本發(fā)明涉及新穎的抗菌化合物、含有它們的藥物組合物和它們作為抗微生物劑的用途。
背景技術(shù)：
：dna拓?fù)洚悩?gòu)酶是在復(fù)制或轉(zhuǎn)錄過程中參與dna-超螺旋的修飾的酶。這些酶結(jié)合單鏈或雙鏈dna并切割所述dna的磷酸酯主鏈，使得所述dna鏈解開或展開。在復(fù)制或轉(zhuǎn)錄過程結(jié)束時(shí)，所述酶本身重新密封dna主鏈。dna拓?fù)洚悩?gòu)酶分為i型(當(dāng)切割dna雙螺旋的單鏈時(shí))和ii型(當(dāng)切割dna雙螺旋的兩條鏈時(shí))。細(xì)菌ii型拓?fù)洚悩?gòu)酶包含dna促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶iv(topoiv)，它們是并行地存在于幾乎所有的原核細(xì)胞中的異四聚體酶。兩種酶都是dna復(fù)制所必需的，且因此，是細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂所必需的。細(xì)菌ii型拓?fù)洚悩?gòu)酶是經(jīng)證實(shí)的抗細(xì)菌靶標(biāo)，尤其是氟喹諾酮類的化合物的抗細(xì)菌靶標(biāo)。氟喹諾酮類是在細(xì)菌感染(特別是醫(yī)院獲得性感染)和其中懷疑對(duì)其它抗細(xì)菌藥物類別具有抗性的感染的治療中起重要作用的廣譜抗細(xì)菌藥物。氟喹諾酮類通過抑制革蘭氏陰性細(xì)菌中的dna促旋酶和革蘭氏陽性細(xì)菌中的拓?fù)洚悩?gòu)酶iv而起作用。但是，近年來由于改變藥物靶標(biāo)dna促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶iv的活性位點(diǎn)或藥物蓄積的突變而出現(xiàn)了對(duì)氟喹諾酮類的抗性。另外，對(duì)喹諾酮類的抗性可以由產(chǎn)生qnr蛋白的質(zhì)粒介導(dǎo)，所述qnr蛋白保護(hù)喹諾酮靶標(biāo)免于抑制(g.a.jacoby,cid,2005:41,增刊2,sd120-s126)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織，抗微生物劑抗性(amr)是微生物對(duì)它最初敏感的抗微生物藥物的抗性。有抗性的細(xì)菌能夠抵抗抗生素和抗細(xì)菌藥物的攻擊，以致于標(biāo)準(zhǔn)治療變得無效且感染持續(xù)，從而增加向其它對(duì)象傳播的風(fēng)險(xiǎn)。mitton-frym.j.等人(bioorg.med.chem.lett.,23,2010,2955-2961)開發(fā)了新穎的喹諾酮衍生物作為細(xì)菌dna促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶iv的抑制劑。鑒于逐步靶標(biāo)突變?cè)诜Z酮類抗性的臨床史中的重要性，所述作者強(qiáng)烈地意識(shí)到，提供topoiv以及dna促旋酶的抑制是關(guān)鍵性重要的。根據(jù)所述作者，這樣的雙靶向活性會(huì)減慢抗性在臨床中出現(xiàn)的速率，因?yàn)橥蛔僤na促旋酶以避免抑制的生物仍然對(duì)通過topoiv抑制實(shí)現(xiàn)的殺死是敏感的。surivetj.p.等人(j.med.chem.2013,56,7396-7415)報(bào)道了包含四氫吡喃核心的新穎細(xì)菌雙重dna促旋酶和topoiv抑制劑的設(shè)計(jì)，并證實(shí)，需要dna促旋酶和topoiv的雙重抑制以使抗性發(fā)展速率最小化。wo2006/105289涉及雜環(huán)化合物，更具體地是吡唑化合物，測(cè)試了這些化合物的dna促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶iv的抑制。wo02/072572、wo2006/021448、wo2008/139288、wo2010/081874、wo2010/084152、wo2013/068948和wo2013/080156公開了具有抗微生物活性的雜環(huán)化合物。wo96/10568和wo2012/003418公開了具有其它治療活性的雜環(huán)化合物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：申請(qǐng)人認(rèn)識(shí)到，強(qiáng)烈地和連續(xù)地需要克服抗性細(xì)菌問題的抗細(xì)菌藥物。申請(qǐng)人面臨開發(fā)新的抗菌化合物的問題，所述新抗細(xì)菌化合物使得可以克服抗細(xì)菌劑抗性的問題。更具體地，申請(qǐng)人面臨開發(fā)新的抗菌化合物的問題，所述新的抗細(xì)菌化合物能夠同時(shí)抑制細(xì)菌ii型拓?fù)洚悩?gòu)酶，即dna促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶iv。并且，申請(qǐng)人面臨開發(fā)具有廣譜活性(即對(duì)革蘭氏陽性的和/或革蘭氏陰性的細(xì)菌是有用的)的新的抗細(xì)菌化合物的問題。因而，在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(i)的化合物和所述式(i)化合物與藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)酸或堿的加成鹽、對(duì)映異構(gòu)體、n-氧化物和季銨鹽：其中g(shù)1和g2，彼此相同或不同，是ch或n，前提條件是，g1和g2中的至少一個(gè)是n；r1是氫原子、鹵素原子、oh、(c1-3)烷基、(c1-3)烷氧基、(c1-3)烷基-oh、-coor’或-conr’r”，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基；l1是σ鍵、-ch2-、-o-或-nh-；y是(c1-6)亞烷基、-nh-(c1-6)亞烷基或(c4-5)亞環(huán)烷基，所述基團(tuán)任選地被羥基或氨基或甲酰氨基(-nh-cho)取代；l2是σ鍵、-nh-或-nh-(c1-6)亞烷基；a是具有下式(ii)和(iii)之一的稠合二環(huán)基團(tuán)其中g(shù)3是n或c(r’)，其中r’是h或(c1-3)烷基；g4、g5和g6，彼此相同或不同，是ch、cf、c-cn或n，r2是氫原子、鹵素原子、羥基、氰基、(c1-3)烷基、(c1-3)烷氧基、cf3、ocf3或nr’r”，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基；以及r3是氫原子、鹵素原子、羥基、氰基、(c1-3)烷基、(c1-3)烷氧基、三氟甲基或nr’r”，其中r’和r”是氫原子或(c1-3)烷基；以及b是具有下式(iv)、(v)和(vi)之一的稠合二環(huán)基團(tuán)，或具有下式(vii)的稠合三環(huán)基團(tuán):其中p1是n或cr’，其中r’是h、cn或cf3；p2是o、s、so2或c(r’)(r”)，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基；r4和r5一起形成3-7元芳族或脂族環(huán)，所述環(huán)任選地包含至少一個(gè)選自n、o和s的雜原子；n是0或1；以及r6是氫原子、鹵素原子、cf3、羥基或nr’r”，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基。在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含至少一種式(i)的化合物的藥物組合物。在第三個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于藥物的式(i)的化合物。在第四個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療細(xì)菌感染的式(i)的化合物。在第五個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于治療細(xì)菌感染的方法，所述方法包括將式(i)化合物施用給有此需要的患者。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，g3是n、c(h)或c(ch3)。優(yōu)選地，r3是氫原子、鹵素原子、氰基、(c1-3)烷基或nr’r”，其中r’和r”是氫原子或(c1-3)烷基。更優(yōu)選地，r3是氫原子、f、cl、氰基、ch3、nh2或n(ch3)2。有利地，l1是σ鍵或-nh-。優(yōu)選地，r1是氫原子、氟原子、氯原子、oh、(c1-3)烷基-oh、-coor’或-con(r’)(r”)，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基。更優(yōu)選地，r1是h、氟原子、oh、-ch2oh、-cooc2h5或-conh2。優(yōu)選地，r2是氫原子、鹵素原子、羥基、氰基、(c1-3)烷基、(c1-3)烷氧基、ocf3或nr’r”，其中r’和r”，彼此相同或不同，是氫原子或(c1-3)烷基。更優(yōu)選地，r2是氫原子、f、cl、氰基、ch3、och3、nh2或n(ch3)2。優(yōu)選地，y是(c1-4)亞烷基、-nh-(c1-4)亞烷基或(c4-5)亞環(huán)烷基，所述基團(tuán)任選地被氨基或一個(gè)羥基取代。更優(yōu)選地，y是(c1-3)亞烷基、-nh-(c1-3)亞烷基或(c4-5)亞環(huán)烷基，所述基團(tuán)任選地被氨基或一個(gè)羥基取代。優(yōu)選地，l2是σ鍵、-nh-或-nh-(c1-3)亞烷基。更優(yōu)選地，l2是σ鍵、-nh-或-nh-ch2-。優(yōu)選地，p2是o、s、so2或ch2。優(yōu)選地，r4和r5一起形成5或6元芳族或脂族環(huán)，所述環(huán)任選地包含至少一個(gè)選自n、o和s的雜原子，其中所述環(huán)任選地帶有氧代基團(tuán)。更優(yōu)選地，r4和r5一起形成5元環(huán)，所述環(huán)包含至少一個(gè)選自n、o或s的雜原子且任選地被酮基取代。更優(yōu)選地，r4和r5一起形成選自苯或吡啶的6元環(huán)。優(yōu)選地，r6是氫原子或鹵素原子。更優(yōu)選地，r6是氫原子、f或cl。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，a是具有下式之一的稠合二環(huán)：其中r’是h或(c1-3)烷基，且r2和r3具有上面解釋的含義。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，b是具有下式之一的稠合二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)：其中r6具有上面解釋的含義。在本說明書中和在后面的權(quán)利要求書中，術(shù)語“(c1-6)烷基”是指包含1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、3-戊基、己基、異己基。在本說明書中和在后面的權(quán)利要求書中，術(shù)語“(c1-3)烷基”是指包含1-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，例如甲基、乙基、丙基、異丙基。在本說明書中和在后面的權(quán)利要求書中，術(shù)語“(c1-6)亞烷基”是指包含1-6個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈或支鏈烷基鏈，例如亞甲基(-ch2-)、亞乙基(-ch2ch2-)、亞丙基(-ch2ch2ch2-)或亞丁基(-ch2ch2ch2ch2-)。在本說明書中和在以下權(quán)利要求中，術(shù)語“(c4-5)亞環(huán)烷基”是指包含4或5個(gè)碳原子的二價(jià)環(huán)烷基，諸如亞環(huán)丁基和亞環(huán)戊基。本發(fā)明的某些化合物可以以互變異構(gòu)形式存在，本發(fā)明包括這些化合物的所有這樣的互變異構(gòu)形式，除非另外指出。除非另有說明，否則在本文中描繪的結(jié)構(gòu)也意圖包括所述結(jié)構(gòu)的所有立體化學(xué)形式；即，每個(gè)不對(duì)稱中心的r和s構(gòu)型。因而，本發(fā)明化合物的單個(gè)立體化學(xué)異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。因而，本發(fā)明包括基本上不含有其它異構(gòu)體(基于摩爾，>90％，和優(yōu)選地>95％，不含有其它立體異構(gòu)體)的每種非對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體以及這樣的異構(gòu)體的混合物?？梢匀缦碌玫教囟ü鈱W(xué)異構(gòu)體：通過根據(jù)常規(guī)方法拆分外消旋混合物，例如，通過形成非對(duì)映異構(gòu)的鹽，通過用光學(xué)活性的酸或堿處理。適當(dāng)?shù)乃岬睦邮蔷剖?、二乙?；剖?、二苯甲?；剖?、二甲苯酰基酒石酸和樟腦磺酸，并然后通過結(jié)晶分離非對(duì)映異構(gòu)體的混合物，隨后從這些鹽釋放光學(xué)活性的堿。一種不同的分離光學(xué)異構(gòu)體的方法包括使用手性色譜柱，其經(jīng)過最佳選擇以使對(duì)映異構(gòu)體的分離最大化。另一種方法包括如下合成共價(jià)非對(duì)映異構(gòu)體：使本發(fā)明的化合物與活化形式的光學(xué)純的酸或光學(xué)純的異氰酸酯反應(yīng)?？梢詫⒑铣傻姆菍?duì)映異構(gòu)體通過常規(guī)方式諸如色譜法、蒸餾、結(jié)晶或升華進(jìn)行分離，然后水解以獲得對(duì)映異構(gòu)純的化合物。通過使用活性起始原料可以得到本發(fā)明的光學(xué)活性化合物。這些異構(gòu)體可以呈游離酸、游離堿、酯或鹽的形式。本發(fā)明的化合物可以以放射性地標(biāo)記的形式存在，即，所述化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)其原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于在自然界中常見的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子。氫、碳、磷、氟和氯的放射性同位素分別包括3h、14c、32p、35s、18f和36cl。含有那些放射性同位素和/或其它原子的其它放射性同位素的本發(fā)明化合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。氚代(即，3h)和碳-14(即，14c)放射性同位素因?yàn)樗鼈兊娜菀字苽浜涂蓹z測(cè)性是特別優(yōu)選的。放射性地標(biāo)記的本發(fā)明化合物通?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法來制備。方便地，通過進(jìn)行本文中公開的操作，但是用容易得到的放射性地標(biāo)記的試劑替換未放射性標(biāo)記的試劑，可以制備這樣的放射性地標(biāo)記的化合物。在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其至少包含如上所述的式(i)的化合物、其與藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)酸或堿的鹽、或其對(duì)映異構(gòu)體、或其n-氧化物、或其季銨鹽以及至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。優(yōu)選地，以合適的劑型制備本發(fā)明的藥物組合物。合適的劑型的例子是：用于口服施用的片劑、膠囊劑、包衣片劑、顆粒劑、溶液劑和糖漿劑；用于局部施用的溶液劑、潤(rùn)發(fā)油和軟膏劑；用于透皮施用的含藥貼劑；用于直腸施用的栓劑和可注射的無菌的溶液。其它合適的劑型是具有持續(xù)釋放的那些和用于口服、注射或透皮施用的基于脂質(zhì)體的那些。本發(fā)明的藥物組合物還可以通過鼻氣霧劑或吸入來施用或通過植入(例如，外科手術(shù)地)來遞送，諸如用可植入或內(nèi)在裝置如支架。其它合適的劑型是具有持續(xù)釋放的那些和用于口服、注射或透皮施用的基于脂質(zhì)體的那些。本發(fā)明的藥物組合物的劑型可以通過藥物化學(xué)家熟知的技術(shù)來制備，且包括混合、制粒、壓縮、溶解、滅菌等。通常，在本發(fā)明的藥物組合物中的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的季銨鹽、n-氧化物和鹽的量將是在0.01mg至1,500mg之間，優(yōu)選地在0.1mg至500mg之間，和更優(yōu)選地在1mg至200mg之間。通常，在本發(fā)明的藥物組合物中的式(i)化合物的量將會(huì)確保0.001-20mg/kg/天的施用水平。優(yōu)選地，所述施用水平是0.01-7.5mg/kg/天，更優(yōu)選地0.1-5mg/kg/天，且最優(yōu)選地0.5-2.5mg/kg/天。技術(shù)人員會(huì)明白，可能需要比上面列舉的那些更低或更高的劑量。用于任何特定患者的具體劑量和治療方案將取決于多種因素，包括使用的具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、施用時(shí)間、排泄速率、藥物組合、疾病的嚴(yán)重程度和進(jìn)程、和患者的疾病傾向以及治療醫(yī)師的判斷?？梢钥诜?、胃腸外、通過吸入噴霧、局部、直腸、經(jīng)鼻、含服、陰道或經(jīng)由植入儲(chǔ)庫施用本發(fā)明的藥物組合物。本文中使用的術(shù)語“胃腸外”包括皮下的、皮內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、滑膜內(nèi)的、胸骨內(nèi)的、鞘內(nèi)的、病灶內(nèi)的和顱內(nèi)的注射或輸注技術(shù)。如上所述，取決于取代基的性質(zhì)，式(i)的化合物可以與藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)酸或堿形成加成鹽。合適的生理上可接受的無機(jī)酸的典型例子是鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。合適的生理上可接受的有機(jī)酸的典型例子是乙酸、抗壞血酸、苯甲酸、檸檬酸、富馬酸、乳酸、馬來酸、甲磺酸、草酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、琥珀酸、鞣酸和酒石酸。合適的生理上可接受的無機(jī)堿的典型例子是銨、鈣、鎂、鈉和鉀的氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽，例如氫氧化銨、氫氧化鈣、碳酸鎂、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀。合適的生理上可接受的有機(jī)堿的典型例子是：精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、n-甲基還原葡糖胺、還原葡糖胺、葡糖胺、組氨酸、n-(2-羥基乙基)-哌啶、n-(2-羥基乙基)吡咯烷、異丙胺、賴氨酸、甲基還原葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨丁三醇。如本文中所述的，本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明的化合物以及藥學(xué)上可接受的賦形劑，如本文中使用的，所述賦形劑包括任意的和所有的溶劑、稀釋劑或其它媒介物、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤(rùn)滑劑等。它們適合于所希望的特定劑型?？梢猿洚?dāng)藥學(xué)上可接受的賦形劑的材料的一些例子包括、但不限于：糖諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；黃蓍膠粉末；麥芽；明膠；滑石；賦形劑諸如可可脂和栓劑蠟；油諸如花生油、棉籽油；紅花油；芝麻油；橄欖油；玉米油和大豆油；二醇類；諸如丙二醇；酯諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇和磷酸鹽緩沖溶液，其它無毒的相容的潤(rùn)滑劑諸如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂、著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”和“生理上可接受的”意指沒有任何特殊限制地定義適合用于制備要施用給生物的藥物組合物的任何材料。在第三個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用作藥物的式(i)的化合物。在第四個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療細(xì)菌感染的式(i)的化合物。在第五個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于治療細(xì)菌感染的方法，所述方法包括將式(i)化合物施用給有此需要的患者。優(yōu)選地，所述細(xì)菌感染是皮膚感染、粘膜感染、婦科感染、呼吸道感染(rti)、cns感染、胃腸感染、骨感染、心血管感染、性傳播的感染或泌尿道感染。更具體地，所述細(xì)菌感染是慢性支氣管炎(aceb)的急性惡化、急性中耳炎、急性鼻竇炎、由藥物抗性細(xì)菌造成的感染、導(dǎo)管相關(guān)的膿毒癥、軟下疳、衣原體病、社區(qū)獲得性肺炎(cap)、合并的皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染、不復(fù)雜的皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染、心內(nèi)膜炎、發(fā)熱性嗜中性粒細(xì)胞減少癥、淋球菌性宮頸炎、淋球菌性尿道炎、醫(yī)院獲得性肺炎(hap)、骨髓炎、膿毒癥、梅毒、呼吸器相關(guān)性肺炎、腹內(nèi)感染、淋病、腦膜炎、破傷風(fēng)或結(jié)核病。甚至更具體地，所述細(xì)菌感染可以是與幽門螺桿菌或肺炎衣原體感染有關(guān)的動(dòng)脈粥樣硬化或心血管疾?。谎汉徒M織感染，包括心內(nèi)膜炎和骨髓炎，其由金黃色葡萄球菌(s.aureus)、溶血性葡萄球菌(s.haemolyticus)、糞腸球菌(e.faecalis)、屎腸球菌(e.faecium)、耐久腸球菌(e.durans)引起，包括對(duì)已知的抗細(xì)菌劑具有抗性的菌株，所述抗細(xì)菌劑是例如，但不限于，β-內(nèi)酰胺類、萬古霉素、氨基糖苷類、喹諾酮類、氯霉素、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類；支氣管炎；導(dǎo)管相關(guān)的膿毒癥；軟下疳；衣原體病；社區(qū)獲得性肺炎；與鳥分枝桿菌(mycobacteriumavium)或細(xì)胞內(nèi)分枝桿菌(mycobacteriumintracellulare)感染有關(guān)的播散性鳥復(fù)合分枝桿菌(mac)疾??；心內(nèi)膜炎；發(fā)熱性嗜中性粒細(xì)胞減少癥；與產(chǎn)氣莢膜梭菌(clostridiumperfringens)或擬桿菌屬種(bacteroidesspp)感染有關(guān)的氣性壞疽；胃腸炎感染；與釀膿鏈球菌(streptococcuspyogenes)、c和g群鏈球菌、白喉棒桿菌(corynebacteriumdiphtheriae)或溶血放線桿菌感染有關(guān)的腎小球腎炎；淋球菌性宮頸炎；淋球菌性尿道炎；婦科感染；醫(yī)院獲得性肺炎(hap)；由藥物抗性細(xì)菌造成的感染；由結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)、麻風(fēng)分枝桿菌(m.leprae)、副結(jié)核分枝桿菌(m.paratuberculosis)、堪薩斯分枝桿菌(m.kansasii)或龜亞科分枝桿菌(m.chelonei)造成的感染；與隱孢子蟲屬種(cryptosporidiumspp)感染有關(guān)的腸原生動(dòng)物；與布氏疏螺旋體(borreliaburgdorferi)感染有關(guān)的萊姆??；與砂眼衣原體(chlamydiatrachomatis)、淋病奈瑟球菌(neisseriagonorrhoeae)、金黃色葡萄球菌、肺炎葡萄球菌(s.pneumoniae)、化膿鏈球菌(s.pyogenes)、流感嗜血菌(h.injluenzae)或李斯特菌屬種(listeriaspp.)感染有關(guān)的結(jié)膜炎、角膜炎和淚囊炎；與肺炎鏈球菌、流感嗜血菌、粘膜炎莫拉菌(moraxellacatarrhalis)、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、酪黃腸球菌(e.casseliflavus)、表皮葡萄球菌(s.epidermidis)、溶血性葡萄球菌或消化鏈球菌屬種(peptostreptococcusspp)感染有關(guān)的乳突炎；與草綠色鏈球菌(viridansstreptococci)感染有關(guān)的牙源性感染；骨髓炎；中耳炎；與百日咳博德特氏菌(bordetellapertussis)感染有關(guān)的持續(xù)咳嗽；咽炎；與金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性的葡萄球菌釀膿鏈球菌、無乳鏈球菌(streptococcusagalactiae)、c-f群鏈球菌(微小菌落鏈球菌)、草綠色鏈球菌、極小棒桿菌(corynebacteriumminutissimum)、梭菌屬種(clostridiumspp.)或橫塞氏巴爾通氏體(bartonellahenselae)感染有關(guān)的產(chǎn)后發(fā)熱；與肺炎支原體(mycoplasmapneumoniae)、嗜肺軍團(tuán)菌(legionellapneumophila)、肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae)、流感嗜血菌(haemophilusinjluenzae)或肺炎衣原體(chlamydiapneumoniae)感染有關(guān)的呼吸道感染；風(fēng)濕熱；膿毒癥；與砂眼衣原體(chlamydiatrachomatis)、杜氏嗜血菌(haemophilusducreyi)、蒼白密螺旋體(treponemapallidum)、解脲尿支原體(ureaplasmaurealyticum)或淋病奈瑟氏菌(neiseriagonorrhoeae)感染有關(guān)的性傳播疾??；鼻竇炎；梅毒；與回歸熱疏螺旋體(borreliarecurrentis)感染有關(guān)的全身發(fā)熱綜合征；扁桃體炎；與金黃色葡萄球菌感染有關(guān)的毒素疾病(食物中毒和中毒性休克綜合征)或a、b和c群鏈球菌；與幽門螺桿菌(helicobacterpylori)感染有關(guān)的潰瘍；與金黃色葡萄球菌凝固酶陰性的葡萄球菌種或腸球菌屬種感染有關(guān)的不復(fù)雜的急性泌尿道感染；不復(fù)雜的皮膚和軟組織感染和膿腫；尿道炎和宮頸炎；泌尿道感染；中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染；由葡萄球菌造成的裝置相關(guān)感染；由葡萄球菌造成的肌肉骨骼感染；產(chǎn)生志賀毒素的大腸桿菌(e.coli)；流感嗜血菌(haemophilusinfluenzae)(侵襲性疾病)；軍團(tuán)桿菌??；鸚鵡熱/鸚鵡衣原體(clamydiapsittaci)嬲??；由沙門氏菌屬種(salmonellaspp)造成的沙門菌病；由志賀氏菌屬種(shigellaspp)造成的志賀氏菌??；鏈球菌中毒性休克綜合征；葡萄球菌中毒性休克綜合征；和由傷寒沙門氏菌(salmonellatyphi)造成的傷寒。所述細(xì)菌感染可以是由不動(dòng)桿菌屬種(acinetobacterspp)、擬桿菌屬種(bacteroidesspp)、伯克霍爾德氏菌屬種(burkholderiaspp)、彎曲桿菌屬種(campylobacterspp)、衣原體屬種(chlamydiaspp)、衣原體屬種(chlamydophilaspp)、梭菌屬種(clostridiumspp)、腸桿菌屬種(enterobacterspp)、腸球菌屬種(enterococcusspp)、埃希氏菌屬種(escherichiaspp)、加德那菌屬種(gardnerellaspp)、嗜血菌屬種(haemophilusspp)、螺桿菌屬種(helicobacterspp)、克雷伯氏菌屬種(klebsiellaspp)、軍團(tuán)菌屬種(legionellaspp)、莫拉菌屬種(moraxellaspp)、摩根氏菌屬種(morganellaspp)、支原體屬種(mycoplasmaspp)、奈瑟球菌屬種(neisseriaspp)、消化鏈球菌屬種(peptostreptococcusspp)、變形菌屬種(proteusspp)、假單胞菌屬種(pseudomonasspp)、沙門氏菌屬種(salmonellaspp)、沙雷氏菌屬種(serratiaspp)、葡萄球菌屬種(staphylococcusspp)、鏈球菌屬種(streptoccocusspp)、寡養(yǎng)單胞菌屬種(stenotrophomonasspp)、尿支原體屬種(ureaplasmaspp)、需氧菌、專性厭氧菌、兼性厭氧菌、革蘭氏陽性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌、革蘭氏不定細(xì)菌和非典型呼吸道病原體引起的感染。更具體地，所述細(xì)菌感染可以是由鮑氏不動(dòng)桿菌(acinetobacterbaumanii)、溶血不動(dòng)桿菌(acinetobacterhaemolyticus)、瓊氏不動(dòng)桿菌(acinetobacterjunii)、約氏不動(dòng)桿菌(acinetobacterjohnsonii)、魯氏不動(dòng)桿菌(acinetobacterlwoffi)、雙道擬桿菌(bacteroidesbivius)、脆弱擬桿菌(bacteroidesfragilis)、洋蔥伯克霍爾德氏菌(burkholderiacepacia)、空腸彎曲桿菌(campylobacterjejuni)、肺炎衣原體(chlamydiapneumoniae)、解脲衣原體(chlamydiaurealyticus)、肺炎衣原體(chlamydophilapneumoniae)、難辨梭菌(clostridiumdifficile)、產(chǎn)氣腸桿菌(enterobacteraerogenes)、陰溝腸桿菌(enterobactercloacae)、糞腸球菌(enterococcusfaecalis)、屎腸球菌(enterococcusfaecium)、大腸桿菌(escherichiacoli)、陰道加德那菌(gardnerellavaginalis)、副流感嗜血菌(haemophilusparainfluenzae)、流感嗜血菌(haemophilusinfluenzae)、幽門螺桿菌(helicobacterpylori)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、嗜肺軍團(tuán)菌(legionellapneumophila)、甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、粘膜炎莫拉菌(moraxellacatarrhalis)、摩氏摩根氏菌(morganellamorganii)、肺炎支原體(mycoplasmapneumoniae)、淋病奈瑟球菌(neisseriagonorrhoeae)、青霉素抗性的肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae)、青霉素敏感的肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae)、大消化鏈球菌(peptostreptococcusmagnus)、微小消化鏈球菌(peptostreptococcusmicros)、厭氧消化鏈球菌(peptostreptococcusanaerobius)、不解糖消化鏈球菌(peptostreptococcusasaccharolyticus)、普氏消化鏈球菌(peptostreptococcusprevotii)、四聯(lián)消化鏈球菌(peptostreptococcustetradius)、陰道消化鏈球菌(peptostreptococcusvaginalis)、奇異變形菌(proteusmirabilis)、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)、喹諾酮抗性的金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、喹諾酮抗性的表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermis)、傷寒沙門氏菌(salmonellatyphi)、副傷寒沙門氏菌(salmonellaparatyphi)、腸炎沙門氏菌(salmonellaenteritidis)、鼠傷寒沙門氏菌(salmonellatyphimurium)、粘質(zhì)沙雷氏菌(serratiamarcescens)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)、腐生葡萄球菌(staphylococcussaprophyticus)、無乳鏈球菌(streptococcusagalactiae)、肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae)、釀膿鏈球菌(streptococcuspyogenes)、嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌(stenotrophomonasmaltophilia)、解脲尿支原體(ureaplasmaurealyticum)、萬古霉素抗性的屎腸球菌(enterococcusfaecium)、萬古霉素抗性的糞腸球菌(enterococcusfaecalis)、萬古霉素抗性的金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和萬古霉素抗性的表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermis)引起的感染。