本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及槐定胺類衍生物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

槐定堿(sophoridine)是從豆科槐屬植物苦豆子中提取的生物堿單體，其具有廣泛的藥理學(xué)作用，例如抗腫瘤、抗病毒、抗炎等。2005年鹽酸槐定堿注射液被批準(zhǔn)上市，用于治療滋養(yǎng)細(xì)胞癌。槐定堿結(jié)構(gòu)(結(jié)構(gòu)如下所示)與現(xiàn)有抗癌化療藥結(jié)構(gòu)不同，是一類新型的抗癌新藥，目前對(duì)槐定堿結(jié)構(gòu)改造及其構(gòu)效關(guān)系研究較少，并且本領(lǐng)域?qū)Y(jié)構(gòu)新穎且具有較高活性的抗腫瘤藥物仍有巨大需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明人以槐定堿為先導(dǎo)化合物，通過(guò)對(duì)槐定堿的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造和修飾，得到了一類結(jié)構(gòu)新穎的具有優(yōu)異抗腫瘤活性的槐定胺類衍生物，本發(fā)明即是基于以上發(fā)現(xiàn)而完成。

本發(fā)明第一方面提供式i化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，

其中，

r1和r2各自獨(dú)立地代表氫、c1-6烷基、c1-6烷氧基、芳基(例如6-20元芳基)、雜芳基(例如6-20元雜芳基)、環(huán)烷基(例如3-20元環(huán)烷基)或脂雜環(huán)基(3-20元脂雜環(huán)基)，任選地，其中所述c1-6烷基、c1-6烷氧基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基和脂雜環(huán)基被一個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4、5或6個(gè))選自下述的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元環(huán)烷基、3-8元脂雜環(huán)基、6-15元芳基和5-15元雜芳基，其中，所述3-8元環(huán)烷基、3-8元脂雜環(huán)基、6-15元芳基和5-15元雜芳基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、氰基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基和c1-6烷氧基的取代基取代；或者，

r1和r2與相連的n原子一起形成脂雜環(huán)基(例如3-20元脂雜環(huán)基)，其中所述脂雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、氰基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基和c1-6烷氧基的取代基取代；

r3代表氫、鹵素、羥基、氨基、氰基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基和c1-6烷氧基；

n1代表0-10的整數(shù)(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)；

a代表-ch2-、-co-或-s(o)n2-，其中n2為0、1或2；

環(huán)x代表芳環(huán)(例如6-20元芳環(huán))或雜芳環(huán)(5-20元雜芳環(huán))；

代表碳氮單鍵或碳氮雙鍵，當(dāng)代表碳氮雙鍵時(shí)，r1不存在。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，r1和r2各自獨(dú)立地代表氫、c1-6烷基、6-15元芳基(例如苯基、萘基)、苯并3-6元雜環(huán)基、3-8元脂雜環(huán)基，任選地，其中所述c1-6烷基、6-15元芳基、苯并3-6元雜環(huán)基、3-8元脂雜環(huán)基被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自下述的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、氰基、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基，其中，所述c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧 基的取代基取代；或者，

r1和r2與相連的n原子一起形成3-8元脂雜環(huán)基，優(yōu)選5-6元脂雜環(huán)基，例如吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其中所述3-8元脂雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮單鍵或碳氮雙鍵，當(dāng)代表碳氮雙鍵時(shí)，r1不存在。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，r1為氫，r2代表氫、c1-6烷基、6-15元芳基(例如苯基、萘基)、苯并3-6元雜環(huán)基、3-8元脂雜環(huán)基，任選地，其中所述c1-6烷基、6-15元芳基、苯并3-6元雜環(huán)基、3-8元脂雜環(huán)基被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自下述的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、氰基、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基，其中，所述c1-4烷基、c1-4烷氧基和苯基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；或者，

r1和r2與相連的n原子一起形成3-8元脂雜環(huán)基，優(yōu)選5-6元脂雜環(huán)基，例如吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其中所述3-8元脂雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、羥基、氨基、三氟甲基、氰基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮單鍵。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，r1為氫，r2代表氫、c1-6烷基(優(yōu)選甲基和乙基)、苯基、1,3-苯并二噁茂基或嗎啉基，任選地，其中所述c1-6烷基、苯基、1,3-苯并二噁茂基和嗎啉基被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自下述的取代基取代：鹵素、三氟甲基、甲氧基、1,3-苯并二噁茂基以及任選地被一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、三氟甲基、甲基和甲氧基的取代基取代的苯基；或者，

r1和r2與相連的n原子一起形成哌嗪環(huán)，其中所述哌嗪環(huán)任選地被 一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3、4、5或6個(gè))選自鹵素、三氟甲基、甲基和甲氧基的取代基取代；

代表碳氮單鍵。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，r1為氫，r2選自4-氯-3-三氟甲基苯基、3,4,5-三甲氧基苯基、3,4,5-三甲氧基芐基、4-嗎啉基、1,3-苯并二噁茂基、1,3-苯并二噁茂-4-甲基和1,3-苯并二噁茂-4-乙基；或者，

r1和r2與相連的n原子一起形成4-甲基-哌嗪基；

代表碳氮單鍵。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，r3代表氫、鹵素(例如氟、氯、溴或碘)、羥基、氨基、氰基、c1-4烷基(例如甲基或以乙基)、鹵代c1-4烷基或c1-4烷氧基(例如甲氧基或乙氧基)，優(yōu)選地，r3代表鹵素，更優(yōu)選地，r3為氯。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)x為6-15元芳環(huán)或5-15元雜芳環(huán)，例如苯、萘、芴、吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、吡嗪、嘧啶、吲哚或嘌呤，優(yōu)選地，環(huán)x為苯。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，式i中為4-氯苯基。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，n1代表0-3的整數(shù)，更優(yōu)選地，n1為3。

