本發(fā)明涉及新型、生物活性的、穩(wěn)定化的腎上腺髓質(zhì)素(adm)肽衍生物。通過取代分子內(nèi)二硫鍵和任選一種或多種進(jìn)一步修飾來穩(wěn)定化本發(fā)明的化合物，所述進(jìn)一步修飾選自通過天然或非天然氨基酸替換氨基酸，將肽衍生物與選自聚合物、fc、fcrn結(jié)合配體、白蛋白和白蛋白結(jié)合配體的異源部分共價(jià)連接，以及至少一個(gè)酰胺鍵的n-甲基化。本發(fā)明還涉及用于治療和/或預(yù)防疾病、特別是心血管、水腫性和/或炎性病癥的方法中的化合物，以及包含用于治療和/或預(yù)防心血管、水腫性和/或炎性病癥的化合物的藥物。在腎上腺、肺、腎臟、心肌和其他器官中產(chǎn)生52個(gè)氨基酸肽類激素腎上腺髓質(zhì)素(adm)。adm的血漿水平在較低的皮摩爾范圍內(nèi)。adm是肽的降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)家族的成員并由此結(jié)合至由crlr和ramp2或3(降鈣素受體樣受體和受體活性修飾蛋白2或3)組成的異源二聚體g蛋白偶聯(lián)受體上。adm受體的活化導(dǎo)致在帶有該受體的細(xì)胞中腺苷3',5'-環(huán)一磷酸(camp)的細(xì)胞內(nèi)升高。adm受體存在于幾乎所有包括內(nèi)皮細(xì)胞的器官中的不同細(xì)胞類型上。認(rèn)為adm被中性肽鏈內(nèi)切酶代謝并主要在其中高度表達(dá)adm-受體的肺中被清除[綜述參見gibbonsc,dackorr,dunworthw,fritz-sixk,caronkm,molendocrinol21(4),783–796(2007)]。來自文獻(xiàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，adm參與多種功能性作用，尤其包括血壓調(diào)節(jié)、支氣管舒張、腎功能、激素分泌、細(xì)胞生長、分化、神經(jīng)傳遞和免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)。此外，adm在內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與再生過程中作為自分泌因子起到了關(guān)鍵作用[綜述參見garcíam.a.,martín-santamarías.,depascual-teresab.,ramosa.,juliánm.,martíneza.,expertopinthertargets,10(2),303-317(2006)]。有大量來自文獻(xiàn)的證據(jù)表明adm對完整的內(nèi)皮屏障功能而言不可或缺，并且施用超生理水平的adm在包括敗血癥、急性肺損傷和腸道炎癥的動物實(shí)驗(yàn)中的多種炎性病況中產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗水腫和抗炎作用[綜述參見temmesfeld-wollbrückb,hockea.,suttorpn,hippenstiels,thrombhaemost;98,944–951(2007)]。迄今為止，在具有可測量血液動力學(xué)終點(diǎn)的心血管適應(yīng)癥諸如肺動脈高壓、高血壓、心力衰竭和急性心肌梗塞中進(jìn)行了adm的臨床試驗(yàn)。adm在患有前述病況的患者中的幾項(xiàng)研究中顯示了血液動力學(xué)效果。然而，效果僅僅是短暫的，并在結(jié)束施用后立即終止。該發(fā)現(xiàn)與adm的已知藥代動力學(xué)特性充分相關(guān)。藥效學(xué)效應(yīng)尤其包括降低全身與肺動脈血壓和增加心輸出量[troughtonrw,lewislk,yandletg,richardsam,nichollsmg,hypertension,36(4),588-93(2000);nagayan,kangawak,peptides,.25(11),2013-8(2004);kataokay,miyazakis,yasudas,nagayan,noguchit,yamadan,moriii.,kawamuraa,doik,miyatakek,tomoikeh,kangawak,jcardiovascpharmacol,56(4),413-9(2010)]?？傊?，基于來自大量動物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和人的第一輪臨床試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的證據(jù)，提高adm至超生理水平可被認(rèn)為是治療人與動物的多種病況的目標(biāo)機(jī)制。然而，使用adm作為治療劑的主要限制是連續(xù)輸液治療的不方便的適用性(這排除了其用于大多數(shù)的潛在適應(yīng)癥)以及與adm的推注施用可導(dǎo)致的低血壓相關(guān)的潛在受限的安全限度(safetymargins)。本發(fā)明的目的是提供可用于治療疾病，特別是心血管病癥、水腫性病癥和炎性病癥的新型生物活性的、穩(wěn)定化的adm肽衍生物。許多治療活性肽或蛋白受困于在體內(nèi)的高清除率。存在增加治療活性肽或蛋白的穩(wěn)定性并降低其清除率的幾種方法，包括二硫鍵的改變、酰胺鍵的n-甲基化和與異源部分諸如聚合物和蛋白的綴合。含有二硫鍵的肽治療劑在其體內(nèi)應(yīng)用中可能是有問題的。二硫橋?qū)€原劑和二硫化物異構(gòu)酶是不穩(wěn)定的。二硫鍵的還原導(dǎo)致結(jié)構(gòu)重排和活性喪失。蛋白-二硫化物異構(gòu)酶(pdi)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的酶。蛋白折疊途徑含有非天然二硫橋的中間體。基本pdi功能是重排這些中間體以達(dá)到最終構(gòu)象[laboissieremc,sturleysl,rainesrt,theessentialfunctionofprotein-disulfideisomeraseistounscramblenon-nativedisulfidebonds,jbiolchem.,270(47),28006-28009,1995]。谷胱甘肽(gsh)與生長抑素反應(yīng)以形成混合二硫化物，與第二gsh分子的進(jìn)一步反應(yīng)導(dǎo)致生長抑素和gssg的還原二巰基化物形式。巰基/二硫化物交換容易發(fā)生；然而，形成的混合二硫化物迅速地經(jīng)歷分子內(nèi)二硫鍵的再形成[rabensteindl,weaverkh,kineticsandequilibriaofthethiol/disulfideexchangereactionsofsomatostatinwithglutathione,jorgchem.,61(21),7391-7397,1996]。二硫鍵在肽的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性中的作用描述于gehrmannj,alewoodpf,craikdj,structuredeterminationofthethreedisulfidebondisomersofα-conotoxingi:amodelfortheroleofdisulfidebondsinstructuralstability,jmolbiol.,278(2),401-415,1998。胱硫醚對巰基還原具有抗性。因此，用硫醚取代二硫化物在藥物發(fā)現(xiàn)中是有趣的，因?yàn)樗鼈兲峁┝酸槍€原的保護(hù)，同時(shí)僅最小程度地干擾結(jié)構(gòu)。合成了補(bǔ)體抑制肽compstatin的硫醚類似物。抑制潛力被大部分保留，而還原的穩(wěn)定性得到改善[knerrpj,tzekoua,ricklind,quh,chenh,vanderdonkwa,lambrisjd,synthesisandactivityofthioether-containinganaloguesofthecomplementinhibitorcompstatin,acschembiol.,6(7),753-760,2011]?；诙被岬碾亩蜴I模擬物描述于例如cuihk,guoy,hey,wangfl,changhn,wangyj,wufm,tiancl,liul,diaminodiacid-basedsolid-phasesynthesisofpeptidedisulfidebondmimics,angewchem,125,9737-9741,2013。硫醚和雙碳二氨基二酸(biscarbadiaminodiacids)被應(yīng)用于鱟素i類似物的肽二硫鍵模擬物的合成。所述衍生物表現(xiàn)出降低的抗微生物活性，但改善的血清穩(wěn)定性。kowalczykr,harrispw,brimblema,callonke,watsonm,cornishj,synthesisandevaluationofdisulfidebondmimeticsofamylin-(1-8)asagentstotreatosteoporosis,bioorgmedchem.,20(8),2661-2668,2012涉及八肽胰淀素(amylin)。天然肽(1-8)僅在-80℃下在氬氣氣氛下穩(wěn)定6個(gè)月。合成肽的類似物，其中通過插入不同性質(zhì)的接頭或橋修飾二硫橋。所有類似物都是實(shí)驗(yàn)臺穩(wěn)定的，因此表現(xiàn)出改善的穩(wěn)定性。muttenthalerm,anderssona,dearaujoad,dekanz,lewisrj,alewoodpf,modulatingoxytocinactivityandplasmastabilitybydisulfidebondengineering,jmedchem.,53(24),8585-8596,2010涉及合成具有二硫鍵替換(硫醚、硒硫化物、二硒醚和二碲化物橋)的催產(chǎn)素類似物，以改善含半胱氨酸肽的代謝半衰期。與催產(chǎn)素相比，一些類似物保留親和力和功能效力，且所有模擬物都表現(xiàn)出血漿穩(wěn)定性的增加(1.5-3倍)。pakkalam,weisellj,hekimc,veps?l?inenj,wallenea,stenmanuh,koistinenh,n?rv?nena,mimeticsofthedisulfidebridgebetweenthen-andc-terminalcysteinesoftheklk3-stimulatingpeptideb-2,aminoacids.,39(1),233-242,2010涉及激肽釋放酶相關(guān)肽酶3(klk3)。激肽釋放酶相關(guān)肽酶3(klk3)的蛋白水解活性由合成的環(huán)狀、二硫化物橋聯(lián)肽b-2促進(jìn)。進(jìn)行γ-丁酸和天冬氨酸之間用內(nèi)酰胺橋替換二硫化物。所得肽具有血漿中和針對klk3的降解的改善穩(wěn)定性，以及在高濃度下比b-2更高的活性。watkinsha,rathbonedl,barwellj,haydl,poynerdr,structure-activityrelationshipsforα-calcitoningene-relatedpeptide,brjpharmacol.,170(7),1308-1322,2013概述了用α-降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)(腎上腺髓質(zhì)素的最接近的類似物)進(jìn)行的sar研究。被引用是具有內(nèi)酰胺作為替代物的二硫化物模擬物(環(huán)[asp2,lys7]-cgrp)，其最初描述于：dennist,fourniera,stpierres,quirionr,structure-activityprofileofcalcitoningene-relatedpeptideinperipheralandbraintissues.evidenceforreceptormultiplicity.jpharmacolexpther.,251(2),718-725,1989。該肽顯示與大鼠脾臟膜中的受體的親和力降低50％。豚鼠心房中的生物活性的測量表明激動劑功能的喪失。此外，存在幾種形成此類藥物的可注射儲庫型劑型(injectabledepot)的方法，其涉及使用大分子。以非共價(jià)鍵合狀態(tài)含有藥物分子的聚合物基質(zhì)是公知的。這些也可以以水凝膠、微?；蚰z束注射。此類藥物產(chǎn)品的釋放動力學(xué)可能相當(dāng)不可靠，具有高患者間變異性。此類聚合物的產(chǎn)生可能損害敏感的藥物物質(zhì)，或者該藥物物質(zhì)會在其降解過程中與該聚合物發(fā)生副反應(yīng)[d.h.lee等人,j.contr.rel.,92,291-299,2003]。肽或蛋白永久peg化以提高它們的溶解度、降低免疫原性和通過降低腎清除率來延長半衰期是自20世紀(jì)80年代初眾所周知的概念[calicetip.,veronesef.m.,adv.drugdeliv.rev.,55,1261-1277,2003]。對于幾種藥物已經(jīng)成功采用了這種方法，但是對許多實(shí)例而言，peg化在一定程度上降低藥物物質(zhì)的功效，使得該概念不再合適[t.peleg-shulman等人,j.med.chem.,47,4897-4904,2004]。合適的替代方法是基于聚合物的前藥。iupac對前藥的現(xiàn)行定義描述了以下術(shù)語[internationalunionofpureandappliedchemistryandinternationalunionofbiochemistry:glossaryoftermsusedinmedicinalchemistry(recommendations1998);pure&appl.chem.vol70,no.5,p.1129-1143,1998]:前藥：前藥是經(jīng)歷生物轉(zhuǎn)化后展示其藥理作用的任何化合物。前藥由此可以看作是含有以短暫方式使用的專門化無毒保護(hù)性基團(tuán)以改變或消除母體分子中不合意性質(zhì)的藥物。載體連接的前藥(載體前藥)：載體連接的前藥是含有給定活性物質(zhì)與暫時(shí)性載體基團(tuán)的臨時(shí)連接的前藥，所述暫時(shí)性載體基團(tuán)產(chǎn)生改善的物理化學(xué)或藥代動力學(xué)特性并通常通過水解裂解可容易地在體內(nèi)除去。級聯(lián)前藥：級聯(lián)前藥是載體基團(tuán)的切割僅在暴露活化基團(tuán)之后才變得有效的前藥。存在基于peg的載體前藥的幾個(gè)實(shí)例，它們大多數(shù)需要酶促活化(主要通過酶促水解引發(fā))活性藥物與載體之間的接頭。由于酯類在體內(nèi)非常容易和不可預(yù)測地切割，載體前藥的直接酯接頭的可用性存在限制[j.rautio等人,naturereviewsdrugdiscovery,7,255-270,2008]。通常使用的替代方法是級聯(lián)連接至肽或蛋白中的胺官能團(tuán)的接頭。在級聯(lián)接頭中，作為級聯(lián)中速率限制步驟必須除去掩蔽基團(tuán)。這活化了接頭以便在第二位置分解以釋放肽或蛋白。通常，掩蔽基團(tuán)可以通過酶促機(jī)制除去[r.b.greenwald等人于wo2002/089789、greenwald,等人,j.med.chem.1999,42,3657-3667、f.m.h.degroot等人于wo2002/083180和wo2004/043493以及d.shabat等人于wo2004/019993]。不依賴于酶促活化的替代方法是u.hersel等人在wo2005/099768中的概念。在他們的方法中，以純粹ph依賴方式通過內(nèi)部親核試劑的攻擊除去酚上的掩蔽基團(tuán)。這活化了接頭以便進(jìn)一步分解。如u.hersel等人在wo2005/099768所提及，“greenwald、degroot和shabat描述的前述前藥體系中的缺點(diǎn)在于在臨時(shí)連接切割后釋放可能有毒的芳族小分子副產(chǎn)物如醌甲基化物?？赡苡卸镜膶?shí)體以1:1的化學(xué)計(jì)量比與藥物一起釋放并可能假定高的體內(nèi)濃度”。同樣的問題也同樣適用于hersel等人的體系。對于小的有機(jī)分子來說，存在數(shù)量眾多的不同前藥方法[j.rautio等人,naturereviewsdrugdiscovery,7,255-270,2008]。u.hersel等人所用的作為他們的掩蔽基團(tuán)的釋放機(jī)制的途徑自20世紀(jì)80年代晚期已經(jīng)用作小分子的酚類基團(tuán)的前藥方法。[w.s.saari于ep0296811和w.s.saari等人,j.med.chem.,vol33,no1,p97-101,1990]。替代的基于胺的前藥體系基于作為級聯(lián)前藥的雙羥乙基甘氨酸的緩慢水解。雙羥乙基甘氨酸的羥基被易于被酯酶水解的酯掩蔽[r.greenwald等人,j.med.chem.,47,726–734,2004,和d.vetter等人于wo2006/136586]。接頭的ph依賴性切割比接頭的酶促切割純粹是更可靠的，因?yàn)槠洳灰蕾囉谠谏到y(tǒng)中可變化的酶濃度。一個(gè)ph依賴性地切割的接頭的概念是基于以可調(diào)節(jié)的分解速率的β消除的前藥，如santi等人于us8,680,315中所述。所述將大分子可逆連接至肽和小分子的接頭技術(shù)適用于釋放藥物中的幾個(gè)官能團(tuán)。胺、醇、羧酸和硫醇可經(jīng)由適體系統(tǒng)連接至β消除部分。在ph觸發(fā)的分解后，co2和連接至大分子的不飽和片段釋放后釋放藥物。另一種針對酚(即肽中的酪氨酸)優(yōu)化的方法基于氨基甲酸酯，所述氨基甲酸酯在酚的釋放和與大分子連接的環(huán)脲的生成下ph依賴性地受到親核胺的攻擊，如flammei.等人于wo2013/064455中所述。對于調(diào)節(jié)肽的藥代動力學(xué)性質(zhì)的另外異源部分包括聚合物，包括直鏈或支鏈c3-c100羧酸(脂化)，聚乙二醇(peg)部分，聚丙二醇(ppg)部分，pas部分，其為主要包含丙氨酸和絲氨酸殘基或主要包含丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸殘基的氨基酸序列，所述氨基酸序列在生理?xiàng)l件下形成無規(guī)卷曲構(gòu)象[美國專利號2010/0292130和wo2008/155134]和羥乙基淀粉(hes)部分[wo02/080979]，fc，fcrn結(jié)合配體，白蛋白和白蛋白結(jié)合配體。通過脂化調(diào)節(jié)肽的藥代動力學(xué)性質(zhì)是一種良好開發(fā)的方法?？蓪﹄男蛄袃?nèi)的氨基酸的n末端或側(cè)鏈官能團(tuán)發(fā)生脂化。脂化描述于如以下綜述中例舉的許多出版物和專利中：zhangl,bulajg,convertingpeptidesintodrugleadsbylipidation,currmedchem.;19(11):1602-18,2012或m.gerauer,s.koch,h.waldmann,l.brunsveld,lipidatedpeptidesynthesis:wileyencyclopediaofchemicalbiology,volume2,520-530,2009,(hrsg.begley,t.p.).johnwiley&sons,hoboken,nj。截短的adm片段的脂化描述于wo2012/138867中。用作成像劑和治療劑的標(biāo)記腎上腺髓質(zhì)素衍生物是已知的[j.depuis等人于ca2567478和wo2008/138141]。在這些adm衍生物中，能夠結(jié)合放射性同位素的絡(luò)合籠狀分子結(jié)構(gòu)以直接方式或經(jīng)由間隔基單元(可能還包括短peg間隔基)連接至adm的n端。這些藥物的診斷或治療價(jià)值來自于放射性分子的靶向遞送。與上述前藥途徑(其均基于掩蔽胺官能團(tuán))不同，wo2013/064508中描述的另一種方法基于掩蔽adm中酪氨酸的酚基?；谠摲踊习被姿狨サ膬?nèi)部親核試劑輔助切割，使用載體連接的前藥。相對于上述其他前藥類別的關(guān)鍵優(yōu)點(diǎn)在于該接頭分解產(chǎn)物——永久連接至該載體上的環(huán)狀脲——的毒理學(xué)無害性。此外，該前藥的分解不取決于會導(dǎo)致切割動力學(xué)的高患者間變異性的酶促機(jī)制。該切割機(jī)制僅依賴于ph，因?yàn)樵谒嵝詐h下質(zhì)子化的內(nèi)部胺在更高(中性)ph下活化以充當(dāng)攻擊基于酪氨酸的酚類氨基甲酸酯的親核試劑。在本發(fā)明的上下文中，現(xiàn)在描述了穩(wěn)定化的、生物活性的adm肽衍生物，其中替換adm肽衍生物的二硫化物橋聯(lián)。任選地，這些修飾的adm肽衍生物通過n-甲基化或通過將肽衍生物與選自聚合物、fc、fcrn結(jié)合配體、白蛋白和白蛋白結(jié)合配體的異源部分共價(jià)連接來進(jìn)一步修飾。與肽衍生物共價(jià)連接的聚合物選自任選地取代的、飽和的、或單或雙不飽和的、直鏈或支鏈c3-c100羧酸，優(yōu)選c4-c30羧酸，peg部分，ppg部分，pas部分和hes部分。借助活性和穩(wěn)定性研究所述類似物。據(jù)顯示，與wtadm相比，adm衍生物的活性得到保留。此外，穩(wěn)定化的adm肽衍生物顯示在血液和肝臟中的增加的半衰期，如血清和肝勻漿中的穩(wěn)定性測定所示。穩(wěn)定化的adm肽顯示與amd相比延長的藥理作用持續(xù)時(shí)間，并且其基于這種特定作用機(jī)制——在腸胃外施用后——在體內(nèi)發(fā)揮持續(xù)的抗炎和血液動力學(xué)作用，分別諸如內(nèi)皮屏障功能的穩(wěn)定化和降低血壓。