本發(fā)明涉及由基于核酸的分子構成的治療劑和生物藥物領域。具體而言，本發(fā)明涉及用于遞送rna干擾劑的組合物和方法，所述rna干擾劑用于對惡性腫瘤的相關疾病和癥狀進行預防、治療或療效改善。序列表本申請包括以電子版形式提交的序列表ascii文件，該文件創(chuàng)建于2016年1月2日，文件名為nd5123179wo_sl.txt，大小為140,959字節(jié)，其全部內容通過參考并入本說明書中。
背景技術：
：kras基因突變可能與例如肺腺癌、粘液腺癌、胰腺導管癌、和結腸直腸癌等惡性腫瘤相關。最近的觀察表明，該kras突變與谷胱甘肽s-轉移酶-π(gst-π)蛋白水平的升高有關。在不拘泥于任何特定理論的前提下，已經發(fā)現(xiàn)，當細胞中的gst-π受到阻遏時，出乎意料地，細胞周期調控蛋白p21的水平顯著升高。細胞周期調控蛋白p21的功能之一在于抑制細胞凋亡。例如，p21可能具有保護細胞、使其免于被化療劑誘導凋亡的效果(體內和體外)。例如，參見gartelandtyner,2002,molcancerther.,2002,1(8):639-49；abbasanddutta,2009,natrevcancer.,2009,9(6):400-14。p21由cdkn1a基因編碼，屬于cip/kip家族。p21可通過與細胞周期蛋白-cdk復合物結合而發(fā)揮作用，在gl期和g2/m期抑制細胞周期的進程。例如，p21基因被腫瘤阻遏基因p53激活。當p53由于dna損傷而被激活時，其激活p21，從而使細胞周期停滯在gl期和g2/m期。gst-π是谷胱甘肽s-轉移酶(iubmbec2.5.1.18)家族的6個同工酶之一，其通過催化疏水性和親電子性的化合物與還原型谷胱甘肽綴合而參與解毒。作為多態(tài)性基因，gst-π基因(gstpl)編碼多種高活性、功能各異的gstpl變體蛋白，這些蛋白被認為作用于異物代謝(xenobioticmetabolism)。gstpl還可能與癌癥易感性有關，并在腫瘤細胞中大量表達。例如，參見aliyas.etal.molcellbiochem.,2003nov；253(1-2):319-327。在人體中，谷胱甘肽s-轉移酶-π由gstpl基因編碼。例如，參見boraps,etal.(oct1991)j.biol.chem.,266(25):16774-16777。gst-π同工酶還被發(fā)現(xiàn)催化gsh與某些烷基化抗癌劑的綴合，這暗示了gst-π的過量表達可能會導致腫瘤細胞的耐受性。在患有各種胃腸道惡性腫瘤(包括胃癌、食道癌、結腸癌、胰腺癌、肝細胞癌和膽管癌)的患者中，觀察到gst-π的血清水平升高。80％以上患有iii期或iv期胃癌的患者、甚至約50％的ii期或ii期患者中，gst-π的血清水平升高。例如，參見niitsuy,etal.cancer,1989jan15；63(2):317-23。gst-π被發(fā)現(xiàn)作為用于預測口腔癌患者化療后腫瘤復發(fā)的標志物有用。例如，參見hiratas.etal.cancer,1992nov15:70(10):2381-7。在人結腸直腸癌中，kras突變通過激活ap-1來誘導gst-π的過量表達。例如，參見miyanishietal.,gastroenterology,2001；121(4):865-74。gst-π的表達在各種癌細胞中升高，這可能與對于某些抗癌劑的耐受性有關。例如，參見banetal.,cancerres.,1996,56(15):3577-82；nakajimaetal.,jpharmacolexpther.,2003,306(3):861-9。已經公開了gst-π阻遏劑可誘導細胞凋亡。然而，這些組合物和技術也會導致自體吞噬，并且需要各種藥劑的協(xié)同作用。例如，參見us2014/0315975al。另外，尚未發(fā)現(xiàn)阻遏gst-π會使腫瘤縮小或減輕。例如，在gst-π過量表達的癌癥中，雖然觀察到了其他的效果，但阻遏gst-π并未影響腫瘤重量。例如，參見hokaiwadoetal.,carcinogenesis,2008,29(6):1134-1138。當前，急需用于治療惡性腫瘤患者的方法和組合物，例如可抑制gst-π和p21的表達的sirna序列、化合物和構建體。為了解決上述課題，需要用于預防或治療惡性腫瘤的方法和組合物。并且，持續(xù)需求用于預防、治療或減輕惡性腫瘤的rnai分子、其他構建體和組合物。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供涉及以人gst-π作為靶標的rnai分子、及以人p21作為靶標的rnai分子的組合物和方法。所述組合物還含有藥學上允許的擔體。本發(fā)明涉及用于惡性腫瘤的生物藥物和治療劑的分子和組合物。具體而言，本發(fā)明涉及用于提供下述納米粒子的化合物、組合物和方法，所述納米粒子將活性劑或藥物化合物遞送及分配至細胞、組織、器官和患有惡性腫瘤的受試者。本發(fā)明包括對有需要的受試者的惡性腫瘤的一種或多種癥狀進行預防、治療或改善的方法。所述方法可包括向受試者施予有效量的以gst-π和p21作為靶標的rnai分子的組合物。本發(fā)明包括以下實施方式：組合物，其含有以人gst-π作為靶標的rnai分子、以人p21作為靶標的rnai分子、和藥學上允許的擔體。上述rnai分子可在反義鏈自3’端起第2～8位含有一個或多個2’-脫氧核苷酸。上述擔體可包含包封rnai分子的脂質體納米粒子。所述脂質體納米粒子能夠包封rnai分子，并且，在人血清中暴露1小時后，所述脂質體納米粒子保持至少80％的包封的rnai分子。所述脂質體納米粒子的大小可為10～1000nm或10～150nm。組合物具有惡性腫瘤治療活性，所述惡性腫瘤可位于任何器官或組織，包括肺、結腸、腎臟、胰腺、肝臟、骨、皮膚、或腸。脂質體納米粒子可由可離子化脂質、結構脂質、一種或多種脂質穩(wěn)定劑、和用于降低納米粒子的免疫原性的脂質構成?？呻x子化脂質可選自由化合物81、化合物71、化合物57、化合物84、化合物49，化合物76、化合物78、和化合物102組成的組。本發(fā)明還包括用于預防、治療或改善有需要的受試者的惡性腫瘤的一種或多種癥狀的方法。所述方法可包括向受試者施予有效量的上述組合物。在一些實施方式中，惡性腫瘤可能與kras突變相關，而上述方法還包括對受試者的腫瘤細胞進行鑒定，所述腫瘤細胞具有以下至少一者：(i)kras基因突變、和(ii)kras蛋白表達水平異常。在某些實施方式中，惡性腫瘤可過量表達gst-π。rnai分子可降低受試者中的gst-π和p21的表達。在一些實施方式中，上述施予可使受試者中的gst-π和p21的表達降低至少5％、且持續(xù)至少5天。上述施予還可使受試者的惡性腫瘤的體積縮小至少5％、或至少10％、或至少20％、或至少>30％、或至少>40％、或至少>50％。本申請的方法可減輕惡性腫瘤的一種或多種癥狀，或者延遲或終止惡性腫瘤的發(fā)展。在某些實施方式中，施予可減緩受試者的惡性腫瘤細胞的生長。施予可使受試者的惡性腫瘤細胞的生長減緩至少2％、或至少5％、或至少10％、或至少15％、或至少20％。在一些實施方式中，惡性腫瘤可為腸癌、胰腺癌、腎癌、肺癌、乳腺癌、纖維肉瘤、肺腺癌、粘液腺癌、胰腺導管癌、或結腸直腸癌。本發(fā)明的實施方式可提供下述方法，所述方法中，每天施予12次。所述施予可持續(xù)1、2、3、4、5、6或7天，或持續(xù)1、2、3、4、5、6、8、10或12周。在一些實施方式中，以0.01～2mg/kg的量施予rnai分子，每天至少1次，持續(xù)期間為12周以下。在其他實施方式中，對于施予而言，gst-πrnai分子的平均auc(o-last)為1～1000ug*min/ml，平均cmax為0.1～50ug/ml。在某些實施方式中，對于所述施予而言，p21rnai分子的平均auc(o-last)為1～1000ug*min/ml，平均cmax為0.1～50ug/ml。施予方法可以為靜脈注射、皮內注射、皮下注射、肌肉內注射、腹腔內注射、口服、局部、輸液、或吸入。附圖說明圖1是表示使用本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑而使癌異種移植腫瘤在體內顯著縮小的圖。在以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-π和p21的sirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。利用的癌異種移植模型被施予了相對較低的量(gst-πsirna為1.15mg/kg，p21sirna為0.74mg/kg)。gst-π和p21的sirna制劑在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著的腫瘤抑制效果。30天后，gst-π和p21的sirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，腫瘤體積縮小2倍。圖2是表示使用本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑而使體內癌異種移植腫瘤顯著縮小的圖。在以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-π和p21的sirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。利用的癌異種移植模型被施予了相對較低的量(各sirna為0.75mg/kg)。gst-π和p21的sirna制劑在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著的腫瘤抑制效果。30天后，gst-π和p21的sirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，腫瘤體積縮小1.7倍。圖3是表示本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑在體外展示出由癌細胞凋亡導致的癌細胞死亡上升的圖。體外癌細胞凋亡的監(jiān)控通過觀察puma的表達上調進行，puma是細胞凋亡的生物標志物，其與細胞活性的下降相關。如圖3所示，在gst-π和p21的sirna轉染后2～4天，gst-π和p21的sirna制劑使puma的表達水平顯著升高。圖4是表示本發(fā)明的以gst-π作為靶標的sirna導致體內原位肺癌腫瘤顯著縮小的圖。以脂質體制劑的形式向患有原位a549肺癌腫瘤的無胸腺裸鼠施予2mg/kg的gst-πsirna。對治療組和介質對照組進行剖檢，測定原發(fā)瘤的最終重量。在為期6周的研究中，gst-πsirna呈現(xiàn)了顯著的肺癌腫瘤抑制效果。如圖4所示，43天后，gst-πsirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，原發(fā)瘤的最終平均重量大幅度減輕2.8倍。圖5是表示gst-πsirna的體內腫瘤抑制效果的圖。向使用a549細胞的癌異種移植模型以相對較低的量(0.75mg/kg)施予sirna。gst-πsirna在數(shù)天內呈現(xiàn)了有利的腫瘤抑制。36天后，gst-πsirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制，較之對照而言，腫瘤的最終平均體積顯著縮小2倍左右。圖6是表示本發(fā)明的gst-πsirna使由體內凋亡導致的癌細胞死亡顯著上升的圖。gst-πsirna導致了puma表達上調，puma是細胞凋亡的生物標志物，其與細胞活性的下降相關。圖6中，在gst-πsirna轉染2～6天后，puma的表達顯著升高。圖7是表示本發(fā)明的gst-πsirna在體內對于a549異種移植腫瘤發(fā)揮了敲低效果的圖。在施予了以gst-π作為靶標的sirna的無胸腺裸(nu/nu)雌鼠(charlesriver)中觀察到gst-πmrna的劑量依賴性敲低。如圖7所示，在以4mg/kg注射24小時后，觀測到gst-πmrna顯著下降約40％。具體實施方式本發(fā)明提供遞送至惡性腫瘤的治療組合物中使用的化合物和組合物。在一些方面，本發(fā)明涉及用于提供納米粒子的化合物、組合物和方法，所述納米粒子用于將活性劑或藥物化合物遞送并分配至惡性腫瘤細胞、及組織、器官、和患有惡性腫瘤的受試者。本發(fā)明提供一系列用于將活性劑遞送至惡性腫瘤細胞的可離子化化合物。除了其他用途以外，本發(fā)明的可離子化化合物可用于形成遞送及分配用于改善惡性腫瘤的活性劑的納米粒子。本發(fā)明的實施方式包括廣范圍的具有與脂質相似性質的化合物，這些化合物可用于遞送使惡性腫瘤細胞攝取的活性劑。本發(fā)明的組合物和方法可用于分配基因表達阻遏劑?；虮磉_阻遏劑的例子包括抑制核酸分子，例如，核酶、反義核酸、和rna干擾分子(rnai分子)。另一方面，本發(fā)明提供利用使gst-π核酸分子或多肽、和p21核酸分子或多肽的表達降低的治療性組合物來治療受試者的腫瘤的方法，所述方法中，腫瘤與具有kras突變或呈現(xiàn)異常的kras表達水平的細胞有關。本發(fā)明的治療性組合物可含有抑制核酸分子，例如，sirna、shrna、反義rna，以及dna指導的rna(ddrna)、piwi-相互作用rna(pirna)、和重復相關sirna(rasirna)。本文中，kras相關惡性腫瘤或kras相關癌定義為：(a)具有體細胞kras突變的癌細胞或腫瘤細胞、或(b)kras表達水平異常的癌細胞或腫瘤細胞，所述表達水平異常包括但不限于kras編碼dna的擴增、或者kras基因較之正常的非癌細胞的水平而言過量表達或低表達。gst-π表示由gstp1基因編碼的酶，其催化谷胱甘肽的綴合反應。gst-π存在于包括人在內的各種動物中，其序列信息是已知的，并可提供ncbi數(shù)據(jù)庫登錄號(例如，人：np_000843(nm_000852)，大鼠：np_036709(nm_012577)，小鼠：np_038569(nm_013541)等)。本發(fā)明包括用于阻遏編碼gst-π的dna的rnai分子、核酶，反義核酸、dna/rna嵌合多核苷酸、用于表達它們的載體、和gst-π的顯性失活變體。p21存在于包括人在內的各種動物中，其序列信息也是已知的(例如，人：nm_000389.4、nm_078467.2、nm001291549.1、nm_001220778.1、nm_001220777.1(np_001207707.1、ρ_001278478.1、np_001207706.1、p_510867.1、p_000380.1)等，上述編號代表ncbi數(shù)據(jù)庫登錄號，括號內外分別表示氨基酸序列和核苷酸序列)。例如，人cdkn1a基因的核苷酸序列在數(shù)據(jù)庫中登錄為m_000389.4。對于p21而言，其序列信息已被登錄為上述多個登錄號，并且存在多個轉錄變體。本發(fā)明包括用于阻遏編碼p21的dna的rnai分子、核酶、反義核酸、dna/rna嵌合多核苷酸、用于表達它們的載體、和p21的顯性失活變體。通常，在受試者被診斷為患有與kras突變或kras擴增相關的腫瘤(例如，肺癌、腎癌或胰腺癌)后，可選擇阻遏抑制gst-π和p21的治療方法。此處使用的gst-π阻遏劑的例子包括阻遏gst-π生產及/或活性的藥物、促進gst-π分解及/或失活的藥物。阻遏gst-π生產的藥物的例子包括rnai分子、核酶、反義核酸、gst-π編碼dna的dna/rna嵌合多核苷酸、或表達它們的載體。