開發(fā)用于神經病學疾病的診斷系統(tǒng)是生物醫(yī)學科學中的一項持續(xù)的挑戰(zhàn)，這在較大程度上是因為所遇到的許多癥狀可以由極其多樣的原因(包括基因遺傳疾病、藥物濫用、營養(yǎng)不良、感染、損傷、精神性疾病、免疫缺陷和癌癥)來解釋說明。

由于神經病學疾病很少與臨床癥狀的獨特的特征性模式相關聯(lián)，所以通常難以僅基于受影響的患者的觀察和檢查或者其醫(yī)療史來提供可靠的診斷。

不可過分強調早期診斷的重要性。許多神經病學病癥，最顯著地，阿爾茨海默病和帕金森病以及多發(fā)性硬化，不能被治愈，但是可以用于減緩其進展的藥物是可得的。診斷越早，為了患者的充分益處而利用可得的藥物譜的機會就越好。

這在與自身抗體相關的神經病學疾病的情況下更是如此。在一些情況下，特異性的可檢測的自身抗體與病況之間的關聯(lián)足夠強從而允許進行即刻的診斷。

但是，即使不是這樣，自身抗體的檢測可以向主治醫(yī)師指明可以用于改善患者病況的治療手段。存在各種各樣的廣泛使用的免疫抑制劑，其可以不管自身抗體靶標的性質而進行使用。備選地，單采血液成分術(apheresis)可以用于從患者的血液中除去自身抗體。在許多情況下，患者在神經病學自身免疫疾病的早期診斷和治療后繼續(xù)過正 常的生活。

基于自身抗體檢測的診斷測定法還可以確證除了與自身抗體相關的那些疾病之外的其他疾病的診斷。如果結果是血液樣品沒有特異性自身抗體，這可能幫助主治醫(yī)師排除一系列的可能性并因此縮小似乎可能的病況的范圍。

與自身抗體的出現(xiàn)相一致的神經病學病況的實例包括：視神經脊髓炎(一種以視覺和脊髓功能的喪失為特征的疾病)，和抗-NMDA受體腦炎(其與自主神經功能障礙相關)，通氣不足，小腦性共濟失調，輕偏癱，意識喪失，或緊張癥。雖然自身抗體的參與和這些病況本身的性質以前了解得很少，但是由于基于自身抗體檢測的測定法的可得性，此類疾病中的許多現(xiàn)在可以被診斷和有效地治療。

多發(fā)性硬化是另一種被廣泛認為與至關重要的身體結構的自身免疫性破壞相關的疾病。大約20％的患者遭受視覺損害，更特別地，視神經炎。特異性的診斷是困難的，這是由于寬范圍的癥狀和疾病的性質，其中在發(fā)作之后有時候接著是癥狀的完全消失。

因此，最重要的是用于區(qū)分與自身抗體相關的神經病學病況和未發(fā)展的那些的新方法。

作為本發(fā)明之基礎的問題是提供新的試劑、裝置和方法，其可以用于支持神經病學疾病，特別是與視覺損害、頭痛和/或腦損傷相關的疾病的診斷和治療。

作為本發(fā)明之基礎的另一個問題是提供新的試劑、裝置和方法，其可以用于區(qū)分自身免疫疾病(特別是神經病學自身免疫疾病)和除了自身免疫疾病之外的其他疾病，這在較大程度上是為了確定最有希望的治療方案，更特別地，免疫抑制治療是否適當。

作為本發(fā)明之基礎的問題通過所附的獨立權利要求和從屬權利要求的主題而得到解決。

在第一個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過用于診斷疾病的方法而得到解決，所述方法包括在來自患者的樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

在第二個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2或者其變體的多肽而得到解決，所述多肽優(yōu)選地被固定化，更優(yōu)選地在固體載體上。

在第三個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過本發(fā)明的多肽用于疾病診斷的用途而得到解決，所述疾病診斷優(yōu)選地包括在樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

在第四個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過用于在疾病治療中使用的本發(fā)明的多肽而得到解決。

在第五個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合，優(yōu)選地與包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的復合物相結合的自身抗體，優(yōu)選地分離的自身抗體而得到解決，其中所述自身抗體優(yōu)選地處于與本發(fā)明的多肽的復合物之中。

在第六個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過用于分離與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合，優(yōu)選地與包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的復合物相結合的自身抗體的方法而得到解決，所述方法包括下列步驟：

a)使包含該自身抗體的樣品與本發(fā)明的多肽在與復合物形成相容的條件下相接觸，其中所述自身抗體與所述多肽相結合，

b)分離在步驟a)中形成的復合物，

c)使在步驟b)中分離出的復合物解離，和

d)將該自身抗體與該多肽分開。

在第七個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過包含本發(fā)明的多肽的藥物組合物，或醫(yī)學裝置，優(yōu)選地診斷裝置而得到解決。

在第八個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過用于疾病診斷的測試試劑盒而得到解決，所述測試試劑盒包含本發(fā)明的多肽，其中所述測試試劑盒優(yōu)選地還包含用于檢測復合物的工具，所述復合物包含本發(fā)明的多肽和與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體。

在第九個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過本發(fā)明的多肽在制備用于在患者中進行疾病診斷的測試試劑盒中的用途而得到解決，所 述疾病診斷優(yōu)選地包括在來自患者的樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

在第十個方面，作為本發(fā)明之基礎的問題通過本發(fā)明的多肽在制備藥物組合物中的用途而得到解決，所述藥物組合物用于在患者的疾病治療中使用。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述患者具有一個或多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀，或者所述疾病與一個或多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀相關：升高的CSF中的細胞數(shù)目，鞘內IgG合成，CSF中的寡克隆條帶(oligoclonal bands，OCB)，CSF中的MRZ(M－麻疹，R－風疹，Z－水痘帶狀皰疹)反應，視覺損害，優(yōu)選地視敏度損害，視神經炎，頭痛，脊髓損傷，和腦損傷，優(yōu)選地視覺損害，更優(yōu)選地視敏度損害，頭痛，脊髓損傷，和腦損傷。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述疾病為神經病學疾病，優(yōu)選地脫髓鞘疾病，優(yōu)選地CNS的疾病，優(yōu)選地腦的疾病，優(yōu)選地與視神經的炎癥相關的疾病。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽以包含編碼所述多肽的核酸的細胞的形式或以包含所述多肽的組織的形式來提供。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽為重組的和/或分離的多肽。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述樣品為包含抗體的體液，其優(yōu)選地選自全血、血清、腦脊液和唾液。

在一個優(yōu)選的實施方案中，包含浮艦蛋白1或其變體的多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的多肽兩者都存在，并且優(yōu)選地是復合物的一部分。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述自身抗體與包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的復合物相結合。

本發(fā)明基于發(fā)明人的下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：存在這樣的神經病學自身免疫疾病，其與對于浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的自身抗體和選自下列的癥狀相關：升高的CSF中的細胞數(shù)目、鞘內IgG合成、CSF中的寡克隆條帶、CSF中的MRZ反應、視覺損害、視神經炎、頭痛、 脊髓損傷和腦損傷。

進一步地，本發(fā)明基于發(fā)明人的下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：存在對于浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的自身抗體，并且所述自身抗體可以在來自許多遭受神經病學癥狀的患者的樣品中檢測到，但不在從健康受試者獲得的樣品中檢測到。

進一步地，本發(fā)明基于發(fā)明人的下述令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：具有未知病因學的已知的神經病學疾病，特別是脫髓鞘疾病，與對于浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的自身抗體的存在相關。

在不希望束縛于任何理論的情形下，此類自身抗體的存在暗示，浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2和/或下游效應子的活性和功能在具有此類自身抗體的患者中受到損害，以致于出現(xiàn)了神經病學癥狀，更特別地脫髓鞘疾病，特別是與視覺損害相關的那些。

浮艦蛋白(flotillin)1和浮艦蛋白2(同義詞：reggie-2和reggie-1)最初被發(fā)現(xiàn)在視神經的創(chuàng)傷性損傷后在金魚視網膜神經節(jié)細胞的再生軸突中上調。然而，它們在許多真核生物(包括哺乳動物)中是非常保守的。在脊椎動物中，這兩種蛋白質都是遍在地表達的，并且在橫紋肌、脂肪組織和肺組織中最豐富。在分子水平上，浮艦蛋白附著于脂膜筏的胞質側，并因此經常用作脂微域的標志物。與其他脂膜筏組成成分相似地，它們在蔗糖密度離心后在Triton X-100中在很大程度上是不可溶的而是漂浮。從功能上來說，它們參與在神經元中的蛋白質相互作用、細胞信號傳導、淀粉狀蛋白前體的簇集和淀粉狀蛋白生成性加工(Stuermer CA,Plattner H.The'lipid raft'microdomain proteins reggie-1 and reggie-2(flotillins)are scaffolds for protein interaction and signalling.Biochem Soc Symp 2005,(72):109-18)。浮艦蛋白2的過表達在幾種癌癥中被看到，并且通常與更嚴重的進展相關(Arkhipova KA,Sheyderman AN,Laktionov KK,Mochalnikova VV,Zborovskaya IB.Simultaneous expression of flotillin-1,flotillin-2,stomatin and caveolin-1 in non-small cell lung cancer and soft tissue sarcomas.BMC Cancer 2014,14:100)。

