本發(fā)明涉及一種原肌球蛋白相關(guān)激酶抑制劑(tropomyosin-relatedkinaseinhibitor)(“trk抑制劑”)，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的藥物制劑，以及3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物。所述一水合物形式具有促進(jìn)將3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制成藥物制劑的期望性質(zhì)。所述trk抑制劑微晶溶液藥物制劑包含呈一水合物形式的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其顯示出相比無(wú)水物形式而言改善的特性。本發(fā)明還涉及trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延長(zhǎng)釋放藥物制劑，其包含負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。本發(fā)明還涉及使用這些藥物制劑治療疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代謝缺陷和癌癥，以及治療骨關(guān)節(jié)炎(oa)、疼痛、術(shù)后疼痛和與oa有關(guān)的疼痛中的用途。所述trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和制備所述trk抑制劑的方法披露于國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)pct/us14/69469和美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)14/564,773，各自標(biāo)題為原肌球蛋白相關(guān)激酶(trk)抑制劑，通過(guò)引用將其并入本文。
背景技術(shù)：
：不適用技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一方面涉及trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式，其中使用cukα輻射測(cè)量的x射線(xiàn)粉末衍射圖含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。本發(fā)明的第二方面涉及藥物制劑，其包含trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式和藥用賦形劑，其中使用cukα輻射測(cè)量的x射線(xiàn)粉末衍射圖含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。本發(fā)明的第三方面涉及trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。本發(fā)明的第四方面涉及藥物制劑，其包含trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式和藥用賦形劑。本發(fā)明的第五方面涉及延長(zhǎng)釋放藥物制劑，其包含負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。在第六方面，本發(fā)明涉及制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺與溶劑混合以形成混懸液；b.攪拌混懸液；c.通過(guò)過(guò)濾收集混懸液中的固體；和d.使固體干燥。在第七方面，本發(fā)明涉及制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺與溶劑混合以形成混懸液；b.攪拌混懸液；c.通過(guò)過(guò)濾收集混懸液中的固體；和d.使固體干燥。在第八方面，本發(fā)明涉及通過(guò)溶劑萃取制備負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有機(jī)溶劑以形成藥物溶液；b.添加聚合物至藥物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液混合至水溶液中以形成乳液；d.添加去離子水至乳液；e.通過(guò)溶劑萃取從乳液中形成微球；和f.使用表面活性劑溶液篩分所得微球。以及在第九方面，本發(fā)明涉及通過(guò)溶劑萃取制備負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有機(jī)溶劑以形成藥物混懸液；b.添加聚合物至藥物混懸液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液與水溶液混合以形成乳液；d.添加去離子水至乳液；e.通過(guò)溶劑萃取從乳液中形成微球；和f.使用表面活性劑溶液篩分所得微球。在第十一方面，本發(fā)明涉及通過(guò)噴霧干燥制備負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有機(jī)溶劑以形成藥物溶液；b.添加聚合物至藥物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液通過(guò)噴霧器泵入干燥器以形成球狀顆粒。在第十二方面，本發(fā)明涉及通過(guò)噴霧干燥制備負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有機(jī)溶劑以形成藥物混懸液；b.添加聚合物至藥物混懸液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液通過(guò)噴霧器泵入干燥器以形成球狀顆粒。附圖說(shuō)明圖1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的x射線(xiàn)粉末衍射(xrpd),4-40°2θ。使用cukα測(cè)量的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的xrpd顯示出在7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.312θ峰處的獨(dú)特峰。圖2：以10℃/min加熱的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的差示掃描量熱法(dsc)和熱重量分析(tga)熱解曲線(xiàn)。所述dsc熱解曲線(xiàn)展現(xiàn)在76.72、160.13和195.78℃的三個(gè)熱事件，所述tga熱解曲線(xiàn)顯示出在25-100℃的3.7％重量損失。圖3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。展現(xiàn)出trk抑制劑的一水合物形式的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。圖4：實(shí)驗(yàn)性xrpd圖與由單晶結(jié)構(gòu)計(jì)算出的xrpd圖的疊加。該圖展現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)性粉末圖與從單晶結(jié)構(gòu)計(jì)算出的圖的疊加。強(qiáng)的匹配度表明，單晶結(jié)構(gòu)表示散裝材料(bulkmaterial)。圖5：api載量對(duì)ivr分布(profile)的作用-12％api/9:1r202h:752h、16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h微球。該圖比較了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺負(fù)載對(duì)不同組成的微球的體外釋放分布的作用。圖6：16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h微球的dsc熱解曲線(xiàn)。所述dsc熱解曲線(xiàn)表明20％微球顯示130-150℃的熔化吸熱，這證實(shí)了存在表面藥物晶體。圖7：16％api/9:1r202h:752h微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1500x)。所述16％載藥微球未顯示藥物晶體，指示藥物為無(wú)定形的。圖8：20％api/9:1r202h:752h微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1500x)。所述20％載藥微球顯示表面藥物晶體。圖9：api載量對(duì)ivr分布的作用-15％api/r202h、17％api/r202h和19％api/r202h微球。該圖比較了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺負(fù)載對(duì)不同組成的微球的體外釋放分布的作用。圖10：api載量對(duì)ivr分布的作用-16％api/9.5:0.5r202h:752h、18％api/9.5:0.5r202h:752h和20％api/9.5:0.5r202h:752h微球。該圖比較了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺負(fù)載對(duì)不同組成的微球的體外釋放分布的作用。圖11：聚合物共混物對(duì)ivr分布的作用-16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:rg752h微球。該圖比較了聚合物共混物對(duì)不同組成的微球的體外釋放分布的作用。圖12：聚合物共混物對(duì)ivr分布的作用-16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h微球。該圖比較了聚合物共混物對(duì)不同組成的微球的體外釋放分布的作用。圖13：顯示歷時(shí)180天的零級(jí)ivr分布的制劑-15％api/9:1r203h:rg752h和16％api/9.5:0.5r202h:rg502h微球。使用比率為9:1的r203h:752h聚合物中15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺以及比率為9.5:0.5的r202h:rg502h聚合物中16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備的微球展現(xiàn)出歷時(shí)6個(gè)月的假零級(jí)釋放分布。圖14：制備中的共溶劑系統(tǒng)對(duì)ivr分布的作用-16％api/9:1r203h:rg752h微球-9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9.5:.05dcm:ba、9:1dcm:ba。該圖比較了微球制備中使用的共溶劑系統(tǒng)對(duì)含有16％藥物載量和9:1r203h:rg752h的聚合物共混物的微球的體外釋放分布的作用。圖15：用于增加api載量的dcm:ba共溶劑系統(tǒng)對(duì)ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h微球。該圖比較了用于增加藥物載量的微球制備中使用的共溶劑系統(tǒng)對(duì)不同聚合物共混物的微球的體外釋放分布的作用。圖16：用微粒化混懸液微囊化方法(micronizedsuspensionmicroencapsulationprocess)制備的微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1500x)。通過(guò)包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混懸液產(chǎn)生的微球是球形的，其由于存在嵌入表面的藥物晶體而具有粗糙的表面紋理(texture)。圖17：微粒化混懸液微囊化方法對(duì)ivr分布的作用-25％api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.6mlea,25％api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+3.25mlea,25％api/r203h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,40％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.3mlea,30％微流化api/r202s39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/r203s39ml5％pva+2.0ml微球。該圖比較了在微球制備中使用的微?；鞈乙何⒛一椒▽?duì)具有不同藥物載量的微球的體外釋放分布的作用。