此處使用的p21阻遏劑的例子包括阻遏p21生產及/或活性的藥物、促進p21分解及/或失活的藥物。阻遏p21生產的藥物的例子包括rnai分子、核酶、反義核酸、p21編碼dna的dna/rna嵌合多核苷酸、或表達它們的載體。rnai分子本領域技術人員可以理解，已提交的序列可隨時間而變更，以引入核酸分子中任何需要的改變。本發(fā)明的實施方式可提供使用核酸分子的組合物和方法，其用于gst-π基因表達沉默。本發(fā)明的實施方式可提供使用核酸分子的組合物和方法，其用于p21基因表達沉默。本發(fā)明的實施方式可提供使用核酸分子的組合物和方法，其用于同時使gst-π和p21基因的表達沉默。能夠介導rna干擾的核酸分子的例子包括具有rna干擾活性的分子(rnai分子)，其包括rna雙鏈體、例如sirna(小干擾rna)、mirna(微rna)、shrna(短發(fā)夾rna)、ddrna(dna指導的rna)、pirna(piwi-相互作用rna)、或rasirna(重復相關sirna)、和它們的修飾體。本文中公開的組合物和方法也可用于治療受試者的各種惡性腫瘤。為了下調gst-π編碼基因的表達、及p21編碼基因的表達，可將本發(fā)明的核酸分子和方法集中或組合使用。本發(fā)明的組合物和方法可包含一種或多種核酸分子，通過將所述核酸分子組合使用，能夠調節(jié)或調控gst-π和p21蛋白及/或蛋白編碼基因的表達、與疾病維持及/或發(fā)展相關的蛋白及/或蛋白編碼基因的表達、以及例如惡性腫瘤等與gst-π和p21有關的紊亂或病癥。參考gst-π和p21的示例性序列，對本發(fā)明的組合物和方法進行說明。本領域技術人員可以理解，本發(fā)明的各方面和實施方式可對應任何相關的gst-π或p21的基因、序列、或變體(例如，同源基因和轉錄變體)、以及多態(tài)性、例如與任何gst-π或p21基因相關的單核苷酸多態(tài)性(snp)。在一些實施方式中，本發(fā)明的組合物和方法可提供下調gst-π基因(例如，人gst-π)表達的雙鏈短干擾核酸(sirna)分子。本發(fā)明的組合物和方法還可提供下調p21基因(例如，人p21)表達的雙鏈短干擾核酸(sirna)分子。本發(fā)明的rnai分子以gst-π或p21、和任何能夠提供其他靶序列的同源序列作為靶標，例如使用互補序列或通過并入非典型(canonical)堿基對例如錯配和/或擺動(wobble)堿基對(其可提供額外的靶序列)。在鑒定錯配的情況下，可以使用非典型堿基對，例如錯配和/或擺動堿基來產生靶向多于一個基因序列的核酸分子。例如，uu和cc堿基等非常規(guī)堿基對可用于生成能以具有序列同源性的不同的靶序列作為靶標的核酸分子。由此，rnai分子可將同源基因的保守核苷酸序列作為靶標，從而可使用1種rnai分子抑制多個基因的表達。在一些方面，本發(fā)明的組合物和方法包含對于gst-πmrna的任何部分具有干擾活性的rnai分子。所述rnai分子可含有與任何編碼gst-π的mrna序列互補的序列。本發(fā)明還涉及包含對于p21mrna的任何部分具有干擾活性的rnai分子的組合物和方法。所述rnai分子可含有與任何編碼p21的mrna序列互補的序列。在一些實施方式中，本申請公開的rnai分子可具有對于gst-πrna的干擾活性，所述rnai分子含有與具有gst-π變體編碼序列(例如，本領域已知的與惡性腫瘤相關的gst-π基因突變)的rna互補的序列。在一些實施方式中，本申請公開的rnai分子可具有對于p21rna的干擾活性，所述rnai分子含有與具有p21變體編碼序列(例如，本領域已知的與惡性腫瘤相關的p21基因突變)的rna互補的序列。在另一些實施方式中，本發(fā)明的rnai分子可含有能夠介導gst-π基因表達沉默的核苷酸序列。在另一些實施方式中，本發(fā)明的rnai分子可含有能夠介導p21基因表達沉默的核苷酸序列。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表1。表1：gst-πrnai分子序列表1備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表2。表2：gst-πrnai分子序列表2備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。小寫字母f表示2’-脫氧-2’-氟代，例如，fu為2’-脫氧-2’-氟-u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表3。表3：gst-πrnai分子序列表3備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。小寫字母f表示2’-脫氧-2’-氟代，例如，fu為2’-脫氧-2’-氟-u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表4。表4：gst-πrnai分子序列表4備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。小寫字母f表示2’-脫氧-2’-氟代，例如，fu為2’-脫氧-2’-氟-u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表5。表5：gst-πrnai分子序列表5備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。小寫字母f表示2’-脫氧-2’-氟代，例如，fu為2’-脫氧-2’-氟-u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。本發(fā)明的以gst-πmrna作為靶標的rnai分子的例子示于表6。表6：gst-πrnai分子序列表6備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。小寫字母f表示2’-脫氧-2’-氟代，例如，fu為2’-脫氧-2’-氟-u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。本發(fā)明的以p21mrna作為靶標的rnai分子的例子示于表7。表7：p21rnai分子序列表7備注:大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、g、c、t分別表示2’-脫氧-a，2’-脫氧-g，2’-脫氧-c和胸苷。mu為2’-甲氧基-u。本發(fā)明的以p21mrna作為靶標的rnai分子的例子示于表8。表8：p21rnai分子序列表8備注：大寫字母a、g、c、u分別表示ribo-a、ribo-g、ribo-c和ribo-u。小寫字母a、u、g、c、t分別表示2’-脫氧-a、2’-脫氧-u、2’-脫氧-g、2’-脫氧-c和脫氧胸苷(dt＝t＝t)。下劃線表示被2’-ome取代，例如，u。n表示a、c、g、u、u、a、c、g、u、t、或者經過修飾、反轉、或化學修飾的核苷酸。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一系列核酸分子，其中，a)所述分子具有多核苷酸有義鏈和多核苷酸反義鏈；b)所述分子的每條鏈長度為15～30個核苷酸；c)反義鏈中的15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域與編碼p21的mrna序列互補；以及d)有義鏈的至少一部分與反義鏈的至少一部分互補，并且，所述分子具有長度為15～30個核苷酸的雙鏈區(qū)。在一些實施方式中，核酸分子可在反義鏈具有15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域，所述區(qū)域與編碼p21的mrna序列互補，并且位于分子的雙鏈區(qū)。在另一些實施方式中，核酸分子可在反義鏈具有15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域，并且，所述區(qū)域的序列與編碼p21的mrna序列互補。在其他方面，本發(fā)明的核酸分子的每條鏈的長度可以為18～22個核苷酸。核酸分子還可具有長度為19個核苷酸的雙鏈區(qū)。在某些實施方式中，核酸分子可具有多核苷酸有義鏈和多核苷酸反義鏈，所述有義鏈和反義鏈以單鏈形式連接，并且形成一端以環(huán)(loop)連接的雙鏈區(qū)。本發(fā)明的核酸分子可具有平末端，也可具有一個或多個3’懸掛。本發(fā)明的核酸分子可以是具有基因沉默活性的rnai分子，例如，具有基因沉默活性的dsrna、sirna、micro-rna、或具有基因沉默活性的shrna、及dna指導的rna(ddrna)、piwi-相互作用rna(pirna)、重復相關sirna(rasirna)。本發(fā)明提供一系列具有p21表達抑制活性的核酸分子。在一些實施方式中，核酸分子的p21敲低的ic50可小于100pm。在另一些實施方式中，核酸分子的p21敲低的ic50可小于50pm。本發(fā)明還包括含有一種或多種本發(fā)明的核酸分子和藥學上允許的擔體的組合物。所述擔體可以是脂質分子或脂質體。對于本發(fā)明的化合物和組合物而言，通過將其施予至需要的受試者，所述化合物和組合物對于p21相關疾病的預防或治療的方法有用。在其他方面，本發(fā)明包括p21表達相關疾病的治療方法，所述方法中，向有需要的受試者施予含有一種或多種本發(fā)明的核酸分子的組合物。所述疾病可以是惡性腫瘤，其可出現(xiàn)于與sp21表達相關的癌癥等疾病中。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一系列核酸分子，其中，a)所述分子具有多核苷酸有義鏈和多核苷酸反義鏈；b)所述分子的每條鏈長度為15～30個核苷酸；c)反義鏈中的15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域與編碼gst-π的mrna序列互補；d)有義鏈的至少一部分與反義鏈的至少一部分互補，并且，分子具有長度為15～30個核苷酸的雙鏈區(qū)。在一些實施方式中，核酸分子可在反義鏈具有15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域，所述區(qū)域與編碼gst-π的mrna序列互補，并且位于分子的雙鏈區(qū)。在另一些實施方式中，核酸分子可在反義鏈具有15～30個核苷酸的連續(xù)區(qū)域，并且，所述區(qū)域與序列編碼gst-π的mrna序列互補。在某些實施方式中，核酸分子的每條鏈的長度可以為18～22個核苷酸。核酸分子的雙鏈區(qū)長度可以為19個核苷酸。在一些替代形式中，核酸分子可具有多核苷酸有義鏈和多核苷酸反義鏈，所述有義鏈和反義鏈以單鏈形式連接，并且形成一端以環(huán)連接的雙鏈區(qū)。在一些實施方式中，本申請公開的核酸分子可具有平末端。在某些實施方式中，核酸分子可具有一個或多個3’懸掛。本發(fā)明提供一系列具有基因沉默活性的核酸分(即rnai分子)。本發(fā)明的核酸分子可以是dsrna、sirna、micro-rna、或具有基因沉默活性的shrna、及dna指導的rna(ddrna)、piwi-相互作用rna(pirna)、或重復相關sirna(rasirna)。核酸分子可具有gst-π表達抑制活性。本發(fā)明的實施方式還提供gst-π敲低的ic50小于100pm的核酸分子。本發(fā)明的另一些實施方式提供gst-π敲低的ic50小于50pm的核酸分子。本發(fā)明還包括含有一種或多種本發(fā)明的核酸分子和藥學上允許的擔體的組合物。在某些實施方式中，所述擔體可以是脂質分子或脂質體。對于本發(fā)明的化合物和組合物而言，通過將其施予至需要的受試者，所述化合物或組合物對于gst-π相關疾病的預防或治療的方法有用。本文中，rnai分子指任何能夠導致rna干擾的分子，其包括rna雙鏈體，例如，sirna(小干擾rna)、mirna(微rna)、shrna(短發(fā)夾rna)、ddrna(dna指導的rna)、pirna(piwi-相互作用rna)、或rasirna(重復相關sirna)、和它們的修飾體。這些rnai分子可通過購買獲得，或根據(jù)已知的序列信息進行設計或制備等。反義核酸包含rna、dna、pna、或它們的復合物。本文中，dna/rna嵌合多核苷酸包含由抑制靶基因表達的dna和rna構成的雙鏈多核苷酸。在一個實施方式中，本發(fā)明的制劑含有sirna作為治療劑。sirna分子的長度可為10～50個以上核苷酸。sirna分子的長度可為15～45個核苷酸。sirna分子的長度可為19～40個核苷酸。sirna分子的長度可為19～23個核苷酸。本發(fā)明的sirna分子能夠介導針對靶mrna的rnai。sirna的設計和生產可利用市售的設計工具和試劑盒進行，例如，可使用ambion，inc.(德克薩斯州奧斯汀市)、麻省理工學院懷特黑德生物醫(yī)學研究所(馬薩諸塞州劍橋市)的制品。惡性腫瘤的治療方法本發(fā)明的實施方式可提供能夠用于下調或抑制gst-π及/或gst-π蛋白的表達的rnai分子，以及能夠用于下調或抑制p21及/或p21蛋白的表達的rnai分子。在一些實施方式中，本發(fā)明的rnai分子可用于下調或抑制gst-π及/或gst-π蛋白的表達，所述gst-π及/或gst-π蛋白源于可能與例如惡性腫瘤等疾病或病癥相關的gst-π單倍型多態(tài)性。本發(fā)明的實施方式還包含用于下調或抑制p21及/或p21蛋白表達的rnai分子，所述p21及/或p21蛋白源于可能與例如惡性腫瘤等疾病或癥狀相關的p21單倍型多態(tài)性。對于gst-π的蛋白或mrna的水平、及p21的蛋白或mrna的水平的監(jiān)控可用于表征基因沉默，以及測定本發(fā)明的化合物和組合物的效果。本申請公開的rnai分子可單獨使用，也可與其他sirna組合使用來調節(jié)一個或多個基因的表達。本申請公開的rnai分子可單獨使用，也可與其他已知的藥物組合或綴合使用，由此預防或治療疾病、或改善惡性腫瘤等與gst-π和p21相關的病癥或紊亂的癥狀。本發(fā)明的rnai分子可用于以序列特異性方式調節(jié)或抑制gst-π表達。另外，本發(fā)明的rnai分子可用于以序列特異性方式調節(jié)或抑制p21表達。本申請公開的rnai分子可包含引導鏈(guidestrand)，其是一系列連續(xù)的核苷酸，至少部分與gst-πmrna或p21mrna互補。在特定的方面，可使用本發(fā)明的rnai分子通過rna干擾對惡性腫瘤進行治療。對于惡性腫瘤的治療而言，可利用合適的以細胞為基礎的模型、動物模型(體外或體內)進行表征。對于惡性腫瘤的治療而言，可通過測定受影響組織的細胞中的gst-πmrna水平或gst-π蛋白水平進行表征。對于惡性腫瘤的治療而言，可通過測定受影響組織的細胞中的p21mrna水平或p21蛋白水平進行表征。對于惡性腫瘤的治療而言，可通過對受影響的器官或組織進行非侵入性的醫(yī)學掃描進行表征。本發(fā)明的實施方式可包括對有需要的受試者的gst-π及/或p21相關疾病或病癥的癥狀進行預防、治療、或改善的方法。在一些實施方式中，對受試者的惡性腫瘤的癥狀進行預防、治療、或改善的方法可包括向受試者施予本發(fā)明的rnai分子，由此調節(jié)受試者或生物體中的gst-π基因及/或p21基因的表達。在一些實施方式中，本發(fā)明包括下調細胞或生物體中的gst-π基因表達的方法，所述方法中，使細胞或生物體與本發(fā)明的rnai分子接觸。