本發(fā)明提供式(i)的化合物：其中x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-6；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-6；*-(ch2)m3-#，其中m3是1-8；*-(ch2)m4-(ch2=ch2)-(ch2)n1-#，其中m4是0-6,n1是0-6，條件是m4+n1=0-6；*-(ch2)m5-(ch≡ch)-(ch2)n2-#，其中m5是0-6，且n2是0-6，條件是m5+n2=0-6；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-6；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0-4，且n4是0-4，條件是m7+n4=0-6；*-so-(ch2)m8-#，其中m8是0-6；#-so-(ch2)m9-*，其中m9是0-6；*-so2-(ch2)m10-#，其中m10是0-6；#-so2-(ch2)m11-*，其中m11是0-6；*-5-6元雜芳基-#；*-o-(ch2)m12-#，其中m12是0-6；#-o-(ch2)m13-*，其中m13是0-6；*-ch2-s-(ch2)m14-#，其中m14是0-6；#-ch2-s-(ch2)m15-*，其中m15是0-6；*-ch2-o-(ch2)m16-#，其中m16是0-6；#-ch2-o-(ch2)m17-*，其中m17是0-6；*-(ch2)m18-nh-co-ch2-nh-co-(ch2)n5-#，其中m18是0-3，且n5是0或1，條件是m18+n5=0-3；#-(ch2)m19-nh-co-ch2-nh-co-(ch2)n6-*，其中m19是0-3，且n6是0或1，條件是m19+n6=0-3；*-(ch2)m20-nh-co-ch(ch3)-nh-co-(ch2)n7-#，其中m20是0-3，且n7是0或1，條件是m20+n7=0-3；#-(ch2)m21-nh-co-ch(ch3)-nh-co-(ch2)n8-*，其中m21是0-3，且n8是0或1，條件是m21+n8=0-3；*-(ch2)m22-nh-co-ch(ch2-c(ch3)2)-nh-co-(ch2)n9-#，其中m22是0-3，且n9是0或1，條件是m22+n9=0-3；#-(ch2)m23-nh-co-ch(ch2-c(ch3)2)-nh-co-(ch2)n10-*，其中m23是0-3，且n10是0或1，條件是m23+n10=0-3；*-(ch2)m24-nh-co-ch(ch(ch3)c2h5)-nh-co-(ch2)n11-#，其中m24是0-3，且n11是0或1，條件是m24+n11=0-3；#-(ch2)m25-nh-co-ch(ch(ch3)c2h5)-nh-co-(ch2)n12-*，其中m25是0-3，且n12是0或1，條件是m25+n12=0-3；*-(ch2)m26-nh-co-ch(ch2(c6h5))-nh-co-(ch2)n-#，其中m26是0-3，且n13是0或1，條件是m26+n13=0-3；#-(ch2)m27-nh-co-ch(ch2(c6h5))-nh-co-(ch2)n14-*，其中m27是0-3，且n14是0或1，條件是m27+n14=0-3；*-(ch2)m28-nh-co-(ch2)3-nh-co-(ch2)n15-#，其中m28是0或1，且n15是0或1，條件是m28+n15=0-1；#-(ch2)m29-nh-co-(ch2)3-nh-co-(ch2)n16-*，其中m29是0或1，且n16是0或1，條件是m29+n16=0-1；*-(ch2)m30-nh-co-nh-(ch2)n17-#，其中m30是0-5，且n17是0-5，條件是m30+n17=0-5；#-(ch2)m31-nh-co-nh-(ch2)n18-*，其中m31是0-5，且n18是0-5，條件是m31+n18=0-5；*-(ch2)m32-o-co-nh-(ch2)n19-#，其中m32是0-5，且n19是0-5，條件是m32+n19=0-5；#-(ch2)m33-o-co-nh-(ch2)n20-*，其中m33是0-5，且n20是0-5，條件是m33+n20=0-5；*-(ch2)m34-o-co-o-(ch2)n21-#，其中m34是0-5，且n21是0-5，條件是m34+n21=0-5；*-(ch2)m35-nh-co-(ch2)n22-nh-(ch2)p1-，其中m35是0-4,n22是0-4，且p1是0-4，條件是m35+n22+p1=0-4；且*-(ch2)m36-nh-co-(ch=ch)-co-nh-(ch2)n23-#，其中m36是0-2，且n23是0-2，條件是m36+n23=0-2；其中*和#反映環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)結(jié)合x1的位置；x2不存在，是氫，或是選自以下的氨基酸或氨基酸序列：g14、k14、f14、seqidno:1[y1rqsmnnfqglrsf14]、seqidno:2[r2qsmnnfqglrsf14]、seqidno:3[q3smnnfqglrsf14]、seqidno:4[s4mnnfqglrsf14]、seqidno:5[m5nnfqglrsf14]、seqidno:6[n6nfqglrsf14]、seqidno:7[n7fqglrsf14]、seqidno:8[f8qglrsf14]、seqidno:9[q9glrsf14]、seqidno:10[g10lrsf14]、seqidno:11[l11rsf14]、seqidno:12[r12sf14]和seqidno:13[s13f14]，其通過酰胺鍵與式(i)的氨基酸序列的n-末端g15共價(jià)連接，其中x2的任何氨基酸可以任選地被天然或非天然氨基酸替代；其中a是l-丙氨酸；r是l-精氨酸；n是l-天冬酰胺；d是l-天冬氨酸；q是l-谷氨酰胺；g是l-甘氨酸；h是l-組氨酸；i是l-異亮氨酸；l是l-亮氨酸；k是l-賴氨酸；m是l-甲硫氨酸；f是l-苯丙氨酸；p是l-脯氨酸；s是l-絲氨酸；t是l-蘇氨酸；y是l-酪氨酸；v是l-纈氨酸；其中式(i)中和x2的定義中的氨基酸的編號是指相應(yīng)的人adm序列；x3不存在或是與n末端或x2的任何氨基酸的側(cè)鏈的官能團(tuán)、g15的n末端或z共價(jià)連接的異源部分；z不存在或是x2或g15的任何氨基酸的n末端和x3之間或x2的任何氨基酸的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭，其中如果x3不存在，則z也不存在，且x2是氫或是如上所定義的氨基酸或氨基酸序列；其中如果x3是異源部分，則x2不存在或是如上所定義的氨基酸或氨基酸序列；z不存在或是x2的任何氨基酸或g15的n末端和x3之間或x2的任何氨基酸的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；或其鹽、其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。據(jù)報(bào)道，用內(nèi)酰胺橋取代二硫鍵以及引入n-甲基化和棕櫚?；梢栽黾与牡拇x穩(wěn)定性，同時(shí)保留生物活性。然而，如例如watkinsha,rathbonedl,barwellj,haydl,poynerdr,structure-activityrelationshipsforα-calcitoningene-relatedpeptide,brjpharmacol.2013,170(7),1308-1322anddennist,fourniera,stpierres,quirionr,structure-activityprofileofcalcitoningene-relatedpeptideinperipheralandbraintissues.evidenceforreceptormultiplicity.j.pharmacolexpther.1989,251(2),718-725所報(bào)道，肽的降鈣素超家族成員中二硫橋的替換與保留的活性無關(guān)。而且，盡管描述了肽結(jié)構(gòu)的單個(gè)變化，例如二硫鍵模擬物、n-甲基化和/或棕櫚酰化的組合在結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系方面是不可預(yù)知的。已知降鈣素相關(guān)肽的adm和其他成員通過二硫橋的切割而快速失活。然而，活性保留并同時(shí)半衰期延長的該二硫橋的取代–甚至改變分子內(nèi)環(huán)的大小–是本領(lǐng)域未知的，并且不被預(yù)期。根據(jù)本發(fā)明的化合物是式(i)的化合物以及其鹽、其溶劑合物和其鹽的溶劑合物，式(i)所涵蓋并具有下文中具體說明的式的化合物和其鹽、其溶劑合物以及其鹽的溶劑合物，式(i)所涵蓋并在下文中作為工作實(shí)施例具體說明的化合物和其鹽、其溶劑合物以及其鹽的溶劑合物，如果式(i)所涵蓋并在下文中具體說明的化合物還不是鹽、溶劑合物以及鹽的溶劑合物的話。取決于它們的結(jié)構(gòu)，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以立體異構(gòu)體形式存在(對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體)。本發(fā)明因此涵蓋對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體及其特定混合物。立體異構(gòu)均質(zhì)成分可以以已知方式由此類對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體的混合物中分離。當(dāng)本發(fā)明的化合物以互變異構(gòu)形式存在時(shí)，本發(fā)明涵蓋所有互變異構(gòu)形式。根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的立體異構(gòu)形式的實(shí)例是如上所定義的式(i)的化合物，其中所有氨基酸都具有l(wèi)-構(gòu)型：。本發(fā)明包括所有可能的立體異構(gòu)體形式，在未指示立體異構(gòu)現(xiàn)象的情況下也是如此。本發(fā)明還涵蓋根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的所有合適的同位素變體。根據(jù)本發(fā)明的化合物的同位素變體在此被理解為指其中根據(jù)本發(fā)明的化合物內(nèi)的至少一個(gè)原子已經(jīng)被交換為原子序數(shù)相同、但原子質(zhì)量與自然界中通?；蛑饕嬖诘脑淤|(zhì)量不同的另一個(gè)原子?？梢該饺敫鶕?jù)本發(fā)明的化合物的同位素的實(shí)例是氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，諸如2h(氘)、3h(氚)、13c、14c、15n、17o、18o、32p、33p、33s、34s、35s、36s、18f、36cl、82br、123i、124i、129i和131i。根據(jù)本發(fā)明的化合物的特定同位素變體，特別是其中摻入一種或多種放射性同位素的那些可能是有利的，例如用于檢查作用機(jī)制或活性化合物在體內(nèi)的分布；由于相對容易的制備性和可檢測性，特別是用3h或14c同位素標(biāo)記的化合物適合于此目的。此外，由于化合物的代謝穩(wěn)定性較高，例如體內(nèi)半衰期延長或所需活性劑量減少，同位素(例如氘)的摻入可導(dǎo)致特定治療益處；因此，根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的此類修飾在一些情況下也可構(gòu)成本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的同位素變體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如通過下述方法和工作實(shí)施例中所述的方法，通過使用特定試劑和/或其中的起始化合物的相應(yīng)同位素修飾。本發(fā)明還包括根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的前藥。術(shù)語“前藥”此處表示本身可以是生物活性的或無活性的、但在其體內(nèi)停留時(shí)間期間被轉(zhuǎn)化(例如，代謝或水解)為根據(jù)本發(fā)明的式(i)的化合物的化合物。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的鹽是根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理學(xué)可接受的鹽。還包括本身不適于藥物應(yīng)用但是例如可用于分離或純化根據(jù)本發(fā)明的化合物的鹽。根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理學(xué)可接受的鹽包括無機(jī)酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸和苯甲酸的鹽。根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理學(xué)可接受的鹽還包括常用堿的鹽，例如和優(yōu)選堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽和鎂鹽)和衍生自氨或具有1至16個(gè)碳原子的有機(jī)胺的銨鹽，所述有機(jī)胺例如和優(yōu)選乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己基胺、二甲基氨基乙醇、普魯卡因、二芐基胺、n-甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和n-甲基哌啶。在本發(fā)明的上下文中，溶劑合物是指在固體狀態(tài)或液體狀態(tài)下通過與溶劑分子配位形成復(fù)合物的本發(fā)明化合物的那些形式。水合物是其中與水配位的溶劑合物的特定形式。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的溶劑合物是水合物。在基團(tuán)的具體組合或優(yōu)選組合中給出的特定基團(tuán)定義也可以替換成其他組合的任何基團(tuán)定義，而不考慮指定的基團(tuán)的特殊組合。非常特別優(yōu)選的是前述優(yōu)選范圍的兩個(gè)或更多個(gè)的組合。本發(fā)明進(jìn)一步提供制備式(i)和(ia)的化合物、或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物的方法，其中式(ii)化合物根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-6；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-6；*-(ch2)m3-#，其中m3是1-8;*-(ch2)m4-(ch2=ch2)-(ch2)n1-#，其中m4是0-6,n1是0-6，條件是m4+n1=0-6；*-(ch2)m5-(ch≡ch)-(ch2)n2-#，其中m5是0-6，且n2是0-6，條件是m5+n2=0-6；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-6；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0-4，且n4是0-4，條件是m7+n4=0-6；*-so-(ch2)m8-#，其中m8是0-6；#-so-(ch2)m9-*，其中m9是0-6；*-so2-(ch2)m10-#，其中m10是0-6；#-so2-(ch2)m11-*，其中m11是0-6；其中*和#分別表示環(huán)內(nèi)結(jié)合的方向，且x2、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-4；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-4；*-(ch2)m3-#，其中m3是1-6；*-(ch2)m4-(ch2=ch2)-(ch2)n1-#，其中m4是0-4,n1是0-4，條件是m4+n1=0-4；*-(ch2)m5-(ch≡ch)-(ch2)n2-#，其中m5是0-4，且n2是0-4，條件是m5+n2=0-4；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-4;#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0-4，且n4是0-4，條件是m7+n4=0-4；*-so-(ch2)m8-#，其中m8是0-4；#-so-(ch2)m9-*，其中m9是0-4；*-so2-(ch2)m10-#，其中m10是0-4；#-so2-(ch2)m11-*，其中m11是0-4；其中*和#分別表示環(huán)內(nèi)結(jié)合的方向，且x2、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-6；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-6；*-(ch2)m3-#，其中m3是1-8;*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-6；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0-4，且n4是0-4，條件是m7+n4=0-6；x2是g14或k14，其通過酰胺鍵與式(i)的化合物的n末端g15共價(jià)連接，x3不存在或是與g14或k14的n末端或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)或z共價(jià)連接的異源部分；z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；其中如果x3不存在，則z也不存在；其中如果x3是異源部分，則z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-ch2-s-#；#-ch2-s-*；*-(ch2)2-#；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0或1且n3選自0、1、2、3；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0或1且n4選自0、1、2、3；其中*和#分別表示環(huán)內(nèi)結(jié)合的方向，且x2、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-ch2-s-#；#-ch2-s-*；*-(ch2)2-#；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是1且n3選自0、1和3；或m6是0且n3選自0、1和2；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是1且n4選自0、1和3；或m7是0且n4選自0、1和2；其中*和#分別表示環(huán)內(nèi)結(jié)合的方向，且x2、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-ch2-s-#；#-ch2-s-*；*-co-nh-ch2-#；*-co-nh-(ch2)2-#；*-ch2-co-nh-(ch2)3-#；*-ch2-co-nh-ch2-#；#-ch2-co-nh*；其中*和#分別表示環(huán)內(nèi)結(jié)合的方向；x2如上所定義；x3不存在或是棕櫚酸；且z不存在；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-6；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-6；*-(ch2)m3-#，其中m3是1-8；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-6；#-(ch2)m7-co-nh-(ch2)n4-*，其中m7是0-4，且n4是0-4，條件是m7+n4=0-6；且x2、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)m1-s-#，其中m1是0-4；#-(ch2)m2-s-*，其中m2是0-4；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0-4，且n3是0-4，條件是m6+n3=0-6；x2是g14或k14，其通過酰胺鍵與式(i)的化合物的n末端g15共價(jià)連接；x3不存在或是與g14或k14的n末端或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)或z共價(jià)連接的異源部分；z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；其中如果x3不存在，則z也不存在；其中如果x3是異源部分，則z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)-s-#；#-(ch2)-s-*；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0或1，且n3選自1、2和3；x2是g14或k14，其通過酰胺鍵與式(i)的化合物的n末端g15共價(jià)連接，x3不存在或是與g14或k14的n末端或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)或z共價(jià)連接的異源部分；z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；其中如果x3不存在，則z也不存在；其中如果x3是異源部分，則z不存在或是g14或k14的n末端和x3之間或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1選自*-(ch2)-s-#；#-(ch2)-s-*；*-(ch2)m6-co-nh-(ch2)n3-#，其中m6是0或1，且n3選自1、2和3；x2是g14或k14，其通過酰胺鍵與式(i)的化合物的n末端g15共價(jià)連接，x3是棕櫚酸，其與g14或k14的n末端或k14的側(cè)鏈的官能團(tuán)共價(jià)連接；z不存在；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1如上所定義；x2是g14或k14，其通過酰胺鍵與式(i)的化合物的n末端g15共價(jià)連接；且x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1和x2如上所定義；x3是聚合物，且所述聚合物選自直鏈或支鏈c3-c100羧酸，優(yōu)選c4-c30羧酸，其任選地被鹵素、羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯或磷酸酯取代，并且其可以是飽和的，或單或雙不飽和的；且z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1和x2如上所定義；x3是聚合物，且所述聚合物是peg部分；且z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x1和x2如上所定義；x3是異源部分，且z是x2的任何氨基酸或g15的n末端和x3之間或x2的任何氨基酸的側(cè)鏈的官能團(tuán)和x3之間共價(jià)連接的可切割接頭；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x2的至少一個(gè)氨基酸已被天然或非天然氨基酸替換；且x1、x3和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。在本發(fā)明的含義內(nèi)，天然氨基酸被定義為生肽性(peptidogenic)氨基酸。在本發(fā)明的含義內(nèi)，非天然氨基酸被定義為插入根據(jù)本發(fā)明的肽中的非生肽性氨基酸，包括：二氨基二酸，其在本發(fā)明的含義內(nèi)被定義為具有兩個(gè)氨基和兩個(gè)羧基的氨基酸。二氨基二酸可以與兩個(gè)另外的氨基酸形成酰胺鍵。二氨基二酸的實(shí)例是胱硫醚和2,7-二氨基辛二酸；二氨基酸，其在本發(fā)明的含義內(nèi)被定義為具有第二個(gè)氨基的氨基酸。二氨基酸的實(shí)例是3-氨基丙氨酸(dpr)、2,4-二氨基丁酸(dab)、α,γ-二氨基丁酸(dbu)和2,5二氨基戊酸(orn)；d-氨基酸，用于替代苯丙氨酸的雜環(huán)取代的丙氨酸和鹵代氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x3是選自聚合物、fc、fcrn結(jié)合配體、白蛋白和白蛋白結(jié)合配體的異源部分；且x1、x2和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。在本發(fā)明的含義內(nèi)，術(shù)語“異源部分”包括聚合物、fc、fcrn結(jié)合配體、白蛋白和白蛋白結(jié)合配體。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x3是聚合物，且所述聚合物選自直鏈或支鏈c3-c100羧酸，優(yōu)選c4-c30羧酸，其任選地被鹵素、羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯或磷酸酯取代，并且其可以是飽和的，或單或雙不飽和的peg部分、ppg部分、pas部分和hes部分；且x1、x2和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：x3是選自以下的羧酸：花生酸、花生四烯酸、山萮酸、癸酸、己酸、辛酸、三十六酸、蠟酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、反油酸、庚酸、芥酸、格地酸、三十一酸(henatriacontylicacid)、二十一酸(heneicosylicacid)、二十七酸(heptacosylicacid)、三十六酸(hexatriacontylicacid)、蟲漆醋酸(lacceroicacid)、月桂酸、二十四酸、亞麻酸(linoelaidicacid)、亞油酸、十七酸、蜂花酸、褐煤酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻腦酸、二十九酸(nonacosylicacid)、十九酸、油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、泛酸、壬酸、二十五酸、十五酸、葉虱酸、十六碳烯酸(sapienicacid)、硬脂酸、二十三酸、十三酸、十一酸、十八碳烯酸、戊酸、α-亞麻酸(α-linolenicacid)及其衍生物；且x1、x2和z如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步實(shí)施方案，所述異源部分是本領(lǐng)域已知的聚乙二醇(peg)或聚丙二醇(ppg)部分。所述聚合物可以是任何分子量的，并且可以是支鏈或非支鏈的。對于聚乙二醇，在一個(gè)實(shí)施方案中，為了易于處理和制造，分子量為約1kda至約100kda。可以使用其他大小，其取決于所需概況(例如，所需持續(xù)釋放的持續(xù)時(shí)間，對生物活性(如果有的話)的影響，處理的容易性，抗原性的程度或缺乏以及聚乙二醇對肽或類似物的其他已知影響)。