本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及二氫黃酮類衍生物、其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

精神障礙是指大腦機(jī)能活動(dòng)發(fā)生紊亂，導(dǎo)致認(rèn)知、情感、行為和意志等精神活動(dòng)不同程度障礙的總稱。常見的精神障礙有精神分裂癥，抑郁癥，躁狂抑郁性精神障礙(雙相障礙)，焦慮癥，恐懼癥，強(qiáng)迫癥，應(yīng)激相關(guān)障礙，以及各種器質(zhì)性病變伴發(fā)的精神障礙等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，非感染性疾病占全球負(fù)擔(dān)的比重日益增加，精神障礙占整個(gè)疾病負(fù)擔(dān)的15％以上。我國精神疾病在我國疾病總負(fù)擔(dān)中排名首位，約占疾病總負(fù)擔(dān)的20％。據(jù)報(bào)道，我國精神疾病發(fā)病率已高達(dá)17.5％，其中重性精神障礙發(fā)病率高達(dá)1％。

在發(fā)病機(jī)制方面，單胺類遞質(zhì)及其受體是精神醫(yī)學(xué)研究得最廣泛的神經(jīng)遞質(zhì)和受體之一。在精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制中，主要有多巴胺(da)活動(dòng)過度假說、5-羥色胺(5-ht)和去甲腎上腺素(ne)神經(jīng)通路障礙假說。研究表明，精神分裂癥患者的陽性癥狀(幻覺、妄想等)可能與皮質(zhì)下邊緣系統(tǒng)da功能亢進(jìn)有關(guān)。通過阻斷多巴胺2型受體(drd2)發(fā)揮藥理作用的抗精神病藥物能有效控制精神分裂癥的陽性癥狀。

谷氨酸和天門冬氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。有研究提示精神分裂癥和其他精神障礙涉及谷氨酸能傳遞異常。n-甲基-d-天冬氨酸(n-methyl-d-asparticacid，nmda)受體拮抗劑能夠誘導(dǎo)精神分裂癥樣效應(yīng)；增強(qiáng)nmda受體功能的物質(zhì)能夠改善精神分裂癥患者的癥狀和認(rèn)知功能。

現(xiàn)在越來越多的證據(jù)表明，炎癥和免疫功能異?？赡芘c精神分裂癥、抑郁癥和其他精神障礙的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。在精神分裂癥患者和具有精神分裂高風(fēng)險(xiǎn)的患者大腦內(nèi)，免疫細(xì)胞(小膠質(zhì)細(xì)胞)更活躍，表明神經(jīng)炎性反應(yīng)是精神分裂的一個(gè)重要因素，并成為了治療和預(yù)防精神分裂癥的一個(gè)新的潛在目標(biāo)。此外，針對(duì)人類的尸檢研究及特殊的成像學(xué)技術(shù)，以及動(dòng)物抑郁模型研究顯示，當(dāng)小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生改變，無法繼續(xù)調(diào)節(jié)腦內(nèi)功能及行為進(jìn)程時(shí)，即可發(fā)生抑郁。長(zhǎng)期暴露于慢性的、無法預(yù)測(cè)的心理應(yīng)激也可導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞的形狀及功能發(fā)生改變，而這種應(yīng)激同樣也是導(dǎo)致人類抑郁的最首要原因之一。

已有大量研究表明，小膠質(zhì)細(xì)胞激活和神經(jīng)炎癥是神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病、帕金森病)、腦血管病、腦創(chuàng)傷、脊髓損傷、脫髓鞘病、多發(fā)性硬化、腦脊髓炎等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要發(fā)病機(jī)制。

神經(jīng)白質(zhì)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分，是神經(jīng)纖維聚集的地方，中樞神經(jīng)細(xì)胞的髓鞘損害，會(huì)引起白質(zhì)病變。精神分裂癥、抑郁癥和其他精神障礙患者，以及腦血管病、糖尿病性神經(jīng)病等出現(xiàn)白質(zhì)神經(jīng)纖維的異常，如髓鞘的變化、軸突的紊亂等，而且多發(fā)性硬化等脫髓鞘疾病可出現(xiàn)精神障礙癥狀。這些結(jié)果表明神經(jīng)白質(zhì)病變與精神障礙和一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。

目前，臨床上應(yīng)用的抗精神病藥物可分為兩類：一類是具有阻斷多巴胺受體作用的第一代抗精神病藥物，稱為“經(jīng)典”抗精神病藥物(如氟哌啶醇等)，它們雖然能有效控制精神分裂癥的陽性癥狀，但對(duì)認(rèn)知障礙的療效甚差；另一類是與多巴胺受體和其他受體(如5-羥色胺受體、去甲腎上腺素受體)共同作用的藥物，稱為“非經(jīng)典”抗精神病藥物(如齊拉西酮、利培酮等)，該類藥物雖然對(duì)精神分裂癥的陽性癥狀和陰性癥狀有一定療效，但同樣地，其對(duì)認(rèn)知障礙的療效較差。

綜上所述，當(dāng)前仍缺乏能夠改善認(rèn)知障礙的抗精神病藥物，另外，對(duì)于能夠同時(shí)作用在多巴胺能系統(tǒng)、谷氨酸能系統(tǒng)、小膠質(zhì)細(xì)胞、腦白質(zhì)等精神障礙和神經(jīng)疾病復(fù)雜發(fā)病機(jī)制多靶點(diǎn)的藥物的研究不足。

因此，研制作用在多靶點(diǎn)的抗精神障礙和神經(jīng)疾病藥物對(duì)臨床治療具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明人通過對(duì)二氫黃酮類化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到一類結(jié)構(gòu)新穎的化合物，其能夠同時(shí)作用在多巴胺能系統(tǒng)、谷氨酸能系統(tǒng)、小膠質(zhì)細(xì)胞、腦白質(zhì)等多靶點(diǎn)，可用于預(yù)防或治療精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病，本發(fā)明即是基于以上發(fā)現(xiàn)而完成。

基于以上發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的目的在于以下的任一項(xiàng)：1.提供一類結(jié)構(gòu)新穎的二氫黃酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其制備方法，以及包含所述衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物；2.提供所述二氫黃酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥物組合物在制備用于預(yù)防或治療精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的用途；3.提供一種預(yù)防或治療精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，其包括向有此需要的患者給予所述二氫黃酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥物組合物；4.所述二氫黃酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥物組合物，其用于預(yù)防或治療精神障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