圖18：通過(guò)溶劑萃取制備的16％api/9:1r202h:rg752h微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1000x)。溶劑萃取微球是球形的，具有光滑的表面紋理。圖19：通過(guò)噴霧干燥制備的16％api/9:1r202h:rg752h微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1000x)。噴霧干燥的微球是球形的，具有一些表面紋理。圖20：微囊化方法對(duì)ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h通過(guò)溶劑萃取的微球(ow)、16％api/9:1r202h:rg752h通過(guò)噴霧干燥的微球(20％和22.5％聚合物)和16％api/9:1r203h:rg752h通過(guò)噴霧干燥的微球(22.5％聚合物)。該圖比較了通過(guò)溶劑萃取和噴霧干燥制備的負(fù)載16％藥物的9:1r202h:rg752h微球的體外釋放分布。圖20：微囊化方法對(duì)ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h通過(guò)溶劑萃取的微球(ow)、16％api/9:1r202h:rg752h通過(guò)噴霧干燥的微球(20％和22.5％聚合物)和16％api/9:1r203h:rg752h通過(guò)噴霧干燥的微球(22.5％聚合物)。該圖顯示了微囊化方法對(duì)不同制劑的微球的體外釋放分布的作用。圖21：噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/無(wú)添加劑微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1000x)。示出噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/無(wú)添加劑的微球。圖22：噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1000x)。示出噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球。圖23：噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407微球的掃描電子顯微鏡(sem)視圖(1000x)。示出噴霧干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407微球。圖24：1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407對(duì)ivr分布的作用-16％api/1:1r202h:r203h/無(wú)添加劑、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407。該圖比較了通過(guò)噴霧干燥制備的16％api/1:1r202h:r203h/無(wú)添加劑微球、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球和16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407的體外釋放分布。圖25：體內(nèi)(大鼠)ivr分布-16％api/9:1202h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球。該圖顯示了歷經(jīng)約3-4個(gè)月和5-6個(gè)月對(duì)于16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球的體內(nèi)近零級(jí)釋放。圖26：隨時(shí)間保留的[14c]3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(大鼠膝關(guān)節(jié))-16％api/9:1202h:rg502h和15％api/9:1203h:rg752h微球。關(guān)節(jié)內(nèi)給予至大鼠膝關(guān)節(jié)后，對(duì)于16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球顯示持續(xù)5至6個(gè)月的藥物釋放；16％api/9:1202:h:rg502h顯示5個(gè)月后在關(guān)節(jié)中保留12％且15％api/9:1r203h:rg752h顯示6個(gè)月后保留30％藥物。圖27：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺濃度-時(shí)間分布(大鼠血液)-16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球。該圖顯示關(guān)節(jié)內(nèi)給予負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球后血液中的藥物濃度-時(shí)間分布。圖28：ivr分布-16％api/9:1202:h:rg752h、15％api/9:1r203h:rg752h和40％api/203h微球。圖29：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺濃度-時(shí)間分布-16％api/9:1202:h:rg752h、15％api/9:1r203h:rg752h和40％api/203h微球。圖30：形式1至4(無(wú)水物和水合物)的測(cè)量或模擬xrpd。示出3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的無(wú)水物和水合物形式的xrpd。圖31：形式5(乙醇)的xrpd。呈現(xiàn)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式5(乙醇)的xrpd。圖32：形式9(丙酮)的xrpd。呈現(xiàn)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式9(丙酮)的xrpd。圖33：形式10(丙酮)和形式9(丙酮)的xrpd比較。該圖提供了在丙酮中獲得的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的兩種形式的比較。圖34：形式11(乙腈)的xrpd。呈現(xiàn)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式11(乙腈)的xrpd。圖35：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的固體結(jié)晶相。該圖提供了實(shí)驗(yàn)中獲得的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的十種結(jié)晶形式的比較。具體實(shí)施方式本發(fā)明涉及一種原肌球蛋白相關(guān)激酶抑制劑(“trk抑制劑”)，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的藥物制劑，以及3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。所述trk抑制劑微晶溶液藥物制劑包含呈其一水合物形式的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其相對(duì)于無(wú)水物形式而言顯示出改善的特性。本發(fā)明還涉及trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延長(zhǎng)釋放藥物制劑，其包含負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。本發(fā)明還涉及使用這些藥物制劑治療疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代謝缺陷和癌癥，以及治療骨關(guān)節(jié)炎(oa)、疼痛、術(shù)后疼痛和與oa有關(guān)的疼痛中的用途。本發(fā)明的trk抑制劑的藥物制劑抑制原肌球蛋白相關(guān)激酶a(trka)、原肌球蛋白相關(guān)激酶b(trkb)、原肌球蛋白相關(guān)激酶c(trkc)和c-fms(集落刺激因子-1(csf-1)的細(xì)胞受體)。原肌球蛋白相關(guān)激酶(trk)是由稱(chēng)為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neutrophin,nt)的可溶性生長(zhǎng)因子活化的高親和力受體。trka也稱(chēng)為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性酪氨酸激酶受體1型，由神經(jīng)生長(zhǎng)因子(ngf)活化。trkb由腦源性生長(zhǎng)因子和nt-4/5活化。trkc由nt3活化。trk的活化導(dǎo)致?tīng)可婕?xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的下游激酶的活化，包括細(xì)胞增殖、存活、血管生成和轉(zhuǎn)移。trk牽涉許多疾病，包括oa。本發(fā)明的trk抑制劑的藥物制劑也可抑制c-fms(集落刺激因子-1(csf-1)的細(xì)胞受體)。c-fms在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能中發(fā)揮作用，且被認(rèn)為是在炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代謝缺陷和癌癥中發(fā)揮作用(burnsandwilks,2011,informahealthcare)。oa是以慢性疼痛和關(guān)節(jié)軟骨的破壞為特征的流行和使人虛弱的關(guān)節(jié)疾病。最近的臨床試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)在oa膝蓋疼痛中阻斷ngf的作用，證明通過(guò)靜脈內(nèi)輸注抗ngf阻斷抗體治療的患者中顯著的疼痛緩解和高像應(yīng)率(lane,2010,nengljmed)。然而，由于全身抑制ngf信號(hào)傳導(dǎo)(fda關(guān)節(jié)炎咨詢(xún)委員會(huì)討論與抗神經(jīng)生長(zhǎng)因子因子藥物相關(guān)的安全問(wèn)題會(huì)議；http://www.fda.gov/advisorycommittees/calendar/ucm286556.htm)，這種方式(modality)可能導(dǎo)致不良事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。因此，通過(guò)開(kāi)發(fā)trk抑制劑，特別是trka抑制劑，ngf的高親和力受體，采用了靶向ngf介導(dǎo)的oa疼痛的新方法(nicol,2007,molecularinterv)。本發(fā)明的trk抑制劑被局部遞送，從而避免了靜脈內(nèi)抗ngf給予觀察到的全身分布(distribution)。該治療策略通過(guò)允許在非局部位點(diǎn)維持生理必需的ngf信號(hào)傳導(dǎo)(即感覺(jué)/交感神經(jīng)維持，血管發(fā)生)來(lái)提供增強(qiáng)的劑量方便性以及更高的安全性。本發(fā)明涉及trk抑制劑的藥物制劑和使用trk抑制劑的藥物制劑治療疾病的方法。更具體地，本發(fā)明涉及用trk抑制劑的藥物制劑治療疼痛、oa、與oa有關(guān)的疼痛、術(shù)后疼痛、炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代謝缺陷和癌癥的方法。trk抑制劑的藥物組合物可以多種劑型給予，包括作為微晶混懸液和延長(zhǎng)釋放制劑的局部遞送的注射劑。trk抑制劑是包含trk抑制劑的藥物組合物中的活性藥物成分。trk抑制劑也可與其他活性成分共同給予和/或共同配制用于治療疾病，包括治療疼痛、oa和與oa有關(guān)的疼痛。本發(fā)明的trk抑制劑的藥物制劑包含作為活性藥物成分的由式(i)表示的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺也稱(chēng)為gz389988。式(i)：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(gz389988)用本發(fā)明所要解決的問(wèn)題是配制包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的組合物中的困難。