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      一種葵花盤小分子肽及制備方法和醫(yī)用用途與流程

      文檔序號:11973084閱讀:2763來源:國知局
      本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域,具體涉及以葵花盤為原料提取得到的葵花盤小分子肽,同時還提供了其制備方法及其在制備預(yù)防和/或治療痛風(fēng)的藥物中的用途。

      背景技術(shù):
      向日葵花盤為菊科植物向日葵(HelianthusannuussL.)的花盤,亦稱向日葵花托、向日葵餅和葵房,其性平、味甘淡、無毒、歸肝經(jīng),主要功能有清熱平肝、止痛、止血,用于治療關(guān)節(jié)炎、乳腺炎、頭暈、耳鳴、脘腹痛等。向日葵盤水煎液具有治療腫瘤作用,向日葵花盤乙醇提取物有一定的降壓作用,民間也用其作為調(diào)治萎縮性胃炎藥膳。我國是向日葵的種植大國,葵花盤的資源豐富。但是,在傳統(tǒng)應(yīng)用中,通常是將除葵花子后葵花盤作為牲畜飼料喂養(yǎng)牲畜或作為燒材取暖做飯,沒有發(fā)揮出其更大的經(jīng)濟效益和醫(yī)療作用,造成資源浪費。痛風(fēng)是嘌呤代謝紊亂所致的一種代謝疾病,血尿酸濃度升高,尿酸鈉晶體沉積于下肢骨關(guān)節(jié)、動脈、脊椎骨間隙組織而引起,表現(xiàn)為關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛,關(guān)節(jié)活動不利,嚴(yán)重者呈關(guān)節(jié)畸形及功能障礙,且具有反復(fù)發(fā)作的特點。痛風(fēng)的存在還可導(dǎo)致冠心病、糖尿病、高血壓等疾病的惡化。在治療方面,西醫(yī)藥治療痛風(fēng),尚無根治的方法,秋水仙堿、非甾體類抗炎藥、別嘌呤醇等藥物雖可減輕癥狀,降低血尿酸,但其作用較單一,很難從根本上治療痛風(fēng),且長期服用此類西藥對身體造成的傷害遠比治療效果多。我國的傳統(tǒng)中醫(yī)藥可已被用來治療痛風(fēng),并且副作用少,易被患者接受,從而達到長期用藥、最終根治疾病的目的。但是,傳統(tǒng)的中醫(yī)藥治療痛風(fēng)方法還存在以下問題:對痛風(fēng)病機的認識還缺乏共識,辨證分型較難統(tǒng)一;臨床報道較多,因缺乏對照,影響了治療結(jié)果的可靠性;湯劑加減者多,固定劑型少,藥物作用機制缺乏動物試驗的驗證。直到現(xiàn)在,尚未有很好的治療痛風(fēng)藥物。中國專利申請CN201510589245.7公開了一種葵花盤水解復(fù)合粉劑在制備預(yù)防、緩解或治療與血尿酸水平升高相關(guān)疾病的食品、藥物或食品及藥物組合物中的應(yīng)用,并指出葵花盤水解復(fù)合粉劑不僅具有潛在的預(yù)防動物體內(nèi)血尿酸升高的作用,同時還具有降低血中已經(jīng)形成高尿酸水平的潛在性作用。但是,該專利文獻中僅提及葵花盤水解復(fù)合粉劑是通過對葵花盤浸泡液酶水解得到小分子多肽,而沒有披露更多的技術(shù)信息。因此,還需要對葵花盤提取物中活性小分子多肽的組成成分和制備工藝做進一步的研究,以獲得更好的治療效果。

      技術(shù)實現(xiàn)要素:
