特吡瓦林(tubuvaline)組分的乙酸鹽/酯從研究第17天給藥后4天抽取的血液缺失評價，其具有-val-ala-可切割單元，于6d⁺藥物單元/mab的dar，向l540cy異種移植物腹膜內(nèi)給予單劑量0.3mg/kg、1mg/kg和3.0mg/kg，其中偶聯(lián)物的cac10抗體配體單元靶向cd30抗原。

圖8。對比對照偶聯(lián)物，從季銨化藥物-接頭32制備的特吡萊辛m配體藥物偶聯(lián)物的特吡瓦林組分的乙酸鹽/酯從研究第11天給藥后10天抽取的血液缺失評價，于6d⁺藥物單元/mab的dar，向l540cy異種移植物腹膜內(nèi)給予單劑量0.3mg/kg、1mg/kg和3.0mg/kg，其中偶聯(lián)物的cac10抗體配體單元靶向cd30抗原。

圖9。比較0.6mg/kg和2mg/kg下，腹膜內(nèi)單劑量的配體藥物偶聯(lián)物處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型，其中偶聯(lián)物的cac10抗體配體單元靶向cd30抗原，具有4個季銨化特吡萊辛藥物單元/cac10抗體配體單元，其中偶聯(lián)物從藥物接頭化合物32制備，其具有帶-val-ala-可切割單元的季銨化特吡萊辛m，并且來自藥物接頭化合物79、80和104，其分別具有季銨化tubu(oet)、tubu(o-pr)和特吡萊辛m藥物單元，和相同的葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元。

圖10。比較用cac10配體藥物偶聯(lián)物單劑量腹膜內(nèi)0.5mg/kg或0.6mg/kg和2mg/kg處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型，其中一種偶聯(lián)物具有8個季銨化奧瑞他汀f藥物單元/配體單元并且從藥物-接頭化合物189制備，對比另一種偶聯(lián)物具有4個季銨化tubu(o-ch3)藥物單元/cac10抗體配體單元，從藥物接頭化合物78制備，兩種偶聯(lián)物都具有相同的葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元。

圖11。比較用以下偶聯(lián)物單劑量腹膜內(nèi)0.4mg/kg和0.8mg/kg處理l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型：具有4個藥物-接頭部分的cac10配體藥物偶聯(lián)物，其中抗體配體單元靶向cd30抗原，其中一種偶聯(lián)物具有季銨化尾海兔素10且從藥物-接頭177制備，對比從藥物接頭183制備的非季銨化尾海兔素10偶聯(lián)物，其中兩種偶聯(lián)物都具有葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元。

圖12。大鼠中，與1mg/kg靜脈內(nèi)給予的未偶聯(lián)的抗體相比，具有人igg配體單元的4個對比8個季銨化藥物單元載藥的配體藥物偶聯(lián)物的藥代動力學(xué)概況，其中偶聯(lián)物從具有季銨化特吡萊辛m藥物單元和組織蛋白酶條件釋放接頭單元的藥物接頭32制備并且從也具有特吡萊辛m藥物單元但具有葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元的藥物接頭113制備。

圖13。大鼠中，與1mg/kg靜脈內(nèi)給予的具有8個季銨化藥物單元載藥并具有非靶向抗體配體單元的配體藥物偶聯(lián)物的藥代動力學(xué)概況，其中該偶聯(lián)物從藥物-接頭化合物80制備，其季銨化藥物接頭是特吡萊辛m的醚變體，其中特吡瓦林的o-連接的乙酸酯部分已經(jīng)被丙氧基替代并且其具有葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元。

圖14。具有8個季銨化藥物單元載藥的配體藥物偶聯(lián)物的藥代動力學(xué)概況，其中該偶聯(lián)物從具有季銨化奧瑞他汀f藥物單元和組織蛋白酶條件接頭單元的藥物接頭化合物8、具有季銨化尾海兔素10藥物單元和葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元的藥物接頭化合物177、和具有非季銨化尾海兔素10偶聯(lián)物并也具有葡糖醛酸糖苷酶條件釋放接頭單元的藥物接頭化合物183制備，對比非偶聯(lián)的非靶向抗體。

發(fā)明詳述

定義

如本文所述，并且除非另外說明或上下文暗示，本文所用的術(shù)語具有以下定義的含義。除非顯示不當(dāng)或另有暗示，例如，包括互相排斥的元素或選項，在這些定義并在本說明書中，術(shù)語“一個”和“一種”表示一個(種)或多個(種)并且術(shù)語“或”在上下文允許時表示和/或。因此，在本說明書和權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該”包括多個指示物，除非上下文中有明顯的表示。

在本公開的多個位置，例如，在任意公開的實施方式或在權(quán)利要求中，參考“包括”一個或多個具體組分、元素或步驟的方法、組合物或化合物。本發(fā)明還具體包括這些化合物、組合物、或方法，其由那些具體組分、元素或步驟組成，或基本由其組成。術(shù)語“包含”與術(shù)語“包括”可互換使用并且被稱為等同術(shù)語。例如，“包括”組分或步驟的公開的組合物、裝置、制品或方法是開放的并且它們包含或讀成這些組合物或方法加上其他組分或步驟。然而，那些術(shù)語并不涵蓋可能破壞公開的組合物、裝置、制品或方法所需目的的功能的未引用的元素。類似地，包括“由(組分或步驟)組成”的公開的組合物、裝置、制品或方法是封閉的并且它們不包含或讀成這些組合物或方法具有明顯其他組分或步驟。此外，所用的術(shù)語“包括”以及其他形式，如“包含”和“含有”不是限制性的。最后，術(shù)語“基本由……組成”承認包含對所公開的組合物、裝置、制品或方法所需目的的功能沒有明顯影響的未引用的元素，并且在本文中進一步定義。本文所用章節(jié)標題僅用于組織目的，而不應(yīng)理解為限制所述客體。除非另外說明，采用質(zhì)譜、nmr、hplc、蛋白質(zhì)化學(xué)、生物化學(xué)、重組dna技術(shù)和藥學(xué)的常規(guī)方法。

當(dāng)與提供用于描述化合物或組合物的具體性質(zhì)的數(shù)值或數(shù)值范圍聯(lián)用時，本文所用的“約”表示該數(shù)值或數(shù)值范圍可偏差到本領(lǐng)域普通技術(shù)人員認為合理的程度同時仍然描述特定性質(zhì)。合理的偏差包括在測量、確定或衍生具體性質(zhì)中使用的設(shè)備的精度或準度內(nèi)的那些偏差。具體地，在本文中使用時，術(shù)語“約”表示數(shù)值或數(shù)值范圍可相對列出的數(shù)值或數(shù)值范圍變化10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％或0.01％，一般是10％至0.5％，更一般是5％至1％，同時仍然描述具體性質(zhì)。

本文所用的“基本保留”、“基本保持”等術(shù)語是指化合物或組合物或其部分的性質(zhì)、特征或活性，其與其所衍生自的另一種化合物或組合物或部分的相同性質(zhì)、特征或活性沒有可檢測到的變化或者在測定的實驗誤差之內(nèi)。

本文所用的“可忽略”或“可忽略的”是低于hplc分析的定量水平的雜質(zhì)的量，并且如果存在，表示其污染的組合物的約0.5％至約0.1w/w％。根據(jù)上下文，這些術(shù)語也可表示在測量的值和結(jié)構(gòu)之間沒有觀察到統(tǒng)計學(xué)顯著的差異或者在用于獲得這些值的設(shè)備的實驗誤差以內(nèi)。實驗確定的參數(shù)值的可忽略的差異并不表示由該參數(shù)表征的雜質(zhì)以可忽略的量存在。

本文所用的“基本保留”是指一種化合物或組合物或其部分的物理性質(zhì)的測量值，其在統(tǒng)計學(xué)上不同于其所衍生自的另一種化合物或組合物或部分的相同物理性質(zhì)的確定，但是這種差異并不在用于評價活性的合適生物測試系統(tǒng)中代表生物活性的統(tǒng)計學(xué)顯著差異(即，基本保留生物活性)。因此，術(shù)語“基本保留”用于描述一種化合物或組合物的物理性質(zhì)對與該性質(zhì)明確相關(guān)的生物活性的影響。

“主要含有”、“主要具有”等術(shù)語是指混合物的主要組分。當(dāng)混合物由2種組分組成時，主要組分表示超過混合物的50重量％。對于由3種或更多種組分組成的混合物，主要組分是混合物中以最大量存在的組分，并且可能或可能不占混合物的大部分質(zhì)量。

術(shù)語“吸電子基團”是指從其耦合和/或通過共振(無論哪個更主要)從與其鍵連的原子吸去電子密度的官能團或電負性原子(即，官能團或原子可耦合吸電子但可能總體通過共振供電子)，并且往往使陰離子或富電子部分穩(wěn)定化。吸電子作用一般通過耦合但減弱形式傳遞至與鍵連原子接合的其他原子，該鍵連原子已經(jīng)通過吸電子基團(ewg)變得缺電子，由此影響更遠反應(yīng)中心的親電子性。示例性的吸電子基團包括但不限于-c(＝o)、-cn、-no2、-cx3、-x、-c(＝o)or、-c(＝o)nr2、-c(＝o)r、-c(＝o)x、-s(＝o)2r、-s(＝o)2or、-s(＝o)2nhr、-s(＝o)2nr2、-p(＝o)(or)2、-p(＝o)(ch3)nhr、-no、和-nr3⁺，其中x是-f、-br、-cl、或-i，并且r在每次出現(xiàn)時獨立選自氫和c1-6烷基。示例性的ewg也可包括芳基(例如，苯基)(基于取代)和某些雜芳基基團(例如，吡啶)。因此，術(shù)語“吸電子基團”也包括進一步被吸電子基團取代的芳基或雜芳基。一般而言，吸電子基團是-c(＝o)、-cn、-no2、-cx3、和-x，其中x是鹵素。根據(jù)其取代基，不飽和烷基部分也可以是吸電子基團。

術(shù)語“供電子基團”是指從其通過耦合和/或共振(無論哪個更主要)向與其鍵連的原子增加電子密度的官能團或電正性原子(即，官能團或原子可通過共振供電子但可能總體耦合吸電子)，并且往往使陽離子或貧電子系統(tǒng)穩(wěn)定化。供電子作用一般通過共振傳遞至與鍵連原子接合的其他原子，該鍵連原子已經(jīng)通過供電子基團(ewg)變得富電子，由此影響更遠反應(yīng)中心的親核性。示例性的供電子基團包括但不限于-oh和-nh2。根據(jù)其取代基，芳基、雜芳基或不飽和烷基部分也可以是供電子基團。

本文所用的“部分”表示分子或化合物的具體區(qū)段、片段或官能團?；瘜W(xué)部分有時指包埋或附加(即，取代基或可變基團)至分子、化合物或化學(xué)式的化學(xué)實體。

對于本文中由給定碳原子范圍描述的取代基或部分，標號范圍表示描述了任何單獨數(shù)量的碳原子。因此，指代，例如，“任選取代的c1-c4烷基”、“任選取代的烯基c2-6烯基”、“任選取代的c3-c8雜環(huán)”具體表示存在1、2、3或4個碳被任選取代的烷基部分，如本文所定義，或2、3、4、5或6個碳烯基，或3、4、5、6、7或8個碳部分，其包含雜環(huán)或任選取代的烯基部分，如本文所定義。所有數(shù)字標號表示公開所有的單獨碳原子基團；并且因此“任選取代的c1-c4烷基”包括甲基、乙基、3碳烷基、和4碳烷基，包括它們的所有取代或未取代的位置異構(gòu)體。因此，當(dāng)烷基部分被取代時，數(shù)字標號是指未取代的基礎(chǔ)部分并且往往不包括可能在基礎(chǔ)部分的取代基中存在的碳原子。對于由給定范圍的碳原子定義的本文所述的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯和脲，標號范圍包括相應(yīng)官能團的羰基碳。因此，c1酯是指甲酸酯，c2酯是指乙酸酯并且未取代的c1脲是指nh2(c＝o)nh2。

本文所述的有機取代基、部分或基團，和本文所述的任意其他部分通常將排除不穩(wěn)定部分，除非這種不穩(wěn)定部分是可用于制備對于本文所述的一種或多種用途具有足夠化學(xué)穩(wěn)定性的化合物的瞬態(tài)物質(zhì)。具體排除了通過運用本文所述的定義產(chǎn)生具有五價碳的取代基、部分或基團。

本文所用的“烷基”單獨或作為另一個數(shù)據(jù)的部分是指甲基或碳原子的幾何，其中碳原子中的一個或多個是飽和的(即，包含一個或多個sp³碳)，其在正、仲、叔或環(huán)狀排列，即線性、分支、環(huán)狀排列或其一些組合中共價連接到一起。當(dāng)連續(xù)飽和的碳原子呈環(huán)狀排列時，這種烷基部分有時被稱為本文定義的環(huán)烷基。包含烷基取代基含有飽和碳原子(即，sp³碳)并且沒有芳族、sp²或sp碳原子(即，不被不飽和的芳族和雜芳族部分取代)。不飽和烷基取代基是被部分如本文所述的烯基、炔基、芳基和雜芳基部分取代的烷基部分。

因此，除非另外說明，術(shù)語“烷基”將表示飽和的非環(huán)烴基，其任選地被一個或多個環(huán)烷基或不飽和、芳族或雜芳族部分或其一些組合取代，其中所述飽和烴基具有所示數(shù)量的共價連接的飽和碳原子(例如，“c1-c6烷基”或“c1-c6烷基”表示含有1、2、3、4、5或6個連續(xù)非環(huán)飽和碳原子的烷基部分或基團并且“c1-c8烷基”是指具有1、2、3、4、5、6、7或8個連續(xù)飽和非環(huán)碳原子的烷基部分或基團)。烷基部分或基團中的飽和碳原子的數(shù)量可變化并且一般是1-50、1-30或1-20，并且更一般1-8或1-6。一般而言，烷基取代基是飽和c1-c8烷基部分，或者更具體地是c1-c6或c1-c4烷基部分，后者有時被稱為低級烷基。未指示碳原子數(shù)量時，烷基基團具有1至8個碳原子。

當(dāng)以烷基取代基提及烷基部分或基團時，對馬庫什結(jié)構(gòu)或與之結(jié)合的另一種有機部分的烷基取代基是通過烷基取代基的sp³碳共價接合至結(jié)構(gòu)或部分的連續(xù)飽和碳原子的鏈。本文所用的烷基取代基因此含有至少一個飽和部分并且也可含有(即，被以下取代)環(huán)烷基、不飽和烷基、芳族或雜芳族部分或基團。因此，烷基取代基還可包含1、2、3或更多獨立選擇的雙鍵、三鍵或環(huán)烷基、芳族或雜芳族部分或其一些組合，一般是一個雙鍵、一個三鍵(即，是取代的一個烯基或炔基部分)或者是環(huán)烷基、芳基或雜芳基部分。

當(dāng)指定烷基取代基、部分或基團時，種類包括從母體烷烴去除碳原子衍生的那些(即，單價)并且可包括甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(異丙基，-ch(ch3)2)、1-丁基(正丁基)、2-甲基-1-丙基(異丁基，-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(仲丁基，-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(叔丁基，-c(ch3)3)、戊基、異戊基、仲戊基、和其他直鏈、環(huán)狀和支鏈烷基部分。

本文所用的“亞烷基”單獨或作為其他術(shù)語的部分是指取代或未取代的飽和、支鏈、環(huán)狀或直鏈烴雙基，其中所示數(shù)量的碳原子，一般1-10個碳原子中一個或多個碳原子是不飽和的(即，包含一個或多個sp³碳)，并且具有2個基團中心(即，二價)，其通過從母體烷烴的相同或2個不同飽和(即，sp³)碳原子上去除2個氫原子衍生。亞烷基部分還包括本文所述的烷基，其中已從烷基的基團碳或飽和部分去除氫原子以形成雙基。一般而言，亞烷基部分包括從母體烷基部分的飽和碳原子去除氫原子衍生的二價部分，但不限于：亞甲基(-ch2-)、1，2-亞乙基(-ch2ch2-)、1，3-亞丙基(-ch2ch2ch2-)、1，4-亞丁基(-ch2ch2ch2ch2-)等雙基。一般而言，亞烷基是一般含有僅sp³碳的支鏈或直鏈烴(即，基團碳原子仍然是完全飽和的)。

本文所用的“環(huán)烷基”是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)系統(tǒng)的基團，其中形成環(huán)系統(tǒng)的各原子(即，骨架原子)是碳原子，并且其中碳源系統(tǒng)的各環(huán)中的這些碳原子中的一個或多個是飽和的(即，包含一個或多個sp³碳)。因此，環(huán)烷基是飽和碳的環(huán)狀排列，但是也可含有不飽和碳原子，并且因此其碳環(huán)可以是飽和的或部分不飽和的并且可與芳環(huán)稠合，其中環(huán)烷基和芳環(huán)的稠合點是環(huán)烷基部分或基團或取代基的相鄰不飽和碳和芳環(huán)的相鄰芳族碳。

除非另外說明，環(huán)烷基部分、基團或取代基可被烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷基芳基等所述的部分取代或者可被另一個環(huán)烷基部分取代。環(huán)烷基部分、基團或取代基包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、金剛烷基(adamantly)或其他僅具有碳原子的環(huán)狀部分。環(huán)烷基還包括環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。根據(jù)其結(jié)構(gòu)，環(huán)烷基取代基可以是上述環(huán)烷基部分或基團的單基或雙基(即，亞環(huán)烷基，諸如但不限于，環(huán)丙-1，1-二基、環(huán)丁-1，1-二基、環(huán)戊-1，1-二基、環(huán)己-1，1-二基、環(huán)己-1，4-二基、環(huán)庚-1，1-二基等)。

當(dāng)環(huán)烷基用作馬庫什基團(即，取代基)時，環(huán)烷基接合至馬庫什式或另一個有機部分，其通過參與環(huán)烷基的碳環(huán)系統(tǒng)的碳接合，條件是該碳不是芳族碳。當(dāng)包含環(huán)烷基取代基的烯基部分的不飽和碳接合至與其結(jié)合的馬庫什式時，該環(huán)烷基有時被稱為環(huán)烯基取代基。環(huán)烷基取代基中碳原子的數(shù)量由環(huán)系統(tǒng)的骨架原子的總數(shù)確定。該數(shù)字可變化并且一般范圍是3-50、1-30或1-20，更一般是3-8或3-6，除非另外說明，例如，c3-8環(huán)烷基表示含3、4、5、6、7或8個碳環(huán)碳原子的環(huán)烷基取代基、部分或基團，并且c3-6環(huán)烷基表示含3、4、5或6個碳環(huán)碳原子的環(huán)烷基取代基、部分或基團。因此，環(huán)烷基取代基、部分或基團通常在其碳環(huán)系統(tǒng)中有3、4、5、6、7、8個碳原子并且可含有外或內(nèi)-環(huán)雙鍵或內(nèi)-環(huán)三鍵或兩者的組合，其中內(nèi)-環(huán)雙鍵或三鍵，或兩者的組合不形成4n+2個電子的環(huán)狀偶聯(lián)系統(tǒng)。雙環(huán)系統(tǒng)可共有一個(即，螺環(huán)系統(tǒng))或兩個碳原子并且三環(huán)系統(tǒng)可共有總共2、3或4個，一般是2或3個碳原子。

本文所用的“烯基”表示包含一個或多個雙鍵部分(例如對于內(nèi)雙鍵和外雙鍵分別是-ch＝ch-或＝ch2官能團)或1、2、3、4、5或6或更多個，一般1、2或3個這類部分的取代基、部分或基團，并且可被芳基部分或基團如苯取代，或連接正、仲、叔或環(huán)狀碳原子，即直鏈、支鏈、環(huán)狀或其任意組合，除非烯基取代基、部分或基團是乙烯基部分(例如，-ch＝ch2官能團)。具有多個雙鍵的烯基部分、基團或取代基可具有連續(xù)(即，1，3-丁二烯部分)或具有一個或多個間插的飽和碳原子或其組合的不連續(xù)排列的雙鍵，條件是雙鍵的環(huán)狀連續(xù)排列不形成4n+2電子的環(huán)狀偶聯(lián)的系統(tǒng)(即，不是芳族的)。

當(dāng)指定烯基部分、基團或取代基時，種類包括例如但不限于本文所述的任何烷基或環(huán)烷基基團、部分或取代基，其具有外雙鍵或一個或多個內(nèi)雙鍵，包括亞甲基(＝ch2)、甲基亞甲基(＝ch-ch3)、乙基亞甲基(＝ch-ch2-ch3)、＝ch-ch2-ch2-ch3、和從母體烯烴化合物的sp2碳去除氫原子衍生的單價部分。這種單價部分一般包括乙烯基(-ch＝ch2)、烯丙基、1-甲基乙烯基、丁烯基、異丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、環(huán)戊烯基、1-甲基-環(huán)戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、環(huán)己烯基、和含有至少一個雙鍵的其他所有直鏈、環(huán)狀和支鏈含碳部分。當(dāng)烯基用作馬庫什基團(即，是取代基)時，烯基通過烯基部分或基團的雙鍵碳(即，sp²碳)接合與其結(jié)合的馬庫什式或另一個有機部分。烯基取代基中碳原子的數(shù)量由限定其為烯基取代基的烯烴官能團的sp²碳原子數(shù)量和添加到這些sp²碳各自的連續(xù)非芳族碳原子的總數(shù)限定。該數(shù)字可變化并且除非另外說明，具體范圍是1至50，例如，一般是1-30或1-20，更一般是1-8或1-6，當(dāng)雙鍵官能團是馬庫什結(jié)構(gòu)以外時，或者可變化并且范圍是2-50，一般是2-30或2-20，更一般是2-8或2-6，當(dāng)雙鍵官能團是馬庫什結(jié)構(gòu)以內(nèi)時。例如，c2-8烯基或c2-8烯基表示含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子的烯基部分，其中至少2個是互相偶聯(lián)的sp²碳并且c2-6烯基或c2-6烯基表示含有2、3、4、5或6個碳原子的烯基部分，其中至少2個是互相偶聯(lián)的sp²碳。一般而言，烯基取代基是具有2個互相偶聯(lián)的sp²碳的c2-c6或c2-c4烯基部分。

“亞烯基”單獨或作為另一個術(shù)語的部分是指包含一個或兩個雙鍵部分的所示數(shù)量的碳原子取代基、部分或基團，如之前針對烯基所述，一般是1-10個碳原子，當(dāng)雙鍵官能團在較大部分之外時，或者2-10，當(dāng)雙鍵官能團在亞烯基部分之內(nèi)時，并且具有通過從母體烯烴中的雙鍵部分的相同或2個不同sp²碳原子去除2個氫原子衍生的2個基團中心。亞烯基部分還包括本文所述的烯基基團，其中已經(jīng)從烯基基團的雙鍵部分的相同或不同sp²碳原子中去除氫原子以形成雙基，或從不同雙鍵部分的sp²碳去除氫原子以提供另一個基團碳。一般而言，亞烯基部分包括具有-c＝c-或-c＝c-x¹-c＝c-結(jié)構(gòu)的雙基，其中x¹不存在或者是本文定義的亞烷基。

本文所用的“炔基”表示取代基、部分或基團，其包含一個或多個三鍵部分(即，-c≡c-官能團)，例如，1、2、3、4、5、6或更多，一般1或2個三鍵，任選包含1、2、3、4、5、6或更多雙鍵(即，任選被烯基部分取代)，其余的鍵(如果存在)是單鍵并且還可包含連接的正、仲、叔、或環(huán)狀碳原子，即，直鏈、支鏈、環(huán)狀或其任意組合，除非炔基部分是乙炔基。

當(dāng)指定炔基部分或基團時，種類包括，例如但不限于，具有一個或多個雙鍵的本文所述的任意烷基部分、基團或取代基，乙炔基、丙炔基、丁炔基、異丁炔基、3-甲基-2-丁炔基、1-戊炔基、環(huán)戊炔基、1-甲基-環(huán)戊炔基、1-己炔基、3-己炔基、環(huán)己炔基和含有至少一個三鍵的其他直鏈、環(huán)狀和支鏈全部碳。當(dāng)炔基用作馬庫什基團(即，取代基)時，炔基通過炔基官能團的sp碳之一接合至與其接合的馬庫什式。炔基取代基中碳原子的數(shù)量由限定其為炔基取代基的炔烴官能團的2個sp碳原子和添加到未被馬庫什結(jié)構(gòu)取代的sp碳的連續(xù)非環(huán)狀非芳族碳原子的總數(shù)限定。數(shù)量可變化并且范圍是2至約50，一般是2-30或2-20或者更一般是2-8，除非另外說明，例如，c2-8炔基表示含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子的炔基部分。炔基基團將一般具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳原子。

本文所用的“亞炔基”單獨或作為另一個術(shù)語的部分，是指指定數(shù)量的碳原子，一般2-10個碳原子中包含一個或多個三鍵部分的取代基、部分或基團，如之前針對炔基所述，并且具有通過從母體炔烴中的三鍵部分的2個不同sp碳原子去除2個氫原子衍生的2個基團中性。亞炔基部分還包括本文所述的炔基基團，其中乙炔烴中已經(jīng)去除2個氫原子或者從2個三鍵部分的2個sp碳中去除2個氫原子以形成雙基。一般而言，亞炔基部分包括具有-c≡c-或-c≡c-x-c≡c-結(jié)構(gòu)的雙基，其中x是本文定義的亞烷基、亞烯基或亞芳基部分。

本文所使用的“芳香烴”，“芳香環(huán)系統(tǒng)”或類似術(shù)語指具有包含4n+2π電子的離域π電子系統(tǒng)的平面環(huán)，其中n是正整數(shù)。芳香環(huán)可由五，六，七，八，九，十，或多于十個原子形成。芳香烴可被任選取代。術(shù)語“芳香烴”同時包括碳環(huán)芳基(“芳基”，例如苯基)和雜環(huán)芳基(或“雜”或“雜芳環(huán)”)基團(例如吡啶)。該術(shù)語包括單環(huán)或稠環(huán)多環(huán)(即共用相鄰碳原子對的環(huán))基團。

本文所用的“芳基”是指由包含1，2，3或4到6個環(huán)，通常是1到3個環(huán)的芳環(huán)系統(tǒng)或不含環(huán)雜原子的稠環(huán)系統(tǒng)定義的有機部分、取代基或基團，其中所述環(huán)僅包含碳原子，所述碳原子參與4n+2個電子(通常是6、10或14個電子)的環(huán)共軛體系(休克爾規(guī)則)，其中一些電子還可參與和雜原子的環(huán)外共軛(交叉共軛(例如醌))。芳基取代基、部分或基團通常由六，八，十或更多個芳族碳原子形成。芳基取代基、部分或基團可被任選取代。示例芳基包括c6-c10芳基如苯基和萘基和菲基。由于中性芳基部分的芳香性需要偶數(shù)個電子，應(yīng)當(dāng)理解該部分的給定范圍將不包括具有奇數(shù)芳香碳原子的物質(zhì)。當(dāng)芳基用作馬庫什基團(即取代基)時，該芳基由該芳基基團的芳族碳原子附接于其所結(jié)合的馬庫什式或另一個有機部分上。

根據(jù)結(jié)構(gòu)，芳基基團可以是單價基團(即一價)或二價基團(即本文所述的亞芳基基團，其是二價)。

本文所用的“亞芳基”，或“雜亞芳基”，本身或作為另一術(shù)語的一部分是如本文定義的芳基或雜芳基部分、基團或取代基，其在更大范圍內(nèi)形成兩個共價鍵，其可呈鄰位、間位或?qū)ξ粯?gòu)型或芳族二價基團部分(即它是二價的)。示例亞芳基包括但不限于亞苯-1，2-基，亞苯-1，3-基，和亞苯-1，4-基，如以下結(jié)構(gòu)所示：

本文所述的“芳基烷基”指芳基部分與烷基部分鍵合的取代基、部分或基團，即-烷基-芳基，其中烷基和芳基基團如上所述，例如-ch2-c6h5或-ch2ch(ch3)-c6h5。當(dāng)芳基烷基用作馬庫什基團(即取代基)時，該芳基烷基的烷基部分通過烷基部分的sp³碳原子附接于在其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上。

本文所述的“烷基芳基”指以下取代基、部分或基團，其中烷基部分鍵合在芳基部分，即-芳基-烷基，其中芳基和烷基基團如上所述，例如-c6h4-ch3或-c6h4-ch2ch(ch3)。當(dāng)烷基芳基用作馬庫什基團(即取代基)時，該烷基芳基的芳基部分通過芳基部分的sp²碳原子附接于其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上。

“任選取代的烷基”，“任選取代的烯基”，“任選取代的炔基”，“任選取代的烷基芳基”，“任選取代的芳基烷基”“任選取代的雜環(huán)”，“任選取代的芳基”，“任選取代的雜芳基”，“任選取代的烷基雜芳基”，“任選取代的雜芳基烷基”和類似術(shù)語指烷基，烯基，炔基，烷基芳基，芳基烷基，芳基烷基雜環(huán)，芳基，雜芳基，烷基雜芳基，雜烷基芳基或本文定義或公開的其它取代基，部分或基團，其中所述取代基，部分，或基團的氫原子已被不同的部分或基團或其中包含那些取代基之一的脂環(huán)族碳鏈任選替代，部分或基團被具有不同部分或基團的鏈的替代碳原子間雜。

在任何一個前述的取代基，部分或基團中替代氫的任選取代基包含獨立選自以下基團：鹵素，-cn，-nh2，-oh，-n(ch3)2，烷基，氟烷基。雜烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，烷氧基，芳氧基，烷硫基，芳硫基，烷基亞砜，芳基亞砜，烷基砜，和芳基砜，或選自組，包含鹵素，-cn，-nh2，-oh，-nh(ch3)，-n(ch3)2，-c(＝o)oh(即co2h)，-c(＝o)o-烷基(即co2-烷基)，-c(＝o)nh2，-c(＝o)nh(烷基)，-c(＝o)n(烷基)2，-s(＝o)2nh2，-s(＝o)2nh(烷基)，-s(＝o)2n烷基)2。

通常在任何一個前述的取代基，部分或基團中替代氫的任選取代基包含獨立選自以下基團：烷基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基，雜脂環(huán)，羥基，烷氧基，芳氧基，氰基，鹵素，硝基，鹵代烷基，氟代烷基，氟代烷氧基，和氨基，包括單-，二-和三-取代氨基及受保護的衍生物，或選自組，包含鹵素，-cn，-nh2，-oh，-nh(ch3)，-n(ch3)2，-ch3，-ch2ch3，-cf3，-och3，和-ocf3。通常通過替代一個或多個它的氫被任選取代的前述取代基、部分或基團的任何一個具有被一個或兩個前述任選取代基或通常前述任選取代基之一取代的它的氫。在無環(huán)或環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的飽和脂環(huán)族碳原子上的任選取代基還包含側(cè)氧基(＝o)。對于苯基或6元雜環(huán)部分，存在于芳香烴或雜芳環(huán)上的任何兩個取代基可以是鄰位(o)，間位(m)，或?qū)ξ?p)。

通常，在無環(huán)碳鏈中替代碳的任選取代基包含選自以下的基團：-o-，-c(＝o)-，-c(＝o)o-，-s-，-s(＝o)-，-s(＝o)2-，-nh-，-nhc(＝o)-，-c(＝o)nh-，s(＝o)2nh-，-nhs(＝o)2，-oc(＝o)nh-，和-nhc(＝o)o-。

通常通過替代一個或多個脂環(huán)族碳原子的被任選取代的任何一個前述取代基、部分或基團具有被一個或兩個前述任選取代基或通常前述任選取代基之一取代的碳原子。

本文所用的“雜環(huán)基”指包含環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳基，或其稠合組合的母體單價碳環(huán)的部分，取代基或基團，其中一個或多個，但不全部的母體碳環(huán)部分的骨架碳原子被雜原子獨立取代，如果允許，被任選取代，包括n，o，s，se，b，si，p，其中在相同環(huán)系統(tǒng)內(nèi)，兩個或更多個雜原子可彼此相鄰或被一個或兩個碳原子，通常是1-3個原子分開。那些雜原子通常包括n，o或s。因此雜環(huán)包括具有雜芳香環(huán)(也稱雜芳基)或雜環(huán)烷基環(huán)的那些，這兩者都可與碳環(huán)，芳基或雜芳基部分稠合并包括苯基-(即苯并)稠合的雜環(huán)烷基和雜芳基部分，條件是當(dāng)雜芳基部分稠合到雜環(huán)烷基或碳環(huán)部分時(即當(dāng)稠合環(huán)系統(tǒng)的雜環(huán)部分是單價時)，所得稠合環(huán)系統(tǒng)被分類為雜芳基和當(dāng)雜環(huán)烷基部分稠合到碳環(huán)部分(即當(dāng)稠合環(huán)系統(tǒng)的碳環(huán)部分是單價時)，所得稠合環(huán)系統(tǒng)被分類為雜環(huán)烷基。

雜環(huán)在環(huán)中通常包含總共1到4個雜原子，條件是雜環(huán)部分中任何一個環(huán)骨架原子不全是雜原子，其中環(huán)中在允許的情況下被任選取代的每個雜原子獨立選自o，s和n，其中雜環(huán)基團在它的單環(huán)或稠合環(huán)系統(tǒng)中有總共4到10個原子，并且條件是任何一個環(huán)不包含兩個相鄰的o或s原子。雜環(huán)烷基在它們的環(huán)系統(tǒng)中具有至少3個原子，并且雜芳基基團在它們的環(huán)系統(tǒng)中具有至少5個原子。舉例但不限于，雜環(huán)包括由paquette，leoa提供的芳族化雜環(huán)的雜環(huán)和雜芳基；《現(xiàn)代雜環(huán)化學(xué)原理》(w.a.benjamin，紐約，1968)，特別是第1、3、4、6、7和9章，《雜環(huán)化合物的化學(xué)：專題論文集》(約翰韋利森公司(johnwiley&sons)，紐約，1950年至今)，特別是第13、14、16、19和28卷；和j.am.chem.soc.82：5545-5473(1960)，特別是5566-5573。

雜芳基在所述雜芳基環(huán)系統(tǒng)的環(huán)中通常包含總共1到4個雜原子，條件是雜環(huán)部分中任何一個環(huán)系統(tǒng)的骨架原子不全是雜原子，如果允許，任選取代，并且具有0-3個n原子，1-3個n原子或有0-1個o原子或0-1個s原子的0-3個n原子，條件是至少存在一個雜原子。雜芳基可以是單環(huán)或雙環(huán)。雜芳基環(huán)的環(huán)系統(tǒng)通常包含1-9個碳(即c1-c9雜芳基)。單環(huán)雜芳基包括c1-c5雜芳基。單環(huán)雜芳基包括具有5-元或6-元環(huán)系統(tǒng)的那些。5-元雜芳基是雜芳香環(huán)系統(tǒng)內(nèi)包含1到4個碳原子和必要數(shù)目雜原子的c1-c4雜芳基。6-元雜芳基是雜芳香環(huán)系統(tǒng)內(nèi)包含1到5個碳原子和必要數(shù)目雜原子的c1-c5雜芳基。包括c1，c2，c3和c4雜芳基的5-元雜芳基分別具有4，3，2或1個芳香雜原子和包括c2，c3，c4和c5雜芳基的6-元雜芳基分別具有4，3，2或1個芳香雜原子。5-元c1-c4雜芳基是由衍生自去除芳香碳的氫原子和芳香雜原子的電子的單價部分舉例證明，如果允許，從下列母體雜環(huán)化合物：吡咯，呋喃，噻吩，噁唑，異噁唑，噻唑，異噻唑，咪唑，吡唑，三唑和四唑。6-元c2-c4雜芳基是在允許的情況下從下列母體雜環(huán)化合物去除芳香碳的氫原子和芳香雜原子的電子而衍生的單價部分的示例：吡啶，噠嗪，嘧啶和三嗪。雙環(huán)雜芳基(即具有至少一個是雜芳烴的稠合芳香環(huán)的雜芳基)包括c6-c9雜芳基(即雜芳烴部分包含總共6-9個芳香碳原子和至少一個芳香雜原子)。一些雙環(huán)雜芳基是在允許的情況下由下列母體6，5-雙環(huán)雜環(huán)化合物的雜芳環(huán)去除芳香碳的氫原子和芳香雜原子的電子而衍生的單價部分的示例：苯并呋喃(o1)，異苯并呋喃(o1)，吲哚(n1)，異吲哚(n1)，中氮茚(n1)，二氫吲哚(n1)，異二氫吲哚(n1)，嘌呤(n4)，苯并咪唑(n2)，吲唑(n2)，苯并噁唑(n1o1)，苯并異噁唑(n1o1)，苯并二茂(o2)，苯并呋咱(n2o1)，苯并三唑(n3)，苯并噻吩(s1)，苯并噻唑(n1s1)，苯并噻二唑(n2s)。其它雙環(huán)雜芳基是在允許的情況下由下列母體6，6-雙環(huán)雜環(huán)化合物的雜芳環(huán)去除芳香碳的氫原子和芳香雜原子的電子而衍生的單價部分的示例：苯并吡喃(o1)，異苯并吡喃(o1)，苯并二氫吡喃(o1)，異苯并二氫吡喃(o1)，苯并二噁烷(o2)，喹啉(n1)，異喹啉(n1)，喹嗪(n1)，苯并噁嗪(n1o1)，苯并二嗪(n2)，吡啶并吡啶(n2)，喹喔啉(n2)，喹唑啉(n2)，噌啉(n2)，酞嗪(n2)，萘啶(n2)，蝶啶(n4)。對于上述5，6-和6，6-雙環(huán)雜芳香化合物，括號內(nèi)表達式表示稠合芳香環(huán)系統(tǒng)的雜原子組成。根據(jù)所述結(jié)構(gòu)，雜芳基基團可以是單自由基或二自由基(即雜亞芳基)。

通常更多雜芳基是如下芳基部分，其中一個1，2或3個母體芳基部分的芳香環(huán)的碳原子被雜原子替代，如果允許則任選取代，包括n，o和s，條件是所述芳基部分中的任何一個芳香環(huán)系統(tǒng)的骨架原子不全被雜原子替代，更通常是被氧(-o-)，硫(-s-)氮(＝n-)或-nr-替代，其中r是-h，保護基團或烷基，芳基或是以保留環(huán)共軛系統(tǒng)的方式用另一個有機部分替代的氮，其中所述氮，硫或氧雜原子參加通過與環(huán)系統(tǒng)中相鄰原子的π鍵合或通過雜原子上的孤對電子的共軛系統(tǒng)。

雜芳基的非限制性實施例包括吡啶基，噻唑基，嘧啶基，呋喃基，噻吩基，吡咯基，吡唑基，嘌呤基，咪唑基，苯并呋喃基，吲哚基，異吲哚基，喹啉基，異喹啉基，苯并咪唑基，噠嗪基，吡嗪基，苯并噻喃，苯并三嗪，異噁唑基，吡唑并嘧啶基，喹喔啉基，噻二唑基，三唑基等。單環(huán)雜芳基的實施包括但不限于：吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻嗪基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、噠嗪基、噁二唑基、噻二唑和呋咱基。

不是雜芳基的雜環(huán)的非限制性實施例包括：四氫噻吩基，四氫呋喃基，二氫吲哚基，哌啶基，吡咯烷基，2-吡咯烷酮基，四氫喹啉基，四氫異喹啉基，十氫喹啉基，八氫異喹啉基，2h-吡咯基，3h-吲哚基，4h-喹嗪基，咪唑烷基，咪唑啉基，吡唑烷基，哌嗪基，奎林環(huán)基，嗎啉基和噁唑烷基。

通常，雜環(huán)烷基是環(huán)烷基基團，部分或取代基，其中環(huán)烷基鏈的1，2或3個碳被選自以下雜原子替代，包括氮，氧和硫并且是c2-c10雜環(huán)烷基，更通常是c4-c10雜環(huán)烷基。非限制性雜環(huán)烷基可包含0-2個n原子，0-2個o原子或0-1個s原子或它們的組合，條件是至少一個所述雜原子存在于環(huán)的環(huán)系統(tǒng)中并可用一或兩個氧代(＝o)部分替代，如吡咯烷-2-酮。更通常地，雜環(huán)烷基包括吡咯烷基，四氫呋喃基，四氫吡喃基，哌啶基，嗎啉基，哌嗪基，二氫吲哚基和單糖。

雜環(huán)烷基的實施例包括但不限于吡咯烷基，四氫呋喃基，二氫呋喃基，四氫噻吩基，噁唑烷酮基，四氫吡喃基，二氫吡喃基，四氫噻喃基，哌啶基，嗎啉基，硫代嗎啉基，噻喃基，哌嗪基，氮丙啶基，吖丁啶基，氧雜環(huán)丁烷基，硫雜環(huán)丁烷基，高哌啶基，氧雜環(huán)戊烷基，硫環(huán)戊基，噁氮雜基，噻氮雜基，噻吩基，1，2，3，6-四氫吡啶基，吡咯啉-2-基，吡咯啉-3-基，二氫吲哚基，2h-吡喃基，4h-吡喃基，二氧戊環(huán)基，1，3-二氧戊環(huán)基，吡唑啉基，二噻烷基，二硫噁環(huán)基，二氫吡喃基，二氫噻吩基，二氫呋喃基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己基，3氮雜雙環(huán)[4.1.0]庚基，3h-吲哚基和喹嗪基。雜環(huán)烷基還包括碳水化合物的所有環(huán)形式，包括但不限于單糖，二糖和低聚糖。

當(dāng)雜環(huán)用作馬庫什基團(即取代基)時，所述雜環(huán)通過該雜環(huán)的碳或雜原子附接于其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上，其中這種附接不會導(dǎo)致該碳或雜原子的不穩(wěn)定或不允許形式氧化態(tài)。c連接的雜環(huán)通過碳原子鍵合到分子上，其有時描述為-c＜雜環(huán)，其中c＜代表雜環(huán)中的碳原子。有時描述為-n＜雜環(huán)的n連接的雜環(huán)是鍵合雜環(huán)氮的含氮雜環(huán)，其中n＜代表雜環(huán)中的氮原子。因此，含氮雜環(huán)可以是c連接的或n連接的并包括吡咯取代基，其可以是吡咯-1-基(n連接的)或吡咯-3-基(c連接的)，咪唑取代基，其可以是咪唑-1-基或咪唑-3-基(都是n連接的)或咪唑-2-基，咪唑-4-基或咪唑-5-基(都是c連接的)?！?元氮雜芳基”是是在它的芳香環(huán)系統(tǒng)中包含至少一個氮原子的5元雜芳香部分并且是單環(huán)雜芳基或稠合到芳基或另一個雜芳基環(huán)系統(tǒng)，并可包含一個或多個其它獨立選定的雜原子，如n，o或s。示例性5元雜芳基包括噻唑，咪唑，吡唑，三唑，吡咯并嘧啶，吡唑并嘧啶，吲哚和異吲哚。

本文所述的“雜芳基烷基”指雜芳基部分鍵合到烷基部分的取代基，部分或基團，即-芳基-雜烷基，其中雜芳基和烷基基團如上所述。當(dāng)雜芳基烷基用作馬庫什基團(即取代基)時，所述雜芳基烷基的烷基部分通過該烷基部分的sp³碳附接于其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上。

本文所述的“雜芳基烷基”指其中雜芳基部分鍵合到烷基部分的取代基，部分或基團，即-烷基-雜芳基，其中烷基和雜芳基基團如上所述。當(dāng)雜芳基烷基用作馬庫什基團(即取代基)時，所述雜芳基烷基的雜芳基部分通過該烷基部分的sp²碳或雜原子附接于其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上。

本文所用的“o連接部分”，“o連接取代基”和類似術(shù)語指直接通過基團或取代基的氧原子附著在部分的基團或取代基。氧連接的基團可以是單價的，包括如下基團：羥基，乙酰氧基(即-oc(＝o)ch3)，酰氧基(即-oc(＝o)r^a，其中r^a是-h，任選取代的烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取代的烯基，任選取代的炔基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán))，并還包括單價基團，如芳氧基(芳基-o-)，苯氧基(ph-o-)，雜芳氧基(雜芳基-o-)，甲硅烷氧基(即r3sio-，其中r是獨立任選取代的烷基或芳基)，和-or^pr，其中r^pr是如之前定義的保護基團或單價的o連接基團，即＝o或-x-(ch2)n-y-，其中x和y獨立地是s和o并且n是2到3，以形成x和y附著在的碳的螺環(huán)系統(tǒng)。

本文所用的“鹵素”或“鹵素”指氟，氯，溴或碘并通常是-f或-cl。

本文所用的“保護基團”指防止或減少所連接的原子或官能團參加不需要的反應(yīng)的能力的部分。greene(1999)，“有機合成中的保護基團，第3^版”，wileyinterscience給出了典型的原子或官能團的保護基團。雜原子的保護基團，如氧，硫和氮有時被用來用親電子化合物最小化或避免不需要的反應(yīng)。其他時候，所述保護基團被用來降低或消除未保護雜原子的親和性和/或堿度。保護的氧的非限制性實施例由-or^pr給出，其中-or^pr是羥基的保護基團，其中羥基通常是作為酯被保護(例如乙酸鹽，苯酸鹽或苯甲酸鹽)。羥基的其它保護基團避免干擾有機金屬試劑或其它高堿性試劑的親核性，其中羥基通常作為醚被保護，包括烷基或雜環(huán)烷基醚(例如甲基或四氫吡喃基醚)，烷氧基甲基醚(例如甲氧基甲基或乙氧基甲基醚)任選取代的芳基醚和甲硅烷基醚(例如三甲基甲硅烷基(tms)，三乙基甲硅烷基(tes)，叔丁基二甲苯基甲硅烷基(tbdps)，叔丁基二甲基甲硅烷基(tbs/tbdms)，三異丙基甲硅烷基(tips)和[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]-甲基甲硅烷基(sem)。氮保護基團包括-nhr^pr或-n(r^pr)2-中的伯胺或仲胺那些基團，其中r^pr的至少一個是氮原子保護基團或兩個r^pr都包含保護基團。

當(dāng)需要時，當(dāng)它能夠在分子中的其他地方進行所需化學(xué)轉(zhuǎn)化所需的反應(yīng)條件下以及新生成的分子的純化期間防止或避免不需要的副反應(yīng)或保護基團的過早損失時，保護基團是合適的保護，并且能在不對新生成的分子的結(jié)構(gòu)或立體化學(xué)完整性產(chǎn)生不利影響的條件下被除去。作為舉例而非限制，合適的保護基團可包括之前描述的用來保護官能團的那些。合適的保護基團通常是酞偶合反應(yīng)中的保護基團。

本文所用的“酯”是指包含-c(＝o)-o-結(jié)構(gòu)(即酯官能團)的取代基，部分或基團，其中所述結(jié)構(gòu)的碳原子未直接連接到另一個雜原子并直接連接到-h或另一個有機部分的碳原子，并且所述單價氧原子附著到相同的有機部分以提供內(nèi)酯或不同的有機部分。

通常，酯包含或組成包括1-50個碳原子的有機部分，通常1-20個碳原子或更通常地1-8個碳原子和0-10個獨立選定的雜原子(例如o，s，n，p，si，但通常是o，s和n)，通常0-2，其中所述有機部分通過-c(o)-o-結(jié)構(gòu)(即通過酯官能團)鍵合。當(dāng)酯是馬庫什結(jié)構(gòu)的取代基或可變基團時，取代基通過所述酯官能團的單價氧原子鍵合到所述結(jié)構(gòu)上。在那些情況中，附著到所述酯官能團的羰基碳的有機部分包含本文所述的任何一種有機基團，例如c1-20烷基部分，c2-20烯基部分，c2-20，炔基部分，c6-c10芳基部分，c4-8任何這些的雜環(huán)或取代衍生物，包含1，2，3，4或更多的取代基，其中每個取代基被獨立選擇。示例性酯包括，舉例但非限制，乙酸酯，丙酸酯，異丙酸酯，異丁酸酯，丁酸酯，戊酸酯，異戊酸酯，己酸酯，異己酸酯，己酸酯，庚酸酯，辛酸酯，苯乙酸酯或苯甲酸酯。

本文所用的“醚”指包含不與羰基(通常1或2)鍵合的1，2，3，4或更多-o-(即氧基)部分的有機部分，基團或取代基，其中沒有兩個-o-部分彼此緊鄰(即直接附著)。通常，醚結(jié)構(gòu)包含或由式-o-有機部分組成，其中有機部分如鍵合到酯官能團的有機部分所述。更通常地，醚結(jié)構(gòu)、基團或取代基具有-o-有機部分的式，其中所述有機部分如本文對于任選取代的烷基基團所述。當(dāng)醚用作馬庫什基團(即，醚取代基)時，醚官能團的氧附著在其所關(guān)聯(lián)的馬庫什式上。當(dāng)醚用作馬庫什基團中的取代基時，有時被指定為“烷氧基”基團。烷氧基包括c1-c4醚取代基，舉例但不限于，如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基和丁氧基。

本文所用的“酰胺”或“甲酰胺”指包含-c(＝o)n(r)2或r-c(＝o)n(r)-結(jié)構(gòu)(即分別是甲酰胺或酰胺的基團)沒有其它雜原子直接附著到所述結(jié)構(gòu)的羰基碳上的部分，并且其中獨立取代的r是氫，保護基團或有機部分，其中有機部分如本文所述是鍵合到酯官能團的有機部分并且通常是任選取代的烷基基團。通常，獨立選自r的氫或氧部分鍵合到甲酰胺或酰胺官能團，其中所述有機部分也如本文對于鍵合到酯官能團上的有機部分所述。當(dāng)鍵合到有機部分時，所得到的結(jié)構(gòu)由有機部分-c(＝o)n(r)2或r-c(＝o)n(r)-有機部分表示。當(dāng)酰胺被列為馬庫什結(jié)構(gòu)的變量時，所述酰胺與該結(jié)構(gòu)鍵合。對于甲酰胺取代基，所述酰胺官能團的羰基碳鍵合到馬庫什結(jié)構(gòu)上。酰胺和甲酰胺通常通過將酰鹵，如酰氯和包含伯胺或仲胺的分子縮合來制備?；蛘撸褂迷陔暮铣深I(lǐng)域眾所周知的通過激活羧酸分子的酯時常進行的酰胺偶聯(lián)反應(yīng)。通過肽偶聯(lián)方法的酰胺鍵合的示例性制備在benoiton(2006)肽合成化學(xué)crc出版社，bodansky“肽合成：實用教材”(1988)springer-verlag；frinkin，m.等.“肽合成”ann.rev.biochem.(1974)43：419-443.中被提出；活性羧酸的制備中用到的試劑在han等.“有機合成中肽偶聯(lián)試劑的最近進展”tet.(2004)60：2447-2476.中提供。

這里所用的“碳酸酯”指包含-o-c(＝o)-o-結(jié)構(gòu)(即碳酸酯官能團)的取代基，部分或基團。通常，這里所用的碳酸酯基團包含或有有機部分組成，其中所有有機部分如本文對于鍵合到酯官能團的有機部分所述，通過-o-c(＝o)-o-結(jié)構(gòu)，例如有機部分-o-c(＝o)-o-鍵合。當(dāng)碳酸鹽用作馬庫什基團(即取代基)時所述碳酸酯官能團的單獨鍵合的氧原子之一附著到結(jié)合的馬庫什式并且其它的鍵合到有機部分的碳原子上，如之前關(guān)于鍵合到酯官能團的有機部分所述。

這里所用的“氨基甲酸酯”和“氨基甲酸乙酯”指包含由-o-c(＝o)n(r^a)-(即氨基甲酸酯官能團)或-o-c(＝o)n(r^a)2，-o-c(＝o)nh(任選取代的烷基)或-o-c(＝o)n(任選取代的烷基)2(即示例性氨基甲酸酯取代基)表示的結(jié)構(gòu)的取代基，部分或基團，其中r^a和任選取代的烷基是獨立選擇的，其中獨立選擇的r^a是氫，保護基團或有機部分，其中有機部分是如本文所述鍵合到酯官能團的有機部分并且通常是任選取代的烷基。通常，這里所用的氨基甲酸酯基團包含或由獨立選自r^a的有機部分組成，其中所述有機部分如本文所述是鍵合到酯官能團的有機部分，通過-o-c(＝o)-n(r^a)-結(jié)構(gòu)鍵合，其中所得結(jié)構(gòu)具有有機部分-o-c(＝o)-n(r^a)-或-o-c(＝o)-n(r^a)-有機部分的式。當(dāng)氨基甲酸酯用作馬庫什基團(即取代基)時，所述氨基甲酸酯官能團的單獨鍵合的氧(o連接)或氮(n連接)附著在所結(jié)合的馬庫什式上。所述氨基甲酸酯的連接是明確指出的(n或o連接)或隱含在該取代基指代的上下文中。

這里所用的“脲”指包含由-n(r^a)-c(＝o)n(r^a)-(即脲官能團)表示和通常由-nh-c(＝o)nh(任選取代的烷基)或-nh-c(＝o)n(任選取代的烷基)2(即任選取代的烷基是示例性脲取代基)表示的結(jié)構(gòu)的取代基，部分或基團，其中r^a和任選取代的烷基是獨立選擇的，每個r^a獨立地是-h，保護基團或如所述的有機部分鍵合到酯官能團上的有機部分。當(dāng)有機部分鍵合到脲官能團時，所得到的結(jié)構(gòu)由有機部分-n(r^a)-c(＝o)-n(r^a)-或-n(r^a)-c(＝o)-n(r^a)-有機部分表示。當(dāng)脲用作馬庫什基團(即作為取代基)時，所述脲官能團的單獨鍵合的氮附著在所結(jié)合的馬庫什式上，同時其它單獨鍵合的氮是未取代的或用一或兩個其它獨立選擇的有機部分單或雙取代的，其中有機部分如本文關(guān)于鍵合到酯官能團上的有機部分所述。

這里所用的術(shù)語“抗體”以其最廣泛的含義使用，并且具體涵蓋完整的單克隆抗體、多克隆抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)，和顯示所需生物活性的抗體片段，限制條件是，所述抗體片段具有藥物-接頭必需的連接位點數(shù)量?？贵w天然形式是四聚體，并且包含兩個相同對的免疫球蛋白鏈，其中各對具有一個輕鏈和一個重鏈。在各對中，輕鏈和重鏈可變區(qū)(vl和vh)一起在與抗原的結(jié)合中起主要作用。輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含摻雜有三個高變區(qū)(也稱作“互補決定區(qū)”或”“cdr”)的框架區(qū)。恒定區(qū)可由免疫系統(tǒng)識別并且與其相互作用(參見例如，janeway等，2001，immuno.biology，第五版，加蘭出版公司(garlandpublishing)，紐約)。抗體可以是任何類型(例如，igg、ige、igm、igd和iga)、類別(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或子類?？贵w可源自任何合適的物種。在一些實施方式中，抗體是人或鼠源性的?？贵w可以是，例如，人、人源化或嵌合抗體。抗體或其抗體片段是并入本發(fā)明的ldc中的示例性配體靶向部分。

在一些方面抗體選擇性或特異性結(jié)合到過度增殖細胞或超刺激哺乳動物細胞(即異常細胞)上的表位，其中與正常細胞相反，所述表位是優(yōu)先顯示或是更獨特的異常細胞，或與正常細胞未定位到異常細胞相比，是優(yōu)先顯示或是異常細胞附近更獨特的正常細胞。在那些方面中所述哺乳動物細胞通常是人細胞。

本文所用術(shù)語“單克隆抗體”指獲自基本均一抗體群體的抗體，即除了少數(shù)出現(xiàn)可能的天然產(chǎn)生突變外，群體包含的單獨抗體是相同的。單克隆抗體具有針對某一抗原性位點的高度特異性。修飾語“單克隆”指示該抗體獲自基本均質(zhì)的抗體群這一特點，而不應(yīng)被解釋為需要通過任何特定的方法來產(chǎn)生抗體。

這里所用的“細胞毒性活性”指的是藥物，配體-藥物偶聯(lián)物或配體-藥物偶聯(lián)物的胞內(nèi)代謝物的殺細胞作用。細胞毒性活性可通過ic50值表示，其為一半細胞存活的每單位體積的濃度(摩爾或質(zhì)量)。

這里所用的“細胞生長抑制活性”指不依賴于細胞殺傷但其作用是由于超增殖細胞，超刺激免疫細胞或其它異?；虿恍枰募毎募毎至训囊种频乃幬?，配體-藥物偶聯(lián)物或配體-藥物偶聯(lián)物的胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的抗增殖作用。

術(shù)語“特異性結(jié)合”和“特異性地結(jié)合”指作為靶標部分的ldc中的抗體或抗體能夠結(jié)合以高度選擇性的方式結(jié)合與其對應(yīng)的靶標抗原，并不與多數(shù)其它抗原結(jié)合。通常，所述抗體或抗體衍生物以至少約1x10^-7m，且優(yōu)選10^-8m至10^-9m、10^-10m、10^-11m，或10^-12m的親和性結(jié)合，并且，其與預(yù)確定的抗原結(jié)合的親和性是其與除緊密相關(guān)抗原以外的、非特異性抗原(例如，bsa、酪蛋白)結(jié)合的親和性的至少兩倍高。

本文所用的術(shù)語“配體-藥物偶聯(lián)物”或“l(fā)dc”指包括通過連接單元彼此鍵合的來自靶向部分的配體單元和在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于含有叔胺藥物的季胺化的含叔胺藥物單元(d⁺)構(gòu)建體，其中l(wèi)dc通過其配體單元選擇性結(jié)合靶標部分。在一些情況中，術(shù)語ldc是個別lcd化合物的多元結(jié)構(gòu)(即組合物)，這些個別lcd化合物的不同之處主要在于鍵合至各配體單元的d⁺單元的數(shù)量或配體單元上d⁺單元所鍵合的位置。在其他方面，術(shù)語ldc適用于組合物的個別成員

本文所用的術(shù)語“靶向部分”是以配體單元的形式納入ldc中的選擇性結(jié)合靶標部分的部分，與存在于正常細胞上、內(nèi)或附近(其中這些異常的或不需要的細胞通常不存在)的其它部分相比，該靶標部分通常存在于高增殖細胞、過度刺激的免疫細胞或其它異?；虿恍枰募毎?、內(nèi)或附近。與通常不存在異常細胞的正常細胞或正常細胞的環(huán)境相比，有時靶標部分以高豐度存在于異常的內(nèi)部，內(nèi)或附近。在一些情況中所述靶向部分是特異性結(jié)合異常細胞的易接近抗原的特征或是對這些細胞被發(fā)現(xiàn)的周圍環(huán)境特有的易接近抗原。在一些情況中所述靶向部分是以高豐度特異性結(jié)合異常細胞或其它不需要的細胞的易接近受體的特征或是對異常細胞被發(fā)現(xiàn)的周圍環(huán)境細胞特有的易接近受體。通常靶向部分如本文所定義的是選擇性結(jié)合到異常的或不需要的哺乳動物細胞的靶標部分，更通常是異?；虿恍枰娜思毎陌袠瞬糠值目贵w。

本文所用的術(shù)語“靶標細胞”是lcd經(jīng)設(shè)計以與預(yù)期細胞(即異?；蚱渌恍枰募毎?相互作用以抑制預(yù)期細胞增殖或其它不需要的活性的預(yù)期細胞。在一些情況中，所述靶標細胞是超增殖細胞或超活性免疫細胞，這是示例性異常細胞。通常這些異常細胞是哺乳動物細胞并且更通常是人細胞。在其他情況中，所述靶標細胞在異?；虿恍枰募毎浇鼉?nèi)，因此ldc在附近細胞上的作用對異?；虿恍枰募毎哂蓄A(yù)期作用。例如，所述附近細胞可以是具有異常腫瘤脈管系統(tǒng)特征的上皮細胞。通過ldc對那些血管細胞的靶向?qū)⒕哂袑@些細胞的毒性或殺傷作用，這將抑制對腫瘤的異常細胞的營養(yǎng)傳遞以間接具有對異常細胞的毒性或殺傷作用，和/或通過在這些細胞附近釋放活性藥物部分對異常細胞具有直接的毒性或殺傷作用。

