本發(fā)明涉及一種防治植物真菌病害并且促進(jìn)植物生長(zhǎng)的微生物菌肥，屬于微生物菌肥的制備
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：植物病害是嚴(yán)重危害農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的自然災(zāi)害之一，其中70%～80%的植物病害由致病真菌引起，同時(shí)致病真菌也是農(nóng)作物連坐障礙的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年世界糧食產(chǎn)量因真菌病害減產(chǎn)15%以上。植物真菌病害不僅直接造成農(nóng)作物產(chǎn)量下降、品質(zhì)降低還對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的安全性構(gòu)成極大的威脅。真菌病害一直也是影響我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)以及食品安全的重要問(wèn)題。目前，防治植物真菌病害主要采用的是化學(xué)殺菌劑。隨著化學(xué)殺菌劑的長(zhǎng)期使用，植物病原菌不僅對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗性，而且化學(xué)殺菌劑還對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重的影響。此外，為了提高農(nóng)作物產(chǎn)量，滿足糧食需求，化肥的使用量日益增加。我國(guó)是世界上最大的化肥生產(chǎn)和消費(fèi)國(guó)。過(guò)量施用化肥，造成土壤酸化、板結(jié)、肥力下降以及水體的污染。這種過(guò)量施用化學(xué)殺菌劑和化肥的不可持續(xù)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方式不僅嚴(yán)重污染了土地和水資源，還嚴(yán)重危害了人類健康。微生物殺菌劑和菌肥由于不污染環(huán)境，對(duì)人畜無(wú)害，不破壞土壤結(jié)構(gòu)，持久增強(qiáng)肥力，促進(jìn)作物的生長(zhǎng)，增加產(chǎn)量，改善農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)，符合綠色農(nóng)業(yè)和可持續(xù)農(nóng)業(yè)的發(fā)展，日益受到關(guān)注。隨著微生物類群的研究，目前應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的菌種達(dá)到110多種，但現(xiàn)有產(chǎn)品存在作用單一的問(wèn)題，其應(yīng)用受到一定的限制。為此，研制具有防治真菌病害和促進(jìn)生長(zhǎng)雙重作用的微生物菌肥成為該領(lǐng)域急需解決的課題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種防病抗病促生長(zhǎng)微生物菌肥。本發(fā)明的目的還在于提供一種防病抗病促生長(zhǎng)微生物菌肥的制備方法。本發(fā)明的構(gòu)思如下：從重茬種植的草莓地中選擇生長(zhǎng)旺盛植株的根際土壤，從中分離篩選對(duì)草莓以及其他農(nóng)作物致病真菌具有廣泛抗病活性的細(xì)菌，同時(shí)從健康的草莓根部分離篩選不僅有廣譜抗真菌活性還具有明顯促生長(zhǎng)的內(nèi)生細(xì)菌，經(jīng)培養(yǎng)制成微生物菌肥用于致病真菌的防治及促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)。從根際土壤中分離的具有廣譜抗真菌活性的細(xì)菌，經(jīng)鑒定為解淀粉芽孢桿菌，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心，地址：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏日期：2015年12月14日，保藏編號(hào)：CGMCC11871。分離得到具有明顯促進(jìn)植物生長(zhǎng)的內(nèi)生細(xì)菌，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心，地址：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏日期：2016年1月18日，保藏編號(hào)：CGMCC12063。將兩種細(xì)菌分別發(fā)酵得到菌懸液，混合制成微生物菌肥。具體的，本發(fā)明給出的防病抗病促生長(zhǎng)微生物菌肥由解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌分別發(fā)酵得到的菌懸液混合而成，每克產(chǎn)品的活菌總數(shù)大于2×108個(gè)，其中，兩種菌的數(shù)量比為，解淀粉芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌=（0.8～1.2）：（0.8～1.2）。解淀粉芽孢桿菌桿菌采用以下方法分離得到：以草莓常見(jiàn)病害灰霉病的病原菌灰葡萄孢菌為篩選菌，從重茬草莓根際土壤中分離篩選拮抗菌，從中得到一株對(duì)灰葡萄孢菌具有較強(qiáng)拮抗作用的細(xì)菌，經(jīng)試驗(yàn)，此菌還對(duì)其他作物常見(jiàn)致病真菌具有廣泛抗菌作用，經(jīng)過(guò)鑒定為解淀粉芽孢桿菌。