相關申請的交叉引用本申請要求2014年11月13日提交的美國臨時專利申請62/079,156的優(yōu)先權，該專利申請的公開內容以引用的方式整體并入本文。
背景技術：
：需要對涉及工業(yè)過程的多種工業(yè)產品和其它樣品(原材料、過程中樣品、環(huán)境樣品等)進行微生物污染測試。在一些情況下，最終產品必須是無菌的；在其它情況下，對所允許的微生物總數(shù)設定限制。經常對某些特定生物體的存在進行測試，并且此外可能對具體量的樣品不存在要求或對所允許的數(shù)量可能有所限制。傳統(tǒng)上，這些測試涉及使用培養(yǎng)技術。然而，這些傳統(tǒng)的測試方法很慢。通常，在健康的、快速生長的細菌或酵母形成足夠大的菌落以在瓊脂板上輕松計數(shù)之前，一般需要花費至少24小時。然而，許多樣品含有在其開始繁殖之前需要恢復期的應激微生物或在常見類型的培養(yǎng)基上生長緩慢的生物體(包括霉菌)。因此，許多經過驗證的培養(yǎng)方法需要24-48小時的孵育期，并且在一些情況下需要5天或更多?，F(xiàn)在許多微生物測試使用atp生物發(fā)光反應檢測從細胞(例如微生物細胞)中釋放的atp來更快速地進行。atp是能量代謝的必要部分，并且因此是活生物體或其它有機物質存在的指示物。這些測試利用熒光素酶。生物發(fā)光試劑含有熒光素酶以及尤其是熒光素酶的底物熒光素、鎂離子和合適的緩沖劑。當向此試劑中添加腺苷-5'-三磷酸(atp)時，熒光素酶催化光發(fā)射。測試結果記錄為rlu(相對光單位)值。rlu值通常與存在于測試樣品中的微生物量成比例。某些樣品(例如牛奶)可能含有相對高水平的與酪蛋白膠束相關的游離atp和存在于體細胞中的atp。在這些情況下，螯合劑可以用于破壞膠束，溫和洗滌劑可以用于裂解體細胞，并且“非微生物”atp可以使用三磷酸腺苷雙磷酸酶(atp水解酶)水解；從而能夠實現(xiàn)對微生物atp的檢測。仍然需要簡單、方便的檢測微生物atp的測試。技術實現(xiàn)要素：本公開涉及包含在環(huán)境溫度(例如約25℃)下格外穩(wěn)定的atp-二磷酸水解酶的水性組合物的試劑盒以及制備所述組合物的方法。已知包含atp-二磷酸水解酶的基本干燥的組合物在0℃下是穩(wěn)定的。還已知，當冷凍儲存時，≥1mg/ml的atp-二磷酸水解酶在水性組合物(ph5-7)中可以是穩(wěn)定的。甚至還已知<1mg/ml的atp-二磷酸水解酶可以儲存在包含1mmmgcl2、1mmdtt、1mmedta和1mg/ml牛白蛋白的水性組合物(ph7.5)中。然而，還已知反復凍融循環(huán)和室溫暴露數(shù)小時導致水性溶液中atp-二磷酸水解酶活性的喪失。該組合物可以用于檢測樣品中細菌atp的試劑盒中。本公開的發(fā)明性的水性組合物在室溫(例如約21-25℃)下儲存至少28天之后令人驚奇地保留了大于或等于約90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。有利的是，在環(huán)境溫度下水性溶液中atp-二磷酸水解酶的這種穩(wěn)定允許在用于檢測atp生物發(fā)光的試劑盒中使用水性組合物。在一個方面，本公開提供了包含具有約6.0至7.2的ph的水性組合物的試劑盒。水性組合物可以包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶。在任何實施方案中，多元醇可以包括山梨醇，緩沖試劑可以包括hepes、tris和琥珀酸鹽的混合物，并且蛋白質可以包括牛血清白蛋白。在另一個方面，本公開提供了在大于0℃儲存至少7天的水性組合物中保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性的方法。該方法可以包括形成具有約6.0至7.2的ph的水性組合物，該組合物包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶；以及將該水性組合物于包括端值在內的1-25℃之間的溫度下儲存至少7天的時間段。水性組合物在第一時間點具有atp-二磷酸水解酶活性的初始濃度。有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在25℃下從第一時間點直到第一時間點后7天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。