在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，a代表-ch2-、-co-或-so2-。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述式i化合物選自以下化合物，

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(3,4,5-三甲氧基苯基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(n-嗎啉基)槐定亞胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(4-氯-3-三氟甲基苯基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基苯基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯芐基-4’-(n-甲基哌嗪基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯苯甲?；?4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯苯甲?；?4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯苯甲?；?4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯苯磺?；?4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺；

12-n-對(duì)氯苯磺?；?4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺；和

12-n-對(duì)氯苯磺?；?4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺。

本發(fā)明式i化合物可通過(guò)以下方法制備得到：

方法一：

步驟一，槐定堿經(jīng)開(kāi)環(huán)和酯化反應(yīng)得到槐定酸甲酯z0a；

步驟二，z0a經(jīng)n-烷基化得到z08；

步驟三，z08的酯基還原后得到c08；

步驟四，c08的羥基氧化后得到q08；

步驟五，q08的醛基與r1r2nh縮合(或經(jīng)還原胺化反應(yīng))得到目標(biāo)化合物target1；

方法二：

步驟1，化合物z0a的氨基經(jīng)boc保護(hù)得到12-n-boc-槐定酸甲酯；

步驟2，12-n-boc-槐定酸甲酯還原后得到12-n-boc-槐定醇；

步驟3，12-n-boc-槐定醇氧化后得到12-n-boc-槐定醛；

步驟4，12-n-boc-槐定醛與r1r2nh經(jīng)還原胺化反應(yīng)得到12-n-boc-槐定胺衍生物；

步驟5，12-n-boc-槐定胺衍生物經(jīng)脫保護(hù)反應(yīng)得到目標(biāo)化合物target2；

優(yōu)選地，當(dāng)r1r2nh中r1為氫時(shí)，在步驟5前還包括對(duì)12-n-boc-槐定胺衍生物中r2所連氨基進(jìn)行選擇性保護(hù)的步驟，例如，選擇性保護(hù)基可以為fmoc；

方法三：

步驟a，z0a經(jīng)n-磺酰化反應(yīng)得到磺酰胺hxz08；

步驟b，hxz08的酯基經(jīng)還原后得到hdc08；

步驟c，hdc08的醇經(jīng)氧化后得到hxq08；

步驟d，hxq08與r1r2nh經(jīng)還原胺化反應(yīng)得到目標(biāo)化合物target3。

本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)教科書的教導(dǎo)制備得到上述各化合物，對(duì)于具體的反應(yīng)條件本發(fā)明不作具體限定。

本發(fā)明的第二方面提供藥物組合物，其包含本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選地一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

本發(fā)明的第三方面提供本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療受試者所患癌癥的藥物中的用途。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥選自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、卵巢癌、淋巴瘤神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膠質(zhì)瘤和黑色素瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者為哺乳動(dòng)物，例如?？苿?dòng)物、馬科動(dòng)物、羊科動(dòng)物、豬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物；其中，特別優(yōu)選的受試者為人。

本發(fā)明的另一方面提供一種治療癌癥的方法，其包含向有需要的受試者施用有效量的本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥選自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、卵巢癌、淋巴瘤神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膠質(zhì)瘤和黑色素瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者為哺乳動(dòng)物，例如牛科動(dòng)物、馬科動(dòng)物、羊科動(dòng)物、豬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物；其中，特別優(yōu)選的受試者為人。

本發(fā)明的再一方面提供本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的式i化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療受試者所患的癌癥。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥選自肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、卵巢癌、淋巴瘤神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膠質(zhì)瘤和黑色素瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者為哺乳動(dòng)物，例如?？苿?dòng)物、馬科動(dòng)物、羊科動(dòng)物、豬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物；其中，特別優(yōu)選的受試者為人。

以下對(duì)本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)進(jìn)行解釋，對(duì)于特定的術(shù)語(yǔ)，如果本發(fā)明中的含義與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義不一致，以本發(fā)明中的含義為準(zhǔn)；如果在本發(fā)明中沒(méi)有定義，則其具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義。除非有相反陳述，本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)具有下述含義：

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“c1-6烷基”是指具有1-6(例如1、2、3、4、5或6)個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如c1-4烷基。所述c1-6烷基可被鹵素取代得到所述鹵代c1-6烷基，例如三氟甲基、三氟乙基等。具體的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基、戊基和己基等。

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“c1-6烷氧基”是指具有“c1-6烷基-o-”結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，例如c1-4烷氧基，其中c1-6烷基具有與前文所述“c1-6烷基”相同的含義。具體的實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、異丁氧基、戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、仲戊氧基、己氧基、2-己氧基和3-己氧基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指飽和或部分飽和的碳環(huán)，包括單環(huán)或多環(huán)，例如3-20元環(huán)烷基、3-15元環(huán)烷基、3-10元環(huán)烷基、3-8元環(huán)烷基、3-6元環(huán)烷基等。所述環(huán)烷基可任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氨基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元環(huán)烷基、3-8元 脂雜環(huán)基、6-15元芳基和5-15元雜芳基的取代基取代。環(huán)烷基具體的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“芳基”是指具有單環(huán)(如苯基)、多環(huán)(如萘基)或其中至少一個(gè)環(huán)是芳香性的稠合環(huán)(例如苯并3-6元雜環(huán)，如1,3-苯并二噁茂)的芳族碳環(huán)基，例如6-20元芳基、6-15元芳基等。所述芳基可任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氨基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元環(huán)烷基、3-8元脂雜環(huán)基、6-15元芳基和5-15元雜芳基的取代基取代。芳基或取代芳基的具實(shí)例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、茚基、苊基、1,3-苯并二噁茂、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、4-氯-3-三氟甲基苯基等。

