本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及雙嘧達莫的新用途，具體涉及雙嘧達莫的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應用。
背景技術(shù)：
：雙嘧達莫主要用于血栓栓塞性疾病、人工心臟瓣膜置換術(shù)后，防止血小板血栓形成，多與香豆素類、阿司匹林等合用與血栓患者，還可以阻抑動脈粥樣硬化早期的病變過程。迄今為止，尚未見雙嘧達莫及其藥物組合物與白內(nèi)障的相關(guān)性報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種雙嘧達莫的藥物組合物，該藥物組合物中含有雙嘧達莫和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，雙嘧達莫和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療白內(nèi)障。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種雙嘧達莫的藥物組合物，包括雙嘧達莫、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將土木香粉碎，用85～95％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8％乙醇洗脫10個柱體積，再用70％乙醇洗脫12個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。上述化合物(Ⅰ)在制備治療白內(nèi)障的藥物中的應用。上述雙嘧達莫的藥物組合物在制備治療白內(nèi)障的藥物中的應用。本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明提供的雙嘧達莫的藥物組合物中含有雙嘧達莫和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，雙嘧達莫、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對白內(nèi)障具有治療作用；雙嘧達莫和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對白內(nèi)障病的治療效果進一步提高，可開發(fā)成治療白內(nèi)障的藥物。具體實施方式下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范圍。實施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。分離方法：(a)將土木香(2kg)粉碎，用90％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8％乙醇洗脫10個柱體積，再用70％乙醇洗脫12個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1(8個柱體積)、20:1(8個柱體積)、10:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積)、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集8～14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z279.1183，結(jié)合核磁特征可得分子式為C15H18O5，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-2(3.46，d，J＝2.8Hz)，H-3(3.07，d，J＝2.8Hz)，H-5(2.11，d，J＝11.7Hz)，H-6(3.88，dd，J＝11.7，10.6Hz)，H-7(2.54，dt，J＝3.5，10.6Hz)，H-8α(2.05，ddt，J＝13.3，3.6，3.2Hz)，H-8β(1.65，ddt，J＝13.3，3.2，13.2Hz)，H-9α(1.74，dt，J＝3.2，13.2Hz)，H-9β(1.67，dt，J＝13.2，3.2Hz)，H-13(5.79，d，J＝3.1Hz)，H-13(6.08，d，J＝3.1Hz)，H-14(1.07，s)，H-15(1.44，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CDCl3，125MHz)：211.4(C，1-C)，73.2(CH，2-C)，62.4(CH，3-C)，59.5(C，4-C)，56.7(CH，5-C)，77.5(CH，6-C)，50.2(CH，7-C)，20.2(CH2，8-C)，32.1(CH2，9-C)，40.5(C，10-C)，138.3(C，11-C)，170.3(C，12-C)，117.9(CH2，13-C)，15.2(CH3，14-C)，23.2(CH3，15-C)。紅外波譜中的1716cm-1吸收帶與UV譜中的236nm吸收帶表明該化合物含有γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，進一步并通過分析13C-NMR譜中的δC77.5，50.2，138.3，170.3，117.9的碳信號可知存在環(huán)外亞甲基γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示兩個甲基質(zhì)子信號δH1.07(3H，s)、1.44(3H，s)，一對端烯烴質(zhì)子信號δH5.79(1H，d，J＝3.1Hz)與6.08(1H，d，J＝3.1Hz)，三個連氧次甲基質(zhì)子信號δH3.46(1H，d，J＝2.8Hz)、3.07(1H，dd，J＝2.8Hz)與3.88(1H，dd，J＝11.7，10.6Hz)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有15個碳信號，包括兩個甲基，三個亞甲基(一個烯烴碳)，五個次甲基(三個連氧碳)，以及五個季碳(一個烯烴碳，兩個羰基碳和一個含氧碳)。以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為四環(huán)結(jié)構(gòu)。NMR譜數(shù)據(jù)δH3.07(1H，d，J＝2.8Hz)與δC62.4和59.5可知該化合物中存在環(huán)氧結(jié)構(gòu)。