本文所用的術(shù)語“靶向部分”是由靶向部分或來自靶向部分(即由配體單元選擇性結(jié)合)的配體-藥物偶聯(lián)物的配體單元優(yōu)先識別的部分并且存在于靶標細胞內(nèi)，內(nèi)或附近。有時所述靶標部分是對抗體選擇性結(jié)合易接近的抗原，這是作為配體單元并入到ldc的示例性靶向部分。在那些情況中，這種抗原是存在于異常細胞或其它不需要的細胞或存在于對異常細胞或不需要的細胞所得發(fā)現(xiàn)的周圍環(huán)境是特有的細胞的細胞表面蛋白。如血管細胞在腫瘤中是超增殖細胞的環(huán)境的特征。更通常的是，所述抗原是能夠在與它的同源靶向配體結(jié)合時內(nèi)在化的異常細胞或不需要的細胞的細胞表面蛋白。在其他情況中，所述靶向部分是細胞外易接近細胞膜受體的配體，其可在靶向部分的結(jié)合時被內(nèi)在化或能夠被動或促進ldc靶向細胞表面受體的轉(zhuǎn)運。在一些方面中，所述靶向部分存在于異常哺乳動物細胞或存在于這種異常細胞的環(huán)境的特征的哺乳動物細胞。

本文所用的術(shù)語“抗體-藥物”或“adc”指其中靶向部分是抗體的ldc，其中抗體通常通過中間連接單元共價附著到季銨化藥物單元(d⁺)上。時常所述術(shù)語指具有相同抗體，藥物單元和連接單元的偶聯(lián)物的集合(即群體或多個)，但是對于每個抗體，具有接頭-藥物部分的可變負載或分布(例如當(dāng)多個這種構(gòu)建體中的d⁺的任意兩個adcs的數(shù)量相同但附著到靶向部分的位點的位置不同時)。在那些情況中，adc通過偶聯(lián)物的平均藥物負載來描述。獲自本文所描述的方法的adc具有ab-lb-lo-d⁺的一般結(jié)構(gòu)，其中l(wèi)b-lo連接單元，其中l(wèi)b是配體共價結(jié)合部分，有時指主要接頭(lr)接頭，這樣命名是因為該部分需要存在于adc的配體單元中，lo是對酶促(例如蛋白酶或糖苷酶)或非酶促(例如還原或水解)裂解敏感的二級接頭。在一些情況中，該裂解在異常的環(huán)境中增強或在adc的靶向抗體結(jié)合到它的同源抗原后adc的胞內(nèi)內(nèi)在化后發(fā)生。d⁺是包含藥物單元d的季銨化叔胺，其中d由于對lo的酶促或非酶促作用而釋放。

在adc組合物中(即adc偶聯(lián)物集合的平均數(shù)目與存在于該集合中的偶聯(lián)的藥物單元或每個adc中的它們的位置的數(shù)目不同)每個抗體或其片段的配體單元的平均數(shù)目被指定為p，或當(dāng)接頭不分支時，p是藥物-連接部分的平均數(shù)目。在該情況下，p是一個從約2到約20的數(shù)目范圍并通常是約2，約4，或約8。在其他情況中，p代表藥物單元的數(shù)量，或當(dāng)接頭不分支時，其共價鍵合到抗體-藥物偶聯(lián)物的集合內(nèi)的adc的單抗體上，在每個adc中，偶聯(lián)的的接頭-藥物單元的數(shù)目或位置不同，并被指定為p’。在該情況下，p’是從1到20的整數(shù)，通常是1到12，1到10，更通常是從1到8。

偶聯(lián)反應(yīng)的制備物中每配體單元的藥物單元的平均數(shù)目可通過傳統(tǒng)方式表征，例如質(zhì)譜、elisa試驗，hic和/或hplc。也可以p的形式確定藥物-接頭-配體偶聯(lián)物的定量分布。在某些情況下，可通過諸如反相hplc或電泳等方式將具有某一確定p值的同質(zhì)配體-藥物偶聯(lián)物與其它藥物載量的配體-藥物偶聯(lián)物分離、純化，并鑒定。

“抗原”是能夠選擇性結(jié)合到未偶聯(lián)抗體或其片段或結(jié)合到包含來自抗體或其片段的adc。在一些方面中，與正常細胞相比，所述抗原是由異常細胞或其它不需要的細胞優(yōu)先顯示的胞外易接近的細胞表面蛋白，糖蛋白或碳水化合物。在一些情況中，所述不需要的細胞具有的抗原是哺乳動物中的超增殖細胞。在其他情況中，所述不需要的細胞具有的抗原是哺乳動物中的超活性免疫細胞。在其他方面，與缺乏這種異常細胞中正常細胞通常經(jīng)歷的環(huán)境相比，所述特異性結(jié)合的抗原存在于哺乳動物中超增殖細胞或超活性免疫細胞的特別的環(huán)境。在其他方面中，所述細胞表面抗原能在adc的選擇性結(jié)合與對環(huán)境獨特的細胞關(guān)聯(lián)時內(nèi)在化，其中超增殖細胞和超刺激免疫細胞在缺乏這種異常細胞的環(huán)境中被發(fā)現(xiàn)。抗原是ldc的示例性靶標部分，其中它的來自所述靶標部分的配體單元是能通過選擇性結(jié)合優(yōu)先識別該抗原的抗體?？乖Y(jié)合對adc(包括，舉例但非限制，cd19，cd70，cd30，cd33，ntb-a，αvβ6，和cd123)細胞表面易接近的超增殖細胞。

“配體共價結(jié)合部分”是包含選擇性結(jié)合它的同源靶標部分并有時被稱為靶標部分的ldc的部分。配體共價結(jié)合部分包括但不限于受體配體，對細胞表面抗原的抗體和轉(zhuǎn)運體底物。與正常細胞相比，有時，通過ldc發(fā)現(xiàn)的所述受體，抗原或轉(zhuǎn)運體以更高豐度存在于異常細胞上。與正常細胞相比，其他時候，通過ldc發(fā)現(xiàn)的所述受體，抗原或轉(zhuǎn)運體以更高豐度存在于異常細胞上。

“配體共價結(jié)合部分前體”是連接單元或在連接單元的制備中使用的其底物的部分，其能夠在ldc的制備期間共價結(jié)合到靶標部分，因此所述配體結(jié)合部分前體(lb’)被轉(zhuǎn)化為配體共價結(jié)合部分(lb)。在一些方面中，lb’部分通常具有能夠與抗體或其片段天然的親核試劑或親電子試劑反應(yīng)或通過化學(xué)轉(zhuǎn)化或基因工程引入抗體的官能團。在一些方面中，所述親核試劑是包含抗體或賴氨酸殘基的ε氨基的肽的n端氨基。在其他方面，所述親核試劑是通過基因工程或從抗體的分子間二硫化物的化學(xué)還原引進的半胱氨酸殘基的巰基。在一些方面，所述親電子試劑是通過抗體的碳水化合物部分選擇性氧化引入的醛或使用基因工程trna/trna合成酶對引入到抗體的非天然氨基酸的酮。那些和其它方法由behrens和liu“位點特異性藥物偶聯(lián)到抗體的方法”mab(2014)6(1)：46-53.進行了綜述。

“配體共價結(jié)合部分”是共價結(jié)合靶向異常細胞或不需要的細胞或它們的環(huán)境的配體單元的剩余部分的ldc中的配體單元的部分并且源自配體單元前體中對應(yīng)的lb'和靶標部分的反應(yīng)例如，當(dāng)lb’由馬來酰亞胺組成時。該部分與靶向部分的反應(yīng)性巰基的反應(yīng)將lb’轉(zhuǎn)化成由硫代琥珀酰亞胺部分組成的lb。在另一個實施例中，當(dāng)lb’由活性羧酸組成時，該官能團和靶標部分中賴氨酸的ε氨基的反應(yīng)將所述官能團轉(zhuǎn)化成酰胺，其中該酰胺包括所連接的配體單元的lb部分。本發(fā)明的實施方式中描述了其它lb部分和他們的來自包含lb’部分的轉(zhuǎn)化。在一些情況中，靶向部分和雙功能分子的衍生化以提供和配體共價結(jié)合前體部分縮合的中間體。由于該縮合，這樣形成的lb部分具有歸屬于雙功能分子和lb’的原子。

本文所用的“連接單元”是指配體藥物偶聯(lián)物(ldc)中插入在季銨化藥物單元(d⁺)和來自靶標部分的配體單元之間和共價附接于該藥物單元及該配體單元上的有機部分。在一些方面中，所述配體共價結(jié)合前體部分包含馬來酰亞胺(m¹)部分。靶向部分的連接通過通過巰基的邁克爾加成到m1的馬來酰亞胺的環(huán)系統(tǒng)上通過靶標部分的半胱氨酸巰基發(fā)生。由于該加成，獲得了具有硫代琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的琥珀酰亞胺(m²)部分。隨后該環(huán)自發(fā)或在受控條件下水解，當(dāng)該環(huán)系統(tǒng)是自穩(wěn)定連接(lss)部分的一部分時，產(chǎn)生琥珀酸-酰胺(m³)部分，其是示例性自穩(wěn)定(ls)部分，如本文進一步所述。也共建鍵合到主要接頭(lr部分)的lb或lb’上，是第二接頭(lo)部分，其進一步介導(dǎo)靶向部分和ldc中的季銨化藥物單元之間并通過中間體醚，酯，碳酸酯，脲，二硫化物，酰胺或氨基甲酸酯官能團，更通常地通過醚，酰胺，或氨基甲酸酯官能團鍵合到lr。

所使用的“主要接頭”是配體共價結(jié)合部分(lb)或配體共價結(jié)合部分前體(lb’)，并且通常作為ldc連接單元的組分或含有l(wèi)b′的部分如lb'-lo或lb’-lo-d⁺的組分存在。lb'主要接頭是由能夠與靶向部分的親電子或親核官能團反應(yīng)的反應(yīng)性官能團組成。作為反應(yīng)的結(jié)果，所述靶標部分作為配體單元通過源自lb’的反應(yīng)性官能團共價鍵合到lb主要接頭上。本文所用的“二級接頭”部分指連接單元中的有機部分，其中二級接頭(lo)通過lb或lb'部分和季銨化藥物單元可能共價連接的連接單元的剩余部分之間的官能團的中間體共價連接到lb或lb’部分(即主要連接單元)上。在ldc中，所述二級接頭通過包含間隔物單元的pab或pab型的自毀滅部分的芐基位置也共價連接到季銨化藥物單元(d⁺)上。除了間隔物單元(y)，二級接頭由可拆卸(w)組成。其中w，y和d⁺以線性或正交關(guān)系布置，并且還可能由單價單元(a)組成。當(dāng)存在時，a有時是由亞基a1組成，其是將源自此的lb’的反應(yīng)性官能團或lb的官能團與二級接頭的剩余部分相互連接的支架部分。在ldc中，lo由包含共價鍵合到可裂解部分單元(w)的自毀滅部分(si)的間隔單元(y)組成，使得與正常細胞或它們的環(huán)境相比，在在異常細胞更可能經(jīng)歷或其附近的條件下，w的分列導(dǎo)致自毀滅部分的自我破壞并伴隨著d的附隨物釋放。通常該自我破壞在如本文所述的si部分中通過1，6-消除發(fā)生。在這些情況中，si通過該藥物的叔胺氮的季銨化附著在含叔胺的藥物上。當(dāng)鍵合到d⁺上時，二級接頭(lo)通常通過(1)和(2)的結(jié)構(gòu)顯示：其中aa是延伸單元；ww和w’w’是可切割單元；和yy是間隔單元，其中a是0或1，w或w′是1和y是1。當(dāng)a是1時，aa前的波浪線表示該lo亞基和lb’或lb(由lb’引入ldc后產(chǎn)生)的共價鍵合。當(dāng)a是0時該波浪線表示lb’或lb與結(jié)構(gòu)(1)中的可切割單元w或結(jié)構(gòu)(2)中的y共價鍵合。

在本發(fā)明的一些方面中，結(jié)構(gòu)(1)中的y由如本文所述的由w和d⁺取代的自毀滅(si)部分組成或由其組成。在本發(fā)明的其他方面中，結(jié)構(gòu)(2)中的y由如本文所述的由d⁺通過季胺氮取代的自毀滅部分組成或由其組成并進一步由w和配體-lb-a-或lb'-a-取代，其中a任選存在(即當(dāng)a存在時鍵合到y(tǒng)的si上或當(dāng)a不存在時lb或lb’鍵合到y(tǒng)的si上)。

通常，具有結(jié)構(gòu)(1)的二級接頭示為

具有結(jié)構(gòu)(2)的二級接頭示為

其中y由si組成并且e，j，v，z¹，z²，z³，r’，r⁸和r⁹如實施方式中對pab或pab型自毀滅單元所定義。

本文所用的“馬來酰亞胺”部分是具有馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的配體共價結(jié)合前體部分。馬來酰亞胺部分(m¹)能夠參加靶標部分衍生的巰基的邁克爾加成(即1，4-共軛加成)以提供如本文所述的硫代琥珀酰亞胺(m²)部分，這將存在于ldc中的連接單元中。m¹在它轉(zhuǎn)化成硫代琥珀酰亞胺部分之前通過它的酰胺氮附著在連接單元的剩余部分上。除了所述酰亞胺氮，m¹部分通常是未取代的，但可能在它的馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的環(huán)狀雙鍵處被不對稱取代。這種取代導(dǎo)致對所述馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的更少妨礙和更多電子缺陷的雙鍵碳(取決于更主要的貢獻)的巰基的區(qū)域化學(xué)優(yōu)選加成。當(dāng)存在于自穩(wěn)定接頭(lss)部分中時，源自這種取代的m¹部分硫代琥珀酰亞胺部分m²的琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的受控的水解預(yù)期在自穩(wěn)定接頭(ls)部分中提供琥珀酸-酰胺(m³)的區(qū)域化學(xué)異構(gòu)體，這是由于存在于m¹前體中的取代基的m²的兩個羰基碳的反應(yīng)性差異引起的。

本文所用的“琥珀酰亞胺部分”是在adc中組成接頭單元的有機部分并且由抗體衍生的巰基與馬來酰亞胺部分(m¹)馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的邁克爾加成產(chǎn)生。琥珀酰亞胺(m²)部分因此由硫代琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)組成并具有連接單元的剩余部分取代的酰亞胺氮和被存在于m¹前體中的取代基任選取代。通常，當(dāng)a存在于所述酰亞胺氮時，共價附著到如本文所述的支架部分(a)或其亞基上。有時m²-a(或m²-a1)提供如本文所述的自穩(wěn)定接頭(lss)部分。

本文所用的“琥珀酸酰胺部分”指具有酰胺取代基的琥珀酸，其由通過水解已經(jīng)破壞其羰基-氮鍵之一的琥珀酰亞胺部分m²的硫代琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)產(chǎn)生。導(dǎo)致琥珀酸酰胺(m³)的水解提供在具有該m³部分的ldc中通過抗體-硫取代基不太可能過早損失抗體的連接單元。當(dāng)存在于自穩(wěn)定接頭(lss)部分中時，源自這種取代的m¹部分的硫代琥珀酰亞胺部分m²的琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的受控的水解預(yù)期提供m³部分(獨立稱為m^3a和m^3b)的區(qū)域化學(xué)異構(gòu)體，這是由于存在于m¹前體中的取代基的m²的兩個羰基碳的反應(yīng)性差異引起的。

本文所用的“自穩(wěn)定接頭”是ldc的接頭的包含lb的部分，或在受控條件下能夠經(jīng)歷化學(xué)轉(zhuǎn)化成自穩(wěn)定接頭部分(ls)的其前體(即包含lb’的部分)，使得最初由自穩(wěn)定(lss)部分組成的ldc變得更耐受來自ldc的靶標部分的過早損失。通常除了lb或lb’部分的lss部分由延伸單元或其亞基組成。在一些線性布置中具有l(wèi)ss，w和y這些情況中，lss通過延伸單元或另一個其亞基共價附著到可切割單元(w)上。在其他具有與lss-y正交的y的這些情況中，lss通過延伸單元或另一個其亞基共價附著到y(tǒng)上。然而，根據(jù)lss，w和y接頭組分的相對布置，有時不存在插入的a并且lss直接共價附著到w或y上。在一些方面中，lss在其并入到ldc中之前包含作為lb’部分(靶標部分將通過其附著)的馬來酰亞胺(m¹)部分和延伸單元(a)或其亞基(即a1)并通過m¹-a或m¹-a1的式表示。在并入ldc之后(即在靶標部分通過邁克爾加成附著到馬來酰亞胺部分之后)所述lss的m¹-a(或m¹-a1)部分被轉(zhuǎn)化成它對應(yīng)的硫代琥珀酰亞胺部分m²-a(或m2-a1)。通常lss也由結(jié)合到m²或它的m¹前體上的延伸單元的取代基的如本文所述的basicunit(bu)組成。在這些方面中，bu有助于將m²的琥珀酰亞胺部分水解成其對應(yīng)的開環(huán)形式m³[即m²-a(bu)-或m²-a1(bu)-被轉(zhuǎn)化成m³-a(bu)或m³-a1(bu)]。

“自穩(wěn)定接頭”是源自lss部分的有機部分，兩者都是含有l(wèi)b的部分，ldc通常在受控的條件下已經(jīng)經(jīng)歷了水解，以提供不太可能反轉(zhuǎn)靶標部分與提供原始含有l(wèi)b部分的包含lb’的部分的縮合反應(yīng)的新的包含lb的部分。通常，自穩(wěn)定接頭(ls)由延伸單元或其共價附著到獲自馬來酰亞胺部分(m²)的轉(zhuǎn)化的部分的亞基組成，其具有由靶標部分的巰基與m¹的馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)邁克爾加成產(chǎn)生的硫代琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)，與另一部分，其中該m²衍生部分與m²中對應(yīng)的取代基相比具有用于消除其硫代取代基的降低的反應(yīng)性。在這些方面中，所述m²衍生物部分具有與m²對應(yīng)的琥珀酸-酰胺(m³)部分的結(jié)構(gòu)，其中m²已經(jīng)經(jīng)歷了其琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的羰基-氮鍵之一的水解。該水解可自然發(fā)生或更通常是被共價附著到結(jié)合到m²的延伸單元的bu的堿性官能團的催化并且由于該附著的結(jié)果，適當(dāng)?shù)慕咏詤f(xié)助羰基-氮的破裂。該水解的產(chǎn)物因此具有通過上述延伸單元的結(jié)構(gòu)在其酰胺氮上被取代的羧酸官能團和酰胺官能團，其與包含m²的lss前體中的酰胺氮對應(yīng)。通常，該堿性官能團是其堿性催化水解活性受ph控制的氨基。因此，自穩(wěn)定接頭(ls)通常具有共價鍵合到延伸單元或其亞基的m³的結(jié)構(gòu)，反過來其以線性排列共價鍵合到二級接頭lo(lo’)的剩余部分并且堿性單元共價附著到與lo正交的結(jié)合m³的延伸單元上。具有以指示的方式布置的m³，a，bu和lo的ls由m³-a(bu)-lo’或m³-a1(bu)-lo’的式顯示。

在水解后，得到的自穩(wěn)定接頭(ls)通常具有共價鍵合到所述bu取代的延伸單元(m³-a(bu)-或m³a1(bu)-)的m³的結(jié)構(gòu)。該延伸單元反過來以線性布置共價鍵合到lo(lo’)的剩余部分，堿性單元相對于m³和其它lo組分單元正交布置。具有以指示的方式排列的m²或m³，a(bu)[或a1(bu)]和lo’的lss和ls的示例性結(jié)構(gòu)以實施例的方式顯示但不限于：

其中所指示的ch(ch2nh2)c(＝o)部分是所述延伸單元或其亞基的結(jié)構(gòu)，共價鍵合到m²或m³的酰胺氮的亞酰胺上，其中所述-ch2nh2部分是該延伸單元的bu取代基。所述結(jié)構(gòu)的剩余部分代表來自m²的琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的琥珀酰亞胺部分m²或琥珀酸酰胺部分m³，其在酰亞胺或?qū)?yīng)的酰胺氮處被所述延伸單元的sp³碳取代。所述波浪線表示由該基團和m¹的馬來酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的邁克爾加成產(chǎn)生的靶標部分衍生物巰基的附著。m²的琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)由于其靶標部分衍生的硫取代基因此是不對稱取代的，如本文所定義的琥珀酸酰胺(m³)部分的區(qū)域化學(xué)異構(gòu)體相對于游離的羧酸基團在位置上不同，通常由m²水解產(chǎn)生。在上述結(jié)構(gòu)中，所述指示的延伸單元的羰基例示了并入到這種單元的結(jié)構(gòu)中的如本文所述的水解增強子(he)。

與對應(yīng)的lss部分的m²-a(bu)結(jié)構(gòu)相比，m³-a(bu)表示自穩(wěn)定接頭(ls)部分的示例性結(jié)構(gòu)，因此這些結(jié)構(gòu)不太可能消除所述靶標部分的硫取代基，從而造成該部分的缺失。與m²相比，這增加了m³中更大構(gòu)象靈活性的穩(wěn)定性，m²不再限制有利于e2消除的構(gòu)象中的中硫取代基。

本文所用的“堿性單元”是如本文所述的自穩(wěn)定接頭(lss)部分的有機部分，其可以通過參與包括lss(即催化水分子加入到琥珀酰亞胺羰基-氮鍵之一)的m²部分內(nèi)的琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的堿輔助水解進入到對應(yīng)的ls部分并可以在附著于lss的靶標部分所耐受的受控條件下被引發(fā)。對于該目的，選擇所述堿性單元(bu)的堿性官能團和在lss中它相對于它的m²組分的相對位置，因為其氫鍵鍵合到m²的羰基上的能力，其有效增加它的親電性并因此增加其對水攻擊的敏感性?；蛘?，選擇這些變量以至于其親核性通過氫鍵鍵合到bu的堿性官能團而增加的水分子指向m²羰基。通常，通過任一機制起作用的bu由連接其堿性氨基與所附著的lss部分的1-6個連續(xù)碳原子組成。為了通過氫鍵鍵合增加m²羰基的親電性，bu需要具有作為其堿性官能團的伯胺或仲胺，而以上述方式增加水親核性可以伯、仲或叔胺作為堿性官能團來完成。為了使堿性氨在所需要的附近通過任一機制幫助琥珀酰亞胺部分m²水解成其對應(yīng)的開環(huán)羧酸胺m³，通常將bu的含胺碳鏈附著到相對于a(或a1)附著到m²(并因此相應(yīng)的m¹-a或m¹-a1結(jié)構(gòu)的馬來酰亞胺氮)的琥珀酰亞胺氮上的點的該部分的α碳處的lss的支架部分。通常該α碳距今有所述的(s)立體化學(xué)構(gòu)型。本文所用的“水解增強單元”是包含lss部分的延伸單元的可選取代基的吸電子基團或部分。當(dāng)存在時，水解增強子單元(he)通常并入到鍵合到m²部分的酰亞胺氮的延伸單元，以至于在該部分中其吸電子效應(yīng)增加了琥珀酰亞胺羰基的親電子性。當(dāng)所述延伸單元也具有bu取代基時，平衡取決于bu堿性官能團的堿度和該官能團相對于那些羰基的距離的he對羰基的影響加上bu的影響，使得在從具有m¹-a(bu)-結(jié)構(gòu)的lss前體中制備ldc期間m¹或m²到m³的過早水解不會發(fā)生或忽略不計，但允許在被所附著的靶標部分耐受的受控條件(如當(dāng)ph有目的地增加時)下水解(即包含ldc的-m²-a(bu)部分到相應(yīng)的-m³-a(bu)-部分的轉(zhuǎn)化)。通常，所述he單元是羰基部分(即酮或-c(＝o)-)或位于鍵合到源自其的m²或m³的延伸單元末端的含羰基的官能團，并還將該延伸單元共價鍵合到二級接頭的剩余部分。除了酮含羰基的的官能團包括酯，氨基甲酸酯，碳酸酯和脲。當(dāng)he是除了酮的含羰基官能團時，該官能團的羰基部分通常鍵合到a上。在一些方面，如當(dāng)bu取代基不存在時，所述he單元可在延伸單元內(nèi)與延伸單元共價鍵合的酰亞胺氮充分遠離，以至于觀察不到對包含m²部分的琥珀酰亞胺羰基-氮的水解敏感性的可辨識的影響。

本文所用的術(shù)語“延伸單元”指從延伸單元末梢的連接單元(如可切割單元和/或間隔單元)的其它插入組分中物理分離靶標部分的二級接頭中的有機部分。當(dāng)ldc的lb部分不能提供足夠空間釋放以允許在w處的連接單元處理時通常需要延伸單元，以至于可以釋放并入d⁺中的含叔胺的藥物。延伸單元(a)可包含一個或多個如本文所述的支架基團或亞基。在并入ldc之前，a具有能夠?qū)b’共價鍵合到某些接頭結(jié)構(gòu)(如當(dāng)a，w和y在一個線性布置中)中的可切割單元(w)或其它接頭結(jié)構(gòu)(如當(dāng)w與a-y正交時)中的間隔單元(y)。在本發(fā)明的一些方面中，延伸單元能夠附著到多于一個可切割單元，間隔單元和/或藥物單元上，例如當(dāng)a表示樹枝狀聚合物或其它多功能分支結(jié)構(gòu)時。在本發(fā)明的一些方面中，所述二級接頭通過它的支架亞基之一附著到lb或lb’部分上，同時另一個或它的亞基共價鍵合到所述二級接頭的剩余部分。

當(dāng)存在與ldc中時，延伸單元(a)是共價附著到配體共價鍵合部分或配體共價鍵合部分前體和另一個二級接頭單元上的有機部分并且可包含兩個，三個或更多亞基或由其組成。通常a是一個不同的單元或具有被稱為a1和ao的兩個不同的亞基。在a具有兩個亞基的這些情況中，在藥物接頭或配體藥物偶聯(lián)物中所述下標是2，這些偶聯(lián)物由如-aa-ww-yy-或aa-yy(ww)-的部分組成并且作為-a1-a2-的aa有時被稱為-a1-a0-。選擇延伸單元中連續(xù)原子的數(shù)目以減輕未被配體共價鍵合部分占據(jù)的配體部分的位阻影響，該配體共價鍵合部分將阻止由包含該共價配體鍵合部分，延伸單元和可切割單元組成的ldc的w的異常細胞內(nèi)或其位點處的處理產(chǎn)生的游離的包含叔胺的藥物的釋放。通常所述延伸單元或其亞基具有在配體共價鍵合部分或配體共價鍵合部分前體和將延伸單元a共價附著到二級接頭的可裂解(w)或間隔(y)單元上或附著到a的另一個亞基上的官能團之間的一個到六個連續(xù)碳原子。在一些方面中，該官能團還可作為水解增強(he)單元。

本文所用的“分支單元”指是延伸單元(a)的任選亞基的三功能有機部分。有時a的亞基a1或a0作為分支單元并且其他時候分支單元是a的附加亞基。當(dāng)a1a0和b作為a的亞基存在時，b可以是配體共價鍵合部分(lb)或它的前體lb’(即是-a1-ao-之前)或a的遠端亞基(即是-a1-ao-之后)的近端亞基。所述分支單元是三功能的以便并入到二級接頭(l0)或?qū)0連接到主要接頭單元(lr)上并且當(dāng)該單元作為接頭單元(lu)的組分存在時，另外連接到溶解單元(s)上。在a具有兩個亞基其中一個亞基是分支單元的這些情況中，在藥物接頭或配體藥物偶聯(lián)物中所述下標是2，這些偶聯(lián)物由如-aa-ww-yy-或aa-yy(ww)-的部分組成，在這些情況下作為-a1-a2-的aa有時被稱為-a-b-或-b-a-。在a具有兩個亞基其中一個亞基是分支亞基的這些情況中，在藥物接頭或配體藥物偶聯(lián)物中所述下標是3，這些偶聯(lián)物由如-aa-ww-yy-或aa-yy(ww)-的部分組成，在這些情況下作為-a1-a2-a3-的aa有時被稱為-a1-b-a0或-b-a1-a0-或-a1-a0-b-，取決于藥物接頭或配體藥物偶聯(lián)物的連接單元中a1，a0和b的相對排列。

在一些方面中。具有官能化的側(cè)鏈的天然或非天然氨基酸或其它包含胺的酸性化合物用作分支單元。通常，當(dāng)當(dāng)分支單元(b)和溶解單元(s)是連接單元體的組分時，b的官能化側(cè)鏈將s連接到lu的剩余部分。b的示例性結(jié)構(gòu)是a的其它亞基(例如a1，a0)的本文所述的那些，條件是所述結(jié)構(gòu)具有所需的前述三官能度。在一些方面b是l-或d-構(gòu)型中的賴氨酸，谷氨酸或天冬氨酸，其中所述ε-氨基，γ-羧酸或β-羧酸官能團分別將溶解單元連接到lu的剩余部分上。

本文所用的“溶解單元”指親水性的有機部分。當(dāng)存在時，增溶部分(s)共價附著到分支單元上并且當(dāng)藥物單元的疏水性限制了配體藥物偶聯(lián)物(ldc)的藥物平均負載時，至少部分抵消了藥物單元的疏水性。在疏水性藥物的偶聯(lián)中的該限制通常產(chǎn)生于adc組分中單個adc化合物的疏水介導(dǎo)的聚集。與適當(dāng)控制adc缺乏溶解單元相比，適當(dāng)?shù)娜芙鈫卧牟⑷雽?dǎo)致通過尺寸排阻色譜法測量的復(fù)合種的可檢測的減少。

所定義的“可切割單元”提供反應(yīng)性位點，其中該位點的反應(yīng)性與正常細胞相比在超增殖細胞或超刺激免疫細胞(即異常細胞)內(nèi)或周圍更大，使得該位點導(dǎo)致優(yōu)先暴露與包含叔胺藥物的異常細胞。該暴露是由于具有可切割單元的ldc的游離藥物的最終釋放。在本發(fā)明的一些方面中，w由活性或豐度在超增殖細胞，免疫刺激細胞或其它異?；虿恍枰募毎麅?nèi)或周圍更大的酶(即w由酶底物組成)可切割的活性位點組成。在其他方面中，與正常細胞的環(huán)境相比，其中異常細胞通常不存在，w由在靶標位點的異常細胞內(nèi)或周圍的環(huán)境中更可能操作的其它機制(即非酶)可切割的活性位點組成。在本發(fā)明的其他方面中，反應(yīng)活性位點更可能在ldc胞內(nèi)內(nèi)在化到異常細胞后運行。與正常細胞相比，由于所述異常細胞或不需要的細胞上的ldc的靶標部分識別的靶標部分的更多呈現(xiàn)，該內(nèi)在化更可能發(fā)生在那些細胞中。因此，所述靶標部分更可能在胞內(nèi)暴露于從其ldc游離出的活性藥物部分。所述可切割單元在所述靶標位點的這些條件下可包含一個或多個對裂解敏感的位點，但通常只有一個這種位點。在本發(fā)明的一些方面中，所述可切割單元是胞內(nèi)位于靶標細胞內(nèi)的調(diào)控蛋白酶，水解酶或糖苷酶的底物(即w的活性位點是通過調(diào)控蛋白酶，水解酶或糖苷酶可裂解的肽鍵或糖苷鍵)，其中與血清蛋白酶，水解酶或糖苷酶相比，所述肽或糖苷鍵能夠被調(diào)控蛋白酶，水解酶或糖苷酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，所述調(diào)控蛋白酶，水解酶或糖苷酶對靶標異?；蚱渌恍枰募毎赡苁腔虿皇歉毺氐?，或與正常細胞相比，能通過靶標異?；蚱渌恍枰募毎暂^大量的蛋白酶，水解酶或糖苷酶選擇性切割。或者，與正常細胞的環(huán)境相比，當(dāng)ldc優(yōu)先內(nèi)化到異常細胞中時，當(dāng)并入到ldc中對溶菌酶的酸性環(huán)境或這些細胞中或周圍較強的還原環(huán)境敏感時，w提供一種官能團，其中異常細胞通常不存在，使得與正常細胞相比，游離叔胺藥物的釋放優(yōu)先將異常細胞暴露于該藥物。

所述可切割單元(w)在并入到ldc之前能夠連接到間隔單元(y)。在并入到ldc之后，w提供可切割的鍵(即活性位點)，其在存在于超增殖細胞或超活性免疫細胞內(nèi)的酶或這些異?；虿恍枰募毎闹苯迎h(huán)境特征的作用下，或者與正常細胞相比，由于超增殖細胞更可能經(jīng)歷的病癥，在非酶的作用下，釋放游離的包含叔胺的藥物?；蛘撸c正常細胞相比，由于優(yōu)先并入這種細胞，w提供更可能在胞內(nèi)超增殖細胞或超活性免疫細胞內(nèi)發(fā)揮作用的可切割鍵。通常，adc中的w共價鍵合到由自毀滅部分組成或由其組成的間隔單元(y)上，使得在w上的酶活作用觸發(fā)y-d⁺內(nèi)該部分的自我破壞以釋放游離的d。

提供可切割鍵的官能團包括，舉例但不限于：(a)形成二硫鍵的巰基，與由經(jīng)歷了缺氧條件的這種細胞產(chǎn)生的正常細胞或過量的谷胱甘肽相比，易受異常細胞的更強的還原性條件的影響，(b)形成希夫堿或腙官能團的醛，酮或肼基團，與內(nèi)在化成正常細胞相比，其易受在具有可切割鍵的連接單元選擇性內(nèi)化至異常細胞的溶菌酶的酸性條件的影響，(c)在肽鍵中形成酰胺鍵的羧基或氨基，與正常細胞相比或通過靶細胞內(nèi)的調(diào)控蛋白酶，其易受由異常細胞優(yōu)先產(chǎn)生或分泌的蛋白酶的酶切割的影響。(d)與正常細胞相比，形成某些脲或氨基甲酸酯基團的氨基或羥基或形成酯或碳酸酯基團的羧酸或羥基易受由異常細胞優(yōu)先產(chǎn)生或分泌的水解酶或酯酶的酶切割的影響。

提供可切割鍵的其它官能團在具有糖苷鍵的糖或碳水化合物中被發(fā)現(xiàn)，它們是與正常細胞相比時，有時有可能由異常細胞優(yōu)先產(chǎn)生的糖苷底物。或者，與正常細胞相比，處理連接單元以釋放活性叔胺藥物所需的蛋白酶，水解酶或糖苷酶需不需要由異常細胞優(yōu)先產(chǎn)生，條件是加工酶不會被正常細胞分泌至將造成游離藥物過早釋放的不良副作用的程度。在其他情況中，所需的蛋白酶，水解酶或糖苷酶可被分泌但是為了避免不期望的藥物的過早損失，優(yōu)選的是加工酶在異常細胞附近被分泌并保持局限于該環(huán)境，無論由異常細胞或附近正常細胞產(chǎn)生，以響應(yīng)由異常細胞引起的異常環(huán)境。在該方面中，與自由循環(huán)的酶相反，w被選擇為被異常細胞的環(huán)境內(nèi)或內(nèi)部的蛋白酶，水解酶或糖苷酶優(yōu)先作用。在這些方面中，ldc不太可能在正常細胞附近釋放叔胺藥物，也不會將其內(nèi)在化為確實產(chǎn)生但不分泌選定酶的正常細胞，因為這種細胞不太可能顯示由ldc進入所需的靶標部分。

在一些方面中，w由氨基酸組成或由提供存在于異常細胞內(nèi)的蛋白酶或局限于這些異常細胞的環(huán)境的底物的一個或多個氨基酸序列組成或由其組成。因此，w可由通過酰胺鍵合到y(tǒng)的si并入到連接單元的二肽，三肽，四肽，五肽，六肽，七肽，八肽，十肽，十肽，十肽或十二肽部分組成或由其組成，其中該部分是該蛋白酶的識別序列。在其他方面，w由通過由異常細胞優(yōu)先產(chǎn)生的糖苷酶可切割的糖苷鍵附著到y(tǒng)的si上的碳水化合物部分組成或由其組成，或在這種細胞中被發(fā)現(xiàn)，由于異常細胞上的靶標部分的存在，由si和碳水化合物部分組成的ldc具有選擇性進入。

本文所用的“間隔單元”是在連接單元內(nèi)二級接頭中(lo)的有機部分，其共價鍵合到可切割單元(w)或延伸單元(a)(當(dāng)a不存在時或lb或lb’)，取決于它們相對彼此的構(gòu)型。通常，在一種構(gòu)型中，季銨化藥物單元(d⁺)和w都共價鍵合到y(tǒng)上，y反過來鍵合到a(當(dāng)a不存在時或lb或lb’)，以至于w與lo的剩余部分正交，而在另一種構(gòu)型中，w，y，d以線性布置排列，d⁺鍵合到y(tǒng)上。在任一排列中，y用于將切割位點w與d⁺分開以避免該單元的空間相互作用，每當(dāng)通過酶促作用進行裂解時，這將妨礙w的切割。

通常，間隔單元由如本文所述的自毀滅部分(si)組成或由其組成，其中該部分共價鍵合到可切割單元(w)以至于體內(nèi)w的處理促進si自我破壞，從而釋放游離的包含叔胺的藥物。通常y的si通過酰胺(或酰苯胺)官能團鍵合到w上，y也通過si共價鍵合到d⁺的叔胺氮上，以至于si的自我破壞導(dǎo)致游離的叔胺藥物的釋放。

本文所用的“自毀部分”指具有插入第一和第二官能團之間的有機部分的間隔單元內(nèi)的雙功能部分，并且將這些部分共價并入正常穩(wěn)定的三分子分子中，除非活化。當(dāng)與第一官能團分子的共價鍵被切割激活時，第二官能團通過si剩余部分的自我破壞從三分子分子中自發(fā)分離。該自我破壞激活釋放游離的叔胺藥物(d)。在一些方面中，在連接單元的y中，該自我破壞在包含d⁺和具有自毀滅的連接單元的ldc的胞內(nèi)內(nèi)在化后發(fā)生。在自毀滅部分的官能團部分之間所述插入的有機部分有時是能經(jīng)歷片段化通過1，4或1，6-消除形成醌甲基化物或相關(guān)結(jié)構(gòu)并伴隨著游離叔胺藥物的釋放的亞芳基或雜亞芳基部分。這種si部分通過任選取代的對氨基芐醇(pab)部分，鄰氨基或?qū)Π被S基縮醛，或與pab基團電子相似的芳香化合物(即pab-型)，如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(參見例如，hay等，1999，bioorg.med.chem.lett.9：2237)和本文所述的其它雜芳基舉例證明。

通常，對于si部分中的一個官能團部分，并入到連接單元中的pab或pab-型si部分的亞芳基或雜亞芳基的芳香碳被通過包含雜原子的官能團附著到w的切割位點上的給電子(edg)雜原子取代，其中該雜原子被官能化以至于它的給點子能力被衰減(即通過將y的si并入到連接單元中來掩蔽edg)。所述提供第二官能團的其它取代基是具有季胺取代基的芐基碳，其中包含叔胺藥物的季胺通過附著到中心亞芳基或雜亞芳基的另一個芳香碳原子芐基碳鍵合，其中帶有減弱的給電子雜原子的芳香碳與該芐基碳相鄰(即1，2-關(guān)系)或另外兩個除去的位置(即1，4-關(guān)系)。選擇edg以至于w的切割位點的處理恢復(fù)掩蔽的edg的給電子能力，從而觸發(fā)1，4-或1，6-消除以從芐基季胺取代基中排出含有叔胺的藥物。

當(dāng)存在于結(jié)構(gòu)(1)的二級接頭-d+部分時具有帶有所需的1，2或1，4取代模式的亞芳基或亞雜芳基，該取代模式允許1，4-或1，6-片段化以從季銨化藥物部分釋放d時，示例性的pab或pab-相關(guān)si部分表示為

其中d⁺通過共價接結(jié)合至前述芐基碳的季胺氮在-c(r⁸)(r⁹)-d⁺中接合并且j掩蔽的edg，其中通過包含j的減弱官能團結(jié)合至w的j是-o-、-n(r³³)-、或-s-，并且r⁸、r⁹、r³³、r’、v、z¹、z²、z³在pab和pab-型si單元的實施方式中定義?？蛇x擇這些變量使得當(dāng)在靶位點處從處理w釋放時j的反應(yīng)性與從si消除的叔胺的反應(yīng)性和從該消除產(chǎn)生的醌-甲基化物型中間體的穩(wěn)定性平衡。

在結(jié)構(gòu)(1)的二級接頭-d⁺部分的一些方面中，結(jié)合至d⁺的pab或pab-型si部分具有以下結(jié)構(gòu)

通過實施方式提供了在結(jié)構(gòu)(1)的二級接頭-d⁺部分中納入si部分的其他結(jié)構(gòu)及其可變基團定義。

在結(jié)構(gòu)(2)的二級接頭的一些方面中，當(dāng)存在于結(jié)構(gòu)(2)的二級接頭中時，pab或pab-型si部分具有以下結(jié)構(gòu)

其中，到j(luò)的波浪線在a是0時表示與配體-lb-或lb'-的穩(wěn)定共價鍵連(即，在靶位點處不被處理)或者在a是1時表示通過a或其亞基，其中j是直接結(jié)合至lb、lb’、a或a的亞基或通過包含j的官能團結(jié)合的-o-、-n(r³³)-、或-s-，并且其中r’、r⁸、r⁹、v、z¹、z²和z³在式1中定義并且獨立于j選擇的e是供電子基團如-o-、-n(r³³)-、或-s-，其中通過e結(jié)合至w’減弱e的供電子能力，其中w’-e提供了糖苷酶的切割位點，并且e和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺部分的芐基碳在由v、z¹、z²或z³定義的位置處結(jié)合至亞芳基或亞雜芳基，使得e和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺部分處于1，2或1，4關(guān)系以允許1，4-或1，6-片段化，其導(dǎo)致含叔胺藥物的釋放。

在結(jié)構(gòu)(2)的二級接頭-d⁺部分的一些方面中，結(jié)合至d⁺的pab或pab-型si部分具有以下結(jié)構(gòu)

通過實施方式提供了在結(jié)構(gòu)(2)的二級接頭-d⁺部分中納入si部分的其他結(jié)構(gòu)及其可變基團定義。

si部分的亞芳基或亞雜芳基還可經(jīng)取代以影響1，2-或1，4-消除的動力學(xué)以調(diào)節(jié)d的釋放或改善其所納入的配體藥物偶聯(lián)物的理化性質(zhì)(例如，降低疏水性)。

經(jīng)修飾以容納芐基季胺取代基的si結(jié)構(gòu)的示例性和非限制性示例由以下提供：blencowe等，“聚合物遞送系統(tǒng)中的自分解型接頭(self-immolativelinkersinpolymericdeliverysystems)”polym.chem.(2011)2：773-790；greenwald等，“采用1，4-或1，6-消除的藥物遞送系統(tǒng)：含胺化合物的聚(乙二醇)前藥(drugdeliverysystemsemploying1，4-or1，6-elimination：poly(ethyleneglycol)prodrugsofamine-containingcompounds)”j.med.chem.(1999)42：3657-3667；和美國專利號7,091,186、7,754,681、7,553,816、和7,989,434，其全部通過引用全文納入本文，其中提供的結(jié)構(gòu)和可變基團通過引用具體納入。

本文所用的“細胞毒性藥物”是指衍生自ldc的代謝物或化合物，其對高增殖的細胞、高活化免疫細胞或其他異?；虿恍枰募毎┘涌股嫘Ч?。在一些方面中，細胞毒性藥物直接作用在這些細胞上或通過作用在異常血管上間接作用，該血管支持高度增殖或其他異常或不需要細胞的存活和/或生長，或細胞毒性藥物在浸潤性高活化免疫細胞的位點內(nèi)發(fā)揮作用。一般而言，由細胞毒性藥物作用的異常細胞或不需要細胞是哺乳動物細胞，更具體是人細胞。細胞毒性藥物的細胞毒性可表示為ic50值，其是在暴露于細胞毒性劑后體外細胞模型系統(tǒng)中一半癌細胞存活的有效濃度，一般以摩爾/單位體積表示。因此，ic50是模型依賴性的。一般而言，納入ldc的細胞毒性劑將具有在包含高度增殖的細胞的體外細胞模型中100nm至0.1pm，或更一般約10nm至1pm的ic50值。較高毒性的細胞毒性藥物一般在這類模型中具有約100pm或更低的ic50值。雖然逆轉(zhuǎn)對細胞毒性藥物的耐受性的多種耐藥性抑制劑本身不是細胞毒性的，但它們有時作為細胞毒性藥物包括在內(nèi)。

本文所用的“細胞生長抑制藥物”是指衍生自ldc的代謝物或化合物，其對高增殖的細胞、高活化免疫細胞或其他異?；虿恍枰毎纳L和增殖施加抑制效果。在一些方面中，細胞生長抑制藥物直接作用在這些細胞上或通過作用在異常血管上間接作用，該血管支持高度增殖或其他異?；虿恍枰毎拇婊詈?或生長，或細胞毒性藥物在浸潤性高活化免疫細胞的位點內(nèi)發(fā)揮作用。一般而言，由細胞毒性藥物作用的異常或不需要細胞是哺乳動物細胞，更具體是人細胞。雖然逆轉(zhuǎn)對細胞生長抑制藥物的耐受性的多種抗藥性抑制劑本身不是細胞生長抑制性的，但它們有時作為細胞生長抑制藥物包括在內(nèi)。

本文所用的術(shù)語“血液惡性腫瘤”是指源自淋巴或骨髓來源的血細胞腫瘤并且與“液體腫瘤”同義。血液惡性腫瘤可分類為無痛性、中等侵襲性或高度侵襲性。

本文所用的“淋巴瘤”是血液惡性腫瘤，其通常從淋巴來源的高增殖的細胞發(fā)展而來。淋巴瘤有時被分成2種主要類型：霍奇金淋巴瘤(hl)和非霍奇金淋巴瘤(nhl)。也可按照表型、分子或細胞發(fā)生標志物最類似癌細胞的正常細胞類型對淋巴瘤進行分類。該分類下的淋巴瘤亞型包括但不限于成熟b-細胞腫瘤、成熟t細胞和自然殺傷(nk)細胞腫瘤、霍奇金淋巴瘤和免疫缺陷相關(guān)淋巴-增殖性紊亂。淋巴瘤亞型包括前體t-細胞淋巴母細胞淋巴瘤(有時稱為淋巴母細胞白血病，因為t-細胞淋巴母細胞在骨髓中產(chǎn)生)、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大b細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、b-細胞慢性淋巴細胞性淋巴瘤(有時稱為白血病，由于涉及外周血)、malt淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、蕈樣肉芽腫病及其更有侵襲性的變體塞扎里病、外周t-細胞淋巴瘤(除非另有說明)、霍奇金淋巴瘤的結(jié)節(jié)硬化、和霍奇金淋巴瘤的混合細胞亞型。

本文所用術(shù)語“白血病”是血液惡性腫瘤，其通常從骨髓來源的高增殖的細胞發(fā)展而來，并且包括但不限于急性淋巴母細胞白血病(all)、急性髓細胞性白血病(aml)、慢性淋巴母細胞白血病(cll)、慢性髓細胞性白血病(cml)和急性單核細胞白血病(amol)。其他白血病包括多毛細胞白血病(hcl)、t-細胞淋巴細胞性白血病(t-pll)、大顆粒淋巴細胞白血病和成人t-細胞白血病。

本文所用的“季銨化藥物單元”可以是具有細胞毒性、細胞生長抑制性、免疫抑制性或抗炎性質(zhì)的任何含叔胺化合物(d)，一般是針對哺乳動物細胞，其已經(jīng)以其相應(yīng)季胺鹽(d⁺)納入ldc。術(shù)語“藥物”并不表示僅由監(jiān)管機構(gòu)批準用于治療具有高增殖和高免疫活化疾病或病癥的化合物，或?qū)⒃趌dc內(nèi)容以外適于任何此類目的。因此，d⁺也包括未偶聯(lián)的季銨化化合物(即，以含叔胺“游離”形式，并且因此不存在于ldc)將不適于向?qū)ο蠼o藥。例如，當(dāng)以d⁺納入ldc時，由于在所需治療劑量下無法容忍的全身毒性，含季胺藥物(d)可能是不適于治療對象中癌癥的細胞毒性化合物。在一些方面中，通過將含叔胺藥物的叔胺氮與具有合適離去基團的二級接頭lo縮合來獲得季銨化藥物。在一些方面中，納入d⁺的含叔胺藥物將適用于治療癌癥。在其他方面中，納入d⁺的含叔胺藥物將適用于治療癌癥。在一些方面中，納入ldc的d⁺的含叔胺藥物將是細胞毒性或細胞生長抑制化合物。在其他方面中，納入ldc的d⁺的含叔胺藥物將是抗炎或免疫抑制化合物。在其他方面中，納入ldc的d⁺的含叔胺藥物將是多重耐藥性抑制劑。另外還通過限定含叔胺藥物來提供可納入d⁺的其他含叔胺藥物。

本文所用的“含叔胺藥物”是具有細胞毒性、細胞生長抑制或抗炎活性并且特征是能夠在ldc的靶向部分結(jié)合至其關(guān)聯(lián)靶向的部分之后從ldc的相應(yīng)季胺(d⁺)部分釋放脂族叔胺部分(d)的那些化合物。通常，含叔胺化合物在其首先納入含lb或lb'部分時被轉(zhuǎn)化成其季銨化形式。然而，有時，含仲胺或伯胺的前體被納入含lb或lb'部分，其然后經(jīng)季銨化以形成d⁺部分，含叔胺化合物能夠從其釋放。因此，結(jié)構(gòu)如l-lb-lo-d⁺和lb'-lo-d⁺沒有提示特定方法，其中d⁺形成并且不需要以其形式使用的反應(yīng)物是含叔胺藥物。

從本發(fā)明的ldc釋放的含叔胺藥物的類別包括，例如但不限于具有叔胺官能團的化合物，其可用于治療癌癥或自身免疫疾病。那些化合物包括微管破壞劑、dna小溝結(jié)合劑、dna復(fù)制抑制劑、dna烷基化劑、化療敏化劑和拓撲異構(gòu)酶抑制劑如特吡萊辛、奧瑞他汀、吩嗪二聚體、某些多重耐藥性(mdr)抑制劑和煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nampt)抑制劑。

本文所用的“高增殖的細胞”是指特征是不需要的細胞增殖或異常高速或持續(xù)狀態(tài)的細胞分裂，其與周圍正常組織不相關(guān)或不協(xié)調(diào)。一般而言，高增殖的細胞是哺乳動物細胞。在一些方面，高增殖的細胞是本文定義的高刺激的免疫細胞，其在可能初次誘發(fā)細胞分化變化的刺激停止之后出現(xiàn)持續(xù)細胞分化狀態(tài)。在其他方面中，高增殖的細胞是轉(zhuǎn)化的正常細胞或癌細胞，并且其不受控制和進行性的細胞增殖狀態(tài)可能導(dǎo)致良性、潛在惡性(癌前)或真惡性的腫瘤。由轉(zhuǎn)化的正常細胞或癌細胞產(chǎn)生的高增殖條件包括但不限于特征為初癌、增生、發(fā)育不良、腺瘤、肉瘤、母細胞瘤、癌、淋巴瘤、白血病或乳頭瘤的那些。初癌通常定義為顯示組織學(xué)變化的病灶，其與增加的癌癥發(fā)展風(fēng)險相關(guān)并且有時具有一些但非全部的表征癌癥的分子和表型性質(zhì)。激素相關(guān)或激素敏感初癌包括前列腺上皮內(nèi)瘤樣病變(pin)，尤其是高度pin(hgpin)、非典型小腺泡增殖(asap)、宮頸非典型增生和原位導(dǎo)管癌。增生一般是指器官或組織內(nèi)的細胞增殖超過其通常所見，其可能導(dǎo)致器官總體擴大或形成良性腫瘤或生長。增生包括但不限于子宮內(nèi)膜增生(子宮內(nèi)膜異位)、良性前列腺增生和導(dǎo)管增生。

本文所用的“正常細胞”是指經(jīng)過與常規(guī)細胞更新或損傷所需的組織修復(fù)所需的維持正常組織細胞完整性或循環(huán)淋巴或血細胞補充相關(guān)，或與來自病原體接觸或其他細胞損失的常規(guī)免疫或炎性應(yīng)答相關(guān)的協(xié)調(diào)細胞分裂的細胞，其中誘發(fā)的細胞分裂或免疫應(yīng)答在完成必要保持、補充或病原體清除完終止。正常細胞包括正常增殖的細胞、正常靜息細胞和正常活化的免疫細胞。

“正常靜息細胞”是處于其靜息go狀態(tài)中并且還沒有被應(yīng)激或分裂原刺激的非癌細胞或者是處于正常無活性或者還未被促炎性細胞因子接觸活化的免疫細胞。

本文所用術(shù)語“高刺激的免疫細胞”是指參與先天或過繼性免疫的細胞，其特征是異常持續(xù)的增殖或不當(dāng)?shù)拇碳顟B(tài)，其發(fā)生在初始誘發(fā)增殖或刺激變化的刺激定制之后或發(fā)生在沒有外部損傷的情況下。通常，持續(xù)增殖或不當(dāng)刺激狀態(tài)導(dǎo)致特征為慢性炎癥狀態(tài)的疾病狀態(tài)或病癥。在一些情況中，可能初始誘發(fā)增殖或刺激變化的刺激并非由于外部損傷而是由內(nèi)部衍生，如在自身免疫疾病中。在一些方面中，高刺激的免疫細胞是促炎性免疫細胞，其通過慢性促炎性細胞因子接觸已經(jīng)高度活化。

在本發(fā)明的一些方面中，ldc結(jié)合至優(yōu)先由異常增殖或不當(dāng)活化的促炎性免疫細胞展示的抗原。這些免疫細胞包括經(jīng)典活化的巨噬細胞或1型t輔助(th1)細胞，其產(chǎn)生干擾素-γ(inf-γ)、白介素-2(il-2)、白介素-10(il-10)、和腫瘤壞死因子-β(tnf-β)，其是參與巨噬細胞和cd8⁺t細胞活化的細胞因子。

本文所用的“糖苷酶”是指能夠?qū)μ擒真I進行酶促切割的蛋白質(zhì)。一般而言，待切割的糖苷鍵存在于ldc的可切割單元(w)。有時，作用于ldc上的糖苷酶存在于與正常細胞相比ldc優(yōu)先觸及的高增殖細胞、高活化的免疫細胞或其他異?；虿恍枰毎陌麅?nèi)，這是由于配體-結(jié)合組分(即，配體單元)的靶向能力。有時，與正常細胞相比，糖苷酶對異常或不需要細胞更有特異性或者優(yōu)選由異?；虿恍枰毎置冢蛘吲c血清量相比以更大量存在于異?；虿恍枰毎車Ｓ袝r，糖苷酶所作用的w中的糖苷鍵將糖部分(su)的異頭碳接合至包含延伸單元(y)的自我分解(si)部分的酚氧，使得對該鍵的糖苷酶切割觸發(fā)含叔胺藥物從與si的芐基位置接合的鍵部分的1，4-或1，6-消除。

在藥物接頭化合物或包含部分如-aa-yy(ww)-d⁺其中下標w和y各自是1的配體藥物偶聯(lián)物中，-y(w)-一般是本文定義的su-o’-si部分，a、w和d以允許在糖苷酶作用之后自毀釋放含游離叔胺的藥物的方式接合至si。這種-y(w)-部分有時被稱為葡糖苷酸單元，其中su不限于葡糖醛酸。

一般而言，su-o’-si部分(其中-o’-表示糖苷鍵的氧并且su是糖部分)有自柔部分所述的結(jié)構(gòu)表示，其中結(jié)合至si的芳基部分的e是氧，該雜源自通過該部分的異頭碳源自被糖部分取代。更一般地，su-o’-si具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r^24a、r^24b和r^24c如發(fā)明概述中對r²⁴那樣定義并經(jīng)選擇，使得從糖苷鍵釋放的酚-oh的供電子能力、連接至糖部分su的糖苷鍵對所需糖苷酶的選擇性切割的敏感性、和片段化后的醌甲基化物型中間體的穩(wěn)定性與叔胺的離去能力平衡，使得發(fā)生通過1，4-或1，6-消除從d⁺高效釋放d。這些su-o’-si結(jié)構(gòu)是代表性的葡糖苷酸單元。當(dāng)糖苷鍵連接至葡糖醛酸時，能夠酶促切割該糖苷鍵的糖苷酶是葡糖醛酸糖苷酶。本文所用的“糖部分”是指具有cm(h2o)n的經(jīng)驗式的單糖，其中n等于m，含有半縮醛形式的醛部分或其衍生物，其中式中的ch2oh部分已經(jīng)氧化成羧酸(例如，來自葡萄糖中ch2oh基團的氧化葡糖醛酸)。一般而言，糖部分(su)是環(huán)己糖，如吡喃糖，或環(huán)戊糖，如呋喃糖。通常，吡喃糖是β-d構(gòu)型的葡糖苷酸或己糖。在一些情況中，吡喃糖是β-d-葡糖苷酸部分(即，通過可被β-葡糖醛酸糖苷酶切割的糖苷鍵連接至自毀部分-si-的β-d-葡糖醛酸)。通常，糖部分是未取代的(即，是天然產(chǎn)生的環(huán)己糖或環(huán)戊糖)。通常，糖部分可以是取代的β-d-葡糖苷酸(即，被一個或多個基團，如氫、羥基、鹵素、硫、氮和低級烷基取代的葡糖醛酸)。

本文所用的“氨基酸”是含有羧酸和能夠通過肽合成領(lǐng)域中熟知的標準肽鍵形成反應(yīng)與另一個有機部分形成酰胺鍵的脂族胺官能團，一般是伯或仲胺官能團的有機部分。氨基酸包括天然、非天然、和非經(jīng)典氨基酸，如本文所定義。疏水性氨基酸含有疏水性取代基，一般是與在羧酸和胺官能團之間間插的原子鏈內(nèi)的碳原子接合的c1-c6烷基并且一般在連接至胺或羧酸官能團的α碳原子上。對于疏水性天然氨基酸，α碳上的疏水性取代基是纈氨酸、丙氨酸、亮氨酸或異亮氨酸的疏水性取代基。

“天然氨基酸”是指天然產(chǎn)生的l或d構(gòu)型的氨基酸精氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸、組氨酸、絲氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、異亮氨酸、和纈氨酸，除非上下文另有說明。

本文所用的“非天然氨基酸”是含胺酸化合物，其具有天然氨基酸的基本結(jié)構(gòu)(即，是含α-氨基的酸)，但具有在天然氨基酸中不存在的接合至α碳的r基團。

本文所用的“非經(jīng)典氨基酸”是其胺取代基不結(jié)合至連接羧酸的α碳的含胺酸化合物(即，不是α-氨基酸)。非經(jīng)典氨基酸包括β-氨基酸，其中在天然氨基酸或非天然氨基酸中的羧酸和氨基官能團之間插入亞甲基。

