本發(fā)明屬于生物制藥技術領域，具體涉及生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝。

背景技術：

1920年從后葉分離并部分提純了兩種激素，垂體后葉素和加壓素。它們都是由丘腦下部特殊的神經(jīng)細胞分泌的，沿丘腦下部垂體束到達后葉并貯存于后葉。

垂體后葉素為縮宮素和加壓素的混合體，其有效成分效價比值為0.9～1.7；主要用于肺、支氣管出血(如咯血)消化道出血(嘔血、便血)。并適用于婦科催產(chǎn)以及產(chǎn)后收縮子宮、止血等。對于腹腔手術后腸道麻痹等亦有功效。垂體后葉素尚對尿崩癥有減少排尿量之作用。垂體后葉注射液對平滑肌有強烈收縮作用，尤以對血管及子宮之基層作用更強，由于劑量不同，可引起子宮節(jié)律收縮至強直收縮。對于腸道及膀胱亦能增加張力而使其收縮。此外，垂體后葉素尚能抑制排尿。

在pH值在3.0～4.0之間最穩(wěn)定，90℃加熱半小時或50℃以下較長時間加熱均不失活。在pH＝5.0時，加熱會引起效價的損失；pH＝6.0時，即在正常溫度下也能損失較多的活力。在冰醋酸中室溫放置24小時，檢查不出變化。

而現(xiàn)有的垂體后葉素生產(chǎn)工藝往往采用存在垂體后葉素內(nèi)蛋白質(zhì)雜質(zhì)含量高；提取效率低；現(xiàn)有技術垂體后葉素通常采用不滅菌或半無菌罐封后流動蒸汽滅菌，導致垂體后葉素澄明度較低，且容易變質(zhì)、失效。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術的不足，提供生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝。

生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝，包括以下步驟：

1)初脫丙酮、分離

取出浸泡于丙酮中的豬小腦，置于盤內(nèi)進行點數(shù)，去除破碎的豬小腦，整粒豬小腦用鑷子迅速分離成前葉和后葉，并將后葉置于丙酮溶液中浸泡；

2)后葉粗粉制備

從丙酮溶液中取出后葉，并用紗布在漏斗上濾干，待丙酮揮發(fā)盡后，放入干燥箱中，干燥5～7天，干燥后的干后葉送入粉碎裝置粉碎成后葉粉，后葉粉過40～60目篩，收集后葉粗粉并稱重；

3)乙醚后葉粉制備

向后葉粗粉中加入3倍后葉粗粉量的冷丙酮，室溫攪拌1.5小時，靜置6～12小時，傾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法處理三次，最后一次抽干，沉淀物為丙酮后葉粉，向丙酮后葉粉中加入3倍丙酮后葉粉量的冷乙醚，室溫攪拌1小時，靜置30分鐘后過濾，揮發(fā)盡乙醚，得到乙醚后葉粉；

4)垂體后葉粉制備

乙醚后葉粉放入干燥箱中，干燥5～7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂體后葉粉，垂體后葉粉用消毒、潔凈的薄膜包扎密封，貼上狀態(tài)標識放置5℃以下的低溫箱保存；

5)提取液制備

稱取垂體后葉粉3000g，進行一次提取，一次提取的步驟為：向垂體后葉粉中加入濃度為0.25％醋酸溶液150000mL，在60～65℃溫度條件下攪拌、提取15分鐘，垂體后葉粉的提取液冷處靜置6～12小時，靜置后的提取液用布氏漏斗冷濾，得到第一次提取液和濾渣，濾渣中加入濃度為0.25％醋酸溶液60000mL，進行二次提取，二次提取的時間、溫度和過濾方式與一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液與第一次提取液混合得到提取液；

6)脫蛋白

向提取液中加入萬分之一的活性炭，迅速加熱至100℃保溫30分鐘，取出放置于-5℃以下的溫度條件下放置6～12小時，取出冷卻液，先用紙漿漏斗抽濾，再經(jīng)30kD超濾膜過濾濾器抽濾至澄明，得到垂體后葉溶液，對垂體后葉溶液進行取樣檢驗；