本發(fā)明還包括下調細胞或生物體中的p21基因表達的方法，所述方法中，使細胞或生物體與本發(fā)明的rnai分子接觸。抑制gst-π和p21的核酸分子可以是使基因表達降低的寡核苷酸，其可以采用單鏈或雙鏈核酸分子結構。在一個方案中，抑制核酸分子為用于rna干擾(rnai)介導基因表達敲低的雙鏈rna。在一個實施方式中，具有rna干擾活性的rna雙鏈體(dsrna)分子含有本發(fā)明的寡核苷酸中的8～25(例如、8、10、12、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25)個連續(xù)的核苷酸。dsrna可以是2條形成雙鏈結構的互補rna鏈，也可以是1條自體形成雙鏈結構的rna鏈(短發(fā)夾(sh)rna)。在一些實施方式中，具有rna干擾活性的dsrna具有約21或22個堿基對，也可以更長或更短，最長為29個核苷酸。雙鏈rna可以利用常規(guī)技術制備，例如，化學合成或體外轉錄。也可使用試劑盒，例如，由ambion(德克薩斯州奧斯汀市)和epicentre(威斯康星州麥迪遜市)提供的試劑盒。在哺乳動物細胞中表達dsrna的方法記載于以下文獻：brummelkampetal.science296:550-553,2002；paddisonetal.genes&devel.16:948-958,2002；pauletal.naturebiotechnol.20:505-508,2002；suietal.,proc.natl.acad.sci.usa99:5515-5520,2002；yuetal.proc.natl.acad.sci.usa99:6047-6052,2002；miyagishietal.,naturebiotechnol.20:497-500,2002；及l(fā)eeetal.,naturebiotechnol.20:500-5052002，其內容通過參考并入本說明書中。與gst-π基因“對應”的抑制核酸分子含有至少1段雙鏈基因，由此，雙鏈抑制核酸分子的每條鏈能夠與gst-π靶基因的互補鏈結合。抑制核酸分子不需要與gst-π參考序列完全一致。與p21基因“對應”的抑制核酸分子含有至少1段雙鏈基因，由此，雙鏈抑制核酸分子的每條鏈能夠與p21靶基因的互補鏈結合。抑制核酸分子不需要與p21參考序列完全一致。在一個實施方式中，sirna與靶核酸具有至少約85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的序列同一性。例如，19個堿基對的、含有1～2處堿基對錯配的雙鏈可用于本發(fā)明的方法。在其他的實施方式中，抑制核酸分子的核苷酸序列顯示了1、2、3、4、5處或更多的錯配。本發(fā)明提供的抑制核酸分子不限于sirna，而是包含能降低gst-π或p21的核酸分子或多肽的表達的任何核酸分子。本發(fā)明提供的dna序列可用于例如發(fā)現(xiàn)和開發(fā)能降低編碼蛋白表達的治療性反義核酸分子。本發(fā)明還提供催化性rna分子或核酶。這樣的催化性rna分子可用于抑制靶核酸分子的體內表達。通過在反義rna中包含核酶序列，能夠賦予分子rna切割活性，從而提高構建體的活性。靶rna特異性核酶的設計和利用記載于haseloffetal.,nature334:585-591.1988和us2003/0003469al，其內容通過參考并入本說明書中。在本發(fā)明的各實施方式中，催化性核酸分子形成錘頭狀或發(fā)夾狀基序(motif)。上述錘頭基序的例子記載于rossietal.,aidsresearchandhumanretroviruses,8:183,1992。上述發(fā)夾基序的例子記載于hampeletal.,biochemistry,28:4929,1989,andhampeletal.,nucleicacidsresearch,18:299,1990。本領域技術人員熟知，對于酶性核酸分子而言，特異性底物結合位點是必須的，所述位點與一個或多個靶基因rna區(qū)域互補，并且，所述位點內部或附近的核苷酸序列能夠賦予分子rna切割活性。對靶標的阻遏可通過比較相應蛋白在被阻遏的細胞和未使用阻遏劑的細胞中的表達或活性來測定。蛋白表達可利用任何已知的技術進行評價，例如，利用抗體的免疫沉淀法、eia、elisa、ira、irma、western印跡法、免疫組織化學方法、免疫細胞化學方法、流式細胞術、各種利用與編碼蛋白的核酸或其特有片段、或者所述核酸的轉錄產物(例如，mrna)或剪接產物的特異性雜交的雜交法、northern印跡法、southern印跡法、以及各種pcr方法。蛋白活性可通過分析所述蛋白的已知活性進行評價，所述活性包括與例如raf-1(尤其是磷酸化raf-1)或egfr(尤其是磷酸化egfr)等結合，所述評價可利用任何已知方法，例如，免疫沉淀法、western印跡法，amass分析、下拉法(pull-down)、或表面等離子體共振(spr)法。kras突變體的例子包括但不限于導致持續(xù)激活kras的突變，例如，抑制內源性gtpase的突變或提高鳥嘌呤核苷酸交換率的突變。這樣的突變的具體例子包括但不限于：例如，人kras第12、13及/或61位氨基酸突變(抑制內源性gtpase)、和人kras第116及/或119位氨基酸突變(提高鳥嘌呤核苷酸交換率)(bos,cancerres.1989；49(17):4682-9,levietal.,cancerres.1991；51(13):3497-502)。在本發(fā)明的一些實施方式中，kras突變體可以是在人kras第12、13、61、116、119位氨基酸中的至少一處發(fā)生突變的kras。在本發(fā)明的一個實施方式中，kras突變體在人kras第12位氨基酸發(fā)生突變。在一些實施方式中，kras突變體可能會誘導gst-π的過量表達。具有kras突變的細胞可能會呈現(xiàn)gst-π的過量表達?？衫萌魏我阎募夹g對kras突變進行檢測，例如，利用對于已知突變序列具有特異性的核酸探針進行的選擇性雜交、酶促錯配切割法、測序(bos,cancerres.1989；49(17):4682-9)、pcr-rflp法(miyanishietal.，gastroenterology。2001；121(4):865-74).)?？衫萌魏我阎募夹g對靶表達進行檢測。為了評價該靶標是否過量表達，例如，可將具有kras突變的細胞中的靶表達程度與含有正常kras的同型細胞中的靶表達程度進行比較。該情況下，如果具有kras突變的細胞中的靶表達程度高于含有正常kras的同型細胞中的靶表達程度，則評價為過量表達。在一個方面，本發(fā)明的特征在于，含有編碼上述任一種抑制核酸分子的載體。在具體的實施方式中，載體為逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、或慢病毒載體。在另一個實施方式中，載體含有適于哺乳動物細胞中表達的啟動子。本發(fā)明的組合物中，誘導rna干擾的活性成分的配合量可以為使施予利大于弊的量。所述配合量可通過使用培養(yǎng)細胞的體外試驗、或者模型動物或例如小鼠、大鼠、狗、豬等哺乳動物的試驗來確定，并且，可使用本領域技術人員熟知的試驗方法。本發(fā)明方法可應用于包括人在內的任何動物?；钚猿煞值呐浜狭靠筛鶕?jù)制劑或組合物的施予方式而變化。例如，一次施予中使用多個組合物單位(unit)的情況下，通過將一次施予所需的活性成分量除以所述單位的數(shù)量，則可確定每1個單位中的活性成分配合量。本發(fā)明還涉及生產用于阻遏gst-π和p21的制劑或組合物的步驟，以及為使惡性腫瘤減輕或縮小而使用阻遏gst-π和p21的組合物的步驟。rna干擾rna干擾(rnai)是指由短干擾rna(sirna)介導的動物中的序列特異性轉錄后基因沉默。例如，zamoreetal.,cell,2000,vol.101,pp.25-33；fireetal.,nature,1998,vol.391,pp.806811；sharp,genes&development,1999,vol.13,pp.139-141。細胞中的rnai反應可以由雙鏈rna(dsrna)引發(fā)，其機理尚未徹底研明。在細胞中，作為rnaseiii酶的dicer酶可作用于特定的dsrna。例如，參見zamoreetal.,cell,2000,vol.101,pp.25-33；hammondetal.,nature,2000,vol.404,pp.293-296。dicer可將dsrna加工成更短的dsrna片段，即sirna。一般而言，sirna的長度可以為21～約23個核苷酸，并且包含長度為約19個核苷酸的堿基對雙鏈區(qū)。rnai涉及被稱為rna誘導沉默復合物(risc)的核酸內切酶復合物。sirna具有的反義鏈或引導鏈進入risc復合物，并介導單鏈靶rna的切割，所述單鏈靶rna含有與sirna雙鏈體的反義鏈互補的序列。sirna的另一條鏈為隨從鏈(passengerstrand)。靶rna的切割在與sirna雙鏈體的反義鏈互補的區(qū)域中部發(fā)生。例如，參見elbashiretal.,genes&development,2001,vol.15,pp.188-200。本文中，用語“有義鏈”表示sirna分子的下述核苷酸序列，所述序列與sirna分子的反義鏈的至少一部分完全互補或部分互補。sirna分子的有義鏈可含有與靶核酸序列具有同源性的核酸序列。本文中，用語“反義鏈”表示與靶核酸序列的至少一部分完全互補或部分互補的sirna分子的核苷酸序列。sirna分子的反義鏈可含有與該sirna分子的有義鏈的至少一部分互補的核酸序列。rnai分子可通過以序列特異性方式介導rna干擾來下調或敲低基因表達。例如，參見zamoreetal.,cell,2000,vol.101,pp.25-33；elbashiretal.,nature,2001,vol.411,pp.494-498；kreutzeretal.,wo2000/044895；zernicka-goetzetal.,wo2001/36646；fireetal.,wo1999/032619；plaetincketal.,wo2000/01846；melloetal.,wo2001/029058。本文中，關于基因表達的用語“抑制”、“下調”或“降低”是指，觀察到基因表達、或編碼一種或多種蛋白的mrna分子的水平、或一種或多種編碼蛋白的活性低于不存在本發(fā)明的rnai分子或sirna的情況。例如，可觀察到較之不存在本發(fā)明的rnai分子或sirna的情況而言，表達水平、mrna水平、或編碼蛋白的活性水平降低至少1％、或至少10％、或至少20％、或至少50％、或至少90％以上。rnai分子還可用于敲低病毒基因表達，從而能夠影響病毒復制。rnai分子可以由獨立的多核苷酸鏈制得：有義鏈或隨從鏈、和反義鏈或引導鏈。引導鏈與隨從鏈至少部分互補。引導鏈和隨從鏈可形成具有約15～49個堿基對的雙鏈區(qū)。在一些實施方式中，sirna雙鏈區(qū)可具有17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或49個堿基對。在某些實施方式中，rnai分子可在risc復合物中具有活性，其具有對于ric有活性的雙鏈體區(qū)域長度。在另一些實施方式中，rnai分子可以作為dice底物發(fā)揮作用，并被轉換為能夠在risc復合物中發(fā)揮作用的rnai分子。在一些方面，rnai分子可在長鏈分子相反的兩端具有互補的引導序列部分和隨從序列部分，由此，分子能夠介由互補的序列部分而形成雙鏈區(qū)，在雙鏈區(qū)的一端介由核苷酸接頭或非核苷酸接頭將鏈彼此連接。例如，發(fā)夾結構或莖環(huán)結構。接頭與鏈的相互作用可以是共價鍵或非共價相互作用。本申請公開的rnai分子可包含將核酸的有義區(qū)域與反義區(qū)域接合的核苷酸接頭、非核苷酸接頭、或核苷酸/非核苷酸混合接頭。核苷酸接頭的長度可以為≥2個核苷酸，例如約3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸。核苷酸接頭可以是核酸適體。本文中，用語“適體”或“核酸適體”表示與靶分子特異性結合的核酸分子，所述核酸分子的序列中包含天然能夠被靶分子識別的序列。或者，適體也可以是天然不會與核酸結合的靶分子結合的核酸分子。例如，適體可用于與蛋白質的配體結合區(qū)域結合，由此阻礙天然存在的配體與蛋白的相互作用。例如，參見goldetal.,annurevbiochem,1995,vol.64,pp.763-797；brodyetal.,j.biotechnol.,2000,vol.74,pp.5-13；hermannetal.,science,2000,vol.287,pp.820-825。非核苷酸接頭的例子包括脫堿基核苷酸、聚醚、聚胺、聚酰胺、肽、碳水化合物、脂質、聚烴、或其他聚合物，例如，具有例如2～100個乙二醇單元的聚乙二醇。一些例子記載于seelaetal.,nucleicacidsresearch,1987,vol.15,pp.3113-3129；cloadetal.,j.am.chem.soc.,1991,vol.113,pp.6324-6326；jaeschkeetal.,tetrahedronlett.,1993,vol.34,pp.301；arnoldetal.,wo1989/002439；usmanetal.,wo1995/006731；dudyczetal.,wo1995/011910；和ferentzetal.,j.am.chem.soc.,1991,vol.113,pp.4000-4002。rnai分子可在雙鏈區(qū)具有一個或多個懸掛。懸掛是堿基未配對的單鏈區(qū)，長度可為1～8個核苷酸或更長。懸掛可以是3’懸掛，其中，鏈的3’端具有長度為1～8個核苷酸的單鏈區(qū)。懸掛也可以是5’懸掛，其中，鏈的5’端具有長度為1～8個核苷酸的單鏈區(qū)。rnai分子的懸掛的長度可以相同，也可以不同。rnai分子可具有一個或多個平末端，即，雙鏈區(qū)的末端沒有懸掛，兩條鏈的堿基配對直到雙鏈區(qū)的末端。本申請公開的rnai分子可具有一個或多個平末端，也可具有一個或多個懸掛，或者具有平末端和懸掛的組合。rnai分子鏈的5’端可以是平末端，或者也可以是懸掛。rnai分子鏈的3’端可以是平末端，或者也可以是懸掛。rnai分子鏈的3’端為懸掛時，5’端可以是平末端。rnai分子鏈的5’端為懸掛時，3’端可以是平末端。在一些實施方式中，rnai分子的兩端可均為平末端。在另一些實施方式中，rnai分子的兩端可均具有懸掛。5’端和3’端的懸掛的長度可以不同。在某些實施方式中，rnai分子可具有平末端，即，在反義鏈的5’端和有義鏈的3’端不具有任何懸掛的核苷酸。在另一些實施方式中，rnai分子可具有平末端，即，在反義鏈的3’端和有義鏈的5’端不具有任何懸掛的核苷酸。rnai分子可在雙鏈區(qū)具有堿基錯配。rnai分子的懸掛中的任意的核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸，也可以是核糖核苷酸。rnai分子可在5’端具有一個或多個脫氧核糖核苷酸，另一條鏈的3’端可不具有懸掛，或不具有脫氧核糖核苷酸懸掛。rnai分子可在3’端具有一個或多個脫氧核糖核苷酸，另一條鏈的5’端可不具有懸掛，或不具有脫氧核糖核苷酸懸掛。在一些實施方式中，rnai分子的一個或多個、或者全部懸掛的核苷酸可以為2’-脫氧核糖核苷酸。dicer底物rnai分子在一些方面，rnai分子可具有適合作為dizcer底物的長度，并且能夠被加工成具有risc活性的rnai分子。例如，參見rossietal.，us2005/0244858。