      為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的研發(fā)缺限,以獲得具有更顯著藥理活性的葵花盤活性成分,本發(fā)明提供了一種葵花盤小分子肽,是以葵花盤為原料,經(jīng)由復(fù)合蛋白酶酶解精制后得到的一種新的小分子肽,對于痛風(fēng)疾病具有顯著的治療作用,并且毒副作用小,可長期服用。本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。一方面,本發(fā)明提供了一種葵花盤小分子肽,其中,粗蛋白質(zhì)>93%,80%肽段的相對分子質(zhì)量分布/u<1000;肽含量為85.6%,水分含量為3.5%,灰分含量為7.4%。具體地,所述葵花盤小分子肽的電泳圖如圖1所示。本發(fā)明提供的葵花盤小分子肽是將大分子的蛋白質(zhì),利用復(fù)合蛋白酶分解成小分子的物質(zhì),在不同位點進行酶切,由2到10個氨基酸殘基分子組成。相比大分子多肽蛋白,小分子肽耐熱耐酸堿,是重要的“生理調(diào)節(jié)物”,可以直接被胃腸道吸收調(diào)控激素和酶的分泌發(fā)揮作用,經(jīng)過腸道毛細血管直接吸收,轉(zhuǎn)運全身起效。特別是當(dāng)應(yīng)用于痛風(fēng)疾病的治療時,葵花盤小分子肽能夠控制嘌呤合成的PRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶,從而抑制嘌呤的合成及抑制嘌呤代謝。另外,小分子肽可以干擾黃嘌呤氧化酶等嘌呤轉(zhuǎn)化為尿酸的酶,從而控制體內(nèi)尿酸含量。對于部分遺傳性疾病的痛風(fēng)患者,由于基因缺失,缺乏嘌呤代謝的酶,導(dǎo)致尿酸積累,小分子肽可以起到一定的缺失酶的作用,調(diào)控體內(nèi)激素平衡以控制尿酸濃度。具體地,本發(fā)明的葵花盤小分子肽由包括以下步驟的方法制備得到:1)將葵花盤5-8kg粉碎至100-200目,加入6-10倍質(zhì)量的去離子水,充分攪拌,用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為8-9,在45-50℃攪拌120-240分鐘,得到葵花盤分離蛋白液;2)將葵花盤分離蛋白液加熱至85-90℃,攪拌1-3h,冷卻至45-55℃,加入占葵花盤分離蛋白液總體積0.1%-0.3%的復(fù)合蛋白酶,酶解3-5h,反應(yīng)終止時,5分鐘內(nèi)升溫至85-90℃,保持5-10分鐘,使復(fù)合蛋白酶失去活性,所得酶解液備用;3)將步驟2)的酶解液在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心8-12分鐘,收集上清液,得葵花蛋白小分子肽粗液;4)將步驟3)的葵花蛋白小分子肽粗液經(jīng)截流分子量為5000-20000的中空纖維膜超濾,除去大分子蛋白,得到葵花盤小分子肽液;5)將步驟4)的葵花盤小分子肽液濃縮,使其體積濃縮至原來的四分之一到二分之一,噴霧干燥,即得葵花盤小分子肽。蛋白酶是水解蛋白質(zhì)肽鏈的一類酶的總稱。按其降解多肽的方式分成內(nèi)肽酶和端肽酶兩類。前者可把大分子量的多肽鏈從中間切斷,形成分子量較小的朊和胨;后者又可分為羧肽酶和氨肽酶,它們分別從多肽的游離羧基末端或游離氨基末端逐一將肽鏈水解生成氨基酸。由于每一種蛋白酶酶切的位點不一樣,單一蛋白酶只能酶切氨基酸多肽序列一個位點,酶解不完全,生成多肽序列單一。本發(fā)明葵花盤小分子肽的生產(chǎn)過程中,采用復(fù)合蛋白酶對葵花盤酶解,所述的復(fù)合蛋白酶是由生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按(0.7-1.2):(0.2-0.6):(0.8-1.2)的質(zhì)量比例混合而成;優(yōu)選按1:0.5:1的質(zhì)量比例混合。用多種蛋白酶可以對葵花盤蛋白質(zhì)、長鏈多肽進行多位點、廣譜性的酶切,得到更多種類的小分子肽,從而在治療痛風(fēng)中起到調(diào)控體內(nèi)嘌呤,尿酸代謝平衡,調(diào)節(jié)腎小球蛋白,抑制炎癥,抑制疼痛等全方位起效,治療痛風(fēng)效果明顯。