在下面表1中提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物的例子。表1可以如下面合成實(shí)施例中所解釋的制備以上化合物。關(guān)于對(duì)于本發(fā)明的化合物(包括含有a、l1、b、l2、y、l3和c的不同選擇的化合物)的合成、回收和表征有用的合成策略、保護(hù)基以及其它材料和方法的指導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員具有非常確定的雜環(huán)和其它有關(guān)化學(xué)轉(zhuǎn)化的文獻(xiàn)，要利用的回收和純化技術(shù)，以及在下面的實(shí)施例中所含的信息。多個(gè)合成方案可以用于生產(chǎn)本文所述化合物，包括在下面示意地描繪的那些方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明白，可以在這些方案中使用保護(hù)基?！氨Ｗo(hù)基”是這樣的部分：其用于暫時(shí)阻斷在潛在反應(yīng)部位(例如，胺、羥基、巰基、醛等)處的化學(xué)反應(yīng)，使得反應(yīng)可以在多官能化合物的另一個(gè)部位處選擇性地進(jìn)行。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，保護(hù)基以好收率選擇性地反應(yīng)以產(chǎn)生適合用于計(jì)劃的反應(yīng)的受保護(hù)底物；所述保護(hù)基應(yīng)當(dāng)可以通過容易得到的、優(yōu)選地?zé)o毒的試劑以好收率選擇性地除去，所述試劑不會(huì)不適當(dāng)?shù)毓舸嬖诘钠渌倌軋F(tuán)；所述保護(hù)基優(yōu)選地形成可容易地分離的衍生物(更優(yōu)選地不產(chǎn)生新立體中心)；且所述保護(hù)基優(yōu)選地具有額外官能團(tuán)的最小值以避免其它反應(yīng)位點(diǎn)的復(fù)雜化。多種保護(hù)基以及用于布置和除去它們的策略、試劑和條件是本領(lǐng)域已知的。并且，可以選擇富含期望的同位素(例如氚替代氫)的試劑以制備含有這樣的同位素的本發(fā)明的化合物。含有在一個(gè)或多個(gè)位置的氚以替代氫或者含有c、n、p和o的各種同位素的化合物包含在本發(fā)明范圍內(nèi)，且可以用于，例如，研究化合物的代謝和/或組織分布或改變代謝的速率或途徑或生物學(xué)功能的其它方面。使用下面描述的方法以及合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域已知的合成方法，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明白的對(duì)它們的變化，可以合成本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的方法包括、但不限于下面描述的那些。在對(duì)于采用的試劑和材料而言適當(dāng)且適合于所要實(shí)現(xiàn)的轉(zhuǎn)化的溶劑中進(jìn)行所述反應(yīng)。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)理解，存在于分子上的官能團(tuán)應(yīng)當(dāng)與提議的轉(zhuǎn)化相一致。這有時(shí)要求某種判斷從而修改合成步驟的次序或選擇一個(gè)特定工藝方案(相對(duì)于另一個(gè))以便得到期望的本發(fā)明的化合物。如在下文所述的合成途徑中所示和經(jīng)由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，可以制備本發(fā)明的化合物。實(shí)施例在下文所述的合成途徑中使用的縮寫的列表：boc:氨基甲酸叔丁酯chex環(huán)己烷cv柱體積dbu:1,5-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-5-烯dcm:二氯甲烷dipean,n-二異丙基乙胺dme:1,2-二甲氧基乙烷dmf:n,n-二甲基甲酰胺et2o:乙醚etoac:乙酸乙酯ms:質(zhì)譜法tea:三乙胺tfa:三氟乙酸t(yī)hf:四氫呋喃pd/c:活性炭載鈀pd(oh)2/c:活性炭載氫氧化鈀r.t.:室溫uplc:超高效液相色譜法化合物27、29和40的制備按照合成途徑a，如在下文中描述的，制備化合物27、29和40。步驟1將4-羥基香豆素a0(1g)溶解在含有三乙胺(1.72ml)的dcm(30ml)中，并將三氟甲烷磺酸酐(1.25ml)在-10℃逐滴加入dcm中，并將溶液在-10℃攪拌2小時(shí)。將得到的赤褐色溶液溫?zé)嶂潦覝?，用環(huán)己烷/乙醚1/1稀釋，并使用環(huán)己烷/乙醚1/1濾過硅膠墊。在真空中除去溶劑以得到三氟甲磺酸-2-氧代-2h-色烯-4-基酯中間體化合物a1(1.76g,y＝97％)。lc-ms(m-h+):295.0步驟2將三乙胺(1ml)在乙腈(2ml)中的溶液逐滴加入中間體化合物a1(1.76g)和1-boc-4-氨基哌啶(1.2g)在無水乙腈(20ml)中的攪拌溶液中。一旦加入結(jié)束，將溶液回流加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用dcm稀釋，并用飽和nahco3和水洗滌。然后將有機(jī)相分離，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)。通過與甲醇一起研磨來純化粗制物質(zhì)以得到4-[(2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯中間體化合物a2(1.51g,y＝73％)。lc-ms(m-h+):345.2步驟3將中間體化合物a2(1g)溶解在dcm(10ml)中，在0℃逐滴加入tfa(3ml)，并將溶液攪拌2小時(shí)。然后將溶液在真空中濃縮，用甲苯和乙醚洗滌以得到4-(哌啶-4-基氨基)-2h-色烯-2-酮中間體化合物a3的三氟乙酸鹽(1.2g,y＝定量)。lc-ms(m-h+):245.1步驟4將中間體化合物a3(50mg)和碳酸鉀(38.7mg)在dmf(2ml)中混合。隨后在室溫加入3-溴丙-1-炔(20.8mg)，并將反應(yīng)物攪拌過夜。將混懸液過濾并將濾液濃縮。將殘余物通過si-柱純化，用etoac至etoac/甲醇8:2洗脫以得到4-{[1(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基]氨基}-2h-色烯-2-酮中間體化合物a4(25.6mg,y＝76％)。lc-ms(m-h+):283.1步驟5將中間體化合物a4(50mg,1當(dāng)量)、在下表中表示的期望的鹵素-雜芳族化合物b-hal(1.1當(dāng)量)和碘化亞銅(cui,3.42mg,0.1當(dāng)量)溶解在dmf(1ml)中。加入dipea(0.125ml,4當(dāng)量)。通過交替應(yīng)用真空和氮?dú)鈱⒒旌衔锩摎猓缓蠹尤腚p(三苯基膦)二氯化鈀(ii)(12.6mg,0.1當(dāng)量)，并將混合物在60℃加熱。3小時(shí)以后，當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，加入水，并將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空中濃縮以得到粗制物質(zhì)。通過用etoac至etoac/甲醇8:2洗脫的si-柱純化以后，得到在下表中描述的對(duì)應(yīng)的期望的中間體化合物a5:步驟6將每種以上中間體化合物a5(0.09mmol,1當(dāng)量)放入etoac(5ml)中。將pd/c10％(0.05當(dāng)量)加入每種溶液中并將混合物在室溫在氫氣(3.5大氣壓)下攪拌。3小時(shí)以后加入dcm，然后將混合物過濾并在真空中濃縮以得到粗制物質(zhì)，將其通過用dcm至dcm/甲醇8:2洗脫的si-柱純化以得到下述的對(duì)應(yīng)化合物a6:將化合物29溶解在dcm中。將1m的hcl在乙醚中的溶液在0℃逐滴加入，并將溶液在攪拌下放置2小時(shí)。然后將每種溶液在真空中濃縮，以在從乙醚研磨以后得到作為鹽酸鹽的最終化合物:化合物29:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.62(br.s.,1h),8.62(br.s.,1h),8.55(d,j＝6.3hz,1h),8.21(d,j＝8.5hz,3h),8.09(br.s.,1h),7.95(br.s.,1h),7.64-7.56(m,1h),7.49(br.s.,1h),7.35-7.26(m,2h),5.36(s,1h),3.82(br.s.,2h),3.75-3.41(m,4h),3.26(br.s.,2h),3.12(br.s.,2h),2.40-2.25(m,2h),2.20-1.94(m,4h)化合物40:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.67(br.s.,1h),7.59-7.51(m,2h),7.35(d,j＝7.8hz,1h),7.30(t,j＝7.5hz,1h),7.10(d,j＝7.0hz,1h),7.05-7.00(m,1h),6.96(t,j＝7.3hz,1h),5.47-5.32(m,2h),3.63-3.52(m,3h),3.07(d,j＝11.0hz,2h),2.64(t,j＝5.9hz,2h),2.35(t,j＝5.9hz,2h),2.31-2.13(m,4h),2.06-1.93(m,2h),1.87(td,j＝6.1,12.1hz,2h)化合物46的制備按照合成途徑b，如下文中所述制備化合物46。步驟1a將2-氯異喹啉(isoquinole)b0a(3g)溶解在含有哌嗪(23.7g)和碳酸鉀(3.8g)的ch3cn(150ml)中，并將溶液加熱至回流保持48h。將溶液濃縮，用dcm稀釋，并用飽和nahco3和鹽水洗滌。然后將有機(jī)相分離，用硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)以得到1-(哌嗪-1-基)異喹啉中間體化合物b1a(3.9g,y＝94％)。lc-ms(m-h+):214.1步驟1b向式b0b的3-(boc-氨基)-1-丙醇(3.9ml)在dcm(140ml)中的溶液中加入戴斯-馬丁過碘烷(12.4g)，并將得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后將混合物用乙醚稀釋，并用1m的na2s2o3水溶液和飽和nahco3洗滌。然后將有機(jī)相分離，用硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)以得到(3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯中間體化合物b1b(3.9g,y＝定量)。lc-ms(m-h+):174.0步驟2將中間體化合物b1a(4g)溶解在dcm(75ml)和中間體化合物b1b(4.9g)中，并隨后在室溫加入5滴乙酸。10分鐘以后，還加入三乙酰氧基硼氫化鈉(6g)，并將溶液攪拌過夜。將溶液用dcm稀釋，并用1m的氫氧化鈉洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并在真空中蒸發(fā)。如下純化粗制物質(zhì)：首先用si-柱，用乙酸乙酯洗脫，然后用另一個(gè)si-柱，用dcm/乙酸乙酯/meoh7/2.5/0.5洗脫，以得到{3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯中間體化合物b2(3.5g,y＝50％)。lc-ms(m-h+)＝371.2步驟3將中間體化合物b2(3.5g)溶解在dcm(25ml)中，在0℃逐滴加入tfa(10ml)，并將溶液攪拌2小時(shí)。在真空中濃縮溶液，用甲苯和乙醚洗滌以得到作為tfa鹽的3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-1-胺中間體化合物b3(6.35g,y＝93％)。lc-ms(m-h+)＝271.2步驟4將作為tfa鹽的中間體化合物b3(1.3g)溶解在dcm(12ml)和tea(1ml)中，隨后在室溫加入一滴乙酸和[1,3]氧硫雜環(huán)戊烯并[5,4-c]吡啶-6-甲醛(150mg)，其制備如在preparationofnaphthyridinederivativesasantibacterialagents；miller,williamhenry；rouse,meaganb.；seefeld,markandrew,pctint.appl.,2006014580,2006年2月9日)中所述。10分鐘以后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(382mg)，并將溶液攪拌過夜。將溶液用dcm稀釋，并用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并在真空中蒸發(fā)。如下純化粗制物質(zhì)：首先用si-柱(nh)，用乙酸乙酯至乙酸乙酯/meoh9:1洗脫，然后用si-柱，用dcm至dcm/meoh7:3洗脫，以得到期望的化合物46,3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-n-([1,3]氧硫雜環(huán)戊烯并-[5,4-c]吡啶-6-基甲基)丙烷-1-胺(290mg,y＝28％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.10(d,j＝8.5hz,1h),8.03(s,1h),7.75(d,j＝8.0hz,1h),7.61(ddd,j＝1.3,7.0,8.1hz,1h),7.51(ddd,j＝1.3,7.0,8.3hz,1h),7.24(d,j＝5.8hz,1h),7.22(s,1h),5.74(s,2h),5.31(s,1h),3.83(s,2h),3.55-3.38(m,4h),2.82-2.68(m,6h),2.56(t,j＝7.3hz,2h),1.81(quin,j＝7.1hz,2h)化合物44、51、52、56、62、66、67、69、72、73、79、80、86、88、91、95、98、108和124的制備按照合成途徑c，如下文中所述制備化合物44、51、52、56、62、66、67、69、72、73、79、80、86、88、91、95、98、108和124。用于制備化合物51的合成方法步驟1將1,7-二氯異喹啉c0(350mg)、k2co3(390mg)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(700mg)的混合物一起放入燒瓶中，并執(zhí)行3個(gè)真空/n2的循環(huán)。加入dmso(10ml)，并將混懸液加熱至120℃和攪拌5.5h。然后將反應(yīng)物冷卻，用水稀釋，并用etoac萃取。將有機(jī)相分離，并用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥和在減壓下蒸發(fā)以得到作為棕色油的粗制物質(zhì)。將它通過snap50gsi柱純化，用混合物chex/etoac(10/0,2cv–從10/0至7/3,8cv-7/3,2cv)洗脫，以得到無色粘性膠狀物，4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯中間體化合物c1(y＝73％)。lc-ms(m-h+)＝348.3步驟2在室溫將tfa(1ml)加入中間體化合物c1(480mg)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌60分鐘。將反應(yīng)物在減壓下蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷(10ml)中2次，并在減壓下蒸發(fā)，然后將殘余物溶解在meoh(4ml)中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱(5g)上。將scx用meoh洗脫，然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到330mg稠的無色油，7-氯-1-(哌嗪-1-基)異喹啉中間體化合物c2(y＝定量)。lc-ms(m-h+)＝248.2步驟3將中間體化合物c2(325mg)、n-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(297mg),碘化鉀(109mg)和碳酸鉀(362mg)在dmf(4ml)中的混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)物在etoac(50ml)和半飽和的鹽水(50ml)之間分配。將有機(jī)相分離，然后用半飽和的鹽水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥和在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap25)上色譜分離，用50-100％的混合物a在環(huán)己烷中的溶液梯度洗脫，其中a是etoac/meoh(97:3)，以得到465mg無色粘性膠狀物,n-{3-[4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯中間體化合物c3(y＝92％)。lc-ms(m-h+)＝405.4步驟4在室溫將tfa(2ml)加入中間體化合物c3(462mg)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌60分鐘。在減壓下蒸發(fā)揮發(fā)物。將殘余物在二氯甲烷(10ml)中溶解2次并在減壓下蒸發(fā)，然后將殘余物溶解在meoh(4ml)中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱(5g)上。將scx用meoh洗脫，并然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到336mg黃色膠狀物,3-[4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-1-胺中間體化合物c4(y＝96％)。lc-ms(m-h+)＝305.3步驟5在-10℃將三氟甲烷磺酸酐(2.5ml)在二氯甲烷(10ml)中的溶液逐滴加入4-羥基-2h-色烯-2-酮中間體化合物c5(2.00g)和三乙胺(3.44ml)在二氯甲烷(60ml)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)物在-10℃攪拌2小時(shí)，然后將其溫?zé)嶂?℃并用環(huán)己烷/乙醚(3:1,100ml)稀釋。將混合物在硅膠塞上過濾，用另外的環(huán)己烷/乙醚(3:1)洗滌。將含有期望產(chǎn)物的洗液在減壓下蒸發(fā)以得到3.80g棕色固體，三氟甲磺酸-2-氧代-2h-色烯-4-基酯中間體化合物c6(y＝97％)。lc-ms(m-h+)＝295.1步驟6將中間體化合物c4(114mg)、三乙胺(70μl)和中間體化合物c6(100mg)在乙腈(4ml)中的溶液加熱至70℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將殘余物在二氯甲烷(15ml)和鹽水/碳酸氫鈉混合物(1:1,15ml)之間分配。將混合物濾過疏水玻璃料(分相器)，用二氯甲烷(10ml)洗滌。將有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物在硅膠(2xsnap10串聯(lián))上色譜分離，用10-100％的a在環(huán)己烷中的溶液梯度洗脫，其中a是meoh/etoac(20:80)，以得到63mg作為白色泡沫的4-({3-[4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物51)。將4-({3-[4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物51)(60mg)溶解在二氯甲烷(3ml)中并用1m的hcl在乙醚中的溶液(0.35ml)處理，造成沉淀。將得到的混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物與乙醚一起研磨。將固體干燥以得到69mg灰白色固體,4-({3-[4-(7-氯異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽(y＝35％)。lc-ms(m-h+)＝449.3通過分別用下述化合物替代步驟1的1,7-二氯異喹啉(c0)，以類似的方式制備化合物44、52、56、66、67、72、88、91、95、98和108?；衔镏虚g體c0最終化合物的lc-ms441-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝415.2527-氰基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝440.3563-甲基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝429.4661,3-二氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝449.3677-氟-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝433.3727-甲基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝429.4733-甲氧基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝445.4887-甲氧基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝445.4913-氟-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝433.3953-氰基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝440.3987-二甲基氨基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝458.41088-甲基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝429.4化合物44:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(br.s.,1h),8.19(d,j＝8.5hz,1h),8.15(d,j＝8.3hz,1h),8.08(d,j＝6.0hz,1h),8.00(d,j＝8.3hz,1h),7.95(t,j＝5.5hz,1h),7.85(t,j＝7.5hz,1h),7.73-7.67(m,1h),7.63-7.58(m,1h),7.57(d,j＝6.0hz,1h),7.39-7.28(m,2h),5.27(s,1h),4.23(br.s.,2h),4.00(d,j＝13.3hz,2h),3.65(d,j＝10.5hz,4h),3.50-3.34(m,4h),3.30(td,j＝4.8,9.4hz,2h),2.14(quin,j＝7.3hz,2h)化合物51:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.72(br.s.,1h),8.18(d,j＝5.5hz,1h),8.15-8.09(m,2h),8.01(d,j＝8.8hz,1h),7.89(t,j＝5.9hz,1h),7.79(dd,j＝1.9,8.7hz,1h),7.63-7.57(m,1h),7.55(d,j＝5.5hz,1h),7.38-7.28(m,2h),5.78(br.s.,1h),5.27(s,1h),3.90-3.75(m,2h),3.62(d,j＝10.0hz,2h),3.53-3.34(m,6h),3.33-3.22(m,2h),2.14(quin,j＝7.0hz,2h)化合物52:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.73(br.s.,1h),8.65(s,1h),8.30(d,j＝5.8hz,1h),8.16-8.07(m,2h),8.03(dd,j＝1.5,8.5hz,1h),7.89(t,j＝5.1hz,1h),7.69-7.52(m,2h),7.41-7.25(m,2h),5.28(s,1h),4.75(br.s.,1h),3.89(d,j＝11.5hz,2h),3.62(d,j＝9.3hz,2h),3.55-3.36(m,6h),3.35-3.17(m,2h),2.14(quin,j＝7.0hz,2h)化合物56:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.06(br.s.,2h),8.08(d,j＝8.3hz,2h),7.83(d,j＝7.8hz,2h),7.70(t,j＝7.2hz,1h),7.66-7.60(m,1h),7.59-7.50(m,1h),7.41-7.27(m,3h),5.31(s,1h),3.88(d,j＝11.0hz,2h),3.75-3.17(m,13h),2.21-2.02(m,2h)化合物72:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(氯仿-d)8.14(d,j＝5.5hz,1h),7.93(br.s.,2h),7.84(s,1h),7.71(d,j＝8.5hz,1h),7.55-7.44(m,2h),7.34-7.28(m,3h),5.25(s,1h),3.70(br.s.,4h),3.49(br.s.,2h),3.04(br.s.,4h),2.92(br.s.,2h),2.59-2.49(m,3h),2.18-2.04(m,2h)化合物73:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(br.s.,1h),8.17(d,j＝5.8hz,1h),7.97(br.s.,2h),7.76(d,j＝6.8hz,1h),7.59(br.s.,2h),7.32(br.s.,3h),6.77(br.s.,1h),5.26(br.s.,1h),3.90(br.s.,6h),3.70-3.05(m,10h),2.15(br.s.,2h)化合物88:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(br.s.,1h),8.16(d,j＝7.8hz,1h),8.00(d,j＝6.0hz,1h),7.97-7.89(m,2h),7.65-7.56(m,1h),7.56-7.45(m,2h),7.40-7.27(m,3h),5.27(s,1h),4.64(br.s.,1h),4.03-3.84(m,5h),3.73-3.52(m,4h),3.50-3.35(m,4h),3.30(br.s.,2h),2.16(quin,j＝7.2hz,2h)化合物91:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.52(br.s.,1h),8.14-8.07(m,2h),7.93(d,j＝8.3hz,1h),7.86(t,j＝5.5hz,1h),7.74(t,j＝7.5hz,1h),7.64-7.58(m,1h),7.58-7.52(m,1h),7.40-7.28(m,2h),7.15(s,1h),5.28(s,1h),3.96(d,j＝13.3hz,2h),3.68(br.s.,1h),3.63(d,j＝11.5hz,2h),3.52-3.24(m,8h),2.17-2.04(m,2h)化合物95:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.57(br.s.,1h),8.24(s,1h),8.21(d,j＝8.3hz,1h),8.09(dd,j＝8.0,13.1hz,2h),7.94-7.88(m,1h),7.88-7.80(m,2h),7.65-7.57(m,1h),7.38-7.28(m,2h),5.28(s,1h),3.98(d,j＝13.3hz,2h),3.63(d,j＝11.0hz,2h),3.55-3.45(m,2h),3.44-3.24(m,6h),2.12(quin,j＝7.1hz,2h)化合物98:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(br.s.,1h),8.14(d,j＝7.8hz,1h),7.93(d,j＝8.5hz,2h),7.78(d,j＝6.3hz,1h),7.68-7.49(m,3h),7.38-7.27(m,2h),6.96(br.s.,1h),5.28(s,1h),4.69-3.86(m,6h),3.69(d,j＝12.3hz,2h),3.52-3.35(m,4h),3.30(br.s.,2h),3.11(s,6h),2.23-2.08(m,2h)化合物108:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.90-2.27(m,2h),2.92(s,3h),3.06-4.06(m,12h),5.27(s,1h),7.18-8.01(m,8h),8.03-8.19(m,2h),10.59(br.s.,1h)化合物62的制備類似于化合物44，但是在步驟3中采用n-(3-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯替代n-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯。lc-ms(m-h+)＝401.3化合物62:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.28(br.s.,1h),8.23(d,j＝7.5hz,1h),8.19(d,j＝8.3hz,1h),8.11(d,j＝5.8hz,1h),8.04(t,j＝5.3hz,1h),7.99(d,j＝8.0hz,1h),7.83(t,j＝7.4hz,1h),7.73-7.66(m,1h),7.65-7.58(m,1h),7.56(d,j＝5.8hz,1h),7.39-7.28(m,2h),5.39(s,1h),4.86(br.s.,1h),3.99(d,j＝11.8hz,2h),3.87-3.73(m,4h),3.64(t,j＝11.4hz,2h),3.51(br.s.,4h)化合物69的制備類似于化合物44，但是在步驟6中采用1h-茚-1,3(2h)-二酮替代三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯。lc-ms(m-h+)＝399.3化合物69:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.40(t,j＝5.3hz,1h),8.10(d,j＝5.8hz,1h),8.08(d,j＝8.3hz,1h),7.87(d,j＝8.0hz,1h),7.70(t,j＝7.3hz,1h),7.63-7.55(m,2h),7.43-7.33(m,3h),7.28-7.23(m,1h),4.84(s,1h),3.39(q,j＝6.5hz,2h),3.36-3.25(m,6h),2.67(br.s.,4h),1.87(quin,j＝6.5hz,2h)化合物79的制備類似于化合物44，但是在步驟6中采用三氟甲磺酸2-氧代-6-氯-2h-色烯-4-基酯替代三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯。lc-ms(m-h+)＝449.3化合物79:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.86(br.s.,1h),8.28(d,j＝1.8hz,1h),8.17(d,j＝8.3hz,1h),8.11(d,j＝5.8hz,1h),7.97(d,j＝8.0hz,1h),7.95-7.88(m,j＝5.0,5.0hz,1h),7.81(t,j＝7.4hz,1h),7.73-7.60(m,2h),7.54(d,j＝5.8hz,1h),7.37(d,j＝9.0hz,1h),5.32(s,1h),4.31(br.s.,1h),3.94(d,j＝13.3hz,2h),3.75-3.50(m,4h),3.48-3.12(m,6h),2.25-2.03(m,2h)化合物80的制備類似于化合物44，但是在步驟6中采用三氟甲磺酸2-氧代-6-氟-2h-色烯-4-基酯替代三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯。lc-ms(m-h+)＝433.3化合物80:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(br.s.,1h),8.18(d,j＝8.3hz,1h),8.14-8.05(m,2h),7.99(d,j＝8.3hz,1h),7.92(t,j＝5.3hz,1h),7.83(t,j＝7.4hz,1h),7.74-7.65(m,1h),7.55(d,j＝6.0hz,1h),7.49(dt,j＝2.8,8.5hz,1h),7.43-7.32(m,1h),5.31(s,1h),4.72(br.s.,1h),3.98(d,j＝13.3hz,2h),3.65(d,j＝11.5hz,4h),3.48-3.35(m,4h),3.30(br.s.,2h),2.24-2.06(m,2h)化合物86的制備類似于化合物44，但是在步驟6中采用三氟甲磺酸2-氧代-5,6,7,8-四氫-2h-色烯-4-基酯替代三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯。lc-ms(m-h+)＝419.4化合物86:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.16(br.s.,1h),8.19(d,j＝8.3hz,1h),8.07(d,j＝6.0hz,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.94-7.79(m,1h),7.77-7.66(m,1h),7.57(d,j＝5.8hz,1h),6.80(br.s.,1h),4.92(s,1h),4.01(d,j＝13.3hz,1h),4.06(br.s.,3h),3.68(d,j＝10.0hz,1h),3.62(d,j＝12.0hz,2h),3.39(d,j＝10.0hz,2h),3.30-3.12(m,4h),2.42-2.32(m,2h),2.30-2.17(m,2h),2.03(quin,j＝7.0hz,2h),1.78-1.53(m,4h)分別使用4-羥基-6-氯-2h-色烯-2-酮、4-羥基-6-氟-2h-色烯-2-酮和4-羥基-5,6,7,8-四氫-2h-色烯-2-酮，用步驟5的操作制備三氟甲磺酸2-氧代-6-氯-2h-色烯-4-基酯、三氟甲磺酸2-氧代-6-氟-2h-色烯-4-基酯和三氟甲磺酸-2-氧代-5,6,7,8-四氫-2h-色烯-4-基酯?；衔?24的制備在0℃，向4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物44)(110mg,0.265mmol,1當(dāng)量)在thf(5ml)中的溶液中，加入ch3i(33μl,0.53mmol,2當(dāng)量)。使混合物溫度自發(fā)地升高至室溫，然后加熱至70℃保持2天。通過真空除去溶劑，并將粗制物質(zhì)通過制備型hplc-ms純化以得到4-(異喹啉-1-基)-1-甲基-1-{3-[(2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]丙基}哌嗪-1-鎓碘化物(化合物124)(52mg,y＝32％)。lc-ms(m-h+)＝429.21hnmr(300mhz,dmso-d6+d2o)δ＝8.20-8.09(m,2h),8.03(dd,j＝1.3,8.0hz,1h),7.95(d,j＝7.6hz,1h),7.77(dt,j＝1.0,7.5hz,1h),7.72-7.58(m,2h),7.52(d,j＝5.8hz,1h),7.41-7.30(m,2h),5.33(s,1h),3.87-3.58(m,10h),3.42(t,j＝6.6hz,2h),3.22(s,3h),2.26-2.05(m,2h)?；衔?4的制備通過用如下所述制備的4-氯-3,4-二氫-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮中間體化合物d1替代步驟6的三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯，將化合物64制備為化合物44。lc-ms(m-h+)＝416.3用于制備化合物64的合成方法在室溫，將五氯化磷(293mg)加入4-羥基-1,3-苯并噁嗪-2-酮中間體化合物d0(100mg)在三氯氧化磷(v)(0.335ml)中的攪拌混合物中。將反應(yīng)混合物加熱至110℃并攪拌4h。將反應(yīng)混合物冷卻并在減壓下蒸發(fā)。然后，將殘余物溶解在甲苯中并在減壓下濃縮以除去多余的pocl3，進(jìn)行3次。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上色譜分離，用etoac洗脫，以得到108mg4-氯-3,4-二氫-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮中間體化合物d1(y＝99％)。化合物64:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.62(br.s.,1h),9.49(br.s.,1h),8.24(d,j＝8.0hz,1h),8.17(d,j＝8.3hz,1h),8.11(d,j＝6.0hz,1h),7.97(d,j＝8.0hz,1h),7.81(t,j＝7.7hz,1h),7.77-7.71(m,1h),7.71-7.64(m,1h),7.54(d,j＝6.0hz,1h),7.37(t,j＝7.7hz,1h),7.32(d,j＝8.5hz,1h),4.11(br.s.,1h),3.95(d,j＝11.8hz,2h),3.66(q,j＝6.1hz,4h),3.56(br.s.,2h),3.41(br.s.,2h),3.31(br.s.,2h),2.16(quin,j＝7.4hz,2h)化合物61、63、65、66、67、72、88和100的制備按照合成途徑e，如下文中所述制備化合物61、63、65、66、67、72、88和100。用于制備化合物61的合成方法步驟1將4-[3-(1,3-二氧代異吲哚-2-基)丙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯中間體化合物e0(1.9g)溶解在甲胺(33％在絕對(duì)乙醇中,20ml)中并在40℃加熱4h。將溶劑蒸發(fā)并將殘余物溶解在乙醚中和過濾。將濾液蒸發(fā)以得到作為無色油的4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯中間體化合物e1(1.1g,y＝89％)。lc-ms(m-h+)＝244.3步驟2將中間體化合物e1(1.1g)、三乙胺(0.674ml)和三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯(1.2g)(如在化合物51的制備的步驟5中所述制備)在乙腈(20ml)中的溶液加熱至70℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將殘余物在二氯甲烷和鹽水/碳酸氫鈉混合物(1:1)之間分配。將混合物濾過疏水玻璃料(分相器)，用二氯甲烷洗滌。將有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物在硅膠(snap50)上色譜分離，用etoac在環(huán)己烷中的梯度洗脫，以得到700mg4-{3-[(2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]丙基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯中間體化合物e2(700mg,y＝44％)。lc-ms(m-h+)＝388.3步驟3在室溫，將tfa(2ml)加入中間體化合物e2(700mg)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌20分鐘。將殘余物在減壓下蒸發(fā)，溶解在meoh中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱上。將scx用meoh洗脫，并然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到4-{[3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基}色烯-2-酮中間體化合物e3(456mg)(y＝88％)。lc-ms(m-h+)＝288.3步驟4將中間體化合物e3(40mg)、8-氯-1,7-萘啶(19mg)和碳酸鉀(23mg)在dmso(1ml)中的混合物在110℃攪拌過夜。將混合物用etoac稀釋。將有機(jī)相用碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap10)上色譜分離，用a在etoac中的0-100％的溶液梯度洗脫，其中a是meoh/etoac(10:90)，以得到20mg期望產(chǎn)物4-({3-[4-(1,7-萘啶-8-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物61)。lc-ms(m-h+)＝416.3將4-({3-[4-(1,7-萘啶-8-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮溶解在二氯甲烷(1.5ml)中并用1m的hcl在乙醚中的溶液(0.12ml)處理，造成沉淀。將得到的混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物與乙醚一起研磨。將固體干燥以得到14.8mg作為黃色固體的4-({3-[4-(1,7-萘啶-8-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽。lc-ms(m-h+)＝416.3化合物61:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.56(br.s.,1h),8.91(dd,j＝1.8,4.3hz,1h),8.35(dd,j＝1.8,8.3hz,1h),8.15-8.04(m,2h),7.85(t,j＝5.4hz,1h),7.76(dd,j＝4.0,8.3hz,1h),7.64-7.55(m,1h),7.43-7.25(m,3h),5.26(s,1h),5.04(d,j＝14.1hz,2h),3.71-3.48(m,6h),3.46-3.35(m,2h),3.34-3.16(m,4h),2.11(quin,j＝7.2hz,2h)還通過分別用下述化合物替代步驟4的8-氯-1,7-萘啶，以類似的方式制備化合物63、65、66、67、72、88和100。化合物替代化合物lc-ms634-氯-2h-色烯-2-酮lc-ms(m-h+)＝432.4655-氯-1,6-萘啶lc-ms(m-h+)＝416.3661,3-二氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝449.3677-氟-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝433.3727-甲基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝429.4887-甲氧基-1-氯異喹啉lc-ms(m-h+)＝445.41001-氯-7-氟異喹啉-2-鎓-2-醇化物lc-ms(m-h+)＝449.3化合物63:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.74(br.s.,1h),8.10(d,j＝7.8hz,1h),7.91-7.82(m,1h),7.73(d,j＝7.5hz,1h),7.61(q,j＝7.7hz,2h),7.40(d,j＝8.0hz,1h),7.38-7.28(m,3h),5.87(s,1h),5.27(s,1h),3.78(d,j＝9.0hz,2h),3.59(br.s.,7h),3.45-3.22(m,8h),2.18-2.04(m,2h)化合物65:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.10(br.s.,1h),9.06(dd,j＝1.6,4.1hz,1h),8.54(d,j＝8.3hz,1h),8.35(d,j＝6.0hz,1h),8.07(d,j＝8.0hz,1h),7.81(t,j＝5.5hz,1h),7.68-7.57(m,2h),7.53(d,j＝6.0hz,1h),7.40-7.28(m,2h),5.28(s,1h),3.92(d,j＝11.5hz,2h),3.63(d,j＝10.0hz,2h),3.37-3.18(m,8h),2.18-2.01(m,2h)化合物66:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(br.s.,1h),8.11(d,j＝8.3hz,1h),8.05(d,j＝8.3hz,1h),7.91(d,j＝7.8hz,1h),7.85-7.72(m,2h),7.69-7.56(m,3h),7.41-7.28(m,2h),5.29(s,1h),3.96(d,j＝9.3hz,2h),3.64(d,j＝6.5hz,2h),3.48-3.34(m,8h),2.16-2.01(m,2h)化合物67:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.27(br.s.,1h),8.16(d,j＝5.8hz,1h),8.11-8.03(m,2h),7.88-7.80(m,2h),7.70(dt,j＝2.5,8.8hz,1h),7.64-7.58(m,1h),7.56(d,j＝5.8hz,1h),7.39-7.26(m,2h),5.29(s,1h),3.81(d,j＝12.0hz,2h),3.68-3.58(m,2h),3.57-3.22(m,9h),2.12(quin,j＝7.6hz,2h)化合物72:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(氯仿-d)8.14(d,j＝5.5hz,1h),7.93(br.s.,2h),7.84(s,1h),7.71(d,j＝8.5hz,1h),7.55-7.44(m,2h),7.34-7.28(m,3h),5.25(s,1h),3.70(br.s.,4h),3.49(br.s.,2h),3.04(br.s.,4h),2.92(br.s.,2h),2.59-2.49(m,3h),2.18-2.04(m,2h)化合物88:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(br.s.,1h),8.16(d,j＝7.8hz,1h),8.00(d,j＝6.0hz,1h),7.97-7.89(m,2h),7.65-7.56(m,1h),7.56-7.45(m,2h),7.40-7.27(m,3h),5.27(s,1h),4.64(br.s.,1h),4.03-3.84(m,5h),3.73-3.52(m,4h),3.50-3.35(m,4h),3.30(br.s.,2h),2.16(quin,j＝7.2hz,2h)化合物100:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.97(br.s.,1h),8.12(d,j＝7.3hz,2h),8.07(dd,j＝5.6,8.9hz,1h),8.00-7.81(m,3h),7.65-7.52(m,2h),7.39-7.29(m,2h),5.28(s,1h),4.31-3.71(m,3h),3.57(d,j＝11.3hz,2h),3.52-3.35(m,4h),3.34-3.24(m,2h),3.13(br.s.,2h),2.12(quin,j＝7.3hz,2h)下面描述了1-氯-7-氟異喹啉-2-鎓-2-醇化物(在化合物100的制備中使用的中間體x0)的合成。將3-氯過氧苯甲酸(0.10g)加入1-氯-7-氟異喹啉x0(50mg)在無水二氯甲烷(1.5ml)中的溶液中。將混合物在室溫?cái)嚢?天。然后將混合物用二氯甲烷稀釋，并用1mnaoh水溶液(2x)和鹽水洗滌。將有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空中濃縮以得到作為白色固體的粗制的1-氯-7-氟異喹啉-2-鎓-2-醇化物(0.049g,y＝80％)。該產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。lc-ms(m-h+)＝198.0化合物54、55、77、78和99的制備按照合成途徑f，如下文中所述制備化合物54、55、77、78和99。用于制備化合物54和55的合成方法步驟1在室溫，將三乙酰氧基硼氫化鈉(597mg)加入1-(哌嗪-1-基)異喹啉中間體化合物f0(200mg)(如在化合物46的制備的步驟1中所述制備)和n-(3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(174mg)在二氯甲烷(5ml)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)物用二氯甲烷(15ml)稀釋并用水(20ml)淬滅。將混合物濾過疏水玻璃料(分相器)并將有機(jī)相用鹽水和碳酸氫鈉溶液的混合物(1:1,20ml)洗滌，然后濾過疏水玻璃料(分相器)。將有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap25)上色譜分離，用a在環(huán)己烷中的梯度洗脫，其中a是meoh/etoac(3:97)，以得到84mg作為黃色膠狀物的順式-{3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁基}-氨基甲酸叔丁酯(y＝23％)和175mg作為白色泡沫的反式-{3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁基}-氨基甲酸叔丁酯(中間體化合物f1)(y＝49％)，二者都具有l(wèi)c-ms(m-h+)＝383.3。已經(jīng)使用反式中間體化合物f1進(jìn)行下述步驟以便得到化合物55?？梢允褂庙樖街虚g體化合物f1重復(fù)相同步驟以便得到化合物54。步驟2在室溫，將tfa(1ml)加入反式中間體化合物f1(175mg)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌60分鐘。在減壓下蒸發(fā)揮發(fā)物。將殘余物在二氯甲烷(5ml)中溶解2次并在減壓下蒸發(fā)。然后將殘余物溶解在meoh(2ml)中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱(1g)上。將scx用meoh洗脫，然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到127mg作為無色粘性油的反式-3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁胺中間體化合物f2(y＝98％)。lc-ms(m-h+)＝283.2步驟3將反式中間體化合物f2(120mg)、三乙胺(81μl)和三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯(114mg)(如在化合物51的制備的步驟5中所述制備)在乙腈(4ml)中的溶液加熱至70℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并過濾，用乙腈(2x1ml)洗滌固體。將固體通過硅膠上的色譜法(2xsnap10串聯(lián))進(jìn)一步純化，用meoh在二氯甲烷中的1-10％的梯度洗脫，以得到148mg作為白色泡沫的反式-4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物55)(y＝79％)。lc-ms(m-h+)＝427.4將反式-4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁基}氨基)-2h-色烯-2-酮溶解在二氯甲烷(5ml)和最小量的meoh中，并用1m的hcl在乙醚中的溶液(0.87ml)處理，造成沉淀。將得到的混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物與乙醚一起研磨。將固體干燥以得到152mg作為白色固體的反式-4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]環(huán)丁基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽(y＝79％)。lc-ms(m-h+)＝427.4。化合物551hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm2.55-2.69(m,2h),2.89-3.05(m,2h),3.19-3.37(m,2h),3.58-3.79(m,4h),3.94-4.10(m,3h),4.31(br.s.,1h),4.98(s,1h),7.30-7.39(m,2h),7.55-7.65(m,2h),7.72(t,j＝7.58hz,1h),7.82-7.89(m,1h),7.94(br.s.,1h),8.01(d,j＝7.60hz,1h),8.06-8.13(m,1h),8.17-8.27(m,2h),11.84(br.s.,1h)?；衔?4lc-ms(m-h+)＝427.4。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm2.60-2.70(m,2h),2.83-2.94(m,2h),3.27-3.38(m,2h),3.56(d,j＝11.74hz,2h),3.60-3.75(m,3h),3.86-3.96(m,1h),4.04(d,j＝12.23hz,2h),5.10(s,1h),7.30-7.38(m,2h),7.55-7.64(m,2h),7.72(t,j＝7.58hz,1h),7.86(t,j＝7.34hz,1h),7.97-8.04(m,2h),8.08(d,j＝6.36hz,1h),8.17-8.27(m,2h),11.85(br.s.,1h)。通過用7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉替代步驟1的1-(哌嗪-1-基)異喹啉，以類似的方式制備化合物99(y＝50％)lc-ms(m-h+)＝401.3。化合物99:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.82(br.s.,1h),9.37(d,j＝5.8hz,1h),8.29(d,j＝7.0hz,1h),8.18(d,j＝5.8hz,1h),8.08(dd,j＝5.8,9.0hz,1h),7.87(dd,j＝2.5,10.3hz,1h),7.79-7.68(m,2h),7.58(d,j＝5.8hz,1h),7.39(t,j＝8.0hz,1h),7.33(d,j＝8.3hz,1h),4.96(br.s.,1h),4.78(br.s.,1h),4.01(d,j＝7.3hz,1h),3.86(d,j＝12.3hz,2h),3.65(d,j＝10.8hz,2h),3.47-3.17(m,4h),3.02-2.81(m,2h),2.74-2.57(m,2h)化合物77和78的制備。以化合物55和54的類似的方式制備化合物77和78，但是在步驟1中，使用具有下式(ii)的n-(3-氧代環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯替代n-(3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。兩種化合物都具有l(wèi)c-ms(m-h+)＝441.4?；衔?7:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.51(br.s.,1h),8.43(d,j＝7.3hz,1h),8.20(d,j＝8.5hz,1h),8.12(d,j＝5.8hz,1h),7.99(d,j＝8.3hz,1h),7.83(t,j＝7.7hz,1h),7.75-7.66(m,2h),7.65-7.51(m,2h),7.37-7.26(m,2h),5.25(s,1h),4.68(br.s.,1h),4.17-4.05(m,1h),3.97(d,j＝11.5hz,2h),3.81-3.65(m,3h),3.65-3.51(m,2h),3.50-3.35(m,2h),2.72-2.60(m,1h),2.27-2.08(m,3h),2.06-1.91(m,2h)化合物78:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.27(br.s.,1h),8.19(t,j＝7.8hz,2h),8.11(d,j＝6.0hz,1h),7.98(d,j＝8.0hz,1h),7.82(t,j＝7.5hz,1h),7.73-7.65(m,1h),7.64-7.58(m,1h),7.55(d,j＝6.0hz,1h),7.47(d,j＝6.3hz,1h),7.39-7.25(m,2h),5.24(s,1h),4.84(br.s.,1h),4.25-4.13(m,1h),4.01-3.92(m,2h),3.91-3.81(m,1h),3.74-3.64(m,2h),3.58(t,j＝12.5hz,2h),3.49-3.32(m,2h),2.48-2.40(m,1h),2.37-2.14(m,3h),2.08-1.95(m,1h),1.94-1.81(m,1h)如下制備式(ii)的n-(3-氧代環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯。步驟1a在0℃將戴斯-馬丁過碘烷(2.53g)分批加入式(i)的(3-羥基環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(1g)在二氯甲烷(26ml)中的溶液中。完全加入以后，將反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，然后將其溫?zé)嶂潦覝夭嚢?8小時(shí)。將反應(yīng)混合物用50/50的飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和硫代硫酸鈉水溶液淬滅。將水層用二氯甲烷萃取3次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并在真空中濃縮。將殘余物通過快速柱色譜法在硅膠上純化，用chex至chex/乙酸乙酯1:1洗脫，以得到980mg中間體化合物，即式(ii)的(3-氧代環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(y＝99％)。lc-ms(m-h+)＝200.1?；衔?9、93、94、102、103、104、106的制備按照合成途徑g，如下文中所述制備化合物59、93、94、102、103、104、106。用于制備化合物59的合成方法步驟1將1-(哌嗪-1-基)異喹啉,中間體化合物g0(150mg)(如在化合物61的制備的步驟1中所述制備)和2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基甲基)-2,3-二氫-1h-異吲哚-1,3-二酮(136mg)在ch3cn(3ml)中的混合物在搖動(dòng)下加熱至60℃保持2天。將反應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物在硅膠(snap25)上色譜分離，用etoac在環(huán)己烷中的50-100％的梯度洗脫，以得到203mg作為白色粘性泡沫的中間體化合物2-{2-羥基-3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}-2,3-二氫-1h-異吲哚-1,3-二酮，中間體化合物g1(y＝73％)。lc-ms(m-h+)＝417.3步驟2將中間體化合物g1(202mg)溶解在甲胺的乙醇溶液(5ml,33％的在etoh中的溶液)中并加熱至50℃保持2小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將殘余物與乙醚/etoac(1:1,～10ml)一起研磨。將混合物過濾，將固體用小量相同溶劑混合物洗滌。將殘余物加載到scx柱(1g)上并用meoh洗脫，并然后用2m的nh3在meoh中的溶液洗脫。收集堿性級(jí)分以得到125mg作為無色粘性膠狀物的1-氨基-3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇,中間體化合物g2(y＝90％)。lc-ms(m-h+)＝287.2步驟3將中間體化合物g2(123mg)、三乙胺(82μl)和三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯(115mg)(如在化合物27的制備的步驟1中所述制備)在乙腈(4ml)中的溶液加熱至60℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將殘余物在二氯甲烷(20ml)和鹽水/碳酸氫鈉混合物(1:1,20ml)之間分配。將混合物濾過疏水玻璃料(分相器)，用二氯甲烷(10ml)洗滌。將有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物在硅膠(snap25)上色譜分離，用meoh在二氯甲烷中的1-10％的梯度洗脫，以得到113mg作為無色泡沫的期望產(chǎn)物4-({2-羥基-3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物59)的外消旋混合物。lc-ms(m-h+)＝431.3。將化合物59溶解在二氯甲烷(3ml)和最小量的meoh中并用1m的hcl在乙醚中的溶液(0.66ml)處理，造成沉淀。將得到的混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物與乙醚一起研磨。將固體干燥以得到117mg作為灰白色固體的4-({2-羥基-3-[4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽(y＝60％)。lc-ms(m-h+)＝431.3化合物59:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.23(br.s.,1h),8.28-8.04(m,3h),8.03-7.75(m,3h),7.74-7.45(m,3h),7.40-7.26(m,2h),6.06(br.s.,1h),5.36(s,1h),4.76(br.s.,1h),4.39(br.s.,1h),3.95(br.s.,2h),3.82-3.42(m,7h),3.40-3.17(m,3h)通過使用手性制備型hplc-ms，拆分得到化合物93和94，即，化合物59的r和s立體異構(gòu)體。二者都具有l(wèi)c-ms(m-h+)＝431.3?；衔?3:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.89(br.s.,1h),8.18-8.06(m,3h),7.94(d,j＝8.0hz,1h),7.85(t,j＝5.9hz,1h),7.76(t,j＝7.8hz,1h),7.69-7.57(m,2h),7.49(d,j＝5.8hz,1h),7.40-7.29(m,2h),6.01(br.s.,1h),5.38(s,1h),4.33(d,j＝7.8hz,1h),4.19-3.77(m,4h),3.70(br.s.,1h),3.61(d,j＝10.3hz,1h),3.54-3.31(m,6h),3.30-3.19(m,1h)化合物94:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.89(br.s.,1h),8.19-8.06(m,3h),7.94(d,j＝8.3hz,1h),7.85(t,j＝6.0hz,1h),7.76(t,j＝7.4hz,1h),7.68-7.58(m,2h),7.49(d,j＝5.8hz,1h),7.39-7.29(m,2h),6.01(br.s.,1h),5.38(s,1h),4.43-4.24(m,1h),3.96-3.81(m,2h),3.64(br.s.,3h),3.52-3.16(m,8h)通過用7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉替代步驟1的1-(哌嗪-1-基)異喹啉，以類似的方式制備化合物102和103。二者都具有l(wèi)c-ms(m-h+)＝449.1。化合物102:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.23(br.s.,1h),8.19(d,j＝8.0hz,1h),8.14(d,j＝5.8hz,1h),8.07(dd,j＝5.8,9.0hz,1h),7.94(t,j＝5.5hz,1h),7.85(dd,j＝2.3,10.3hz,1h),7.72(dt,j＝2.5,8.8hz,1h),7.65-7.52(m,2h),7.40-7.26(m,2h),5.36(s,1h),4.65-3.17(m,15h)化合物103:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ＝10.17(br.s.,1h),8.18(d,j＝7.8hz,1h),8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.07(dd,j＝5.6,8.9hz,1h),7.92(t,j＝5.7hz,1h),7.84(d,j＝10.3hz,1h),7.71(dt,j＝2.3,8.8hz,1h),7.64-7.59(m,1h),7.56(d,j＝6.0hz,1h),7.39-7.30(m,2h),5.37(s,1h),4.51-3.93(m,3h),3.82(t,j＝13.0hz,2h),3.71(d,j＝10.8hz,1h),3.61(d,j＝10.8hz,1h),3.55-3.19(m,8h)。