更具體地說，本發(fā)明第一方面提供式(i)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，

r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、氰基、羥基、氨基、c1-6烷基(例如甲基)、c1-6烷氧基(例如甲氧基)、c1-6烷氨基和芳基，任選地，其中所述c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氨基和芳基各自獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氨基和羥基的取代基取代，優(yōu)選地，其中所述鹵素為氯或氟；

x為含有2-6個(gè)碳原子的飽和或部分飽和的亞鏈烴基，任選地，其中所述亞鏈烴基被選自羥基或甲基的取代基取代；

y為-n-或-c(r)-，其中所述r基選自氫、羥基、氨基、c1-6烷基；

z為芳基或雜芳基。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，r3和r8各自獨(dú)立地選自氫、鹵素(例如氟或氯)、c1-6烷基(例如甲基)和c1-6烷氧基(例如甲氧基)，任選地，其中所述c1-6烷基和c1-6烷氧基各自獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氨基和羥基的取代基取代；

其余各原子或取代基如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，r1、r2、r4、r5、r6和r7均為氫；

其余各原子或取代基如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，x為c2-6亞烷基(例如c2-4亞烷基，再例如1,2-亞乙基、1,3-亞丙基或1,4-亞丁基)，任選地，所述c2-6亞烷基被選自羥基或甲基的取代基取代；

其余各原子或取代基如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，y為-n-或-c(r)-，其中r選自氫、羥基或甲基；

其余各原子或取代基如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，z為含5-20個(gè)碳原子(例如5-15個(gè)碳原子，再例如5-10個(gè)碳原子)的芳基或雜芳基，優(yōu)選地，所述芳基或雜芳基選自苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三氮唑基、吡啶基、吡喃基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并三氮唑基、喹啉基、苯并吡喃基、苯并嘧啶基、喹喔啉基、苯并噠嗪基、苯并三嗪基和嘌呤基；

其余各原子或取代基如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，其中所述化合物選自：

5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；

5-羥基-2-(4-甲基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；

5-羥基-2-(4-氟基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；

5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；

5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；

5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丙氧基)苯并二氫吡喃-4-酮；和

5-羥基-2-(4-氟基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮。

本發(fā)明第二方面提供了本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其特征在于，先合成x基團(tuán)右側(cè)的二氫黃酮部分，然后通過一個(gè)含有2-6個(gè)碳原子的碳鏈與取代苯基或1，2-苯并異噁唑基取代的哌嗪基或哌啶基連接而成，其中各基團(tuán)或符號(hào)定義如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括以下步驟：

1)化合物a與乙酰氯經(jīng)?；磻?yīng)得到化合物b；

2)在化合物b的羥基上引入保護(hù)基得化合物c；

3)化合物c與化合物d發(fā)生羥醛縮合反應(yīng)制得化合物e；

4)化合物e經(jīng)關(guān)環(huán)反應(yīng)得化合物f；

5)化合物f脫羥基保護(hù)基得化合物g；

6)化合物g與化合物h經(jīng)親核取代得到化合物i；

7)化合物i與化合物j經(jīng)親核取代得到式i化合物；

其中，pg代表羥基保護(hù)基，例如mom、tms或tbs等；l表示親核取代反應(yīng)的離去基團(tuán)，例如鹵素、-ots、-ocor(r代表烷基)等；

其余各原子或取代基定義如本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述。

本發(fā)明的第三方面提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選地一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料(如載體和/或賦形劑等)。

本發(fā)明還提供了本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或本發(fā)明第三方面所述的藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的用途。

本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，其包括向有此需要的受試者給予有效量的本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或本發(fā)明第三方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物。

本發(fā)明還提供本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或本發(fā)明第三方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其用于預(yù)防或治療精神障礙或神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

本發(fā)明所述的精神障礙選自精神分裂癥、抑郁癥、躁狂抑郁性精神障礙(雙相障礙)、認(rèn)知障礙、焦慮癥、應(yīng)激相關(guān)障礙、注意缺陷與多動(dòng)障礙、抽動(dòng)障礙，以及各種器質(zhì)性病變伴發(fā)的精神障礙等。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述各種器質(zhì)性病變伴發(fā)的精神障礙選自阿爾茨海默病、血管性癡呆、腦外傷所致精神障礙、顱內(nèi)感染所致精神障礙、腦腫瘤所致精神障礙、梅毒所致精神障礙、癲癇性精神障礙和hiv/aids所致精神障礙。

本發(fā)明所述的神經(jīng)系統(tǒng)疾病選自神經(jīng)退行性疾病(阿爾茨海默病、帕金森病)、腦血管病、腦創(chuàng)傷、脊髓損傷、脫髓鞘病、多發(fā)性硬化、炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病、缺血-缺氧性病引起的白質(zhì)腦病和糖尿病性神經(jīng)病。

以下對(duì)本發(fā)明的術(shù)語進(jìn)行解釋，對(duì)于特定的術(shù)語，如果本發(fā)明中的含義與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義不一致，以本發(fā)明中的含義為準(zhǔn)；如果在本發(fā)明中沒有定義，則其具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義。除非有相反陳述，本發(fā)明中使用的術(shù)語具有下述含義：

本發(fā)明所用術(shù)語“c1-6烷基”是指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如c1烷基、c2烷基、c3烷基、c4烷基、c5烷基或c6烷基。具體的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“c1-6烷氧基”是指具有“c1-6烷基-o-”結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，其中c1-6烷基具有前述相同的含義。例如c1烷氧基、c2烷氧基、c3烷氧基、c4烷氧基、c5烷氧基或c6烷氧基。具體的實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“c1-6烷氨基”是指具有“c1-6烷基-nh-”結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，其中c1-6烷基具有前述相同的含義。例如c1烷氨基、c2烷氨基、c3烷氨基、c4烷氨基、c5烷氨基或c6烷氨基。具體的實(shí)例包括但不限于甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基、丁氨基、叔丁氨基、戊氨基、己氨基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“芳基”是指具有單環(huán)(如苯基)、多環(huán)(如萘基)或其中至少一個(gè)環(huán)是芳香性的稠合環(huán)(如1，2，3，4-四氫萘基)的芳族碳環(huán)基。例如含有5-20個(gè)(例如5-15個(gè)或5-10個(gè))碳原子的芳基。具體的實(shí)例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、茚基、苊基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“雜芳基”是指含有至少一個(gè)至多四個(gè)選自n、o或s的雜原子的具有芳香性的環(huán)狀基團(tuán)，例如含有5-20個(gè)(例如5-15個(gè)或5-10個(gè))碳原子的雜芳基。具體的實(shí)例包括但不限于、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三氮唑基、吡啶基、吡喃基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并三氮唑基、喹啉基、苯并吡喃基、苯并嘧啶基、喹喔啉基、苯并噠嗪基、苯并三嗪基和嘌呤基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“飽和的或部分飽和的亞鏈烴基”是指飽和的或部分飽和的鏈烴基上失去兩個(gè)氫原子后剩余的部分，例如含有2-6個(gè)碳原子的飽和的或部分飽和的亞鏈烴基，例如含有2-6個(gè)碳原子的亞烷基。具體的實(shí)例包括但不限于亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、1,2-亞乙基、1,3-亞丙基、1,4-亞丁基、1,5-亞戊基、1,6-亞己基等。