該問(wèn)題的解決方法是發(fā)現(xiàn)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式與無(wú)水物形式相比具有改善的物理和化學(xué)性質(zhì)，包括更佳的物理穩(wěn)定性和更慢的水溶出度。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的無(wú)水物形式證實(shí)在溶液中相對(duì)不穩(wěn)定，產(chǎn)生與其配制成藥物組合物相關(guān)的問(wèn)題。無(wú)水物形式在某些條件下展現(xiàn)出可變的固體形式變化，包括轉(zhuǎn)化成水合物。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式容許額外的穩(wěn)定性且有必要避免經(jīng)長(zhǎng)期儲(chǔ)存和加工期間的無(wú)定形轉(zhuǎn)化，且導(dǎo)致增強(qiáng)的物理穩(wěn)定性。此外，觀察到一水合物形式在水溶液中更慢的溶出。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，也稱(chēng)為gz389988a，由下式(ii)表示。式(ii)：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式(gz389988a)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的分子量為470.54g/mol，且分子式(elementalformula)為c26h26n6o3。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式是一種灰白色粉末，且在偏振光顯微鏡下其看上去是精細(xì)針狀物或纖維狀顆粒。根據(jù)實(shí)施例1合成3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案是3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式，其中使用cukα輻射測(cè)量的x射線(xiàn)粉末衍射圖(xrpd)含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。獲得xrpd計(jì)算結(jié)果的方法的詳細(xì)內(nèi)容在實(shí)施例1中提供。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種藥物制劑，其包含trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式和藥用賦形劑。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在其它溶劑中的其它晶體形式，所述溶劑包括乙醇、丙酮、乙腈和混合溶劑。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的其它形式和獲得xrpd計(jì)算結(jié)果的方法的詳細(xì)內(nèi)容在實(shí)施例4中提供。本發(fā)明還涉及一種組合物和藥物制劑，所述組合物包含由式(i)表示的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的組合物，所述藥物制劑包含trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式和藥用賦形劑。trk抑制劑的藥物制劑可包含一種或多種藥用賦形劑。trk抑制劑的藥物制劑的給予方式包括口服、舌下、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、透皮、經(jīng)直腸、吸入、鞘內(nèi)/心室內(nèi)和局部給予。因此，trk抑制劑的藥物制劑可配制成例如膠囊、片劑、粉劑、溶液、混懸液、乳劑、凍干粉末或包含可注射微膠囊的延長(zhǎng)釋放制劑。trk抑制劑的藥物制劑中使用的賦形劑將取決于trk抑制劑的藥物制劑預(yù)期的給予途徑。合適的賦形劑包括但不限于無(wú)機(jī)或有機(jī)材料，諸如稀釋劑、溶劑、明膠、白蛋白、乳糖、淀粉、穩(wěn)定劑、熔化劑、乳化劑、助懸劑、鹽和緩沖劑。用于關(guān)節(jié)內(nèi)制劑諸如溶液或混懸液的合適的藥用賦形劑包括但不限于市售的惰性凝膠或液體。由于trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的溶解性低，需要助懸劑來(lái)制備用于關(guān)節(jié)內(nèi)注射的微晶混懸液制劑，其包含trk抑制劑作為活性藥物成分。常用的藥用助懸劑包括：阿拉伯膠、瓊脂、藻酸、膨潤(rùn)土、硬脂酸鈣、卡波姆、羧甲基纖維素(鈣和鈉)、角叉菜膠、纖維素(微晶纖維素、微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉，粉末狀)、膠體二氧化硅、糊精(destrin)、明膠、瓜爾膠、水輝石、疏水性膠體二氧化硅、羥基乙基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羥丙甲纖維素、高嶺土、硅酸鎂鋁、麥芽糖醇溶液、中鏈甘油三酯、甲基纖維素、硼酸苯汞、磷脂、聚卡波非(poycarbophil)、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚維酮(聚乙烯基吡咯烷酮)、藻酸丙二醇酯、皂石、麻油、藻酸鈉、脫水山梨糖醇酯、蔗糖、西黃蓍膠、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯和黃原膠(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。緩沖劑也可用于關(guān)節(jié)內(nèi)給予的溶液的制劑，其中所述活性成分為trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。藥用緩沖劑包括：己二酸、氨溶液、硼酸、碳酸鈣、氫氧化鈣、乳酸鈣、磷酸鈣、檸檬酸一水合物、磷酸氫二鈉、二乙醇胺、甘氨酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、甲硫氨酸、磷酸二氫鈉、單乙醇胺、谷氨酸單鈉、磷酸、檸檬酸鉀、乙酸鈉、碳酸氫鈉、硼酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鈉二水合物、氫氧化鈉、乳酸鈉和三乙醇胺(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。因?yàn)楸景l(fā)明的trk抑制劑的藥物制劑是關(guān)節(jié)內(nèi)給予的制劑，它們也可含有稀釋劑。適用于本發(fā)明應(yīng)用的稀釋劑包括：麥芽糖醇、葵花子油、藻酸銨、碳酸鈣、乳酸鈣、無(wú)水磷酸氫鈣、磷酸氫鈣二水合物、磷酸鈣、硅酸鈣、硫酸鈣、纖維素(粉末狀，硅化微晶纖維素)、乙酸纖維素、可壓縮糖、糖粉(confectioner’ssugar)、玉米淀粉和預(yù)膠化淀粉、葡聚糖結(jié)合劑(dextrate)、糊精、葡萄糖、赤蘚糖醇、乙基纖維素、果糖、富馬酸、棕櫚酸硬脂酸甘油酯、吸入乳糖、異麥芽糖醇、高嶺土、拉克替醇、乳糖(無(wú)水、一水合物和玉米淀粉、一水合物和微晶纖維素，噴霧干燥的)、碳酸鎂、氧化鎂、糊精-麥芽糖復(fù)合劑、麥芽糖、甘露糖醇、中鏈甘油三酯、微晶纖維素、聚葡萄糖、聚甲基丙烯酸酯、二甲硅油(simethicone)、藻酸鈉、氯化鈉、山梨糖醇、淀粉(預(yù)膠化的、可滅菌的玉米淀粉)、蔗糖、糖球、磺丁基醚β-環(huán)糊精、滑石、西黃蓍膠、海藻糖、木糖醇(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式作為活性成分的trk抑制劑的藥物制劑的微晶混懸液述于實(shí)施例2。本發(fā)明還涉及制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的結(jié)晶形式和制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺與溶劑混合以形成混懸液；b.攪拌混懸液；c.通過(guò)過(guò)濾收集混懸液中的固體；和d.使固體干燥。在該方法中，用于形成混懸液的溶劑可為丙酮和水的混合物。此外，混懸液可攪拌過(guò)夜，并且收集的固體可為空氣干燥的。trk抑制劑的延長(zhǎng)釋放藥物制劑可包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺或3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，因?yàn)樵谟伤幬锶芤褐苽涞闹苿┑那闆r下，trk抑制劑在微膠包囊和配制之前溶于溶劑中，并且在由藥物混懸液制備的制劑的情況下，trk抑制劑在微膠包囊和配制之前混懸于溶劑中。然后如實(shí)施例3所述，將含有活性成分的溶液或混懸液與多種聚合物合并，從而微囊化3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微囊化有助于提供具有延長(zhǎng)的效果的制劑，至多且持續(xù)3個(gè)月，且有助于在患者中提供持續(xù)的治療效果。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的藥物制劑包含藥用稀釋劑、藥用助懸劑和藥用緩沖劑。在本發(fā)明的藥物制劑的某些實(shí)施方案中，所述稀釋劑為山梨糖醇，所述助懸劑為聚維酮，且所述緩沖劑為磷酸。本發(fā)明還涉及延長(zhǎng)釋放藥物制劑，其包含負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。在這些延長(zhǎng)釋放制劑中，所述trk抑制劑可為3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺或所述化合物的一水合物形式。所述載藥微球可進(jìn)一步包含聚合物。在包含聚合物的負(fù)載trk抑制劑的微球的具體實(shí)施方案中，所述聚合物選自聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)及聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)兩者的組合。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，延長(zhǎng)釋放制劑中使用的聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度(inherentviscosity)。在另一實(shí)施方案中，聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在包含聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)兩者的延長(zhǎng)釋放制劑中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有度0.16-0.24dl/g的比濃對(duì)數(shù)粘且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。且在另一實(shí)施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，包含負(fù)載trk抑制劑的微球的延長(zhǎng)釋放藥物制劑包含9:1比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。在這些延長(zhǎng)釋放制劑中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在另一實(shí)施方案中，包含負(fù)載trk抑制劑的微球的延長(zhǎng)釋放藥物制劑包含9.5:0.5比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。在這些制劑中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在包含負(fù)載trk抑制劑的微球的延長(zhǎng)釋放藥物制劑中，所述微球負(fù)載有1％w/w至99％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述微球負(fù)載有12％w/w至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在另一實(shí)施方案中，所述微球負(fù)載有12％w/w至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在更具體的實(shí)施方案中，所述微球負(fù)載有12％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、25％w/w、30％w/w、40％w/w或甚至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。