特別是本發(fā)明公開的蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶,是取自具有冬蟲夏草前體蝙蝠蛾幼蟲消化道的蛋白消化酶,由多種蛋白酶混合。蝙蝠蛾幼蟲在西藏、青海等高海拔地區(qū)生長繁殖,由于高輻射以及植物資源種類稀少,四季苦旱寒,這就使得蝙蝠蛾幼蟲對食物有強于一般動植物的消化吸收能力。蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶可以作用于各種類型的蛋白質(zhì),酶切位點高效廣譜,經(jīng)蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶分解的蛋白,可以產(chǎn)生大量有助于體內(nèi)調(diào)控痛風(fēng)疾病的多肽。優(yōu)選地,所述的蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶的制備方法包括如下步驟:將蝙蝠蛾幼蟲去頭并剔除蟲皮和脂肪,取消化道整體,加入10倍質(zhì)量的磷酸緩沖液,勻漿,在4℃下組織漿液,然后以3000rpm/min的速度離心,取上清液加熱到40℃并迅速冷卻至5℃,過濾除去脂肪,透析除鹽,冷凍干燥,即得。本發(fā)明的葵花盤小分子肽作為活性成分可被廣泛應(yīng)用于藥品和/或保健品中。因此,本發(fā)明的另一目的是提供一種藥物組合物,其包含上述的葵花盤小分子肽和任選的藥學(xué)上可接受的賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物可以是本領(lǐng)域已知的任何制劑形式,例如片劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、散劑、微丸、溶液劑、糖漿劑、乳劑或注射劑等。另一方面,本發(fā)明還提供了所述葵花盤小分子肽的制備方法,其包括以下步驟:1)將葵花盤5-8kg粉碎至100-200目,加入6-10倍質(zhì)量的去離子水,充分攪拌,用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為8-9,在45-50℃攪拌120-240分鐘,得到葵花盤分離蛋白液;2)將葵花盤分離蛋白液加熱至85-90℃,攪拌1-3h,冷卻至45-55℃,加入占葵花盤分離蛋白液總體積0.1%-0.3%的復(fù)合蛋白酶,酶解3-5h,反應(yīng)終止時,5分鐘內(nèi)升溫至85-90℃,保持5-10分鐘,使復(fù)合蛋白酶失去活性,所得酶解液備用;3)將步驟2)的酶解液在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心8-12分鐘,收集上清液,得葵花蛋白小分子肽粗液;4)將步驟3)的葵花蛋白小分子肽粗液經(jīng)截流分子量為5000-20000的中空纖維膜超濾,除去大分子蛋白,得到葵花盤小分子肽液;5)將步驟4)的葵花盤小分子肽液濃縮,使其體積濃縮至原來的四分之一到二分之一,噴霧干燥,即得葵花盤小分子肽。優(yōu)選地,步驟2)所述的復(fù)合蛋白酶是由生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按(0.7-1.2):(0.2-0.6):(0.8-1.2)的質(zhì)量比例混合而成,優(yōu)選1:0.5:1的質(zhì)量比例;優(yōu)選地,所述的蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶的制備方法包括如下步驟:將蝙蝠蛾幼蟲去頭剔出蟲皮和脂肪取消化道整體,加入10倍質(zhì)量的磷酸緩沖液,勻漿,在4℃下組織漿液,然后以3000rpm/min的速度離心,取上清液加熱到40℃并迅速冷卻至5℃,過濾除去脂肪,透析除鹽,冷凍干燥,即得。