本發(fā)明所用術(shù)語“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。

本發(fā)明的化合物可以含有手性中心，且可以以不同的對(duì)映體和非對(duì)映體形式存在。本發(fā)明化合物的所有旋光異構(gòu)體，或外消旋混合物均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

本發(fā)明中所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”通常是指制藥學(xué)上或醫(yī)學(xué)上可用的，或者雖然不能直接用于制藥學(xué)或醫(yī)學(xué)，但是可作為制備制藥學(xué)或醫(yī)學(xué)產(chǎn)品中間體時(shí)可以利用，并在最后用于制藥學(xué)或醫(yī)學(xué)之前通過適宜的方法脫除的。例如藥學(xué)上可接受的鹽，不但包括可用于臨床的藥用鹽，還包括不能直接用于臨床，但可在制備本發(fā)明化合物時(shí)使用并在隨后的工藝過程中脫除的鹽。本發(fā)明中所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”包括與藥學(xué)上可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸或者無機(jī)堿或有機(jī)堿形成的常規(guī)的鹽以及季銨與酸形成的鹽。合適的酸鹽的例子包括但不限于鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、高氯酸鹽、富馬酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸鹽、羥基乙酸鹽、甲酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、撲酸鹽、丙二酸鹽、戊二酸鹽、羥基馬來酸鹽、苯乙酸鹽、谷氨酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、富馬酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯磺酸鹽、羥基萘甲酸鹽、氫碘酸鹽、蘋果酸鹽、硬脂酸鹽、鞣酸鹽等。其它的如草酸鹽，雖然其本身并非藥學(xué)上可接受的，但可以用于制備用作中間體的鹽，以獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。合適的堿鹽的更具體的例子包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋁鹽、鈣鹽、鋅鹽、銨鹽、三乙胺鹽、叔丁胺鹽、n,n'-二芐基乙二胺鹽、普魯卡因鹽、氯代普魯卡因鹽、膽堿鹽、二乙醇胺鹽、乙二胺鹽和n-甲基葡糖胺鹽等。

本發(fā)明中所用術(shù)語“輔料”是指除藥物活性成分以外，在安全性方面已經(jīng)進(jìn)行了合理的評(píng)估，且包含在藥物制劑中的物質(zhì)。例如載體或賦形劑，這里的載體包括但不限于：離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂；所述賦形劑是指在藥物制劑中除主藥以外的附加物，其性質(zhì)穩(wěn)定，與主藥無配伍禁忌，不產(chǎn)生副作用，不影響療效，在常溫下不易變形、干裂、霉變、蟲蛀、對(duì)人體無害、無生理作用，不與主藥產(chǎn)生化學(xué)或物理作用，不影響主藥的含量測(cè)定等。如片劑中的黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑；中藥丸劑中的酒、醋、藥汁等；半固體制劑軟膏劑、霜?jiǎng)┲械幕|(zhì)部分；液體制劑中的防腐劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、助溶劑、乳化劑、增溶劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、著色劑等均可稱為賦形劑，等等。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述受試者為哺乳動(dòng)物，例如?？苿?dòng)物、馬科動(dòng)物、羊科動(dòng)物、豬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物；其中，特別優(yōu)選的受試者為人。

本發(fā)明的化合物或藥物組合物適用于口服、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌肉或皮下)，經(jīng)皮、經(jīng)舌或呼吸給藥等給藥途徑。其中優(yōu)選口服、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌肉或皮下)的給藥方式。

當(dāng)口服用藥時(shí)，本發(fā)明的化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、丸劑、散劑、糖漿劑、膠囊、水溶液或水懸浮液等。其中，片劑使用的載體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。

本發(fā)明的化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。

另外需要指出，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、營養(yǎng)狀況、化合物的活性強(qiáng)度、服用時(shí)間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。優(yōu)選的使用劑量介于0.001至100mg/kg體重/天，更優(yōu)選劑量為0.01mg/kg至50mg/kg體重/天，再更優(yōu)選劑量為0.1mg/kg至25mg/kg體重/天，最優(yōu)劑量為1mg/kg至10mg/kg體重/天。如果需要，有效的日劑量可出于給藥目的分成多劑量；因此，單劑量組合物可含有這種數(shù)量或其分劑量，以構(gòu)成日劑量。上述式i化合物的給藥頻率可以根據(jù)臨床醫(yī)生的經(jīng)驗(yàn)和諸如患者年齡、體重、性別、一般健康狀況以及疾病的類型和嚴(yán)重性等因素來確定，例如每天給予1次、2次、3次、4次、5次等，或者每2天一次、每3天1次、每1周1次、每2周1次等。

發(fā)明的有益效果

本發(fā)明通過對(duì)二氫黃酮類化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到一類結(jié)構(gòu)新穎的化合物，其能同時(shí)作用在多巴胺能系統(tǒng)、谷氨酸能系統(tǒng)、小膠質(zhì)細(xì)胞和腦白質(zhì)等多靶點(diǎn)上。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述化合物具有優(yōu)秀的抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)炎癥反應(yīng)活性，并能拮抗多巴胺2型受體，改善多種精神障礙動(dòng)物模型的行為學(xué)變化，而且還能有效抑制神經(jīng)炎癥和髓鞘脫失，表明本發(fā)明的化合物具有防治精神障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用，為相關(guān)疾病的治療提供了一種新的思路。

附圖說明

圖1為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物抑制lps+inf-γ致小膠質(zhì)細(xì)胞(bv2細(xì)胞)活化及一氧化氮(no)過度產(chǎn)生和釋放結(jié)果，其中每個(gè)樣品每個(gè)濃度平行6孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次，數(shù)據(jù)以mean±se表示；^##p<0.01,模型組與對(duì)照組相比；^＊p<0.05,^＊＊p<0.01,給藥組與模型組相比；

圖2為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)多巴胺受體2(drd2)的拮抗活性；

圖3為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)mk-801致精神分裂癥高活動(dòng)模型小鼠270分鐘內(nèi)自主活動(dòng)影響的曲線圖，小鼠放入曠場(chǎng)行為紅外監(jiān)視系統(tǒng)儀器中開始測(cè)試60分鐘，然后空白組腹腔注射生理鹽水，模型組、藥物組腹腔注射mk-801，繼續(xù)測(cè)定各組小鼠210分鐘內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)性和中央?yún)^(qū)活動(dòng)情況，每10分鐘檢測(cè)一次，每組n＝10；