atp-二磷酸水解酶活性是在ph7.75并使用非限速濃度的atp、熒光素和熒光素酶的條件下用生物發(fā)光偶聯(lián)測定法測量的。在上述方法的任何實施方案中，有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合，可以使得組合物保持在25℃下從第一時間點直到第一時間點后28天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。在該方法的任一上述實施方案中，有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合，可以使得組合物保持在25℃下從第一時間點直到第二時間點之后能夠保留大于或等于95％的初始atp-二磷酸水解酶活性。術語“包括”及其變型形式在說明書和權利要求書中出現(xiàn)這些術語的地方不具有限制的含義。如本文所用，“一個”、“一種”、“所述(該)”、“至少一個(種)”以及“一個(種)或多個(種)”可互換使用。因此，例如，一種緩沖試劑可以理解為“一種或多種”緩沖試劑。術語“和/或”意指所列要素的一個或全部，或者所列要素的任何兩個或更多個的組合。另外，在本文中，通過端點表述的數(shù)值范圍包括該范圍內所含的所有數(shù)值(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。本發(fā)明的上述
發(fā)明內容并非旨在描述本發(fā)明的每個公開的實施方案或每種實現(xiàn)方式。以下描述更具體地例示了示例性實施方案。在本申請全文的若干處，通過實施例列表提供了指導，這些實施例可以各種組合使用。在每種情況下，所引用的列表都只用作代表性的組，并且不應理解為排它性列表。在以下所示附圖和說明書中闡述了這些和其它實施方案的另外細節(jié)。通過說明書和權利要求書，其它特征、目的和優(yōu)點將變得顯而易見。具體實施方式在詳細闡釋本公開的任何實施方案之前，應當理解，本發(fā)明在其應用中不限于以下說明中闡述或以下附圖中示出的構造細節(jié)和部件布置方式。本發(fā)明能夠擁有其它實施方案，并且能夠通過各種方式實踐或進行。另外，應當理解，本文使用的措詞和術語是出于描述目的而不應被視為限制性的。本文使用的“包括”、“包含”或“具有”及其變型形式意在涵蓋其后列出的項目及其等同形式以及附加的項目。現(xiàn)在已知本公開的水性組合物可以與熒光素酶、熒光素和atp來源組合來檢測樣品中活微生物。水性組合物可以用于在微生物細胞(如果樣品中存在的話)破壞之前從樣品中去除“游離”atp并且在生物發(fā)光酶促反應中檢測與破壞的細胞相關的atp。令人驚奇的是，組合物可以在環(huán)境溫度或低于環(huán)境溫度下儲存至少四周的時間段后保留至少90％的初始三磷酸腺苷雙磷酸酶活性。本公開提供一種試劑盒。在任何實施方案中，試劑盒可以用于檢測與有活力的微生物相關的atp。試劑盒包括本文公開的組分，以及任選地用于使用這些組分的說明書。試劑盒包含具有約6.0至約7.2的ph的水性組合物，該組合物包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶。本公開的水性組合物可以用于檢測樣品(例如，牛奶)中微生物atp的方法。將水性組合物與可能包含非微生物atp的樣品混合(例如，稀釋)。因此，通過atp-二磷酸水解酶的作用從樣品中消除無細胞(非微生物)atp。隨后，微生物(如果樣品中存在的話)被裂解，并且可以使用本領域已知的檢測方法(例如，atp依賴性生物發(fā)光)檢測微生物atp。因此，本公開的水性組合物包含一定量(例如，濃度)的atp二磷酸水解酶，使得當與樣品混合時能在相對較短的時間段內(例如，小于數(shù)小時、小于一小時、小于或等于30分鐘、小于或等于20分鐘、小于或等于15分鐘、小于或等于10分鐘、小于或等于5分鐘、小于或等于2分鐘、小于或等于1分鐘、小于1分鐘)有效水解樣品中atp。因此，atp-二磷酸水解酶的“有效量”涉及atp-二磷酸水解酶在其中使用atp-二磷酸水解酶的方法中(例如，在檢測非微生物atp的方法中)的功能。