本發(fā)明中所用術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”是指含有至少一個(gè)、至多四個(gè)選自n、o或s的雜原子的單環(huán)或多環(huán)，可分為脂雜環(huán)基和芳雜環(huán)基，其中所述脂雜環(huán)基包括例如3-20元脂雜環(huán)基、3-15元脂雜環(huán)基、3-10元脂雜環(huán)基、3-8(例如3、4、5、6、7或8)元脂雜環(huán)基、3-6元脂雜環(huán)基等，其中所述芳雜環(huán)基(也稱作雜芳基)包括例如5-20元雜芳基，5-15元雜芳基、5-10元雜芳基或5-8元雜芳基等。所述雜環(huán)基可任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氨基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、3-8元環(huán)烷基、3-8元脂雜環(huán)基、6-15元芳基和5-15元雜芳基的取代基取代。具體的實(shí)例包括但不限于環(huán)氧乙烷基、氧代環(huán)丁烷基、吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、哌啶基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吡啶基、吡喃基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、吲哚基或嘌呤基等。

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴以及碘。

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“一個(gè)或多個(gè)”是指一個(gè)或兩個(gè)以上，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)。

本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“光學(xué)異構(gòu)體”包括本發(fā)明式1化合物的所有可能的光學(xué)異構(gòu)體形式(例如對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體等)。

本發(fā)明式1化合物或其藥學(xué)可接受的鹽還可以形成溶劑化物，例如水合 物、醇合物等，一般來(lái)說(shuō)，與藥學(xué)可接受的溶劑如水、乙醇等形成的溶劑合物形式與非溶劑合物形式相當(dāng)。

本發(fā)明式i化合物還可以是前藥或可在體內(nèi)代謝變化后釋放出所述活性成分的形式。選擇和制備適當(dāng)?shù)那八幯苌锸潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知技術(shù)。

本文所用術(shù)語(yǔ)“有效量”是指足以實(shí)現(xiàn)所需治療效果的量，例如，實(shí)現(xiàn)減輕與待治療疾病相關(guān)的癥狀的量。

本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療”目的是減輕或消除所針對(duì)的疾病狀態(tài)或病癥。如果受試者按照本文所述方法接受了治療量的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物組合物，該受試者一種或多種指征和癥狀表現(xiàn)出可觀察到的和/或可檢測(cè)出的降低或改善，則受試者被成功地“治療”了。還應(yīng)當(dāng)理解，所述的疾病狀態(tài)或病癥的治療的不僅包括完全地治療，還包括未達(dá)到完全地治療，但實(shí)現(xiàn)了一些生物學(xué)或醫(yī)學(xué)相關(guān)的結(jié)果。

本文所用術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物、其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。藥物組合物的目的是促進(jìn)對(duì)生物體的給藥，利于活性成分的吸收進(jìn)而發(fā)揮生物活性。這里所述的載體包括但不限于：離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛脂。所述賦形劑是指在藥物制劑中除主藥以外的附加物。其性質(zhì)穩(wěn)定，與主藥無(wú)配伍禁忌，不產(chǎn)生副作用，不影響療效，在常溫下不易變形、干裂、霉變、蟲蛀、對(duì)人體無(wú)害、無(wú)生理作用，不與主藥產(chǎn)生化學(xué)或物理作用，不影響主藥的含量測(cè)定等。如片劑中的黏合劑、填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑；中藥丸劑中的酒、醋、藥汁等；半固體制劑軟膏劑、霜?jiǎng)┲械幕|(zhì)部分；液體制劑中的防腐劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、助溶劑、乳化劑、增溶劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、著色劑等均可稱為賦形劑。

本發(fā)明的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其溶劑合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以通過(guò)以下途徑給藥：胃腸外、局部、靜脈內(nèi)、口服、皮下、動(dòng)脈內(nèi)、真 皮內(nèi)、經(jīng)皮、直腸、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、肌內(nèi)途徑或作為吸入劑。所述組合物可以任選地與在治療各種疾病中至少有一定效果的其它試劑聯(lián)合給藥。

本發(fā)明的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽可根據(jù)給藥途徑配成各種適宜的劑型。

當(dāng)口服用藥時(shí)，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。任選地，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。

當(dāng)皮膚局部施用時(shí)，本發(fā)明化合物可制成適當(dāng)?shù)能浉?、洗劑或霜?jiǎng)┲苿┬问?，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。軟膏制劑可使用的載體包括但不限于：礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蠟和水；洗劑或霜?jiǎng)┛墒褂玫妮d體包括但不限于：礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、吐溫60、十六烷酯蠟、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。

本發(fā)明化合物還可以無(wú)菌注射制劑形式用藥，包括無(wú)菌注射水或油懸浮液或無(wú)菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。