作為dicer底物，雙鏈rna(dsrna)具有對于被dicer加工成活性rnai分子而言充分的長度，并具有以下一種或多種性質：(i)作為dicer底物的dsrna可以是不對稱的，例如，可在反義鏈具有3’懸掛；及(ii)dicer底物dsrna可在有義鏈的3’末端具有修飾，由此引導dicer結合和加工的方向和dsrna加工成活性rnai分子。rnai分子的使用方法本發(fā)明的核酸分子和rnai分子可直接用于遞送至細胞或組織，也可與擔體或稀釋劑結合。對于本發(fā)明的核酸分子和rnai分子而言，可使用擔體或稀釋劑、或任何其他發(fā)揮輔助、促進或加快進入細胞的作用的遞送介質(vehicle)(例如，病毒序列、病毒物質、或者脂質或脂質體制劑)，由此將分子直接用于遞送或施予至細胞、組織、器官、或受試者。本發(fā)明的核酸分子和rnai分子可以與陽離子性脂質形成復合物、被脂質體包封、或以其它方式遞送至靶細胞或靶組織。核酸或核酸復合物可通過直接經皮施用、透皮施用、或注射而局部施予至體外或體內的有關組織。遞送體系可包括：例如，水性和非水性的凝膠、乳霜(cream)、乳劑(emulsion)、微乳劑、脂質體、軟膏、水性和非水性的溶液、乳液(lotion)、氣溶膠(aerosols)、烴類基劑和粉末，并且可含有例如助溶劑、滲透促進劑等賦形劑?？上蛩帉W上允許的稀釋劑、擔體或賦形劑中添加本發(fā)明的抑制核酸分子或組合物，以單位劑型進行施予。可采用常規(guī)制藥操作提供合適的制劑或組合物，由此將化合物施予至患有由細胞過度增殖導致的疾病的患者。施予可在患者顯出癥狀之前開始。施予可采用任何合適的途徑，例如，可為胃腸外、靜脈、皮下、瘤內、肌肉內、顱內、眼眶內、眼部、心室內、肝內、關節(jié)囊內、鞘內、腦池內、腹腔內、鼻內適于、噴霧劑、栓劑、或口服。例如，治療制劑的劑型可以為液狀溶液或懸浮液；對于口服而言，制劑的劑型可以為片劑或膠囊劑；對于鼻內制劑而言，劑型可以為粉劑、滴鼻劑、或噴霧劑。本申請公開的組合物和方法可包含表達載體，所述擔體以能夠使核酸分子表達的方式而含有編碼至少1種本發(fā)明的rnai分子的核酸序列。本發(fā)明的核酸分子和rnai分子可利用插入dna或rna載體的轉錄單元表達。重組載體可以是dna質?；虿《据d體。病毒載體可用于使核酸分子短暫表達。例如，載體可含有編碼rnai分子雙鏈體的2條鏈、或自身互補從而能形成rnai分子的單個核酸分子的序列。表達載體可含有編碼2個或更多核酸分子的核酸序列。核酸分子可利用真核生物啟動子在細胞中表達。本領域技術人員熟知，核酸可利用合適的dna/rna載體而在真核細胞中表達。在一些方面，病毒構建體可用于將表達構建體導入細胞，由此轉錄該表達構建體編碼的、具有rna干擾活性的dsrna構建體。脂質制劑可通過靜脈注射、肌肉內注射、腹腔內注射、口服、吸入或本領域已知的其他方法施予至動物。可使用已知能夠用于施予寡核苷酸的藥學上允許的制劑。在上述方法的一個實施方式中，抑制核酸分子的施予量為約5～500mg/m2/天，例如，可為5、25、50、100、125、150、175、200、225、250、275、或300mg/m2/天。在一些實施方式中，將抑制本發(fā)明的核酸分子以1～100mg/kg的用量進行全身施予，例如，為1、5、10、20、25、50、75、或100mg/kg。在另一些實施方式中，用量可為25～500mg/m2/天的范圍。制劑制造領域的已知方法可參見例如"remington:thescienceandpracticeofpharmacy"ed.a.r.gennaro,lippincourtwilliams&wilkins,philadelphia,pa.,2000。對于用于胃腸外的施予制劑而言，例如，可含有賦形劑、無菌水、或生理鹽水、聚乙二醇等聚亞烷基二醇、植物油、或氫化萘。為了控制化合物的釋放，可使用生物相容性、生物降解性的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物。其他潛在有用的抑制核酸分子的胃腸外遞送體系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物粒子、滲透泵、植入式輸液裝置、和脂質體。吸入用制劑可包含例如乳糖等賦形劑，或為含有例如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘氨膽酸鹽和脫氧膽酸鹽的水性溶液，或為用于以滴鼻液形式施予的油性溶液、或凝膠?？赏ㄟ^向患者施予治療有效量(例如，預防、消除或減輕病癥的量)的制劑來治療腫瘤疾病或病癥。本發(fā)明的寡核苷酸的優(yōu)選用量取決于下述變量：紊亂的類型和程度、個別患者的總體健康狀態(tài)、化合物賦形劑的配方、和施予途徑。所有上述用于減輕惡性腫瘤的方法可以是體外方法，也可以是體內方法。用量可通過本領域已知的使用培養(yǎng)細胞的體外試驗來確定。有效量可以是使kras相關腫瘤的大小縮小至少10％、至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、最多為100％的量。本發(fā)明的藥物組合物能夠有效地治療kras相關疾病。疾病的例子包括由異常細胞增殖導致的疾病、由kras突變導致的疾病、和由gst-π過量表達導致的疾病。由異常細胞增殖導致的疾病的例子包括惡性腫瘤、增生、瘢痕瘤、庫欣綜合征、原發(fā)性醛固酮增多癥、黏膜紅斑病、真性紅細胞增多癥、粘膜白斑病、增生性瘢痕、扁平癬、和著色斑病。由kras突變導致的疾病的例子包括惡性腫瘤(也被稱為癌癥或惡變腫瘤)。由gst-π過量表達導致的疾病的例子包括惡性腫瘤。癌癥的例子包括：纖維肉瘤、惡性纖維性組織細胞瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、和骨肉瘤等肉瘤；腦癌、頭頸癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、腎癌、胰腺癌、膽囊癌、膽管癌、腎細胞癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、睪丸癌、子宮癌、卵巢癌、皮膚癌等上皮性惡性腫瘤；白血病、和惡性淋巴瘤。癌癥包括上皮性惡性腫瘤和非上皮性惡性腫瘤。癌可存在于身體的任何部位。本發(fā)明的一個實施方式中，癌包括具有上述kras突變的癌細胞。在另一個實施方式中，癌包括呈現(xiàn)不依賴激素或生長因子的增殖的癌細胞。在另一些實施方式中，癌包括呈現(xiàn)gst-π過量表達的癌細胞。用于阻遏gst-π的其他活性劑或藥物用于抑制gst-pi活性的其他活性劑的例子包括但不限于：與gst-pi結合的物質，例如，谷胱甘肽、谷胱甘肽類似物(例如，記載于wo95/08563、wo96/40205、w099/54346的物質)、酮洛芬、吲哚美辛(例如，參見halletal.,cancerres.1989；49(22):6265-8)、依他尼酸、吡前列素(例如，參見tewetal.,cancerres.1988；48(13):3622-5)、抗gst-pi抗體、和gst-π顯性失活突變體。這些活性劑可通過購買獲得，或可基于現(xiàn)有已知技術生產而得到。用于向惡性腫瘤遞送活性劑的三元制劑本文中，對于制劑的成分而言，例如，“脂質”可以是單一的化合物，也可以是一種或多種合適的脂質化合物的組合。例如，“脂質穩(wěn)定劑”可表示單一的穩(wěn)定劑，或一種或多種合適的脂質穩(wěn)定劑的組合。本領域技術人員可以容易地理解，無需進行大量試驗即可應用本文中記載的特定的化合物組合，以及，各種化合物的組合也屬于本文中說明的制劑成分。本發(fā)明可提供用于在細胞、組織、器官、或生物體、和受試者中使活性劑分配的組合物，所述組合物含有本發(fā)明的一種或多種可離子化脂質分子。本發(fā)明的組合物可含有一種或多種可離子化脂質分子、結構脂質、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質。本發(fā)明的可離子化脂質分子可以為本發(fā)明的組合物的任意mol％。本發(fā)明的組合物中，可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的50mol％～80mol％。在某些實施方式中，組合物中的可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的55mol％～65mol％。在另一些實施方式中，組合物中的可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的約60mol％。本發(fā)明的組合物中的結構脂質可以為組合物中脂質成分的20mol％～50mol％。在某些實施方式中，組合物中的結構脂質可以為組合物中脂質成分的35mol％～45mol％。一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質的總量可以為組合物中脂質成分的1mol％～8mol％。在某些實施方式中，一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質的總量可以為組合物中脂質成分的1mol％～5mol％。在其它方面，本發(fā)明的組合物還可含有陽離子性脂質，所述陽離子性脂質可以為組合物中脂質成分的5mol％～25mol％。在某些實施方式中，本發(fā)明的組合物還可含有陽離子性脂質，所述陽離子性脂質可以為組合物中脂質成分的5mol％～15mol％。在這些方面，本發(fā)明的組合物中的陽離子性脂質與可離子化脂質分子的濃度的摩爾比可以為5:80～25:50。本發(fā)明的組合物中，全部脂質成分可包括一種或多種可離子化脂質分子成分、一種或多種結構脂質、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質。用于向惡性腫瘤遞送活性劑的四元制劑本發(fā)明可提供用于在細胞、組織、器官、或生物體、和受試者中使活性劑分配的組合物，所述組合物含有本發(fā)明的一種或多種可離子化脂質分子。本發(fā)明的組合物可含有一種或多種可離子化脂質分子、結構脂質、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質。本發(fā)明的可離子化脂質分子可以為本發(fā)明的組合物的任意mol％。本發(fā)明的組合物中，可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的15mol％～40mol％。在某些實施方式中，組合物中的可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的20mol％～35mol％。在另一些實施方式中，組合物中的可離子化脂質分子可以為組合物中脂質成分的25mol％～30mol％。本發(fā)明的組合物中的結構脂質可以為組合物中脂質成分的25mol％～40mol％。在某些實施方式中，組合物中的結構脂質可以為組合物中脂質成分的30mol％～35mol％。本發(fā)明的組合物中，脂質穩(wěn)定劑的總量可以為組合物中脂質成分的25mol％～40％mol％。在某些實施方式中，脂質穩(wěn)定劑的總量可以為組合物中脂質成分的30mol％～40mol％。在一些實施方式中，本發(fā)明組合物的可含有2種或多種脂質穩(wěn)定劑，其中，各脂質穩(wěn)定劑可各自為組合物中脂質成分的5mol％～35mol％。在某些實施方式中，本發(fā)明組合物的可含有2種或多種脂質穩(wěn)定劑，其中，各脂質穩(wěn)定劑可各自為組合物中脂質成分的10mol％～30mol％。在某些實施方式中，一種或多種脂質穩(wěn)定劑的總量可以為組合物中脂質的25mol％～40mol％，其中，各脂質穩(wěn)定劑可各自為5mol％～35％mol％。在某些實施方式中，一種或多種脂質穩(wěn)定劑的總量可以為組合物中脂質的30mol％～40mol％，其中，各脂質穩(wěn)定劑可各自為10mol％～30％mol％。一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質的總量可以為組合物中脂質成分的1mol％～8mol％。在某些實施方式中，一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質的總量可以為組合物中脂質成分的1mol％～5mol％。在其它方面，本發(fā)明的組合物還可含有陽離子性脂質，所述陽離子性脂質可以為組合物中脂質成分的5mol％～25mol％。在某些實施方式中，本發(fā)明的組合物還可含有陽離子性脂質，所述陽離子性脂質可以為組合物中脂質成分的5mol％～15mol％。i在這些方面，本發(fā)明的組合物中的陽離子性脂質與可離子化脂質分子的濃度的摩爾比可以為5:35～25:15。本發(fā)明的組合物中，全部脂質成分可包括一種或多種可離子化脂質分子成分、一種或多種結構脂質、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質。脂質組合物的例子在一些實施方式中，三組脂質類成分，例如，一種或多種可離子化分子、結構脂質、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以為組合物中脂質成分的100％。在某些實施方式中，可包含陽離子性脂質。本發(fā)明的組合物的例子示于表9。表9：脂質成分的組成(各成分相對于總量的mol％)可離子化陽離子性結構免疫原性降低.600328600355550441650323600364650323700255740206780202501035555152555520205在某些實施方式中，四組脂質類成分，例如，一種或多種可離子化分子、結構脂質、一種或多種脂質穩(wěn)定劑、和一種或多種用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以為組合物中脂質成分的100％。本發(fā)明的組合物的例子示于表10。表10：脂質成分的組成(各成分相對于總量的mol％)可離子化陽離子性結構穩(wěn)定劑免疫原性降低.17035408200354052503539125035355250304052504030530025405350253554003025525530355251030305251525305可離子化脂質類分子可離子化脂質的例子包括具有式i表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝ch2(ch2)noc(＝o)r4r2＝ch2(ch2)moc(＝o)r5，其中，n和m為1～2；r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或具有0～2個雙鍵的c(12-20)鏈烯基；式中，r3選自：其中，r6選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基，羥基烷基；q為氧原子或nr7；p為1～4?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：雙(9z,9’z,12z,12’z)-(十八碳-9,12-二烯酸)((2-((3,s’,4r)-3,4-二羥基吡咯烷-l-基)乙?；?氮烷二基)雙(乙烷-2,l-二基)酯?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：雙十四烷酸((2-(3-(羥甲基)雜氮環(huán)丁烷-l-基)乙酰基)氮烷二基)雙(乙烷-2,l-二基)酯?