本發(fā)明還涉及通過(guò)溶劑萃取和通過(guò)噴霧干燥制備負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法。本發(fā)明的一種溶劑萃取方法涉及由3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的溶液形成負(fù)載trk抑制劑的微球。該方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有機(jī)溶劑以形成藥物溶液；b.添加聚合物至藥物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液混合至水溶液中以形成乳液；d.添加去離子水至乳液；e.通過(guò)溶劑萃取從乳液中形成微球；和d.使用表面活性劑溶液篩分所得微球。在該方法中，所述有機(jī)溶劑可包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。該方法中的聚合物可為聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的組合。該方法中的水溶液可為聚乙烯醇在水中的溶液。該方法中的表面活性劑溶液可為泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。本發(fā)明的另一溶劑萃取方法涉及由3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混懸液形成負(fù)載trk抑制劑的微球。該方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有機(jī)溶劑以形成藥物混懸液；b.添加聚合物至藥物混懸液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液與水溶液混合以形成乳液；d.添加去離子水至乳液；e.通過(guò)溶劑萃取從乳液中形成微球；和f.使用表面活性劑溶液篩分所得微球。在該方法中，所述有機(jī)溶劑可包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿，或(vii)乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿。該方法中的聚合物可為聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的組合。該方法中的水溶液可為聚乙烯醇在水中的溶液。該方法中的表面活性劑溶液可為泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。在另一方面，本發(fā)明涉及通過(guò)噴霧干燥由負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的溶液形成負(fù)載trk抑制劑的微球的方法。該方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有機(jī)溶劑以形成藥物溶液；b.添加聚合物至藥物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液通過(guò)噴霧器泵入干燥器以形成球狀顆粒。在該方法中，所述有機(jī)溶劑可包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。該方法中的聚合物可為聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的組合。該方法的附加參數(shù)涉及噴霧器的噴霧速率和霧化氮?dú)饬魉佟Ｋ鰢婌F速率可為0.7ml/min；所述霧化氮?dú)饬魉倏蔀?l/min。干燥器中各點(diǎn)處的溫度也是可被控制以影響所得微球大小的因素。在該方法中，所述干燥器具有50℃的入口溫度、40-45℃的腔室溫度和20-30℃的排氣溫度。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述腔室溫度為40-43℃；更具體地，所述腔室溫度為41-43℃。在另一實(shí)施方案中，所述排氣溫度為22-28℃。在另一方面，本發(fā)明涉及通過(guò)噴霧干燥由負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的混懸液形成負(fù)載trk抑制劑的微球的方法。該方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有機(jī)溶劑以形成藥物混懸液；b.添加聚合物至藥物混懸液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液通過(guò)噴霧器泵入干燥器以形成球狀顆粒。在該方法中，所述有機(jī)溶劑可包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿，或(vii)乙酸乙酯,二氯甲烷和氯仿。該方法中的聚合物可為聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)，或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的組合。該方法的附加參數(shù)涉及噴霧器的噴霧速率和霧化氮?dú)饬魉?。所述噴霧速率可為0.7ml/min；所述霧化氮?dú)饬魉倏蔀?l/min。干燥器中各點(diǎn)處的溫度也是可被控制以影響所得微球大小的因素。在該方法中，所述干燥器具有50℃的入口溫度，40-45℃的腔室溫度和20-30℃的排氣溫度。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述腔室溫度為40-43℃；更具體地，所述腔室溫度為41-43℃。在另一實(shí)施方案中，所述排氣溫度為22-28℃。以下非限制性實(shí)施例示例性說(shuō)明本發(fā)明的各種實(shí)施方案，包括制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式、含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的藥物制劑、3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延長(zhǎng)釋放藥物制劑的方法以及制備這些延長(zhǎng)釋放制劑的方法。實(shí)施例實(shí)施例1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式實(shí)施例1-1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的合成向3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)苯基)甲胺(2.00g,7.32mmol)和5-溴-2-氯-3-硝基吡啶(1.66g,6.97mmol)于乙腈(50ml)中的經(jīng)攪拌溶液中添加n,n-二異丙基乙基胺(1.13g,8.71mmol)。將所得混合物加熱至回流并攪拌。64h后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用水稀釋。用二氯甲烷萃取混合物兩次。將合并的有機(jī)相以硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到3.34g(>100％)5-溴-n-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)-3-硝基吡啶-2-胺，其為黃棕色固體。向攪拌的5-溴-n-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)-3-硝基吡啶-2-胺于四氫呋喃(40ml)、乙醇(40ml)和水(40ml)中的溶液中添加亞硫酸氫鈉(6.09g,34.99mmol)。將所得混合物加熱至回流并攪拌。4h后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用水稀釋。用二氯甲烷萃取黃色混合物三次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并濃縮，得到3.10g黃棕色固體。進(jìn)行色譜純化(combi-flash40gsio2gold柱,1-2.5％甲醇/二氯甲烷)，得到1.28g(51％)5-溴-n2-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)吡啶-2,3-二胺，其為黃色固體。向經(jīng)攪拌的5-溴-n2-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)吡啶-2,3-二胺(0.850g,1.91mmol)于二氯甲烷(30ml)和甲醇(30ml)中的溶液中添加溴化氰(5.0m于乙腈中,573μl,2.87mmol)。將所得溶液在室溫?cái)嚢琛?4h后，添加第二等份的溴化氰溶液(600μl)并繼續(xù)攪拌。48h后，添加第三等份的溴化氰溶液(600μl)并繼續(xù)攪拌?？傆?jì)72h后，濃縮反應(yīng)混合物，并將殘余物溶于二氯甲烷。將溶液用1n氫氧化鈉溶液洗滌，以硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到1.17g棕色固體。進(jìn)行色譜純化(combi-flash,40gsio2gold柱,1-10％2m氨/甲醇/二氯甲烷)，得到0.28g(32％)6-溴-3-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其為棕色固體。向經(jīng)攪拌的6-溴-3-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基芐基氧基)芐基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(0.25g,0.53mmol)于1,4-二噁烷(10ml)和水(4ml)中的溶液中添加1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.14g,0.66mmol)、磷酸鉀(0.39g,1.84mmol)、三環(huán)己基膦(0.015g,0.052mmol)、乙酸鈀(ii)(0.005g,0.026mmol)。將反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至125℃。15min后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用水稀釋。用乙酸乙酯萃取混合物兩次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，以硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到0.36g，綠棕色固體。進(jìn)行色譜純化(combi-flash,12gsio2gold柱,1-10％2m氨/甲醇/二氯甲烷)，得到0.10g(41％)產(chǎn)物，其為淺綠色固體。將3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺添加至丙酮(2ml)和水(0.1ml)的混合物中。將混懸液在室溫通過(guò)磁力攪拌棒攪拌過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集固體并在空氣中干燥。通過(guò)質(zhì)子nmr證實(shí)結(jié)構(gòu)。差示掃描量熱法(dsc)熱解曲線(xiàn)在76.72、160.13和195.78℃展現(xiàn)三個(gè)熱事件，熱重量分析(tga)熱解曲線(xiàn)顯示自25至100℃的3.7％重量損失，x射線(xiàn)粉末衍射分析(xrpd)顯示使用cukα測(cè)量的在3.6、7.1、8.9、10.4、10.7、12.4、12.7和14.32θ峰的獨(dú)特峰(準(zhǔn)確度±0.2°)。實(shí)施例1-2：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的結(jié)晶結(jié)構(gòu)的鑒定還解析了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。自丙酮/水中重結(jié)晶3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的晶體。當(dāng)將大小為0.20*0.08*0.03mm的晶體置于mitegenmicromount的頂端時(shí)，其符合合適的衍射框。在bruker/axs三圓衍射儀上收集x射線(xiàn)衍射數(shù)據(jù)，所述衍射儀裝配有smartapex區(qū)域探測(cè)器(area-detector)、低溫裝置(lt2型)和銅-k微焦點(diǎn)發(fā)生器，其在45kv/650μa和具有約250μm圖像焦點(diǎn)直徑的聚焦光束montel多層光學(xué)器件操作(wiesmannetal.,2007)。