本文所用的“肽”是指2種或更多種氨基酸的聚合物，其中一個氨基酸的羧酸基團與在肽序列中相鄰氨基酸的α氨基形成酰胺鍵。在酰胺的定義中還提供了制備多肽中酰胺鍵的方法。

肽可包含l或d構(gòu)型的天然產(chǎn)生的氨基酸或非天然或非經(jīng)典氨基酸，其包括但不限于鳥氨酸、瓜氨酸、二氨基丁酸、正亮氨酸、吡喃丙氨酸(pyrylalanine)、噻吩基丙氨酸、萘基丙氨酸和苯基甘氨酸。非天然產(chǎn)生和非經(jīng)典氨基酸的其他示例是α*和α-雙取代*氨基酸、n-烷基氨基酸*、乳酸*、天然氨基酸的鹵素衍生物如三氟酪氨酸*、對-cl-苯丙氨酸*、對-br-苯丙氨酸*、對-f-苯丙氨酸*、l-烯丙基-甘氨酸*、β-丙氨酸*、l-α-氨基丁酸*、l-γ-氨基丁酸*、l-α-氨基異丁酸*、l-ε-氨基己酸#、7-氨基庚酸*、l-甲硫氨酸砜*、l-正亮氨酸*、l-正纈氨酸*、對-硝基-l-苯丙氨酸*、l-羥基脯氨酸#、l-硫代脯氨酸*、苯丙氨酸(phe)的甲基衍生物如4-甲基-phe*、五甲基-phe*、l-phe(4-氨基)#、l-tyr(甲基)*、l-phe(4-異丙基)*、l-tic(1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸)*、l-二氨基丙酸、l-phe(4-芐基)*、2，4-二氨基丁酸、4-氨基丁酸(γ-abu)、2-氨基丁酸(α-abu)、6-氨基己酸(ε-ahx)、2-氨基異丁酸(aib)、3-氨基丙酸、鳥氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、羥基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、氟代氨基酸、β-甲基氨基酸、cα-甲基氨基酸、n-甲基氨基酸、萘基丙氨酸等。符號*表示具有疏水性特征的衍生物，#表示具有親水性特征的衍生物，并且#*表示具有兩親性特征的衍生物。

肽中的變體氨基酸序列有時包括在序列的任意兩個氨基酸殘基之間插入的合適間隔基團，除氨基酸間隔物如甘氨酸或β-丙氨酸殘基以外，包括烷基如甲基、乙基或丙基。同時，肽可包括類肽或由其組成。術(shù)語“類肽”是指變體氨基酸結(jié)構(gòu)，其中α-碳取代基在主鏈氮原子上而不是α-碳上。以類肽形式制備肽的方法是本領(lǐng)域已知的(參見，例如，simon等，proc.nat’l.acad.sci.(usa)(1992)89(20)：9367-9371；和norwell，trendsbiotechnol.13(4)：132-134(1995))。

本文定義的“蛋白酶”是指能夠?qū)︳驶?氮鍵，如一般在肽中發(fā)現(xiàn)的酰胺鍵進行酶促切割的蛋白質(zhì)。蛋白酶被分成6個主要類別：絲氨酸蛋白酶、蘇氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶，以主要負責(zé)切割其底物的羰基-氮鍵的活性位點中的催化殘基命名。蛋白酶的特征是各種特異性，其依賴于羰基-氮鍵的n-端和/或c-端側(cè)的殘基的種類和各種取代基。

當(dāng)w包含酰胺或其他可由蛋白酶切割的含羰基-氮官能團時，切割位點通常限于由蛋白酶識別的那些，其發(fā)現(xiàn)于高增殖的細胞或高刺激的免疫細胞或在對高增殖的細胞或高刺激的免疫細胞存在的環(huán)境特定的細胞內(nèi)。在這些情況中，不需要蛋白酶以更大豐度優(yōu)選存在或發(fā)現(xiàn)于ldc靶向的細胞中，因為ldc將對優(yōu)先沒有靶向部分的那些細胞有較差可及性。其他時候，與正向細胞或沒有異常細胞的發(fā)現(xiàn)這些正常細胞的典型環(huán)境相比，蛋白酶優(yōu)先由異常細胞或發(fā)現(xiàn)這些異常細胞的環(huán)境中的細胞分泌。因此，在分泌蛋白酶的情況中，與正常細胞相比，需要蛋白酶以較大豐度優(yōu)先存在或存在于ldc靶向的細胞周圍。

當(dāng)納入ldc時，包含w的肽將顯示由呈遞至切割w中的羰基-氮鍵的蛋白酶識別的識別序列，導(dǎo)致接頭單元的片段化以從d⁺釋放含叔胺藥物。有時，與正常細胞相比，由于異常細胞靶向，識別序列被ldc優(yōu)先可及的異常細胞中存在的胞內(nèi)蛋白酶選擇性識別，或者與正常細胞相比，識別序列優(yōu)先由異常細胞產(chǎn)生，出于向所需作用位點適當(dāng)遞送藥物的目的。通常，肽對循環(huán)蛋白酶有抗性，以最小化含叔胺藥物的過早排出，并且因此最小化不需要的對藥物的全身暴露。一般而言，肽將在其序列上有一個或多個非天然或非經(jīng)典氨基酸，以具有該抗性。通常，被由異常細胞產(chǎn)生的蛋白酶特異性切割的酰胺鍵是苯胺，其中苯胺的氮是具有之前定義的結(jié)構(gòu)的si部分的新生供電子雜原子(即，j)。因此，對w中的肽序列上的蛋白酶作用導(dǎo)致通過si的亞芳基部分的1，4-或1，6-消除從接頭片段釋放藥物。

調(diào)節(jié)性蛋白酶一般位于胞內(nèi)并且是細胞活性調(diào)節(jié)所需的，其有時在異?；蚱渌恍枰毎凶兊卯惓；蚴Э?。在一些情況中，當(dāng)w涉及具有優(yōu)先胞內(nèi)分布的蛋白酶時，該蛋白酶是調(diào)節(jié)性蛋白酶，其參與細胞維持或增殖。在一些情況中，這些蛋白酶包括組織蛋白酶。組織蛋白酶包括絲氨酸蛋白酶、組織蛋白酶a、組織蛋白酶g、天冬氨酸蛋白酶、組織蛋白酶d、組織蛋白酶e和半胱氨酸蛋白酶、組織蛋白酶b、組織蛋白酶c、組織蛋白酶f、組織蛋白酶h、組織蛋白酶k、組織蛋白酶l1、組織蛋白酶l2、組織蛋白酶o、組織蛋白酶s、組織蛋白酶w和組織蛋白酶z。

在其他情況中，當(dāng)w涉及由于高增殖或高刺激的免疫細胞或相鄰細胞的優(yōu)先分泌優(yōu)先在這類細胞周圍胞外分布，其分泌是高增殖或高刺激的免疫細胞的環(huán)境所特有時，蛋白酶通常是金屬蛋白酶。一般而言，這些蛋白酶參與組織重建，其輔助高增殖的細胞的侵入或高活化的免疫細胞的不需要積累，其導(dǎo)致這類細胞的進一步招募。

本文所用的“微管破壞劑”是指結(jié)合至微管或其亞基并由此抑制微管延長或微管聚合以負面影響微管動力學(xué)，尤其在高增殖或高刺激的免疫細胞中的細胞毒性或細胞生長抑制化合物。抗微管劑(即，微管破壞劑)的示例包括但不限于，紫杉烷、長春花生物堿、美登素和美登木素、尾海兔素和奧瑞他汀。含叔胺微管破壞劑是本文定義的微管破壞劑，其含有或可經(jīng)修飾含有叔胺官能團。

本文所用術(shù)語“尾海兔素藥物”是從海洋來源分離的具有作為微管破壞劑的細胞毒性活性的五肽。尾海兔素10和尾海兔素15是含叔胺尾海兔素的示例并且具有以下結(jié)構(gòu)：

尾海兔素10

尾海兔素15

一些示例性的尾海兔素涉及尾海兔素10，其中苯基和噻唑取代基被獨立選擇的芳基或雜芳基部分取代。其他示例性的尾海兔素涉及尾海兔素15，其中c-端酯部分被酰胺取代，其中該酰胺氮被芳烷基或雜芳烷基部分取代。在季銨化藥物單元的實施方式中提供了它們的結(jié)構(gòu)和其他示例性的含叔胺尾海兔素的結(jié)構(gòu)及其納入ldc的方式。

本文所用的術(shù)語“奧瑞他汀”是與尾海兔素10相關(guān)的基于肽基的微管破壞劑。一些含叔胺奧瑞他汀具有de或df的結(jié)構(gòu)：

其中z是-o-、-s-、或-n(r¹⁹)-，并且其中r¹⁰-r²¹如季銨化的含叔胺奧瑞他汀藥物的實施方式中所定義。當(dāng)納入ldc或其前體時，叔胺部分的所示氮通過共價結(jié)合至lo或包含lo的含lb或lb’部分的lo季銨化。一般而言，d⁺的季銨化部分季胺部分與來自lo中包含自毀間隔單元(y)或由其組成的pab或pab-型部分的芐基碳的共價連接。在基于奧瑞他汀的季銨化藥物單元的實施方式中提供了其他示例性的含季胺奧瑞他汀的結(jié)構(gòu)及這類藥物納入ldc的方式并且包括奧瑞他汀e和奧瑞他汀f。

所用的“特吡萊辛藥物”是具有細胞毒性活性的肽基微管蛋白破壞劑，并且包含一個天然或非天然氨基酸組分以及三個非天然氨基酸組分，其中這些組分之一的特征是中心5-元或6-元亞雜芳基部分并且另一個提供叔胺用于納入季銨化藥物單元。

一些含叔胺特吡萊辛具有dg或dh的結(jié)構(gòu)：

其他含叔胺特吡萊辛具有dg-1或dh-1的結(jié)構(gòu)：

其中環(huán)表示5-元或6-元氮-雜芳基，其中對在雜芳基的所示所需取代基互相處于1，3-或間位關(guān)系，在剩余位置上有任選取代；r⁴、r^4a、r^4b、r^8a各自是獨立選擇的任選取代的烷基；r⁷是任選取代的芳烷基或任選取代的雜芳烷基；r^7a是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；r²是二價o-連接的取代基(即，存在雙鍵或具有該可變基團的碳被r²單一情況雙取代)，或雙鍵不存在(即，r²單鍵連接至具有該可變基團的碳)或r²是氫，任選取代的烷基，或單價o-連接的取代基；m是0或1；并且r^2a、r³、r⁵和r⁶如基于特吡萊辛的季銨化含叔胺藥物的實施方式中所定義。

天然產(chǎn)生的特吡萊辛具有以下結(jié)構(gòu)

并且方便地分成4個氨基酸亞基，如垂直虛線所示，稱為n-甲基-2-哌啶酸(mep)、異亮氨酸(ile)、特吡瓦林(tuv)、和特吡苯丙氨酸(tup，當(dāng)r^7a是氫時)或特吡酪氨酸(tut，當(dāng)r^7a是-oh時)。存在約十二種天然產(chǎn)生的特吡萊辛，目前稱為特吡萊辛a-i、特吡萊辛u、特吡萊辛v和特吡萊辛z，其結(jié)構(gòu)由基于特吡萊辛的季銨化藥物單元的實施方式中定義的結(jié)構(gòu)dg-6的可變基團所示。

前特吡萊辛具有結(jié)構(gòu)dg或dh，其中r³是-ch3并且r²是氫，并且去甲基特吡萊辛具有結(jié)構(gòu)dg、dg-1、dg-6、dh、dh-1和由基于特吡萊辛的季銨化藥物單元的實施方式給出的其他特吡萊辛結(jié)構(gòu)，其中r³是氫，并且其中其他可變基團如特吡萊辛所述的那樣。前特吡萊辛和去甲基特吡萊辛任選地包括在特吡萊辛的定義中。

在基于特吡萊辛的季銨化藥物單元的實施方式中，結(jié)構(gòu)dg、dg-1、dg-6、dh、dh-1和其他本文所述的特吡萊辛結(jié)構(gòu)中，當(dāng)這類結(jié)構(gòu)納入ldc或其前體中時，所示氮是季銨化位點。當(dāng)納入ldc或其前體時，該氮通過共價結(jié)合至lo或包含lo的含lb或lb’部分的lo季銨化。一般而言，d⁺的季銨化部分季胺部分與來自lo中包含y或由其組成的pab或pab-型部分的芐基碳的共價接合。在基于特吡萊辛的季銨化藥物單元的實施方式中提供了它們的結(jié)構(gòu)和其他示例性的含叔胺特吡萊辛和前特吡萊辛的結(jié)構(gòu)及其納入ldc的方式。

制備特吡萊辛藥物的示例性方法和構(gòu)效關(guān)系由以下提供：shankar等，“新特吡萊辛u類似物的合成和構(gòu)效關(guān)系研究-對特吡瓦林片段中結(jié)構(gòu)變化的細胞毒性的影響(synthesisandstructure-activityrelationshipstudiesofnoveltubulysinuanalogs-effectoncytotoxicityofstructuralvariationsinthetubuvalinefragment)”org.biomol.chem.(2013)11：2273-2287；xiangming等，“特吡萊辛合成的最新進展(recentadvancesinthesynthesisoftubulysins)”mini-rev.med.chem.(2013)13：1572-8；shankar等，“特吡萊辛-u的非對映異構(gòu)體和n-端類似物的合成和細胞毒性評價(synthesisandcytotoxicevaluationofdiastereomersandn-terminalanalogsoftubulysin-u)”tet.lett.(2013)54：6137-6141；shankar等，“特吡萊辛u的噁唑類似物的總體合成和細胞毒性評價(totalsynthesisandcytotoxicityevaluationofanoxazoleanalogueoftubulysinu)”synlett(2011)2011(12)：1673-6；raghavan等，j.med.chem.(2008)51：1530-3；balasubramanian，r.等，“特吡萊辛類似物納入去甲基和二甲基特吡苯丙氨酸衍生物(tubulysinanalogsincorporatingdesmethylanddimethyltubuphenylalaninederivatives)”bioorg.med.chem.lett.(2008)18：2996-9；和raghavan等，“細胞毒性簡化的特吡萊辛類似物(cytotoxicsimplifiedtubulysinanalogues)”j.med.chem.(2008)51：1530-3。

本文所用的“吩嗪二聚體藥物”是具有通過其c-1位處的羧酰胺官能團連接在一起的兩個芳基稠合的吩嗪環(huán)系統(tǒng)的含叔胺化合物，其中連接部分包含含叔胺部分，其在以d⁺納入本發(fā)明的ldc時季銨化。一些含叔胺吩嗪二聚體具有結(jié)構(gòu)di：

其中環(huán)a和環(huán)b獨立地選自任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，其與吩嗪環(huán)系統(tǒng)稠合，該吩嗪環(huán)系統(tǒng)任選被1、2或3個獨立選擇的r^a和/或r^b取代基取代，r^9a和r^9b是獨立選擇的任選取代的烷基或與它們接合的氮一起并且這些氮之間間插的碳原子包括雜環(huán)烷基環(huán)系統(tǒng)，并且其中在季銨化含叔胺藥物的實施方式中定義r^a、r^b、r^11a、r^11b、n、s和o。

一些示例性的含叔胺吩嗪二聚體或具有稠合的芳基或雜芳基的吩嗪，其包含結(jié)構(gòu)di的吩嗪二聚體由以下提供：moorthy等，“手和芳基-吩嗪：生物活性分子開發(fā)的支架(fusedaryl-phenazines：scaffoldforthedevelopmentofbioactivemolecules)”curr.drugtargets(2014)15(7)：681-8；zhuo等，“用作拓撲異構(gòu)酶i和ii的雙重抑制劑的苯并[a]吩嗪衍生物的合成和生物學(xué)評價(synthesisandbiologicalevaluationofbenzo[a]phenazinederivativesasadualinhibitoroftopoisomeraseiandii)”org.biomol.chem.(2013)11(24)：3989-4005；kondratyuk等，“用作潛在癌癥化學(xué)預(yù)防劑或抗炎劑的新海洋吩嗪(novelmarinephenazinesaspotentialcancerchemopreventiveandanti-inflammatoryagents)”marinedrugs(2012)10(2)：451-64；gamage等，“吩嗪-1-羧酰胺：9-取代基的結(jié)構(gòu)-細胞毒性關(guān)系和陽離子側(cè)鏈的h-結(jié)合模式變化(phenazine-1-carboxamides：structure-cytotoxicityrelationshipsfor9-substituentsandchangesintheh-bondingpatternofthecationicsidechain)”bioorg.med.chem.(2006)14(4)：1160-8；yang等，“新合成異喹啉[5，4-ab]吩嗪：對拓撲異構(gòu)酶i、抗腫瘤和dna光切割活性的抑制(novelsyntheticisoquinolino[5，4-ab]phenazines：inhibitiontowardtopoisomerasei，antitumoranddnaphoto-cleavingactivities)”bioorg.med.chem.(2005)13(21)：5909-14.gamage等，“用作拓撲異構(gòu)酶靶向的抗癌劑的吡啶并-、咪唑并-、吡唑并-、吡嗪并-、和吡咯并吩嗪羧酰胺的構(gòu)效關(guān)系(structure-activityrelationshipsforpyrido-，imidazo-，pyrazolo-，pyrazino-，andpyrrolophenazinecarboxamidesastopoisomerase-targetedanticanceragents)”j.med.chem.(2002)45(3)：740-3；vicker等，“新角苯并吩嗪：作為潛在抗癌劑的雙重拓撲異構(gòu)酶i和拓撲異構(gòu)酶ii抑制劑(novelangularbenzophenazines：dualtopoisomeraselandtopoisomeraseiiinhibitorsaspotentialanticanceragents)”j.med.chem.(2002)45(3)：721-39；mekapati等，“(抗癌化合物雙(11-氧代-11h-茚并[1，2-b]喹啉-6-羧酰胺)、雙(吩嗪-1-羧酰胺)和雙(萘酰亞胺)的qsar)”bioorg.med.chem.(2001)9(11)：2757-62；gamange等，“二陽離子雙(9-甲基吩嗪-1-羧酰胺)：一系列強效拓撲異構(gòu)酶靶向的抗癌藥物的生物活性和接頭鏈結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系(dicationicbis(9-methylphenazine-1-carboxamides)：relationshipbetweenbiologicalactivityandlinkerchainstructureforaseriesofpotenttopoisomerasetargetedanticanceragents)”j.med.chem.(2001)44：1407-1415；和spicer等，“雙(吩嗪-1-羧酰胺)：新一類雙重拓撲異構(gòu)酶i/ii-引導(dǎo)的抗癌藥物的構(gòu)效關(guān)系(bis(phenazine-1-carboxamides)：structure-activityrelationshipsforanewclassofdualtopoisomerasei/ii-directedanticancerdrugs)”j.med.chem.(2000)43(7)：1350-8。

本文所用的“mdr抑制劑藥物”是逆轉(zhuǎn)或減弱由轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)的疏水性細胞毒性、細胞生長抑制或抗炎藥物流出導(dǎo)致的多重耐藥性的含叔胺化合物，這種流出向高增殖的細胞或高活化的免疫細胞賦予了對這些化合物作用的抗性。這些轉(zhuǎn)運蛋白一般術(shù)語atp結(jié)合盒(abc)轉(zhuǎn)運蛋白家族并且包括p-糖蛋白、乳腺癌抗性蛋白、和多重耐藥性相關(guān)蛋白1。其他mdr-賦予abc轉(zhuǎn)運蛋白描述于xia和smith，“急性白血病中藥物流出和多重耐藥性：治療影響和新醫(yī)療方法(drugeffluxandmultidrugresistanceinacuteleukemia：therapeuticimpactandnovelapproachestomediation)”mol.pharmacol.(2012)82(6)：1008-1021。示例性的含叔胺mdr抑制劑藥物由以下提供：zinzi等，“用作恢復(fù)mdr的新策略的小且新分子(smallandinnovativemoleculesasnewstrategytorevertmdr)”front.oncol.(2014)doi：10.3389/onc.2014.00002并且包括tariquidar^tm和elacridar^tm及其衍生物，如以下提供：paleva等，“多重耐藥性調(diào)節(jié)劑tariquidar和elacridar及其類似物與對位-糖蛋白的相互作用(interactionsofthemultidrugresistancemodulatorstariquidarandelacridarandtheiranalogueswithp-glycoprotein)”chem.med.chem.(2013)doi：10.1002/cmdc.201300233。雖然含叔胺mdr抑制劑藥物本身不是細胞毒性或細胞生長抑制性的，但它們被如此分類包括到由本發(fā)明的ldc釋放的含叔胺細胞毒性或細胞生長抑制藥物。

納入季銨化藥物單元的具有叔胺的示例性mdr抑制劑藥物在季銨化含叔胺藥物的實施方式中提供。一般而言，那些藥物的特征在于異喹啉結(jié)構(gòu)，其氮是納入ldc中時的季銨化位點。因此，一些示例性mdr抑制劑具有以下結(jié)構(gòu)：

，其中ar是任選取代的芳基并且包括tariquidar^tm和elacridar^tm。

本文所用的“防止”、“預(yù)防”等類似術(shù)語以其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的正常且常規(guī)的含義，并且因此不需要引用該術(shù)語的每種情況都能確切避免。

本文所用的“胞內(nèi)代謝物”是指從細胞內(nèi)對ldc的代謝過程或反應(yīng)產(chǎn)生的化合物。代謝過程或反應(yīng)可以是酶促過程，如ldc的肽接頭的蛋白水解切割。胞內(nèi)代謝物包括但不限于，靶向部分和在其進入、擴散、攝入或轉(zhuǎn)運到靶向的細胞中之后經(jīng)過胞內(nèi)切割的游離藥物。

本文所用的“胞內(nèi)切割”，“胞內(nèi)切割的”等術(shù)語是指細胞內(nèi)對ldc的代謝過程或反應(yīng)等，從而在季胺和抗體之間的共價接合，例如，接頭斷裂，產(chǎn)生游離含叔胺藥物，或從細胞內(nèi)的靶向部分解離的偶聯(lián)物的其他代謝物。ldc的切割的部分因此是胞內(nèi)代謝物。

本文所用的“生物利用度”是指向患者給予的給定量的藥物的全身利用度(即，血液/血漿水平)。生物利用度是表示從給予的急性達到一般循環(huán)的藥物的時間(速率)和總量(程度)測量的絕對值。

本文所用的“對象”是指具有高增殖、炎性或免疫病癥或易患這類病癥的人、非人靈長類或哺乳動物，其將受益于給予有效量的ldc。對象的非限制性示例包括但不限于，人、大鼠、小鼠、豚鼠、猴、豬、山羊、奶牛、馬、狗、貓、鳥和家禽。一般而言，對象是人、非人靈長類、大鼠、小鼠、或狗。

術(shù)語“抑制”或“對于……的抑制”指，以可檢測的量減少，或完全防止。adc抑制高增殖的細胞的增殖一般在合適測試系統(tǒng)中在細胞培養(yǎng)物(體外)或異種移植模型(體內(nèi))中相對于未處理(用載劑假擬處理)的確定。一般包含針對抗原的靶向部分的ldc用作陰性對照，該抗原并不存在于感興趣的高增殖的細胞或活化的免疫刺激細胞上。

術(shù)語“治療有效量”指的是，有效治療哺乳動物中的疾病或紊亂的藥物的量。在癌癥的情況中，治療有效量的藥物可減少癌細胞數(shù)量；減小腫瘤尺寸；抑制(即，延緩至一定程度，優(yōu)選終止)癌細胞浸潤浸入周圍器官；抑制(即，延緩至一定程度，優(yōu)選終止)腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度上抑制腫瘤生長；和/或一定程度上減輕與所述癌癥相關(guān)聯(lián)的一種或多種癥狀。就藥物可抑制癌細胞生長和/或殺死現(xiàn)存的癌細胞的程度而言，其可能是抑制細胞生長的和/或細胞毒性的。就癌癥治療而言，功效可以，例如，通過評估疾病進展的時間(ttp)和/或確定響應(yīng)率(rr)來檢測。

在來自高刺激的免疫細胞的免疫病癥的情況中，治療有效量的藥物可降低高刺激的免疫細胞的數(shù)量、其刺激和/或浸入其他正常組織的程度和/或一定程度上降低一種或多種由于高刺激的免疫細胞與失控免疫系統(tǒng)相關(guān)的癥狀。對于由于高刺激的免疫細胞的免疫病癥，可例如通過評價一種或多種炎性替代物來測量，包括一種或多種以下細胞因子的水平如：il-1β、tnfα、infγ和mcp-1，或經(jīng)典活化的巨噬細胞的數(shù)量。

在本發(fā)明的一些方面中，配體-藥物偶聯(lián)物與靶細胞(即，高增殖的細胞或高刺激的免疫細胞)的表面上的抗原結(jié)合，并且然后配體藥物偶聯(lián)物通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用攝入靶細胞。一旦進入細胞，接頭單元內(nèi)的一個或多個切割單元被切割，導(dǎo)致含叔胺藥物的釋放。釋放的含栓藥物然后在細胞溶質(zhì)中自由遷移并且誘導(dǎo)細胞毒性或細胞生長抑制活性，或在高刺激的免疫細胞的情況中還可抑制促炎信號誘導(dǎo)。在本發(fā)明的另一個方面中，藥物在靶細胞外但在靶細胞周圍從配體-藥物偶聯(lián)物上切下，使得釋放的含叔胺單元隨后滲透細胞而不是在遠端釋放。

本文所用術(shù)語“運載體”指的是伴隨化合物給予的稀釋劑、佐劑或賦形劑。這類藥物載體可以是液體，如水和油，包括來自石油、動物、植物或合成來源的油，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油。所述運載體可以是鹽水、阿拉伯膠、明膠、淀粉糊劑、滑石、角蛋白、硅膠、尿素。此外，助劑，穩(wěn)定劑，增稠劑，潤滑劑和著色劑也可能使用。在一個實施方式中，給予患者時，所述化合物或組合物和藥學(xué)上可接受的運載體是無菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)給予化合物時，水是示例性運載體。鹽水溶液和右旋糖水溶液和甘油溶液也可用作液體運載體，特別適用于注射液。合適的藥物運載體包括賦形劑，如：淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊(chalk)、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇。如果需要，本發(fā)明組合物也可含有少量潤濕劑或乳化劑或ph緩沖劑。

除非上下文中另有指明，“處理”或“治療”等術(shù)語指的是治療性治療和預(yù)防復(fù)發(fā)的預(yù)防性檢測，其中，目標是抑制或減緩(減輕)不希望的生理變化或病癥，例如，癌癥的發(fā)展或擴散或來自慢性炎癥的組織損傷。一般而言，這種治療性處理的有益或所需的臨床結(jié)果包括但不限于，癥狀的緩解、疾病程度減輕、疾病狀況穩(wěn)定(即，不惡化)、疾病進展的延緩或減慢、疾病狀況的改善或減輕以及癥狀的緩解(部分或完全)，上述結(jié)果是可檢測或不可檢測的?！爸委煛币部梢灾概c不接受治療的期望存活或生活質(zhì)量相比延長生存期或生活質(zhì)量。需要治療的那些對象包括已患有病癥或疾病的，以及傾向于患有病癥或疾病的那些對象。

在癌癥或與慢性炎癥相關(guān)的疾病狀態(tài)中，術(shù)語“治療”包括以下的任意或全部：抑制腫瘤細胞、癌細胞或腫瘤的生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞的復(fù)制，抑制腫瘤細胞或癌細胞的擴散，降低總體腫瘤負荷或較少癌細胞數(shù)量，抑制促炎性免疫細胞的復(fù)制或刺激，抑制或降低失控免疫系統(tǒng)的慢性炎性狀態(tài)或降低由患有自身免疫疾病或病癥的發(fā)散強度和/或頻率或緩解一種或多種與癌癥或高免疫刺激的疾病或病癥相關(guān)的癥狀。

本文使用的“藥學(xué)上可接受的鹽”指化合物的藥學(xué)上可接受的有機或無機鹽。該化合物一般含有至少一個氨基，并且因此可與氨基形成酸加成鹽。示例性鹽包括但不限于：硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1，1’-亞甲基-雙(2-羥基-3-萘甲酸鹽))鹽。

藥學(xué)上可接受的鹽可以包含另一個分子，例如乙酸根離子、琥珀酸根離子、或其他相對離子。該相對離子可以是穩(wěn)定母體化合物上電荷的任何有機或無機部分。另外，藥學(xué)上可接受的鹽可在結(jié)構(gòu)中具有超過一個的帶電原子。其中多個帶電原子是藥學(xué)上可接受的鹽的一部分的示例能有多個相對離子。因此，藥學(xué)上可接受的鹽可具有一個或多個帶電原子和/或一個或多個相對離子。

一般而言，藥學(xué)上可接受的鹽選自p.h.stahl和c.g.wermuth編，《藥用鹽手冊：性質(zhì)、選擇和使用》(handbookofpharmaceuticalsalts：properties，selectionanduse)，weinheim/zürich：wiley-vch/vhca，2002中所述的那些。鹽選擇可基于藥物產(chǎn)物必須顯示出的性質(zhì)，包括在各種ph值下的充足水溶解性，取決于目標給藥途徑，結(jié)晶性與流動性質(zhì)和低吸濕性(即，對比相對濕度的水吸收性)，其適于操作和所需保質(zhì)期，通過確定加速條件下的化學(xué)和固態(tài)穩(wěn)定性(即，用于確定當(dāng)儲存在40℃和75％相對濕度下時的降價或固態(tài)變化)。

“負載”、“載藥量”、“荷載”等術(shù)語表示或指代ldc群中荷載的平均數(shù)(“荷載”與“藥物”在此可互換使用)(即，具有相同或不同接合位置接合的d⁺單元數(shù)量不同，但在結(jié)構(gòu)上基本相同的組合物)。載藥量的范圍可以是1-24個藥物/靶向部分。其有時稱為dar，或藥物：靶向部分比。本文所述的ldc一般具有1-24的dar，并且在一些方面中1-8、2-8、2-6、2-5和2-4。一般的dar值是約2、約4、約6和約8?？赏ㄟ^常規(guī)方法如紫外/可見光譜、質(zhì)譜、hic、elisa實驗和hplc鑒定偶聯(lián)反應(yīng)確定制劑中每種抗體的平均藥物數(shù)量或dar值。也可確定定量dar值。在一些情況中，可通過手段如反相hplc或電泳來實現(xiàn)對具有特定dar值的均相l(xiāng)dc的分離、純化和表征?？赏ㄟ^靶向部分上的接合位點的數(shù)量來限制dar。

例如，當(dāng)靶向部分是抗體并且接合位點是半胱氨酸巰基時，抗體可具有僅一個或多個與含lb’部分反應(yīng)的充足反應(yīng)性的巰基。有時，半胱氨酸巰基是衍生自參與鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基的巰基。在其他時候，半胱氨酸殘基是不參與鏈間二硫鍵，但通過遺傳工程改造導(dǎo)入的半胱氨酸殘基的巰基。一般而言，在偶聯(lián)反應(yīng)期間，少于理論最大量的d⁺部分偶聯(lián)至抗體。例如，抗體可含有許多賴氨酸殘基，其不與含lb’的部分反應(yīng)，因為僅最有反應(yīng)性的賴氨酸基團可與該部分反應(yīng)。

本文定義的“抗生素”表示一種天然、半合成或合成來源的化合物，與哺乳動物細胞相比其主要或選擇性對原核細胞(例如，細菌)施加影響。抗生素一般抑制微生物的生長而沒有對給予抗生素的人或動物產(chǎn)生明顯毒性。抗生素包括，例如，青霉素、頭孢菌素、碳青霉烯和袢霉素。抗體主要用于治療感染性疾病。本發(fā)明設(shè)想的藥物不是抗生素。

1.實施方式

本文提供了與正常細胞或異常細胞一般不存在的正常細胞的環(huán)境相比，能夠向高增殖的細胞或高活化的免疫細胞或者這類異常細胞周圍優(yōu)先遞送含叔胺藥物的配體-藥物偶聯(lián)物(ldc)，其可用于治療由這些異常細胞表征的疾病和病癥。

1.1概述

ldc具有三個主要組分：(1)來自選擇性結(jié)合至靶部分的靶向部分的配體單元，與正常細胞上、其內(nèi)或一般不存在異常細胞或不需要細胞的正常細胞周圍存在的其他部分相比，該靶部分存在于這些異常細胞或其他不需要細胞上或其內(nèi)或周圍，或者與正常細胞或一般不存在異?；虿恍枰毎恼＜毎h(huán)境中相比，該靶部分存在于異常或其他不需要細胞上、其內(nèi)或周圍，(2)納入對應(yīng)于含叔胺藥物的結(jié)構(gòu)的季銨化藥物單元，和(3)連接d⁺至配體單元并且能夠在配體單元靶向的異常或不需要細胞內(nèi)或其周圍條件性釋放游離含叔胺藥物的接頭單元。

待用于本發(fā)明的含叔胺的藥物是與原核細胞相比主要或選擇性對哺乳動物細胞發(fā)揮其效果(例如，細胞毒性、細胞生長抑制效果)的藥物。在一些方面中，靶部分是胞外展示的與正常細胞相比主要在異?；虿恍枰毎习l(fā)現(xiàn)的膜蛋白的表位。

在一些方面中，具有叔胺基團的細胞毒性、細胞生長抑制、免疫抑制或抗炎藥物單元(d)以季銨化藥物單元(d⁺)納入ldc并且具有針對高增殖的細胞、高活化的免疫細胞或其他異?；虿恍枰募毎陌麅?nèi)活性，在“游離”形式下(即，從d⁺釋放d)對這些細胞可能有或可能沒有特異性。因此，與異?；虿恍枰毎幌嚓P(guān)的正常細胞相比，d可能具有針對異?；虿恍枰毎倪x擇性或非特異性細胞毒性、細胞生長抑制、免疫抑制或抗炎活性。針對異常或不需要細胞(即，靶向的細胞)的特異性在任意情況中來自其中納入d的ldc的配體單元(l)。除了l和d⁺以外，靶向異常或不希望細胞的ldc一般具有將季銨化藥物單元共價接合至配體單元的接頭單元。在一些方面中，配體單元來自抗體，其是示例性的靶向部分，其識別異常哺乳動物細胞。

在一些方面中，被配體單元識別的靶部分是胞外展示的與正常細胞相比主要在異?；虿恍枰毎习l(fā)現(xiàn)的膜蛋白的表位。在這些方面中的一些中，作為另一種要求，由配體單元靶向的膜蛋白必須有足夠的拷貝數(shù)，并且在結(jié)合ldc之后內(nèi)化，以優(yōu)先向異常細胞胞內(nèi)遞送有效量的結(jié)合的細胞毒性、細胞生長抑制、免疫抑制或抗炎藥物。由于這些限制，從d⁺釋放的藥物一般是高活性藥物，由于來自對所需作用位點周圍或遠端的正常細胞的破壞、損傷或不需要的抑制的無法容忍的副作用，其一般無法單獨作為藥物給予對象。

考慮到具有不良外周影響的含叔胺藥物需要通過其ldc選擇性地總，ldc的接頭單元不僅是用作靶向部分和從中釋放含叔胺藥物的d⁺之間的橋，但必須經(jīng)小心工程改造以具有從給予ldc的部位直至其被遞送至靶向的部位之間的穩(wěn)定性并且然后必須高效釋放活性藥物部分。為了實現(xiàn)該任務(wù)，靶向部分與含lb’部分反應(yīng)以形成含lb部分。當(dāng)如此形成的含lb部分是ldc時，這類化合物一般包含配體單元形成的靶向部分，也被稱為一級接頭(lr)的配體結(jié)合部分(lb)，季銨化含叔胺藥物(d⁺)與lb和d⁺之間間插的二級接頭(lo)。

1.1一級接頭(lr)：_

一級接頭(lr)是配體結(jié)合部分(lb)或配體結(jié)合部分前體(lb’)，并且通常作為ldc或有l(wèi)b′的部分如lb’-lo或lb'-lo-d⁺的接頭單元的組分存在。含lb’部分的一級接頭包含能夠與靶向部分的親電子或親核官能團反應(yīng)的官能團。作為該反應(yīng)的結(jié)果，靶向部分通過lb共價鍵合至一級接頭，其中一級接頭現(xiàn)在是具有衍生自lb’的官能團的lb。

在一些實施方式中，含lb’部分中的lb’具有以下之一的結(jié)構(gòu)

其中r是氫或c1-c6任選取代的烷基；t是-cl、-br、-i、-o-甲磺?；?o-甲苯磺?；蚱渌撬犭x去基團；u是-f、-cl、-br、-i、-o-n-琥珀酰亞胺、-o-(4-硝基苯基)、-o-五氟苯基、-o-四氟苯基或-o-c(＝o)-or⁵⁷；x²是c1-10亞烷基、c3-c8-碳環(huán)、-o-(c1-c6烷基)、-亞芳基-、c1-c10亞烷基-亞芳基、-亞芳基-c1-c10亞烷基、-c1-c10亞烷基-(c3-c6-碳環(huán))-、-(c3-c8碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、c3-c8-雜環(huán)、-c1-c10亞烷基-(c3-c8雜環(huán))-、-c3-c8-雜環(huán))-c1-c10亞烷基、-(ch2ch2o)u、或-ch2ch2o)u-ch2-，其中u是1至10的整數(shù)并且r⁵⁷是c1-c6烷基或芳基；并且其中波浪線表示與lo亞基的共價結(jié)合。

在與靶向部分的親電子試劑或親核試劑相互作用后，將lb’轉(zhuǎn)化成配體-lb部分，如下面所例舉的那樣，其中發(fā)生了一個這樣的相互作用：

，其中所示(#)原子衍生自配體的反應(yīng)部分并且x²如定義的那樣。

1.2二級接頭(lo)：

ldc或其含lb’前體中的二級接頭是位于一級接頭(lr)和季銨化藥物單元(d⁺)之間的有機部分，其在使ldc的靶向部門選擇性結(jié)合其同系靶部分之后，提供對ldc的接頭單元內(nèi)可切割單元的處理，該同系靶部分存在于由ldc靶向的高增殖細胞、高活化免疫細胞或其他異常或不需要的細胞上，內(nèi)部或附近。在一些實施方式中，w提供存在于高增殖細胞或高活化免疫細胞內(nèi)的蛋白酶的底物。優(yōu)選的是在高增殖細胞或高活化免疫細胞存在下通常不發(fā)生的由正常細胞分泌的蛋白酶識別的那些課切割單元，或者是具有全身循環(huán)的蛋白酶的底物，以使由其ldc過早釋放所致的非靶向藥物釋放或含叔胺的藥物的全身暴露最小化。更優(yōu)選的是作為溶酶體中發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性蛋白酶或蛋白酶的那些蛋白酶，溶酶體是ldc在ldc特異性結(jié)合的膜表面受體內(nèi)化后被遞送到的細胞區(qū)室。調(diào)節(jié)性和溶酶體蛋白酶是示例性的細胞內(nèi)蛋白酶。

在一個實施方式中，二級接頭內(nèi)的w包含具有以下結(jié)構(gòu)的二肽部分或由其組成：其中r²⁹是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-ch(oh)ch3或具有以下結(jié)構(gòu)：并且r³⁰是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、-(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，其中二肽部分提供調(diào)節(jié)性或溶酶體蛋白酶的識別位點。

在優(yōu)選的實施方式中，二肽是纈氨酸-丙氨酸(val-ala)。在另一個實施方式中，w包含二肽纈氨酸-瓜氨酸(val-cit)或由其組成。在另一個實施方式中，w包含二肽蘇氨酸-谷氨酸(thr-glu)或由其組成。在這些實施方式的一些實施方式中，二肽部分通過在丙氨酸或瓜氨酸羧酸官能團或谷氨酸的α羧酸官能團與si的芳基或雜芳基氨基之間形成的酰胺鍵共價接合至y的si單元。因此，在這些實施方式中，si包含芳基胺或雜芳基胺部分，并且二肽部分的上述羧酸官能團與芳胺部分的氨基氮形成苯胺鍵。

在另一個實施方式中，二級接頭內(nèi)的w包含具有細胞內(nèi)定位的糖苷酶的識別位點的糖苷鍵合的糖部分。在這些實施方式中，w是與e結(jié)合的糖部分，其中w-e提供用于從e切割w的識別位點，并且w和e之間的鍵是糖苷鍵。在這些實施方式中，w-e一般具有以下結(jié)構(gòu)

其中r⁴⁵是-ch2oh或-co2h，并且e是與糖部分和y的自毀部分(如波浪線所示)鍵合的雜原子部分如-o-、-s-或-nh-，其中連接至糖部分的鍵為糖苷酶提供識別位點。優(yōu)選地，該位點被溶酶體糖苷酶識別。在一些實施方式中，糖苷酶是葡糖醛酸糖苷酶，當(dāng)r⁴⁵是-co2h時。

除了w之外的二級接頭也包含間隔(y)單元，并且還可以包含以線性或正交關(guān)系相對于w排列的眼神(a)單元，如下所示

分別，其中下標w是1，y是1并且下標a是0或1；

其中連接至y的波浪線表示y與d⁺的共價結(jié)合，并且當(dāng)兩個結(jié)構(gòu)中a為1時，波浪線連接至a，或者當(dāng)a為0時，當(dāng)與y-d⁺呈線性排列時連接至w，或當(dāng)y-d⁺呈正交排列時連接至y，表示a、w或y分別與lb或lb’的sc共價鍵合。在優(yōu)選的實施方式中，a、w和y各自是1。

lo中的一些示例性a、w和y部分的結(jié)構(gòu)及其取代基描述于wo2004/010957、wo2007/038658，美國專利號6,214,345、7,498,298、7,968,687和8,163,888，以及美國專利公開號2009-0111756、2009-0018086和2009-0274713，其通過引用納入本文。

在一些實施方式中，a部分或其亞基(例如，a1，ao)具有以下結(jié)構(gòu)

其中連接至任一結(jié)構(gòu)的羰基部分的波浪線代表包含相對于a線性排列的w的二肽部分的氨基末端，或與本文所述的y中w鍵合至y的si的自毀部分的接合點，并且與a正交排列并且其中連接至任一結(jié)構(gòu)的氨基部分的波浪線表示與lb或lb’中的sc的含羰基官能團的接合點；

其中k和l獨立地是c、n、o或s，條件是當(dāng)k或l是o或s時，連接至k的r⁴¹和r⁴²或連接至l的r⁴³和r⁴⁴不存在，并且當(dāng)k或l是n時，連接至k的r⁴¹、r⁴²之一或連接至l的r⁴³、r⁴⁴之一不存在，并且條件是沒有2個相鄰l獨立選自n、o、或s；

其中q是0-12的整數(shù)，并且r是1-12的整數(shù)：

其中g(shù)是氫、任選取代的c1-c6烷基、-oh、-or^pr、-co2h、co2r^pr，其中r^pr是合適的保護基團，-n(r^pr)(r^pr)，其中r^pr獨立地是保護基團或r^pr一起形成合適的保護基團，或-n(r⁴⁵)(r⁴⁶)，其中r⁴⁵、r⁴⁶之一是氫或r^pr，其中r^pr是合適保護基團，并且另一個是氫或任選取代的c1-c6烷基；

其中r³⁸是氫或任選取代的c1-c6烷基；r³⁹-r⁴⁴獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基、或任選取代的雜芳基，或r³⁹和r⁴⁰與它們接合的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基，或者r⁴¹、r⁴²與它們接合的k(當(dāng)k是c)一起，或r⁴³、r⁴⁴與它們接合的l(當(dāng)l是c)一起包含c3-c6環(huán)烷基，或者r⁴⁰和r⁴¹，或r⁴⁰和r⁴³，或r⁴¹和r⁴³與它們接合的碳或雜原子和這些碳和/或雜原子之間間插的原子一起包含5-或6-元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，條件是當(dāng)k是o或s時，r⁴¹和r⁴²不存在，當(dāng)k是n時，r⁴¹、r⁴²之一不存在，當(dāng)l是o或s時，r⁴³和r⁴⁴不存在，并且當(dāng)l是n時，r⁴³、r⁴⁴之一不存在。

在一些實施方式中，r³⁸是氫。在其他實施方式中，-k(r⁴¹)(r⁴²)是-(ch2)-。在其他實施方式中，當(dāng)p不是0時，r³⁹和r⁴⁰在每次出現(xiàn)時是氫。在其他實施方式中，當(dāng)q不是0時，-l(r⁴³)(r⁴⁴)-在每次出現(xiàn)時是-ch2-。

在優(yōu)選實施方式中，g是-co2h。在其他優(yōu)選實施方式中，k和/或l是c。在其他優(yōu)選實施方式中，q或p是0。在其他優(yōu)選實施方式中，p+q是1-4的整數(shù)。

在一些實施方式中，a或其亞基具有以下結(jié)構(gòu)：-nh-c1-c10亞烷基-c(＝o)-、-nh-c1-c10亞烷基-nh-c(＝o)-c1-c10亞烷基-c(＝o)-、-nh-c1-c10亞烷基-c(＝o)-nh-c1-c10亞烷基(c＝o)-、-nh-(ch2ch2o)s-ch2(c＝o)-、-nh-(c3-c8碳環(huán))(c＝o)-、-nh-(亞芳基-)-c(＝o)-、和-nh-(c3-c8雜環(huán)-)c(＝o)。

在其他實施方式中，a或其亞基具有以下結(jié)構(gòu)：其中r¹³是-c1-c10亞烷基-、-c3-c8碳環(huán)-、-亞芳基-、-c1-c30雜亞烷基-、-c3-c8雜環(huán)-、-c1-c10亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-c1-c10亞烷基-、-c1-c10亞烷基-(c3-c8碳環(huán))-、-(c3-c8碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、-c1-c10亞烷基-(c3-c8雜環(huán))-、-(c3-c8雜環(huán))-c1-c10亞烷基-、-(ch2ch2o)1-10(-ch2)1-3-、或-(ch2ch2nh)1-10(-ch2)1-3-。在一些實施方式中，r¹³是-c1-c10亞烷基-或-c1-c30雜亞烷基-。在一些實施方式中，r¹³是-c1-c10亞烷基-、-(ch2ch2o)1-10(-ch2)1-3-、或-(ch2ch2nh)1-10(-ch2)1-3-。在一些實施方式中，r¹³是-c1-c10亞烷基-聚乙二醇或聚乙烯亞胺。

在更優(yōu)選的實施方式中，a或其亞單元在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于α-氨基酸，β-氨基酸部分或其它含胺的酸。a與亞基a1和ao的其他實施方式在lr-lo的實施方式中描述為接頭單元。

在一些實施方式中，y部分能夠在與y共價鍵合的w的酶處理(即，y包含si)之后經(jīng)歷1，4-或1，6-消除反應(yīng)。在一些實施方式中，在lo中線性排列的y的si具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v、z¹、z²和z³獨立地是-c(r²⁴)＝或-n＝；u是-o-、-s-或-n(r²⁵)-；

r²⁴獨立地是氫、鹵素、-no2、-cn、-or²⁵、-sr²⁶、-n(r²⁷)(r²⁸)、任選取代的c1-c6烷基、或-c(r²⁹)＝c(r³⁰)-r³¹，其中r²⁵是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，r²⁶是任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，r²⁷和r²⁸獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基或者r²⁷和r²⁸與它們接合的氮一起包含5-或6-元雜環(huán)，r²⁹和r³⁰獨立地是氫，或任選取代的c1-c6烷基，并且r³¹是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、-c(＝o)or³²或-c(＝o)nr³²，其中r³²是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基、或任選取代的雜芳基，r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；并且r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團或是供電子基團，

條件是r²⁴中不超過2個不是氫；

其中j是-o-、s-、或-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；

其中連接到e的波浪線表示e與w的官能團的共價鍵合，其抑制e的供電子能力足以使si的亞芳基部分穩(wěn)定至1，4-或1，6-消除，并且其中酶處理w導(dǎo)致釋放與y結(jié)合的活性藥物部分的消除的能力的雙重抑制(例如，當(dāng)e鍵合到w的含羰基官能團的羰基部分時)；

其中，當(dāng)1，4-或1，6-消除時，d⁺內(nèi)含叔胺的化合物被釋放。

在優(yōu)選的實施方式中，當(dāng)si在lo中相對于w和d⁺呈線性排列時，si具有以下結(jié)構(gòu)

在優(yōu)選實施方式中，-j-是-o-或-nh-并且v、z¹或z²是＝c(r²⁴)，其中r²⁴是氫或供電子基團。在其他優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫并且v、z¹或z²是＝ch-。在其他優(yōu)選實施方式中，-j-是-nh，v、z¹或z²是＝ch-并且r’是氫或供電子基團。

在其它實施方式中，w-y在lo中正交排列(即，在接頭單元內(nèi)是-y(w)-)，其中y的si與具有糖苷酶識別位點的糖苷鍵合的糖部分鍵合，其中涉及si的正交排列一般由以下結(jié)構(gòu)表示

其中e鍵合到v、z¹、z³中的一個，條件是其他v、z¹、z²(即未鍵合到e)由＝c(r²⁴)-或＝n-定義，或si由以下結(jié)構(gòu)表示

其中v、z¹和z³獨立地是-c(r²⁴)＝或-n＝；r²⁴獨立地是氫、鹵素、-no2、-cn、-or²⁵、-sr²⁶、-n(r²⁷)(r²⁸)、-c(r²⁹)＝c(r³⁰)-r³¹或任選取代的c1-c6；

其中r²⁵是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；r²⁶是任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，并且r²⁷和r²⁸獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基或者r²⁷和r²⁸與其接合的氮一起包含5-或6-元雜環(huán)，r²⁹和r³⁰獨立地是氫，或任選取代的c1-c6烷基，并且r³¹是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、-cn、-c(＝o)or³²或-c(＝o)nr³²；其中r³²是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基、或任選取代的雜芳基；

r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；r’是氫或鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或是吸電子基團；r⁴⁵是-ch2oh、-co2h；e是-o-或-nh-；j是-nh-；并且d⁺如季銨化藥物單元所述的實施方式中所定義。

在優(yōu)選實施方式中，當(dāng)w-y在lo中正交排列時，y的si具有以下結(jié)構(gòu)

在優(yōu)選實施方式中，-e-是-o-或-nh-并且v或z³是＝c(r²⁴)，其中r²⁴是氫或吸電子基團。在其他優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫并且v、z¹或z²是＝ch-。在其他優(yōu)選實施方式中，-j-是-nh，v、z¹或z²是＝ch-并且r’是氫或吸電子基團。

1.3lr-lo作為接頭單元

接合到本文所述的任何上述si部分的季銨化藥物單元(d+)可以表示具有叔胺部分(即，d⁺是季銨化的含叔胺的藥物)的任何季銨化的細胞毒性、細胞生長抑制性、免疫抑制性或抗炎藥物，其季銨化氮接合到si部分的芐基位置。

在一些實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb'-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)

其中連接至lb的波浪線表示與ldc的靶向部分的共價結(jié)合，q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選包含2、3或4個亞基，并且下標a是0或1；q²是w′w′-e-，其中q²在存在時與v、z¹、z²或z³鍵連；ww和w′w′是切割單元；其中q¹的ww能夠被與循環(huán)血清蛋白酶相比由靶向部分靶向的異常細胞產(chǎn)生的蛋白酶，或通過二硫鍵交換由谷胱甘肽選擇性切割，或者與血清中的生理ph相比在溶酶體中存在的較低ph下有更大水解反應(yīng)性并且q²的w-e可被糖苷酶切割，其中下標w是0或1并且w′是0或1，其中w+w′是1(即，一個且僅一個w存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基或炔基，或鹵素、-no2、-cn，或其他吸電子基團或是供電子基團、-q²、或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，條件是當(dāng)w′是1時q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得-c(r⁸)(r⁹)-d⁺與v、z¹、z²、z³之一鍵連并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相是鄰位或?qū)ξ坏模?/p>

條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得-c(r⁸)(r⁹)-d⁺與v、z¹、z²、z³之一鍵連并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得q²與v、z¹、z²、z³中的另一個鍵連，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相是鄰位或?qū)ξ唬籸⁸和r⁹獨立地是氫、任選取代的烷基、烯基或炔基、或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；d⁺表示季銨化含叔胺藥物d的結(jié)構(gòu)；并且p是1-24的數(shù)字；其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、水解或糖苷酶切割導(dǎo)致從d⁺排出d。

在優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb'-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v、z¹和z²獨立地是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，并且r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb'-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v、z²和z³獨立地是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，并且r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、任選取代的烷基或吸電子基團，z¹是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，并且r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基。

在包含q²的上述-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺結(jié)構(gòu)更優(yōu)選實施方式中，v是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、鹵素或-no2。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v和z¹獨立地是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，并且r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基，j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基并且r’是氫或吸電子基團。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中z¹是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、任選取代的烷基或吸電子基團，并且r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基，并且r’是氫或供電子基團。

在包含q²的上述-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺結(jié)構(gòu)更優(yōu)選實施方式中，z³是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、鹵素或-no2。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中v和z³獨立地是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基，并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基并且r’是氫或吸電子基團。

在一些實施方式中，lr-lo-d⁺(即，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺)具有以下結(jié)構(gòu)

其中v、z¹和z²獨立地是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基，并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基并且r’是氫或供電子基團。

在優(yōu)選的實施方式中，上述lr-lo-d⁺(即，-lb-lo-d⁺和lb’-lo-d⁺)結(jié)構(gòu)中任一個中v、z¹、z²、z³的中的至少一個是-ch＝或不是＝n-。

在更優(yōu)選的實施方式中，lr-lo-d⁺(即，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺)具有以下結(jié)構(gòu)

其中v、z¹或z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基，并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基并且r’是氫或吸電子基團。

在更優(yōu)選的實施方式中，上述包含q¹的lr-lo結(jié)構(gòu)中任一個中r⁸和r⁹是氫。在其他更優(yōu)選的實施方式中，上述包含q¹的lr-lo結(jié)構(gòu)中任一個中，v、z¹或z²是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或供電子基團。因此，這些優(yōu)選的實施方式中的一些具有以下結(jié)構(gòu)

在其他更優(yōu)選實施方式中，上述包含q¹的lr-lo結(jié)構(gòu)中任一個中，當(dāng)a存在時(即，a是1)，q¹中的a在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于含胺酸，其中含胺酸的羧酸末端以酯或酰胺與j鍵連并且其n-末端通過含羰基官能團與lb或lb’鍵合。

在其他實施方式中，lr-lo-d⁺(即，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺)具有以下結(jié)構(gòu)

其中v、z¹或z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中獨立選擇的r²⁴是氫、任選取代的烷基或供電子基團，r⁸和r⁹獨立地是氫或任選取代的烷基，并且j是-o-或-n(r³³)，其中r³³是氫或低級烷基并且r’是氫或吸電子基團。

在更優(yōu)選的實施方式中，上述包含q2的lr-lo結(jié)構(gòu)中任一個中r⁸和r⁹是氫。在其他更優(yōu)選實施方式中，v或z³是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或供電子基團。因此，這些優(yōu)選的實施方式中的一些具有以下結(jié)構(gòu)

在其他更優(yōu)選實施方式中，上述包含q²的lr-lo結(jié)構(gòu)中任一個中，當(dāng)a存在時，a在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于含胺酸，其中含胺酸的羧酸末端以酯或酰胺與j鍵連并且其n-末端通過含羰基官能團與lb或lb’鍵合。在特別優(yōu)選的實施方式中，上述-lb-lo-d⁺、lb’-lo-d⁺或lr-lo-d⁺實施方式的任一個中的-lb-a-或lb’-a具有如下所示的m¹-a、m¹-a1-ao-、m²-a或m²-a1-ao-結(jié)構(gòu)：

其中a1和ao是a的亞基，lb是琥珀酰亞胺(m²)部分并且lb’是馬來酰亞胺部分(m¹)，其中-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-是a或a的亞基(a1)；r和r^a2獨立地是氫或任選取代的烷基；r^a1是氫、低級烷基或bu；he是任選的水解強化(he)單元；m是0-6的整數(shù)；各r^b1獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或2個r^b1與它們接合的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基或一個r^b1和he與它們接合的碳一起包含5或6-元雜烷基或者5-或6-元雜環(huán)烷基，并且其他r^b1是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；bu是具有-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)結(jié)構(gòu)的堿性單元，其中n是0、1、2或3，r¹獨立地是氫或低級烷基或者2個r¹與它們接合的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基，r²獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或2個r²與它們接合的碳和任何間插碳一起定義c3-c6環(huán)烷基，或一個r¹和一個r²與它們接合的碳和任何間插碳一起包含5-或6-元環(huán)烷基并且其余r¹和r²如定義的那樣；r²²和r²³獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基或r²²和r²³與它們接合的氮一起包含5-或6-元雜環(huán)烷基；并且其中靶向部分的巰基部分如連接至琥珀酰亞胺部分的波浪線所示與m²鍵連并且其中連接至he(或連接至[c(r^b1)(r^b1)]m，當(dāng)he不存在時)的波浪線表示在q1存在的實施方式中與a的另一個亞基或與w的共價結(jié)合或者在q2存在的實施方式中與si部分的v、z¹、z²或z³的共價結(jié)合。

在這些實施方式中，-lb和lb’是指琥珀酰亞胺(m²)部分并且與它們對應(yīng)的-lb-a-、lb’-a、-lb-a1-或lb’-a1是指含琥珀酰亞胺部分，其是代表性的lss部分。

在其他特別優(yōu)選的實施方式中，上述含lb的實施方式中的任一個中的-lb-a-或-lb-a1-ao具有如下所示的m³-a或m³-a1-ao結(jié)構(gòu)：

其中a1和ao是a的亞基，并且m^3a和m^3b是m³的區(qū)域異構(gòu)體，并且其中可變基團和與靶向部分或he(或[c(r^b1)(r^b1)]m)的巰基的連接如以上剛剛所示的相應(yīng)含琥珀酰亞胺部分所定義。在本發(fā)明的實施方式中，lb是指琥珀酸-酰胺(m³)部分并且-lb-a-、lb’-a、-lb-a1-或lb’-a1是指含琥珀酸-酰胺部分，其是代表性的ls部分。

在這些-lb-a-、lb’-a、-lb-a1-和lb’-a1或m¹-a、m¹-a1-ao-、m²-a、m²-a1-ao-、m³-a和m³-a1-ao實施方式中任一個中，各r^b獨立地優(yōu)選是氫或低級烷基并且m是0或1，r^a1優(yōu)選是氫、低級烷基或bu或者r^a1優(yōu)選是氫。

在其中q¹包含a或a1-ao的包含q¹的上述實施方式中的任一個中，優(yōu)選的實施方式是其中q¹的w通過酰胺官能團與a或ao鍵合的那些。在這些實施方式中，優(yōu)選a、a1和ao具有獨立選擇的結(jié)構(gòu)，其對應(yīng)于本文所述的延伸單元實施方式中所述的含胺酸。在包含a或a1的上述-lb-a-、lb’-a、-lb-a1-和lb’-a1實施方式中的任何一個中，a和a1優(yōu)選具有對應(yīng)于本文所述延伸單元實施方式的含胺酸的結(jié)構(gòu)，其中a鍵合到w或a1通過酰胺官能團與ao鍵合。在上述m¹-a、m¹-a1-ao-、m²-a、m²-a1-ao-、m³-a和m³-a1-ao實施方式中的任何一個中，優(yōu)選a、a1和ao具有獨立選擇的對應(yīng)于本文所述的延伸單元a和亞基ao實施方式的含胺酸。在包含-a(bu)-或-a1(bu)-部分組成的上述lss或ls實施方案中的任一個中，a和a1優(yōu)選具有對應(yīng)于被bu取代的含胺酸的結(jié)構(gòu)，并因此是如本文所述的延伸單元和堿性單元實施方式所述的含二氨基的酸。在具有結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于含胺酸的a或a1部分的含m¹、m²和m³的部分中，含胺酸的胺氮以m¹或m²環(huán)體系的亞胺氮或m³部分的酰胺氮引入。在含lss或ls的部分中，含二氨基的酸的n末端胺氮以m¹或m²環(huán)體系的亞胺氮或m³部分的酰胺氮引入。優(yōu)選地，對于上述含m¹、m²和m³的部分或含lss或ls的部分中的任意一個，含胺酸或含二氨基的酸的羧酸對于包含a1-ao-的那些部分引入連接至ao的酰胺官能團，對于當(dāng)ao不存在時包含a的那些部分引入連接至w的酰胺官能團。