盡管水性組合物的多元醇、緩沖試劑和/或蛋白質也可以在其中使用atp-二磷酸水解酶的方法中具有功能；如本文所用，多元醇、緩沖試劑和蛋白質的“有效量”具體地涉及它們在水性組合物的儲存期間(例如，在催化反應中使用atp-二磷酸水解酶活性之前)保存atp-二磷酸水解酶活性的作用。水性組合物的多元醇、緩沖劑和/或蛋白質組分的活性保存作用使得含atp-二磷酸水解酶的水性組合物在環(huán)境溫度(例如，約25℃)、高于環(huán)境溫度或低于環(huán)境溫度下能夠儲存。本公開的水性組合物包含有效量的至少一種緩沖試劑。在任何實施方案中，緩沖試劑用于將水性組合物的ph(在室溫下)維持在約6.0至約7.2。在任何實施方案中，緩沖試劑用于將水性組合物的ph(在室溫下)維持在約6.8至約7.2。在任何實施方案中，緩沖試劑用于將水性組合物的ph(在室溫下)維持在約6.9至約7.1。緩沖試劑可以是具有約6-8的pka的任何合適的緩沖劑化合物或用于在上述ph下緩沖水性溶液的所述化合物的混合物，其條件是當試劑以有效濃度(即適合于維持ph的濃度)存在于水性組合物中時，緩沖試劑基本上不抑制atp-二磷酸水解酶活性。優(yōu)選地，在水性組合物中的操作濃度下，當水性組合物接觸熒光素酶時，緩沖試劑也基本上不抑制熒光素酶活性物。合適的緩沖試劑的示例包括(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)(“hepes”)、三(羥甲基)氨基甲烷(“tris”)、琥珀酸、磷酸鹽、三(羥甲基)甲基甘氨酸(tricine)、ada、aces、pipes、mops、bes、tes、前述緩沖試劑的任一種的鹽以及前述緩沖試劑的任何兩種或更多種的混合物。在任何實施方案中，水性組合物包含hepes、tris和琥珀酸鹽緩沖試劑。在任何實施方案中，至少一種緩沖試劑以約0.5mm至約200mm的濃度存在于水性組合物中。在任何實施方案中，水性組合物在室溫(即約25℃)下的ph為約6.0至約7.2。在任何實施方案中，水性組合物在室溫下的ph在包括端值在內的6.0和7.2之間。在任何實施方案中，水性組合物在室溫下的ph在包括端值在內的6.4和7.0之間。在任何實施方案中，水性組合物在室溫下的ph為約7.0。本公開的水性組合物包含有效量的多元醇。已知多元醇諸如蔗糖和山梨醇在冷凍儲存期間有效保存肌原纖維蛋白的功能特性。適用于本公開的水性組合物的多元醇包括但不限于山梨醇、木糖醇、甘油及其混合物。用于穩(wěn)定蛋白質的多元醇的有效量是本領域已知的。在任何實施方案中，多元醇是山梨醇。在任何實施方案中，山梨醇以包括端值在內的約1摩爾/升至約1.6摩爾/升的濃度存在于水性組合物中。本公開的水性組合物包含催化atp水解以產生amp和無機磷酸鹽的atp-二磷酸水解酶(三磷酸腺苷雙磷酸酶)。在任何實施方案中，atp-二磷酸水解酶衍生自馬鈴薯提取物。有利的是，水性組合物的其它特征(例如，ph、緩沖劑、多元醇、蛋白質)一致地用來在大于0℃的溫度下在延長的時間段內(例如，大于一周、大于兩周、大于3周、大于4周)穩(wěn)定atp-二磷酸水解酶活性。如本文所用，“穩(wěn)定atp-二磷酸水解酶活性”意指當使用具有固定量的atp、熒光素和熒光素酶的偶聯(lián)酶測定來測量活性時，在大于0℃儲存之前存在于水性組合物中至少90％的初始atp-二磷酸水解酶活性在儲存期之后保留在水性組合物中。atp-二磷酸水解酶活性以可用于催化細胞外atp快速(例如，在15分鐘內)分解成amp和無機磷酸鹽的濃度存在于水性組合物中。然而，優(yōu)選地，atp-二磷酸水解酶活性以基本上不干擾在ph7.75下的熒光素酶/熒光素反應中細胞外atp的測量的濃度存在于水性組合物中。在任何實施方案中，本公開的水性組合物中atp-二磷酸水解酶活性的濃度是約250單位/升至約2500單位/升。在任何實施方案中，本公開的水性組合物中atp-二磷酸水解酶活性的濃度是約600單位/升至約1200單位/升。本公開的水性組合物包含有效量的蛋白質。該蛋白質與水性組合物中存在的atp-二磷酸水解酶不同。該蛋白質功能用于在大于0℃的溫度下穩(wěn)定atp-二磷酸水解酶活性。用于本公開的水性組合物中合適蛋白質的非限制性示例包括血清白蛋白和純化的膠原蛋白(例如，由密蘇里州圣路易斯的西格瑪奧德里奇公司(sigma-aldrich(st.louis,mo))以商品名出售的純化的膠原蛋白)。