本發(fā)明涉及一種高度選擇性的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK4/6)抑制劑的二羥乙基磺酸鹽的結(jié)晶形態(tài)，特別是6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-[5-(1-哌嗪基)吡啶-2-氨基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的二羥乙基磺酸鹽(式(I)化合物)的I、II、III型結(jié)晶。

背景技術(shù)：

全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢。美國8名婦女一生中就會(huì)有1人患乳腺癌。中國不是乳腺癌的高發(fā)國家，但不宜樂觀，近年我國乳腺癌發(fā)病率的增長速度卻高出高發(fā)國家1～2個(gè)百分點(diǎn)。據(jù)國家癌癥中心和衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發(fā)病數(shù)據(jù)顯示：全國腫瘤登記地區(qū)乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位。乳腺癌已成為當(dāng)前社會(huì)的重大公共衛(wèi)生問題。

常規(guī)的乳腺癌治療方法有外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療和內(nèi)分泌治療。隨著研究的深入，有越來越多的治療方法和藥物已經(jīng)用于臨床，這使得乳腺癌患者的長期生存率較以往有較大程度的提高。例如，乳腺癌術(shù)后采用輔助化療或放療，可使復(fù)發(fā)率降低約20-40％。但是，對于已經(jīng)轉(zhuǎn)移了的乳腺癌來說，用常規(guī)的治療手段不但沒有令人滿意的療效，而且往往還伴有病人難受忍受的副作用，甚至是反作用。

近年來，乳腺癌治療研究的一個(gè)熱點(diǎn)就是靶向治療，其特點(diǎn)是集中作用于腫瘤組織、細(xì)胞或基因，選擇性地殺滅腫瘤細(xì)胞，但對人體正常組織細(xì)胞損傷較小。因此，與常規(guī)治療方法相比，靶向治療不僅可以提高療效，還可以降低副作用的發(fā)生率。分子靶向治療作為乳腺癌治療的新領(lǐng)域已被廣為重視。

目前，包括輝瑞、禮來和諾華等一些醫(yī)藥公司陸續(xù)報(bào)道了一系列選擇性較好的CDK4/6抑制劑，正在進(jìn)行臨床研究，而目前最受關(guān)注 的CDK4/6抑制劑就是輝瑞開發(fā)的Palbociclib。CDK4/6作為抗腫瘤靶點(diǎn)的優(yōu)勢在于：(1)大多數(shù)增殖的細(xì)胞依賴CDK2或者CDK4/6增殖，但CDK4/6的抑制劑不表現(xiàn)出“泛-CDK抑制劑”的細(xì)胞毒性，如骨髓抑制和腸道反應(yīng)。(2)臨床前實(shí)驗(yàn)表明，如果細(xì)胞cyclin D水平升高或者P161NK4a失活，能夠增加細(xì)胞對藥物的敏感性，由于腫瘤細(xì)胞相對于正常細(xì)胞存在上述現(xiàn)象，所以一定程度上增加了藥物的靶向性。

Palbociclib在臨床上療效顯著，在絕經(jīng)后婦女ER陽性/HER2陰性乳腺癌的研究中取得令人印象深刻的結(jié)果。2013年4月，F(xiàn)DA授予其“突破性療法”的資格。ER陽性/HER2陰性的乳腺癌占所有乳腺癌患者總數(shù)的百分之六十。因此，Palbociclib的市場前景廣闊。

CN1835951A公開了Palbociclib的單羥乙基磺酸鹽，并認(rèn)為該化合物為二元堿化合物，也可以生成二羥乙基磺酸鹽，但不如單－羥乙基磺酸鹽，也沒有研究二－羥乙基磺酸鹽的性狀及其晶型。