例如，所述聚乙二醇可以具有以下平均分子量：約200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、45,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000kda。在一些實(shí)施方案中，所述聚乙二醇可以具有支鏈結(jié)構(gòu)。支鏈聚乙二醇描述于例如美國專利號5,643,575;morpurgo等人,appl.biochem.biotechnol.56:59-72(1996);vorobjev等人,nucleosidesnucleotides18:2745-2750(1999);和caliceti等人,bioconjug.chem.10:638-646(1999)。在其他實(shí)施方案中，所述異源部分是pas序列。如本文所使用的pas序列是指主要包含丙氨酸和絲氨酸殘基或主要包含丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸殘基的氨基酸序列，所述氨基酸序列在生理?xiàng)l件下形成無規(guī)卷曲構(gòu)象。因此，所述pas序列是構(gòu)建嵌段、氨基酸聚合物或序列盒，其包含丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸，基本上由其組成或由其組成，其可以用作促凝劑化合物中的異源部分的一部分。然而，技術(shù)人員意識到，當(dāng)除丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸之外的殘基作為pas序列中的次要組分添加時(shí)，氨基酸聚合物也可以形成無規(guī)卷曲構(gòu)象。如本文所使用的術(shù)語“次要組分”是指可以在特定程度上添加至pas序列中的除丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸以外的氨基酸，所述特定程度例如最多達(dá)約12％，即pas序列的100個(gè)氨基酸中的約12個(gè)，最多達(dá)約0％，即pas序列的100個(gè)氨基酸中的約10個(gè)，最多達(dá)約9%>，即pas序列的100個(gè)氨基酸中的約9個(gè)，最多達(dá)約8%>，即pas序列的100個(gè)氨基酸中的約8個(gè)，約6%>，即100個(gè)氨基酸中的約6個(gè)，約5%>，即100個(gè)氨基酸中的約5個(gè)，約4%>，即100個(gè)氨基酸中的約4個(gè)，約3%>，即100個(gè)氨基酸中的約3個(gè)，約2%>，即100個(gè)氨基酸中的約2個(gè)，約1%>，即100個(gè)氨基酸中的約1個(gè)。不同于丙氨酸、絲氨酸和脯氨酸的氨基酸可以選自arg、asn、asp、cys、gin、glu、gly、his、he、leu、lys、met、phe、thr、trp、tyr和val。在生理?xiàng)l件下，pas序列延伸形成無規(guī)卷曲構(gòu)象，從而可以介導(dǎo)促凝劑化合物的體內(nèi)和/或體外穩(wěn)定性增加。由于無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)域本身不采用穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)或功能，所以促凝劑化合物中pep1和/或pep2多肽介導(dǎo)的生物活性基本上得到保留。在其他實(shí)施方案中，形成無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)域的pas序列是生物學(xué)惰性的，特別是關(guān)于血漿中的蛋白水解、免疫原性、等電點(diǎn)/靜電行為、與細(xì)胞表面受體的結(jié)合或內(nèi)化，但仍然是可生物降解的，這提供了相對于合成聚合物諸如peg的明顯優(yōu)點(diǎn)。形成無規(guī)卷曲構(gòu)象的pas序列的非限制性實(shí)例包括選自aspaapapaspaapapsapa、aapaspapaapsapapaaps、apsspspsapsspspaspss、apsspspsapsspspasps、sspsapspsspaspspsspa、aaspaapsappaaaspaapsappa和asaaapaaasaaasapsaaa或其任何組合的氨基酸序列。pas序列的另外實(shí)例從例如美國專利公開號2010/0292130al和pct申請公開號wo2008/155134al是已知的。在某些實(shí)施方案中，所述異源部分是羥乙基淀粉(hes)或其衍生物。羥乙基淀粉(hes)是天然存在的支鏈淀粉(amylopectin)的衍生物，并被體內(nèi)的α-淀粉酶降解。hes是碳水化合物聚合物支鏈淀粉(amylopectin)的取代衍生物，其以最高達(dá)95重量％的濃度存在于玉米淀粉中。hes表現(xiàn)出有利的生物學(xué)特性，并且用作血容量替代劑且用于診所中的血液稀釋療法(sommermeyer等人,krankenhauspharmazie,8(8),271-278(1987);和weidler等人,arzneim.-forschung/drugres.,41,494-498(1991))。支鏈淀粉(amylopectin)含有葡萄糖部分，其中在主鏈中存在α-1,4-糖苷鍵，并且在支鏈位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)α-1,6-糖苷鍵。該分子的物理-化學(xué)特性主要由糖苷鍵的類型決定。由于缺口的α-1,4-糖苷鍵，產(chǎn)生每個(gè)轉(zhuǎn)角具有約6個(gè)葡萄糖單體的螺旋結(jié)構(gòu)。聚合物的物理-化學(xué)特性和生物化學(xué)特性可以經(jīng)由取代進(jìn)行修飾。羥乙基的引入可以經(jīng)由堿性羥乙基化來實(shí)現(xiàn)。通過調(diào)整反應(yīng)條件，可以就羥乙基化而言利用未取代的葡萄糖單體中各羥基的不同反應(yīng)性。由于該事實(shí)，技術(shù)人員能夠在有限的程度上影響取代模式。hes主要特征在于分子量分布和取代度。表示為ds的取代度涉及摩爾取代，是技術(shù)人員已知的。參見sommermeyer等人,krankenhauspharmazie,8(8),271-278(1987)，如上所引用，特別是第273頁。在一個(gè)實(shí)施方案中，羥乙基淀粉具有1至300kd、2至200kd、3至100kd或4至70kd的平均分子量(重量平均值)。羥乙基淀粉可以進(jìn)一步表現(xiàn)出0.1至3、優(yōu)選0.1至2、更優(yōu)選0.1至0.9、優(yōu)選0.1至0.8的摩爾取代度，以及就羥乙基而言2至20范圍內(nèi)的c2:c6取代之間的比率。具有約130kd的平均分子量的hes的非限制性實(shí)例是具有0.2至0.8諸如0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8、優(yōu)選0.4至0.7諸如0.4、0.5、0.6或0.7的取代度的hes。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，具有約130kd的平均分子量的hes是來自fresenius的voluven?。voluven?是一種人造膠體，其用于例如用于治療和預(yù)防血容量不足的治療適應(yīng)癥中的體積置換。voluven?的特征是130,000+/-20,000d的平均分子量，0.4的摩爾取代，和約9:1的c2:c6比率。在其他實(shí)施方案中，羥乙基淀粉的平均分子量范圍為例如4至70kd或10至70kd或12至70kd或18至70kd或50至70kd或4至50kd或10至50kd或12至50kd或18至50kd或4至18kd或10至18kd或12至18kd或4至12kd或10至12kd或4至10kd。在還有其他實(shí)施方案中，所用的羥乙基淀粉的平均分子量在大于4kd且低于70kd的范圍內(nèi)，諸如約10kd，或在9至10kd或10至11kd或9至11kd的范圍內(nèi)，或約12kd，或在11至12kd或12至13kd或11至13kd的范圍內(nèi)，或約18kd，或在17至18kd或18至19kd或17至19kd的范圍內(nèi)，或約30kd，或在29至30或30至31kd的范圍內(nèi)，或約50kd，或在49至50kd或50至51kd或49至51kd的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，所述異源部分可以是具有不同平均分子量和/或不同取代度和/或不同c2:c6取代比的羥乙基淀粉的混合物。因此，可以采用這樣的羥乙基淀粉的混合物，其具有不同平均分子量和不同取代度以及不同c2:c6取代比，或具有不同平均分子量和不同取代度以及相同或約相同c2:c6取代比，或具有不同平均分子量和相同或約相同取代度以及不同c2:c6取代比，或具有相同或約相同平均分子量和不同取代度以及不同c2:c6取代比，或具有不同平均分子量和相同或約相同取代度以及相同或約相同c2:c6取代比，或具有相同或約相同平均分子量和不同取代度以及相同或約相同c2:c6取代比，或具有相同或約相同平均分子量和相同或約相同取代度以及不同c2:c6取代比，或具有約相同平均分子量和約相同取代度以及約相同c2:c6取代比。在某些實(shí)施方案中，所述異源部分是聚唾液酸(psa)或其衍生物。聚唾液酸(psa)是由某些細(xì)菌菌株和哺乳動物的某些細(xì)胞中產(chǎn)生的唾液酸的天然存在的非支化聚合物rothj.,等人(1993)polysialicacid:frommicrobestoman,編輯rothj.,rutishauseru.,troyf.a.(birkhauserverlag,basel,switzerland),pp335-348.它們可以以n=約80個(gè)或更多個(gè)唾液酸殘基降至n=2的不同聚合度通過有限的酸水解或通過用神經(jīng)氨酸酶消化，或通過分級天然的、細(xì)菌衍生形式的聚合物來產(chǎn)生。不同聚唾液酸的組成也變化，使得存在均聚形式，即包含大腸桿菌菌株k1的莢膜多糖和組b腦膜炎球菌的α-2,8連接的聚唾液酸，其也在神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(n-cam)的胚胎形式上發(fā)現(xiàn)。也存在異聚形式—諸如大腸桿菌菌株k92的交替α-2,8α-2,9聚唾液酸和腦膜炎奈瑟氏球菌的組c多糖。唾液酸也可以在與唾液酸以外的單體的交替共聚物中發(fā)現(xiàn)，諸如腦膜炎奈瑟氏球菌的組w135或組y。聚唾液酸具有重要的生物學(xué)功能，包括通過致病細(xì)菌逃避免疫和補(bǔ)體系統(tǒng)，以及在胎兒發(fā)育期間調(diào)節(jié)未成熟神經(jīng)元的神經(jīng)膠質(zhì)粘附性(其中聚合物具有抗粘附功能)cho和troy,p.n.a.s.,usa,91(1994)11427-11431，盡管在哺乳動物中沒有已知的聚唾液酸受體。大腸桿菌菌株k1的α-2,8連接的聚唾液酸也被稱為“多聚乙酰神經(jīng)氨酸”，并且被用于(以各種長度)以例舉本發(fā)明。已經(jīng)描述了將聚唾液酸附著或綴合至肽或多肽的各種方法(例如，參見美國專利號5,846,951；wo-a-0187922，和us2007/0191597al。在某些實(shí)施方案中，所述異源部分是富含甘氨酸的均氨基酸聚合物(hap)。所述hap序列可以包含甘氨酸的重復(fù)序列，其具有長度至少50個(gè)氨基酸、至少100個(gè)氨基酸、120個(gè)氨基酸、140個(gè)氨基酸、160個(gè)氨基酸、180個(gè)氨基酸、200個(gè)氨基酸、250個(gè)氨基酸、300個(gè)氨基酸、350個(gè)氨基酸、400個(gè)氨基酸、450個(gè)氨基酸或500個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述hap序列能夠延長與hap序列融合或連接的部分的半衰期。所述hap序列的非限制性實(shí)例包括但不限于(gly)n、(gly4ser)n或s(gly4ser)n，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一個(gè)實(shí)施方案中，n為20、21、22、23、24、25、26、26、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40。在另一個(gè)實(shí)施方案中，n為50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200。在某些方面，本發(fā)明的化合物與至少一個(gè)異源部分共價(jià)連接，所述異源部分是或包含xten多肽或其片段、變體或衍生物。如本文所用，“xten多肽”是指具有非天然存在的、基本上不重復(fù)的序列的延伸長度多肽，所述序列主要由小親水氨基酸構(gòu)成，其中所述序列在生理?xiàng)l件下具有低程度或不具有二級或三級結(jié)構(gòu)。作為異源部分，xten可以充當(dāng)半衰期延長部分。此外，xten可以提供所需特性，包括但不限于增強(qiáng)的藥代動力學(xué)參數(shù)和溶解度特征。將包含xten序列的異源部分并入本發(fā)明的綴合物中可以賦予所得綴合物以下有利特性中的一種或多種：構(gòu)象柔性、增強(qiáng)的水溶性、高度的蛋白酶抗性、低免疫原性、與哺乳動物受體的低結(jié)合或增加的流體動力學(xué)(或斯托克斯)半徑。在某些方面，xten部分可以增加藥代動力學(xué)特性，諸如更長的體內(nèi)半衰期或增加的曲線下面積(auc)，使得本發(fā)明的化合物或綴合物在體內(nèi)停留并且與具有相同、但不具有xten異源部分的化合物或綴合物相比具有增加時(shí)間段的促凝活性?？捎米鞅景l(fā)明的促凝血綴合物中的異源部分的xten部分的實(shí)例公開于例如美國專利公開號2010/0239554al、2010/0323956al、2011/0046060al、2011/0046061al、2011/0077199al或2011/0172146al或國際專利公開號wo2010091122al、wo2010144502a2、wo2010144508al、wo2011028228al、wo2011028229al或wo2011028344a2。在本發(fā)明的含義內(nèi)，術(shù)語“fc”應(yīng)理解為免疫球蛋白恒定區(qū)或其部分，諸如fc區(qū)或fcrn結(jié)合配偶體。在某些實(shí)施方案中，所述化合物或綴合物與一個(gè)或多個(gè)截短的fc區(qū)連接，所述fc區(qū)仍足以為fc區(qū)賦予fc受體(fcr)結(jié)合特性。例如，結(jié)合fcrn的fc區(qū)的部分(即，fcrn結(jié)合部分)包含igg1的約氨基酸282-438，eu編號(其中主要接觸位點(diǎn)是ch2結(jié)構(gòu)域的氨基酸248、250-257、272、285、288、290-291、308-311和314以及ch3結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基385-387、428和433-436)。因此，本發(fā)明的生物活性adm肽衍生物中的fc區(qū)可以包含fcrn結(jié)合部分或由fcrn結(jié)合部分組成。fcrn結(jié)合部分可以衍生自任何同種型的重鏈，包括igg1、igg2、igg3和igg4。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用來自人同種型iggl的抗體的fcrn結(jié)合部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用來自人同種型igg4的抗體的fcrn結(jié)合部分。在某些實(shí)施方案中，fc區(qū)包含以下中的至少一個(gè)：鉸鏈(例如，上、中和/或下鉸鏈區(qū))結(jié)構(gòu)域(根據(jù)eu編號的抗體fc區(qū)的約氨基酸216-230)、ch2結(jié)構(gòu)域(根據(jù)eu編號的抗體fc區(qū)的氨基酸231-404)、ch3結(jié)構(gòu)域(根據(jù)eu編號的抗體fc區(qū)的氨基酸341-438)、ch4結(jié)構(gòu)域或其變體、部分或片段。在其他實(shí)施方案中，fc區(qū)包含完整的fc結(jié)構(gòu)域(即，鉸鏈結(jié)構(gòu)域、ch2結(jié)構(gòu)域和ch3結(jié)構(gòu)域)。在一些實(shí)施方案中，fc區(qū)包含與ch3結(jié)構(gòu)域(或其部分)融合的鉸鏈結(jié)構(gòu)域(或其部分)，與ch2結(jié)構(gòu)域(或其部分)融合的鉸鏈結(jié)構(gòu)域(或其部分)，與ch3結(jié)構(gòu)域(或其部分)融合的ch2結(jié)構(gòu)域(或其部分)，與鉸鏈結(jié)構(gòu)域(或其部分)和ch3結(jié)構(gòu)域(或其部分)融合的ch2結(jié)構(gòu)域(或其部分)，基本上由其組成或由其組成。在還有其他實(shí)施方案中，fc區(qū)缺少ch2結(jié)構(gòu)域的至少一部分(例如，ch2結(jié)構(gòu)域的全部或部分)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，fc區(qū)包含對應(yīng)于eu編號221至447的氨基酸或由其組成。本發(fā)明的生物活性adm肽衍生物中的fc可以例如包括以下中公開的一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置的改變(例如，取代)：國際pct公開wo88/07089a1、w096/14339a1、wo98/05787a1、w098/23289a1、w099/51642a1、w099/58572a1、wo00/09560a2、wo00/32767a1、wo00/42072a2、wo02/44215a2、wo02/060919a2、wo03/074569a2、wo04/016750a2、wo04/029207a2、wo04/035752a2、wo04/063351a2、wo04/074455a2、wo04/099249a2、wo05/040217a2、wo04/044859、wo05/070963a1、wo05/077981a2、wo05/092925a2、wo05/123780a2、wo06/019447a1、wo06/047350a2和wo06/085967a2；美國專利公開號us2007/0231329、us2007/0231329、us2007/0237765、us2007/0237766、us2007/0237767、us2007/0243188、us2007/0248603、us2007/0286859、us2008/0057056；或美國專利號5,648,260；5,739,277；5,834,250；5,869,046；6,096,871；6,121,022；6,194,551；6,242,195；6,277,375；6,528,624；6,538,124；6,737,056；6,821,505；6,998,253；7,083,784；7,404,956和7,317,091。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以在一個(gè)或多個(gè)公開的氨基酸位置進(jìn)行特異性改變(例如，本領(lǐng)域公開的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的特異性取代)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以在一個(gè)或多個(gè)所公開的氨基酸位置進(jìn)行不同的改變(例如，本領(lǐng)域公開的一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置的不同取代)。用于本發(fā)明的fc區(qū)還可以包含改變其糖基化的本領(lǐng)域公認(rèn)的氨基酸取代。例如，fc具有導(dǎo)致糖基化降低(例如，n-或o-連接的糖基化)的突變，或者可以包含野生型fc部分的改變的糖型(例如，低巖藻糖或不含巖藻糖的聚糖)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物或綴合物與包含白蛋白或其功能片段的異源部分連接。人血清白蛋白(hsa或ha)是其全長形式的609個(gè)氨基酸的蛋白，負(fù)責(zé)很大比例的血清滲透壓，并且還作為內(nèi)源和外源配體的載體發(fā)揮功能。如本文所用的術(shù)語“白蛋白”包括全長白蛋白或其功能片段、變體、衍生物或類似物。白蛋白或其片段或變體的實(shí)例公開于美國專利公開號2008/0194481a1、2008/0004206al、2008/0161243al、2008/0261877al或2008/0153751al或pct申請公開號2008/033413a2、2009/058322al或2007/021494a2。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異源部分是白蛋白、其片段或變體，其進(jìn)一步連接至選自免疫球蛋白恒定區(qū)或其部分(例如fc區(qū))、pas序列、hes和peg的異源部分。在某些實(shí)施方案中，所述異源部分是白蛋白結(jié)合部分，其包含白蛋白結(jié)合肽、細(xì)菌白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域、白蛋白-結(jié)合抗體片段或其任何組合。例如，白蛋白結(jié)合蛋白可以是細(xì)菌白蛋白結(jié)合蛋白、抗體或抗體片段(包含結(jié)構(gòu)域抗體)(參見美國專利號6,696,245)。例如，白蛋白結(jié)合蛋白可以是細(xì)菌白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，諸如鏈球菌蛋白g之一(konig,t.和skerra,a.(1998)j.immunol.methods218,73-83)。可用作綴合配偶體的白蛋白結(jié)合肽的其他實(shí)例是例如具有cys-xaai-xaa2-xaa3-xaa4-cys共有序列的那些，其中xaai是asp、asn、ser、thr或trp；xaa2是asn、gin、his、he、leu或lys；xaa3是ala、asp、phe、trp或tyr；且xaa4是asp、gly、leu、phe、ser或thr，如美國專利申請2003/0069395或dennis等人(dennis等人(2002)j.biol.chem.277,35035-35043)中所述。如kraulis等人,febslett.378:190-194(1996)和linhult等人,proteinsci.11:206-213(2002)所公開的來自鏈球菌蛋白g的結(jié)構(gòu)域3是細(xì)菌白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的實(shí)例。白蛋白結(jié)合肽的實(shí)例包括一系列具有核心序列diclprwgclw(seqidno:45)的肽。參見例如dennis等人,j.biol.chem.2002,277:35035-35043(2002)。白蛋白結(jié)合抗體片段的實(shí)例公開于muller和kontermann,curr.opin.mol.ther.9:319-326(2007);roovers等人,cancerimmunol.immunother.56:303-317(2007)，和holt等人,prot.eng.designsci.,21:283-288(2008)，其以其整體通過引用并入本文。此白蛋白結(jié)合部分的實(shí)例是如trussel等人,bioconjugatechem.20:2286-2292(2009)公開的2-(3-馬來酰亞胺基丙酰胺基)-6-(4-(4-碘苯基)丁酰胺基)己酸酯(“albu”標(biāo)簽)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：z不存在且x1、x2和x3如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。根據(jù)該實(shí)施方案，如上所定義的異源部分x3以永久方式與x2共價(jià)連接。在本發(fā)明的含義內(nèi)，術(shù)語部分“以永久方式與肽共價(jià)連接”應(yīng)當(dāng)理解為該部分在不使用接頭z的情況下與肽共價(jià)連接。一個(gè)實(shí)例是用直鏈或支鏈c3-c100羧酸、優(yōu)選c4-c30羧酸將式(i)的肽序列的n末端或其中的任何氨基酸的合適的側(cè)鏈官能團(tuán)官能化，所述直鏈或支鏈c3-c100羧酸、優(yōu)選c4-c30羧酸任選地被鹵素、羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯或磷酸酯取代，并且其可以是飽和的，或單或雙不飽和的。