本發(fā)明的藥物制劑包括藥學(xué)上可實(shí)施的任何制劑，例如口服制劑、腸胃外給藥制劑等。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，進(jìn)行合適的體外或體內(nèi)測(cè)定來(lái)確定本發(fā)明藥物組合物的效果以及給藥是否適用于治療個(gè)體所患疾病或醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)。這些測(cè)定的實(shí)例在下文非限制性實(shí)施例結(jié)合具體疾病或醫(yī)學(xué)治療進(jìn)行了描述。通常，足以實(shí)現(xiàn)預(yù)防或治療效果的本發(fā)明組合物的有效量為約0.001mg/千克體重/天至約10,000mg/千克體重/天。合適的情況下，劑量為約0.01mg/千克體重/天至約1000mg/千克體重/天。劑量范圍可以為每天、每?jī)商旎蛎咳旒s0.01至1000mg/kg宿主體重，更通常為0.1至500mg/kg宿主體重。示例性 的治療方案為每?jī)商煲淮位蛎恐芤淮位蛎吭乱淮谓o藥。通常多次給予所述試劑，單次劑量之間的間隔可以是每天、每周、每月或每年?；蛘?，可以以緩釋制劑的形式給予所述試劑，在這種情況下，需要較少的給藥頻率。劑量和頻率根據(jù)試劑在受試者中的半衰期而不同。也可以根據(jù)是預(yù)防性處理還是治療性處理而不同。在預(yù)防性應(yīng)用中，以相對(duì)低頻率的間隔長(zhǎng)期給予相對(duì)低的劑量。在治療性應(yīng)用中，有時(shí)需要以相對(duì)短的間隔給予相對(duì)高的劑量，直至疾病的進(jìn)展被延緩或停止，并優(yōu)選地直至個(gè)體表現(xiàn)出疾病癥狀的部分或完全改善，在此之后，可以給予患者預(yù)防方案。

發(fā)明的有益效果

本發(fā)明通過(guò)對(duì)槐定堿11位和12位進(jìn)行改造修飾得到一類結(jié)構(gòu)新穎的具有優(yōu)異抗腫瘤活性的化合物，例如對(duì)肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、卵巢癌、淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膠質(zhì)瘤和黑色素瘤具有較好的活性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物對(duì)肝癌具有與一線抗腫瘤藥物(例如拓?fù)涮婵祷蜃仙即?相當(dāng)甚至更好的治療效果。

附圖說(shuō)明

圖1為腹腔給藥后，溶劑對(duì)照組、多柔比星組和待測(cè)化合物組中裸鼠瘤體積變化曲線；

圖2為腹腔給藥后，溶劑對(duì)照組、多柔比星組和待測(cè)化合物組中裸鼠瘤體重變化曲線。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

一、本發(fā)明化合物的合成

實(shí)施例112-n-對(duì)氯芐基槐定醛(q08)的合成

步驟一：將槐定堿(4.96g,20mmol)均勻分散于50ml6nhcl水溶液中，回流反應(yīng)4小時(shí)，tlc檢測(cè)原料消失后，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑得黃色油狀物，加入50ml無(wú)水甲醇，室溫?cái)嚢鑳尚r(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓蒸干溶劑，得白色固體，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得到白色固體z0a。

步驟二：將上述白色固體z0a(2.81g,10.0mmol)懸浮于50ml1,2-二氯乙烷中，加入三乙胺(2.8ml,20.0mmol)，攪拌至溶解，加入對(duì)氯苯甲醛(2.1g,15.0mmol)，回流2小時(shí)后，緩慢加入三乙?；饸浠c(3.16g,15.0mmol)，繼續(xù)回流至tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，冷至室溫后，依次用20ml水，20ml飽和食鹽水洗滌，有機(jī)層蒸干后，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體z08。

步驟三：取四氫鋁鋰(0.5g,12.0mmol)懸浮于50ml無(wú)水四氫呋喃中，將z08(1.60g，4.0mmol)的四氫呋喃溶液15ml，緩慢加入上述體系中，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，冰浴條件下依次緩慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬滅反應(yīng)體系，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)后過(guò)濾，減壓蒸干濾液后，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得黃色固體c08。

步驟四：氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向干燥250ml三頸瓶中加入100ml無(wú)水二氯甲烷，冷至-78℃，依次緩慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亞砜(1.5ml,20mmol)，低溫?cái)嚢?分鐘后，將c08(3.7g,10mmol)的二氯甲烷溶液 20ml，緩慢注射到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)在-78℃反應(yīng)半小時(shí)后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室溫?cái)嚢璋胄r(shí)后，依次用50ml水，50ml飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色粘稠固體12-n-對(duì)氯芐基槐定醛q08。

實(shí)施例212-n-對(duì)氯芐基-4’-(3,4,5-三甲氧基苯基)槐定胺(a08a)的合成

將q08(1.1g,3.0mmol)溶于50ml無(wú)水甲醇中，加入3,4,5-三甲氧基苯胺(0.8g,4.5mmol)，回流4小時(shí)后，緩慢加入氰基硼氫化鈉(0.9g,4.5mmol)后，繼續(xù)回流4小時(shí)，冷至室溫后，減壓蒸干反應(yīng)體系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml飽和氯化銨溶液洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(1.1g,67％)。熔點(diǎn)：77-79℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.43–7.25(m,4h),5.86(s,2h),3.70(s,6h),3.62–3.54(m,1h),3.53(s,3h),3.50–3.44(m,1h),3.09–2.63(m,6h),2.50–2.37(m,3h),2.30–2.12(m,1h),2.13–1.84(m,3h),1.81–1.60(m,3h),1.61–1.43(m,6h),1.44–1.34(m,1h),1.30–1.11(m,3h),1.11–0.88(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.9,146.3(2),139.7(2),131.5,130.4,130.2,128.9(2),128.5(2),90.3,64.1,60.6,58.6(2),57.7,56.0,54.2,51.1,45.4,43.6,37.8,30.2,29.5,26.9,25.5,23.1,23.1,19.1；hrms:calcdforc31h44n3o3cl[m+h]⁺,542.3144,found,542.3147.