圖4為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)mk-801致精神分裂癥高活動(dòng)模型小鼠210分鐘內(nèi)自發(fā)活動(dòng)總路程的影響；數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝10；^##p<0.01，模型組與對(duì)照組相比；^＊p<0.05給藥組與模型組相比；

圖5為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)mk-801致精神分裂癥高活動(dòng)模型小鼠210分鐘內(nèi)中央?yún)^(qū)活動(dòng)距離的影響，數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝10；^##p<0.01，模型組與對(duì)照組相比；

圖6為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠8分鐘內(nèi)y-迷宮進(jìn)臂次數(shù)的影響，數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝8，^＊p<0.05；^＊＊p<0.01；給藥與模型組相比；

圖7為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠8分鐘內(nèi)y-迷宮自發(fā)性交替反應(yīng)的影響，數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝8，^#p<0.05，模型組與對(duì)照組相比；^＊p<0.05，給藥組與模型組相比；

圖8為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠10分鐘內(nèi)曠場(chǎng)自發(fā)活動(dòng)總路程的影響，數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝8，^##p<0.01，模型組與對(duì)照組相比；^＊p<0.05，給藥組與模型組相比；

圖9為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠額葉皮質(zhì)髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein，mbp)的影響，其中(a)為mbp蛋白的westernblot代表性圖片，?。盒┝拷M，25mg/kg；大：大劑量組，50mg/kg；(b)為mbp蛋白定量統(tǒng)計(jì)結(jié)果，數(shù)據(jù)以mean±se表示，n＝4，^##p<0.01，與對(duì)照組相比；^＊＊p<0.01，與模型組相比；

圖10為在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的影響(免疫組織化學(xué)染色)，數(shù)據(jù)以means±se表示，n＝3，^##p<0.01，與正常對(duì)照組相比；^＊p<0.05，與模型組相比。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得或按照公知教導(dǎo)制備得到的常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例中所述化合物的結(jié)構(gòu)是按照常規(guī)的光譜技術(shù)(紅外、紫外、核磁共振或esi-ms質(zhì)譜)測(cè)定的。

a本發(fā)明化合物的合成

實(shí)施例1：5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p1)的合成

1)取間苯三酚5.0g(40mmol)，溶于50ml二硫化碳和15ml硝基苯的溶液中，加入15.6g(120mmol)無水三氯化鋁，室溫?cái)嚢?0分鐘，向反應(yīng)液中滴加10ml乙酰氯4.23ml(60mmol)的二硫化碳溶液，之后于50℃下加熱回流1小時(shí)結(jié)束反應(yīng)。減壓蒸去二硫化碳，向殘留物中加入10ml鹽酸和50ml冰水混合物，乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，有機(jī)層飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干乙酸乙酯，硅膠拌樣，硅膠柱分離。石油醚：乙酸乙酯(2:1)洗脫，得淡黃色固體5.71g，收率85.7％。

2)取第一步產(chǎn)物5.0g，溶于50ml丙酮中，加入無水碳酸鉀15g，在室溫下緩慢滴加氯甲基甲醚1.58ml，20min滴完，之后于室溫下繼續(xù)攪拌2小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束。濾掉無水碳酸鉀固體，減壓蒸去丙酮溶液，殘余物中加入20ml水，乙酸乙酯萃取3次(30ml×3)，有機(jī)層用飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干有機(jī)溶劑，硅膠拌樣，硅膠柱分離。石油醚：乙酸乙酯(15:1)洗脫，得淡黃色油狀物約4.3g，收率56.4％。

3)取第二步產(chǎn)物4g，氫氧化鈉10g，甲醇100ml，對(duì)甲氧基苯甲醛3.64ml，加熱回流5小時(shí)，冷至室溫，減壓蒸干溶劑，加入50ml蒸餾水，2％hcl溶液中和至中性，乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，有機(jī)層用飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干乙酸乙酯，硅膠拌樣，硅膠柱分離。先用石油醚洗脫5個(gè)柱體積，再用石油醚：乙酸乙酯(10:1)洗脫，得黃色固體4.98g，收率85.2％。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)：δ＝12.39(brs,1h,oh-5),7.67(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),7.53(d,2h,j＝9.6hz,ar-h),7.01(d,2h,j＝9.0hz,ar-h),5.28(s,2h,-och2-),5.22(s,2h,-och2-),3.81(s,3h,-och3),3.40(s,3h,-och3),3.40(s,3h,-och3).

4)取第三步產(chǎn)物2g，乙酸鈉8g，甲醇30ml，加熱回流12小時(shí)，冷至室溫，減壓蒸干溶劑，加入30ml蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次(20ml×3)，有機(jī)層用飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干乙酸乙酯，硅膠拌樣，硅膠柱分離。先用石油醚：乙酸乙酯(10:1)洗脫4個(gè)柱體積，再用石油醚：乙酸乙酯(3:1)洗脫，得無色油狀物1.63g，收率81.5％。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)：δ＝7.44(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.97(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.36(d,1h,j＝2.1hz,h-8),6.33(d,1h,j＝2.4hz,h-6),5.50(dd,1h,j＝12.9,2.7hz,h-2),5.23(s,2h,-och2-),5.22(s,2h,-och2-),3.77(s,3h,-och3),3.41(s,3h,-och3),3.38(s,3h,-och3),3.14(dd,1h,j＝16.2,12.9hz,h-3α),2.60(dd,1h,j＝16.2,2.7hz,h-3β).

5)取第四步產(chǎn)物1.5g，甲醇30ml，濃鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，冷至室溫，減壓蒸干溶劑，少量甲醇混懸，倒入100ml冰水混合物中，減壓抽濾，濾餅烘干后得白色固體0.87g，收率72.3％。

¹hnmr(300mhz，dmso-d6)：δ＝12.14(brs,1h,oh-5),10.78(brs,1h,oh-7),7.44(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.97(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),5.90(brs,1h,h-8),5.89(brs,1h,h-6),5.50(dd,1h,j＝12.6,2.7hz,h-2),3.77(s,3h,-och3),3.28(dd,1h,j＝14.1,12.6hz,h-3α),2.72(dd,1h,j＝14.1,3.0hz,h-3β).

6)取第五步產(chǎn)物0.8g，無水碳酸鉀3g，丙酮20ml，1,4-二溴丁烷1.2g，加熱回流3小時(shí)，冷至室溫，濾掉無水碳酸鉀固體，有機(jī)層硅膠拌樣，硅膠柱分離，石油醚：乙酸乙酯(15:1)洗脫，得黃色油狀物0.61g，收率54.5％。

esi+-ms：423.1[m+h]⁺

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.03(brs,1h,oh-5),7.40(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.97(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.06(d,1h,j＝2.4hz,h-8),6.04(d,1h,j＝2.4hz,h-6),5.38(dd,1h,j＝12.9,3.0hz,h-2),4.04(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.85(s,3h,-och3),3.49(t,2h,j＝6.0hz,h-4”),3.11(dd,j＝17.1,12.9hz,h-3α),2.80(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.68(m,4h,h2-2”’；h2-6”’),2.49(t,2h,j＝7.2hz,h-5”’),2.09(m,2h,h-3”),1.96(m,2h,h-2”).

