本發(fā)明涉及食品包裝材料領(lǐng)域，具體涉及一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜及其制備方法。

背景技術(shù)：

可食性包裝膜由于能夠減少食品的風(fēng)味物質(zhì)散失和營養(yǎng)成分消耗，防止微生物侵染，能夠有效地延長食品貯藏保鮮和銷售期限，從而受到廣泛關(guān)注。在眾多的可食性包裝膜載體中，膠原蛋白因其安全無毒、營養(yǎng)豐富、良好的成膜性和氣體阻隔性能而備受青睞。但是膠原蛋白不具有抗菌活性，對食品表面在加工、儲運和處理過程中的污染的微生物不具有抑制或殺死的效果，因而其在食品保存期限的長度上有局限性。

另外，現(xiàn)有技術(shù)在制備包裝膜過程中，一般先制備出包裝膜成品材料，再將成品材料采用牛津杯法測得對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等的抑菌圈以測試成品材料的抗菌效果，如果測試得到的抗菌結(jié)果不好，還需調(diào)整抗菌劑的濃度重新制備包裝膜，然后再測試抗菌效果，直至得到抗菌效果良好的包裝膜成品材料，該制備方法缺乏科學(xué)的指導(dǎo)，制備方法復(fù)雜、耗時較長，浪費了大量的時間和精力。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，該方法先對溶菌酶的抗菌效果進(jìn)行測試，得出最小抑菌濃度及最小殺菌濃度后，用來指導(dǎo)抗菌膜的制備，使制備方法更有目的性和針對性，同時節(jié)省了大量的時間和精力。

本發(fā)明第一方面提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，包括以下步驟：

取改性的膠原蛋白溶液，將不同質(zhì)量的溶菌酶分別溶解在所述改性的膠原蛋白溶液中，攪拌均勻后，得到不同溶菌酶濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液；

將所述膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行最小抑菌濃度試驗，得到所述溶菌酶的最小抑菌濃度；

將具有所述最小抑菌濃度以及濃度大于所述最小抑菌濃度的所述膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行最小殺菌濃度試驗，得到所述溶菌酶的最小殺菌濃度；

將具有所述最小殺菌濃度以及濃度接近所述最小殺菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行真空脫氣、流延成膜后揭膜，制得膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜。

其中，所述最小抑菌濃度試驗方法為：

將不同質(zhì)量的溶菌酶分別溶解到改性的膠原蛋白溶液中，攪拌均勻后，得到溶菌酶濃度分別為100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195和0.098mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液，將大腸桿菌或與金黃色葡萄球菌菌懸液加入到所述膠原蛋白-溶菌酶共混液中，觀察所述膠原蛋白-溶菌酶共混液中是否有肉眼可見的細(xì)菌沉淀，無肉眼可見細(xì)菌沉淀的所述膠原蛋白-溶菌酶共混液對應(yīng)的最小的溶菌酶濃度即為膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶對大腸桿菌或?qū)瘘S色葡萄球菌的最小抑菌濃度。

其中，所述膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶對大腸桿菌或?qū)瘘S色葡萄球菌的最小抑菌濃度為6.25-12.5mg/ml。

其中，所述最小殺菌濃度試驗方法為：

將具有所述最小抑菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液以及濃度大于所述最小抑菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液分別加入到培養(yǎng)皿中與大腸桿菌或金黃色葡萄球菌37℃共培養(yǎng)24-48h，然后觀察所述培養(yǎng)皿中的細(xì)菌生長情況，無生長菌落的培養(yǎng)皿對應(yīng)的最小的溶菌酶濃度即為膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶對大腸桿菌或?qū)瘘S色葡萄球菌的最小殺菌濃度。

其中，所述膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶對大腸桿菌或?qū)瘘S色葡萄球菌 的最小殺菌濃度為12.5-25mg/ml。

其中，所述真空脫氣的方法為：在真空度0.08-0.09mpa的環(huán)境下將所述膠原蛋白-溶菌酶共混液脫氣3-6min，重復(fù)脫氣三次后，靜置0.5-1h。

其中，所述真空脫氣后，將所述膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行流延成膜，然后在30-60℃下干燥4-20h，冷卻后揭膜，得到膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜。

其中，所述改性的膠原蛋白溶液的制備方法為：將膠原蛋白溶于蒸餾水中，在20℃-60℃溫度下熱處理5-30min，得到所述改性的膠原蛋白溶液。

本發(fā)明第一方面提供的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，該方法先對溶菌酶的抗菌效果進(jìn)行測試，得出最小抑菌濃度及最小殺菌濃度后，用來指導(dǎo)抗菌膜的制備，使制備方法更有目的性和針對性，同時節(jié)省了大量的時間和精力。