使用程序包smartv5.628(brukeraxs,2001)收集數(shù)據(jù)，并使用程序saint+release6.45(brukeraxs,2003)進(jìn)行處理。該分析產(chǎn)生2459次反射(0<h<24,-4<k<0,-19<l<19)，其中全部2459次反射均是獨(dú)特的(rint＝n.a.,rσ＝0.1583)。使用1405次反射進(jìn)行晶胞參數(shù)的精修。應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)吸收校正并使用apex2套件的“結(jié)構(gòu)-解析(structure-solution)”模塊解析相位問(wèn)題。使用apex2套件的xl模塊(brukeraxs,2011)，通過(guò)最小二乘法((fo2–fc2)2的最小化)來(lái)精修結(jié)構(gòu)。計(jì)算所有氫原子的位置，s擬合優(yōu)度＝1.085，r所有數(shù)據(jù)＝0.1329(1614次反射的robs.數(shù)據(jù)＝0.0920，其中|fobs|>4σ,wr2所有數(shù)據(jù)＝0.2710,wr2觀測(cè)數(shù)據(jù)＝0.2377)。差示圖中的最大未分配峰對(duì)應(yīng)于-0.348vs+3.86個(gè)電子/c-c鍵的平均估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(e.s.d.)為o-c鍵的平均估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為且n-c鍵的平均估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為平均e.s.d.c-c-c鍵角的平均估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7且c-c-c-c扭轉(zhuǎn)角的平均估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.004°。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的結(jié)晶結(jié)構(gòu)示于圖3。圖4顯示由單晶結(jié)構(gòu)計(jì)算出的實(shí)驗(yàn)粉末圖的疊加。強(qiáng)的匹配度表明，單晶結(jié)構(gòu)表示散裝材料。實(shí)施例2：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混懸液制劑開(kāi)發(fā)了trk抑制劑的藥物制劑的微晶混懸液，其中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式為活性成分。將這些制劑開(kāi)發(fā)成不溶性3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺顆粒的混懸液以使得所述trk抑制劑隨時(shí)間持續(xù)遞送至體內(nèi)。該方法依賴(lài)于活性成分的差溶解度和用于控制釋放持續(xù)時(shí)間的劑量；其還顯示3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺約1個(gè)月的體內(nèi)持續(xù)遞送。實(shí)施例2-1：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物注射用微晶混懸液制備包含每毫升溶液20mg3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的藥物制劑。20mg/ml微晶混懸液的組合物提供于下表1中。表1：20mg/ml微晶混懸液制劑應(yīng)用10％的過(guò)量填裝(overfilling)實(shí)施例2-2：制備20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混懸液制劑的方法根據(jù)以下步驟制備3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的20mg/ml溶液：1.通過(guò)以下方式制備磷酸鹽緩沖液10mmph7.4：組合適量注射用水(wfi)和磷酸二氫鈉，攪拌至完全溶解，然后用氫氧化鈉1n溶液調(diào)節(jié)ph至7.4(±0.2)。2.通過(guò)以下方式制備媒介物：組合適量山梨糖醇和聚維酮k17熱原(pyrogen)，添加磷酸鹽緩沖液10mmph7.4并攪拌直至完全溶解。3.然后通過(guò)0.22μmpvdf[聚偏二氟乙烯]親水型過(guò)濾器過(guò)濾所得媒介物。4.通過(guò)以下方式制備濃縮的混懸液：使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式與媒介物大致混合，以獲得30mg/ml濃縮的混懸液。5.在75μm不銹鋼篩上過(guò)濾保持在攪拌下的濃縮的混懸液。6.預(yù)過(guò)濾的混懸液仍保持?jǐn)嚢璨⒃?0μm不銹鋼篩上過(guò)濾，以獲得濃縮物混懸液。7.用經(jīng)過(guò)濾的媒介物濃縮混懸液調(diào)節(jié)，以獲得20mg/ml混懸液。8.將最終的混懸液填充至無(wú)菌和去熱原的無(wú)色i型玻璃小瓶中至3.6ml填充體積。用無(wú)菌和去熱原的經(jīng)etfe包覆的溴丁基瓶塞封閉小瓶。將瓶塞用無(wú)菌鋁蓋和無(wú)菌白色塑料蓋壓接在小瓶上。9.將填充的小瓶在高壓滅菌設(shè)備中滅菌。實(shí)施例2-3：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混懸液制劑的臨床劑量將3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的20mg/ml微晶混懸液進(jìn)一步修飾，以獲得呈成品藥品構(gòu)型的將要向患者給予的劑量和體積。必要時(shí)由20mg/ml微晶混懸液重構(gòu)目標(biāo)劑量。不同的劑量和體積格式的總結(jié)在表2中提供。表2：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混懸液的臨床處方重構(gòu)不需要達(dá)到所需的最終濃度。2x2.7ml小瓶實(shí)施例3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺延長(zhǎng)釋放制劑在一些情況下，期望延長(zhǎng)藥物釋放的持續(xù)時(shí)間，例如延長(zhǎng)至大于3個(gè)月的暴露時(shí)間。因此，使用化合物的無(wú)水物或一水合物形式產(chǎn)生和配制的trk抑制劑3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺作為活性成分的延長(zhǎng)釋放制劑。所述延長(zhǎng)釋放制劑方法使用聚(d,l-丙交酯)(pla)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)(plga)聚合物或pla-plga聚合物的組合，以包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(活性藥物成分[api]或藥物物質(zhì)[ds])，從而產(chǎn)生可注射微囊的藥品[dp]溶液。這些制劑可提供持續(xù)或大于3個(gè)月的藥物暴露于體內(nèi)。該實(shí)施例的延長(zhǎng)釋放制劑的制備中使用的不同聚合物的總結(jié)在表3中提供。表1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物延長(zhǎng)釋放制劑中使用的聚合物*用ubbelhode大小0c玻璃毛細(xì)管粘度計(jì)以0.1％w/v于chcl3中在25℃測(cè)量固有粘度。來(lái)源：http://www.resomer.com/product/biodegradable-polymers/en/pharma-polymers/products/pages/bioresorbable-polymer.aspx含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺作為活性成分的trk抑制劑的延長(zhǎng)釋放藥物制劑使用生物可消化的聚合物，即聚(d,l-丙交酯)和/或聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)，以改變活性成分從藥物顆粒溶解至聚合物水解的釋放的控制。使用聚合物與活性成分載量的適當(dāng)組合，可控制藥物釋放速率以導(dǎo)致3個(gè)月或更長(zhǎng)的暴露。plga/pla聚合物和3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的具體組合以延長(zhǎng)藥物釋放的持續(xù)時(shí)間大于3個(gè)月的方式組合；這些制劑在該實(shí)施例中進(jìn)一步討論。實(shí)施例3-1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺負(fù)載對(duì)體外釋放分布的作用通過(guò)溶劑萃取制備包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的藥物組合物。用于制備各批次的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和pla/pgla聚合物物料的量示于表4。檢查了各種制劑的體外釋放(ivr)動(dòng)力學(xué)。表4：微球的組合物–12％api/9:1r202h:752h、16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg伴隨輕微加熱(約30分鐘)，將3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于2ml9:1二氯甲烷(dcm):甲醇(meoh)。歷經(jīng)30分鐘添加聚合物并溶解。另外，將39ml冷的無(wú)菌過(guò)濾的聚乙烯胺(pva)溶液(5％w/v于水中)置于裝配有7.9x38.1mmteflon磁力攪拌棒的250ml燒杯中。將燒杯置于在ikarct基本攪拌平臺(tái)設(shè)置(basicstirplateset)(500rpm)上的冰浴中。使用連接至5cc玻璃hamilton注射器的pallacrodisc0.2μmptfe注射器過(guò)濾器，將聚合物/藥物溶液過(guò)濾至pva溶液中。添加后，聚合物/藥物溶液形成乳狀液。1分鐘后，添加160ml冷去離子水。5分鐘后，攪拌速度降至300rpm。歷經(jīng)3小時(shí)通過(guò)溶劑萃取法形成微球。通過(guò)75μm和38μm疊篩使用冷的0.1％kolliphorp407于去離子水中篩選微球；收集38-75μm級(jí)分并除去多余的淋洗液。將微球在-80℃冷凍并凍干。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺自微球制劑中釋放的ivr動(dòng)力學(xué)通過(guò)制備與其模擬膝蓋的關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境的微球于0.2％透明質(zhì)酸+0.2％kolliphorp407中的2％(w/v)含水混懸液確定。在一式三份中，將一定體積含有500μg3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的理論載量的混懸液吸入含有0.5％十二烷基硫酸鈉/pbs,ph7.4釋放介質(zhì)的單獨(dú)的50ml玻璃離心管中。將管置于37℃互動(dòng)搖床培養(yǎng)箱側(cè)。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，允許微球沉降，取樣1ml釋放介質(zhì)并置換。為了確定ivr樣品中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的實(shí)際總質(zhì)量，將用于釋放研究的相同體積的混懸液取樣(一式三份)并添加10ml二甲基亞砜。將樣品進(jìn)行超聲處理，輕輕加熱并在室溫置于搖臂上以溶解。使用hplc-uv分析這些樣品的總3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺含量。將累積ivr分布對(duì)實(shí)際3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺載量相對(duì)于時(shí)間的百分?jǐn)?shù)作圖。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺包囊效率通過(guò)將實(shí)際藥物載量除以理論載量來(lái)確定。