7)取第六步產(chǎn)物0.6g，無水碳酸鉀2g，碘化鉀0.5g，乙腈10ml，1-(2-甲氧基苯基)哌嗪0.68g，加熱回流2小時(shí)，冷至室溫，濾掉無水碳酸鉀固體，有機(jī)層硅膠拌樣，硅膠柱分離，石油醚：乙酸乙酯(2:1)洗脫，得黃色油狀物0.15g，收率19.7％。

esi⁺-ms：532.9[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：533.2712[m+h]⁺(calcdforc31h36n2o6,533.2646).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.04(brs,1h,oh-5),7.40(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.90(m,6h,ar-h),6.08(d,1h,j＝2.1hz,h-8),6.05(brs,1h,j＝1.8hz,h-6),5.38(dd,1h,j＝12.9,2.7hz,h-2),4.03(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.88(s,3h,-och3),3.85(s,3h,-och3),3.11(m,5h,h2-4”；h2-3”’；h-3α),2.80(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.68(m,4h,h2-2”’；h2-6”’),2.49(t,2h,j＝7.2hz,h-5”’),1.85(m,2h,h-2”),1.70(m,2h,h-3”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝195.9(c-4),167.5(c-7),164.1(c-7”’),162.9(c-5),160.1(c-4’),152.3(c-9),141.4(c-8”’),130.5(c-1’),127.7(c-2’,6’),122.9(c-12”’),121.0(c-10”’),118.2(c-11”’),114.2(c-3’,5’),111.3(c-9”’),103.1(c-10),95.6(c-6),94.6(c-8),79.0(c-2),68.3(c-1”),58.1(c-4”),55.4(2×-och3),53.4(c-3”’,5”’),50.6(c-2”’,6”’),43.2(c-3),27.0(c-2”),23.2(c-3”).

實(shí)施例2：5-羥基-2-(4-甲基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p2)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟3)中使用對(duì)甲基苯甲醛作為反應(yīng)物。

esi+-ms：517.2[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：517.2766[m+h]⁺(calcdforc31h36n2o5,517.2697).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.03(brs,1h,oh-5),7.36(d,2h,j＝8.1hz,ar-h),7.26(d,2h,j＝7.8hz,ar-h),6.95(m,4h,ar-h),6.08(d,1h,j＝2.7hz,h-8),6.06(brs,1h,j＝2.4hz,h-6),5.40(dd,1h,j＝12.9,3.0hz,h-2),4.03(t,2h,j＝6.3hz,h-1”),3.88(s,3h,-och3),3.10(m,5h,h2-4”；h2-3”’；h-3α),2.82(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.69(m,4h,h2-2”’；h2-6”’),2.49(t,2h,j＝7.2hz,h-5”’),2.40(s,3h,-ch3),1.83(m,2h,h-2”),1.71(m,2h,h-3”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝195.8(c-4),167.5(c-7),164.1(c-7”’),162.9(c-5),152.3(c-9),141.4(c-8”’),138.8(c-4’),135.5(c-1’),129.5(c-2’,6’),126.2(c-3’,5’),122.9(c-12”’),121.0(c-10”’),118.2(c-11”’),111.3(c-9”’),103.1(c-10),95.6(c-6),94.6(c-8),79.1(c-2),68.3(c-1”),58.1(c-4”),55.4(2-och3),53.4(c-3”’,5”’),50.6(c-2”’,6”’),43.3(c-3),27.0(c-2”),23.2(c-3”),21.2(-ch3).

實(shí)施例3：5-羥基-2-(4-氟基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p3)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟3)中使用對(duì)氟苯甲醛作為反應(yīng)物，所得產(chǎn)物p3為黃色油狀物。

esi+-ms：520.8[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：521.2506[m+h]⁺(calcdforc30h33fn2o5,521.2446).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.01(brs,1h,oh-5),7.45(m,2h,ar-h),7.16(m,2h,j＝7.8hz,ar-h),6.95(m,4h,ar-h),6.10(d,1h,j＝2.4hz,h-8),6.06(d,1h,j＝2.1hz,h-6),5.40(dd,1h,j＝13.2,3.0hz,h-2),4.03(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.88(s,3h,-och3),3.06(m,5h,h2-4”；h2-3”’；h-3α),2.82(dd,1h,j＝17.1,3.3hz,h-3β),2.68(m,4h,h2-2”’；h2-6”’),2.49(t,2h,j＝7.5hz,h-5”’),2.40(s,3h,-ch3),1.82(m,2h,h-2”),1.70(m,2h,h-3”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝195.3(c-4),167.6(c-7),164.2(c-7”’),162.6(c-5),152.3(c-9),141.4(c-8”’),134.4(c-4’),134.3(c-1’),128.0(c-2’,6’),122.9(c-12”’),121.0(c-10”’),118.2(c-11”’),116.0(c-3’),115.7(c-3’),111.3(c-9”’),103.0(c-10),95.7(c-6),94.7(c-8),78.5(c-2),68.3(c-1”),58.1(c-4”),55.4(2-och3),53.5(c-3”’,5”’),50.6(c-2”’,6”’),43.4(c-3),27.0(c-2”),23.2(c-3”).

實(shí)施例4：5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p6)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟6)中使用1,3-二溴丙烷作為反應(yīng)物，所得產(chǎn)物p3為黃色油狀物。

esi+-ms：519.0[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：519.2548[m+h]⁺(calcdforc30h34n2o6,519.2490).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.04(brs,1h,oh-5),7.40(d,2h,j＝8.4hz,ar-h),6.96(m,6h,ar-h),6.09(brs,1h,h-8),6.08(brs,1h,h-6),5.38(dd,1h,j＝12.9,2.4hz,h-2),4.08(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.88(s,3h,-och3),3.85(s,3h,-och3),3.11(m,5h,h2-3”；h2-3”’；h-3α),2.80(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.69(m,4h,h2-2”’；h2-6”’),2.58(t,2h,j＝7.2hz,h-5”’),2.03(m,2h,h-2”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝196.0(c-4),167.2(c-7),164.1(c-7”’),162.9(c-5),160.1(c-4’),152.2(c-9),140.8(c-8”’),130.4(c-1’),127.7(c-2’,6’),123.3(c-12”’),121.1(c-10”’),118.4(c-11”’),114.2(c-3’,5’),111.2(c-9”’),103.2(c-10),95.6(c-6),94.6(c-8),79.0(c-2),66.4(c-1”),55.4(2×-och3),54.8(c-3”),53.2(c-5”’,9”’),49.8(c-2”’,6”’),43.2(c-3),29.7(c-2”).