本發(fā)明第二方面提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，其由上述的制備方法制得的。

其中，所述膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.08-0.12mm。

本發(fā)明第二方面提供的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，包括膠原蛋白和溶菌酶，兩者均可生物降解，生物相容性較好，另外，溶菌酶的抗菌性能較好，得到的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜具有抗菌防腐特性，能夠抑制貯藏過程中食品微生物的生長并避免食品的二次污染，從而延長食品的保質(zhì)期。

綜上，本發(fā)明有益效果包括以下幾個方面：

1、本發(fā)明提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，該制備方法先進(jìn)行抑菌試驗和殺菌試驗，然后在進(jìn)行成膜，制備方法具有目的性和針對性，節(jié)省了大量的時間和精力；

2、本發(fā)明提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，具有抗菌防腐特性，能夠抑制貯藏過程中食品微生物的生長并避免食品的二次污染，從而延長食品的保質(zhì)期。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法的流程圖；

圖2為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對大腸桿菌的最小抑菌濃度的細(xì)胞培養(yǎng)板圖；

圖3為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度的細(xì)胞培養(yǎng)板圖；

圖4為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對大腸桿菌的最小殺菌濃度的培養(yǎng)皿圖；

圖5為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度的培養(yǎng)皿圖。

具體實施方式

以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明第一方面提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，包括以下步驟：

取改性的膠原蛋白溶液，將不同質(zhì)量的溶菌酶分別溶解在改性的膠原蛋白溶液中，攪拌均勻后，得到不同溶菌酶濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液；

將膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行最小抑菌濃度試驗，得到溶菌酶的最小抑菌濃度；

將具有最小抑菌濃度以及濃度大于最小抑菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行最小殺菌濃度試驗，得到溶菌酶的最小殺菌濃度；

將具有最小殺菌濃度以及濃度接近最小殺菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行真空脫氣、流延成膜后揭膜，制得膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白為ⅰ型膠原蛋白。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白為從魚鱗、牛皮或豬皮中提取得到的。

本發(fā)明一優(yōu)選實施方式中，膠原蛋白為魚鱗膠原蛋白，魚鱗膠原蛋白的純度大于90％。

溶菌酶廣泛分布于各種生物組織及其分泌物中，是一種無味、無毒、無害、安全性很高的高鹽基蛋白質(zhì)，具有生物相容性好，對組織無刺激，且具有一定的保健作用。溶菌酶催化某些細(xì)菌細(xì)胞壁多糖的水解，從而溶解這些細(xì)菌的細(xì)胞壁。溶解酶的底物特異性很強，不同來源溶菌酶作用的底物不同。按作用細(xì)胞壁不同分為細(xì)菌細(xì)胞壁溶菌酶和真菌細(xì)胞壁溶菌酶。細(xì)菌細(xì)胞壁溶菌酶又細(xì)分為一種是作用于β-1,4糖苷鍵的細(xì)胞壁溶解酶，另一種是作用于肽鏈“尾”端和酰胺部分的細(xì)胞壁溶解酶。溶菌酶不僅對細(xì)菌有明顯的抑制作用，對真菌和病毒也有一定的抑制作用，在一定程度上能夠阻止或延緩食物變質(zhì)，同時延長食物貨架保存期，溶菌酶可以作為一種綠色食品防腐劑應(yīng)用于食品的防腐、保鮮和殺菌等方面的應(yīng)用。

本發(fā)明將膠原蛋白和溶菌酶混合用于制備膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，能抑制食品表面微生物的生長，從而達(dá)到食品保鮮及延長貨架期的效果。同時，膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜能被生物降解，不會對環(huán)境造成污染。

本發(fā)明實施方式中，改性的膠原蛋白溶液為將膠原蛋白進(jìn)行熱改性得到的。

本發(fā)明實施方式中，熱改性的方法為：將膠原蛋白溶于蒸餾水中，在20℃-60℃溫度下熱處理5-30min，得到改性的膠原蛋白溶液。

未改性的膠原蛋白難溶于水，力學(xué)性能和成膜能力差，改性后，膠原蛋白的交聯(lián)度較高，機械強度和熱穩(wěn)定較好，同時可以均勻分散在蒸餾水中，易于成膜。

本發(fā)明實施方式中，改性的膠原蛋白溶液的濃度為0.03g/ml-0.07g/ml。如果膠原蛋白溶液中膠原蛋白含量較少，將難以得到交聯(lián)性較好的抗菌膜，如果膠原蛋白較高，抗菌膜的制備成本就大大提高，因此，本發(fā)明改性的膠原蛋白溶液的濃度為0.03g/ml-0.07g/ml。