為了確定實(shí)際載量，將精確稱(chēng)重的負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球溶于二甲基亞砜中，并通過(guò)hplc-uv測(cè)量3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺濃度。ivr分布顯示，高于16％(w/w)的藥物載量水平顯示突然釋放(burstrelease)(圖5)。通過(guò)差示掃描量熱法(dsc)和掃描電子顯微鏡(sem)鑒定了該突然釋放的原因。dsc分析表明，高于16％(w/w)的藥物載量水平顯示在微球中藥物結(jié)晶，如通過(guò)在130-150℃的熔融吸熱所證明(圖6)。藥物結(jié)晶也通過(guò)sem顯示，其中高于16％的藥物載量水平顯示微球表面上的藥物晶體(圖7)。錯(cuò)誤！未找到引用源。說(shuō)明20％微球顯示130-150℃之間的熔化吸熱，確證表面藥物晶體的存在。圖7和圖8顯示負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球在1500x的sem。圖7，16％載藥微球，顯示沒(méi)有藥物晶體(藥物為無(wú)定形的)；圖8，20％載藥微球，顯示表面藥物晶體。使用相關(guān)的微球組合物還說(shuō)明了藥物結(jié)晶對(duì)ivr的影響。圖9顯示由用r202h聚合物制備的微球的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的ivr。圖10顯示由用9.5:0.5比例的r202h和rg752h聚合物制備的微球的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的ivr。在這些實(shí)施例中，高于16％(w/w)的藥物載量水平顯示突然釋放；藥物突然釋放程度與藥物載量水平直接相關(guān)。實(shí)施例3-2：聚-丙交酯和聚-丙交酯-共-乙交酯聚合物共混物對(duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放分布的作用實(shí)施例3-2-1：16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:752h微球制備包含于r202h、9.0:0.5r202h:rg752h和9:1r202h:752h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r202h、9.0:0.5r202h:rg502h和9:1r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的藥物組合物，以評(píng)估不同聚合物共混物對(duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放動(dòng)力學(xué)的影響。表5示出用于制備每批的藥物和聚合物質(zhì)量。用于制備這些制劑的方法描述于實(shí)施例3-1。表5：含有聚-丙交酯和聚-丙交酯-共-乙交酯聚合物共混物(16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:rg752h)的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺微球制劑通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。制劑4、5和6的包囊效率分別為96.1±2.6％、87.8±6.3％和77.7±8.6％。使用于r202h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備的微球展現(xiàn)出雙相釋放速率，具有0-70天的緩慢初始釋放速率和隨后70-110天的更快二次釋放速率(圖11)。將更親水的聚合物rg752h(75:25plga)混合至pla微球制劑增加了初始釋放速率。該plga聚合物允許更快的水吸收至微球中，導(dǎo)致速率增加。以9:1r202h:rg752h的比率，初始釋放與二次釋放速率相匹配，產(chǎn)生歷時(shí)3個(gè)月的假零級(jí)釋放分布(圖11)。實(shí)施例3-2-2：16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h微球制備含有于r202h、9.0:0.5r202h:rg502h和9:1r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的藥物組合物，以評(píng)估不同聚合物共混物對(duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放動(dòng)力學(xué)的影響。表6示出用于制備各批次的藥物和聚合物質(zhì)量。用于制備這些制劑的方法述于實(shí)施例3-1。表6：微球的組合物–16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。制劑7、8和9的包囊效率分別為96.1±2.6％、91.7±3.3％和94.2±2.5％。使用于r202h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備的微球展現(xiàn)出雙相釋放速率，具有0-70天的緩慢初始釋放速率和隨后70-110天的更快二次釋放速率(圖12)。將更親水的50:50plga聚合物(rg752h)混合至pla微球制劑增加了初始釋放速率。rg752h允許更快的水吸收至微球中，導(dǎo)致該速率增加。以9.5:0.5r202h:rg502h的比率，初始釋放與二次釋放速率相匹配，產(chǎn)生歷時(shí)6個(gè)月的假零級(jí)釋放分布(圖12)。實(shí)施例3-3：顯示歷時(shí)180天的零級(jí)體外釋放動(dòng)力學(xué)的微球制劑的制備和表征制備包含于9:1r203h:rg752h中的15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于9.0:0.5r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的藥物組合物并分析體內(nèi)釋放動(dòng)力學(xué)。表7示出用于制備各批次的藥物和聚合物質(zhì)量。表7：微球的組合物–15％api/9:1r203h:rg502h和16％api/9.5:0.5r202h:rg502h)通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。制劑10和11的包囊效率分別為89.7±2.1％和91.7±3.3％。使用于9:1比率的r203h:752h聚合物中的15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于9.5:0.5比率的r202h:rg502h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備的微球展現(xiàn)出歷時(shí)6個(gè)月的假零級(jí)釋放分布(圖13)。實(shí)施例3-4：制備中的共溶劑系統(tǒng)對(duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放分布的作用實(shí)施例3-4-1：如于9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9:5dcm:ba和9:1dcm:ba中制備的16％api/9:1r202h:rg752h使用具有不同比率的溶劑二氯甲烷(dcm)、甲醇(meoh)和苯甲醇(ba)的各種共溶劑溶液制備包含于9:1r202h:rg752h中的負(fù)載16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的藥物組合物。所用的比率為9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9.5:0.5dcm:ba和9:1dcm:ba。對(duì)于用于制備各批次的藥物、聚合物和共溶劑，參見(jiàn)表8。用于制備這些制劑的方法述于實(shí)施例3-1。表8：用共溶劑系統(tǒng)制備的微球的組合物–16％api/9:1r203h:rg752h通過(guò)溶劑萃取制備(各種共溶劑系統(tǒng))gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。制劑12、13、14和15的包囊效率分別為77.7±8.6％、94.9±2.0％、90.5±2.6％和94.4±1.5％。由于其增強(qiáng)溶解3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的能力，選擇苯甲醇摻入共溶劑系統(tǒng)中。圖14和圖15顯示苯甲醇可用作含有二氯甲烷或二氯甲烷和甲醇的共溶劑的部分，以產(chǎn)生微球而不影響釋放速率。這可用于減少微球產(chǎn)生過(guò)程中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺可能的重結(jié)晶。實(shí)施例3-4-2：dcm:ba用于提高3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺載量的用途使用不同體積的二氯甲烷(dcm)和苯甲醇(ba)制備藥物組合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的16％和25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r202h中的30％和40％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203h中的25％、30％、40％和50％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。對(duì)于用于制備各批次的藥物和聚合物質(zhì)量及溶劑體積，參見(jiàn)表9。用于制備這些制劑的方法述于實(shí)施例3-1。表9：用dcm:ba共溶劑系統(tǒng)制備的微球的組合物–16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。用不同體積二氯甲烷(dcm)和苯甲醇(ba)產(chǎn)生的制劑的包囊效率為：由于其增強(qiáng)溶解3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的能力，選擇苯甲醇摻入共溶劑系統(tǒng)中。圖10顯示苯甲醇可用作含有二氯甲烷的共溶劑的部分，以產(chǎn)生具有高至載量50％(w/w)的微球。一些所示釋放分布具有應(yīng)當(dāng)達(dá)到3-6月持續(xù)時(shí)間的最小突然釋放和動(dòng)力學(xué)。方法中使用的苯甲醇的體積影響3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的突然釋放。減少溶劑系統(tǒng)中苯甲醇的量，但仍保持api即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在聚合物溶液中的溶解度，降低突然釋放效應(yīng)(bursteffect)。通過(guò)減少向患者給予的聚合物的量，增加api載量提供了益處。這預(yù)期提高植入物的生物相容性并減少重復(fù)給予后聚合物積聚的可能性。此外，增加的api載量應(yīng)轉(zhuǎn)化成較低的每單位制造成本。實(shí)施例3-5：微?；鞈乙何⒛一椒▽?duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放分布的作用用3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式制備藥物組合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(一水合物形式)、于9:1r203h:rg752h中的30％和40％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺、于r202h中的25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺、于r202s中的30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203s中的30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。對(duì)于用于制備各批次的藥物和聚合物質(zhì)量，參見(jiàn)表10。使用來(lái)自生產(chǎn)批次的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備批次27、28和29，而使用3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制備批次30、31、32、33、34和35，其使用微流化方法進(jìn)行微粉化以確保粒徑小于10μm直徑。