通過用4-氯-3,4-二氫-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(如在化合物64的制備中所述制備)替代步驟3的三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯，以與化合物103和102類似的方式制備化合物104和106。二者都具有l(wèi)c-ms(m-h+)＝450.3化合物104:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.05(br.s.,1h),9.41(br.s.,1h),8.27(br.s.,1h),8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.05(dd,j＝5.6,8.7hz,1h),7.82(d,j＝10.3hz,1h),7.78-7.64(m,2h),7.55(d,j＝5.8hz,1h),7.43-7.25(m,2h),4.51-4.31(m,1h),4.07-3.31(m,13h),3.29-3.17(m,1h)化合物106:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.94(br.s.,1h),9.38(t,j＝5.4hz,1h),8.25(d,j＝7.8hz,1h),8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.06(dd,j＝5.6,8.9hz,1h),7.82(dd,j＝2.1,10.2hz,1h),7.77-7.72(m,1h),7.69(dt,j＝2.8,8.8hz,1h),7.55(d,j＝5.8hz,1h),7.37(t,j＝7.7hz,1h),7.33(d,j＝8.3hz,1h),4.45-4.35(m,j＝7.0hz,1h),3.87-3.67(m,5h),3.66-3.57(m,3h),3.55-3.31(m,5h),3.24(t,j＝11.4hz,1h)化合物90的制備按照合成途徑i，如下文中所述制備化合物90。步驟1將1-氯異喹啉,中間體化合物i0(905mg)溶解在ch3cn(72ml)中。加入碳酸鉀(796mg)，隨后加入哌嗪-2-甲酸甲酯二鹽酸鹽(1.8g)。將混合物在100℃攪拌7天。加入dcm，并將混合物用水洗滌。將有機(jī)相分離，干燥并真空蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用chex/乙酸乙酯3:7至乙酸乙酯/meoh9:1洗脫，以得到570mg4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酸甲酯,中間體化合物i1(y＝38％)。lc-ms(m-h+)＝272.2。步驟2將中間體化合物i1(570mg)、n-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(475mg)、碘化鉀(174mg)和碳酸鉀(579mg)在dmf(20ml)中的混合物在60℃攪拌過夜。將反應(yīng)物在etoac和半飽和的鹽水之間分配。將有機(jī)相分離，然后用半飽和的鹽水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap50)上色譜分離，用etoac在環(huán)己烷中的30-100％的梯度洗脫，以得到470mg1-{3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基}-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酸甲酯,中間體化合物i2(y＝52％)。lc-ms(m-h+)＝429.4。步驟3將中間體化合物i2(200mg)溶解在thf(2ml)中，將混合物冷卻至0℃，并在n2氣氛下逐滴加入2m的硼氫化鋰在thf中的溶液(0.259ml)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，冷卻至0℃并用水淬滅。加入乙酸乙酯并將有機(jī)相用鹽水洗滌。將溶劑真空蒸發(fā)以得到粗制物質(zhì)，將其通過si-柱(nh)純化，用環(huán)己烷至乙酸乙酯洗脫，以得到102mgn-{3-[2-(羥基甲基)-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯,中間體化合物i3(y＝54％)。lc-ms(m-h+)＝401.4步驟4將中間體化合物i3(100mg)溶解在dcm(5ml)中，冷卻至0℃，并逐滴加入tfa(1ml)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將溶劑真空除去并將粗制物通過scx柱純化以得到70mg1-(3-氨基丙基)-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酰胺中間體化合物i4(y＝93％)。lc-ms(m-h+)＝301.3步驟5將中間體化合物i4(70mg)、三乙胺(0.726ml)和三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯(62mg)在乙腈(2ml)中的溶液加熱至70℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。將殘余物通過si-柱(nh)純化，用環(huán)己烷至乙酸乙酯洗脫，以得到40mg期望產(chǎn)物4-({3-[2-(羥基甲基)-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物90)。lc-ms(m-h+)＝445.4將該產(chǎn)物溶解在dcm中，冷卻至0℃，并加入1m的hcl在et2o中的溶液(3當(dāng)量)。30分鐘以后，將溶液在真空中蒸發(fā)并與et2o一起研磨以得到28mg4-({3-[2-(羥基甲基)-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽。lc-ms(m-h+)＝445.4化合物90:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.92(br.s.,1h),8.21-8.04(m,3h),7.95(d,j＝8.0hz,1h),7.87(t,j＝5.8hz,1h),7.77(t,j＝7.5hz,1h),7.69-7.57(m,2h),7.51(d,j＝5.8hz,1h),7.37-7.27(m,2h),5.30(s,1h),4.12(br.s.,2h),3.98-3.83(m,3h),3.77(d,j＝12.3hz,1h),3.67(br.s.,1h),3.56(br.s.,3h),3.49-3.36(m,4h),3.31(br.s.,1h),2.22-2.00(m,2h)化合物105的制備按照合成途徑l，如下文中所述制備化合物105。步驟1在0℃，將3-氯過氧苯甲酸(26mg)加入4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)色烯-2-酮l0(化合物67)(60mg)在無水二氯甲烷(3ml)中的溶液中。將混合物在0℃攪拌。然后將混合物用二氯甲烷稀釋，并用1m的naoh水溶液(2x)和鹽水洗滌。將有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空中濃縮。將殘余物(59mg)通過快速色譜法(biotagekp-sil10gsnap柱,洗脫液a:二氯甲烷,洗脫液b:二氯甲烷/meoh80/20,梯度a/b在15cv中從90/10至0/100，然后在0/100的5cv，級(jí)分大小9ml)純化以得到(0.054g)期望產(chǎn)物4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)-1-氧代哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮(化合物105)。lc-ms(m-h+)＝449.3。將該化合物(29.5mg)溶解在二氯甲烷中并在室溫加入1m的hcl在乙醚中的溶液(0.14ml,2當(dāng)量)。將如此得到的混合物在氮?dú)庀聺饪s，并將殘余物與乙醚(2x)一起研磨以得到作為黃色固體的4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)-1-氧代哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽(0.028g,y＝52％)。lc-ms(m-h+)＝449.3化合物105:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.44(br.s.,1h),8.17(d,j＝5.8hz,1h),8.12(d,j＝7.5hz,1h),8.08(dd,j＝5.8,9.0hz,1h),7.87(d,j＝7.8hz,2h),7.71(dt,j＝2.5,8.8hz,1h),7.64-7.54(m,2h),7.39-7.27(m,2h),5.30(s,1h),4.18-3.73(m,8h),3.68-3.55(m,2h),3.45(q,j＝6.4hz,2h),2.26(quin,j＝7.0hz,2h)化合物109的制備按照合成途徑m，如下文中所述制備化合物109。步驟1將裝有1-氯異喹啉,中間體化合物m0(2.2g)和n-boc-1,2,3,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯(4g)的燒瓶置于氮?dú)庀?。加入dme(80ml)和etoh(24ml)以得到溶液。加入磷酸二氫鉀(1.2g)和磷酸三鉀(1.9mg)在水(40ml)中的溶液。將混合物通過幾個(gè)真空/n2循環(huán)脫氧，然后加入pdcl2(dbpf)(548mg)。然后將得到的反應(yīng)混合物在60℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物在減壓下部分地蒸發(fā)以除去揮發(fā)物，然后將殘余物在半飽和的碳酸氫鈉溶液和etoac之間分配。將水相用etoac進(jìn)一步萃取。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap100)上色譜分離，用20-80％etoac在環(huán)己烷中的溶液梯度洗脫以得到2.8g4-(異喹啉-1-基)-3,6-二氫-2h-吡啶-1-甲酸叔丁酯,中間體化合物m1(y＝67％)。lc-ms(m-h+)＝311.5。步驟2在室溫，向中間體化合物m1(2.8g)在etoh(90ml)中的溶液中加入甲酸銨(3.9g)和pd(oh)2/c(644mg)。將混合物加熱至80℃并在該溫度攪拌1小時(shí)，然后冷卻至室溫并在硅藻土墊上過濾，用etoh洗滌。在減壓下消除溶劑。將殘余物在硅膠(snap100)上色譜分離，用10-80％etoac在環(huán)己烷中的溶液梯度洗脫，以得到1.66g4-(異喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯,中間體化合物m2(y＝59％)。lc-ms(m-h+)＝313.3步驟3在室溫，將tfa(2ml)加入中間體化合物m2(658mg)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌20分鐘。將殘余物在減壓下蒸發(fā)，溶解在meoh中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱上。將scx用meoh洗脫，并然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到1-(哌啶-4-基)異喹啉,中間體化合物m3(447mg,y＝定量)。lc-ms(m-h+)＝213.2步驟4將中間體化合物m3(447mg)、n-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(476mg)、碘化鉀(174mg)和碳酸鉀(580mg)在dmf(10ml)中的混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)物在etoac和半飽和的鹽水之間分配。將有機(jī)相分離，然后用半飽和的鹽水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠(snap25)上色譜分離，用30-100％的a在etoac中的溶液梯度洗脫，其中a是meoh/etoac(20:80)，以得到665mg{3-[4-(異喹啉-1-基)哌啶-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯,中間體化合物m4(y＝85％)。lc-ms(m-h+)＝370.4步驟5將中間體化合物m4(665mg)溶解在dcm(100ml)中并在0℃冷卻。加入tfa(18ml)并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^夜。在真空下濃縮溶液，并將殘余物加載到5gscx上和用meoh/nh31m在meoh中的溶液洗脫。將在meoh中的級(jí)分再次加載到5gscx上，并用meoh/nh31m在meoh中的溶液洗脫。將在nh3中的級(jí)分合并以得到作為淺黃色油的3-[4-(異喹啉-1-基)哌啶-1-基]丙烷-1-胺中間體化合物m5(410mg)(y＝85％)。lc-ms(m-h+)＝270.4步驟6將中間體化合物m5(167mg)、tea(130μl)和4-氯-2h-色烯-2-酮(100mg)在ch3cn(5ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將溶液加熱至40℃，攪拌1.5小時(shí)，然后冷卻至室溫并攪拌過夜。次日，將溶液加熱至60℃并攪拌2小時(shí)，然后停止反應(yīng)。將反應(yīng)溶液濃縮并將殘余物溶解在etoac中，用nahco3和鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮以得到作為黃色泡沫的粗產(chǎn)物(237mg)。將這樣的粗產(chǎn)物用25gsi柱純化，用混合物dcm/meoh(從10/0至9/1)洗脫以得到作為白色泡沫的期望產(chǎn)物4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌啶-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮110mg(化合物109)。lc-ms(m-h+)＝414.4將83mg化合物109溶解在冷卻至0℃的dcm中，然后加入1m的hcl在et2o中的溶液(0.6mmol,600μl)。15分鐘以后，將溶液用n2蒸發(fā)并與et2o一起研磨以得到作為淺黃色固體的4-({3-[4-(異喹啉-1-基)哌啶-1-基]丙基}氨基)-2h-色烯-2-酮鹽酸鹽(123mg,y＝44％)。lc-ms(m-h+)＝414.41hnmr(500mhz,氯仿-d)δppm1.65(br.s.,2h),1.92-2.15(m,4h),2.31(br.s.,2h),2.45(d,j＝12.23hz,2h),2.76(br.s.,2h),3.27-3.50(m,4h),3.62-3.78(m,1h),5.22(s,1h),7.32(d,j＝8.80hz,1h),7.46-7.56(m,2h),7.59(d,j＝5.38hz,1h),7.63(t,j＝8.30hz,1h),7.70(t,j＝7.34hz,1h),7.88(d,j＝7.83hz,1h),7.91-8.01(m,1h),8.22(d,j＝7.83hz,2h),8.54-8.72(m,2h)?；衔?25、126和127的制備按照合成途徑n，如在下文中描述的制備化合物125、126和127。用于制備化合物125的合成方法步驟1將吡咯烷(22ml)加入四氫-4h-吡喃-4-酮,中間體化合物n0(10g)在甲苯(120ml)中的溶液中。將混合物用dean-stark設(shè)備(浴溫度120-130℃)回流加熱。1小時(shí)30分鐘以后，反應(yīng)結(jié)束，因?yàn)橛^察到化學(xué)計(jì)量的量的水的形成。然后將混合物在真空中濃縮以得到棕色油1-(3,6-二氫-2h-吡喃-4-基)吡咯烷,中間體化合物n1(17.5g)。將所述化合物不經(jīng)進(jìn)一步純化地用在以下合成中。步驟2在0℃，向中間體化合物n1(9.16g)在1,4-二噁烷(60ml)中的溶液中加入乙酸酐(12.4ml)，并將得到的混合物在氮?dú)庀略谑覝財(cái)嚢柽^夜。加入水(15ml)，將得到的混合物回流1小時(shí)，然后冷卻至室溫，并真空濃縮。加入水(60ml)，并將水相用etoac(60ml)萃取2次。將合并的有機(jī)萃取物用5％w/whcl水溶液(60ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥并真空濃縮以得到7.6g粗制物質(zhì)。將該粗制物質(zhì)通過快速色譜法(biotagekp-sil340gsnap柱,梯度為在10cv中從90/10至20/80的環(huán)己烷/乙酸乙酯，級(jí)分大小100ml)純化以得到作為無色油的2-乙?；蹼s環(huán)己烷-4-酮,中間體化合物n2(1.34g,y＝16％)。lc-ms(m-h+)＝143.0步驟3將中間體化合物n2(1.34g)在thf(47ml)中的溶液冷卻至-78℃并逐滴加入lihmds(28.2ml)。在相同溫度攪拌1小時(shí)以后，加入碳酸二甲酯。將得到的混合物緩慢地溫?zé)嶂?10℃并在該溫度攪拌。5小時(shí)以后，將反應(yīng)混合物在0℃用1mhcl水溶液淬滅至ph6。加入乙酸乙酯并分離有機(jī)相。將水相用乙酸乙酯再次萃取。將混合的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥、過濾并在真空中蒸發(fā)以得到1.7g粗制的3-氧代-3-(4-氧代四氫-2h-吡喃-3-基)丙酸甲酯,中間體化合物n3，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝183.1步驟4將中間體化合物n3(1.7g)溶解在甲苯中。加入dbu(1.4ml)并將混合物回流攪拌。將反應(yīng)物冷卻至0℃并用1mhcl水溶液淬滅。加入乙酸乙酯并分離有機(jī)相。將水相用乙酸乙酯再次萃取。將混合的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥、過濾并在真空中蒸發(fā)以得到1.2g粗制物質(zhì)。將粗制物質(zhì)通過快速色譜法(biotagekp-sil50gsnap柱,洗脫液a:二氯甲烷,洗脫液b:二氯甲烷/meoh9/1,梯度a/b在10cv中從70/30至0/100,級(jí)分大小9ml)純化以得到作為黃色泡沫的4-羥基-2,5,7,8-四氫吡喃并[3,2-c]吡喃-2-酮,中間體化合物n4(553mg,y＝35％)。lc-ms(m-h+)＝169.0步驟5在-10℃，將三氟甲烷磺酸酐(0.664ml)在二氯甲烷(5ml)中的溶液逐滴加入中間體化合物n4(553mg)和三乙胺(0.915ml)在二氯甲烷(10ml)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)物在-10℃攪拌1小時(shí)，然后將其溫?zé)嶂?℃并用環(huán)己烷/乙醚(3:1,60ml)稀釋。將混合物在硅膠塞上過濾，用另外的環(huán)己烷/乙醚(3:1)洗滌。將含有期望產(chǎn)物的洗液在減壓下蒸發(fā)以得到425mg作為黃色油的三氟甲磺酸2-氧代-2,5,7,8-四氫吡喃并[3,2-c]吡喃-4-基酯,中間體化合物n5(y＝43％)。lc-ms(m+h+)＝301.1步驟6將3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-1-胺(化合物67的合成中的中間體化合物c4)(164mg)、三乙胺(0.145ml)和中間體化合物n5(150mg)在乙腈(4ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入dcm并將有機(jī)相用鹽水洗滌。在真空中除去溶劑以得到130mg粗制物質(zhì)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。將殘余物通過si-柱純化，用乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇8:2洗脫，并然后用dcm至dcm/甲醇9:1洗脫以得到58mg期望產(chǎn)物4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-7,8-二氫-2h,5h-吡喃并[4,3-b]吡喃-2-酮(化合物125)(y＝25％)。lc-ms(m-h+)＝439.3化合物125:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.07(br.s.,1h),8.17(d,j＝5.5hz,1h),8.06(dd,j＝5.8,9.0hz,1h),7.84(dd,j＝2.4,10.4hz,1h),7.70(dt,j＝2.5,8.8hz,1h),7.56(d,j＝5.8hz,1h),6.75(t,j＝5.4hz,1h),4.99(s,1h),4.35(s,2h),3.91-3.75(m,5h),3.46-3.28(m,5h),3.27-3.14(m,5h),2.07-1.92(m,2h)在0℃，將該產(chǎn)物溶解在dcm中并加入2n的hcl在乙醚中的溶液(3當(dāng)量)。10分鐘以后，將溶劑在真空中蒸發(fā)并將固體與乙醚一起研磨以得到20mg4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-7,8-二氫-2h,5h-吡喃并[4,3-b]吡喃-2-酮鹽酸鹽(y＝7.5％)。lc-ms(m-h+)＝439.3通過分別用下述化合物替代步驟1的四氫-4h-吡喃-4-酮(n0)，以類似的方式制備化合物126和127?；衔镏虚g體n0lc-ms126四氫-4h-噻喃-4-酮lc-ms(m-h+)＝455.3127四氫-4h-噻喃-4-酮1,1-二氧化物lc-ms(m-h+)＝487.3化合物126:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.30(br.s.,1h),8.16(d,j＝5.8hz,1h),8.07(dd,j＝5.9,9.2hz,1h),7.90-7.78(m,1h),7.71(t,j＝8.8hz,1h),7.56(d,j＝5.5hz,1h),6.97-6.84(m,1h),5.00(s,1h),3.93(br.s.,1h),3.81(d,j＝10.0hz,2h),3.68-3.52(m,2h),3.48-3.31(m,6h),3.26(d,j＝6.0hz,4h),2.85(t,j＝5.5hz,2h),2.74-2.61(m,2h),2.12-1.90(m,2h)化合物127:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.49(br.s.,1h),8.16(d,j＝5.8hz,1h),8.07(dd,j＝5.6,8.9hz,1h),7.85(dd,j＝2.1,10.2hz,1h),7.71(dt,j＝2.5,8.8hz,1h),7.57(d,j＝5.8hz,1h),6.92(t,j＝5.4hz,1h),5.06(s,1h),4.16(br.s.,1h),4.07(s,2h),3.82(d,j＝9.3hz,2h),3.60(d,j＝5.8hz,2h),3.51(t,j＝6.4hz,2h),3.46-3.32(m,4h),3.24(q,j＝6.4hz,4h),3.02(t,j＝6.1hz,2h),2.02(quin,j＝7.0hz,2h)化合物131的制備按照合成途徑o，如下文中所述制備化合物131。步驟1將1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷、中間體化合物oa(723mg)、7-氟-1-碘異喹啉中間體化合物ob(1.15g)和碳酸鉀(872mg)在dmso(13ml)中的混合物在110℃攪拌過夜。將混合物用etoac稀釋。將有機(jī)相用碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下蒸發(fā)以得到1.3g作為黃色油的1-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-8-基)-7-氟異喹啉,中間體化合物o1(y＝92％)。lc-ms(m-h+)＝289.1步驟2向1-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-8-基)-7-氟異喹啉,中間體化合物o1(1.1g)在thf(3ml)中的溶液中，在室溫加入2nhcl(5ml)并攪拌過夜。然后將得到的紅色溶液加熱至60℃保持8h并在室溫過夜。將反應(yīng)混合物用10％naoh溶液調(diào)至堿性，并用etoac萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠上色譜分離，用chcl3至chcl3/meoh(99:1)洗脫以得到1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-酮,中間體化合物o2(y＝78％)。lc-ms(m-h+)＝245.1步驟3使用(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯和三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基酯作為起始試劑，如在化合物51的制備的步驟6中所述，制備{2-[(6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]乙基}氨基甲酸叔丁酯,中間體化合物o3(y＝50％)。lc-ms(m-h+)＝323.1步驟4使用{2-[(6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]乙基}氨基甲酸叔丁酯作為試劑，如在化合物51的制備的步驟4中所述制備4-[(2-氨基乙基)氨基]-6-氟-2h-色烯-2-酮,中間體化合物o4(y＝90％)。lc-ms(m-h+)＝223.1步驟5在室溫，向4-[(2-氨基乙基)氨基]-6-氟-2h-色烯-2-酮,中間體化合物o4(300mg)在chcl3(35ml)中的混懸液中，加入1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-酮o2(213mg)在chcl3(15ml)中的溶液。向混合物中加入2滴乙酸，并在10分鐘以后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(210mg)。將其在室溫?cái)嚢?天。將混懸液用dcm稀釋，并用碳酸氫鈉溶液洗滌。分離各相，并將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物在硅膠上色譜分離，用chcl3至chcl3/meoh(9:1)洗脫以得到6-氟-4-[(2-{[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}乙基)氨基]-2h-色烯-2-酮(化合物131)(35mg,y＝10％)。lc-ms(m-h+)＝451.191hnmr(300mhz,dmso-d6)δ＝8.09(d,j＝5.8hz,1h),8.04-7.94(m,2h),7.70-7.54(m,3h),7.48(ddd,j＝3.0,8.0,9.0hz,1h),7.41(d,j＝5.8hz,1h),7.37(dd,j＝4.9,9.1hz,1h),5.27(s,1h),3.66(td,j＝3.0,13.1hz,2h),3.42-3.22(m,2h),3.03-2.83(m,4h),2.79-2.66(m,1h),2.00(dd,j＝2.4,12.6hz,2h),1.59(dq,j＝3.4,11.3hz,2h)?；衔?34的制備按照合成途徑p，如在下文中描述的制備化合物134。步驟1在n2下，將4-甲基-2h-色烯-2-酮,中間體化合物p0(300mg)溶解在無水thf(4ml)中并在-30℃冷卻。逐滴加入1m的雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰溶液(1.87ml)，并將紅色溶液在-30℃攪拌30min。將溫度降低至-78℃并逐滴加入氯丙酰氯(0.35ml)。使溫度達(dá)到室溫。2h以后，將反應(yīng)物在etoac和nh4cl之間分配，并將有機(jī)相真空蒸發(fā)。將殘余的粗制物質(zhì)在戊烷/et2o混合物中研磨以得到4-(4-氯-2-氧代丁基)-2h-色烯-2-酮,中間體化合物p1(200mg)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于隨后反應(yīng)。步驟2將4-(4-氯-2-氧代丁基)-2h-色烯-2-酮,中間體化合物p1(200mg)和7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉,中間體化合物pa(184mg)溶解在無水ch3cn(10ml)中。加入k2co3(330mg)并將混合物在45℃攪拌1h。冷卻后，將無機(jī)鹽濾出并將濾液真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法(洗脫液chex:etoac:meoh＝6:3:1)初步純化以得到作為淡黃色粉末的4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-氧代丁基}-2h-色烯-2-酮,中間體化合物p2(135mg)。lc-ms(m-h+)＝446.4步驟3向4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-氧代丁基}-2h-色烯-2-酮、中間體化合物p2(50mg)在meoh(4ml)中的溶液中，加入nabh4(9mg)并將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將揮發(fā)物在真空中蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物通過使用h2o/mecn+1％hcooh的混合物作為洗脫液的c-18反相色譜法純化。得到作為甲酸鹽的4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥基丁基}-2h-色烯-2-酮(化合物134)(26mg,y＝37％)。lc-ms(m-h+)＝448.41h-nmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.67-1.81(m,2h),2.53-2.58(m,1h),2.59-2.82(m,6h),3.09(dd,j＝13.45,3.18hz,1h),3.30(br.s.,4h),3.85-4.03(m,1h),6.38(s,1h),7.34-7.43(m,2h),7.45(d,j＝5.87hz,1h),7.59-7.67(m,2h),7.68-7.73(m,1h),7.95(d,j＝7.83hz,1h),8.01(dd,j＝8.80,5.87hz,1h),8.12(d,j＝5.38hz,1h),8.15(s,1h)。化合物143的制備按照合成途徑q，如在下文中描述的制備化合物143。步驟1向4-氨基-3-硝基-2h-色烯-2-酮,中間體化合物q0(100mg)在異丙醇(6ml)中的混懸液中，加入鋅粉(1.2g)和3mhcl水溶液(6.4ml)。將混合物在室溫?cái)嚢?0min，并然后將它倒入飽和na2co3水溶液中。將產(chǎn)物用et2o萃取2次，在無水na2so4上干燥，過濾并蒸發(fā)以回收55mg純的3,4-二氨基-2h-色烯-2-酮,中間體化合物q1，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于后續(xù)步驟。lc-ms(m-h+)＝177.1步驟2將7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉,中間體化合物qa(400mg)溶解在無水meoh(20ml)中，加入n,n-二異丙基乙胺(0.82ml)，隨后加入丙烯酸甲酯(0.356ml)。將混合物在60-70℃攪拌1h。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并將產(chǎn)物通過柱色譜法(20-80％的乙酸乙酯在環(huán)己烷中的溶液梯度)分離，以得到3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙酸甲酯,中間體化合物q2(410mg,y＝75％)。