本發(fā)明一優(yōu)選實施方式中，改性的膠原蛋白溶液的濃度為0.05g/ml。

本發(fā)明實施方式中，攪拌速度為2000-5000r/min。

本發(fā)明實施方式中，不同濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的濃度分別為100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195和0.098mg/ml。

本發(fā)明實施方式中，最小抑菌濃度測試方法為：

將不同質(zhì)量的溶菌酶分別溶解到改性的膠原蛋白溶液中，攪拌均勻后，得到溶菌酶濃度分別為100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195和0.098mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液，將大腸桿菌或與金黃色葡萄球菌菌懸液加入到膠原蛋白-溶菌酶共混液中，觀察膠原蛋白-溶菌酶共混液中是否有肉眼可見的細(xì)菌沉淀，無肉眼可見細(xì)菌沉淀的膠原蛋白-溶菌酶共混液對應(yīng)的最小濃度即為溶菌酶對大腸桿菌或?qū)瘘S色葡萄球菌的最小抑菌濃度。

本發(fā)明實施方式提供的最小抑菌濃度測試方法，將膠原蛋白-溶菌酶共混液和菌懸液混合后，只需肉眼觀察膠原蛋白-溶菌酶共混液中是否含有細(xì)菌沉淀即可得到最小抑菌濃度即可，測試方法簡單、直觀，不需要將細(xì)菌和膠原蛋白-溶菌酶共混液培養(yǎng)一段時間再測試，易于操作。

本發(fā)明實施方式中，將不同的濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液置于96孔板中。測試最小抑菌濃度時一般是在試管中操作，但是采用試管操作時，耗費的溶液體積一般為幾十毫升，浪費較為嚴(yán)重。本發(fā)明采用96孔板進(jìn)行最小抑菌濃度試驗，每孔加入的溶液體積僅為幾毫升，大大節(jié)省了試驗成本。

本發(fā)明實施方式中，96孔板中大腸桿菌的菌落數(shù)為10⁴-10⁶cfu/ml。

本發(fā)明實施方式中，96孔板中金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)為10⁴-10⁶cfu/ml。

本發(fā)明實施方式中，最小殺菌濃度測試方法為：

將具有最小抑菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液以及濃度大于最小抑菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液分別加入到培養(yǎng)皿中與大腸桿菌或金黃色葡萄球菌37℃共培養(yǎng)24-48h，然后觀察培養(yǎng)皿中的細(xì)菌生長情況，無生長菌落的培養(yǎng)皿對應(yīng)的最小濃度即為最小殺菌濃度。

本發(fā)明實施方式中，培養(yǎng)皿中的大腸桿菌的菌落數(shù)為10⁴-10⁶cfu/ml。

本發(fā)明實施方式中，培養(yǎng)皿中的金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)為10⁴-10⁶cfu/ml。

本發(fā)明實施方式中，培養(yǎng)皿中含有瓊脂培養(yǎng)基。

本發(fā)明實施方式提供的最小殺菌濃度測試方法，在得到最小抑菌濃度結(jié)果后，根據(jù)最小抑菌濃度測試最小殺菌濃度，方法簡單、直觀，不需從多個不同的濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液中測試得到最小殺菌濃度，試驗過程較為簡短。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的最小抑菌濃度為6.25-12.5mg/ml。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的最小殺菌濃度為12.5-25mg/ml。

在具體試驗或生產(chǎn)過程中，可以根據(jù)實際需求選擇最終的膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的濃度，如為了膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的抗菌效果更好，可以選擇濃度大于最小殺菌濃度的膠原蛋白-溶菌酶共混液。

膠原蛋白與溶菌酶混合在一起時，容易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，例如膠原蛋白與溶菌酶通過氫鍵連接在一起，從而會影響溶菌酶的抗菌效果，因此膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的抗菌效果和單獨溶菌酶的抗菌效果是不同的?，F(xiàn)有技術(shù)測試溶菌酶的抗菌效果時，一般是將溶菌酶溶于水中，從而測試溶菌酶水溶液的抗菌效果。而本發(fā)明測試膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的抗菌效果，結(jié)果更準(zhǔn)確。

本發(fā)明實施方式中，將膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行真空脫氣的方法為：在真空度0.08-0.09mpa的環(huán)境下將膠原蛋白-溶菌酶共混液脫氣3-6min，重復(fù)脫氣三次后，靜置0.5-1h。脫氣的目的是為除去涂膜液中包裹的氣體，有助于得到分布均勻的抗菌膜。