該實(shí)施例比較了當(dāng)聚合物分散在具有或不具有乙酸乙酯(ea)的聚乙烯醇(pva)溶液中獲得的微球中的差異，以及api載量、聚合物組成和不同聚合物溶液濃度(通過(guò)改變ea體積)。表10：用微?；鞈乙何⒛一椒ㄖ苽涞奈⑶虻慕M合物–16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h通過(guò)溶劑萃取制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mgsem分析顯示，通過(guò)包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混懸液產(chǎn)生的微球由于嵌入表面的藥物晶體的存在而是球形的，具有粗糙的表面紋理(圖16)。包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。批號(hào)30、31、32、33、34和35的包囊效率分別為103.3±3.8％、101.6±5.3％、94.7±4.0％、97.1±0.2％、35.6±0.8％和62.5±3.0％。沒(méi)有在批次27、28或29上進(jìn)行包囊效率。ivr分布顯示突然釋放范圍為25％至47％，接著是4天后的無(wú)釋放(圖17)。對(duì)批次進(jìn)行評(píng)估長(zhǎng)達(dá)21天。實(shí)施例3-6：包囊方法對(duì)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的體外釋放分布的作用使用9:1比率的二氯甲烷(dcm):苯甲醇(ba)制備藥物組合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的16％和25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203h中的25％和30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。對(duì)于用于制備各批次的藥物和聚合物質(zhì)量，參見(jiàn)表11。用于制備批次23的方法述于實(shí)施例3-1,批次2。通過(guò)伴隨輕微超聲處理使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于5.016g9:1dcm/meoh制備批次24。然后添加兩種聚合物并溶解。表11：通過(guò)溶劑萃取和噴霧干燥制備的微球的組合物–16％api/9:1r202h:rg752h和無(wú)api/9:1r202h:rg752hgz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg(對(duì)于批次23)和1254mg(對(duì)于批次24)噴霧干燥使用裝配有具有0.4mm開(kāi)口的流體噴嘴的procept,4m8裝置進(jìn)行。噴霧干燥條件和參數(shù)如下：sem分析顯示，溶劑萃取微球是球形的，具有光滑的表面紋理，而噴霧干燥微球是球形的，具有一些表面紋理(圖18和圖19)。包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。溶劑萃取批次36和噴霧干燥批次37和38的包囊效率分別為107.4±11.6％、91.4±4.3％和92.6±3.6％。兩種微囊化方法產(chǎn)生具有近零級(jí)釋放分布的微球。圖18和圖19顯示負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球在1000x的sem。ivr分布顯示不同的釋放速率(圖20)；噴霧干燥制劑實(shí)現(xiàn)3-6個(gè)月遞送的期望持續(xù)時(shí)間。實(shí)施例3-7：1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407對(duì)16％(w/w)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的噴霧干燥微球的體外釋放分布的作用進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)以確定添加親水性添加劑是否可用于加速來(lái)自pla/pga微球的gz389988的體外釋放速率。在該實(shí)驗(yàn)中，將微球(無(wú)添加劑)與用1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407制備的微球進(jìn)行比較。表12詳細(xì)說(shuō)明了用于制備每批的藥物和聚合物質(zhì)量。表12：用1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407制備的微球的組合物–16％api/1:1r202h:r203h/無(wú)添加劑、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407通過(guò)噴霧干燥制備gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺噴霧干燥使用裝配有具有0.4mm開(kāi)口的雙流體噴嘴的procept,4m8裝置進(jìn)行。噴霧干燥條件和參數(shù)如下：批號(hào)404142gz389988載量(％,w/w)161616plga溶液濃度(％,w/v):22.522.522.5噴霧速率(ml/min):0.70.70.7空氣流速(l/min):0.350.350.35霧化氮?dú)饬魉?l/min):444冷卻器溫度(℃):-4-4-4入口溫度(℃):505050腔室溫度(℃):404040排氣溫度(℃):292929預(yù)旋流器壓力(mbar):27-3027-3027-30sem分析顯示，用或不用親水性添加劑制備的噴霧干燥微球顯示類(lèi)似的大小分布和表面紋理；所有噴霧干燥微球均是球形的，具有一些表面紋理(圖21、圖22和圖23)。包囊效率和ivr分析如實(shí)施例3-1所述進(jìn)行。噴霧干燥批號(hào)40、41和42的包囊效率分別為102.0±16.3％、101.7±16.3％和100.5±16.1％。不用添加劑制備的微球顯示gz389988的緩慢的近零級(jí)釋放，其中歷經(jīng)35天釋放約20％的活性化合物(圖24)。1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407的添加增加了釋放速率；歷經(jīng)35天釋放約42％的活性化合物。該實(shí)施例說(shuō)明，摻入親水性賦形劑可加速gz389988從pla/pga微球中的體外釋放速率。實(shí)施例4：體內(nèi)研究實(shí)施例4-1：關(guān)節(jié)內(nèi)注射至大鼠膝關(guān)節(jié)后負(fù)載[14c]-3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的體內(nèi)表現(xiàn)選擇兩種制劑來(lái)比較體外釋放動(dòng)力學(xué)與大鼠膝關(guān)節(jié)中的體內(nèi)藥物持久性。制劑示于表13。使用實(shí)施例3-1中所述的方法進(jìn)行體外釋放測(cè)試。使用[14c]-3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和未標(biāo)記的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺進(jìn)行體內(nèi)藥物持久性測(cè)試；兩種藥物形式在微囊化過(guò)程中共溶解，以確保微球中藥物分布均勻。向每只大鼠關(guān)節(jié)給予的放射性活度(radioactivity)總量為約1.2mbq。大鼠膝關(guān)節(jié)中藥物保留的評(píng)價(jià)如下進(jìn)行：在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死2-3只大鼠，冷凍研磨膝關(guān)節(jié)并從研磨的組織提取3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)進(jìn)行定量。通過(guò)將每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的放射性計(jì)數(shù)除以處理后0.1小時(shí)處死的大鼠的放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算關(guān)節(jié)中回收的放射性活度的量。將大鼠血液中的放射性藥物的濃度(以neq/g表示)隨時(shí)間作圖并與化合物的已知ic50值進(jìn)行比較。表13：體內(nèi)測(cè)試的微球的組合物–16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752hgz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*總聚合物量＝260mg批次40和41的ivr分布分別顯示歷時(shí)近3-4個(gè)月和5-6個(gè)月的近零級(jí)段釋放(圖25)。關(guān)節(jié)內(nèi)注射至大鼠膝關(guān)節(jié)后，批次43和44顯示超過(guò)5至6個(gè)月的藥物釋放；批次43顯示5個(gè)月后關(guān)節(jié)中12％的保留且批次44顯示6個(gè)月后30％的藥物保留(圖26)。相比于可能由于微球在滑膜中的定位而導(dǎo)致的ivr率，體內(nèi)藥物釋放率略低。圖27顯示血液中的藥物濃度-時(shí)間分布。關(guān)節(jié)內(nèi)給予負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球后，系統(tǒng)隔室中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的濃度在第一周內(nèi)略高于ec50值(基于細(xì)胞)，但是然后在實(shí)驗(yàn)期間(5-6個(gè)月)下降到低于ec50值。該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球以低系統(tǒng)性(即亞治療性)藥物暴露提供持續(xù)的局部藥物遞送至膝關(guān)節(jié)。實(shí)施例4-2：評(píng)估單一關(guān)節(jié)內(nèi)注射三種負(fù)載3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球緩釋微球制劑后gz389988的藥物動(dòng)力學(xué)選擇三種制劑來(lái)比較大鼠膝關(guān)節(jié)中關(guān)節(jié)內(nèi)注射后系統(tǒng)隔室內(nèi)的體外和體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)。制劑示于表14。使用實(shí)施例3-1中所述的方法進(jìn)行體外釋放測(cè)試。通過(guò)用給予微球制劑注射3只雄性wistar大鼠(0.1或1mg的gz389988至膝關(guān)節(jié))來(lái)測(cè)量體內(nèi)表現(xiàn)。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)頸靜脈插管收集血液樣品(約0.25ml)并置于含有k2edta作為抗凝劑的冷凍管中，混合，并保持在冰上直至離心。將樣品在4℃的溫度收集1小時(shí)內(nèi)，在3,000×g離心5至10分鐘。將血液樣品離心至聚丙烯管后，收集血漿。將血漿樣品在干冰上冷凍，并在lc-ms/ms分析前在-60至-80℃冷凍保存。將gz389988在大鼠血漿中的濃度(以ng/ml表示)對(duì)時(shí)間(總共28天)作圖。表14：評(píng)估gz389988的藥物動(dòng)力學(xué)中測(cè)試的微球的組成和劑量gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制劑a和制劑b的ivr分布顯示緩釋?zhuān)瑲v經(jīng)28天約有10％的活性化合物釋放。制劑c在最初5天顯示稍高的初始釋放，接著在剩余的23天顯示降低的釋放率；歷經(jīng)28天約22％的活性化合物釋放。關(guān)節(jié)內(nèi)給予至大鼠膝關(guān)節(jié)后，制劑a和b歷經(jīng)28天顯示出類(lèi)似的血漿-藥物暴露分布；兩種制劑均顯示出在實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間內(nèi)具有穩(wěn)態(tài)血漿水平的1-1.5小時(shí)的tmax值(對(duì)于0.1和1.0mg劑量分別為0.08和0.8ng/ml)。