動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)確認(rèn)安全后，保藏備用?？莶菅挎邨U菌采用以下方法分離得到：從草莓植株根部分離內(nèi)生菌，以病原菌灰葡萄孢菌為篩選菌，從中篩選抗真菌的內(nèi)生細(xì)菌，然后經(jīng)過(guò)促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)篩選，得到一株對(duì)種子發(fā)芽、植株的生長(zhǎng)具有明顯促進(jìn)作用的內(nèi)生菌。經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)確認(rèn)安全后，保藏備用。本發(fā)明給出的防病抗病促生長(zhǎng)微生物菌肥的制備方法包括以下步驟：（1）解淀粉芽孢桿菌菌懸液制備采用二級(jí)好氧分批發(fā)酵，種子培養(yǎng)基配方為：酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉10.0g，水1000mL，pH7.0～7.2；發(fā)酵培養(yǎng)基為：酵母膏8.0g，蛋白胨5.0g，氯化鈉10.0g，硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀3g，糖蜜50.0g，水1000mL，pH6.5～7.0，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%～3%的接種量接種，37℃，通氣量為0.2～0.8L/Lmin(每分鐘每升發(fā)酵液體積的通氣體積)培養(yǎng)36h～40h，得到濃度大于2×108個(gè)/mL發(fā)酵液；（2）枯草芽孢桿菌菌懸液制備由于解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)世代不同，所以采用分別培養(yǎng)。培養(yǎng)基與步驟（1）相同，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%～3%的接種量接種，37℃，通氣量為0.2～0.8L/Lmin(每分鐘每升發(fā)酵液體積的通氣體積)培養(yǎng)32h～36h，得到濃度大于2×108個(gè)/mL發(fā)酵液；（3）將解淀粉芽孢桿菌菌懸液和枯草芽孢桿菌菌懸液按體積比1：1混合，得到活菌數(shù)大于2×108個(gè)/mL混合菌液，最終pH為6.0～7.0，分裝得到成品。本發(fā)明制備的防病抗病促生長(zhǎng)微生物菌肥應(yīng)用在以下方面：（1）應(yīng)用于土壤改良及防治土傳真菌病害。經(jīng)稀釋10～50倍之后，噴灑到土壤表面，用于土壤改良和防治土傳真菌病害。（2）用于植物葉面和果實(shí)真菌病害防治及促生長(zhǎng)。經(jīng)稀釋200倍以后，噴灑到植株表面，用于葉面及果實(shí)真菌病害防治，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。（3）應(yīng)用范圍包括蔬菜、水果和農(nóng)作物。本發(fā)明取得的有益效果是：由解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的混合菌劑，可應(yīng)用于蔬菜、水果及農(nóng)作物，起到防治真菌病害、消除連作障礙、促進(jìn)生長(zhǎng)、增加產(chǎn)量的作用。避免了同類產(chǎn)品效果差、效果單一等缺點(diǎn)。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1一種防病抗病促生長(zhǎng)混合菌肥，其組成按活菌數(shù)比表示為：解淀粉芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌＝1.1：0.9；且每克產(chǎn)品的活菌總數(shù)為3.1×108個(gè)/g。其制備方法是：（1）解淀粉芽孢桿菌菌懸液制備采用二級(jí)好氧分批發(fā)酵。種子培養(yǎng)基配方為：酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉10.0g，水1000mL，pH7.0；發(fā)酵培養(yǎng)基為：酵母膏8.0g，蛋白胨5.0g，氯化鈉10.0g，硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀3g，糖蜜50.0g，水1000mL，pH6.8。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的接種量接種，37℃，通氣量為0.4L/Lmin(每分鐘每升發(fā)酵液體積的通氣體積)培養(yǎng)38h，得到濃度為3.4×108個(gè)/mL發(fā)酵液。（2）枯草芽孢桿菌菌懸液制備采用二級(jí)好氧分批發(fā)酵。培養(yǎng)基同解淀粉芽孢桿菌。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的接種量接種，37℃，通氣量為0.8L/Lmin(每分鐘每升發(fā)酵液體積的通氣體積)培養(yǎng)36h，得到濃度為2.8×108個(gè)/mL發(fā)酵液。（3）將解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的菌懸液按體積比1：1混合，得到活菌數(shù)為3.1×108個(gè)/mL混合菌液，最終pH為6.4，分裝得到成品。產(chǎn)品的性能：產(chǎn)品效力以產(chǎn)品中各種菌的活菌數(shù)表示(個(gè)/g)。