實(shí)施例312-n-對(duì)氯芐基-4’-(n-嗎啉基)槐定亞胺(a08b)的合成

將q08(1.1g,3.0mmol)溶于50ml無(wú)水甲醇中，加入4-氨基嗎啉(0.43ml,4.5mmol)，回流4小時(shí)后，冷至室溫，減壓蒸干反應(yīng)體系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml飽和氯化銨溶液洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(1.0g, 74％)。熔點(diǎn)：59-61℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.38–7.30(m,4h),6.93(t,j＝5.2hz,1h),3.73–3.65(m,4h),3.61–3.44(m,2h),3.01–2.89(m,1h),2.88–2.75(m,6h),2.71–2.60(m,1h),2.50–2.35(m,2h),2.25–1.87(m,6h),1.82–1.62(m,3h),1.58–1.37(m,5h),1.31–1.21(m,2h),1.17–1.10(m,1h),1.01(dd,j＝20.5,11.7hz,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ140.4,139.7,131.4,130.2(2),128.5(2),66.1(2),63.9,58.5,57.7,54.4,52.5(2),52.4,51.6,45.4,38.0,32.9,29.8,26.8,26.1,25.5,22.6,19.2；hrms:calcdforc26h39n4ocl[m+h]⁺,459.2885；found,459.2885.

實(shí)施例412-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺(a08c)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與2,3,-亞甲二氧基芐胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：66％)。熔點(diǎn)：62-64℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),11.14(s,1h),9.36(s,1h),9.25(s,1h),8.17–7.87(m,2h),7.70–7.47(m,2h),6.97–6.79(m,2h),6.78–6.62(m,1h),5.99(s,2h),4.51–4.34(m,1h),4.34–4.04(m,1h),3.92–3.71(m,1h),3.59(s,2h),3.41–3.11(m,5h),3.11–2.75(m,6h),2.76–2.55(m,2h),2.04–1.59(m,7h),1.56–1.17(m,4h),1.01–0.76(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.8,146.4,133.1,131.5,129.4(2),129.2(2),122.1,109.5,108.8,101.3,61.0,56.4,55.5,55.0,52.0,48.4,46.7,44.6,33.9,31.5,26.0,25.3,23.1,22.3,22.0,21.7,19.0,17.6；hrms:calcdforc30h40n3o2cl[m+h]⁺,510.2881,found,510.2883.

實(shí)施例512-n-對(duì)氯芐基-4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺鹽酸鹽(a08d)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與3,4,5-三甲氧基芐胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：71％)。熔點(diǎn)：65-67℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.59(s,1h),11.17(s,1h),9.68(s,1h),9.57(s,1h),7.97(d,j＝8.2hz,2h),7.53(d,j＝8.3hz,2h),7.08(s,2h),4.50–4.19(m,2h),4.12–3.89(m,5h),3.80(s,6h),3.67(s,3h),3.32–2.93(m,6h),2.93–2.79(m,2h),2.79–2.54(m,2h),2.03–1.55(m,9h),1.60–1.19(m,3h),1.00–0.74(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.2(2),138.2,134.7(2),133.1(2),129.4,129.2,127.9,108.3(2),65.3,61.1,60.4,56.6,55.5,55.0,52.0,50.6,46.3,44.6,33.9,26.0,25.3,25.2,23.2,22.3,22.1,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc32h46n3o3cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,556.3300；found,556.3306.

實(shí)施例612-n-對(duì)氯芐基-4’-(4-氯-3-三氟甲基苯基)槐定胺(a08e)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與4-氯-3-三氟甲基苯胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：68％)。熔點(diǎn)：71-73℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),11.12(s,1h),10.93(s,1h),8.12–7.77(m,2h),7.01(d,j＝8.7hz,3h),6.91–6.74(m,2h),4.52–4.34(m,1h),4.34–4.12(m,1h),3.88–3.69(m,1h),3.65–3.25(m,4h),3.24–2.76(m,3h),2.76–2.55(m,3h),2.43–1.98(m,2h),1.99–1.29(m,8h),1.29–1.14(m,2h),1.03–0.79(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ153.9,146.3,139.7,131.5,130.4,130.2,128.9(2),128.5(2),90.3,64.1,60.6,58.6,57.7,56.0,54.2,51.5,45.4,43.6,37.8,30.2,29.5,26.9,25.5,25.4,23.1,23.1,19.1；hrms:calcdforc29h36n3cl2f3[m+h]⁺,554.2311,found,554.2313.

實(shí)施例712-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺鹽酸鹽(a08f)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與2,3-亞甲二氧基苯乙胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：68％)。熔點(diǎn)：71-73℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ11.56(s,1h),11.15(s,1h),9.56(s,1h),9.47(s,1h),7.97(d,j＝8.2hz,2h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.29(d,j＝1.3hz,1h),7.08(dd,j＝8.0,1.4hz,1h),6.96(d,j＝7.9hz,1h),6.06(s,2h),4.48–4.12(m,5h),4.10–3.91(m,2h),3.87–3.69(m,1h),3.33–2.92(m,6h),2.92–2.77(m,2h),2.76–2.55(m,3h),2.01–1.56(m,9h),1.54–1.20(m,3h),0.95–0.77(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ148.1,147.7,133.1,129.4,129.2,125.9(2),124.6(2),110.9,108.6,101.7,65.3,63.3,61.1,55.5,55.0,52.0,50.0,49.0,46.0,44.6,33.8,26.0,25.2,23.2,22.3,22.1,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc31h42n3o2cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,524.3038；found,524.3032.