在任何實施方案中，水性組合物包含血清白蛋白。在任何實施方案中，本公開的水性組合物中蛋白質(例如，血清白蛋白)的有效量是約100mg/l至約1000mg/l。在任何實施方案中，本公開的試劑盒任選地包含預先確定的量的體細胞提取劑。體細胞提取劑可以用于引起體細胞(即例如非微生物細胞諸如哺乳動物細胞和植物細胞)的裂解。在試劑盒的任何實施方案中，體細胞提取劑可以提供在與水性組合物隔離的試劑盒中(即，在與水性組合物不同的主容器中)，或者試劑盒可以在水性組合物中提供有效量的體細胞提取劑。如果與水性組合物分開提供，則體細胞提取劑可以呈粉末或液體形式提供，其中任一種可以部分或全部與水性組合物混合以在水性組合物中提供有效量的體細胞提取劑。在任何實施方案中，體細胞提取劑可以包括非離子表面活性劑。合適的體細胞提取劑的示例包括但不限于聚乙二醇對(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚、聚乙二醇單烷基醚及其混合物。在本公開的水性組合物的任何實施方案中，組合物不包含有效量的殺微生物劑(例如，疊氮化合物)。在水性溶液中通常使用有效量的殺微生物劑化合物以防止微生物在溶液中生長。然而，本公開的水性組合物中有效量的殺微生物劑化合物(如果存在的話)會使水性組合物在用于檢測樣品中微生物atp的方法的某些實施方案中(例如，在其中用微生物細胞提取劑處理樣品以引起atp從微生物細胞中釋放之前用atp-二磷酸水解酶活性處理“游離”atp或“體細胞”atp的方法的實施方案中)的使用無效。在本公開的水性組合物的任何實施方案中，組合物不包含有效量的包含巰基的化合物或能夠還原蛋白質中二硫鍵的硫醇。含巰基化合物(例如，二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇)和硫醇(例如，2-巰基乙醇)用于在水性溶液中穩(wěn)定某些酶(例如，蛋白酶)的活性。因此，在任何實施方案中，本公開的水性組合物不包括有效量的二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇或β-巰基乙醇。在任何實施方案中，本公開的試劑盒任選地包含熒光素酶活性物。在任何實施方案中，熒光素酶活性物可以與水性組合物隔離(即，在分開的主容器中)。熒光素酶活性物可以呈凍干形式提供，例如該凍干形式可以在使用前再水化。在任何實施方案中，本公開的試劑盒任選地包含微生物(例如，細菌)細胞提取劑。細菌細胞提取劑可以與本公開的水性組合物一起用于檢測樣品中微生物atp的方法中。合適的微生物細胞提取劑的示例包括但不限于季銨化合物(例如，十六烷基三甲基溴化銨(ctab)、十二烷基三甲基溴化銨(dtab))或陽離子聚雙胍化合物(例如，氯己定或其鹽)。在任何實施方案中，微生物細胞提取劑包括葡糖酸氯己定。在任何實施方案中，細菌細胞提取物還包括非離子洗滌劑(例如，tritonn-60)，當與陽離子細胞提取劑組合時該非離子洗滌劑可以促進細胞提取。在另一個方面，本公開提供一種方法。該方法可以用于在大于0℃儲存至少7天的水性組合物中保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。該方法包括形成本公開的水性組合物的任何實施方案，該組合物包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶，各自如本文所公開；以及將該組合物于包括端值在內的1-25℃之間儲存至少7天。ph和有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后至少7天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性，其中atp-二磷酸水解酶活性是在ph7.75并使用非限速濃度的atp、熒光素和熒光素酶的條件下用生物發(fā)光偶聯(lián)測定法測量的。在本文的實施例2中描述了用于測量atp-二磷酸水解酶活性的示例性生物發(fā)光偶聯(lián)測定(“atp測定”)。在該方法的任何實施方案中，有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后14天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。