實(shí)施例5：5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p5)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟7)中使用6-氟-3-(4-哌啶基)-1,2-苯異噁唑作為反應(yīng)物，所得產(chǎn)物p5為黃色油狀物。

esi+-ms：560.8[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：561.2447[m+h]⁺(calcdforc32h33fn2o6,561.2395).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.05(brs,1h,oh-5),7.40(dd,1h,j＝8.7,5.1hz,ar-h),7.44(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),7.25(dd,2h,j＝8.7,2.1hz,ar-h),7.07(dt,1h,j＝9.0,2.1hz,ar-h),6.97(d,2h,j＝8.7hz,ar-h),6.08(d,1h,j＝2.1hz,h-8),6.06(brs,1h,j＝2.4hz,h-6),5.40(dd,1h,j＝13.2,3.0hz,h-2),4.03(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.85(s,3h,-och3),3.12(m,4h,h2-4”；h-8”；h-3α),2.81(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.47(t,2h,j＝7.2hz,h-6”),2.08(m,6h,h2-7”；h2-9”；h2-10”),1.83(m,2h,h-2”),1.70(m,2h,h-3”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝195.9(c-4),167.5(c-7),164.1(c-6”’),162.9(c-5),161.1(c-9),160.1(c-4’),130.5(c-1’),127.7(c-2’,6’),122.7(c-8”’),122.5(c-6”’),117.3(c-3”’),114.4(c-3’,5’),112.5(c-9”’),112.1(c-9”’),103.1(c-10),97.6(c-7”’),97.2(c-7”’),95.5(c-6),94.6(c-8),79.0(c-2),68.3(c-1”),58.3(c-4”),55.4(-och3),53.5(c-6”,10”),43.2(c-3),34.6(c-8”),30.5(c-7”,9”),27.0(c-2”),23.3(c-3”).

實(shí)施例6：5-羥基-2-(4-氟基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丁氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p4)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟3)中使用對(duì)氟苯甲醛作為反應(yīng)物；在步驟7)中使用6-氟-3-(4-哌啶基)-1,2-苯異噁唑作為反應(yīng)物，所得產(chǎn)物為黃色油狀物。

esi+-ms：548.8[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：549.2273[m+h]⁺(calcdforc31h30f2n2o5,549.2196).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.04(brs,1h,oh-5),7.40(dd,2h,j＝8.7,5.1hz,ar-h),7.44(m,2h,ar-h),7.24(dd,2h,j＝8.7,2.1hz,ar-h),7.09(m,4h,ar-h),6.08(d,1h,j＝2.1hz,h-8),6.05(brs,1h,j＝2.4hz,h-6),5.40(dd,1h,j＝12.6,3.0hz,h-2),4.03(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.06(m,4h,h2-4”；h-8”；h-3α),2.80(dd,1h,j＝17.1,3.0hz,h-3β),2.48(t,2h,j＝7.2hz,h-6”),2.05(m,6h,h2-7”；h2-9”；h2-10”),1.83(m,2h,h-2”),1.70(m,2h,h-3”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝195.9(c-4),167.5(c-7),164.1(c-4”’),162.6(c-5),161.0(c-9),134.3(c-4’),134.3(c-1’),128.0(c-2’,6’),122.7(c-8”’),122.5(c-6”’),117.3(c-9”’),115.9(c-3’),115.7(c-3’),112.5(c-1”’),112.1(c-7”’),103.0(c-10),97.2(c-5”’),95.7(c-6),94.6(c-8),78.5(c-2),68.3(c-1”),58.2(c-4”),53.4(c-6”,10”),30.4(c-7”,9”),43.3(c-3),34.5(c-8”),26.9(c-2”),23.2(c-3”).

實(shí)施例7：5-羥基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-(4-(6-氟-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基)丙氧基)苯并二氫吡喃-4-酮(p7)的合成

操作同實(shí)施例1，在步驟6)中使用1,3-二溴丙烷作為反應(yīng)物；在步驟7)中使用6-氟-3-(4-哌啶基)-1,2-苯異噁唑作為反應(yīng)物，所得產(chǎn)物為黃色油狀物。

esi+-ms：546.9[m+h]⁺

hr-q-tof-ms：547.2309[m+h]⁺(calcdforc31h31fn2o6,547.2239).

¹hnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝12.04(brs,1h,oh-5),7.72(dd,1h,j＝8.4,5.1hz,ar-h),7.39(d,2h,j＝8.4hz,ar-h),7.25(m,1h,ar-h),7.06(dt,1h,j＝9.0,2.1hz,ar-h),6.96(d,2h,j＝8.4hz,ar-h),6.10(brs,1h,h-8),6.08(brs,1h,h-6),5.40(dd,1h,j＝12.9,2.1hz,h-2),4.08(t,2h,j＝6.0hz,h-1”),3.84(s,3h,-och3),3.11(m,4h,h2-3”；h-8”；h-3α),2.81(dd,1h,j＝17.1,2.7hz,h-3β),2.60(t,2h,j＝7.2hz,h-5”),2.09(m,8h,h2-2”；h2-6”；h2-8”；h2-9”).¹³cnmr(300mhz，cdcl3)：δ＝196.0(c-4),167.4(c-7),164.1(c-6”’),162.9(c-5),161.0(c-9),160.0(c-4’),130.4(c-1’),127.7(c-2’,6’),122.7(c-8”’),122.6(c-6”’),117.3(c-3”’),114.2(c-3’,5’),112.5(c-9”’),112.2(c-9”’),103.1(c-10),97.6(c-7”’),95.6(c-6),94.6(c-8),79.0(c-2),66.7(c-1”),55.4(-och3),55.0(c-3”),53.5(c-5”,9”),43.2(c-3),34.5(c-7”),30.4(c-6”,8”),30.0(c-2”),26.5(c-3”).

b.本發(fā)明化合物的藥理研究

實(shí)驗(yàn)例1：本發(fā)明化合物對(duì)lps+inf-γ致小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模盒∧z質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病的重要發(fā)病機(jī)制。致炎物質(zhì)細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharides，lps)以及干擾素γ(interferon-γ，ifn-γ)可刺激機(jī)體產(chǎn)生前炎癥細(xì)胞因子，后者觸發(fā)瀑布式炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)一步激活小膠質(zhì)細(xì)胞等炎癥細(xì)胞，釋放炎性介質(zhì)一氧化氮(nitricoxide，no)等，形成炎癥網(wǎng)絡(luò)。本實(shí)驗(yàn)通過建立lps+inf-γ聯(lián)合致小膠質(zhì)細(xì)胞(bv2細(xì)胞)炎癥模型，研究本發(fā)明合成的新型化合物對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥的抑制作用。