實(shí)施例812-n-對(duì)氯芐基-4’-(2,3-亞甲二氧基苯基)槐定胺鹽酸鹽(a08g)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與2,3-亞甲二氧基苯胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：71％)。熔點(diǎn)：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),11.46(s,1h),11.31(s,1h),11.06(s,1h),7.95(d,j＝8.0hz,2h),7.52(d,j＝8.3hz,2h),7.31–7.22(m,1h),7.14(d,j＝8.2hz,1h),7.06(d,j＝8.3hz,1h),6.09(s,2h),4.38(d,j＝11.3hz,1h),4.31–4.22(m,1h),3.78(d,j＝11.1hz,1h),3.34–3.02(m,7h),3.01–2.77(m,2h),2.74–2.66(m,1h),2.64–2.53(m,1h),2.50–2.35(m,1h),2.03–1.56(m,9h),1.54–1.23(m,3h),1.00–0.75(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ148.3,147.7,134.7,133.1,129.4(2),129.2(2),116.9,109.0,104.6,102.5,65.3,63.3,61.2,55.5,55.0,52.05,50.8,49.0,44.6,33.9,26.1,25.1,23.0,22.3,22.1,21.7,17.6；hrms:calcdforc29h38n3o2cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,496.2725,found,496.2723.

實(shí)施例912-n-對(duì)氯芐基-4’-(n-甲基哌嗪基)槐定胺鹽酸鹽(a08h)的合成

參考實(shí)施例3中方法，將q08與n-甲基哌嗪按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(收率：65％)。熔點(diǎn)：73-75℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.25(s,1h),12.15(s,1h),11.61(s,1h),11.16(s,1h),7.99(d,j＝7.9hz,2h),7.57(d,j＝7.9hz,2h),5.07(s,3h),4.50–4.16(m,1h),3.92–3.68(m,3h),3.66–3.35(m,5h),3.34–2.75(m,11h),2.73–2.53(m,2h),2.21–1.58(m,9h),1.60–1.23(m,3h),1.16–0.99(m,1h),1.01–0.80(m,1h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ134.7,133.1,129.5(2),129.2(2),65.3,60.9,55.5,55.0,52.1(2),51.9(2),49.9,48.5,44.6,42.5,26.1,25.1,23.0,22.8,22.3,21.9,21.7,17.6,15.6；hrms:calcdforc27h43n4cl.4hcl[m-4hcl+h]⁺,459.3249；found,459.3249.

實(shí)施例1012-n-對(duì)氯苯甲酰基-4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺鹽酸鹽(xa08c)的合成

可參考如下合成路線：

步驟1：將z0a(2.81g,10.0mmol)懸浮于50ml二氯甲烷中，加入碳酸鉀粉末(1.4ml,10.0mmol)，攪拌至溶解，加入二碳酸二叔丁酯(2.3ml,15.0mmol)，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，依次用50ml水、50ml飽和食鹽水洗滌后，無(wú)水硫酸鈉干燥后過(guò)濾，減壓蒸干，得12-n-boc-槐定酸甲酯粗品(2.53g)。

步驟2：將12-n-boc-槐定酸甲酯溶于100ml無(wú)水thf中，冰浴下緩慢加入lialh4(0.50g,12.5mmol)，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，冰浴下依次緩慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬滅反應(yīng)體系，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)后過(guò)濾，減壓蒸干后加二氯甲烷溶解，依次用50ml水、50ml飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥后過(guò)濾，減壓蒸干，得12-n-boc-槐定醇粗品(2.17g)。

步驟3：氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向干燥250ml三頸瓶中加入100ml無(wú)水二氯甲烷，冷至-78℃，依次緩慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亞砜(1.5ml,20mmol)，低溫?cái)嚢?分鐘后，將12-n-boc-槐定醇(3.5g,10mmol)的二氯甲烷溶液20ml緩慢注射到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)在-78℃反應(yīng)半小時(shí)后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室溫?cái)嚢璋胄r(shí)后，依次用50ml水，50ml飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，得12-n-boc-槐定醛粗品3.3g。

步驟4：將12-n-boc-槐定醛(0.35g,1.0mmol)溶于50ml無(wú)水甲醇中， 加入2,3-亞甲二氧基芐胺(0.2ml,1.5mmol)，回流4小時(shí)后，緩慢加入氰基硼氫化鈉(03g,1.5mmol)后，繼續(xù)回流4小時(shí)，冷至室溫后，減壓蒸干反應(yīng)體系，加入50ml二氯甲烷后，依次用20ml水，20ml飽和氯化銨溶液洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得12-n-boc-槐定胺(0.15g，43％)。

步驟5：將10ml12-n-boc-槐定胺(0.15g，0.43mmol)的二氧六環(huán)溶液加到20ml10％naco3水溶液中，冰浴下緩慢加入氯甲酸-9-芴基甲酯，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，50ml二氯甲烷提取兩次后，減壓蒸干得黃色粘稠狀固體。

步驟6：將步驟三中所得的固體溶于30ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，ph調(diào)至7-8，水洗后，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾后，加入對(duì)氯苯甲酰氯(170ul,1.5mmol)，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，依次用10ml水，10ml飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干后，加入10ml哌啶，室溫?cái)嚢?h，減壓蒸干，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物，加入10ml3n鹽酸乙醚溶液酸化過(guò)濾得白色固體(123mg,23％)。熔點(diǎn)：87-89℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.26(s,1h),9.39(s,1h),9.33(s,1h),7.53–7.44(m,3h),7.42–7.31(m,1h),7.29–7.18(m,1h),7.08–7.00(m,1h),7.01–6.89(m,1h),6.05(s,2h),4.09–3.96(m,2h),3.68–3.20(m,8h),3.23–3.03(m,2h),3.01–2.73(m,2h),2.45–2.31(m,1h),1.88–1.51(m,8h),1.43–1.34(m,1h),1.38–1.08(m,4h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.4,148.1,131.6,129.2,129.1,129.0,125.9(2),124.6(2),110.8,108.7,101.7,63.6,58.4,58.3,53.6,50.0,46.3,44.4,43.0,40.9,36.6,29.1,28.1,25.6,25.5,23.0,22.6,22.5,22.2,17.8；hrms:calcdforc30h38n3o3cl.3hcl[m-3hcl+h]⁺,524.2674；found,524.2674.