本發(fā)明實施方式中，將膠原蛋白-溶菌酶共混液進(jìn)行流延成膜，在30-60℃下干燥4-20h，冷卻后揭膜，得到膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜。

本發(fā)明實施方式中，將膠原蛋白-溶菌酶共混液在有機玻璃板上流延成膜。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白-溶菌酶共混液定容至100ml后，再進(jìn)行流延成膜。

本發(fā)明實施方式中，干燥冷卻后揭膜，在溫度25±1℃，濕度為50±1％的恒溫恒濕箱中平衡48h，得到膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.08-0.12mm。

現(xiàn)有技術(shù)一般提供的抗菌膜的制備方法需要先制備出成品再采用測試抑菌圈直徑的方法來抗菌性能測試，抗菌測試方法往往需要3天才能測試完成，另外，該方法只能定性，無法直接得到抗菌膜的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度。如果抗 菌測試效果不好，還要調(diào)節(jié)原料的配比重新再測試制備抗菌膜，后續(xù)還要進(jìn)行抗菌測試，該制備方法較為盲目，缺乏指導(dǎo)，制備方法復(fù)雜繁瑣。

本發(fā)明第一方面提供的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，在制備抗菌膜之前先測試膠原蛋白-溶菌酶共混液中溶菌酶的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度，在得到最小抑菌濃度和最小殺菌濃度后，可以用來指導(dǎo)抗菌膜的制備，如可以確認(rèn)抗菌膜中溶菌酶含量為多少時抗菌效果較好，使抗菌膜的制備更有目的性和針對性，避免了現(xiàn)有技術(shù)需要重復(fù)多次制備抗菌膜造成的制備方法復(fù)雜的問題，方法簡單、直觀。

本發(fā)明第二方面提供了一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，其由上述的制備方法制得的。

本發(fā)明實施方式中，膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.08-0.12mm。

本發(fā)明提供的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，可用于食品包裝，尤其適用于深海魚的包裝。

本發(fā)明第二方面提供的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，包括膠原蛋白和溶菌酶，兩者均可生物降解，生物相容性較好，另外，溶菌酶的抗菌性能較好，得到的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜具有抗菌防腐特性，能夠抑制貯藏過程中食品微生物的生長并避免食品的二次污染，從而延長食品的保質(zhì)期。本發(fā)明得到的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜可以應(yīng)用于食品的保鮮。

實施例1：

參照圖1的制備方法流程示意圖，一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，包括以下步驟：

(1)膠原蛋白熱改性：稱取5g魚鱗膠原蛋白溶于95ml蒸餾水中，熱改性溫度為20℃，熱改性時間為30min，得到改性的膠原蛋白溶液；

(2)溶菌酶最小抑菌濃度試驗：稱取一定量溶菌酶，分別溶解在改性的膠原蛋白溶液，攪拌轉(zhuǎn)速為2000r/min，得到溶菌酶的最終濃度分別為100、50、25、 12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195和0.098mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液；

取無菌96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，將溶菌酶濃度分別為100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195和0.098mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液分別置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的第1排第1管至第11管中以及第2排的第1管至第11管中，然后在第2排第1管至第11管的每管內(nèi)加入大腸桿菌菌懸液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中大腸桿菌的菌落數(shù)約為10⁵cfu/ml；對照第1排，觀察第2排培養(yǎng)板中是否有肉眼可見的細(xì)菌沉淀，無肉眼可見細(xì)菌沉淀的培養(yǎng)板即澄清的培養(yǎng)板對應(yīng)的最小濃度即為溶菌酶對大腸桿菌的最小抑菌濃度。按照相同的方法，測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)約為10⁵cfu/ml。圖2為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對大腸桿菌的最小抑菌濃度的細(xì)胞培養(yǎng)板圖；圖3為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度的細(xì)胞培養(yǎng)板圖；從圖2中可以看出，第2排第1-5管為澄清，從第6管開始，溶液較為渾濁，因此，可以確定第5管對應(yīng)的溶菌酶的濃度為最小抑菌濃度，溶菌酶對大腸桿菌的最小抑菌濃度為6.25mg/ml。從圖3中可以看出，第2排第1-4管為澄清的試管，從第5管開始，溶液較為渾濁，因此，可以確定第4管對應(yīng)的溶菌酶的濃度為最小抑菌濃度，溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為12.5mg/ml。