7)包裝、儲存

檢驗合格后的垂體后葉溶液分裝于潔凈的不銹鋼桶中，桶口用潔凈的塑料膜包扎密封，桶外貼標簽，置于-5℃以下存放。

進一步的，所述冷丙酮的比重為0.820～0.830，冷丙酮的溫度為15℃。

進一步的，所述粉碎機為陶瓷粉碎機或球磨壇。

進一步的，所述干燥箱均采用干石灰作為干燥劑。

本發(fā)明技術方案生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝，取出浸泡于丙酮中的豬小腦，置于盤內(nèi)進行點數(shù)，去除破碎的豬小腦，整粒豬小腦用鑷子迅速分離成前葉和后葉，并將后葉置于丙酮溶液中浸泡，將破碎的豬小腦和前葉去除以提高垂體后葉素成品的品質(zhì)；制備后葉粗粉以便于后續(xù)無藥效組分的析出；向后葉粗粉中加入3倍后葉粗粉量的冷丙酮，室溫攪拌1.5小時，靜置6～12小時，傾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法處理三次，最后一次抽干，沉淀物為丙酮后葉粉，向丙酮后葉粉中加入3倍丙酮后葉粉量的冷乙醚，室溫攪拌1小時，靜置30分鐘后過濾，揮發(fā)盡乙醚，得到乙醚后葉粉，讓后葉粗粉中無藥效的組分析出，提高垂體后葉素的品質(zhì)和產(chǎn)率；通過濃度為0.25％醋酸溶液對垂體后葉粉進行提取，提高了提取的效率；向提取液中加入萬分之一的活性炭，迅速加熱至100℃保溫30分鐘，取出放置于-5℃以下的溫度條件下放置6～12小時，取出冷卻液，先用紙漿漏斗抽濾，再經(jīng)30kD超濾膜過濾濾器抽濾至澄明，得到垂體后葉溶液，通過活性炭對提取液中蛋白質(zhì)和雜質(zhì)進行吸附，再通過紙漿漏斗抽濾、30kD超濾膜過濾濾器抽濾，提高垂體后葉素的澄明度和品質(zhì)；檢驗合格后的垂體后葉溶液分裝于潔凈的不銹鋼桶中，桶口用潔凈的塑料膜包扎密封，桶外貼標簽，置于-5℃以下存放，以延長垂體后葉素保質(zhì)期。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明提供的生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝，通過冷丙酮和冷乙醚對后葉粉進行處理，垂體后葉素的產(chǎn)率高；通過活性炭對提取液中蛋白質(zhì)和雜質(zhì)進行吸附，再通過紙漿漏斗抽濾、30kD超濾膜過濾濾器抽濾，垂體后葉素的澄明度高、品質(zhì)好；制備好的垂體后葉素在-5℃以下存放，垂體后葉素保質(zhì)期長。

附圖說明

圖1為本發(fā)明中生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝的生產(chǎn)工藝圖。

圖2為本發(fā)明中生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝的提取液制備的工藝圖。

具體實施方式

參見圖1、圖2，生物提取法生產(chǎn)藥用垂體后葉素工藝，包括以下步驟：

1)初脫丙酮、分離

取出浸泡于丙酮中的豬小腦，置于盤內(nèi)進行點數(shù)，去除破碎的豬小腦，整粒豬小腦用鑷子迅速分離成前葉和后葉，并將后葉置于丙酮溶液中浸泡。

2)后葉粗粉制備

從丙酮溶液中取出后葉，并用紗布在漏斗上濾干，待丙酮揮發(fā)盡后，放入干燥箱中，干燥5～7天，干燥后的干后葉送入粉碎裝置粉碎成后葉粉，后葉粉過40～60目篩，收集后葉粗粉并稱重。

3)乙醚后葉粉制備

向后葉粗粉中加入3倍后葉粗粉量的冷丙酮，室溫攪拌1.5小時，靜置6～12小時，傾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法處理三次，最后一次抽干，沉淀物為丙酮后葉粉，向丙酮后葉粉中加入3倍丙酮后葉粉量的冷乙醚，室溫攪拌1小時，靜置30分鐘后過濾，揮發(fā)盡乙醚，得到乙醚后葉粉。

4)垂體后葉粉制備

乙醚后葉粉放入干燥箱中，干燥5～7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂體后葉粉，垂體后葉粉用消毒、潔凈的薄膜包扎密封，貼上狀態(tài)標識放置5℃以下的低溫箱保存。

5)提取液制備

稱取垂體后葉粉3000g，進行一次提取，一次提取的步驟為：向垂體后葉粉中加入濃度為0.25％醋酸溶液150000mL，在60～65℃溫度條件下攪拌、提取15分鐘，垂體后葉粉的提取液冷處靜置6～12小時，靜置后的提取液用布氏漏斗冷濾，得到第一次提取液和濾渣，濾渣中加入濃度為0.25％醋酸溶液60000mL，進行二次提取，二次提取的時間、溫度和過濾方式與一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液與第一次提取液混合得到提取液。

6)脫蛋白

向提取液中加入萬分之一的活性炭，迅速加熱至100℃保溫30分鐘，取出放置于-5℃以下的溫度條件下放置6～12小時，取出冷卻液，先用紙漿漏斗抽濾，再經(jīng)30kD超濾膜過濾濾器抽濾至澄明，得到垂體后葉溶液，對垂體后葉溶液進行取樣檢驗。