實(shí)施例1112-n-對(duì)氯苯甲?；?4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺(xa08d)的合成

參考實(shí)施例10的方法，將步驟4中的2,3-亞甲二氧基芐胺替換為3,4,5- 三甲氧基芐胺，并做相應(yīng)的后處理，終產(chǎn)品以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(收率：71％)。熔點(diǎn)：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.65–7.17(m,4h),7.05–6.76(m,2h),5.77(s,1h),3.67(s,6h),3.57–3.38(m,4h),3.37–3.20(m,3h),3.17(s,3h),3.14–2.78(m,5h),2.44–2.06(m,3h),1.98–1.50(m,7h),1.47–1.29(m,3h),1.27–1.07(m,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.3(2),153.7(2),135.5,135.4,134.5,134.3,129.2,129.1(2),129.0(2),60.5,58.4,56.6,53.7,52.2,49.0,46.5,44.4,40.8,36.6,30.0,29.2,28.1,27.3,25.6,23.39,23.0,22.2,17.8.

實(shí)施例1212-n-對(duì)氯苯甲酰基-4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺(xa08f)的合成

參考實(shí)施例10的方法，將步驟4中的2,3-亞甲二氧基芐胺替換為2,3-亞甲二氧基苯乙胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，終產(chǎn)品以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(收率：71％)。熔點(diǎn)：72-74℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.58–7.25(m,4h),6.96–6.80(m,2h),6.77–6.59(m,1h),5.99(s,2h),3.77–3.56(m,2h),3.54–3.32(m,6h),3.21–2.77(m,11h),2.44–2.07(m,1h),2.03–1.48(m,7h),1.47–1.04(m,4h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ169.4,147.8,146.4,135.4,134.5,131.5(2),129.2(2),122.1,109.4,108.8,101.3,72.6,66.8,60.5,58.4,53.6,49.03,48.3,46.9,39.0,36.6,31.5,29.4,28.17,25.1,25.8,23.6,22.4,17.8；hrms:calcdforc31h40n3o3cl[m+h]⁺,538.2831；found,538.2830.

實(shí)施例1312-n-對(duì)氯苯磺?；倍ㄈ?hxq08)的合成

步驟a：將z0a(2.81g,10.0mmol)懸浮于50ml二氯甲烷中，加入碳酸鉀粉末(1.4ml,10.0mmol)，攪拌至溶解，加入對(duì)氯苯磺酰氯(2.6g,15.0mmol)，室溫反應(yīng)8小時(shí)，tlc檢測(cè)原料消失，依次用20ml水，20ml飽和食鹽水洗滌，有機(jī)層蒸干后，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體hxz08。

步驟b：取四氫鋁鋰(0.5g,12.0mmol)懸浮于50ml無(wú)水四氫呋喃中，將hdz08(1.82g，4.0mmol)的四氫呋喃溶液15ml，緩慢加入上述體系中，室溫反應(yīng)至tlc檢測(cè)原料消失，冰浴條件下依次緩慢加入0.5ml水，0.5ml15％naoh水溶液1.5ml淬滅反應(yīng)體系，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)后過(guò)濾，減壓蒸干濾液后，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色油狀物hdc08。

步驟c：氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向干燥250ml三頸瓶中加入100ml無(wú)水二氯甲烷，冷至-78℃，依次緩慢滴加草酰氯(1.0ml,12mmol)和二甲基亞砜(1.5ml,20mmol)，低溫?cái)嚢?分鐘后，將hdc08(4.2g,10mmol)的二氯甲烷溶液20ml，緩慢注射到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)在-78℃反應(yīng)半小時(shí)后，加入三乙胺(5.6ml,40mmol)，室溫?cái)嚢璋胄r(shí)后，依次用50ml水，50ml飽和食鹽水洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得黃色粘稠固體12-n-對(duì)氯苯磺酰基槐定醛hxq08。

實(shí)施例1412-n-對(duì)氯苯磺酰基-4’-(2,3-亞甲二氧基芐基)槐定胺(hxa08c)的合成

將hxq08(1.2g,3.0mmol)溶于50ml無(wú)水甲醇中，加入2,3-亞甲二氧基芐胺(0.6ml,4.5mmol)，回流4小時(shí)后，緩慢加入氰基硼氫化鈉(0.9g,4.5mmol)后，繼續(xù)回流4小時(shí)，冷至室溫后，減壓蒸干反應(yīng)體系，加入50ml二氯甲烷后，依次用30ml水，30ml飽和氯化銨溶液洗滌，減壓蒸干有機(jī)相，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(1.0g,61％)。熔點(diǎn)：87-89℃；¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ7.87–7.74(m,2h),7.71–7.60(m,2h),7.11–7.01(m,1h),6.96–6.84(m,2h),6.02(s,2h),3.89–3.73(m,2h),3.73–3.62(m,1h),3.53–3.45(m,1h),2.97–2.71(m,4h),2.60–2.51(m,2h),2.47–2.33(m,1h),2.03–1.91(m,1h),1.79–1.67(m,2h),1.66–1.34(m,6h),1.33–0.98(m,8h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.7,147.2,140.4,137.7,129.9(2),128.9(2),123.1,109.8,108.5,101.4,59.3,57.6,53.9,51.4,47.3,45.1,45.0,37.6,29.3,28.4,27.3,26.6,25.3,24.4,24.2,18.7,15.6；hrms:calcdforc29h38n3o4cls[m+h]⁺,560.2344；found,560.2372.