在其它優(yōu)選實施方式中，w包含由組織蛋白酶識別的二肽，其中二肽通過另一酰胺官能團與si的j鍵合，其中組織蛋白酶能夠?qū)的酰胺鍵切割成si以引起si的片段化來從與si鍵合的d⁺釋放d。

在這些和包含he的上述實施方式中的任一個中，he優(yōu)選是-c(＝o)-。在其中q1的w包含由組織蛋白酶識別的二肽的上述實施方式中的任一個中，優(yōu)選的二肽具有以下結(jié)構(gòu)：其中r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-ch(oh)ch3或具有以下結(jié)構(gòu)：并且r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，其中二肽b-末端處的波浪線表示與a或與lb或lb’的共價結(jié)合并且二肽c-末端處的波浪線表示與si部分的j共價結(jié)合。

在包含q¹的優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb'-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中a1和ao是a的亞基，其中ao是任選亞基(即，當(dāng)ao不存在時a1變成a)，其中r³⁴是甲基、異丙基或-ch(oh)ch3并且r³⁵是甲基、-(ch2)3nh(c＝o)nh2或-(ch2)2co2h，其中r’、r⁸、r⁹、j、v、z¹和z²如之前針對式i所定義。在更優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫。在其他更優(yōu)選實施方式中，j是-nh-。在其他更優(yōu)選實施方式中，j、v、z¹和z²各自是-ch＝。還更優(yōu)選的是，其中l(wèi)b’具有馬來酰亞胺部分(m¹)的結(jié)構(gòu)或其中l(wèi)b具有琥珀酰亞胺部分(m²)或琥珀酸-酰胺(m³)部分的結(jié)構(gòu)的那些實施方式。

在包含q¹的其他優(yōu)選實施方式中，式lr-lo-d⁺的配體藥物偶聯(lián)物或藥物接頭化合物具有以下結(jié)構(gòu)

其中下標w為1、2、3或更多，優(yōu)選為2，并且其中w包含二肽或由二肽組成，其中二肽是ww的順序氨基酸亞基，其中二肽亞基位于ww的遠端(即，二肽具有-w2-w1-的式)，并且與自由循環(huán)的血清蛋白酶相比，所指示的鍵是可由細胞內(nèi)蛋白酶特異性切割的酰胺鍵。在一些實施例中，當(dāng)下標a為1時，延伸單元(a)是支化單元。在其它實施方式中，當(dāng)aa包含支化單元(b)且下標a為2或更大時，b優(yōu)選位于aa的遠端亞基。在其它實施例中，b優(yōu)選地連接到ww的近端，并且b優(yōu)選地位于aa的遠端(例如，b是ao，當(dāng)aa是-a1-ao-或aa是-a1-ao-b-時)。對于這些實施方式中的任一個，支化單元被溶解單元取代。

在更有選實施方式中，a或-a1-ao-中的a1和ao獨立地由結(jié)構(gòu)(3)或(4)表示：

其中連接至任一結(jié)構(gòu)的羰基部分的波浪線表示優(yōu)選通過酰胺官能團將a或ao接合至w或a1接合至ao的點，并且其中任一結(jié)構(gòu)的氨基部分的波浪線表示接合a或a1至lb或lb’或a1的含羰基的官能團的點，優(yōu)選形成酰胺官能團；其中可變基團如先前針對表示a的結(jié)構(gòu)所定義。在優(yōu)選的實施方式中，l不存在(即，q為0)，并且g為氫、bu、-co2h或-nh2或天然存在的氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈。在其他優(yōu)選實施方式中，k是碳并且r⁴¹、r⁴²、r⁴³和r⁴⁴各自出現(xiàn)時是氫。在其他優(yōu)選實施方式中，r³⁸-r⁴⁴各自出現(xiàn)時是氫。其它優(yōu)選實施方式具有其中k是氮并且r⁴¹、r⁴²之一不存在且另一個是氫的結(jié)構(gòu)(3)。其他優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(4)，其中r是1，k是氮，且r⁴¹、r⁴²中的一個不存在且另一個是氫。在其它優(yōu)選實施方式中，結(jié)構(gòu)(3)的p和q是0或者結(jié)構(gòu)(4)的q和r是0。其它優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(3)，其中p和q都是0，并且k與r⁴¹和r⁴²一起是-c(＝o)-。其它優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(4)，其中q都是1，并且l與r⁴³和r⁴⁴一起是-c(＝o)-。

結(jié)構(gòu)(3)和(4)也表示-w3-w2-w1-中的w2并且在后者中提供的支化單元的優(yōu)選實施方案，g是-co2h或-nh2或天然存在的氨基酸，如天冬氨酸、谷氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈。

在更優(yōu)選實施方式中，a、a1或ao具有(3a)或(4a)的結(jié)構(gòu)

其中p或q是0或1。

當(dāng)lss或ls部分包含a或a1時，優(yōu)選的a或a1結(jié)構(gòu)對應(yīng)于其中r³⁸不存在的(3)，(3a)，(4)和(4a)所示的結(jié)構(gòu)，g是堿性單元(bu)并且n-末端氮以該部分環(huán)系統(tǒng)的亞胺氮引入m¹或m²部分，或者以琥珀酸酰胺的酰胺氮引入m³部分。

在其它更優(yōu)選的實施方式中，a或a的a1和ao在結(jié)構(gòu)上獨立地對應(yīng)于α-氨基、β-氨基或其它含胺酸。當(dāng)lss或ls部分包含a或a1時，優(yōu)選的a或a1部分在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于被bu取代的α-氨基、β-氨基或其它含胺酸(即，是含二氨基的酸)，其中由a(bu)或a1(bu)表示的bu-取代的α-氨基、β-氨基或其它含胺酸的n-末端氮以該部分環(huán)系統(tǒng)的亞胺氮引入m¹或m²部分或作為琥珀酸酰胺部分的酰胺氮引入m³中。

在這些實施方式中，特別優(yōu)選的a(bu)或a1(bu)具有(3)或(3a)的結(jié)構(gòu)，其中p為0且g為bu或具有(4)或(4a)的結(jié)構(gòu)，其中q為1且g是bu。在其中存在ao的包含q¹的實施方式中，對應(yīng)于ao的特別優(yōu)選的含胺酸具有-nh2-x¹-co2h的結(jié)構(gòu)，其中x¹是任選取代的c1-c6-亞烷基，包括ε-氨基-己酸和β-氨基-丙酸。

在優(yōu)選實施方案中，ldc及其藥物接頭前體的接頭單元包含q2，其提供具有糖苷酶識別位點的糖苷鍵合糖。在包含q2的其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb'-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中a1和ao是a的亞基，其中ao是任選的亞基(即，當(dāng)ao不存在時，a1變?yōu)閍)，r⁴⁵是-ch2oh或-co2h，并且r⁸、r⁹、v、z³、e和j如之前定義。在更優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫。在其他更優(yōu)選實施方式中，e是-o-。在其他更優(yōu)選實施方式中，j是-nh-。在其他更優(yōu)選實施方式中，v和z³中的一個或兩個是-ch＝。還更優(yōu)選的是其中l(wèi)b'具有馬來酰亞胺部分(m¹)的結(jié)構(gòu)或其中l(wèi)b具有琥珀酰亞胺部分(m²)或琥珀酸-酰胺(m³)部分的結(jié)構(gòu)的那些實施方式。更優(yōu)選的是其中l(wèi)b'-a1具有結(jié)構(gòu)m¹-a1，或lb-a1具有上述m²-a1或m³-a1給定的結(jié)構(gòu)的那些實施方式。在這些實施方式中的任一個中

在包含q2的優(yōu)選實施方式中，ao存在并具有先前(3)、(3a)、(4)或(4a)定義的結(jié)構(gòu)，其中連接至任何一個結(jié)構(gòu)的羰基部分的波浪線表示優(yōu)選通過酰胺官能團將ao接合至j的點，并且其中任一結(jié)構(gòu)的氨基部分的波浪線表示與a1的含羰基的官能團的接合點，優(yōu)選形成酰胺官能團；其中可變基團如先前針對表示a的結(jié)構(gòu)所定義。在優(yōu)選的實施方式中，l不存在(即，q為0)，并且g為氫、-co2h或-nh2或天然存在的氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈。在其他優(yōu)選實施方式中，k是碳并且r⁴¹、r⁴²、r⁴³和r⁴⁴各自出現(xiàn)時是氫。在其他優(yōu)選實施方式中，r³⁸-r⁴⁴各自出現(xiàn)時是氫。其它優(yōu)選實施方式具有其中k是氮并且r⁴¹、r⁴²之一不存在且另一個是氫的結(jié)構(gòu)(3)。其他優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(4)，其中r是1，k是氮，且r⁴¹、r⁴²中的一個不存在且另一個是氫。在其它優(yōu)選實施方式中，結(jié)構(gòu)(3)的p和q是0或者結(jié)構(gòu)(4)的q和r是0。其它優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(3)，其中p和q都是0，并且k與r⁴¹和r⁴²一起是-c(＝o)-。其它優(yōu)選實施方式具有結(jié)構(gòu)(4)，其中q都是1，并且l與r⁴³和r⁴⁴一起是-c(＝o)-。

在更優(yōu)選的實施方式中，a或a的a1和ao在結(jié)構(gòu)上獨立地對應(yīng)于α-氨基、β-氨基或其它含胺酸。在其他具有包含a或a1的lss或ls部分的更優(yōu)選實施方式中，優(yōu)選的a或a1結(jié)構(gòu)對應(yīng)于其中r³⁸不存在的(3)，(3a)，(4)和(4a)所示的結(jié)構(gòu)，g是堿性單元(bu)并且n-末端氮以該部分環(huán)系統(tǒng)的亞胺氮引入m¹或m²部分，或者以琥珀酸酰胺的酰胺氮引入m³部分。當(dāng)lss或l的其他優(yōu)選的a或a1部分在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于被bu取代的α-氨基、β-氨基或其它含胺酸(即，是含二氨基的酸)，其中由a(bu)或a1(bu)表示的bu-取代的α-氨基、β-氨基或其它含胺酸的n-末端氮以該部分環(huán)系統(tǒng)的亞胺氮引入m¹或m²部分或作為琥珀酸酰胺部分的酰胺氮引入m³中。

在其中存在ao的包含q2的實施方式中，對應(yīng)于ao的特別優(yōu)選的含胺酸具有-nh2-x¹-co2h的結(jié)構(gòu)，其中x¹是任選取代的c1-c6-亞烷基，包括ε-氨基-己酸和β-氨基-丙酸。

特別優(yōu)選的是上述含lb實施方式中的任一個，其中與lb鍵連的靶向部分是抗體。

1.4季銨化藥物單元

含叔胺的藥物的有用類別包括例如但不限于對異常細胞或異常細胞(即腫瘤相關(guān)細胞)附近的正常細胞具有細胞生長抑制或細胞毒性活性的那些。在一些實施方式中，含叔胺的藥物對高刺激的免疫細胞具有細胞生長抑制或細胞毒性活性。在其它實施方式中，含叔胺的藥物對腫瘤細胞或腫瘤相關(guān)細胞具有細胞生長抑制或細胞毒性活性。這種含叔胺的藥物包括具有n-末端叔胺部分的特吡萊辛、尾海兔素和奧瑞他汀、吩嗪二聚體和基于四氫喹啉的mdr抑制劑。

1.4.1季銨化尾海兔素和奧瑞他汀

在一些實施方案中，抗增殖季銨化含叔胺藥物是含叔胺尾海兔素，包括尾海兔素10、尾海兔素15和相關(guān)化合物，其中尾海兔素10和尾海兔素15所示的氮通過共價結(jié)合在lo中的pab或pab型自毀部分的芐基位置季銨化。

尾海兔素10

尾海兔素15

在那些實施方式中，與尾海兔素10相關(guān)的示例性尾海兔素是其中尾海兔素10的苯基和噻唑取代基被獨立選擇的芳基或雜芳基部分替代的那些。其他示例性的尾海兔素與尾海兔素15有關(guān)，其中c末端酯部分被酰胺官能團取代，其中該官能團的酰胺氮被芳基烷基或雜芳基烷基部分取代。

其他基于尾海兔素的微管蛋白破壞劑的結(jié)構(gòu)如下，其中通過共價結(jié)合至pab或pab型自毀部分的芐基位置將指定的氮季銨化：

其中各r¹⁰、r¹¹和r¹⁸是獨立選擇的任選取代的c1-c6烷基，并且獨立選擇的ar或ar1和ar2是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基。其他具有能夠季銨化的叔胺的尾海兔素的類肽模擬物由以下提供：schmitt等，“尾海兔素15類肽的合成(synthesisofdolastatin15peptoids)”bioorg.med.chem.lett.(1998)8(4)：385-8。在優(yōu)選實施方式中，r¹⁰和r¹¹是甲基。在其他優(yōu)選實施方式中，r¹⁸是叔丁基。在其他優(yōu)選實施方式中，ar是任選取代的苯基或獨立選擇的ar1和/或ar2是任選取代的苯基。在其他優(yōu)選實施方式中，ar1是苯基并且ar2是2-噻唑基。

在一些實施方式中，季銨化藥物是具有n-末端叔胺的奧瑞他汀，其氮通過其與pab或pab型自毀部分的芐基位置的共價結(jié)合被季銨化。具有n-末端叔胺的奧瑞他汀的合成和結(jié)構(gòu)描述于美國專利申請?zhí)?003-0083263、2005-0238649、2005-0009751、2009-0111756、和2011-0020343；國際專利公開號wo04/010957、國際專利公開號wo02/088172、和美國專利號7,659,241和8,343,928；其各自通過引用納入并用于所有目的。具體地，在這些專利文獻中公開的具有能夠季銨化的叔胺的奧瑞他汀結(jié)構(gòu)及其可變基團通過引用并入本文中，它們公開的奧瑞他汀結(jié)構(gòu)和合成通過引用并入本文。從本發(fā)明的ldc釋放的含叔胺的奧瑞他汀結(jié)合微管蛋白，并由于該結(jié)合而對希望的細胞(即靶細胞)施加細胞毒性或細胞生長抑制作用。

具有n-末端叔胺的示例性奧瑞他汀由下式表示，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單位(d⁺)納入到ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中r¹⁰和r¹¹獨立地是c1-c8烷基；r¹²是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)或-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹³是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁴是氫或甲基，或者r¹³和r¹⁴與它們接合的碳一起包含c3-c8環(huán)烷基；r¹⁵是氫或c1-c8烷基；r¹⁶是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁷獨立地是氫、-oh、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基和o-(c1-c8烷基)；r¹⁸是氫或c1-c8烷基；r¹⁹是-c(r^19a)2-c(r^19a)2-芳基、-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8雜環(huán))或-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8環(huán)烷基)，其中各r^19a獨立地是氫、c1-c8烷基、-oh或-o-c1-c8烷基；

r²⁰是氫、c1-c20烷基、芳基、c3-c8雜環(huán)、-(r⁴⁷o)m-r⁴⁸、和-(r⁴⁷o)m-ch(r⁴⁹)2；r²¹是芳基烷基，包括-ch2ph、羥基烷基，包括-ch(ch3)-oh或c3-c8雜環(huán)；z是o、s、nh、或nr⁴⁶，其中r⁴⁶是c1-c8烷基；m是1-1000的整數(shù)；r⁴⁷是c2-c8烷基；r⁴⁸是氫或c1-c8烷基；r⁴⁹獨立地是-cooh、-(ch2)n-n(r⁵⁰)2、-(ch2)n-so3h、或-(ch2)n-so3-c1-c8烷基；r⁵⁰獨立地是c1-c8烷基、或-(ch2)n-cooh；n是0-6的整數(shù)；并且x¹是c1-c10亞烷基。

一些優(yōu)選的具有n-末端叔胺的奧瑞他汀由下式表示，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單位(d⁺)納入到ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中r¹⁰和r¹¹獨立地是de-1、de-2結(jié)構(gòu)中的c1-c6烷基，并且

df-1、de-1或de-2中的ar是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，并且df-1z是-o-，或-nh-r²⁰是氫、c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，并且r²¹是任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基烷基或任選取代的雜芳基烷基。

在更優(yōu)選的實施方式中，r¹⁰和r¹¹是甲基。在de-1或de-2中的其它更優(yōu)選的實施方式中，ar是任選取代的苯基或任選取代的2-吡啶基。在df-1的其它更優(yōu)選的實施方式中，r²¹是x¹-s-r^21a或x¹-ar，其中x¹是c1-c6亞烷基，r^21a是低級烷基，ar是任選取代的苯基或雜芳基。在其他優(yōu)選實施方式中，-z-是-o-并且r²⁰是低級烷基。在其它優(yōu)選的實施方式中，z是-nh-并且r²⁰是任選取代的苯基或任選取代的雜芳基。在其他實施方式中，r²¹是-x¹-ar，x是-nh-并且r²⁰是ar，其中x¹和ar如之前r²¹所述獨立選擇。

一些優(yōu)選的具有n-末端叔胺的奧瑞他汀由下式表示，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單位(d⁺)納入到ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中r¹⁰和r¹¹是甲基，r¹³是異丙基或-ch2-ch(ch3)2，并且r^19b是-ch(ch2ph)-2-噻唑、-ch(ch2ph)-2-吡啶基、-ch(ch2-p-cl-ph)、-ch(co2me)-ch2ph、-ch(co2me)-ch2ch2sch3、ch(ch2ch2sch3)c(＝o)nh-3-喹啉基、-ch(ch2ph)c(＝o)nh-p-cl-ph或r^19b具有結(jié)構(gòu)

納入季銨化藥物單元的特別優(yōu)選的含叔胺的奧瑞他汀包括但不限于奧瑞他汀e、奧瑞他汀pe、奧瑞他汀phe、奧瑞他汀pye、奧瑞他汀efp、奧瑞他汀eb和奧瑞他汀evb。

在一些實施方式中，具有n-末端叔胺的奧瑞他汀或尾海兔素的lb’-lo-d⁺部分具有以下結(jié)構(gòu)

其中l(wèi)b’是馬來酰亞胺部分(m¹)并且a、w、v、z¹和z²如前面對式1所定義，并且ar、ar1、ar2、和r¹⁹如前面含叔胺的尾海兔素和奧瑞他汀所定義，其中si(間隔單元y所包含)的苯胺氮通過苯胺官能團的羰基與w鍵合。在優(yōu)選實施方式中，v、z¹、z²中的兩個或更多個是＝ch-。在其它優(yōu)選實施方式中，ar或ar1和ar2獨立地是任選取代的苯基。在更優(yōu)選的實施方式中，ar是苯基或者ar1和ar2均為苯基且v、z¹和z²為＝ch-。

在其它優(yōu)選實施方式中，具有肽可切割單元的式lb’-lo-d⁺的藥物接頭化合物，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀，具有以下結(jié)構(gòu)：

在包含季銨化的奧瑞他汀藥物單元的任何一個上述實施方式中，優(yōu)選的實施方式是其中l(wèi)b’(即m¹)被lb部分替代，lb部分也與靶向部分鍵合以提供ldc，其中l(wèi)b部分是m²或m³部分和/或a被-a1-ao取代，其中a1和ao是a的亞基。

在包含結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于de、df、df-1、de-1、de-2或df/e-3的季銨化奧瑞他汀藥物單元的上述含lb或lb’的部分中任何一個中，優(yōu)選的可切割單元(w)包含由能夠切割將w共價接合到si的苯胺鍵的組織蛋白酶識別的二肽。在更優(yōu)選實施方式周公，w包含具有結(jié)構(gòu)的二肽，其中r³⁴和r³⁵以及連接至a(或其亞基)和y單元的波浪線如之前定義。在特別優(yōu)選的實施方式中，r³⁴是-ch(ch3)2，r³⁵是-(ch2)3-nh(＝o)nh2，或r³⁴是-ch(ch3)2并且r³⁵是-ch3；并且其中連接至r3⁴和r³⁵的α碳在l-氨基酸的相同絕對構(gòu)型中。

在包含季銨化的奧瑞他汀藥物單元的上述含有l(wèi)b或lb’部分的任何一個中，優(yōu)選的延伸單元a或其亞基(即a1)在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于α氨基酸、β氨基酸或其它含胺酸如具有式nh2-x¹-co2h的含胺酸，其中x¹是c1-c6亞烷基，其中含胺酸的n末端氮對應(yīng)于m¹或m²部分的馬來酰亞胺或琥珀酰亞胺酰亞胺氮或琥珀酸-酰胺(m³)部分的酰胺氮，并且羰基對應(yīng)于通過酰胺官能團與w鍵合的含胺酸的c末端。因此，優(yōu)選的m¹-a-、m²-a或m³-a部分或優(yōu)選的m¹-a1-、m²-a1或m³-a1部分具有以下結(jié)構(gòu)

更優(yōu)選對應(yīng)于或衍生自β-氨基丙酸、γ-氨基丁酸或ε-氨基己酸的那些a單元或其亞基。其它優(yōu)選的a或a1部分在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于或衍生自具有式nh2-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-c(＝o)oh的含二氨基的酸，其中r^a1具有式-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)，其中可變基團如先前對a(bu)-和a1(bu)-部分所定義。更優(yōu)選的是其中r^a1是-ch2nh2的那些a或a1部分。因此，優(yōu)選的-a-或a1具有-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-c(＝o)-的結(jié)構(gòu)。

在具有肽可切割單元w的式lb’-lo-d⁺的藥物接頭化合物的更優(yōu)選實施方式中，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀具有以下結(jié)構(gòu)：

在一些實施方式中，更優(yōu)選的是具有肽可切割單元的式lb’-lo-d⁺的藥物接頭化合物，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀，和包含m¹和x¹的延伸單元，具有以下結(jié)構(gòu)

在結(jié)構(gòu)與de、df、df-1、de-1、de-2或df/e-3相對應(yīng)的包含季銨化的奧瑞他汀藥物單元的上述含lb或lb’的部分的任何一個中，a可含有2個亞基，其中上述結(jié)構(gòu)中的-a-被-a1-ao-取代，其中a1具有如上對于a所定義的結(jié)構(gòu)，并且其中ao在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于另一種含胺酸。優(yōu)選具有式-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-ao-的-a1-ao-部分，其中r^a1具有式-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)其中ao與w鍵合，并且a1通過酰胺官能團與ao鍵合，并且其中具有r^a1和r^a2取代基的碳與m¹或m²部分的酰亞胺氮或酰胺酸m³部分的酰胺氮鍵合。在上述包含結(jié)構(gòu)上與de、df、de-1、de-2或df、df1或df/e-3相對應(yīng)的季銨化奧瑞他汀藥物單元的上述含lb-a-或lb’-a-的部分中任一個中，特別優(yōu)選其中l(wèi)b’是m¹，lb是m²或lb是m^3a或m^3b，其中m^3a和m^3b為來自m²水解開環(huán)的琥珀酸-酰胺部分m³的區(qū)域異構(gòu)體，其中m¹-a-、m²-a-、m^3a-a-、m^3b-a、m¹-a1-ao、m²-a1-ao、m^3a-a1-ao或m^3b-a1-ao具有以下結(jié)構(gòu)：

其中連接至羰基部分的波浪線表示與w的共價鍵，而另一條波浪線表示與靶向部分的巰基的共價鍵。

其中l(wèi)b’是m¹并且d⁺為季銨化的奧瑞他汀，-a1-ao-具有-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-(ch2)m’-c(＝o)-的結(jié)構(gòu)的藥物接頭化合物的優(yōu)選實施方式具有以下結(jié)構(gòu)：

在其他實施方式中，式lb’-lo-d⁺的藥物-接頭化合物包含季銨化尾海兔素或奧瑞他汀藥物單元和可被糖苷酶切割的w’單元，其中l(wèi)b’-lo-d⁺部分具有以下結(jié)構(gòu)：

其中l(wèi)b’是馬來酰亞胺部分(m¹)，a、v和z3如先前對式1和si單元實施方式所定義，ar、ar1、ar2和r¹⁸如前面對基于奧瑞他汀的季銨化藥物單元所定義，r⁴⁵是-co2h或ch2oh，其中作為間隔單元y的si的苯胺氮通過苯胺官能團的羰基與a鍵合。在優(yōu)選實施方式中，v、z³中的一個或兩個是＝ch-。

在包含季銨化的奧瑞他汀藥物和作為糖苷酶切割單位(即葡糖苷酸單位)的w’的上述含lb或lb’部分的任何一個中，a可以含有2個亞基，其中上述結(jié)構(gòu)中的-a-被-a1-ao-取代，其中a1具有如上對a所定義的結(jié)構(gòu)，并且其中ao在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于另一種含胺酸。在更優(yōu)選的實施方式中，包含季銨化的尾海兔素或奧瑞他汀藥物單元的lb'-lo-d⁺部分具有以下結(jié)構(gòu)：

在其它優(yōu)選的實施方式中，lb’(即m¹)被lb部分替代，lb部分也與靶向部分鍵合以提供ldc，其中l(wèi)b部分是m²或m³部分。在更優(yōu)選的實施方式中，通過糖苷鍵共價接合到si的糖部分具有β-構(gòu)型的異頭碳。在其它更優(yōu)選的實施方式中，r⁴⁵是-co2h。

在具有延伸單元和葡糖苷酸單元的實施方式中，優(yōu)選以下結(jié)構(gòu)的那些：

在具有包含m¹和x¹的延伸單元和葡糖苷酸單元的實施方案中，更優(yōu)選的是以下結(jié)構(gòu)的那些：

其中r⁴⁵優(yōu)選是-co2h并且下標m是4。

在其它優(yōu)選實施方式中，上述實施方式中的任何一個中的a被如本文中含lb或lb’-部分所定義的-a1-ao-取代，該含lb或lb’-部分包含季銨化奧瑞他汀藥物單元和具有式-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-(ch2)m’-c(＝o)-、-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b)(r^b)]m-(c＝o)-nh-ch(co2h)-(ch2)m’-1-c(＝o)-或-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-(ch2)m’-1-ch(co2h)-c(＝o)-的蛋白酶可切割w單元。其它優(yōu)選的-a1-ao-部分如對于相應(yīng)的季銨化的特吡萊辛藥物單元所述。

在這些實施方式中，優(yōu)選的藥物接頭化合物具有以下結(jié)構(gòu)

1.4.1季銨化特吡萊辛

在一組實施方式中，季銨化藥物在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于在n-末端具有叔胺的特吡萊辛，其中該叔胺的氮被并入季銨化藥物單元中。

在一些實施方式中，季銨化藥物是由下式的結(jié)構(gòu)表示的特吡萊辛，其中當(dāng)將這些化合物以季銨化藥物單位(d⁺)摻入ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中所述環(huán)表示5元或6元氮雜芳基，其中所述雜芳基所示的所需取代基彼此之間具有1，3-或間位關(guān)系，在剩余位置具有任選取代；r²是x^a-r^2a，其中x^a是-o-、-s-、-n(r^2b)-、-ch2-、-(c＝o)n(r^2b)-或-o(c＝o)n(r^2b)-其中r^2b是氫或任選取代的烷基，r^2a是氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基或-c(＝o)r^c，其中r^c是氫、任選取代的烷基或任選取代的芳基，或者r²是o-連接的取代基；r³是氫或任選取代的烷基；r⁴、r^4a、r^4b、r⁵和r⁶是獨立選擇的任選取代的烷基，一個r⁷是氫或任選取代的烷基，且另一個r⁷是任選取代的芳基烷基或任選取代的雜芳基烷基，并且m是0或1。在其他實施方式中，季銨化藥物是由結(jié)構(gòu)dg表示的特吡萊辛，其中一個r⁷是氫或任選取代的烷基，優(yōu)選低級烷基，另一個r⁷是獨立選擇的任選取代的烷基，優(yōu)選c1-c6烷基，m是0或1，優(yōu)選1，其中另一個可變基團如前所定義。

在一些方面，r²是x^a-r^2a，其中x^a是-o-、-s-、-n(r^2b)-、-ch2-、或-o(c＝o)n(r^2b)-，其中r^2b是氫或任選取代的烷基，r^2a是氫、任選取代的烷基、任選取代的芳基或-c(＝o)r^c，其中r^c是氫、任選取代的烷基或任選取代的芳基或者r²是o-連接的取代基。

在一些方面，r²是x^a-r^2a，其中x^a是-o-、-s-、-n(r^2b)-或-(c＝o)n(r^2b)-，其中r^2a和r^2b獨立地是氫或任選取代的烷基，或r²是o-連接的取代基。

在其他方面，dg或dh中的-n(r⁷)(r⁷)被-n(r⁷)-ch(r¹⁰)(ch2r¹¹)取代，以定義式dh’和dg’的季銨化特吡萊辛藥物：

其中r¹⁰是被-co2h或其酯取代的c1-c6烷基，r⁷是氫或獨立地選自r¹⁰的c1-c6烷基，或r⁷和r¹⁰與它們所接合的原子一起定義為5或6元雜環(huán)；并且r¹¹是芳基或5-或6-元雜芳基，任選被一個或多個，優(yōu)選1或2個，更優(yōu)選1個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、-oh和-o-c1-c6烷基，優(yōu)選-f、-ch3和-och3；剩余的可變基團如dg和dh所定義。

在另一方面，dg或dh中的-n(r⁷)(r⁷)中的一個r⁷為氫或c1-c6烷基，另一個r⁷為任選被-co2h或其酯，或任選取代的苯基取代的獨立選擇的c1-c6烷基。

在結(jié)構(gòu)dg和dh的一些實施方式中，一個r⁷是氫，另一個r⁷是任選取代的具有以下結(jié)構(gòu)的芳基烷基：

，其中r^7b是氫或o-連接的取代基，優(yōu)選對位氫或-oh，并且r^8a是氫或低級烷基，優(yōu)選甲基；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。

在結(jié)構(gòu)dg或dh的優(yōu)選實施方式中，一個r⁷是氫，另一個r⁷是具有以下結(jié)構(gòu)的任選取代的芳基烷基

，其中r^7b是-h或-oh；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。

在結(jié)構(gòu)dg和dh的其它實施方式中，一個r⁷是氫或低級烷基，優(yōu)選氫或甲基，更優(yōu)選氫，另一個r⁷是任選取代的具有以下結(jié)構(gòu)之一的芳基烷基：

，其中z是任選取代的亞烷基或任選取代的亞烯基，r^7b是氫或o-連接的取代基，優(yōu)選對位氫或-oh，r^8a是氫或低級烷基，優(yōu)選甲基，并且下標n是0、1或2，優(yōu)選0或1；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。在結(jié)構(gòu)dg和dh的另外其它實施方式中，-n(r⁷)(r⁷)是-nh(c1-c6烷基)，其中c1-c6烷基任選被-co2h或其酯或任選取代的苯基取代。在優(yōu)選的實施方式中，-n(r⁷)(r⁷)選自下組：-nh(ch3)、-ch2ch2ph、和-ch2-co2h、-ch2ch2co2h和-ch2ch2ch2co2h。

在結(jié)構(gòu)dg'和dh’的一些實施方案中，r⁷和r¹⁰與它們接合的原子一起定義任選取代的5或6元雜環(huán)，其中-n(r⁷)-ch(r¹⁰)(ch2r¹¹)具有結(jié)構(gòu)：其中波浪線表示與dg’或dh’的其余部分的接合點。

一些優(yōu)選的特吡萊辛由下式表示，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單元(d⁺)納入到ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中所述環(huán)表示5元或6元氮雜芳基，其中所述雜芳基所示的所需取代基彼此之間具有1，3-或間位關(guān)系，在其余位置具有任選取代；r^2a是氫或任選取代的烷基或r^2a與其接合的氧原子一起定義o-連接的取代基；r³是氫或任選取代的烷基；r⁴、r^4a、r^4b、r⁵和r⁶是獨立選擇的任選取代的烷基；r^7a是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，r^8a是氫或任選取代的烷基，并且m是0或1。

在結(jié)構(gòu)dg、dg-1、dh、或dh-1的一些優(yōu)選實施方式中，r⁴是甲基或r^4a和r^4b是甲基。在結(jié)構(gòu)dg’或dh’的其它優(yōu)選實施方式中，r⁴是甲基或r^4a和r^4b是甲基。在其它優(yōu)選實施方式中，r^7a是任選取代的苯基。在其他優(yōu)選實施方式中，r^8a是(s)-構(gòu)型的甲基。在其它優(yōu)選實施方式中，r^2a連同其所接合的氧原子一起定義除-oh以外的o-連接的取代基，更優(yōu)選酯、醚或o-連接的氨基甲酸酯。在更優(yōu)選的實施方式中，該環(huán)表示特別優(yōu)選的具有二價噁唑或噻唑部分的5元氮-亞雜芳基。在其它優(yōu)選實施方式中，r⁴是甲基或r^4a和r^4b是甲基。在其它優(yōu)選實施方式中，r⁷是任選取代的芳基烷基，其中芳基為苯基，且r^7a是任選取代的苯基。

在dg、dg’、dg-1、dh、dh’或dh-1的其它實施方式中，該環(huán)表示5元氮雜亞芳基，優(yōu)選由結(jié)構(gòu)表示，其中x^b為o，s或n-r^b，其中r^b是氫或低級烷基。優(yōu)選地，季銨化藥物是由結(jié)構(gòu)dg、dg’或dg-1表示的特吡萊辛，其中m是1。更優(yōu)選的是由結(jié)構(gòu)dg表示的特吡萊辛，其中m是1，并且該環(huán)代表任選取代的二價噻唑部分。

其他優(yōu)選的特吡萊辛由下式表示，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單元(d⁺)納入到ldc中時，所指示的氮是季銨化位點：

其中r^2a與其所接合的氧原子一起定義了o-連接的取代基，優(yōu)選酯、醚或o-連接的氨基甲酸酯，r³是低級烷基或-ch2oc(＝o)r^3a，其中r^3a是任選取代的低級烷基，并且r^7b是氫或o-連接的取代基，優(yōu)選對位。在更優(yōu)選的實施方案中，r³是甲基或r^3a是甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基或-ch2c＝(ch3)2。在其它優(yōu)選的實施方式中，r^2a是甲基、乙基、丙基(即，-or^2a是醚)或是-c(＝o)r^2b(即-or^2a是酯)，其中r^2b是具有r^2b作為甲基的低級烷基(即，-or^2a是乙酸酯)。具有n-末端叔胺作為偶聯(lián)位點的更優(yōu)選的特吡萊辛具有下式之一的結(jié)構(gòu)：

其中r^7b是氫或-oh，r³是低級烷基，優(yōu)選甲基或乙基，并且r^2b和r^2c獨立地是氫或低級烷基。在結(jié)構(gòu)dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dh、dh-1和dh-2中的任一種的一些優(yōu)選實施方案中，r³是甲基或-ch2oc(＝o)r^3a，其中r^3a是任選取代的烷基。在結(jié)構(gòu)dg’和dh’中任何一個的其它優(yōu)選實施方式中，r³是甲基或是-ch2oc(＝o)r^3a，其中r^3a是任選取代的烷基。在這些結(jié)構(gòu)中的任一個的其它優(yōu)選實施方式中，r³是-c(r^3a)(r^3a)c(＝o)-x^c，其中x^c是-or^3b或-n(r^3c)(r^3c)，其中各r^3a、r^3b和r^3c獨立地是氫、任選取代的烷基或任選取代的環(huán)烷基。優(yōu)選地，r³是-c(r^3a)(r^3a)c(＝o)-n(r^3c)(r^3c)，r^3a是氫，一個r^3c是氫和另一個r^3c是正丁基或異丙基是更優(yōu)選的。

在dg、dg’、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dh、dh’、dh-1和dh-2的結(jié)構(gòu)中任一個的其他優(yōu)選實施方式中，r³是乙基或丙基。

在dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dh-1和dh-2的結(jié)構(gòu)中任一個的其他優(yōu)選實施方式中，噻唑核心雜環(huán)被或替代。

在dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dh、dh-1、dh-2、dh-3和dh-4的結(jié)構(gòu)中任一個的其他優(yōu)選實施方式中，r³是甲基或是-ch2oc(＝o)r^3a，其中r^3a是任選取代的烷基。在這些結(jié)構(gòu)中的任一個的其它優(yōu)選實施方式中，r³是-c(r^3a)(r^3a)c(＝o)-x^c，其中x^c是-or^3b或-n(r^3c)(r^3c)，其中各r^3a、r^3b和r^3c獨立地是氫、任選取代的烷基或任選取代的環(huán)烷基。優(yōu)選地，r³是-c(r^3a)(r^3a)c(＝o)-n(r^3c)(r^3c)，r^3a是氫，一個r^3c是氫和另一個r^3c是正丁基或異丙基是更優(yōu)選的。

在dg-3、dg-4、dg-5、dh-3和dh-4的結(jié)構(gòu)中任一個的其他優(yōu)選實施方式中，噻唑核心雜環(huán)被或替代。

在更優(yōu)選的實施方式中，特吡萊辛具有結(jié)構(gòu)dg-3或dg-4，其中m是1，r³是任選取代的甲基、乙基或丙基，優(yōu)選甲基、乙基或丙基。

在特別優(yōu)選的實施方式中，特吡萊辛具有結(jié)構(gòu)dg-3，其中m是1，r³是甲基、乙基或丙基，-oc(o)r^2b是-o-c(o)h、任選取代的o-c(o)-c1-c6烷基或-oc2-c6烯基，優(yōu)選-oc(o)ch3、-oc(o)ch2ch3、-oc(o)ch(ch3)2、-oc(o)c(ch3)3、或-oc(o)ch＝ch2。

在其它特別優(yōu)選的實施方式中，特吡萊辛具有結(jié)構(gòu)dg-4，其中m是1，r³是甲基、乙基或丙基，并且-och2r^2b是-och3、-och2ch3、-och2ch2ch3或-och2och3。

特別優(yōu)選的具有n-末端叔胺作為偶聯(lián)位點的微管蛋白列激素具有以下結(jié)構(gòu)

其中r^2b是-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2c(ch3)3，并且所指示的氮是這類化合物以季銨化藥物單元(d⁺)納入ldc時的季銨化位點。

其他具有n-末端叔胺作為偶聯(lián)位點的特別優(yōu)選的特吡萊辛具有以下結(jié)構(gòu)

其中r^2b是氫、甲基或-och3(即-och2r^2b是甲基乙基、甲氧基甲基醚取代基)。

在其它優(yōu)選實施方式中，以d⁺納入ldc的特吡萊辛是天然存在的特吡萊辛，包括特吡萊辛a、特吡萊辛b、特吡萊辛c、特吡萊辛d、特吡萊辛e、特吡萊辛f、特吡萊辛g、特吡萊辛h、特吡萊辛i、特吡萊辛u、特吡萊辛v、特吡萊辛w、特吡萊辛x或特吡萊辛z，其結(jié)構(gòu)由以下結(jié)構(gòu)和可變基團定義給出，其中當(dāng)這些化合物以季銨化藥物單元(d⁺)納入ldc中時，所示氮是季銨化位點：

表1.一些天然產(chǎn)生的特吡萊辛

在結(jié)構(gòu)dg-6的特別優(yōu)選的實施方式中，季銨化的特吡萊辛是微管蛋白列激素m，其中r³是-ch3，r²是c(＝o)ch3，并且r^7b是氫。

在一些實施方式中，包含lo和d⁺的lb-或其含lb’的前體將特吡萊辛藥物納入季胺單元中，其中l(wèi)b-或其含lb’的前體具有對應(yīng)于以下任何一種的結(jié)構(gòu)：本文所述的-lr-d⁺、lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺、lss-lo-d⁺，ls-d⁺、m¹-a、m²-a、m³-a、m¹-a1、m²-a1、m³-a1、m¹-a(bu)、m²-a(bu)、m³-a(bu)、m¹-a1(bu)、m²-a1(bu)或m³-a1(bu)部分，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀藥物。在優(yōu)選的實施方案中，具有dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dh、dh-1、dh-2、dh-3或dh-4結(jié)構(gòu)的特吡萊辛取代在所示叔胺氮中具有奧瑞他汀結(jié)構(gòu)的每個實施方案中的de、de-1、de-2、df、df-1或df/g-3。

因此，一些優(yōu)選的-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺實施方式具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r²、r³、r⁴、r^4a、r^4b、r⁵、r⁶和r⁷如dg和dh形成的游離形式的特吡萊辛藥物所述，其中l(wèi)b、lb’、q1、v、z¹和z²如先前對于含lb和lb’的部分的實施方式所述，該部分包含季銨化奧瑞他汀藥物單元及其lo和y單元，其lo和y單元包含si單元或由其組成，j為-o-、-s-或n(r³³)-，其中r³³為氫或任選取代的烷基。

其他優(yōu)選的-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺實施方式具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r^2a、r³、r⁴、r^4a、r^4b、r⁵、r⁶、r^7a和r^8a如dg-1和dh-1形成的游離形式的特吡萊辛藥物所述，其中l(wèi)b、lb’、q1、v、z¹和z²為如前包含季銨化的奧瑞他汀藥物單元及其lo和y單元的含lb和lb’的部分所述，其中l(wèi)o和y單元包含si單元或由si單元組成，j為-o-、-s-或n(r³³)-，其中r³³為氫或任選取代的烷基。

在更優(yōu)選的實施方式中，r^7a是任選被-oh取代的苯基，或者r^8a是甲基。在其它更優(yōu)選的實施方式中，r⁴或r^4a和r^4b是甲基。在其他優(yōu)選的實施方式中，j是-o-。

在其他優(yōu)選實施方式中，-lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

在更優(yōu)選實施方式中，r^7a是對位的氫或-oh。

在包含季銨化的特吡萊辛藥物單元的上述含lb或lb’部分的任何一個中，lb’是馬來酰亞胺部分(m¹)或lb是琥珀酰亞胺(m²)或琥珀酸-酰胺(m³)部分。

在包含季銨化的特吡萊辛藥物的上述含lb或lb’部分的任何一個的優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫。在其他優(yōu)選實施方式中，v、z¹和z²是＝ch-。在其他優(yōu)選實施方式中，-or²是酯或r³是低級烷基。在其他更優(yōu)選實施方式中，j是-nh-。在更優(yōu)選的實施方式中，q¹包含通過可由細胞內(nèi)或調(diào)節(jié)性蛋白酶切割的酰胺官能團與j共價結(jié)合的二肽，因此該基團的蛋白水解釋放出能夠進行1，6-片段化的si。

在包含季銨化的特吡萊辛藥物單元的任何一個上述實施方式中，更優(yōu)選的實施方式是其中l(wèi)b’(即，m¹)被lb部分取代，lb部分也與靶向部分鍵合以提供ldc，其中l(wèi)b部分是m²或m³部分的那些。

因此，lb-lo-d⁺或lb’-lo-d⁺的更優(yōu)選實施方式具有以下結(jié)構(gòu)之一：

其中波浪線表示m²或m³部分與靶向部分的巰基的共價結(jié)合。在優(yōu)選的實施方式中，-or^2a是c2-c6酯或r³是低級烷基，且r^7b是氫或-oh。在其它更優(yōu)選的實施方式中，-r^2a是任選取代的低級烷基，r³是低級烷基，獨立地選自r^2a，并且r^7b是氫或-oh。在特別優(yōu)選的實施方式中，r³是甲基、乙基或丙基，并且r^2a是-c(o)ch3、甲基、乙基、丙基或-ch2och3。

在其他優(yōu)選實施方式中，lb’-lo-d⁺或lb-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r²、r^2a、r³、r⁴、r^4a、r^4b、r⁵、r⁶、r^7a和r^8a如dg、dg’、dg-1、dh、dh’或dh-1形成的游離形式的特吡萊辛藥物所述，其中l(wèi)b、lb’、q1、v、z¹和z²為如前包含季銨化的奧瑞他汀藥物單元及其lo和y單元的相應(yīng)含lb和lb’的部分所述，其中l(wèi)o和y單元包含si單元或由si單元組成；e和j獨立地是-o-、-s-或n(r³³)-，其中r³³為氫或任選取代的烷基；并且r⁴⁵是co2h或ch2oh。在更優(yōu)選的實施方式中，j是-nh-。在其他優(yōu)選實施方式中，e是-o-。

更優(yōu)選的是其中l(wèi)b’是馬來酰亞胺(m¹)部分或lb是琥珀酰亞胺(m²)或酰胺-酸(m³)部分的那些實施方式。

在其他更優(yōu)選實施方式中，lb’-lo-d⁺具有以下結(jié)構(gòu)：

其中a、r^2a、r³、r⁴⁵、r^7b和r⁴⁵如前文所定義。在更優(yōu)選實施方式中，v、z³中的一個或兩個是＝ch-。

在更優(yōu)選的實施方式中，包含季銨化特吡萊辛藥物單元的lb’-lo-d⁺或-lb-lo-d⁺部分具有以下結(jié)構(gòu)：

其中波浪線表示與靶向部分的巰基的共價鍵。在更優(yōu)選的實施方式中，通過糖苷鍵共價接合到si的糖部分具有β-構(gòu)型的異頭碳。在其他優(yōu)選實施方式中，r⁴⁵是-ch2oh或-co2h。

在上述實施方案中，對于包含季銨化的特吡萊辛藥物的含lb-、lb’-、m¹-、m²-或m³-的部分，r³優(yōu)選為甲基或r²優(yōu)選為乙酸酯或m優(yōu)選為1。此外，對于這類含lb-、lb’-、m¹-、m²-或m³-的部分，優(yōu)選其中r³是甲基、乙基或丙基，并且-or^2a是-oc(o)ch3、-och3、-och2ch3或-och2ch2ch3的那些。

特別優(yōu)選的實施方式具有以下結(jié)構(gòu)：

其中波浪線表示與靶向部分的巰基的共價鍵合，其中r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-ch(oh)ch3或具有以下結(jié)構(gòu)：并且r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，并且r^7b是氫或-oh。

其他特別優(yōu)選的實施方式具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r²和r³獨立地是甲基、乙基或丙基，或r²是-c(o)ch3并且r³是甲基、乙基或丙基。

在包含季銨化的特吡萊辛藥物的含lb的部分的任何一個中，特別優(yōu)選的是其中結(jié)合的靶向部分是抗體的那些，并且在包含季銨化的特吡萊辛藥物的含m²或m³的部分的任何一種中，特別優(yōu)選的是鍵合巰基來自抗體靶向部分的那些。

在包含a的含lb-或lb’-的部分的結(jié)構(gòu)中的任何一個結(jié)構(gòu)中，a被-a1-ao-取代，其中a的亞基如當(dāng)存在于相應(yīng)的含lb-或lb’部分中時對于這些部分所述，這些部分包含季銨化奧瑞他汀藥物單元和具有延伸單元的lo。其他這類部分還描述于m¹-a、m²-a、m^3a-a和m^3b中的延伸單元。

對于包含季銨化的特吡萊辛藥物的含lb、lb’、m¹、m²或m³的部分中的任何一種，優(yōu)選的延伸基團在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于本文所定義的含胺酸，更優(yōu)選γ-氨基己酸。因此，一種優(yōu)選的延伸單元具有結(jié)構(gòu)-(ch2)5-c(＝o)-。其他優(yōu)選的延伸基團具有式-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-(ch2)m’-c(＝o)-、-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-ch(co2h)-(ch2)m’-1-c(＝o)-或-c(r^a1)(r^a2)-[c(r^b1)(r^b1)]m-(c＝o)-nh-(ch2)m，-1-ch(co2h)-c(＝o)-，其中m是0-5的整數(shù)并且m’是1-5的整數(shù)，其中r^a1是氫或具有式-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)并且其中其他可變基團如之前定義。對于那些延伸單元，r^b1優(yōu)選是-ch2nh2。

更優(yōu)選的是提供具有以下結(jié)構(gòu)的m¹-a、m²-a、m^3a-a和m^3b部分的那些延伸單元：

其他更優(yōu)選延伸單元是提供具有以下結(jié)構(gòu)的m¹-a1-ao-、m²-a1-ao、m^3a-a1-ao-和m^3b-a1-ao-部分的那些：

其他更優(yōu)選延伸單元是提供具有以下結(jié)構(gòu)的m¹-a1-ao-、m²-a1-ao、m^3a-a1-ao-和m^3b-a1-ao-部分的那些：

1.6高增殖病癥的治療

配體-藥物偶聯(lián)物可用于抑制腫瘤細胞或癌細胞的增殖，從而在腫瘤或癌細胞中引起細胞凋亡，或用于治療患者的癌癥。因此，所述配體-藥物偶聯(lián)物可用于癌癥治療的多種設(shè)定中。配體-藥物偶聯(lián)物可用于將藥物遞送至腫瘤細胞或癌細胞。不受理論的約束，在一個實施方式中，配體-藥物偶聯(lián)物的配體單元與細胞表面癌細胞或腫瘤細胞相關(guān)抗原或受體結(jié)合或締合，并且在結(jié)合后，配體藥物偶聯(lián)物可以通過抗原或受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用或其他內(nèi)化機制在腫瘤細胞或癌細胞內(nèi)被吸收(內(nèi)化)?？乖梢赃B接至腫瘤細胞或癌細胞，或可以是與腫瘤細胞或癌細胞相關(guān)的細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)。一旦在細胞內(nèi)，通過酶或非酶切割機制，根據(jù)接頭系統(tǒng)的組分，藥物在細胞內(nèi)釋放。在替代實施方式中，藥物或藥物單元從腫瘤細胞或癌細胞附近的配體-藥物偶聯(lián)物切割，并且藥物或藥物單元隨后穿透細胞。

配體藥物偶聯(lián)物可以提供偶聯(lián)特異性腫瘤或癌癥藥物靶向，從而降低藥物的一般毒性。

在一些實施方式中，接頭單元穩(wěn)定血液中的配體-藥物偶聯(lián)物，但是能夠在細胞內(nèi)釋放藥物。

在一個實施方式中，所述配體單元結(jié)合至腫瘤細胞或癌細胞。

在另一個實施方式中，所述配體單元結(jié)合至位于腫瘤細胞或癌細胞的表面上的腫瘤細胞或癌細胞抗原。

在另一個實施方式中，所述配體單元結(jié)合至腫瘤細胞或癌細胞抗原，所述腫瘤細胞或癌細胞抗原是與腫瘤細胞或癌細胞相關(guān)的細胞外基質(zhì)蛋白。

配體單元對于特定腫瘤細胞或癌細胞的特異性可能對于確定最有效地被治療的那些腫瘤或癌癥而言是重要的。例如，具有br96配體單元的配體藥物偶聯(lián)物可用于治療抗原陽性癌，包括肺、乳腺、結(jié)腸、卵巢和胰腺的那些。具有抗cd30或抗cd70結(jié)合配體單元的配體-藥物偶聯(lián)物可用于治療血液惡性腫瘤。

可以用配體藥物偶聯(lián)物治療的其它特定類型的癌癥包括但不限于以下實體瘤、血源性癌癥、急性和慢性白血病和淋巴瘤。

實體腫瘤包括但不限于纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏腫瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、腎癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨膜癌、精原細胞癌、胚胎癌、維爾姆斯氏腫瘤、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性膠質(zhì)母細胞瘤、星形細胞瘤、神經(jīng)管胚細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、皮膚癌、黑素瘤、神經(jīng)母細胞瘤和視網(wǎng)膜胚細胞瘤。

血源性癌癥包括但不限于急性淋巴細胞性白血病“all”，急性成淋巴細胞性白血病，急性淋巴細胞白血病，急性成髓細胞白血病“aml”，急性早幼粒細胞白血病“apl”，急性單核細胞白血病，急性紅細胞白血病，急性巨核細胞白血病，急性骨髓單核細胞性白血病，急性非淋巴細胞性白血病，急性未分化白血病，慢性骨髓性白血病“cml”，慢性淋巴細胞白血病“cll”，多毛細胞白血病和多發(fā)性骨髓瘤。

急性和慢性白血病包括但不限于淋巴細胞性，骨髓細胞性，淋巴細胞性和骨髓性白血病。

淋巴瘤包括但不限于霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫的巨球蛋白血癥，重鏈病和真性紅細胞增多癥。

癌癥，包括但不限于，特征為高增殖的細胞的腫瘤、轉(zhuǎn)移，或其它疾病或紊亂，可通過給予adc組合物來治療或抑制。

在其它實施方式中，提供治療癌癥的方法，包括給予有此需要的患者有效量的ldc組合物和化療劑。在一個實施方式中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)待用化療劑與ldc聯(lián)合治療的癌癥是化療劑難治的。在另一個實施方式中，待用化療劑與adc聯(lián)合治療的癌癥是化療劑難治的。所述ldc組合物可以給予已經(jīng)歷手術(shù)作為癌癥治療的患者。

在一些實施方式中，所述患者還接受其它治療，例如放療。在一個特定實施方式中，所述配體-藥物偶聯(lián)物與化療劑或放療同時施予。在另一個特定實施方式中，所述化療劑或放療是在給予配體藥物偶聯(lián)物之前或之后進行。

化療劑可經(jīng)一系列階段給予?？山o予任一化療劑或其組合，例如護理化療劑的標準品。

此外，提供采用配體-藥物偶聯(lián)物治療癌癥的方法，作為化療或放療的替代療法，其中所述化療或放療已證實或可被證實為毒性過高，例如，對于被治療的對象導(dǎo)致不可接受或不希望的副作用。被治療的患者可任選地用其它癌癥治療(例如手術(shù)、放療或化療)來治療，這取決于發(fā)現(xiàn)哪種治療是可接受或可忍耐的。

1.7包含ldc的藥物組合物

本發(fā)明提供包含本文所述的ldc組合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。藥物組合物可以是允許將ldc給予患者用于治療與所述adc結(jié)合的抗原的表達相關(guān)聯(lián)的病癥的任何形式。例如，所述藥物組合物可以是液體或凍干形式。優(yōu)選的給予途徑是胃腸外給予。胃腸外給予包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。在優(yōu)選的實施方式中，以液體溶液的形式靜脈內(nèi)給予包含adc的藥物組合物。

藥物組合物可經(jīng)配制，從而允許化合物在給予患者所述組合物之后具有生物可及性。這樣的組合物可以采取一個或多個劑量單位的形式，其中例如，當(dāng)加入合適的液體載體時，凍干固體可重新配制成溶液或懸浮液時提供單一劑量單位。

用于配制所述藥物組合物的物質(zhì)在其用量內(nèi)優(yōu)選是無毒的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)明了，所述藥物組合物中活性成分的最優(yōu)的劑量將取決于多種因素。相關(guān)的因素包括但不限于，動物類型(例如，人)、藥物組合物的具體形式、給藥方式和所用的ldc組合物。

藥物組合物可以是，例如，液體形式。液體可用于通過注射給予。在用于通過注射給予的組合物中，還可包含表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和等張劑中的一種或多種。

液體組合物(無論其是溶液、懸液還是其它類似形式)還可包含如下的一種或多種：無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液，優(yōu)選生理鹽水、林格氏溶液、等張氯化鈉、固定油(例如合成的甘油單酯或甘油二酯，其可作為溶劑或懸浮介質(zhì))、聚乙二醇、甘油、環(huán)糊精、丙二醇或其它溶劑；抗細菌劑，例如芐基醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如氨基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；洗滌劑，例如非離子型表面活性劑、多元醇；和用于調(diào)節(jié)張力的試劑，例如，氯化鈉或右旋糖。胃腸外組合物可以封裝于由玻璃、塑料或其它材料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水是示例性佐劑。可注射的藥物組合物優(yōu)選是無菌的。

有效治療具體病癥或狀況的偶聯(lián)物的量取決于病癥或狀況的性質(zhì)并且由已知的標準臨床技術(shù)確定。此外，可任選地進行體外或體內(nèi)試驗以助于鑒別最優(yōu)的劑量范圍。組合物所用的準確劑量也取決于給藥途徑和疾病或病癥的嚴重程度，應(yīng)該按照實施人員的判斷和各患者的情況決定。

藥物組合物包含有效量的ldc組合物，使得將獲得對于向有需要的受試者給藥適當(dāng)?shù)膭┝?。通常，該量是至少約0.01％，以藥物組合物的重量計。

對于靜脈內(nèi)給予，藥物組合物可包含約0.01至約100mg的ldc組合物/kg動物體重。在一方面中，藥物組合物可包含約1至約100mg的adc組合物/kg動物體重。在另一個方面中，給予的量將在約0.1至約25mg/kg體重的adc組合物的范圍內(nèi)。

一般而言，給予患者的ldc組合物的劑量通常是約0.01mg/kg至約100mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予患者的劑量是約0.01mg/kg至約15mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予患者的劑量是約0.1mg/kg至約15mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予患者的劑量是約0.1mg/kg至約20mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予的劑量是約0.1mg/kg至約5mg/kg或約0.1mg/kg至約10mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予的劑量是約1mg/kg至約15mg/kg對象體重。在一些實施方式中，給予的劑量是約1mg/kg至約10mg/kg對象體重。在一些實施方式中，在治療周期中，給予的劑量是約0.1至4mg/kg，優(yōu)選0.1至3.2mg/kg，或更優(yōu)選0.1至2.7mg/kg對象體重。

可通過任意方便途徑，例如，通過輸注或團注，通過上皮或粘膜皮膚襯里(例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)的吸收來給予ldc。給藥可以是全身給藥或局部給藥。各種遞送系統(tǒng)已知，例如，包封于脂質(zhì)體、微顆粒、微膠囊、膠囊等，并且可用于給予化合物。在某些實施方式中，向患者給予超過一種化合物或組合物。

在一個實施方式中，按照常規(guī)方法將該偶聯(lián)物配制成適合靜脈內(nèi)給予動物，尤其是人類的藥物組合物。用于靜脈內(nèi)給予的運載體或載劑通常是無菌的等張水性緩沖溶液。必要時，組合物還可包含溶解劑。用于靜脈注射的組合物可以任選地包括諸如利多卡因的局部麻醉劑，以減輕在注射部位的疼痛。通常，各成分單獨提供或混合在一起以單位劑型的形式提供，例如作為標明活性物質(zhì)含量的密封容器(如安瓿或藥囊)中的凍干粉末或無水濃縮物。通過輸液給予該偶聯(lián)物時，例如，可用含有無菌藥物級水或鹽水的輸液瓶分散該組合物。通過注射給予該偶聯(lián)物時，可提供一安瓿的無菌注射用水或鹽水，以便在給藥前與藥物成分混合。

藥物組合物一般配制成無菌的、基本等張并且完全符合美國食品與藥品管理局的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(gmp)規(guī)定。

本發(fā)明的藥物組合物包括本發(fā)明的ldc組合物和藥學(xué)上可接受的運載體。在一些優(yōu)選的實施方式中，藥物組合物中存在的全部、或幾乎全部、或超過50％的ldc包含水解的硫-取代的琥珀酰亞胺。在一些優(yōu)選的實施方式中，超過55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的藥物組合物中存在的配體藥物偶聯(lián)物包含水解的硫-取代的琥珀酰亞胺。

1.8制備

方案1：

方案1是式lb’-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的藥物-接頭化合物的示例性制備，其中l(wèi)b’是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過糖苷鍵與si結(jié)合的糖(su)部分，其中所述糖苷鍵可被糖苷酶切割，d⁺是季銨化的奧瑞他汀。在該特定的lb’-lo-d⁺部分中，lb’-a1(bu)-結(jié)構(gòu)表示示例性的lss部分。

方案2：

方案2是式lb'-a1(bu)-ao-y-w-d⁺的藥物-接頭化合物的示例性制備，其中l(wèi)b’是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過苯胺鍵與si鍵合的二肽部分，其中所述苯胺鍵可被調(diào)節(jié)性蛋白酶切割，d⁺是季銨化的奧瑞他汀。在該特定lb'-lo-d⁺部分中，lb'-a1(bu)-結(jié)構(gòu)表示共價鍵合到另一個延伸亞基的示例性lss部分，并且val-cit二肽部分提供了所述調(diào)節(jié)性蛋白酶的識別，在這種情況中是組織蛋白酶b。