與制劑a和b相比，制劑c在實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間內(nèi)顯示出更高的cmax值和更高的穩(wěn)態(tài)血漿水平(對(duì)于0.1和1.0mg劑量分別為1.2至12ng/ml)(圖29)。這些結(jié)果與ivr實(shí)驗(yàn)結(jié)果非常一致。實(shí)施例4-3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在具有膝蓋的疼痛性骨關(guān)節(jié)炎的患者中的安全性、耐受性和藥物動(dòng)力學(xué)的臨床研究在兩部分雙盲安慰劑對(duì)照臨床研究中，測(cè)試3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的安全性和功效，以評(píng)估單次逐步增加的關(guān)節(jié)內(nèi)劑量的安全性、耐受性和藥物動(dòng)力學(xué)，隨后評(píng)估具有膝蓋的疼痛性骨關(guān)節(jié)炎的患者中單次關(guān)節(jié)內(nèi)劑量的功效、安全性、耐受性和藥物動(dòng)力學(xué)。在第一部分研究中，膝蓋中單次關(guān)節(jié)內(nèi)注射各種劑量的根據(jù)上述實(shí)施例2制備的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混懸液，針對(duì)3ml和5ml的安慰劑劑量進(jìn)行測(cè)試。診斷為原發(fā)性膝蓋骨關(guān)節(jié)炎的成年男性和女性有資格參與研究。患者具有癥狀超過(guò)6個(gè)月并在與研究相關(guān)的任何手術(shù)之前提供書(shū)面知情同意書(shū)。在注射后12周，基于安全性和耐受性(不良事件、體檢、體重、體溫、臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試、血壓、心率、12導(dǎo)聯(lián)心電圖、局部耐受性)評(píng)價(jià)功效。還評(píng)價(jià)了藥物動(dòng)力學(xué)(血漿和(如果可能的話(huà))滑膜液中)和藥效學(xué)。在研究藥物或安慰劑給予后，患者被隨訪(fǎng)84±7天，并選擇繼續(xù)進(jìn)行長(zhǎng)期觀察性安全性研究而無(wú)需額外的研究藥物給予，以評(píng)估長(zhǎng)期安全性和療效。實(shí)施例5：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的多晶型現(xiàn)象研究為了鑒定3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在純?nèi)軇┘叭軇┖退氖芸鼗旌衔镏械木?，進(jìn)行了gz389988的多晶型現(xiàn)象研究。用作多晶型物的表征工具的技術(shù)包括x射線(xiàn)粉末衍射(xrpd)、高分辨率x射線(xiàn)粉末衍射(hr-xrpd)和單晶x射線(xiàn)衍射(xrscd)、熱重量分析(tga)與紅外光譜(ft-ir)或質(zhì)譜(ms)、水和溶劑的動(dòng)態(tài)蒸氣吸附(dvs)和光學(xué)顯微術(shù)(om)。這些技術(shù)在下文更詳細(xì)地描述。高分辨率x射線(xiàn)粉末衍射(hr-xrpd)在panalyticalx'pertprompd粉末衍射儀的環(huán)境條件下，使用偶聯(lián)有x'celerator檢測(cè)器的bragg-brentano(垂直θ-2θ配置)準(zhǔn)聚焦幾何圖形記錄高分辨率圖。使用密封的銅陽(yáng)極x射線(xiàn)管，在45kv和40ma水平運(yùn)行的。入射光束單色儀(johansson型：對(duì)稱(chēng)切割的彎曲鍺(111)晶體)產(chǎn)生純cukα1輻射對(duì)于每組實(shí)驗(yàn)，將產(chǎn)品的薄層沉積在用單晶硅晶片覆蓋的樣品架的表面上。通過(guò)系統(tǒng)消光根據(jù)si(510)結(jié)晶取向切割晶片，阻止硅的任何bragg反射?？捎玫慕嵌确秶鷱?延伸到50°2θ，其中步長(zhǎng)為0.017°2θ。使用每步100到2500秒的可變計(jì)數(shù)時(shí)間。x射線(xiàn)粉末衍射(xrpd)其他xrpd分析在siemens-bruckerd8advance粉末衍射儀上進(jìn)行，還使用bragg-brentano(垂直θ-θ配置)準(zhǔn)聚焦幾何形狀和anton-paarttk450溫度室。產(chǎn)品的薄層沉積在單晶硅晶片上，通過(guò)系統(tǒng)消光根據(jù)si(510)結(jié)晶取向切割，阻止晶片的任何bragg反射。使用在40kv和35ma水平運(yùn)行的密封銅陽(yáng)極x射線(xiàn)管。通常發(fā)射兩條線(xiàn)：cukα1和cukα2放置在檢測(cè)器和樣品之間的鎳β過(guò)濾器并沒(méi)有完全消除cukβ輻射，其仍然貢獻(xiàn)了檢測(cè)器(制造商的數(shù)據(jù))約1％的衍射光束。光束通過(guò)soller狹縫發(fā)送，以改善其平行度?？勺儼l(fā)散狹縫保持樣品面積的照度不變。準(zhǔn)直器限制管和樣品之間的擴(kuò)散。lynxeye線(xiàn)性檢測(cè)器完成了設(shè)置。它在2θ角度處有一個(gè)3.5°寬的檢測(cè)窗口。在以下條件記錄圖：在環(huán)境溫度，從2至40°2θ角度掃描。積分時(shí)間取決于實(shí)驗(yàn)條件。使用以2θ為計(jì)的每步0.1秒計(jì)數(shù)時(shí)間進(jìn)行進(jìn)化研究和大多數(shù)掃描。更長(zhǎng)的積分時(shí)間(至多5s)可能已被用于表征穩(wěn)定形式。x射線(xiàn)單晶衍射(xrscd，也稱(chēng)scxrd)在brukersmartapex單晶衍射儀上記錄xrscd數(shù)據(jù)。使用鉬iμs微聚焦x射線(xiàn)源，在50kv和0.6ma運(yùn)行，發(fā)射mo-kα輻射電荷耦合元件(ccd芯片：4k,62mm)面積檢測(cè)器位于6.0cm處。oxfordcryosystems氮?dú)獾蜏睾銣仄?cryostreamplus)允許在100k進(jìn)行xrscd實(shí)驗(yàn)。將晶體從paratonentm油滴安裝到低背景mylarmitegen環(huán)上。收集了一個(gè)完整的ewald反射球體(3個(gè)ω掃描，680幀，幀寬為0.3°)。累積時(shí)間取決于晶體。使用apex2(v2014.11-0)程序套件建立取向矩陣和單位晶胞。使用saint(v8.34a)程序進(jìn)行3d反射分布和所有反射的整合。sadabs(v2014/5)程序用于校正lorentz和極化效應(yīng)以及通過(guò)樣品的吸收。試驗(yàn)性空間群用xprep(v2014/2)程序確定。shelxtl(v2014/7)套件用于通過(guò)內(nèi)在定相方法解析結(jié)構(gòu)，并通過(guò)f2全矩陣最小二乘法精修解決方案。多晶型物鑒定和表征使用上述技術(shù)，鑒定3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的晶型。這些形式、使用輻射測(cè)量的xrpd2θ峰和形成條件示于下表15。表15：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基芐基)氧基)芐基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式一水合物形式1、無(wú)水物形式2和3的測(cè)量hr-xrpd圖以及倍半水合物形式4的模擬xrpd圖在圖30中繪制在一起。在混合溶劑乙醇/水(99/1)中將20mg/mlgz389988a形式一水合物的混懸液在80℃加熱1小時(shí)。然后過(guò)濾混懸液。接下來(lái)，將溶液在室溫保持過(guò)夜。一夜之后，觀察到晶體，隨后鑒定為對(duì)應(yīng)于乙醇溶劑化物形式(標(biāo)示為形式5)。通過(guò)乙醇和水的混合物(99/1)的緩慢蒸發(fā)獲得的晶體的物理性質(zhì)適于通過(guò)單晶x射線(xiàn)衍射進(jìn)行分析。在5x50x200μm3晶體上以100k進(jìn)行測(cè)量，累積時(shí)間為300s/幀。衍射圖證實(shí)了所分析顆粒的結(jié)晶度。圖31顯示了在室溫測(cè)量的乙醇溶劑化物粉末的hr-xrpd圖(底部)，與由在100k測(cè)量的xrscd數(shù)據(jù)模擬的xrpd圖(上部)相比。在丙酮/水的混合物(99/1)或純丙酮中制備20mg/mlgz389988a形式一水合物1(形式1)的混懸液，并在80℃加熱1小時(shí)以實(shí)現(xiàn)完全溶解。接下來(lái)，過(guò)濾混懸液。然后將溶液保持在室溫或5℃。一夜之后，裸眼可見(jiàn)晶體，隨后鑒定為對(duì)應(yīng)于丙酮溶劑化物形式(標(biāo)示為形式9)。通過(guò)丙酮和水的混合物(99/1)的緩慢蒸發(fā)獲得的晶體的物理性質(zhì)適于通過(guò)單晶xr衍射進(jìn)行分析。在100x200x2000μm3晶體上以100k進(jìn)行測(cè)量，累積時(shí)間為30s/幀。圖32展現(xiàn)了在室溫測(cè)量的丙酮溶劑化物粉末的xrpd圖(底部)，并由xrscd在100k模擬的圖(上部)。在另一實(shí)驗(yàn)中，在純丙酮中制備20mg/mlgz389988a形式一水合物1(形式1)的混懸液，并在80℃加熱1小時(shí)。接下來(lái)，過(guò)濾混懸液，然后直接冷卻至5℃并在該溫度儲(chǔ)存。一夜之后，裸眼可見(jiàn)晶體且類(lèi)似于針對(duì)丙酮溶劑化物1,形式9所獲得的那些。將其在研缽中懸浮研磨后，鑒定為對(duì)應(yīng)于另一種丙酮溶劑化物,形式10。圖33比較了兩種丙酮溶劑化物形式的xrpd，形式9(底部)和形式10(上部)。將20mg/mlgz389988a形式一水合物在乙腈(acn)中的混懸液在80℃加熱4小時(shí)。然后過(guò)濾混懸液。接下來(lái)，將溶液在40℃保持過(guò)夜，然后放置2小時(shí)，冷卻至室溫。一夜之后，在小瓶的底部形成晶體簇。乙腈(acn)溶劑化物形式(形式11)的hr-xrpd圖如圖34所報(bào)道。在丙酮/水和乙腈/水混合溶劑中形成的固體結(jié)晶相的鑒定50mggz389988a一水合物1補(bǔ)充有三種不同重量比的2ml溶劑(丙酮或乙腈)和去礦物質(zhì)水的混合物：50/50、80/20和95/5。用丙酮探測(cè)比率為99/1和98/2的其他混合物。在80℃2小時(shí)后，在標(biāo)稱(chēng)孔徑為0.45μm的ptfe注射器過(guò)濾器上過(guò)濾樣品，過(guò)濾后再次在80℃儲(chǔ)存15分鐘。然后將樣品在40℃放置冷卻過(guò)夜，然后在室溫再冷卻24小時(shí)。然后通過(guò)xrpd在用相應(yīng)溶劑飽和的腔中分析樣品。如果需要，將大晶體在小瓶中用刮刀粉碎成更細(xì)的粉末。然后將“濕”粉末的樣品盡可能平坦地沉積在樣品架上。這些分析的結(jié)果示于下表16。表16：丙酮/水和乙腈/水混合物中g(shù)z389988a的固體結(jié)晶相在本實(shí)施例中研究并示出了由一水合物1在乙醇、丙酮、乙腈及丙酮/水和乙腈/水混合物中的結(jié)晶的溶劑化物和水合物的形成。已經(jīng)鑒定了十種結(jié)晶相：●無(wú)水物相1(形式2)●無(wú)水物相2(形式3)●無(wú)水物相3(形式6/7)●一水合物1(形式1)●一水合物2(形式8)●倍半水合物(形式4)●乙醇溶劑化物(形式5)●丙酮溶劑化物1(形式9)●丙酮溶劑化物2(形式10)●乙腈溶劑化物(形式11)相應(yīng)的衍射圖在圖35中繪制在一起。從對(duì)乙醇、丙酮和乙腈以及溶劑混合物(丙酮/水和乙腈/水)的多晶型現(xiàn)象研究可得出若干結(jié)論。所有三種純?nèi)軇?dǎo)致形成固體結(jié)晶溶劑化物相。gz389988a在乙醇和乙腈中重結(jié)晶各自導(dǎo)致一種溶劑化物形式。從丙酮中重結(jié)晶已經(jīng)得到兩種溶劑化物形式。在重量比為98:2、97:3、95:5、80:20和50:50的丙酮/水混合溶劑體系中形成的晶體均呈一水合物1結(jié)晶相。在重量比為95:5、80:20和50:50的乙腈/水混合溶劑體系中形成的晶體也均為一水合物1晶體。已經(jīng)觀察到丙酮溶劑化物1經(jīng)去溶劑化轉(zhuǎn)化為大部分無(wú)定形固體。如果通過(guò)混合丙酮和水的蒸氣的存在增加分子遷移率，則初始丙酮溶劑化物1晶體和無(wú)定形固體重組成一水合物1。乙醇、乙腈和丙酮溶劑化物1在氮?dú)庀卤┞队?20℃的溫度去溶劑化成相同的無(wú)水結(jié)晶相2。對(duì)于乙醇、乙腈和丙酮溶劑化物2形式觀察到同晶型現(xiàn)象(isomorphism)(待單晶x射線(xiàn)衍射確證)。它們均可逆地溶劑化成相同的無(wú)水物相3。無(wú)水物相3水合成一水合物形式，即不同于一水合物1的“一水合物2”。當(dāng)前第1頁(yè)12