lc-ms(m-h+)＝318.3步驟3將3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙酸甲酯,中間體化合物q2(300mg)溶解在thf/水(1:1)中并加入lioh(68mg)，將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，將得到的殘余物通過scx柱純化(用3m的tea在meoh中的溶液洗脫期望產(chǎn)物)，以得到作為三乙胺鹽的3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙酸,中間體化合物q3(330mg,y＝65％)。lc-ms(m-h+)＝304.2步驟4將3,4-二氨基-2h-色烯-2-酮,中間體化合物q1(50mg)和作為三乙胺鹽的3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙酸,中間體化合物q3(50mg)懸浮于多磷酸(1.5ml)中，并將混合物在140℃加熱4h。將反應(yīng)混合物倒入飽和na2co3水溶液中，并將產(chǎn)物用etoac萃取2次。將有機(jī)相通過使用chex/etoac/meoh(6:3:1)的混合物作為洗脫液的快速色譜法純化。將30mg回收的化合物溶解在dcm(1ml)中并用過量的1m的hcl在et2o中的溶液(1ml)處理。將混濁的混合物濃縮并在烘箱(50℃)中干燥1h以得到作為鹽酸鹽的2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}色烯并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(化合物143)。lc-ms(m-h+)＝444.41hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm3.63(t,j＝6.85hz,2h),3.92(br.s.,4h),3.93-3.98(m,2h),4.20(br.s.,4h),7.45(t,j＝7.34hz,1h),7.50(d,j＝7.83hz,1h),7.56-7.63(m,1h),7.82(d,j＝6.36hz,1h),7.89-7.95(m,1h),7.97-8.03(m,2h),8.08(d,j＝9.29hz,1h),8.23(dd,j＝9.29,5.38hz,1h)?；衔?44的制備如下文中所述制備化合物144。步驟1-4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：在室溫，將碳酸鉀(2.9g,21mmol)加入1-氯-7-氟異喹啉(2.6,14mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.2g,28mmol)在dmso(20ml)中的攪拌溶液中。將得到的混合物加熱至120℃過夜。uplc檢查表明反應(yīng)完成。然后將混合物冷卻至室溫并在etoac(300ml)和水(300ml)之間分配。將有機(jī)相分離，用1m檸檬酸溶液(100ml)和鹽水(70ml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑，并將得到的殘余物通過硅膠上的快速色譜法(snap100，從cy至cy/乙酸乙酯8:2)純化以得到4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.3g,13mmol,93％收率)。lc-ms(m-h+)＝332.3步驟2-7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉的合成：將tfa(10ml)加入4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.3g,13mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液中，并將得到的混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。uplc檢查表明反應(yīng)完成。在減壓下蒸發(fā)揮發(fā)物，將殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并在減壓下蒸發(fā)2次。將得到的殘余物溶解在meoh中并加載到預(yù)調(diào)節(jié)的scx柱(50g)上。將scx用meoh洗脫，并然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。最后，將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到3.1g(y＝定量)作為黃色粘性膠狀物的7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉。lc-ms(m-h+)＝232.2步驟3-4-(4-氯-2-氧代丁基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：在n2下，將4-甲基-2h-1-苯并吡喃-2-酮(200mg,1.25mmol)溶解在無水thf(4ml)中并在-30℃冷卻。逐滴加入lihdms(1m的在thf中的溶液，1.25ml,1.25mmol)并將紅色溶液在-30℃攪拌30min。然后使溫度降低至-78℃并逐滴加入氯丙酰氯(0.24ml,2.5mmol)。使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，然后在etoac和nh4cl之間分配。將有機(jī)相在真空中蒸發(fā)并將殘余的粗制物質(zhì)用戊烷/et2o混合物處理以得到270mg(1.1mmol,88％收率)4-(4-氯-2-氧代丁基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮。lc-ms(m-h+)＝251.2步驟4-4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-氧代丁基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：將4-(4-氯-2-氧代丁基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮(270mg,1.1mmol)和7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉(244mg,1.1mmol)溶解在無水mecn(10ml)中。加入k2co3(434mg,2.4mmol)并將混合物在45℃攪拌1h。冷卻后，將無機(jī)鹽濾出并將濾液在真空中蒸發(fā)。將粗制物通過fc(cy:etoac:meoh6:3:1)純化以回收188mg(0.42mmol,38％收率)作為淡黃色粉末的4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-氧代丁基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮(y＝39％)。lc-ms(m-h+)＝446.4步驟5-4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥基丁基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮(化合物144)的合成：將4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-氧代丁基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮(80mg,0.18mmol)溶解在無水thf(0.5ml)中。加入2m的nh3在meoh中的溶液(0.9ml,1.8mmol)，隨后加入ti(ipro)4(212μl,0.72mmol)。將反應(yīng)混合物在密封瓶中在50℃加熱3小時(shí)，并然后使其達(dá)到室溫過夜。將揮發(fā)物在真空中蒸發(fā)，將殘余物溶解在thf/meoh中并在冰浴中冷卻?？焖俚丶尤雗abh4(127mg)。10分鐘以后，將反應(yīng)物用4mhcl在二噁烷中的溶液淬滅，達(dá)到ph4，將溶劑在真空中蒸發(fā)，并將粗制物質(zhì)在堿性條件下通過制備型hplc純化以得到25mg(y＝31％)4-{4-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥基丁基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮。lc-ms(m-h+)＝447.2.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.67-1.88(m,2h)2.50(dt,j＝3.70,1.79hz,7h)3.09-3.95(m,6h)6.44(s,1h)7.35-7.44(m,2h)7.46(d,j＝5.77hz,1h)7.61-7.76(m,3h)7.97-8.04(m,2h)8.13(d,j＝5.77hz,1h)?；衔?45的制備如下文中所述制備化合物145。步驟1-[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：根據(jù)關(guān)于4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(參見化合物144)，使用哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯制備中間體[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯。y＝71％。lc-ms(m-h+)＝346.5步驟2-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成：根據(jù)關(guān)于7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉的合成描述的操作(參見化合物144)，使用[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯制備中間體1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺。y＝定量lc-ms(m-h+)＝246.3步驟3-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯的合成：將4-氯-3-甲酰基香豆素(0.5g,2.4mmol)和甘氨酸乙酯鹽酸鹽(353mg,2.5mmol)懸浮于絕對(duì)乙醇中。將混合物冷卻至0℃，然后加入tea(1.1ml,7.2mmol)。將混合物在0℃攪拌2h，并然后在80℃加熱12h。將粗制的混合物加載到c-18柱上并用h2o/mecn(+0.1％hcooh)從100/0至0/100洗脫以回收400mg4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯(400mg,1.5mmol,64％收率)。lc-ms(m-h+)＝258.2步驟4-2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：將4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯(170mg,0.66mmol)溶解在無水thf(6ml)中。在0℃逐滴加入1m的lialh4在thf中的溶液(1.33ml,1.33mmol)。將溶液在0℃攪拌4h，然后通過加入na2so4*10h2o進(jìn)行淬滅。將無機(jī)鹽濾出并將溶劑蒸發(fā)。將粗殘余物通過快速色譜法(cy:etoac:meoh6:3:1)純化以得到2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(80mg,0.37mmol,56％收率)。lc-ms(m-h+)＝216.2步驟5-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：將2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(80mg,0.37mmol)懸浮于無水dcm(15ml)中并用戴斯-馬丁高碘烷(100mg,0.44mmol)處理。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5min，然后將混懸液在dcm和飽和nahco3水溶液/10％na2s2o31:1之間分配。將有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并蒸發(fā)以回收40mg(0.19mmol,y＝51％)4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛，將其不經(jīng)任何純化地在下一步中處理。lc-ms(m-h+)＝214.2步驟6-2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸鹽,化合物145)的合成：向4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(40mg,0.19mmol)在無水mecn(40ml)中的混懸液中，加入1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺(60mg,0.24mmol)，隨后加入3滴乙酸。將混濁的混合物在室溫?cái)嚢?h，然后一次性加入nabh(oac)3(100mg,0.47mmol)。將所述多相混合物攪拌過夜，然后真空中蒸發(fā)揮發(fā)物。將殘余物加載到c-18反相柱上并用h2o/meoh+1％hcooh(從95/5至70/30)洗脫以得到32mg(0.066mmol,34％收率)作為甲酸鹽的2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝443.4。1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm1.99(qd,j＝12.06,3.42hz,2h),2.31(d,j＝10.76hz,2h),3.06(t,j＝12.23hz,2h),3.31-3.35(m,2h),3.84(d,j＝13.21hz,2h),4.37(s,2h),6.93(s,1h),7.37-7.46(m,3h),7.48-7.58(m,2h),7.76(dd,j＝10.03,2.20hz,1h),7.91-7.99(m,2h),8.07(d,j＝5.87hz,1h)?；衔?46的制備如下文中所述制備化合物146。步驟1-3,4-二氨基-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：將4-氨基-3-硝基-2h-1-苯并吡喃-2-酮(500mg,2.4mmol)懸浮于ipa(30ml)中。加入鋅粉(6g,92mmol)，隨后加入3mhcl溶液(32ml,96mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?0min，然后倒入飽和na2co3中。將產(chǎn)物用et2o萃取2次，有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥、過濾并濃縮至干以得到330mg3,4-二氨基-2h-1-苯并吡喃-2-酮(330mg,78％收率)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。lc-ms(m-h+)＝177.2步驟2-2-(氯甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：向3,4-二氨基-2h-1-苯并吡喃-2-酮(120mg,0.68mmol)在多磷酸(2.5ml)中的混懸液中加入氯乙酸(96mg,1mmol)。將混懸液在140℃加熱45min，然后冷卻，并將粗制物在h2o和et2o之間分配。將有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并濃縮以得到90mg(0.38mmol,56％收率)2-(氯甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝235.1步驟3-2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(化合物146)的合成：將1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺(370mg,1.5mmol,參見化合物145)溶解在無水dmf(2ml)中并在冰浴中冷卻。將固體2-(氯甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(90mg,0.38mmol)逐份加入，并將混合物攪拌10min。將粗制的反應(yīng)物直接加載到c-18反相色譜柱上并用h2o/mecn+1％hcooh(從100/0至85/15)洗脫以回收38mg(0.09mmol,23％收率)2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝444.4。1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm1.84-1.97(m,2h),2.25(d,j＝11.74hz,2h),3.03(t,j＝11.74hz,2h),3.11-3.21(m,1h),3.80(d,j＝12.72hz,2h),4.34(s,2h),7.40(d,j＝5.87hz,1h),7.43(t,j＝7.58hz,1h),7.48(d,j＝7.83hz,1h),7.50-7.60(m,2h),7.75(dd,j＝10.03,2.20hz,1h),7.92(dd,j＝9.05,5.62hz,1h),8.03(dd,j＝7.83,1.47hz,1h),8.05(d,j＝5.87hz,1h),8.24-8.29(m,1h)?；衔?47的制備如下文中所述制備化合物147。步驟1-2-(3-溴丙基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：根據(jù)關(guān)于2-(氯甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成描述的過程(參見化合物146)，使用4-溴丁酸制備中間體2-(3-溴丙基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝307.1步驟2-2-{3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(甲酸鹽,化合物147)的合成：向2-(3-溴丙基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(160mg,0.7mmol)在無水dmf(2ml)中的混懸液中，分批加入固體7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉(70mg,0.30mmol,參見化合物144)。將混合物攪拌2h，然后加入1mhcl1(8ml)。將水相用dcm洗滌2次，然后加載到c-18反相色譜柱上并用h2o/mecn+1％hcooh(從100/0至75/25)洗脫以得到39mg(0.09mmol,30％收率)作為甲酸鹽的2-{3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝458.4。1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm2.29(quin,j＝7.09hz,2h),3.02-3.17(m,4h),3.28(s,4h),3.61(br.s.,4h),7.36-7.50(m,3h),7.51-7.62(m,2h),7.79(dd,j＝9.78,2.45hz,1h),7.88-8.01(m,2h),8.11(d,j＝5.38hz,1h)?；衔?48的制備如下文中所述制備化合物148。步驟1-4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：將1-氯-7-氟異喹啉(0.5g,2.76mmol)和n-boc-哌嗪(1.54g,8.3mmol)在甲苯中的溶液脫氣10min。然后在室溫加入叔丁醇鉀(626mg,5.6mmol)、binap(174mg,0.28mmol)和乙酸鈀(61mg0.28mmol)。將混合物在85℃攪拌4h，通過lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋，用水和鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮溶劑，并將得到的粗制物通過硅膠(60-120目)柱色譜法(0-20％的乙酸乙酯在己烷中的溶液)純化，以得到作為淡黃色固體的4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(310mg,34％)。ls-msm/z:331.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm1.44(s,9h),3.21-3.24(m,4h),3.60(m,4h),7.48-7.49(m,1h),7.64-7.69(m,1h),7.75-7.78(m,1h),7.97-8.04(m,1h),8.13-8.14(m,1h)。步驟2-7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉三氟乙酸鹽的合成：在室溫，向4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg,0.9mmol)在dcm(5ml)中的溶液中緩慢地加入tfa(5ml)。將反應(yīng)混合物攪拌4h，然后在減壓下濃縮并將得到的粗制物(棕色液體)直接用于下一步中(310mg,定量)。ls-msm/z:231.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm3.38(m,4h),3.46-3.47(m,4h),7.52(d,j＝5.7hz,1h),7.67-7.72(m,1h),7.83(d,j＝9.9hz,1h),8.03-8.07(m,1h),8.15(d,j＝5.7hz,1h),8.83(br.s,1h)。步驟3-1-氯-3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇的合成：將7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉三氟乙酸鹽(200mg,0.87mmol)、dipea(398mg,43mmol)和氯甲代環(huán)氧丙烷(398mg,4.8mmol)在乙醇(5ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?h。通過lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束以后，將混合物在減壓下濃縮。將得到的粗制物溶解在etoac(50ml)中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮以得到作為粘性液體的1-氯-3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇(220mg,79％)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。ls-msm/z:324.2(m+1)。步驟4-1-疊氮-3-(4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇的合成：向1-氯-3-(4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇(210mg,0.65mmol)在dmf(4ml)中的溶液中，加入疊氮化鈉(65mg,1mmol)。將混懸液在85℃攪拌5h，然后冷卻至室溫，并在水和etoac之間分配。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下濃縮。將得到的粗制物通過硅膠(60-120目,0-10％的meoh在dcm中的溶液)柱色譜法純化以得到作為淡黃色膠狀物的1-疊氮-3-(4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇(160mg,74％)。ls-msm/z:331.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm2.49-2.52(m,2h),2.50-2.71(m,4h),2.86-2.87(m,2h),3.19-3.20(m,4h),3.88-3.89(m,1h),5.14(br.s,1h),7.44(d,j＝7.7hz,1h),7.61-7.70(m,2h),7.98-8.03(m,1h),8.11(d,j＝7.6hz,1h)。步驟5-1-氨基-3-(4-(7-氟異喹啉-1基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇的合成：向1-疊氮-3-(4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇(160mg)在乙醇(5ml)中的溶液中加入10％pd/c(10mg)。將混合物在氫氣氛下在室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)結(jié)束以后，將混合物在硅藻土床上過濾并將濾液在減壓下濃縮以得到作為淡黃色固體的1-氨基-3-(4-(7-氟異喹啉-1基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇(125mg,85％)。ls-msm/z:305.2(m+1)。1hnmr(cdcl3):δppm2.27-2.28(m,2h),2.45-2.57(m,2h),2.70-2.91(m,4h),3.40(m,4h),3.81(m,1h),7.25-7.45(m,2h),7.56-8.12(m,2h),8.42-8.44(m,1h)。步驟6-5-氟-2-羥基苯甲酸甲酯的合成：在0℃，向5-氟水楊酸(25g,160mmol)在meoh(250ml)中的攪拌溶液中，緩慢地加入濃硫酸(20ml)。將得到的反應(yīng)混合物回流48h，然后在減壓下濃縮并將得到的粗制物用飽和nahco3堿化至ph8.0。然后將它用1.5nhcl溶液中和，并用etoac萃取。將有機(jī)層經(jīng)無水na2so4干燥并濃縮以得到作為淺棕色液體的5-氟-2-羥基苯甲酸甲酯(22.8g,83％)。gcms:(acq方法hp-1ms.m)170.1(m)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm10.29(s,1h),7.51-7.49(m,1h),7.42-7.41(m,1h),57.03-7.01(m,1h),3.89(s,3h)。步驟7-5-氟-2-羥基苯甲酰胺的合成：將5-氟-2-羥基苯甲酸甲酯(22g,129mmol)和氨的甲醇溶液(methanolicammonia)(250ml)的混合物在高壓釜中在50℃加熱10h。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，將得到的粗制物與甲苯一起共蒸餾并干燥以得到作為棕色固體的5-氟-2-羥基苯甲酰胺(18.5g,92％)。ls-msm/z:154.0(m-h)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.74(s,1h),8.40(s,1h),8.03(s,1h),7.73-7.71(m,1h),7.31-7.29(m,1h),6.91-6.90(m,1h)。步驟8-6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2,4(3h)-二酮的合成：在0℃，向5-氟-2-羥基苯甲酰胺(8.0g,51.6mmol)在無水thf(80ml)中的攪拌溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(10.9g,67.09mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?4h，然后在減壓下濃縮。將得到的粗制物用meoh處理，并用乙醚洗滌。將得到的白色固體干燥并不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步(5.1g,55％白色固體)。ls-msm/z:180.0(m-h):1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.19(s,1h),7.68-7.67(m,2h),7.50-7.48(m,1h)。步驟9-4-氯-6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮的合成：在0℃，向6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2,4(3h)-二酮(0.5g,2.76mmol)在無水1,2-二氯乙烷(2.5ml)中的攪拌溶液中加入五氯化磷(0.69g,3.31mmol)。將得到的混合物回流6h，然后在減壓下濃縮。將dcm(15ml)加入得到的粗制物中，用水(2ml)洗滌并經(jīng)無水na2so4干燥。在減壓下濃縮溶劑以得到作為灰白色固體的4-氯-6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(0.46g,84％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm7.69-7.67(m,2h),7.50-7.49(m,1h)。步驟10-6-氟-4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(化合物148)的合成：在0℃，向4-氯-6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(235mg,1.2mmol)在乙腈(5ml)中的混懸液中加入dipea(402mg,3.1mmol)和1-氨基-3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇(120mg,0.39mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?5h，然后將得到的固體過濾，用水洗滌并干燥。將粗產(chǎn)物通過用(0-20％的meoh在dcm中的溶液)洗脫的硅膠柱色譜法純化，得到作為灰白色固體的6-氟-4-({3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(90mg,74％)。lcmsm/z:468.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm2.48-2.49(m,2h),2.71(m,2h),2.76(m,2h),3.26(m,4h),3.40-3.43(m,1h),3.70-3.75(m,1h),4.07(d,j＝5.9hz,1h),5.00(d,j＝4.5hz,1h)7.35-7.39(m,1h),7.43(d,j＝5.6hz,1h),7.59-7.70(m,3h),7.98(dd,j＝8.6,5.6hz,1h),8.09-8.12(m,2h),9.11-9.14(m,1h)。化合物149的制備如下文中所述制備化合物149。步驟1-2-(氰基甲基)-5-氟芐腈的合成：在0℃，向nah(2.58g,60％在礦物油中,64.74mmol)在dmso(30ml)中的攪拌溶液中緩慢地加入氰基乙酸乙酯(7.3g,64.7mmol)，并在相同溫度攪拌20min。然后加入2,5-二氟芐腈(3g,21.5mmol)在dmso(10ml)中的溶液。將混合物在95℃加熱過夜，然后加入水(20ml)，并將溶液加熱至120℃保持12h。通過lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束。在0℃，將0.1nhcl(30ml)加入反應(yīng)混合物中，攪拌10min以后，將固體過濾，并用水和石油醚洗滌。將粗制物通過快速色譜法(24％的etoac在石油醚中的溶液)純化，得到作為灰白色固體的標(biāo)題化合物(1.8g,53.0％)。lcmsm/z:159.2(m-1)。1hnmr(dmsod6):δppm4.2(s,2h),7.64-7.73(m,2h),7.96(dd,j＝8.5,2.5hz,1h)。步驟2-1-溴-7-氟異喹啉-3-胺的合成：在0℃，向hbr在acoh中的攪拌溶液(14ml,33％)中緩慢地加入2-(氰基甲基)-5-氟芐腈(1.4g,87.5mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?h，然后用水(15ml)稀釋并使用飽和na2co3堿化。將溶液用etoac萃取，將有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下除去溶劑以得到作為黃色固體的1-溴-7-氟異喹啉-3-胺(1.5g,75％)。lcmsm/z:241.0(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm6.30(s,2h),6.70(s,1h),7.48-7.54(m,2h),7.70(dd,j＝9.1,5.5hz,1h)。步驟3-1-溴-3,7-二氟異喹啉的合成：在0℃，向1-溴-7-氟異喹啉-3-胺(0.5g,20.7mmol)在吡啶(2ml)中的攪拌溶液中緩慢地加入hf.