本發(fā)明涉及包含哺乳動物(優(yōu)選地，人)的浮艦蛋白1或其變體和/或浮艦蛋白2或其變體的多肽，所述變體優(yōu)選地為對于與浮艦蛋白1和浮艦蛋白2或其變體相結合的自身抗體具有反應性的免疫原性變體。哺乳動物浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的實例包括來自人、猴、小鼠、大鼠、兔、豚鼠或豬的那些。在一個最優(yōu)選的實施方案中，浮艦蛋白1是由數(shù)據(jù)庫代碼O75955所編碼的多肽或其變體，和/或浮艦蛋白2是由數(shù)據(jù)庫代碼Q14254所編碼的多肽或其變體。在整個本申請中，任何所引用的數(shù)據(jù)庫代碼均涉及Uniprot數(shù)據(jù)庫，更特別地，在2015年5月29日在線可獲取的那個版本。NP_005794和NP_004466分別表示編碼浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的核苷酸序列。

在一個更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽包含直接地或通過連接體而相互融合的浮艦蛋白1或其變體和浮艦蛋白2或其變體這兩者。在一個最優(yōu)選的實施方案中，使用這樣的復合物，其包含有直接地或通過另一個分子而相互結合的包含浮艦蛋白1或其變體的多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的多肽這兩者。優(yōu)選地，所述復合物不包含除了包含浮艦蛋白1或其變體的多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的多肽之外的其他蛋白質。這樣的復合物可以用于捕獲與所述復合物相結合的自身抗體，以用于疾病診斷。

如果使用包含有包含浮艦蛋白1或其變體的第一多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的第二多肽的復合物，那么所述第一和第二多肽可以在同一個細胞中表達以形成這樣的復合物。備選地，所述第一和第二多肽可以在不同的細胞中分開地表達并在表達后重構，任選地以經純化的形式。

本發(fā)明的教導不僅可以通過使用多肽，特別是包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的天然序列的多肽，或具有在本申請中明確地(例如通過功能、名稱、序列或登錄號)或隱含地提到的準確序列的核酸來實施，而且還可以通過使用此類多肽或核酸的變體來實施。

在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“變體”可以是指所提到的全長序列的至少一種片段，更特別地一種或多種相對于全長 序列而言在一個或兩個末端處截短了一個或多個氨基酸的氨基酸或核酸序列。這樣的片段包含或編碼具有原始序列或其變體的至少6、7、8、10、12、15、20、25、50、75、100、150或200個連續(xù)氨基酸的肽。變體的總長度可以為至少6、7、8、9、10、11、12、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100個或更多個氨基酸。

在另一個優(yōu)選的實施方案中，術語“變體”不僅是指至少一種片段，而且還是指這樣的多肽或其片段，所述多肽或其片段包含與所提到的參考氨基酸序列或其片段至少40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列，其中刪除或置換除了對于生物學活性(例如，抗原結合(自身)抗體的能力)或者多肽的折疊或結構來說必需的那些氨基酸之外的其他氨基酸，和/或以保守的方式替換一個或多個這樣的必需氨基酸和/或添加氨基酸，從而使得多肽的生物學活性得到保留?，F(xiàn)有技術包括各種不同的可以用于比對兩個給定核酸或氨基酸序列并計算同一性程度的方法，參見例如Arthur Lesk(2008),Introduction to bioinformatics,Oxford University Press,2008,第3版。在一個優(yōu)選的實施方案中，使用ClustalW軟件(Larkin,M.A.,Blackshields,G.,Brown,N.P.,Chenna,R.,McGettigan,P.A.,McWilliam,H.,Valentin,F.,Wallace,I.M.,Wilm,A.,Lopez,R.,Thompson,J.D.,Gibson,T.J.,Higgins,D.G.(2007).Clustal W and Clustal X version 2.0.Bioinformatics,23,2947-2948)，其中采用缺省設置。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽和其變體還可以包含化學修飾，例如同位素標記，或者共價修飾例如糖基化、磷酸化、乙酰化、脫羧、瓜氨酸化、甲基化、羥基化等等。本領域技術人員熟悉用于修飾多肽的方法。對任何修飾如此地進行設計，從而使得其不取消變體的生物學活性。

此外，變體還可以通過與其他已知多肽或其變體相融合來產生，并且包含具有活性的部分或結構域，優(yōu)選地，所述具有活性的部分或結構域當與參考序列的具有活性的部分進行比對時，具有至少70％、 75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，其中此處所使用的術語“具有活性的部分”是指比全長氨基酸序列短的氨基酸序列，或在核酸序列的情況下編碼比全長氨基酸序列短的氨基酸序列，和/或是天然序列的變體，但保留了至少一些生物學活性。

在一個優(yōu)選的實施方案中，術語“核酸的變體”包括這樣的核酸，所述核酸的互補鏈與參考核酸或野生型核酸雜交，優(yōu)選地在嚴緊條件下。雜交反應的嚴緊性是本領域普通技術人員可容易地確定的，并且通常是取決于探針長度、洗滌溫度和鹽濃度的根據(jù)經驗的計算。通常，較長的探針需要較高的用于適當退火的溫度，而較短的探針則需較低的溫度。雜交通常取決于變性的DNA與在環(huán)境中存在的互補鏈在低于其解鏈溫度的溫度下再退火的能力：探針和可雜交序列之間的所希望的同源性程度越高，可以使用的相對溫度就越高。因此，較高的相對溫度將會傾向于使反應條件更嚴緊，而較低的反應溫度將會更不嚴緊。關于雜交反應的嚴緊性的另外的細節(jié)和解釋，參見Ausubel,F.M.(1995),Current Protocols in Molecular Biology.John Wiley&Sons,Inc。此外，本領域技術人員可以遵循在手冊Boehringer Mannheim GmbH(1993)The DIG System Users Guide for Filter Hybridization,Boehringer Mannheim GmbH,Mannheim,Germany中和在Liebl,W.,Ehrmann,M.,Ludwig,W.,and Schleifer,K.H.(1991)International Journal of Systematic Bacteriology 41:255-260中所給出的關于如何借助于雜交來鑒定DNA序列的指導。在一個優(yōu)選的實施方案中，將嚴緊條件應用于任何雜交，即僅如果探針與靶序列具有70％或更高的同一性，雜交才出現(xiàn)。具有較低的相對于靶序列而言的同一性程度的探針可以雜交，但此類雜交體是不穩(wěn)定的并且將會在嚴緊條件下的洗滌步驟中被去除，例如降低鹽濃度至2×SSC或，任選地和隨后，至0.5×SSC，而溫度為大約50℃-68℃，大約52℃-68℃，大約54℃-68℃，大約56℃-68℃，大約58℃-68℃，大約60℃-68℃，大約62℃-68℃，大約64℃-68℃，大約66℃-68℃，以優(yōu)選度漸增的順序。在一個特別 優(yōu)選的實施方案中，溫度為大約64℃-68℃或大約66℃-68℃?？赡艿氖?，調節(jié)鹽濃度至0.2×SSC，或甚至0.1×SSC?？梢苑蛛x出具有至少70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的相對于參考序列或野生型序列而言的同一性程度的核酸序列。在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“核酸序列的變體”是指任何這樣的核酸序列，其按照遺傳密碼的簡并性而編碼與參考核酸序列所編碼的相同的氨基酸序列及其變體。

多肽的變體具有生物學活性。在一個優(yōu)選的實施方案中，這樣的生物學活性是特異性地結合目的自身抗體的能力，所述目的自身抗體優(yōu)選地為在罹患由發(fā)明人所鑒定的疾病的患者中發(fā)現(xiàn)的與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的那些。