在該方法的任何實施方案中，有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后21天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。在該方法的任何實施方案中，有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后28天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。在該方法的任何實施方案中，ph和有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第二時間點之后能夠保留大于或等于95％的初始atp-二磷酸水解酶活性；其中第二時間點是第一時間點后的7天、14天、21天或28天。在另一個方面，本公開提供一種方法。該方法可以用于定量樣品中細菌atp。該方法包括將樣品與本文公開的水性組合物的任何實施方案組合以形成第一混合物，其中水性組合物具有約6.9至約7.1的ph；將第一混合物在預先確定的溫度下保持第一時間段；將第一混合物與細菌細胞提取劑、熒光素酶、熒光素和緩沖試劑組合以形成具有約7.75的ph的第二混合物；以及測量熒光素酶催化的生物發(fā)光反應。在該方法的任何實施方案中，樣品可以包括水性樣品。在一個優(yōu)選的實施方案中，樣品包括牛奶(例如，生牛奶)。在任何實施方案中，在該方法中使用的組合物具有約6.8至約7.2的ph。將樣品與水性組合物組合以形成第一混合物后，將第一混合物在預先確定的溫度(例如，環(huán)境溫度)下保持一段時間(例如，約1分鐘、約2分鐘、約3分鐘、約5分鐘、約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約25分鐘、約30分鐘)以便允許atp-二磷酸水解酶水解樣品中存在的任何atp。在任何實施方案中，將樣品與水性組合物組合以形成第一混合物，任選地包括形成包含有效量的體細胞提取劑的第一混合物。如本文所述，體細胞提取劑可以單獨添加到第一混合物中，或者它可以在樣品中提供或在水性組合物中提供。如本文所討論，在使樣品與細菌細胞提取劑接觸之前，體細胞提取劑可以用于引起樣品中體細胞(即，例如非微生物細胞諸如哺乳動物細胞和植物細胞)的裂解。在將第一混合物保持第一個時間段后，將第一混合物與細菌細胞提取劑、熒光素酶、熒光素和緩沖試劑組合以形成具有約7.75的ph的第二混合物。一旦形成第二混合物；樣品中細菌(如果存在的話)被裂解并且釋放它們的atp。釋放的細菌atp可以與本領域熟知的生物發(fā)光反應中熒光素酶和熒光素反應?？梢允褂霉舛扔嫳O(jiān)測反應以確定樣品中細菌atp的量。示例性實施方案實施方案a是一種試劑盒，其包含：具有約6.0至約7.2的ph的水性組合物，該組合物包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶。實施方案b是實施方案a的試劑盒，其還包含體細胞提取劑。實施方案c是實施方案a或實施方案b的試劑盒，其條件是組合物不包含有效量的殺微生物化合物。實施方案d是實施方案c的試劑盒，其中殺微生物化合物包含疊氮化物部分。實施方案e是前述實施方案中任一項的試劑盒，其條件是組合物不包含有效量的二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇或β-巰基乙醇。實施方案f是前述實施方案中任一項的試劑盒，其還包含熒光素酶活性物。實施方案g是實施方案f的試劑盒，其中熒光素酶活性物與水性組合物隔離。實施方案h是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中水性組合物的ph為約6.4至約7.0。實施方案i是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中多元醇選自山梨醇、木糖醇、甘油及其混合物。實施方案j是實施方案i的試劑盒，其中多元醇包括山梨醇。實施方案k是實施方案j的試劑盒，其中山梨醇以約1摩爾/升至約1.6摩爾/升的濃度存在于水性組合物中。實施方案l是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中水性組合物包含有效量的體細胞提取劑。