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：雙(9z,9’z,12z,12’z)-(十八碳-9,12-二烯酸)((2-(4-(2-羥乙基)哌嗪-l-基)乙?；?氮烷二基)雙(乙烷-2,l-二基)酯?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：雙(9z,9’z,12z,12’z)-(十八碳-9,12-二烯酸)((2-(4-(2-羥乙基)哌嗪-l-基)乙酰基)氮烷二基)雙(乙烷-2,l-二基)酯?？呻x子化脂質的例子包括具有式iv表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝c(＝o)or4r2＝c(＝o)or5，其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基，或具有1～2個雙鍵的c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自：其中，r6選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；q為氧原子或nr7；p為1～4?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：2-((l-(((9z,12z)-十七碳-9,12-二烯-1-基)氧基)-5-(((9z,12z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氧基)-1,5-二氧代戊烷-3-基)氨基)-n,n,n-三甲基-2-氧代1-乙銨?？呻x子化脂質的例子包括具有式vi表示的結構的化合物。式中，r1為：r1＝oc(＝o)r4其中，r2和r4在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或具有1～2個雙鍵的c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自氨基烷基、四級氨基烷基(quternaryaminoalkyl)。可離子化脂質的例子包括以下化合物：(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯酸2-((9z,12z)-n-(3-(二甲基氨基)丙基)十八碳-9,12-二烯酰氨基)乙酯?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：n,n,n-三甲基-3-((9z,12z)-n-(2-(((9z,12z)-十八碳-9,12-二烯?；?氧基)乙基)十八碳-9,12-二烯酰氨基)-l-丙銨?？呻x子化脂質的例子包括具有式ix表示的結構的化合物式中，r1和r2為：r1＝c(＝o)or4r2＝nhc(＝o)r5其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或具有1～2個雙鍵的c(12-20)鏈烯基；其中，r為1～4；其中，r3選自：其中，r6選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；q為氧原子或nr7?？呻x子化脂質的例子包括以下化合物：n,n,n-三甲基-2-(((s)-3-(((9z,12z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氧基)-2-((9z,127)-十八碳-9,12-二烯酰氨基)-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代-l-乙銨?？呻x子化脂質分子的例子包括具有式iii表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝ch2(ch2)noc(＝o)r4r2＝ch2(ch2)moc(＝o)r5，其中，n和m為1～2；r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自烷基、羥基烷基、烷氧烷氧基、和羧基烷基；其中，r6選自nr72、n+hr72和n+r73；其中，r7選自氫原子、烷基、羥基烷基。可離子化脂質分子的例子包括具有式iv-b表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝c(＝o)or4r2＝c(＝o)or5，其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，z為硫原子或氧原子；其中，r3選自：其中，r6各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；p為1～4?？呻x子化脂質分子的例子包括具有式v表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝nhc(＝o)r4r2＝c(＝o)or5，其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，p為1～4；其中，r3選自：其中，r6各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；q為氧原子或nr7?？呻x子化脂質分子的例子包括具有式vii表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝ch2(ch2)noc(＝o)r4r2＝ch2(ch2)moc(＝o)r5，其中，n和m為1～2；r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自氨基烷基、四級氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧烷氧基烷基。可離子化脂質分子的例子包括具有式viii表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝oc(＝o)r4r2＝c(＝o)zr5，其中，z為nh或氧原子；其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自：氨基；四級氨基；氨基烷基；四級氨基烷基；nhc(＝o)(ch2)pr8；nhc(＝o)sr9，其中，r8選自：羧基烷基；氨基烷基；其中，r9選自：氨基烷基；其中，r6各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；q為氧原子或nr7?？呻x子化脂質分子的例子包括具有式viii-b表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝ch2(ch2)noc(＝o)r4r2＝ch2(ch2)moc(＝o)r5其中，n和m為1～2；r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，z為氮原子、氧原子；其中，r3選自：其中，r6各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基、羥基烷基；p為1～4。可離子化脂質分子的例子包括具有式x表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝c(＝o)or4r2＝nhc(＝o)r5其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，r3選自：氨基；四級氨基；氨基烷基；四級氨基烷基；羥基烷基氨基；四級羥基烷基氨基?？呻x子化脂質分子的例子包括具有式xi表示的結構的化合物。式中，r1和r2為：r1＝c(＝o)r4r2＝c(＝o)or5其中，r4和r5在各情況下獨立地為c(12-20)烷基、或c(12-20)鏈烯基；其中，p為1～4；其中，r3選自：其中，r6各自獨立地選自氫原子、烷基、羥基烷基、烷氧基、烷氧烷氧基、氨基烷基；r7選自氫原子、烷基；q為氧原子或nr7。結構脂質結構脂質的例子包括膽固醇、甾醇、和類固醇。結構脂質的例子包括膽烷、膽甾烷、麥角甾烷、菜油甾烷(campestane)、多孔甾烷(poriferastane)、豆甾烷、gorgostane、羊毛甾烷、甾烷(gonane)、雌烷、雄烷、孕烷、和環(huán)阿屯烷。結構脂質的例子包括甾醇和動物甾醇，例如膽固醇、羊毛甾醇、酵母甾醇、酵母甾烯醇、鏈甾醇、豆甾烷醇、二氫羊毛甾醇、和7-脫氫膽固醇。結構脂質的例子包括聚乙二醇化膽固醇，和膽甾烷3-氧代-(cl-22)?；衔?，例如，乙酸膽固醇酯、花生四烯酸膽固醇酯、丁酸膽固醇酯、己酸膽固醇酯、豆蔻酸膽固醇酯、棕櫚酸膽固醇酯、山崳酸膽固醇酯、硬脂酸膽固醇酯、辛酸膽固醇酯、正癸酸膽固醇酯、十二烷酸膽固醇酯、二十四碳烯酸膽固醇酯、壬酸膽固醇酯、正戊酸膽固醇酯、油酸膽固醇酯、反式油酸膽固醇酯、芥酸膽固醇酯、庚酸膽固醇酯、反式亞油酸膽固醇酯、和亞油酸膽固醇酯。結構脂質的例子包括甾醇，例如，植物甾醇、β-谷甾醇、采油甾醇、麥角甾醇、菜籽甾醇、δ-7-豆甾醇、和δ-7-燕麥甾醇。脂質穩(wěn)定劑脂質穩(wěn)定劑的例子包括兩性離子型脂質。脂質穩(wěn)定劑的例子包括化合物例如磷脂質。磷脂質的例子包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕櫚酰油?；字憠A、溶血磷脂膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿和二亞油酰磷脂酰膽堿。脂質穩(wěn)定劑的例子包括磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰膽堿化合物。脂質穩(wěn)定劑的例子包括l,2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dopc)。脂質穩(wěn)定劑的例子包括二植烷酰磷脂酰乙醇胺(dphpe)和l,2-二植烷?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dphpc)。脂質穩(wěn)定劑的例子包括l,2-二硬脂?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dspc)、l,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dppc)、1,2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dppe)、和l,2-二油?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dope)。脂質穩(wěn)定劑的例子包括1,2-二月桂?；?sn-甘油(dlg)、1,2-二豆蔻酰基-sn-甘油(dmg)、1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油(dpg)、1,2-二硬脂?；?sn-甘油(dsg)、l,2-二花生?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dapc)、l,2-二月桂?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dlpc)、l,2-二豆蔻?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(dmpc)、l,2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-0-ethyl-3-磷酸膽堿(dpepc)、l,2-二月桂?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dlpe)、1,2-二豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、l,2-二硬脂?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dspe)、l-棕櫚?；?2-亞油?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿、1-棕櫚?；?2-油?；?sn-甘油基-3-磷酸膽堿(popc)、l-棕櫚?；?2-溶血-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(p-lyso-pc)；和l-硬脂酰基-2-溶血-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(s-lyso-pc)。用于降低免疫原性的脂質用于降低免疫原性的脂質的例子包括聚合物和聚合物-脂質綴合物。用于降低免疫原性的脂質的例子包括具有聚乙二醇(peg)片段的聚乙二醇化脂質。peg片段的分子量可以為任意值。在一些實施方式中，peg片段的分子量可為200、300、350、400、500、550、750、1000、1500、2000、3000、3500、4000或5000da。用于降低免疫原性的脂質的例子包括具有甲氧基聚乙二醇片段的化合物。用于降低免疫原性的脂質的例子包括具有羰基-甲氧基聚乙二醇片段的化合物。用于降低免疫原性的脂質的例子包括具有多支化peg片段的化合物。用于降低免疫原性的脂質的例子包括具有聚甘油片段的化合物。用于降低免疫原性的脂質的例子包括脂質聚合物，例如dspe-mpeg、dmpe-mpeg、dppe-mpeg、和dope-mpeg。用于降低免疫原性的脂質的例子包括peg-磷脂質和peg-神經酰胺。陽離子性脂質陽離子性脂質的例子包括記載于例如us2013/0330401al中的陽離子性hedc化合物。us2013/0115274al公開了一些陽離子性脂質的例子。另外，還有一些陽離子性脂質的例子是本領域已知的。脂質組合物在一些實施方式中，組合物可含有可離子化脂質化合物81、作為結構脂質的膽固醇、作為脂質穩(wěn)定劑的dopc和dope、和用于降低免疫原性的脂質dppe-mpeg。在某些實施方式中，化合物81可以為組合物的15～25mol％，膽固醇、dopc、和dop的總量可以為組合物的75～85mol％，dppe-mpeg可以為組合物的5mol％。在一個實施方式中，化合物81可以為組合物的25mol％，膽固醇可以為組合物的30mol％，dopc可以為組合物的20mol％，dope可以為組合物的20mol％，dppe-mpeg(2000)可以為組合物的5mol％。納米粒子本發(fā)明的實施方式可提供脂質體納米粒子組合物。本發(fā)明的可離子化分子可用于形成脂質體組合物，所述脂質體組合物可具有脂質類分子的雙層結構。納米粒子組合物可含有一種或多種本發(fā)明的可離子化分子，其結構可為脂質體結構、雙層結構、膠束、層狀結構、或它們的混合物。在一些實施方式中，組合物可包含一種或多種液體介質成分。示于遞送本發(fā)明的活性劑的液體介質可以是藥學上允許的液體介質。液體介質可包含有機溶劑、或水和有機溶劑的組合物。本發(fā)明的實施方式可提供大小為10～1000nm的脂質納米粒子。在一些實施方式中，脂質體納米粒子的大小可為10～150nm。在某些實施方式中，本發(fā)明的脂質體納米粒子可包封rnai分子，并且，在人血清中暴露1小時后，至少保持80％包封的rnai分子。藥物組合物本發(fā)明還包括方法將活性劑分配至受試者的器官的方法，所述方法用于通過向受試者施予本發(fā)明的組合物來治療惡性腫瘤。