藥用的活性成分的晶型結(jié)構(gòu)往往影響到該藥物的化學(xué)穩(wěn)定性，結(jié)晶條件及儲(chǔ)存條件的不同有可能導(dǎo)致化合物的晶型結(jié)構(gòu)的變化，有時(shí)還會(huì)伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。因此，對藥物晶型的研究，特別是藥物穩(wěn)定晶型的研究，對藥物的后續(xù)開發(fā)具有十分重要的意義。令我們驚喜的是發(fā)現(xiàn)了Palbociclib的二羥乙基磺酸鹽的I、II、III型結(jié)晶，通過晶型的穩(wěn)定性研究，我們發(fā)現(xiàn)I晶型具備良好的晶型穩(wěn)定性，且制備工藝可控可重復(fù)，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-[5-(1-哌嗪基)吡啶-2-氨基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的二羥乙基磺酸鹽(如式(I)所示)的多晶型物。

式(I)所示化合物在不同結(jié)晶條件下得到了一系列結(jié)晶產(chǎn)物，對 所得結(jié)晶產(chǎn)物進(jìn)行了X-衍射及DSC檢測，發(fā)現(xiàn)式(I)所示化合物在本發(fā)明特定的結(jié)晶條件下，可以得到I型結(jié)晶、II型結(jié)晶、III型結(jié)晶。

本發(fā)明一方面提供了式(I)所示化合物的I型結(jié)晶，其特征在于下述中的一種或多種，其DSC圖譜顯示在275.69℃附近有熔融吸熱峰，X-射線粉末衍射圖譜如圖1所示，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度和晶面間距(d值)表示的X-射線粉末衍射圖譜，其中在4.32(20.44)，6.37(13.86)，9.78(9.04)，12.74(6.94)，13.94(6.35)，14.74(6.00)，16.93(5.23)，17.79(4.98)，19.13(4.64)，20.42(4.34)，21.56(4.12)，22.26(3.99)，23.46(3.79)，24.29(3.66)，25.75(3.46)，26.49(3.36)，28.07(3.18)和29.78(3.00)有特征峰。

該I型結(jié)晶可通過將任意晶型或無定型的式(I)所示化合物在乙醇或乙醇和水的混合溶劑中析晶然后過濾、洗滌、干燥得到。乙醇和水的比例沒有特殊限制，在本發(fā)明的的一個(gè)實(shí)施例中體積比為9:1。

本發(fā)明另一方面提供了式(I)所示化合物的II型結(jié)晶，其特征在于下述中的一種或多種，其DSC圖譜顯示在274.80℃附近有熔融吸熱峰，X-射線粉末衍射圖譜如圖3所示，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度和晶面間距(d值)表示的X-射線粉末衍射圖譜，其中在4.31(20.50)，5.45(16.20)，6.72(13.14)，7.87(11.23)，9.59(9.21)，11.59(7.63)，13.07(6.77)，13.46(6.57)，13.94(6.35)，16.14(5.49)，16.30(5.41)，18.23(4.86)，19.30(4.60)，20.35(4.36)，20.91(4.24)，21.50(4.13)，23.16(3.84)，24.52(3.63)，25.01(3.56)，26.97(3.30)和28.19(3.16)有特征峰。

該II型結(jié)晶可通過將任意晶型或無定型的式(I)所示化合物在甲醇或甲醇和水的混合溶劑中析晶然后過濾、洗滌、干燥得到。甲醇和水的比例沒有特殊限制，在本發(fā)明的的一個(gè)實(shí)施例中體積比為9:1。

本發(fā)明提供了式(I)所示化合物的III型結(jié)晶，其特征在于下述中的一種或多種，其DSC圖譜顯示在277.16℃附近有熔融吸熱峰，X-射線粉末衍射圖譜如圖1所示，使用Cu-Ka輻射，以2θ角度和晶面間距(d值)表示的X-射線粉末衍射圖譜，其中在3.00(29.40)，5.99(14.74)，7.80(11.32)，8.97(9.85)，12.32(7.18)，15.03(5.89)，18.02(4.92)，19.00(4.67)，20.91(4.24)，22.95(3.87)，24.86(3.58)，27.20(3.28) 和30.24(2.95)有特征峰。