進一步地,本發(fā)明還提供了上述葵花盤小分子肽或包含該葵花盤小分子肽的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療痛風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的積極效果在于:本發(fā)明的葵花盤小分子肽為一種新的植物小分子肽,蛋白質(zhì)分子量小,可不通過消化系統(tǒng)直接為人體吸收,吸收快速,可顯著預(yù)防和/或治療痛風(fēng);涉及的提取分離工藝簡單,易于操作,無需特殊設(shè)備,成本低廉;本發(fā)明葵花盤小分子肽制備工藝中所用的試劑對環(huán)境無污染,適合于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。附圖說明圖1為本發(fā)明葵花盤小分子肽及經(jīng)不同酶解所得產(chǎn)物SDS-PAGE電泳電泳圖。在圖中,左起第1,2,3條帶分別是實施例1-3的葵花盤小分子肽的上樣結(jié)果,左起(4,5,6條帶),(7,8,9條帶)(10,11,12條帶)分別為葵花盤經(jīng)蝙蝠蛾幼蟲消化蛋白酶、生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶分別酶解超濾后所得小分子肽的上樣結(jié)果。復(fù)合蛋白酶(生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按1:0.5:1的質(zhì)量比例混合)與單一酶相比,酶解產(chǎn)物增多,有多種不同的小分子肽片段,尤其在小于20kd時,小分子肽更多于單一酶,蝙蝠蛾幼蟲消化酶比生姜蛋白酶,蝸牛蛋白酶酶解效率更高。具體實施方式通過以下實施例進一步舉例描述本發(fā)明,并不以任何方式限制本發(fā)明,在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下,對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。實施例1葵花盤小分子肽的制備:1)將葵花盤5kg粉碎至100目,加入30kg的去離子水,充分攪拌,用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH8,在45℃攪拌120分鐘,得到葵花盤分離蛋白液;2)將葵花盤分離蛋白液加熱至85℃,攪拌1h,冷卻至45℃,加入占葵花盤分離蛋白液總體積0.1%的復(fù)合蛋白酶(生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按1:0.5:1的質(zhì)量比例混合),酶解3h,反應(yīng)終止時,5分鐘內(nèi)升溫至85℃,保持5分鐘,使復(fù)合蛋白酶失去活性,所得酶解液備用;3)將步驟2)的酶解液在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心8分鐘,收集上清液,得葵花蛋白小分子肽粗液;4)將步驟3)的葵花蛋白小分子肽粗液經(jīng)截流分子量為5000的中空纖維膜超濾,除去大分子的蛋白,得到葵花盤小分子肽液;5)將步驟4)的葵花盤小分子肽液濃縮,將其體積濃縮至原來的四分之一,噴霧干燥,即得葵花盤小分子肽。實施例2葵花盤小分子肽的制備:1)將葵花盤7kg粉碎至150目,加入56kg的去離子水,充分攪拌,用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH8.5,在48℃攪拌180分鐘,得到葵花盤分離蛋白液;2)將葵花盤分離蛋白液加熱至88℃,攪拌2h,冷卻至48℃,加入占葵花盤分離蛋白液總體積0.2%的復(fù)合蛋白酶(生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按0.9:0.6:1的比例混合),酶