可治療的器官包括肺、肝臟、胰腺、腎臟、結腸、骨、皮膚、和腸。在一些實施方式中，本發(fā)明提供通過向受試者施予本發(fā)明的組合物對肺惡性腫瘤疾病進行治療的方法。在其他方面，本發(fā)明提供一系列藥物制劑。此處，藥物制劑可包含本發(fā)明的活性劑、及藥物擔體、或脂質、以及藥學上允許的擔體或稀釋劑。一般而言，本說明書中的活性劑包括任何用于惡性腫瘤的活性劑，例如，任何抑制核酸分子和任何小分子藥物。抑制核酸分子的例子包括核酶、反義核酸、和rna干擾分子(rnai分子)?？箰盒阅[瘤藥物和抗癌藥物的例子包括致癌基因相關因子、腫瘤血管生長因子、轉移相關因子、例如tgf-beta等細胞因子、生長因子，例如mmp等蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、和免疫阻遏因子。藥物擔體能夠將組合物導向星狀細胞。藥物擔體可在其內部包含藥物，或附著于或含有藥物的物質表面，或與藥物混合(前提是，所述藥物擔體包含類視色素衍生物及/或維生素a類似物，并且至少部分暴露于配制物的表面)。對于組合物或配制物而言，可用合適的材料將其包覆，例如，腸溶包衣或隨著時間而崩解的材料，或者，將其組入合適的藥物釋放體系。本發(fā)明的藥物制劑可含有以下一種或多種成分：表面活性劑、稀釋劑、賦形劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、染料、和懸浮劑。用于藥物制劑的一些藥物擔體、稀釋劑和成分、以及配置及施予本發(fā)明的化合物和組合物的方法記載于remington'spharmaceuticalsciences,18thed.,mackpublishingco.,easton,penn.(1990)。防腐劑的例子包括苯甲酸鈉、抗壞血酸，和對羥基苯甲酸酯。表面活性劑的例子包括醇、酯、硫酸化脂肪醇。賦形劑的例子包括蔗糖、葡萄糖、乳糖，淀粉、結晶纖維素、甘露醇、輕質無水硅酸鹽、鋁酸鎂、硅酸鎂-鋁酸鎂復鹽(magnesiummetasilicatealuminate)、合成硅酸鋁、碳酸鈣、碳酸氫鈉、磷酸氫鈣、和羧甲基纖維素鈣。懸浮劑的例子包括椰子油、橄欖油、芝麻油、花生油、豆油(soya)、鄰苯二甲酸乙酸纖維素，乙酸甲酯-甲基丙烯酸酯共聚物、和鄰苯二甲酸酯。用于遞送一種或多種具有基因沉默活性的分子的本發(fā)明的治療制劑可施予至需要的哺乳動物?？上虿溉閯游镆园庥谥|體的形式施予治療有效量的制劑和活性劑，由此對惡性腫瘤進行預防或治療。施予途徑可以為局部或全身。本發(fā)明的具有治療效果的制劑可通過各種途徑施予，例如，靜脈、腹腔內、肌肉內、皮下、和口服。施予途徑可包括胃腸外遞送，例如，肌肉內、皮下、靜脈、髓內注射，以及鞘內、直接心室內、腹腔內，鼻內、或眼內注射。制劑還可以以持續(xù)釋放劑型或控釋劑型施予，包括長效注射、滲透泵等，由此以事先規(guī)定的速度進行長期及/或定時、脈沖式的施予。本發(fā)明的組合物可通過各種途徑施予，包括，口服途徑和胃腸外途徑，作為例子，包括但不限于：口服、靜脈、肌肉內、皮下、局部、肺內、氣道內、氣管內、支氣管內、鼻、直腸、動脈內、門脈內、心室內、髓內、淋巴結內、淋巴內、腦內、鞘內、腦室內、經粘膜、經皮、鼻內、腹腔內、和子宮內途徑，并且，本發(fā)明的組合物可配制成適合各種施予途徑的劑型。上述劑型和配制方法可從任何已知的劑型和方法中適當選擇。例如，參見hyojunyakuzaigaku,standardpharmaceutics,ed.byyoshiteruwatanabeetal.,nankodo,2003。適合口服施予的劑型的例子包括但不限于粉劑、顆粒、片劑、膠囊、液體、懸浮液、乳劑、凝膠、糖漿，適合胃腸外施予的劑型的例子包括注射劑，例如，可注射的溶液、可注射的懸浮液、可注射的乳劑、和準備用于注射的制劑。用于胃腸外施予的制劑可為水性或非水性的等滲無菌溶液或懸浮液。用于胃腸外施予、例如彈丸注射(bolusinjection)或持續(xù)輸液的藥物制劑包括以可溶于水的形式含有活性制劑的水溶液?；钚曰衔锏膽腋∫嚎芍苽涑珊线m的油性注射懸浮液。水性注射懸浮液可含有提高懸浮液粘性的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、或葡聚糖。另外，為了制備高濃度的溶液，懸浮液可選擇性地含有合適的穩(wěn)定劑或提高化合物溶解性的成分。用于注射的制劑可以單位劑型的形式存在，例如，可與添加的防腐劑共存于安瓿或多劑量容器中。制劑可采用例如利用油性或水性介質的懸浮液、溶液或乳液，并可含有例如懸浮劑、穩(wěn)定劑及/或分配劑等配制用劑。另外，活性成分可以為粉劑形式，并在使用前與合適的介質、例如無菌無熱原水混合。除了前文記載的配制物以外，制劑還可被配置成貯庫(depot)制劑。這種長效制劑可通過肌肉注射施予。因此，例如，制劑可使用合適的聚合物材料或疏水性材料配制，例如，用允許的油配制的乳劑、或離子交換樹脂、或例如難溶鹽等難溶衍生物。本發(fā)明的組合物和制劑還可用于局部遞送，并可通過任何使用局部遞送介質的步驟而應用于受試者的皮膚。例如，可手動使用試劑，也可采用涂敷器(applicator)、或包含二者的步驟。敷用之后，可通過例如摩擦而使制劑滲入受試者的皮膚。敷用可每天實施多次，也可每天實施1次。例如，制劑敷用于受試者皮膚的頻率可為每天1次、每天2次、或每天多次，或者，每2天1次、每3天1次、或約每周1次、每2周1次、或數(shù)周1次。本文中記載的制劑或藥物組合物可通過任何合適的手段施予至受試者。施予方法的例子包括：(a)通過注射(皮下、腹腔內、靜脈、肌肉內、皮內、眼眶內、囊內、脊柱內、胸骨等)，包括輸液泵遞送；(b)局部施予，例如，通過例如長效植入而直接注入腎臟或心區(qū)，以及本領域技術人員認可的使活性化合物與活體組織接觸的合適手段；等等。對于藥物組合物而言，具體的制劑、施予途徑和用量可以由醫(yī)師根據(jù)患者的情況選擇。例如，參見goodman&gilman'sthepharmacologicalbasisoftherapeutics,12thed.,sec.1,2011。典型地，向患者施予的組合物用量的范圍可以是為0.5～1000mg/kg(患者體重)。根據(jù)患者的需要，可在1天或數(shù)天期間單次、或連續(xù)2次或多次施予上述用量。已經確立了至少某些病癥的化合物的人用劑量的情況下，用量可與已經確定的人用劑量大致相等，或為所述劑量的0.1％～500％左右，更優(yōu)選為25％～250％左右。尚未確立人用劑量，即作為新發(fā)現(xiàn)的藥物組合物的情況下，可根據(jù)ed50或id50的值、或其他通過體外或體內研究而得到、且經過使用動物的毒性試驗、效果試驗驗證的合適的值來推測合適的人用劑量。預防或治療惡性腫瘤的方法本發(fā)明還涉及用于控制惡性腫瘤的活躍度或生長的方法，所述方法包括向有需要的受試者施予有效量的組合物。此處，所謂有效量，是指在治療惡性腫瘤的方法中，能夠緩解癥狀、或者延遲或終止腫瘤進展的量，更優(yōu)選為能夠預防惡性腫瘤的發(fā)病或復發(fā)、或者治愈惡性腫瘤的量。另外，也優(yōu)選使施予利大于弊的量。這樣的劑量可通過使用培養(yǎng)細胞的體外試驗、或者模型動物或例如小鼠、大鼠、狗、豬等哺乳動物的試驗適當確定，并且，可使用本領域技術人員熟知的試驗方法。另外，擔體中的活性劑量和本發(fā)明的方法中使用的活性劑量可以是本領域技術人員已知的劑量，或可通過上述試驗而適當確定。施予頻率取決于使用的組合物的性能和上述受試者的病癥，可以為每天數(shù)次(即，每天2、3、4、5、次或更多)、每天1次、數(shù)天1次(即，每2、3、4、5、6或7天等)、每周1次(例如，每周2、3、4次等)，每2周數(shù)次、或每數(shù)周1次(例如，每2、3、4周等)。在一些實施方式中，本發(fā)明還涉及利用上述擔體將藥物遞送至惡性腫瘤細胞的方法。該方法包括下述步驟：向活體或介質(例如，含有生產細胞外基質的肺細胞的培養(yǎng)基)施予或添加載有應遞送物質的擔體。這些步驟可按照任何已知的方法或本發(fā)明中記載的方法適當?shù)赝瓿?。另外，上述方法包括在體外實施的模式、和以體內的肺部惡性腫瘤細胞作為靶標的模式?？蓪⒈景l(fā)明的具有治療效果的制劑全身性地遞送施予，由此使活性劑廣泛地分配于體內。本發(fā)明的實施方式可提供包含本發(fā)明的治療性分子、和藥學上允許的擔體的治療制劑。對于本發(fā)明的制劑的有效量而言，可每天施予1～12次，或每周施予1次。施予期間可以為1、2、3、4、5、6或7天，或者1、2、3、4、5、6、8、10或12周。其他實施方式用于分配治療受試者的惡性腫瘤的活性劑的組合物，所述組合物含有可離子化脂質、結構脂質、和用于降低納米粒子的免疫原性的脂質。惡性腫瘤可位于肺、結腸、腎臟或胰腺。惡性腫瘤可位于肝臟、骨、皮膚、或腸?？呻x子化脂質可以為組合物中的脂質的50mol％～80mol％，或組合物中的脂質的55mol％～65mol％。結構脂質可以為組合物中的脂質的20mol％～50mol％，或組合物中的脂質的35mol％～55mol％。結構脂質可以為膽固醇、甾醇、或類固醇。用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以為組合物中的脂質的1mol％～8mol％。用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以具有聚乙二醇(peg)片段，所述聚乙二醇片段的分子量為200～5000da。用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以為dppe-mpeg、dspe-mpeg、dmpe-mpeg、或dope-mpeg。本發(fā)明還包括用于分配治療受試者的惡性腫瘤的活性劑的組合物，所述組合物含有可離子化脂質、結構脂質、一種或多種脂質穩(wěn)定劑、和用于降低納米粒子的免疫原性的脂質?？呻x子化脂質可以為組合物中的脂質的15mol％～40mol，或組合物中的脂質的20mol％～35mol％。結構脂質可以為組合物中的脂質的25mol％～40mol％，或組合物中的脂質的30mol％～35mol％。一種或多種脂質穩(wěn)定劑的總量可以為組合物中的脂質的25mol％～40mol％，其中，各脂質穩(wěn)定劑可各自為5mol％～35％mol％。一種或多種脂質穩(wěn)定劑可以為磷脂酰乙醇胺化合物或磷脂酰膽堿化合物。組合物(化合物81/膽固醇/dopc/dope/dppe-peg-2000)可以為下述中的1種組合，其中，數(shù)字表示成分的mol％濃度：(25/30/30/10/5)、(25/30/25/15/5)、(25/30/20/20/5)、(25/30/15/25/5)、(25/30/10/30/5)、(25/35/15/20/5)、(25/35/20/15/5)、(30/30/15/20/5)、(30/30/20/15/5)、(35/30/15/15/5)。在一些實施方式中，可離子化脂質可以是化合物81，結構脂質可以是膽固醇，脂質穩(wěn)定劑可以是dopc和dope，用于降低納米粒子的免疫原性的脂質可以是dspe-mpeg-2000，其中，化合物81占組合物的15～25mol％，膽固醇、dopc、和dope共同占組合物的75～85mol％，dspe-mpeg-2000占組合物的1～5mol％，化合物81、膽固醇、dopc、dope、和dspe-mpeg-2000實質上共同占組合物中的脂質的100mol％?；钚詣┛梢允且詆st-π作為靶標的rnai分子和以p21作為靶標的rnai分子。在一些實施方式中，活性劑包含以gst-π作為靶標的rnai分子和以p21作為靶標的rnai分子，組合物包含包封rnai分子的脂質體納米粒子。在某些實施方式中，活性劑包含以gst-π作為靶標的rnai分子和以p21作為靶標的rnai分子，組合物包含包封rnai分子的脂質體納米粒子，并且，在人血清中暴露1小時后，所述脂質體納米粒子保持至少80％的包封的rnai分子。本發(fā)明還包括含有脂質組合物和活性劑的藥物組合物?；钚詣┛梢允且环N或多種rnai分子。用于治療惡性腫瘤的rnai分子包括gst-π作為靶標的rnai分子和以p21作為靶標的rnai分子。用于治療惡性腫瘤的rnai分子可為例如sirna、shrna、或micro-rna，以及dna指導的rna(ddrna)、piwi-相互作用rna(pirna)、和重復相關sirna(rasirna)。在某些實施方式中，本發(fā)明提供含有用于治療惡性腫瘤的rnai分子的藥物組合物，所述rnai分子僅以gst-π作為靶標。本發(fā)明的實施方式還包括將活性劑分配至受試者的器官的方法，所述方法通過向受試者施予本發(fā)明的組合物來治療惡性腫瘤。惡性腫瘤可位于肺、結腸、腎臟或胰腺。惡性腫瘤可位于肝臟、骨、皮膚、或腸。惡性腫瘤可位于選自由頭、頸部、腦、乳房、食道、胃、腸、十二指腸、肝臟、膽囊、膽管、腎臟、尿道、膀胱、前列腺、睪丸、子宮、卵巢、皮膚、骨、骨髓、血液、皮膚、和上皮層組成的組中的任何解剖學部位。對于施予而言，可以以0.01～2mg/kg的量施予rnai分子，每天至少施予1次，持續(xù)期間為12周以下。施予可提供的gst-πrnai分子的平均auc(o-last)為1～1000ug*min/ml，平均cmax為0.1～50ug/ml。施予可提供的p21rnai分子平均血漿auc(o-last)為1～1000ug*min/ml，平均血漿cmax為0.1～50ug/ml。本發(fā)明提供對需要的哺乳動物、或任何動物的惡性腫瘤的一種或多種癥狀進行預防、治療或改善的方法，所述方法包括向哺乳動物施予治療有效量的含有rnai分子的組合物，其中，部分rnai分子具有降低gst-π表達的活性，部分rnai分子具有降低p21表達的活性。在一些實施方式中，惡性腫瘤與哺乳動物中的kras突變相關，上述方法還包括對哺乳動物中的腫瘤細胞進行鑒定，所述腫瘤細胞具有以下至少一者：(i)kras基因突變、和(ii)kras蛋白表達水平異常。本發(fā)明的方法可應用于包括人在內的任何動物。哺乳動物可以為人，gst-π可以為人gst-π，p21可以為人p21。在一些實施方式中，惡性腫瘤過量表達gst-π，若gst-π的表達被下調，則p21水平可能也會被下調。rnai分子能夠降低哺乳動物中的gst-π和p21表達。施予使哺乳動物中的gst-π和p21表達降低至少5％、且持續(xù)至少5天。本發(fā)明的方法可減輕惡性腫瘤的一種或多種癥狀，或者延遲或終止惡性腫瘤的發(fā)展，或減緩受試者中惡性腫瘤細胞的生長。較之正常細胞而言，腫瘤細胞可含有以更高水平表達的野生型kras蛋白。腫瘤細胞可過量表達野生型gst-πrna或蛋白，若gst-π的表達被阻遏，則p21rna或蛋白的水平可能被提高。在一些實施方式中，腫瘤細胞可在kras蛋白的第12、13和第61位殘基具有突變。在某些實施方式中，腫瘤細胞可含有kras蛋白突變，腫瘤為選自腸癌、胰腺癌和肺癌中的癌癥。腫瘤可以選自由肺腺癌、粘液腺癌、胰腺導管癌、和結腸直腸癌組成的組。惡性腫瘤可以是選自由肺腺癌、粘液腺癌、胰腺導管癌、結腸直腸癌、乳腺癌、和纖維肉瘤組成的組中的腫瘤。惡性腫瘤可位于任何解剖學部位，在一些實施方式中，可以是選自由肺、肝臟、胰腺、結腸、腎臟、骨、皮膚、腸、和它們的任意的組合組成的組。另一方面，本發(fā)明涉及以下出乎意料的發(fā)現(xiàn)：通過利用gst-π和p21的sirna抑制劑進行治療，能夠使體內惡性腫瘤的大小縮小。另外，本發(fā)明還獲得了出乎意料的有利結果，即，腫瘤細胞凋亡可被提高至協(xié)同致死(syntheticlethality)的水平，由此，可提供用于預防或治療惡性腫瘤的方法和組合物。