(3)溶菌酶最小殺菌濃度試驗：

將濃度為6.25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液以及濃度為100、50、25和12.5mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液分別加入到5個瓊脂培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中通過畫板法接種大腸桿菌，培養(yǎng)皿中大腸桿菌的菌落數(shù)約為10⁵cfu/ml；37℃孵育24h后觀察培養(yǎng)皿中的細(xì)菌生長情況，無生長菌落的培養(yǎng)皿對應(yīng)的最小濃度即為溶菌酶對大腸桿菌的最小殺菌濃度。圖4為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對大腸桿菌的最小殺菌濃度的培養(yǎng)皿圖；從圖4中可以看出，第1-第3個培養(yǎng)皿中均沒有生長大腸桿菌菌落，從第4個培養(yǎng)皿開始長有菌落，可以確定最小抑菌濃度即為最小殺菌濃度為25mg/ml。按照相同的方法，測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度，將濃度為12.5mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液以及濃度為100、50和25mg/ml 的膠原蛋白-溶菌酶共混液分別加入到4個瓊脂培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中接種金黃色葡萄球菌，培養(yǎng)皿中金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)約為10⁵cfu/ml；37℃孵育24h后觀察培養(yǎng)皿中的細(xì)菌生長情況。圖5為本發(fā)明實施例1測試溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度的培養(yǎng)皿圖。從圖5中可以看出，第1-第3個培養(yǎng)皿中均沒有生長大腸桿菌菌落，從第4個培養(yǎng)皿開始長有菌落，因此，可以確定溶菌酶對金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度為25mg/ml。

(4)真空脫氣：將溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液冷卻至室溫(23℃)，在真空度0.08mpa環(huán)境下脫氣6min，重復(fù)三次，然后靜置0.5h。

(5)流延成膜：將膠原蛋白-溶菌酶共混液定容至100ml，即取100ml真空脫氣后的溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液流延至有機玻璃板上，在30℃下干燥20h，注意有機玻璃板保持水平。干燥冷卻后揭膜，在溫度25±1℃，濕度50±1％的恒溫恒濕箱中平衡48h，制得膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，該膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.08mm。

實施例2：

一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，包括以下步驟：

(1)膠原蛋白熱改性：稱取3g魚鱗膠原蛋白溶于97ml蒸餾水中，熱改性溫度為60℃，熱改性時間為5min，得到改性的膠原蛋白溶液；

(2)同實施例1的步驟(2)；

(3)同實施例1的步驟(3)；

(4)真空脫氣：將溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液冷卻至室溫(23℃)，在真空度0.09mpa環(huán)境下脫氣3min，重復(fù)三次，然后靜置1h；

(5)流延成膜：將膠原蛋白-溶菌酶共混液定容至100ml，即取100ml真空脫氣后的溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液流延至有機玻璃板上，在60℃下干燥4h，注意有機玻璃板保持水平。干燥冷卻后揭膜，在溫度25±1℃，濕度50±1％的恒溫恒濕箱中平衡48h，制得膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，該膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.10mm。

實施例3：

一種膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的制備方法，包括以下步驟：

(1)膠原蛋白熱改性：稱取7g魚鱗膠原蛋白溶于93ml蒸餾水中，熱改性溫度為40℃，熱改性時間為10min，得到改性的膠原蛋白溶液；

(2)同實施例1的步驟(2)；

(3)同實施例1的步驟(3)；

(4)真空脫氣：將溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液冷卻至室溫(23℃)，在真空度0.09mpa環(huán)境下脫氣4min，重復(fù)三次，然后靜置0.7h；

(5)流延成膜：將膠原蛋白-溶菌酶共混液定容至100ml，即取100ml真空脫氣后的溶菌酶濃度為25mg/ml的膠原蛋白-溶菌酶共混液流延至有機玻璃板上，在40℃下干燥10h，注意有機玻璃板保持水平。干燥冷卻后揭膜，在溫度25±1℃，濕度50±1％的恒溫恒濕箱中平衡48h，制得膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜，該膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的厚度為0.12mm。

效果實施例：

為有力支持本發(fā)明實施例的有益效果，提供效果實施例如下，用以評測本發(fā)明實施例提供的產(chǎn)品的性能。

將實施例1制得的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜用于包裝新鮮的三文魚，同時設(shè)置空白樣，空白樣指的是沒有做任何處理的三文魚，測試0-7天內(nèi)三文魚中總的微生物指標(biāo)。

表1

備注：n表示菌落太多，導(dǎo)致無法計數(shù)。

從表1中可以看出，采用膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜包裝的三文魚中的細(xì)菌含量比空白樣要顯著減少，這可以說明，采用本發(fā)明方法制得的膠原蛋白-溶菌酶抗菌膜的抗菌效果較好，可以很好地應(yīng)用于食品的包裝。

以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。