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物定義如下：z是如上所定義的可切割接頭；且x1、x2和x3如上所定義；或其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或鹽的溶劑合物。在本發(fā)明的含義內(nèi)，術(shù)語“可切割接頭”應(yīng)理解為x2和x3之間的接頭，其允許通過酶促方法或通過ph依賴性親核過程或通過水解或其任何組合從x2釋放異源部分。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，式(i)的化合物通過至少一個(gè)酰胺鍵的n-甲基化而進(jìn)一步修飾。已經(jīng)針對各種肽描述了n-甲基化對肽的代謝穩(wěn)定性的影響。例如，環(huán)孢菌素是天然存在的、環(huán)狀的、多次n-甲基化的肽，其表現(xiàn)出優(yōu)異的藥代動力學(xué)概況。n-甲基化通常阻斷蛋白酶的酶促降解，因?yàn)樗鼈儾荒芮懈頽-甲基化的肽鍵。顯示多重n-甲基化改善了肽的代謝穩(wěn)定性和腸通透性[chatterjeej,gilonc,hoffmana,kesslerh,n-methylationofpeptides:anewperspectiveinmedicinalchemistry,accchemres.,41(10),1331-1342,2008]。使用與n-甲基化組合的環(huán)化來調(diào)節(jié)肽的物理化學(xué)特性，包括代謝穩(wěn)定性、膜滲透性和口服生物利用度[chatterjeej,lauferb,kesslerh,synthesisofn-methylatedcyclicpeptides,natprotoc.,7(3),432-444,2012]。dongqg,zhangy,wangms,fengj,zhanghh,wuyg,gutj,yuxh,jiangcl,cheny,liw,kongw,improvementofenzymaticstabilityandintestinalpermeabilityofdeuterohemin-peptideconjugatesbyspecificmulti-siten-methylation,aminoacids.,43(6),2431-2441,2012描述了選擇位點(diǎn)的n-甲基化顯示針對蛋白水解降解的高抗性。在稀釋的血清和腸道制備物中觀察到高50至140倍的半衰期值。然而，lindey,ovadiao,safraie,xiangz,portillofp,shalevde,haskell-luevanoc,hoffmana,gilonc,structure-activityrelationshipandmetabolicstabilitystudiesofbackbonecyclizationandn-methylationofmelanocortinpeptides,biopolymers.,90(5),671-682,2008描述了α-黑素細(xì)胞刺激激素的環(huán)狀n-甲基化類似物比母體肽更穩(wěn)定，然而生物活性更低。根據(jù)本發(fā)明的化合物顯示出不可預(yù)見的藥理活性可用范圍。因此，它們適于用作在人和動物中治療和/或預(yù)防疾病的藥物。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防病癥，尤其是心血管病癥、水腫性病癥和/或炎性病癥的用途。對本發(fā)明，術(shù)語“治療(treatment)”或“治療(treating)”包括抑制、延緩、減輕、緩解、阻止、減少疾病、病癥、病況或狀態(tài)、其發(fā)展和/或進(jìn)展和/或其癥狀，或造成疾病、病癥、病況或狀態(tài)、其發(fā)展和/或進(jìn)展和/或其癥狀的衰退。術(shù)語“預(yù)防(prevention)”或“預(yù)防(preventing)”包括降低患有、感染或經(jīng)歷疾病、病癥、病況或狀態(tài)、其狀態(tài)、發(fā)展和/或進(jìn)展和/或其癥狀的風(fēng)險(xiǎn)。術(shù)語預(yù)防包括防治(prophylaxis)。治療或預(yù)防疾病、病癥、病況或狀態(tài)可以是部分或完全的?；谄渌幚硖匦?，根據(jù)本發(fā)明的化合物可用于治療和/或預(yù)防心血管疾病，特別是心力衰竭，尤其是慢性和急性心力衰竭、惡化心力衰竭、舒張性和收縮性(充血性)心力衰竭、急性失代償性心力衰竭、心臟功能不全、冠心病、心絞痛、心肌梗死、缺血再灌注損傷、缺血性和出血性卒中、動脈硬化、動脈粥樣硬化、高血壓尤其是原發(fā)性高血壓、惡性原發(fā)性高血壓、繼發(fā)性高血壓、腎血管性高血壓和腎臟和內(nèi)分泌病癥繼發(fā)的高血壓、高血壓性心臟病、高血壓性腎疾病、肺動脈高壓，尤其是繼發(fā)性肺動脈高壓、具有或不具有急性肺心病的肺栓塞后的肺動脈高壓、原發(fā)性肺動脈高壓和周圍動脈閉塞性疾病。根據(jù)本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防妊娠[懷孕引發(fā)的]水腫和具有和不具有高血壓的蛋白尿(子癇前期)。本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防肺部病癥，諸如慢性阻塞性肺疾病、哮喘、急性和慢性肺水腫、吸入的有機(jī)塵埃和真菌、放線菌或其他來源的粒子造成的變應(yīng)性肺泡炎和肺炎、急性化學(xué)性支氣管炎、急性和慢性化學(xué)性肺水腫(例如在吸入光氣、氮氧化物后)、神經(jīng)源性肺水腫、輻射造成的急性和慢性肺部表現(xiàn)、急性和慢性間質(zhì)性肺病癥(諸如但不限于藥物引起的間質(zhì)性肺病癥，例如繼發(fā)于博來霉素治療)、成人或兒童包括新生兒的急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ali/ards)、肺炎和敗血癥繼發(fā)的ali/ards、吸引術(shù)繼發(fā)的吸入性肺炎和ali/ards(諸如但不限于反芻胃內(nèi)容物造成的吸入性肺炎)、煙氣吸入繼發(fā)的ali/ards、輸血相關(guān)的急性肺損傷(trali)、外科手術(shù)、創(chuàng)傷或燒傷后的ali/ards或急性肺功能不全、呼吸機(jī)所致肺損傷(vili)、胎糞吸入后的肺損傷、肺纖維化和高山病。根據(jù)本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防慢性腎臟疾病(階段1-5)、腎機(jī)能不全、糖尿病性腎病變、高血壓性慢性腎臟病、腎小球腎炎、急進(jìn)性和慢性腎炎綜合征、非特異性腎炎綜合征、腎病綜合征、遺傳性腎病、急性和慢性腎小管間質(zhì)性腎炎、急性腎損傷、急性腎功能衰竭、創(chuàng)傷后腎功能衰竭、創(chuàng)傷和手術(shù)后腎損傷、心腎綜合征以及腎移植的保護(hù)與功能改善。該化合物此外適于治療和/或預(yù)防糖尿病及其相繼癥狀，諸如例如糖尿病大血管和微血管病變、糖尿病性腎病變和神經(jīng)性病變。本發(fā)明的化合物此外可用于治療和/或預(yù)防中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)病癥，諸如病毒性和細(xì)菌性腦膜炎和腦炎(例如帶狀皰疹腦炎)、創(chuàng)傷性和毒性腦損傷、腦和脊髓的原發(fā)性或繼發(fā)性[轉(zhuǎn)移]惡性腫瘤、脊神經(jīng)根炎和多發(fā)性神經(jīng)根炎、格林-巴利綜合征[急性(后-)感染性多發(fā)性神經(jīng)炎，米勒費(fèi)雪綜合征]、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化[進(jìn)行性脊髓性肌萎縮]、帕金森氏病、急性和慢性多發(fā)性神經(jīng)病、疼痛、腦水腫、阿爾茨海默氏病、神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病諸如但不限于多發(fā)性硬化。根據(jù)本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防門靜脈高血壓和肝纖維化[肝硬化]及其后遺癥諸如食管靜脈曲張和腹水，適于治療和/或預(yù)防惡性腫瘤或炎癥繼發(fā)的胸腔積液和適于治療和/或預(yù)防淋巴水腫和靜脈曲張繼發(fā)的水腫。本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防胃腸道的炎性病癥諸如炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎和腸道的中毒和血管病癥。本發(fā)明的化合物此外適于治療和/或預(yù)防敗血癥、敗血癥性休克、非感染性起因的全身炎癥反應(yīng)綜合征(sirs)、出血性休克、具有器官功能障礙或多器官衰竭(mof)的敗血癥或sirs、創(chuàng)傷性休克、中毒性休克、過敏性休克、蕁麻疹、昆蟲叮咬和叮咬相關(guān)過敏、血管神經(jīng)性水腫[巨大蕁麻疹，昆克氏水腫]、急性喉炎和氣管炎、以及急性梗阻性喉炎[哮吼]和會厭炎。該化合物此外適于治療和/或預(yù)防風(fēng)濕病類型的疾病和視為自身免疫性疾病的其他疾病，諸如但不限于多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、硬皮病、紫癜和血管炎。根據(jù)本發(fā)明的化合物還適于治療水腫性眼部疾病或與受干擾的血管功能相關(guān)的眼部疾病，包括但不限于年齡相關(guān)性黃斑變性(amd)、糖尿病性視網(wǎng)膜病，特別是糖尿病性黃斑水腫(dme)、視網(wǎng)膜下水腫和視網(wǎng)膜內(nèi)水腫。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語年齡相關(guān)性黃斑變性(amd)包括amd的濕性(或滲出性、新生血管性)和干性(或非滲出性、非新生血管性)表現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的化合物此外適于治療眼內(nèi)高壓(青光眼)。根據(jù)本發(fā)明的化合物此外可用于治療和/或預(yù)防外科手術(shù)介入，特別是使用心肺機(jī)對心臟的介入(例如搭橋手術(shù)、心臟瓣膜移植)、對頸動脈的介入、對主動脈的介入和顱蓋的工具開啟或穿透的介入后的手術(shù)相關(guān)性局部缺血狀態(tài)以及其后續(xù)癥狀。該化合物此外適于外科手術(shù)介入事件中的一般性治療和/或預(yù)防，目的在于加速傷口愈合和縮短再恢復(fù)時(shí)間。它們進(jìn)一步適于促進(jìn)傷口愈合。該化合物此外適于治療和/或預(yù)防骨密度與結(jié)構(gòu)的病癥，諸如但不限于骨質(zhì)疏松、骨軟化癥和甲狀旁腺功能亢進(jìn)有關(guān)的骨骼病癥。該化合物此外適于治療和/或預(yù)防性功能障礙，特別是男性勃起功能障礙。該化合物優(yōu)選適于治療和/或預(yù)防心力衰竭、慢性心力衰竭、心力衰竭惡化、急性心力衰竭、急性失代償性心力衰竭、舒張期和收縮期(充血性)心力衰竭、冠心病、缺血性和/或出血性卒中、高血壓、肺動脈高壓、周圍動脈閉塞性疾病、子癇前期、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、急性和/或慢性肺水腫、吸入的有機(jī)塵埃和真菌、放線菌或其他來源的粒子造成的變應(yīng)性肺泡炎和/或肺炎、和/或急性化學(xué)性支氣管炎、急性和/或慢性化學(xué)性肺水腫、神經(jīng)源性肺水腫、輻射造成的急性和/或慢性肺部表現(xiàn)、急性和/或慢性間質(zhì)性肺病癥、成人或兒童包括新生兒的急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ali/ards)、肺炎和敗血癥繼發(fā)的ali/ards、吸引術(shù)繼發(fā)的吸入性肺炎和ali/ards、煙氣吸入繼發(fā)的ali/ards、輸血相關(guān)的急性肺損傷(trali)、外科手術(shù)、創(chuàng)傷和/或燒傷后的ali/ards和/或急性肺功能不全、和/或呼吸機(jī)所致肺損傷(vili)、胎糞吸入后的肺損傷、肺纖維化、高山病、慢性腎臟疾病、腎小球腎炎、急性腎損傷、心腎綜合征、淋巴水腫、炎性腸病、敗血癥、敗血性休克、非感染性起因的全身炎癥反應(yīng)綜合征(sirs)、過敏性休克、炎性腸病和/或蕁麻疹。該化合物更優(yōu)選適于治療和/或預(yù)防心力衰竭、慢性心力衰竭、心力衰竭惡化、急性心力衰竭、急性失代償性心力衰竭、舒張期和收縮期(充血性)心力衰竭、高血壓、肺動脈高壓、哮喘、急性和/或慢性化學(xué)性肺水腫、成人或兒童包括新生兒的急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ali/ards)、肺炎和敗血癥繼發(fā)的ali/ards、吸引術(shù)繼發(fā)的吸入性肺炎和ali/ards、煙氣吸入繼發(fā)的ali/ards、輸血相關(guān)的急性肺損傷(trali)、外科手術(shù)、創(chuàng)傷和/或燒傷后的ali/ards和/或急性肺功能不全、和/或呼吸機(jī)所致肺損傷(vili)、胎糞吸入后的肺損傷、敗血癥、敗血性休克、非感染性起因的全身炎癥反應(yīng)綜合征(sirs)、過敏性休克、炎性腸病和/或蕁麻疹。本發(fā)明進(jìn)一步提供根據(jù)本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防病癥，特別是上述病癥的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供根據(jù)本發(fā)明的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防病癥，特別是上述病癥的藥物的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供使用有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物治療和/或預(yù)防病癥，特別是上述病癥的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含根據(jù)本發(fā)明的化合物和一種或多種其他活性成分，特別是用于治療和/或預(yù)防上述病癥的活性成分的藥物。示例性和優(yōu)選活性成分組合是：ace抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、β-2受體激動劑、磷酸二酯酶抑制劑、糖皮質(zhì)激素受體激動劑、利尿劑或重組血管緊張素轉(zhuǎn)化酶-2或乙酰水楊酸(阿司匹林)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與ace抑制劑聯(lián)合施用，所述ace抑制劑諸如例如且優(yōu)選是依那普利、喹那普利、卡托普利、賴諾普利、雷米普利、地拉普利、福辛普利、培多普利、西拉普利、咪達(dá)普利、貝那普利、莫西普利、螺普利或泉多普利(trandopril)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與血管緊張素受體拮抗劑聯(lián)合施用，所述血管緊張素受體拮抗劑諸如例如且優(yōu)選是氯沙坦、坎地沙坦、纈沙坦、替米沙坦或恩布沙坦。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與β-2受體激動劑聯(lián)合施用，所述β-2受體激動劑諸如例如且優(yōu)選是沙丁胺醇、吡布特羅、沙美特羅、特布他林、非諾特羅、妥布特羅、克侖特羅、瑞普特羅或福莫特羅。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與磷酸二酯酶(pde)抑制劑聯(lián)合施用，所述磷酸二酯酶(pde)抑制劑諸如例如且優(yōu)選是米利酮、氨吡酮、匹莫苯丹、西洛他唑、西地那非、伐地那非或他達(dá)拉非。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與糖皮質(zhì)激素受體激動劑聯(lián)合施用，所述糖皮質(zhì)激素受體激動劑諸如例如且優(yōu)選是皮質(zhì)醇(cortiosol)、可的松、氫化可的松、強(qiáng)的松、甲基強(qiáng)的松龍、甲烯強(qiáng)的松龍(prednylidene)、地夫可特、氟可龍、去炎松、地塞米松或倍他米松。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與利尿劑聯(lián)合施用，所述利尿劑諸如例如且優(yōu)選是呋塞米、托拉塞米和氫氯噻嗪。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與利鈉肽諸如奈西立肽(人b型利鈉肽(hbnp))和卡培立肽(α-人心房利鈉多肽(hanp))組合施用。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與尿擴(kuò)張素(一種仍在開發(fā)用于急性心力衰竭中的anp的衍生物)組合施用。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物與lcz696(entresto)、中性溶酶(腦啡肽酶、中性內(nèi)肽酶、nep，其也參與adm代謝)抑制劑組合施用。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含通常與一種或多種惰性、無毒、藥學(xué)適宜的賦形劑一起的至少一種本發(fā)明的化合物的藥物，并涉及其用于前述目的的用途。根據(jù)本發(fā)明的化合物可以全身和/或局部起作用。為此，它們可以以合適的方式，例如通過腸胃外、經(jīng)肺、經(jīng)鼻、舌下、經(jīng)舌、口腔、皮膚、透皮、結(jié)膜、視神經(jīng)途徑或作為植入物或支架進(jìn)行施用。根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以適于這些施用途徑的施用形式施用。可以在避免吸收步驟(例如靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心臟內(nèi)、脊柱內(nèi)或腰椎內(nèi))或包含吸收步驟(例如肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮或腹膜內(nèi))的情況下進(jìn)行腸胃外施用。適于腸胃外施用的施用形式包括用于以溶液、混懸劑、乳劑、凍干物或消毒粉末形式注射或輸注的制劑。適于其他施用途徑的是例如用于吸入的藥物形式(包括粉末吸入裝置、噴霧器)、滴鼻劑、滴眼劑、溶液或噴霧劑；膜/片或水性混懸劑(洗液，搖振混合物)、親脂性混懸劑、軟膏劑、霜?jiǎng)?、透皮治療系統(tǒng)(例如貼劑)、乳劑、糊劑、泡沫劑、撲粉、植入物或支架。腸胃外施用是優(yōu)選的，尤其是靜脈內(nèi)施用。吸入施用也是優(yōu)選的，例如，通過使用粉末吸入器或霧化器。根據(jù)本發(fā)明的化合物可以轉(zhuǎn)化為所述施用形式。這可以以本身已知的方式，通過與惰性、無毒、藥學(xué)適宜的賦形劑混合來進(jìn)行。這些賦形劑包括載體(例如微晶纖維素、乳糖、甘露醇)、溶劑(例如液體聚乙二醇)、乳化劑和分散劑或潤濕劑(例如十二烷基硫酸鈉、聚氧失水山梨糖醇油酸酯(polyoxysorbitanoleate))、粘合劑(例如聚乙烯基吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑，例如抗壞血酸)、著色劑(例如無機(jī)顏料，例如氧化鐵)和口味和/或氣味掩蔽劑。通常發(fā)現(xiàn)在腸胃外施用情況下有利的是施用約0.001至5mg/kg體重、優(yōu)選約0.01至1mg/kg體重的量以實(shí)現(xiàn)有效結(jié)果。盡管如此，在一些情況下可能需要偏離所述的量，特別是根據(jù)體重、施用途徑、對活性成分的個(gè)體響應(yīng)、制劑的性質(zhì)以及進(jìn)行施用的時(shí)間或時(shí)間間隔。例如，在一些情況下小于前述最小量可能是足夠的，而在其他情況下必須超過所述上限。在施用量較大的情況下將這些分為每天多份獨(dú)立劑量可能是明智的。下列工作實(shí)施例舉例說明本發(fā)明。本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。下列測試與實(shí)施例中的百分比除非另行說明均為重量百分比；份數(shù)是重量份。液體/液體溶液的溶劑比、稀釋比和濃度數(shù)據(jù)各自基于體積。附圖的解釋：圖1：內(nèi)皮細(xì)胞中的跨細(xì)胞電阻測定(1b)。在≥1nmol/l的濃度下，用實(shí)施例16處理依賴性和顯著地減少凝血酶劑量刺激后huvec單層的電阻破壞。將值繪制為4個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的平均值±sem。圖2：內(nèi)皮細(xì)胞中的體外滲透性測定(1c)。在≥0.3nmol/l的濃度下，用實(shí)施例18處理依賴性和顯著地減少凝血酶劑量刺激后huvec單層對于fitc-右旋糖酐的滲透性。將值繪制為至少4個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的平均值±sem。圖3：使用用于測定半衰期(慢)的兩相衰減分析(測試1e)用graphpadprism5(graphpadsoftware)計(jì)算的血漿中肽的穩(wěn)定性。對照：tam[g14]adm(14-52)；實(shí)施例18：tam[k14(pam),(dpr16,e21)lac]adm(14-52))；和實(shí)施例27：tam[k14(pam),(dpr16,e21)lac,nα-me-k46]adm(14-52)的n-末端6-羧基四甲基羅丹明-(tam)-標(biāo)記的類似物。圖4：粒細(xì)胞變移測定(測試1f)。在≥1nmol/l的濃度下，用實(shí)施例18處理顯著減少通過tnf-α刺激的huvec的pmns的變移。將值繪制為7個(gè)重復(fù)的平均值±sem，媒介物對照n=12?？筰cam-1抗體充當(dāng)陽性對照，n=6。圖5：遙測的、血壓正常的wistar大鼠的血壓和心率的測量。(測試2a)在皮下施用所示劑量的實(shí)施例18或媒介物(虛線)后，從遙測的、血壓正常的雌性wistar大鼠記錄的平均動脈血壓(mabp)的24小時(shí)曲線。將數(shù)據(jù)點(diǎn)繪制為每組6只動物的平均30分鐘間隔的平均值±sem。以100μg/kg的劑量施用實(shí)施例18，使mabp減少約20至25％，直至施用后3.5小時(shí)(實(shí)心圓形)。在施用后4小時(shí)和8小時(shí)之間，mabp逐漸恢復(fù)至基線值，并最終處于媒介物處理動物的范圍內(nèi)。當(dāng)以≤300μg/kg體重的劑量(參考wo2013/064508a1，圖1)測試時(shí)，野生型腎上腺髓質(zhì)素(bachem,h-2932)在該試驗(yàn)中誘導(dǎo)血壓降低，持續(xù)時(shí)間≤4小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)以≤200μg/kg體重(參考肽組分)的劑量誘導(dǎo)血壓降低長達(dá)8小時(shí)。a.實(shí)施例腎上腺髓質(zhì)素-類似物縮寫aa氨基酸acn乙腈acoh乙酸adm腎上腺髓質(zhì)素(人)all烯丙基alloc烯丙基氧基羰基approx.近似boc叔丁基氧基羰基c16→u21/u16→c21胱硫醚dab2,4-二氨基丁酸dcm二氯甲烷dden-γ-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環(huán)己-1-亞基)乙基ddtc二乙基二硫代氨基甲酸鈉dicn,n′-二異丙基碳二亞胺dipean,n-二異丙基二乙胺dmfn,n-二甲基甲酰胺dprn-β-4-甲基三苯甲基-l-二氨基丙酸edt乙烷-1,2-二硫醇eq.當(dāng)量esi電噴霧電離(以ms)fmocn-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基hcl鹽酸hobt1-羥基苯并三唑hplc高壓、高效液相色譜ivdden-γ-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環(huán)己-1-亞基)-3-甲基丁基maldi基質(zhì)輔助激光解吸/電離(以ms)mmt甲氧基三苯甲基ms質(zhì)譜mtt甲基三苯甲基nacl氯化鈉naoh氫氧化鈉n-men-甲基nmmn-甲基嗎啉nmpn-甲基-2-吡咯烷酮opp2-苯基異丙基oxyma2-氰基-2-(羥基亞氨基)乙酸乙酯pam棕櫚酸pbf2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺?；鵵p反相(在hplc中)ta硫代苯甲醚tbsttris緩沖鹽水/tween?20tbu叔丁基tfa三氟乙酸t(yī)is三異丙基甲硅烷tpp-pd四(三苯基膦)鈀(0)trt三苯甲基u16→u212,7-二氨基辛二酸v/v體積/體積。氨基酸和肽序列的命名法根據(jù)：internationalunionofpureandappliedchemistryandinternationalunionofbiochemistry:nomenclatureandsymbolismforaminoacidsandpeptides(recommendations1983).在：pure&appl.chem.56,第5卷,1984,第595–624頁。慣用名符號單字母符號丙氨酸alaa精氨酸argr天冬酰胺asnn天冬氨酸aspd半胱氨酸cysc谷氨酸glue谷氨酰胺glnq甘氨酸glyg組氨酸hish異亮氨酸ilei亮氨酸leul賴氨酸lysk甲硫氨酸metm苯丙氨酸phef脯氨酸prop絲氨酸sers蘇氨酸t(yī)hrt色氨酸t(yī)rpw酪氨酸t(yī)yry纈氨酸valv方法一般信息：所有反應(yīng)和程序均在室溫下進(jìn)行。在每次偶聯(lián)和脫保護(hù)步驟后，用溶劑洗滌樹脂以除去過量的試劑。肽合成的一般方法：用自動肽合成儀(syroi,multisyntech)在novasyn?tgrr樹脂(novabiochem)上逐步合成adm類似物。反應(yīng)容器裝有15μmolnovasyn?tgrr樹脂。以8倍摩爾過量(120μmol)添加各氨基酸和試劑oxyma和dic。如果沒有另外指明，氨基酸是n-α-fmoc保護(hù)的；下示保護(hù)基用于側(cè)鏈官能團(tuán)。所有反應(yīng)均在dmf中進(jìn)行。每個(gè)偶聯(lián)步驟進(jìn)行兩次，反應(yīng)時(shí)間為40分鐘。在每個(gè)偶聯(lián)步驟后，使用40％哌啶/dmf(v/v)3分鐘和20％哌啶/dmf(v/v)10分鐘來實(shí)現(xiàn)fmoc保護(hù)基的切割。內(nèi)酰胺橋聯(lián)的腎上腺髓質(zhì)素-類似物實(shí)施例1和2合成：使用上述一般方法合成實(shí)施例1和2。偶聯(lián)序列如下：在自動化合成序列adm(15-52)后，對于實(shí)施例1，氨基酸fmoc-glu(opp)(aa16)和fmoc-gly-oh(aa15)以及n-末端氨基酸boc-gly-oh(對于實(shí)施例1和2)與5倍摩爾過量的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。通過用由tfa/tis/dcm(1:5:94,v/v/v)組成的切割混合物處理樹脂(20x2min)來實(shí)現(xiàn)opp和mmt保護(hù)基的除去。隨后，用5％dipea/dmf洗滌(2x5min)樹脂。經(jīng)由在aa16和aa21的側(cè)鏈之間形成酰胺鍵來引入內(nèi)酰胺橋。使用10倍過量(150μmol)的hobt和dic在作為溶劑的dmf中進(jìn)行反應(yīng)近似24小時(shí)。用tfa/tis/h2o(90:3.5:3.5,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。粗肽的純化使用c18柱(phenomenexjupiter10uproteo90?:250mm×21.2mm,10μm,90?)上的制備型rp-hplc進(jìn)行。應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為10ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由分析型rp-hplc、maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：1:[g14,(e16,k21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,23s)-23-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,20,24-六氧代-1,4,7,10,13,19-六氮雜環(huán)二十四烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c195h306n58o58精確質(zhì)量：4388.278da分子量：4390.94g/mol。實(shí)施例1以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為6.0mg(理論值的9.0％)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例1。rt=30.4min，純度≥90％。此外，使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)，應(yīng)用60分鐘內(nèi)10％至100％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=21.7min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1098.5[m+4h]4+,879.1[m+5h]5+,732.8[m+6h]6+,628.4[m+7h]7+,550.1[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4389.4[m+h]+,2195.1[m+2h]2+。實(shí)施例：2:[g14,(k16,e21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,23s)-23-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,17,24-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十四烷-14-羰基)-l-蘇氨酰基-adm(22-52)化學(xué)式：c195h306n58o58精確質(zhì)量：4388.278da分子量：4390.94g/mol。實(shí)施例2以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為3.8mg(理論值的5.8％)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；0.6ml/min的流速)分析實(shí)施例2。rt=30.1min，純度≥90％。此外，使用kinetex?5μmxb-c18柱(phenomenex,250x4.6mm,5μm,100?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60%洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=1.25ml/min；λ=220nm)。rt=23.0min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1098.5[m+4h]4+,879.1[m+5h]5+,732.8[m+6h]6+,628.4[m+7h]7+,547.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4389.4[m+h]+,2195.0[m+2h]2+,1464.0[m+3h]3+。內(nèi)酰胺橋聯(lián)的腎上腺髓質(zhì)素-類似物實(shí)施例3-11、19-22和26合成：使用如一般方法中所述的序列adm(22-52)的自動化肽合成來進(jìn)行實(shí)施例3-8、10、11和19-22的合成。隨后，手動并入位置21至14。以如一般方法中所述的自動化方式合成序列實(shí)施例9的[g14,orn16(ivdde),d21(opp)]adm(14-52)和實(shí)施例26的[g14,d16(opp),dpr21(mtt)]adm(14-52)。所有化合物的n-末端用fmoc保護(hù)，除了實(shí)施例9和26，其中并入bocgly-oh作為末端氨基酸。adm(22-52)的偶聯(lián)序列如下：化合物9和26的偶聯(lián)序列如下：使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)化合物3-8、10、11和19-22的氨基酸21(參見下表)，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次10分鐘來實(shí)現(xiàn)隨后的fmoc-脫保護(hù)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)化合物3-8、10、11和19-22的以下四個(gè)氨基酸，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次10分鐘來實(shí)現(xiàn)前三次偶聯(lián)后的fmoc-脫保護(hù)。偶聯(lián)序列如下：偶聯(lián)循環(huán)實(shí)施例3-8、10和11人adm的aa1.fmoc-thr(tbu)-oh202.fmoc-gly-oh193.fmoc-phe-oh184.fmoc-arg(pbf)-oh17使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)實(shí)施例3-8、10、11和19-22的氨基酸16(參見下表)，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次10分鐘來實(shí)現(xiàn)隨后的fmoc-脫保護(hù)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)化合物3-8、10、11和19-22的以下兩個(gè)氨基酸，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次5分鐘來實(shí)現(xiàn)第一次偶聯(lián)后的fmoc-脫保護(hù)。偶聯(lián)序列如下：偶聯(lián)循環(huán)實(shí)施例3-8、10和11人adm的aa1.fmoc-gly-oh152.boc-gly-oh14為了同時(shí)除去dde/ivdde保護(hù)基，用3％肼一水合物/dmf(v/v)(15x10min,1ml)處理化合物4-6和8-11、19和20的樹脂。應(yīng)用以下步驟來合成化合物3-11、19-22和26。為了同時(shí)除去mmt/opp保護(hù)基，用tfa/tis/dcm(2:5:93,v/v/v)(15x2min,1ml)處理樹脂。隨后，用2％dipea/dmf(v/v)洗滌樹脂兩次10分鐘(1ml)。使用6倍過量的hobt和dic在作為溶劑的dmf中進(jìn)行環(huán)化近似24小時(shí)。用tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)近似3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚/正己烷(4/1;v/v)洗滌，隨后凍干。使用制備型rp-hplc在c18柱(xbridgebeh130prepc1810μmobd:250mm×19mm,10μm)上進(jìn)行化合物3-11、19和20的純化。應(yīng)用30分鐘內(nèi)10％至45％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為20ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。使用制備型rp-hplc在c18-柱(kinetex?5μmxb-c18100?:250mm×21.2mm,5μm)上進(jìn)行化合物21、22和26的純化。應(yīng)用30分鐘內(nèi)10％至45％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為20ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：3:[g14,(dpr16,d21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,19s)-19-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,16,20-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c191h298n58o58精確質(zhì)量：4332.215da分子量：4334.83g/mol。實(shí)施例3以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.9mg(理論值的2.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例3。rt=27.8min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=31.3min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1084.5[m+4h]4+,867.8[m+5h]5+,723.5[m+6h]6+,620.3[m+7h]7+,542.8[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4333.2[m+h]+,2167.1[m+2h]2+。實(shí)施例：4:[g14,(d16,dab21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,20s)-20-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,18,21-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十一烷-14-羰基)-l-蘇氨酰基-adm(22-52)化學(xué)式：c192h300n58o58精確質(zhì)量：4346.231da分子量：4348.86g/mol。實(shí)施例4以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.8mg(理論值的2.6%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例4。rt=26.3min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=29.5min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1088.3[m+4h]4+,870.7[m+5h]5+,725.9[m+6h]6+,622.2[m+7h]7+,544.5[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4347.2[m+h]+,2174.1[m+2h]2+。實(shí)施例：5:[g14,(dab16,d21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,20s)-20-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,16,21-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十一烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c192h300n58o58精確質(zhì)量：4346.231da分子量：4348.86g/mol。實(shí)施例5以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.4mg(理論值的1.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例5。rt=26.1min，純度≥90％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=29.1min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1088.1[m+4h]4+,870.7[m+5h]5+,725.8[m+6h]6+,622.2[m+7h]7+,544.5[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4347.2[m+h]+,2174.1[m+2h]2+。實(shí)施例：6:[g14,(e16,dpr21)lac]adm(14-52)((3s,6s,12s,15s,18s)-18-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-12-芐基-15-(3-胍基丙基)-6-((r)-1-羥基乙基)-5,8,11,14,17,21-六氧代-1,4,7,10,13,16-六氮雜環(huán)二十一烷-3-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c192h300n58o58精確質(zhì)量：4346.231da分子量：4348.86g/mol。實(shí)施例6以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.2mg(理論值的1.7%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例6。rt=22.9min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.6min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1088.3[m+4h]4+,870.6[m+5h]5+,725.7[m+6h]6+,622.2[m+7h]7+,544.5[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4347.2[m+h]+,2174.1[m+2h]2+。實(shí)施例：7:[g14,(dpr16,e21)lac]adm(14-52)((3s,9s,12s,15s,21s)-15-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-9-芐基-12-(3-胍基丙基)-3-((r)-1-羥基乙基)-2,5,8,11,14,18-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十一烷-21-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c192h300n58o58精確質(zhì)量：4346.231da分子量：4348.86g/mol。實(shí)施例7以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.8mg(理論值的2.7%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例7。rt=23.4min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=23.2min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1088.6[m+4h]4+,870.6[m+5h]5+,725.7[m+6h]6+,622.2[m+7h]7+,544.5[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4347.2[m+h]+,2174.0[m+2h]2+。實(shí)施例：8:[g14,(d16,orn21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,21s)-21-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,19,22-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十二烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c193h302n58o58精確質(zhì)量：4360.247da分子量：4362.89g/mol。實(shí)施例8以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.4mg(理論值的3.7%，純度≥95%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例8。rt=23.1min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.8min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1091.5[m+4h]4+,873.8[m+5h]5+,728.1[m+6h]6+,624.3[m+7h]7+,546.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4361.3[m+h]+,2181.1[m+2h]2+。實(shí)施例：9:[g14,(orn16,d21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,21s)-21-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,16,22-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十二烷-14-羰基)-l-蘇氨酰基-adm(22-52)化學(xué)式：c193h302n58o58精確質(zhì)量：4360.247da分子量：4362.89g/mol。實(shí)施例9以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為7.9mg(理論值的12.1%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例9。rt=23.1min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.9min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1091.7[m+4h]4+,873.5[m+5h]5+,728.1[m+6h]6+,624.3[m+7h]7+,546.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4361.2[m+h]+,2181.0[m+2h]2+。實(shí)施例：10:[g14,(e16,dab21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,21s)-21-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,18,22-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十二烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c193h302n58o58精確質(zhì)量：4360.247u分子量：4362.89g/mol。實(shí)施例10以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.9mg(理論值的3.0%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例10。rt=22.5min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.3min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1091.7[m+4h]4+,873.6[m+5h]5+,728.1[m+6h]6+,624.3[m+7h]7+,546.