本發(fā)明涉及的方法和組合物結合了基于核酸的治療性化合物，其用于遞送至各種器官，由此對惡性腫瘤的疾病及病癥進行預防、治療、或改善。在一些實施方式中，本發(fā)明提供rna干擾分子(rnai分子)的組合物，用于使各種與惡性腫瘤有關的靶基因沉默。本發(fā)明可提供用于遞送治療分子的組合物、及使用其的方法。本發(fā)明的各種基于rna的藥物和組合物可用于預防或治療惡性腫瘤的方法。在一些實施方式中，通過利用調節(jié)gst-π和p21的表達水平的sirna劑進行治療，可使具有kras突變、或呈現(xiàn)異常的kras表達水平的惡性腫瘤縮小至能夠引起腫瘤細胞的協(xié)同致死的水平。本發(fā)明涉及針對惡性腫瘤的、基于核酸的治療性化合物的方法和組合物。在一些實施方式中，本發(fā)明提供能夠使gst-π和p21的表達沉默的rnai分子、結構和組合物。本申請公開的結構和組合物可用于惡性腫瘤的預防、治療或使其大小縮小。本發(fā)明提供可用于治療受試者中的腫瘤的組合物和方法。具體而言，本發(fā)明提供能使gst-π核酸分子或多肽、及p21核酸分子或多肽的表達降低的治療性組合物，由此對與kras相關的腫瘤進行治療。在一些方面，本發(fā)明包括與gst-π核酸分子的至少1個片段對應或互補的抑制核酸分子，并且，所述抑制核酸分子使gst-π在細胞中的表達降低。在其他方面，本發(fā)明包括與p21核酸分子的至少1個片段對應或互補的抑制核酸分子，所述抑制核酸分子使p21在細胞中的表達降低。在某些實施方式中，本發(fā)明提供以下用于阻遏gst-π和p21的雙鏈核酸分子：例如sirna或shrna等rnai分子、dna指導的rna(ddrna)、piwi-相互作用rna(pirna)、和重復相關sirna(rasirna)。本發(fā)明的方法可應用于包括人在內的任何動物。在一些方面，本發(fā)明包括一種或多種編碼上述抑制核酸分子的載體。載體可以是逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、或慢病毒載體。在另一些實施方式中，載體可含有適于哺乳動物細胞中表達的啟動子。其他的實施方式包括具有kras突變或呈現(xiàn)異常的kras表達水平的癌細胞，并且，可還包括載體、或上述的任一種抑制核酸分子。在另一些實施方式中，細胞可以是體內腫瘤細胞。在一些實施方式中，本發(fā)明包括使gst-π和p21在惡性腫瘤細胞中的表達降低的方法，其中，所述惡性腫瘤細胞具有kras突變或呈現(xiàn)異常的kras表達水平。所述方法可包含使細胞與有效量的抑制核酸分子接觸，其中，抑制核酸分子抑制gst-π多肽和p21多肽的表達，從而使gst-π和p21在細胞中的表達降低。在另一些實施方式中，本發(fā)明的方法能夠使gst-π和p21在惡性腫瘤的轉錄或翻譯水平降低。在某些實施方式中，本發(fā)明包括使gst-π和p21在惡性腫瘤細胞中的表達降低的方法，其中，所述細胞可以是人細胞、腫瘤細胞、體內細胞、或體外細胞。本發(fā)明的實施方式還可提供治療患有腫瘤的受試者的方法，其中，癌腫瘤細具有kras突變或呈現(xiàn)異常的kras表達水平。該方法可包括向受試者施予有效量的2種或多種抑制核酸分子，其中，抑制核酸分子使gst-π和p21的表達降低，由此對腫瘤進行治療。在一些實施方式中，本發(fā)明的方法可使腫瘤的大小小于治療之前或未經治療的腫瘤。在各種實施方式中，可將抑制核酸分子載于脂質體、聚合物、微球、納米顆粒，基因治療載體、或裸dna載體而進行遞送。在其他方面，本發(fā)明的特征在于，在對受試者(例如，患有腫瘤的病人)進行治療的方法中，腫瘤癌細胞具有kras突變或呈現(xiàn)異常的kras表達水平。在某些實施方式中，方法可包括向受試者施予有效量的抑制核酸分子，其中，所述抑制核酸分子為具有rna干擾活性的反義核酸分子、sirna、dsrna，或它們的組合，并且，能夠抑制gst-π多肽和p21多肽的表達。在某些實施方式中，腫瘤細胞過量表達gst-π，若gst-π的表達被阻遏，則p21rna或蛋白的水平可能被提高。在某些實施方式中，腫瘤可以是惡性腫瘤、肺癌、腎癌或胰腺癌。脂質尾部的結構本發(fā)明的脂質類化合物可具有一個或多個親脂性尾(lipophilictails)，其含有一個或多個烷基或鏈烯基。親脂性尾的例子包括c(14：l(5))鏈烯基、c(14：l(9))鏈烯基、c(16：l(7))鏈烯基、c(16：l(9))鏈烯基、c(18：1(3))鏈烯基、c(18：l(5))鏈烯基、c(18：l(7))鏈烯基、c(18：l(9))鏈烯基、c(18：l(11))鏈烯基、c(18：l(12))鏈烯基、c(18:2(9,12))鏈烯基、c(18:2(9,11))鏈烯基、c(18：3(9,12,15))鏈烯基、c(18：3(6,9,12))鏈烯基、c(18：3(9,11,13))鏈烯基、c(18:4(6,9,12,15))鏈烯基,c(l8:4(9,11,13,15))鏈烯基、c(20：1(9))鏈烯基、c(20：l(11))鏈烯基、c(20:2(8,11))鏈烯基、c(20:2(5,8))鏈烯基、c(20:2(11,14))鏈烯基、c(20:3(5,8,11))鏈烯基、c(20:4(5,8,11,14))鏈烯基、c(20:4(7,10,13,16))鏈烯基、c(20:5(5,8,11,14,17))鏈烯基、c(20:6(4,7,10,13,16,19))鏈烯基、c(22：l(9))鏈烯基、c(22：l(13))鏈烯基、和c(24：l(9))鏈烯基?；瘜W定義本文中，用語“烷基”表示作為飽和脂肪族基團的烴基，其可以為任何長度。烷基可以是支鏈或直鏈、經取代或未取代的含有1～22個碳原子的脂肪族基團。該定義同樣適用于例如環(huán)烷基、烷氧基、酰基、和芳烷基等其他基團的烷基部分。本文中，例如，用語“c(l-5)烷基”包括c(l)烷基、c(2)烷基、c(3)烷基、c(4)烷基、和c(5)烷基。同樣地，例如，用語“c(3-22)烷基”包括c(l)烷基、c(2)烷基、c(3)烷基、c(4)烷基、c(5)烷基、c(6)烷基、c(7)烷基、c(8)烷基、c(9)烷基、c(10)烷基、c(ll)烷基、c(12)烷基、c(13)烷基、c(14)烷基、c(15)烷基、c(16)烷基、c(17)烷基、c(18)烷基、c(19)烷基、c(20)烷基、c(21)烷基、和c(22)烷基。本文中，可利用以下用語指定烷基：例如，me(甲基)、et(乙基)、pr(任何丙基)、npr(n-pr、正丙基)，'pr(i-pr、異丙基)，bu(任何丁基)、nbu(n-bu、正丁基)，3/4u(i-bu，異丁基)、3/4u(s-bu、仲丁基)，和*bu(t-bu，叔丁基)。本文中，用語“鏈烯基”表示具有至少一個碳-碳雙鍵的烴基。鏈烯基可以是支鏈或直鏈、經取代或未取代的含有2～22個碳原子和至少1個碳-碳雙鍵的烴基。本文中，用語“取代”表示一個或多個取代的原子，或者可以相同或不同的取代基，其中，取代基包括氫。因此，例如，用語烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、烷氧基、?；?、芳烷基等用語所表示的基團可包含經取代的變體。取代變體包括線性、支鏈、和環(huán)狀變體，以及以一個或多個取代基對與基團中的任意的碳原子結合的一個或多個氫原子進行取代而得到的基團。一般而言，化合物可具有一個或多個手性中心。具有一個或多個手性中心的化合物可包括被稱為“異構體”、“立體異構體”、“非對映異構體”、“對映異構體”、“光學異構體”、“外消旋混合物”的化合物。立體化學命名的慣例、例如立體異構體命名的cahn-ingold-prelog規(guī)則、以及立體化學測定、立體異構體區(qū)分的方法均是本領域已知的。例如，參見michaelb.smithandjerrymarch,march’sadvancedorganicchemistry,5thedition,2001。本申請公開的化合物和結構應包含所有針對特定的化合物或結構理應存在的異構體、立體異構體、非對映異構體、對映異構體、及/或光學異構體，并且包括它們的任何混合物、外消旋體或其他。本發(fā)明包括本文中公開的化合物和組合物的任何及所有互變異構體形式、溶劑合物或非溶劑化形式、水合物或未水合形式、及任何原子同位素形式。本發(fā)明包括本文中公開的化合物和組合物的任何及所有多晶型或不同的晶型。體外敲低的方案例在轉染前1天，向96孔板中注入細胞(2x103細胞/孔，100μl含有10％fbs的dmem(hyclonecat.#sh30243.01))，在37℃的孵育器(濕潤氣氛，空氣中co2濃度為5％)中培養(yǎng)。轉染前，將培養(yǎng)基置換為90μl含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基(lifetechnologiescat.#31985-070)。然后，將0.2μl的lipofectaminernaimax(lifetechnologiescat.#13778-100)與4.8μl的opti-memi于室溫混合5分鐘。接著，將1μl的sirna與4μl的opti-memi混合，進而加入lf2000溶液，輕輕混合，無需振蕩(vortex)。于室溫反應5分鐘，然后，將混合物于室溫進一步孵育10分鐘，形成rna-rnaimax復合物。接下來，向每個孔中加入10μl的rna-rnaimax復合物，用手輕輕搖動平板。將細胞在37℃的孵育器(濕潤氣氛，空氣中co2濃度為5％)中培養(yǎng)2小時。將培養(yǎng)基置換為新鮮的含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基。轉染24小時后，用冰冷的pbs洗滌1次細胞。用50μl的cell-to-ct裂解液(lifetechnologiescat.#4391851c)裂解細胞，于室溫處理5-30分鐘。加入5μl的終止溶液，并于室溫孵育2分鐘。立刻使用taqman通過rt-qpcr測定mrna水平。也可將試樣于-80℃冷凍，在稍后進行分析。血清穩(wěn)定性的方案例將0.2mg/ml的sirna和10％人血清一同于37℃孵育。在特定的時間點(0、5、15和30分鐘)，用200μl提取溶劑(氯仿：苯酚：異戊醇＝24：25：1)等份地提取200μl的試樣。振蕩試樣，并于13,000rpm、室溫離心分離10分鐘，然后轉移上層溶液，用0.45μm過濾器進行過濾。將濾液移至300μl的hplc注射瓶中。對于lcm而言，流動相為mpa：100mmhfip+7mmtea(水中)，mpb：50％甲醇+50％乙腈。柱：watersacquityost2.1x50mm，1.7μm。實施例實施例1：本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑使癌異種移植腫瘤在體內顯著縮小。在以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-π和p21的sirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。圖1顯示了gst-π(序列號61、126)和p21(序列號341、355，n＝u)sirna的脂質體制劑的腫瘤抑制效果。利用的癌異種移植模型被施予了相對較低的量，p21sirna為0.74mg/kg。gst-π和p21的sirna制劑在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。30天后，gst-π和p21的sirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，腫瘤體積縮小超過2倍。gst-πsirna以包含組合物(可離子化脂質：膽固醇：dope：dopc：dppe-peg-2k)(25：30：20：20：5)的脂質體制劑的形式注射施予了4次(第1、8、15、22天)。對于癌異種移植模型而言，從atcc獲得了a549細胞系。在添加有10％胎牛血清、100u/ml盤尼西林和100μg/ml鏈霉素的培養(yǎng)基中維持細胞。在接種前48小時稀釋(split)細胞，從而使細胞在被收集時處于對數(shù)生長期。使用胰蛋白酶-edta輕度消化細胞后，從組織培養(yǎng)物中收集細胞。在臺盼藍的存在下，用血細胞計數(shù)器計數(shù)并測定活細胞的數(shù)量(僅計數(shù)活細胞)。在無血清培養(yǎng)基中重新懸浮細胞，使?jié)舛葹?x107/ml。然后將細胞懸浮液與冰上融化的bdmatrigel以1：1的比例充分混合，用于注射。小鼠為charlesriverlaboratory的雌性無胸腺裸鼠(nu/nu)，經過免疫妥協(xié)，6～8周齡，每組7～8只小鼠。對于腫瘤模型的制備而言，使用25g注射針和針筒，在每只小鼠的右側腹皮下接種0.1ml含有2.5x106個a549細胞的接種液，每只小鼠接種1劑接種液。小鼠在接種時未被麻醉。對于腫瘤體積的測量和隨機化而言，腫瘤大小的測量結果取至0.1mm。腫瘤體積利用下式算出：腫瘤體積＝長x寬2/2。當培養(yǎng)的腫瘤生長至約120～175mm3、平均腫瘤體積為150mm3時，將小鼠分配至各介質對照組和處理組，結果，處理組的平均腫瘤體積為介質對照組的平均腫瘤體積的10％以下，符合理想地，腫瘤體積的cv％小于25％。按照給藥方案，在同一天施予試驗制劑和對照介質。在第1周檢測3次腫瘤體積，在接下來的數(shù)周，每周檢測2次，包括研究結束當天。對于施予量而言，在施予當天，從-80℃冰箱中取出試驗制劑，在冰上融化。在裝入注射器之前，手動將裝在瓶中的制劑顛倒數(shù)次。所有試驗制劑均以10ml/kg通過靜脈注射施予。對于體重而言，小鼠稱重至0.1g。在第1次施予后的7天內，每天檢測并記錄體重。在接下來的數(shù)周，每周檢測并記錄體重2次，包括研究結束當天。對于腫瘤的采集而言，在第1次施予后28天，測量腫瘤體積，切割腫瘤供于稱重，并保存以用于pd生物標志物研究。記錄腫瘤的重量。實施例2：本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑使癌異種移植腫瘤在體內顯著縮小。在以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-π和p21的sirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。圖2顯示了gst-π(序列號156、182)和p21(序列號341、355，n＝u)sirna的脂質體制劑的腫瘤抑制效果。利用的癌異種移植模型被施予了相對較低的量，各sirna為0.75mg/kg。gst-π和p21的sirna制劑在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。30天后，gst-π和p21的sirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，腫瘤體積縮小1.7倍。實施例3：本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑在體外展示出由癌細胞凋亡導致的癌細胞死亡上升。體外癌細胞凋亡的監(jiān)控通過觀察puma的表達上調進行，puma是細胞凋亡的生物標志物，其與細胞活性的下降相關。gst-π和p21的sirna制劑出乎意料地使癌細胞的凋亡上升。如圖3所示，在gst-π和p21的sirna轉染后2～4天，gst-π和p21的sirna制劑使puma的表達水平顯著升高(圖3，p21(a)+gstp(a)，p21：序列號341、355，n＝u，gstp：序列號156、182)。