7)包裝、儲存

檢驗合格后的垂體后葉溶液分裝于潔凈的不銹鋼桶中，桶口用潔凈的塑料膜包扎密封，桶外貼標簽，置于-5℃以下存放。

所述冷丙酮的比重為0.820～0.830，冷丙酮的溫度為15℃。

所述粉碎機為陶瓷粉碎機或球磨壇。

所述干燥箱均采用干石灰作為干燥劑。

實施例1

取出浸泡于丙酮中的豬小腦，置于盤內(nèi)進行點數(shù)，去除破碎的豬小腦，整粒豬小腦用鑷子迅速分離成前葉和后葉，并將后葉置于丙酮溶液中浸泡；從丙酮溶液中取出后葉，并用紗布在漏斗上濾干，待丙酮揮發(fā)盡后，放入采用干石灰作為干燥劑的干燥箱中，干燥5天，干燥后的干后葉送入陶瓷粉碎粉碎成后葉粉，后葉粉過40目篩，收集后葉粗粉并稱重；向后葉粗粉中加入3倍后葉粗粉量的比重為0.820、溫度為15℃的冷丙酮，室溫攪拌1.5小時，靜置6小時，傾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法處理三次，最后一次抽干，沉淀物為丙酮后葉粉，向丙酮后葉粉中加入3倍丙酮后葉粉量的冷乙醚，室溫攪拌1小時，靜置30分鐘后過濾，揮發(fā)盡乙醚，得到乙醚后葉粉；乙醚后葉粉放入干燥箱中，干燥5天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂體后葉粉，垂體后葉粉用消毒、潔凈的薄膜包扎密封，貼上狀態(tài)標識放置5℃以下的低溫箱保存；稱取垂體后葉粉3000g，進行一次提取，一次提取的步驟為：向垂體后葉粉中加入濃度為0.25％醋酸溶液150000mL，在60℃溫度條件下攪拌、提取15分鐘，垂體后葉粉的提取液冷處靜置6小時，靜置后的提取液用布氏漏斗冷濾，得到第一次提取液和濾渣，濾渣中加入濃度為0.25％醋酸溶液60000mL，進行二次提取，二次提取的時間、溫度和過濾方式與一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液與第一次提取液混合得到提取液；向提取液中加入萬分之一的活性炭，迅速加熱至100℃保溫30分鐘，取出放置于-5℃以下的溫度條件下放置6小時，取出冷卻液，先用紙漿漏斗抽濾，再經(jīng)30kD超濾膜過濾濾器抽濾至澄明，得到垂體后葉溶液，對垂體后葉溶液進行取樣檢驗；檢驗合格后的垂體后葉溶液分裝于潔凈的不銹鋼桶中，桶口用潔凈的塑料膜包扎密封，桶外貼標簽，置于-5℃以下存放。

實施例2

取出浸泡于丙酮中的豬小腦，置于盤內(nèi)進行點數(shù)，去除破碎的豬小腦，整粒豬小腦用鑷子迅速分離成前葉和后葉，并將后葉置于丙酮溶液中浸泡；從丙酮溶液中取出后葉，并用紗布在漏斗上濾干，待丙酮揮發(fā)盡后，放入采用干石灰作為干燥劑的干燥箱中，干燥7天，干燥后的干后葉送入球磨壇粉碎成后葉粉，后葉粉過60目篩，收集后葉粗粉并稱重；向后葉粗粉中加入3倍后葉粗粉量的比重為0.830、溫度為15℃的冷丙酮，室溫攪拌1.5小時，靜置12小時，傾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法處理三次，最后一次抽干，沉淀物為丙酮后葉粉，向丙酮后葉粉中加入3倍丙酮后葉粉量的冷乙醚，室溫攪拌1小時，靜置30分鐘后過濾，揮發(fā)盡乙醚，得到乙醚后葉粉；乙醚后葉粉放入干燥箱中，干燥7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂體后葉粉，垂體后葉粉用消毒、潔凈的薄膜包扎密封，貼上狀態(tài)標識放置5℃以下的低溫箱保存；稱取垂體后葉粉3000g，進行一次提取，一次提取的步驟為：向垂體后葉粉中加入濃度為0.25％醋酸溶液150000mL，在65℃溫度條件下攪拌、提取15分鐘，垂體后葉粉的提取液冷處靜置12小時，靜置后的提取液用布氏漏斗冷濾，得到第一次提取液和濾渣，濾渣中加入濃度為0.25％醋酸溶液60000mL，進行二次提取，二次提取的時間、溫度和過濾方式與一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液與第一次提取液混合得到提取液；向提取液中加入萬分之一的活性炭，迅速加熱至100℃保溫30分鐘，取出放置于-5℃以下的溫度條件下放置12小時，取出冷卻液，先用紙漿漏斗抽濾，再經(jīng)30kD超濾膜過濾濾器抽濾至澄明，得到垂體后葉溶液，對垂體后葉溶液進行取樣檢驗；檢驗合格后的垂體后葉溶液分裝于潔凈的不銹鋼桶中，桶口用潔凈的塑料膜包扎密封，桶外貼標簽，置于-5℃以下存放。

本發(fā)明技術方案在上面結(jié)合附圖對本發(fā)明進行了示例性描述，顯然本發(fā)明具體實現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構(gòu)思和技術方案進行的各種非實質(zhì)性改進，或未經(jīng)改進將發(fā)明的構(gòu)思和技術方案直接應用于其它場合的，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。