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4361.2[m+h]+,2181.0[m+2h]2+。實(shí)施例：11:[g14,(dab16,e21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,21s)-21-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,17,22-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十二烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c193h302n58o58精確質(zhì)量：4360.247da分子量：4362.89g/mol。實(shí)施例11以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.5mg(理論值的2.3%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例11。rt=22.8min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.6min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1091.9[m+4h]4+,873.5[m+5h]5+,728.1[m+6h]6+,624.3[m+7h]7+,546.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4361.2[m+h]+,2181.0[m+2h]2+。實(shí)施例：19:[g14,(e16,orn21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,22s)-22-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,19,23-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十三烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c194h304n58o58精確質(zhì)量：4374.26da分子量：4376.91g/mol。實(shí)施例19以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.6mg(理論值的2.4%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例19。rt=23.2min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=23.2min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1095.4[m+4h]4+,876.4[m+5h]5+,730.5[m+6h]6+,626.3[m+7h]7+,548.1[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4375.3[m+h]+,2188.0[m+2h]2+。實(shí)施例：20:[g14,(orn16,e21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,22s)-22-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,17,23-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十三烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c194h304n58o58精確質(zhì)量：4374.26da分子量：4376.91g/mol。實(shí)施例20以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.7mg(理論值的2.6%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例20。rt=22.8min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=22.9min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1095.4[m+4h]4+,876.3[m+5h]5+,730.5[m+6h]6+,626.3[m+7h]7+,548.1[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4375.2[m+h]+,2188.0[m+2h]2+。實(shí)施例：21:[g14,(k16,d21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,22s)-22-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,16,23-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十三烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c194h304n58o58精確質(zhì)量：4374.26da分子量：4376.91g/mol。實(shí)施例21以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為0.3mg(理論值的0.5%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例21。rt=26.1min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=25.9min,purity≥95%觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1095.5[m+4h]4+,876.3[m+5h]5+,730.5[m+6h]6+,626.3[m+7h]7+,548.1[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4375.2[m+h]+,2188.1[m+2h]2+,1459.1[m+3h]3+。實(shí)施例：22:[g14,(d16,k21)lac]adm(14-52)((3s,9s,12s,15s,23s)-15-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-9-芐基-12-(3-胍基丙基)-3-((r)-1-羥基乙基)-2,5,8,11,14,17-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十三烷-23-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c194h304n58o58精確質(zhì)量：4374.26da分子量：4376.91g/mol。實(shí)施例22以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為0.8mg(理論值的1.2%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例22。rt=25.9min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=25.8min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1095.0[m+4h]4+,876.3[m+5h]5+,730.5[m+6h]6+,626.3[m+7h]7+,548.1[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4375.2[m+h]+,2188.1[m+2h]2+,1459.1[m+3h]3+。實(shí)施例：26:[g14,(d16,dpr21)lac]adm(14-52)((3s,6s,12s,15s,18s)-18-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-12-芐基-15-(3-胍基丙基)-6-((r)-1-羥基乙基)-5,8,11,14,17,20-六氧代-1,4,7,10,13,16-六氮雜環(huán)二十烷-3-羰基)-l-蘇氨酰基-adm(22-52)化學(xué)式：c191h298n58o58精確質(zhì)量：4332.215da分子量：4334.83g/mol。實(shí)施例26以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為3.8mg(理論值的5.8%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例26。rt=26.1min，純度≥90％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=26.1min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1084.5[m+4h]4+,867.9[m+5h]5+,723.5[m+6h]6+,620.3[m+7h]7+,542.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4333.2[m+h]+,2167.1[m+2h]2+。棕櫚?；膬?nèi)酰胺橋聯(lián)的腎上腺髓質(zhì)素-類似物12、13和18合成：使用上述一般方法合成實(shí)施例12、13和18。偶聯(lián)序列如下：在自動化合成序列adm(15-52)后，對于實(shí)施例12和13，n-末端氨基酸boc-lys(fmoc)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。對于實(shí)施例18，使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)fmoc-glu(opp)-oh(aa21)，持續(xù)近似24小時(shí)。在fmoc-脫保護(hù)后，使用上述一般方法自動延長肽序列。偶聯(lián)序列如下：33.thr(tbu)2034.gly1935.phe1836.arg(pbf)17對于實(shí)施例18，其后使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)fmoc-dpr(mtt)-oh(aa16)，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用由tfa/tis/dcm(1:5:94,v/v/v)(對于實(shí)施例12和13)和tfa/tis/dcm(2:5:93,v/v/v)(對于實(shí)施例18)組成的切割混合物處理樹脂(20x2min)來實(shí)現(xiàn)opp、mmt和mtt保護(hù)基的除去。隨后，用5％dipea/dmf(對于實(shí)施例12和13)和2％dipea/dmf(實(shí)施例16)洗滌樹脂(2x5min)。經(jīng)由在aa16和aa21的側(cè)鏈之間形成酰胺鍵來引入內(nèi)酰胺橋。使用10倍過量(150μmol)(對于實(shí)施例12和13)和6倍過量(90μmol)(對于實(shí)施例18)的hobt和dic在作為溶劑的dmf中在室溫下進(jìn)行反應(yīng)近似24小時(shí)。對于實(shí)施例18，氨基酸fmoc-gly-oh(aa15)和boc-lys(fmoc)-oh(aa14)與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。隨后，使用30％哌啶/dmf(v/v)從n-末端賴氨酸中除去fmoc兩次10分鐘。使用5倍過量(75μmol)的棕櫚酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中實(shí)現(xiàn)游離賴氨酸側(cè)鏈的棕櫚?；?，持續(xù)近似24小時(shí)。用tfa/tis/h2o(90:5:5,v/v/v)(對于實(shí)施例12和13)和tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)(對于實(shí)施例18)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。粗肽的純化使用c18柱(phenomenexjupiter10uproteo90?:250mm×21.2mm,10μm,90?)上的制備型rp-hplc進(jìn)行。應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(對于實(shí)施例12)以及50分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(對于實(shí)施例13)(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為10ml/min(對于實(shí)施例12)和15ml/min(對于實(shí)施例13)，在λ=220nm測量uv檢測。使用制備型rp-hplc在c18柱(kinetex?5μmxb-c18100?:250mm×21.2mm,5μm)上進(jìn)行實(shí)施例18的純化。應(yīng)用50分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為20ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：12:[k14(pam),(e16,k21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,23s)-23-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,20,24-六氧代-1,4,7,10,13,19-六氮雜環(huán)二十四烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c215h345n59o59精確質(zhì)量：4697.58da分子量：4700.47g/mol。實(shí)施例12以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為5.3mg(理論值的7.6%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)20%至70%洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例12。rt=39.7min，純度≥95％。此外，使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)，應(yīng)用60分鐘內(nèi)10％至100％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=30.7min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1175.9[m+4h]4+,941.0[m+5h]5+,784.4[m+6h]6+,672.6[m+7h]7+,588.8[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4698.8[m+h]+,2349.7[m+2h]2+。實(shí)施例：13:[k14(pam),(k16,e21)lac]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,23s)-23-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,17,24-六氧代-1,4,7,10,13,18-六氮雜環(huán)二十四烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c215h345n59o59精確質(zhì)量：4697.58da分子量：4700.47g/mol。實(shí)施例13以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為3.5mg(理論值的5.0%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例13。rt=41.2min，純度≥95％。此外，使用60分鐘內(nèi)10％至100％洗脫液b/a的線性梯度。(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=30.8min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1175.9[m+4h]4+,941.0[m+5h]5+,784.4[m+6h]6+,672.6[m+7h]7+,588.8[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4698.7[m+h]+,2349.75[m+2h]2+。實(shí)施例：18:[k14(pam),(dpr16,e21)lac]adm(14-52)((3s,9s,12s,15s,21s)-15-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-9-芐基-12-(3-胍基丙基)-3-((r)-1-羥基乙基)-2,5,8,11,14,18-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十一烷-21-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c212h339n59o59精確質(zhì)量：4655.53da分子量：4658.40g/mol。實(shí)施例18以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.4mg(理論值的3.4%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例18。rt=34.1min，純度≥95％。此外，使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)，應(yīng)用50分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=29.4min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1165.5[m+4h]4+,932.7[m+5h]5+,777.3[m+6h]6+,666.5[m+7h]7+,583.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4656.6[m+h]+,2328.7[m+2h]2+。具有n-甲基化異亮氨酸47的腎上腺髓質(zhì)素-類似物14合成：使用上述一般方法合成序列adm(48-52)。偶聯(lián)序列如下：自動化合成序列adm(48-52)后，fmoc保護(hù)的n-甲基化異亮氨酸與5倍摩爾過量的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。除去fmoc保護(hù)基后，fmoc-lys(boc)-oh與5倍摩爾過量的氨基酸和10倍摩爾(150μmol)過量的hobt和dic在dmf/dcm/nmp(1:1:1,v/v/v)中手動偶聯(lián)。反應(yīng)在50℃下進(jìn)行24小時(shí)，同時(shí)以1300rpm振蕩(thermomixer,eppendorf)。隨后，使用上述一般方法進(jìn)行肽鏈的伸長。偶聯(lián)序列如下：延長后，將n-末端氨基酸boc-lys(fmoc)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)近似24小時(shí)。通過用由tfa/tis/dcm(2:5:93,v/v/v)組成的切割混合物處理樹脂(15x2min)來實(shí)現(xiàn)opp和mmt保護(hù)基的除去。隨后，用5％dipea/dmf洗滌(2x5min)樹脂。經(jīng)由在aa16和aa21的側(cè)鏈之間形成酰胺鍵來引入內(nèi)酰胺橋。使用10倍過量(150μmol)的hobt和dic在作為溶劑的dmf中進(jìn)行反應(yīng)近似24小時(shí)。隨后，使用30％哌啶/dmf(v/v)從n-末端賴氨酸中除去fmoc兩次10分鐘。使用5倍過量(75μmol)的棕櫚酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中實(shí)現(xiàn)游離賴氨酸側(cè)鏈的棕櫚酰化，持續(xù)近似24小時(shí)。用tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)近似3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。粗肽的純化使用c18柱(phenomenexjupiter10uproteo90?:250mm×21.2mm,10μm,90?)上的制備型rp-hplc進(jìn)行。應(yīng)用50分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為10ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：14:[k14(pam),(e16,k21)lac,n-me-i47]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,23s)-23-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,20,24-六氧代-1,4,7,10,13,19-六氮雜環(huán)二十四烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?[n-me-i47]adm(22-52)化學(xué)式：c216h347n59o59精確質(zhì)量：4711.60da分子量：4714.49g/mol。實(shí)施例14以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為0.6mg(理論值的0.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例14。rt=34.3min，純度≥90％。此外，使用vydac218tpc18柱(gracevydac,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=30.9min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1179.6[m+4h]4+,943.8[m+5h]5+,786.8[m+6h]6+,674.5[m+7h]7+,590.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4712.74[m+h]+,2356.7[m+2h]2+。具有n-甲基化賴氨酸46的腎上腺髓質(zhì)素-類似物27合成：使用上述一般方法合成序列adm(47-52)。偶聯(lián)序列如下：偶聯(lián)循環(huán)實(shí)施例27人adm的aa1.tyr(tbu)522.gly513.gln(trt)504.pro495.ser(tbu)486.ile(tbu)47自動化合成序列adm(47-52)后，fmoc保護(hù)的n-甲基化賴氨酸與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。除去fmoc保護(hù)基后，fmoc-ser(tbu)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的氨基酸和10倍摩爾過量(150μmol)過量的hobt和dic在dmf/dcm/nmp(1:1:1,v/v/v)中手動偶聯(lián)。反應(yīng)在50℃下進(jìn)行24小時(shí)，同時(shí)以1300rpm振蕩(thermomixer,eppendorf)。隨后，使用上述一般方法進(jìn)行肽鏈的伸長。偶聯(lián)序列如下：fmoc-glu(opp)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。