方案3：

方案3是lb’-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的藥物-接頭化合物的示例性制備，其中l(wèi)b’是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過糖苷鍵與si結(jié)合的糖(su)部分，其中所述糖苷鍵可被糖苷酶切割，d⁺是季銨化的吩嗪二聚體。在該特定lb'-lo-d⁺化合物中，lb'-a1-ao-結(jié)構(gòu)表示具有兩個延伸亞基的m¹-a部分(即-a-是-a1-ao-)。

方案4：

方案4是作為用于獲得式lb'-lo-d⁺的藥物-接頭化合物的中間體的式nh2-w-y-d⁺化合物的示例性制備，其中y是pab自毀(si)部分，w是通過苯胺鍵與si鍵合的二肽部分，其中所述苯胺鍵可被調(diào)節(jié)性蛋白酶切割，d⁺是季銨化的特吡萊辛藥物單元。

方案5：

方案5是從方案4的nh2-w-y-d⁺中間體與lb’-a-co2h或lb'-a(bu)-co2h中間體，其中l(wèi)b’是馬來酰亞胺(m¹)部分的肽偶聯(lián)獲得的lb'-a-w-y-d⁺藥物-接頭化合物和lb'-a(bu)-w-y-d+接頭化合物的示例性制備。如此形成的產(chǎn)物，m¹-a-w-y-d⁺和m¹-a(bu)-w-y-d⁺是具有季銨化的特吡萊辛藥物單元的示例性lb'-lo-d⁺藥物-接頭化合物。

方案6：

方案6是lb'-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺部分的示例性制備，其中l(wèi)b’是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過糖苷鍵與si結(jié)合的糖(su)部分，其中所述糖苷鍵可被糖苷酶切割，d⁺是季銨化的mdr抑制劑，其中該抑制劑是tariquidar。在該特定的lb'-lo-d⁺部分中，lb’-a(bu)-結(jié)構(gòu)表示示例性的lss部分。

方案7：

方案7表示式dg-4的特吡萊辛的示例性制備，其中r^7b是氫，并且r^2b是氫、甲基或乙基，其具有醚(即甲基、乙基或丙基醚)作為取代特吡萊辛m的特吡瓦林部分的乙酸酯的o-連接取代基，并且不具有這些特吡萊辛的化學(xué)不穩(wěn)定的n，o-縮醛官能團。通過用醚部分取代水解不穩(wěn)定的特吡瓦林乙酸酯取代基，化合物64-66與特吡萊辛m相比進一步穩(wěn)定。

，其中r^7b是氫或o-連接的取代基，優(yōu)選對位氫或-oh，并且r^8a是氫或低級烷基，優(yōu)選甲基；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。

在結(jié)構(gòu)dg或dh的優(yōu)選實施方式中，一個r⁷是氫，另一個r⁷是具有以下結(jié)構(gòu)的任選取代的芳基烷基

，其中r^7b是-h或-oh；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。

在結(jié)構(gòu)dg和dh的其它實施方式中，一個r⁷是氫或低級烷基，優(yōu)選氫或甲基，更優(yōu)選氫，另一個r⁷是任選取代的具有以下結(jié)構(gòu)之一的芳基烷基：

，其中z是任選取代的亞烷基或任選取代的亞烯基，r^7b是氫或o-連接的取代基，優(yōu)選對位氫或-oh，r^8a是氫或低級烷基，優(yōu)選甲基，并且下標n是0、1或2，優(yōu)選0或1；并且其中波浪線表示與dg或dh的其余部分的接合點。在結(jié)構(gòu)dg和dh的另外其它實施方式中，-n(r⁷)(r⁷)是-nh(c1-c6烷基)，其中c1-c6烷基任選被-co2h或其酯或任選取代的苯基取代。在優(yōu)選的實施方式中，-n(r⁷)(r⁷)選自下組：-nh(ch3)、-ch2ch2ph、和-ch2-co2h、-ch2ch2co2h和-ch2ch2ch2co2h。

在結(jié)構(gòu)dg'和dh’的一些實施方案中，r⁷和r¹⁰與它們接合的原子一起定義任選取代的5或6元雜環(huán)，其中-n(r⁷)-ch(r¹⁰)(ch2r¹¹)具有結(jié)構(gòu)：，其中波浪線表示與dg’或dh’的其余部分的接合點。

方案8：

方案8表示式lb’-lo-d⁺的藥物接頭化合物的示例性制備，其中d⁺是季銨化的特吡萊辛化合物，其具有醚部分作為o-連接取代基取代在特吡萊辛m中的特吡瓦林并且不具有這些特吡萊辛的化學(xué)不穩(wěn)定的n，o-縮醛官能團。在示例化合物中，-lo-d⁺具有aa-yy(ww)-d⁺的結(jié)構(gòu)，其中下標a、y和w各自為1。因此，化合物78-80代表示例性的藥物接頭化合物，其中w是通過可被糖苷酶切割的糖苷鍵接合至具有pab部分的結(jié)構(gòu)的自毀間隔物單元(y)的糖部分，其接合d⁺，其中d⁺是季銨化的特吡萊辛化合物?；衔?8-80還表示藥物接頭化合物，其lb’組分包含m¹部分和堿性單元，以便從其與具有反應(yīng)性巰基官能團如抗體的半胱氨酸硫醇中的靶向部分的縮合提供配體藥物偶聯(lián)物的自穩(wěn)定接頭組分(lss)。

方案9：

方案10：

方案9和10一起提供式lb’-lo-d⁺的藥物接頭化合物的替代性制備，其中-lo-d⁺具有aa-yy(ww)-d⁺的結(jié)構(gòu)，其中下標a、y和w各自是1，其中-a-是-a1-ao-。因此，化合物104代表式lb-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的示例性的藥物接頭化合物，其中w是通過可被糖苷酶切割的糖苷鍵接合至具有pab部分的結(jié)構(gòu)的自毀間隔物單元(y)的糖部分，其接合d⁺，其中d⁺是季銨化的特吡萊辛化合物。對于化合物104，季銨化的特吡萊辛是特吡萊辛m具有保留特吡瓦林乙酸酯組分但不具有這種特吡萊辛的化學(xué)不穩(wěn)定的n，o-縮醛官能團的醚部分。

方案11：

方案11表示制備式dg-3的藥物-接頭化合物lb’-lo-d⁺的w”w-yy-d⁺中間體的示例性合成，其中r^7b為-h且r^2b為甲基，并且其中下標w和v各自為1，并且其中w”為藥物接頭化合物中的w的前體，或由藥物接頭化合物中間體制備的配體藥物偶聯(lián)物?；衔?11還表示藥物接頭中間體化合物，其中w是二肽部分并且y是由pab部分示例的自毀隔離單元。在化合物111中，二肽的示例為-纈氨酸-谷氨酸-，并且d⁺為季銨化的特吡萊辛m。

方案12：

方案12例示了來自式h-ww-yy-d⁺的中間體的式dg-3的藥物接頭化合物lb’-lo-d⁺，即化合物111的制備，其中r^7b為-h且r^2b為甲基，其中下標w和y各自為1，并且w、y和d⁺分別由二肽部分(-纈氨酸-谷氨酸-)，自毀pab部分和季銨化的特吡萊辛m示例?；衔?13還代表由配體共價結(jié)合部分前體(lb’)納入藥物接頭化合物而具有式lb'-a(bu)-w-y-d⁺的產(chǎn)物，其中l(wèi)b’-a(bu)-包括馬來酰亞胺部分(m¹)，由堿性單元(bu)通過將具有部分m¹的化合物6和bu取代延伸單元前體(aa’)縮合，其中下標a為1取代的延伸單元(a)，其中在boc去保護后，與化合物111的ww-yy-d⁺縮合的前體將完成接頭單元lb'-lo-的lo組分的形成。

方案13：

方案14：

方案13和14一起提供了特吡萊辛的示例性合成，其中，如結(jié)構(gòu)dg-3所示，其中特吡萊辛m的特吡瓦林組分的乙酸酯部分已被其它具有式-oc(o)r^2b的o-連接部分替代。

方案15：

方案15顯示了用于制備具有非季銨化特吡萊辛藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的藥物接頭化合物的示例性合成，其中去甲基的特吡萊辛m的特吡瓦林組分的乙酸酯o-連接取代基已被o-連接的取代基接合的醚部分替換，并且其中通過延伸單元的羰基官能團將tub(och3)藥物單元通過n末端組分接合到接頭單元。來自化合物172的ldc表示不可切割的偶聯(lián)物(即，抗蛋白酶介導(dǎo)的游離去甲基特吡萊辛m(och3)-oh的釋放)，并且具有通式m¹-a-d，其中m¹是馬來酰亞胺部分，延伸單元a是亞烷基，并且非季銨化的藥物單元d是脫-metub(och3)-oh。來自該藥物接頭化合物的配體藥物偶聯(lián)物具有通式l-s-m²-a-d，其中m²是由向藥物接頭化合物的m¹共軛加成靶向部分巰基而產(chǎn)生的琥珀酰亞胺部分。當(dāng)ldc的配體單元是抗體靶向部分(即，是adc)時，最終從非特異性蛋白水解釋放的活性部分具有cys-s-m²-a-tub(och3)-oh的結(jié)構(gòu)，其中cys-s-部分來自抗體配體單元的半胱氨酸氨基酸。

用另一種在其特吡瓦林組分中保留乙酸酯部分的含叔胺的特吡萊辛替代特吡萊辛m，或者用式dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dg-7、dg-8、dh、dh-1或dh-2的醚或不同的酰氧基或o-連接的取代基(例如o-連接的氨基甲酸酯)代替該部分的藥物-接頭化合物以方案4，方案7，方案8，方案9+10，方案11，方案12或方案13+14的類似方式制備。

方案16：

方案16顯示了用于制備具有式lb’-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的配體藥物偶聯(lián)物的藥物接頭化合物的示例性合成，其中l(wèi)b’是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過糖苷鍵與si鍵合的糖(su)部分，其中所述連接可被糖苷酶切割，并且d⁺是季銨化的尾海兔素10。在式lb’-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的藥物-接頭實施方式中，lb’-a1(bu)-結(jié)構(gòu)表示示例性的lss部分?；衔?77類似于方案1的化合物8，其中季銨化的奧瑞他汀e被季銨化的尾海兔素10代替。由化合物177制備的配體藥物偶聯(lián)物釋放游離尾海兔素10，它是奧瑞他汀類化合物的另一成員，并在β-葡萄糖醛酸苷酶作用后含有叔胺官能團。

方案17：

方案17顯示用于制備其中單甲基尾海兔素10通過氨基甲酸酯官能團與pab部分偶聯(lián)的配體藥物偶聯(lián)物的藥物-接頭化合物的示例性合成。氨基甲酸酯連接的配體藥物偶聯(lián)物不適合含叔胺的藥物，其中該胺官能團是與pab部分的接合點。來自化合物183的偶聯(lián)物釋放含仲胺的游離藥物(即單甲基尾海兔素10)，并且來自化合物177的偶聯(lián)物通過β-葡糖醛酸糖苷酶進行相同的酶處理而釋放含叔量母體游離藥物(即，尾海兔素10)。

方案18：

方案18顯示了用于制備具有式lb'-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的配體藥物偶聯(lián)物的藥物接頭化合物的示例性合成，其中l(wèi)b'是m¹部分，y是pab自毀(si)部分，w是通過糖苷鍵與si鍵合的糖(su)部分，其中所述連接可被糖苷酶切割，并且d⁺是季銨化的奧瑞他汀f。在式lb'-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺的藥物-接頭實施方式中，lb'-a1(bu)-結(jié)構(gòu)表示示例性的lss部分?；衔?89分別類似于方案1、4和17的化合物8、化合物14和化合物17，其中季銨化的奧瑞斯汀e或季銨化的尾海兔素10被季銨化的mmaf代替。mmaf是另一種奧瑞斯汀類化合物的含叔胺藥物。

用類似于在方案1、方案2、方案5、方案16或方案18中例示的方式制備用da、db、dc、de、de-1、de-2、df、df-1或de/f-3的化合物替代奧瑞他汀e、尾海兔素10或奧瑞他汀f的藥物-接頭化合物。

方案19。

方案19顯示了用于制備具有非季銨化的特吡萊辛藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的藥物接頭化合物的示例性合成，其中通過延伸單位的肼官能團將特吡萊辛m藥物單元通過c末端組分接合到接頭單元。來自化合物172的ldc表示包含部分-w-y-的可切割偶聯(lián)物，其中w是二肽-纈氨酸-瓜氨酸-并且具有通式m¹-a-w-y-d或m¹-a-w2-w1-pabc-d，其中m¹是馬來酰亞胺部分，延伸單元a是亞烷基，w是式-w2-w1-的肽可切割單元，其中w1是瓜氨酸并且w2是纈氨酸，pabc是作為自毀間隔單元y的對氨基羰基部分，延伸單元a是亞烷基，并且非季銨化的藥物單元d是tubm-nhnh-。來自該藥物-接頭化合物的配體藥物偶聯(lián)物具有通式l-s-m²-a-w-y-d或l-s-m²-a-w2-w1-pabc-d，其中m²是由靶向部分巰基想藥物接頭化合物的m¹的共軛加成產(chǎn)生的琥珀酰亞胺部分。由環(huán)境特定的(context-specific)蛋白水解在w處釋放的活性藥物部分具有tubm-nh-nh2-的結(jié)構(gòu)。

ii.編號實施方式

1.一種配體藥物偶聯(lián)物(ldc)組合物，其中l(wèi)dc組合物由式1的結(jié)構(gòu)表示：

其中“配體”來自靶向部分，其選擇性結(jié)合至靶部分；lb是配體共價結(jié)合部分；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選地包含2、3或4個亞基，使得當(dāng)a存在時a是1并且a不存在時a是0；q²是w′w′-e-，其中q²在存在時鍵合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是可切割單元；其中與血清蛋白酶相比，q¹的ww能夠被異常或其他不需要細胞中的調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其中與正常細胞相比，所述調(diào)節(jié)性蛋白酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰募毎懈筇禺愋?，并且其中調(diào)節(jié)性蛋白酶對w的作用將導(dǎo)致從ldc釋放含叔胺藥物(d)，或q¹的ww或者能夠被與正常細胞相比在異常細胞中以更大量分泌的蛋白酶切割，或者在與血清的生理ph相比溶酶體中存在的較低ph條件下更易于發(fā)生水解反應(yīng)，

并且q²的w′-e提供與血清糖苷酶相比，可由異?；蚱渌恍枰毎陌麅?nèi)糖苷酶切割的糖苷鍵，其中與正常細胞相比，所述糖苷酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋裕蛘吣軌虮慌c正常細胞相比在靶向的異?；蚱渌恍枰募毎幸愿罅糠置诘奶擒彰高x擇性切割，其中所述下標w是0或1，使得當(dāng)w是0時w不存在或者w是1時w存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在或者w′是1時w′-e存在，并且其中w+w′是1(即，w，w′中的一個且僅一個存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基、或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，其中當(dāng)w是1時，v、z¹、z²和z³中的至少一個是＝c(r²⁴)-，并且當(dāng)w′是1時v、z¹、z²和z³中的至少2個是＝c(r²⁴)-，條件是條件是當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺鍵合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬籸⁸和r⁹獨立地是氫、任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或者是供電子基團；d⁺表示含季銨化叔胺的藥物d的結(jié)構(gòu)，并且p是1-24的平均載藥量；其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致從ldc組合物的ldc的排出d。

在一些實施方案中，d⁺的含叔胺的藥物d是尾海兔素，如尾海兔素10或尾海兔素15。

在一些實施方案中，d⁺的含叔胺的藥物d是具有da、db或dc結(jié)構(gòu)的尾海兔素。

在其它實施方式中，d⁺的含叔胺的藥物d是含叔胺的奧瑞他汀，其包含具有de、de-1、de-2、df、df-1和df/g-3之一結(jié)構(gòu)的奧瑞他汀。

在優(yōu)選的實施方式中，納入季銨化藥物單位的含叔胺奧瑞他汀是奧瑞他汀e、奧瑞他汀f、奧瑞他汀pe、奧瑞他汀phe、奧瑞他汀pye和奧瑞他汀c、grp18112、grp18290、grp18158、奧瑞他汀m、奧瑞他汀mq和奧瑞他汀pac。優(yōu)選的是奧瑞他汀e、奧瑞他汀f、奧瑞他汀pe、奧瑞他汀phe和奧瑞他汀pye，更優(yōu)選奧瑞他汀e和奧瑞他汀f，特別優(yōu)選奧瑞他汀e。

在其他實施方案中，d⁺的d⁺的含叔胺的藥物d是特吡萊辛。在這些實施方式中，優(yōu)選的是天然存在的特吡萊辛或具有dg-6結(jié)構(gòu)的特吡萊辛。納入季銨化藥物單元中的其他優(yōu)選的特吡萊辛具有dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dh、dh-1、和dh-2之一的結(jié)構(gòu)，具有dg-3、dg-4、dg-5結(jié)構(gòu)的那些更優(yōu)選。

在其它實施方式中，d⁺的含叔胺的藥物d是含叔胺的吩嗪二聚體，優(yōu)選具有di的結(jié)構(gòu)。

在其他實施方式中，d⁺的含叔胺的藥物d是mdr抑制劑，優(yōu)選具有其氮是季銨化位點的異喹啉亞結(jié)構(gòu)。

在優(yōu)選的實施方式中，d⁺的d是特吡萊辛m或奧瑞他汀e。在其它優(yōu)選實施方案中，存在q¹并提供調(diào)節(jié)性蛋白酶的切割位點。在其它優(yōu)選實施方式中，存在q²并提供糖苷酶如葡糖醛酸糖苷酶的切割位點。

在更優(yōu)選的實施方式中，靶向部分是抗體，并且靶向部分是由抗體靶向部分選擇性識別的抗原，其中抗原是與正常細胞相比優(yōu)先由異常展示的可及細胞表面抗原。

在其它優(yōu)選實施方式中，靶向部分是可及的細胞表面受體的配體，并且靶向的部分是選擇性結(jié)合靶向配體的受體，其中與正常細胞相比，受體優(yōu)先被異常細胞展示。

在特別優(yōu)選的實施方式中，靶向的部分是可及的細胞表面抗原或受體，其中該抗原或受體在adc結(jié)合之后內(nèi)化，其中與正常細胞相比，受體優(yōu)先被異常細胞展示。

在特別優(yōu)選的實施方式中，靶向部分是與正常細胞相比在異常細胞中豐度更大或更有活性的可接近的細胞表面轉(zhuǎn)運蛋白，并且靶向部分是該受體的底物，其中在結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白時，與正常細胞相比，包含該靶向部分的ldc優(yōu)先進入異常細胞。

2.如實施方式1所述的ldc組合物，其中式1具有式2a或式2b的結(jié)構(gòu)：

在一些實施方式中，式2a的lb是m²或m³部分，其中實施方案1的ldc組合物由式2a-1的結(jié)構(gòu)表示：

在其他實施方式中，式2b的lb是m²或m³部分，其中實施方案1的ldc組合物由式2b-1的結(jié)構(gòu)表示：

在這兩個實施方式中的任一個中，m是m²或m³部分(即，式2a-1或式2b-1的lb-q¹-具有式m²-a-w或m³-a-w)。

在其它實施方案中，式2a-1或2b-1的lb為m²部分，并且q¹為a-w或-a1-ao-w-，其中a1和ao為a的亞基。對于這些實施方式，實施方式1的ldc組合物由式2a-2或式2b-2的結(jié)構(gòu)表示：

其中l(wèi)ss是自穩(wěn)定配體單元，并且ao是可選的延伸亞基，其中當(dāng)ao存在時，lss為m²-a1，或當(dāng)ao不存在時為m²-a(即，式2a或式2b的lb-q¹-具有式lss-w，當(dāng)lss為m²-a或式lss-ao-w時，lss為m²-a1-)。

在其它實施方式中，式2a-1或2b-1的lb為m³部分，q¹為a-w或-a1-ao-w-，其中a1和ao為a的亞基。對于這些實施方式，實施方式1的ldc組合物由式2a-1或式2b-1的結(jié)構(gòu)表示，其中當(dāng)lss被ls部分替換時，m是m³部分或式2a-2和式2b-2。

在一些實施方式中，具有v、z¹、z²、z³中的至少一個的上述結(jié)構(gòu)中的任一個是＝c(r²⁴)-。在優(yōu)選的實施方式中，r²⁴是氫或供電子基團。在更優(yōu)選的實施方式中，v、z¹、z²、z³中的兩個或多個為＝c(r²⁴)-，其中每次出現(xiàn)的r²⁴可變基團是氫或一個是供電子基團，另一個是氫。

在優(yōu)選的實施方式中，當(dāng)上述結(jié)構(gòu)中的任何一個具有v、z¹、z²、z³＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是供電子基團時，r²⁴優(yōu)選處于具有-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基的芳族碳的鄰位或?qū)ξ?。在?yōu)選的實施方式中，當(dāng)r’為供電子基團時，r’優(yōu)選處于具有-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基的芳族碳的鄰位或?qū)ξ弧?/p>

在上述結(jié)構(gòu)中的任何一個的其它優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫。

其它優(yōu)選的實施方式具有結(jié)構(gòu)式2a-1或式2-a-2。在這些實施方式中，更優(yōu)選當(dāng)v和z¹為＝ch-并且z²為＝c(r²⁴)-時，其中r²⁴為氫或供電子基團。在式2a-1或式2a-2的其它優(yōu)選實施方式中，v、z¹和z²是＝ch-。在式2a-1或式2a-2的更優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹為氫，并且v、z²和z³為＝ch-。

在具有上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中任一個的其它更優(yōu)選的實施方式中，靶向部分(即，配體)是抗體，并且p為2-8。在具有上述結(jié)構(gòu)中的任何一個的其它更優(yōu)選的實施方式中，j是鍵合到包含在q¹中的w的二肽以形成可被調(diào)節(jié)性蛋白酶切割的苯胺官能團的-nh-。在其他更優(yōu)選的實施方式中，ldc組合物由式2a表示。在特別優(yōu)選的實施方式中，靶向部分是抗體，并且lb是琥珀酰亞胺(m²)或琥珀酸-酰胺(m³)部分。在其它特別優(yōu)選的實施方式中，q¹是-a1-ao-w-，其中a1和ao是延伸a亞基，并且lb-a1是自穩(wěn)定(lss)接頭部分。在其它特別優(yōu)選的實施方式中，-q¹-是-a1-ao-ww-，其中下標w是1，并且其中a1和ao是延伸a亞基，lb-a1是穩(wěn)定的(ls)接頭部分。

更優(yōu)選的實施方式是上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中的任何一種，其中d⁺是季銨化含叔胺的奧瑞他汀如奧瑞他汀e或具有季銨化de、de-1、de-2、df、df-1、或df/e-3的結(jié)構(gòu)。

其它更優(yōu)選的實施方式是上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中的任一種，其中d⁺是季銨化含叔胺的特吡萊辛，例如特吡萊辛m，或具有季銨化dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dg-7、dg-8、dh、dh-1或dh-2的結(jié)構(gòu)。

其它更優(yōu)選的實施方式是上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中的任何一種，其中d⁺是具有di結(jié)構(gòu)的季銨化吩嗪二聚體。

另外更優(yōu)選的實施方式是上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中的任何一種，其中d⁺是基于季銨化異喹啉的mdr抑制劑(即，具有異喹啉亞結(jié)構(gòu)的mdr抑制劑，其中該亞結(jié)構(gòu)的氮被季銨化)如elacridar或tariquidar。

在式2a-1或式2b-1的一些實施方式中，不存在延伸單元(即，下標a為0)。在的其他實施方式中，式2a-1或式2b-1中存在延伸單元(即，下標a為1)。在一些實施方式中，式2a-1或式2b-1中的延伸單元以單一單元存在。在這些實施方式中的一些中，a是具有溶解劑(sa)取代基的支化單元(b)。在其他實施方式中，當(dāng)存在時延伸單元由2、3或4個，優(yōu)選2或3，并且更優(yōu)選2個亞基組成。在這些實施方式中的一些中，a的亞基之一是作為取代基的具有溶解劑(sa)的支化單元(b)(即，a的亞基a1、a2、a3或a4是-b(sa)-)。在這些實施方式中的其他中，當(dāng)下標a是1時，式2a-1或式2a-b中的a上不存在支化單元。

在式2a-1或式2b-1的一些實施方式中，當(dāng)下標a是1(即，存在延伸單元)時，-a-是-a1-ao-，其中a1和ao是a的亞基。在這些實施方式中的一些中，a的a1亞基是-b(sa)-。在這些實施方式中的其他中，a的ao亞基是-b(sa)-。在這些實施方式中的其他中，a1和ao都不是-b(sa)-(即，不存在支化單元)或a中不存在溶解劑。

在式2a-2或式2b-2的一些實施方式中，當(dāng)a是單個單元并任選存在時，-ao-是-a-，或當(dāng)a包含1、2、3或4個亞基或由其組成時，-ao-是a的亞基。在這些實施方式中的一些中，當(dāng)ao存在時，-ao-是-b(sa)-。在式2a-2或式2b-2的其他實施方式中，-ao-中的溶解劑不存在。

3.如實施方式1所述的ldc組合物，其中式1具有式3a或式3b的結(jié)構(gòu)：

4.如實施方式1所述的ldc組合物，其中式1的結(jié)構(gòu)具有式3c或式3d的結(jié)構(gòu)：

5.如實施方式1所述的ldc組合物，其中式1的結(jié)構(gòu)具有式3e或式3f的結(jié)構(gòu)：

在式3a-3f中的任一個中，r⁸和r⁹優(yōu)選是氫。在式3a-3f結(jié)構(gòu)的其他優(yōu)選實施方式中，v、z¹、z²或z³可變基團是＝c(r²⁴)-。在優(yōu)選的實施方式中，r²⁴是氫或供電子基團，其中當(dāng)r²⁴為供電子基團時，優(yōu)選處于具有-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基的芳族碳的鄰位或?qū)ξ?。在其他?yōu)選的實施方式中，當(dāng)r’為供電子基團時，r’優(yōu)選處于具有-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基的芳族碳的鄰位或?qū)ξ?。在其他?yōu)選實施方式中，v、z¹、z²或z³可變基團是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是與具有q²取代基的芳族碳鄰位的吸電子基團。在具有式2b或2f的結(jié)構(gòu)的優(yōu)選實施方式中，r’優(yōu)選是氫或吸電子基團，如-no2或-cl。

在其他優(yōu)選的式3a-3f結(jié)構(gòu)中，j是-nh-并且q²中的e是-o-。在更優(yōu)選的實施方式中，w是糖，其中q²的e-w鍵可被糖苷酶切割。

在優(yōu)選的實施方式中，實施方式1的ldc組合物由式3f表示，其中r’是氫或吸電子基團，并且v、z³中的一個或兩個是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫。

在式3a、3b、3c、3d、3d、3e或3f的一些實施方式中，不存在延伸單元(即，下標a為0)。在的其他實施方式中，式3a或式3b中存在延伸單元(即，下標a為1)。在式3a、3b、3c、3d、3d、3e或3f的一些實施方式中，存在單一單元的延伸單元。在這些實施方式中的一些中，a是具有溶解劑的支化單元。在其他實施方式中，當(dāng)存在時延伸單元由2、3或4個，優(yōu)選2或3，并且更優(yōu)選2個組成。在這些實施方式中的一些中，a的亞基之一是作為取代基的具有溶解劑(sa)的支化單元(b)(即，a的亞基a1、a2、a3或a4是-b(sa)-)。在這些實施方式中的其他中，當(dāng)式3a、3b、3c、3d、3d、3e或3f中下標a是1時，a中不存在支化單元。

在式3a、3b、3c、3d、3d、3e或3f的一些實施方式中，當(dāng)下標a是1(即。存在延伸單元)時，-a-是-a1-ao-，其中a1和ao是a的亞基。在這些實施方式中的一些中，a的a1是-b(sa)-。在這些實施方式中的其他中，a的ao是-b(sa)-。在這些實施方式中的其他中，a1和ao都不是-b(sa)-(即，不存在支化單元)或a中不存在溶解劑。

在實施方式1-5中任一個的其他優(yōu)選實施方式中，-a-在存在時(即，當(dāng)a是1時)被-a1-ao-替代，其中a1和ao是亞基，其中ao是任選亞基(即，當(dāng)ao不存在時，a1變成a，或當(dāng)ao存在時，a是a1-ao)。在這些實施方式中的一些中，當(dāng)ao存在時，-ao-是-b(sa)-。在這些實施方式中的其他中，-a1-是-b(sa)-。在式3a、3b、3c、3d、3d、3e或3f的其他實施方式中，-ao-中的溶解劑不存在或a中不存在支化單元。

在式3f所示的更優(yōu)選實施方式中，lb是m²或m³部分，其中實施方式1的ldc組合物由式3f-1或式3f-2的結(jié)構(gòu)表示：

其中m是m²或m³部分并且a1和ao是延伸單元a的亞基，

在具有式3f-1或式3f-2的結(jié)構(gòu)的更優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫，v和z³是＝ch-并且r’是氫或吸電子基團，優(yōu)選-cl或-no2。在特別優(yōu)選的實施方式中，式3f-1或式3f-2的“配體”是抗體。在式3f-1或式3f-2的其他特別優(yōu)選的實施方式中，m是m²，其中m²-a或m²-a1是lss部分。在式3f-1或式3f-2的其他特別優(yōu)選的實施方式中，m是m³，其中m³-a或m³-a1是ls部分。

在式3f-1的一些實施方式中，a是-b(sa)-，其中b是支化單元并且sa是溶解劑。在其他實施方式中，式3f-1的a不是-b(sa)或不包含溶解劑。在式3f-2的一些實施方式中，ao存在，其中a1或ao是-b(sa)-。在式3f-1或3f-2的其他實施方式中，a或-a1-ao-分別包含分支單元。在式3f-1或3f-2的其他實施方式中，溶解劑存在于-a-或-a1-ao-。

在式3a、3b、3c、3d、3e、3f、3f-1或3f-2的優(yōu)選實施方式中的任一個中，更優(yōu)選的是其中d⁺是季銨化含叔胺奧瑞他汀如奧瑞他汀e或具有季銨化的de、de-1、de-2、df、df-1、或df/e-3的結(jié)構(gòu)的那些。

在式3a、3b、3c、3d、3e、3f、3f-1或3f-2的其它更優(yōu)選的實施方式的任一個中，更優(yōu)選的是其中d⁺是季銨化含叔胺的特吡萊辛，例如特吡萊辛m，或具有季銨化dg、dg-1、dg-2、dg-3、dg-4、dg-5、dg-6、dg-7、dg-8、dh、dh-1或dh-2的結(jié)構(gòu)的那些。

在式3a、3b、3c、3d、3e、3f、3f-1或3f-2的優(yōu)選實施方式的任一個中，更優(yōu)選的是其中d⁺是具有di結(jié)構(gòu)的季銨化的吩嗪二聚體。

另外更優(yōu)選的實施方式是上述式2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2結(jié)構(gòu)中的任何一種，其中d⁺是基于季銨化異喹啉的mdr抑制劑(即，具有異喹啉亞結(jié)構(gòu)的mdr抑制劑，其中該亞結(jié)構(gòu)的氮被季銨化)如elacridar或tariquidar。

6.如實施方式1-5中任一項所述的ldc組合物，其中所述靶向部分是抗體，從而定義抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，并且靶向的部分是靶向的異常細胞的細胞表面抗原，其能夠進行結(jié)合的adc的細胞內(nèi)化，其中與正常細胞相比，所述抗原優(yōu)先存在于異常細胞上。

在優(yōu)選的實施方式中，靶向的抗原選自下組cd19、cd70、cd30、cd33、ntb-a、αvβ6、cd123和lw-1。在其他優(yōu)選的實施方式中，靶向的抗原是高增殖細胞的可及細胞表面抗原。在其他優(yōu)選的實施方式中，靶向的抗原是高活化免疫細胞的可及細胞表面抗原。

7.如實施方式1-5中任一項所述的ldc組合物，其中靶向部分是細胞表面轉(zhuǎn)運蛋白的底物并且所述靶向的部分是細胞表面轉(zhuǎn)運蛋白，其中異常細胞上所述靶向的轉(zhuǎn)運蛋白能夠細胞攝入包含作為其靶向部分的所述底物的結(jié)合的ldc，其中與正常細胞相比，所述轉(zhuǎn)運蛋白優(yōu)先存在于異常細胞上或在異常細胞上更有活性。

在優(yōu)選的實施方式中，轉(zhuǎn)運蛋白是葉酸轉(zhuǎn)運蛋白。在其他實施方式中，靶向部分是細胞表面轉(zhuǎn)運蛋白的配體并且靶向的部分是細胞表面受體，其中異常細胞上的所述靶向的受體能夠細胞內(nèi)化包含受體配體作為其靶向部分的結(jié)合的ldc，其中與正常細胞相比，靶向的受體優(yōu)先存在于異常細胞上。

8.如實施方式1或2所述的ldc組合物，其中q¹的w包含具有與與血清蛋白酶相比可被調(diào)節(jié)性蛋白酶選擇性切割的j鍵連的肽的肽部分，其中調(diào)節(jié)性蛋白酶對w的作用將導(dǎo)致從所述組合物的ldc胞內(nèi)釋放含叔胺藥物(d)。

9.如實施方式3、4或5所述的ldc組合物，其中q²的w是糖苷鍵合的糖，其中q²的糖苷鍵w-e提供糖苷酶的切割位點，其中糖苷酶對w-e的作用導(dǎo)致從所述組合物的ldc釋放含叔胺藥物(d)。

10.如實施方式8所述的ldc組合物，其中w的肽部分包含具有式6的結(jié)構(gòu)的二肽部分或由其組成：

其中r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基，-ch(oh)ch3或具有結(jié)構(gòu)并且r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、-(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，其中連接點二肽的c末端的波浪鍵表示與式2a或2b的亞芳基部分的j的共價鍵，并且二肽的n末端表示與w的剩余部分的共價連接，如果該剩余部分存在，或與a或其亞基的共價連接，當(dāng)a為1時，或與lb的共價連接，當(dāng)a是0時，并且其中二肽與j的鍵合可由調(diào)節(jié)性蛋白酶切割。

11.如實施方式9所述的ldc組合物，其中q²中的w是與e糖苷鍵合的糖的部分，其中糖苷鍵可被糖苷酶切割，并且其中w-e具有式7的結(jié)構(gòu)：

其中當(dāng)該可變基團是＝ch(r²⁴)-時，波浪線表示鍵合到v、z¹、z²、或z³之一的e，其中e是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；并且其中r⁴⁵是-ch2oh或-co2h。

12.如實施方式1-11中任一項所述的ldc組合物，其中a為1，使得q¹中的a或其亞基(即，a1)與式1的lb鍵合，其中-lb-a或-lb-a1具有式8的結(jié)構(gòu)：

其中-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分表示a或其亞基(a1)的結(jié)構(gòu)；r和r^a2獨立地是氫或甲基；r^a1是氫、甲基、乙基或堿性單元(bu)；he是任選的水解強化(he)單元；m為0-6的整數(shù)；每個r^b1獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r^b1與它們所連接的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基或一個r^1b和he連同它們所連接的碳包含5或6元環(huán)烷基或5或6元雜環(huán)烷基，而另一個r^b1是氫、任選取代的c1-c6烷基，任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；其中bu具有-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中n為0、1、2或3，其中每個r¹獨立地為氫或低級烷基或兩個r¹與它們所連接的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基；每個r²獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起定義c3-c6環(huán)烷基，或一個r¹和一個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起包含5-或6-元環(huán)烷基，其余的r¹和r²如所定義；r²²和r²³獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基或與它們所連接的氮一起包含5或6元雜環(huán)烷基；并且其中連接至琥珀酰亞胺環(huán)的波浪線表示衍生自靶向部分的巰基的硫的共價鍵，而另一條波浪線表示a(或a1)與式1、2a、2b、2a-1、2b-1、2a-2、2b-2、3a-3f、3f-1或3f-2的其余部分的共價鍵合。

在優(yōu)選的實施方式中，r是氫。在其他優(yōu)選實施方式中，[he]存在并且是羰基(即，-c(＝o)-)或含羰基官能團，其中該官能團的羰基優(yōu)選與a或a1的[c(r^b1)(r^b1)]m部分直接鍵合。在其他優(yōu)選的實施方式中，各r^b和r^a1和r^a2是氫，其中更優(yōu)選m是5。

在其他優(yōu)選的實施方式中，[he]存在并且是羰基(即，-c(＝o)-)并且更優(yōu)選r^a1是堿性單元且r^a2是氫，且bu具有-ch2nh2的結(jié)構(gòu)。

13.如實施方式10所述的ldc組合物，其中靶向部分是具有式9的結(jié)構(gòu)的式1的抗體：

其中r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基；r³⁴是甲基、異丙基或-ch(oh)ch3；r³⁵是甲基、-(ch2)3nh(c＝o)nh2或-(ch2)2co2h；j是-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；并且

v和z¹獨立地是＝ch-或＝n-。

在優(yōu)選實施方式中，r⁸和r⁹是氫。在其他優(yōu)選實施方式中，r³⁴是異丙基并且r³⁵是-(ch2)3nh(c＝o)nh2，其中這些取代基接合的碳與l-氨基酸處于相同絕對構(gòu)型中。在其他優(yōu)選實施方式中，r³⁴是異丙基并且r³⁵是甲基，其中這些取代基接合的碳與l-氨基酸處于相同絕對構(gòu)型中。

在一些實施方式中，式9中的a被a1-ao替代和/或lb是m²或m³部分。

14.如實施方式13所述的ldc組合物，其中靶向部分是具有式10的結(jié)構(gòu)的式1的抗體：

其中ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao存在時為a1，使得a變成a1-ao；r為-h；r^a1是-h或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫、甲基或乙基，或二者與它們接合的氮原子一起包含5或6元雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m為1-5的整數(shù)；每個r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或為-c(＝o)-；r³⁴是甲基、異丙基或-ch(oh)ch3；r³⁵是-(ch2)3nh(c＝o)nh2、-(ch2)2co2h；j是-nh-；v、z¹和z²是＝ch2-；r⁸是氫；并且

r⁹是氫或甲基；并且其中s是衍生自抗體靶向部分的巰基的硫。

15.如實施方式11所述的ldc組合物，其中靶向部分是具有式11的結(jié)構(gòu)的式1的抗體：

其中a1和ao獨立地是a的選擇的亞基，其中ao是a的任選亞基(即，當(dāng)ao不存在時，a1變成a并且當(dāng)ao存在時，a是a1-ao)；e是-o-或-nh-；j是-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；

v和z³獨立地是＝ch-或＝n-；r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基；并且r⁴⁵是-co2h。

在其他實施方式中，式11的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。

在式11的一些實施方式中，-a1-或-ao-是-b(sa)-，其中b是支化單元并且sa是溶解劑。在其他實施方式中，式11的a1和ao都不是-b(sa)或-a1-ao-不包含溶解劑。

16.如實施方式15所述的ldc組合物，其中靶向部分是具有式12的結(jié)構(gòu)的式1的抗體：

其中a1和ao是獨立選擇的a的亞基，其中ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b)(r^b)]m-[he]-是a，當(dāng)ao存在時是a1，使a變成a1-ao；其中ao存在時在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于通過含胺酸的c末端羰基鍵合到j(luò)的含胺酸；

其中r是氫；r’是氫或吸電子基團；r^a1是氫或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫、甲基或乙基或兩者與它們接合的氮原子一起包含5-或6-原雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m是1-5的整數(shù)；各r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或是-c(＝o)-；r⁴⁵是-co2h；e是-o-；j是-nh-；v和z³是＝ch2-；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基；并且其中s是衍生自抗體的巰基的硫。

在其他實施方式中，式12的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。

17.如實施方式14、15或16所述的ldc組合物，其中ao在存在時具有式13或式14的結(jié)構(gòu)：

其中連接至任一結(jié)構(gòu)的羰基部分的波浪線表示ao與w的接合點，并且其中連接至任一結(jié)構(gòu)的氨基部分的波浪線代表ao與a1的接合點；其中k和l獨立地為c、n、o或s，條件是當(dāng)k或l為o或s時，連至k的r⁴¹和r⁴²或連至l的r⁴³和r⁴⁴不存在，并且當(dāng)k或l為n時，連至k的r⁴¹、r⁴²或連至l的r⁴³、r⁴⁴之一不存在，條件是兩個相鄰的l不再獨立地選擇為n、o或s；其中q為0-12的整數(shù)，r為1-12的整數(shù)；其中g(shù)是氫、任選取代的c1-c6烷基、-oh、-or^g、-co2h、co2r^g，其中r^g是任選取代的c1-c6烷基、芳基或雜芳基、或r^pr，其中r^pr是合適的保護基、nh2或-n(r^g)(r^g)，其中獨立選擇的r^g如先前所定義，或者r^g與它們所連接的氮一起包括5-或6-元雜環(huán)烷基或兩者作為r^pr一起形成合適的保護組其中r³⁸是氫或任選取代的c1-c6烷基；r³⁹-r⁴⁴獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基，或任選取代的雜芳基，或者r³⁹、r⁴⁰與它們所連接的碳一起包括c3-c6環(huán)烷基，或r⁴¹、r⁴²與它們接合的k一起，當(dāng)k為c時，或者r⁴³、r⁴⁴與它們接合的l一起包含c3-c6環(huán)烷基，或r⁴⁰和r⁴¹，或r⁴⁰和r⁴³，或r⁴¹和r⁴³與它們所連接的碳或雜原子和間插于這些碳和/或雜原子之間的原子一起包含5-或6-元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或其中ao具有對應(yīng)于α-氨基，β-氨基或另一個含胺酸的結(jié)構(gòu)。

在一些實施方式中，式13或式14的ao是具有溶解劑取代基的支化單元(即，-ao-是-b(sa)-)。在這些情況中，g包含增溶劑(sa)并且優(yōu)選是由該sa取代的d-或l-氨基酸的側(cè)鏈，其余的可變基團如所定義。

18.如實施方式14或16所述的ldc組合物，其中當(dāng)碳為手性時，所指示的帶星號(*)碳主要處于l-氨基酸的α碳的相同絕對構(gòu)型。

19.如實施方式6所述的ldc組合物，其中式1具有來自作為靶向部分的抗體的配體單元，使得式1組合物的各ldc由式16a或式16b的結(jié)構(gòu)表示：

其中q^1’是ao-ww，其中ao是a的任選亞基，使得-q^1’-是-ww-，當(dāng)ao不存在時，或是-ao-ww-，當(dāng)ao存在時，使得a變?yōu)閍1-ao，其中-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分變?yōu)閍，當(dāng)ao不存在時，或是a1，當(dāng)ao存在時，并且其中w是1，當(dāng)q²不存在時，或是0(即，w不存在)當(dāng)q²存在時；

r是氫；r^a1是-h或bu，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫或甲基或者兩者與它們所連接的氮原子一起包含5-或6-雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m為1-5的整數(shù)；r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或為-c(＝o)-；j是-o-或-nh-；q²存在時是w-e，其中e是-o-或-nh-；p′是1至24的整數(shù)；并且其中s是衍生自抗體靶向部分的巰基的硫。

20.如實施方式19所述的ldc組合物，其中式1的組合物的各ldc由式17a或式17b的結(jié)構(gòu)表示：

其中j是-nh-；v、z¹之一是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫、-cl或-no2，并且其他v、z¹和z²是＝ch2-；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基。

21.如實施方式19所述的ldc組合物，其中式1的組合物的各ldc由式18a或式18b的結(jié)構(gòu)表示：

其中ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao存在時為a1，使得a變成a1-ao；r為-h；r^a1是-h或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²獨立地是氫或甲基，或兩個r²²與它們接合的氮原子一起包含5或6元雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m為1-5的整數(shù)；r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或為-c(＝o)-；r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基。

在其他實施方式中，式18a或18b的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。

在式18a或式18b的一些實施方式中，ao存在。在這些實施方式中的一些中，a是-b(sa)-，其中b是支化單元并且sa是溶解劑。在其他實施方式中，式18a或式18b的ao如果存在不是-b(sa)-或不包含溶解劑。

22.如實施方式21所述的ldc組合物，其中式1的組合物的各ldc由式19a或式19b的結(jié)構(gòu)表示：

其中r是氫；r^a1是氫或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫或甲基或兩者與它們接合的氮原子一起包含5-或6-原雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m是1-5的整數(shù)；各r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或是-c(＝o)-；r⁴⁵是-co2h；e是-o-；j是-nh-；v和z³是＝ch2-；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基。

在其他實施方式中，式19a或19b的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。

23.如實施方式19、20、21或22所述的ldc組合物，其中當(dāng)碳為手性時，所指示的帶星號(*)碳主要處于l-氨基酸的α碳的相同絕對構(gòu)型。

24.如實施方式1所述的ldc組合物，其中-d⁺具有式20(de’)或式21(df’)的結(jié)構(gòu)：

其中r¹⁰和r¹¹獨立地是c1-c8烷基；r¹²是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)或-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹³是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁴是氫或甲基，或者r¹³和r¹⁴與它們接合的碳一起包含c3-c8環(huán)烷基；r¹⁵是氫或c1-c8烷基；r¹⁶是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁷獨立地是氫、-oh、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基和o-(c1-c8烷基)；r¹⁸是氫或c1-c8烷基；r¹⁹是-c(r^19a)2-c(r^19a)2-芳基、-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8雜環(huán))或-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8環(huán)烷基)，其中r^19a是氫、c1-c6烷基或-oh；r²¹是芳基或c3-c8雜環(huán)；r²⁰是氫、c1-c20烷基、芳基、c3-c8雜環(huán)、-(r⁴⁷o)m-r⁴⁸、和-(r⁴⁷o)m-ch(r⁴⁹)2；m是1-1000的整數(shù)；r⁴⁷是c2-c8烷基；r⁴⁸是氫或c1-c8烷基；r⁴⁹獨立地是-cooh、-(ch2)n-n(r⁵⁰)2、-(ch2)n-so3h、或-(ch2)n-so3-c1-c8烷基；r⁵⁰獨立地是c1-c8烷基、或-(ch2)n-cooh；z是o、s、nh、或nr⁴⁶，其中r⁴⁶是c1-c8烷基；x¹是c1-c10亞烷基；并且n是0-6的整數(shù)；并且其中連接至n⁺的波浪線表示式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

25.如實施方式1所述的ldc組合物，其中-d⁺具有式22(di’)的結(jié)構(gòu)：

其中環(huán)a和環(huán)b是獨立選擇的芳基或雜芳基，其任選地在環(huán)a上被一個，兩個或三個r^a取代基取代，和/或在環(huán)b上任選地被一個，兩個或三個r^b取代基取代，并與吩嗪環(huán)體系稠合，其中一個吩嗪環(huán)系統(tǒng)任選地被一個，兩個或三個獨立選擇的r^c取代基取代，另一個吩嗪環(huán)任選地被一個，兩個或三個獨立選擇的r^d取代基取代，其中當(dāng)存在時，r^a、r^b、r^c和r^d是鹵素、任選取代的烷基或o-連接的取代基；r^9a和r^9b是獨立選擇的任選取代的烷基或與它們所連接的氮原子和這些氮之間間插的碳原子一起包含雜環(huán)烷基環(huán)系，其中n、s和o獨立地為2至4的整數(shù)；并且其中連接至n⁺的波浪線表示d⁺與式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

26.如實施方式1所述的ldc組合物，其中-d⁺具有式23(dg-1’)或式24(dh-1’)的結(jié)構(gòu)：

其中所述環(huán)表示5元雜芳基或6元芳基或雜芳基，其中所述雜芳基所示的所需取代基彼此之間具有1，3-或間位關(guān)系，在其余位置具有任選取代；r^2a是氫或任選取代的烷基或r^2a與其接合的氧原子一起定義除-oh以外的o-連接的取代基；r³是氫或任選取代的烷基；r⁴、r^4a、r^4b、r⁵和r⁶是獨立選擇的任選取代的烷基；r^7a是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，r^8a是氫或任選取代的烷基，并且m是0或1；并且其中連接至n⁺的波浪線表示d⁺與式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

在優(yōu)選實施方式中，r^7a是任選取代的苯基。在其他優(yōu)選的實施方式中，環(huán)表示噻唑。在其它優(yōu)選的實施方式中，r³是-ch3。在更優(yōu)選的實施方式中，r^7a是任選取代的苯基，該環(huán)代表噻唑，并且r^2a與其所連接的氧原子一起形成酯。

27.如實施方式1-26中任一項所述的ldc組合物，其中靶向部分是抗體。

28.如實施方式1-27中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元靶向免疫細胞上的抗原。

29.如實施方式1-28中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元靶向細菌上的抗原。

30.如實施方式1-28中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元不結(jié)合細菌多糖。

31.如實施方式1-28中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元不結(jié)合細胞壁磷壁酸。

32.如實施方式1-23中任一項所述的ldc組合物，其中d⁺在結(jié)構(gòu)上不對應(yīng)于抗生素。

33.如實施方式1-23中任一項所述的ldc組合物，其中d⁺在結(jié)構(gòu)上不對應(yīng)于抗生素。

34.如實施方式1-23中任一項所述的ldc組合物，其中d⁺在結(jié)構(gòu)上不對應(yīng)于用于治療細菌感染的那些。

35.如實施方式1-23中任一項所述的ldc組合物，其中d⁺是可用于治療癌癥的化學(xué)化合物，其具有叔胺官能團或能夠經(jīng)修飾以具有該官能團。

36.如實施方式1-23中任一項所述的ldc組合物，其中d⁺是可用于治療自身免疫疾病的化學(xué)化合物，其具有叔胺官能團或能夠經(jīng)修飾以具有該官能團。

1a.一種具有式i結(jié)構(gòu)的化合物

其中l(wèi)b′是接頭共價結(jié)合前體部分；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選地包含2、3或4個亞基，使得下標a是0或1，其中當(dāng)a是0時a不存在并且當(dāng)a是1時a存在；q²是w′-e，其中q²在存在時結(jié)合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是可切割單元；其中q¹的ww包含具有與j結(jié)合的肽的肽部分，j可被調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其與正向細胞相比，該調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶可能或可能不對異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋裕蛘吣軌虮慌c正常細胞相比被靶向的異常細胞或其他不需要細胞以更大量分泌的蛋白酶選擇性切割，或包含可通過二硫鍵交換被谷胱甘肽切割的二硫鍵部分或包含與血清的生理ph相比在溶酶體中存在的較低ph條件下(在更酸性條件下)更易于發(fā)生水解反應(yīng)的腙部分，當(dāng)納入式1的ldc中，其結(jié)構(gòu)對應(yīng)于式1的結(jié)構(gòu)時，并且q²的w′-e提供了可被位于胞內(nèi)的糖苷酶切割的糖苷鍵，其中與正常細胞相比，糖苷酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋裕蛘吣軌虮话邢虻漠惓；蚱渌恍枰毎员日＜毎蟮牧糠置诘奶擒彰高x擇性切割，其中下標w是0或1，其中當(dāng)w是1時w存在或w是0時w不存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在并且當(dāng)w′是1時w′-e存在，并且其中w+w′是1(即，一個且僅一個w存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，條件是當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬⑶覘l件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ唬瑀⁸和r⁹獨立地是氫，任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或者是供電子基團；并且d⁺表示含季銨化叔胺的藥物d的結(jié)構(gòu)，其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致從所述ldc的d⁺排出d。

2a.如實施方式1a所述的化合物，其中l(wèi)b'具有以下之一的結(jié)構(gòu)

其中r是氫或c1-c6任選取代的烷基；t是-cl、-br、-i、-o-甲磺?；?o-甲苯磺?；籾是-f、-cl、-br、-i、-o-n-琥珀酰亞胺、-o-(4-硝基苯基)、-o-五氟苯基、-o-四氟苯基或-o-c(＝o)-or⁵⁷；x²是c1-10亞烷基、c3-c8-碳環(huán)、-o-(c1-c6烷基)、-亞芳基-、c1-c10亞烷基-亞芳基、-亞芳基-c1-c10亞烷基、-c1-c10亞烷基-(c3-c6-碳環(huán))-、-(c3-c8碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、c3-c8-雜環(huán)、-c1-c10亞烷基-(c3-c8雜環(huán))-、-c3-c8-雜環(huán))-c1-c10亞烷基、-(ch2ch2o)u、或-ch2ch2o)u-ch2-，其中u是1至10的整數(shù)并且r⁵⁷是c1-c6烷基或芳基。

3a.如實施方式2a所述的化合物，其中該化合物具有式iia或式iib的結(jié)構(gòu)：

其中a是延伸單元；下標a為1；下標w為1；下標w′為1；r是氫或甲基；e和j獨立地為-o-或-n(r³³)-，其中r³³為氫或任選取代的c1-c6烷基；下標w為1，式iia的w為肽部分(即，w為2個或更多個氨基酸亞基，優(yōu)選2至4個)，其中與血清蛋白酶相比，連接至j的肽鍵可通過調(diào)節(jié)性或溶酶體蛋白酶可選擇性地切割，并且式iib的w’是糖苷鍵合糖，其中連接至w′-e中的e的糖苷鍵可通過溶酶體或細胞內(nèi)糖苷酶切割；r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基。優(yōu)選地，式iia的肽w是-w1-w2-，其中w1和w2是w的氨基酸亞基，其一起為半胱氨酸蛋白酶如組織蛋白酶提供識別位點。

在式iia或式iib的一些實施方案中，-a-是-b(sa)-，其中b(sa)是被溶解劑(sa)取代的支化單元(b)。在其它實施方式中，式iia或式iib-a的a不包括支化單元。在式iia或式iia的某些實施方案中，-a-是-a1-ao-，其中a1或ao是-b(sa)-。在式iia或式iib的其它實施方式中，a不包括支化單元。在式iia或iib的其它實施方式中，-a-中不存在溶解劑。

4a.如實施方式3a所述的化合物，其中式iia化合物具有式iiia或式iiib的結(jié)構(gòu)：

其中下標w是1；下標w’是1；ao是a的任選亞基，其中-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao不存在時，并且是a1，當(dāng)ao存在時，使得a變?yōu)閍1-ao；r和r^a2獨立地是氫或甲基；r^a1是氫、甲基、乙基或堿性單元(bu)；he是任選的水解強化單元；m為0-6的整數(shù)；每個r^b1獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r^b1與它們所連接的碳一起定義c3-c6環(huán)烷基或一個r^1b和he連同它們所連接的碳定義5或6元環(huán)烷基或5或6元雜環(huán)烷基，而另一個r^b1是氫、任選取代的c1-c6烷基，任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；其中bu具有-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中n為0、1、2或3，其中每個r¹獨立地為氫或低級烷基或兩個r¹與它們所連接的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基，并且各r²獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起定義c3-c6環(huán)烷基，或一個r¹和一個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起包含5-或6-元環(huán)烷基，其余的r¹和r²如所定義；r²²和r²³獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基或與它們所連接的氮一起包含5或6元雜環(huán)烷基；r⁸是氫；并且r⁹是氫或c1-c6烷基。

在式iiia或式iiib的一些實施方式中，ao存在。在這些實施方式中的一些中，-ao-是-b(sa)-，其中b(sa)是被溶解劑(sa)取代的支化單元(b)。在式iiia或式iiib的其他實施方式中，ao存在但不是-b(sa)-或不包含溶解劑。

4a.如實施方式2a所述的化合物，其中式i化合物具有式iva或式ivb的結(jié)構(gòu)：

其中在式iva中，v、z¹或z²之一是＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或供電子基團，并且其他v、z¹或z²是＝ch2-或＝n-，并且r’是氫或供電子基團，或其中在式ivb中，v和z³是＝c(r²⁴)-，其中一個r²⁴是氫并且另一個r²⁴是氫、供電子基團或吸電子基團，或v和z³獨立地是＝ch2-或＝n-；并且其中r’是氫或吸電子基團，e是-o-或-nh-；j是-n(r³³)，其中r³³是氫或甲基；r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-ch(oh)ch3或具有結(jié)構(gòu)r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、-(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h；并且r⁴⁵是-ch2oh或-co2h。

在其他實施方式中，式ivb的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。

在一些實施方式中，式iva的-a-為-b(sa)-或a1-ao-，其中a1或ao為-b(sa)-，其中b(sa)為具有溶解劑(sa)取代基的支化單元(b)。在式ivb的一些實施方式中，a1或ao是-b(sa)-。在式iva或式ivb的其它實施方式中，-a-、a1和ao都不是-b(sa)-，或者式iva中的-a-或式ivb中的-a1-ao-不包含溶解劑。

5a.如實施方式4a所述的化合物，其中式iva或式ivb化合物具有式va或式vb的結(jié)構(gòu)：

其中ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b)(r^b)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao不存在時，并且是a1，當(dāng)ao存在時，使得a變成a1-ao；r為-h，其中r是氫；r^a1是氫或bu，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫、甲基或乙基，或兩者與它們接合的氮原子一起包含5或6元雜環(huán)烷基；r^a2是氫；m為1-5的整數(shù)；r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或為-c(＝o)-；r⁴⁵是-co2h；e是-o-；j是-nh-；v、z¹、z²和z³各自是＝ch2-；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基。

在其他實施方式中，式vb的糖部分被另一個糖部分替代，其中連接至該部分的糖苷鍵被糖苷酶切割。在式va或式vb的一些實施方案中，ao是-b(sa)-。在式iva或式ivb的其它實施方式中，ao不是-b(sa)-或不包含溶解劑。

6a.如實施方式5a所述的化合物，其中式vb中的ao具有以下結(jié)構(gòu)

其中連接至任一結(jié)構(gòu)的c-末端羰基部分的波浪線表示與j的接合點，并且其中連接至任一結(jié)構(gòu)的n-末端氨基部分的波浪線代表與a1的含羰基官能團的接合點；其中k和l獨立地為c、n、o或s，條件是當(dāng)k或l為o或s時，連至k的r⁴¹和r⁴²或連至l的r⁴³和r⁴⁴不存在，并且當(dāng)k或l為n時，連至k的r⁴¹、r⁴²或連至l的r⁴³、r⁴⁴之一不存在，條件是兩個相鄰的l不再獨立地選擇為n、o或s；其中q為0-12的整數(shù)，r為1-12的整數(shù)；其中g(shù)是氫、任選取代的c1-c6烷基、-oh、-or^g、-co2h、co2r^g，其中r^g是任選取代的c1-c6烷基、芳基或雜芳基、或r^pr，其中r^pr是合適的保護基、nh2或-n(r^g)(r^g)，其中獨立選擇的r^g如先前所定義，或者r^g與它們所連接的氮一起包括5-或6-元雜環(huán)烷基或兩者作為r^pr一起形成合適的保護組其中r³⁸是氫或任選取代的c1-c6烷基；r³⁹-r⁴⁴獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基，或任選取代的雜芳基，或者r³⁹、r⁴⁰與它們所連接的碳一起包括c3-c6環(huán)烷基，或r⁴¹、r⁴²與它們接合的k一起，當(dāng)k為c時，或者r⁴³、r⁴⁴與它們接合的l一起包含c3-c6環(huán)烷基，或r⁴⁰和r⁴¹，或r⁴⁰和r⁴³，或r⁴¹和r⁴³與它們所連接的碳或雜原子和間插于這些碳和/或雜原子之間的原子一起包含5-或6-元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或其中式vb中的ao具有對應(yīng)于α-氨基酸，β-氨基酸或其他含胺酸的結(jié)構(gòu)。

在一些實施方式中，ao是具有溶解劑取代基的支化單元(即-ao-是-b(sa)-)。在這些情況中，g包含增溶劑(sa)并且優(yōu)選是由該sa取代的d-或l-氨基酸的側(cè)鏈，其余的可變基團如所定義。

8a.如實施方式6a所述的化合物，其中ao具有以下結(jié)構(gòu)

其中x³不存在或是x²，并且其中x²如實施方式2a中所定義；并且r^a是賴氨酸、天冬氨酸或谷氨酸的側(cè)鏈。

9a.如實施方式7a或8a所述的化合物，其中ao具有以下結(jié)構(gòu)