當用于實施本發(fā)明的教導時，包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2或其變體的本發(fā)明的多肽，或者本發(fā)明的自身抗體，可以以任何形式和以任何純化程度來提供，從以內源形式包含所述多肽的液體樣品、組織或細胞，更優(yōu)選地，過表達所述多肽的細胞，此類細胞的粗制的或經富集的裂解物，直至經純化的和/或分離的多肽，其任選地是基本上純的。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽是天然多肽，其中此處所使用的術語“天然多肽”是指經折疊的多肽，更優(yōu)選地是指從組織或細胞中，更優(yōu)選地從哺乳動物細胞或組織中，任選地從非重組的組織或細胞中純化出的經折疊的多肽。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽是重組的蛋白質，其中此處所使用的術語“重組的”是指通過使用基因工程方法在生產過程的任何階段而產生的多肽，例如通過將編碼所述多肽的核酸與用于在細胞或組織中過表達的強啟動子相融合或者通過改造所述多肽本身的序列。本領域技術人員熟悉用于改造核酸和所編碼的多肽的方法(例如，在Sambrook,J.,Fritsch,E.F.和Maniatis,T.(1989),Molecular Cloning,CSH中或在Brown T.A.(1986),Gene Cloning–an introduction,Chapman&Hall中所描述的)和用于產生和純化天然或重組多肽的方法(例如，由GE Healthcare Life Sciences公開的手冊“Strategies for Protein Purification”, “Antibody Purification”,“Purifying Challenging Proteins”(2009/2010)，其在Burgess,R.R.,Deutscher,M.P.(2009),Guide to Protein Purification中)。在一個優(yōu)選的實施方案中，多肽是純的，如果在各自樣品中至少60％、70％、80％、90％、95％或99％的多肽由所述多肽組成，如通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳以及隨后的考馬斯藍染色和目視檢定所判斷的。

如果本發(fā)明的多肽以組織的形式來提供，那么優(yōu)選的是，所述組織為哺乳動物組織，例如人、大鼠、靈長類、驢、小鼠、山羊、馬、綿羊、豬或奶牛，更優(yōu)選地腦組織，最優(yōu)選地小腦。如果使用細胞裂解物，那么優(yōu)選的是，所述細胞裂解物包含與細胞表面相關的膜。如果所述多肽以重組細胞的形式來提供，那么優(yōu)選的是，所述重組細胞為真核細胞例如酵母細胞，更優(yōu)選地來自多細胞真核生物例如植物、哺乳動物、蛙或昆蟲，最優(yōu)選地來自哺乳動物例如大鼠、人、靈長類、驢、小鼠、山羊、馬、綿羊、豬或奶牛的細胞。

優(yōu)選地，對用于實施本發(fā)明的教導的多肽(包括任何變體)如此地進行設計，從而使得其包含被與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體所識別的表位和/或特異性地結合與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體。在一個實施方案中，這樣的多肽包含由來自浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的6、7、8、9、10、11、12、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100個或更多個，優(yōu)選地至少9個但不多于16個連續(xù)氨基酸構成的鏈段。本領域技術人員熟悉用于設計具有足夠的免疫原性的肽的指導方針，例如在Jackson,D.C.,Fitzmaurice,C.J.,Brown,L.E.,Zeng,W.(1999),Preparation and properties of totally synthetic immunogenes,Vaccine,第18卷,第3-4期,1999年9月,第355-361頁；和Black,M.,Trent,A.,Tirrell,M.和Olive,C.(2010),Advances in the design and delivery of peptide subunit vaccines with a focus on Toll-like receptor agonists,Expert Rev Vaccines,2010年2月,9(2):157-173中所描述的那些。簡而言之，合乎希望的是，所述肽盡可能多地符合下列要求：(a)它具有高的親 水性程度；(b)它包含一個或多個選自天冬氨酸、脯氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的殘基；(c)為了更高的特異性，它與其他已知的肽或多肽不具有同源性或具有很低的同源性；(d)它需要是足夠可溶的；和(e)它不包含糖基化或磷酸化位點，除非由于特殊原因而需要。備選地，可以遵循生物信息學方法，例如由Moreau,V.,Fleury,C.,Piquer,D.,Nguyen,C.,Novali,N.,Villard,S.,Laune,D.,Granier,C.和Molina,F.(2008),PEPOP:Computational design of immunogenic peptides,BMC Bioinformatics 2008,9:71所描述的那些。

當根據(jù)本發(fā)明進行使用時，包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2或其變體的本發(fā)明的多肽，優(yōu)選地一種包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的多肽或者由兩種或更多種包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的多肽構成的復合物，可以以任何種類的構象來提供。例如，所述多肽可以是基本上未折疊的、部分折疊的或完全折疊的多肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽在這樣的意義上進行折疊，即對于與本發(fā)明的自身抗體的結合來說必需的表位，或者該蛋白質或其變體以其整體，采取由天然蛋白質在其天然環(huán)境中所采取的折疊。本領域技術人員熟悉適合于測定多肽是否是折疊的，和如果是，那么它具有哪種結構的方法，例如有限蛋白酶解、NMR光譜學、CD光譜學或X-射線晶體學(參見例如Banaszak L.J.(2008),Foundations of Structural Biology,Academics Press；或Teng Q.(2013),Structural Biology:Practical Applications,Springer)，優(yōu)選地使用CD光譜學。

本發(fā)明的多肽可以是融合蛋白，其包含除了取自浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的那些之外的其他氨基酸序列，特別是C-末端或N-末端標簽，優(yōu)選地C-末端標簽，其在一個優(yōu)選的實施方案中為具有功能的額外的序列基元或多肽，其具有一些生物學或物理功能和可以例如用于純化、固定化、沉淀或鑒定本發(fā)明的多肽。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述標簽是能夠與配體特異性地結合的序列或結構域，例如選自His標簽、硫氧還蛋白、麥芽糖結合蛋白、谷胱甘肽S-轉移酶的標簽；熒光標簽，其例如選自綠色熒光蛋白。SEQ ID NO 1、2和SEQ ID NO 5、6表示示例性的分別包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的融合多肽。

本發(fā)明的多肽可以是經固定化的多肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“經固定化的”是指結合至在水溶液中不可溶的固體載體的分子，更優(yōu)選地通過共價鍵、靜電相互作用、包囊或包載(例如通過使球狀多肽在凝膠中變性)，或通過疏水相互作用，最優(yōu)選地通過一個或多個共價鍵。這樣的載體優(yōu)選地為人工載體，其在主體上不是生物學材料例如組織切片。各種不同的合適載體，例如紙、聚苯乙烯、金屬、硅或玻璃表面、微觀流體通道、膜、珠粒例如磁珠、柱色譜法介質、生物芯片、聚丙烯酰胺凝膠等，已在文獻中進行了描述，例如在Kim,D.和Herr,A.E.(2013),Protein immobilizsation techniques for microfluidic assays,Biomicrofluidics 7(4),041501中。如此，可以以直截了當?shù)姆绞綄⒔浌潭ɑ姆肿舆B同不可溶的載體一起與水溶液相分開，例如通過過濾、離心或潷析。經固定化的分子可以是以可逆或不可逆的方式進行固定化的。例如，如果分子與載體通過可以經由添加高濃度的鹽而掩蔽的離子相互作用來進行相互作用，或如果分子通過可裂開的共價鍵例如二硫橋(其可以通過添加含巰基的試劑來進行裂開)進行結合，那么固定化是可逆的。相反地，如果分子通過不能在水溶液中裂開的共價鍵(例如，通過經常用于將賴氨酸側鏈偶聯(lián)至親和柱的環(huán)氧化物基團和胺基團的反應而形成的鍵)而拴系至載體，那么固定化是不可逆的。蛋白質可以間接地進行固定化，例如通過使抗體或其他對于該分子具有親和力的實體固定化，隨后是復合物的形成，以致于分子-抗體復合物被固定化。各種不同的用于使分子固定化的方式描述在文獻中，例如在Kim,D.,Herr和A.E.(2013),Protein immobilizsation techniques for microfluidic assays,Biomicrofluidics 7(4),041501中。另外，各種不同的用于固定化反應的試劑和試劑盒是商購可得的，例如從Pierce Biotechnology。

必要的是，用于按照本發(fā)明進行診斷的樣品包含抗體，其也稱為免疫球蛋白。典型地，體液樣品包含對于受試者免疫球蛋白的全體來 說具有代表性的一組。但是，一旦提供了，可以使樣品經歷進一步的加工，其可以包括分級分離、離心、富集或分離受試者的全體免疫球蛋白或任何免疫球蛋白類別，這可以影響各種不同類別的免疫球蛋白的相對分布。

在整個本申請中所描述的試劑、裝置、方法和用途可以用于疾病診斷。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述疾病為神經病學疾病。在一個更優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“神經病學疾病”是指任何與神經系統(tǒng)，更優(yōu)選地對于視覺來說必需的神經系統(tǒng)的要素，更優(yōu)選地視覺神經的缺陷相關的疾病。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述疾病，更優(yōu)選地神經病學疾病，與一個或多個，更優(yōu)選地兩個或更多個，最優(yōu)選地三個或更多個選自下列的癥狀相關：癌癥、升高的CSF中的細胞數(shù)目，鞘內IgG合成，CSF中的寡克隆條帶，CSF中的MRZ反應，視覺損害，優(yōu)選地視敏度損害，視神經炎，頭痛，脊髓損傷，和腦損傷。優(yōu)選地，所述疾病對于免疫調節(jié)性的(優(yōu)選地，免疫抑制性的)療法作出響應。