吡啶(2ml)，隨后加入亞硝酸鈉(0.171g,24mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天，然后緩慢地倒入飽和的碳酸鈉溶液以調(diào)節(jié)ph至8，并用etoac萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下除去溶劑，并將得到的粗制物通過快速色譜法(25％的etoac在石油醚中的溶液)純化，得到作為黃色固體的1-溴-3,7-二氟異喹啉(0.250g,50％)。lcmsm/z:244.0(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm7.83(s,1h),7.86-7.94(m,2h),7.20(dd,j＝9.1,5.5hz,1h)。步驟4-4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：將1-溴-3,7-二氟異喹啉(400mg,1.6mmol)和n-boc-哌嗪(610mg,3.2mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液脫氣10min。然后在室溫加入cs2co3(1.04g,3.2mmol)、xanthphos(138mg,0.24mmol)和pd(dba)2(61mg,0.28mmol)。將反應(yīng)混合物在80℃攪拌過夜，然后在硅藻土墊上過濾，并用dcm洗滌。將合并的有機(jī)層在減壓下濃縮，并將得到的粗制物通過硅膠(60-120目)柱色譜法(25-20％的乙酸乙酯在己烷中的溶液)純化以得到作為淡黃色固體的4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg,35％)。es-msm/z:294.2(-tbu+1)。1hnmr(dmsod6):δppm1.43(s,9h),2.27-2.49(m,4h),3.58-3.59(m,4h),7.41(s,1h),7.65-7.77(m,2h),7.97-8.02(m,1h)。步驟5-3,7-二氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉鹽酸鹽的合成：在0℃，向4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg,0.8mmol)在二噁烷(1ml)中的溶液中緩慢地加入二噁烷.hcl(5ml,4.5m)。在0℃攪拌2h以后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將得到的棕色粘稠液體(160mg)不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。es-msm/z:250.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm3.32-3.38(m,4h),3.53-3.54(m,4h),7.24(s,1h),7.69-7.73(m,1h),7.86(dd,j＝10.4,2.6hz,1h),8.03(dd,j＝8.8,5.6hz,1h),9.09(br.s,1h)。步驟6-1-氯-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇的合成：按照關(guān)于1-氯-3-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇的合成描述的過程(參見化合物148)，使用3,7-二氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉鹽酸鹽制備標(biāo)題中間體(99％收率)。es-msm/z:342.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm2.68-2.71(m,2h),2.80-2.83(m,2h),2.97-3.10(m,2h),3.55-3.77(m,6h),4.07-4.09(m,1h),6.82(s,1h),7.40(td,j＝8.4,2.1hz,1h),7.63(dd,j＝9.7,2.1hz,1h),7.60-7.72(m,1h)。步驟7-1-疊氮基-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇的合成：按照關(guān)于1-疊氮-3-(4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇描述的過程(參見化合物148)，使用1-氯-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇制備標(biāo)題中間體(89％收率)。es-msm/z:349.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm2.64-2.69(m,2h),2.68-2.73(m,4h),3.22-3.25(m,2h),3.31-3.36(m,4h),3.82-3.89(m,1h),5.10(d,j＝4.9hz,1h),7.10(s,1h),7.65-7.90(m,1h),7.96-8.00(m,1h)。步驟8-1-氨基-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇的合成：按照關(guān)于1-氨基-3-(4-(7-氟異喹啉-1基)哌嗪-1-基)丙烷-2-醇描述的操作(參見化合物148)，使用1-疊氮基-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇制備標(biāo)題中間體(99％收率)。es-msm/z:323.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm1.90(br.s,2h),2.33-2.48(m,4h),2.51-2.68(m,4h),3.17-3.33(m,4h),3.60-3.62(m,1h),4.50(s,1h),7.10(s,1h),7.66-7.70(m,2h),7.98(dd,j＝8.8,6.6hz,1h)。步驟9-4-({3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-6-氟-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(化合物149)的合成：按照關(guān)于化合物148描述的操作，使用1-氨基-3-[4-(3,7-二氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙烷-2-醇制備標(biāo)題化合物(23％收率)。es-msm/z:486.2(m+1)。1hnmr(dmsod6)。δppm2.69-2.75(m,4h),2.71(m,2h),3.32-3.36(m,4h),3.71-3.72(m,1h),4.06(s,1h),4.01(s,1h),7.09(s,1h)7.38(s,1h),7.62-7.70(m,2h),7.97(s,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),9.13(s,1h)?；衔?50的制備如下文中所述制備化合物150。步驟1-n-boc-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙胺的合成：根據(jù)關(guān)于中間體c3(化合物51)的合成描述的操作，使用7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉和(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物(82％收率)。lc-ms(m-h+)＝375.2步驟2-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙烷-1-胺三氟乙酸鹽的合成：根據(jù)關(guān)于7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉的合成描述的操作(參見化合物144)，使用n-boc-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙胺制備標(biāo)題中間體(91％收率)。lc-ms(m-h+)＝275.2步驟3-n-[(3,4-二氫-2h-吡喃并[2,3-c]吡啶-6-基)甲基]-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙烷-1-胺(化合物150)的合成：向3,4-二氫-2h-吡喃并[2,3-c]吡啶-6-甲醛(如在wo2012012391中所述制備,218mg,1.33mmol)和dipea(0.25ml)在dcm(3ml)中的溶液中，加入2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙烷-1-胺三氟乙酸鹽(1.6g,5.8mmol)在dcm(5ml)中的溶液和2滴acoh。攪拌10min以后，加入nabh(oac)3(446mg,2mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?h，然后加入dcm(35ml)和飽和nahco3(25ml)。將有機(jī)相分離，用飽和nacl洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮。將殘余物通過快速色譜法(硅膠,dcm/meoh9/1)純化，得到n-[(3,4-二氫-2h-吡喃并[2,3-c]吡啶-6-基)甲基]-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙烷-1-胺(139mg,0.33mmol,25％收率)。lc-ms(m-h+)＝422.2。1hnmr(300mhz,氯仿-d)δ＝8.13(d,j＝5.8hz,1h),8.09(s,1h),7.76(dd,j＝5.6,9.0hz,1h),7.69(dd,j＝2.6,10.2hz,1h),7.39(dt,j＝2.6,8.6hz,1h),7.24(d,j＝5.8hz,1h),7.01(s,1h),4.21(t,j＝5.1hz,2h),3.87(s,2h),3.40(t,j＝4.9hz,4h),2.84(t,j＝6.2hz,2h),2.80-2.64(m,8h),2.55(br.s.,1h),2.08-1.95(m,2h)?；衔?52的制備如下文中所述制備化合物152。步驟1-[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：根據(jù)關(guān)于2-(氯甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成描述的操作(參見化合物146)使用甲酸制備中間體[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。y＝67％。lc-ms(m-h+)＝187.1步驟2-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(274mg,1.5mmol)在無水dmf(10ml)中的溶液冷卻至0℃。加入nah(60％的在礦物油中的分散體,117mg,2.9mmol)并將混合物在0℃攪拌15min。加入sem-cl(294mg,1.8mmol)并將混合物攪拌另外2h。uplc分析表明反應(yīng)完成，所以在0℃加入水，隨后加入乙酸乙酯。將有機(jī)相分離，并用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并在真空中蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用cy至cy/乙酸乙酯1:1洗脫，得到作為區(qū)域異構(gòu)體的混合物的265mg1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝317.3步驟3-2-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(150mg,0.47mmol)溶解在dcm中。加入n-溴琥珀酰亞胺(88mg,0.5mmol)和催化量的aibn，并將混合物在45℃攪拌4h。uplc分析表明反應(yīng)完成，所以加入水并將有機(jī)相分離和在真空中蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用cy至cy/乙酸乙酯85:15洗脫，得到104mg(y＝56％)作為區(qū)域異構(gòu)體的混合物的2-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝396.2步驟4-2-(1-乙氧基乙烯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將2-溴-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(104mg,0.26mmol)溶解在二噁烷(2ml)中，加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫(140mg,0.39mmol)，并將混合物用n2凈化20分鐘。加入四(三苯基膦)鈀(0)(30mg,0.026mmol)，并將混合物回流攪拌6h，然后冷卻至0℃，用水稀釋，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用kf水溶液洗滌，經(jīng)na2so4干燥并在真空中濃縮。將粗制物質(zhì)通過nh2-柱純化，用cy至cy/乙酸乙酯8:2洗脫，得到100mg(0.25mmol)2-(1-乙氧基乙烯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮，其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝387.4步驟5-2-(溴乙酰基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將2-(1-乙氧基乙烯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(100mg,0.25mmol)在thf/水(10ml)中的溶液冷卻至0℃。加入n-溴琥珀酰亞胺(76mg,0.43mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?h。uplc分析表明反應(yīng)完成。加入dcm，隨后加入水。將有機(jī)相分離，經(jīng)na2so4干燥并在真空中濃縮。將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用cy至cy/乙酸乙酯9:1洗脫，以得到70mg(0.16mmol,64％收率)2-(溴乙?；?-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮，將其不經(jīng)任何進(jìn)一步純化和表征地使用。步驟6-2-{[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙酰基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將2-(溴乙?；?-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(70mg,0.16mmol)、7-氟-1-(哌嗪-1-基)異喹啉(37mg,0.16mmol,參見化合物144)和碳酸鉀(33mg,0.24mmol)溶解在mecn中。將混合物在室溫?cái)嚢?0min，然后加入乙酸乙酯，隨后加入水。將有機(jī)相分離，經(jīng)na2so4干燥并在真空中濃縮。將得到的粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用cy至cy/乙酸乙酯1:1洗脫，以得到61mg(0.1mmol,65％收率)2-{[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙?；鶀-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝588.4步驟7-2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將2-{[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙?；鶀-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(61mg,0.1mmol)在甲醇/dcm10:1(11ml)中的溶液冷卻至0℃，然后加入nabh4(19mg,0.5mmol)。將混合物在0℃攪拌30min，然后將溶劑在真空中蒸發(fā)，加入乙酸乙酯，并將有機(jī)相用水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并在真空中濃縮以得到51mg(0.086mmol,86％收率)2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝590.4步驟8-2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮鹽酸鹽的合成(化合物152)：將2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1h,4h-色烯并[3,4-d]咪唑-4-酮(51mg,0.086mmol)溶解在乙醇(8ml)中，加入1mhcl在乙醇中的溶液(10ml,10mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?h。在真空中除去溶劑以后，將得到的粗制物通過c18反相色譜法純化，用水/乙腈95:5至乙腈100％洗脫，得到60mg產(chǎn)物。將化合物溶解在dcm中，并將溶液冷卻至0℃。加入1m的hcl在乙醚中的溶液(5ml)，將混合物在真空中濃縮并將粗制的固體用乙醚處理，得到30mg作為鹽酸鹽的2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝460.4。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm3.42-3.90(m,8h),5.51(dd,j＝10.03,2.69hz,1h),6.95(d,j＝8.80hz,1h),7.37-7.48(m,1h),7.50-7.54(m,1h),7.55-7.62(m,2h),7.73(td,j＝8.68,2.69hz,1h),7.87(dd,j＝10.03,2.20hz,1h),8.08(dd,j＝9.05,5.62hz,1h),8.14-8.28(m,2h),10.55(br.s.,1h)?；衔?53的制備如下文中所述制備化合物153。步驟1-4-氯-3-(三氟乙酰基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：在壓力試管中進(jìn)行所述反應(yīng)。向4-羥基香豆素(2.5g,15.4mmol)在無水1,4-二噁烷中的混懸液中加入無水吡啶2.56g(2.6ml,32.4mmol)。當(dāng)混合物變得完全均勻時(shí)，加入三甲基氯硅烷(2g,18.5mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h。然后加入三氟乙酸酐(2.8ml,20mmol)，并將混合物在90℃攪拌2h。向冷卻的反應(yīng)物質(zhì)中加入磷酰氯(1.4ml,15.4mmol)并將混合物在60℃攪拌2h，然后將它用冰水稀釋，并用dcm(3x50ml)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮以得到4-氯-3-(三氟乙?；?-2h-1-苯并吡喃-2-酮(3.1g,73％收率)。將化合物不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用和表征。步驟2-4-氧代-3-(三氟甲基)-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯的合成：根據(jù)關(guān)于4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯的合成描述的操作(參見化合物145)，使用4-氯-3-(三氟乙?；?-2h-1-苯并吡喃-2-酮制備標(biāo)題中間體(y＝74％)。lc-ms(m-h+)＝326.1步驟3-4-4-氧代-3-(三氟甲基)-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：根據(jù)關(guān)于4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(參見化合物145)的合成描述的操作，使用4-氧代-3-(三氟甲基)-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯制備標(biāo)題中間體(經(jīng)2步y(tǒng)＝35％)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝282.1步驟5-2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)-3-(三氟甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸鹽,化合物153)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物145的合成描述的操作，使用4-氧代-3-(三氟甲基)-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛制備化合物153(y＝8％)。lc-ms(m-h+)＝511.3。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.60-1.73(m,2h),1.98-2.08(m,2h),2.69-2.80(m,1h),2.93(t,j＝11.60hz,2h),3.67(d,j＝11.60hz,2h),4.06(s,2h),7.38-7.44(m,2h),7.44-7.48(m,1h),7.49-7.56(m,1h),7.60-7.69(m,2h),7.99(dd,j＝8.80,5.87hz,1h),8.09(d,j＝5.87hz,1h),8.17(s,1h),8.22(dd,j＝7.83,0.98hz,1h)?；衔?55的制備按照關(guān)于化合物149的合成描述的操作，從2-氟-5-三氟甲氧基芐腈開始制備化合物1556-氟-4-[(3-{4-[3-氟-7-(三氟甲氧基)異喹啉-1-基]哌嗪-1-基}-2-羥丙基)氨基]-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮。lcmsm/z:552.2(m+1)。1hnmr(400mhz,cdcl3+meoh-d4):δppm2.48-2.54(m,1h),2.62-2.65(m,1h),2.74-2.75(m,2h),2.87-2.89(m,2h),3.33(s,1h),3.45-3.55(m,4h),3.88(dd,j＝14.0,3.6hz,1h),4.05-4.06(m,1h),6.78(s,1h)7.23-7.27(m,2h),7.34(dd,j＝8.8,2.3hz,1h),7.43(d,j＝8.8hz,1h),7.61(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.23(d,j＝8.8hz,1h),7.78(s,1h)?；衔?56的制備根據(jù)化合物149的合成，使用5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(如關(guān)于化合物196所述制備)制備化合物1566-氟-4-((2-羥基-3-(4-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2h-苯并[e][1,3]噁嗪-2-酮。lcmsm/z:452.2(m+1)。1hnmr(dmso-d6):δppm2.49-2.50(m,4h),3.31-3.34(m,3h),3.37-3.75(m,1h),3.98-3.99(m,4h),4.08-4.09(m,1h),5.00(d,j＝4.4hz,1h)7.23(d,j＝5.6hz,1h),7.38(dd,j＝8.8,4.6hz,1h),7.60-7.64(m,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),8.25(d,j＝5.6hz,1h),8.84(s,1h),8.99(s,1h),9.13-9.14(m,1h)。化合物158和159的制備如下文中所述制備化合物158。步驟1-2-{1-疊氮基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：將2-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-羥基乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(279mg,0.47mmol,參見化合物152)溶解在無水dcm(30ml)中，加入tea(98μl,0.7mmol)，并將混合物冷卻至0℃。加入mscl(40μl,0.52mmol)并將混合物在0℃攪拌1h。然后加入疊氮化鈉(244mg,3.8mmol)和mecn(16ml)。將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，然后用dcm稀釋。將有機(jī)相用水洗滌并在真空中濃縮。將粗制物質(zhì)通過si-柱(從100％cy至cy/乙酸乙酯6:4)純化，得到134mg(0.22mmol,46％收率)2-{1-疊氮基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝615.3步驟2-2-{1-氨基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮的合成：向2-{1-疊氮基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(134mg,0.22mmol)在thf/h2o3:1(44ml)中的溶液中，加入三苯基膦(69mg,0.26mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，然后加入dcm，隨后加入水。將有機(jī)相分離并在真空中蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過si-柱(dcm/甲醇98:2)純化以得到124mg(0.21mmol,96％收率)2-{1-氨基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮。lc-ms(m-h+)＝589.5步驟3-2-{1-氨基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮鹽酸鹽(化合物158)和n-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-(4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-2-基)乙基}甲酰胺鹽酸鹽(化合物159)的合成：將2-{1-氨基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(124mg,0.21mmol)溶解在4mhcl在二噁烷中的溶液(10ml)中。加入水(1ml)并將混合物在室溫?cái)嚢?h。在真空中除去溶劑，將得到的固體通過c-18反相色譜法純化，用(水+0.1％甲酸/甲醇+0.1％甲酸)洗脫?；厥?-{1-氨基-2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-4(1h)-酮(化合物158)和對(duì)應(yīng)的n-{2-[4-(7-氟異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-1-(4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[3,4-d]咪唑-2-基)乙基}甲酰胺(化合物159)。化合物158:將產(chǎn)物溶解在dcm中并加入1m的hcl在乙醚中的溶液，得到39mg作為鹽酸鹽的標(biāo)題化合物。lc-ms(m-h+)＝459.3。1hnmr.(500mhz,甲醇-d4)δppm2.87-2.98(m,2h),3.04-3.12(m,2h),3.20(d,j＝6.85hz,2h),3.83-4.03(m,4h),4.88-4.99(m,1h),7.46(t,j＝7.60hz,1h),7.51(d,j＝7.60hz,1h),7.58-7.63(m,1h),7.66(d,j＝6.85hz,1h),7.80(d,j＝6.85hz,1h),7.88(td,j＝8.80,2.00hz,1h),7.99(dd,j＝9.78,1.96hz,1h),8.05(d,j＝7.60hz,1h),8.16(dd,j＝8.80,5.38hz,1h)?；衔?59：將產(chǎn)物溶解在dcm中并加入1m的hcl在乙醚中的溶液，得到3.3mg作為鹽酸鹽的標(biāo)題化合物。lc-ms(m-h+)＝487.3。1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm3.70-4.01(m,9h),4.14(dd,j＝13.30,6.02hz,1h),5.98(t,j＝6.90hz,1h),7.45(t,j＝7.53hz,1h),7.49-7.54(m,1h),7.57-7.63(m,1h),7.66(d,j＝6.27hz,1h),7.74(td,j＝8.66,2.30hz,1h),7.95(dd,j＝9.79,2.26hz,1h),8.01-8.15(m,3h),8.38(s,1h)?；衔?62的制備如下文中所述制備化合物162。步驟1-2-氯-5-氟煙酰胺的合成：在0℃，向2-氯-5-氟煙酸(5.0g,28.5mmol)在thf(50ml)中的溶液中，加入1,1’-羰基二咪唑(5.38g,39mmol)。將混合物回流3h，然后冷卻至0℃并加入thf*氨(60ml)。在室溫?cái)嚢?2h以后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將得到的粗制物通過快速色譜法(5％的meoh在dcm中的溶液)純化，得到作為白色固體的2-氯-5-氟煙酰胺(4.4g,88％)。lc-msm/z:175.2(m+1)。1hnmr(300mhz,dmso-d6):δppm7.87(br.s,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),8.10(br.s,1h),8.53(d,j＝2.9hz,1h)。步驟2-5-氟-2-甲基煙酰胺的合成：在氬氣下，將2-氯-5-氟煙酰胺(4.2g,24.0mmol)在dmf(42ml)中的溶液凈化15min。加入四甲基錫(8.58g,48mmol)和雙(三苯基膦)二氯化鈀(ii)(0.84g,1.2mmol)，并將得到的混合物在90℃攪拌6h，并然后穿過硅藻土床過濾。將濾液在減壓下濃縮，并將得到的粗制物通過快速色譜法(5％的meoh在dcm中的溶液)純化，得到作為淡棕色固體的5-氟-2-甲基煙酰胺(2.15g,58％)。lc-msm/z:155.2(m+1)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm2.53(s,3h),7.71-7.68(m,2h),7.98(s,1h),8.49(d,j＝2.9hz,1h)。步驟3-3-氟-1,6-萘啶-5(6h)-酮的合成：將5-氟-2-甲基煙酰胺(1.6g,10mmol)在無水dmf/dma(3.2ml)中的混合物在55℃加熱3h。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將無水dmf(10ml)加入得到的粗制物中。然后在0℃加入nah(60％在礦物油中,620mg,15.5mmol)，并將混合物在85℃加熱3h，冷卻，用水稀釋，并使用濃hcl中和。將反應(yīng)物質(zhì)在減壓下濃縮，并將得到的粗制物通過快速色譜法(5％的meoh.nh3在dcm中的溶液)純化，得到作為灰白色固體的3-氟-1,6-萘啶-5(6h)-酮(150mg,9％)。lcmsm/z:165.2(m+1)。1hnmr(300mhz,dmso-d6):δppm6.66(d,j＝7.5hz,1h),7.46-7.40(m,1h),8.27-8.21(m,1h),8.96(d,j＝3hz,1h),11.7(br.s,1h)。步驟4-5-氯-3-氟-1,6-萘啶的合成：將3-氟-1,6-萘啶-5(6h)-酮(150mg,0.9mmol)和磷酰氯(3.48g,23mmol)的混合物加熱至100℃保持3h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在減壓下濃縮以除去多余的pocl3。將得到的粗制物溶解在etoac中，并用飽和nahco3和水洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到作為淡棕色固體的5-氯-3-氟-1,6-萘啶(152mg,91.5％)。將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地原樣用在下一步中。lc-msm/z:183.2(m+1)。