解4h,反應(yīng)終止時,5分鐘內(nèi)升溫至88℃,保持8分鐘,使復(fù)合蛋白酶失去活性,所得酶解液備用;3)將步驟2)的酶解液在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘,收集上清液,得葵花蛋白小分子肽粗液;4)將步驟3)的葵花蛋白小分子肽粗液經(jīng)截流分子為10000的中空纖維膜超濾,除去大分子的蛋白,得到葵花盤小分子肽液;5)將步驟4)的葵花盤小分子肽液濃縮,將其體積濃縮至原來的三分之一,噴霧干燥,即得葵花盤小分子肽。實施例3葵花盤小分子肽的制備:1)將葵花盤8kg粉碎至200目,加入80kg去離子水,充分攪拌,用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH9,在50℃攪拌240分鐘,得到葵花盤分離蛋白液;2)將葵花盤分離蛋白液加熱至90℃,攪拌3h,冷卻至50℃,加入占葵花盤分離蛋白液總體積0.3%的復(fù)合蛋白酶(生姜蛋白酶、蝸牛蛋白酶、蝙蝠蛾幼蟲蛋白消化酶按1.2:0.4:0.8的質(zhì)量比例混合),酶解5h,反應(yīng)終止時,5分鐘內(nèi)升溫至90℃,保持10分鐘,使復(fù)合蛋白酶失去活性,所得酶解液備用;3)將步驟2)的酶解液在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心12分鐘,收集上清液,得葵花蛋白小分子肽粗液;4)將步驟3)的葵花蛋白小分子肽粗液經(jīng)截流分子量為20000的中空纖維膜超濾,除去大分子的蛋白,得到葵花盤小分子肽液;5)將步驟4)的葵花盤小分子肽液濃縮,將其體積濃縮至原來的二分之一,噴霧干燥,即得葵花盤小分子肽。試驗例1:藥理試驗數(shù)據(jù)一、試驗材料1.動物:昆明種小鼠,體重(20g±2g),由吉林大學(xué)臨床動物研究中心提供。2.給藥樣品:空白對照組(蒸餾水),本發(fā)明組(實施例1、2、3制備得到的葵花盤小分子肽組)。二、試驗方法1.鎮(zhèn)痛實驗:取雄性小鼠40只,隨機分為空白對照組,實施例1、實施例2、實施例3組,按120mgkg-1給藥,1次一天,空白對照組給予等量蒸餾水,連續(xù)給藥5天,于末次給藥1小時后,每組給各取10只小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1mlg-1,記錄各組小鼠20min內(nèi)扭體次數(shù)。結(jié)果見表1。表1.對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響與空白對照組比較,*P<0.05,**P<0.012.小鼠血尿酸(UA)、黃嘌呤氧化酶(XOD)及尿素氮(BUN)取雄性小鼠100只,隨機分為正常組、模型組、本發(fā)明組(實施例1、實施例2、實施例3),每組20只。除正常組外,每組均以酵母30g·kg-1灌胃,連續(xù)一周。從第3天開始本發(fā)明組灌胃,按120mg·kg-1給藥,連續(xù)給藥5d。小鼠摘除眼球法取血,分離血清,在波長690nm、530nm和640nm處測定UA、XOD和BUN值。結(jié)果見表2。表2.對酵母膏致高尿酸血癥小鼠血清UA、XOD及BUN的影響三、試驗結(jié)果由上述表1和表2的試驗結(jié)果可以看出,本發(fā)明的葵花盤小分子肽能顯著減輕化學(xué)物質(zhì)產(chǎn)生的疼痛,說明本發(fā)明小分子肽有鎮(zhèn)痛作用。另外,本發(fā)明的葵花盤小分子肽能顯著抑制黃嘌呤氧化酶活性,減少尿酸的生成,表明能明顯降低血中尿素氮,改善腎功能。試驗例2:典型臨床案例病例1:宋某,男,56歲,機關(guān)工作。患者無誘因于7年前出現(xiàn)手指、足趾關(guān)節(jié)腫痛,以夜間痛為甚,右手指關(guān)節(jié)僵硬破潰已2年?;颊哂?