該III型結(jié)晶可通過將任意晶型或無定型的式(I)所示化合物在異丙醇、丙酮或乙腈以及它們中的一種或幾種與水的混合溶劑中析晶然后過濾、洗滌、干燥得到。異丙醇、丙酮或乙腈和水的比例沒有特殊限制，在本發(fā)明的的一個(gè)實(shí)施例中體積比為9:1。

重結(jié)晶的方法沒有特別限定，可以用通常的重結(jié)晶操作方法進(jìn)行。例如，可以用原料式(I)所示化合物在溶劑中加熱溶解后慢慢冷卻析晶，結(jié)晶完成后，經(jīng)過濾干燥，即可得到所需要的結(jié)晶。需特別說明的是，所濾取的結(jié)晶體通常在減壓下，在30～100℃左右，優(yōu)選40～60℃的加熱條件下進(jìn)行真空干燥，就能達(dá)到去除重結(jié)晶溶劑的效果。

通過差示掃描熱分析(DSC)、X-衍射圖譜測定，對得到的式(I)所示化合物結(jié)晶體進(jìn)行了晶型研究，同時(shí)對所得結(jié)晶的溶劑殘留進(jìn)行了檢測。

按照本發(fā)明的方法制備的式(I)所示化合物I、II、III型結(jié)晶不含有或僅含有較低含量的殘留溶劑，符合國家藥典規(guī)定的有關(guān)醫(yī)藥產(chǎn)品殘留溶劑的限量要求，因而本發(fā)明的結(jié)晶可以較好地作為醫(yī)藥活性成分使用。

經(jīng)研究表明，本發(fā)明制備的式(I)所示化合物I、II、III型結(jié)晶在光照、高溫、高濕的條件下穩(wěn)定性良好，且在研磨、壓力和受熱等條件下，晶型穩(wěn)定性良好，能夠滿足生產(chǎn)運(yùn)輸儲(chǔ)存的藥用要求，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可重復(fù)可控，能夠適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1表示式(I)所示化合物I型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖2表示式(I)所示化合物I型結(jié)晶的DSC譜圖。

圖3表示式(I)所示化合物II型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖4表示式(I)所示化合物II型結(jié)晶的DSC譜圖。

圖5表示式(I)所示化合物III型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖6表示式(I)所示化合物III型結(jié)晶的DSC譜圖。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合實(shí)施例更詳細(xì)地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。

實(shí)驗(yàn)所用的測試儀器

1、DSC譜

儀器型號(hào)：Mettler Toledo DSC 1Stare^e System

吹掃氣：氮?dú)?/p>

升溫速率：10.0℃/min

溫度范圍：40-350℃

2、X-射線衍射譜

儀器型號(hào)：Bruker D8Focus X-射線粉末衍射儀

射線：單色Cu-Kα射線(λ＝1.5406)

掃描方式：θ/2θ，掃描范圍：2-40°

電壓：40KV，電流：40mA

實(shí)施例1

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入16ml 90％乙醇，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.71g，收率為71.0％。該結(jié)晶樣品的X-射線衍射譜圖見圖1。該結(jié)晶在約4.32(20.44)，6.37(13.86)，9.78(9.04)，12.74(6.94)，13.94(6.35)，14.74(6.00)，16.93(5.23)，17.79(4.98)，19.13(4.64)，20.42(4.34)，21.56(4.12)，22.26(3.99)，23.46(3.79)，24.29(3.66)，25.75(3.46)，26.49(3.36)，28.07(3.18)和29.78(3.00)處有特征峰。DSC譜圖見圖2，在275.69℃附近有尖銳吸熱峰，我們定義為I晶型。