步驟5-6-氟-4-({3-[4-(3-氟-1,6-萘啶-5-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮(化合物162)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物149描述的合成，使用5-氯-3-氟-1,6-萘啶制備標(biāo)題化合物。lcmsm/z:469.2(m+1)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm2.78-2.58(m,6h),3.44-3.34(m,5h),3.73-3.71(m,1h),4.08-4.06(m,1h),5.04-5.02(m,1h),7.41-7.37(m,1h),7.49(d,j＝5.6hz,1h),7.65-7.61(m,1h),8.18-8.11(m,2h),8.31(d,j＝8hz,1h),9.17-9.10(m,2h)?；衔?63的制備根據(jù)關(guān)于化合物162描述的合成，從2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸開始，制備化合物1636-氟-4-[(2-羥基-3-{4-[3-(三氟甲基)-1,6-萘啶-5-基]哌嗪-1-基}丙基)氨基]-2h-1,3-苯并噁嗪-2-酮。lcmsm/z:519.2(m+1)。1hnmr(dmsod6):δppm2.26-2.18(m,4h),3.62-3.72(m,8h),4.24(br.s,1h),7.18-7.21(m,1h),7.21-7.34(m,2h),7.51(d,j＝6.0hz,1h),7.74-7.75(m,1h),8.35(d,j＝6.0hz,1h),8.52(s,1h),9.09(s,1h)?；衔?66的制備如下文中所述制備化合物166。步驟1-4-[3-(1,3-二氧代-1,3-二氫-2h-異吲哚-2-基)-2-羥丙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：將n-boc-哌嗪(15g,81mmol)和n-(2,3-環(huán)氧丙基)鄰苯二甲酰亞胺(16.4g,81mmol)在乙腈(100ml)中的混合物在70℃加熱6h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在真空下濃縮并將殘余物通過快速色譜法(硅膠,chcl3/meoh9/1)純化以得到20.4g棕色固體(52mmol,y＝64％)。lc-ms(m-h+)＝390.1步驟2-4-(3-氨基-2-羥丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：將4-[3-(1,3-二氧代-1,3-二氫-2h-異吲哚-2-基)-2-羥丙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(20.4g,52mmol)和30％的甲胺在etoh中的溶液(215ml)的溶液在密閉試管中在50℃加熱過夜。將混合物冷卻至室溫并過濾。將濾液在真空下濃縮并通過快速色譜法(硅膠,chcl3/meoh9/1)純化，得到4-(3-氨基-2-羥丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.2g,24mmol,y＝46％)。lc-ms(m-h+)＝260.1步驟3-三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基酯的合成：將6-氟-4-羥基-2h-色烯-2-酮(10g,55.5mmol)和tea(15.5ml,111mmol)在dcm(150ml)中的溶液在-10℃冷卻。逐滴加入三氟甲烷磺酸酐(10.3ml,61.1)在dcm(10ml)中的溶液。將混合物在-10℃攪拌2h并在室溫?cái)嚢柽^夜。將混合物用己烷/乙醚1/1稀釋，將固體濾過硅膠床并濃縮，得到固體(11.2g,35mmol,y＝63％)，將其不經(jīng)任何進(jìn)一步純化地使用。gc-ms＝312.0步驟4-4-{3-[(7-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-2-羥丙基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：將三乙胺(4ml,28.7mmol)在乙腈(20ml)中的溶液逐滴加入三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基酯(7.5g,23.9mmol)和4-(3-氨基-2-羥丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.2g,23.9mmol)在無水乙腈(50ml)中的攪拌溶液中。一旦加入結(jié)束，將溶液回流加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用dcm稀釋，并用飽和nahco3和水洗滌。然后將有機(jī)相分離，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過快速色譜法(硅膠,從100％chcl3至chcl3/meoh85/15)純化以得到4-{3-[(7-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-2-羥丙基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.2g,10mmol,y＝42％)。lc-ms(m-h+):422.2步驟5-7-氟-4-{[2-羥基-3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮鹽酸鹽的合成：將4-{3-[(7-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-2-羥基丙基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4g,9.5mmol)溶解在meoh(30ml)中，加入1.25mhcl在meoh中的溶液(4.5ml)，并將混合物回流2h。冷卻以后，將白色固體過濾并干燥，得到7-氟-4-{[2-羥基-3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮鹽酸鹽(3.4g,y＝定量)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。lc-ms(m-h+):322.2步驟6-6-氟-4-({2-羥基-3-[4-(1,6-萘啶-5-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮(化合物166)的合成：向7-氟-4-{[2-羥基-3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮鹽酸鹽(261mg,0.73mmol)和tea(0.2ml,1.46mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入5-氯-1,6-萘啶(80mg,0.49mmol)。將混合物在100℃攪拌18h，然后冷卻，用水稀釋，并用etoac萃取。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空下濃縮，并將粗殘余物通過快速色譜法(硅膠,chcl3/meoh95/5)純化以得到95mg(0.21mmol,y＝29％)標(biāo)題化合物。lc-ms(m-h+):450.2。1hnmr(300mhz,氯仿-d)δ＝9.01(dd,j＝1.2,4.3hz,1h),8.42-8.33(m,2h),7.53(d,j＝5.9hz,1h),7.45(dd,j＝4.3,8.4hz,1h),7.36-7.19(m,4h),5.78(t,j＝4.3hz,1h),5.36(s,1h),4.26-4.10(m,1h),3.50(s,6h),3.28-3.15(m,1h),3.05-2.93(m,2h),2.81-2.70(m,2h),2.62(d,j＝6.8hz,2h)?；衔?71的制備如下文中所述制備化合物171。步驟1-3-甲氧基哌啶-4-胺二鹽酸鹽的合成：將4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯(900mg,3.9mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液冷卻至0-5℃。加入4mhcl在二噁烷中的溶液(9ml)。在室溫?cái)嚢?h以后，將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。將得到的粗制物與石油醚(3x25ml)一起研磨，過濾并在減壓下干燥，得到作為灰白色固體的3-甲氧基哌啶-4-胺二鹽酸鹽(700mg,粗制物)。ls-ms(elsd)m/z:131.2(m+h)。步驟2-1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-胺的合成：向3-甲氧基哌啶-4-胺二鹽酸鹽(700mg,3.4mmol)在1-丁醇(3ml)中的攪拌溶液中，加入dipea(1.07g,8.28mmol)。在室溫?cái)嚢?5min以后，加入1-氯-7-氟異喹啉(300mg,1.6mmol)。將混合物在100℃攪拌48h，然后冷卻并在減壓下濃縮。將殘余物用水(25ml)稀釋，并用etoac(3x50ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)。將得到的粗制物通過快速色譜法(硅膠,8-10％的meoh在dcm中的溶液)純化，得到作為淡黃色固體的1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-胺(150mg,32.9％)。ls-msm/z:276.1(m+h)。步驟3-2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(化合物171)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物145的合成描述的操作，使用1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物。通過快速色譜法(硅膠,5％的meoh在dcm中的溶液)純化，隨后手性sfc分離，得到2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(未指定的立體異構(gòu)體,y＝11％)。lc-ms(m-h+)＝473.2。1hnmr(dmsod6):δppm12.60(brs,1h),8.08(d,j＝5.6hz,2h),8.07-7.97(m,1h),7.77-7.74(m,1h),7.66-7.62(m,1h),7.45-7.34(m,4h),6.58(s,1h),3.92-3.91(m,2h),3.72-3.63(m,3h),3.33-3.29(m,3h),3.11-3.08(m,2h),2.93-2.91(m,1h),1.91-1.83(m,2h)?；衔?72的制備根據(jù)關(guān)于化合物171的合成描述的操作，使用4-氨基-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯制備化合物172。通過快速色譜法(硅膠,5％的meoh在dcm中的溶液)純化，隨后手性sfc分離，得到2-({[3-氟-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(未指定的立體異構(gòu)體,y＝7％)。ls-msm/z:461.2(m+1)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.56(brs,1h),8.11-8.08(m,2h),8.02-7.98(m,1h),7.75(d,j＝10.4hz,1h),7.67-7.62(m,1h),7.46-7.34(m,4h),6.60(s,1h),5.07-4.95(m,1h),3.99-3.93(m,3h),3.74-3.71(m,1h),3.22-2.99(m,1h),2.97-2.78(m,2h),1.98-1.97(m,2h)?；衔?77的制備根據(jù)關(guān)于化合物171的合成描述的操作，使用4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯制備2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲基哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮。通過快速色譜法(硅膠,0-6％的meoh在dcm中的溶液)純化，隨后手性sfc分離，得到標(biāo)題化合物(未指定的立體異構(gòu)體,y＝7％)。ls-msm/z:457.2(m+h)。1hnmr(dmsod6):δppm12.55(brs,1h),8.09-8.06(m,2h),8.01-7.97(m,1h),7.67-7.62(m,2h),7.45-7.35(m,4h),6.59(s,1h),4.01-3.98(m,1h),3.90-3.86(m,1h),3.72-3.69(m,1h),3.62-3.59(m,1h),2.89(t,j＝12hz,1h),2.68-2.60(m,1h),2.33-2.15(m,2h),1.86-1.80(m,1h),1.65-1.60(m,1h),1.01(d,j＝6.8hz,3h)?；衔?84的制備如下文中所述制備化合物184。步驟1-4-氨基-1-芐基哌啶-3-甲酸乙酯的合成：根據(jù)關(guān)于中間體4-氨基-3-(芐氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯描述的操作(參見化合物186)，使用1-芐基-4-氧代哌啶-3-甲酸乙酯，制備標(biāo)題化合物，為順式/反式外消旋混合物(y＝65％)。ls-msm/z:263.2(m+h)。步驟2-1-芐基-4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-3-甲酸乙酯的合成：向4-氨基-1-芐基哌啶-3-甲酸乙酯(6g,22.87mmol)在dcm(20ml)中的冷(0-5℃)溶液中緩慢地加入tea(9.5ml,68.61mmol)和boc酸酐(5.98g,27.4mmol)。在室溫?cái)嚢?h以后，將混合物用水(25ml)稀釋，并用dcm(3x30ml)萃取。將合并的有機(jī)層用水(25ml)和鹽水溶液(25ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空下濃縮。將得到的粗制物通過快速色譜法(硅膠,30-35％的etoac在石油醚中的溶液)純化以得到作為順式/反式外消旋混合物的標(biāo)題化合物(1.4g)。ls-msm/z:363.2(m+h)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δppm7.31-7.28(m,5h),5.32(brs,1h),4.17-4.12(m,3h),3.90-3.80(m,1h),3.60-3.31(m,2h),3.15-3.08(m,1h),2.79-2.76(m,1h),2.24-2.20(m,3h),2.09-2.06(m,1h),1.61-1.59(m,1h),1.45(s,9h),1.22-1.18(m,2h)。步驟3-4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-3-甲酸乙酯的合成：在室溫、氮?dú)夥障?，?-芐基-4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-3-甲酸乙酯(1.4g,3.86mmol)在acoh(30ml)中的攪拌溶液中加入10％pd/c(140mg,50％濕)。將反應(yīng)混合物在50℃氫化24h，然后在硅藻土床上過濾并將濾液在減壓下濃縮，得到作為順式/反式外消旋混合物的4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-3-甲酸乙酯(900mg,85％收率)。ls-ms(elsd)m/z:273.2(m+h)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δppm5.56-5.45(m,1h),4.33-4.12(m,2h),3.90-3.78(m,1h),3.45-3.33(m,1h),3.15-3.01(m,1h),2.86-2.68(m,3h),1.88-1.76(m,3h),1.45(s,9h),1.32-1.23(m,3h)。步驟4-4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-3-甲酸乙酯的合成：根據(jù)關(guān)于中間體1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-胺描述的操作(參見化合物171)，使用4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-3-甲酸乙酯制備標(biāo)題化合物，為順式/反式外消旋混合物(y＝24％)。ls-msm/z:418.2(m+h)。1hnmr(cdcl3):δppm8.18-8.16(m,1h),7.91-7.88(m,1h),7.87-7.85(m,1h),7.52-7.44(m,1h),7.35-7.30(m,1h),5.67(brs,1h),4.29-4.01(m,4h),3.35-3.33(m,1h),3.20-3.18(m,1h),2.45-2.42(m,2h),2.08-1.98(m,2h),1.45(s,9h),1.25-1.17(m,3h)。步驟5-4-氨基-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽的合成：根據(jù)關(guān)于中間體3-甲氧基哌啶-4-胺二鹽酸鹽描述的操作(參見化合物171)，使用4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-3-甲酸乙酯制備標(biāo)題化合物，為順式/反式外消旋混合物(y＝88％)。ls-msm/z:318.1(m+h)。步驟6-1-(7-氟異喹啉-1-基)-4-{[(4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}哌啶-3-甲酸乙酯(化合物184)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物145的合成描述的操作，使用4-氨基-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-3-甲酸乙酯鹽酸鹽制備標(biāo)題化合物，為順式/反式外消旋混合物(y＝9％)。ls-msm/z:515.2(m+h)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.48(brs,1h),8.12(d,j＝5.6hz,1h),8.06(d,j＝7.6hz,1h),8.03-7.98(m,1h),7.71-7.63(m,2h),7.46-7.24(m,4h),6.59(s,1h),4.07-3.84(m,5h),3.59-3.11(m,5h),2.08-1.92(m,2h),1.04-1.03(m,3h)?；衔?86的制備如下文中所述制備化合物186。步驟1-4-氨基-3-(芐氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：將3-(芐氧基)-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.9g,6.2mmol)和乙酸銨(3.35g,43.5mmol)在甲醇(100ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?h，然后冷卻至10℃。加入氰基硼氫化鈉(580mg,9.3mmol)并將混合物在室溫?cái)嚢?8h。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮，用水(20ml)稀釋，并用etoac(3x50ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(40ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮，得到作為淡綠色粘性物的粗制物4-氨基-3-(芐氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6g)。將該粗制物不經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步。ls-msm/z:307.1(m+h)。步驟2-33-(芐氧基)哌啶-4-胺二鹽酸鹽的合成：將4-氨基-3-(芐氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.6g,5.2mmol)在1,4,二噁烷(5ml)中的攪拌溶液冷卻至0-5℃。加入hcl(4m在1,4二噁烷中的溶液,16ml)并將混合物在室溫?cái)嚢?h。在減壓下除去溶劑，將得到的粗制物與石油醚(3x25ml)一起研磨并過濾。將灰白色固體在減壓下干燥，得到3-(芐氧基)哌啶-4-胺二鹽酸鹽(1.5g,粗制物)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步。ls-msm/z:207.1(m+h-2hcl)。步驟3-3-(芐氧基)-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成：根據(jù)關(guān)于中間體1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-甲氧基哌啶-4-胺描述的操作(參見化合物171)，使用3-(芐氧基)哌啶-4-胺二鹽酸鹽制備標(biāo)題化合物(y＝35％)。ls-msm/z:352.1(m+h)。步驟4-2-({[3-(芐氧基)-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：根據(jù)關(guān)于化合物145的合成描述的操作，使用3-(芐氧基)-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺制備作為立體異構(gòu)體的混合物的標(biāo)題化合物(y＝45％)。ls-msm/z549.1(m+h)。步驟5-2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-羥基哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(化合物186)的合成：在0-5℃，在帶罩試管中向2-({[3-(芐氧基)-1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(立體異構(gòu)體的混合物,200mg,0.36mmol)在氯仿(20ml)中的攪拌溶液中，緩慢地加入三甲基碘硅烷(0.729g,3.6mmol)。將混合物在70℃攪拌4h，然后用硫代硫酸鈉溶液(30ml)稀釋并過濾。將殘余物用氯仿(3x15ml)和石油醚(2x20ml)洗滌。通過快速色譜法(硅膠,8-10％的meoh在dcm中的溶液)純化，隨后進(jìn)行制備型hplc分離，得到作為灰白色固體的2-({[1-(7-氟異喹啉-1-基)-3-羥基哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(未指定的立體異構(gòu)體,18mg,11％收率)。ls-msm/z:459.2(m+h)。1hnmr(400mhz,dmsod6):δppm12.35(brs,1h),8.09-7.95(m,4h),7.65-7.60(m,1h),7.44-7.35(m,4h),6.57(s,1h),5.03-5.02(m,1h),3.99-3.93(m,1h),3.91-3.72(m,2h),3.69-3.33(m,2h),3.05-3.01(m,2h),2.76-2.67(m,1h),1.89-1.77(m,2h)。化合物187的制備如下文中所述制備化合物187。步驟1-[1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：根據(jù)關(guān)于1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成描述的操作(參見化合物145)，使用5-氯-1,6-萘啶制備中間體[1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯。y＝82％。lc-ms(m-h+)＝329.3步驟2-1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-胺的合成：根據(jù)關(guān)于1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成描述的操作(參見化合物145)，使用[1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯制備中間體1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-胺。y＝98％。將所述化合物不經(jīng)任何表征地使用。步驟3-4-氯-6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-3-甲醛的合成：在0℃，向攪拌體積(25ml)的dmf中一次性加入pocl3(25ml)。將得到的溶液在50℃加熱0.5h，然后加入6-氟-4-羥基香豆素(5g,27.7mmol)在dmf(50ml)中的溶液。將混合物在60℃攪拌3h，然后倒入冰中。攪拌20min以后，加入dcm(50ml)并分離有機(jī)相，經(jīng)na2so4干燥并在真空中濃縮，得到6.2g4-氯-6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-3-甲醛，其不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。步驟4-8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯的合成：根據(jù)關(guān)于4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸酯的合成描述的操作(參見化合物145)，使用4-氯-6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-3-甲醛制備中間體8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯(y＝50％)。lc-ms(m-h+)＝276.1步驟5-8-氟-2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：根據(jù)關(guān)于2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(參見化合物145)，使用8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸酯制備中間體8-氟-2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮。將化合物不經(jīng)進(jìn)一步表征地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝234.2步驟6-8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：根據(jù)關(guān)于4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成描述的操作(參見化合物145)，使用8-氟-2-(羥基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮制備中間體8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛。將化合物不經(jīng)進(jìn)一步表征地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝232.2步驟7-8-氟-2-({[1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-4(3h)-酮(化合物187)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物145的合成描述的操作，使用8-氟-4-氧代-1,4-二氫[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛和1-(1,6-萘啶-5-基)哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物(y＝41％)。lc-ms(m-h+)＝444.3。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.55-1.69(m,2h),2.03(d,j＝10.15hz,2h),2.67-2.76(m,1h),3.01(t,j＝11.12hz,2h),3.77(d,j＝12.90hz,2h),3.91(s,2h),6.59(s,1h),7.29(td,j＝8.65,3.02hz,1h),7.37(d,j＝6.04hz,1h),7.47(dd,j＝9.06,4.67hz,1h),7.57(dd,j＝8.37,4.25hz,1h),7.95(dd,j＝9.06,3.02hz,1h),8.26(d,j＝5.76hz,1h),8.39(d,j＝7.96hz,1h),8.99(dd,j＝4.39,1.65hz,1h),11.96-13.07(m,1h)。化合物188的制備如下文中所述制備化合物188。步驟1-2-1-(6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺的合成：將8-溴-2-甲氧基-1,5-萘啶(250mg,1mmol)、4-(n-boc-氨基)哌啶(600mg,3mmol)和dipea(44μl,0.25mmol)在nmp(4ml)中的混合物在90℃攪拌過夜。加入dcm(20ml)并將混合物用飽和nahco3洗滌。在真空中除去溶劑并將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用cy至乙酸乙酯100％洗脫。將產(chǎn)物溶解在dcm(20ml)中，加入tfa(4ml)并將混合物在40℃攪拌1h。將溶劑在真空中蒸發(fā)，并將殘余物通過scx柱純化以得到265mg1-(6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺。lc-ms(m-h+)＝259.2步驟3-8-氟-2-({[1-(6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-4(3h)-酮(化合物188)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物187的合成描述的操作，使用1-(6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物(y＝23％)。lc-ms(m-h+)＝474.3。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.48-1.65(m,2h),2.04(d,j＝10.15hz,2h),2.66-2.79(m,1h),3.00(t,j＝10.84hz,2h),3.91(s,2h),3.97(s,3h),4.26(d,j＝12.35hz,2h),6.59(s,1h),6.93(d,j＝5.49hz,1h),7.16(d,j＝9.06hz,1h),7.29(td,j＝8.65,3.02hz,1h),7.47(dd,j＝9.06,4.67hz,1h),7.95(dd,j＝9.06,3.02hz,1h),8.13(d,j＝8.78hz,1h),8.43(d,j＝5.21hz,1h),11.53-13.13(m,1h)?；衔?92的制備如下文中所述制備化合物192。步驟1-2-1-(3-氟-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺的合成：在瓶中，將8-溴-7-氟-2-甲氧基-1,5-萘啶(250mg,0.97mmol)、n-(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(194mg,0.97mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(53mg,0.06mmol)、rac-binap(37mg,0.06mmol)、cs2co3(664mg,2.04mmol)和18-冠-6(26mg,0.097mmol)在二噁烷(10ml)中組合并用n2凈化。將瓶在攪拌下快速地加熱至100℃。12h以后，將溶液過濾，濃縮，并將殘余物通過快速色譜法(硅膠,1％的meoh在dcm中的溶液)純化，產(chǎn)生作為橙色固體的[1-(3-氟-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(309mg,0.82mmol,82％收率)，將其不經(jīng)進(jìn)一步表征地使用。將化合物溶解在dcm(20ml)中并冷卻至0℃。加入tfa(3ml)并將混合物攪拌1h。