使用上述一般方法自動延長肽序列。偶聯(lián)序列如下：偶聯(lián)循環(huán)實(shí)施例27人adm的aa33.thr(tbu)2034.gly1935.phe1836.arg(pbf)17fmoc-dpr(mtt)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic手動偶聯(lián)。反應(yīng)在作為溶劑的dmf中進(jìn)行24小時(shí)。通過用由tfa/tis/dcm(2:5:93,v/v/v)組成的切割混合物處理樹脂(12x2min)來實(shí)現(xiàn)opp和mtt保護(hù)基的除去。隨后，用2％dipea/dmf洗滌(2x5min)樹脂。經(jīng)由在aa16和aa21的側(cè)鏈之間形成酰胺鍵來引入內(nèi)酰胺橋。使用6倍過量(90μmol)的hobt和dic在作為溶劑的dmf中進(jìn)行反應(yīng)近似24小時(shí)。隨后，將fmoc-gly-oh和boc-lys(fmoc)-oh與5倍摩爾過量(75μmol)的hobt和dic在dmf中手動偶聯(lián)近似24小時(shí)。在每個(gè)偶聯(lián)步驟前和完成合成后用30%哌啶/dmf(v/v)除去fmoc以產(chǎn)生游離的賴氨酸側(cè)鏈。使用5倍過量(75μmol)的棕櫚酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中實(shí)現(xiàn)游離賴氨酸側(cè)鏈的棕櫚?；?，持續(xù)近似24小時(shí)。用tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)近似3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。使用制備型rp-hplc在c18-柱(xbridgebeh130prepc1810μmobd:250mm×19mm,10μm)上進(jìn)行粗肽的純化。應(yīng)用60分鐘內(nèi)10％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為20ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：27:[k14(pam),(dpr16,e21)lac,n-me-k46]adm(14-52)((3s,9s,12s,15s,21s)-15-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-9-芐基-12-(3-胍基丙基)-3-((r)-1-羥基乙基)-2,5,8,11,14,18-六氧代-1,4,7,10,13,17-六氮雜環(huán)二十一烷-21-羰基)-l-蘇氨?；?[n-me-k46]adm(22-52)化學(xué)式：c213h341n59o59精確質(zhì)量：4669.55da分子量：4672.43g/mol。實(shí)施例27以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為0.6mg(理論值的0.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例27。rt=34.5min，純度≥95％。此外，使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)，應(yīng)用60分鐘內(nèi)10％至100％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=29.6min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1168.7[m+4h]4+,935.5[m+5h]5+,779.6[m+6h]6+,668.5[m+7h]7+,584.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4670.5[m+h]+,2336.6[m+2h]2+。具有二硫鍵-模擬物的腎上腺髓質(zhì)素-類似物15-17合成：使用如一般方法中所述的序列adm(22-52)的自動化肽合成來進(jìn)行化合物15-17的合成。隨后，手動并入位置21至14。已經(jīng)對于具有非蛋白性氨基酸的內(nèi)酰胺橋聯(lián)的類似物3-11顯示了adm(22-52)的偶聯(lián)序列。以下顯示的二硫鍵模擬物用作二硫鍵模擬物。它們在替代adm-c21和nalloc的位置的n末端被fmoc保護(hù)，在替代adm-c16的位置的n-和c-末端被oall-保護(hù)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中偶聯(lián)模擬物，持續(xù)近似24小時(shí)。使用20%哌啶/dmf(v/v)進(jìn)行fmoc-切割兩次5分鐘。a:fmoc-[c16→u21](nalloc,oall)-oh;n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-s-[(2r)-3-氧代-3-(丙-2-烯-1-基氧基)-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]氨基}丙基]-l-高半胱氨酸所述化合物根據(jù)以下文獻(xiàn)程序制備：p.j.knerr,a.tzekou,d.ricklin,h.qu,h.chen,w.a.vanderdonk,j.d.lambris,acschem.biol.2011,6,753-760和h.-k.cui,y.guo,y.he,f.-l.wang,h.-n.chang,y.-j.wang,f.-m.wu,c.-l.tian,l.liu,angew.chem.int.ed.2013,52,9558–9562。b:fmoc-[u16→c21](nalloc,oall)-oh;n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-3-{[(3s)-4-氧代-4-(丙-2-烯-1-基氧基)-3-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]氨基}丁基]硫烷基}-l-丙氨酸所述化合物根據(jù)以下文獻(xiàn)程序制備：p.j.knerr,a.tzekou,d.ricklin,h.qu,h.chen,w.a.vanderdonk,j.d.lambris,acschem.biol.2011,6,753-760和h.-k.cui,y.guo,y.he,f.-l.wang,h.-n.chang,y.-j.wang,f.-m.wu,c.-l.tian,l.liu,angew.chem.int.ed.2013,52,9558–9562。c:fmoc-[u16→u21](nalloc,oall)-oh;(2s,7s)-2-{[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-8-氧代-8-(丙-2-烯-1-基氧基)-7-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]氨基}辛酸所述化合物根據(jù)以下文獻(xiàn)程序制備：h.-k.cui,y.guo,y.he,f.-l.wang,h.-n.chang,y.-j.wang,f.-m.wu,c.-l.tian,l.liu,angew.chem.int.ed.2013,52,9558–9562。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)化合物15-17的以下四個(gè)氨基酸，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次5分鐘來實(shí)現(xiàn)前三次偶聯(lián)后的fmoc-脫保護(hù)。偶聯(lián)序列如下：在40℃真空下干燥樹脂后，使用1.5倍摩爾過量的tpp-pd在chcl3/acoh/nmm(37:2:1,v/v/v,1.5ml)中除去烯丙基和alloc保護(hù)基。將混合物在氬氣氣氛下攪拌2小時(shí)。將樹脂用0.5%dipea/dmf和0.5%ddtc/dmf(w/w)洗滌兩次，每次10分鐘。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次5分鐘來實(shí)現(xiàn)fmoc-脫保護(hù)。使用5倍摩爾過量的hobt和dic且使用dmf作為溶劑進(jìn)行內(nèi)酰胺化近似24小時(shí)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)化合物15-17的以下兩個(gè)氨基酸，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用20％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次5分鐘來實(shí)現(xiàn)第一次偶聯(lián)后的fmoc-脫保護(hù)。偶聯(lián)序列如下：用tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)近似3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。使用制備型rp-hplc在c18-柱(xbridgebeh130prepc1810μmobd:250mm×19mm,10μm)上進(jìn)行粗肽的純化。應(yīng)用50分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為15ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：15:[g14,c16→u21]adm(14-52)((4s,7s,13s,16s,19r)-19-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-13-芐基-16-(3-胍基丙基)-7-((r)-1-羥基乙基)-6,9,12,15,18-五氧代-1-硫雜-5,8,11,14,17-五氮雜環(huán)二十烷-4-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c191h299n57o57s精確質(zhì)量：4335.197da分子量：4337.90g/mol。實(shí)施例15以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.6mg(理論值的2.5%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例15。rt=25.3min，純度≥90％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=26.0min，純度≥90％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1085.4[m+4h]4+,868.5[m+5h]5+,723.9[m+6h]6+,602.7[m+7h]7+,543.3[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4336.2[m+h]+,2168.6[m+2h]2+。實(shí)施例：16:[g14,u16→c21]adm(14-52)((3r,6s,12s,15s,18s)-18-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-12-芐基-15-(3-胍基丙基)-6-((r)-1-羥基乙基)-5,8,11,14,17-五氧代-1-硫雜-4,7,10,13,16-五氮雜環(huán)二十烷-3-羰基)-l-蘇氨酰基-adm(22-52)化學(xué)式：c191h299n57o57s精確質(zhì)量：4335.197da分子量：4337.90g/mol。實(shí)施例16以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.2mg(理論值的3.4%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用phenomenexjupiter4uproteo90?(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度和0.6ml/min的流速分析實(shí)施例16。rt=25.2min。此外，使用phenomenexjupiter5uproteo300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度和0.6ml/min的流速。rt=29.8min。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1085.6[m+4h]4+,868.5[m+5h]5+,723.9[m+6h]6+,602.7[m+7h]7+,543.2[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4336.3[m+h]+,2168.6[m+2h]2+。實(shí)施例：17:[g14,u16→u21]adm(14-52)((2s,5s,11s,14s,19s)-19-(2-(2-氨基乙酰胺基)乙酰胺基)-5-芐基-2-(3-胍基丙基)-11-((r)-1-羥基乙基)-3,6,9,12,20-五氧代-1,4,7,10,13-五氮雜環(huán)二十烷-14-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c192h301n57o57精確質(zhì)量：4317.241da分子量：4319.86g/mol。實(shí)施例17以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.6mg(理論值的4.0%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度分析實(shí)施例17。rt=23.2min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=23.4min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1080.9[m+4h]4+,864.9[m+5h]5+,721.0[m+6h]6+,618.2[m+7h]7+,540.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4318.4[m+h]+,2159.7[m+2h]2+。具有二硫鍵-模擬物的棕櫚?；哪I上腺髓質(zhì)素-類似物23-25合成：使用如一般方法中所述的序列adm(22-52)的自動化肽合成來進(jìn)行實(shí)施例23-25的合成。隨后，手動并入位置21至14和棕櫚?；?。已經(jīng)對于內(nèi)酰胺橋聯(lián)的類似物3-11、19-22和26顯示了adm(22-52)的偶聯(lián)序列?；衔颽、b和c(上面顯示)用作二硫鍵模擬物。它們在替代adm-c21和nalloc的位置的n末端被fmoc保護(hù)，在替代adm-c16的位置的n-和c-末端被oall-保護(hù)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中偶聯(lián)模擬物，持續(xù)近似24小時(shí)。使用20%哌啶/dmf(v/v)進(jìn)行fmoc-切割兩次5分鐘。隨后，使用上述一般方法進(jìn)行氨基酸17-20的伸長。偶聯(lián)序列如下：偶聯(lián)循環(huán)實(shí)施例23-25人adm的aa1.fmoc-thr(tbu)-oh202.fmoc-gly-oh193.fmoc-phe-oh184.fmoc-arg(pbf)-oh17在40℃真空下干燥樹脂后，使用1.5倍摩爾過量的tpp-pd在chcl3/acoh/nmm(37:2:1,v/v/v,1.5ml)中除去烯丙基和alloc保護(hù)基。將混合物在氬氣氣氛下攪拌2小時(shí)。將樹脂用0.5%dipea/dmf(v/v)、0.5%ddtc/dmf(w/w)洗滌兩次，每次10分鐘。通過用30％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次10分鐘來實(shí)現(xiàn)fmoc-脫保護(hù)。使用15倍摩爾過量的hobt和10倍摩爾過量的dic在作為溶劑的dmf中進(jìn)行內(nèi)酰胺化6-8小時(shí)。使用5倍摩爾過量的氨基酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中手動偶聯(lián)實(shí)施例23-25的以下兩個(gè)氨基酸，持續(xù)近似24小時(shí)。通過用30％哌啶/dmf(v/v)處理樹脂兩次10分鐘來實(shí)現(xiàn)第一次偶聯(lián)后的fmoc-脫保護(hù)。偶聯(lián)序列如下：隨后，使用30％哌啶/dmf(v/v)從n-末端氨基酸除去fmoc兩次10分鐘。使用5倍過量(75μmol)的棕櫚酸、hobt和dic在作為溶劑的dmf中實(shí)現(xiàn)n-末端(實(shí)施例23和24)或游離賴氨酸側(cè)鏈(實(shí)施例25)的棕櫚?；掷m(xù)近似24小時(shí)。用tfa/ta/edt(90:7:3,v/v/v)實(shí)現(xiàn)從樹脂切割肽和同時(shí)的側(cè)鏈脫保護(hù)，持續(xù)近似3小時(shí)。將肽沉淀并用冰冷的乙醚洗滌，隨后凍干。使用制備型rp-hplc在c18-柱(kinetex?5μmxb-c18100?:250mm×21.2mm,5μm)上進(jìn)行粗肽的純化。應(yīng)用60分鐘內(nèi)20％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08％tfa/acn)。流速為20ml/min，在λ=220nm測量uv檢測。分析：經(jīng)由maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。使用分析型rp-hplc分析純度。實(shí)施例：23:pam[g14,c16→u21]adm(14-52)((4s,7s,13s,16s,19r)-13-芐基-16-(3-胍基丙基)-7-(羥基甲基)-6,9,12,15,18-五氧代-19-(2-(2-棕櫚酰胺基乙酰胺基)乙酰胺基)-1-硫雜-5,8,11,14,17-五氮雜環(huán)二十烷-4-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c207h329n57o58s精確質(zhì)量：4573.43da分子量：4576.31g/mol。實(shí)施例23以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.0mg(理論值的2.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例23。rt=34.1min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)10％至60％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=34.1min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=916.4[m+5h]5+,763.7[m+6h]6+,654.8[m+7h]7+;maldi-tof:m/z=4574.9[m+h]+,2287.1[m+2h]2+。實(shí)施例：24:pam[k14,c16→u21]adm(14-52)((4s,7s,13s,16s,19r)-19-(2-(6-氨基-2-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-13-芐基-16-(3-胍基丙基)-7-((r)-1-羥基乙基)-6,9,12,15,18-五氧代-1-硫雜-5,8,11,14,17-五氮雜環(huán)二十烷-4-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c211h338n58o58s精確質(zhì)量：4644.50da分子量：4647.43g/mol。實(shí)施例24以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為1.3mg(理論值的1.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例24。rt=23.7min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=31.0min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1163.0[m+4h]4+,930.3[m+5h]5+,775.5[m+6h]6+,664.8[m+7h]7+,581.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4645.5[m+h]+,2323.1[m+2h]2+。實(shí)施例：25:[k14(pam),c16→u21]adm(14-52)((4s,7s,13s,16s,19r)-19-(2-((s)-2-氨基-6-棕櫚酰胺基己酰胺基)乙酰胺基)-13-芐基-16-(3-胍基丙基)-7-((r)-1-羥基乙基)-6,9,12,15,18-五氧代-1-硫雜-5,8,11,14,17-五氮雜環(huán)二十烷-4-羰基)-l-蘇氨?；?adm(22-52)化學(xué)式：c211h338n58o58s精確質(zhì)量：4644.50da分子量：4647.43g/mol。實(shí)施例25以15μmol規(guī)模合成。產(chǎn)量為2.0mg(理論值的2.9%)。經(jīng)由分析型rp-hplc使用jupiter?4μmproteo90?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,4μm,90?)應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1%tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)分析實(shí)施例25。rt=24.4min，純度≥95％。此外，使用jupiter?5μmc18300?柱(phenomenex,250mm×4.6mm,5μm,300?)，應(yīng)用40分鐘內(nèi)20％至70％洗脫液b/a的線性梯度(洗脫液a=0.1％tfa/水；洗脫液b=0.08%tfa/acn；流速=0.6ml/min；λ=220nm)。rt=33.5min，純度≥95％。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。esi離子阱：m/z=1162.7[m+4h]4+,930.4[m+5h]5+,775.6[m+6h]6+,664.9[m+7h]7+,581.9[m+8h]8+;maldi-tof:m/z=4645.5[m+h]+,2323.1[m+2h]2+。b.藥理活性的評價(jià)使用以下縮寫：acn乙腈balf支氣管肺泡灌洗液bp動脈血壓cho中國倉鼠卵巢細(xì)胞co心輸出量ec50半最大有效濃度evwli血管外肺水指數(shù)fio2吸入氧分?jǐn)?shù)fitc異硫氰酸熒光素hepes羥乙基-哌嗪乙磺酸hr動脈心率huvec人臍靜脈細(xì)胞ibmx3-異丁基-1-甲基黃嘌呤i.v.靜脈內(nèi)地lps脂多糖lvp左心室壓力oa油酸pao2動脈血中的氧分壓pap肺動脈壓peg聚乙二醇s.c.皮下地tam6-羧基四甲基羅丹明teer跨內(nèi)皮電阻tfa三氟乙酸t(yī)nf腫瘤壞死因子v/v體積/體積可以使用下列試驗(yàn)體系來表明根據(jù)本發(fā)明的化合物治療疾病的適用性：1)測試說明(體外)1a)在重組腎上腺髓質(zhì)素-受體報(bào)告細(xì)胞上的試驗(yàn)借助于攜帶人腎上腺髓質(zhì)素受體的重組中國倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞系定量本發(fā)明的化合物的活性。通過水母發(fā)光蛋白發(fā)光測量配體對受體的活化。已經(jīng)詳細(xì)描述了細(xì)胞系的構(gòu)建和測量程序[wunderf.,rebmanna.,geertsa和kalthofb.,molpharmacol,73,1235–1243(2008)]。簡而言之：細(xì)胞以4000個(gè)細(xì)胞/孔的密度在不透明的384孔微量滴定板上接種并生長24小時(shí)。