實(shí)驗(yàn)方法：取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的bv2細(xì)胞(小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系)接種于96孔培養(yǎng)板，置37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后，加入不同濃度的化合物，培養(yǎng)24h后棄培養(yǎng)液，加入lps+inf-γ作用24h，收集上清液。以no的穩(wěn)定性代謝產(chǎn)物亞銷酸鹽作為檢測(cè)no的指標(biāo)，用griess試劑盒測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖1所示，lps+inf-γ誘導(dǎo)bv2細(xì)胞(小膠質(zhì)細(xì)胞)產(chǎn)生和釋放炎性介質(zhì)no明顯增多。本發(fā)明化合物都具有抑制lps+inf-γ致bv2細(xì)胞no過度生成和釋放的作用，表明這些化合物具有明顯的拮抗神經(jīng)炎癥的作用。

結(jié)果提示本發(fā)明化合物可用于防治精神分裂癥、抑郁癥等精神障礙，以及神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病、帕金森病)、腦血管病、腦創(chuàng)傷、脊髓損傷、脫髓鞘病、多發(fā)性硬化、炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

實(shí)驗(yàn)例2：本發(fā)明化合物對(duì)多巴胺2型受體活性的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模壕穹至寻Y患者的陽性癥狀(幻覺、妄想等)可能與皮質(zhì)下邊緣系統(tǒng)多巴胺(da)功能亢進(jìn)有關(guān)，阻斷多巴胺2型受體(drd2)的抗精神病藥物能有效控制精神分裂癥的陽性癥狀。通過建立共轉(zhuǎn)drd2和gα16的細(xì)胞系，使得drd2被激活后能引起gα16蛋白的活化，進(jìn)而激活磷脂酶c(plc)產(chǎn)生ip3和dag，ip3可與細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體上的ip3受體結(jié)合，從而引起胞內(nèi)鈣的釋放。因此，測(cè)定胞內(nèi)鈣的變化可以作為檢測(cè)drd2活化狀態(tài)的方法。fluo-4/am是一種鈣熒光探針指示劑用來測(cè)量鈣離子。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用fluo-4熒光法，通過測(cè)量被細(xì)胞內(nèi)鈣離子激發(fā)的熒光強(qiáng)度來反映gα蛋白被激活的水平。如果化合物能夠激動(dòng)drd2，則可以使鈣流反應(yīng)升高；反之，如果化合物能夠拮抗drd2，則使鈣流反應(yīng)降低。

實(shí)驗(yàn)方法：將穩(wěn)定表達(dá)drd2/gα16的hek293細(xì)胞種于96孔板，培養(yǎng)過夜。吸去培養(yǎng)液，加入新鮮配制的染料fluo-4/am，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育40分鐘。將染料吸盡棄去，用新鮮配制的鈣緩沖液洗一遍后，換上50μl溶解有待測(cè)藥物的鈣緩沖液。用flexstationii儀檢測(cè)，第15秒開始由儀器自動(dòng)加入25μl溶解有已知激動(dòng)劑的鈣緩沖液，最終讀取525nm處熒光值(激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)為485nm)。以多巴胺(dopamine)為激動(dòng)劑，eticlopride(依替必利，d2受體拮抗劑)為拮抗劑，通過以下公式計(jì)算得到各樣品各濃度條件下的細(xì)胞反應(yīng)率(％response)：％response＝(lsample-lblank)/(ldopamine-lblank)。lsample表示待測(cè)樣品的檢測(cè)信號(hào)值，lblank表示eticlopride完全抑制的檢測(cè)信號(hào)值，ldopamine表示50nm激動(dòng)劑dopamine刺激dmso組后的檢測(cè)信號(hào)值。ic50值是通過graphpadprism計(jì)算得到。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：從表1和圖2看出，本發(fā)明化合物p1～p7都具有抑制多巴胺2型受體(drd2)的活性，并具有一定量效關(guān)系。結(jié)果提示本發(fā)明化合物可用于防治精神分裂癥等精神障礙。

表1.本發(fā)明部分化合物抑制多巴胺2型受體的ic50值

實(shí)驗(yàn)例3：本發(fā)明化合物對(duì)nmda受體拮抗劑致精神分裂癥小鼠模型的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模汗劝彼醾鬟f低下是精神分裂癥等精神障礙的發(fā)病機(jī)制之一，n-甲基-d-天冬氨酸(n-methyl-d-asparticacid，nmda)受體拮抗劑能夠誘導(dǎo)精神分裂癥樣效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)采用nmda受體拮抗劑地卓西平(mk-801)誘導(dǎo)小鼠的高活動(dòng)性精神分裂癥模型，對(duì)本發(fā)明化合物p6、p5、p4、p7進(jìn)行體內(nèi)活性評(píng)價(jià)。

實(shí)驗(yàn)方法：選擇無特殊病原體spf級(jí)近交系balb/c雄性小鼠，體重(20±2)g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、本發(fā)明藥物組。小鼠先適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境1周，連續(xù)灌胃給藥3天，第四天在測(cè)試前給藥，隨后放入曠場(chǎng)行為紅外監(jiān)視系統(tǒng)儀器中開始測(cè)試60分鐘，然后對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，模型組、給藥組腹腔注射nmda受體拮抗劑地卓西平(mk-801)溶液0.6mg/kg，繼續(xù)測(cè)定各組小鼠210分鐘內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)性和中央?yún)^(qū)活動(dòng)情況。其中，自發(fā)活動(dòng)用來反映精神分裂癥中快速移動(dòng)的陽性癥狀；中央?yún)^(qū)活動(dòng)情況用來評(píng)價(jià)精神分裂癥的焦慮狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：應(yīng)用曠場(chǎng)試驗(yàn)檢測(cè)小鼠自主活動(dòng)情況，結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，mk-801模型組小鼠210分鐘內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)總路程和中央?yún)^(qū)活動(dòng)距離延長(zhǎng)；本發(fā)明化合物p6、p5、p7灌胃給藥能夠縮短mk-801模型小鼠的自發(fā)活動(dòng)總路程和中央?yún)^(qū)活動(dòng)距離(圖3，圖4，圖5，表2)。結(jié)果提示本發(fā)明化合物可減輕精神分裂癥的陽性癥狀和焦慮狀態(tài)。

表2.本發(fā)明化合物對(duì)mk-801致精神分裂癥高活動(dòng)模型小鼠210分鐘內(nèi)自發(fā)活動(dòng)總路程及中央?yún)^(qū)活動(dòng)距離的影響(曠場(chǎng)試驗(yàn))