將溶劑除去并將殘余物溶解在二氯甲烷/meoh中，并加載到scx柱上，將其用meoh洗脫，然后用2m的氨在meoh中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分蒸發(fā)以得到1-(3-氟-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺(180mg,0.66mmol,80％收率。lc-ms(m-h+)＝277.3步驟3-8-氟-2-({[1-(3-氟-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-4(3h)-酮(化合物192)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物187的合成描述的操作，使用1-(3-氟-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物(y＝16％)。lc-ms(m-h+)＝492.1。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δppm1.68-1.82(m,2h),2.12(d,j＝9.29hz,2h),2.81-2.92(m,1h),3.37(t,j＝12.42hz,2h),4.02(s,2h),4.04-4.08(m,3h),4.15(d,j＝11.80hz,2h),6.73(s,1h),7.10(d,j＝9.03hz,1h),7.22(td,j＝8.72,2.89hz,1h),7.44(dd,j＝8.70,4.52hz,1h),7.65(dd,j＝8.70,2.90hz,1h),8.08(d,j＝9.04hz,1h),8.42(d,j＝4.77hz,1h)?；衔?95的制備如下文中所述制備化合物195。步驟1-{[(6-甲氧基吡啶-3-基)氨基]亞甲基}丙二酸二乙酯的合成：將6-甲氧基吡啶-3-胺(5g,40.3mmol)和乙烯-1,1,2-三甲酸三乙酯(8.13ml,40.3mmol)在etoh(50ml)中的溶液回流3h。冷卻以后，將混合物在真空下濃縮，得到作為暗紅色油的{[(6-甲氧基吡啶-3-基)氨基]亞甲基}丙二酸二乙酯(12g,定量)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。lc-ms(m-h+)＝295.3步驟2-6-甲氧基-4-氧代-1,4-二氫-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯的合成：在配有蒸餾頭和回流冷凝器的50ml3-頸燒瓶中使a(10ml)達(dá)到沸騰(250℃)。分批加入{[(6-甲氧基吡啶-3-基)氨基]亞甲基}丙二酸二乙酯(2.1g,7.2mmol)。將混合物沸騰15分鐘，然后將它冷卻至室溫，用cy(15ml)稀釋并在-20℃冷卻過夜。將棕色沉淀物過濾，并用cy洗滌，得到棕色固體，將其與etoac一起研磨。將混懸液過濾，得到作為灰色固體的6-甲氧基-4-氧代-1,4-二氫-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯(1.04g,4.2mmol,58％收率)。lc-ms(m-h+)＝249.2步驟3-4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯的合成：將6-甲氧基-4-氧代-1,4-二氫-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯(6.3g,25.4mmol)在dmf(20ml)中的混懸液在n2下在室溫?cái)嚢琛Ｖ鸬渭尤肴寤?2.5ml,26.7mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌另外30分鐘。將混合物放在冰浴中并加入水(120ml)，隨后加入飽和na2co3至ph7。將固體在真空下過濾，用水洗滌并在真空下干燥。將粗產(chǎn)物通過nh柱純化(洗脫液從cy100％至cy/etoac95/5％)，得到4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯(6.6g,21mmol,83％收率)。lc-ms(m-h+)＝311.1步驟4-4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸的合成：將4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸乙酯(500mg,1.6mmol)在thf(4.5ml)和水(1.5ml)中的溶液用lioh.h2o(201mg,4.8mmol)處理。將混合物在室溫?cái)嚢?h，然后濃縮。將殘余物溶解在水(5ml)中并用1nhcl調(diào)至ph4，得到沉淀物，將其過濾，并用冷水洗滌，得到作為白色固體的4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸(409mg,1.45mmol,90％收率)。lc-ms(m-h+)＝283.1步驟5-4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酰胺的合成：向4-溴-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酸(350mg,1.24mmol)在無水dcm(5ml)中的溶液中加入socl2(136μl,1.86mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h。將混合物濃縮并將殘余物溶解在0.5m的氨在二噁烷中的溶液(7.4ml,3.7mmol)中。將反應(yīng)混合物攪拌1h，然后濃縮，并將粗制物4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酰胺(0.6g)不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。lc-ms(m-h+)＝238.2步驟6-4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈的合成：向4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲酰胺(粗制的0.6g,2.5mmol)在thf(15ml)中的混懸液中加入burgess試劑(1.2g,5.0mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?h。在真空下除去溶劑并將殘余物通過色譜柱snap-25純化，用dcm洗脫，以得到190mg(0.87mmol,35％收率)4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈。lc-ms(m-h+)＝220.2步驟7-[1-(3-氰基-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：根據(jù)關(guān)于[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成描述的操作(參見化合物145)，使用4-氯-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈制備標(biāo)題中間體。y＝92％。lc-ms(m-h+)＝384.4步驟8-4-(4-氨基哌啶-1-基)-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈的合成：根據(jù)關(guān)于1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成描述的操作(參見化合物145)，使用[1-(3-氰基-6-甲氧基-1,5-萘啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物。y＝88％。lc-ms(m-h+)＝284.3步驟9-4-(4-{[(8-氟-4-氧代-3,4-二氫[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}哌啶-1-基)-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈的合成(化合物195)：根據(jù)關(guān)于化合物187的合成描述的操作，使用4-(4-氨基哌啶-1-基)-6-甲氧基-1,5-萘啶-3-甲腈制備標(biāo)題化合物(y＝35％)。lc-ms(m-h+)＝499.4。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.54-1.72(m,2h),2.02-2.14(m,2h),2.63(br.s.,1h),2.75-2.87(m,1h),3.52(t,j＝11.07hz,2h),3.92(s,2h),3.96(s,3h),4.32(d,j＝11.10hz,2h),6.60(s,1h),7.22-7.35(m,2h),7.47(dd,j＝9.15,4.66hz,1h),7.95(dd,j＝9.10,2.96hz,1h),8.17(d,j＝8.99hz,1h),8.57(s,1h),12.50(br.s.,1h)?；衔?96的制備如下文中所述制備化合物196。步驟1-5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪的合成：將2-氯吡啶-3,4-二胺(1g,6.96mmol)和乙二醛溶液(40wt％在水中，3.2ml,27.84mmol)在乙醇(20ml)中的混合物回流2小時(shí)，然后冷卻至室溫。將沉淀物過濾，用etoh洗滌并在真空中干燥，得到5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(0.3g,1.8mmol,26％收率)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。lc-ms(m-h+)＝166.1步驟2-[1-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：根據(jù)關(guān)于[1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成描述的操作(參見化合物145)，使用5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪制備標(biāo)題中間體。y＝69％。lc-ms(m-h+)＝330.4步驟3-1-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-胺的合成：根據(jù)關(guān)于1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成描述的操作(參見化合物145)，使用[1-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物。y＝98％。lc-ms(m-h+)＝230.3步驟4-8-氟-2-({[1-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-4(3h)-酮(甲酸鹽,化合物196)的合成：根據(jù)關(guān)于化合物187的合成描述的操作，使用1-(吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物(y＝37％)。lc-ms(m-h+)＝445.4。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.42-1.61(m,2h),2.02(d,j＝10.30hz,2h),2.76-2.91(m,1h),3.22(t,j＝11.46hz,2h),3.96(s,2h),4.80(d,j＝11.50hz,2h),6.62(s,1h),7.20(d,j＝5.70hz,1h),7.29(td,j＝8.74,3.01hz,1h),7.47(dd,j＝9.10,4.60hz,1h),7.95(dd,j＝9.10,2.96hz,1h),8.24(d,j＝5.70hz,1h),8.83(d,j＝1.75hz,1h),8.98(d,j＝1.75hz,1h)。化合物199的制備如下文中所述制備化合物199。步驟1-5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪-3(4h)-酮的合成：將2-氯吡啶-3,4-二胺(1g,6.96mmol)和乙醛酸溶液(50wt％在h2o中,0.92ml,8.35mmol)在meoh(20ml)中的混合物在瓶中在50℃加熱過夜。將混合物冷卻至室溫并在真空中除去溶劑。將殘余物與et2o一起研磨并將混懸液過濾。將粗產(chǎn)物通過c-18色譜法(從100％水+0.1％甲酸至80/20水+0.1％甲酸/mecn+0.1％甲酸)純化，得到5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪-3(4h)-酮(255mg,1.4mmol,20％收率)。lc-ms(m-h+)＝182.1步驟2-3,5-二氯吡啶并[3,4-b]吡嗪的合成：將5-氯吡啶并[3,4-b]吡嗪-3(4h)-酮(200mg,1.1mmol)和磷酰氯(6ml)的混合物回流2小時(shí)。冷卻以后，在真空下除去溶劑。將反應(yīng)混合物小心地倒在冰上并用飽和na2co3溶液中和。加入dcm，將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將粗制物質(zhì)通過nh-色譜法(從100％dcm至80/20dcm/etoac)純化，得到3,5-二氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(200mg,1mmol,91％收率)。lc-ms(m-h+)＝200.1步驟3-5-氯-3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪的合成：向3,5-二氯吡啶并[3,4-b]吡嗪(200mg,1mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入甲醇鈉(0.5m在meoh中的溶液,2.2ml,1.1mmol)，并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將溶液用水稀釋，并用etoac萃取。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮，得到5-氯-3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪(150mg,0.77mmol,77％收率)。lc-ms(m-h+)＝196.1步驟4-[1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：將5-氯-3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪(100mg,0.55mmol)和4-(n-boc-氨基)哌啶(332mg,1.66mmol)懸浮于異丙醇(5ml)中并在回流下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)溶液濃縮并通過nh-色譜法(從100％dcm至95/5dcm/meoh)純化，得到[1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(170mg,0.47mmol,85％收率)。lc-ms(m-h+)＝360.4步驟5-1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-胺的合成：根據(jù)關(guān)于1-(7-氟異喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成描述的操作(參見化合物145)，使用[1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯制備標(biāo)題化合物。y＝91％。lc-ms(m-h+)＝260.3步驟6-8-氟-2-({[1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[3,4-b]吡咯-4(3h)-酮的合成(甲酸鹽,化合物199)：根據(jù)關(guān)于化合物187的合成描述的操作，使用1-(3-甲氧基吡啶并[3,4-b]吡嗪-5-基)哌啶-4-胺制備標(biāo)題化合物(y＝44％)。lc-ms(m-h+)＝475.2。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.35-1.53(m,2h),1.89-2.02(m,2h),2.69-2.84(m,1h),3.11(t,j＝11.35hz,2h),3.90(s,2h),3.99(s,3h),4.60-4.71(m,2h),6.57(s,1h),6.98(d,j＝5.67hz,1h),7.26(td,j＝8.75,3.03hz,1h),7.44(dd,j＝9.10,4.60hz,1h),7.92(dd,j＝9.10,3.03hz,1h),8.13(d,j＝5.48hz,1h),8.15(s,1h),8.42(s,1h),12.68(br.s.,1h)?；衔?03的制備如下文中所述制備化合物203。步驟1-1-溴-7-甲氧基異喹啉-3-胺的合成：根據(jù)關(guān)于2-(氰基甲基)-5-氟芐腈的合成描述的操作(參見化合物149)，使用2-(氰基甲基)-5-甲氧基芐腈制備標(biāo)題中間體(y＝17％)。lcmsm/z:253.0(m+1)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δppm7.55(d,j＝9.1hz,1h),7.22(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.14(d,j＝2.5hz,1h),6.64(s,1h),6.05(s,2h),3.85(s,3h)。步驟2-1-溴-3-氟-7-甲氧基異喹啉的合成：根據(jù)關(guān)于1-溴-3,7-二氟異喹啉的合成描述的操作(參見化合物149)，使用1-溴-7-甲氧基異喹啉-3-胺制備標(biāo)題中間體(y＝66％)。lcmsm/z:256.0(m+1)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm8.01(d,j＝9.0hz,1h),7.71(s,1h),7.58(dd,j＝9.3,2.2hz,1h),7.43(d,j＝2.4hz,1h),3.96(s,3h)。步驟3-6-氟-4-({3-[4-(3-氟-7-甲氧基異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮(化合物203)的合成：將n,n-二異丙基乙胺(1.7ml,9.57mmol)加入1-溴-3-氟-7-甲氧基異喹啉(490mg,1.91mmol)和6-氟-4-{[2-羥基-3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮鹽酸鹽(如在化合物166的合成中所述制備，754mg,1.91mmol)在dmso(15ml)中的攪拌混懸液中。將得到的混合物在100℃攪拌18h，然后冷卻，倒入水(25ml)中，并用乙醚(3x25ml)和用dcm(20ml)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥,過濾并濃縮。將粗制物吸附到硅膠上并通過快速色譜法(dcm/meoh/nh3)純化，得到作為米色固體的6-氟-4-({3-[4-(3-氟-7-甲氧基異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]-2-羥丙基}氨基)-2h-1-苯并吡喃-2-酮(375mg,39％收率)。lcmsm/z:497.1(m+1)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm8.02(dd,j＝10.0,2.9hz,1h),7.82(d,j＝9.0hz,1h),7.71(t,j＝5.5hz,1h),7.52-7.43(m,1h),7.42-7.33(m,2h),7.28(d,j＝2.4hz,1h),7.01(s,1h),5.34(s,1h),4.99(d,j＝4.8hz,1h),4.03-3.92(m,1h),3.89(s,3h),3.48-3.35(m,5h),3.29-3.18(m,1h),2.83-2.68(m,4h)。化合物89的制備按照合成途徑r，如下文所述制備化合物89。步驟1將碳酸鉀(634mg,4.6mmol,1.5當(dāng)量)、1-氯異喹啉(500mg,3.1mmol,1當(dāng)量)和哌嗪-2-甲酸甲酯(880mg,6.1mmol,2當(dāng)量)在dmso(4ml)中的混合物在微波輻射下加熱至120℃保持5小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫。將固體過濾，用水洗滌，然后在減壓下干燥，得到4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酸甲酯,中間體化合物r1(y＝81％)。步驟2將nah(60％的在礦物油中的分散體,81mg,2mmol,1.1當(dāng)量)和n-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(330mg,1.4mmol,0.75當(dāng)量)加入中間體化合物r1(488mg,1.8mmol,1當(dāng)量)在無水dmf(6ml)中的攪拌溶液中。將混合物攪拌4小時(shí)，然后用水淬滅，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并在硅膠上色譜分離，用50-100％etoac在石油醚中的溶液梯度洗脫，得到1-{3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基}-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酸甲酯中間體化合物r2(y＝51％)。步驟3向中間體化合物r2(130mg,0.3mmol,1當(dāng)量)在thf/水9:1(10ml)中的溶液中加入lioh(13mg,0.33mmol,1.1當(dāng)量)。將混合物在60℃攪拌5小時(shí)，然后在減壓下濃縮。將粗制物質(zhì)溶解在dmf(2ml)中，加入tea(62μl,0.45mmol,1.5當(dāng)量)，隨后加入六甲基二硅氮烷(72.4mg,0.45mmol,1.5當(dāng)量)。將混合物冷卻至0℃并加入hatu(137mg,0.36mmol,1.2當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢?h以后，將溶劑在真空中蒸發(fā)，將殘余物溶解在乙酸乙酯中，并用鹽水洗滌。將有機(jī)相分離、干燥并真空蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)通過si-柱純化，用乙酸乙酯至乙酸乙酯/meoh95:5洗脫，得到90mg{3-[2-氨甲?；?4-(異喹啉-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯,中間體化合物r3(y＝58％)。lc-ms(m-h+)＝414.4步驟4在室溫，將tfa(1ml)加入中間體化合物r3(78mg,0.2mmol,1當(dāng)量)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中，并將得到的混合物攪拌60分鐘。在減壓下蒸發(fā)揮發(fā)物，然后將殘余物溶解在meoh(2ml)中并加載到預(yù)處理的scx柱(1g)上。將scx用meoh洗脫，并然后用2m的氨在甲醇中的溶液洗脫。將堿性級(jí)分在減壓下蒸發(fā)以得到56mg1-(3-氨基丙基)-4-(異喹啉-1-基)哌嗪-2-甲酰胺,中間體化合物r4(y＝定量)。lc-ms(m-h+)＝314.2步驟5將中間體化合物r4(56mg,0.2mmol,1.1當(dāng)量)、三乙胺(37μl,0.27mmol,1.5當(dāng)量)和三氟甲磺酸2-氧代-2h-色烯-4-基酯,中間體化合物a1(53mg,0.18mmol,1當(dāng)量)在乙腈(2ml)中的溶液加熱至70℃保持1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并將殘余物在二氯甲烷(10ml)和鹽水/碳酸氫鈉混合物(1:1,10ml)之間分配。將混合物濾過疏水玻璃料(分相器)，用二氯甲烷(10ml)洗滌。將有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物在nh-改性的硅膠(2xsnap11串聯(lián))上色譜分離，用20-100％的etoac在環(huán)己烷中的溶液梯度洗脫，得到79mg無色的粘性膠狀物。將產(chǎn)物溶解在二氯甲烷(3ml)中并用1m的hcl在乙醚中的溶液(0.46ml)處理，生成沉淀。將得到的混合物在減壓下蒸發(fā)，并將殘余物與乙醚一起研磨。將固體干燥，得到4-(異喹啉-1-基)-1-{3-[(2-氧代-2h-色烯-4-基)氨基]丙基}哌嗪-2-甲酰胺鹽酸鹽(化合物89)(y＝25％)。lc-ms(m-h+)＝458.4化合物89:1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.23(br.s.,1h),8.38(br.s.,1h),8.19(d,j＝8.5hz,1h),8.15(d,j＝5.8hz,1h),8.05(d,j＝7.3hz,1h),7.99(br.s.,1h),7.96(d,j＝8.3hz,1h),7.83(t,j＝5.8hz,1h),7.78(t,j＝7.4hz,1h),7.70-7.64(m,1h),7.64-7.58(m,1h),7.54(d,j＝5.8hz,1h),7.39-7.29(m,2h),5.29(s,1h),4.49-3.82(m,4h),3.75-3.53(m,2h),3.48-3.19(m,6h),2.24-1.93(m,2h)生物學(xué)測(cè)定實(shí)施例1大腸桿菌(e.coli)和金黃色葡萄球菌(s.aureus)中的dna促旋酶和topoiv的抑制如下試驗(yàn)以上化合物：根據(jù)下述方法，在革蘭氏陽性的和革蘭氏陰性的細(xì)菌中，在促旋酶超螺旋測(cè)定中試驗(yàn)酶dna促旋酶的抑制和在斷開測(cè)定中試驗(yàn)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶iv的抑制。根據(jù)從以下文章修改的方案方法進(jìn)行兩種所述測(cè)定：blanchef,等人.“differentialbehaviorsofstaphylococcusaureusandescherichiacolitypeiidnatopoisomerases”,antimicrob.agentschemother.,1996,第40卷,第12期第2714-2720頁。一式兩份地在單一濃度(200、100或50μm)篩選所述化合物。分別在200和50μm的單一濃度，將環(huán)丙沙星和新生霉素用作參照化合物。dna促旋酶超螺旋測(cè)定.使用來自金黃色葡萄球菌和大腸桿菌促旋酶超螺旋測(cè)定試劑盒(inspiralis,uk)的試劑。用下述試劑制備具有對(duì)于要進(jìn)行的反應(yīng)數(shù)目而言足夠的總體積的主混合物：5x測(cè)定緩沖液，松弛的pbr322底物(0.5μg/反應(yīng))，無rna酶-dna酶的水。將該混合物的等分試樣分配在每個(gè)試管中，然后將10x化合物儲(chǔ)備溶液或媒介物對(duì)照(dmso)加入每個(gè)反應(yīng)試管中。用大腸桿菌(2u/反應(yīng))或金黃色葡萄球菌(1u/反應(yīng))促旋酶酶添加開始反應(yīng)。將加入了等體積的稀釋緩沖液的樣品用作陰性對(duì)照(不含酶)。將反應(yīng)試管輕輕渦旋并在37℃溫育30分鐘。通過加入30μl停止緩沖液和30μl氯仿/異戊醇(24/1)來停止每個(gè)反應(yīng)，簡(jiǎn)單渦旋5-10秒并在20000xg離心2分鐘。將樣品加載到1％瓊脂糖凝膠上并在tae(40mmtris-乙酸鹽,2mmedta)中在80v恒定電壓進(jìn)行電泳1小時(shí)。數(shù)據(jù)采集和分析.用含有dna促旋酶的松弛的pbr322處理，將松弛的拓?fù)洚悩?gòu)體(不同連接數(shù)目的dna)轉(zhuǎn)化成質(zhì)粒的超螺旋形式，其在瓊脂糖凝膠上更快地遷移。上面的泳帶也可能是可見的，其由開環(huán)(帶切口的)dna組成，所述dna存在于松弛的底物中，但是與一些松弛的拓?fù)洚悩?gòu)體共同遷移。通過溴化乙錠染色(稀釋度1:20000)觀察泳帶30分鐘，隨后在蒸餾水中脫色10分鐘。為了評(píng)價(jià)化合物對(duì)酶的活性，根據(jù)生產(chǎn)商的說明書用數(shù)字成像系統(tǒng)imagequantlas4000(gehealthcare)拍攝凝膠中的超螺旋dna的泳帶的照片。通過imagequanttl軟件分析每個(gè)泳帶的熒光強(qiáng)度，并將它表達(dá)為體積(通過使用滾球方法減去背景強(qiáng)度以后，圖像特征中的未校準(zhǔn)量的材料的體積)。在相同凝膠上將每個(gè)泳帶強(qiáng)度與媒介物樣品泳帶強(qiáng)度(其充當(dāng)陽性對(duì)照)進(jìn)行對(duì)比，作為百分比。將抑制活性表達(dá)為相對(duì)于陽性對(duì)照的抑制百分比。結(jié)果總結(jié)在下面表2中。拓?fù)洚悩?gòu)酶iv斷開測(cè)定使用金黃色葡萄球菌和大腸桿菌拓?fù)洚悩?gòu)酶iv斷開試劑盒(inspiralis,uk)。用下述試劑制備具有對(duì)于要執(zhí)行的反應(yīng)數(shù)目而言足夠的總體積的主混合物：5x測(cè)定緩沖液(50mmhepes-koh(ph7.6),100mm谷氨酸鉀,10mm醋酸鎂,10mmdtt,1mmatp,50μg/ml白蛋白),kdna底物(200ng/反應(yīng)),無rna酶-dna酶的水。將該混合物的等分試樣分配在每個(gè)試管中，然后將10x化合物儲(chǔ)備溶液或媒介物對(duì)照(dmso)加入每個(gè)反應(yīng)試管中。用拓?fù)洚悩?gòu)酶iv酶(0.5u/反應(yīng))添加開始反應(yīng)。將加入了等體積的稀釋緩沖液的樣品用作陰性對(duì)照(不含酶)。將反應(yīng)試管輕輕渦旋并在37℃溫育30分鐘。通過加入30μl停止緩沖液和30μl氯仿/異戊醇(24/1)來停止每個(gè)反應(yīng)，簡(jiǎn)單渦旋5-10秒并在20000xg離心2分鐘。將取自上面相的樣品加載到1％瓊脂糖凝膠中并在tae(40mmtris-乙酸鹽,2mmedta)中在80v恒定電壓進(jìn)行電泳1小時(shí)。數(shù)據(jù)采集和分析。由于高分子質(zhì)量，kdna在正常電泳條件下不可進(jìn)入瓊脂糖凝膠中，而是保留在孔中。在有topoiv拓?fù)洚悩?gòu)酶存在下，微環(huán)(2.5kb)通過斷開而從kdna釋放并在相對(duì)較高的電壓快速地和容易地溶解在凝膠中。通過溴化乙錠染色(稀釋度1:20000)觀察泳帶30分鐘，隨后在蒸餾水中脫色10分鐘。對(duì)于單個(gè)濃度篩選測(cè)定，為了評(píng)價(jià)化合物對(duì)酶的活性，根據(jù)生產(chǎn)商的說明書用數(shù)字成像系統(tǒng)imagequantlas4000(gehealthcare)拍攝凝膠中脫連環(huán)化的(decatenated)dna的泳帶的照片。通過imagequanttl軟件分析每個(gè)泳帶的熒光強(qiáng)度，并將它表達(dá)為體積(通過使用滾球方法減去背景強(qiáng)度以后，圖像特征中的未校準(zhǔn)量的材料的體積)。在相同凝膠上將每個(gè)泳帶強(qiáng)度與媒介物樣品泳帶強(qiáng)度(其充當(dāng)陽性對(duì)照)進(jìn)行對(duì)比，作為百分比。將抑制活性表達(dá)為相對(duì)于陽性對(duì)照的抑制百分比。結(jié)果總結(jié)在下面表2中。表2n/a＝無活性以上結(jié)果表明，舉例說明的化合物有效地抑制大腸桿菌(其為革蘭氏陽性細(xì)菌)和/或金黃色葡萄球菌(其為革蘭氏陰性細(xì)菌)的dna促旋酶和topoiv。實(shí)施例2ic50的確定為了確定ic50，在濃度-響應(yīng)曲線(在0.1-300μm范圍內(nèi)的8個(gè)半對(duì)數(shù)濃度)中進(jìn)一步測(cè)定了在以上實(shí)施例1中表現(xiàn)出高于選定的截止值(即，在單一濃度時(shí)至少50％抑制)的抑制活性的化合物。如下分析如在實(shí)施例1中所述得到的超螺旋的或脫連環(huán)化的dna泳帶。將泳帶通過凝膠歸檔設(shè)備(syngene,cambridge,uk)進(jìn)行分析，并使用syngenegenetools軟件量化。將從syngene,genetools凝膠分析軟件收集的原始凝膠數(shù)據(jù)(熒光泳帶體積)轉(zhuǎn)化成100％對(duì)照(完全超螺旋的或脫連環(huán)化的dna泳帶)的百分比。使用sigmaplot12.3版(2013)分析這些數(shù)據(jù)。使用總曲線擬合非線性回歸工具，通過從指數(shù)式衰減方程式類別選擇單個(gè)、2參數(shù)擬合函數(shù)來計(jì)算ic50數(shù)據(jù)。結(jié)果報(bào)告在下表3中。表3當(dāng)前第1頁12