實(shí)施例1512-n-對(duì)氯苯磺酰基-4’-(3,4,5-三甲氧基芐基)槐定胺(hxa08d)的合成

參考實(shí)施例14的方法，將hxq08與3,4,5-三甲氧基芐胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(收率：65％)。熔點(diǎn)：83-85℃；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.88–7.68(m,2h),7.69–7.53(m,2h),6.68(s,2h),3.76(s,6h),3.69–3.64(m,3h),3.63(s,3h),3.52–3.27(m,2h),2.84–2.62(m,4h),2.32(d,j＝10.5hz,1h),2.05–1.83(m,1h),1.81–1.48(m,5h),1.48–0.97(m,12h)；¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ153.1(2),140.5,137.7,136.6,135.8,129.8(2),128.9(2),105.7(2),60.4,59.5,57.6,56.2(2),54.2,53.2,48.62,45.3,45.1,38.0,29.6,29.0,28.9,26.4,25.8,24.8,24.6,18.9；hrms:calcdforc31h44n3o5cls[m+h]⁺, 606.2763；found,606.2786.

實(shí)施例1612-n-對(duì)氯苯磺?；?4’-(2,3-亞甲二氧基苯乙基)槐定胺(hxa08f)的合成

參考實(shí)施例14的方法，將hxq08與2,3-亞甲二氧基苯乙胺按該條件反應(yīng)，并做相應(yīng)的后處理，以二氯甲烷/甲醇為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱層析分離純化，得白色固體(收率：67％)。熔點(diǎn)：82-84℃；¹hnmr(500mhz,dmso)δ7.81(d,j＝8.6hz,2h),7.67(d,j＝8.6hz,2h),6.91–6.79(m,2h),6.74–6.61(m,1h),5.98(s,2h),3.66(t,j＝7.2hz,1h),3.53–3.44(m,1h),2.96–2.86(m,2h),2.86–2.70(m,6h),2.63(t,j＝7.4hz,2h),2.39–2.25(m,1h),2.03–1.82(m,1h),1.80–1.51(m,5h),1.51–1.37(m,3h),1.33–1.14(m,6h),1.12–0.95(m,3h)；¹³cnmr(125mhz,dmso-d6)δ147.7,146.1,140.5,137.7,129.9(2),128.9(2),122.0,109.4,108.6,101.2,65.4,59.4,57.6,54.1,49.6,47.9,45.2,45.0,37.8,33.2,29.3,27.1,26.5,25.6,24.7,24.2,18.8,15.6；hrms:calcdforc30h40n3o4cls[m+h]⁺,574.2500；found,574.2526.

實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物對(duì)體外細(xì)胞的抑制活性測(cè)定(ic50)

待測(cè)化合物：本申請(qǐng)實(shí)施例化合物；

拓?fù)涮婵担嘿?gòu)于中國(guó)藥品食品檢定院；

紫杉醇：購(gòu)于中國(guó)藥品食品檢定院；

用dmso將待測(cè)化合物配置成30mg/ml溶液，加入pbs配置成所需的五個(gè)梯度濃度，在96孔板上以4﹡10³的密度接種處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hepg2細(xì)胞(購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院)，貼壁生長(zhǎng)24h后加藥，每個(gè)化合物設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)dmso溶媒對(duì)照孔和無(wú)細(xì)胞調(diào)零孔。于37℃、5％co2條件下培養(yǎng)48h，每孔加入20μl5mg/mlmtt溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液后，每孔加入dmso液150μl，將培養(yǎng)板置于微孔板振蕩器上振蕩10分鐘，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔光吸收，測(cè)定波長(zhǎng)為492nm。根據(jù)各孔o(hù)d值計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞增殖抑制率。計(jì)算公式為抑制率(％)＝(1-化合物od492/對(duì) 照od492)×100。將各濃度梯度的抑制率數(shù)據(jù)導(dǎo)入sigmaplot軟件，計(jì)算ic50值。

表1槐定胺類衍生物抗肝癌hepg2細(xì)胞活性結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物的體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)用雌性balb/c小鼠(購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，將1×10⁷人肝癌細(xì)胞hepg2細(xì)胞(購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院)用pbs配置成0.2ml細(xì)胞懸液，無(wú)菌條件下在動(dòng)物右側(cè)腋窩皮下接種腫瘤。接種后三周脫頸處死，剝離腫瘤表層組織，剪碎成2mm×2mm瘤塊，接種于18-22g實(shí)驗(yàn)用balb/c裸鼠右側(cè)腋窩皮下，每組8只共3組：陽(yáng)性藥物對(duì)照組(dox，多柔比星(購(gòu)于中國(guó)藥品食品檢定院))、溶劑對(duì)照組(生理鹽水)和待測(cè)化合物組(化合物a08c)。接種腫瘤后72小時(shí)，a08c與多柔比星用0.9％生理鹽水溶解，分別配置成0.25mg/ml和0.1mg/ml的溶液，腹腔給藥量為 0.2ml/20g，對(duì)照組注射生理鹽水，每四天稱量體重，測(cè)量瘤塊直徑并計(jì)算瘤體積(瘤體積＝1/2×長(zhǎng)徑×短徑²)。接種后18天結(jié)束實(shí)驗(yàn)，稱體重，處死動(dòng)物，剝?nèi)∧[瘤并稱重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。

盡管本發(fā)明的具體實(shí)施方式已經(jīng)得到詳細(xì)的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)已經(jīng)公開(kāi)的所有教導(dǎo)，可以對(duì)本發(fā)明的細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。