通過1H-1HCOSY譜中H-2/H-3以及H-5/H-6/H-7/H2-8/H2-9相關(guān)信號，以及HMBC譜中顯示的H-2與C-1、C-3和C-4，H-3與C-1、C-2、C-4和C-5，H-5與C-6和C-10，H-6與C-7、C-8、C-11和C-12，H-7與C-6、C-11、C-12和C-13，H2-13與C-7和C-12，H3-14與C-10相關(guān)信號，可以構(gòu)建該化合物的連接方式，并且上述波譜數(shù)據(jù)表明該化合物為桉葉烷型倍半萜，并且存在環(huán)外亞甲基γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，該化合物中的C-2、C-3、C-4、C-5、C-6、C-7和C-10為手性碳，通過NOESY試驗與H-H偶合常數(shù)確認了相對構(gòu)型。NOESY譜中顯示存在H-6/H-8β、H-6/H3-14以及H-8β/H3-14相關(guān)信號表明這些氫處在同一側(cè)，另H-5/H-7、H-5/H-9α、H-7/H-9α相關(guān)信號表明這些氫處在同一側(cè)，這些相關(guān)信號與相關(guān)偶合常數(shù)的結(jié)果一致，并且也表明A/B與B/C環(huán)反式連接。此外，通過H-3/H3-14、H-3/H3-15、H-6/H3-15以及H3-14/H3-15相關(guān)信號確定C-3與C-4的環(huán)氧結(jié)構(gòu)為α構(gòu)型，NOE差譜試驗中照射H3-14甲基可以發(fā)現(xiàn)H-3、H-6、H-8β、H-9β、H3-15有明顯增益，因此以上相關(guān)信號可以表明該化合物的C-2、C-3、C-4、C-5、C-6、C-7和C-10構(gòu)型為2R、3R、4S、5S、6S、7S和10R。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如下：實施例2：藥理作用本實施例使用半乳糖制備白內(nèi)障大鼠模型，觀察藥物提高眼晶體SOD的含量，降低眼晶體MDA的含量，即減輕眼晶體脂質(zhì)過氧化損傷等方面的抗白內(nèi)障作用。1、材料與方法1.1動物SPF級Wistar大鼠，雌雄各半，30d齡，體重165～235g，外觀健康，分籠喂養(yǎng)，自由攝食攝水。實驗室條件為動物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對濕度45％±10％，通風良好。1.2試劑與樣品雙嘧達莫購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實施例1。D-半乳糖(AR)用蒸餾水配成50％的溶液，高壓滅菌后供腹腔注射。SOD(超氧化物歧化酶)試劑盒、MDA(丙二醛)試劑盒、考馬斯亮藍試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。雙嘧達莫、化合物(Ⅰ)及其組合物先用少量DMSO超聲溶解，再用純化水溶解稀釋灌胃。1.3儀器裂隙燈顯微鏡(北京北方科儀公司)。1.4大鼠分組及模型制備大鼠隨機分為5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、雙嘧達莫組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、雙嘧達莫與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1雙嘧達莫+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。除正常對照組外，其他組50％半乳糖腹腔注射，劑量為10g/kg，每日一次連續(xù)15d，另在飲水中加入5％半乳糖連續(xù)7d，誘發(fā)大鼠白內(nèi)障。實驗第8d開始，按照上述劑量連續(xù)灌胃給藥7d，正常對照組與模型對照組大鼠灌胃給予等量的生理鹽水。1.5Wistar大鼠晶體勻漿的制備實驗各組所有大鼠于實驗結(jié)束時全部脫臼處死，立即取出雙側(cè)眼球，用生理鹽水沖洗3次，剝離晶體，并用濾紙吸干，放在電子天平上稱重。然后將雙側(cè)晶體放入玻璃勻漿器內(nèi)，按重量體積比加入生理鹽水緩沖溶液，充分研磨，制成1％晶體勻漿待測。1.6SOD活力和MDA含量的測定實驗分別取各組大鼠晶體勻漿4℃離心10min(3000r/min)后，取出上清液測定SOD和MDA水平，測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行。1.7統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示，應用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2、實驗結(jié)果2.1對白內(nèi)障模型大鼠眼晶體SOD活力的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠SOD活力明顯降低(P＜0.01)；與模型對照組比較，雙嘧達莫與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠SOD活力明顯升高(P＜0.01)；與模型對照組比較，雙嘧達莫組、化合物(Ⅰ)組大鼠SOD活力升高(P＜0.05)。結(jié)果見表1。2.2對白內(nèi)障模型大鼠眼晶體MDA含量的影響與正常對照組比，模型對照組大鼠眼晶體MDA含量明顯升高(P＜0.01)。與模型對照組比，雙嘧達莫與化合物(Ⅰ)組合物組大鼠眼晶體MDA含量明顯降低(P＜0.01)；與模型對照組比較，雙嘧達莫組、化合物(Ⅰ)組大鼠眼晶體MDA含量降低(P＜0.05)。試驗結(jié)果見表1。表1對半乳糖性白內(nèi)障眼晶體SOD活力和MDA含量的影響組別SOD(NU/mg蛋白)MDA(nmol/m蛋白)正常對照組45.28±3.230.0427±0.0121模型對照組26.32±2.660.3421±0.0321雙嘧達莫組33.46±3.450.2092±0.0325化合物(Ⅰ)組34.99±3.210.2330±0.0262雙嘧達莫與化合物(Ⅰ)組合物組46.32±3.570.0696±0.0112結(jié)果表明，雙嘧達莫、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對白內(nèi)障具有治療作用；雙嘧達莫和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對白內(nèi)障病的治療效果進一步提高，可開發(fā)成治療白內(nèi)障的藥物。上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。當前第1頁1 2 3