數(shù)據(jù)以mean±se表示，每組n＝10；^##p<0.01，模型組與對(duì)照組相比；^＊p<0.05，給藥組與模型組相比。

實(shí)驗(yàn)例4：本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone小鼠模型行為學(xué)變化的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模荷窠?jīng)炎癥、白質(zhì)病變、髓鞘脫失是中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病和精神障礙的重要發(fā)病機(jī)制。cuprizone(雙環(huán)己酮草酰二腙)可引起炎癥反應(yīng)、髓鞘脫失、軸突損傷、認(rèn)知功能損害等變化。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用y-迷宮和曠場(chǎng)行為試驗(yàn)研究了本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone小鼠模型記憶功能和運(yùn)動(dòng)情況的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：選擇spf級(jí)近交系c57bl/6雄性小鼠，體重(20±2)g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、本發(fā)明藥物組。小鼠先適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境3天，然后除了對(duì)照組給予正常飼料以外，其它各組均給予含0.2％cuprizone的飼料進(jìn)行造模，造模的同時(shí)各組灌胃相應(yīng)劑量的藥物，連續(xù)飼養(yǎng)5周，然后進(jìn)行y-迷宮和曠場(chǎng)行為測(cè)試。其中，y-迷宮的進(jìn)臂次數(shù)用來反映小鼠的運(yùn)動(dòng)情況；y-迷宮的自發(fā)性交替反應(yīng)(alternation)用來反映小鼠的工作記憶情況；曠場(chǎng)行為的自發(fā)活動(dòng)性用來反映小鼠的運(yùn)動(dòng)情況。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：y-迷宮試驗(yàn)的結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，cuprizone模型小鼠的進(jìn)臂次數(shù)增高，自發(fā)性交替反應(yīng)減低；本發(fā)明化合物p6、p5灌胃給藥能夠減低模型小鼠的進(jìn)臂次數(shù)(圖6)，增高自發(fā)性交替反應(yīng)(圖7)。曠場(chǎng)行為試驗(yàn)的結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，cuprizone模型小鼠的自發(fā)活動(dòng)總路程延長(zhǎng)；本發(fā)明化合物p6、p5灌胃給藥能夠縮短模型小鼠的自發(fā)活動(dòng)總路程(圖8)。結(jié)果表明本發(fā)明化合物能夠改善cuprizone模型小鼠的認(rèn)知功能和運(yùn)動(dòng)行為，減低模型小鼠的高活動(dòng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)例5：本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone小鼠模型髓鞘脫失的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模荷窠?jīng)白質(zhì)病變、髓鞘脫失是中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病和精神障礙的重要發(fā)病機(jī)制。cuprizone可引起髓鞘脫失和神經(jīng)白質(zhì)病變。髓鞘堿性蛋白(mbp)是軸突髓鞘化的標(biāo)志性蛋白，是髓鞘的主要組成成分。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用蛋白免疫印跡(westernblot)方法研究本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone模型小鼠腦內(nèi)mbp含量及髓鞘脫失的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：cuprizone小鼠造模與給藥方法同實(shí)驗(yàn)例11。小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)后，腹腔注射10％水合氯醛進(jìn)行麻醉，取腦，于-80℃保存。westernblot檢測(cè)：取腦組織用裂解液提取蛋白，測(cè)蛋白濃度。進(jìn)行sds-page凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉。于4℃冰箱與抗mbp抗體(一抗)孵育過夜。在tbst漂洗后，于4℃冰箱與二抗孵育2h。tbst洗膜后，在暗室中加入ecl發(fā)光液，壓片，曝光。各蛋白條帶的信號(hào)強(qiáng)度用fluorchem8900灰度分析軟件進(jìn)行分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：應(yīng)用westernblot方法檢測(cè)，結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，cuprizone模型組小鼠額葉皮層髓鞘堿性蛋白(mbp)含量明顯降低；本發(fā)明化合物p5、p4能夠顯著升高模型小鼠的mbp含量，表明具有改善髓鞘脫失的作用(圖9)。

結(jié)果提示本發(fā)明化合物可用于防治精神分裂癥、抑郁癥和其他精神障礙，以及腦血管病、脫髓鞘病、多發(fā)性硬化、炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病、缺血-缺氧性病引起的白質(zhì)腦病、糖尿病性神經(jīng)病等疾病。

實(shí)驗(yàn)例6：本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone小鼠模型小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模盒∧z質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多疾病的重要發(fā)病機(jī)制。iba-1能夠特異標(biāo)志小膠質(zhì)細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法研究本發(fā)明化合物對(duì)cuprizone小鼠模型腦內(nèi)iba-1標(biāo)志的小膠質(zhì)細(xì)胞的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：cuprizone小鼠造模與給藥方法同實(shí)驗(yàn)例11。小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)后，腹腔注射10％水合氯醛進(jìn)行麻醉。灌注后，取出腦組織，用15％多聚甲醛固定腦組織，然后進(jìn)行冰凍切片。免疫組織化學(xué)染色：冰凍切片用3％的h2o2滅活10min，pbs漂洗；10％的血清封閉，37℃孵育1h。洗出血清，滴加一抗(抗iba-1抗體)，4℃過夜。用pbst漂洗，滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育2h。用pbst漂洗，滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素三抗，37℃孵育2h。用pbs漂洗，dab試劑顯色，透明，封片。在顯微鏡下觀察iba-1陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，cuprizone模型組腦內(nèi)iba-1標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增多，表明小膠質(zhì)細(xì)胞活化，出現(xiàn)炎癥反應(yīng)；本發(fā)明化合物p6(25、50mg/kg)能夠明顯減少小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，表明能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，減輕炎性反應(yīng)(圖10)。

結(jié)果提示本發(fā)明化合物可用于防治精神分裂癥、抑郁癥等精神障礙，以及神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病、帕金森病)、腦血管病、腦創(chuàng)傷、脊髓損傷、脫髓鞘病、多發(fā)性硬化、炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

綜上所述，本發(fā)明提供了一類式i所示的結(jié)構(gòu)新穎的化合物，這些化合物能夠拮抗多巴胺2型受體，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活和神經(jīng)炎癥反應(yīng)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明化合物可降低mk-801小鼠模型的高活動(dòng)性，并能緩解其焦慮狀態(tài)；能夠改善cuprizone模型小鼠的記憶功能障礙、異常運(yùn)動(dòng)行為和高活動(dòng)性，并能抑制模型小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞活化和髓鞘脫失。這些結(jié)果表明本發(fā)明化合物具有防治多種精神障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的用途。

盡管本發(fā)明的具體實(shí)施方式已經(jīng)得到詳細(xì)的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，根據(jù)已經(jīng)公開的所有教導(dǎo)，對(duì)本發(fā)明細(xì)節(jié)進(jìn)行的各種修改和替換均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。