實施方案m是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中體細胞提取劑包括非離子表面活性劑。實施方案n是實施方案m的試劑盒，其中體細胞提取劑選自聚乙二醇對(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚和聚乙二醇單烷基醚。實施方案o是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中緩沖試劑包括hepes和tris琥珀酸鹽的混合物。實施方案p是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中緩沖試劑以約0.5mm至約200mm的濃度存在于水性組合物中。實施方案q是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中蛋白質選自血清白蛋白和純化的膠原蛋白。實施方案r是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中蛋白質以約100mg/l至約1000mg/l的濃度存在于水性組合物中。實施方案s是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中atp-二磷酸水解酶衍生自馬鈴薯的提取物。實施方案t是前述實施方案中任一項的試劑盒，其中atp-二磷酸水解酶以約250單位/升至約2500單位/升的濃度存在于水性組合物中。實施方案u是前述實施方案中任一項的試劑盒，其還包含細菌細胞提取劑。實施方案v是實施方案u的試劑盒，其中細菌細胞提取劑包括葡糖酸氯己定。實施方案w是一種在大于0℃儲存至少7天的水性組合物中保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性的方法，該方法包括：形成具有約6.0至7.2的ph的水性組合物，該組合物包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶；以及將該水性組合物于包括端值在內的1-25℃之間的溫度下儲存至少7天的時間段；其中水性組合物在第一時間點具有初始atp-二磷酸水解酶活性；其中ph和有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后至少7天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性；其中atp-二磷酸水解酶活性是在ph7.75并使用非限速濃度的atp、熒光素和熒光素酶的條件下用生物發(fā)光偶聯(lián)測定法測量的。實施方案x是實施方案w的方法，其中有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后14天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。實施方案y是實施方案w的方法，其中有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后21天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。實施方案z是實施方案w的方法，其中有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第一時間點后28天的第二時間點之后能夠保留大于或等于90％的初始atp-二磷酸水解酶活性。實施方案aa是實施方案w至z中任一項的方法，其中ph和有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶的組合使得組合物保持在約25℃下從第一時間點直到第二時間點之后能夠保留大于或等于95％的初始atp-二磷酸水解酶活性。實施方案ab是一種試劑盒，其包含：具有約6.0-7.2的ph的水性組合物，該組合物包含有效量的山梨醇、hepes、tris琥珀酸鹽、血清白蛋白和atp-二磷酸水解酶活性。實施方案ac是實施方案ab的試劑盒，其中在水性組合物中，山梨醇的有效量是約1.3m，hepes緩沖劑的有效量是約1mm，tris琥珀酸鹽的有效量是約1mm，血清白蛋白的有效量是約230mg/l，并且atp-二磷酸水解酶活性的有效量是約600-1200單位/升。