其中r^46a和r^46b獨立地是h或c1-c6烷基(優(yōu)選甲基)或與它們接合的氮一起包含5-或6-元雜環(huán)烷基或者r^46a和r^46b之一是氫或c1-c6烷基并且另一個是優(yōu)選通過酰胺官能團與氮雜原子鍵連的溶解劑。在優(yōu)選的實施方式中，r^46a和r^46b各自是氫或甲基。在其他優(yōu)選的實施方式中，r^46a和r^46b之一是氫并且另一個是優(yōu)選通過酰胺官能團與氮雜原子鍵連的溶解劑。

10a.如實施方式1a-6a中任一項所述的化合物，其中ao是具有被溶解劑取代的支化單元。

11a.如實施方式1a-9a中任一項所述的化合物，ao是賴氨酸，優(yōu)選l-賴氨酸，任選在其ε-氨基基團處被溶解劑取代。

1b.一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)組合物，其通過使實施方式2a的化合物與具有反應(yīng)性巰基、氨基或醛部分的抗體在合適的條件下接觸以使反應(yīng)性部分與式1化合物的lb’部分縮合獲得，其中l(wèi)b’轉(zhuǎn)化為lb，其中表示來自所述縮合的adc組合物的結(jié)構(gòu)內(nèi)的ab-lb-部分具有以下之一的結(jié)構(gòu)：

，其中所示(#)原子衍生自抗體的反應(yīng)部分并且x²如實施方式2a中所定義，

其中ab是來自靶向抗體的抗體配體單元。

2b.如實施方案1b所述的adc組合物，其中反應(yīng)性抗體部分是半胱氨酸巰基，其通過將半胱氨酸殘基在溶劑可及位置工程改造到成抗體的重鏈恒定區(qū)而獲得，或通過使抗體與二硫化物還原劑在適合于選擇性還原抗體的鉸鏈二硫化物部分的條件下。

3b.如實施方式2b所述的adc組合物，其中該組合物由ab-s-式1或ab-s-式2的結(jié)構(gòu)表示：

其中下標a為1；下標w為1；下標w′為1，下標y為1(即延伸、切割和間隔單位存在)；下標p′在1至8之間，其中可變基團如實施方案1a所定義并且d⁺表示季銨化的含叔胺藥物的結(jié)構(gòu)。

4b.如實施方式3b所述的adc組合物，其中該組合物由ab-s-式5或ab-s-式11的結(jié)構(gòu)表示：

其中ab-s-式5和ab-s-式11的可變基團分別如實施方式4a或?qū)嵤┓绞?2a所定義。

在ab-s-式5或ab-s-式11的一些實施方式中，ao不存在。在ab-s-式5或ab-s-式11的其他實施方式中，ao存在。在ab-s-式5或ab-s-式11的其他實施方式中，ao，如果存在，是-b(sa)-，其中b(sa)是具有溶解劑(sa)取代基的支化單元(b)。在ab-s-式5或ab-s-式11的其它實施方式中，ao不是-b(sa)-或不包含溶解劑。

在其它實施方式中，糖部分由另一個糖部分代替，其中與該部分鍵連的糖苷鍵可被糖苷酶切割。

5b.如實施方式3b所述的adc組合物，其中該組合物由ab-s-式9或ab-s-式12的結(jié)構(gòu)表示：

其中連接至酰亞胺氮的α碳被bu取代或以其它方式被氫取代，并且其中ab-s-式9和ab-s-式12的可變基團分別如實施方式8a或?qū)嵤┓绞?2a所定義。

在ab-s-式9或ab-s-式12的一些實施方式中，ao不存在。在ab-s-式9或ab-s-式12的其他實施方式中，ao存在。在ab-s-式9或ab-s-式12的其他實施方式中，ao，如果存在，是-b(sa)-，其中b(sa)是具有溶解劑(sa)取代基的支化單元(b)。在ab-s-式5或ab-s-式11的其它實施方式中，ao不是-b(sa)-或不包含溶解劑。

6b.如實施方式5b所述的adc組合物，其中bu不存在并且倍括號內(nèi)的氫取代或具有-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中n、r¹、r²、r²²和r²³如實施方式2a中所定義。

7b.如實施方式5b所述的adc組合物，其中該組合物由ab-s-式13或ab-s-式14的結(jié)構(gòu)表示：

其中當(dāng)bu存在時，adc組合物的各偶聯(lián)物在每次p’出現(xiàn)時所述的帶星號(*)位置處有不超過10％的相反立體異構(gòu)體，

其中bu如果存在是-ch2n(r²²)(r²³)，其中r²²和r²³之一是-h并且另一個是氫或c1-c6烷基。

8b.如實施方式5b所述的adc組合物，其中bu不存在(即，被括號內(nèi)的氫替代)并且-[c(r^b1)(r^b1)]m-是-(ch2)4-。

9b.如實施方式5b所述的adc組合物，其中bu是-ch2nh2并且m是0。

10b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中ab來自靶向哺乳動物細胞上的抗原的靶向抗體。

11b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中ab來自靶向哺乳不結(jié)合細菌上的抗原的靶向抗體。

12b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中ab來自靶向哺乳不結(jié)合細菌多糖的靶向抗體。

13b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中ab來自靶向哺乳不結(jié)合細胞壁磷壁酸的靶向抗體。

14b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中d⁺在結(jié)構(gòu)上不對應(yīng)于抗生素。

15b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中d⁺在結(jié)構(gòu)上不對應(yīng)于用于治療細菌感染的那些。

16b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中d⁺是可用于治療癌癥的化學(xué)化合物，其具有叔胺官能團或能夠經(jīng)修飾以具有該官能團。

18b.如實施方式1b-9b中任一項所述的adc組合物，其中d⁺是可用于自身免疫疾病的化學(xué)化合物，其具有叔胺官能團或能夠經(jīng)修飾以具有該官能團。

1c.一種配體藥物偶聯(lián)物(ldc)組合物，其中l(wèi)dc組合物由式1的結(jié)構(gòu)表示：

其中“配體”來自靶向部分的配體單元，其選擇性結(jié)合至靶部分；lb是配體共價結(jié)合部分；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選地包含2、3或4個亞基，使得當(dāng)a是0時a不存在并且當(dāng)a是1時a存在；q²是w′-e，其中q²在存在時結(jié)合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是可切割單元；其中q¹的ww被調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，其與正向細胞相比，該調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶可能或可能不對異常或其他不需要細胞有更大特異性，或者能夠被與正常細胞相比被靶向的異常細胞或其他不需要細胞以更大量分泌的蛋白酶選擇性切割，或通過二硫鍵交換被谷胱甘肽切割或與生理ph相比在溶酶體中存在的較低ph條件下更易于發(fā)生水解反應(yīng)，并且q²的w′-e提供了可被位于胞內(nèi)的糖苷酶選擇性切割的糖苷鍵，其中與正常細胞相比，糖苷酶可能或可能不對靶向的異?；蚱渌恍枰毎懈筇禺愋裕蛘吣軌虮话邢虻漠惓；蚱渌恍枰毎员日＜毎蟮牧糠置诘奶擒彰高x擇性切割，其中下標w是0或1，其中當(dāng)w是1時w存在或w是0時w不存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在并且當(dāng)w′是1時w′-e存在，并且其中w+w′是1(即，一個且僅一個w存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，條件是當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，并且條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，r⁸和r⁹獨立地是氫，任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或者是供電子基團；并且d⁺表示含季銨化叔胺的藥物d的結(jié)構(gòu)；并且p是1-24的平均載藥量；其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致d從所述ldc組合物的ldc排出。

2c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺是季銨化的奧瑞他汀藥物單元。

3c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺具有de’或df’的結(jié)構(gòu)

其中r¹⁰和r¹¹獨立地是c1-c8烷基；r¹²是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)或-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹³是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁴是氫或甲基，或者r¹³和r¹⁴與它們接合的碳一起包含c3-c8環(huán)烷基；r¹⁵是氫或c1-c8烷基；r¹⁶是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁷獨立地是氫、-oh、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基和o-(c1-c8烷基)；r¹⁸是氫或c1-c8烷基；r¹⁹是-c(r^19a)2-c(r^19a)2-芳基、-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8雜環(huán))或-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8環(huán)烷基)，其中r^19a是氫、c1-c8烷基或-oh；r²¹是芳基或c3-c8雜環(huán)；r²⁰是氫、c1-c20烷基、芳基、c3-c8雜環(huán)、-(r⁴⁷o)m-r⁴⁸、和-(r⁴⁷o)m-ch(r⁴⁹)2；m是1-1000的整數(shù)；r⁴⁷是c2-c8烷基；r⁴⁸是氫或c1-c8烷基；r⁴⁹獨立地是-cooh、-(ch2)n-n(r⁵⁰)2、-(ch2)n-so3h、或-(ch2)n-so3-c1-c8烷基；r⁵⁰獨立地是c1-c8烷基、或-(ch2)n-cooh；z是o、s、nh、或nr⁴⁶，其中r⁴⁶是c1-c8烷基；x¹是c1-c10亞烷基；并且n是0-6的整數(shù)；其中連接至n⁺的波浪線表示式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

4c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；并且p是1-24的數(shù)字。優(yōu)選地，p范圍是1-8。

5c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab是來自靶向抗體的抗體配體單元，并且ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連；r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；并且p’是1-24的整數(shù)。在優(yōu)選實施方式中，p’是1-8的整數(shù)。

6c.如實施方式4c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

7c.如實施方式5c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸α或β碳鍵連。

8c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中p是1-24范圍的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-24范圍的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

9c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連；其中p’是1-24的整數(shù)。在優(yōu)選實施方式中，p’是1-8的整數(shù)。

10c.如實施方式8c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

11c.如實施方式9c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸α或β碳鍵連。

12c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺是季銨化的特吡萊辛藥物單元。

13c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺具有式dg-1，或式dh-1，的結(jié)構(gòu)：

其中所述環(huán)表示5元氮雜芳基，并且其中所述指定的所述雜芳基所需的取代基彼此之間具有1，3-關(guān)系，在剩余位置具有任選取代；r^2a是氫或任選取代的烷基或r^2a與其所接合的氧原子一起定義除-oh以外的o-連接的取代基；

r³是氫或任選取代的烷基；r⁴、r^4a、r^4b、r⁵和r⁶是獨立選擇的任選取代的烷基；r^7a是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；r^8a是氫或任選取代的烷基；并且m為0或1，其中連接至n⁺的波浪線表示d⁺與式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

14c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b；并且p是1-24的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

15c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基；并且p是1-24的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

16c.如實施方式14c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

17c.如實施方式15c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

18c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸α或β碳鍵連；

r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b；并且p’是1-24的整數(shù)。在優(yōu)選實施方式中，p’是1-8的整數(shù)。

19c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b；并且p’是1-24的整數(shù)。在優(yōu)選實施方式中，p’是1-8的整數(shù)。

20c.如實施方式18c所述的ldc組合物，其中式1組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

21c.如實施方式19c所述的ldc組合物，其中組合物的各ldc由以下結(jié)構(gòu)所示

22c.如實施方式4c、5c、8c、9c、14c、15c、18c或19c所述的ldc組合物，其中a是-ch2(ch2)4(c＝o)-或-ch2(ch2)4(c＝o)nhch2ch2(c＝o)-。

23c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺是季銨化的吩嗪二聚體。

24c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺具有di’的結(jié)構(gòu)：

其中環(huán)a和環(huán)b是獨立選擇的芳基或雜芳基，其任選地被一個、兩個或三個與任選被一個、兩個或三個獨立選擇的r^c和/或r^bd取代基取代的吩嗪環(huán)系統(tǒng)融合的r^a和/或r^b取代基取代，其中當(dāng)存在時，r^a、r^b、r^c和r^d獨立地是鹵素、任選取代的烷基或o-連接的取代基；r^9a和r^9b是獨立選擇的任選取代的烷基或與它們所連接的氮原子和這些氮之間的間插碳原子一起包含雜環(huán)烷基環(huán)系統(tǒng)，并且其中n、s和o獨立地為2-4的整數(shù)；其中連接至n⁺的波浪線表示d⁺與式1結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

25c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺具有的結(jié)構(gòu)：

其中r^a和r^b存在并且是低級烷基。

26c.如實施方式25c所述的ldc組合物，其中l(wèi)dc組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中p是1-24范圍的數(shù)字。

在優(yōu)選實施方式中，r⁴⁵是-co2h。在更優(yōu)選的實施方式中，糖是葡糖醛酸。在其他優(yōu)選實施方式中，r^a和r^b是-ch3。在其他優(yōu)選的實施方式中，lb是m²或m³部分，更優(yōu)選其中m²-a是lss部分或m³-a是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，a被-a1-ao-替代，使得m²-a¹是lss部分或m³-a¹是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

27c.如實施方式26c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中p是1-24范圍的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

28c.如實施方式27c所述的ldc組合物，其中式1的各ldc組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連并且p’是1-8的整數(shù)。

29c.如實施方式26c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中q是-w-a或-w-a1-ao-并且p是1-24的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

在優(yōu)選的實施方式中，w是調(diào)節(jié)性蛋白酶的底物，其切割q¹和si部分之間的鍵。在其他優(yōu)選的實施方式中，lb是m²或m³部分，更優(yōu)選其中m²-a或m²-a1是lss部分或m³-a或m³-a¹是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

30c.如實施方式1c所述的ldc組合物，其中-d⁺是具有異喹啉亞結(jié)構(gòu)的季銨化的mdr抑制劑。

31c.如實施方式30c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ar是任選取代的芳基或雜芳基并且p是1-24的數(shù)字。

在優(yōu)選實施方式中，r⁴⁵是-co2h。在更優(yōu)選的實施方式中，糖是葡糖醛酸。在其他優(yōu)選實施方式中，r^a和r^b是-ch3。在其他優(yōu)選的實施方式中，“配體”是靶向抗體并且lb是m²或m³部分，更優(yōu)選其中m²-a是lss部分或m³-a是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，a被-a1-ao-替代，使得m²-a¹是lss部分或m³-a¹是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，“配體”是靶向抗體并且p是1-24的數(shù)字。在優(yōu)選實施方式中，其中p是1-8范圍的數(shù)字。

32c.如實施方式31c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中p是1-8范圍的數(shù)字。

33c.如實施方式31c所述的ldc組合物，其中式1的各ldc組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連并且p’是1-8的整數(shù)。

34c.如實施方式30c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中q是-w-a或-w-a1-ao-并且p是1-24的數(shù)字。

在優(yōu)選的實施方式中，w是調(diào)節(jié)性蛋白酶的底物，其切割q¹和si部分之間的鍵。在其他優(yōu)選的實施方式中，“配體”是靶向抗體并且lb是m²或m³部分，更優(yōu)選其中m²-a或m²-a1是lss部分或者m³-a或m³-a¹是ls部分。在其他更優(yōu)選實施方式中，“配體”是靶向抗體并且p是1-8的數(shù)字。

35c.如實施方式34c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

36c.如實施方式31c所述的ldc組合物，其中式1的各ldc組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連并且p’是1-24的整數(shù)。在優(yōu)選實施方式中，p’是1-8的整數(shù)。

37c.如實施方式31c所述的ldc組合物，其中式1組合物由以下結(jié)構(gòu)所示

其中p是1-8范圍的數(shù)字。

38c.如實施方式31c所述的ldc組合物，其中式1的各ldc組合物由以下結(jié)構(gòu)所示：

其中ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵連并且p’是1-8的整數(shù)。

39c.如實施方式31c、32c、33c、34c、35c或36c所述的ldc組合物，其中ar具有以下結(jié)構(gòu)

，其中波浪線表示芳基部分與所示羰基官能團鍵連。

40c.如實施方式1c-39c中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元或ab靶向免疫細胞上的抗原。

41c.如實施方式1c-39c中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元或ab不結(jié)合細菌上的抗原。

42c.如實施方式1c-39c中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元或ab不結(jié)合細菌多糖。

43c.如實施方式1c-39c中任一項所述的ldc組合物，其中來自靶向部分的配體單元或ab不結(jié)合細胞壁磷壁酸。

1d.一種藥物-接頭化合物，其中該化合物具有式i的結(jié)構(gòu)：

其中l(wèi)'b是配體共價結(jié)合部分前體；q¹是aa-ww，其中a是任選的延伸單元，任選地包含2、3或4個亞基，使得當(dāng)a是0時a不存在并且當(dāng)a是1時a存在；q²是w′w′-e，其中q²在存在時結(jié)合至v、z¹、z²或z³；ww和w′w′是可切割單元；其中與血清蛋白酶相比，q¹的ww能夠被調(diào)節(jié)性或胞內(nèi)蛋白酶選擇性切割，或通過二硫鍵交換被谷胱甘肽切割或與生理ph相比在溶酶體中存在的較低ph條件下(即，更酸性條件下)更易于發(fā)生水解反應(yīng)，并且q²的w′-e提供了可被位于胞內(nèi)的糖苷酶選擇性切割的糖苷鍵，并且其中下標w是0或1，其中當(dāng)w是1時w存在或w是0時w不存在，并且w′是0或1，其中當(dāng)w′是0時w′-e不存在并且當(dāng)w′是1時w′-e存在，并且其中w+w′是1(即，一個且僅一個w存在)；v、z¹、z²和z³是＝n-或＝c(r²⁴)-，其中r²⁴是氫或任選取代的烷基、烯基或炔基，或鹵素，-no2，-cn或其他吸電子基團，供電子基團，-q²，或-c(r⁸)(r⁹)-d⁺，條件是當(dāng)w是1時，q²不存在并且一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且q¹-j-和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，并且條件是當(dāng)w′是1時，一個且僅一個r²⁴是-c(r⁸)(r⁹)-d⁺使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，-c(r⁸)(r⁹)-d⁺結(jié)合至v、z¹、z²、z³之一，并且一個且僅一個其他r²⁴是q²使得當(dāng)可變基團是＝c(r²⁴)-時，q²結(jié)合至v、z¹、z²、z³中的另一個，并且q²和-c(r⁸)(r⁹)-d⁺取代基互相鄰位或?qū)ξ?，r⁸和r⁹獨立地是氫，任選取代的烷基、烯基或炔基，或任選取代的芳基或雜芳基；e和j獨立地是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或任選取代的烷基；r’是氫或是鹵素、-no2、-cn或其他吸電子基團，或者是供電子基團；并且d⁺表示含季銨化叔胺的藥物d的結(jié)構(gòu)；并且下標p是1-24的平均載藥量；并且其中所述蛋白酶切割、二硫鍵交換、酸水解或糖苷酶切割導(dǎo)致從藥物接頭化合物，或配體藥物偶聯(lián)物化合物或從中衍生的n-乙?；?半胱氨酸偶聯(lián)物釋放游離含叔胺藥物(d)。

2d.如實施方式1d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式iia或式iib的結(jié)構(gòu)：

3d.如實施方式1d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式iiia或式iiib的結(jié)構(gòu)：

4d.如實施方式1d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式iiic或式iiid的結(jié)構(gòu)：

5d.如實施方式1d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式iiie或式iiic的結(jié)構(gòu)：

6d.如實施方式1d-5d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中l(wèi)b’-具有選自下組的結(jié)構(gòu)：

其中r是氫或c1-c6任選取代的烷基；r’是氫或鹵素或者r和r’獨立地是選擇的鹵素；t是-cl、-br、-i、-o-甲磺?；?o-甲苯磺?；蚱渌撬犭x去基團；u是-f、-cl、-br、-i、-o-n-琥珀酰亞胺、-o-(4-硝基苯基)、-o-五氟苯基、-o-四氟苯基或-o-c(＝o)-or⁵⁷；x²是c1-10亞烷基、c3-c8-碳環(huán)、-o-(c1-c6烷基)、-亞芳基-、c1-c10亞烷基-亞芳基、-亞芳基-c1-c10亞烷基、-c1-c10亞烷基-(c3-c6-碳環(huán))-、-(c3-c8碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、c3-c8-雜環(huán)、-c1-c10亞烷基-(c3-c8雜環(huán))-、-c3-c8-雜環(huán))-c1-c10亞烷基、-(ch2ch2o)u、或-ch2ch2o)u-ch2-，其中下標u是1至10的整數(shù)并且r⁵⁷是c1-c6烷基或芳基。

7d.如實施方式1d-6d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中下標a是1，使得q¹與式i的l'b鍵連并且lb'-a具有通式m¹-a1-ao-，其中m¹是馬來酰亞胺部分并且ao是a的任選亞基，使得a是2個亞基，當(dāng)ao存在時，或是單個單元，當(dāng)ao不存在時。

8d.如實施方式7d所述的藥物-接頭化合物，其中m¹-a¹-ao-具有式viii的結(jié)構(gòu)：

其中ao是a的任選亞基，其中-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao不存在時，并且是a1，當(dāng)ao存在時，使得a變?yōu)閍1-ao；r和r^a2獨立地是氫或甲基；r^a1是氫、甲基、乙基或堿性單元(bu)；he是任選的水解強化(he)單元；m為0-6的整數(shù)；每個r^b1獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r^b1與它們所連接的碳一起定義c3-c6環(huán)烷基或一個r^1b和he連同它們所連接的碳定義5或6元環(huán)烷基或5或6元雜環(huán)烷基，而另一個r^b1是氫、任選取代的c1-c6烷基，任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；其中bu具有-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中n為0、1、2或3，其中每個r¹獨立地為氫或低級烷基或兩個r¹與它們所連接的碳一起包含c3-c6環(huán)烷基，并且各r²獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，或兩個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起定義c3-c6環(huán)烷基，或一個r¹和一個r²與它們所連接的碳和任何間插碳一起包含5-或6-元環(huán)烷基，其余的r¹和r²如所定義；r²²和r²³獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基或與它們所連接的氮一起包含5或6元雜環(huán)烷基；并且波浪線表示a(或ao)與式viii結(jié)構(gòu)的其余部分的共價鍵合。

在一些實施方式中，-[c(r¹)(r¹)]-[c(r²)(r²)]n-n(r²²)(r²³)以酸加成鹽存在，其中酸加成鹽是無機酸，優(yōu)選的hcl或有機酸如tfa的那些。在其他實施方式中，酸加成鹽是藥學(xué)上可接受的那種。

9d.如實施方式7d或8d所述的藥物-接頭化合物，其中式i的m¹-a¹-ao-具有結(jié)構(gòu)：

其中r²²和r²³各自是氮并且r²²、r²³之一是氫并且另一個是酸不穩(wěn)定氨基甲酸酯保護基團；并且下標m是0-4的整數(shù)。

在一些實施方式中，-n(r²²)(r²³)部分以酸加成鹽存在，其中酸加成鹽是無機酸，優(yōu)選的hcl或有機酸如tfa的那些。在其他實施方式中，酸加成鹽是藥學(xué)上可接受的那種。

10d.如實施方式7d、8d或9d所述的藥物-接頭化合物，其中式i的m¹-a¹-ao-具有結(jié)構(gòu)：

其中下標m是0或4并且r²²和r²³各自是氫或r²²、r²³之一是氫并且另一個是-c(o)ot-bu。

在一些實施方式中，-n(r²²)(r²³)部分以酸加成鹽存在，其中酸加成鹽是無機酸，優(yōu)選的hcl或有機酸如tfa的那些。在其他實施方式中，酸加成鹽是藥學(xué)上可接受的那種。

11d.如實施方案1d-10d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中q¹的w包含連接至j的肽鍵的肽部分或由其組成，j與血清蛋白酶相比可被細胞內(nèi)或調(diào)節(jié)性蛋白酶選擇性切割，其中調(diào)節(jié)性蛋白酶對w的作用引起游離含叔胺的藥物(d)從藥物-接頭化合物或配體藥物偶聯(lián)物或由其衍生的n-乙?；?半胱氨酸偶聯(lián)物釋放。

12d.如實施方案1d-10d中任一項的藥物-接頭化合物，其中q²的w’是糖苷鍵合的糖，其中q²的糖苷鍵w’-e提供位于細胞內(nèi)的糖苷酶的切割位點，其中糖苷酶對w’-e的作用引起從藥物-接頭化合物或配體藥物偶聯(lián)物化合物或由其衍生的n-乙?；?半胱氨酸偶聯(lián)物釋放含叔胺藥物(d)。

13d.如實施方式11所述的藥物接頭化合物，其中w的肽部分包含具有式vi的結(jié)構(gòu)的二肽部分或由其組成：

其中r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基，-ch(oh)ch3或具有結(jié)構(gòu)并且r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、-(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，其中連接點二肽的c末端的波浪鍵表示與式iia或iib的亞芳基部分的j的共價鍵，并且二肽的n末端表示與w的剩余部分的共價連接，如果任何該剩余部分存在，或與a或其亞基的共價連接，當(dāng)a為1時，或與lb的共價連接，當(dāng)下標a是0時，并且其中二肽與j的鍵合可由胞內(nèi)或調(diào)節(jié)性蛋白酶切割。

14d.如實施方案12d所述的藥物-接頭化合物，其中q²中的w是與e糖苷鍵合的糖的部分，其中糖苷鍵可被胞內(nèi)糖苷酶切割，并且其中w′-e具有式vii的結(jié)構(gòu)：

其中當(dāng)該可變基團是＝c(r²⁴)-時，波浪線表示鍵合到v、z¹、z²、或z³之一的e，其中e是-o-、-s-或-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；并且其中r⁴⁵是-ch2oh或-co2h。

在優(yōu)選實施方式中，r⁴⁵是-co2h。在其他優(yōu)選實施方式中，w’-e的糖部分處于d-構(gòu)型中。

15d.如實施方式11d或13d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式ix的結(jié)構(gòu)：

其中r’是氫或供電子基團；r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基；r³⁴是甲基、異丙基或-ch(oh)ch3；r³⁵是甲基、-(ch2)3nh(c＝o)nh2或-(ch2)2co2h；j是-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；并且v和z¹獨立地是＝ch-或＝n-。

在一些實施方式中，a包含c1-c6亞烷基，任選被堿性單元取代。在其他實施方式中，v、z¹、z²中的一個或兩個是＝ch-并且其他是＝n-。在優(yōu)選實施方式中，v、z¹、z²各自是＝ch-。

16d.如實施方式15d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式x的結(jié)構(gòu)：

其中星號(*)指在所示碳處的手性或其缺失；ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-部分是a，當(dāng)ao存在時為a1，使得a變成a1-ao；r為-h；r^a1是-h或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫、甲基或乙基，或二者與它們接合的氮原子一起包含5或6元雜環(huán)烷基；r^a2是氫；下標m為0-6的整數(shù)；每個r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或為-c(＝o)-；r³⁴是甲基、異丙基或-ch(oh)ch3；r³⁵是-(ch2)3nh(c＝o)nh2、或-(ch2)2co2h；j是-nh-；v、z¹和z²是＝ch2-；r’是氫或供電子基團；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基。

在優(yōu)選的實施方式中，he存在并且下標m的范圍是0-4。在其他優(yōu)選的實施方式中，he存在并且下標m是0或4并且ao不存在。在其他優(yōu)選實施方式中，r^a1是bu并且m是0。

在一些實施方式中，r^a1是bu，其中bu的-n(r²²)(r²³)以酸加成鹽存在，其中酸加成鹽是無機酸的鹽，優(yōu)選的hcl或有機酸如tfa的那些。在其他實施方式中，酸加成鹽是藥學(xué)上可接受的那種。

17d.如實施方式12d或14d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式xi的結(jié)構(gòu)：

其中a1和ao是a的獨立選擇的亞基，其中ao是a的任選亞基(即，a1變?yōu)閍，當(dāng)ao不存在時，并且a是-a1-ao-，當(dāng)ao存在時)；e是-o-或-nh-；j是-n(r³³)-，其中r³³是氫或甲基；v和z³獨立地是＝ch-或＝n-；r’是氫或吸電子基團；r⁸是氫；r⁹是氫、任選取代的c1-c6烷基或任選取代的苯基；并且r⁴⁵是-co2h或-ch2oh。

在優(yōu)選實施方式中，r⁴⁵是-co2h并且w’-e的糖部分處于d-構(gòu)型中。

18d.如實施方式12d、14d或17d所述的藥物接頭化合物，其中該化合物具有式xii的結(jié)構(gòu)：

其中星號(*)指所示碳的手性或其缺失；a1和ao是a的獨立選擇的亞基，其中ao是a的任選亞基，其中當(dāng)ao不存在時，-[c(r^b1)(r^b1)]m-[he]-是a，并且，當(dāng)ao存在時，是a1，使得a變成a1-ao；其中ao在存在時，結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于通過含胺酸的c-末端羰基與j鍵連的含胺酸；r是氫；r’是氫或吸電子基團；r^a1是氫或堿性單元(bu)，其中bu具有-ch2-n(r²²)(r²³)的結(jié)構(gòu)，其中r²²和r²³獨立地是氫、甲基或乙基或者兩者與它們接合的氮原子一起包含5-或6-元雜環(huán)烷基；r^a2是氫；下標m是0-6的整數(shù)；各r^b1獨立地是氫或任選取代的c1-c6烷基；he不存在或是-c(＝o)-；r⁴⁵是-co2h或-ch2oh；e是-o-；j是-nh-；v和z³是＝ch2-；r⁸是氫；并且r⁹是氫或甲基。

在一些實施方式中，r^a1是bu，其中bu的-n(r²²)(r²³)以酸加成鹽存在，其中酸加成鹽是無機酸的鹽，優(yōu)選的hcl或有機酸如tfa的那些。在優(yōu)選的實施方式中，酸加成鹽是藥學(xué)上可接受的那種并且r⁴⁵是-co2h。在其他優(yōu)選的實施方式中，he存在并且下標m的范圍是0-4并且r⁴⁵是-co2h。在其他優(yōu)選的實施方式中，he存在并且下標m是0或4，ao不存在并且r⁴⁵是-co2h。在其他優(yōu)選實施方式中，r^a1是bu，m是0，ao存在并且r⁴⁵是-co2h。在這些優(yōu)選實施方式中的任一個中，q²的糖部分處于d-構(gòu)型中。

19d.如實施方式1d-19d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中ao在存在時具有式xiii或式xiv的結(jié)構(gòu)：

其中連接至任一結(jié)構(gòu)的羰基部分的波浪線表示ao與w的接合點，并且其中連接至任一結(jié)構(gòu)的氨基部分的波浪線代表ao與a1的接合點；其中k和l獨立地為c、n、o或s，條件是當(dāng)k或l為o或s時，連至k的r⁴¹和r⁴²或連至l的r⁴³和r⁴⁴不存在，并且當(dāng)k或l為n時，連至k的r⁴¹、r⁴²或連至l的r⁴³、r⁴⁴之一不存在，條件是兩個相鄰的l不再獨立地選擇為n、o或s；其中下標q為0-12的整數(shù)，并且下標r為1-12的整數(shù)；其中g(shù)是氫、任選取代的c1-c6烷基、-oh、-or^g、-co2h、co2r^g，其中r^g是任選取代的c1-c6烷基、芳基或雜芳基、或r^pr，其中r^pr是合適的保護基、nh2或-n(r^g)(r^pg)，其中獨立選擇的r^g如先前所定義，或者r^g與它們所連接的氮一起包括5-或6-元雜環(huán)烷基或r^g和r^pr一起形成合適的保護組其中r³⁸是氫或任選取代的c1-c6烷基；r³⁹-r⁴⁴獨立地是氫、任選取代的c1-c6烷基，或任選取代的雜芳基，或者r³⁹、r⁴⁰與它們所連接的碳一起包括c3-c6環(huán)烷基，或r⁴¹、r⁴²與它們接合的k一起，當(dāng)k為c時，或者r⁴³、r⁴⁴與它們接合的l一起包含c3-c6環(huán)烷基，或r⁴⁰和r⁴¹，或r⁴⁰和r⁴³，或r⁴¹和r⁴³與它們所連接的碳或雜原子和間插于這些碳和/或雜原子之間的原子一起包含5-或6-元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，或其中ao具有對應(yīng)于α-氨基，β-氨基或另一個含胺酸的結(jié)構(gòu)。

20d.如實施方式18d所述的藥物-接頭化合物，其中當(dāng)所示碳為手性時，所指示的帶星號(*)碳主要處于l-氨基酸的α碳的相同絕對構(gòu)型。

21d.如實施方式1d-20d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中-d⁺是季銨化的含叔胺的微管蛋白破壞劑。

22d.如實施方式21d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的微管蛋白破壞劑-d⁺是季銨化的特吡萊辛藥物單元。

23d.如實施方式22d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有式dg-1’或式dh-1’的結(jié)構(gòu)：

其中所述環(huán)表示5元氮雜芳基，并且其中所述雜芳基所示的所需取代基彼此之間具有1，3-關(guān)系，在其余位置具有任選取代；r^2a是氫或任選取代的烷基或r^2a與其接合的氧原子一起定義除-oh以外的o-連接的取代基；r³是氫或任選取代的烷基；r⁴、r^4a、r^4b、r⁵和r⁶是獨立選擇的任選取代的烷基；r^7a是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，r^8a是氫或任選取代的烷基，并且下標m是0或1；并且其中連接至n⁺的波浪線表示d⁺與藥物-接頭化合物的其余部分的共價鍵合。

24d.如實施方式23d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

其中z是任選取代的低級亞烷基或任選取代的低級亞烯基；表示r^7b取代基數(shù)量的下標q是1、2或3；各r^7b獨立地選自氫和o-連接的取代基；并且其中波浪線表示d⁺與藥物-接頭化合物的其他部分的共價鍵合。

25d.如實施方式24d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

其中r^2a是氫或任選取代的c1-c6烷基或r²與其接合的氧原子一起定義除了-oh以外的o-連接的取代基；r³是任選取代的c1-c6烷基；r⁵和r⁶是天然疏水性氨基酸的側(cè)鏈殘基；-n(r⁷)(r⁷)是-nh(c1-c6烷基)或-nh-n(c1-c6烷基)2，其中一個且僅一個c1-c6烷基任選被-co2h，或其酯或任選取代的苯基取代；并且其中波浪線表示d⁺與藥物-接頭化合物的其余部分的共價鍵合。

26d.如實施方式25d所述的藥物-接頭，其中-n(r⁷)(r⁷)選自下組：-nh(ch3)、-nhch2ch2ph、和-nhch2-co2h、-nhch2ch2co2h和-nhch2ch2ch2co2h。

27d.如實施方式23d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

28d.如權(quán)利要求23d-27d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中o-連接的取代基-or^2a排除-oh(即，r^2a不是氫)。

29d.如權(quán)利要求28d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

其中r^4a是甲基；r³是h、甲基、乙基、丙基、-ch2-oc(o)r^3a、-ch2ch(r^3b)c(o)r^3a或-ch(r^3b)c(o)nhr^3a，其中r^3a是c1-c6烷基并且r^3b是h或c1-c6烷基，獨立地選自r^3a；并且-or^2a是o-連接的取代基，其選自下組：-or^2b、-oc(o)r^2b或-oc(o)n(r^2b)(r^2c)，其中r^2b和r^2c獨立地選自下組：h、c1-c6烷基和c2-c6烯基；并且r^7b是氫或-oh。

30d.如實施方式29d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

其中r^2a和r³獨立地選自下組：甲基、乙基、丙基和異丙基；r^2b是甲基、乙基、丙基和異丙基或-or^2a如之前定義；r³是甲基、乙基或丙基；并且r^7b是氫或-oh。

31d.如實施方式29d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的特吡萊辛藥物單元-d⁺具有結(jié)構(gòu)：

其中r^2b是甲基、乙基、丙基、異丙基、3-甲基-丙-1-基、3，3-二甲基-丙-1-基、或乙烯基；r³是甲基、乙基或丙基；并且r^7b是氫或-oh。

32d.如實施方式23d-29d和31d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中r^2b是-ch3，r³是-ch3并且r^7b是h或-oh。

33d.如權(quán)利要求23-30中任一項所述的藥物-接頭化合物，其特征在于，r^2a是-ch2ch3。

34d.如權(quán)利要求23d-29d和31d所述的藥物-接頭化合物，其中r^2b是-ch3，r³是-ch3并且r^7b是h。

35d.如實施方式22d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3、異丙基、-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2或-ch2ch2co2h；r^7b是氫或-oh；并且r^2a是c1-c6烷基、c2-c6烯基、-och2or^2b、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是氫、或c1-c6烷基。

36d.如權(quán)利要求35d所述的藥物-接頭化合物，其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3、或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；并且r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基。

37d.如實施方式35d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r^7b是氫或-oh；并且r^2a是c1-c6烷基、c2-c6烯基、-och2or^2b、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是氫、或c1-c6烷基；并且r⁴⁵是-co2h或-ch2oh。

38d.如權(quán)利要求102所述的藥物-接頭化合物，其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3、或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；并且r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基。

39d.如實施方式35d或36d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有結(jié)構(gòu)

40d.如實施方式1d-8d、15d、17d和35d-37d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中a或-a1-ao-是-ch2(ch2)4(c＝o)-或-ch2(ch2)4(c＝o)nhch2ch2(c＝o)-。

41d.如實施方式35-40d中任一項所述的藥物-接頭化合物，其中r^2a是-c(o)ch3、甲基、乙基或丙基。

42d.如實施方式21d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的微管蛋白破壞劑-d⁺是季銨化的奧瑞他汀或尾海兔素藥物單元。

43d.如實施方式42d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的微管蛋白破壞劑-d⁺是季銨化的尾海兔素10或尾海兔素15。

44d.如權(quán)利要求42d所述的藥物-接頭化合物，其中所述季銨化的奧瑞他汀藥物單元-d⁺具有de’或df’的結(jié)構(gòu)：

其中r¹⁰和r¹¹獨立地是c1-c8烷基；r¹²是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)或-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹³是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁴是氫或甲基，或者r¹³和r¹⁴與它們接合的碳一起包含c3-c8環(huán)烷基；r¹⁵是氫或c1-c8烷基；r¹⁶是氫、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基、芳基、-x¹-芳基、-x¹-(c3-c8環(huán)烷基)、c3-c8雜環(huán)和-x¹-(c3-c8雜環(huán))；r¹⁷獨立地是氫、-oh、c1-c8烷基、c3-c8環(huán)烷基和o-(c1-c8烷基)；r¹⁸是氫或c1-c8烷基；r¹⁹是-c(r^19a)2-c(r^19a)2-芳基、-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8雜環(huán))或-c(r^19a)2-c(r^19a)2-(c3-c8環(huán)烷基)，其中r^19a是氫、c1-c8烷基或-oh；r²¹是芳基或c3-c8雜環(huán)；r²⁰是氫、c1-c20烷基、芳基、c3-c8雜環(huán)、-(r⁴⁷o)m-r⁴⁸、和-(r⁴⁷o)m-ch(r⁴⁹)2；m是1-1000的整數(shù)；r⁴⁷是c2-c8烷基；r⁴⁸是氫或c1-c8烷基；r⁴⁹獨立地是-cooh、-(ch2)n-n(r⁵⁰)2、-(ch2)n-so3h、或-(ch2)n-so3-c1-c8烷基；r⁵⁰獨立地是c1-c8烷基、或-(ch2)n-cooh；z是o、s、nh、或nr⁴⁶，其中r⁴⁶是c1-c8烷基；x¹是c1-c10亞烷基；并且下標n是0-6的整數(shù)；其中連接至n⁺的波浪線d⁺與藥物-接頭化合物的其余部分的共價鍵合。

45d.如權(quán)利要求44d所述的藥物-接頭化合物，其特征在于，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3、-ch2ch2cooh或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2。

46d.如實施方式45d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

其中下標m是4。

47d.如實施方式44d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r⁴⁵是-co2h或ch2oh。

48d.如實施方式47d所述的藥物-接頭化合物，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu)：

其中r⁴⁵是-co2h或-ch2oh；并且下標m是4。

1e.一種ldc組合物，其中所述組合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3、異丙基、-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2或-ch2ch2co2h；r^7b是氫或-oh；并且r^2a是c1-c6烷基、c2-c6烯基、-och2or^2b、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是氫、或c1-c6烷基；并且下標p是1-8的數(shù)字。

2e.如實施方式1e所述的ldc組合物，其中r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基；并且下標p是1-8的數(shù)字。

3e.如實施方式1e所述的ldc組合物，其中所述組合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；r^7b是氫或-oh；r^2a是c1-c6烷基、-och2or^2b、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是c1-c6烷基或c1-c6烯基；并且下標p是1-8的數(shù)字。

4e.如實施方式3e所述的ldc組合物，其中r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基；并且p是1-8的數(shù)字。

5e.如實施方式1e所述的ldc組合物，其中所述組合物的結(jié)構(gòu)由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；下標p是1-8的數(shù)字；并且下標m是4。

6e.如實施方式3e所述的ldc組合物，其中所述組合物的結(jié)構(gòu)由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；下標p是1-8的數(shù)字；并且下標m是4。

1f.一種ldc組合物，其中所述組合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；ab-s-部分與羧酸的α或β碳鍵合；r³⁴是異丙基并且r³⁵是-ch3或-ch2ch2ch2nh(c＝o)nh2；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基；并且下標p’是1-8的整數(shù)。

2f.如實施方式1f所述的ldc組合物，其中組合物的各配體藥物偶聯(lián)物化合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵合；r^7b是氫或-oh；r^2a是低級烷基、-c(＝o)r^2b或-c(＝o)nhr^2b，其中r^2b是低級烷基；并且下標p’是1-8的整數(shù)。

3f.如實施方式1f所述的ldc組合物，其中組合物的各配體藥物偶聯(lián)物化合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵合；下標p’是1-8的整數(shù)；并且下標m是4。

4f.如實施方式2f所述的ldc組合物，其中組合物的各配體藥物偶聯(lián)物化合物由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab是抗體配體單元；s是抗體配體單元的硫原子；ab-s-部分與m³羧酸的α或β碳鍵合；下標p’是1-8的整數(shù)；并且下標m是4。

5f.如實施方式1f或2f所述的ldc組合物，其中a是-ch2(ch2)4(c＝o)-或-ch2(ch2)4(c＝o)nhch2ch2(c＝o)-。

6f.如實施方式1e-6e和1f-5f中任一項所述的ldc組合物，其中r^2a是-c(o)ch3、甲基、乙基或丙基。

實施例

概述：化學(xué)

所有市售可得的無水溶劑均直接使用無需進一步純化。分析型薄層色譜在硅膠60f254鋁薄片(emd化學(xué)公司，新澤西州吉布斯鎮(zhèn))上進行。徑向色譜在chromatotron儀器(哈瑞絲研究公司(harrisresearch)，加利福尼亞州帕洛阿爾托)上進行。柱色譜在biotageisoleraone^tm快速純化系統(tǒng)(北卡羅來州夏洛特)上進行。分析型hplc在配備有varianprostar330pda檢測儀的varianprostar210^tm溶劑遞送系統(tǒng)上進行。樣品通過c12phenomenexsynergi^tm2.0x150mm，4μm，反相柱洗脫。酸性流動相包含乙腈和水，其均包含0.05％三氟乙酸或0.1％甲酸(各化合物所示)?；衔锊捎?％(注射后1分鐘)到95％(11分鐘)線性梯度酸性乙腈，隨后采用等度95％乙腈至15分鐘(流速＝1.0ml/分鐘)來洗脫。lc-ms在兩種不同的系統(tǒng)上進行。lc-ms系統(tǒng)1由接合至配有c12phenomenexsynergi2.0x150mm，4μm，反相柱的hpagilent1100hplc儀的zmdmicromass質(zhì)譜儀組成。酸洗脫劑包含0.1％水性甲酸中5％-95％的線性梯度的乙腈(進行10分鐘)，隨后是等度95％乙腈(進行5分鐘)(流速＝0.4ml/分鐘)。lc-ms系統(tǒng)2包含接合至waters2695分離模塊和waters2996光電二極管陣列檢測儀的watersxevog2^tmtof質(zhì)譜儀；柱、流動相、梯度和流速與lc-ms系統(tǒng)1相同。uplc-ms系統(tǒng)1由連接至裝配acquityuplcbehc182.1x50mm，1.7μm反相柱的acquity^tm超高效lc的waterssq質(zhì)量檢測器組成。酸性流動相(0.1％甲酸)由3％乙腈/97％水至100％乙腈的梯度組成(流速＝0.5ml/分鐘)。uplc-ms系統(tǒng)2由連接至裝配acquityuplcbehc182.1x50mm，1.7μm反相柱的watersacquityh-class高效lc的watersxevog2tof質(zhì)譜儀組成。酸性流動相(0.1％甲酸)由3％乙腈/97％水至100％乙腈的梯度組成(流速＝0.7ml/分鐘)。制備型hplc在配備有varianprostar330pda檢測儀的varianprostar210溶劑遞送系統(tǒng)上進行。產(chǎn)物在c12phenomenexsynergi10.0x250mm，4μm，反相柱上純化，采用水中的0.1％三氟乙酸(溶劑a)和乙腈中的0.1％三氟乙酸(溶劑b)洗脫。純化方法一般由溶劑a至溶劑b的線性梯度組成，從90％水性溶劑a至10％溶劑a。在254nm監(jiān)測流速為4.6ml/分鐘。nmr譜數(shù)據(jù)在varianmercury400mhz波譜儀上收集。偶聯(lián)常數(shù)(j)以赫茲報告。

概述：生物學(xué)

體外試驗。將培養(yǎng)為對數(shù)期生長的細胞接種于包含補充有20％fbs的150μlrpmi1640的96孔板中，維持24小時。用細胞培養(yǎng)基以4倍工作濃度制備抗體-藥物偶聯(lián)物的連續(xù)稀釋液；將50μl各稀釋液添加至96孔板。添加adc之后，細胞用測試物質(zhì)在37℃下孵育4天。96小時后，生長抑制通過celltiter-glo^tm(普洛麥格公司(promega)，威斯康星州麥迪遜)評價，并在酶標儀上測量發(fā)光。本文中，以三個重復(fù)檢測的ic50值定義為相對于未處理對照導(dǎo)致細胞生長降低50％的濃度。

體內(nèi)異種移植模型。全部實驗按照動物飼養(yǎng)和使用委員會(animalcareandusecommittee)用國際實驗動物評估和認可委員(associationforassessmentandaccreditationoflaboratoryanimalcare)會完全認可的設(shè)備進行。在l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型中進行功效實驗。以細胞懸液在免疫功能不全的scid小鼠中皮下植入l540cy腫瘤細胞。在腫瘤移植之后，當(dāng)平均腫瘤體積達到約100mm³時，將小鼠隨機分組成研究組。通過腹膜內(nèi)注射給予adc或?qū)φ找淮?。使用?lxw²)/2確定隨時間變化的腫瘤體積。腫瘤體積達到1000mm³時，對動物處以安樂死。植入后約100天時，顯示持久消退的小鼠終止。

離體穩(wěn)定性實驗。通過首先用igselect^tm樹脂(ge醫(yī)療公司)分離adc來實現(xiàn)由反相l(xiāng)c-ms對嚙齒動物血漿樣品中人源化adc的載藥量，該樹脂選擇性結(jié)合人fc結(jié)構(gòu)域。使用完全還原的cac10，用8藥物/mdpr-葡糖苷酸-季胺-ae8或mdpr-val-cit-pab-季胺-ae(mdpr-vcpab4-ae)14的抗體來制備adc。在37℃下，在無菌大鼠和小鼠血漿中孵育adc(1.0mg/ml)10天。在孵育期間的8個時間點處，去除50μl等份的各adc并在-80℃下冷凍。在時程完成之后，從各樣品純化adc并且用與tof質(zhì)譜儀共線的反相hplc分析以確定藥物：抗體比率。

酶促藥物釋放實驗。向27μl的dmso中加入15μl的10mm的8的藥物-接頭母液，并且在ep管中用n-乙酰半胱氨酸(30μl的pbs中的100mm母液)終止。加入48μl的pbs并且使管在室溫下靜置1小時。通過將β-葡糖醛酸糖苷酶(來自牛肝，≥100,000單位/g固體)溶解于100mmnaoac中至終濃度為1或2mg/ml同時制備酶母液，之后將38μl淬滅的接頭溶液與170μl的新鮮酶母液和132μl的100mmnaoac合并，然后在37℃下孵育。在每個時間點取25μl，加入到150μlmeoh中，密封并儲存在-80℃，直到所有時間點被取出。然后將樣品高速離心20分鐘，并通過uplc-ms分析，計數(shù)完整終止的接頭和釋放的藥物的離子。

胞內(nèi)藥物釋放。tf1α、l428、和hct-15細胞用于該研究。收獲已在正常條件下培養(yǎng)的細胞并在新鮮培養(yǎng)基中以5x10⁵細胞/ml洗滌。對于各處理條件，5-15x10⁶個細胞被接種到t25或t250燒瓶中。cokt9-5023(8-藥物/ab)以1μg/ml添加到培養(yǎng)物中并且它們在37℃，5％co2下孵育24小時。對于懸浮細胞，通過離心(500×g，5分鐘，4℃)收集已知體積的細胞培養(yǎng)物，并移走培養(yǎng)基的等分試樣并儲存用于質(zhì)譜分析(-20℃)。對于貼壁細胞，小心地去除培養(yǎng)基(儲存用于質(zhì)譜分析的等分試樣)，并用胰蛋白酶-edta提取細胞，然后離心(500×g，5分鐘，4℃)以收集細胞沉淀。對于懸浮液和貼壁細胞，將收獲的細胞沉淀重懸在冰冷pbs中，并移走等分試樣以用于計數(shù)并使用vi-cellxr2.03細胞活力分析儀(加利福尼亞州富勒敦的貝克曼庫爾特公司)測定平均細胞直徑。將剩余的細胞懸浮液沉淀(500×g，5分鐘)，然后用1ml冰冷pbs再洗滌一次。所得的沉淀在-20℃下儲存。

使用用于校準曲線的未處理的細胞沉淀和培養(yǎng)基產(chǎn)生未處理的樣品。用4μl的25x標準分析物摻入未處理的細胞沉淀。通過在400μl含有內(nèi)標的meoh中渦旋將摻入和處理的細胞沉淀懸浮并在-20℃下放置15分鐘。然后樣品在16,000×g下離心并且制備上清用于固相提取。用4μl的25x標準物摻入未處理的培養(yǎng)基樣品(0.5ml)。摻入和處理的培養(yǎng)基與10μl內(nèi)標混合并且制備用于固相提取。樣品經(jīng)固相提取并且回收的含藥物溶液經(jīng)干燥并重建用于通過lc-ms/ms的定量。為了得出實驗未知樣品中釋放藥物的定量方程，將每個藥物標準品的峰面積除以內(nèi)標獲得的峰面積。將所得峰面積比繪制為標準摻入量的函數(shù)，并使用線性回歸將數(shù)據(jù)點擬合到曲線上。使用派生方程將實驗樣品中釋放藥物與內(nèi)標獲得的峰面積比率轉(zhuǎn)化為藥物量。

實施例1：(2s，3r，4s，5s，6s)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(溴甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-3，4，5-三基三乙酸酯(2)：

用4.5ml無水thf中的已知(bioconjugatechem.2006，17，831-840)葡糖苷酸接頭片段(1，210mg，281μmol)充填火焰干燥的燒瓶。在室溫下在氮氣下攪拌溶液。依次加入三苯基膦(111mg，421.5μmol)和n-溴代琥珀酰亞胺(75mg，421.5μmol)，將溶液攪拌2小時。將反應(yīng)物在減壓下濃縮并通過biotage柱(己烷/etoac，30％-50％-70％)在硅膠上純化，得到2(222mg，97％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.36分鐘，m/z(es+)實際811.34。

實施例2：(s)-n-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(4)：

向壓力容器中加入無水2-丁酮(4.2ml)中的實施例1的溴化延伸-葡糖苷酸單元中間體(2，111mg，137μmol)和奧瑞他汀e(3，100mg，137μmol)。反應(yīng)容器用氮氣沖洗并密封。然后攪拌反應(yīng)并加熱至80℃持續(xù)12小時。將所得混合物冷卻、減壓濃縮、并通過biotage柱(ch2cl2/meoh，2％-20％-100％)在硅膠上純化，得到4(113mg，56％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.02分鐘，m/z(es+)實際1462.53。

實施例3：(s)-n-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(5)：用thf(1.3ml)和meoh(1.3ml)中的葡糖苷酸-ae(4，113mg，77μmol)充填燒瓶。在氮氣下攪拌該溶液并冷卻至0℃。lioh·h2o(19mg，462μmol)溶解在水(1.3ml)中，然后逐滴加入。將反應(yīng)升溫至室溫并攪拌1小時。反應(yīng)然后用乙酸(26μl，462μmol)終止并且減壓冷凝。在少量dmso中收集殘留物并通過制備型lc純化以得到5(34mg，40％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.20分鐘，m/z(es+)實際1100.51。

實施例4：(s)-n-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(7)：

用無水dmf(0.31ml)中的去保護的葡糖苷酸-ae(5，34mg，31μmol)填充燒瓶。在氮氣下添加mdpr(boc)-osu(6，14mg，37μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(27μl，155μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(27μl)終止并通過制備型lc純化以得到7(29mg，68％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.52分鐘，m/z(es+)實際1366.40。

實施例5：(s)-n-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(8)：

含mdpr(boc)-葡糖苷酸-ae(7，29mg，21μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(1.1ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。然后在dmso中收集反應(yīng)，減壓冷凝，并通過制備型lc純化以得到8(20mg，75％)。分析uplc-ms：tr＝1.23分鐘，m/z(es+)實際1266.39。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝9.53分鐘，m/z(es+)實際1266.70。

實施例6：((s)-1-(((s)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯(10)：

在氮氣下向火焰干燥的少品中加入二肽fmoc-val-cit-pab(9，75mg，125μmol)并冷卻至0℃。逐滴添加乙酸(1.3ml)中的33％hbr溶液。將溶液升溫至室溫并攪拌1小時。然后通過氮氣流吹掉剩余hbr并且反應(yīng)在減壓下進一步冷凝。在thf中收集所得殘留物并且然后再回流3次然后利用而沒有進一步純化。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.19分鐘，m/z(es+)實際664.47。

實施例7：(s)-n-(4-((s)-2-((s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(11)：

向裝有粗溴代二肽(10，48mg，72μmol)的壓力容器中添加奧瑞他汀e(3，30mg，41μmol)和無水2-丁酮(2.2ml)。該容器用氮氣沖洗并密封。然后然后加熱至80℃并攪拌3小時。通過lc-ms沒有觀察到反應(yīng)，添加n，n-二異丙基乙胺(7μl，41μmol)并且反應(yīng)再密封12小時。反應(yīng)混合物減壓回流并通過制備型lc純化以得到11(13mg，24％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.88分鐘，m/z(es+)實際1315.57。

實施例8：(s)-n-(4-((s)-2-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(12)：

向含無水dmf(0.4ml)的燒瓶中添加fmoc-val-cit-pab-ae(11，13mg，10μmol)。在氮氣下添加吡啶(0.1ml)。反應(yīng)在室溫下攪拌30分鐘。通過制備型lc直接純化反應(yīng)以得到12(8mg，74％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.27分鐘，m/z(es+)實際1093.62。

實施例9：(s)-n-(4-((7s，10s，13s)-7-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-10-異丙基-2，2-二甲基-4，8，11-三氧代-13-(3-脲基丙基)-3-氧雜-5，9，12-三氮雜十四烷酰胺基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(13)：

用無水dmf(146μl)中的val-cit-pab-ae(12，8mg，7.3μmol)填充燒瓶。在氮氣下添加mdpr(boc)-osu(6，3.3mg，8.8μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(6μl，35μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(6μl)終止并通過制備型lc純化以得到13(2mg，17％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.66分鐘，m/z(es+)實際1359.51。

實施例10：(s)-n-(4-((s)-2-((s)-2-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((1s，2r)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(14)：

含mdpr(boc)-val-cit-pab-ae(13，2mg，1.5μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(294μl)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌3小時。然后在dmso中收集反應(yīng)，減壓冷凝，并通過制備型lc純化以得到14(2.2mg，99％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.30分鐘，m/z(es+)實際1259.69。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝9.22分鐘，m/z(es+)實際1259.78。

實施例11：n-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-n-甲基-3-(甲基(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)氨基)-n-(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)丙-1-銨(16)：

實施例1的溴代延伸-葡糖苷酸單元中間體2(25mg，30μmol)和對稱吩嗪二聚體15(j.med.chem.，2001，44，1407)(19mg，30μmol)溶解在無水丁酮(0.48ml)和無水二甲基甲酰胺(0.48ml)中。用氮氣吹掃反應(yīng)并在密封管中加熱至80℃持續(xù)18小時。lc/ms分析顯示在起始物質(zhì)和雙烷基化副產(chǎn)物存在下的產(chǎn)物。粗物質(zhì)然后濃縮并通過制備型hplc純化以得到季胺16(8.5mg，21％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝12.52分鐘，m/z(es+)實際1359.19。

實施例12：n-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-n-甲基-3-(甲基(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)氨基)-n-(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)丙-1-銨(17)：

向燒瓶中裝有溶解在甲醇(0.2ml)和四氫呋喃(0.2ml)中的季胺接頭16(8.5mg，6.0μmol)，然后在冰浴中在氮氣下冷卻至0℃。將氫氧化鋰一水合物(0.75mg，18μmol)溶于水(0.1ml)中，并將溶液滴加到反應(yīng)燒瓶中。添加額外的水(0.2ml)、甲醇(0.2ml)、和四氫呋喃(0.2ml)。然后將反應(yīng)在0℃下攪拌1.5小時，然后將另外的氫氧化鋰(0.75mg，18μmol)加入到0.1ml水中至反應(yīng)中。3小時后，通過lc完成反應(yīng)，然后用冰醋酸(2.1μl)終止并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。通過制備型hplc純化粗物質(zhì)以得到完全去保護的季胺接頭17(3.7mg，62％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝10.26分鐘，m/z(es+)實際997.45。

實施例13：n-(4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰胺基)丙酰胺基)芐基)-n-甲基-3-(甲基(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)氨基)-n-(2-(9-甲基吩嗪-1-甲酰胺基)乙基)丙-1-銨(19)：

在氮氣下向攪拌的無水二甲基甲酰胺(0.18ml)中接頭17(3.7mg，3.6μmol)的溶液中以無水二甲基甲酰胺(0.18ml)溶液加入馬來酰亞氨基己?；?琥珀酰亞胺酯18(1.2mg，4.0μmol)，然后加入二異丙基乙酰胺(3.8μl)。在室溫下氮氣攪拌反應(yīng)1小時后，再加入90μl二甲基甲酰胺中的18(0.6mg)，然后加入90μl二甲基亞砜以促進所有反應(yīng)物的溶解。將反應(yīng)在室溫下在氮氣下再攪拌2小時，然后通過多次制備型hplc注射進行純化，以從產(chǎn)物，季胺-吩嗪二聚體接頭19(2.1mg，45％)中除去殘留的18。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝10.76分鐘，m/z(es+)實際1190.35。

實施例14：(s)-2-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-丙酸(22)：

用無水二甲基甲酰胺(10.6ml)中的boc-val-osu(20，1.0g，3.18mmol)和h-ala-oh(21，312mg，3.5mmol)填充燒瓶。添加n，n-二異丙基乙胺(1.1ml，6.4mmol)并且溶液在50℃下在氮氣下攪拌12小時。在dmso中收集殘留物并通過制備型lc純化以得到22(808mg，88％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.38分鐘，m/z(es+)實際289.60。

實施例15：((s)-1-(((s)-1-((4-(羥基甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(24)：

在火焰干燥的燒瓶中加入無水二氯甲烷(14ml)中的二肽22(808mg，2.8mmol)和4-氨基苯甲醇23(345mg，2.8mmol)。以固體添加eedq(762mg，3.1mmol)并在室溫下在氮氣下攪拌12小時。反應(yīng)然后冷凝并通過biotage柱在二氧化硅上純化(ch2cl2/meoh，0％-10％)以得到24(660mg，60％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.51分鐘，m/z(es+)實際394.51。

實施例16：((s)-1-(((s)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(25)：

用氮氣吹掃含boc-val-ala-paba-oh(24，100mg，254μmol)、n-溴代琥珀酰亞胺(68mg，381μmol)、和三苯基膦(100mg，381μmol)的燒瓶。在thf(4ml)中收集反應(yīng)并攪拌12小時。反應(yīng)然后冷凝并通過biotage柱在二氧化硅上純化(己烷/meoh，10％-100％)以得到25(94mg，81％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.09分鐘，m/z(es+)實際456.10。

實施例17：4-(2-((1r，3r)-1-乙酰氧基-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(2s，4r)-叔丁酯(27)：

向火焰干燥的燒瓶中填充在無水dcm(0.7ml)和叔丁醇(0.7ml)中的特吡萊辛m(26，10mg，14μmol)。添加二異丙基碳二亞胺(3.2μl，21μmol)和dmap(0.08mg，0.7μmol)并且反應(yīng)在室溫下攪拌48小時。反應(yīng)經(jīng)冷凝，在dmso中收集并通過制備型lc純化以得到27(3.5mg，32％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.35分鐘，m/z(es+)實際784.56。

實施例18：(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-5-(叔丁氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-2-((s)-2-((叔丁氧基-羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(28)：

用無水丁酮(0.765ml)中的boc-val-ala-pab-br(25，3.5mg，7.7μmol)和保護的特吡萊辛m(4.0mg，5.1μmol)來填充壓力容器。添加n，n-二異丙基乙胺(1.8μl，10μmol)并且用氮氣吹掃反應(yīng)。容器經(jīng)密封并在80℃下攪拌12小時。反應(yīng)經(jīng)冷凝，在dmso中收集并通過制備型lc純化以得到28(3.5mg，58％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.51分鐘，m/z(es+)實際1159.58。

實施例19：(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-2-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(29)：

含boc-val-ala-pab-tubm-otbu(28，3.5mg，3μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.3ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)經(jīng)冷凝，在dmso中收集并通過制備型lc純化以得到29(1.9mg，63％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.05分鐘，m/z(es+)實際1003.60。

實施例20：(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-2-((s)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(30)：

mc-osu(18，0.6mg，2μmol)在無水二甲基甲酰胺(0.2ml)中收集并且添加至含val-ala-pab-tubm(29，1.9mg，2μmol)的燒瓶中。添加n，n-二異丙基乙基胺(1.0mg，8μmol)并且在氮氣下攪拌反應(yīng)3小時。在dmso中收集殘留物并通過制備型lc純化以得到季胺特吡萊辛接頭30(1.2mg，53％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.25分鐘，m/z(es+)實際1196.45。

實施例21：(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((7s，10s，13s)-7-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-10-異丙基-2，2，13-三甲基-4，8，11-三氧代-3-氧雜-5，9，12-三氮雜十四烷酰胺基)-芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(31)：

mdpr(boc)-osu(6，1.3mg，3.5μmol)在無水二甲基甲酰胺(0.3ml)中收集并且添加至含val-ala-pab-tubm(29，3.2mg，3.2μmol)的燒瓶中。添加n，n-二異丙基乙基胺(1.6mg，13μmol)并且在氮氣下攪拌反應(yīng)3小時。在dmso中收集反應(yīng)并通過制備型lc純化以得到31(2.0mg，49％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.35分鐘，m/z(es+)實際1269.76。

實施例22：(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-(4-((s)-2-((s)-2-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(32)：

含mdpr(boc)-val-ala-pab-tubm(31，2mg，1.6μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(1.6ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)經(jīng)冷凝，在dmso中收集并通過制備型lc純化以得到32(1.0mg，54％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.02分鐘，m/z(es+)實際1169.72。

實施例23：2-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(4-(4，5-二甲氧基-2-(喹啉-3-甲酰胺基)苯甲酰氨基)苯乙基)-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-2-鎓(34)：

向壓力容器中填充無水2-丁酮(2.9ml)中的實施例1的溴化延伸-葡糖苷酸單元中間體(2，78mg，137μmol)和tariquidar(33，62mg，137μmol)。反應(yīng)容器用氮氣沖洗并密封。反應(yīng)然后攪拌并加熱至80℃持續(xù)4小時，其那時lc/ms顯示轉(zhuǎn)化成季銨化的產(chǎn)物。所得經(jīng)冷卻、減壓回流并通過制備型hplc純化以得到34(123mg，90％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.05分鐘，m/z(es+)實際1377.74。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝11.23分鐘，m/z(es+)實際1377.47。

實施例24：2-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(4-(4，5-二甲氧基-2-(喹啉-3-甲酰胺基)苯甲酰氨基)苯乙基)-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-2-鎓(35)：

向燒瓶中填充溶解在甲醇(1.4ml)和四氫呋喃(1.4ml)中的季胺接頭34(123mg，83μmol)，然后在冰浴中在氮氣下冷卻至0℃將氫氧化鋰一水合物(21mg，500μmol)溶于水(1.4ml)中，并將溶液滴加到反應(yīng)燒瓶中。然后將反應(yīng)在0℃下攪拌2小時，然后將另外的氫氧化鋰(7mg，170μmol)加入到0.45ml水中至反應(yīng)中。3小時后，通過lc完成反應(yīng)，然后用冰醋酸(28μl)終止并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。通過制備型hplc純化粗物質(zhì)以得到完全去保護的季胺接頭35(71mg，85％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.29分鐘，m/z(es+)實際1015.74。

實施例25：2-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(4-(4，5-二甲氧基-2-(喹啉-3-甲酰胺基)苯甲酰氨基)-苯乙基)-6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫異喹啉-2-鎓(36)：

向含去保護的葡糖苷酸-tariquidar35(40mg，35μmol)的燒瓶中加入無水二甲基甲酰胺(0.9ml)中mdpr(boc)-osu6(20mg，52μmol)的溶液。加入n，n-二異丙基乙胺(30μl)并且反應(yīng)在室溫下在氮氣下攪拌3小時，在那時lc-ms顯示轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。通過制備型hplc純化粗反應(yīng)產(chǎn)物以提供偶聯(lián)的產(chǎn)物mdpr(boc)-葡糖苷酸-tariquidar(30mg，67％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝9.99分鐘，m/z(es+)實際1281.45。含mdpr(boc)-葡糖苷酸-tariquidar(28mg，20μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(2ml)中10％tfa逐滴加入并在室溫下攪拌1小時，在那時lc-ms顯示完全去保護。反應(yīng)在2mldmso中稀釋，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并且通過制備型hplc純化以得到36(20mg，定量)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.30分鐘，m/z(es+)實際1181.64。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝8.95分鐘，m/z(es+)實際1181.41。

實施例26：制備特吡瓦林醚中間體的一般過程

醚化：在經(jīng)火焰干燥的燒瓶中加入無水四氫呋喃(50mm)中的boc-保護的特吡瓦林(j.org.chem.，2008，73，4362-4369)中間體41，向其中加入18-冠-6(2.0當(dāng)量)并冷卻至-78℃。以四氫呋喃中的1m溶液滴加六甲基二硅疊氮鉀(1.5當(dāng)量)，然后將反應(yīng)在-78℃在氮氣下攪拌1小時。然后加入碘代烷烴(2-5當(dāng)量)，將反應(yīng)緩慢升溫至室溫，然后進行uplc/ms。一旦起始材料被消耗，反應(yīng)物在冰上冷卻，用飽和氯化銨終止并在二氯甲烷(10體積)中稀釋。有機層用0.1mhcl洗滌，所得水相用二氯甲烷萃取兩次。用硫酸鈉干燥合并的有機物，過濾，濃縮至干。粗制boc保護的o-烷基化乙酯產(chǎn)物(boc-tuv(o-醚)-oet)的純化通過硅膠快速色譜法或制備型hplc實現(xiàn)。制備化合物42、43和44(方案7)來例示一般過程。

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-羧乙酯(42)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.62分鐘，m/z(es+)計算401.21，實際401.28。

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-羧乙酯(43)：如上所述，使用碘乙烷(89μl，880μmol)將特吡瓦林中間體41(170mg，440μmol)o-乙基化，經(jīng)硅膠純化洗脫甲醇和二氯甲烷混合物后得到標題化合物。uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.66分鐘，m/z(es+)計算415.23(m+h)⁺，實際415.29

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-羧乙酯(44)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.77分鐘，m/z(es+)計算428.23(m+h)⁺，實際451.30。¹hnmr(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1∶1混合，cdcl3)δ(ppm)0.91(m，9h)，1.40(t，j＝7.0hz，3h)，1.47(由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，9h)，1.64(m，3h)，1.87(m，2h)，2.74(m，3h)，3.42(m，2h)，4.10(m，1h)，4.42(q，j＝7.0hz，2h)，4.50(m，1h)，8.14(由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，1h).