實(shí)施例2

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到50ml單口瓶中，加入20ml 90％甲醇，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.28g，收率為28.0％。該結(jié)晶樣品的X-射線衍射譜圖見圖3。該結(jié)晶在約4.31(20.50)，5.45(16.20)，6.72(13.14)，7.87(11.23)，9.59(9.21)，11.59(7.63)，13.07 (6.77)，13.46(6.57)，13.94(6.35)，16.14(5.49)，16.30(5.41)，18.23(4.86)，19.30(4.60)，20.35(4.36)，20.91(4.24)，21.50(4.13)，23.16(3.84)，24.52(3.63)，25.01(3.56)，26.97(3.30)和28.19(3.16)處有特征峰。DSC譜圖見圖4，在274.80℃附近有尖銳吸熱峰，我們定義為II晶型。

實(shí)施例3

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到50ml單口瓶中，加入35ml 90％異丙醇，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.83g，收率為83.0％。該結(jié)晶樣品的X-射線衍射譜圖見圖5。該結(jié)晶在約3.00(29.40)，5.99(14.74)，7.80(11.32)，8.97(9.85)，12.32(7.18)，15.03(5.89)，18.02(4.92)，19.00(4.67)，20.91(4.24)，22.95(3.87)，24.86(3.58)，27.20(3.28)和30.24(2.95)處有特征峰。DSC譜圖見圖6，在277.16℃附近有尖銳吸熱峰，我們定義為III晶型。

實(shí)施例4

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入10ml 80％甲醇，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.15g，收率15.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為II晶型。

實(shí)施例5

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到50ml單口瓶中，加入30ml 90％丙酮，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.62g，收率62.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為III晶型。

實(shí)施例6

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物(按CN1835951A中公開方法制備)加入到50ml單口瓶中，加入30ml 90％乙腈，加熱溶解，再冷卻至室溫析晶，抽濾，真空干燥，得到固體0.37g，收率37.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為III晶型。

實(shí)施例7

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物I晶型(按實(shí)施例1制 備)和(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物II晶型(按實(shí)施例2制備)加入到100ml單口瓶中，加入40ml乙醇，室溫打漿，次日，抽濾，真空干燥，得到固體1.44g，收率72.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實(shí)施例8

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物I晶型(按實(shí)施例1制備)和(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物III晶型(按實(shí)施例3制備)加入到100ml單口瓶中，加入40ml乙醇，室溫打漿，次日，抽濾，真空干燥，得到固體1.88g，收率94.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實(shí)施例9

取(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物II晶型(按實(shí)施例2制備)和(1.0g，1.43mmol)式(I)所示化合物III晶型(按實(shí)施例3制備)加入到100ml單口瓶中，加入40ml乙醇，室溫打漿，次日，抽濾，真空干燥，得到固體1.90g，收率95.0％。其X-衍射和DSC圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為I晶型。

實(shí)施例10

將實(shí)施例1、2、3所得的I、II、III型結(jié)晶產(chǎn)物樣品分別敞口平攤放置，考察在光照，加熱(40℃，60℃)，高濕(RH75％，RH90％)條件下樣品的穩(wěn)定性?？疾烊訒r(shí)間為5天和10天，HPLC檢測純度見表1。

表1.式(I)所示化合物I、II、III型結(jié)晶樣品的穩(wěn)定性

穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，式(I)所示化合物I、II、III型結(jié)晶樣品在敞口放置的條件下，經(jīng)光照、高溫和高濕條件下的穩(wěn)定性比較發(fā)現(xiàn)，光照、高濕、高溫對產(chǎn)品的質(zhì)量影響不大，說明其具有較好的穩(wěn)定性。

實(shí)施例11

將按實(shí)施例1、2、3方法制得的式(I)所示化合物I、II、III型結(jié)晶進(jìn)行研磨、加熱及壓片處理，研究結(jié)果表明I、II、III晶型穩(wěn)定，詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參見下表2、3、4。

表2.式(I)所示化合物I晶型特殊穩(wěn)定性研究

表3.式(I)所示化合物II晶型特殊穩(wěn)定性研究

表4.式(I)所示化合物III晶型特殊穩(wěn)定性研究