實施方案ad是實施方案ab或實施方案ac的試劑盒，其還包含聚乙二醇單烷基醚。實施方案ae是實施方案ad的試劑盒，其中聚乙二醇單烷基醚的有效量是約0.09重量％。實施方案af是一種定量樣品中細菌atp的方法，該方法包括：形成包含樣品和水性組合物的第一混合物；其中水性組合物具有約6.8至約7.2的ph，并且包含有效量的多元醇、緩沖試劑、蛋白質和atp-二磷酸水解酶；將第一混合物在預先確定的溫度下保持第一時間段；將第一混合物與細菌細胞提取劑、熒光素酶、熒光素和緩沖試劑組合以形成具有約7.75的ph的第二混合物；以及測量熒光素酶催化的生物發(fā)光反應。實施方案ag是實施方案af的方法，其中形成第一混合物還包括形成包含有效量的體細胞提取劑的第一混合物。實施方案ah是實施方案ag的方法，其中水性混合物包含有效量的體細胞提取劑。實施例通過下面的實施例進一步說明了本發(fā)明的目的和優(yōu)點，但這些實施例中列舉的具體材料及其量以及其它條件和細節(jié)不應被理解為對本發(fā)明的不當限制。除非另外指明，否則所有的份數(shù)和百分比以重量計，所有的水是蒸餾水并且所有的分子量是重均分子量。材料表1.在實施例中使用的材料。參考例1.在25℃下儲存不同的時間段后凍干的atp-二磷酸水解酶活性的穩(wěn)定性。對于三磷酸腺苷雙磷酸酶的長期儲存本領域的當前狀態(tài)是對酶進行凍干。當可能時，凍干的酶被儲存在4℃或低于4℃，但它可以被儲存在環(huán)境溫度(25℃)下一定時間，如本參考實施例所示。凍干的atp-二磷酸水解酶的小瓶(三磷酸腺苷雙磷酸酶，料號62058354；明尼蘇達州圣保羅的3m公司)在室溫下儲存表2所示的時間段。在每個相應的時間點(時間點“1”發(fā)生在環(huán)境溫度下儲存的初始日，時間點“2”發(fā)生在環(huán)境溫度下儲存6-7天后，時間點“3”發(fā)生在環(huán)境溫度下儲存14-15天后，時間點“4”發(fā)生在環(huán)境溫度下儲存21-22天后，并且時間點“5”發(fā)生在環(huán)境溫度下儲存28-29天后)，根據制造商的說明書將這些小瓶中的一個進行復原。復原的酶用于以下所述的atp測定中。如本文所述測量rlu/s?！埃ナＳ唷笔侵竷龈傻拿冈诃h(huán)境溫度下儲存每個相應的時間段之后剩余的初始(時間點“1”)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的百分比。表2.在環(huán)境溫度下儲存期間凍干的三磷酸腺苷雙磷酸酶的穩(wěn)定性。如本文所述測量rlu/s?！埃ナＳ唷笔侵冈诃h(huán)境溫度下儲存之后在測試的每個相應的小瓶中的剩余的初始(時間點“1”)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的百分比。時間點rlu/s％剩余192100293.51023101.811048895.759098結果指示凍干的三磷酸腺苷雙磷酸酶在環(huán)境溫度下穩(wěn)定至少約4周。實施例1.包含atp-二磷酸水解酶的水性組合物(ph7.0)通過在室溫下混合表3中所列的成分制備包含三磷酸腺苷雙磷酸酶(atp-二磷酸水解酶)的水性組合物。使用1mnaoh將所得溶液的ph調節(jié)至7.0。將所得的水性組合物放置在儲存在環(huán)境溫度(25℃)下的密封sterilin容器中。比較例1.包含atp-二磷酸水解酶的水性組合物(ph7.75)通過在室溫下混合表3中所列的成分制備包含三磷酸腺苷雙磷酸酶(atp-二磷酸水解酶)的水性組合物。使用1mnaoh將所得溶液的ph調節(jié)至7.75。將所得的水性組合物放置在儲存在環(huán)境溫度(25℃)下的密封sterilin容器中。表3.三磷酸腺苷雙磷酸酶制劑的組成儲存在25℃下的水性組合物中atp-二磷酸水解酶的穩(wěn)定性。在環(huán)境溫度下儲存表4所示的時間段后，將等分試樣從每個容器(即，實施例1和比較例1，以及參考例1)中取出并且用于以下所述的atp測定中。atp測定：根據制造商的說明書將ll1的小瓶復原。