去保護：純化的o-烷基化產(chǎn)物(boc-tuv(o-醚)-oet)經(jīng)皂化以得到向右的特吡瓦林醚游離酸化合物(boc-tuv(o-醚)-oh)使用四氫呋喃∶甲醇∶水的1∶1∶1混合物在20mm反應(yīng)濃度下如下進行。o-烷基化的特吡瓦林中間體溶于1體積的各四氫呋喃和甲醇中?；旌衔锶缓笤?℃的冰浴中冷卻。氫氧化鋰一水合物(2-3當(dāng)量)溶于1體積的蒸餾水中并且逐滴加入反應(yīng)燒瓶中，在0℃下攪拌。然后使反應(yīng)升溫至室溫并通過uplc/ms監(jiān)測。一旦起始物質(zhì)被轉(zhuǎn)化成游離酸，用冰醋酸(2-3當(dāng)量)終止反應(yīng)并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。然后通過制備型hplc純化粗羧酸。分別從化合物42、43和44制備化合物45、46和47(方案7)以例示一般過程。

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-羧乙酯(45)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.47分鐘，m/z(es+)計算373.18，實際373.41。¹hnmr(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的1∶1混合，cdcl3)δ(ppm)0.87(dd，j＝6.7，2.0hz，3h)，0.96(dd，j＝6.7，1.2hz，3h)，1.49(由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，9h)，1.67(m，1h)，1.85(m，1h)，2.01(m，1h)，2.70(m，3h)，3.41(s，3h)，4.12(m，1h)，4.36(第一旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，dd，j＝10.5，2.3hz，0.5h)，4.48(第二旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，d，j＝8.6hz，0.5h)，8.28(由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，1h).

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-羧乙酯(46)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.48分鐘，m/z(es+)計算387.20(m+h)⁺，實際387.26。¹hnmr(cdcl3)δ(ppm)0.88(dd，j＝6.7，2.0hz，3h)，0.96(d，j＝6.6hz，3h)，1.49(來自旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個，9h)，1.68(m，1h)，1.86(m，1h)，2.00(m，1h)，2.69(m，3h)，3.53(m，2h)，4.09(m，1h)，4.43(第一旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，dd，j＝10.2，2.7hz，0.5h)，4.54(第二旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，d，j＝7.0hz，0.5h)，8.24(由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，1h).

2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-羧乙酯(47)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.58分鐘，m/z(es+)計算401.21(m+h)⁺，實際401.28(m+na)⁺。

實施例27：通過胺偶聯(lián)導(dǎo)入特吡苯丙氨酸組分的一般過程。

肽偶聯(lián)：通過溶解在無水二甲基甲酰胺(25-50mm)并添加hatu(2.4當(dāng)量)和dipea(5當(dāng)量)來預(yù)活化實施例26的o-烷基化特吡瓦林游離酸(boc-tuv(o-醚)-oh)然后在室溫下在氮氣下攪拌反應(yīng)混合物持續(xù)10分鐘。活化的酸然后添加至特吡苯丙氨酸烯丙酯40(org.lett.，2007，9，1605-1607)并且反應(yīng)然后在環(huán)境溫度下在氮氣下攪拌，通過uplc/ms監(jiān)測過程。在反應(yīng)完成之后，加入冰醋酸(14當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化產(chǎn)物(boc-tuv(o-醚)-tup-o-烯丙基)。分別從化合物45、46和47制備化合物48、49和50(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(48)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.96分鐘，m/z(es+)計算602.33(m+h)⁺，實際602.26。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(49)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.84分鐘，m/z(es+)計算616.34(m+h)⁺，實際616.43。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(50)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝2.00分鐘，m/z(es+)計算630.36(m+h)⁺，實際630.45。¹hnmr(cdcl3)δ(ppm)0.94(m，9h)，1.19(d，j＝7.4hz，3h)，1.49(s，9h)，1.64(m，5h)，1.84(m，1h)，2.03(m，2h)，2.63(m，1h)，2.73(m，3h)，2.93(m，2h)，3.41(m，2h)，4.07(m，2h)，4.29(m，1h)，4.41(m，2h)，4.55(m，2h)，5.25(m，2h)，5.88(m，1h)，7.24(m，5h)，8.05(來自旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的2個s，1h).

去保護：用二氯甲烷中的10％tfa(25mm)的二氯甲烷溶液將純化的o-烷基化的特吡瓦林-特吡苯丙氨酸二肽(boc-tuv(o-醚)-tup-o-烯丙基)產(chǎn)物脫保護以在酸性條件下顯露出特吡瓦林胺仲胺官能團。具體地，起始物質(zhì)溶于無水二氯甲烷(9體積)并在0℃下在氮氣下攪拌。然后向攪拌的溶液中逐滴加入三氟乙酸(1體積)。然后使反應(yīng)緩慢升溫至室溫并通過uplc/ms監(jiān)測。在完成中，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮反應(yīng)并在真空線上抽空過夜。游離胺(nh(ch3)-tuv(o-醚)-tup-o-烯丙基)直接使用不需要進一步純化。分別從化合物48、49和50制備化合物51、52和53(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-甲氧基-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(51)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.17分鐘，m/z(es+)計算524.26(m+na)⁺，實際524.27。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-乙氧基-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(52)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.11分鐘，m/z(es+)計算516.29(m+h)⁺，實際516.37。

(2s，4r)-2-甲基-4-(2-((1r，3r)-4-甲基-3-(甲基氨基)-1-丙氧基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-5-苯基戊酸烯丙酯(53)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.16分鐘，m/z(es+)計算530.31(m+h)⁺，實際530.40。

通過用合適保護并如方案7所示的其他氨基酸或含胺酸輸入來替換化合物40的合適保護的特吡苯丙氨酸來制備類似的二肽，包括

其中r^7b是o-連接的取代基，優(yōu)選-oh，下標n是0、1或2，優(yōu)選0或1；并且還包括nh2-ch2-co2h、nh2-ch2ch2co2h和nh2-ch2ch2ch2co2h。

實施例28：用fmoc-保護的l-異亮氨酸對o-烷基化特吡瓦林-特吡苯丙氨酸烷基酯二肽的胺偶聯(lián)的一般方案。

將fmoc-l-異亮氨酸(1.3-2當(dāng)量)溶于無水二甲基甲酰胺(50-200mm)中并用hatu(1.5-2當(dāng)量)和dipea(2當(dāng)量)預(yù)活化；將混合物在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘?；罨乃崛缓筇砑拥桨凑諏嵤├?7制備的nh2-tuv(o-醚)-tup-o-烯丙基二肽；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌，并且通過uplc/ms監(jiān)測。一旦反應(yīng)停止進行或達到完成，加入冰醋酸(13當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化所得的fmoc-ile-tuv(o-醚)-tupo-烯丙基三肽產(chǎn)物。分別從化合物51、52和53制備化合物54、55和56(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7-甲基-3，6-二氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十二烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(54)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.07分鐘，m/z(es+)計算837.43(m+h)⁺，實際837.20

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7-甲基-3，6-二氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十三烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(55)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.95分鐘，m/z(es+)計算851.44(m+h)⁺，實際851.54。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7-甲基-3，6-二氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十四烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(56)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝2.25分鐘，m/z(es+)計算865.46(m+h)⁺，實際865.65。

根據(jù)實施例26-28的一般過程通過用適當(dāng)保護的其它氨基酸或含胺酸輸入替代實施例26中的化合物40的適當(dāng)保護的苯丙氨酸來制備類似的三肽，如方案7所示?；蛘呋虺撕线m保護的特吡苯丙氨酸以外，通過用具有疏水性側(cè)鏈的其他合適保護的氨基酸如fmoc-l-亮氨酸替代fmoc-l-異亮氨酸來獲得其他三肽。

實施例29：用含叔胺的酸對異亮氨酸-特吡瓦林(o-醚)-特吡苯丙氨酸烯丙基酯三肽的酰胺偶聯(lián)用于導(dǎo)入特吡萊辛n-末端組分的一般過程。

去保護：根據(jù)實施例28制備的fmoc-三肽(fmoc-ile-tuv(o-醚)-tupo-烯丙基)通過在氮氣在室溫下在攪拌下使用二甲基甲酰胺(20mm)中的20％哌啶除去fmoc保護基來去保護。一旦完成去保護，如uplc/ms所監(jiān)測，反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。然后將粗產(chǎn)物通過制備型hplc純化以得到游離胺三肽(nh2-ile-tuv(o-醚)-tupo-烯丙基)。分別從化合物54、55和56制備化合物57、58和59(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(57)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.30分鐘，m/z(es+)計算637.34(m+na)⁺，實際637.57。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(58)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.18分鐘，m/z(es+)計算629.38(m+h)⁺，實際629.45。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(59)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.29分鐘，m/z(es+)計算643.39(m+h)⁺，實際643.55。

肽偶聯(lián)：將(r)-n-甲基-哌啶酸(d-mep)60(1.5-2當(dāng)量)溶于無水二甲基甲酰胺(25-50mm)中并用hatu(2當(dāng)量)和dipea(4當(dāng)量)預(yù)活化；將反應(yīng)混合物在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘。活化的酸然后添加從fmoc去保護獲得的nh2-ile-tuv(o-醚)-tupo-烯丙基三肽；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌，并且通過uplc/ms監(jiān)測。在反應(yīng)完成之后，加入冰醋酸(14當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化四肽產(chǎn)物(d-mep-ile-tuv(o-醚)-tupo-烯丙基)。分別從化合物57、58和59制備化合物61、62和63(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(61)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.29分鐘，m/z(es+)計算762.42(m+na)⁺，實際762.32。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(62)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.25分鐘，m/z(es+)計算754.46(m+h)⁺，實際754.55。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(63)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.36分鐘，m/z(es+)計算768.48(m+h)⁺，實際768.55。

為了獲得相應(yīng)的游離藥物(d-mep-ile-tuv(o-醚)-tupoh)的微管蛋白理解素醚，通過溶解于無水二氯甲烷(20mm)中將烯丙酯保護的特吡萊辛醚四肽去保護以提供具有游離的特吡苯丙氨酸酸部分的特吡萊辛醚并用四(三苯基膦)鈀(0.1當(dāng)量)、三苯基膦(0.2當(dāng)量)和無水吡咯烷(8當(dāng)量)處理，并將反應(yīng)在環(huán)境溫度下在氮氣下攪拌。一旦uplc/ms顯示轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物游離酸，用冰醋酸終止反應(yīng)(22當(dāng)量)，用乙腈和二甲基甲酰胺稀釋，然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。然后通過制備型hplc純化粗特吡萊辛醚。分別從化合物61、62和63制備化合物64、65和66(方案7)以例示一般過程。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(64)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.05分鐘，m/z(es+)計算700.41(m+h)⁺，實際700.50。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-乙氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(65)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.09分鐘，m/z(es+)計算714.43(m+h)⁺，實際714.51

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-丙氧基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(66)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.19分鐘，m/z(es+)計算728.44(m+h)⁺，實際728.54。

另外的特吡萊辛醚，包括在替換實施例27的特吡苯丙氨酸輸入(化合物40)的氨基酸或含胺酸輸入中具有變異的那些，和/或?qū)嵤├?8中的fmoc-氨基酸(fmoc-ile)通過用其他n-烷基化哌啶酸輸入或n-烷基化氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸、n-烷基化-d-脯氨酸或n，n-二-烷基氨基酸如n，n-二甲基甘氨酸替代d-mep來制備。

實施例30：lss前體(s)3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酸全氟苯基酯(68)的制備：

向裝有mdpr(boc)-oh(67)(naturebiotech，2014，32，105-1062)67(500mg，1.76mmol)的燒瓶中加入dmf(8.8ml)中的五氟苯酚(324mg，1.76mmol)溶液，然后加入固體的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(371mg，1.93mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌1小時，然后用50ml的h2o中的飽和nh4cl和50mlh2o終止。用dcm萃取水層2次，然后鹽水洗滌有機物，在naso4上干燥，并且在減壓下濃縮以得到標題的化合物(589mg，74％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.51分鐘，m/z(es+)計算473.07(m+na)⁺，實際473.14。

化合物68，縮寫為mdpr(boc)-opff是用于制備藥物-接頭化合物的活化形式的式m¹-a'(bu)-cooh的示例性lss前體(即，一類含lb’的部分)，包括通式m¹-a1(bu)-ao-w-y-d⁺和m¹-a(bu)-y(w)-d⁺的那些，其中m¹是馬來酰亞胺部分，a’是延伸亞基(單元)前體，a1和ao是延伸單元a的亞基，bu是堿性單元如氨基烷基部分，y是自毀間隔單元并且-y(w)-是葡糖苷酸部分，并且包含例如作為糖部分的葡糖醛酸殘基和作為自毀部分的pab殘基；并且d⁺是季銨化的特吡萊辛。

實施例31：包括從特吡萊辛(o-醚)-烯丙基酯的葡糖醛酸釋放機制的制備藥物-接頭化合物中間體的一般過程。

式a’-yy(w’w’)-d⁺的示例性藥物-接頭化合物中間體，其中下標w’和y各自為1，a’為延伸單元前體，d⁺為季銨化的特吡萊辛(o-醚)藥物單位并且-y(w’)-是葡糖苷酸單元，按照以下方式由實施例29的特吡萊辛(o-醚)-烯丙基酯制備。所得產(chǎn)物由fmoc-glucq-tub(o-醚)-o-烯丙基的通式表示。

接頭單元精制：在壓力容器中加入無水2-丁酮(50mm)中的d-mep-ile-tuv(o-醚)-tup-o-烯丙基(1當(dāng)量)和實施例1的溴化延伸-葡糖醛酸單元中間體2(1.5當(dāng)量)。反應(yīng)容器用氮氣沖洗并密封。然后攪拌反應(yīng)并加熱至60℃持續(xù)18小時。所得混合物經(jīng)冷卻，減壓冷凝，然后以粗制物進行或在少量dmso中收集與通過制備型hplc純化以得到標題化合物。分別從化合物61、62和63制備化合物69、70和71(方案8)，并且化合物2以例示一般過程。

(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-甲氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(69)：分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.61分鐘，m/z(es+)計算1470.68(m)⁺，實際1471.68。

(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-乙氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(70)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.49分鐘，m/z(es+)計算1484.69(m)⁺，實際1484.84。

(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)-4-甲基-1-丙氧基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(71)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.47分鐘，m/z(es+)計算1498.71(m)⁺，實際1498.85。

去保護：fmoc-glucq-tub(o-醚)-o-烯丙基產(chǎn)物在冷卻至0℃的thf和meoh中完全去保護。向lioh·h2o(6.0當(dāng)量)中逐滴加入h2o(1∶1∶1thf∶meoh∶h2o，50mm終濃度)，之后反應(yīng)升溫至室溫并攪拌過夜。減壓去除thf和meoh，并且使用少量dmso重溶所得沉淀物并通過制備型hplc純化混合物。完全去保護的產(chǎn)物縮寫為h-glucq-tub(o-醚)-oh。分別從化合物69、70和71制備化合物72、73和74(方案8)以例示一般過程。

(2r)-1-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)-1-甲氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(72)：fmoc-glucq-tub(ome)-o烯丙基69(17mg，12μmol)如上所述去保護以提供72(4.3mg，34％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.08分鐘，m/z(es+)計算1068.53(m)⁺，實際1068.66。

(2r)-1-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-乙氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(73)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.95分鐘，m/z(es+)計算1082.55(m)⁺，實際1082.68。

(2r)-1-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基-1-丙氧基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(74)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.98分鐘，m/z(es+)計算1096.56(m)⁺，實際1096.67。

實施例32：通過lss-延伸亞基前體與包含葡糖苷酸單元和季銨化的特吡萊辛(o-醚)藥物單元的藥物-接頭中間體的酰胺偶聯(lián)制備藥物接頭化合物的一般過程。

式lb'-aa-yy(w’w’)-d⁺的示例性藥物接頭化合物，其中下標a、y和w’各自為1，其中l(wèi)b'-a-具有式m¹-a1(bu)-ao-，其中m¹-a1(bu)-表示自身穩(wěn)定化(lss)的前體，其是配體藥物偶聯(lián)物中的一類的含lb'-的部分，其中a1是延伸單元a的亞基，ao是另一個亞基，d⁺為季銨化的特吡萊辛(o-醚)藥物單元并且-y(w’)-是葡糖苷酸單元，由h-glucq-tub(o-醚)-oh化合物以下述方式制備并且縮寫為mdpr-glucq-tub(o-醚)-oh，其中mdpr-是m¹-a¹(bu)-ao-部分。

接頭單元精制：以dmf(10mm)中實施例30的mdpr(boc)-opfp(68，1.2當(dāng)量)的溶液加入裝有實施例31的胺h-glucq-tub(o-醚)-oh的燒瓶。添加n，n-二異丙基乙基胺(4.0當(dāng)量)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)用acoh(4.0當(dāng)量)終止，然后在dmso(1體積)中稀釋并通過制備型hplc純化。分別從化合物72、73和74制備化合物75、76和77(方案8)以例示一般過程。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-甲氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(75)：分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.22分鐘，m/z(es+)計算1334.62(m)⁺，實際1334.68。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-乙氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(76)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.19分鐘，m/z(es+)計算1348.64(m)⁺，實際1348.79。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基-1-丙氧基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(77)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.24分鐘，m/z(es+)計算1362.65(m)⁺，實際1362.78。

去保護：將酰胺鍵形成的產(chǎn)物去保護以下列方式除去boc保護基團。用mdpr(boc)-glucq-tub(o-醚)-oh填充燒品并冷卻至0℃。加入dcm中10％tfa的溶液(50mm)，并將反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝?，同時攪拌1小時。然后將反應(yīng)用dmso(1體積)稀釋，通過減壓除去dcm，然后通過制備型hplc純化。分別從化合物75、76和77制備化合物78、79和80(方案8)以例示一般過程。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-甲氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(78)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.09分鐘，m/z(es+)計算1234.57(m)⁺，實際1234.65。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-乙氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(79)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.95分鐘，m/z(es+)計算1248.59(m)⁺，實際1248.72。

(2r)-1-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基-1-丙氧基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(80)：分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.03分鐘，m/z(es+)計算1262.60(m)⁺，實際1262.73。

實施例33：異亮氨酸-特吡瓦林(oac)-特吡苯丙氨酸烯丙酯的制備

皂化：燒瓶中裝有thf(1.35ml)和meoh(1.35ml)中的boc-tuv(oac)-tup-oet(90，50mg，81μmol)并冷卻至0℃。lioh·h2o(27mg，647μmol)溶解在水(1.35ml)中，然后逐滴加入。將反應(yīng)升溫至室溫并攪拌3小時。反應(yīng)然后用乙酸(37μl，647μmol)終止并且減壓冷凝。殘留物在dmso中收集并通過制備型hplc純化以提供(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-羥基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(91)(44mg，定量)(方案9)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.53分鐘，m/z(es+)計算548.28(m+h)⁺，實際548.24。

乙酰化和烯丙基酯去保護：將boc-tuv(oh)-tup-oh(91，44mg，81μmol)產(chǎn)物溶于無水吡啶(1.6ml)中，并在室溫下在n2下攪拌。逐滴加入乙酸酐(15.4μl，162μmol)。在攪拌1小時后加入1.0額外當(dāng)量的乙酸酐，2小時后通過lcms確定反應(yīng)完成。將反應(yīng)物減壓濃縮至干，然后在無水烯丙醇(1.6ml)中再溶解。加入焦碳酸二烯丙酯(54μl，325μmol)，然后加入固體dmap(3.0mg，24μmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌并通過lcms監(jiān)測，根據(jù)需要加入額外的焦碳酸二烯丙酯以推動反應(yīng)完成(4.0額外當(dāng)量)。反應(yīng)在dmso中收集，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-乙酰氧基-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(92)(方案9)(33mg，65％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.75分鐘，m/z(es+)計算630.32(m+h)⁺，實際630.42。

二肽去保護：裝有boc-tuv(oac)-tup-o-烯丙基(92，33mg，21μmol)的燒瓶在n2下冷卻至0℃。ch2cl2(0.52ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)減壓濃縮，在dcm中重溶，并冷凝3次以去除tfa以得到粗(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-乙酰氧基-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(93)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.03分鐘，m/z(es+)計算530.27(m+h)⁺，實際530.36?；衔?3(方案9)利用而不需要進一步純化。

肽偶聯(lián)：向裝有h-tuv(oac)-tup-o-烯丙基(93，28mg，53μmol)的燒瓶中添加固體hatu(40mg，106μmol)和boc-l-ile-oh(15mg，63μmol)，之后添加dmf(1.0ml)。添加n，n-二異丙基乙基胺(37μl，211μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)48小時。反應(yīng)在dmso中收集，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到(2s，4r)-4-(2-((6s，9r，11r)-6-((s)-仲丁基)-9-異丙基-2，2，8-三甲基-4，7，13-三氧代-3，12-二氧雜-5，8-二氮雜十四烷-11-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(94)(方案9)(19mg，49％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.72分鐘，m/z(es+)計算743.41(m+h)⁺，實際743.51。

三肽去保護：裝有boc-ile-tuv(oac)-tup-o-烯丙基(94，19mg，26μmol)的燒瓶在n2下冷卻至0℃。ch2cl2(0.52ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)減壓濃縮，在dcm中重溶，并冷凝3次以去除tfa以得到粗(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-乙酰氧基-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(95)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.18分鐘，m/z(es+)計算643.36(m+h)⁺，實際643.42。化合物95(方案9)，縮寫為ile-tuv(oac)-tup-o-烯丙基(異亮氨酸-特吡瓦林(oac)-特吡苯丙氨酸烯丙酯)被利用而沒有進一步純化。

實施例34.對應(yīng)于特吡萊辛藥物的n-末端部分的季銨化氮雜環(huán)烷基的制備。

n-末端前體(d-mep)：h-pip-otbu(96，500mg，2.70mmol)收集于meoh(4.50ml)、acoh(4.50ml)和h2o(4.50ml)中37％ch2o并攪拌20分鐘。將nabh3cn(509mg，8.10mmol)以固體緩慢加入，劇烈鼓泡，攪拌30分鐘。然后將反應(yīng)倒入200ml飽和nahco3溶液中，并用200mldcm萃取3次。有機層用鹽水洗滌，用na2so4干燥，減壓冷凝以得到(r)-1-甲基哌啶-2-甲酸叔丁酯(97)(516mg，96％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.53分鐘，m/z(es+)計算200.17(m+h)⁺，實際200.21。稱為boc-d-mep-otbu的化合物97(方案10)不經(jīng)進一步純化而用于以下方式與實施例1的溴化延伸-葡糖醛酸單元中間體2縮合。

季銨化：向壓力容器中加入無水2-丁酮(1.71ml)中的溴化延伸-葡糖苷酸單元中間體(2，104mg，128μmol)和d-mep-otbu(97，34mg，171μmol)。反應(yīng)容器用氮氣沖洗并密封。然后攪拌反應(yīng)并加熱至60℃持續(xù)12小時。所得混合物經(jīng)冷卻，減壓冷凝，收集于少量dmso并通過制備型hplc純化以得到(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(叔丁氧基羰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(98)(97mg，82％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.32分鐘，m/z(es+)計算930.40(m)⁺，實際930.49。然后除去糖部分的保護基團，然后用烯丙酯重新保護，以下列方式提供化合物99(方案10)。

糖苷去保護：在n2下向裝有無水烯丙醇(2.09ml)中的具有乙酸酯和甲酯保護基團的化合物98(97mg，104μmol)的火焰干燥的燒瓶中加入ti(oc2h5)4(87μl，417μmol)，并將所得反應(yīng)混合物加熱至80℃，同時攪拌2小時。然后將反應(yīng)冷卻至室溫并倒入50ml1mhcl中。靜置45分鐘后，用50mldcm對hcl萃取3次。所得有機物用鹽水洗滌，在na2so4上干燥，冷凝，并通過制備型hplc純化以得到(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-((烯丙基氧基)羰基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(叔丁氧基羰基)-1-甲基哌啶-1-鎓(99)(42mg，48％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.18分鐘，m/z(es+)計算830.39(m)⁺，實際830.49。

實施例35.通過將具有特吡瓦林-(o-酰基)部分酰胺偶聯(lián)至對應(yīng)于游離特吡萊辛藥物的季銨化氮雜環(huán)烷基來制備藥物-接頭化合物中間體。將實施例34的化合物99(方案10)，縮寫為fmoc-gluc(o-烯丙基)qd-mep-otbu，通過除去叔丁基酯保護基團去保護以得到化合物100，然后通過以下方法形成肽鍵將其與異亮氨酸-特吡瓦林-(oac)-特吡苯丙氨酸烯丙酯(化合物95)偶聯(lián)。

n-末端(d-mep)去保護：裝有fmoc-gluc(o-烯丙基)q-d-mep-otbu(99，42mg，50μmol)的燒瓶在n2下冷卻至0℃。ch2cl2(2.5ml)中30％tfa的溶液逐滴加入并攪拌18小時。反應(yīng)經(jīng)減壓濃縮，收集于dmso，并通過制備型hplc純化以得到25mg(64％)(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-((烯丙基氧基)羰基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-羧基-1-甲基哌啶-1-鎓(100)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.05分鐘，m/z(es+)計算774.32(m)⁺，實際774.42。

肽偶聯(lián)：通過裝有h-ile-tuv(oac)-tup-o-烯丙基(95，23mg，36μmol)的燒瓶中向加入化合物100(28mg，36μmol)和固體形式的hatu(27mg，72μmol)，隨后加入dmf(0.714ml)將化合物100(方案10)(縮寫為fmoc-gluc(o-烯丙基)qd-mep-oh)與三肽95縮合。然后添加n，n-二異丙基乙基胺(25μl，143μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)1小時。反應(yīng)收集于dmso中并通過制備型lc純化以得到23mg(46％)(2r)-1-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-((烯丙基氧基)羰基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-甲基哌啶-1-鎓(101)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.39分鐘，m/z(es+)計算1398.66(m)⁺，實際1398.81。

糖苷和tup去保護：fmoc-gluc(o-烯丙基)q-mep-ile-tuv(oac)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(即化合物101)的fmoc和烯丙基保護基，進一步縮寫為fmoc-gluc(o-烯丙基)q-tubm-o-烯丙基，同時保留特吡瓦林乙酸酯，以下列方式完成。將fmoc-gluc(o-烯丙基)q-tubm-o烯丙基(101，21mg，15μmol)收集在dcm(1.5ml)中，在n2下攪拌。以固體加入pd(pph3)4(3.5mg，3.1μmol)和pph3(1.6mg，6.1μmol)，然后加入吡咯烷(20.1μl，245μmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時，然后收集于1mldmso，減壓冷凝，并通過制備型lc純化以得到13mg(79％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(102)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.94分鐘，m/z(es+)計算1096.53(m)⁺，實際1096.65。

化合物102，縮寫為h-glucq-tubm-oh，是式a’-yy(w’w’)-d⁺的示例性藥物-接頭化合物中間體，其中下標y和w’各自為1，其中a’是延伸單元(亞基)前體，-y(w)-是一種葡糖苷酸單元，其包含能夠自毀以釋放特吡萊辛藥物(d)和葡萄糖醛酸部分的pab間隔單元，并且d⁺是季銨化的特吡萊辛m。為制備類似的藥物接頭化合物中間體，其具有含特吡瓦林(o-酰基)組分輸入的替代的季銨化的特吡萊辛，其中boc-tuv(o-ac)-tup(oet)(90)的乙酸酯部分被實施例33中的通式boc-tuv(o-ac基)-tup(oet)的化合物替代以制備對應(yīng)于化合物95的h-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基。然后根據(jù)實施例34和35將該中間體進行處理以得到通式h-glucq-d-mep-ile-tuv(o-酰基)-tup-oh的化合物，其進一步縮寫為h-glucq-tub(o-酰基)-oh，其對應(yīng)于化合物102的藥物-接頭化合物中間體。

其他變體是，或進一步包括，將方案10中適當(dāng)保護的6元含叔胺的雜環(huán)烷基，boc-d-mep-otbu(化合物97)替換為另一種適當(dāng)保護的5或6元含叔胺的雜環(huán)，如boc-n-乙基-哌啶酸叔丁酯、boc-n-甲基-脯氨酸叔丁酯或boc-n-甲基-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸叔丁酯以得到分別類似于方案10中的化合物99和化合物102的化合物，其中fmoc-gluc(o-烯丙基)q-d-mep-otbu和h-glucq-d-mep-ile-tuv(o-ac)-tupoh，或更一般的h-glucq-d-mep-ile-tuv(o-?；?-tup-oh的季胺化d-mep部分分別被替換為另一種季銨化的含叔胺雜環(huán)烷基。也可以通過方案10獲得其中雜環(huán)烷基被含叔胺羧酸替代的藥物-接頭化合物中間體的其它變體，以提供季銨化的特吡萊辛藥物-接頭化合物的n-末端開環(huán)變體。

實施例36：通過lss-延伸亞基前體與包含葡糖苷酸單元和季銨化特吡萊辛(o-酰基)藥物單元的藥物-接頭中間體酰胺偶聯(lián)來制備藥物接頭化合物。

lss(mdpr)前體偶聯(lián)：在n2下向燒瓶中加入無水dmf(0.595ml)中來自實施例35的h-glucq-tubm-oh(102，13.1mg，11.9μmol)，向其中加入mdpr(boc)-osu(6，4.6mg，11.9μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(8.3μl，47.8μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(8.3μl)終止并通過制備型hplc純化以得到5.2mg(33％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)-1-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(103)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.20分鐘，m/z(es+)計算1362.62(m)⁺，實際1362.75。

lss前體去保護：如下去除mdpr(boc)-glucq-tubm-oh(103)上的boc保護基以通過與含硫醇的靶向部分縮合制備適于制備配體-藥物偶聯(lián)物的藥物-接頭化合物。

裝有mdpr(boc)-glucq-tubm-oh(103，5.2mg，3.8μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.84ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)然后收集于dmso，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到4.8mg(81％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(104)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.95分鐘，m/z(es+)計算1262.56(m)⁺，實際1262.68。

還由實施例36制備季銨化的特吡萊辛n-末端殘基中具有變化的藥物-接頭化合物，其中特吡萊辛m中的季銨化的d-mep部分被另一種季銨化的6元含叔胺的雜環(huán)烷基取代。另外由實施例36制備的是由羧酸取代的4或5元含叔胺的雜環(huán)烷基獲得的其它藥物-接頭化合物。其他變體通過在適當(dāng)保護的含叔胺酸的實施例33中使用，以非環(huán)狀形式代替d-mep的季銨化的6-元雜環(huán)烷基，以提供n-末端開環(huán)形式的季銨化的特吡萊辛藥物接頭化合物。還有其他變體用另一個酰氧基替代如實施例33-35所述藥物-接頭化合物中間體的特吡瓦林組分的乙酸酯部分，以提供類似的藥物-接頭化合物。其他變體包括兩種變化，即n-末端部分和特吡瓦林酰氧基部分的變體。

由實施例36制備的化合物是式m¹-a1(bu)-ao-y(w)-d⁺或lb'-ao-y(w)-d⁺的示例性藥物-接頭化合物，其中l(wèi)b'包含馬來酰亞胺部分(m¹)、堿性單元(bu)和延伸單元的亞基(a1)并且ao是延伸單元的另一個亞基，其中l(wèi)b'是從藥物-接頭化合物制備的配體藥物偶聯(lián)物中l(wèi)ss的前體。

實施例37：制備納入具有季銨化特吡萊辛(o-?；?藥物單元的肽釋放機制的藥物-接頭化合物中間體的一般過程。

式a’-ww-yy-d⁺的示例性藥物-接頭化合物中間體如下制備，其中下標w和y各自為1，并且其中a’是延伸單元前體，d⁺為季銨化的特吡萊辛藥物單元并且-w-y-是共價接合到自毀間隔單元(y)的肽可切割單元(w)，其中w提供蛋白酶識別位點，其作用從配體藥物偶聯(lián)物(ldc)釋放游離的特吡萊辛藥物，其中l(wèi)dc包含a’-ww-yy-d⁺作為-lo-d⁺部分。通常，式boc-w2-w1-pab-br的適當(dāng)保護的肽-間隔子單元中間體，其中w1和w2是w的氨基酸亞基并且pab是自毀間隔單元y中間體，首先通過肽鍵將boc保護的w2肽鍵偶聯(lián)至h-w1-pab-oh，然后溴化芐基碳以得到肽間隔單元中間體boc-w2-w1-pab-br來制備。將在c末端組分處適當(dāng)保護的特吡萊辛，例如烯丙酯，然后與肽-間隔子單元中間體縮合以季銨化其含叔胺的組分以在全去保護后提供式h-w-y-d⁺的藥物接頭化合物中間體(即，h-w2-w1-pab-d⁺)。該反應(yīng)順序的產(chǎn)物通過h-val-glu-pab4-tubm-oh的以下制備(方案11)舉例說明，其中二肽殘基-val-glu-對應(yīng)于-w2-w1。

間隔單元肽偶聯(lián)：在室溫下攪拌裝有fmoc-glu(otbu)-oh(105，2.0g，4.7mmol)、h-pab-oh(23，579mg，4.7mmol)和cl2ch2(25ml)的燒瓶。加入固體的eedq(1.40g，5.6mmol)并將混合物攪拌過夜。產(chǎn)物用etoac從4mm的chromatotron板上洗脫，含有產(chǎn)物的餾分被濃縮。將所得殘余物收集于dcm中的20％哌啶中，攪拌15分鐘，然后濃縮成油狀物。油狀物溶于dcm中并使用dcm中10％-20％meoh的梯度從2mm的chromatotron板上洗脫以得到860mg(60％)的4-氨基-5-((4-(羥基甲基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(s)-叔丁酯(106)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.65分鐘，m/z(es+)計算309.18(m+h)⁺，實際309.24。

可切割單元肽偶聯(lián)：向裝有dmf(10ml)中的h-glu(otbu)-pab-oh(106，860mg，2.78mmol)的燒瓶中加入boc-val-osu(20)(1.13g，3.60mmol)和dipea(0.75ml)。30分鐘后，將反應(yīng)混合物倒入100mletoac中，用h2o洗滌3次，鹽水洗滌1次，并在na2so4上干燥。將溶液減壓干燥，溶解在50mletoac中，并由己烷中10％etoac(50ml)沉淀。收集固體并干燥以得到0.97g(70％)的4-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-((4-(羥基甲基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(s)-叔丁酯(107)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.37分鐘，m/z(es+)計算508.30(m+h)⁺，實際508.38。

間隔單元官能化：裝有boc-val-glu(otbu)-pab-oh(107，200mg，394μmol)、n-溴代琥珀酰亞胺(105mg，591μmol)和三苯基膦(155mg，591μmol)的燒瓶用n2沖洗。在thf(4ml)中收集反應(yīng)并攪拌12小時。反應(yīng)經(jīng)冷凝并通過biotage柱在二氧化硅上純化(己烷/etoac，10％-100％)以得到210mg(93％)的5-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-4-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-氧代戊酸(s)-叔丁酯(108)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.56分鐘，m/z(es+)計算570.22(m+h)⁺，實際570.30。

季銨化：裝有boc-val-glu(otbu)-pab-br(108，40mg，70μmol)和tubm-o烯丙基(org.lett.，2007，9，1605-1607)(109，45mg，59μmol)的燒瓶用n2沖洗。加入丁酮(1.17ml)，并在攪拌下將反應(yīng)物加熱至60℃。18小時后，反應(yīng)冷凝至干燥，收集于少量dcm中，并通過biotage純化(0-20％dcm/meoh)以得到62mg(85％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-5-(叔丁氧基)-2-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-氧代戊酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(110)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.47分鐘，m/z(es+)計算1257.72(m)⁺，實際1257.85。

去保護：裝有boc-val-glu(otbu)-pabq-tubm-o烯丙基(110，42mg，50μmol)的燒瓶在n2下冷卻至0℃。ch2cl2(0.99ml)中30％tfa的溶液逐滴加入并攪拌18小時。反應(yīng)減壓冷凝，收集于dcm中并再冷凝3次。然后殘留物收集于dcm(0.98ml)，向其中加入固體pd(pph3)4(5.7mg，4.9μmol)和pph3(2.6mg，9.8μmol)，之后加入吡咯烷(32μl，392μmol)。1小時后，反應(yīng)收集于少量dcm中，冷凝，并通過制備型hplc純化以得到47mg(90％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-2-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-4-羧基丁酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(111)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.95分鐘，m/z(es+)計算1061.57(m)⁺，實際1061.69。

通過用其他適當(dāng)?shù)陌被彷斎胩娲鷚2和w1的fmoc-glu(ot-bu)-oh(105)和boc-val-osu(20)輸入，分別制備與化合物111類似的其它藥物-接頭化合物中間體，使得制備的式h-w2-w1-pab-d⁺的藥物-接頭化合物中間體具有以下結(jié)構(gòu)

其中r³⁴是芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-ch(oh)ch3或具有以下結(jié)構(gòu)：并且r³⁵是甲基、-(ch2)4-nh2、-(ch2)3nh(c＝o)nh2、(ch2)3nh(c＝nh)nh2、或-(ch2)2co2h，其中二肽b-末端處的波浪線表示與a或與lb或lb’的共價結(jié)合并且二肽c-末端處的波浪線表示與si部分的j共價結(jié)合。

實施例38：通過將lss前體部分引入納入具有季銨化特吡萊辛(o-酰基)藥物單元的藥物-接頭化合物中間體制備藥物-接頭化合物的一般過程。

式lb'-y-w-d⁺的藥物-接頭化合物，其中l(wèi)b'-是m¹-a(bu)-并且-y-w-d⁺對應(yīng)于實施例37的藥物接頭化合物中間體，其如方案12所例示。提供如下用于合成藥物-接頭化合物mdpr-val-glu-pabq-tubm-oh(113)的示例，其通式為m¹-a(bu)-w2-w1-pabq-tubm-oh。

lss(mdpr)偶聯(lián)：在n2下向裝有無水dmf(0.420ml)中的h-valglupab4-tubm(111，22.5mg，21.2μmol)的燒瓶中加入固體mdpr(boc)-osu(6，8.9mg，23.3μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(14.8μl，84.7μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(14.8μl)終止并通過制備型hplc純化以得到11.5mg(40％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((7s，10s，13s)-13-(2-羧基乙基)-7-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-10-異丙基-2，2-二甲基-4，8，11-三氧代-3-氧雜-5，9，12-三氮雜十四烷酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(112)(11.5mg，40％)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.31分鐘，m/z(es+)計算1327.66(m)⁺，實際1327.94。

去保護：裝有mdpr(boc)-valglupab4-tubm(112，11.5mg，8.6μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.86ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌2小時。反應(yīng)收集于dcm中，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到9.9mg(93％)的(2r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-乙酰氧基-1-(4-(((2r，4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基)氨基甲酰基)噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?-1-(4-((s)-2-((s)-2-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-4-羧基丁酰胺基)芐基)-1-甲基哌啶-1-鎓(113)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.99分鐘，m/z(es+)計算1227.61(m)⁺，實際1227.83。

實施例39：具有取代特吡瓦林組分中的乙酸酯的替代性酰氧基部分的特吡萊辛中間體化合物的制備。

標題化合物的制備由boc保護的去乙酰基特吡瓦林化合物通過肽偶聯(lián)至作為烯丙酯的特吡苯丙氨酸進行。然后使用合適的酸酐(方法1)，例如丙酸基和丁酸基，或?；?方法2)，例如異丁酰氯重新引入?；糠謥硖鎿Q特吡瓦林乙酸酯部分(即，異丁酸基代替乙酸基)?；蛘?，特吡瓦林羥基通過dcc活化脂肪羧酸(方法)，例如，二甲基丁酸基和異戊酰替換特吡瓦林乙酸酯部分來酯化。所得的化合物具有通式boc-tuv(o-ac基)-tup-o-烯丙基，如方案13所示。去除boc保護基團以使肽偶聯(lián)以引入n-末端組分以提供特吡萊辛m類似物。

tuv水解：用溶于甲醇(5ml)和四氫呋喃(5ml)的特吡瓦林乙酸酯(org.lett.，2007，9，1605-1607)122(225mg，560μmol)填充燒瓶，然后在氮氣下在冰浴中冷卻至0℃。將氫氧化鋰一水合物(71mg，1680μmol)溶于水(5ml)中，并將溶液滴加到反應(yīng)燒瓶中。反應(yīng)然后在室溫下攪拌直至uplc/ms顯示完全轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。物質(zhì)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供200mg(定量)的游離酸化合物2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-羥基-4-甲基戊基)噻唑-4-羧酸(123)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.33分鐘，m/z(es+)計算359.17(m+h)⁺，實際359.14。

肽偶聯(lián)：通過在無水二甲基甲酰胺(5.4ml，100mm)中溶解并添加hatu(250mg，670μmol)和dipea(0.59ml，3.36mmol)來預(yù)活化特吡瓦林游離酸化合物123(20mg，560μmol)；混合物然后在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘。活化的酸然后添加至特吡苯丙氨酸烯丙酯40(org.lett.，2007，9，1605-1607)并且反應(yīng)然后在環(huán)境溫度下在氮氣下攪拌，通過uplc/ms監(jiān)測過程。反應(yīng)完成之后，然后加入冰醋酸(14當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化產(chǎn)物以得到272mg(83％)的tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-羥基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(124)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.84分鐘，m/z(es+)計算588.31(m+h)⁺，實際588.29。

再活化(方法1)：tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽124(26mg，44μmol)溶于無水吡啶(1.8ml，25mm)中并在室溫下在氮氣氣氛下攪拌。丙酸酐125(113μl，20當(dāng)量)逐滴加入并通過uplc/ms監(jiān)測反應(yīng)。添加額外丙酸酐(20當(dāng)量)以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。物質(zhì)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供粗產(chǎn)物，其隨后通過制備型hplc純化以得到17mg(61％)的boc-tuv(丙酸基)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基-1-(丙?；趸?戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(127)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.99分鐘，m/z(es+)計算644.34(m+h)⁺，實際644.26。

tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽124(27mg，46μmol)溶于無水吡啶(0.9ml，50mm)中并在室溫下在氮氣氣氛下攪拌。丁酸酐126(225μl，30當(dāng)量)逐滴加入并通過uplc/ms監(jiān)測反應(yīng)。以三部分添加額外丁酸酐(40當(dāng)量)以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。物質(zhì)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供粗產(chǎn)物，其隨后通過制備型hplc純化以得到24mg(80％)的boc-tuv(丁酸基)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-(丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(128)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.13分鐘，m/z(es+)計算658.35(m+h)⁺，實際658.23。

再活化(方法2)：tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽124(26mg，44μmol)溶于無水吡啶(1.8ml，25mm)中并在室溫下在氮氣氣氛下攪拌。異丁酸酐129(93μl，20當(dāng)量)逐滴加入并通過uplc/ms監(jiān)測反應(yīng)。在轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物之后，物質(zhì)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供粗產(chǎn)物，其隨后通過制備型hplc純化以得到29mg(定量)的boc-tuv(異丁酸基)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-(異丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(130)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.13分鐘，m/z(es+)計算658.35(m+h)⁺，實際658.33。

再活化(方法3)：用溶于無水二氯甲烷(5.6ml，15mm)中的異戊酸131(94μl，851μmol)填充燒瓶并且在氮氣下在0℃下攪拌溶液。然后加入dmap(10mg，85μmol)，之后加入dcc(88mg，425μmol)，并且反應(yīng)在2小時內(nèi)升溫至室溫。所得的活化的酸然后添加至tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽124(50mg，85μmol)并且反應(yīng)攪拌過夜，在那時uplc/ms顯示轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。反應(yīng)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供粗產(chǎn)物，其隨后通過制備型hplc純化以得到52mg(91％)的boc-tuv(異戊酸基)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基-1-((3-甲基丁?；?氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(133)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.91分鐘，m/z(es+)計算672.37(m+h)⁺，實際672.46。

用溶于無水二氯甲烷(5.1ml，15mm)中的偕-二甲基丁酸132(98μl，766μmol)填充燒瓶并且在氮氣氣氛下在0℃下攪拌溶液。然后加入dmap(9mg，77μmol)，之后加入dcc(79mg，383μmol)，并且反應(yīng)在2小時內(nèi)升溫至室溫。所得的活化的酸然后添加至tuv(oh)-tup-o烯丙基二肽124(45mg，77μmol)并且反應(yīng)攪拌過夜，在那時uplc/ms顯示轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。反應(yīng)然后用二氯甲烷稀釋并用0.1mhcl洗滌。水性層用二氯甲烷萃取2次，然后合并的有機物在硫酸鈉上干燥、過濾并濃縮以提供粗產(chǎn)物，其隨后通過制備型hplc純化以得到49mg(93％)的boc-tuv(二甲基丁酸基)-tup-o-烯丙基產(chǎn)物(2s，4r)-烯丙基4-(2-((1r，3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-((3，3-二甲基丁酰基)氧基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸酯(134)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.88分鐘，m/z(es+)計算686.39(m+h)⁺，實際686.47。

去保護：通過方法1、2或3制備的boc-tuv(o-酰基)-tup-o-烯丙基中間體在酸性條件下用二氯甲烷中的10％tfa(25mm)如下所示去保護以顯示仲胺官能團。boc-保護的中間體溶于無水二氯甲烷(9體積)并在0℃下在氮氣下攪拌。然后向攪拌的溶液中逐滴加入三氟乙酸(1體積)。然后使反應(yīng)緩慢升溫至室溫并通過uplc/ms監(jiān)測。在完成中，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮反應(yīng)并在真空線上抽空過夜。利用由此獲得的通式h-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的游離胺來導(dǎo)入n-末端組分而沒有進一步純化。

制備的h-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基化合物(化合物135-139)示于方案14并列于以下。

(2s，4r)-2-甲基-4-(2-((1r，3r)-4-甲基-3-(甲基氨基)-1-(丙?；趸?戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-5-苯基戊酸烯丙酯(135)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.24分鐘，m/z(es+)計算544.29(m+h)⁺，實際544.25

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-(丁?；趸?-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(136)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.20分鐘，m/z(es+)計算558.30(m+h)⁺，實際558.38

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-(異丁?；趸?-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(137)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝130分鐘，m/z(es+)計算558.30(m+h)⁺，實際557.93。

(2s，4r)-2-甲基-4-(2-((1r，3r)-4-甲基-3-(甲基氨基)-1-((3-甲基丁?；?氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-5-苯基戊酸烯丙酯(138)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.23分鐘，m/z(es+)計算572.32(m+h)⁺，實際572.40。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-((3，3-二甲基丁?；?氧基)-4-甲基-3-(甲基氨基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(139)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.27分鐘，m/z(es+)計算586.33(m+h)⁺，實際586.42。

實施例40：用特吡瓦林(o-酰基)-特吡苯丙氨酸烯丙酯二肽酰胺偶聯(lián)異亮氨酸的一般過程

將fmoc-l-異亮氨酸(4當(dāng)量)溶于無水二甲基甲酰胺(50mm)中并用hatu(4當(dāng)量)和dipea(8當(dāng)量)預(yù)活化；將混合物在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘。活化的酸然后添加到通式nh2-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的二肽；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌，并且通過uplc/ms監(jiān)測。一旦反應(yīng)停止進行或達到完成，添加冰醋酸(13當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化反應(yīng)產(chǎn)物。然后通過在氮氣下在室溫下用二甲基甲酰胺中20％哌啶(20mm)處理fmoc-ile-tuv(o-酰基)-tup-o-烯丙基三肽來去除fmoc保護基團。一旦已完成去保護，如uplc/ms所監(jiān)測，反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。然后通過制備型hplc純化通式h-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的粗產(chǎn)物以得到游離胺三肽。

按照上述肽偶聯(lián)過程制備方案14中所示并下列的通式fmoc-ile-tuv(o-酰基)-tup-o-烯丙基的化合物140-144。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7-甲基-3，6，12-三氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十四烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(140)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝2.11分鐘，m/z(es+)計算879.44(m+h)⁺，實際879.60。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7-甲基-3，6，12-三氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十五烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(141)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.94分鐘，m/z(es+)計算893.45(m+h)⁺，實際893.56。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7，14-二甲基-3，6，12-三氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十五烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(143)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝2.06分鐘，m/z(es+)計算907.47(m+h)⁺，實際907.58。

(2s，4r)-4-(2-((5s，8r，10r)-5-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-8-異丙基-7，14，14-三甲基-3，6，12-三氧代-2，11-二氧雜-4，7-二氮雜十五烷-10-基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(144)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝2.50分鐘，m/z(es+)計算921.49(m+h)⁺，實際921.59

按照上述fmoc去保護過程分別從化合物140-144制備方案14中所示并下列的通式h-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的化合物140-149。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-4-甲基-1-(丙酰基氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(145)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.29分鐘，m/z(es+)計算657.37(m+h)⁺，實際658.04。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-(丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(146)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.24分鐘，m/z(es+)計算671.39(m+h)⁺，實際671.48。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-(異丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(147)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.33分鐘，m/z(es+)計算671.39(m+h)⁺，實際671.33

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-4-甲基-1-((3-甲基丁?；?氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(148)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.31分鐘，m/z(es+)計算685.40(m+h)⁺，實際685.49。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-氨基-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-((3，3-二甲基丁酰基)氧基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(149)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝130分鐘，m/z(es+)計算699.42(m+h)⁺，實際699.51。

通過用其他脂族氨基酸(例如，fmoc-leu)或脂族含胺酸替換fmoc-ile來類似制備納入特吡瓦林-(o-?；?組分的其他三肽。

實施例41：用含叔胺的酸對異亮氨酸-特吡瓦林(o-o-?；?-特吡苯丙氨酸烯丙基酯三肽的酰胺偶聯(lián)用于導(dǎo)入特吡萊辛n-末端組分的一般過程。

將(r)-n-甲基-哌啶酸(d-mep)60(2當(dāng)量)溶于無水二甲基甲酰胺(20-25mm)中并用hatu(2當(dāng)量)和dipea(4當(dāng)量)預(yù)活化；將混合物在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘?；罨乃崛缓筇砑拥骄哂型ㄊ絟-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的實施例40的三肽；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌，并且通過uplc/ms監(jiān)測。在反應(yīng)完成之后，加入冰醋酸(14當(dāng)量)并且通過制備型hplc純化通式d-mep-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的四肽產(chǎn)物。然后通過在無水二氯甲烷(20mm)中溶解烯丙酯-保護的特吡萊辛四肽(150-154)，用四(三苯基膦)鈀(0.1當(dāng)量)、三苯基膦(0.2當(dāng)量)、和無水吡咯烷(8當(dāng)量)處理，并且在氮氣下在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)來去除烯丙基保護劑而沒有損失特吡瓦林?；糠?。一旦uplc/ms顯示轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物游離酸，用冰醋酸終止反應(yīng)(22當(dāng)量)，用乙腈和二甲基甲酰胺稀釋，然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。然后通過制備型hplc純化通式d-mep-ile-tuv(o-酰基)-tup-o-烯丙基的粗特吡萊辛化合物。