在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述疾病為神經病學疾病，其選自下列：阿爾茨海默病、孤獨癥、阿斯波哥爾綜合征、失用癥、失語癥、小腦綜合征、小腦炎、舞蹈癥、腦炎、運動障礙、脊髓小腦性共濟失調(優(yōu)選地，非進行性的形式)、麻痹、截癱、戈謝病、肌病、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、帕金森病、多發(fā)性神經病和癡呆，優(yōu)選地小腦綜合征、小腦炎、多發(fā)性硬化、運動障礙和癡呆，更優(yōu)選地多發(fā)性硬化。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述疾病為脫髓鞘疾病，更優(yōu)選地影響CNS的脫髓鞘疾病，更優(yōu)選地多發(fā)性硬化，更優(yōu)選地與視神經炎相關的。

在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述疾病為癌癥，或優(yōu)選地腫瘤形成征兆的神經病學綜合征，其與一個或多個神經病學癥狀相關，和進一步地與癌癥相關，所述神經病學癥狀優(yōu)選地選自下列：升高的CSF中的細胞數(shù)目、鞘內IgG合成、CSF中的寡克隆條帶、CSF中的MRZ反應、視覺損害、視神經炎、頭痛、脊髓損傷和腦損傷。檢測出對于 浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的自身抗體可以指示增加的下列的可能性，即癌癥是存在的(這是使用其他方法不能檢測到的)或將會隨疾病進展而出現(xiàn)。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述癌癥為選自下列的腫瘤癌癥：肺的腫瘤、胸腺的腫瘤、胸腺腫瘤、睪丸腫瘤、頭和頸癌癥腫瘤、乳腺癌癥腫瘤、肛門-生殖器癌癥腫瘤、黑素瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、白血病、神經膠質瘤、生殖細胞腫瘤、絨毛膜癌、胰腺癌癥、卵巢癌癥、胃癌癥、胰腺的癌性損傷、肺腺癌、結腸直腸腺癌、肺鱗狀細胞腺癌、胃腺癌、卵巢表面上皮性瘤(例如，其良性的、增生性的或惡性的種類)、口腔鱗狀細胞癌、非小細胞肺癌、子宮內膜癌、膀胱癌癥、前列腺癌、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、非小細胞肺癌癥(NSCLC)、維爾姆斯腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、間皮瘤(例如，惡性間皮瘤)、結腸癌癥、肺癌癥、乳腺癌癥、子宮癌癥、甲狀腺癌癥、肝細胞癌、肝癌癥、腎癌癥、卡波西肉瘤和其他癌或肉瘤。

在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“診斷”是指任何類型的旨在下列目的的程序：獲得在評估患者是否在過去、在診斷之時或在未來罹患或可能罹患或比平均或比較受試者(其優(yōu)選地具有相似的癥狀)更可能罹患某種疾病或病癥之中有幫助的信息；發(fā)現(xiàn)疾病如何正在進展或在未來可能如何進展；或者評價患者對于某一治療(例如，施用免疫抑制藥物)的應答性。換言之，術語“診斷”不僅包括診斷，而且還包括預測和/或監(jiān)測疾病或病癥的過程。

在許多情況下，單純的檢測(換言之，測定樣品中是否存在可檢測水平的抗體)對于診斷來說是足夠的。如果可以檢測到自身抗體，那么這將是對于臨床醫(yī)師的診斷來說有幫助的信息，并且指明了增加的患者罹患疾病的可能性。在一個優(yōu)選的實施方案中，可以測定相比于在平均健康受試者中可以發(fā)現(xiàn)的水平而言的在血清中抗體的相對濃度。盡管在許多情況下測定自身抗體在樣品中是否存在或可檢測可以是足夠的，但是為了獲得對于診斷來說有幫助的信息而實施的方法可以包括測定濃度是否以至少0.1倍，優(yōu)選地以0.2、0.5、1、2、5、10、 20、25、50、100、200、500、1000、10000或100000倍比在平均健康受試者中所發(fā)現(xiàn)的濃度高。

本領域技術人員將會意識到，臨床醫(yī)師通常并不僅僅基于單一的診斷參數(shù)來對患者是否罹患或可能罹患疾病、病況或病癥作出結論，而是需要考慮其他方面，例如其他自身抗體的存在、標志物、血液參數(shù)、患者癥狀的臨床評估或者醫(yī)學成像或其他非侵入性方法(例如，多導睡眠描記法)的結果，以便達到結論性的診斷。參見Baenkler H.W.(2012),General aspects of autoimmune diagnostics,Renz,H.,Autoimmune diagnostics,2012,de Gruyter,第3頁。診斷試劑或方法的價值也可以在于可能排除一種疾病，因此允許間接診斷另一種疾病。在一個優(yōu)選的實施方案中，在整個本申請中所提到的任何癥狀或疾病的含義與到2015年5月29日為止本領域技術人員的理解相一致，如由教科書和科學出版物所證明的。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的多肽或方法可以用于測定患者是否罹患以與MS的癥狀相似的癥狀為特征的疾病，更優(yōu)選地為了區(qū)分MS和NMO。

因此，術語“診斷”優(yōu)選地不是暗示，根據(jù)本發(fā)明的診斷方法或試劑對于基于單一測試(更不必說參數(shù))來完成診斷來說將會是確定的和足夠的，而是可以是指對于所謂的“鑒別診斷”(即基于一系列診斷參數(shù)考慮了一系列可能病況的可能性的系統(tǒng)診斷程序)的貢獻。因此，本發(fā)明的方法、多肽或用途(其任選地用于測定患者是否罹患疾病)可以包括：從患者(優(yōu)選地人患者)中獲得樣品；測定在所述樣品中是否存在與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體，其中所述測定通過下述方式來進行，使樣品與本發(fā)明的多肽相接觸并檢測在所述多肽和所述自身抗體之間是否出現(xiàn)結合，優(yōu)選地通過使用經標記的二抗來進行檢測，其中所述自身抗體如果存在于樣品中則與所述多肽相結合；和如果測定到自身抗體存在于樣品中，則將患者診斷為罹患或更可能罹患所述神經病學病癥或癌癥。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法可以考慮下述步驟：檢測對于a)水通道蛋白-4的抗體，和對于b)浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的抗體，優(yōu)選地以該 順序。

術語“診斷”還可以是指用于在兩個或更多個與相似或相同的癥狀相關的病況之間進行區(qū)分的方法或試劑。

術語“診斷”還可以是指用于為患者選擇最有希望的治療方案的方法或試劑。換言之，所述方法或試劑可以涉及為受試者挑選治療方案。例如，檢測到自身抗體可以表明，將會選擇免疫抑制療法，其可以包括向患者施用一種或多種免疫抑制藥物。

本發(fā)明涉及包含與本發(fā)明的多肽相結合的抗體(優(yōu)選地，自身抗體)的復合物。作為用于診斷疾病的方法的一部分，可以使用或檢測這樣的復合物。來自受試者的包含抗體的液體樣品可以用于實施所述方法。這樣的液體樣品可以是任何來自受試者的包含具有代表性的一組抗體的體液，優(yōu)選地來自受試者的包含IgG免疫球蛋白類別的抗體的樣品。例如，樣品可以是腦脊液(CSF)、血液或血清、淋巴、組織液，優(yōu)選地是血清或CSF，更優(yōu)選地是血清。

使包含抗體的液體樣品與本發(fā)明的多肽相接觸的步驟可以通過下述方式來進行：在包含抗體的樣品存在下，在與包含所述多肽和結合本發(fā)明多肽的抗體(優(yōu)選地，自身抗體)的復合物形成相容的條件下，溫育固定化形式的所述多肽。隨后，可以移除在那時耗盡了與本發(fā)明的多肽相結合的抗體的液體樣品，接著是一個或多個洗滌步驟。最后，可以檢測包含所述抗體和所述多肽的復合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，術語“與復合物形成相容的條件”是這樣的條件，其允許特異性的抗原-抗體相互作用從而建立包含所述多肽和所述抗體的復合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，此類條件可以包括將所述多肽在于PBS緩沖液中以1:100稀釋的樣品中在25℃下溫育30分鐘。在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“自身抗體”是指與產生所述自身抗體的動物(優(yōu)選地，哺乳動物)的內源性分子特異性地結合的抗體，其中此類抗體的水平更優(yōu)選地相比于任何與此類內源性分子特異性地結合的其他抗體的平均值而言是升高的。在一個最優(yōu)選的實施方案中，所述自身抗體為與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體。