在除去培養(yǎng)基后，在細(xì)胞培養(yǎng)孵育器中在補(bǔ)充有0.2mm3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(ibmx)的不含ca2+的tyrode溶液(130mm氯化鈉，5mm氯化鉀，20mmhepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)，1mm氯化鎂和4.8mm碳酸氫鈉，ph7.4)中用0.6μg/ml腔腸素負(fù)載細(xì)胞3小時(shí)。在含有0.1%的牛血清白蛋白的不含鈣2+的tyrode溶液中經(jīng)6分鐘添加實(shí)施例。在臨添加鈣2+至3mm的最終濃度前通過使用合適的光度計(jì)開始測量水母發(fā)光蛋白發(fā)光。發(fā)光測量60秒。在一個(gè)典型的實(shí)驗(yàn)中，在1×10-13至3×10-6m的濃度范圍內(nèi)測試化合物。在下表1中給出了實(shí)施方案實(shí)施例的代表性ec50值：表1wtadm的ec50主要在0.5nm至2.5nm的范圍內(nèi)。1b)內(nèi)皮細(xì)胞中的跨細(xì)胞電阻測定在體外滲透測定中在人臍靜脈細(xì)胞(huvec，lonza)中表征根據(jù)本發(fā)明的化合物的活性。通過使用ecis設(shè)備(ecis：electriccell-substrateimpedancesensing；appliedbiophysicsinc;troy,ny)，通過使用已經(jīng)在其上接種細(xì)胞的小的金電極連續(xù)測量在內(nèi)皮單層上的跨內(nèi)皮電阻(teer)的變化。huvec在96孔傳感器電極板(96w1e，ibidigmbh，martinsried)上生長以匯合單層并通過炎性刺激諸如均已經(jīng)證實(shí)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞接觸瓦解(breakdown)和teer降低的凝血酶、tnf-α、il-1β、vegf、組胺和過氧化氫來誘發(fā)高滲透性(hyperpermeability)。凝血酶以0.5u/ml的最終濃度使用。測試化合物在添加凝血酶之前或之后添加。在典型試驗(yàn)中，在1×10-10至1×10-6m濃度范圍內(nèi)測試化合物。根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)防止在>1nmol/l的濃度下劑量依賴地用凝血酶刺激后huvec單層的電阻分解[圖1]。1c)內(nèi)皮細(xì)胞中的體外滲透性測定在另一種內(nèi)皮高滲透性體外模型中，對于調(diào)節(jié)大分子滲透性檢查根據(jù)本發(fā)明的化合物的活性。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(huvecs)生長至纖連蛋白包被的transwell?過濾膜(24孔板，6.5毫米，具有0.4微米聚碳酸酯的膜插入物；costar#3413)上匯合，該過濾膜將上部組織培養(yǎng)室與下部組織培養(yǎng)室分開，內(nèi)皮細(xì)胞在上部室的底部上生長。上部室的介質(zhì)補(bǔ)充有250μg/ml的40kdafitc-右旋糖酐(invitrogen，d1844)。通過添加凝血酶至0.5u/ml的最終濃度來誘導(dǎo)該單層的高滲透性。每30分鐘從下部室中收集介質(zhì)樣品，并在合適的熒光計(jì)中測量作為大分子滲透性經(jīng)時(shí)變化的參數(shù)的相對熒光。凝血酶攻擊誘導(dǎo)幾乎加倍的跨越內(nèi)皮單層的fitc-右旋糖酐轉(zhuǎn)換。在典型試驗(yàn)中，在1×10-10至1×10-6m濃度范圍內(nèi)測試化合物。根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)降低在≥0.3nmol/l的濃度下劑量依賴地用凝血酶刺激后40kdafitc-右旋糖酐的huvec單層的滲透性[圖2]。1d)camp測定縮寫cfp青色熒光蛋白clr降鈣素受體樣受體crecamp反應(yīng)元件dmemdulbecco氏改良的eagle氏培養(yǎng)基dpbsdulbecco氏磷酸鹽-緩沖的鹽水ecfp增強(qiáng)型青色熒光蛋白eyfp增強(qiáng)型黃色熒光蛋白fcs胎牛血清ramp2受體活性-修飾蛋白2供應(yīng)商細(xì)胞培養(yǎng)將hek-293細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)在75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中在含有15％fcs的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中在加濕氣氛下在37℃和5%co2下培養(yǎng)。hek293細(xì)胞的瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染將細(xì)胞在75cm2燒瓶中培養(yǎng)至70-80％匯合度。將45μlmetafectenerpro稀釋于900μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中，并在室溫下孵育20分鐘。將9000ng含有與eyfp融合的clr的dna的質(zhì)粒和3000ng含有與ecfp融合的ramp2dna的質(zhì)粒溶解于900μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中。將質(zhì)粒溶液與metafectenerpro溶液混合，并在室溫下孵育25分鐘。從細(xì)胞去除培養(yǎng)基，并用6ml含有15%fcs的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)替換。添加轉(zhuǎn)染溶液后，將細(xì)胞在加濕氣氛下在37℃和5%co2下孵育3小時(shí)。對于第二次轉(zhuǎn)染，將45μlmetafectene?pro稀釋于900μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中，并在室溫下孵育20分鐘。將12000ng含有熒光素酶報(bào)告基因luc2p(具有cre啟動子區(qū))的dna的pgl4.29[luc2p/cre/hygro]質(zhì)粒溶解于900μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中。將質(zhì)粒溶液與metafectene?pro溶液混合，并在室溫下孵育25分鐘。從細(xì)胞去除培養(yǎng)基，并用6ml含有15%fcs的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)替換。添加轉(zhuǎn)染溶液后，將細(xì)胞在加濕氣氛下在37℃和5%co2下孵育過夜。camp-測定在96孔板中接種瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對于96孔板的包被，將50μl聚-d-賴氨酸溶液(1ml聚-d-賴氨酸-氫溴酸/10mldpbs的儲備溶液)吸取至每個(gè)孔中并孵育40分鐘。除去聚-d-賴氨酸后，每孔用50μldpbs洗滌。通過除去培養(yǎng)基、用5mldpbs洗滌兩次并重懸浮于13ml含有15％fcs的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中來將瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞從細(xì)胞培養(yǎng)瓶中分離出來。每孔接種150μl含有15％fcs的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中的90000至120000個(gè)細(xì)胞，并將板在加濕氣氛下在37℃和5%co2下孵育過夜。細(xì)胞刺激對于每種配體，使用ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)制備得到八種不同濃度的連續(xù)稀釋液。在刺激之前，細(xì)胞上的培養(yǎng)基通過100μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)替換，并將板在加濕氣氛下在37℃和5%co2下孵育1小時(shí)。對于刺激，再次除去培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在加濕氣氛下在37℃和5%co2下在80μl配體溶液中孵育3小時(shí)。另外，使用80μl的5μm毛喉素溶液(在ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)中)作為陽性對照，并使用80μl的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)作為陰性對照。將每種濃度和對照測試為一式三份。發(fā)光測量刺激3小時(shí)后，除去溶液，并將細(xì)胞用每孔50μl的ham′sf-12/dmem(1/1;v/v)洗滌。在室溫下在30μlham′sf-12/dmem(1/1;v/v)孵育10分鐘后，添加30μl熒光素酶-溶液(one-glotm熒光素酶測定系統(tǒng))，并使用infinitem200(tecan)測量直接發(fā)光。數(shù)據(jù)分析用graphpadprism5進(jìn)行發(fā)光測量的數(shù)據(jù)分析。因此，首先基于毛喉素刺激的相應(yīng)平均值校正每個(gè)板的測量的發(fā)光值。然后將其針對[g14]adm(14-52)均一化，所述[g14]adm(14-52)在每次測定中用作標(biāo)準(zhǔn)肽。在校正和均一化后，使用非線性回歸分析數(shù)據(jù)，得到每種測試的配體的劑量-反應(yīng)曲線。表2：結(jié)果camp測定1e)人血漿中的穩(wěn)定性使用n-末端6-羧基四甲基羅丹明(tam)標(biāo)記的類似物研究肽的穩(wěn)定性。通過使用如前所述的固相肽合成(spps)(肽合成的一般方法)制備熒光標(biāo)記的adm類似物。在恒定振蕩下如前所述(b?hmed.,beck-sickingera.g.chemmedchem2015,10:804-14)用3倍摩爾過量的dmf中的熒光染料2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲陽離子六氟磷酸鹽(hbtu)和n,n-二異丙基乙胺(dipea)進(jìn)行6-羧基四甲基羅丹明(tam)與肽的n-末端的手性偶聯(lián)，持續(xù)24小時(shí)。通過質(zhì)譜法用maldi-ms(ultraflexiii,bruker)和esi-ms(hct,bruker)證實(shí)肽的身份。觀察到的質(zhì)量對應(yīng)于計(jì)算的質(zhì)量。所有類似物的純度通過分析型rp-hplc證明，且為≥90％。將肽溶解于1.5ml人血漿中至10e-5m的濃度，并在37℃下在恒溫振蕩下孵育。在不同時(shí)間點(diǎn)，在-20℃下，將150μl的樣品用300μl乙醇/acn(1:1)沉淀至少1小時(shí)。以12000rpm離心30秒后，將上清液轉(zhuǎn)移至costar?spin-x?離心管過濾器(0.22μm)中，并以12000rpm離心1小時(shí)。通過rp-hplc使用varianvaritiderpc柱(粒徑6μm；孔徑200?；250x4.6mm)以0.1％tfa/水和0.08%tfa/acn的線性梯度分析樣品；在λ=573nm處檢測熒光發(fā)射。通過峰積分測定完整肽的百分比。通過比較使用maldi-ms分析(ultraflexiii,bruker)的切割片段和完整肽的強(qiáng)度來校正含有額外切割片段的峰的值。用graphpadprism5(graphpad軟件)使用兩相指數(shù)衰減函數(shù)計(jì)算肽的穩(wěn)定性，所述兩相指數(shù)衰減函數(shù)用于測定慢衰減期半衰期(ln(2)/k慢；k慢：指數(shù)衰減的慢部分的速率常數(shù))(表3和圖3)。表3：人血漿中的穩(wěn)定性1f)粒細(xì)胞變移測定將第2代的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(huvec,lonza)以內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(ebm2,lonzacc-3156,補(bǔ)充有生長補(bǔ)充劑，lonzacc-4176)中的每盤2x104個(gè)細(xì)胞的密度接種于transwell?過濾盤(24孔板，6.5mm-插入物5μm孔徑；costar#3421，包被有纖連蛋白，sigmaf-1141)中，并在37℃和5%co2下孵育36小時(shí)。用含有腫瘤壞死因子-α(tnf-α，0.5nm)的新鮮的完整ebm2培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基，并將細(xì)胞再孵育7小時(shí)。隨后將細(xì)胞在mam培養(yǎng)基(補(bǔ)充有20％fcs和25mmhepes的培養(yǎng)基199)中洗滌，并且在將測試化合物添加至盤中后，再孵育30分鐘。此后將盤轉(zhuǎn)移至含有具有白介素8(il-8,5ng/ml)的mam培養(yǎng)基的新板。將人多形核粒細(xì)胞(pmn，50μl中的3.7x105個(gè)細(xì)胞)添加至插入物。30分鐘后，通過使用casy?tt細(xì)胞計(jì)數(shù)器(rocheinnovatisag)在來自孔的500μl培養(yǎng)基中測定變移細(xì)胞的數(shù)目。使用濃度為100μg/ml的抗icam-1igg(r&dsystems,bba4)作為陽性對照。人類粒細(xì)胞(pmn)從15ml外周靜脈edta血液新鮮分離，所述外周靜脈edta血液在給予其知情同意后從健康志愿者收集。簡言之：將血液鋪層在histopaque?1077/histopaque?1119(各12ml)梯度的頂部，并在以2100xrcf離心30分鐘后收集pmn。在裂解紅細(xì)胞和幾個(gè)洗滌步驟后，將pmn最終重新懸浮于mam緩沖液中。在典型的實(shí)驗(yàn)中，化合物以1x10-9至1x10-6m的濃度范圍內(nèi)進(jìn)行測試。根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)降低在≥1nmol/l的濃度下pmntnf-α刺激的huvecs的變移[圖4]。2．測試說明(體內(nèi))2a)遙測的、血壓正常的wistar大鼠的血壓和心率測量通過無線電遙測測量血壓和心率在自由活動的清醒的雌性wistar大鼠(體重>200克)中研究根據(jù)本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)的心血管作用。簡而言之，該遙測系統(tǒng)(dsidatascienceinternational，mn，usa)由3個(gè)基本部件組成：植入式發(fā)射器(ta11pa-c40)、接收器(ra1010)和基于計(jì)算機(jī)的采集軟件(dataquest?a.r.t.4.1，適用于windows)。在實(shí)驗(yàn)前用儀器為大鼠裝備長期使用至少14天的壓力植入物。傳感器導(dǎo)管用4-0縫線系住數(shù)次以制造距導(dǎo)管尖端0.5厘米的制動器(stopper)。在導(dǎo)管植入中用戊巴比妥(nembutal，sanofi：50mg/kgi.p.)麻醉大鼠。在將腹部皮膚剃毛后，在腹部正中切口，并將流體填充的傳感器導(dǎo)管向上插入到髂分叉與腎動脈之間的暴露的降主動脈中。導(dǎo)管在制動器處系住數(shù)次。遙測導(dǎo)管尖端恰好位于腎動脈尾部并用組織粘合劑固定。發(fā)射器主體在腹部閉合前貼到內(nèi)腹膜壁上。采用腹部切口的雙層閉合，分別縫合腹膜和肌肉壁，之后閉合外皮。為了術(shù)后防止感染和疼痛，注射單劑抗生素(土霉素10%r，5.0ml/kgs.c.，beta-pharmagmbh&co，germany)和鎮(zhèn)痛藥(rimadylr，5.0ml/kgs.c.，pfizer，germany)。為24只動物安裝硬件配置。各鼠籠定位在單獨(dú)的接收器平臺頂部。在激活植入的發(fā)射器后，聯(lián)機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)，采樣數(shù)據(jù)并將遙感壓力信號轉(zhuǎn)換為mmhg。氣壓參考考慮了絕對壓力(相對于真空)與環(huán)境大氣壓的關(guān)系。數(shù)據(jù)采集軟件每5分鐘以10秒間隔對樣品血流動力學(xué)數(shù)據(jù)預(yù)先定義。數(shù)據(jù)采集至文件在施用測試化合物前2小時(shí)開始，并在24小時(shí)周期完成后結(jié)束。在典型測試中，測試化合物以0.1至1000μg/kg體重的劑量(參考肽組分)以大劑量(bolus)形式皮下或靜脈內(nèi)施用。野生型腎上腺髓質(zhì)素(bachem，h-2932)在以≤300μg/kg體重的劑量測試時(shí)在該測試中以≤4小時(shí)的持續(xù)時(shí)間誘導(dǎo)血壓降低[參考wo2013/064508a1]。本發(fā)明的物質(zhì)在≤200μg/kg體重劑量(參考肽組分)下誘導(dǎo)最長8小時(shí)的血壓降低[圖5]。2b)wistar大鼠的皮膚血管滲漏測定采用皮內(nèi)組胺激發(fā)測試評價(jià)根據(jù)本發(fā)明的化合物對健康動物的血管屏障功能的作用。雄性spraguedawley大鼠(體重>200克)用異氟烷(環(huán)境空氣中2%-3%)麻醉并令其呈仰臥位。將腹部剃毛并將導(dǎo)管插入股靜脈。以靜脈大劑量形式施用單獨(dú)的媒介物(0.5mlpbs+0.1%牛血清白蛋白)或適當(dāng)劑量的測試化合物。在15分鐘后，施用第二次注射的100μl/kg2%伊文思藍(lán)(sigma)溶液并隨后立即將100微升適當(dāng)濃度的組胺溶液(例如0–2.5–5–10–20–40μg/ml)皮內(nèi)注射到腹部皮膚中。伊文思藍(lán)是一種高度血漿蛋白結(jié)合染料，并因此用作富含蛋白的流體外滲和血管滲漏的指示劑。該程序后30分鐘，通過過量使用異氟烷并隨后頸部錯(cuò)位處死大鼠，并切除腹部皮膚。使用8毫米活檢穿孔器切除風(fēng)疹塊，將組織樣品稱重并轉(zhuǎn)移至甲酰胺中保持48小時(shí)以萃取伊文思藍(lán)。樣品在合適的光度計(jì)上在620納米和750納米波長下測量，并根據(jù)公式a620(校正的)=a620-(1.426×a750+0.030)對血紅素色素校正及針對標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算該樣品的伊文思藍(lán)含量[方法改編自wangl.f.,patelm.,razavih.m.,weickers.,josephm.g.,mccormackd.g.,mehtas.,am.respircritcaremed,165(12),1634-9(2002)]。2c)小鼠的lps氣管內(nèi)滴注采用脂多糖(lps)的氣管內(nèi)攻擊用于檢查根據(jù)本發(fā)明的化合物對急性肺損傷的作用。雄性balb/c小鼠(平均動物體重20-23克)用異氟烷(7%)麻醉并通過使用微量移液管滴注在100微升鹽水中的來自大腸桿菌的lps(例如血清型055:b5；sigma)。用于攻擊的lps的通常劑量為1至10mg/kg體重。在滴注之前和之后的不同時(shí)間點(diǎn)，通過皮下途徑施用測試化合物。通常劑量為1至300μg/kg體重。在該測試中，施用測試化合物的典型時(shí)間點(diǎn)為lps攻擊之前15分鐘或之后1小時(shí)。在滴注lps后48小時(shí)，小鼠用異氟烷深度麻醉并通過頸部錯(cuò)位處死小鼠。在氣管插管后，用0.5ml冰冷的鹽水灌洗支氣管肺泡空間。制備肺并稱重。在細(xì)胞計(jì)數(shù)器(celldyn3700，abbott)上計(jì)數(shù)支氣管肺泡灌洗流體(balf)中的細(xì)胞。在該測試中，在lps攻擊后48小時(shí)，可再現(xiàn)地發(fā)現(xiàn)作為肺水腫量度的肺重量相比假手術(shù)對照組增加了約50%或更多。由于在各組中肺重量僅顯示極低的差異性，使用絕對肺重量作為參數(shù)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)總是發(fā)現(xiàn)在lps攻擊后在balf中相比對照顯著增加。2d)小型豬的急性肺損傷誘發(fā)通過使用脂多糖(lps)或油酸作為攻擊物在麻醉的小型豬中誘發(fā)急性肺損傷。具體地：約3.5至5.5kg體重的雌性g?ttingen小型豬(ellegaard，denmark)通過在用肌內(nèi)注射ketavet?/stresnil?術(shù)前用藥后連續(xù)靜脈輸注ketavet?、dormicum?和pancuronium?保持麻醉狀態(tài)。在氣管內(nèi)插管后，使用小兒呼吸器(sulla808v；dr?ger，germany)以30至50ml換氣量和25分鐘-1的恒定頻率用氧氣空氣混合物對動物進(jìn)行人工通氣。通過經(jīng)由氧/空氣混合物比例調(diào)節(jié)吸入氧的部分(fio2)，由此將動脈paco2調(diào)節(jié)至約40mmhg。在放置安裝到合適的壓力傳感器與記錄設(shè)備上的必要的探針和導(dǎo)管后常規(guī)測量下列心血管和呼吸參數(shù)：中心靜脈壓(經(jīng)由左頸靜脈)、動脈血壓和心率(bp和hr；經(jīng)由左頸動脈)、左心室壓力(lvp；使用經(jīng)由右頸動脈引入左心室的millar導(dǎo)管[fmi，mod.:spc-340s，ref:800-2019-1,4f])、肺動脈壓(pap；使用經(jīng)由左側(cè)頸靜脈放入肺動脈的arrowberman血管造影球囊導(dǎo)管[ref.:ai-071344fr.50cm])、心輸出量(co)和通過使用與置入右股動脈的pulsion4f熱稀釋導(dǎo)管(pv2014l08n)連接的picco系統(tǒng)(pulsion，germany)獲得的血管外肺水指數(shù)(evwli)。用于測量cvp、bp、hr、lvp和pap的導(dǎo)管安裝到ponemah記錄系統(tǒng)。進(jìn)行動脈血?dú)夥治鲆源_定pao2/fio2。根據(jù)american-europeanconsensusconferenceonards，<300mmhg的pao2/fio2被視為預(yù)示著存在急性肺損傷。取決于采用的方案，實(shí)驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間為施用誘導(dǎo)肺損傷的攻擊后4至5小時(shí)不等。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，通過放血處死豬，從肺中收集支氣管肺泡灌洗流體(balf)。通過使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器(celldyn3700)測定balf的細(xì)胞含量。在一種典型設(shè)置中，經(jīng)由氣管內(nèi)導(dǎo)管氣管內(nèi)滴注鹽水中的脂多糖(lps；大腸桿菌0111:b4；sigmal2630)，由此誘發(fā)急性肺損傷。響應(yīng)于該攻擊，pap和evwli提高，同時(shí)pao2/fio2降低。balf的細(xì)胞含量顯著提高。在另一方案中，用乙醇(1:1)稀釋的油酸(oa；sigma-aldrich，o1008)以100mg/kg體重的最終劑量經(jīng)15分鐘靜脈內(nèi)輸注。用oa攻擊導(dǎo)致pap和evlwi升高，以及pao2/fio2降低。c．藥物組合物的示例性實(shí)施方案根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以下列方式轉(zhuǎn)化為藥物制劑：靜脈內(nèi)溶液：根據(jù)本發(fā)明的化合物以低于飽和溶解度的濃度溶解在生理可接受的溶劑(例如ph4至ph7的緩沖液、等滲氯化鈉溶液、5%葡萄糖溶液和/或30%peg400溶液)中。該溶液通過過濾滅菌并裝入無菌以及無熱原的注射容器中。皮下溶液：根據(jù)本發(fā)明的化合物以低于飽和溶解度的濃度溶解在生理可接受的溶劑(例如ph4至ph7的緩沖液、等滲氯化鈉溶液、5%葡萄糖溶液和/或30%peg400溶液)中。該溶液通過過濾滅菌并裝入無菌以及無熱原的注射容器中。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12