每克產(chǎn)品活菌總數(shù)為3.1×108個(gè)/g，其中解淀粉芽孢桿菌為1.7×108個(gè)/g，枯草芽孢桿菌為1.4×108個(gè)/g。產(chǎn)品應(yīng)用效果：2013年9月至2014年5月，在山東省臨沂市蘭陵縣向城鎮(zhèn)曹灣村進(jìn)行應(yīng)用效果實(shí)驗(yàn)。因本地點(diǎn)連續(xù)幾年種植大棚黃瓜，有較大機(jī)率發(fā)生連坐障礙（重茬）。黃瓜品種為德瑞特。實(shí)施過(guò)程為2013年9月整地施肥，9月17日育苗，11月20日定植，畦寬40cm，株距25cm。2014年2月開(kāi)始采摘計(jì)產(chǎn)，以后每隔半月采摘計(jì)產(chǎn)一次，2014年5月20日收秧計(jì)產(chǎn)結(jié)束。分組及施用方法如下：處理組：在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，每畝將2L菌液稀釋至30kg中，均勻噴灑在土壤表面，播種。12月，每畝將1L菌液在灌溉時(shí)隨水沖施。開(kāi)花前，每畝用150mL菌液稀釋至30L水中，葉面均勻噴施一次，然后每隔20天噴施一次，共三次。澆水次數(shù)和用量同對(duì)照組。對(duì)照組1：為常規(guī)施肥，即整地時(shí)施用復(fù)合肥100kg/畝，雞糞15方/畝，硫酸鉀75kg/畝，中間不再追肥。12月起，每隔一星期施用百菌清一次，澆水一次。對(duì)照組2：在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，每次施用菌肥時(shí)，施用等量的清水。12月起，每隔一星期施用百菌清一次，澆水一次。（1）菌肥對(duì)黃瓜抗病生長(zhǎng)的效果對(duì)蘭陵縣向城鎮(zhèn)曹灣村示范點(diǎn)每處取4各點(diǎn)，每點(diǎn)依次取4株，對(duì)株高、節(jié)間、果位徑粗、瓜長(zhǎng)、單果重進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及差異性比較。表1菌肥對(duì)黃瓜抗病生長(zhǎng)的效果抗病促生長(zhǎng)菌肥可以代替農(nóng)藥百菌清起到抗病效果，并顯著增加黃瓜單果的重量。（2）菌肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的效果處理和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小區(qū)面積為30m2，各三個(gè)重復(fù)。表2菌肥對(duì)黃瓜增產(chǎn)分組小區(qū)產(chǎn)量（kg/30m2）畝產(chǎn)（kg）增產(chǎn)（kg）增產(chǎn)率（%）增加效益（元、/畝）處理組507.7±3.1a11282.01154.911.404041.8對(duì)照組1455.6±4.810127.2---對(duì)照組2455.9±4.510131.64.40.0415.40實(shí)施例2一種防病抗病促生混合菌肥，其組成按活菌數(shù)比表示為：解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌＝1.0：1.0；且每克產(chǎn)品的活菌總數(shù)2.92×108個(gè)/g。其制備方法與實(shí)施例1相同。產(chǎn)品性能：產(chǎn)品效力以產(chǎn)品中各種菌的活菌數(shù)表示(個(gè)/g)，每克產(chǎn)品活菌總數(shù)為2.92×108個(gè)/g，其中，解淀粉芽孢桿菌為1.46×108個(gè)/g，枯草芽孢桿菌為1.46×108個(gè)/g。產(chǎn)品應(yīng)用效果：2014年10月至2015年6月，在河北省石家莊市欒城去冶河鎮(zhèn)燁河村進(jìn)行菌肥對(duì)小麥的應(yīng)用效果實(shí)驗(yàn)。小麥品種為石新828。常規(guī)實(shí)施過(guò)程為2014年10月5日整地施肥，播種，播種量為13.5kg/畝，2015年3月25日化學(xué)除草劑進(jìn)行化學(xué)除草。2015年3月27追肥澆水，5月12小麥病蟲(chóng)害防治，6月10小區(qū)取樣測(cè)定產(chǎn)量。分組及施用方法如下：對(duì)照組：常規(guī)管理。處理組：在整地施肥的基礎(chǔ)上，每畝使用菌肥750mL菌液稀釋至30L中，均勻噴灑在土壤表面，播種。于小麥分蘗拔節(jié)期和抽穗期使用菌肥250mL稀釋至50L進(jìn)行葉面噴施各一次。常規(guī)化學(xué)除草和澆水，不進(jìn)行常規(guī)的追肥和病蟲(chóng)害防治。處理和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)面積為50m2，各三個(gè)重復(fù)。（1）菌肥對(duì)小麥生長(zhǎng)的效果分組基本苗（萬(wàn)）次生根（個(gè)）分蘗數(shù)（個(gè)）處理組85.7±0.85.17±0.12.47±0.14對(duì)照組75.9±0.45.13±0.092.9±0.06（2）菌肥對(duì)小麥產(chǎn)量的效果分組畝穗數(shù)（萬(wàn)）穗粒數(shù)（個(gè)）千粒重（g）畝產(chǎn)（kg）增產(chǎn)/畝（kg）增產(chǎn)率（%）處理組51.4±0.234.1±0.0541.0±0.3610.8±1.2888.7416.97對(duì)照組50.0±0.331.1±0.0439.5±0.5522.1±2.16--當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3