在一個優(yōu)選的實施方案中，用于根據(jù)本發(fā)明的預后、診斷、方法或測試試劑盒的復合物的檢測包括使用選自下列的方法：免疫擴散技術，免疫電泳技術，光散射免疫測定法，凝集技術，標記免疫測定法例如選自放射性標記免疫測定法、酶免疫測定法、化學發(fā)光免疫測定法和免疫熒光技術的那些。本領域技術人員熟悉這些方法，其也描述在現(xiàn)有技術中，例如在Zane,H.D.(2001),Immunology–Theoretical &Practical Concepts in Laboratory Medicine,W.B.Saunders Company中，特別是在第14章中。

備選地，可以使用除了液體樣品之外的包括包含本發(fā)明多肽的組織的樣品。所述組織樣品優(yōu)選地來自表達內源性浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的組織。然后，可以使這樣的樣品(其可以以固定在載體例如用于顯微分析的載玻片上的組織切片的形式)與結合本發(fā)明多肽的本發(fā)明抗體(優(yōu)選地，自身抗體)相接觸。優(yōu)選地，對所述抗體進行標記以允許與結合本發(fā)明多肽的內源性抗體相區(qū)分，從而使得可以對新形成的復合物進行檢測，和任選地進行定量。如果所形成的復合物的量低于在取自健康受試者的樣品中所發(fā)現(xiàn)的量，那么受檢查樣品所取自的受試者可能罹患疾病。

可以將任何證明包含抗體和本發(fā)明多肽的復合物存在或不存在的數(shù)據(jù)與參考數(shù)據(jù)相關聯(lián)。例如，檢測到所述復合物指示，提供所分析樣品的患者已經罹患、正在罹患或在未來可能罹患疾病。如果患者以前已被診斷并且再次運行用于獲得在診斷上有關的信息的方法，那么可以將在這兩次運行中檢測到的復合物的量相關聯(lián)以獲悉有關疾病進展和/或治療成功的信息。例如，如果發(fā)現(xiàn)復合物的量增加，那么這暗示病癥正在進展從而可能在未來顯現(xiàn)，和/或所嘗試的任何治療是不成功的。

在一個優(yōu)選的實施方案中，使用微量培養(yǎng)板、膜ELISA、斑點印跡或線印跡(line blot)來實施根據(jù)本發(fā)明的診斷方法。本領域技術人員熟悉實驗設置，其描述在現(xiàn)有技術(Raoult,D.和Dasch,G.A.(1989),The line blot:an immunoassay for monoclonal and other antibodies. Its application to the serotyping of gram-negative bacteria.J.Immunol.Methods,125(1-2),57-65；WO2013041540)中。

在另一個優(yōu)選的實施方案中，按照本發(fā)明教導的預后、診斷、方法或測試試劑盒考慮使用間接免疫熒光。本領域技術人員熟悉此類技術和合適樣品的制備，其描述在現(xiàn)有技術(US4647543；Voigt,J.,Krause,C.,E,Saschenbrecker,S.,Hahn,M.,Danckwardt,M.,Feirer,C.,Ens,K,Fechner,K,Barth,E,Martinetz,T.和W.(2012),Automated Indirect Immunofluorescence Evaluation of Antinuclear Autoantibodies on HEp-2Cells,”Clinical and Developmental Immunology,第2012卷，doi:10.1155/2012/651058；Bonilla,E.,Francis,L.,Allam,F.等人,Immuno-fluorescence microscopy is superior to fluorescent beads for detection of antinuclear antibody reactivity in systemic lupus erythematosus patients,Clinical Immunology,第124卷,第1期,第18-21頁,2007)中。合適的試劑、裝置和軟件包是商購可得的，例如從EUROIMMUN,Lübeck,Germany。

使樣品經歷僅測定是否存在與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的測試，但是優(yōu)選的是，診斷方法、測試、裝置等考慮測定針對各種各樣涉及神經病學自身免疫疾病的抗原或其變體的自身抗體的存在，所述抗原優(yōu)選地選自Hu、Yo、Ri、CV2、PNMA1、PNMA2、DNER/Tr、ARHGAP26、ITPR1、ATP1A3、NBC1、神經軟骨蛋白、CARPVIII、Zic4、Sox1、Ma、MAG、MPO、MBP、GAD65、雙載蛋白、恢復蛋白、GABA A受體、GABA B受體、甘氨酸受體、橋連蛋白、IgLON5、DPPX、水通道蛋白-4、MOG、NMDA受體、AMPA受體、GRM1、GRM5、LGI1、VGCC和mGluR1和CASPR2，所述抗原優(yōu)選地是經固定化的，例如在醫(yī)學裝置例如線印跡上。在診斷上有關的標志物神經軟骨蛋白(EP15001186)、ITPR1(EP14003703.7)、NBC1(EP14003958.7)和ATP1A3(也稱為人神經元Na(+)/K(+)ATP酶的α3亞基)(EP14171561.5)已經描述在現(xiàn)有技術中。

根據(jù)本發(fā)明的教導，提供用于疾病診斷的與本發(fā)明的多肽相結合的抗體，優(yōu)選地自身抗體。本領域技術人員熟悉用于純化抗體的方法，例如在Hermanson,G.T.,Mallia,A.K.和Smith,P.K.(1992),Immobilized Affinity Ligand Techniques,San Diego:Academic Press中所描述的那些。簡而言之，將與目的抗體(其抗原是本發(fā)明的多肽)特異性地結合的抗原固定化，并用于經由親和層析來從適當?shù)膩碓粗屑兓瞿康目贵w。來自罹患由發(fā)明人所鑒定的神經病學病癥的患者的包含抗體的液體樣品可以用作來源。

根據(jù)本發(fā)明，提供能夠與本發(fā)明的多肽特異性地結合的抗體，例如自身抗體。在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“抗體”是指任何基于免疫球蛋白的結合部分，更優(yōu)選地包含至少一個免疫球蛋白重鏈和至少一個免疫球蛋白輕鏈的結合部分，其包括但不限于單克隆和多克隆抗體以及抗體的變體，特別是片段，所述結合部分能夠與各自的抗原相結合，更優(yōu)選地與之特異性地結合。在一個優(yōu)選的實施方案中，此處所使用的術語“特異性地結合”表示，所述結合比以1×10^-5M，更優(yōu)選地1×10^-7M，更優(yōu)選地1×10^-8M，更優(yōu)選地1×10^-9M，更優(yōu)選地1×10^-10M，更優(yōu)選地1×10^-11M，更優(yōu)選地1×10^-12M的解離常數(shù)為特征的結合反應更強，所述解離常數(shù)通過使用Biacore設備在25℃下在PBS緩沖液(pH 7)中通過表面等離子體共振來測定。所述抗體可以是自身抗體制備物的一部分，所述自身抗體制備物是異源的或可以是同源的自身抗體，其中異源制備物包含許多不同的自身抗體種類，如通過從人供者血清進行制備而可獲得的，例如通過使用經固定化的抗原進行親和層析以純化任何能夠與所述抗原相結合的自身抗體。所述抗體可以是經糖基化的或非糖基化的。本領域技術人員熟悉可以用于鑒定、產生和純化抗體及其變體的方法，例如在EP 2 423 226 A2以及其中的參考文獻之中所描述的那些。所述抗體可以用作診斷試劑，單獨地，或相組合地，例如處于與本發(fā)明的多肽的復合物之中。

本發(fā)明提供了用于分離與本發(fā)明的多肽相結合的抗體(優(yōu)選地， 自身抗體)的方法，其包括下列步驟：a)使包含該抗體的樣品與本發(fā)明的多肽相接觸，從而形成復合物，b)分離在步驟a)中形成的復合物，c)使在步驟b)中分離出的復合物解離，和d)將該抗體與本發(fā)明的多肽分開。可以將來自罹患由發(fā)明人所鑒定的新的神經病學病癥的患者的樣品用作抗體的來源。合適的方法描述在現(xiàn)有技術中，例如在由GE Healthcare Life Sciences公開的手冊“Affinity chromatography”、“Strategies for Protein Purification”和“Antibody Purification”(2009/2010)中，和在Philips,Terry,M.,Analytical techniques in immunochemistry,1992,Marcel Dekker,Inc中。

本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的多肽的藥物組合物，所述組合物優(yōu)選地適合于向受試者，優(yōu)選地哺乳動物受試者，更優(yōu)選地人進行施用。這樣的藥物組合物可以包含藥學上可接受的載體。所述藥物組合物可以例如經口服途徑、經腸胃外途徑、通過吸入噴霧劑、經局部途徑、通過滴眼劑、經直腸途徑、經鼻途徑、經頰途徑、經陰道途徑或經由植入型儲器進行施用，其中此處所使用的術語“經腸胃外途徑”包括皮下、皮內、靜脈內、肌內、關節(jié)內、滑膜內、胸骨內、鞘內、損傷內和顱內注射或輸注技術。所述藥物組合物可以以合適的劑型來提供，例如膠囊、片劑以及水性懸浮液和溶液，優(yōu)選地以無菌的形式。它可以在治療疾病的方法中進行使用，所述方法包括向受試者施用有效量的本發(fā)明的多肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的多肽的疫苗，其任選地包含輔助試劑例如佐劑或緩沖液；和本發(fā)明的多肽用于制備疫苗的用途。