通過在比色皿中(在25℃下)將600微升復原的ll1與50微升水性三磷酸腺苷雙磷酸酶組合物(即，實施例1或比較例1的組合物)和50微升的10-7matp混合來制備用于確定三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單獨的測試樣品。制備樣品后，立即通過追蹤光度計中8分鐘內atp衰變的速度來測量比色皿中三磷酸腺苷雙磷酸酶活性。以每秒的相對光單位(rlu/s)記錄結果。與起始時間點(“時間點1”)相比，每個連續(xù)的時間點處的相對較高的rlu/s數(shù)值指示在儲存期間保留了較大分數(shù)的原始三磷酸腺苷雙磷酸酶活性。在時間點“1”，制備用于測試三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單個樣品，并且在制備單個水性組合物(實施例1和比較例1)的同一天測試(如上所述)這些單個樣品。在時間點“2”，從用于在已經老化6-7天的水性組合物中測試(如上所述)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的sterilin容器中取出用于測試三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單個的50微升樣品。在時間點“3”，從用于在已經老化14-15天的水性組合物中測試(如上所述)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的sterilin容器中取出用于測試三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單個的50微升樣品。在時間點“4”，從用于在已經老化21-22天的水性組合物中測試(如上所述)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的sterilin容器中取出用于測試三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單個的50微升樣品。在時間點“5”，從用于在已經老化28-29天的水性組合物中測試(如上所述)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的sterilin容器中取出用于測試三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的單個的50微升樣品。結果在表4中示出。表4.在環(huán)境溫度下儲存期間水性三磷酸腺苷雙磷酸酶溶液的穩(wěn)定性。如本文所述測量rlu/s。“％剩余”是指在環(huán)境溫度下儲存之后在測試的每個相應的組合物中的剩余的初始(時間點“1”)三磷酸腺苷雙磷酸酶活性的百分比。數(shù)據指示具有7.0的ph的水性組合物在環(huán)境溫度下儲存期間比具有7.75的ph的類似組合物保留顯著更多的atp-二磷酸水解酶活性。本文引用的所有專利、專利申請和出版物的全部公開內容以及可供使用的電子版材料均以引用的方式并入。在本申請的公開內容和以引用的方式并入本文的任何文獻的公開內容之間存在任何不一致的情況下，應以本申請的公開內容為準。上述具體實施方式和實施例僅為清楚理解本發(fā)明而給出。而不應被理解為不必要的限制。本發(fā)明并不限于所示和所述的準確細節(jié)，對本領域的技術人員顯而易見的變型將包括在由權利要求書所限定的本發(fā)明內。所有的標題是為了方便閱讀者，而不應當用于限制該標題后面的正文的含義，除非如此規(guī)定。本文說明性地描述的本發(fā)明可在不存在本文未具體公開的任何元素的情況下進行適當?shù)貙嵺`。因此，例如，在本文的每個實例中，術語“包括”、“基本上由......組成”和“由......組成”中的任一個可被替換為其它兩個術語中的任一個。盡管將已采用的術語和表達用作描述而非限制術語，并且非旨在使用此類術語和表達而排出所示和所描述的特征或其部分的任何等同物，但是已經認識到，在所要求保護的本發(fā)明的范圍內的各種修改是可能的。因此，應當理解，盡管本發(fā)明已通過優(yōu)選的實施方案和任選的特征而具體公開，但是本領域的技術人員可推出本文所公開的概念的修改和變型，并且此類修改和變型被視為在由所附的權利要求書所限定的本發(fā)明的范圍內。當前第1頁12