年前經(jīng)常出差。頻頻飲酒,屢進膏粱厚味,兼之旅途勞頓,感受風(fēng)寒,時感手指、足趾腫痛,因工作較忙,未曾介意。以后每于飲酒或勞累、受寒之后,即疼痛增劇,右手指關(guān)節(jié)及左足拇指內(nèi)側(cè)腫痛尤甚,以夜間痛為劇,即去醫(yī)院就診,血尿酸高達918umol/L,確診為“痛風(fēng)”。即服用別嘌呤醇、丙硫酸等,病情有所好轉(zhuǎn),但因胃痛不適而停服。因之腫痛有增劇,乃繼續(xù)服用,迄今未愈。查體:右手食指中指腫痛破潰。左足大趾內(nèi)側(cè)亦腫痛較甚。夜間痛較甚。血尿酸714umol/L,口苦,苔黃膩,脈弦數(shù),右二有痛風(fēng)石結(jié)節(jié)。治療:服用本發(fā)明實施例1制備的藥物2個療程后,疼痛減輕,破潰處之分泌物有所減少,足趾之腫痛減清,繼續(xù)服用2個療程后,患者以上癥狀消失,血尿酸已接近正常,囑患者繼續(xù)鞏固一個療程,隨訪一年,未復(fù)發(fā)。病例2:王某,男性,35歲,農(nóng)民?;颊咦笞阒?、足背反復(fù)性腫痛6年?;颊?年前在一次飲酒后,突然發(fā)生左足背,大拇指腫痛,難以入睡,局部灼熱紅腫。在當(dāng)?shù)胤孟钻囃此幒?,一周后疼痛緩解。以后,每遇飲酒或感冒后即易發(fā)作,每遇發(fā)作,自服潑尼松等藥。近一年來服用上藥效果不佳。疼痛固定于左足背及左拇指。于2周前又因酒后臥睡受涼而引起本病發(fā)作,局部紅腫熱痛,功能受限,故來我處診治。查體:面紅,頗行,左足背及拇指紅、腫、壓痛、功能受限。舌質(zhì)紅,,苔黃膩,脈弦滑數(shù)?;灒貉粒?0㎜/h,血尿酸:720umol/L。X線示:左足跖骨骨頭處出現(xiàn)溶骨性缺損。治療:服用本發(fā)明實施例1制備的藥物2療程后,癥狀消失,行走自如,無跛行。為鞏固療效囑繼續(xù)服用5個療程。隨訪1年,未復(fù)發(fā)。病例3:女性,楊XX,48歲,患痛風(fēng)20年以上,福建人,原飲食習(xí)慣每日大量進食海鮮和啤酒,曾經(jīng)有一頓兩人進食30斤貝蟹類海鮮食物的記錄。曾經(jīng)有關(guān)節(jié)疼痛病史亦未在意,未作治療,近兩年來癥狀加重,全身各個關(guān)節(jié)基本全部受累,尤其是雙手、雙足、雙踝、雙膝關(guān)節(jié)嚴(yán)重,大量痛風(fēng)石沉積使得關(guān)節(jié)嚴(yán)重變形,這次就診,即因為全身劇烈疼痛,無法行走就醫(yī)。多數(shù)醫(yī)院以無治療價值拒收。治療:服用本發(fā)明實施例1制備的藥物2療程后,癥狀消失,正常行走活動沒有影響,各項指標(biāo)正常,飲食習(xí)慣已經(jīng)基本改過來了,為鞏固療效囑繼續(xù)服用5個療程。隨訪1年,未復(fù)發(fā)。病例4:張某某,男,40歲。主訴左足踝、足跖趾腫脹疼痛三天,因連續(xù)三天在下半夜患處劇烈疼痛、坐臥不寧而來診,見患者形體豐滿,痛苦面容,走路坡行,左足踝及足跖趾關(guān)節(jié)處明顯腫脹,微紅不熱,因連續(xù)夜間疼痛影響睡眠而心煩,伴有脘腹痞滿、大便干結(jié),查舌質(zhì)暗紅,苔白稍厚,脈弦滑。血液檢查提示,血脂偏高,血尿酸554umol/L。結(jié)合患者形體豐滿,工作應(yīng)酬多,生活無規(guī)律,偏食肥厚重味,嗜飲啤酒及可樂飲品,當(dāng)屬痰濕體質(zhì)。治療:服用本發(fā)明實施例1制備的藥物后疼痛即有減輕,1個療程后腫脹基本消失,唯疼痛時作,尤其是久立行走后明顯,再服一個療程痛漸向愈。舌質(zhì)紅,苔薄白,脈弦滑。服藥效顯不更方,繼續(xù)維持原治療。連續(xù)服用4個療程,疼痛腫脹均已消失。隨訪1年,未復(fù)發(fā)。
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