在本發(fā)明的范圍內，提供了包含，優(yōu)選地涂有本發(fā)明的(自身)抗體和/或本發(fā)明的多肽的醫(yī)學或診斷裝置。優(yōu)選地，這樣的醫(yī)學或診斷裝置以這樣的形式包含本發(fā)明的多肽，所述形式允許使其與水溶液，更優(yōu)選地液體人樣品以直截了當?shù)姆绞较嘟佑|。特別地，可以將本發(fā)明的多肽固定化在載體例如人工載體的表面上，所述人工載體優(yōu)選地選自玻璃板或載玻片、生物芯片、微滴定板、珠粒例如磁珠、單采血液成分術裝置、色譜柱、膜等。示例性的醫(yī)學裝置包括線印跡、微量 培養(yǎng)板、用于顯微術的載玻片、珠粒和生物芯片。除了本發(fā)明的多肽外，所述醫(yī)學或診斷裝置還可以包含額外的多肽，優(yōu)選地以經富集的、分離的和/或重組的形式，例如陽性或陰性對照或者已知的具有診斷價值的與自身抗體相結合的其他抗原，特別是與其他與一種或多種相同或相似癥狀相關的疾病有關的那些。除了本發(fā)明的多肽外，所述醫(yī)學裝置(其優(yōu)選地包含一種在診斷上有用的載體，所述載體包含一種或多種抗原，優(yōu)選地多于一種抗原；或多于一種在診斷上有用的載體，所述載體中的每一種包含一種或多種抗原，優(yōu)選地一種抗原)還可以包含一種或多種選自Hu、Yo、Ri、CV2、PNMA1、PNMA2、DNER/Tr、ARHGAP26、ITPR1、ATP1A3、NBC1、神經軟骨蛋白、CARPVIII、Zic4、Sox1、Ma、MAG、MPO、MBP、GAD65、雙載蛋白、恢復蛋白、GABA A受體、GABA B受體、甘氨酸受體、橋連蛋白、IgLON5、DPPX、水通道蛋白-4、MOG、NMDA受體、AMPA受體、GRM1、GRM5、LGI1、VGCC和mGluR1和CASPR2的抗原，優(yōu)選地包含至少包括根據(jù)本發(fā)明的多肽、水通道蛋白-4和MOG的組合?？梢允褂妹糠N抗原的具有與各自的對于所述抗原的自身抗體相結合的能力(作為生物學活性)的變體，以代替所述抗原。

本發(fā)明的教導提供了試劑盒，其優(yōu)選地用于診斷疾病。這樣的試劑盒可以包含詳細說明如何使用該試劑盒的說明書，和用于使本發(fā)明的多肽與來自受試者(優(yōu)選地，人受試者)的體液樣品相接觸的工具，例如線印跡，其中本發(fā)明的多肽被固定化在線印跡上。進一步地，所述試劑盒可以包含陽性對照，例如一批已知與本發(fā)明的多肽相結合的自身抗體或重組抗體；和陰性對照，例如與本發(fā)明的多肽不具有可檢測的親和力的蛋白質例如牛血清白蛋白。最后，這樣的試劑盒可以包含用于制備校準曲線的抗體或抗原的標準溶液。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述試劑盒包含用于檢測與本發(fā)明的多肽相結合的抗體(更優(yōu)選地，自身抗體)的工具，所述檢測優(yōu)選地通過檢測包含本發(fā)明的多肽和與本發(fā)明的多肽相結合的抗體的復合物來進行。這樣的工具優(yōu)選地是這樣的試劑，所述試劑與所述復合物相 結合并且修飾該復合物或者攜帶標記從而使得該復合物可檢測。例如，所述工具可以是經標記的抗體，其在除了被一抗所識別的結合位點之外的其他結合位點處與所述多肽相結合或者與一抗的恒定區(qū)相結合。備選地，所述工具可以是與所述自身抗體的恒定區(qū)相結合的二抗，優(yōu)選地對于哺乳動物IgG類抗體來說特異的二抗。許多用于檢測此類復合物的方法和工具在現(xiàn)有技術中已有描述，例如在Philips,Terry,M.,Analytical techniques in immunochemistry,1992,Marcel Dekker,Inc中。

包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2的本發(fā)明的多肽可以以包含和/或表達編碼所述多肽的核酸的細胞的形式來產生或提供。如果使用包含編碼本發(fā)明的多肽或其變體的序列的核酸，那么這樣的核酸可以是未修飾的核酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸為這樣的核酸，其本身不在自然界中出現(xiàn)，并且相比于天然核酸而言包含至少一個修飾，例如同位素內容物或化學修飾，例如甲基化、序列修飾、標記等，其指示了合成來源。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸為重組核酸或核酸的一部分，和在一個更優(yōu)選的實施方案中，為載體的一部分，在所述載體中它可以與允許所述核酸表達(優(yōu)選地，過表達)的啟動子功能性地相連接。本領域技術人員熟悉各種各樣的合適的載體，其是商購可得的，例如從Origene。例如，可以使用編碼具有C-末端GFP的融合構建體的載體。所述細胞可以是真核或原核細胞，優(yōu)選地真核細胞，例如酵母細胞，和更優(yōu)選地為哺乳動物細胞，更優(yōu)選地人細胞例如HEK293細胞。哺乳動物細胞的實例包括HEK293、CHO或COS-7細胞。包含編碼本發(fā)明的多肽的核酸的細胞可以是重組細胞或分離的細胞，其中術語“分離的”表示，所述細胞是經富集的，從而使得相比于所述細胞的野生型的環(huán)境而言，存在很少的其他分化或種類的細胞或者實際上不存在這樣的其他細胞。

本發(fā)明的教導可以不僅用于診斷，而且還用于預防或治療疾病，更特別地，用于預防或治療疾病的方法，其包括下列步驟：a)降低在受試者血液中與本發(fā)明的多肽相結合的自身抗體的濃度，和/或b)施 用一種或多種免疫抑制藥學物質，其優(yōu)選地選自利妥昔單抗、波尼松、甲波尼龍、環(huán)磷酰胺、嗎替麥考酚酯、靜脈內免疫球蛋白、他克莫司、環(huán)孢菌素、氨甲蝶呤、硫唑嘌呤，和/或藥物組合物。

圖1顯示了在抗浮艦蛋白陽性的患者中的表現(xiàn)出多重脫髓鞘損傷的頭部的MRI。該女性患者呈現(xiàn)出具有所懷疑的自身免疫來源的視神經炎。損傷在用干擾素β進行免疫調節(jié)療法5個月的情況下保持穩(wěn)定。在最初呈獻時(A、B)和6個月之后(C、D)同一名34歲的女性患者的T2加權磁共振成像(A、C)和FLAIR成像(B、D)。

圖2顯示了中樞神經組織的免疫熒光染色。在第一步中將冷凍切片與患者血清(1:100)或CSF(未稀釋的)一起進行溫育，和在第二步中與經FITC標記的山羊抗人IgG一起進行溫育。通過與TO-PRO-3碘化物一起進行溫育來對細胞核進行復染(藍色)。獲得分子層(ML)的細顆粒狀染色和顆粒層的斑片狀染色。在海馬上，外部ML比內部ML更強烈。A)大鼠海馬，B)大鼠小腦，C)猴小腦。

圖3顯示了組織免疫沉淀和抗原鑒定。將大鼠或豬小腦的冷凍切片與患者血清(1:200)一起進行溫育，在PBS中洗滌，并通過使用去污劑來增溶。將該溶液與包被有G蛋白的磁珠一起進行溫育。通過SDS來洗脫免疫復合物，并其使經歷SDS-PAGE分析和Western印跡。

圖3A：左：用膠體考馬斯藍進行的染色。右：在與抗浮艦蛋白2一起進行溫育后的Western印跡。泳道1：分子量標準參照物；泳道2和3：由大鼠小腦來獲得的患者血清的組織免疫沉淀物；泳道4和5：對照樣品的組織免疫沉淀物。箭頭指明了50kDa的免疫沉淀出的抗原的位置，而虛線箭頭指明了處于52kDa的IgG重鏈的位置。

圖3B：用患者血清(1和4)和抗浮艦蛋白2抗體(2和5)來進行的大鼠海馬(1-3)和小腦(4-6)、猴腸神經(7-9)和視神經(10-12)組織切片的免疫熒光染色。經合并的照片顯示了這兩種反應性的共定位，包括在海馬上外部分子層的更強烈的染色(3和6)。