按照上述肽偶聯(lián)過程分別從化合物145-149制備方案14中所示并下列的通式d-mep-ile-tuv(o-?；?-tup-o-烯丙基的化合物150-154。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-(丙?；趸?戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(150)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.33分鐘，m/z(es+)計算782.45(m+h)⁺，實際781.82。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-(丁酰基氧基)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(151)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.31分鐘，m/z(es+)計算796.47(m+h)⁺，實際796.57。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-(異丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(152)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.37分鐘，m/z(es+)計算796.47(m+h)⁺，實際795.78。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-((3-甲基丁?；?氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(153)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.35分鐘，m/z(es+)計算810.49(m+h)⁺，實際810.59。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-((3，3-二甲基丁?；?氧基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸烯丙酯(154)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.38分鐘，m/z(es+)計算824.50(m+h)⁺，實際824.60。

按照上述烯丙基去保護過程分別從化合物150-154制備方案14中所示并下列的通式d-mep-ile-tuv(o-?；?-tup-oh的化合物155-159。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-(丙?；趸?戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(155)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.11分鐘，m/z(es+)計算742.42(m+h)⁺，實際742.51。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-(丁?；趸?-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(156)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.16分鐘，m/z(es+)計算756.44(m+h)⁺，實際756.54。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-(異丁?；趸?-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(157)：uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.23分鐘，m/z(es+)計算756.44(m+h)⁺，實際756.82。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基-1-((3-甲基丁?；?氧基)戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(158)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.22分鐘，m/z(es+)計算770.45(m+h)⁺，實際770.55。

(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-((3，3-二甲基丁?；?氧基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(159)：uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.23分鐘，m/z(es+)計算784.47(m+h)⁺，實際784.57。

另外的特吡萊辛o-?；衔?，包括在替換實施例39的特吡苯丙氨酸部分(化合物40)的氨基酸或含胺酸輸入中具有變異的那些，如實施例27所示，和/或?qū)嵤├?0中的fmoc-氨基酸輸入(fmoc-ile)通過用其他n-烷基化哌啶酸輸入或n-烷基化氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸、n-烷基化-d-脯氨酸或n，n-二-烷基氨基酸如n，n-二甲基甘氨酸替代d-mep來制備。

實施例42：具有帶與延伸單元的n-末端接合的不可切割特吡萊辛藥物單元的藥物-接頭化合物的制備。

通式m¹-a-d的藥物-接頭化合物，其中m¹是馬來酰亞胺部分，a是延伸單元并且d是具有于m¹-a接頭單元前體的n-末端接合的特吡萊辛，如方案15所示制備。在該方案中，化合物172作為藥物-接頭化合物的示例，其制備如下所述，其中藥物單元是去甲基-特吡萊辛m(o-ch3)(170)，其中特吡瓦林組分的o-連接的乙酸酯取代基已經(jīng)被-och3替代。該藥物-接頭化合物通過藥物配體與來自靶向部分的巰基官能團的接合提供配體藥物偶聯(lián)物(ldc)，其對游離藥物釋放有抗性。對于來自化合物172的ldc和抗體靶向部分，釋放的活性部分一般由cys-m²-a-d的通用結(jié)構(gòu)表示，其中m²是來自向m¹-a-d藥物-接頭化合物的馬來酰亞胺部分邁克爾添加半胱氨酸巰基得到的琥珀酰亞胺部分。最終從這類ldc釋放的活性部分可被認為是特吡萊辛m(o-醚)，其中d-mep部分的甲基取代基已經(jīng)被巰基取代的烷基部分替代。

去甲基-tub(ome)-o-烯丙基：(r)-n-boc-哌啶酸60(6mg，24μmol)溶于無水二甲基甲酰胺(0.46ml，25mm)并用hatu(9mg，24μmol)和dipea(9μl，48μmol)預(yù)活化；混合物在室溫下在氮氣下攪拌10分鐘?；罨乃崛缓筇砑拥綄嵤├?8的h-ile-tuv(ome)-tup-o-烯丙基三肽57(10mg，12μmol)；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌，并且通過uplc/ms監(jiān)測。反應(yīng)然后用乙酸終止并且通過制備型hplc純化以得到12mg(定量)(r)-2-(((2s，3s)-1-(((1r，3r)-1-(4-(((2r，4s)-5-(烯丙基氧基)-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-1-甲氧基-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲?；?哌啶-1-羧酸叔丁酯(168)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.99分鐘，m/z(es+)計算847.47(m+na)⁺，實際847.87。

去保護：在n2下boc-tub(ome)-o烯丙基(168，12mg，15μmol)在攪拌中收集于dcm(0.75ml)中。以固體加入pd(pph3)4(1.7mg，1.5μmol)和pph3(0.8mg，3μmol)，然后加入吡咯烷(11μl，120μmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時，然后收集于dmso，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到9mg(76％)的(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-((r)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-甲酰胺基)-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(169)：分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.80分鐘，m/z(es+)計算786.45(m+h)⁺，實際786.67。

n-末端去保護：裝有boc-tubome-oh(169，9mg，11μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.5ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)然后收集于dmso，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到(5mg)63％的(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(170)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.15分鐘，m/z(es+)計算686.40(m+h)⁺，實際685.59。

lb'-a-偶聯(lián)：將馬來酰亞胺己酸171(2mg，9.5μmol)溶于無水二甲基甲酰胺(0.5ml，20mm)中并用hatu(2.3mg，6μmol)和dipea(5μl，29μmol)預(yù)活化；將混合物在氮氣下在室溫下攪拌10分鐘?；罨乃崛缓筇砑又撂剡寥R辛甲醚170(5mg，7.3μmol)；反應(yīng)在氮氣下在室溫下攪拌并通過uplc/ms監(jiān)測。反應(yīng)用乙酸終止并且通過制備型hplc純化以得到7mg(定量)的(2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-3-((2s，3s)-2-((r)-1-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；?哌啶-2-甲酰胺基)-n，3-二甲基戊酰胺基)-1-甲氧基-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊酸(172)。分析uplc-ms(系統(tǒng)1)：tr＝1.60分鐘，m/z(es+)計算879.47(m+h)⁺，實際879.11。

本文所述的季胺偶聯(lián)物條件性釋放具有含叔胺n-末端組分的特吡萊辛，其中該組分的氮原子直接被烷基部分取代(即，通過氮-碳鍵)。相反，從藥物-接頭化合物172制備的配體藥物偶聯(lián)物非條件性釋放的活性藥物部分具有含仲胺的n-末端組分，其通過酰胺官能團被取代成亞烷基。

實施例43：具有納入葡糖苷酸單元的季銨化的尾海兔素10的藥物-接頭化合物的制備。

季銨化：向壓力容器中加入無水2-丁酮(1.0ml)中的實施例1的溴化延伸-葡糖苷酸單元中間體2(62mg，76μmol)和尾海兔素10(173，45mg，51μmol)。反應(yīng)容器用氮氣沖洗并密封。然后攪拌反應(yīng)并加熱至80℃持續(xù)12小時。所得混合物經(jīng)冷卻，減壓冷凝，并利用而不需要進一步純化以提供(s)-n-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(174)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.42分鐘，m/z(es+)計算1515.74(m)⁺，實際1515.91。

糖苷去保護：用thf(0.42ml)和meoh(0.42ml)中的fmoc-glucq-d10(174，39mg，26μmol)充填燒瓶。在氮氣下攪拌該溶液并冷卻至0℃。lioh·h2o(8.6mg，206μmol)溶解在水(0.42ml)中，然后逐滴加入。將反應(yīng)升溫至室溫并攪拌2小時。反應(yīng)然后用乙酸(12μl，206μmol)終止并且減壓冷凝。所得殘留物收集在少量dmso中并通過制備型hplc純化以提供7mg(24％)(s)-n-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(175)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.90分鐘，m/z(es+)計算1153.62(m)⁺，實際1153.78。

lss(mdpr)偶聯(lián)：用無水dmf(0.62ml)中的h-glucq-d10(175，7.0mg，6.0μmol)填充燒瓶。在氮氣下添加mdpr(boc)-osu(6，2.3mg，6.1μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(4.2μl，24μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(4.2μl)終止并且通過制備型hplc純化以得到5.5mg(64％)(s)-n-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(176)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.18分鐘，m/z(es+)計算1419.71(m)⁺，實際1419.87。

lss(mdpr)去保護：含mdpr(boc)-glucq-d10(176，5.5mg，3.9μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.39ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)然后收集于dmso，減壓冷凝并且通過制備型hplc純化以得到5.1mg(99％)的(s)-n-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(177)。分析uplc-ms：tr＝0.95分鐘，m/z(es+)計算1319.66(m)⁺，實際1319.81。

實施例44：具有與葡糖苷酸單元的氨基甲酸酯接合的尾海兔素10的藥物-接頭化合物的制備。

氨基甲酸酯藥物單元接合：用無水dmf(0.96ml)中的fmoc-gluc-pnp(bioconjugatechem.，2006，17，831-840)(178，60mg，66μmol)和單甲基尾海兔素10(179，46mg，60μmol)填充燒瓶并向其中加入哌啶(0.24ml)，之后加入hobt(3.2mg，24μmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌過夜，減壓冷凝，并通過快速色譜(dcm/meoh)純化以提供54mg(59％)(2s，3r，4s，5s，6s)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-0丙酰胺基)-4-((5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-5，8-二異丙基-12-(2-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)-吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2，13-二氧雜-4，7，10-三氮雜十四基)-苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-3，4，5-三基三乙酸酯(180)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.65分鐘，m/z(es+)計算1545.71(m+h)⁺，實際1545.98。

糖苷去保護：用thf(0.78ml)和meoh(0.78ml)中的fmoc-gluc-mmd10(180，54mg，35μmol)充填燒瓶。在氮氣下攪拌該溶液并冷卻至0℃。lioh·h2o(12mg，278μmol)溶解在水(0.78ml)中，然后逐滴加入。將反應(yīng)升溫至室溫并攪拌2小時。反應(yīng)然后用乙酸(17μl，278μmol)終止并且減壓冷凝。殘留物收集于少量dmso中并通過制備型hplc純化以得到9.6mg(23％)的(2s，3s，4s，5r，6s)-6-(2-(3-氨基丙酰胺基)-4-((5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-5，8-二異丙基-12-(2-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2，13-二氧雜-4，7，10-三氮雜十四基)苯氧基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-羧酸(181)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.13分鐘，m/z(es+)計算1183.60(m+h)⁺，實際1183.70。

葡糖苷酸-藥物單元偶聯(lián)：用無水dmf(0.81ml)中的h-gluc-mmd10(181，9.6mg，8.1μmol)填充燒瓶。在氮氣下添加mdpr(boc)-osu(6，3.4mg，8.9μmol)。添加n，n-二異丙基乙基胺(5.7μl，32μmol)并且在室溫下攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)然后用乙酸(5.7μl)終止并通過制備型hplc純化以得到5.2mg(44％)的(2s，3s，4s，5r，6s)-6-(2-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-((5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-5，8-二異丙基-12-(2-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2，13-二氧雜-4，7，10-三氮雜十四基)苯氧基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-羧酸(182)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.40分鐘，m/z(es+)計算1449.69(m+h)⁺，實際1449.80。

去保護：含mdpr(boc)-gluc-mmd10(182，5.6mg，3.9μmol)的燒瓶在氮氣下冷卻至0℃。ch2cl2(0.39ml)中10％tfa的溶液逐滴加入并攪拌4小時。反應(yīng)然后收集于dmso，減壓冷凝，并通過制備型hplc純化以得到5.2mg(99％)的(2s，3s，4s，5r，6s)-6-(2-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-((5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-5，8-二異丙基-12-(2-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2，13-二氧雜-4，7，10-三氮雜十四基)苯氧基)-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-羧酸(183)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.13分鐘，m/z(es+)計算1349.64(m+h)⁺，實際1349.75。

實施例44的方案17表示用于制備具有氨基甲酸酯接合的藥物單元的藥物-接頭化合物的示例性反應(yīng)順序。含有非季銨化的藥物單元的可獲自這種氨基甲酸酯藥物-接頭化合物的配體藥物偶聯(lián)物可與季銨化形式比較，所需季銨化藥物接頭化合物的合成通過方案16的概括提供。為了針對氨基甲酸酯藥物-接頭化合物進行調(diào)整，必須從含栓藥物的叔胺官能團去除烷基取代基，如果其以藥物單元的接合是通過該官能團的氮。游離藥物從具有藥物單元中的該修飾的配體藥物偶聯(lián)物的釋放將釋放經(jīng)修飾的藥物，其被預(yù)期具有與可能不需要的母體藥物相比不同的性質(zhì)。

實施例45：具有納入葡糖苷酸單元的季銨化的奧瑞他汀f的藥物-接頭化合物的制備。

奧瑞他汀fc-末端保護：用奧瑞他汀f184(150mg，201μmol)填充圓底燒瓶并溶于烯丙醇(10ml)中。反應(yīng)冷卻至0℃并且加入焦碳酸二烯丙酯(149mg，804μmol)之后加入dmap(7.3mg，60μmol)。反應(yīng)劇烈放出co2并在15分鐘后減緩。在室溫下攪拌2小時后通過hplc分析反應(yīng)并顯示超過90％的濃度。反應(yīng)經(jīng)真空濃縮并且通過硅膠層析(0-25％meoh)純化粗制物。該餾分濃縮至干以得到111mg(71％)的(s)-2-((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酸烯丙酯(185)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.11分鐘，m/z(es+)計算786.54(m+h)⁺，實際786.72。

季銨化：向含af-o烯丙基185(111mg，141μmol)的20ml燒瓶中加入溴代延伸-葡糖苷酸單元中間體2(160mg，197μmol)和干dmf(5ml)。溶液在65℃下攪拌16小時并且通過uplc確定反應(yīng)完成。反應(yīng)經(jīng)干燥，收集于dmso并通過hplc純化。產(chǎn)物餾分經(jīng)濃縮至干以得到85mg(40％)的(s)-n-(3-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-3，4，5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((s)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(186)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.45分鐘，m/z(es+)計算1516.77(m)⁺，實際1517.03。

糖苷去保護：向含保護的glucq-af-o烯丙基186(85mg，56μmol)的20ml瓶中添加thf(4ml)和meoh(4ml)。反應(yīng)冷卻至0℃并且在一個部分中添加lioh溶液(水中18mg/ml)。反應(yīng)在室溫下攪拌3小時并且通過uplc確定反應(yīng)完成。真空去除溶劑并且殘留物收集于dmso/h2o(1∶1)。制備型hplc之后進行凍干得到42mg(62％)的(s)-n-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((s)-1-羧基-2-苯基乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(187)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.88分鐘，m/z(es+)計算1114.63(m)⁺，實際1114.83。

lss(mdpr)偶聯(lián)：用nh2-gluq-af187(42mg，39μmol)和干dmf(1.6ml)填充3ml瓶。攪拌溶液并添加mdpr-(boc)-opfp68(19mg，42μmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌5分鐘，然后添加dipea(13μl，77μmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌1小時并且通過uplc確定反應(yīng)完成。對粗制品的制備型hplc純化之后凍干得到13mg(24％)的(s)-n-(3-(3-((s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)-丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((s)-1-羧基-2-苯基乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(188)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝1.12分鐘，m/z(es+)計算1380.72(m)⁺，實際1380.87。

lss(mdpr)-ao-y(w)-d⁺去保護：含boc-mdpr-glucq-af(13mg，9μmol)的20ml瓶冷卻至0℃并且添加dcm(1.0ml)中20％tfa的溶液。反應(yīng)緩慢升溫至室溫并攪拌4小時，并且通過uplc確定反應(yīng)完全。向反應(yīng)中添加dmso/h2o中0.1％tfa，然后在hplc上純化以得到1.5mg(33％)的(s)-n-(3-(3-((s)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2s，3r，4s，5s，6s)-6-羧基-3，4，5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-基)氧基)芐基)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((s)-1-羧基-2-苯基乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-n，n，3-三甲基-1-氧代丁-2-銨(189)。分析uplc-ms(系統(tǒng)2)：tr＝0.86分鐘，m/z(es+)計算1280.67(m)⁺，實際1280.80。

實施例45的方案18和實施例43的方案16與方案1一起提供制備通式lb'-ao-y(w)-d⁺，更具體地m1-a1-ao-y(w)-d⁺的藥物-接頭化合物的示例性途徑，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀(即，分別是尾海兔素10、奧瑞他汀e或奧瑞他汀f)。該通式的其他藥物-接頭化合物用具有叔胺官能團的其他奧瑞他汀化合物制備，尤其是當(dāng)以n-末端氨基酸組分的官能團存在時。

實施例46：具有帶與延伸單元的c-末端接合的可條件釋放的特吡萊辛藥物單元的藥物-接頭化合物的制備。

以游離藥物合成特吡萊辛m-酰肼(190)并偶聯(lián)至val-cit-pab-pnp活化的藥物-接頭化合物中間體(192)，如方案24所示。簡言之，特吡萊辛m(26)通過在羥基苯并三唑存在下用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺活化偶聯(lián)至肼基甲酸叔丁酯。偶聯(lián)的產(chǎn)物在標準條件下用二氯甲烷中的三氟乙酸boc-去保護以得到游離藥物，特吡萊辛m-酰肼(1r，3r)-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-1-(4-(((2r，4s)-5-肼基-4-甲基-5-氧代-1-苯基戊-2-基)氨基甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊基乙酸酯(190)。通式m¹-a-w-y-d的可切割mc-val-cit-pabn-d藥物-接頭化合物，其中m¹是馬來酰亞胺部分，a是作為間隔單元的亞烷基，w是-w2-w1-，其中w1是瓜氨酸并且w2是纈氨酸，y是作為通過肼官能團與特吡萊辛藥物單元接合的自毀間隔單元的pab部分，通過將酰肼氮與pnp-活化的藥物-接頭化合物中間體4-((s)-2-((s)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(191)在二異丙基乙基胺、羥基苯并三唑、和吡啶作為共溶劑的存在下反應(yīng)來制備，以33％的產(chǎn)率從特吡萊辛m-酰肼(190)得到藥物-接頭化合物4-((s)-2-((s)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)芐基2-((2s，4r)-4-(2-((1r，3r)-1-乙酰氧基-3-((2s，3s)-n，3-二甲基-2-((r)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰胺基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰胺基)-2-甲基-5-苯基戊o基)肼羧酸酯(192)。

從藥物-接頭化合物192制備的配體藥物偶聯(lián)物的條件性蛋白水解釋放作為活性藥物部分的化合物190，其中c-末端殘基保留其酰肼的修飾。本文所述的季胺偶聯(lián)物釋放在其c-末端具有游離羧酸官能團的特吡萊辛。

實施例47：具有季銨化的tub(o-?；?藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的特吡瓦林(o-酰基)組分的去?；u價。

在2.5μm聚丙烯96孔過濾板中，向各孔中添加1mlpbs。將200μl的mabselect^tm蛋白a樹脂漿料施加到各孔中，并且真空除去水性組分。20μl等份的各凍融的血漿樣品被施加到樹脂中并在4℃下混合。通過離心(500g，3分鐘)在平板中收集流出相并且用200μl[2x]木瓜蛋白酶緩沖液(40mmkpo4，20mmedta，ph7)通過另一次離心來洗滌樹脂。

木瓜蛋白酶以2.5mg/ml溶解在[1x]木瓜蛋白酶緩沖液(20mmkpo4，10mmedta，2mm半胱氨酸，ph7)中并在37℃下孵育15分鐘。向含樹脂的各孔中添加200μl等份的木瓜蛋白酶。密封平板并在37℃下孵育2小時。通過離心(500g，3分鐘)回收流出相。用100μl[1x]木瓜蛋白酶緩沖液洗滌樹脂并與流出相合并。樣品轉(zhuǎn)移至ep管并且向各管中加入1000μl冰冷meoh并在冰上孵育15分鐘。通過在4℃下在16000g下離心5分鐘來沉淀樣品，并且上清被轉(zhuǎn)移到96孔板中。

在50％meoh中制備對各藥物而言范圍為1-10000nm的8點標準曲線。向通式含有樣品的96孔板中添加20μl等份的各標準品。向各標準孔中添加300μl等份的20mmkpo4、10mmedta、2mm半胱氨酸(1x木瓜蛋白酶緩沖液)和1000μlmeoh。平板在氮氣下蒸發(fā)至干。

平板用70μl20％乙腈+0.1％甲酸重建并且將50μl等份注射到與quattropremier三重四極質(zhì)譜儀偶聯(lián)的watersacquitylc上。質(zhì)譜儀測量母體離子向ms/ms片段離子的轉(zhuǎn)變，產(chǎn)生樣品和標準品中各分析物的峰面積。標準品峰面積隨藥物濃度的變化作圖并且從樣品測量的峰面積使用由標準曲線確定的直線方程定量。

實施例47具有季銨化的特吡萊辛作為d⁺部分的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

靶向淋巴瘤細胞的ldc組合物獲自方案5的藥物接頭化合物30和單克隆抗體cac10，其中該組合物主要含有具有8個d⁺單元的ldc，其中d⁺是季銨化的特吡萊辛m。主要的ldc由以下結(jié)構(gòu)表示

其中ab是cac10并且p’是8并且s是抗體半胱氨酸殘基的硫原子。包含單克隆抗體靶向cd30抗體配體單元、二肽可切割單元和季銨化特吡萊辛m的ldc的對一組cd30⁺淋巴瘤細胞系的細胞毒性與對照偶聯(lián)物比較，其中cac10抗體被靶向cd33的對照抗體(h2h12)替代。在其細胞內(nèi)化到cd30+細胞中并且蛋白水解切割val-ala二肽(其是ldc的可切割單元)以釋放游離特吡萊辛m之后出現(xiàn)的cac10-d⁺偶聯(lián)物的細胞毒性。

表2中提供了該比較的結(jié)果，其中以ng/ml的單位提供細胞生長抑制的ic50。

表2.靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的季銨化特吡萊辛m配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性

值得注意的是，km-2、l428、l540cy-bvr和del/byr是多藥物抗性細胞系。制備ldc組合物，其中從特吡萊辛m的mep殘基中去除甲基取代基并且所得的仲胺通過氨基甲酸酯連接至pab自毀部分，其被纈氨酸-瓜氨酸(vc)可切割單元的組織蛋白酶切割活化。如實施例53所述從藥物接頭化合物172制備的ldc組合物被發(fā)現(xiàn)是無活性的，其確認了叔胺藥效團對特吡萊辛的細胞毒性活性的重要性。

當(dāng)以偶聯(lián)的替代位點使用時，tup/tut殘基中的羧酸部分也發(fā)現(xiàn)不耐受修飾。因此，當(dāng)該羧酸被轉(zhuǎn)化成酰肼以使特吡萊辛通過其tup殘基接合至相同pab自毀部分(也通過氨基甲酸酯基團)時，從藥物接頭化合物mc-val-cit-pabc-nhnh-tubm制備的偶聯(lián)物，在表3中縮寫為vcpabn(酰肼)被發(fā)現(xiàn)已失去了明顯活性，當(dāng)與從季銨化的藥物接頭化合物mc-val-ala-pab4-tubm制備的偶聯(lián)物(縮寫為vapab4)相比時。該結(jié)果確認了游離羧酸對于特吡萊辛m的細胞毒性的重要性(因為釋放的藥物在該位置處修飾為酰肼)并在表3中針對靶向cd71抗原的cokt9偶聯(lián)物總結(jié)。在表3中，釋放游離特吡萊辛m的cokt9-vapab4(具有主要8載量)在結(jié)構(gòu)上對應(yīng)于表2的cac10偶聯(lián)物，其中cac10靶向部分是替換的cokt9。表3的具有6.7的dar的cokt9-vcpabn(酰肼)是對應(yīng)于特吡萊辛m的氨基甲酸酯連接的特吡萊辛構(gòu)建體，其中釋放的特吡萊辛在tup殘基處經(jīng)修飾，如上所述。兩種組合物中的主要ldc每個抗體結(jié)合8個藥物(或8個季銨化藥物單元)。

表3.與具有接合至c-末端組分的非季銨化的特吡萊辛配體藥物偶聯(lián)物相比靶向c71⁺淋巴瘤細胞的季銨化的特吡萊辛配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性

括號內(nèi)的值表示在劑量-響應(yīng)曲線的底部留下的活細胞的百分比。測試的cd71對ht-116、l-427、kh-h2、l540cy、mm.1r和hl60cy細胞系的拷貝數(shù)分別是5k、35k、121k、33k、32k和228k。通過實施例64確認表3的結(jié)果，其中具有藥物接頭部分mc-val-cit-pabn-tubm(192)的cokt9-酰肼adc與從藥物接頭化合物mc-val-ala-pab4-tubm(30)制備的cokt9adc比較。

表2和表3的結(jié)果顯示當(dāng)以季銨化的藥物單元納入這類構(gòu)建體時獲得強效且免疫特異性的配體藥物偶聯(lián)物，并且這類偶聯(lián)物對多藥物抗性細胞系有活性。此外，驚訝地發(fā)現(xiàn)獲自化合物30的季銨化的偶聯(lián)物具有殺死不表達cd30抗原的細胞的能力，當(dāng)這些細胞與由偶聯(lián)物靶向的cd30+細胞共培養(yǎng)時。因此，ldc組合物顯示出對l540cy：u268luc⁺細胞共培養(yǎng)的6ng/ml的ic50，在劑量-響應(yīng)曲線的底部留下0％的活細胞。l540cy是cd30⁺并且u266是cd30-。

實施例48具有季銨化的奧瑞他汀作為d⁺部分的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

包含靶向cd30的單克隆抗體cac10和季銨化的奧瑞他汀e的ldc對一組cd30⁺淋巴瘤細胞系的細胞毒性與對照偶聯(lián)物比較，其中cac10抗體被靶向cd19的對照抗體(hbu12)替代。也使用沒有可檢測到的cd30⁺抗原，但具有cd19抗原的對照細胞。在其細胞內(nèi)化到cd30⁺細胞中并且對val-cit二肽(其是在表4中命名為vcpab4-ae的偶聯(lián)物的切割單元)的組織蛋白酶切割或?qū)μ堑奶擒真I(其是命名為vcpab4-ae的cac10偶聯(lián)物的切割單元)進行葡糖醛酸糖苷酶切割以釋放奧瑞他汀e之后出現(xiàn)的cac10-d⁺偶聯(lián)物的細胞毒性。類似地，當(dāng)這些偶聯(lián)物內(nèi)化到具有足夠拷貝數(shù)的相關(guān)抗原的cd19⁺細胞中時，類似的hbu12偶聯(lián)物出現(xiàn)細胞毒性。表4中提供了這些比較的結(jié)果，其中以ng/ml的單位提供細胞生長抑制的ic50。

表4中命名為vcpab4-ae的ldc組合物獲自方案2的化合物14和單克隆抗體cac10，其靶向cd30⁺淋巴瘤細胞，或單克隆抗體hbu12，其靶向c19⁺細胞，其中組合物主要含有具有8個d⁺單元的ldc，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀e。在琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的受控水解之后，由以下結(jié)構(gòu)表示主要ldc：

其中cac10或hbu12的ab-s-部分與m³羧酸α或β碳成鍵。上述結(jié)構(gòu)中所示的m³-a表示自穩(wěn)定化(ls)接頭部分，其與用作可切割單元的val-cit二肽結(jié)合。

表4中命名為gluc4-ae的ldc組合物獲自方案1的化合物8和單克隆抗體cac10，其靶向cd30⁺淋巴瘤細胞，和單克隆抗體hbu12，其靶向c19⁺細胞，其中d⁺是季銨化的奧瑞他汀e。在琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的受控水解之后，由以下結(jié)構(gòu)表示組合物的主要ldc：

其中cac10或hbu12的ab-s-部分與m³羧酸α或β碳成鍵。上述結(jié)構(gòu)中所示的m³-a1表示自穩(wěn)定化(ls)接頭部分，其結(jié)合至a的ao亞基。

vcpab4-ae和gluc4-ae組合物都主要含有具有每個抗體8個d⁺單元的ldc(即，p’是8)。

表4.靶向cd30⁺淋巴瘤細胞或c19⁺淋巴瘤細胞的季銨化奧瑞他汀配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

karpas299是cd30⁺(拷貝數(shù)238k)并且具有低量的cd19(拷貝數(shù)10k)，l-428是cd30⁺(拷貝數(shù)77k)并且沒有可檢測到的c19抗原，并且l540cy是cd30⁺(拷貝數(shù)433k)并且具有低量的cd19(拷貝數(shù)23k)。在另一方面，ramos和rl沒有可檢測的cd30并且具有不同水平的cd19(分別是32k對比18k)。括號內(nèi)的值表示在劑量-響應(yīng)曲線的底部留下的活細胞的百分比。

表4的結(jié)果顯示當(dāng)時以季銨化藥物單元將含叔胺奧瑞他汀納入這類構(gòu)建體時，獲得強效且免疫特異性的ldc。

實施例49作為游離藥物的特吡萊辛(o-醚)的體外細胞毒性。

細胞用通式tub(o-et)-oh的特吡萊辛醚游離酸化合物(64-66)處理96小時，或用特吡萊辛m(26)處理，然后如方法中所述評價活力。結(jié)果匯總于表5，以nm濃度單位給出ic50值。

表5.與特吡萊辛m相比，作為游離藥物的特吡萊辛(o-醚)化合物的體外細胞毒性。

全部4個測試制品對全部測試的細胞系是高度有效的。特吡萊辛乙基醚化合物tub(oet)(62)往往比甲基(61)和丙基(63)類似物更強效。乙基醚和特吡萊辛m化合物在mdr+l428和hl60/rv細胞系中保持最高水平的功效。

實施例50作為游離藥物的特吡萊辛(o-酰基)的體外細胞毒性。

用特吡萊辛酯155-159(即，tub(o-酯)-oh)和特吡萊辛m(26)處理細胞96小時，然后如方法中所述測試活力。結(jié)果匯總于表6，以nm濃度給出ic50值。特吡萊辛155-158與特吡萊辛m表現(xiàn)相當(dāng)，在細胞系間有相似功效。位阻最大的特吡萊辛o-酰基化合物(159)相對于特吡萊辛m顯示明顯減弱的功效，功效損失范圍為相對于特吡萊辛m5-47倍。

表6.與特吡萊辛m相比，作為游離藥物的特吡萊辛(o-?；?化合物的體外細胞毒性

實施例51.具有靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的季銨化的微管蛋白(o-醚)藥物單元的其他配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性

含季銨化的特吡萊辛醚(即，tub(o-醚)化合物)的抗cd30配體藥物偶聯(lián)物與各自具有8個季銨化藥物單元/抗體配體單元并具有條件性葡糖醛酸糖苷酶接頭單元的相應(yīng)特吡萊辛m偶聯(lián)物比較。用cac10(抗-cd30)偶聯(lián)物處理細胞持續(xù)96小時，然后評價活力。以ng/ml濃度單位給出表7中所示的ic50。從乙基醚藥物接頭79制備的偶聯(lián)物一致比甲基(78)或丙基(80)類似物更強效。除了l428以外，從微管蛋白乙基醚藥物-接頭79制備的偶聯(lián)物與從特吡萊辛m藥物-接頭104制備的表現(xiàn)相似。所有的ldc對cd30-陰性ramosnhl細胞系都沒有活性(1000ng/ml下無效果)，表明高度的免疫特異性。

表7.具有季銨化的特吡萊辛(o-醚)藥物單元和條件性葡糖醛酸糖苷酶釋放接頭單元的靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性

實施例52具有靶向cd30⁺淋巴瘤細胞或cd33⁺白血病細胞的季銨化的特吡萊辛m藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

特吡萊辛季胺藥物接頭化合物mc-val-ala-pab4-tubm(30)以8個季銨化藥物單元/抗體與嵌合ac10和人源化2h12偶聯(lián)，其分別是抗cd30和抗cd33抗體。分別在一組cd30陽性和cd33陽性淋巴瘤和急性髓細胞樣白血病(aml)細胞系上測試偶聯(lián)物。cd30-陽性細胞系的結(jié)果(ng/ml)示于表8。cd30-結(jié)合偶聯(lián)物，cac10-30，在全部細胞系中都高度有效；而，非結(jié)合對照h2h12-30在該情況中無活性，ic50＞1000ng/ml。

表8.具有帶不同接頭單元疏水性的季銨化特吡萊辛m藥物單元的靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

cd33-表達aml細胞系組的結(jié)果示于表9。cd33-結(jié)合偶聯(lián)物h2h12-30在所有細胞系中都是強效的，ic50范圍是0.9至18ng/ml。偶聯(lián)物對cd33-陰性l540cy無活性，表明這種adc的高度免疫特異性。

表9.具有帶不同接頭單元疏水性的季銨化特吡萊辛m藥物單元的靶向cd33⁺白血病細胞的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

實施例53.具有帶不同接頭單元疏水性的季銨化特吡萊辛m藥物單元的靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

制備幾種具有季銨化的特吡萊辛m的親水性接頭藥物接頭化合物并且體內(nèi)評價從中衍生的8個藥物單元/cac10抗體配體單元的靶向cd30+細胞的配體藥物偶聯(lián)物；結(jié)果示于表10(以ng/ml單位給出ic50值)。數(shù)據(jù)顯示具有具有通過更親水性的-val-glu-二肽連接的特吡萊辛m從藥物接頭113制備的偶聯(lián)物，其提供對游離特吡萊辛m的組織蛋白酶條件性釋放，和從藥物接頭104制備的納入親水性葡糖苷酸單元的偶聯(lián)物，其提供對游離特吡萊辛m的條件性葡糖醛酸糖苷酶釋放，其與用于組織蛋白酶條件性藥物釋放的從藥物-接頭32制備的-val-ala-對照偶聯(lián)物等效。所有偶聯(lián)物顯示出高度免疫特異性，對抗原陰性hep3b肝細胞癌細胞的ic50＞1000ng/ml。

表10.具有不同接頭單元疏水性的靶向cd30⁺淋巴瘤細胞的季銨化特吡萊辛m的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

實施例54：具有通過特吡萊辛衍生的化合物的n-末端組分接合至接頭單元的非季銨化藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性

在本發(fā)明之前，其中胺氮待用作接合點的含叔胺藥物的偶聯(lián)物需要從叔胺中去除烷基取代基。得到的仲胺使得接頭單元組分再烷基化以提供完全不同的叔胺官能團或?；蕴峁┲脔０饭倌軋F。在兩種方法中，消除了原始母體藥物的釋放。此外，釋放的活性藥物部分是不同的含叔胺或含酰胺化合物，其可能與母體藥物相比具有受損的生物活性，或是仲胺，其可能具有差釋放動力學(xué)和/或受損的生物活性。為了確定從特吡萊辛的叔胺去除烷基取代基的策略以提供非季銨化藥物單元的接合點的策略的結(jié)果，分別按照wo2013/085925和實施例42(參見方案15)的過程制備去甲基-特吡萊辛m和去甲基-tub(och3)-oh(170)?；衔?70與去甲基-特吡萊辛m類似，通過用o-連接的醚部分-och3替代去甲基特吡萊辛m的特吡瓦林組分的乙酸酯o-連接的取代基。具有通式m¹-a-的接頭單元，縮寫為mc，其中m¹是馬來酰亞胺部分并且延伸單元a是亞烷基，然后通過酰胺官能團接合至去甲基-特吡萊辛m和去甲基-tub(och3)-oh以分別提供藥物-接頭化合物166和172。當(dāng)納入配體藥物偶聯(lián)物時，這兩種化合物的藥物接頭部分將非條件性地釋放活性藥物部分，其保留接頭單元部分(即，是含酰胺化合物)或仲胺，如去甲基特吡萊辛m或去甲基-tub(och3)-oh，其產(chǎn)生自酰胺鍵的非特異性切割。由于預(yù)期后一種類型的釋放緩慢，藥物-接頭化合物如化合物166和172的特征是無法有效切割。

從獲自含仲胺的特吡萊辛的藥物-接頭化合物166和172以8-藥物/mab制備抗cd30cac10偶聯(lián)物并且與含叔胺特吡萊辛m和特吡萊辛(och3)-oh比較，其通過本發(fā)明的季胺策略偶聯(lián)。表11所示的結(jié)果(ng/ml單位的ic50值)表明依賴于對含叔胺化合物的n-去烷基化策略來提供特吡萊辛藥物單元的非季胺接合的來自藥物-接頭化合物166和172的cac10抗體配體藥物偶聯(lián)物與從藥物-接頭化合物104(4°tubm)和78(4°tub(och3)-oh)(其釋放保留母體藥物的叔胺官能團的游離藥物)制備的季胺連接的比較物相比對淋巴瘤細胞系無活性。

表11.來自非季銨化和季銨化特吡萊辛藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的比較

實施例55具有季銨化的奧瑞他汀作為d⁺部分的配體藥物偶聯(lián)物的體內(nèi)細胞毒性。

l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型用單劑量腹膜內(nèi)注射具有cac10作為靶向部分和作為接頭-季銨化藥物單元的vcpab4-ae的表4的組合物，其中主要的抗體配體藥物偶聯(lián)物每抗體具有4個d⁺單元(即p’為4)。該偶聯(lián)物與另一種cac10偶聯(lián)物比較，其結(jié)構(gòu)-藥物構(gòu)建體被命名為vcpabc-mmae(圖1)在該ldc中，去除了奧瑞他汀e(ae)的叔胺的甲基取代基以得帶單甲基奧瑞他汀e(mmae)，其然后通過氨基甲酸酯通過其仲胺與通過組織蛋白酶切割相同的纈氨酸-瓜氨酸切割單元激活的pab自毀部分偶聯(lián)。該比較的結(jié)果見圖1所示。在該圖中，cac10-c是氨基甲酸酯cac10-vcpab-mmae偶聯(lián)物，cac10-vcpab4-ae命名的cac10-14是季銨化的ae偶聯(lián)物，并且h00-c是指h00-vcpab-mmae并且h00-14是指h00-vcpab4-ae，其中h00是用作非靶向?qū)φ张潴w單元的通用非接合抗體。圖1的結(jié)果表明，靶向cd30⁺霍奇金淋巴瘤細胞并釋放游離的含叔胺的藥物(ae)的cac10季銨化的ae偶聯(lián)物的體外細胞毒性在體內(nèi)以劑量依賴的方式轉(zhuǎn)化并且優(yōu)于其中釋放相應(yīng)含仲胺的藥物的偶聯(lián)物(mmae)。給予靶向不存在于l540cy細胞上的抗原(單克隆ab為h00)的相應(yīng)偶聯(lián)物的結(jié)果與假擬處理相似。值得注意的是，在較高劑量(2mg/kg)下，vcpab4-ae抗體配體藥物偶聯(lián)物導(dǎo)致腫瘤完全消融，其在剩余研究中沒有反彈。

還在含有季銨化ae藥物單元和用于通過葡糖醛酸糖苷酶進行條件性奧瑞他汀藥物釋放的葡糖苷酸單元的cd30靶向的抗體配體藥物偶聯(lián)物，與其中非季銨化的mmae藥物單元經(jīng)葡經(jīng)氨基甲酸酯接合至萄糖苷酸單元的類似偶聯(lián)物之間比較。因此，表4的季銨化的gluc4-ae抗體配體藥物偶聯(lián)物組合物，同樣每個cac10抗體具有4個d⁺單位的主要ldc，以及相應(yīng)的glu-mmae組合物。還將gluc4-ae和gluc-mmae接頭偶聯(lián)至h00，其如前所述是通用的非結(jié)合蛋白(因此不結(jié)合l540cy霍奇金淋巴瘤細胞)以提供對照ldc。結(jié)果示于圖2。在圖1中，命名為cac10-8的cac10-glcu4-ae是季銨化ae偶聯(lián)物，cac10-b是氨基甲酸酯連接的cac10-gluc-mme偶聯(lián)物，命名為h00-8的h00-gluc4-ae，和命名為h00-b的h00-glu-mmae是各自的對照偶聯(lián)物。與cac10-vcpab4-ae偶聯(lián)物一樣，與釋放游離的含叔胺的奧瑞他汀(ae)的cac10-gluc4-ae偶聯(lián)物的體外結(jié)果在體內(nèi)轉(zhuǎn)換成劑量依賴的方式并且優(yōu)于釋放奧瑞他汀的去甲基形式(mmae)的相應(yīng)偶聯(lián)物(cac10-gluc-mmae)。此外，圖1和圖2顯示了季銨化的偶聯(lián)物的體內(nèi)效果是免疫特異性的。

實施例56具有季銨化的特吡萊辛作為部分d⁺和肽可切割單元的配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

在兩個cd30+異種移植模型，karpas299alcl和l540cy霍奇金淋巴瘤中評估了具有從藥物接頭化合物32制備的-val-ala-可切割單元的季胺-特吡萊辛m藥物接頭部分的命名為cac10-32的cac10抗體配體藥物偶聯(lián)物。結(jié)果分別示于圖5和6。在兩個實驗中，當(dāng)平均腫瘤體積達到100mm³時，荷瘤小鼠腹腔注射單劑量的測試制品。

在karpas299異種移植模型(參見圖5)中，4-藥物/mab的靶向的抗cd30cac10偶聯(lián)物在0.3mg/kg劑量后引起腫瘤生長延遲；而較高劑量的1mg/kg導(dǎo)致5只小鼠中4只中持久、完全的消退。相比之下，h00非結(jié)合偶聯(lián)物在1mg/kg劑量下不顯示活性，表明高度的免疫學(xué)特異性。

在l540cy異種移植模型中觀察到相似的結(jié)果(參見圖6)。加載6-藥物/mab的靶向的抗cd30偶聯(lián)物在0.3mg/kg劑量后引起腫瘤生長延遲；而較高劑量的1mg/kg導(dǎo)致4只小鼠中3只中持久、完全的消退。

實施例57具有季銨化的特吡萊辛(o-醚)作為通過葡糖苷酸單元接合的d⁺部分配體藥物偶聯(lián)物的體內(nèi)細胞毒性

在l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型中評價基于葡糖苷酸的季胺藥物-接頭。由藥物接頭化合物104、79和80制備的抗體配體藥物偶聯(lián)物(adc)分別具有由葡糖苷酸接合的季銨化的特吡萊辛m和季銨化的特吡萊辛醚特吡萊辛(o-乙基)和特吡萊辛(o-丙基)醚d⁺藥物單元。將分別命名為cac10-104、cac10-79和cac10-80的那些adc也與cac10-32進行比較，其具有季銨化的特吡萊辛m作為d⁺，并納入二肽-val-ala-作為可切割單元。所有偶聯(lián)物均以4-藥物/mab加載以最小化adcpk的影響。當(dāng)平均腫瘤體積達到100mm³時，攜帶cd30⁺l540cy異種移植物的小鼠單次腹膜注射0.6或2mg/kg劑量的測試制品。如圖9所示，所有adc在30天內(nèi)均顯示明顯腫瘤消退。在0.6mg/kgcac10-32的較低劑量水平下，4/5小鼠的腫瘤在第36天的尺寸增加；而所有的小鼠在用0.6mg/kg的cac10-104處理后，在此時腫瘤完全消退。對于衍生自藥物接頭的具有季銨化的特吡萊辛醚的化合物79和80的抗體配體藥物結(jié)合物，觀察到兩種劑量下在研究第36天腫瘤完全消退。

實施例58具有通過葡糖苷酸單元接合的具有替代的季銨化奧瑞他汀作為d⁺部分的配體藥物偶聯(lián)物的體內(nèi)細胞毒性

評價具有葡糖苷酸季胺藥物接頭部分的抗體配體藥物偶聯(lián)物(adc)用于靶向遞送抗有絲分裂尾海兔素10和奧瑞他汀f，并分別從藥物接頭化合物177和189制備。這些adc在圖11中命名為cac10-177并且在圖10中命名為cac10-189。

與假擬治療動物相比，在l540cy霍奇金淋巴瘤異種移植模型中評價0.5mg/kg和2mg/kg的單獨腹膜內(nèi)劑量的8個季銨化奧瑞他汀f藥物單位/抗體的載藥量的cac10-189。在相同研究中，也測試了由其中特吡萊辛醚管tub(och3)-oh季銨化的藥物接頭化合物78制備的adc(命名為cac10-78)。對于cac10-78，dar為6個季銨化的特吡萊辛醚/抗體。兩種偶聯(lián)物都具有接合到含有葡糖苷酸單元的相同接頭單元的季銨化藥物單元。結(jié)果示于圖10。直到第20天，在兩種劑量水平下，所有測試制品顯示腫瘤消退。

相對于通過氨基甲酸酯官能團接合到葡糖苷酸單元的單甲基尾海兔素10，在0.4mg/kg和0.8mg/kg的單次腹膜劑量下，在相同l540cy異種移植模型中評估具有季胺尾海兔素10作為d⁺的抗體配體藥物偶聯(lián)物。從具有葡萄苷酸單元的藥物-接頭化合物177制備的具有季銨化尾海兔素10的抗體配體藥物偶聯(lián)物(adc)在圖11中命名為cac10-177，而具有接合到相同葡糖苷酸單元的非季銨化藥物單元的adc被命名為cac10-183。兩種adc與相應(yīng)的其非靶向?qū)φ説00-177和h00-183相比，在0.4mg/kg的最低劑量下誘導(dǎo)持久、完全消退，與季胺連接的尾海兔素10(177)的5/5治愈與氨基甲酸酯連接的單甲基尾海兔素10(183)的4/5治愈相比。在測試的最高劑量(0.8mg/kg)下，與季胺連接的尾海兔素10的短暫的腫瘤生長延遲相比，具有氨基甲酸酯連接的尾海兔素10的非結(jié)合h00對照顯示出暫時的腫瘤消退。不幸的是，兩種adc構(gòu)建體都顯示出免疫特異性。

實施例59游離含叔胺藥物從配體藥物偶聯(lián)物中的季銨化藥物單元的胞內(nèi)釋放。

將cd71⁺的mdr細胞系暴露于包含抗體靶向cd71(cokt9)和季銨化mdr抑制劑(tariquidar^tm)的ldc(1μg/ml)。命名為cokt9-gluc4-t的ldc組合物從方案6的化合物36獲得，并且主要含有具有8個d⁺單元的ldc，其中d⁺是季銨化的tariquidar。在琥珀酰亞胺環(huán)系統(tǒng)的受控水解之后，組合物的主要ldc由以下結(jié)構(gòu)表示：

其中ab-s-與m³羧酸的α或β碳鍵合；并且p是8。

從配體藥物偶聯(lián)物釋放的細胞內(nèi)遞送和保留的藥物的濃度示于表12，并與用50nm游離藥物處理細胞產(chǎn)生的胞內(nèi)藥物(即，pgp結(jié)合的藥物)的量進行比較。使用ldc處理時，這些括號內(nèi)的值是從靶向的細胞泄漏出來的mdr抑制劑的胞外濃度，而游離藥物處理的括號內(nèi)的值代表保留在細胞外的游離藥物的量。

表12：由具有季銨化mdr抑制劑的配體藥物偶聯(lián)物的胞內(nèi)藥物遞送。

表12的結(jié)果表明，mdr抑制劑tariquidar已經(jīng)高效地向胞內(nèi)遞送到mdr細胞中。當(dāng)就從10⁶個胞釋放的pmol藥物分析時，cokt9-glu4-t組合物將其載藥量的50-80％遞送至靶向的細胞。

實施例60從季銨化藥物單元酶促釋放藥物的動力學(xué)。

氨基甲酸酯cac10-gluc-mmae偶聯(lián)物的n-乙酰半胱氨酸(nac)形式和實施例53所述的季銨化cac10-gluc4-ae配體藥物偶聯(lián)物(即，cac10被nac替代，其中對應(yīng)結(jié)構(gòu)的p′為1)經(jīng)受0.5mg/ml或1mg/ml葡糖醛酸糖苷酶，并與不存在葡糖醛酸糖苷酶的對照進行比較。圖4的結(jié)果表明，來自nac-gluc4-ae偶聯(lián)物的季銨化藥物單元的ae的釋放動力學(xué)與nac-gluc-mmae偶聯(lián)物的mmae釋放動力學(xué)相當(dāng)，根據(jù)酶濃度，在3.5-4.5小時內(nèi)出現(xiàn)ae完全釋放。在圖4中，nac-8是具有釋放游離的含叔胺的藥物(ae)的季銨化藥物單元的偶聯(lián)物，并且nac-b是釋放相應(yīng)去甲基奧瑞他汀(mmae)的nac-gluc-mmae氨基甲酸酯偶聯(lián)物。

實施例61：具有季銨化奧瑞他汀藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的離體穩(wěn)定性。

在小鼠和大鼠血漿中孵育后，實施例55的配體藥物偶聯(lián)物組合物cac10-vcpab4-ae和cac10-gluc4-ae的完整性損失示于圖3。在圖3中，gluc4-ae偶聯(lián)物命名為cac10-8，并且vcpab4-ae偶聯(lián)物命名為cac10-14。結(jié)果表明兩種類型的季銨化藥物-接頭構(gòu)建體具有良好的穩(wěn)定性，并且不會過早釋放游離的含叔胺藥物。其中存在n-乙酰半胱氨酸代替靶向抗體的季銨化tarquidar和吩嗪二聚體偶聯(lián)物的偶聯(lián)物和模型系統(tǒng)和季銨化的特吡萊辛也經(jīng)受相同的實驗條件。在這些情況下，也沒有過早釋放游離藥物。

實施例62具有季銨化特吡萊辛(o-?；?藥物單元的配體藥物偶聯(lián)物的體內(nèi)穩(wěn)定性。

在給藥后第4天和第10天(分別為研究第11天和第17天)，從所有小鼠收集來自研究adccac10-32靶向細胞毒性的實施例56(圖6)的l540cy異種移植研究的血漿樣品，以評估特吡萊辛m去乙?；某潭?。已知特吡瓦林乙酸酯的損失導(dǎo)致特吡萊辛的去活化。例如，形成特吡萊辛v的特吡萊辛u的去乙?；瘜?dǎo)致效力損失超過100倍(j.med.chem.，2009，52，238-240)。將實施例56的l540cy異種移植的血漿樣品在給藥后4天和10天進行處理以捕獲adc，藥物被酶促釋放，并且通過質(zhì)譜對去乙?；潭冗M行定量。注射后4天(圖7)，所有三個劑量水平下，偶聯(lián)的特吡萊辛藥物彈頭超過40％去乙?；┝亢蟮?0天(圖8)，所有劑量水平的去乙?；潭瘸^70％。這些發(fā)現(xiàn)表明循環(huán)adc隨著時間的推移損失了彈頭效力，也許減弱了體內(nèi)活性。

實施例63：具有季銨化特吡萊辛作為藥物單元d⁺的配體藥物偶聯(lián)物的藥代動力學(xué)(pk)評價。

使用放射性標記的抗體或adc進行藥代動力學(xué)(pk)實驗。pk測試物質(zhì)采用如下方法進行放射性標記。向補充有額外的50mm磷酸鉀(ph8.0)和50mm氯化鈉的pbs中的抗體或adc溶液中加入55μcin10琥珀酰亞胺基丙酸酯[丙酸酯-2，3，3-三羥基乙基]-(moravekbiochemicals，目錄號mt919，80ci/mmol，1mci/ml，9∶1己烷∶乙酸乙酯溶液)/mg抗體或adc。所得的混合物經(jīng)渦旋處理，并室溫放置2小時。將混合物以4,000g離心5分鐘，并將下層水層除去并分成amiconultra-15離心過濾器單元(密理博，目錄號：ufc903024，30kdamwco)。通過4輪稀釋并以4,000g離心除去未偶聯(lián)的放射性。所得的產(chǎn)物過濾通過無菌0.22μmultrafree-mc離心濾器單元(密理博，目錄號ufc30gvos)，并通過分光光度法測量最終的抗體或adc濃度。各產(chǎn)物的比活(μci/mg)采用液體閃爍計數(shù)測定。

在幾個實驗中檢查了未偶聯(lián)的抗體或adc的藥代動力學(xué)性質(zhì)。在各實驗中，1mg的放射性標記的抗體或adc/kg動物重量通過尾靜脈注射。各測試物質(zhì)在重復(fù)動物中給予一次。在多個時間點，經(jīng)隱靜脈或通過心臟穿刺針使末端流血將血液采集至k2edta管。血漿通過在10xg離心10分鐘來分離。來自各時間點的10-20μl的血漿樣品添加至4mlecoscint-a液體閃爍混合物(國家診斷公司(nationaldiagnostics))并通過液體閃爍計數(shù)來檢測總放射活性。所得的每分鐘崩解值轉(zhuǎn)換成μci，并使用放射性標記的測試物質(zhì)的比活計算各時間點保留于血漿中的抗體或adc的濃度。

圖12顯示了從實施例51中所述的親水性接頭類似物113和藥物接頭化合物mdpr-val-ala-pab4-tubm(32)制備的偶聯(lián)物的暴露曲線。具有人源化igg配體單元和dar4的從藥物-接頭化合物32制備的季銨化特吡萊辛m的adc(具有-val-ala-二肽可切割單元并被命名為higg-32(4))具有與未修飾抗體相同的清除概況；然而，命名為higg-32(8)的dar為8的adc從循環(huán)中被快得多地清除。由命名為higg-113(8)的藥物接頭化合物113制備的具有dar8的相應(yīng)的adc(其中可切割單元中的丙氨酸殘基被谷氨酸取代)沒有導(dǎo)致暴露增加。使用從藥物接頭化合物104制備的higgadc(命名為higg-104(8))，其中higg-32(8)的疏水性二肽可切割單元被更極性的葡糖苷酸單元替代，觀察到輕微的清除改善。

圖13含有從藥物接頭化合物(80)制備的具有葡糖苷酸季胺連接的特吡萊辛醚化合物tub(o-pr)-oh的dar8h00偶聯(lián)物的pk暴露。攜帶8拷貝的來自mdpr-gluc4-tub(opr)-oh80的藥物接頭部分的h00抗體配體藥物偶聯(lián)物比未修飾的抗體快得多地從循環(huán)中清除。

圖14顯示具有藥物-接頭部分的dar8h00抗體配體藥物偶聯(lián)物(h00adc)，藥物-接頭部分包含葡糖苷酸單元和奧瑞他汀e或尾海兔素10細胞毒素作為季銨化d⁺藥物單元，和具有非季銨化藥物單位氨基甲酸酯連接的藥物單元，其中已經(jīng)從ae和尾海兔素10中除去甲基(即，非季銨化藥物單元mmae和單甲基尾海兔素10的偶聯(lián)物)的等效偶聯(lián)物的清除性質(zhì)。從藥物接頭化合物8制備的具有葡糖苷酸季胺-奧瑞他汀e藥物接頭部分的h00adc在7天中提供了與未修飾抗體相同的pk性質(zhì)。然而，具有命名為h00-b的非季銨化氨基甲酸酯連接的單甲基奧瑞他汀e的h00adc偶聯(lián)物引起加速adc清除。相比之下，具有由藥物接頭化合物177制備的季銨化尾海兔素10并命名為h00-177的h00-adc和具有通過氨基甲酸酯官能團接合至接頭單元的非季銨化單甲基尾海兔素10的h00-adc，其從氨基甲酸酯接頭化合物183制備并命名為h00-183比裸抗體更快地被清除并具有相似的暴露。

實施例64：特吡萊辛m-酰肼和特吡萊辛m藥物酰肼作為游離藥物的體外細胞毒性之間的體外比較。

之前針對特吡萊辛b已經(jīng)描述了用于以酰肼類似物偶聯(lián)特吡萊辛的c-末端策略(cancerres.，2008，68，9839-9844)。該方法是本文所述的季胺策略和實施例54的不可切割的n-末端偶聯(lián)策略的替代方案，并且涉及特吡萊辛c末端組分的衍生化(參見實施例47)。在一組細胞系中，相對于未修飾的特吡萊辛m(26)，在體外評價游離藥物的特吡萊辛m-酰肼(190)；將細胞處理96小時，并且結(jié)果示于表11(以nm濃度表示的ic50值)。

表13.游離藥物的特吡萊辛m和特吡萊辛m酰肼之間體外細胞毒性比較

在所測試的所有細胞系中，特吡萊辛m-酰肼效力一致低于母體游離藥，特吡萊辛m。酰肼衍生物的效力損失在四種細胞系中為4-25倍。

實施例63.與季銨化val-ala-pab4特吡萊辛m相比，作為非季銨化val-cit-pabn氨基甲酸酯酰肼藥物接頭部分的特吡萊辛m的體外比較。

將val-ala季胺-特吡萊辛m藥物接頭化合物mc-vapab4-tubm(30)和氨基甲酸酯連接的特吡萊辛m-酰肼藥物接頭化合物mdpr-val-cit-pabn(192)偶聯(lián)至cokt-9，一種抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體igg。簡而言之，用tcep完全還原colt-9以揭示8個可偶聯(lián)的半胱氨酸殘基。所得巰基用含有馬來酰亞胺的藥物接頭化合物30和192烷基化，過量加入。發(fā)現(xiàn)colt-9偶聯(lián)物對于接頭30和192分別以8和6.7藥物/mab加載。用所得到的偶聯(lián)物處理一組癌細胞系96小時并評估其活力。結(jié)果示于表1，以ng/ml單位給出ic50。

表14.與接合至c-末端組分的非季銨化的特吡萊辛配體藥物偶聯(lián)物相比，靶向轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的季銨化的特吡萊辛配體藥物偶聯(lián)物的體外細胞毒性。

攜帶tubm-酰肼(192)的偶聯(lián)物比季胺連接的tubm(30)比較劑的效力明顯更低。衍生的特吡萊辛的效力范圍比母體特吡萊辛m小1-3個log。

實施例65：通過葡糖苷酸季胺接頭的奧瑞他汀f的體外評價。

如上所述制備從葡糖苷酸季胺-奧瑞他汀f藥物接頭化合物189制備的cokt9抗體配體藥物偶聯(lián)物(adc)，并以8-藥物/ab偶聯(lián)至cokt-9，一種抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體。在一組癌細胞系上測試得到的adc，以與由氨基甲酸酯-藥物接頭化合物mc-val-cit-pabc-mmaf193(bioconjugatechem.，2006，17，114-124)制備的相應(yīng)的adc進行比較。結(jié)果見表13。

表15.與相應(yīng)的非季銨化奧瑞他汀配體藥物偶聯(lián)物相比，靶向轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的季銨化奧瑞他汀f配體藥物偶聯(lián)物的細胞毒性

從具有葡糖苷酸單元和自穩(wěn)定lss前體mdpr的藥物接頭化合物189制備的具有奧瑞他汀f作為季胺藥物單元的偶聯(lián)物提供與表14所示與在大多數(shù)細胞系上由val-citpab氨基甲酸酯(vcpabc)-mmaf藥物接頭化合物193制備的adc相似的細胞毒性(ic50值，單位為ng/ml)。與化合物189相反，藥物接頭化合物具有不含lss前體的接頭單元并且包含二肽可切割單元。在aml細胞系hl60和hl60/rv中，相對于從193獲得的val-cit-pabc氨基甲酸酯對照，觀察到的效力中度降低(2至3倍)。

實施例66：靶向癌細胞的季銨化的吩嗪二聚體配體藥物偶聯(lián)物的細胞毒性。

吩嗪二聚體季胺藥物接頭化合物19以4-藥物/抗體的dar分別與嵌合ac10和人源化1f6抗體偶聯(lián)。在兩種cd30⁺淋巴瘤細胞系，karpas299和l540cy，以及兩種cd70陽性腎細胞癌細胞系，786-o和caki-1上測試偶聯(lián)物。數(shù)據(jù)示于表16(ic50值，單位為ng/ml)。

表16.靶向cd30⁺或cd70⁺癌細胞的季銨化吩嗪二聚體配體藥物偶聯(lián)物的細胞毒性

抗cd30結(jié)合偶聯(lián)物，cac10-19，在karpas299alcl系上是有效的；而其對照，不識別cd30抗原的h1f6-19，是無活性的，表明高度的免疫學(xué)特異性。cac10-19和h1f6-19偶聯(lián)物在cd30⁺/cd70⁺l540cy細胞上都是無活性的。在cd30陰性/cd70陽性rcc細胞上，cd70抗原特異性偶聯(lián)物h1f6-19比其不能識別cd70抗原的對照偶聯(lián)物cac10-19明顯更有效。