上述數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑導致出乎意料的癌細胞凋亡的上升。puma生物標志物的方案如下。在轉染前1天，向96孔板中注入細胞(2x103細胞/孔，100μl含有10％fbs的dmem(hyclonecat.#sh30243.01))，以2x103細胞/孔注入96孔板，在37℃的孵育器(濕潤氣氛，空氣中co2濃度為5％)中培養(yǎng)。第二天，在轉染前將培養(yǎng)基置換為90μl含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基(lifetechnologiescat.#31985-070)。然后，將0.2μl的lipofectaminernaimax(lifetechnologiescat.#13778-100)與4.8μl的opti-memi于室溫混合5分鐘。將1μl的sirna(儲存濃度：1μμ)與4μl的opti-memi混合，加入rnaimax溶液，輕輕混合。將混合物于室溫孵育10分鐘，形成rna-rnaimax復合物。向每個孔中加入10μl的rna-rnaimax復合物，使sirna最終濃度為10nm。將細胞孵育2小時，并將培養(yǎng)基置換為新鮮的含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基。在轉染后1、2、3、4、6天，用冰冷的pbs洗滌1次細胞，然后用50μl的cell-to-ct裂解液(lifetechnologiescat.#4391851c)于室溫裂解5～30分鐘。加入5μl的終止溶液，并于室溫孵育2分鐘。使用taqman通過rt-qpcr測定puma(bbc3，cat#hs00248075，lifetechnologies)mrna水平。實施例4：以gst-π和p21作為靶標的sirna的雙敲低體外研究表明，上述組合能夠高效地阻遏2種蛋白質的mrna。如表11所示，濃度為2、10、50nm時，各gst-π和p21敲低水平高。表11：a549中的雙敲低方案：用2、10、50nm的p21sirna進行轉染。在1、2、3、或4天后用10nm的gst-πsirna進行轉染。1天后，通過rt-pcr分析p21mrna和gst-πmrna的水平。實施例5：原位a549肺癌小鼠模型。本發(fā)明的gst-πsirna能夠導致原位肺癌腫瘤在體內顯著縮小。該實施例中，在以脂質體制劑的形式施予至無胸腺裸鼠的原位肺癌腫瘤的情況下，gst-πsirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。一般而言，原位腫瘤模型可呈現(xiàn)藥物效果、效能和提高的預估性能的直觀臨床意義。原位腫瘤模型中，腫瘤細胞被直接植入與細胞來源種類相同的器官。將處理組和介質對照組剖檢時的最終原發(fā)瘤重量進行比較，由此對sirna制劑對于人a549肺癌的抗腫瘤效果進行評價。圖4顯示了由基于bu2結構的gst-πsirna(序列號61、126)導致的體內原位肺癌腫瘤抑制。向使用的原位a549肺癌小鼠模型以相對較低的量(2mg/kg)施予以gst-π為靶標的sirna。在為期6周的該研究中，gst-πsirna呈現(xiàn)了顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。如圖4所示，43天后，gst-πsirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，最終腫瘤平均重量大幅度減輕2.8倍。該研究中，使用了5～6周齡的雄性ncrnu/nu小鼠。在實驗期間，將實驗動物飼育在經過fipea過濾的環(huán)境中。sirna制劑在使用前于4℃保存，并在注射進小鼠10分鐘前使其升溫至室溫。對于該a549人肺癌原位模型而言，在外科原位移植(soi)當天，從接受a549腫瘤異種移植的動物皮下部位采集備份腫瘤(stocktumor)，置于rpmi-1640培養(yǎng)基中。摘除壞死組織，將活體組織切割成1.5～2mm3的小片。通過異氟烷吸入將動物麻醉，用碘酒和酒精消毒手術區(qū)。使用一對手術剪在小鼠左胸壁切開約1.5cm長的橫向切口。切開第三、四肋骨之間，暴露左肺。使用8-0外科縫線(尼龍)，將一片a549腫瘤移植至肺表面。使用6-0縫線(絲)將胸壁縫合。使用裝有25gx11/2針頭的3cc注射器進行胸內穿刺，使肺重新膨脹，由此排出胸腔中殘余的空氣。使用6-0縫線(絲)將胸壁縫合。上述所有手術步驟均在hepa過濾層流操作臺上使用7x放大倍數(shù)的顯微鏡實施。腫瘤移植3天后，將荷瘤模型小鼠隨機分組，每組10只小鼠。對于處理組而言，在腫瘤移植3天后對10只小鼠進行處理。對于處理組而言，制劑為脂質體組合物(可離子化脂質:膽固醇：dope：dopc：dppe-peg-2k：dspe-peg-2k)。脂質體包封gst-πsirna。對于研究終點而言，在處理開始42天后殺死實驗小鼠。切除原發(fā)瘤，并用電子天平稱重，用于后續(xù)分析。對于化合物毒性的估測而言，在整個實驗期間，處理組和對照組的小鼠的平均體重維持在正常范圍內。在小鼠中未觀察到其他毒性癥狀。實施例6：本發(fā)明的gst-π和p21的sirna制劑使癌異種移植腫瘤在體內顯著縮小。在以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-π和p21的sirna在體內發(fā)揮了基因敲低效能。圖5顯示了gst-πsirna(序列號：156、182)的體內腫瘤抑制效果。利用的癌異種移植模型被施予了相對較低的量(以gst-π作為靶標的sirna為0.75mg/kg)。gst-π的sirna制劑在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。36天后，gst-πsirna呈現(xiàn)了明顯有利的腫瘤抑制效果，較之對照而言，腫瘤體積2倍。如圖5所示，gst-πsirna在研究結束當天展示出顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。具體而言，腫瘤重量減輕超過2倍。gst-πsirna以包含組合物(可離子化脂質：膽固醇：dope：dopc：dppe-peg-2k)(25：30：20：20：5)的脂質體制劑的形式注射施予了2次(第1、15天)。對于癌異種移植模型而言，從atcc獲得了a549細胞系。在添加有10％胎牛血清、100u/ml盤尼西林和100μg/ml鏈霉素的培養(yǎng)基中維持細胞。在接種前48小時稀釋細胞，從而使細胞在被收集時處于對數(shù)生長期。使用胰蛋白酶-edta輕度消化細胞后，從組織培養(yǎng)物中收集細胞。在臺盼藍的存在下，用血細胞計數(shù)器計數(shù)并測定活細胞的數(shù)量(僅計數(shù)活細胞)。在無血清培養(yǎng)基中重新懸浮細胞，使?jié)舛葹?x107/ml。然后，將細胞懸浮液與冰上融化的bdmatrigel以1：1的比例充分混合，用于注射。小鼠為charlesriverlaboratory的雌性無胸腺裸鼠(nu/nu)，經過免疫妥協(xié)，6～8周齡，每組7～8只小鼠。對于腫瘤模型的制備而言，使用25g注射針和針筒，在每只小鼠的右側腹皮下接種0.1ml含有2.5x106個a549細胞的接種液，每只小鼠接種1劑接種液。小鼠在接種時未被麻醉。對于腫瘤體積的測量和隨機化而言，腫瘤大小的測量結果取至0.1mm。腫瘤體積利用下式算出：腫瘤體積＝長x寬2/2。當培養(yǎng)的腫瘤生長至約120～175mm3、平均腫瘤體積為150mm3時，將小鼠分配至各介質對照組和處理組，結果，處理組的平均腫瘤體積為介質對照組的平均腫瘤體積的10％以下，符合理想地，腫瘤體積的cv％小于25％。按照給藥方案，在同一天施予試驗制劑和對照介質。在第1周檢測3次腫瘤體積，在接下來的數(shù)周，每周檢測2次，包括研究結束當天。對于施予量而言，在施予當天，從-80℃冰箱中取出試驗制劑，在冰上融化。在裝入注射器之前，手動將裝在瓶中的制劑顛倒數(shù)次。所有試驗制劑均以0.75mg/kg通過靜脈注射施予，每2周1次(q2w)x2，10ml/kg。對于體重而言，小鼠稱重至0.1g。在第1次施予后的7天內，每天檢測并記錄體重。在接下來的數(shù)周，每周檢測并記錄體重2次，包括研究結束當天。對于腫瘤的采集而言，在第1次施予后28天，測量腫瘤體積，切割腫瘤供于稱重，并保存以用于pd生物標志物研究。記錄腫瘤的重量。實施例7：本發(fā)明的gst-πsirna制劑在體外展示出由癌細胞凋亡導致的癌細胞死亡上升。gst-πsirna發(fā)揮了gst-π敲低效果，由此導致與細胞活性下降相關的細胞凋亡生物標志物puma的上調。對于序列號156、182的gst-πsirna而言，其含有位于種子區(qū)域的脫氧核苷酸組合、2’-氟代脫氧核苷酸、和2’-ome取代核糖核苷酸，并出乎意料地使癌細胞的凋亡上升。如圖6所示，對由序列號156、182的gst-πsirna導致的puma的表達水平進行了測量。圖6中，在gst-πsirna轉染2～4天后，puma的表達顯著升高。這些數(shù)據(jù)表明，含有位于種子區(qū)域的脫氧核苷酸組合、2’-氟代脫氧核苷酸、和2’-ome取代核糖核苷酸的gst-πsirna結構出乎意料地使癌細胞的凋亡上升。puma生物標志物的方案如下。在轉染前1天，向96孔板中注入細胞(2x103細胞/孔，100μl含有10％fbs的dmem(hyclonecat.#sh30243.01))，在37℃的孵育器(濕潤氣氛，空氣中co2濃度為5％)中培養(yǎng)。第二天，在轉染前將培養(yǎng)基置換為90μl含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基(lifetechnologiescat.#31985-070)。然后，將0.2μl的lipofectaminernaimax(lifetechnologiescat.#13778-100)與4.8μl的opti-memi于室溫混合5分鐘。將1μl的sirna(儲存濃度：1μμ)與4μl的opti-memi混合，加入rnaimax溶液，輕輕混合。將混合物于室溫孵育10分鐘，形成rna-rnaimax復合物。向每個孔中加入10μl的rna-rnaimax復合物，使sirna最終濃度為10nm。將細胞孵育2小時，并將培養(yǎng)基置換為新鮮的含有2％fbs的opti-memi減血清培養(yǎng)基。在轉染后1、2、3、4、6天，用冰冷的pbs洗滌1次細胞，然后用50μl的cell-to-ct裂解液(lifetechnologiescat.#4391851c)于室溫裂解5～30分鐘。加入5μl的終止溶液，并于室溫孵育2分鐘。使用taqman通過rt-qpcr測定puma(bbc3，cat#hs00248075，lifetechnologies)mrna水平。實施例8：本發(fā)明的gst-πsirna制劑能夠使癌異種移植腫瘤在體內顯著縮小。以脂質體制劑的形式施予至癌異種移植腫瘤的情況下，gst-πsirna能夠在體內發(fā)揮基因敲低效能。圖7顯示了gst-πsirna(序列號61、126)的腫瘤抑制效果。在體內觀察到了以gst-π作為靶標的sirna對于gst-πmrna的劑量依賴性敲低。利用的癌異種移植模型使用了以gst-π作為靶標的sirna。gst-πsirna在施予后數(shù)天內呈現(xiàn)了顯著且出乎意料的有利的腫瘤抑制效果。如圖7所示，在以脂質制劑的形式注射4天后，利用gst-πsirna進行的處理導致gst-πmrna表達顯著降低。以更高的劑量即4mg/kg注射，24小時后，觀測到gst-πmrna表達顯著下降約40％。p21sirna以包含組合物(可離子化脂質：膽固醇：dope：dopc：dppe-peg-2k)(25：30：20：20：5)的脂質體制劑的形式單次注射施予，施予量為10ml/kg。對于癌異種移植模型而言，從atcc獲得了a549細胞系。在添加有10％胎牛血清、100u/ml盤尼西林和100μg/ml鏈霉素的rpmi-1640中維持細胞。在接種前48小時稀釋細胞，從而使細胞在被收集時處于對數(shù)生長期。使用胰蛋白酶-edta輕度消化細胞后，從組織培養(yǎng)物中收集細胞。在臺盼藍的存在下，用血細胞計數(shù)器計數(shù)并測定活細胞的數(shù)量(僅計數(shù)活細胞)。在無血清培養(yǎng)基中重新懸浮細胞，使?jié)舛葹?x107/ml。然后將細胞懸浮液與冰上融化的bdmatrigel以1：1的比例充分混合，用于注射。小鼠為charlesriverlaboratory的雌性無胸腺裸鼠(nu/nu)，經過免疫妥協(xié)，6～8周齡，每組3只小鼠。對于腫瘤模型的制備而言，使用25g注射針和針筒，在每只小鼠的右側腹皮下接種0.1ml含有2.5x106個a549細胞的接種液，每只小鼠接種1劑接種液。小鼠在接種時未被麻醉。對于腫瘤體積的測量和隨機化而言，腫瘤大小的測量結果取至0.1mm。腫瘤體積利用下式算出：腫瘤體積＝長x寬2/2。每周檢測2次腫瘤體積。當培養(yǎng)的腫瘤生長至約350～600mm3時，將小鼠按照各時間點分組。按照給藥方案，在同一天施予試驗制劑。對于施予量而言，在培養(yǎng)的腫瘤生長至約350～600mm3當天，從4℃冰箱中取出試驗制劑。為了形成均質的溶液，在裝入注射器之前，手動將裝在瓶中的制劑顛倒數(shù)次。對于體重而言，小鼠稱重至0.1g。每周檢測并記錄體重2次，包括研究結束當天。對于腫瘤的采集而言，在施予后0、24、48、72、96(可選)、168小時利用高濃度co2殺死動物，并切除腫瘤。先稱取腫瘤的濕重，然后將其分成用于分析kd、分配和生物標志物的3部分。用液氮快速冷凍試樣，并保存于80℃，直到供于處理為止。本文描述的實施方案不是限制性的，并且本領域技術人員可以容易地理解，可以不進行過度實驗而測試本文所述修飾的特定組合以鑒定具有改進的rnai活性的核酸分子。出于所有目的，本文特別提及的所有出版物、專利和文獻通過引用整體并入本文。應當理解，本發(fā)明不限于所述特定方法、方案、材料和試劑，因為它們可能變化。還應當理解，本文使用的術語僅用于描述特定實施方案的目的，并不意圖限制本發(fā)明的范圍。對于本領域技術人員將顯而易見的是，在不背離本說明書的范圍和宗旨的情況下，可以對本文所公開的描述進行各種替換和修改，并且這些實施方案在本說明書和所附權利要求的范圍內。必須指出，本文和所附權利要求中所使用的單數(shù)形式包括復數(shù)指稱，上下文另有明確說明除外。同樣地，術語“一個”(或“一種”)、“一個或更多個(一種或更多種)”和“至少一個/種”在本文可以互換使用。另外要注意，術語“包括”、“包含”、“含有”、“含”和“具有”可以互換使用，并且應該被廣義、無限制地解釋。除非本文另有說明，否則本文中對數(shù)值范圍的記載僅僅意在作為對單獨提到落入該范圍的每個單獨的值的速記法，每個單獨的值均被并入說明書中，如同它們被單獨記載于本文中一樣。對于馬庫什組，本領域技術人員將認識到，該描述包括個體成員以及馬庫什組成員的亞組。即使沒有進一步的闡述，本領域技術人員亦可基于上述描述最大程度地利用本發(fā)明。因此，所附的具體實施方案應被解釋為僅是說明性的，而不是以任何方式限制本公開的其余部分。本說明書中公開的所有特征可以以任何組合而聯(lián)用。本說明書中公開的每個特征可以由服務于相同、等同或相似目的的替代特征來代替。當前第1頁12