圖4顯示了重組浮艦蛋白的免疫熒光染色以及其在組織上對于抗 體反應的中和。

圖4A：經轉染的HEK293細胞的免疫熒光分析。將患者或對照血清(1:1000)(綠色)在經丙酮固定的表達浮艦蛋白1(A1)、浮艦蛋白2(A2)、浮艦蛋白1和2(A3)的重組HEK293細胞或經模擬物轉染的對照(A4)上進行溫育。

圖4B：在神經元組織上免疫熒光反應的中和。將患者血清(綠色)與用作為對照的空載體(B1-B4)或用浮艦蛋白1/2(B5-B8)進行轉染的HEK293細胞的提取物一起進行預溫育。包含浮艦蛋白1/2的提取物大大地降低了或取消了免疫反應。通過與TO-PRO-3碘化物一起進行溫育來對細胞核進行復染(藍色)。大鼠海馬(B1和B5)，大鼠小腦(B2和B6)，猴小腦(B3和B7)，HEK293-浮艦蛋白1/2(B4和B8)。

在本申請中公開了許多序列，更特別地，SEQ ID NO 1，其表示表達載體“pTriEX-1-浮艦蛋白-1[人]-His”的核苷酸序列；SEQ ID NO 2，其表示附著至C-末端His標簽的人浮艦蛋白1的多肽序列；SEQ ID NO 3，其表示表達載體“pTriEX-1-浮艦蛋白-1[人]”的核苷酸序列；SEQ ID NO 4，其表示人浮艦蛋白1的多肽序列；SEQ ID NO 5，其表示表達載體“pTriEX-1-浮艦蛋白-2[人]-His”的核苷酸序列；SEQ ID NO 6，其表示附著至C-末端His標簽的人浮艦蛋白2的多肽序列；SEQ ID NO 7，其表示表達載體“pTriEX-1-浮艦蛋白-2[人]”的核苷酸序列；和SEQ ID NO 8，其表示人浮艦蛋白2的多肽序列。

實施例

概述：

下面的實施例顯示了，在臨床上評估了罹患視神經炎，更特別地視覺損害、頭痛和腦損傷的患者，但是他們的疾病的分子基礎仍然是未知的。對他們的血液進行了篩選，但其不包含對于已知神經病學標 志物的自身抗體?；谠谂c數(shù)種哺乳動物組織，更特別地來自大鼠和豬的小腦和海馬進行反應后的特征性染色圖式，分離出了自身抗體。

使用重組浮艦蛋白1和浮艦蛋白2來進行的免疫沉淀、質譜法和競爭性結合研究將浮艦蛋白1和浮艦蛋白2揭示為所述抗體的靶標。當與重組浮艦蛋白1/2相接觸時，來自具有各種神經自身抗體(抗-NMDAR、抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri、抗-AQP4、抗-LGI1、抗-CASPR2)的患者的34份血清和來自226名健康對照的血清未顯示反應，這確認了本發(fā)明的方法是一種特異性的測定法。

所述患者對于免疫抑制治療作出正面響應直至達到效果。視覺癥狀完全消失。

患者的表征

一名在其他方面健康的女性患者(34歲)起初呈現(xiàn)出視力模糊、局部眼球后疼痛和右眼的紅色視覺的強度減低(其在呈獻之前五天開始)。除了存在有不值得注意的醫(yī)療史外，在近親中沒有關于任何自身免疫疾病的暗示，除了懷疑在外祖母中有多發(fā)性硬化。臨床神經病學檢查揭示了在右眼上視力受損(0.6；左：1.0)。視覺誘發(fā)電位測試揭示了光傳入加工的嚴重擾亂。此外，進一步的電生理學測試也揭示了來自左腿的感覺傳入的輕微紊亂，但在經顱磁力刺激后對于所有四肢的應答正常。顱MRI揭示了右視神經的炎癥征象(對比度增強)以及幾處小的皮質下白質損傷(沒有血腦屏障損害的征象)，這對于脫髓鞘疾病例如多發(fā)性硬化來說是典型的(圖1)。血液測試顯示了關于腎和肝功能的正常值、正常的電解質以及正常的紅細胞和白細胞的數(shù)目和分布。對于血清中自身抗體的測試沒有揭示出明顯的發(fā)現(xiàn)：類風濕因子、pANCA、AMA、抗磷脂、抗疏螺旋體(IgG/IgM)和抗密螺旋體是陰性的；ANA以1:320的滴度存在。CSF揭示了輕度的腦脊液淋巴細胞增多(9個細胞/μL)、正常的蛋白質(269mg/L)、局部IgG合成(53％)和寡克隆條帶(其在血清中不存在)。抗-AQP4在CSF中和在血清中都是不可檢測的。

在懷疑視神經的自身免疫性神經炎的情況下，用靜脈內糖皮質激素脈沖療法來治療患者。假定是臨床孤立綜合征(Clinically Isolated Syndrome，CIS)，并且開始用倍泰龍進行免疫調節(jié)。5個月后，視覺癥狀完全消失。

在最初癥狀開始后22個月，患者呈現(xiàn)出穩(wěn)定的臨床狀態(tài)，沒有神經病學癥狀的進一步進展。對照腰椎穿刺揭示了自身的抗體的產生，其中具有CSF中的寡克隆條帶和5個細胞/μL CSF的輕度的腦脊液淋巴細胞增多。

間接免疫熒光測定法(IFA)

將具有包括腦組織冷凍切片(大鼠的海馬，大鼠、猴和豬的小腦)和HEK293細胞(其各自地表達30種重組的腦抗原)的生物芯片嵌合體的載玻片用于IFA。將所述載玻片與70μL的在PBS、0.2％Tween-20(IFA緩沖液)中進行稀釋的樣品一起在室溫下溫育30分鐘，用IFA緩沖液進行沖洗，并浸沒在IFA緩沖液中5分鐘。隨后，將多克隆山羊抗人泛-IgG(EUROIMMUN)或者單克隆鼠類抗人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(Sigma-Aldrich)(其各自用異硫氰酸熒光素(FITC)進行標記)在室溫下溫育30分鐘。然后將載玻片再次洗滌，包埋在經PBS緩沖的、包含DABCO的甘油(大約20μL/嵌合體)中，并且由兩名獨立的觀察者通過使用激光掃描顯微鏡(LSM700,Zeiss,Jena,Germany)來進行檢查。包括了陽性和陰性對照。基于組織圖式和經轉染的細胞的熒光強度(直接與未轉染的細胞和對照樣品相比較)來對樣品進行分類。終點滴度是指顯示出可見熒光的最高稀釋度。進行采用原代海馬神經元的活細胞IFA(Dalmau J,Gleichman AJ,Hughes EG,Rossi JE,Peng X,Lai M等人.Anti-NMDA-receptor encephalitis:case series and analysis of the effects of antibodies.Lancet Neurol.2008年10月11日)。

在一些實驗中，在第一步中使用針對浮艦蛋白2的多克隆兔抗體(Sigma-Aldrich，稀釋度1:100)，隨后為與抗兔IgG-Cy3(Jackson Research,Suffolk,United Kingdom)一起進行溫育。通過用TO-PRO3碘化物(稀釋度1:2000)(ThermoFisher Scientific,Schwerte,Germany)進行DNA染色來使細胞核顯現(xiàn)。在IFA之前1小時，將重組抗原與經稀釋的血清樣品相混合(參見W,Otte M,Ulrich S,Normann D,Finkbeiner H,K等人.Autoimmunity to pancreatic juice in Crohn's disease.Results of an autoantibody screening in patients with chronic inflammatory bowel disease.Scand J Gastroenterol Suppl 1987,139:41-52)，以用于中和實驗。

抗原的組織免疫沉淀和鑒定

從大鼠或豬解剖出小腦，并將其在-160℃的異戊烷中沖擊冷凍。然后，將組織用SM2000R切片機(Leica Microsystems,Nussloch,Germany)進行冷凍切片(4μm)，放置在載玻片上，干燥，并貯存于-196℃。對于HIP，將載玻片與患者的血清(以1:100進行稀釋的)一起在4℃下溫育3小時，隨后為用IFA緩沖液的3個洗滌步驟。然后，將組織用增溶緩沖液(100mmol/L tris-HCl pH 7.4、150mmol/L氯化鈉、2.5mmol/L EDTA、0.5％(w/v)脫氧膽酸鹽、1％(w/v)Triton X-100，其包含蛋白酶抑制劑)在室溫下提取30分鐘。將得到的懸浮液均質化，并且以16,000×g在4℃下離心15分鐘。在4℃下用G蛋白Dynabeads(ThermoFisher Scientific,Dreieich,Germany)使免疫復合物從清澈的上清液中沉淀過夜，用PBS洗滌3次，并且用PBS、5mmol/L二硫蘇糖醇、1％(w/v)十二烷基硫酸鈉在95℃下洗脫10分鐘。洗脫物通過SDS-PAGE和質譜法或Western印跡來進行分析。

在HEK293中浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的重組表達

使用標準方法來進行表達載體(編碼包含浮艦蛋白1的多肽的SEQ ID NO 1和3；編碼包含浮艦蛋白2的多肽的SEQ ID NO 5和7)的克隆。為了制備用于IFA的基底，將HEK293接種在無菌蓋玻片上， 進行轉染，并且允許其單獨地或者聯(lián)合地表達浮艦蛋白1和浮艦蛋白2 48小時。將蓋玻片用PBS進行洗滌，用丙酮在室溫下固定10分鐘，風干，切成毫米大小的生物芯片，并且在所描述的IFA中用作基底。備選地，將細胞在標準的T-培養(yǎng)瓶中進行轉染，并且在5天后收獲細胞。將細胞沉降物用增溶緩沖液進行提取。將提取物以等分試樣貯存于-80℃直至進一步使用。

用更大群的患者來進行的研究

通過IFA來分析來自49名具有各種神經自身抗體的患者(包括20名具有針對AQP4的自身抗體(滴度達1:3200)的患者)和來自226名健康對照的血清。這些血清中沒有一個與HEK293-浮艦蛋白1、HEK293-浮艦蛋白2和HEK293-浮艦蛋白1/2反應。

然后，在224份樣品中回顧性地測定抗浮艦蛋白1/2的狀態(tài)，對于所述樣品已經在Clinical Immunological Laboratory Lübeck進行了全面的寬范圍的神經自身抗體篩選(包括前面提及的參數(shù))，和對于所述樣品已經報道了沒有已知抗原特異性的神經組織反應性IgG自身抗體。在四名患者中揭示了血清抗浮艦蛋白1/2(滴度：1:1000、1:1000、1:10000、1:10000)?；颊逷2、P3和P5也顯示出在CSF中的抗浮艦蛋白1/2(滴度：1:3.2、1:100、1:1000)。對于P4，CSF是不可得的。對于P1、P3和P5，計算出了>4的特異性抗體指數(shù)。分析了患者的額外的隨訪血清(當可得時)，并且顯示P1、P2和P4的抗浮艦蛋白1/2滴度分別在18、24和72個月的時間段中是穩(wěn)定的。P5的血清顯示出在血漿交換后七周降低至1:320。

然后，將HEK293-浮艦蛋白1/2整合在參考實驗室的寬范圍自身抗體篩選方案中。在一群521名連續(xù)的患者(對于其要求測定抗-AQP4)中，十八名患者對于抗-AQP4來說是陽性的，而三名患者展示出抗浮艦蛋白1/2。對于所述三名患者之一，醫(yī)療記錄是可取得的(血清：1:1000，CSF：無)。在150名連續(xù)的未選擇的神經病學患者的診斷性病情檢查期間鑒定出一名額外的患者(血清：1:10，CSF：陰 性)，和通過篩選57份來自具有分離的ON(視神經炎)的患者的匿名的、抗-AQP4和抗-MOG陰性的血清而鑒定出了另一名患者(1:10，CSF不可得)。

總之，所有七名患者(對于其可以評價醫(yī)療記錄)具有播散性脫髓鞘的放射學征象、輕度的腦脊液淋巴細胞增多和CSF中的OCB，這與MS或暗示MS的CIS相一致。他們中的六名呈現(xiàn)出視神經炎。在所有情況中，自身抗體是IgG1亞類的并且結合至浮艦蛋白1/2，但不結合至獨個的浮艦蛋白1或浮艦蛋白2。這些患者中沒有一個展示出抗-AQP4或抗-MOG抗體。

本發(fā)明的一些實施方案如下：

1.用于診斷疾病的方法，其包括在來自患者的樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

2.包含浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2或者其變體的多肽，其優(yōu)選地被固定化，更優(yōu)選地在固體載體上。

3.根據(jù)實施方案2的多肽用于疾病診斷的用途，所述疾病診斷優(yōu)選地包括在樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

4.根據(jù)實施方案2的多肽，其用于在疾病治療中使用。

5.與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體，優(yōu)選地分離的自身抗體，其中所述自身抗體優(yōu)選地處于與根據(jù)實施方案2的多肽的復合物之中。

6.用于分離與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的方法，其包括下列步驟：

a)使包含該自身抗體的樣品與根據(jù)實施方案2的多肽在與復合物形成相容的條件下相接觸，其中所述自身抗體與所述多肽相結合，

b)分離在步驟a)中形成的復合物，

c)使在步驟b)中分離出的復合物解離，和

d)將該自身抗體與該多肽分開。

7.藥物組合物，或醫(yī)學裝置，優(yōu)選地診斷裝置，其包含根據(jù)實施方案2的多肽。

8.用于疾病診斷的測試試劑盒，所述測試試劑盒包含根據(jù)實施方案2的多肽，其中所述測試試劑盒優(yōu)選地還包含用于檢測復合物的工具，所述復合物包含根據(jù)實施方案2的多肽和與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體。

9.根據(jù)實施方案1、3、4和8中任一項的方法、多肽、用途、自身抗體、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中所述患者具有一個或多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀，或者所述疾病與一個或 多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀相關：升高的CSF中的細胞數(shù)目，鞘內IgG合成，CSF中的寡克隆條帶，CSF中的MRZ反應，視覺損害，優(yōu)選地視敏度損害，視神經炎，頭痛，脊髓損傷，和腦損傷。

10.根據(jù)實施方案1、3、4、8和9中任一項的方法、多肽、用途、自身抗體、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中所述疾病為神經病學疾病，優(yōu)選地脫髓鞘疾病，優(yōu)選地CNS的疾病，優(yōu)選地腦的疾病，優(yōu)選地與視神經的炎癥相關的疾病。

11.根據(jù)實施方案1至10中任一項的多肽、自身抗體、方法、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中所述多肽以包含編碼所述多肽的核酸的細胞的形式或以包含所述多肽的組織的形式來提供。

12.根據(jù)實施方案1至11中任一項的多肽、自身抗體、方法、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中所述多肽為重組的和/或分離的多肽。

13.根據(jù)實施方案1、3、6和9至12的方法，其中所述樣品為包含抗體的體液，其優(yōu)選地選自全血、血清、腦脊液和唾液。

14.根據(jù)實施方案6至13中任一項的方法、多肽、用途、自身抗體、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中包含浮艦蛋白1或其變體的多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的多肽兩者都存在，并且優(yōu)選地是復合物的一部分。

15.根據(jù)實施方案1、5、6和9至14中任一項的方法、多肽、用途、自身抗體、藥物組合物、裝置或測試試劑盒，其中所述自身抗體與包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的復合物相結合。

16.根據(jù)實施方案2的多肽在制備用于在患者中進行疾病診斷的測試試劑盒中的用途。

17.根據(jù)實施方案16的用途，其中所述疾病診斷包括在來自患者的樣品中檢測與浮艦蛋白1和/或浮艦蛋白2相結合的自身抗體的步驟。

18.根據(jù)實施方案2的多肽在制備藥物組合物中的用途，所述藥 物組合物用于在患者的疾病治療中使用。

19.根據(jù)實施方案16至18中任一項的用途，其中所述患者具有一個或多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀，或者所述疾病與一個或多個，優(yōu)選地兩個或更多個選自下列的癥狀相關：升高的CSF中的細胞數(shù)目，鞘內IgG合成，CSF中的寡克隆條帶，CSF中的MRZ反應，視覺損害，優(yōu)選地視敏度損害，視神經炎，頭痛，脊髓損傷，和腦損傷。

20.根據(jù)實施方案16至18中任一項的用途，其中所述疾病為神經病學疾病，優(yōu)選地脫髓鞘疾病，優(yōu)選地CNS的疾病，優(yōu)選地腦的疾病，優(yōu)選地與視神經的炎癥相關的疾病。

21.根據(jù)實施方案16至18中任一項的用途，其中所述多肽以包含編碼所述多肽的核酸的細胞的形式或以包含所述多肽的組織的形式來提供。

22.根據(jù)實施方案16至18中任一項的用途，其中所述多肽為重組的和/或分離的多肽。

23.根據(jù)實施方案17的用途，其中所述樣品為包含抗體的體液，其優(yōu)選地選自全血、血清、腦脊液和唾液。

24.根據(jù)實施方案16至18中任一項的用途，其中包含浮艦蛋白1或其變體的多肽和包含浮艦蛋白2或其變體的多肽兩者都存在，并且優(yōu)選地是復合物的一部分。

25.根據(jù)實施方案17的用途，其中所述自身抗體與包含浮艦蛋白1和浮艦蛋白2的復合物相結合。